HU219673B - Neisseria meningitidis elleni vakcina - Google Patents

Neisseria meningitidis elleni vakcina Download PDF

Info

Publication number
HU219673B
HU219673B HU9301630A HU9301630A HU219673B HU 219673 B HU219673 B HU 219673B HU 9301630 A HU9301630 A HU 9301630A HU 9301630 A HU9301630 A HU 9301630A HU 219673 B HU219673 B HU 219673B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
gly
ser
lys
thr
molecular weight
Prior art date
Application number
HU9301630A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT69980A (en
Inventor
Marie-José Quentin-Millet
Original Assignee
Pasteur Merieux Serums Et Vaccins S.A.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pasteur Merieux Serums Et Vaccins S.A. filed Critical Pasteur Merieux Serums Et Vaccins S.A.
Publication of HUT69980A publication Critical patent/HUT69980A/hu
Publication of HU219673B publication Critical patent/HU219673B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/22—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Neisseriaceae (F)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/871—Neisseria

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

A találmány tárgya gyógyászati készítmény a Neisseria meningitidisfertőzés megelőzésére, illetve hatásainak gyengítésére, azzaljellemezve, hogy terápiás hatóanyagként legalább egy első és egymásodik molekulát tartalmaz, amelyek képesek a humán transzferrinhezkötődni; az említett első molekula a Neisseria meningitidis egy elsőtörzséből származik, amelyben a humán transzferrinreceptor legalábbegy nagy molekulatömegű alegységet (Tbp1) és egy kis molekulatömegűalegységet (Tbp2) tartalmaz, és amelyben a kis molekulatömegűalegységet (Tbp2) a Neisseria meningitidis 2394-es törzs receptora(2394-es receptor) elleni antiszérum felismeri, de nem ismeri fel aNeisseria meningitidis 2169-es törzs receptora (2169-es receptor)elleni antiszérum; és a második említett molekula a Neisseriameningitidis egy másik törzséből származik, amelyben a humán transz-ferrinreceptor legalább egy nagy alegységet (Tbp1) és egy kisebbmolekulatömegű alegységet tartalmaz, és amelyben a kisebbmolekulatömegű alegységet (Tbp2) egy anti-2169 receptorantiszérumfelismeri, de nem ismeri fel egy anti-2394 receptorantiszérum. ŕ

Description

A jelen találmány tárgyát a Neisseria meningitidis által okozott agyhártyagyulladás megelőzésére szolgáló gyógyászati készítmények képezik.
A agyhártyagyulladások általában vagy virális vagy bakteriális eredetűek. A fő bakteriális kórokozók a Neisseria meningitidis és a Haemophilus influenzáé, amelyek a bakteriális eredetű agyhártyagyulladásoknak körülbelül 40-50%-át okozzák.
Franciaországban a Neisseria meningitidis által okozott agyhártyagyulladások száma évente 600 és 800 között változik. Az Amerikai Egyesült Államokban az esetek száma évente 2500 és 3000 között van.
A Neisseria meningitidis fajt szerocsoportokra osztják, a kapszuláris poliszacharid természetétől függően. Jóllehet körülbelül tizenkét szerocsoport létezik, az agyhártyagyulladásos esetek 90%-át 3 szerocsoport okozza, az A, B és C.
A kapszuláris poliszacharidokon alapuló hatékony vakcinák léteznek a Neisseria meningitidis A, B és C szerocsoportjai által okozott agyhártyagyulladások megelőzésére. Ezek a poliszacharidok önmagukban egyáltalán nem, vagy csak nagyon gyengén immunogének a 2 év alatti gyermekekben, és nem indukálják az immunológiai memóriát. Ezek a hátrányok azonban leküzdhetők, ha ezeket a poliszacharidokat egy hordozófehérjével konjugáljuk.
Ezzel szemben, a Neisseria meningitidis B csoportjának poliszacharidja egyáltalán nem, vagy csak csekély mértékben immunogén emberben, függetlenül attól, hogy konjugált formában van-e vagy sem. Ezért nagyon kívánatosnak tűnne egy olyan vakcina kidolgozásának a B szerocsoportba tartozó Neisseria meningitidis által okozott agyhártyagyulladás-fertőzés ellen, amely nem poliszacharidalapú.
Ebből a célból a Neisseria meningitidis külső membránjában levő számos fehérje felhasználását javasolták már. Ez főleg a humán transzferrinmembrán-receptor.
Általában a baktériumok nagy többségének vasra van szükségük a növekedésükhöz, és ezért ennek a fémnek a megszerzésére specifikus rendszereket dolgoztak ki. Különösen ami a Neisseria meningitidist illeti, amely szigorúan patogén emberre, a vas csak a humán vastranszportfehérjékből, például a transzferrinből és a laktoferrinből származhat, mivel a szabad állapotban levő vas mennyisége az emberben elhanyagolható (10~18 mol/1 nagyságrendben van), és ezért egy esetben sem teszi lehetővé a bakteriális növekedést.
Tehát a Neisseria meningitidisnek humán transzferrin- és humán laktoferrinreceptora van, amely lehetővé teszi számára, hogy megkösse ezeket a fémkelátképző fehérjéket, majd ezt követően a növekedéséhez szükséges vasat befogja.
A Neisseria meningitidis B16B6 törzs transzferrinreceptorát Schryvers és munkatársai izolálták és tisztították (WO 90/12591) egy membránkivonatból. Ez a fehérje, a tisztítást követően lényegében két típusú polipeptidet tartalmaz: egy nagy látszólagos molekulatömeggel (körülbelül 100 kD) rendelkező polipeptidet, és egy alacsonyabb látszólagos molekulatömeggel rendelkező polipeptidet, az SDS-poli(akrilamid)-gélelektroforézis alapján.
A Schryvers által azonosított tisztított terméket az önkényes meghatározás alapján és a jelen találmány céljaira transzfemnreceptomak nevezzük, és az alkotóelemeit, alegységeit is. Az alább következő szövegben a nagy molekulatömegű és a kis molekulatömegű alegységek jelzése Tbpl, illetve Tbp2.
Schryvers és munkatársai úttörő munkája óta felfedezték, hogy valójában legalább két különböző típusú törzs létezik, amelyek a transzferrinreceptoraik összetételében különböznek. Ezt úgy igazolták, hogy több tucat, különböző eredetű Neisseria meningitidis törzs membránkivonatát vizsgálták. Ezeket a membránkivonatokat először SDS-poli(akrilamid)-gélelektroforézisnek vetették alá, majd nitro-cellulóz-membrán membránra vitték át elektromos áram segítségével. A nitro-cellulózmembránokat az alábbi körülmények között inkubálták.
a) Egy nyúlantiszérum jelenlétében, amely a Neisseria meningitidis B16B6 törzsből tisztított transzferrinreceptorra specifikus, jele IM2394;
b) Egy nyúlantiszérum jelenlétében, amely a Neisseria meningitidis IM2169 törzsből tisztított transzferrinreceptorra specifikus;
c) Peroxidázzal konjugált humán transzfemn jelenlétében.
Az a) és b) esetben a transzferrinreceptor-alegységek felismerését peroxidázhoz kapcsolt antinyúlimmunoglobulin-antítest hozzáadásával, majd az ezzel az enzimmel reagáló szubsztrát hozzáadásával teszik láthatóvá.
Az alábbi I. és II. jelű táblázatok néhány jellemző törzs profilját mutatják, ahogy a 7,5%-os poli(akrilamid)gélen az SDS-gélelektroforézis után láthatók; a sávokat a kilodaltonban (kD) kifejezett látszólagos molekulatömegük alapján jellemezzük:
1. táblázat Törzsek
2394(B;2a;P1.2:L2,3) 2228 (B;nd) 2170 (B;2a:P1.2:L3) 2234 (Y;nd) 2154 (C;nd) 2448 (B;nd) 550(C;2a:) 179 (C;2a:P1.2)
Kimutatás anti-2394 receptorantiszérummal 93 68 93 69 99 69
Kimutatás anti-2169 receptorantiszérummal 93 93 99
Kimutatás transzferrin-peroxidázzal 68 69 69
A zárójelekben a szerocsoport, a szerotípus, a szubtipus és az immuntípus látható, ebben a sorrendben.
HU 219 673 Β
II. táblázat Törzsek
2169 (B:9: Pl.9) 1000 (B:nd) 1604 (B:nd) 132 (C: 15 Pl.16) 1001 (A:4: Pl.9) 876 (B: 19 Pl.6) 1951 (A:nd) 2449 (B:nd) 867 (B:2b: Pl.2)
Kimutatás anti-2394 receptorantiszérummal 96 98 98 98 98 96 94 94 93
Kimutatás anti-2169 96 98 98 98 98 96 94 94 93
receptorantiszérummal 87 85 83 81 79 88 87 85 85
Kimutatás transzferrinperoxidáz antiszérummal 87 85 83 81 79 88 87 85 85
A zárójelekben a szerocsoport, a szerotípus, a szubtípus és az immuntípus látható, ebben a sorrendben.
A táblázatok első két sorában látható eredmények azt mutatják, hogy kétféle típusú törzs létezik.
Az első típus (I. táblázat) olyan törzseknek felel meg, amelyeknek a receptorában levő két alegységet az alkal- 20 mázott kísérleti körülmények között az anti-IM2394 receptorantiszérum felismeri, míg csak a nagy molekulatömegű alegységet ismeri fel az anti-IM2169 receptorantiszérum.
A második típus (II. táblázat) olyan törzseknek felel 25 meg, amelyeknek a receptorában levő két alegységet az alkalmazott kísérleti körülmények között az antiIM2169 receptorantiszérum felismeri, míg csak a nagy molekulatömegű alegységet ismeri fel az anti-IM2394 receptorantiszérum. 30
Ennek következtében antigéndiverzitás létezik az alacsonyabb molekulatömegű alegység szintjén. Ez a diverzitás azonban korlátozott, mivel csak két fő típusa létezik, szemben azzal, amit Griffiths és munkatársai állítanak [FEMS Microbiol. Lett., 69, 31 (1990)]. 35 [Meg kell azonban jegyeznünk, hogy a törzs típusától függetlenül, mindig a kis alegység az, amely képes a transzferrinhez kötődni (A és B táblázat, az eredmények 3. sora).]
Ezeknek a megfigyeléseknek az alapján azt feltété- 40 lezhetjük, hogy az összes Neisseria meningitidis fertőzés ellen hatásos vakcina készíthető a megfelelő módon, egy transzferrinreceptorból, vagy kizárólag a nagy molekulatömegű alegységből, függetlenül attól, hogy melyik törzsből származik a receptor, mivel az említett alegysé- 45 get az antiszérum 2 különböző típusa is felismeri.
Úgy tűnik azonban, hogy ez nem járható út, mivel a nagy molekulatömegű alegységről úgy gondolják, hogy nem képes semlegesítő típusú antitestek termelését indukálni. A 2 receptoralegység közül csak a ki- 50 sebbről derült ki, hogy képes ellátni ezt a funkciót. Mivel ezt a kisebb molekulatömegű alegységet jelentős antigénvariáció jellemzi az egyes és kettes típusú törzsek között, ezért egyetlen típusú transzferrinreceptor nem lehet elegendő ahhoz, hogy az összes Neis- 55 seria meningitidis fertőzéssel szemben vakcináim lehessen vele.
A találmány tárgya tehát:
i) Egy vakcinális gyógyászati készítmény, amely terápiás hatóanyagként legalább egy első és egy máso- 60 dik molekulát tartalmaz, amelyek képesek a humán transzferrinhez kötődni; az említett első molekula a Neisseria meningitidis egy első törzséből származik, amelyben a humán transzferrinreceptor legalább egy nagy molekulatömegű alegységet (Tbpl) és egy kis molekulatömegű alegységet (Tbp2) tartalmaz, és amelyben a kis molekulatömegű alegységet (Tbp2) a Neisseria meningitidis 2394-es törzs receptora (2394-es receptor) elleni antiszérum felismeri, de nem ismeri fel a Neisseria meningitidis 2169-es törzs receptora (2169-es receptor) elleni antiszérum; és a második említett molekula a Neisseria meningitidis egy másik törzséből származik, amelyben a humán transzferrinreceptor legalább egy nagy alegységet (Tbpl) és egy kisebb molekulatömegű alegységet tartalmaz, és amelyben a kisebb molekulatömegű alegységet (Tbp2) egy anti-2169 receptorantiszérum felismeri, de nem ismeri fel egy anti2394 receptorantiszérum;
ii) egy vakcináló kit, amely tartalmaz:
a) egy gyógyászati készítményt, amely hatóanyagként legalább egy első molekulát tartalmaz, amely képes a humán transzferrinhez kötődni; az említett első molekula a Neisseria meningitidis egy első törzséből származik, amelyben a humán transzferrinreceptor legalább egy nagy molekulatömegű alegységet (Tbpl) és egy kis molekulatömegű alegységet (Tbp2) tartalmaz, és amelyben a kis molekulatömegű alegységet (Tbp2) a Neisseria meningitidis 2394-es törzs receptora (2394-es receptor) elleni antiszérum felismeri, de nem ismeri fel a Neisseria meningitidis 2169-es törzs receptora (2169-es receptor) elleni antiszérum;
b) egy gyógyászati készítményt, amely hatóanyagként legalább egy második molekulát tartalmaz, amely képes a humán transzferrinhez kötődni; a második említett molekula a Neisseria meningitidis egy másik törzséből származik, amelyben a humán transzferrinreceptor legalább egy nagy alegységet (Tbpl) és egy kisebb molekulatömegű alegységet tartalmaz, és amelyben a kisebb molekulatömegű alegységet (Tbp2) egy anti-2169 receptorantiszérum felismeri, de nem ismeri fel egy anti-2394 receptorantiszérum; és
HU 219 673 Β
c) utasításokat az a) és b) készítmények egyidejű vagy egymás után való beadására;
iii) legalább egy első és egy második, a humán transzferrinhez kapcsolódni képes molekula kombinált terápiás alkalmazása; az említett első molekula a Neisseria meningitidis egy első törzséből származik, amelyben a humán transzferrinreceptor legalább egy nagy molekulatömegű alegységet (Tbpl) és egy kis molekulatömegű alegységet (Tbp2) tartalmaz, és amelyben a kis molekulatömegű alegységet (Tbp2) a Neisseria meningitidis 2394-es törzs receptora (2394-es receptor) elleni antiszérum felismeri, de nem ismeri fel a Neisseria meningitidis 2169-es törzs receptora (2169-es receptor) elleni antiszérum; és a második említett molekula a Neisseria meningitidis egy másik törzséből származik, amelyben a humán transzferrinreceptor legalább egy nagy alegységet (Tbpl) és egy kisebb molekulatömegű alegységet tartalmaz, és amelyben a kisebb molekulatömegű alegységet (Tbp2) egy anti-2169 receptorantiszérum felismeri, de nem ismeri fel egy anti2394 receptorantiszérum; és iv) Neisseria meningitidis fertőzés elleni vakcinálási módszer, ami abban áll, hogy gyógyászati szempontból hatékony mennyiséget adunk be egyidejűleg vagy egymás után legalább egy első és egy második, a humán transzferrinhez kötődni képes molekulából, ilyen vakcinakezelést igénylő betegnek; az említett első molekula a Neisseria meningitidis egy első törzséből származik, amelyben a humán transzferrinreceptor legalább egy nagy molekulatömegű alegységet (Tbpl) és egy kis molekulatömegű alegységet (Tbp2) tartalmaz, és amelyben a kis molekulatömegű alegységet (Tbp2) a Neisseria meningitidis 2394-es törzs receptora (2394-es receptor) elleni antiszérum felismeri, de nem ismeri fel a Neisseria meningitidis 2169-es törzs receptora (2169-es receptor) elleni antiszérum; és a második említett molekula a Neisseria meningitidis egy másik törzséből származik, amelyben a humán transzferrinreceptor legalább egy nagy alegységet (Tbpl) és egy kisebb molekulasúlyú alegységet tartalmaz, és amelyben a kisebb molekulatömegű alegységet (Tbp2) egy anti2169 receptorantiszérum felismeri, de nem ismeri fel egy anti-2394 receptorantiszérum.
,Λ humán transzferrinhez kapcsolódni képes molekula” szakkifejezés alatt egyrészt egy Neisseria meningitidisből származó humán transzferrinreceptort értünk (azaz egy olyan molekulát, amely 2 különböző típusú alegységből áll), másrészt kizárólag a receptor alegységét, amely képes a humán transzferrinhez kötődni, valamint ennek az alegységnek egy ffagmentjét vagy analógját.
Egy transzferrinreceptor tisztított formában egy Neisseria meningitidis törzsből állítható elő, amelyet korábban szabad formájú vasat nem tartalmazó táptalajban növesztettünk, Schryvers és munkatársai módszere szerint [WO 90/12591, valamint Schryvers et al., Infect. Immun., 56(5), 1144 (1988)]. Egy másik módszer szerint egy Neisseria meningitidis törzsből származó transzferrinreceptort génsebészeti technikákkal lehet előállítani.
A receptoralegységet kódoló DNS-fragmentet vagy -fragmenteket egyszerre vagy egymástól függetlenül expresszálhatjuk egy heterológ expressziós rendszerben (például baktérium, élesztő, emlőssejt). Az alegységeket, szabad állapotukban, illetve a receptorrá asszociálódott formájukban, ebben az esetben kinyetjük a tenyészetből és tisztítjuk. Ha az alegységeket ily módon szabad formában állítjuk elő, akkor lehetővé tehetjük, hogy reasszociálódjanak receptorrá, megfelelő kezelésnek vetve alá őket.
A humán transzferrinhez kapcsolódni képes alegységet (alacsonyabb molekulasúlyú alegység) tisztított formában kaphatjuk meg (azaz a nagyobb molekulatömegű alegységtől disszociálva és izolálva), főleg akkor, ha a receptort Schryvers és munkatársai módszerével tisztítjuk, ha a receptort erősen denaturáló anyag, például 8 mol/l karbamid vagy 6 mol/l guanidin-HCl hatásának tesszük ki, majd a disszociált alegységeket standard kromatográfiás módszerekkel, például ioncserélő kromatográfiával vagy gélszűréssel választjuk el egymástól. Egy másik módszer szerint az alegységet génsebészeti módszerekkel lehet előállítani. Ezek a módszerek egyebek mellett teljesen alkalmasak az alegység fragmentjeinek vagy analógjainak előállítására.
Példaként a 2394-es és 2169-es törzsek Tbpl és Tbp2 alegységeit aminosavszekvenciájuk alapján írjuk le, amint azt az 1-es és 4-es szekvenciaazonosítóknál bemutatjuk (SEQID NO. 1 -4).
„A humán transzferrinhez kapcsolódni képes alegység fragmentje” alatt egy olyan peptidet értünk, amelynek aminosavszekvenciája megtalálható az alegység szekvenciájában. „A humán transzferrinhez kapcsolódni képes alegység analógja” alatt egy olyan fehérjét értünk, amelynek aminosavszekvenciája legalább 80%os, előnyösen legalább 90%-os, és legelőnyösebben legalább 95%-os homológiát mutat az alegység szekvenciájával. A jelen találmány szempontjából a szakterületen jártas szakember számára nyilvánvaló, hogy egy ilyen fragment vagy egy analógnak a fragmentje meg kell hogy tartsa az alegység immunogén tulajdonságait.
A Neisseria meningitidis 2394-es (B:2a:P1.12:L2.3) és 2169-es (B:9:P1.9:L3.7) törzsek, amelyeket általánosan használnak a laboratóriumokban, szabadon hozzáférhetők a Collection de Institute Pasteurnél, 25 rue de Dr. Roux 75015 Párizs, a CIP79808 és a CIP7917 szám alatt.
Továbbá az antireceptorantiszérumokat, amelyek ahhoz szükségesek, hogy megkülönböztessük a Neisseria meningitidis törzseket, az alábbiak szerint állíthatjuk elő:
Egy receptort először egy kiindulási törzsből tisztítunk (2394-es vagy 2169-es), Schryvers és munkatársai módszerével. New Zealand albínó nyulaknak bőr alá és intramuszkulárisan 100 pg IM2394 receptort adunk be komplett Freund-féle adjuváns jelenlétében. Az első injekció után 21, illetve 42 nappal a nyulaknak ismét beadunk 100 pg-ot a tisztított receptorból, de ez alkalommal inkomplett Freund-féle adjuváns jelenlétében. Az utolsó injekció után 15 nappal az állatokból szérumot gyűjtünk, és komplementmentesítjük, majd 0,45 pm-es
HU 219 673 Β pórusméretű membránon szűqük át. A szűrletet ezt követően IM2394-es törzzsel érintkezésbe hozva kimerítjük, amely törzset ennek a műveletnek a végrehajtása céljából előzőleg szabad formájú vas jelenlétében tenyésztettünk (ilyen körülmények között a transzferrinreceptor szintézise represszálva van). Az érintkeztetés feltételei az alábbiak: 10 ml szűrletet adunk 1010 cfuhoz (telepképző egység) az IM2394 törzs tenyészetéből. Az adszorpciót éjszakán át folytatjuk 4 °C-on kevertetés közben. A baktériumokat ezután centrifúgálással távolítjuk el. A felülúszót kinyerjük, majd két egymást követő adszorpciós műveletnek vetjük alá, a fentiek alapján.
A törzs típusát (a transzferrin receptorának természete alapján) a vasmentes körülmények között tenyésztett tenyészetek membránkivonataiból lehet meghatározni, szokványos technikák, például SDS-poli(akrilamid)-gélelektroforézis alkalmazásával, majd immunblottal, amelyhez egy, az előzőkben ismertetett antiszérumot használunk.
A vakcinakészítményben található első molekula egy első Neisseria meningitidis törzsből származik, amely egy transzferrinreceptort tartalmaz, amely lényegében a következő szerkezettel rendelkezik (i) egy nagy molekulatömegű alegység, előnyösen 100-90 kD méretű, előnyösebben körülbelül 93-95 kD méretű, és (ii) egy alacsony molekulatömegű alegység, előnyösen 75-6- kD között, még előnyösebben 72-65 kD méretű, az abszolút igény pedig az, hogy az (i) pontban 93 kD, a (ii) pontban 67-70 kD legyen a körülbelüli érték.
A vakcinakészítményben részt vevő második molekula egy második Neisseria meningitidis törzsből származik, amely egy transzferrinreceptort tartalmaz, amely lényegében a következő szerkezettel rendelkezik (i) egy nagy molekulatömegű alegység, előnyösen 100-95 kD méretű, előnyösebben körülbelül 100-95 kD méretű, és az abszolút igény körülbelül 98 kD, és (ii) egy alacsony molekulatömegű alegység, előnyösen 90-80 kD között, még előnyösebben 87-85 kD méretű, az abszolút igény pedig körülbelül 87 kD.
Az előzőkben említett molekulatömegek látszólagos molekulatömegek, egy receptornak SDS-poli(akrilamid)-gélen való elektroforézise után megfestve a gélt. Az említett elektroforézist Laemmli módszerével végezzük, az alábbiak alapján:
Először egy poli(akrilamid)-gélt készítünk elektroforézispufferben (6 g/1 TRISZ, 28,8 g/1 glicin, 0,1% SDS) (16 cm x 20 cm χ 1 mm), amely egy 5%-os pregélt és egy 7,5%-os elválasztógélt tartalmaz.
Emellett, 50 μΐ mintafelvivő puffért (62 mmol/1 TRIS-HC1 pH=6,8, 2% SDS, 5% β-merkapto-etanol, 1% glicerin, 0,001% brómfenolkék) adunk 0,6 mg/mles tisztított receptor 50 μΐ-es oldatához (50 mmol/1 pH=8,0, 0,05 szarkozilt tartalmaz). Az elegyet 5 percig forrásban levő vízfürdőben tartjuk. Az így előkészített mintából 17 μΐ-t (egyenlő 5 pg fehérjével) helyezünk a gélben levő zsebbe. Egy hasonlóképpen elkészített, molekulasúly-markereket tartalmazó mintát is felviszünk a gélre. Az elektroforézist elektroforézispufferben végezzük (50 volt, 15 óra). A gélt rögzítjük, majd Coomassie blue-val festjük.
Általánosságban, a jelen találmány számára hasznos első vagy második molekula egy bármely szerocsoportba tartozó Neisseria meningitidis törzsből származhat. Előnyösen az első vagy a második molekula egy B szerocsoportba tartozó Neisseria meningitidis törzsből származhat. Előnyösen az első, illetve második molekulák egy első, illetve egy második, B szerocsoportba tartozó Neisseria meningitidisből származnak.
A találmány egy abszolút előnyös megvalósítási módja szerint az első molekula a 2394-es törzsből származik, míg a második molekula a 2169-es törzsből.
Egy, a találmány szerinti gyógyászati készítményt szokványos módon lehet előállítani. Pontosabban a találmány szerinti terápiás hatású anyagot vagy anyagokat egy hígítóanyaggal vagy egy hordozóval kombináljuk, amely gyógyászati szempontból elfogadható. Egy, a találmány szerinti készítményt bármely, a vakcinálás területén elfogadott szokványos módszerrel beadhatunk, különösen szubkután, intramuszkulárisan vagy intravénásán, például egy injekciózható szuszpenzió formájában. A beadás egyetlen dózis formájában, illetve egy bizonyos időtartam eltelte után egyszer vagy többször ismételt dózis formájában történhet. A megfelelő dózis különböző paraméterektől függően változhat, például a kezelt pácienstől, illetve a beadás módjától függően.
A találmányt nagyobb részletességgel az alábbi példákban ismertetjük, az 1. ábrára hivatkozva, amelyen egy 7,5%-os poli(akrilamid)-gélen végzett SDS-poli(akrilamid)-gélelektroforézis képe látható, amely képen az A, illetve B oszlop megfelel a Neisseria meningitidis 2169, illetve 2394 receptorainak. A vízszintes nyilak az ismert látszólagos molekulasúlyú referenciafehérjék pozícióját mutatják (94 kD, foszforiláz B; 67 kD, albumin).
1. példa
A transzferrinreceptor tisztítása a 2394-es törzsből
1.A) - A tenyészet
A Neisseria meningitidis IM2394 törzs fagyasztva szárított sejtjeit körülbelül 1 ml Mueller-Hinton-táptalajban (MHB, Difco) vesszük fel. A baktériumszuszpenziót ezután szilárd Mueller-Hinton-táptalajra visszük, amely forralt vért tartalmaz (5%).
óra hosszat 37 °C-on inkubáljuk 10% CO2-ot tartalmazó atmoszférában, majd a baktériumréteget kinyerjük, azzal a céllal, hogy 150 ml MHB táptalajt oltsunk vele (pH=7,2, 3 darab 250 ml-es Erlenmeyerlombikba elosztva). Az inkubálást három óra hosszat folytatjuk 37 °C-on kevertetés közben. Az így előállított mindhárom tenyészettel oltható 400 ml MHB (pH=7,2, kiegészítve 30 pmol/l etilén-diamin-di(o-hidroxi-fenil-ecetsav)-val (EDTA, Sigma), amely szabad formájában egy vaskelátot képező vegyület.
Miután 16 óra hosszat tenyésztettük kevertetés közben, a tenyészetek tisztaságát Gram-festést követően mikroszkóposán megvizsgáljuk. A szuszpenziót centri5
HU 219 673 Β fiigáljuk, majd a patogén mikroorganizmust tartalmazó üledéket lemérjük és -20 °C-on tároljuk.
l.B) - Tisztítás
A tisztítást lényegében a Schryvers és munkatársai által közölt módszerrel végezzük, az alábbiak szerint:
A baktériumüledéket megolvasztjuk, majd 200 ml 50 mmol/1 TRIS-HC1 pH=8,0 pufferben (A puffer) szuszpendáljuk. A szuszpenziót centrifugáljuk (20 perc, 15 000 xg, 4 °C). Az üledéket kinyerjük, majd ismét az A pufferben szuszpendáljuk 150 g/1 végkoncentrációban. 150 ml-es frakciókat kezelünk 8 percig 80 Mpa nyomással egy sejtfeltáró berendezésben (Rannie, 8.30H modell). Az így kapott sejtlizátumot 15 percig centrifugáljuk 4 °C-on 15 000xg-vei. A felülúszót kinyerjük, majd 75 percig 4 °C-on 200 OOOxg-vel centrifugáljuk. A felülúszó eltávolítása után az üledéket A pufferben vesszük fel, majd Lowry-féle módszerrel végzett fehéijemérés után a szuszpenzió koncentrációját 5 mg/ml-re állítjuk.
1,4 ml membránszuszpenzióhoz 1,75 mg, Schryvers által leírt módszerrel biotinilezett humán transzferrint adunk. A membránfrakció végkoncentrációja 4 mg/ml. Az elegyet 1 óra hosszat inkubáljuk 37 °Con, majd 100 000 χ g-vel centrifügáljuk 75 percig 4 °Con. A membránüledéket 0,1 mol/1 NaCl-ot tartalmazó A pufferben vesszük fel, majd 60 percig szobahőmérsékleten inkubáljuk.
Miután oldatba vittük, olyan térfogatú 30%-os (tömeg/térfogat) N-lauroil-szarkozint és 500 mmol/1 EDTA-t adunk ehhez a szuszpenzióhoz, hogy a szarkozil és az EDTA végkoncentrációja 0,5%, illetve 5 mmol/1 legyen. Miután 15 percig inkubáltuk 37 °C-on kevertetés közben, 1 ml streptavidin-agarózt (Pierce) adunk hozzá, amelyet előzőleg A pufferben mostunk. A szuszpenziót 15 percig szobahőmérsékleten inkubáljuk, majd 1000 χ g-vel 10 percig centrifugáljuk. A gyantát ezután oszlopba töltjük, és a közvetlen eluátumot elöntjük.
A gyantát 3 oszloptérfogatnyi 50 mmol/1 TRIS-HC1 pH=8,0 pufferrel mossuk, amely 1 mol/1 NaCl-ot, 10 mmold EDTA-t, 0,5% szarkozilt tartalmaz (B puffer), majd 1 oszloptérfogatnyi, 750 mmol/1 guanidinHCl-ot tartalmazó B pufferrel mossuk. A transzferrinreceptort ezután 2 mol/1 guanidin-HCl-ot tartalmazó B pufferrel eluáljuk. Az eluátumot frakciókban gyűjtjük, olyan csövekbe, amelyek azonos térfogatú 50 mmol/1 TRIS-HC1 pH=8,0, 1 mol/1 NaCl összetételű puffért tartalmaznak. Az eluátum optikai sűrűségét 280 nm-en mérjük, az oszlopból való kilépés pontjánál, UV-detektorral.
Az elúciós csíknak megfelelő frakciókat kinyeqük, 10 mmol/1 foszfátpufferrel (pH=8,0) szemben dializáljuk, amely 0,05% szarkozilt tartalmaz, majd fagyasztva szárítjuk. A fagyasztva szárított terméket vízben felvesszük, 10-szer nagyobb töménységben. Az oldatot másodszor is dializáljuk 50 mmol/1 foszfátpuffer, pH=8,0, 0,05% szarkozil (C puffer) összetételű oldattal szemben, majd az oldatot 0,22 pm-es pórusméretű membránon szűrjük át.
A fehéijetartalmat meghatározzuk, majd 1 mg/mlre állítjuk C puffer hozzáadásával, aszeptikus körülmények között. Ezt a készítményt -70 °C-on tároljuk.
2. példa
A 2169-es törzsből származó transzferrinreceptor tisztítása
A 2169-es törzs tenyésztését és a transzferrinreceptor tisztítását az 1. példában leírtakkal azonos körülmények között végezzük.
3. példa
Vakcinális gyógyászati készítmények a Neisseria meningitidis fertőzések megakadályozására
Az 1. és második példák szerint előállított steril oldatokat megolvasztjuk. Abból a célból, hogy 1 1 olyan vakcinát állítsunk elő, amely 100 pg-ot tartalmaz az egyes aktív adalékanyagokból, az alábbi oldatokat keverjük össze steril körülmények között:
- A 2394-es receptor oldata mg/ml koncentrációban, C pufferben 100 ml
- A 2169-es receptor oldata mg/ml koncentrációban, C pufferben 100 ml
- Puffereit fiziológiás sóoldat (PBS), pH=6,0 300 ml
- Alumínium-hidroxid, 10 mg/ml
AL+++ iont tartalmaz milliliterenként 50 ml
- Merthiolát, 1% (tömeg/térfogat) PBS-ben 10 ml
- PBS szükség szerint 1000 ml
4. példa
Az alacsony molekulatömegű alegység vakcináló hatóanyagként való fontosságának igazolása New Zealand albínó nyulaknak bőr alá és intramuszkulárisan 100 pg IM2394 vagy IM2169 receptort adunk be komplett Freund-féle adjuváns jelenlétében. Az első injekció után 21, illetve 42 nappal a nyulaknak ismét beadunk 100 pg-ot a tisztított receptorból, de ez alkalommal inkomplett Freund-féle adjuváns jelenlétében. Az utolsó injekció után 15 nappal az állatokból szérumot gyűjtünk, és komplementmentesítjük, majd 0,45 pm-es pórusméretű membránon szűrjük át. A szűrletet ezt követően IM2394-es vagy IM2169-es törzzsel érintkezésbe hozva kimerítjük, amely törzset ennek a műveletnek a végrehajtása céljából előzőleg szabad formájú vas jelenlétében tenyésztettünk (ilyen körülmények között a transzferrinreceptor szintézise represszálva van). Az érintkeztetés feltételei az alábbiak: 10 ml szűrletet adunk 1010 cfú-hoz (telepképző egység) az IM2394 törzs tenyészetéből. Az adszorpciót éjszakán át folytatjuk 4 °C-on, kevertetés közben. A baktériumokat ezután centrifugálással távolítjuk el. A felülúszót kinyeqük, majd két egymást követő adszorpciós műveletnek vetjük alá, a fentiek alapján.
Az egyes antiszérumokból, az anti-2394-es receptorból és az anti-2169-es receptorból hígítási sort készítünk M199 táptalajban (Gibco). Az egyes hígításokból 200-200 pl-t egy mikrotiterlemez lyukaiba tesszük (20,3x30,5 cm). Egy kontrollvizsgálatot is elvégzünk 200 pl M199 táptalajjal. Mindegyik lyukhoz hozzáadunk (i) 100 pl-t egy Neisseria meningitidis exponenciális növekedési fázisban levő tenyészetéből, Mueller-Hinton-táptalajban, amelyet 30 pmol/l EDTA-val egészítettünk ki, és
HU 219 673 Β (ii) 100 μΐ komplementet (fiatal nyúl széruma, hígítva).
Miután 30 percig hígítottuk 37 °C-on óvatos rázatás közben, 1 ml Mueller-Hinton-táptalajt adunk mindegyik lyukhoz, amely 1 ml Noble-agart tartalmaz túlhű- 5 tött állapotban. A táptalaj megszilárdulása után az inkubálást 37 °C-on végezzük 18-24 óráig; az egyes lyukakban megjelenő telepképző egységek számát kiértékeljük. Az antiszérum azon hígításának a reciproka, amelynek jelenlétében 50%-os a lízis a kontrolihoz viszonyítva, felel meg a baktericidtitemek. Az eredményeket az alábbi, III. táblázatban mutatjuk be.
III. táblázat Baktericidakti vitás
1. nyúl 2. nyúl
A 2394 immunizálás előtti Antireceptor- antiszérum A 2169 immunizálás előtti Antireceptor- antiszemm
2394 <8 2048 <8 <8
2228 <8 1024 <8 <8
2154 <8 2048 <8 <8
2234 <8 2048 <8 <8
2448 <8 256 <8 <4
2169 <16 <16 <8 1024
896 <8 <8 <8 65
Az anti-2394 antiszérum baktericidaktivitása kizárólag a jelen találmányban első típusúnak meghatározott törzsek ellen irányul (2394,2228, 2154, 2234 és 2448), míg az anti-2169-es antiszérum baktericidaktivitása kizárólag a második típusú törzsek ellen irányul (2169 és
876). Ez erősen arra utal, hogy a semlegesítőantitestek termelődését lényegében az alacsony molekulasúlyú alegység indukálja, amely az antigenikus variabilitást hordozza.
A továbbiakban megadjuk a szekvencialistákat.
SEQIDNO: 1
Subject: Amino acid sequence of the N. meningitidis 2394 subunit Tbp2.
Cya 1 Leu Gly Gly Gly 5 Gly Ser Phe Asp Leu 10 Asp Ser Val Glu Thr 15
Val Gin Asp Met His Ser Lys Pro Lys Tyr Glu Asp Glu Lys Ser
20 25 30
Gin Pro Glu Ser Gin Gin Asp Val Ser Glu Asn Ser Gly Alá Alá
35 40 45
Tyr Gly Phe Alá Val Ly3 Leu Pro Arg Arg Asn Alá His Phe Asn
50 55 60
Pro Lys Tyr Lys Glu Lys His Lys Pro Leu Gly Ser Met Asp Trp
65 70 75
Lys Lys Leu Gin Arg Gly Glu Pro Asn Ser Phe Ser Glu Arg Asp
80 85 90
Glu Leu Glu Lys Lys Arg Gly Ser Ser Glu Leu I le Glu Ser Lys
95 100 105
Trp Glu Asp Gly Gin Ser Arg Val val Gly Tyr Thr Asn Phe Thr
110 115 120
Tyr Val Arg Ser Gly Tyr Val Tyr Leu Asn Lys Asn Asn Ile Asp
125 130 135
Ile Lys Asn Asn Ile Val Leu Phe Gly Pro Asp Gly Tyr Leu Tyr
140 145 150
HU 219 673 Β
Tyr Lys Gly Lys Glu 155 Pro Ser Lys Glu Leu 160 Pro Ser Glu Lys Ile 165
Thr Tyr Lys Gly Thr Trp Asp Tyr Val Thr Asp Alá Met Glu Lys
170 175 180
Gin Arg Phe Glu Gly Leu Gly Ser Alá Alá Gly Gly Asp Lys Ser
185 190 19S
Gly Alá Leu Ser Alá Leu Glu Glu Gly Val Leu Arg Asn Gin Alá
200 205 210
Glu Alá Ser Ser Gly Kis Thr Asp Phe Gly Met Thr Ser Glu Phe
215 220 225
Glu Val Asp Phe Ser Asp Lys Thr Ile Lys Gly Thr Leu Tyr Arg
230 235 240
Asn Asn Arg Ile Thr Gin Asn Asn Ser Glu Asn Lys Gin He Lys
245 2S0 255
Thr Thr Arg Tyr Thr Ile Gin Alá THr Leu H is G Ly Asn Arg Phe
260 265 270
Lys Gly Lys Alá Leu Alá Alá Asp Lys Gly Alá Thr Asn Gly Ser
275 280 285
His Pro Phe Ile Ser Asp Ser Asp Ser Leu Glu Gly Gly Phe Tyr
290 295 300
Gly Pro Lys Gly Glu Glu Leu Alá Gly Lys Phe Leu Ser Asn A9p
305 310 315
Asn Lys Val Alá Alá Val Phe Gly Alá Lys Gin Ly3 Asp Lys Lys
320 325 330
Asp Gly Glu Asn Alá Alá Gly Pro Alá Thr Glu Thr Val Ile Asp
335 340 345
Alá Tyr Arg Ile Thr Gly Glu Glu Phe Lys Lys Glu Gin Ile Asp
350 355 360
Ser Phe Gly Asp Val Lys Lys Leu Leu Val Asp Gly Val Glu Leu
365 370 375
Ser Leu Leu Pro Ser Glu Gly Asn Lys Alá Alá Phe Gin His Glu
380 385 390
Ile Glu Gin Asn Gly Val Lys Alá Thr Val Cys Cys Ser Asn Leu
395 400 405
Asp Tyr Met Ser Phe Gly Lys Leu Ser Lys Gku Asn Lys Asp Asp
410 415 420
Met Phe Leu Gin Gly Val Arg Thr Pro Val Ser Asp Val Alá Alá
425 430 435
Arg Thr Glu Alá Lys Tyr Arg Gly Thr Gly Thr Trp Tyr Gly Tyr
440 445 450
Ile Alá Asn Gly Thr Ser Trp Ser Gly Glu Alá Ser Asn Gin Glu
45S 460 465
Gly Gly Asn Arg Alá Glu Phe Asp Val Asp Phe Ser Thr Lys Lys
470 475 480
Ile Ser Gly Thr Leu Thr Alá Lys Asp Arg Thr Ser Pro Alá Phe
485 490 495
HU 219 673 Β
Thr Ile Thr Alá Met 500 Ile Lys Asp Asn Gly 505 Phe Ser Gly Val Alá 510
Lys Thr Gly Glu Asn Gly Phe Alá Leu Asp Pro Gin Asn Thr Gly
515 520 S25
Asn Ser His Tyr Thr His Ile Glu Alá Thr val Ser Gly Gly Phe
530 535 540
Tyr Gly Lys Asn Alá Ile Glu Met Gly Gly Ser Phe Ser Phe Pro
545 550 555
Gly Asn Alá Pro Glu Gly Lys Gin Glu Lys Alá Ser Val Val Phe
560 565 570
Gly Alá Lys Arg Gin Gin Leu Val Gin
575
SEQ1DNO: 2
Subject: Amino acid sequence of the N. meningitidis 2394 subunitTbpl.
Glu Asn 1 Val Gin Alá Glu 5
Gin Alá Gin Glu Lys 10 Gin Leu Asp Thr Ile Gin 15 Val Lys Alá Lys 20
Lys Gin Lys Thr Arg 25 Arg Asp Asn Glu Val Thr 30 Gly Leu Gly Lys 35
Leu Val Lys Ser Ser 40 Asp Thr Leu Ser Lys Glu 45 Gin Val Leu Asn 50
Ile Arg Asp Leu Thr 55 Arg Tyr Asp Pro Gly Ile 60 Alá Val Val Glu 65
Gin Gly Arg Gly Alá 70 Ser Ser Gly Tyr Ser Ile 75 Arg Gly Met Asp 80
Lys Asn Arg Val Ser 85 Leu Thr Val Asp Gly Val 90 Ser Gin Ile Gin 95
Ser Tyr Thr Alá Gin 100 Alá Alá Leu Gly Gly Thr 105 Arg Thr Alá Gly 110
Ser Ser Gly Alá Ile 115 Asn Glu Ile Glu Tyr Glu 120 Asn Val Lys Alá 125
Val Glu Ile Ser Lys 130 Gly Ser Asn Ser Ser Glu 135 Tyr Gly Asn Gly 140
Alá Leu Alá Gly Ser 145 Val Alá Phe Gin Thr Lys 150 Thr Alá Alá Asp 155
Ile Ile Gly Glu Gly 160 Lys Gin Trp Gly Ile Gin 165 Ser Lys Thr Alá 170
Tyr Ser Gly Lys Asp 175 His Alá Leu Thr Gin Ser 180 Leu Alá Leu Alá 185
Gly Arg Ser Gly Gly 190 Alá Glu Alá Leu Leu Ile 195 Tyr Thr Lys Arg 200
Arg Gly Arg Glu Ile 205 His Alá His Lys Asp Alá 210 Gly Lys Gly Val 215
HU 219 673 Β
Gin Ser Phe Asn Arg Leu Val Leu Asp Glu Asp Lys Lys Glu Gly
220 225 230
Gly Ser Gin Tyr Arg Tyr Phe Ile Val Glu Glu Glu Cys His Asn
235 240 245
Gly Tyr Alá Alá Cys Lys Asn Lys Leu Lys Glu Asp Alá Ser Val
250 255 260
Lys Asp Glu Arg Lys Thr Val Ser Thr Gin Asp Tyr Thr Gly Ser
265 270 275
Asn Arg Leu Leu Alá Asn Pro Leu Glu Tyr Gly Ser Gin Ser Trp
280 285 290
Leu Phe Arg Pro Gly Trp His Leu Asp Asn Arg His Tyr Val Gly
295 300 30S
Alá Val Leu Glu Arg Thr Gin Gin Thr Phe Asp Thr Arg Asp Met
310 315 320
The Val Pro Alá Tyr Phe Thr Ser Glu Asp Tyr Val Pro Gly Ser
325 330 335
Leu Lys Gly Leu Gly Lys Tyr Ser Gly Asp Asn Lys Alá Glu Arg
340 345 350
Leu Phe Val Gin Gly Glu Gly Ser Thr Leu Gin Gly Ile Gly Tyr
355 360 365
Gly Thr Gly Val Phe Tyr Asp Glu Arg His Thr Lys· Asn Arg Tyr
370 375 380
Gly Val Glu Tyr Val Tyr His Asn Alá Asp Lys Asp Thr Trp Alá
385 390 395
Asp Tyr Alá Arg Leu Ser Tyr Asp Arg Gin Gly Ile Asp Leu Asp
400 405 410
Asn Arg Leu Gin Gin Thr His Cys Ser His Asp Gly Ser Asp Lys
415 420 425
Asn Cys Arg Pro Asp Gly Asn Lys Pro Tyr Ser Phe Tyr Lys Ser
430 435 440
Asp Arg Met Ile Tyr Glu Glu Ser Arg Asn Leu Phe Gin Alá Val
445 450 455
Phe Lys Lys Alá Phe Asp Thr Alá Lys Ile Arg His Asn Leu Ser
460 465 470
Ile Asn Leu Gly Tyr Asp Arg Phe Lys Ser Gin Leu Ser His Ser
475 480 485
Asp Tyr Tyr Leu Gin Asn Alá Val Gin Alá Tyr Asp Leu Ile Thr
490 495 500
Pro Lys Lys Pro Pro Phe Pro Asn Gly Ser Lys Asp Asn Pro Tyr
505 510 515
Arg Val Ser Ile Gly Lys Thr Thr Val Asn Thr Ser Pro Ile Cy3
520 525 530
Arg Phe Gly Asn Asn Thr Tyr Thr Asp Cys Thr Pro Arg Asn Ile
535 540 545
Gly Gly Asn Gly Tyr Tyr Alá Alá Val Gin Asp Asn Val Arg Leu
550 555 560
HU 219 673 Β
GLy Arg Trp Alá 565 Asp Val Gly Alá Gly 570 Ile Arg Tyr Asp Tyr 575 Arg
Ser Thr His Ser Glu Asp Lys Ser Val Ser Thr Gly Thr His Arg
580 585 590
Asn Leu Ser Tro Asn Alá Gly VaL Val Leu Lys Pro Phe Thr Trp
595 600 605
Met Asp Leu Thr Tyr Arg Alá Ser Thr Gly Phe Arg Leu Pro Ser
610 615 620
Phe Alá Glu Met Tyr Gly Trp Arg Alá Gly Glu Ser Leu Lys Thr
625 630 635
Leu Asp Leu Lys Pro Glu Lys Ser Phe Asn Arg Glu Alá Gly Ile
640 645 650
Val Phe Lys Gly Asp Phe Gly Α3Π Leu Glu Alá Ser Tyr Phe Asn
655 660 665
Asn Alá Tyr Arg Asp Leu Ile Alá Phe Gly Tyr Glu Thr Arg Thr
670 675 680
Gin Asn Gly Gin Thr Ser Alá Ser Gly Asp Pro Gly Tyr Arg Asn
685 690 695
Alá Gin Asn Alá Arg Ile Alá Gly Ile Asn Ile Leu Gly Lys Ile
700 705 710
Asp Trp Kis Gly Val Trp Gly Gly Leu Pro Asp Gly Leu Tyr Ser
715 720 725
Thr Leu Alá Tyr Asn Arg Ile Lys Val Lys Asp Alá Asp Ile Arg
730 735 740
Alá Asp Arg Thr Phe Val Thr Ser Tyr Leu Phe Asp Alá Val Gin
745 750 7S5
Pro Ser Arg Tyr Val Leu Gly Leu Gly Tyr Asp His Pro Asp Gly
760 765 770
Ile Trp Gly Ile Asn Thr Met Phe Thr Tyr Ser Lys Alá Lys Ser
775 780 785
val Asp Glu Leu Leu Gly Ser Gin Alá Leu Leu Asn Gly Asn Alá
790 795 800
Asn Alá Lys Lys Alá Alá Ser Arg Arg Thr Arg Pro Trp Tyr Val
805 810 815
Thr Asp Val Ser Gly Tyr Tyr Asn Ile Lys Lys His Leu Thr Leu
820 82S 830
Arg Alá Gly Val Tyr Asn Leu Leu Asn Tyr Arg Tyr Val Thr Trp
835 840 84S
Glu Asn Val Arg Gin Thr Alá Gly Gly Alá Val Asn Gin His Lys
850 855 860
Asn Val Gly Val Tyr Asn Arg Tyr Alá Alá Pro Gly Arg Asn Tyr
865 870 875
Thr Phe Ser Leu Glu Met Lys Phe
880
HU 219 673 Β
SEQIDNO: 3
Subject: Amino acid sequence of the N. meningitidis 2169 subunit Tbpl.
Glu 1 Asn Val Gin Alá 5 Gly
Gin Alá Gin Glu Lys Gin Leu Asp Thr Ile Gin Val Lys Alá Lys
10 15 20
Lys Gin Lys Thr Arg Arg Asp Asn Glu Val Thr Gly Leu Gly Lys
25 30 35
Leu Val Lys Thr Alá Asp Thr Leu Ser Lys Glu Gin Val Leu Asp
40 45 50
Ile Arg Asp Leu Thr Arg Tyr Asp Pro Gly Ile Alá Val Val Glu
55 60 65
Gin Gly Arg Gly Alá Ser Ser Gly Tyr Ser Ile Arg Gly Met Asp
70 75 80
Lys Asn Arg Val Ser Leu Thr VaL Asp Gly Leu Alá Gin Ile Gin
85 90 95
ser Tyr Thr Alá Gin Alá Alá Leu Gly Gly Thr Arg Thr Alá Gly
100 105 110
Ser Ser Gly Alá Ile Asn Glu Ile Glu Tyr Glu Asn Val Lys Alá
115 120 125
Val Glu Ile Ser Lys Gly Ser Asn Ser Val Glu Gin Gly Ser Gly
130 135 140
Alá Leu Alá Gly Ser Val Alá Phe Gin Tyr Lys Thr Alá Asp Asp
145 150 155
Val Ile Gly Glu Gly Arg Gin Trp Gly I le Gin Ser Lys Thr Alá
160 165 170
Tyr Ser Gly Lys Asn Arg Gly Leu Thr Gin Ser Ile Alá Leu Alá
17S 180 185
Gly Arg Ile Gly Gly Alá Glu Alá Leu Leu Ile His Thr Gly Arg
190 195 200
Arg Alá Gly Glu Ile Arg Alá His Glu Asp Alá Gly Arg Gly Val
205 210 215
Gin Ser Phe Asn Arg Leu Val Pro Val Glu Asp Ser Ser Glu Tyr
220 225 230
Alá Tyr Phe Ile Val Glu Asp Glu Cys Glu Gly Lys Asn Tyr Glu
235 240 24S
Thr Cys Lys Ser Lys Pro Lys Lys ASp Val Val Gly Lys Asp Glu
250 255 260
Arg Gin Thr Val Ser Thr Arg Asp Tyr Thr Gly Pro Asn Arg Phe
265 270 275
Leu Alá Asp Pro Leu Ser Tyr Glu Ser Arg Ser Trp Leu Phe Arg
280 285 290
Pro Gly Phe Arg Phe Glu Asn Lys Arg His Tyr Ile Gly Gly Ile
295 300 305
Leu Glu His Thr Gin Gin Thr Phe Asp Thr Arg Asp Met Thr Val
310 315 320
HU 219 673 Β
Pro Alá Phe Leu 325 Thr Lys Alá Val Phe 330 Asp Alá Asn Ser Lys 335 Gin
Alá Gly Ser Leu Pro Gly Asn Gly Lys Tyr Alá Gly Asn His Lys
340 345 350
Tyr Gly Gly Leu Phe Thr Asn Gly Glu Asn Gly Alá Leu Val Gly
35S 360 365
Alá Glu Tyr Gly Thr Gly Val Phe Tyr Asp Glu Thr His Thr Lys
370 375 380
Ser Arg Tyr Gly Leu Glu Tyr Val Tyr Thr Asn Alá Asp Lys Asp
385 390 395
Thr Trp Alá Asp Tyr Alá Arg Leu Ser Tyr Asp Arg Gin Gly Ile
400 405 410
Gly Leu Asp Asn His Phe Gin Gin Thr Hls Cys Ser Alá Asp Gly
415 420 425
Ser Asp Lys Tyr Cys Arg Pro Ser Alá Asp Lys Pro Phe Ser Tyr
430 435 440
Tyr Lys Ser Asp Arg Val Ile Tyr Gly Glu Ser His Arg Leu Leu
445 450 455
Gin Alá Alá Phe Lys Lys Ser Phe Asp Thr Alá Lys Ile Arg His
460 465 470
Aan Leu Ser Val Asn Leu Gly Phe Asp Arg Phe Asp Ser Asn Leu
475 480 485
Arg His Gin Aap Tyr Tyr Tyr Gin Hls Alá Asn Arg Alá Tyr Ser
490 495 500
Ser Lys Thr Pro Pro Ly3 Thr Alá Asn Pro Asn Gly Asp Lys Ser
505 510 515
Lys Pro Tyr Trp Val ser Ile Gly Gly Gly Asn Val Val Thr Gly
520 525 530
Gin Ile Cys Leu Phe Gly Asn Asn Thr Tyr Thr Asp Cys Thr Pro
535 540 545
Arg Ser Ile Asn Gly Lys Ser Tyr Tyr Alá Alá Val Arg Asp Asn
550 S5S 560
Val Arg Leu Gly Arg Trp Alá Asp Val Gly Alá Gly Leu Arg Tyr
565 570 575
SEQIDNO: 4
Subject: Amino acid sequence of the N. mertingitidis 2169 subunit Tbp2.
Cys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Phe Asp Leu
1 5 10
Asp Ser Val Asp Thr Glu Alá Pro Arg Pro Alá Pro Lys Tyr Gin
15 20 25
Asp Val Ser Ser Glu Lys Pro Gin Alá Gin Lys Asp Gin Gly Gly
30 35 40
Tyr Gly Phe Alá Met Arg Leu Lys Arg Arg Asn Trp Tyr Pro Gly
45 50 SS
HU 219 673 Β
Alá Glu Glu Ser Glu val 60 Lys Leu Asn Glu 6S Ser Asp Trp Glu Alá 70
Thr Gly Leu Pro Thr Lys Pro Lys Glu Leu Pro Lys Arg Gin Lys
75 80 85
Ser Val Ile GLu Lys Val Glu Thr Asp Gly Asp Ser Asp Ile Tyr
90 95 100
Ser Ser Pro Tyr Leu Thr Pro Ser Asn His Gin Asn Gly Ser Alá
105 110 115
Gly Asn Gly Val Asn Gin Pro Lys Asn Gin Alá Thr Gly His Glu
120 125 130
Asn Phe Gin Tyr Val Tyr Ser Gly Trp Phe Tyr Lys His Alá Alá
135 140 145
Ser Glu Lys Asp Phe Ser Asn Lys Lys Ile Lys Ser Gly Asp Asp
150 15S 160
Gly Tyr Ile Phe Tyr His Gly Glu Lys Pro Ser Arg Gin Leu Pro
165 170 175
Alá Ser Gly Lys Val Ile Tyr Lys Gly Val Trp His Phe Val Thr
180 185 190
Asp Thr Lys Lys Gly Gin Asp Phe Arg Glu Ile Ile Gin Pro Ser
195 200 205
Lys Lys Gin Gly Asp Arg Tyr Ser Gly Phe Ser Gly Asp Gly Ser
210 215 220
Glu Glu Tyr Ser Asn Lys Asn Glu Ser Thr Leu Lys Asp Asp His
225 230 235
Glu Gly Tyr Gly Phe Thr Ser Asn Leu Glu Val Asp Phe Gly Asn
240 245 250
Lys Lys Leu Thr Gly Lys Leu Ile Arg Asn Asn Alá Ser Leu Asn
255 260 265
Asp Tyr Arg Ser 580 Thr His Ser Asp Asp 535 Gly Ser Val Ser Thr 590 Gly
Thr Kis Arg Thr 595 Leu Ser Trp Asn Alá 600 Gly Ile Val Leu Lys 605 Pro
Alá Asp Trp Leu 610 Asp Leu Thr Tyr Arg 615 Thr Ser Thr Gly Phe 620 Arg
Leu Pro Ser Phe 625 Alá Glu Met Tyr Gly 630 Trp Arg Ser Gly Val 635 Gin
Ser Lys Alá Val 640 Lys Ile Asp Pro Glu 645 Lys Ser Phe Asn Lys 650 Glu
Alá Gly Ile Val 655 Phe Lys Gly Asp Phe 660 Gly Asn Leu Glu Alá 665 Ser
Trp Phe Asn Asn 670 Alá Tyr Arg Asp Leu 675 He Val Arg Gly Tyr 680 Glu
Alá Gin Ile Lys 68S Asn Gly Lys Glu Glu 690 Alá Lys Gly Asp Pro 695 Alá
Tyr Leu Asn Alá 700 Gin Ser Alá Arg Ile 705 Thr Gly Ile Asn Ile 710 Leu
HU 219 673 Β
Gly Lys Ile Asp 715 Trp Asn Gly Val Trp 720 Asp Lys Leu Pro Glu 725 Gly
Trp Tyr Ser Thr Phe Alá Tyr Asn Arg Val His Val Arg Asp Ile
730 735 740
Lys Lys Arg Alá Asp Arg Thr Asp Ile Gin Ser His Leu Phe Asp
745 7S0 755
Alá Ile Gin Pro Ser Arg Tyr Val Val Gly Leu Gly Tyr Asp Gin
760 765 770
Pro Glu Gly Lys Trp Gly Val Asn Gly Met Leu Thr Tyr Ser Lys
775 780 785
Alá Lys Glu Ile Thr Glu Leu Leu Gly Ser Arg Alá Leu Leu Asn
790 795 800
Gly Asn Ser Arg Asn Thr Lys Alá Thr Alá Arg Arg Thr Arg Pro
805 810 815
Trp Tyr Ile Val Asp Val Ser Gly Tyr Tyr Thr Ile Lys Lys His
820 825 830
Phe Thr Leu Arg Alá Gly Val Tyr Asn Leu Leu Asn Tyr Arg Tyr
835 840 845
Val Thr Trp Glu Asn Val Arg Gin Thr Alá Gly Gly Alá Val Asn
850 855 860
Gin His Lys Asn Val Gly Val Tyr Asn Arg Tyr Alá Alá Pro Gly
865 870 875
Arg Asn Tyr Thr Phe Ser Leu Glu Met Lys Phe
880 885
Asn Asn Thr Asn Asn Asp 270 Lys His Thr Thr 275 Gin Tyr Tyr Ser Leu 280
Asp Alá Gin Ile Thr Gly Asn Arg Phe Α3Π Gly Thr Alá Thr Alá
285 290 295
Thr Asp Lys Lys Glu Asn Glu Thr Lys Leu His Pro Phe Val Ser
300 305 310
Asp Ser Ser Ser Leu Ser Gly Gly Phe Phe Gly Pro Gin Gly Glu
315 320 325
Glu Leu Gly Phe Arg Phe Leu Ser Asp Asp Gin Lys Val Alá Val
330 335 340
Val Gly Ser Alá Lys Thr Lys Asp Lys Leu Glu Asn Gly Alá Alá
345 350 355
Alá Ser Gly Ser Thr Gly Alá Alá Alá Ser Gly Gly Alá Alá Gly
360 365 370
Thr Ser Ser Glu Asn Ser Lys Leu Thr Thr Val Leu Asp Alá Val
375 380 385
Glu Leu Thr Leu Asn Asp Lys Lys ILe Lys Asn Leu Asp Asn Phe
390 395 400
Ser Asn Alá Alá Gin Leu Val Val Asp Gly Ile Met Ile Pro Leu
405 410 415
Leu Pro Lys Asp Ser Glu Ser Gly Asn Thr Gin Alá Asp Lys Gly
420 425 430
HU 219 673 Β
Lys Asn Gly Gly Thr Glu 435 Phe
Glu Ser Asp Lys Lys Asp 450 Alá
Alá Gin Thr Alá Ser Asn 465 Thr
Lys Thr Tyr Glu Val Glu 480 Val
Lys Tyr Gly Met Leu Thr 495 Arg
Alá Gly Gly Asn Ser Ser 510 Gin
Glu Gin Ser Met Phe Leu 525 Gin
Ile Pro Thr Asp Gin Asn 540 Val
His Ile Alá Asn Gly Thr 555 Ser
Glu Gly Gly Asn Arg Alá 570 Glu
Lys Ile Thr Gly Lys Leu 585 Thr
Phe Thr Ile Glu Gly Met 600 Ile
Alá Lys Thr Alá Glu Ser 615 Gly
Thr Arg Thr Pro Lys Alá 630 Tyr
Gly Phe Tyr Gly Pro Lys 645 Alá
Tyr Pro Gly Asp Lys Gin 660 Thr
Asp Gly Asn Ser Alá Ser 675 Ser
Arg Gin Gin Pro Val Gin 690
Thr Arg Lys 440 Phe Glu His Thr Pro 445
Gin Alá Gly 455 Thr Gin Thr Asn Gly 460
Alá Gly Asp 470 Thr Asn Gly Lys Thr 475
Cys Cys Ser 485 Asn Leu Asn Tyr Leu 490
Lys Asn Ser 500 Lys Ser Alá Met Gin 505
Alá Asp Alá 515 Lys Thr Glu Gin val 520
Gly Glu Arg 530 Thr Asp Glu Lys Glu 535
Val Tyr Arg 545 Gly Ser Trp Tyr Gly 550
Trp Ser Gly 560 Asn Alá Ser Asp Lys 565
Phe Thr Val 575 Asn Phe Alá Asp Lys 580
Alá Glu Asn 590 Arg Gin Alá Gin Thr 595
Gin Gly Asn 605 Gly Phe Glu Gly Thr 610
Phe Asp Leu 620 Asp Gin Lys Asn Thr 625
He Thr Asp 635 Alá Lys Val Lys Gly 640
Glu Glu Leu 650 Gly Gly Trp Phe Alá 655
Glu Lys Alá 665 Thr ALa Thr Ser Ser 670
Alá Thr Val 680 Val Phe Gly Alá Lys 685
SZABADALMI IGÉNYPONTOK

Claims (15)

1. Vakcinális gyógyászati készítmény Neisseria meningitidis fertőzés megelőzésére vagy hatásainak gyengítésére, azzal jellemezve, hogy terápiás hatóanyagként legalább egy első és egy második humán transzferrinhez kötődni képes molekulát tartalmaz; amely első molekula a Neisseria meningitidis egy első törzséből származik, amelyben a humán transzferrinreceptor leg55 alább egy nagy molekulatömegű alegységet és egy kisebb molekulatömegű alegységet tartalmaz, és amelyben a kisebb molekulatömegű alegységet a Neisseria meningitidis 2394-es törzs receptora (2394-es receptor) elleni antiszérum felismeri, de nem ismeri fel a Neisseria meningitidis 2169-es törzs receptora (2169-es receptor) elleni antiszérum; és amely második molekula a Neisseria meningitidis egy másik törzséből származik, amelyben a humán transzferrinreceptor legalább egy
HU 219 673 Β nagy alegységet és egy kisebb molekulatömegű alegységet tartalmaz, és amelyben a kisebb molekulatömegű alegységet egy anti-2169 receptorantiszérum felismeri, de nem ismeri fel egy anti-2394 receptorantiszérum; és amely első és második molekulák mindegyike tartalmazza a Neisseria meningitidis humán transzferrinreceptorának kisebb molekulatömegű alegységét vagy annak legalább egy részét.
2. Az 1. igénypont szerinti vakcinális gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy terápiás hatóanyagként legalább egy első és egy második humán transzferrinhez kötődni képes molekulát tartalmaz; amely első molekula a Neisseria meningitidis egy első törzséből származik, amely humán transzferrinreceptort tartalmaz, és amelyben a nagy molekulatömegű alegységet és a kisebb molekulatömegű alegységet a Neisseria meningitidis 2394-es törzs receptora elleni antiszérum felismeri; és amely második molekula a Neisseria meningitidis egy másik törzséből származik, amely humán transzferrinreceptort tartalmaz, és amelyben a nagy molekulatömegű alegységet és a kisebb molekulatömegű alegységet egy anti-2169 receptorantiszérum felismeri.
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti vakcinális gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy terápiás hatóanyagként legalább egy első és egy második, a humán transzfemnhez kötődni képes molekulát tartalmaz; az első molekula egy első Neisseria meningitidis törzsből származik, amelyben a humán transzferrinreceptor összetétele lényegében egy nagy molekulatömegű alegység, melynek mérete körülbelül 100-90 kD, valamint egy kisebb molekulatömegű alegység, melynek mérete körülbelül 75-60 kD; a második molekula egy második Neisseria meningitidis törzsből származik, amelyben a humán transzferrinreceptor összetétele lényegében egy nagy molekulatömegű alegység, melynek mérete körülbelül 100-90 kD, valamint egy kisebb molekulatömegű alegység, melynek mérete körülbelül 90-80 kD.
4. A 3. igénypont szerinti vakcinális gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy az első molekula egy első Neisseria meningitidis törzsből származik, amelyben a humán transzferrinreceptor összetétele lényegében egy nagy molekulatömegű alegység, melynek mérete körülbelül 93-95 kD, valamint egy kisebb molekulatömegű alegység, melynek mérete körülbelül 72-65 kD.
5. A 4. igénypont szerinti vakcinális gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy az első molekula egy első Neisseria meningitidis törzsből származik, amelyben a humán transzferrinreceptor összetétele lényegében egy nagy molekulatömegű alegység, melynek mérete körülbelül 93 kD, valamint egy kisebb molekulatömegű alegység, melynek mérete körülbelül 67-70 kD.
6. Az 5. igénypont szerinti vakcinális gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy a második molekula egy második Neisseria meningitidis törzsből származik, amelyben a humán transzferrinreceptor összetétele lényegében egy nagy molekulatömegű alegység, melynek mérete körülbelül 100-95 kD, valamint egy kisebb molekulatömegű alegység, melynek mérete körülbelül 87-85 kD.
7. A 6. igénypont szerinti vakcinális gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy a második molekula egy második Neisseria meningitidis törzsből származik, amelyben a humán transzferrinreceptor összetétele lényegében egy nagy molekulatömegű alegység, melynek mérete körülbelül 98 kD, valamint egy kisebb molekulatömegű alegység, melynek mérete körülbelül 87 kD.
8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti vakcinális gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy a humán transzfemnhez kötődni képes első molekula az első törzsből származik, és az első törzs humán transzferrinreceptora.
9. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti vakcinális gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy a humán transzfemnhez kötődni képes, és az első törzsből származó első molekula az első törzs humán transzferrinreceptorának kisebb molekulatömegű alegysége vagy a kisebb molekulatömegű alegység fragmentje vagy analógja.
10. A 9. igénypont szerinti vakcinális gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy a humán transzferrinhez kötődni képes, és az első törzsből származó első molekula az első törzs humán transzferrinreceptorának kisebb molekulatömegű alegysége.
11. Az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti vakcinális gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy a humán transzfemnhez kötődni képes, és a második törzsből származó második molekula a második törzs humán transzferrinreceptora.
12. Az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti vakcinális gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy a humán transzfemnhez kötődni képes, és a második törzsből származó második molekula a második törzs humán transzferrinreceptorának kisebb molekulatömegű alegysége vagy a kisebb molekulatömegű alegység fragmentje vagy analógja.
13. A 12. igénypont szerinti vakcinális gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy a humán transzferrinhez kötődni képes, és a második törzsből származó második molekula a második törzs humán transzferrinreceptorának kisebb molekulatömegű alegysége.
14. Az 1-13. igénypontok bármelyike szerinti vakcinális gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy az első és második molekulák a Neisseria meningitidis B szerocsoport egy első és egy második törzséből származnak.
15. Eljárás az 1-14. igénypontok bármelyike szerinti vakcinális gyógyászati készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy a hatóanyag-molekulákat gyógyászatilag elfogadható hordozó- és/vagy egyéb segédanyagokkal elegyítjük.
HU9301630A 1991-10-03 1992-09-29 Neisseria meningitidis elleni vakcina HU219673B (hu)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9112177A FR2682041B1 (fr) 1991-10-03 1991-10-03 Vaccin contre les infections a neisseria meningitidis.
PCT/FR1992/000905 WO1993006861A1 (fr) 1991-10-03 1992-09-29 VACCIN CONTRE LES INFECTIONS A $i(NEISSERIA MENINGITIDIS)

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT69980A HUT69980A (en) 1995-09-28
HU219673B true HU219673B (hu) 2001-06-28

Family

ID=9417549

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9301630A HU219673B (hu) 1991-10-03 1992-09-29 Neisseria meningitidis elleni vakcina

Country Status (14)

Country Link
US (1) US5618541A (hu)
EP (1) EP0560968B1 (hu)
JP (1) JPH06503365A (hu)
AT (1) ATE140626T1 (hu)
AU (1) AU662176B2 (hu)
CA (1) CA2097056A1 (hu)
DE (1) DE69212459T2 (hu)
DK (1) DK0560968T3 (hu)
ES (1) ES2090696T3 (hu)
FI (1) FI107233B (hu)
FR (1) FR2682041B1 (hu)
HU (1) HU219673B (hu)
NO (1) NO306538B1 (hu)
WO (1) WO1993006861A1 (hu)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2682114B1 (fr) * 1991-10-03 1996-02-23 Pasteur Merieux Serums Vacc Vaccin de sous-unite contre les infections a neisseria meningitidis et sous-unites correspondantes a l'etat purifie.
FR2692592B1 (fr) * 1992-06-19 1995-03-31 Pasteur Merieux Serums Vacc Fragments d'ADN codant pour les sous-unités du récepteur de la transferrine de Neisseria meningitidis et procédés les exprimant.
JPH09506247A (ja) * 1993-11-08 1997-06-24 コノート ラボラトリーズ リミテッド ヘモフィリス属菌株トランスフェリン受容体遺伝子
FR2720408B1 (fr) * 1994-05-31 1996-08-14 Pasteur Merieux Serums Vacc Fragments Tbp2 de Neisseria meningitidis.
FR2739624B1 (fr) * 1995-10-10 1997-12-05 Pasteur Merieux Serums Vacc Nouvelle sous-unite tbp2 de neisseria meningitidis
US6290970B1 (en) * 1995-10-11 2001-09-18 Aventis Pasteur Limited Transferrin receptor protein of Moraxella
US6087036A (en) 1997-07-25 2000-07-11 3M Innovative Properties Company Thermal management system and method for a solid-state energy storing device
FR2767060B1 (fr) * 1997-08-07 2000-02-11 Pasteur Merieux Serums Vacc Vaccin meningocoque comportant la valence de souche bz83
GB9726398D0 (en) * 1997-12-12 1998-02-11 Isis Innovation Polypeptide and coding sequences
GB9808866D0 (en) * 1998-04-24 1998-06-24 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
GB9810276D0 (en) * 1998-05-13 1998-07-15 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
FR2785293B1 (fr) * 1998-10-30 2002-07-05 Pasteur Merieux Serums Vacc Acides nucleiques et polypeptides specifiques des souches pathogenes du genre neisseria
US10967045B2 (en) 1998-11-02 2021-04-06 Secretary of State for Health and Social Care Multicomponent meningococcal vaccine
GB9823978D0 (en) * 1998-11-02 1998-12-30 Microbiological Res Authority Multicomponent meningococcal vaccine
PT2255826E (pt) 2002-08-02 2016-06-08 Glaxosmithkline Biologicals Sa Composições de vacina de neisseria compreendendo uma combinação de antigénios
DK2395073T3 (en) 2002-11-01 2017-10-23 Glaxosmithkline Biologicals Sa Process for drying.
DK1961426T3 (da) 2003-10-02 2011-08-08 Novartis Ag Kombinationsvacciner mod meningitis
ES2346314T3 (es) 2003-10-02 2010-10-14 Glaxosmithkline Biolog Sa Antigenos de b. pertussis y uso de los mismos en vacunacion.
GB0505996D0 (en) 2005-03-23 2005-04-27 Glaxosmithkline Biolog Sa Fermentation process
US20090123499A1 (en) 2006-06-12 2009-05-14 Nathalie Devos Vaccine
GB0700562D0 (en) 2007-01-11 2007-02-21 Novartis Vaccines & Diagnostic Modified Saccharides
JP2013521327A (ja) 2010-03-10 2013-06-10 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム 免疫原性組成物

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4681761A (en) * 1985-10-24 1987-07-21 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University Major iron-regulated protein of Neisseria gonorrhoeae and its use as vaccine
US5292869A (en) * 1989-04-27 1994-03-08 The Board Of Governors Of The University Method for isolating and purifying transferrin and lactoferrin receptor proteins from bacteria and the preparation of vaccines containing the same

Also Published As

Publication number Publication date
EP0560968B1 (fr) 1996-07-24
NO932010L (no) 1993-06-02
HUT69980A (en) 1995-09-28
AU662176B2 (en) 1995-08-24
ATE140626T1 (de) 1996-08-15
CA2097056A1 (en) 1993-04-04
FI932491A (fi) 1993-06-01
FI932491A0 (fi) 1993-06-01
DE69212459D1 (de) 1996-08-29
DK0560968T3 (da) 1996-11-25
AU2762492A (en) 1993-05-03
NO306538B1 (no) 1999-11-22
JPH06503365A (ja) 1994-04-14
FR2682041B1 (fr) 1994-01-14
FI107233B (fi) 2001-06-29
US5618541A (en) 1997-04-08
EP0560968A1 (en) 1993-09-22
DE69212459T2 (de) 1996-12-05
WO1993006861A1 (fr) 1993-04-15
FR2682041A1 (fr) 1993-04-09
ES2090696T3 (es) 1996-10-16
NO932010D0 (no) 1993-06-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU219673B (hu) Neisseria meningitidis elleni vakcina
US6019982A (en) Mutant enterotoxin effective as a non-toxic oral adjuvant
Wray et al. Identification and characterization of a uroepithelial cell adhesin from a uropathogenic isolate of Proteus mirabilis
KR100293025B1 (ko) 고나도트로핀방출호르몬에대한면역원성캐리어시스템
JP2007332149A (ja) マイコバクテリア感染症に対するワクチン
JPH10513349A (ja) 微生物蛋白質と、この蛋白質を産生する微生物と、該蛋白質のワクチンおよび結核検出での利用
DE69737323T2 (de) Adhesin aus Helicobacter pylori, welches an Blutgruppenantigene bindet
JP3236610B2 (ja) 豚胸膜肺炎用ワクチン
US5618540A (en) Subunit vaccine against Neisseria meningitidis infections and corresponding subunits in the purified state
EP0759033A1 (en) CLONING OF NON-IgA Fc BINDING FORMS OF THE GROUP B STREPTOCOCCAL BETA ANTIGENS
PT90310B (pt) Processo para a obtencao de preparacoes de adenilato-ciclase
JPH02291271A (ja) 発現伝播体を有する組成物
US6214356B1 (en) Use of adenylate cyclase or bacteria producing it as vaccines against bordetella
EP0309746A1 (de) Antimalaria-Vakzine
JP3140776B2 (ja) 無細胞ワクチン
Johnson et al. Purification and immunobiological properties of R antigen and its relation to M protein of type 3 group A Streptococcus
CA2081950A1 (en) Vaccine for the prevention of infections caused by pasteurella haemolytica
WO1998026798A2 (en) IMMUNIZATION AGAINST NEISSERIA GONORRHOEAE AND $i(NEISSERIA MENINGITIDIS)
DE3531148A1 (de) Immunogene polypeptidsequenz des hepatitis-b-virus

Legal Events

Date Code Title Description
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee