HU218025B - HSV glikoprotein D-t és 3-dezacilezett monofoszforil-lipid-A-t tartalmazó Herpesz Simplex vírus elleni vakcina - Google Patents

HSV glikoprotein D-t és 3-dezacilezett monofoszforil-lipid-A-t tartalmazó Herpesz Simplex vírus elleni vakcina Download PDF

Info

Publication number
HU218025B
HU218025B HU9302645A HU9302645A HU218025B HU 218025 B HU218025 B HU 218025B HU 9302645 A HU9302645 A HU 9302645A HU 9302645 A HU9302645 A HU 9302645A HU 218025 B HU218025 B HU 218025B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
rgd
mpl
alum
hsv
vaccine
Prior art date
Application number
HU9302645A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT67052A (en
HU9302645D0 (en
Inventor
Myriam Francotte
Nathalie Marie-Josephe Claude Garcon-Johnson
Jean-Paul Prieels
Moncef Slaoui
Original Assignee
Smithkline Beecham Biologicals S.A.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=10691946&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU218025(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Smithkline Beecham Biologicals S.A. filed Critical Smithkline Beecham Biologicals S.A.
Publication of HU9302645D0 publication Critical patent/HU9302645D0/hu
Publication of HUT67052A publication Critical patent/HUT67052A/hu
Publication of HU218025B publication Critical patent/HU218025B/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
    • C12N2710/16634—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

A találmány tárgya vakcinakészítmény, amelyre jellemző, hogy egy HSV-glikoprotein D-t vagy annak egy immunológiai fragmentumát tartalmazza3-dezacilezett-monofoszforil-lipid A-val konjugálva, valaminttartalmaz egy megfelelő vivőanyagot. ŕ

Description

A találmány tárgya új vakcinakészítmények, eljárások ezek előállítására, és a terápiában való felhasználásuk. Pontosabban, a jelen találmány tárgya Herpesz Simplexvírus-fertőzések, közelebbről a Herpesz Simplex vírus 2 (HSV-2) fertőzések kezelésére szolgáló új készítmények.
A HSV-2 a genitális herpesz primer etiológiai faktora, és a HSV-l-gyel együtt (a herpes labiális oki tényezője) jellemezhetők azon tulajdonsággal, hogy akut megbetegedést és latens fertőzést is okozhatnak, elsősorban az idegi ganglionsejtekben.
Genitális herpesz becslések szerint körülbelül 5 millió embernél fordul elő csak az USA-ban, minden évben 500 000 klinikai esetet (primer és visszatérő fertőzés) jegyeznek. A primer fertőzés szokványosán a pubertás után fordul elő, és fájdalmas bőrelváltozás lokális megjelenésével jellemezhető, amely 2-3 hétig tart. A primer fertőzést követő hat hónapon belül a betegek 50%-a tapasztalja a betegség kiújulását. A betegek körülbelül 25%-ánál a betegség 10-15 visszatérő epizódja fordul elő évente. Károsodott immunrendszerű betegek esetén a nagy frekvenciával visszatérő tünetek előfordulása statisztikailag gyakoribb, mint a normálbeteg-populációban.
Mind a HSV-1, mind a HSV-2 vírus számos, a vírus felszínén elhelyezkedő glikoprotein komponenssel rendelkezik. Ezek mint gA, gB, gC, gD és gE stb. ismeretesek.
A glikoprotein D a vírusmembránon helyezkedik el, és a fertőzött sejtek citoplazmájában is megtalálható (Eisenberg R. J. és munkatársai, J. of Virol, 35., 428-435. 1980). 393 aminosavat tartalmaz, köztük egy jellemző peptidet, és molekulasúlya körülbelül 60 kD. A HSV által termelt összes glikoprotein közül valószínűleg ez a legjobban ismert (Cohen és munkatársai, J. Virology 60., 157-166. 1986). Ismert, hogy in vivő központi szerepet játszik a vírus sejtmembránhoz való tapadásában. Ezentúl a glikoprotein D képesnek mutatkozott in vivő a neutralizálóantitestek aktiválására (Eing és munkatársai, J. Med. Virology 127.: 59-65. 1989). Mindazonáltal a latens HSV-2 vírus még reaktiválódhat, és a betegség kiújulását okozhatja a páciens szérumában jelen lévő magas neutralizálóantitest-titer ellenére is.
A neutralizálóantitestek indukálására való képesség még önmagában elégtelen a betegség adekvát leküzdésére. A betegség kiújulásának megelőzése céljából valamilyen vakcina szükséges, hogy ne csak a neutralizálóantitesteket stimuláljuk, hanem a T-sejtek közvetítette sejtes immunválaszt is. Jelen találmány ezt a célt szolgálja.
Jelen találmány tárgya egy olyan vakcina, amely HSV-glikoprotein D-t vagy annak immunológiai fragmentumát tartalmazza 3-O-dezacilezett monofoszforillipid A-hoz (3D-MPL) - a monofoszforil-lipid A egy dezacilezett származékához -, valamint egy megfelelő vivőanyaghoz kötve. Szokásos módon a glikoprotein D a HSV-2-ből származik. A vivőanyag lehet olaj-víz emulzió vagy timsó. A 3D-MPL 10-100 pg, előnyösen 25-50 pg/dózis mennyiségben van jelen, míg az antigén mennyisége jellemzően 2-50 pg/dózis tartományban található.
A 3D-MPL a 2220211 (Ribi) számú brit szabadalmi leírásban ismertetett eljárással nyerhető.
A találmány egyik megvalósítási formája a 308 aminosavból álló megrövidített HSV-2 glikoprotein D, ami 1-306, természetben előforduló glikoproteint tartalmaz a megrövidített protein C-terminális végén aszparagin és glutamin addíciójával, ami közömbösíti annak membránhoz kötődő részét. A protein ezen formája tartalmazza a jellemző peptidet, amelyik lehasadva egy aktív, 283 aminosavból álló proteint képez. Ezen protein kínaihörcsögpetefészek-sejtekben történő előállítására a Genentech EP-B-139 417 számú európai szabadalmi leírásában kerül ismertetésre.
Az aktív fragmentum jelen találmány szerint előnyösen vakcinakészítményekben használható, és rgD2t-vel jelöljük.
A HSV-antigén kémiailag vagy egyéb módon konjugálható egy részecskékből álló vivőanyaghoz. Különösen előnyös megközelítés a kémiai konjugálás a hepatitisz B felületiantigén-részéhez a hepatitisz B felületiantigén-felületén elhelyezkedő szabad szulfhidrilcsoportokon keresztül. Lásd az erre vonatkozó, WO 92/11 291 számon publikált nemzetközi bejelentést.
A jelen találmány szerinti készítmények nagyon hatékonyak az immunvédekezés serkentésében még igen alacsony antigéndózisok esetén is (például 5 pg rgD2t).
Kiváló védelmet nyújtanak a primer fertőzés ellen, és előnyös módon mind a specifikus humorális (neutralizálóantitestek), mind az effektorsejt közvetítette (DTH) immunválaszt stimulálják.
A nemtoxikus olaj-víz emulziók előnyösen egy nemtoxikus olajat (például szkvalán vagy szkvalén) és egy emulgeálószert (például Tween 80) tartalmaznak vizes közegben. A vizes közeg lehet például foszfáttal pufferolt fiziológiás sóoldat.
A jelen találmány további szempontból nyújt egy, az itt leírtaknak megfelelő vakcinakészítményt gyógyászati felhasználásra, különösen a Herpesz Simplexvírus-fertőzések kezelésére vagy megelőzésére.
A jelen találmány szerinti vakcina a HSV gD vagy immunológiai fragmentumának immunoprotektív mennyiségét tartalmazza, és ez szokványos technikákkal előállítható.
A vakcinák előállítását a Voller és társai által kiadott New Trends and Developments in Vaccines-ban (University Park Press, Baltimore, Maryland, USA, 1978) írják le általában. A liposzómákba való bezárást (bekapszulázást) például Fullerton a 4 235 877 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban írja le. A proteinek konjugálását makromolekulákhoz például Likhite (4 372 945 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás) és Armor és munkatársai (4 474 757 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás) ismertetik.
A protein mennyiségét minden vakcinadózisban úgy választjuk meg, hogy ez a mennyiség védekező immunválaszt váltson ki az oltóanyagokra jellemző szignifikáns, káros mellékhatások nélkül. Ez a mennyiség vál2
HU 218 025 Β tozó attól függően, hogy melyik specifikus immunogén anyagot alkalmazzuk. Általánosságban várhatóan mindegyik dózis 1-1000 pg proteint tartalmaz, előnyösen 2-1000 pg-ot, még előnyösebben 4-40 pg-ot. Egy specifikus vakcina optimális mennyiségét standard vizsgálatokkal állapíthatjuk meg, amibe beletartozik az alanyokban az antitesttiterek és egyéb válaszreakciók vizsgálata. A kezdeti vakcinációt követően az értékemelkedés a vizsgálati alanyoknál körülbelül 4 héten belül jelentkezik.
A HSV-infekció veszélyének kitett személyek beoltásán kívül a jelen találmány szerinti gyógyászati készítmények felhasználhatók a HSV-fertőzésben szenvedő betegek immunoterápiás kezelésére is.
Jelen találmány tárgya továbbá eljárás az előbbiekben leírt vakcina előállítására, melynek során a HSV-2 glikoprotein D-t vagy immunológiai fragmentumát egy vivőanyaggal, például egy olaj-víz emulzióval vagy timsóval és 3D-MPL-lel összekeverjük.
Egy rekombináns Herpesz Simplex vírus glikoprotein D alegységvakcina adalékanyagainak összehasonlító hatékonysági vizsgálata
Ebben a vizsgálatban tengerimalacok felhasználásával értékeltük néhány adalékanyagnak a Herpesz Simplex 1 vírusból származó rekombináns glikoprotein D (2 rgD2t) immunológiai védőhatását igazoló képességét. A vizsgált adalékanyagok, az alumínium-hidroxid, az alumínium-hidroxid és 3-dezacilezett monofoszforil-lipid A kombinációja és a 3-dezacilezett-monofoszforil-lipid A olaj-víz emulzióban voltak.
1. Az antigén ismertetése
A HSV rgD2t egy genetikusán meghatározott rekombináns megrövidített glikoprotein, amely a fertőzött kínaihörcsög-petefészek sejtjeiben (CHO) termelődik (0 139 417 számú európai szabadalom).
2. Antigénadalékanyag-készítmények és immunizáló hatásuk értékelése
Két különböző kísérletet végeztünk néhány rgD2t készítmény immunvédekezésre való hatásának értékelésére tengerimalacok felhasználásával. Az első kísérletben tengerimalac-csoportokat immunizáltunk három ízben alacsony antigéndózissal (5 pg rgD2t) négyféle adalékanyag hozzáadásával, az alábbiakban ismertetettek szerint. Két héttel az utolsó immunizálást követően intravaginálisan HSV 2-t juttattunk be, majd naponta figyelemmel kísértük a primer és visszatérő HSV-2 betegség tüneteinek kifejlődését. A második kísérletben ezeket a készítményeket nagyobb állatcsoportok felhasználásával is értékeltük. Az ezen készítmények hatékonyságát befolyásoló faktorokat is vizsgáltuk, mint például az antigén dózisát és az adalékanyag-készítményt.
2.1. Antigénadalékanyag-készitmények
Az első kísérletben a tengerimalacokat a következő adalékanyag-készítményekkel immunizáltuk. Minden dózist (5 pg) 0,25 ml térfogatban adagoltunk.
2.1.1. rdD2t/Alum (alumínium-hidroxid)
Az Alumot a Superfosból nyertük [Alhydrogel (Boehimte) Superfos, Dánia]. 5 pg tisztított rgD2t-t adszorbeáltunk egy éjszakán keresztül 4 °C-on alumíniumhidroxidhoz (Alum), azaz 0,25 mg Al3t-ekvivalenshez 0.25 ml 6,8-as pH-jú 150 mM NaCl-10 mM foszfát pufferban.
2.1.2. rgD2t/alumínium-hidroxid és 3D-MPL
A 3D-MPL-t a Ribi Immunochem. Research, Inc.től szereztük be. Miután egy éjszakán át adszorbeáltunk 5 pg gD2t-t Alumhoz a 2.1.1. pontban leírtak szerint, az adalékanyag-készítményt lecentrifugáltuk és a felülúszót eltávolítottuk. Azután egyenlő mennyiségű 100 pg 3D-MPL-t tartalmazó adszorpciós puffért adtunk az Alumhoz kötött rgD2t-hez.
Mindkét rgD2t/Alum készítmény esetén azt találtuk, hogy az rgD2t-nek több mint 98%-a épült be az alumínium-hidroxid-adalékanyagba.
2.1.3. rgD2t/3D-MPL olaj-víz emulzióban (R)
Az olaj-víz emulzió 12 vegyes%-os lecitin-szkvalén olajhoz és 0,08% Tween 80-hoz való hozzáadásával készült. A 3D-MPL-t a kívánt végső koncentrációban adtuk hozzá. E készítmény 1%-át azután hozzákevertük 5 pg vizes fázisban levő rgD2t-hez 0,25 ml térfogatban, így egy olyan 1%-os olaj-víz emulziót kaptunk, amely 100 pg 3D-MPL-t tartalmaz.
A fentiekhez hasonló adalékanyag-készítményeket állítottunk elő, azzal a különbséggel, hogy az rgD2t különböző mennyiségeit tartalmazták, és/vagy immunostimulátort használtunk a második kísérletben. 0,5 ml összmennyiségben adagoltuk őket. Ezeket a készítményeket az alábbiakban ismertetjük:
rgD2t/Alum: 5 vagy 20 pg rgD2t
0,5 mg Al3+ ekvivalens 0,5 ml dózisban rgD2t/Alum és 3D-MPL: 5 vagy 20 pg rgD2t
0,5 mg Al3+ ekvivalens 50 pg 3D-MPL 0,5 ml dózisban rgD2t/3D-MPL olaj-víz emulzióban (R): 5 vagy 20 pg rgD2t-t állítottunk elő a fent leírtak szerint 1% olaj-víz emulzióban (2.1.3.). Egy 0,5 ml-es dózis 5 pg vagy 20 pg rgD2t-t és 50 pg 3D-MPL-t tartalmazott egy 1%-os olaj-víz emulzióban.
rgD2t/3D-MPL olaj-víz emulzióban (S). A vivőanyag az alábbiak szerint készült: 0,4 térfogat% Tween 80-at tartalmazó, foszfáttal pufferolt fiziológiás sóoldathoz (PBS) hozzáadtunk 5 térfogat% Pluronic L121-et és 10% szkvalánt, és a kapott keveréket egy mikrofluidizálón (Model M/110 Microfluidics Corp.) keresztül mikrofluidizáltuk úgy, hogy a keletkezett emulzió csak szubmikron nagyságú részecskéket tartalmazott. Ezután 50 pg 3D-MPL-t adtunk az emulzióhoz. Ebből a 3D-MPL-tartalmú emulzióból egységnyi térfogatot kevertünk össze azonos mennyiségű, kétszeresen koncentrált antigénnel, és rövid ideig összekevertük őket, hogy biztosítsuk a komponensek teljes elkeveredését. A végső készítmény a következőket tartalmazza: 0,2% Tween 80, 2,5% Pluronic L 121, 5% szkvalán, 50 pg 3D-MPL és 5 pg vagy 20 pg rgD2t egy 0,5 ml-es dózisban.
2. Immunizálási táblázat
Nőstény Hartley-tengerimalacok (200-250 g) csoportjait immunizáltuk három alkalommal, a 0., a 28. és a 95. napon 4, különböző adalékanyaggal előállított, 5 pg mennyiségű rgD2t-vel.
HU 218 025 Β
Az immunizálást szubkután, 0,25 ml injekció beadásával végeztük. A kontrollállatokat ugyanezen protokoll szerint az adalékanyagokkal injekcióztuk be, vagy kezeletlenül maradtak.
A különböző csoportokat az alábbiak szerint immunizáltuk:
1. csoport (n=4)=5 pg rgD2t/3D-MPL (100 pg) olajvíz emulzió (R);
2. csoport (n = 4) = 5 pg rgD2t/Alum és 3D-MPL (100 Pg);
3. csoport (n=4)=5 pg rgD2t/Alum;
4. csoport (n=5)=csak Alum;
5. csoport (n=5)=csak 3D-MPL (100 pg);
6. csoport (n=8)=kezeletlen.
Az állatoktól minden 2. héten vért vettünk antitestmeghatározás céljából, amit ELISA- és neutralizációs vizsgálatokkal végeztünk, amint az alábbiakban ismertetjük.
A különböző készítményeknél azt is vizsgáltuk, hogy mennyire képesek a T-sejtek közvetítette immunitást indukálni, és ezt a késői típusú hiperszenzitív válaszok indukciójával mértük. A különböző rgD2t készítmények által kiváltott humorális és celluláris immunválaszok értékelésére vonatkozó adatokat az alábbiakban ismertetjük.
Azért, hogy az rgD2t készítmények immunvédekezést kiváltó hatását összehasonlítsuk, minden tengerimalacba intravaginálisan 105 plakk-képző egység (továbbiakban pke) HSV-2 egységet juttatunk be az MS-vonalból az utolsó immunizálás után 2 héttel. Naponta vizsgáltuk az állatokat úgy az akut infekció klinikai tünetei, mint a visszatérő herpeszes megbetegedés jelenléte szempontjából. Hüvelytamponnal gyűjtöttünk mintákat a vírus bejuttatása utáni 5. napon, és a vírusfertőzés mértékét mértük.
A tengerimalac intravaginális vizsgálata eredményeit az alábbiakban részletesen ismertetjük.
A második kísérletben a következő rgD2t készítmények immunogenicitását értékeltük nagyobb állatcsoportban. Két antigéndózist (5 és 20 pg) hasonlítottunk össze, és különböző adalékanyag-készítményeket vizsgáltunk. 50 pg 3D-MPL dózist használtunk, és ennek hatását vetettük össze a korábban alkalmazott 100 pg dóziséval.
Nőstény Hartley-tengerimalac-csoportokat immunizáltunk három ízben, az 1., a 28. és a 84. napon az alábbiak szerint:
I. csoport (n=8)=20 pg rgD2t/3D-MPL (50 pg) olajvíz emulzió (R);
II. csoport (n=8)=5 pg rgD2t/3D-MPL (50 pg) olajvíz emulzió (R);
III. csoport (n= 10) = 20 pg rgD2t/3D-MPL (50 pg olaj-víz emulzió (S);
IV. csoport (n= 10)=5 pg rgD2/3D-MPL (50 pg) olajvíz emulzió (S);
V. csoport (n= 10) = 20 pg rgD2t/Alum + 3D-MPL (50 pg);
VI. csoport (n= 10) = 5 pg rgD2t/Alum + 3D-MPL (50 pg);
VII. csoport (n=4)=csak Alum+3D-MPL (50 pg);
VIII. csoport (n=4)=csak 3D-MPL (50 pg) olaj-víz emulzió (R);
IX. csoport (n=8)=kezeletlen.
Az immunizálást 0,5 ml-es adagban végeztük. A kontrollcsoportot ugyanezen protokoll szerint immunizáltuk csak az adalékanyaggal (VII. és VIII. csoport), vagy kezeletlenül maradtak (IX. csoport).
Egy utolsó csoportot (X. csoport) egy olyan rgD2t/Alum+3D-MPL készítménnyel immunizáltuk, amely 100 pg 3D-MPL-t tartalmazott egy 0,25 ml-es adagban, az első profilaktikus kísérletben leírt protokoll szerint: X. csoport (n =10)=5 pg rgD,t/'Alum és 3D-MPL (100 pg).
Az állatoktól minden két hétben vettünk vért individuális antitestmeghatározás céljára, amit ELISA- és neutralizációs vizsgálatokkal végeztünk, amint azt az alábbiakban ismertetjük. A hüvelyi mosófolyadékokat összegyűjtöttünk a második immunizálás után, és gD2tre specifikus szisztémás antitestek jelenlétét vizsgáltuk (lgG-osztályba tartozó anti-gD2t antitestek). A tengerimalacokba intravaginálisan 105 pke HSV-2-t (MS-vonal) juttattunk be két héttel az utolsó immunizálás után. Ezután naponta vizsgáltuk az akut fertőzés klinikai tüneteit (a bejuttatás után 4-12. nap) és a visszatérő herpeszes megbetegedés jelenlétét (a bejuttatás után 13-39. nap).
3. További vizsgálatok
Néhány vizsgálatot végeztünk az rgD2t készítményekkel való vakcinálás révén kiváltott specifikus antitest és sejt közvetítette válaszok értékelésére. Ezen készítmények védőhatását a tengerimalac-intravaginális kísérlet alapján értékeltük.
3A. ELISA
Egy ELISA-vizsgálatot terveztünk a gD-specifikus antitestek detektálására és kvantitatív értékelésére tengerimalac szérumából és hüvelyi mosófolyadékából rgD2t mint bevonóantigén felhasználásával.
3.1.1. rgD2t-specifikus IgG-antitestek detektálása szérumban
Antigén- és antitest-oldatokat használtunk 50 pl/lyuk mennyiségben. Az antigént 1 pg/ml végső koncentrációig hígítottuk PBS-ben (foszfátpufferoldatban), és egy éjszakán át 4 °C-on adszorbeáltuk a 96 lyukú mikrotitrálótányér (Maxisorp Immunoplate, Nunc, Dánia) lyukaihoz. A lyukakat azután ötször átmostuk PBS Tween 0,1% mosópufferral, és egy órán át 37 °C-on 1% marhaszérumalbumint, 4% újszülöttborjú-szérumot és 0,1% Tweent tartalmazó PBS-sel inkubáltuk (telítőpuffer). A telítőpufferral háromszorosan hígított szérumot (1/100 hígítással indítva) betöltöttük az rgD2t-vel bevont lyukakba, és szobahőmérsékleten két órán át inkubáltuk. A tányérokat a fentiek szerint mostuk, és telítőpufferral 1:3000 arányban hígított biotinhoz konjugált birka-tengerimalac elleni IgG-t (Specifikus IgG, és IgG2, serotec, Sopar Biochem., Belgium) adtunk minden lyukhoz, és másfél órán keresztül 37 °C-on inkubáltuk. Mosás után telítőpufferral 1:1000-szeresen hígított streptavidin-biotinilált peroxidáz komplexet (Amersham, UK) adtunk hozzá, és 30 percig 37 °C-on inkubáltuk. A tányérokat a fentiek szerint átmostuk, és 4,5-ös pH-értékű 0,1 M cit4
HU 218 025 Β rátpufferban oldott 0,04% o-fenilén-diamin- (Sigma) és 0,03% H2O2-oldattal inkubáltuk.
A színreakciót 15 perc múlva 2 mol/1 H2SO4 hozzáadásával megállítottuk, és az abszorbanciát 492 nm-nél olvastuk le.
Az ELISA-titert azon szérumhígítás reciprokaként határoztuk meg, amely olyan abszorpciót eredményezett (az optikai denzitást 492 nm-nél mérve), amely megfelel a maximális abszorbanciaérték 50%-ának (midpoint titer).
Az ELISA-titereket egy 4 paraméteres lineáris regressziós analízissel számoltuk ki egy számítógépprogram felhasználásával.
3.1.2. RgD2t-re specifikus Ig-antitestek detektálása hüvelyi mosófolyadékban
A hüvelyi mosófolyadékokat teljes IgG-tartalmuk szerint osztályoztuk ELISA-módszer segítségével az alábbiak szerint.
Maxisorp Immuno tányérokat egy éjszaka alatt 4 °C-on PBS-ben hígított tisztított kecsketengerimalac elleni IgG-vel (Sigma, Belgium) vontunk be 1 pg/ml (50 μΐ/lyuk) mennyiségben. A tányérokat átmostuk és telítőpufferral inkubáltuk a fentiek szerint. A hüvelyi mosófolyadékokból sorozathígításokat készítettünk kétszeres hígításokkal (kiindulás 1:100 hígítással) telítőpufferral, és a tányérokhoz adtuk őket. Minden tányér a tisztított tengerimalac-IgG-t (Sigma, Belgium) egy standard görbe szerint tartalmazta (kétszeres hígítás 100 mg/ml koncentrációból kiindulva).
Kétórás, szobahőmérsékleten való inkubálást követően a tányérokat a fentiek szerint mostuk, és 1:1000 arányban telítőpufferban oldott tengerimalac-IgG^re és IgG2-re specifikus biotinhoz konjugált birkaantitesteket (Serotec, Sopar Biochem, Belgium) adtunk minden lyukhoz, és másfél órán keresztül 327 °C-on inkubáltuk. A következő lépések (a streptavidin-biotinilált peroxidáz komplex hozzáadása és a színreakció értékelése) a fentiek szerint zajlott.
A hüvelyi mosófolyadékokban jelen levő teljes IgG-koncentrációt az IgG standard görbéből határoztuk meg egy 4 paraméteres lineáris regressziós analízissel számítógépprogram felhasználásával.
Miután meghatároztuk a teljes IgG-tartalmukat, megvizsgáltuk a hüvelyi mosófolyadékokat az rgD2t-re specifikus IgG-antitestek jelenléte szempontjából, ugyanazon ELISA-módszerrel, amelyet a szérum antigD-antitestek meghatározásánál ismertettünk. Az eredményeket optikai denzitásként adtuk meg, melyet 492 nm-nél, 0,5 pg/ml teljes IgG-koncentrációnál mértünk.
3.2. Neutralizációs vizsgálat
Egy 96 lyukú tányéron neutralizációs vizsgálatot végeztünk az alábbiak szerint.
Kétszeres hígítási sorozatot készítettünk a vizsgálandó mintákból direkt a 96 lyukú tányéron (25 μΐ/lyuk minden szérumhígításból, duplán). Minden lyukhoz a 4000 pke HG52 vírus és komplement keverékének (1/100 végső hígítási arány a lyukban) ötven mikroliterét adtuk. A tányérokat egy órán keresztül 37 °C-on inkubáltuk. Ezután minden lyukhoz 4χ 105 sejt/ml tartalmú BHK21 sejtszuszpenzió 100 mikroliterét adtuk (4χ 104 sejt/lyuk). A tányérokat 5 percen át 1000 fordulat/perc fordulatszámon centrifugáltuk, és 5 napig 37 °C-on, 7% CO2 jelenlétében inkubáltuk.
E periódus után a kultúraközeget óvatosan eltávolítottuk, és 100 pl kristályibolya-oldatot (10% metanol, 90% H2O, 0,3% kristályibolya) adtunk minden lyukhoz, és 20 percig szobahőmérsékleten inkubáltuk. A tányérokat azután bő csapvízzel átmostuk. A plakkok jelenlétét könnyűszerrel észlelhettük mikroszkópos vizsgálattal.
A neutralizálótitert azon legmagasabb szérumhígítás reciprokaként határoztuk meg, amelynél nem észleltünk vírusplakkot [100%-os védelem a vitopatogén (sejtkárosító) hatás ellen]. Lényeges megjegyeznünk, hogy ezen időpontban komplett citopatogén hatást (a sejtvonal 100%-os lízise) észleltünk a kontroli-lyukaknál.
3.3. Késői típusú hiperszenzitivitás (DTH)
A különböző típusú rgD2t-k azon képességét is vizsgáltuk, hogy egy T-sejt-specifikus immunválaszt váltanak ki, amint az a késői típusú hiperszenzitivitásválasz alapján mérhető.
Ebben a vizsgálatban az első kísérlethez előállított adalékkészítményeket használtuk. Az immunizálás folyamata a következők szerint történt: primer immunizálás: 0,25 ml vakcinakészítmény beadása intramuszkulárisan; emlékeztetőimmunizálás: 0,25 ml vakcinakészítmény beadása intramuszkulárisan 21 nap múlva; bőrpróba: 5 pg rgD2t beadása bőrbe (fiziológiás sóoldatban) 8 nappal később. Minden tengerimalacon fiziológiás sóoldattal bőrpróbát végeztünk kontroll céljából.
3.4. Tengerimalac-modell
A HSV genitális fertőzés tengerimalac-modelljét L. R. Stanberry és munkatársai (J. of Infectious Diseases 1982, 146. 397-403. Intervirology 1985, 24. \ 226-231.) ismertetik.
Röviden: két héttel az utolsó immunizálás után a tengerimalacokat 105 pke MS-vonalbeli HSV-2 intravaginális bejuttatásával fertőzték meg. A primer infekció klinikai tüneteit a külső genitáliák bőrelváltozásainak napi észlelésével vizsgálták a vírus bejuttatását követő 12 napos periódusban. A vírusbejuttatást követő 5. napon hüvelytamponokat gyűjtöttünk össze, és plakkvizsgálattal titráltuk a HSV-2 fertőzést az alábbiakban leírtak szerint. Az állatokat ezután naponta vizsgáltuk visszatérő herpeszes elváltozás jeleit keresve a 13-60. napon. A külső genitálék bőrének herpeszes elváltozásait mennyiségileg egy, az elváltozást pontozó skála szerint értékeltük, amely O-tól 4-ig terjedt (0=nincs elváltozás vagy bőrpír, 0,5=bőrpír, l=vesicula (hólyagcsa), 1,5=>4 kis hólyagcsa, 2=nagyobb hólyagcsák, 2,5=néhány nagyobb hólyagcsa, amit a 2. pont szerinti hólyagcsák fúziója eredményezett, 3 = megnövekedett méretű és számú hólyagcsák, 3,5=az elváltozások az egész genitále bőrét borítják, 4=kifekélyesedett elváltozások macerációval).
A különböző rgD2t vakcinák által nyújtott védelem mértékét az alább meghatározott kritériumok szerint értékeltük.
HU 218 025 Β
Védelem a primer megbetegedés ellen (0—12. nap)
Az állatot nem tekintettük védettnek, ha a következő elváltozásokat észleltük:
- több mint egy vörhenyes terület bármely időpontban,
- egy vörhenyes terület, amely ugyanazon a helyen perzisztál legalább 3 egymást követő napon (0,5-ös pontérték),
- egy vagy néhány hólyagosa (>l-es pontérték).
Védelem a visszatérő megbetegedés ellen (13-60.
nap)
Az állatokat pozitívnak értékeltük a visszatérő megbetegedés szempontjából, ha akár egy 0,5-ös pontértéket észleltünk legalább két egymást követő napon, vagy ha egy >l-es pontértéket észleltünk bármely napon. A visszatérő megbetegedés epizódját meg is előzi, és követi is egy olyan nap, amikor semmilyen elváltozás vagy bőrpír nem észlelhető.
Egy államál az elváltozás súlyosságára a primer fertőzés időtartama (1-12. nap) alatt mért pontértékek összegéből következtetünk. Az elváltozás incidenciája azon állatok számát jelenti, amelyeknél >1 pontértékű elváltozást találtunk a megfigyelés ideje alatt (1-12 nap - primer megbetegedés, illetve 13-60 nap - visszatérő megbetegedés).
3.5. Vírusmeghatározás vaginális tamponból
A vaginális tamponokat a vírusbejuttatást követő 5. napon gyűjtöttük össze. A vagina áthajlását tamponáltuk egy kalcium-alginát-végű tamponnal, amit előzőleg 2% újszülöttborjú-szérummal, 2 mmol/1 L-glutaminnal, 100 U/ml penicillinnel, 100 pg/ml streptomicinnel, 100 pg/'ml gentamicinnel és 1 pg/ml amphotericin Bvel (tamponközeg) kiegészített Basal Eagle’s közegben benedvesítettünk.
Mindegyik tampont összetörtük (zúztuk), és egy steril, 12x75 mm-es, 1 ml-tamponközeget tartalmazó 5 ml-es poliallomercsőbe tettük őket. Ezután a csöveket lecentrifugáltuk, hogy a vírusokat eltávolitsuk, és felhasználásig lefagyasztottuk. Magához a titráláshoz lyukanként 5xl05 sejtet tartalmazó, 6 lyukú tenyésztőtányérokat inkubáltunk egy éjszakán át 37 °C-on. A csöveket felolvasztottuk, a mintákból a tamponközeggel sorozathígításokat készítettünk. Miután eltávolítottuk a tenyésztőközeget a 6 lyukból, minden mintahígításból 200 μΐ-t juttattunk a sejtvonalakra (duplán végezve), és 1 órán át 37 °C-on tartottuk őket. 1,5% karboxi-metil-cellulózt tartalmazó tenyésztőközeg 4 ml-ét adtuk minden lyukhoz. Ezután a tányérokat 2 napig 37 °C-on inkubáltuk. Ezen inkubációs periódus után a közeget óvatosan eltávolítottuk, és 1 ml kristályibolya-oldatot (10% metanol, 90% H2O, 0,3% kristályibolya) adtunk minden lyukhoz 15 percre. Ezután a tányérokat megszámoltuk. A HSV-2 titert pke/ml-ben fejeztük ki.
4. Eredmények
Az első kísérletsorozatban tengerimalac-csoportokat immunizáltunk négy különböző készítményként előállított alacsony dózisú (5 pg) rgD2t-vel. Ezt az optimálisnál kisebb antigéndózist azért választottuk, hogy kiválasszuk azon hatékonyabb rgD2t-adalékanyag kombinációt, amelyik képes védelmet biztosítani a primer és a visszatérő HSV-megbetegedés ellen, ha a tengerimalacoknak a HSV-2 intravaginális bejuttatása előtt adagoltuk (profilaktikus kipróbálás).
4.1. A humorális immunválasz indukciója
Amint az 1. táblázat mutatja, az immunstimulánsként 3D-MPL-t tartalmazó rgD2t készítményekkel beoltott csoportok magasabb ELISA- és neutralizálótitereket mutattak a szérumban, mint az rgD2t/Alum vakcinával immunizált csoport. Jó átlagos neutralizálótitereket indukált háromszori immunizálás rgD2t-MPL olaj/víz (R)-rel vagy rgD2t/Alum+3D-MPL-lel.
2. Az effektor T-sejt-válasz indukciója (DTH)
A bőrpróbák eredményei (2. táblázat) azt mutatják, hogy az rgD2t/3D-MPL olaj/víz emulziókészítményben indukálta a legerősebb DTH-választ. Ugyancsak specifikus DTA-választ indukált az rgD2T/Alum+ 3D-MPL. Egerekben végzett hasonló kísérletek is azt mutatták, hogy az Alummal és 3D-MPL-lel kombinált rgD2t igen hatékony az in vivő effektor T-sejt-válasz indukciójában, ellentétben az rgD2t/Alum készítménnyel 4 3. A vakcina hatékonysága primer HSV-megbetegedés ellen
Három héttel a harmadik immunizálás után a tengerimalacokba intravaginálisan HSV-2-t juttattunk. A vakcinálás hatását a primer HSV-2 fertőzés klinikai és virológiái tüneteire vonatkozóan az 1. ábrán ábrázoljuk és a 3. táblázatban összegezzük. Összevetve a kontrollcsoportokkal (4-6. csoport), amelyek megkapták a fertőzést és az akut primer betegséget, az rgD2t/3D-MPL olaj/víz készítménnyel beoltott állatok 100%-ánál hiányoztak a herpeszes megbetegedés tünetei, amint ezt a bőrelváltozások incidenciája és súlyossága révén vizsgáltunk. Továbbá ezeknél az állatoknál nem volt kimutatható vírusreplikáció a vaginális traktusban, amit vaginálisvírustiter-meghatározással a bejuttatást követő 5. napon vizsgáltunk. Nagyon hasonló eredményeket kaptunk az rgD2t/Alum+3D-MPL-lel beoltott csoportnál. Ebben a csoportban egyáltalán nem fejlődött ki herpeszes hólyagosa a megfigyelés időtartama alatt (pontérték < 1), továbbá igen kismértékű vírusreplikáció volt kimutatható az összegyűjtött hüvelytamponokból. Ezzel szemben az Alumhoz adszorbeált rgD2t-t kapott állatok alig bizonyultak védettnek (a bőrelváltozás incidenciája 75%).
4. A vakcinálás hatása a visszatérő HSV-megbetegedésre
Az eredményeket az 1. ábrán ábrázoljuk és a 4. táblázatban összegezzük.
A 3D-MPL-t tartalmazó rgD2t készítményekkel történő vakcinálás (1. és 2. csoport) szignifikánsan megváltoztatja a visszatérő herpeszes megbetegedés kifejlődését. Két csoportnál szignifikánsan kevesebb visszatérő epizód fordult elő, és kevesebb volt a visszatérő betegség napjaink száma, mint a kontroll vagy az rgD2t/Alummal kezelt csoportoknál.
Azért, hogy tovább értékelhessük a 3D-MPL-tartalmú profilaktikus rgD2t vakcinák hatékonyságát befolyásoló tényezőket, egy második kísérletsorozatot kezdtünk nagyobb számú tengerimalacon. Két antigéndó6
HU 218 025 Β zist (5 pg és 20 pg) hasonlítottuk össze, és különböző adalékkészítményeket vizsgáltunk. Három immunizálást végeztünk a 0., 28. és 84. napon. Az állatoktól minden két hétben vettünk vért egyéni antitestmeghatározás céljából, amit ELISA-és neutralizációsteszt-vizsgálatokkal végeztünk. A hüvelyi mosófolyadékokat a második immunizálás után gyűjtöttük össze, és rgD2t-re specifikus szisztémás antitestek jelenlétét vizsgáltuk bennük.
A humorális immunválasz indukciója
Az eredmények (5. táblázat) azt mutatják, hogy minden 3D-MPL-tartalmú rgD2t készítmény képes volt magas EL1SA- és neutralizációs titer stimulálására a tengerimalacok szérumában.
A háromszori immunizálás után indukált átlagos ELISA- és neutralizációs titer nagyon hasonló volt a szérumban azoknál a csoportoknál, amelyeket akár 5 pg, akár 20 pg rgD2t-tartalmú rgD2t készítménnyel vakcináltunk. Nem volt szignifikáns eltérés a humorális válaszban azoknál a csoportoknál mérve, amelyeket akár 50 pg 3D-MPL- (VI. csoport), akár 100 mg 3D-MPL- (X. csoport) tartalmú rgD2t/Alum vakcinával immunizáltunk.
Említésre érdemes, hogy szisztémás anti-rgD2t antitestek (IgG-osztály) voltak észlelhetők minden beoltott csoport hüvelyi mosófolyadékában. Ez a mukózára lokalizálódé anti-rgD2t antitest-válasz fontos védőszerepet játszhat a genitális traktus primer fertőződése alatt a fertőző vírus szóródásának csökkentésével.
A vakcinálás hatása a primer HSV-megbetegedésre
Két héttel a harmadik immunizálás után a tengerimalacokba intravaginálisan HSV-2-t juttattunk be. A vakcinálás hatását a primer HSV-2 fertőzés klinikai és virológiái tüneteire a 6. táblázat összegzi. A kontrollokkal összevetve az akár 50 pg, akár 100 pg 3D-MPL-tartalmú (VI. és X. csoport) 5 pg-nyi rgD2t/Alum+3D-MPL készítménnyel vakcináit állatoknál szignifikánsan redukált (p<0,05) mind a bőrelváltozások súlyossága, mind azok incidenciája.
Nagyon hasonló eredményeket kaptunk az 5 pg rgD2t-t tartalmazó 3D-MPL olaj/víz emulzióval (III. csoport) beoltott csoportban. A három beoltott csoportban igen kevés vírusreplikációt észleltünk a bejuttatást követő 5. napon összegyűjtött hüvelytamponokban.
A vakcinálás hatása a visszatérő HSV-megbetegedésre
Az eredményeket a 6. táblázat mutatja. A kontrollcsoporttal összevetve a három beoltott csoportban szignifikánsan csökkent (p>0,05) a bőrelváltozások incidenciája és a visszatérő betegség napjainak száma. Ezeknél a csoportoknál a visszatérő epizódok száma is kevesebb volt, mint a kontrollcsoportoknál.
5. Következtetések
A tengerimalacokkal szerzett tapasztalatok világosan mutatják, hogy a 3D-MPL-tartalmú rgD2t készítményekkel - amelyeket olaj-víz emulzió formájában vagy alumínium-hidroxiddal kombinálva állítunk elő történő vakcinálás igen hatékony védelmet biztosít a primer és a visszatérő HSV-2 betegség ellen, ha azt a tengerimalacoknak a HSV-2 bejuttatása előtt adagoljuk. Ezek az rgD2t/3D-MPL készítmények képesek specifikus humorális (neutralizálóantitestek) és effektorsejt mediálta (DTH) immunválaszok kiváltására. Ezeket az eredményeket alacsony (5 pg) dózisú rgD2t alkalmazásával nyertük.
6. Az rgD2t készítmények immunogenitása főemlősökben b\.Az rgD2t/Alum és rgD2t/Alum + 3D-MPL készítmények immunogenitásának összehasonlítása
Az, rgD2t/Alum és rgD2t/Alum+3D-MPL vakcinák immunogenitását cercopithecus aethiopsban (afrikai szürkemajom, AGM) értékeltük. Három immunizálást végeztünk a 0., 1. és 3. hónapban. A specifikus humorális (ELISA- és neuralizációs titer) és az effektorsejt mediálta (DTH) immunválaszokat mértük.
6.1.1. Kísérleti eljárás
Mindegyik készítmény 20 mg rgD2t-t és 0,5 mg A13+-ekvivalenst tartalmazott dózisonként, és 50 pg 3D-MPL dózist használtunk. A cercopithecus aethiops (AGM) csoportokat három alkalommal, a 0., 28. és 84. napon immunizáltuk. Az immunizálást intramuszkulárisan végeztük 0,5 ml-es dózissal (20 mg rgD2t). Az állatoktól 2 héttel az immunizálás előtt is minden további 2 hétben vért vettünk antitestmeghatározásra ELISAés neutralizációs tesztekkel. A két készítményt is vizsgáltuk T-sejt mediálta immunitást indukáló képességük szempontjából, amit a késői típusú hiperszenzitív (DTH) válaszok indukciójával mértünk. A majmok hasbőrébe intradermálisan különböző rgD2t dózisokat adtunk be (20, 5 és 1 pg) fiziológiás sóoldatban, 13 nappal a második immunizálás után. Kontrollként csak fiziológiás sóval végeztünk bőrpróbát rajtuk. Az intradermális injekció helyén a bőrpírt és beszűrődést 24 órával, illetve 48 órával később figyeltük meg.
6.1.2. Eredmények
a) A humorális immunitás indukciója
Vakcinálás előtt egy majom széruma sem mutatott anti-HSV-2 antitest aktivitást (az adatok nincsenek feltüntetve). Amint a 7. táblázat mutatja, mindkét vakcina jó ELISA- és neutralizációstiter-emelkedést indukált a második immunizálás után. Ez az antitestválasz nem emelkedett a harmadik immunizálással az rgD2t/Alummal beoltott majmoknál. Ezzel szemben azok a majmok, akik harmadik immunizálásként rgD2t/Alum+ 3D-MPL-t kaptak, megnövekedett ELISA- és neutralizaciósantitest-válaszokat produkáltak (átlagos ELISAtiter: 10 056; átlagos neutralizációs titer: 950).
b) Effektor T-sejt-válasz- (DTH) indukció
A bőrpróba eredményei (8. táblázat) azt mutatják, hogy az Alummal és 3D-MPL-lel kombinált rgD2t nagyon hatékonyan indukálja in vivő az effektor T-sejtválaszt, szemben az rgD2/Alum készítménnyel. Erős DTH-választ figyeltünk meg mindegyik rgD2t/Alum+ 3D-MPL-lel beoltott állatnál, akiknél a bőrpróbát 20 mg rgD2t-vel végeztük. Specifikus DTH-válaszokat mértünk alacsonyabb rgD2t koncentrációk mellett is (5 és 1 pg) a majmok többségénél (% részben az 5 pg dózisnál és % részben az 1 pg dózisnál). Ezek az rgD2t dózisok gyengébb bőrválasz-reakciókat váltottak ki, mint a 20 mg-os rgD2t koncentráció.
HU 218 025 Β
6.2. Az rgD2t/Alum + 3D-MPL készítmények immunogenitása rhesus majmokban
A különböző rgD2T mennyiségeket (100 pg, 10 pg vagy 5 pg) tartalmazó rgD2t/Alum+3D-MPL vakcinák immunogenitását rhesus majmokban hasonlítottuk össze.
6.2.1. Kísérleti eljárás
Mindegyik készítmény 0,5 pg Al3+-ekvivalens és 50 pg 3D-MPL-t tartalmazott dózisonként. Rhesus majmok három csoportját (4 majom csoportonként) immunizáltuk három alkalommal, a 0., 8. és ΊΊ. napon az alábbiak szerint:
1. csoport: 100 pg rgD2t/Alum+3D-MPL (50 pg)
2. csoport: 20 pg rgD2t/Alum+3D-MPL (50 pg)
3. csoport: 5 pg rgD2t /Alum±3D-MPL (50 pg)
Az immunizálást 1 ml-es dózissal intramuszkulárisan végeztük. Az állatoktól 2 héttel az immunizálás előtt és minden további 2 hétben vért vettünk antitestmeghatározásra ELISA- és neutralizációsteszt-módszerrel.
6.2.2. A Immorális immunitás indukciója
Vakcinálás előtt egyik majom széruma sem mutatott anti-HSV-2 antitest aktivitást. Jó ELISA- és neutralizációstiter-emelkedést figyeltünk meg a három beoltott csoportnál, amelyek 100, 20 vagy 5 mg rgD2t/Alum+3D-MPL-t kaptak. (Az adatok nincsenek feltüntetve).
6.3. Következtetések
A cercopithecus aethiops majmoktól nyert eredmények világosan mutatják, hogy egy Alum+3D-MPL kombinációt tartalmazó rgD2t vakcina szignifikánsan növeli a humorális (neutralizálóantitest) és effektorsejt közvetítette (DTH) specifikus immunválaszokat. Összevetve ezen vakcinával, egy rgD2t/Alum készítmény kevésbé hatékony a neutralizálóantitest indukálásában, és nem képes in vivő DTH-válasz kiváltására.
A rhesus majmokból nyert eredmények ugyancsak azt mutatják, hogy egy rgD2t/Alum+3D-MPL készítmény nagyon hatékony egy specifikus humorális válasz kiváltásában még alacsony antigéndózisok (5 pg vagy 20 pg rgD2t) esetén is.
7. Általános következtetések
A tengerimalacokból nyert eredmények világosan mutatják, hogy a 3D-MPL-t tartalmazó adalékkészítmények - egy olaj-víz emulzióban vagy alumíniumhidroxiddal kombinálva - igen hatékonyak egy rekombináns HSV-glikoprotein-vakcinával protektív immunválasz kiváltásában az intravaginálisan fertőzött tengerimalac-modellben még igen alacsony antigéndózisok (5 pg rgD2t) esetén is. A védekezőképesség paraméterei azt is mutatják, hogy ezek az rgD2t/3D-MPL készítmények hatékonyabb védelmet nyújtanak. Ezek a 3D-MPL készítmények képesek specifikus humorális (neutralizálóantitestek) és effektorsejt közvetítette (DTH) immunválaszt nyújtani.
Továbbá az rgD2t/Alum+3D-MPL készítmények immunogenitást is mutatnak az antigénszintnél és effektor T-sejt-választ indukálnak főemlősökben, ami felveti, hogy ez a mellékhatás nem korlátozódik a kis állatfajokra.
1. táblázat
Anti-HSV-antitest-válasz rgD2t készítményekkel immunizált tengerimalacok szérumában a vírus bejuttatása előtt és után
Csoport Vakcina (1) Vírusbejuttatás előtt (2) Vírusbejuttatás után (3)
Antigén Adalék ELlSA-titer Neutralizálótiter ELISA-titer Neutralizálótiter
1. rgD2t 3D-MPL olaj/víz (R) 81 291 ±20 822 1600 68 720±24 648 2200±765
2. rgD2t Alum+3DMPL 39 897±30 165 2000 ±800 27 224±13 093 1800 ±765
3. rgD2t Alum 20 346 ±23 704 600 ±400 28 622 ±24 024 1333±461
4. - Alum <100 <50 737±878 142±85
5. - 3D-MPL <100 <50 259±244 1275 ±1304
6. kezeletlen - <100 <50 225 ±194 119± 141
(1) rgD2t=5 pg. Az állatokat három alkalommal immunizáltuk, a 0., 28. cs 95. napon. A vírusbejuttatás 2 héttel később történik 105 pke HSV-2-vcl.
(2) A virusbejuttatás előtt gyűjtött szérum (=14 nappal a harmadik immunizálás után).
(3) A vírus bejuttatása után gyűjtött szérum.
Az értékek mint aritmctikus átlagtiterck vannak mcgadvaiátlagos szórás.
HU 218 025 Β
2. táblázat
A bőrpróba eredményei (DTH) rgD2t készítményekkel beoltott tengerimalacokban
Készítmény Tengerimalac # 24 órás leolvasás 48 órás leolvasás
E (mm) E (mm) E (mm) I (mm)
rgD2t/3D-MPL olaj-viz (R) 1 20 15 14 10 (N)
2 15 10 10 3
3 20 17 (N) 15 12 (N)
rgD2t /Alum+3D-MPL 1 10 8 10 4
2 15 12 12 3
3 11 9 12 0
Alum+3D-MPL 1 0 0 0 0
2 0 0 0 0
3 0 0 0 0
Kezeletlen 1 0 0 0 0
2 0 0 0 0
E: a bőrpír az id. injekció helyen mm-ben.
I: a beszűrődés az id. injekció helyen mm-ben.
N: elhalás a bőrpróba helyen.
A tcngcrimalacokat a 0. és 21. napon immunizáltuk 5 pg rgD2t készítménnyel (intramuszkulárisan). Intradermálisan 5 pg rgD2t-t kaptak fiziológiás sóoldatban a 29. napon. A bőrpróbát 24 óra, illetve 48 óra múlva olvastuk le.
3. táblázat rgD2t készítményekkel történt immunizálás hatása tengerimalacokban a primer HSV-2 fertőzés klinikai és virológiái jeleire
Csoport Vakcina (1) A bőrelváltozások incidenciája (2) A bőrelváltozás súlyossága (3) Vaginális vírustiter (4)
Antigén Adalékanyag
1. rgD2t 3D-MPL olaj/viz (R) 0/4 0,1 ±0,3 0
2. rgD2t Alum+3D-MPL 0/4 l±0,4 6,25 ±12,4
3. rgD2t Alum 3/4 4,4±2,7 3575±6010
4. - Alum 5/5 6,2±2,6 5216±6295
5. - 3D-MPL 4/5 5,1 ±3,6 3298±4475
6. kezeletlen - 7/8 7,3 ±4,7 2214±4519
(1) rgD2t=5 pg. Az állatokat három alkalommal, a 0., 28. és 95. napon immunizáltuk. A 105 pke HSV-2 vírust 2 héttel később juttattuk be.
(2) Számos állat pontértéke >lvolt a 12 napos obszerváció alatt.
(3) A pontértékek összege (1-12 nap), számtani átlag±átlagos szórás.
(4) A HSV-titcr csúcsa (pke/ml) a bejuttatást követő 5. napon gyűjtött tamponokban.
4. táblázat rgD2t készítményekkel történt immunizálás hatása tengerimalacokban a visszatérő genitális HSV-2 betegségre
Csoport Vakcina A bőrelváltozások incidenciája (2) A visszatérő megbetegedés epizódjai (3) A visszatérő napok száma (4)
Antigén Adalékanyag
1. rgD2t 3D-MPL olaj/viz (R) 1/4 1±2 0,7±l,5
2. rgD2t Alum+3D-MPL 2/4 l±0,8 1,7±3,5
3. rgD2t Alum 3/3 4,3± 1,5 8,3±5
HU 218 025 Β
4. táblázat (folytatás)
Csoport Vakcina A bőrelváltozások ineidcnciája (2) A visszatérő megbetegedés epizódjai (3) A visszatérő napok száma (4)
Antigén Adalékanyag
4. - Alum 4/5 3,8±3,3 7,6±6,5
5. - 3D-MPL 5/5 2,6± 1,1 6±4,4
6. kezeletlen - 6/8 3,5±2,2 9,9±6
(1) rgD2t=5 pg. Az állatokat három alkalommal, a 0., 28. és 95. napon immunizáltuk. A 105 pkc HSV-2 vírust 2 héttel később juttattuk be.
(2) Számos állat pontértéke >1 volt a 12 napos obszcrváció alatt.
(3) Egy visszatérő epizódot megelőz és követ egy olyan nap, amikor elváltozás nem észlelhető és legalább két napig tartó bőrpirral jellemezhető (pontérték=0,5), vagy egy napig hólyagos elváltozással (pontérték >1). Az eredményeket a számtani átlag±átlagos szórás értékkel fejeztük ki (a megfigyelési idő: 13 60 nap).
(4) Az összes napok száma, amelyeken az állatok egy visszatérő herpeszes epizód jeleit mutatták, számtani átlag± átlagos szórás (megfigyelési idő: 13-39 nap).
5. táblázat
Különböző adalékanyag-készítmények hatásának összehasonlítása az rgD2t immunogenitására tengerimalacokban
Két immunizálást követő anti-HSV-antitest-válasz Három immunizálást követő anti-HSVantitcst-válasz - a vírusbejuttatás előtti titer
Csoport Vakcina (1) A szérumban A vaginális mosófolyadékban (5) A szérumban (4)
rgD2t dózis Adalékanyag ELISA- titer semleges titer ELISA-titcr semleges titer
I. 20 Mg 3D-MPL (50 Mg) olaj-víz (R) 31 462 ±9087 850±396 0,780±0,376 19 958±10 171 3400 ±1994
II. 5 Mg 3D-MPL (50 Mg) olaj-víz (R) 35 015±14 395 412±264 1,000±0,177 51 688±40 120 4342±2879
III. 20 gg 3D-MPL (50 Mg) olaj-víz (S) 16 720±12 641 1380±756 0,700±0,232 36 647±24 126 4080±2883
IV. 5 Mg 3D-MPL (50 Mg) olaj-víz (S) 14 992±9885 840±571 0,570±0,200 45 082 ±24 221 4560±2502
V. 20 Mg Alum+3D-MPL (50 Mg) 14 452±7476 740±499 0,620±0,175 16 015±7846 3280±2276
VI. 5 Mg Alum±3D-MPL (50 Mg) 10 174±4219 420±301 0,520±0,175 20 488±9562 2640±1510
VII. - Alum±3D-MPL (50 Mg) <100 <50 <0,020 <100 <50
VIII. - 3D-MPL (50 Mg) olaj-víz (R) <100 <50 <0,020 <100 <50
IX. - kezeletlen <100 <50 <0,020 <100 <50
X. 5 Mg Alum±3D-MPL (100 Mg) 4602±3953 163±151 0,671±l,187 16 588±6945 2560±1678
(1) Az állatokat három alkalommal, a 0., 28. és 95. napon immunizáltuk. A 105 pke HSV-2 vírust 2 héttel később juttatuk be.
(2) Szérum és vaginális mosófolyadék az állatoktól 14 nappal a második immunizálás után véve.
(3) A virusbejuttatást megelőző napon vett szérum (=14 nappal a harmadik immunizálás után).
(4) Az értékek számtani átlaga-hátlagos szórásként vannak megadva.
(5) Az optikaidcnzitás-mércs értékei (492 nm) 0,5 pg/ml teljes IgG-koncentrációnál, standard anti-gD2t ELISA-vizsgálattal mérve; számtani átlagiátlagos szórás.
HU 218 025 Β
6. táblázat rgD2t készítményekkel történt immunizálás hatása tengerimalacokban a HSV-2 fertőzés klinikai és virológiái jeleire
Vakcina
5 pg rgD,t+ 3D-MPLo/w(s) 5 pg rgD2t/ Alum+ 3D -MPL (50 pg) 5 pg rgDjt /Alum+ 3D-MPL(100 pg) Kontroll
III. csoport VI. csoport X. csoport VH-VIII-IX. csoportok
Primer HSV-2 fertőzés A bőrelváltozások incidenciája (%) A bőrelváltozások súlyossága Hüvelyivírus-titer 1/9 11% 1,2±1 0 1/10 10% 0,7±0,7 0 0/10 0% 0,9±l 1,5 ±4,7 12/14 86% 8,6±5,1 1077±1682
Visszatérő HSV-2 fertőzés A bőrelváltozások incidenciája (%) A visszatérő napok száma A visszatérő epizódok száma 2/9 22% 1±2,3 0,2±0,4 2/10 20% 1,6±2,1 0,6±0,7 3/10 30% 1,6±2,7 0,5±0,8 11/14 79% 7,3±6 1,9±1,2
Lábjegyzetek a 6. táblázathoz.
Kísérleti eljárás: 3 immunizálás a 0., 28. és 84. napon.
105 pkc HSV-2 vírus bejuttatása 2 héttel az utolsó immunizálást követően.
Primer HSV-2 fertőzés', a megfigyelés ideje a vírusbejuttatást követő 4-12. nap.
A bőrelváltozások incidcnciája (%) : a hólyagos elváltozást mutató állatok száma (pontérték >1).
A bőrelváltozások súlyossága: a pontértékek összege (a 4-12. napon) számtani átlagiátlagos szórás.
Hüvclyivirus-titer: vírustiterek (pke/ml a bejuttatást követő 5. napon gyűjtött tamponokban.
Visszatérő HSV-2 fertőzés', az obszcrváció ideje a vírusbejuttatást követő 13-39. nap.
A bőrelváltozások incidcnciája (%): a hólyagos elváltozást mutató állatok száma (%) (pontérték >1).
Visszatérő napok száma: azon összes napok száma, melyeken az állatoknál a visszatérő herpeszes megbetegedés észlelhető volt (számtani átlag± átlagos szórás). Az állatokat pozitívnak értékeltük a visszatérő betegség szempontjából akkor, ha 0,5-ös pontérték volt észlelhető (bőrpír) legalább 2 egymást követő napon, vagy ha >1 pontérték [hólyag(ok)] volt észlelhető bármely napon.
Visszatérő epizódok száma: számtani átlag±átlagos szórás.
7. táblázat
DTH-eredmények rgD2t /Alummal, illetve Alum +3D-MPL-lel beoltott afrikai szürkemajmokban
24 óra leolvasás 48 óra leolvasás
Vakcina Majom NB PBS gD2t gD2t gD2t PBS gD2 l gD2t gü2t
1 pg 5 Pg θ pg 1 pg 5 Pg 20 pg
gD2t JO358 - ND - - - ND - -
Alum JO359 - ND - - - ND - -
JO 363 - ND - - - ND - -
JO 364 - ND - - - ND - -
JO 366 - ND - - - ND - -
gD2t JO348 - - E 12-4 - - I I
Alum JO349 - E 1-2 15-8 cm - E I I
3D-MPL JO375 - mm mm E 7-9 - E I I
JO515 - E 1-2 13-4 mm - - - Eweak
mm mm 14-6
- - mm
E
HU 218 025 Β
7. táblázat (folytatás)
24 óra leolvasás 48 óra leolvasás
Vakcina Majom NB PBS gD2t gD,t gD2l PBS gD2t gD2' gD2‘
1 Mg 5 Mg θ Mg 1 Mg 5 Mg 20 pg
Kontrollok JO 320 - - - - - - - -
JS 110 - - - - - - - -
A majmokat a 0. cs 28. napon immunizáltuk 20 pg gD2t készítménnyel (intramuszkulárisan). A has bőrébe intradermálisan különböző dózisú gD2t-t adtunk be fiziológiás sóoldatban 13 nappal később. A bőrpróbát 24 és 48 óra múlva olvastuk le.
E: bőrpír az id. injekció helyén
I: bcszűrődés az id. injekció helyén
ND=ncm végeztük cl
8. táblázat
A gD2t és gD2t/Alum+3D-MPL készítmények immunogenitásának összehasonlítása afrikai szürkemajmokban - szerológiai válaszok
Post 11 Post III
14 nap 28 nap 56 nap 14 nap
Vakcina Majom NB ELISA-titer Ncutralizációs titer ELISA-titer ELISA-titer Ncutralizá- ciós titer ELISA-titer Neutralizációs titer
gD2t/Alum JO358 1388 400 6572 1135 200 2050 400
JO359 4731 400 3232 1866 100 2110 200
JO363 1376 200 2316 1300 50 1205 50
JO364 5914 1600 5275 3740 400 6323 800
JO 366 21 104 400 3696 2550 200 2302 200
Számtani átlag ±SD 6902±8190 600±565 4218±1697 2118± 1062 190±134 2798±2015 330±290
gD,t/Alum+ 3D-MPL JO 348 7120 200 10175 4490 200 11 082 400
JO 349 14 437 1600 15 409 7361 800 15 848 1600
JO 375 7990 800 5170 2953 800 6797 1600
JO515 6515 200 7246 3660 100 6497 200
Számtani átlag ±SD 9015±3664 700±663 9500±4442 4616±1934 475±377 10 056±4392 950±754
* Mindegyik vakcinadózis 20 pg gD2t-t tartalmaz.
ELISA-titcr=középső titer (midpoint titer).
Neutralizációs titcr=a sejtkárosító hatást 100%-ban kivédő legmagasabb szérumhígítás reciproka.

Claims (9)

1. Vakcinakészítmény, azzal jellemezve, hogy egy HSV-glikoprotein D-t vagy annak egy immunológiai fragmentumát 3-dezacilezett-monofoszforil-lipid A-val és egy megfelelő vivőanyaggal konjugálva tartalmazza.
2. Az 1. igénypont szerinti vakcinakészítmény, azzal jellemezve, hogy a vivőanyag alumínium-hidroxid (Alum).
3. A 2. igénypont szerinti vakcinakészítmény, azzal jellemezve, hogy a vivőanyag egy olaj-víz emulzió.
4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti vak55 cinakészítmény, azzal jellemezve, hogy a glikoprotein
D egy HSV-2 glikoprotein D vagy annak immunológiai fragmentuma.
5. Az 1-4. igénypontok szerinti vakcinakészítmény, azzal jellemezve, hogy a glikoprotein D egy rövi60 dített protein.
HU 218 025 Β
6. Az 5. igénypont szerinti vakcinakészítmény, azzal jellemezve, hogy a rövidített protein a C-terminális kötőhelyrégió nélküli HSVgD2.
7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti vakcinakészítmény, azzal jellemezve, hogy a glikoprotein D egy szemcsés vivőanyaghoz van konjugálva.
8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti vakcinakészítmény, azzal jellemezve, hogy a 3-dezacilezett-monofoszforil-lipid A 10 -100 pg/dózis tartományban van jelen.
9. Eljárás az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti vakcina előállítására, azzal jellemezve, hogy a HSV5 glikoprotein D-t vagy annak immunológiai fragmentumát vivőanyaggal és 3-dezacilezett-monofoszforil-lipid
A-val keverjük össze.
HU9302645A 1991-03-21 1992-03-17 HSV glikoprotein D-t és 3-dezacilezett monofoszforil-lipid-A-t tartalmazó Herpesz Simplex vírus elleni vakcina HU218025B (hu)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB9105992A GB9105992D0 (en) 1991-03-21 1991-03-21 Vaccine

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9302645D0 HU9302645D0 (en) 1994-01-28
HUT67052A HUT67052A (en) 1995-01-30
HU218025B true HU218025B (hu) 2000-05-28

Family

ID=10691946

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9302645A HU218025B (hu) 1991-03-21 1992-03-17 HSV glikoprotein D-t és 3-dezacilezett monofoszforil-lipid-A-t tartalmazó Herpesz Simplex vírus elleni vakcina

Country Status (34)

Country Link
US (1) US6027730A (hu)
EP (1) EP0576478B2 (hu)
JP (1) JP3530526B2 (hu)
KR (1) KR100224329B1 (hu)
CN (2) CN1058191C (hu)
AP (1) AP298A (hu)
AT (1) ATE129160T1 (hu)
AU (1) AU650521B2 (hu)
BR (1) BR9205745A (hu)
CA (1) CA2106492C (hu)
CY (1) CY1936A (hu)
CZ (1) CZ280505B6 (hu)
DE (1) DE69205566T3 (hu)
DK (1) DK0576478T4 (hu)
ES (1) ES2081102T5 (hu)
FI (1) FI107881B (hu)
GB (1) GB9105992D0 (hu)
GR (1) GR3017884T3 (hu)
HK (1) HK1004525A1 (hu)
HU (1) HU218025B (hu)
IE (1) IE69560B1 (hu)
IL (1) IL101290A (hu)
MA (1) MA22471A1 (hu)
MX (1) MX9201245A (hu)
MY (1) MY110086A (hu)
NO (1) NO307499B1 (hu)
NZ (1) NZ242057A (hu)
PL (1) PL170059B1 (hu)
PT (1) PT100262B (hu)
SA (1) SA92120459B1 (hu)
SK (1) SK279190B6 (hu)
WO (1) WO1992016231A1 (hu)
YU (1) YU28392A (hu)
ZA (1) ZA922011B (hu)

Families Citing this family (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9105992D0 (en) * 1991-03-21 1991-05-08 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
US6197311B1 (en) 1991-07-25 2001-03-06 Idec Pharmaceuticals Corporation Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses
GB9202933D0 (en) * 1992-02-12 1992-03-25 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
US6620414B2 (en) 1992-03-27 2003-09-16 Smithkline Beecham Biologicals (S.A.) Hepatitis vaccines containing 3-0-deacylated monophoshoryl lipid A
CA2156525A1 (en) * 1993-02-19 1994-09-01 Susan Dillon Influenza vaccine compositions containing 3-o-deacylated monophosphoryl lipid a
EP0812593B8 (en) * 1993-03-23 2010-11-10 SmithKline Beecham Biologicals S.A. Vaccine compositions containing 3-0 deacylated monophosphoryl lipid a
US5723130A (en) * 1993-05-25 1998-03-03 Hancock; Gerald E. Adjuvants for vaccines against respiratory syncytial virus
GB9326253D0 (en) * 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
CA2209360C (en) * 1994-12-28 2010-07-06 University Of Kentucky Recombinant monoclonal anti-idiotype antibody 3h1 sequences relating to human carcinoembryonic antigen
US6949244B1 (en) 1995-12-20 2005-09-27 The Board Of Trustees Of The University Of Kentucky Murine monoclonal anti-idiotype antibody 11D10 and methods of use thereof
US6235280B1 (en) 1996-04-12 2001-05-22 Malaya Chatterjee Methods of delaying development of CEA-associated tumors using anti-idiotype antibody 3H1
US20020041872A1 (en) 1996-04-12 2002-04-11 Malaya Chatterjee Methods of delaying development of CEA-associated tumors using anti-idiotype antibody 3H1
US6468782B1 (en) 1996-12-05 2002-10-22 Quadrant Healthcare (Uk) Limited Methods of preserving prokaryotic cells and compositions obtained thereby
US6274143B1 (en) 1997-06-13 2001-08-14 Malaya Chatterjee Methods of delaying development of HMFG-associated tumors using anti-idiotype antibody 11D10
US6355244B1 (en) 1997-11-17 2002-03-12 University Of Kentucky Research Foundation Methods and compositions for the treatment of psoriasis
GB9819898D0 (en) * 1998-09-11 1998-11-04 Smithkline Beecham Plc New vaccine and method of use
US6692752B1 (en) * 1999-09-08 2004-02-17 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Methods of treating human females susceptible to HSV infection
AU750587B2 (en) 1998-10-16 2002-07-25 Smithkline Beecham Biologicals (Sa) Adjuvant systems and vaccines
US7026155B2 (en) 1999-02-02 2006-04-11 Regents Of The University Of California Method of reducing bacterial proliferation
EP1104767A1 (en) † 1999-11-30 2001-06-06 Stichting Dienst Landbouwkundig Onderzoek Mono- and disaccharide derivatives containing both fatty acid ester and sulfate ester groups
US9273326B2 (en) 2004-04-30 2016-03-01 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Tetracycline-regulated gene expression in HSV-1 vectors
EP1804833A2 (en) 2004-09-22 2007-07-11 GlaxoSmithKline Biologicals SA Staphylococcal immunogenic compositions
NZ561823A (en) 2005-03-23 2010-04-30 Glaxosmithkline Biolog Sa Use of an influenza virus and an oil-in-water emulsion adjuvant to induce cd4 t-cell and/or improved b-memory cell response
GB0607088D0 (en) 2006-04-07 2006-05-17 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
CN101378778B (zh) 2005-12-22 2013-02-06 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 肺炎球菌多糖缀合物疫苗
EP2476433A1 (en) 2006-03-30 2012-07-18 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Immunogenic composition
EP2043682B1 (en) 2006-07-17 2014-04-02 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Influenza vaccine
US20090181078A1 (en) 2006-09-26 2009-07-16 Infectious Disease Research Institute Vaccine composition containing synthetic adjuvant
SI2068918T1 (sl) 2006-09-26 2012-09-28 Infectious Disease Res Inst Si - ep sestavek za cepljenje, ki vsebuje sintetiäśna pomagala
TW200908994A (en) 2007-04-20 2009-03-01 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
AU2008267208B2 (en) 2007-06-26 2012-01-19 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine comprising streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide conjugates
WO2010135747A1 (en) 2009-05-22 2010-11-25 Genocea Biosciences Inc. Vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
PT2437753T (pt) 2009-06-05 2016-11-23 Infectious Disease Res Inst Adjuvantes lipídicos de glucopiranosilo sintéticos e composições de vacina contendo os mesmos
GB0913681D0 (en) 2009-08-05 2009-09-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
GB0913680D0 (en) 2009-08-05 2009-09-16 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
SI2516629T1 (sl) 2009-12-21 2016-10-28 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Cepiva proti virusu herpes simplex
EP2643014A4 (en) 2010-11-24 2015-11-11 Genocea Biosciences Inc HERPES SIMPLEX TYPE 2 VIRUS VACCINES: COMPOSITIONS AND METHODS FOR STIMULATING AN IMMUNE RESPONSE
CA2829607A1 (en) * 2011-03-11 2012-09-20 Mcmaster University A method of vaccination comprising a histone deacetylase inhibitor
MX350795B (es) 2011-04-08 2017-09-19 Inmune Design Corp Composiciones inmunogenicas y metodos para utilizar las composiciones para inducir respuestas inmunes humorales y celulares.
US10206996B2 (en) 2011-08-22 2019-02-19 Nanobio Corporation Herpes simplex virus nanoemulsion vaccine
CA2885693C (en) 2011-11-23 2020-07-28 Genocea Biosciences, Inc. Nucleic acid vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
PT2850431T (pt) 2012-05-16 2018-07-23 Immune Design Corp Vacinas para hsv-2
ES2847930T3 (es) 2013-01-07 2021-08-04 Mucosal Vaccine Tech Llc Vacunas terapéuticas para el tratamiento de las infecciones por el virus del herpes simple de tipo 2
JP6426706B2 (ja) 2013-04-18 2018-11-21 イミューン デザイン コーポレイション がん処置で使用するためのｇｌａ単剤療法
US9463198B2 (en) 2013-06-04 2016-10-11 Infectious Disease Research Institute Compositions and methods for reducing or preventing metastasis
WO2018064232A1 (en) 2016-09-28 2018-04-05 Genocea Biosciences, Inc. Methods and compositions for treating herpes
WO2019152821A1 (en) 2018-02-05 2019-08-08 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Recombinant herpes simplex virus-2 expressing glycoprotein b and d antigens
CA3208643A1 (en) 2021-01-18 2022-07-21 Conserv Bioscience Limited Coronavirus immunogenic compositions, methods and uses thereof

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4372945A (en) * 1979-11-13 1983-02-08 Likhite Vilas V Antigen compounds
IL61904A (en) * 1981-01-13 1985-07-31 Yeda Res & Dev Synthetic vaccine against influenza virus infections comprising a synthetic peptide and process for producing same
US5110587A (en) * 1981-12-24 1992-05-05 Health Research, Incorporated Immunogenic composition comprising synthetically modified vaccinia virus
US5149660A (en) * 1982-02-18 1992-09-22 University Patents, Inc. Diagnostic reagents relating to herpes simplex virus
US4762708A (en) * 1982-02-18 1988-08-09 University Patents, Inc. Materials and methods for herpes simplex virus vaccination
NZ209308A (en) * 1983-08-30 1991-08-27 Genentech Inc Vaccine against hsv involving a truncated membrane-free derivative of a membrane-bound protein
US5244792A (en) * 1984-04-06 1993-09-14 Chiron Corporation Expression of recombinant glyoprotein B from herpes simplex virus
US5171568A (en) * 1984-04-06 1992-12-15 Chiron Corporation Recombinant herpes simplex gb-gd vaccine
US4877611A (en) * 1986-04-15 1989-10-31 Ribi Immunochem Research Inc. Vaccine containing tumor antigens and adjuvants
US5554372A (en) * 1986-09-22 1996-09-10 Emory University Methods and vaccines comprising surface-active copolymers
DE3751772T2 (de) * 1986-10-20 1996-12-05 Chiron Corp Impfstoff zur behandlung von hsv
US5149529A (en) * 1988-04-08 1992-09-22 Board Of Trustees Of Leland Chiron Corporation Compositions and treatment for herpes simplex
US4912094B1 (en) * 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
NZ230424A (en) * 1988-08-25 1992-05-26 Liposome Co Inc Liposomal composition comprising an externally disposed antigen
WO1990004412A1 (en) * 1988-10-27 1990-05-03 Regents Of The University Of Minnesota Liposome immunoadjuvants containing il-2
US5597573A (en) * 1989-05-04 1997-01-28 Igen, Inc. Lipid-A analogs: new monosaccharide and disaccharide intermediates for eliciting therapeutic antibodies and for antitumor and antiviral activities
US5158939A (en) * 1989-07-21 1992-10-27 Wisconsin Alumni Research Foundation Method of stimulating the immune systems of animals and compositions useful therefor
CA2063271A1 (en) * 1989-07-14 1991-01-15 Subramonia Pillai Cytokine and hormone carriers for conjugate vaccines
CA2088246A1 (en) * 1990-08-01 1992-02-02 Dennis J. O'callaghan Gene encoding equine herpesvirus type i glycoprotein d, its gene product, antibodies and their uses
ATE179614T1 (de) * 1990-08-02 1999-05-15 Chiron Corp Herpes simplex virus vp16 impfstoffe
GB9106048D0 (en) * 1991-03-21 1991-05-08 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
US5196452A (en) * 1991-01-29 1993-03-23 Genelabs Incorporated Macrocyclic anti-viral compound and method
US5166173A (en) * 1991-01-29 1992-11-24 Genelabs Incorporated Method of treating herpes simplex virus infection
GB9105992D0 (en) * 1991-03-21 1991-05-08 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
MA22842A1 (fr) * 1992-03-27 1993-10-01 Smithkline Beecham Biolog Procede de preparation de compositions de vaccin.
JP3755890B2 (ja) * 1992-06-25 2006-03-15 スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス（ソシエテ・アノニム） アジュバント含有ワクチン組成物
CA2156525A1 (en) * 1993-02-19 1994-09-01 Susan Dillon Influenza vaccine compositions containing 3-o-deacylated monophosphoryl lipid a
EP0812593B8 (en) * 1993-03-23 2010-11-10 SmithKline Beecham Biologicals S.A. Vaccine compositions containing 3-0 deacylated monophosphoryl lipid a
US5723130A (en) * 1993-05-25 1998-03-03 Hancock; Gerald E. Adjuvants for vaccines against respiratory syncytial virus

Also Published As

Publication number Publication date
ATE129160T1 (de) 1995-11-15
PT100262B (pt) 2001-05-31
CN1058191C (zh) 2000-11-08
ES2081102T5 (es) 2001-09-01
JPH06505727A (ja) 1994-06-30
HUT67052A (en) 1995-01-30
NO933343L (no) 1993-09-20
NO933343D0 (no) 1993-09-20
JP3530526B2 (ja) 2004-05-24
GR3017884T3 (en) 1996-01-31
NO307499B1 (no) 2000-04-17
MA22471A1 (fr) 1992-10-01
GB9105992D0 (en) 1991-05-08
CZ280505B6 (cs) 1996-02-14
IE920881A1 (en) 1992-09-23
SK94693A3 (en) 1994-05-11
US6027730A (en) 2000-02-22
EP0576478B1 (en) 1995-10-18
MX9201245A (es) 1992-10-01
IL101290A (en) 1996-07-23
IE69560B1 (en) 1996-10-02
AP298A (en) 1994-01-14
CZ195893A3 (en) 1994-07-13
CA2106492A1 (en) 1992-09-22
CN1101226C (zh) 2003-02-12
KR100224329B1 (ko) 1999-10-15
IL101290A0 (en) 1992-11-15
DE69205566T3 (de) 2002-09-05
SA92120459B1 (ar) 2005-06-14
PT100262A (pt) 1993-06-30
FI934134A0 (fi) 1993-09-21
CN1065997A (zh) 1992-11-11
DE69205566D1 (en) 1995-11-23
BR9205745A (pt) 1994-10-18
PL170059B1 (pl) 1996-10-31
HK1004525A1 (en) 1998-11-27
FI934134A (fi) 1993-09-21
DE69205566T2 (de) 1996-04-18
NZ242057A (en) 1993-12-23
SK279190B6 (sk) 1998-07-08
ZA922011B (en) 1993-01-27
HU9302645D0 (en) 1994-01-28
FI107881B (fi) 2001-10-31
AU650521B2 (en) 1994-06-23
AP9200368A0 (en) 1992-04-30
CY1936A (en) 1992-03-17
CN1201692A (zh) 1998-12-16
WO1992016231A1 (en) 1992-10-01
EP0576478A1 (en) 1994-01-05
DK0576478T3 (da) 1995-12-04
MY110086A (en) 1997-12-31
YU28392A (sh) 1994-11-15
AU1365792A (en) 1992-10-21
CA2106492C (en) 2003-12-09
DK0576478T4 (da) 2001-07-23
EP0576478B2 (en) 2001-04-18
ES2081102T3 (es) 1996-02-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU218025B (hu) HSV glikoprotein D-t és 3-dezacilezett monofoszforil-lipid-A-t tartalmazó Herpesz Simplex vírus elleni vakcina
US10653771B2 (en) Vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
JP3901731B2 (ja) サポニンおよびステロールを含有するワクチン
BG107898A (bg) ПОДОБР...НА ВАК&#39;ИНА &#39;Р...(tm)&#34; MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE БАК&#39;...РИН
DE69919984T2 (de) Interleukin-12 und herpes simplex virusantigen enthaltende impfstoffe
KR19990082360A (ko) 수두 대상포진 바이러스 유전자 63 생성물에 대한 백신
Baldrick et al. Safety evaluation of a new allergy vaccine containing the adjuvant monophosphoryl lipid A (MPL®) for the treatment of grass pollen allergy
KITAOKA et al. Immunological classification of poliomyelitis viruses isolated in Japan
Simms et al. Large‐scale comparison of experimental adjuvants with herpes simplex virus vaccine reveals a correlation of protection with IgG2a and IgG2b responses
Van Steenis et al. Immunogenicity of dog kidney cell rabies vaccine (DKCV)
Mohammad Pour-dounighi et al. Humoral immune response to Diphtheria and Tetanus toxoids by intranasal administration
Pour-Dounighi et al. Humoral immune response to Diphtheria and Tetanus toxoids by intranasal administration.
AU2932502A (en) Vaccine against sexually transmitted diseases
MXPA97008226A (es) Vacunas que contienen una saponina y un esterol