HU214440B - Eljárás xilanáz előállítására - Google Patents

Eljárás xilanáz előállítására Download PDF

Info

Publication number
HU214440B
HU214440B HU9302227A HU9302227A HU214440B HU 214440 B HU214440 B HU 214440B HU 9302227 A HU9302227 A HU 9302227A HU 9302227 A HU9302227 A HU 9302227A HU 214440 B HU214440 B HU 214440B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
xylanase
process according
growth
production
strains
Prior art date
Application number
HU9302227A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT64392A (en
HU9302227D0 (en
Inventor
Philippe Debeire
Michéle Debeire-Gosselin
Eric Samain
Jean-Pierre Touzel
Original Assignee
Institut National De La Recherche Agronomique (Inra)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institut National De La Recherche Agronomique (Inra) filed Critical Institut National De La Recherche Agronomique (Inra)
Publication of HU9302227D0 publication Critical patent/HU9302227D0/hu
Publication of HUT64392A publication Critical patent/HUT64392A/hu
Publication of HU214440B publication Critical patent/HU214440B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01032—Xylan endo-1,3-beta-xylosidase (3.2.1.32), i.e. endo-1-3-beta-xylanase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
    • C12N9/248—Xylanases
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01008—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
    • D—TEXTILES; PAPER
    • D21—PAPER-MAKING; PRODUCTION OF CELLULOSE
    • D21C—PRODUCTION OF CELLULOSE BY REMOVING NON-CELLULOSE SUBSTANCES FROM CELLULOSE-CONTAINING MATERIALS; REGENERATION OF PULPING LIQUORS; APPARATUS THEREFOR
    • D21C5/00—Other processes for obtaining cellulose, e.g. cooking cotton linters ; Processes characterised by the choice of cellulose-containing starting materials
    • D21C5/005—Treatment of cellulose-containing material with microorganisms or enzymes

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Paper (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)

Abstract

A találmány tárgyát egy körülbelül 22kDa mőlekűlatömegű xilanáz enzimelőállítása képezi, amelynek izőelektrőmős pőntja körülbelül 7,7,60řC-őn stabil és aktivitásának pH őpti űma 4,8 és 7,0 között van. Ezta xilanáz enzimet Bacillűs törzsek szekretálják. Tisztítása úgytörténik, hőgy a törzsek tenyészetének felülúszóját betöményítik, majda tömény őldatőt iőncserélő őszlőpőn, végül pedig a hidrőfóbkölcsönhatás elve alapján működő őszlőpőn bőcsátják át. Ezt a xilanáztfőként papírmassza fehérítésére, valamint xilő­őligőszacharidőknövényi alapanyagőkból való előállítására lehet alkalmazni. ŕ

Description

(57) KIVONAT
A találmány tárgyát egy körülbelül 22 kDa molekulatömegű xilanáz enzim előállítása képezi, amelynek izoelektromos pontja körülbelül 7,7, 60 °C-on stabil és aktivitásának pH optimuma 4,8 és 7,0 között van.
Ezt a xilanáz enzimet Bacillus törzsek szekretálják.
Tisztítása úgy történik, hogy a törzsek tenyészetének felülúszój át betöményítik, máj d a tömény oldatot ioncserélő oszlopon, végül pedig a hidrofób kölcsönhatás elve alapján működő oszlopon bocsátják át.
Ezt a xilanázt főként papírmassza fehérítésére, valamint xilo-oligoszacharidok növényi alapanyagokból való előállítására lehet alkalmazni.
A leírás terjedelme 12 oldal (ezen belül 5 lap ábra)
HU 214 440 B
HU 214 440 Β
A találmány tárgya eljárás xilanáz enzim előállítására az ezt termelő Bacillus törzsekkel.
A találmány szerinti enzim a papíriparban alkalmazható a papírmassza fehérítésében és a xilóz, illetve xilo-oligoszacharidok növényi anyagokból történő előállításában.
A xilanázok változatos felhasználását a biotechnológia területén javasolták, főleg az élelmiszer-ipari területeken [Biely, Trends Biotechnoi., 3(11), 286-290 (1985)], a papíriparban [Móra et al., J. Wood Chem Technoi., 6, 147-165 (1986)], vagy a hemicellulózból kiinduló vegyületek gyártásában [Reilly P. J., Xylanases: structure and function in Trends in the Biotechnology of Fermentations fór Fuels and Chemicals, A. J. Hollaender (Ed)., Plenum, New York (1981)].
Az ilyen alkalmazások technikai megvalósíthatóságát főleg mezofil gombák által termelt enzimekkel értékelték. Az ilyen alkalmazásokat azonban meg lehetne könnyíteni olyan gombák alkalmazásával, amelyeknek nagyobb a magasabb hőmérséklettel szembeni stabilitásuk.
Különböző baktériumokról és enzimekről ismert, hogy részt vesznek a xilanázok termelésében [Wong et al., Microbiological Reviews, 52(3), 305-317 (1988)]. A mai napig a legmagasabb enzim-hozamot gombákkal érték el [Yu et 1., Enzyme Microb. Technoi., 9,16-24 (1987)].
Mindazonáltal a nagy mennyiségű enzimet termelő Bacillus törzseket már leírták [Okazaki et al., ppl. Microbiol. Biotechnology, 19,335-340 (1984); Okazaki et al., Agric. Bioi. Chem. 49, 2033-2039 (1985)]. Az ilyen termofil és xilánbontó Bacillusok jó jelöltek a xilanázok ipari méretekben való előállításához, tekintettel gyors növekedésükre és ismert genetikai hátterükre.
Az Okazaki és munkatársai által izolált xilanázok két Bacillus törzsből származnak, amelyeket a szerzők Wlnek és W2-nek neveztek el. Mindegyik említett törzsben kimutatták, hogy a xilanáz aktivitásnak két komponense van, az I-es és a ΙΙ-es jelű. Az I-es komponens a xilánt bontja xilobiózra és magasabb polimerizációs fokú oligomerekre, míg a ΙΙ-es komponens emellett az alapegységet, a xilózt is termeli.
Az I-es komponensek (jelük W1.1 és W2.1) molekulatömege 21,5 kDa, illetve 22,5 kDa, izoelektromos pontjuk pedig 8,5, illetve 8,3. A ΙΙ-es komponensek (Wl. II és W2. II) molekulatömege 49,5 kDa, illetve 50 kDa.
Az I-es és ΙΙ-es komponenst gátolja a Hg2+ ion, kisebb mértékben Cu2+ ion.
Számos más xilanázt izoláltak különböző Bacillus, Clostridium, Aspergillus, Streptomyces fajokból, illetve Trichodermából, többek között [Wong et al., im. (1988)].
A JP 130 96 84 számú japán közzétételi irat (RIKAGAKU KENKYSHO) egy ΙΙ-es típusú xilanázra vonatkozik, amelynek molekulatömege 50 kDa vagy 42 kDa. Ezeknek a xilanázoknak az izoelektromos pontját nem közlik.
Rajaram és munkatársai egyik cikkükben [Applied Microbiology and Biotechnology, 34(1), 141-144(1990 október)] egy, a természetből izolált Bacillus törzset írnak le, amely olyan xilanázt termel, amelynek optimális aktivitása 60 °C és 75 °C között van, pH optimuma pedig 6 és 7 között van. Ennek az enzimnek sem a molekulatömegét, sem az izoelektromos pontját nem közlik. Ez a törzs a cellulázok mellett egészen más enzimeket is termel.
Egy másik japán közzétett szabadalmi bejelentésben (JP-85 118 644, RIKAGAKU KENKYUSHO) olyan xilanázt írnak le, amelynek optimális aktivitása pH = 6 és 7 között van. Ennek az enzimnek a molekulatömegét ultraszűréssel határozták meg, értéke 50 és 100 kDa között van. Ebben a szabadalmi leírásban nem említenek izoelektromos pontot az enzimre.
Grüninger és munkatársai egyik cikke [Enzyme Microbiology and Technology, 8, 309-314 (1986 május)] egy másik Bacillus törzset ismertet, amelyet agyagból izoláltak, és amely termostabil xilanázt termel. Az enzimet az jellemzi, hogy aktivitásának hőmérséklet-optimuma 78 °C-on van, pH optimuma 7,5. Ennek az enzimnek sem a molekulatömegét, sem az izoelektromos pH értékét nem írták le.
A xilanázok ipari előállítását gátolja, hogy egyidejűleg jelen vannak szennyező aktivitások, például cellulázok, amelyek megnövelik a tisztítási költségeket. Másrészt viszont a genetikailag módosított mikroorganizmusok alkalmazása olyan problémát jelenthet, hogy a xilanázt kódoló géneket tartalmazó plazmidok instabilak.
Tudomásunk szerint a legjobb endoxilanáz hozamot olyan mikroorganizmussal érték el, amely nem termel cellulózt. Ez egy Streptomyces lividans mutáns törzs, amelyben a celluláz aktivitás génjét károsították, majd egy olyan plazmidot juttattak bele, amely a xilanáz A és B enzimeket kódoló géneket tartalmaz. A táptalajban 6000-10 000 NE/ml aktivitást figyeltek meg. Meg kell azonban jegyezni, hogy ebben az esetben is vannak problémák, például az, hogy az oldhatatlan xilánt a xilanáz A nem képes hidrolizálni, és a xilanáz B hőstabilitása okoz problémát [Kluepfel et al., Biochem. J. 267, 47-50 (1990)].
Tehát a korábbi szakirodalomban ismertetett enzimek egyike sem mutatott, tudomásunk szerint, olyan jellemzőket, amelyek lehetővé tették volna ipari alkalmazásukat, azaz a jó termikus stabilitást, amely fontos tulajdonság a szubsztrát lebontása szempontjából, valamint magas termelési szintet biztosító törzsek sem léteznek az előállításhoz.
Meglepő módon azt találtuk és igazoltuk, hogy bizonyos Bacillus törzsek termostabil xilanázokat termelnek, és ezek jelentős lebontó aktivitással rendelkeznek.
Még meglepőbb, hogy ezek a Bacillus törzsek nagy mennyiségben szekretálják ezeket az enzimeket anélkül, hogy jelentős mennyiségben cellulózokat termelnének.
A találmány szerinti xilanázt nagy mennyiségben Bacillus törzsek, főleg azok a törzsek termelik, amelyeket 1-1017 és 1-1018 szám alatt letétbe helyeztünk a Collection Nationale de Cultures des Microorganismes de 1 ’Institute Pasteur-nél.
Ezeket a törzseket trágyából izoláltuk.
A baktériumok megjelenési formájuk szerint rövid, egyenes pálcák, spórát képeznek, átlagos méretük 0, 5 μ és 2,5 μ között van. Általában egyesével vagy párosával fordulnak elő, pozitív Gram festési reakciót adnak, a spóráik oválisak és centrálisak.
Ezek a törzsek szigorúan aerobok, oxigén hiányában
HU 214 440 Β semmilyen növekedés nem figyelhető meg, és a nitrátot csak elektron-akceptorként használják.
A xilanáz termelődésének optimális pH-ja 7,8, míg a növekedéshez elfogadható pH határok 6,5 és 8,5 között helyezkednek el, a növekedéshez elfogadható maximális hőmérséklet 63 °C.
A xilán mellett ezek a törzsek hasznosítják a xilózt, glükózt, szacharózt, maltózt és a keményítőt. A ffuktózt, arabinózt, cellulózt és a pektint nem hasznosítják. Ezenkívül, a növekedést 5% nátrium-klorid jelenléte gátolja.
Ezen törzsek DNS-ének a G+C tartalmát hődenaturálással meghatározva az 57,5 mólszázaléknak adódik.
Ezek a törzsek jól eltérnek egyéb, xilanázokat termelő törzsektől, amint azt az I. táblázatban bemutatjuk, a tenyésztési idejük, illetve a xilanáz-termeló képességük alapján.
Az 1-1018 törzset az 1-1017 törzs mutagén kezelésével kapjuk. Az I-1018-as törzsnek ugyanazok az általános jellemzői, mint az 1-1017 törzsnek, de eltér ettől abban, hogy sokkal több xilanázt termel.
A találmány szerinti termofil xilanáz molekulatömege 22 kDa körül van, izoelektromos pontja pedig kb. 7,7.
Ez az enzim előnyösen nagy stabilitást mutat 60 °Con, legalább 24 órán keresztül, aktivitásának pH optimuma 4,8 és 7 között van, előnyösen 6 körüli. Meg kell jegyezni, hogy ennek az enzimnek a pH értéke elég magas, mindamellett alacsonyabb, mint a többi már leírt, közel álló molekulatömeggel rendelkező, Bacillusok által termelt xilanázoké, mint amelyeket például Okazaki és munkatársai írtak le [1985, idézett mű],
A pH = 6 érték felel meg az optimális pH-nak, de az aktivitás 80%-nál magasabb marad a 4,8-7 pH tartományban.
A találmány szerinti xilanáz az alábbi N-terminális aminosav szekvenciával rendelkezik: Asn-Thr-Tyr-Trp-Gln-Tyr-Trp-Thr-Asp-Gly-Ile-Gly-Tyr-Val-Asn-Ala-Thr-Asn-Gly-Gln.
A szekvencia előnyösen 15 alanint, 6 arginint, 29 aszparaginsavat és aszparagint, 19 glutaminsavat és glutamint, 31 glicint, 3 hisztidint, 6 izoleucint, 7 leucint, 3 lizint, 1 metionint, 4 fenilalanint, 8 prolint, 19 szerint, 13 treonint, 22 tirozint és 14 valint tartalmaz.
Ezt az enzimet a Hg2+ ion gátolja, de az Ag2+ ion nem gátolja (1 mmol/1 koncentrációban), és az SDS sem gátolja 0,1% koncentrációban.
A nyírfa xilánnal szemben mutatott Michaelis konstansa (Km) 0, 9 g/1.
Az enzim által nyírfa xilánból termelt semleges oligoszacharidok (5 g/1 nyírfa xilán; 500 U/l; 60 °C) az alábbiak:
- nagyon rövid inkubálási idő után (15 perc) xilotrióz és magasabb polimerizációs fokú xilo-ohgoszacharidok, — hosszú inkubációs idő elteltével (24-72 óra) xilobióz, xilotrióz és xilotetróz, az utóbbi elhanyagolható menynyiségben. Ezt az endoxilanázt többek között a Bacillus szekretálja, főleg az előzőleg leírt Bacillus faj 1-1017 és 1-1018 törzsei.
Az enzim a tápközegbe szekretálódik.
Ezeknek a törzseknek a tápközegét az jellemzi, hogy nincs bennük endo-P-l,4-glükanáz aktivitás (celluláz) és nagyon kis mennyiségben található szennyező β-xilozidáz aktivitás (0,06 NE/ml) a két törzs tenyészetének felülúszójában. Meg kell jegyezni, hogy a tenyészet felülúszóját liofilezni lehet anélkül, hogy a xilanáz aktivitás jelentős mértékben csökkenne, és lefagyasztva akár egy évig is tárolható anélkül, hogy az aktivitása csökkenne.
Az εηόο-β-1,4 glükanáz aktivitást az 1% karboximetilcellulózból vagy 1% Avicelből 50 mmol/1, pH = 6-os nátriumacetát pufferben felszabaduló redukáló cukrok mennyisége alapján határozzuk meg. A β-xilozidáz aktivitást p-nitrofenolnak 0,1% p-nitrofenil^-D-xilozidból 50 mmol/1 koncentrációjú pH=6 nátrium-acetát pufferben való felszabadulása alapján határozzuk meg.
A xilanáz aktivitás egysége (N. E.) egy mikronról redukáló xilóz felszabadulása egy perc alatt 60 °C-on.
A redukáló cukor koncentrációját Kidby és Davidson módszerével [Anal. Biochem., 55, 321-325 (1973)] határozzuk meg.
A tisztított enzim 20%-os etilénglikolban lefagyasztva tárolható egy évig anélkül, hogy az aktivitásából veszítene. A találmány szerinti eljáráshoz tartozik továbbá egy xilanáz kinyerési eljárás, amely az alábbi lépésekből áll:
- a Bacillus tenyészet felülúszójának töményítése ultraszűréssel,
- ioncserélő oszlopon, például O-Sepharose Fást Flow oszlopon (Pharmacia) való átbocsátás,
- hidrofób kölcsönhatások alapján működő oszlopon, például fenil-Sepharose oszlopon (Pharmacia) való átbocsátás.
A felülúszó koncentrációját jelentősen befolyásolni lehet 10 kDa-nál magasabb kizárási értékű poliszulfon membránon való ultraszűrés alkalmazásával.
Ezzel az eljárással elegendő mértékű tisztasággal rendelkező xilanáz preparátum állítható elő.
A találmány tárgyát képező xilanáz előállítási eljárás az alábbi lépésekből áll:
- a baktériumokat olyan közegben növesztjük, amely a növekedéshez szükséges szubsztrátot, például glukózt tartalmaz, és
- a xilanáz termelését megfelelő mennyiségű xilo-oligoszacharidnak a tápközegbe való folyamatos bejuttatásával indukáljuk.
A találmány szerint előállított xilanáz főként a papírpép fehérítésében alkalmazható.
A xilanáz alkalmazásának az az előnye, hogy a papírpép hidratációjának nincsen jelentősége. A pépet nem kell nagyon felhígítani ahhoz, hogy jó enzimhatást érjünk el. E xilanáznak a papírpép fehérítésében segédanyagként való alkalmazása annál inkább érdeklődésre tart számot, mivel ezzel a készítményeket megtisztítják a celluláz szennyezésektől.
Ez a xilanáz használható még xilóz, illetve xilo-oligoszacharidok növényi eredetű nyersanyagokból való előállítására, amelyek olcsó és megújuló nyersanyagok (például a kukoricacsutka).
A xilanázok egyéb alkalmazását is említik a szakirodalomban. Zeikus és munkatársai összefoglalójukban [Thermostable saccharidases. New Sources, Uses and Biodesign in „Enzymes in biomass conversion”, Leatham and Hímmel, ÁCS Washington D. C. (1991)]
HU 214 440 Β ismertetik a xilanázok fő alkalmazási területeit. Ezeket az enzimeket főleg az élelmiszer-iparban alkalmazzák, ahol tulajdonságaik lehetővé teszik a kenyérré való feldolgozás javítását, a gyümölcslevek és a bor derítését, javítják a gabonafélék rostjainak tápértékét, és segítik az élelmiszer-ipari töltőanyagok előállítását.
Az alkalmazások másik nagy ismert területe a papírpép és rostiparokat érinti, ahol az enzimet a papírpép fehérítésére, famassza előállítására, illetve műselyem gyártásánál a szálak tisztítására használják.
Említik a szárnyasok táplálásában való felhasználásukat is. Itt a xilanázokat arra használják, hogy csökkentsék a tápok viszkozitását [Van Paridon et al., Xylans and Xylanases, International Symposium, Wageningen, (1991. december 8-11); Bedford et Classen, H. L., Xylans and Xylanases, International Symposium, Wageningen, (1991. december 8-11)].
A xilanázok alkalmazását a papírmassza ipar melléktermékeinek valorizálásában pontosabban írják le Biely cikkében [Trends in Biotechnology, 3(11) (1985)]. Idézhetünk két közzétett európai szabadalmi bejelentést is [EP-228.732 és EP-227.159], amelyek a xilanázok alkalmazásával foglalkoznak a glukózszirup és a sör szűrhetőségének javításában.
Meg kell említeni azt is, hogy a xilanázok használhatók kémiai anyagok előállítására hemicellulózból kiindulva [Reilly, idézett mű].
Ezek a különböző publikációk azt mutatják, hogy a találmány szerinti xilanázok számos eljárásban alkalmazhatók.
A találmány szerinti eljárást az alábbi alkalmazási példákkal illusztráljuk anélkül, hogy ezeknek korlátozó jelleget tulajdonítanánk.
Az 1. ábrán az 1-1017 törzs szakaszos tenyésztésének görbéje látható.
A 2. ábrán az 1-1017 törzs folyamatos tenyésztésének görbéi láthatók, miközben a tenyészetet folyamatosan tápláljuk különböző koncentrációjú xilo-oligoszacharidokkal.
A 3. ábrán az 1-1017 és 1-1018 törzsek által termelt xilanázok termelődését hasonlítjuk össze, különböző koncentrációjú xilo-oligoszacharid jelenlétében.
A 4. ábrán a xilo-oligoszacharidok képződését mutatjuk be nem fehérített csomagolópapír masszából kiindulva, különböző koncentrációjú xilanáz jelenlétében.
Az 5. ábrán xilo-oligoszacharidok felszabadulását mutatjuk be őrölt kukoricacsutkából kiindulva.
7. példa
Az 1-1017 törzs szelekciója
Különböző talaj-, komposzt- és trágya-mintákat használunk oltóanyagként a xilanáz aktivitással rendelkező törzsek dúsítása érdekében. 24 órás inkubálás után a felülúszókban vizsgáljuk a xilanáz aktivitásokat, majd a három legnagyobb aktivitást mutató felülúszót hígítjuk és xilántartalmú agartáptalajra visszük.
Egy alaptáptalajt, amely az ásványi anyagokat és a vitaminokat tartalmazza [Zeikus et Wolfe, J. Bacteriol., 109, 707-713 (1972)], valamint tartalmaz 0,2% élesztőkivonatot, 2% agarral, valamint 0,5% zabxilánnal egészítünk ki. Sterilezés után 1 mol/l-es steril KHCO3 oldatból annyit teszünk az izolált törzsek kevert tenyészetéhez, hogy végkoncentrációja 25 mmol/1 legyen. A Petri-csészéket 55 °C-on inkubáljuk zárt edényekben.
A tiszta zónákat eredményező telepeket tisztítjuk. A legjobb termelőképességű izolátumokat (1-1017 törzs) kiválasztjuk és jellemezzük.
A tenyészeteknek mind a dúsítását, mind a szaporítását aerob módon végezzük meleg vizes termosztátban rázatva, 10 ml táptalajt tartalmazó 125 ml-es lombikokban. Az inkubálás hőmérséklete 55 °C, a táptalaj pH-ját 7,0-ra állítjuk be 50 mmol/1 KHCO3 hozzáadásával.
2. példa
Az 1-1017 törzs növesztése
a) A xilanázok termelésének kinetikáját 55 °C-on vizsgáljuk 2 literes fermentorokban, amelyeknek indulási térfogata 1,5 liter. Sterilezés után 50 ml 1 mol/1 koncentrációjú KHCO3 hozzáadásával a pH-t 7,8-ra állítjuk be, majd ezen az értéken tartjuk. Az oldott oxigén koncentrációját 70%-os telítésre szabályozzuk.
Az 1. ábrán az 1-1017 törzs növekedési görbéjét látjuk szakaszos tenyészetben, 0,5% zabxilán mellett. Az 1-1017 törzs 110 egység xilanázt termel milliliterenként. A tenyésztés első óráiban a redukáló cukrok időleges felhalmozódása figyelhető meg. Ez a felhalmozódás annak a következménye, hogy az inokulumban kis mennyiségben található xilanáz, amely az oldható xilán frakció xilo-oligoszacharidokká való gyors hidrolízisét katalizálja.
A baktérium növekedése lehetővé teszi ekkor a xilo-oligoszacharidok felhasználását, valamint a xilanáz szintézisét, amely rögtön azután elkezdődik, hogy a xilo-oligoszacharidok koncentrációja a baktériumok növekedésében korlátozóvá válik.
A xilanáz termelés szintje megközelítően állandó négy órán keresztül (30 NE/ml/h).
Nagy változatosság figyelhető meg a xilanáz termelésében az oltóanyag előzetes xilanáz aktivitásának, a stacioner fázis hosszúságának és a xilán fizikai jellemzőinek függvényében.
b) A xilo-oligoszacharidok mennyiségének hatása az 1-1017 törzs növekedésére.
Abból a célból, hogy reprodukálható tenyésztési feltételeket tudjunk beállítani, a xilanáz termelést olyan tápközegekben vizsgáljuk, amelyekben xilo-oligoszacharidok vannak jelen. A 2. ábrán láthatjuk a xilooligoszacharidok koncentrációjának hatását.
A kiindulási cukorkoncentráció 2 g/1. A szubsztrát az exponenciális növekedési fázis során elfogy, ezalatt semmilyen xilanáz-termelés nem mutatható ki.
Amikor a szubsztrát koncentrációja kezd a növekedés korlátozó tényezőjévé válni, azonnal megfigyelhető a xilanáz szintézise.
Az enzimtermelés szintje és időtartama is függ a szubsztrát mennyiségétől, amely 0,26 g/h és 0,67 g/h között változik, a szubsztrát fluxusa 24 ml/h, a kiindulási térfogat 1,5 liter.
A nyíl a 2. ábrán a xilo-oligoszacharidok hozzáadásának felel meg.
Az enzim legnagyobb mennyiségben való termelődé4
HU 214 440 Β sét (230 NE/ml) akkor figyelhetjük meg, ha a szubsztrátot 0,36 g/h mennyiségben adagoljuk. Ennél magasabb szinten adagolva szubsztrátokat a xilanázok termelődés! periódusának rövidülése figyelhető meg.
Ha a xilo-oligoszacharidok helyett glukózt alkalmazunk, a xilanáz termelődése jelentős mértékben csökken (14 NE/ml) és 2 óránál rövidebb ideig tart.
Másrészt viszont, ha glukózt használunk a növekedés kezdeti fázisában kiindulási szubsztrátként, akkor ez nem módosítja a xilanáz hozamot, a xilo-oligoszacharidok alkalmazásával kapott eredményekhez viszonyítva.
Abból a célból, hogy a xilo-oligoszacharidokat mint szubsztrátokat a folyamatos tenyészetek számára előállítsuk, 5% zabxilán szuszpenziót 8 óra hosszat 60 °C-on inkubálunk pH = 6 érték mellett 5 egység/ml xilanázzal. Ezt a szuszpenziót centrifugáljuk, a felülúszót kinyerjük, majd autoklávozzuk.
3. példa
A xilanáz tisztítása az 1-1017 törzs tenyészetéből
A xilanáz tisztítása az alábbi lépésekből áll:
- a Bacillus tenyészetének felülúszóját betöményítjük, kDa-nál magasabb kizárási értékű poliszulfon membránnal végzett ultraszűrést alkalmazva,
- ioncserélő Sepharose Fást Flow (Pharmacia) oszlopon bocsátjuk át,
- hidrofób kölcsönhatásokon alapuló fenil-Sepharose oszlopon (Pharmacia) bocsátjuk át.
Ennek a tisztításnak az eredményeit a II. táblázatban mutatjuk be.
Ez a tisztítás azt mutatja, hogy az endoxilanáz a fő fehérje komponens a tápközegbe kiválasztott fehérjék között (a kiválasztott fehérjéknek több mint 50%-a).
4. példa
A xilanáz jellemzése gg, a 3. pont szerint tisztított xilanázt szekvenálunk egy Applied Biosystems 470A típusú gázfázisú szekvenálóval. Az egyes aminosavak fenil-tiohidantoin (PTH) származékait nagynyomású folyadékkromatográfiával azonosítjuk, egy PTH elemző segítségével, amely egy Applied Biosystems 120A berendezéshez van kapcsolva.
Az első 20 N-terminális aminosav szekvenciája az alábbi:
Asn-Thr-Tyr-Trp-Gln-Tyr-Trp-Thr-Asp-Gly-Ile-Gly-Tyr-V al-Asn-Ala-Thr-Asn-Gly-Gln.
A teljes aminosav-összetételt is meghatározzuk 5,6 mol/1 sósavval 100 °C-on 24 óra hosszat végzett hidrolízis után.
Az eredményeket a III. táblázatban közöljük, amelyben látható az egyes aminosavak mólszázaléka, az egyes aminosavak becsült száma a fehérjében, és ezzel összehasonlítva az egyes aminosavak száma az első 20 N-terminális aminosav között.
Megjegyezzük, hogy az aszparagin és glutamin csoportokat az aszpartát és glutamát csoportokkal összevonva tudjuk megadni, valamint azt is, hogy a triptofán és cisztein csoportokat nem mérjük.
5. példa
Az 1-1017 törzs mutagenezise
Az 1-1017 törzs tenyészeteit xilánt és etil-metánszulfonátot (EMS) tartalmazó közegben kezeljük.
A kezelt sejteket kétszer mossuk, éj szakán át inkubáljuk, majd xilántartalmú agar közegre visszük ki.
A kiónokat üveg mikrokémcsövekben (8*35 mm) tenyésztjük, amelyek 100 mikroliter táptalajt tartalmaznak, 0,5% zabxilánnal kiegészítve. A mikrokémcsöveket szilikondugókkal zárjuk le, hogy biztosítsuk a levegőztetésüket, majd 24 óra hosszat 55 °C-on rázatjuk. A mutánsok szelekciójához 96 mintát vizsgálunk egyszerre; egy többcsatornás pipettával mindegyik mikrokémcső tenyészetből 20 μ 1-t viszünk át polipropilén mikrokémcsövekbe, amelyekben a xilán hidrolízisét szobahőmérsékleten játszatjuk le. A reakciókat azzal indítjuk, hogy 300 μΐ szubsztrát szuszpenziót adunk az egyes csövekhez, majd azzal állítjuk le, hogy 400 μΐ 3,5-dinitro-szalicilsavat adunk hozzá. 15 percig forraljuk, majd az egyes csövekből 50 μΐ-t mikrotiter lemezek lyukaiba teszünk, hogy az optikai sűrűségüket meghatározzuk.
A legnagyobb xilanáz aktivitást mutató kiónokat újra megvizsgáljuk oly módon, hogy ötször egymás után átoltjuk, majd összehasonlítjuk a kiindulási törzzsel.
Az EMS-sel végzett mutagenezis után 500 kiónból azokat a mutánsokat választjuk ki, amelyeknek a xilanáz aktivitása jelentősen megnőtt.
Ezeknek a mutánsoknak megnövekedett a xilanáz aktivitása, xilánt tartalmazó táptalajon végzett szakaszos fermentáció során.
A mutánsok xilanáz-termelő képességét folyamatos tenyészetekben is meghatározzuk. 0,36 g/h xilo-oligoszacharid fluxus alkalmazásával az 1-1018 mutáns xilanáz termelő képességét nem sikerült szignifikánsan fokozni (10%-nál kevesebb) az 1-1017 törzshöz képest, amint az a 3. ábrán látható, amely az I-1017 és az I-1018 törzsek eltérő növekedését mutatja két xilo-oligoszacharid koncentráció mellett.
Amikor a xilo-oligoszacharidok fluxusát 0,67 g/l-re emeljük, akkor az 1-1018 törzs például kétszer nagyobb xilanáz termelés növekedést mutat, mint az 1-1017 törzs (a kiindulási törzs).
A mutánsok előállítása és a folyamatos tenyésztési körülmények optimalizálása következtében a xilanáz termelési szintjét háromszorosára sikerült növelni a vad törzsek szakaszos tenyészeteihez viszonyítva. A megemelt enzimszintet (egészen 392 NE/ml-ig) 7 órás tenyésztési idő alatt sikerül elérni, és az 1-1018 törzzsel kapott xilanáz termelés lényegesen magasabb, mint amelyet xilanázt termelő gombákkal és baktériumokkal sikerült elérni [Bertrand et al., Biotechnoi. Bioeng., 33, 791-794 (1989); Yu et al., i. m. (1987)], amelyeknek ráadásul több napra van szükségük az említett magas enzimszint eléréséhez.
6. példa
Papírmassza kezelése (nem fehérített csomagolópapír) xilanázzal
8,5 g, tengeri fenyőből származó és 60 mg xilánt tartalmazó nedves masszát (1 g száraz tömegnek felel meg)
HU 214 440 Β
I. táblázat
A xilanázok találmány szerinti és a korábban leirt törzsekkel való előállításának összehasonlítása :czs Növekedési Xilanáz- Tenyésztés Referenciák szubaztrát termelés ideje{óra) szintje (NE/nl/h
Clostridiun glukóz zhexTolacticum
Brodel, B.E. Sémáin and ?. Gebeire, Biotechnoi. Lett.<12[1) É5-70 felszabadulás a lignin származékokkal együtt történik (280 nm-en mért optikai sűrűség alapján).
7. példa
Xilo-oligoszacharidok előállítása őrölt kukoricacsutkából g (száraz tömeg) kukoricacsutka port (szemcseeloszlás: >100 mesh) szuszpendálunk 50 mmol/l-es nátriumacetát pufferben (pH = 6,0), amely 1000 NE xilanázt tartalmaz, majd 18 óra hosszat 60 °C-on inkubáljuk.
Az 5. ábrán azt láthatjuk, hogy ilyen körülmények
C1 nniric: ura xi Ián 0, 7« 12 Serenger,J.F. között a xilán 38%-át is sikerülhet oligoszacharidokká
stercorari-ira C.Frixon J.
Bigliardi and
N.Creuzet 15 II. táblázat
Can.J. Lápé· Frakció Térfogat összes összes Specifikus %-os ki-
Microbiol. fehérje xilaasz aktivitás kiterme-
31,6.35-642 (mg) sktivi- lés
(1985) tia <NS/mg)
(H«)
'hRr—oisrua Milán 2, 40 24 C Yu,E.K.C., 20
aurisrtirus L.U.L.Tan, M.K.H.
Tenyészet 1500 216 232000 L071 100
Chan,L. Deschate-
lets and felülúszó
J.Saddler,
Enzyme I Töményítés 150 197 225000 1142 97
Microb.Technoi,,9 25 II Q Sepharose 250 142 204250 1438 88
16-24 (1967)
Fást Flow
Thielavla Solka-Floc’ 1,04 18 Mercbant,R.,
terrestris F.Kerchant and III Fenil-Sepharose 205 72 143500 1993 62
A. Margaritia,
Biotechnoi.
Lett.,10 (7)
512-51G <19831 30 III. táblázat
Streptomyces xilán 16, 76 72 Beitrand,J-L.,R- A xilanáz aminosav összetétele
livídans A Horosoli AainosavaJc Mólszézalék Hidrolízis Sxekvenália
F.Sbareck and
D.Rluepfel, A csoportok A csoportok száma
Biotechnoi. becsült száma (a azekvenált
Bioeng.33[6) qc (1-20) részben)
791-794 (1989) OJ
Alanin 7,5 15 1
Streptomvces Xilóz 3,25 65 Xluepfel,D.S.
lividane B Vats-Mehta Arginin 3,0 6 0
F.Aumur.t, F. Aszparagin (a) (a) 3
Schareck and
R.MOroaoli, Aszparaginsav 14,5 29 1
B_ochera. 40 Cisztein (c) (c) 0
J.,267, 45-50
/1990/ Glutaminsav 9, 5 19 0
Glutamin (b) (b) 2
Bacilius sp. Xilóz 2,47 46 ökazaki w.,T.
slcalcphile Akiba, K. Glicin 15,5 31 3
Horikoshi and Hisztidin 1,5 3 0
R. Akahoshi,
Appl.Micr. 40 Izoleucin 3,0 6 1
Eiotechnol.19,
335-340 (1964) Leucin 3,5 7 0
Lizin 1,5 3 0
Bacillus op Xilo-oli- 44 7 Metionin 0,5 1 0
(a talál- gaaaaCha-
mány szer.) ridok Fenilalanin 2,0 4 0
50 Prolin 4,0 8 0
3acillus sp Xilo-oli- ,b, 4 7
muráns go3zscha- Szerin 9,5 19 0
(a talál- ridok Trecnin 6,5 13 3
irány szer.)
Triptofán [c) (c) 2
Solca-Floc: : 5-7% heir.icellulózt tartalmazó tisztitett Tirczi.n 11,0 22 3
cellulóz 55 Valin 7,0 14 1
kezelünk 25 ml pufferben (amely különböző koncentrációban tartalmaz xilanázt), 24 óra hosszat 60 °C-on.
A xilo-oligoszacharidok felszabadulásának kinetikáját a 4. ábrán mutatjuk be. Sikerült kimutatni, hogy a (a) : aszparaginsavként számítva (b) : gíutaminsavként számítva (c) : nincs mérve
HU 214 440 Β alakítani (xilo-oligoszacharidok és arabino-oligoszacharidok).
Ezeket a vegyületeket használhatjuk a xilóz és az arabinóz előállításánál prekurzorként.

Claims (7)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Eljárás xilanáz előállítására, azzaljellemezve, hogy
    - az 1-1017 vagy 1-1018 számon a Pasteur Intézetben, a Collection Nationale de Cultures des Microorganismes-ben letétbe helyezett xilanáz-termelő Bacillus törzset olyan táptalajban tenyésztjük, amely növekedéshez szükséges szubsztrátot, előnyösen glukózt tartalmaz,
    - a xilanáz termelődését a tenyészetbe folyamatosan megfelelő mennyiségű xilo-oligoszacharidot adagolva indukáljuk, majd
    - a xilanázt elkülönítjük.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy termofil, 22 kDa molekulatömegű és 7,7 értékű izoelektromos ponttal rendelkező xilanázt állítunk elő.
  3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan xilanázt állítunk elő, amely 60 °C-on stabil.
  4. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan xilanázt állítunk elő, amelynél az optimális aktivitás pH-ja a 4,8-7 tartományba esik és előnyösen 6 értékű.
  5. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan xilanázt állítunk elő, amelynek terminális aminosav szekvenciája:
    Asn-Thr-Tyr-Trp-Gln-Tyr-Trp-Thr-Asp-Gly-Ile-Gly-Tyr-V al-Asn-Ala-Thr-Asn-Gly-Gln.
  6. 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzaljellemezve, hogy olyan xilanázt állítunk elő, amely 15 alanint, 6 arginint, 29 aszparaginsavat és aszparagint, 19 glutaminsavat és glutamint, 31 glicint, 3 hisztidint, 6 izoleucint, 7 leucint, 3 lizint, 1 metionint, 4 fenilalanint, 8 prolint, 19 szerint, 13 treonint, 22 tirozint és 14 valint tartalmaz.
  7. 7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az elkülönítés során a Bacillus tenyészet felülúszóját betöményítjük és egy hidrofób kölcsönhatás elve alapján működő oszlopon vezetjük át.
    HU 214 440 B
    Int. Cl.6: C 12 P 21/02
    Redukáló cukrok és növekedés (tag/ml)
    Idő (órák)
    Xilanáz (egység/ml 60°C-on)
    Fehérjék *—
    Xilanáz
    Rédukáló cukrok —B—
    1. ábra
    HU 214 440 B
    Int. Cl.6: C 12 P 21/02
    Növekedés (OD 550 nm-en)
    0 2 4 6 8
    Idő (órák)
    Xilanáz (egység/ml 60 C-on)
    Növekedés
    --ÍWi—
    Táplálás 0,26 g/h
    O
    Táplálás 0,36 g/h
    Táplálás 0,50 g/h —·—
    Táplálás 0,67 g/h
    2- ábra
    HU 214 440 B
    Int. Cl.6: C 12 P 21/02
    Xilanáz (NE/ml 60 C-on)
HU9302227A 1991-02-01 1992-01-28 Eljárás xilanáz előállítására HU214440B (hu)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9101191A FR2672300B1 (fr) 1991-02-01 1991-02-01 Xylanase, souches de bacillus productrices de xylanase et leurs utilisations.

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9302227D0 HU9302227D0 (en) 1993-11-29
HUT64392A HUT64392A (en) 1993-12-28
HU214440B true HU214440B (hu) 1998-03-30

Family

ID=9409300

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9302227A HU214440B (hu) 1991-02-01 1992-01-28 Eljárás xilanáz előállítására

Country Status (21)

Country Link
EP (1) EP0573536B1 (hu)
JP (1) JPH06506107A (hu)
KR (1) KR930703432A (hu)
AT (1) ATE152168T1 (hu)
AU (1) AU666301B2 (hu)
BG (1) BG97987A (hu)
BR (1) BR9205551A (hu)
CA (1) CA2101063A1 (hu)
CZ (1) CZ150093A3 (hu)
DE (1) DE69219325T2 (hu)
DK (1) DK0573536T3 (hu)
ES (1) ES2103934T3 (hu)
FI (1) FI933408A (hu)
FR (1) FR2672300B1 (hu)
GR (1) GR3024223T3 (hu)
HU (1) HU214440B (hu)
IL (1) IL100831A0 (hu)
NO (1) NO306562B1 (hu)
SK (1) SK82093A3 (hu)
WO (1) WO1992013942A1 (hu)
ZA (1) ZA92582B (hu)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2807612B2 (ja) * 1993-03-12 1998-10-08 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ 新規キシラナーゼ、その製造法、該キシラナーゼによるパルプ処理方法及びキシロオリゴ糖の製造法
US5437992A (en) * 1994-04-28 1995-08-01 Genencor International, Inc. Five thermostable xylanases from microtetraspora flexuosa for use in delignification and/or bleaching of pulp
JP3435946B2 (ja) * 1994-12-21 2003-08-11 王子製紙株式会社 耐熱性キシラナーゼ
CA2234998A1 (en) * 1995-10-17 1997-04-24 Institut National De La Recherche Agronomique (Inra) Xylanase, oligonucleotidic sequence encoding it and its uses
CA2989977A1 (en) * 2015-06-29 2017-01-05 Ferring B.V. Lactobacillus rhamnosus bacterium for treatment of e.g. bacterial vaginosis
CN112410264B (zh) * 2020-12-09 2022-04-22 山东隆科特酶制剂有限公司 一株高产耐高温碱性木聚糖酶的菌株及生产方法
CN112831436B (zh) * 2021-01-20 2022-05-03 山东大学 一株极地杆菌属1,3/1,4-木聚糖降解菌及其培养方法与应用
CN114457059B (zh) * 2022-01-21 2024-03-19 青岛尚德生物技术有限公司 一种含木聚糖酶的酶制剂及其在用于生产低聚木糖中的应用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0248231B2 (ja) * 1983-09-09 1990-10-24 Rikagaku Kenkyusho Shinkikishiranaazeoyobisonoseizoho
JPH0248232B2 (ja) * 1989-04-24 1990-10-24 Rikagaku Kenkyusho Shinkikishiranaazeoyobisonoseizoho

Also Published As

Publication number Publication date
FR2672300B1 (fr) 1994-09-23
HUT64392A (en) 1993-12-28
FI933408A0 (fi) 1993-07-30
ES2103934T3 (es) 1997-10-01
EP0573536B1 (fr) 1997-04-23
IL100831A0 (en) 1992-09-06
BR9205551A (pt) 1994-06-07
NO306562B1 (no) 1999-11-22
BG97987A (en) 1994-04-25
CZ150093A3 (en) 1994-01-19
NO932668L (no) 1993-07-23
FI933408A (fi) 1993-07-30
ZA92582B (en) 1992-10-28
DK0573536T3 (da) 1997-12-01
ATE152168T1 (de) 1997-05-15
HU9302227D0 (en) 1993-11-29
GR3024223T3 (en) 1997-10-31
DE69219325D1 (de) 1997-05-28
SK82093A3 (en) 1994-09-07
KR930703432A (ko) 1993-11-30
AU666301B2 (en) 1996-02-08
CA2101063A1 (fr) 1992-08-02
FR2672300A1 (fr) 1992-08-07
AU1376192A (en) 1992-09-07
DE69219325T2 (de) 1998-01-29
JPH06506107A (ja) 1994-07-14
EP0573536A1 (fr) 1993-12-15
WO1992013942A1 (fr) 1992-08-20
NO932668D0 (no) 1993-07-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Gomes et al. Production of a high level of cellulase-free xylanase by the thermophilic fungus Thermomyces lanuginosus in laboratory and pilot scales using lignocellulosic materials
US5736375A (en) Expression system for novel pullulanase
KR890002413B1 (ko) 디브랜칭 효소 생성물, 그 제법 및 그 이용 방법
Smith et al. Xylanase production by Aspergillus awamori. Development of a medium and optimization of the fermentation parameters for the production of extracellular xylanase and β‐xylosidase while maintaining low protease production
JP2589941B2 (ja) グルコアミラーゼ酵素分画
Ding et al. High activity xylanase production by Streptomyces olivaceoviridis E-86
Palma et al. Influence of aeration and agitation rate on the xylanase activity from Penicillium janthinellum
WO1984003902A1 (en) Hyperproducing cellulase microorganism
CN103275955A (zh) 一种高木糖耐受性的木糖苷酶Xyl43B及其基因和应用
EP3342867A1 (en) Mutant xylanase, manufacturing method and use therefor, and method for manufacturing saccharified lignocellulose
JPH08507221A (ja) アルカリ耐性キシラナーゼ
Grajek Production of D-xylanases by thermophilic fungi using different methods of culture
Marimuthu et al. Production and Optimization of Xylanase Enzyme from Bacillus subtilis using Agricultural Wastes by Solid State Fermentation.
HU214440B (hu) Eljárás xilanáz előállítására
Bicho et al. The characterisation of a thermostable endo-β-1, 4-mannanase cloned from “Caldocellum saccharolyticum”
US6548283B1 (en) Bacterial protein with xylanase activity
JP2020065514A (ja) 新規アラビノフラノシダーゼ
Sakka et al. Cloning and expression in Escherichia coli of Clostridium stercorarium strain F-9 genes related to xylan hydrolysis
Dobberstein et al. β-Xylanase produced by Aureobasidium pullulans CBS 58475
Ziayoddin et al. Increased production of carrageenase by Pseudomonas aeruginosa ZSL-2 using Taguchi experimental design
Éthier et al. Cloning of two xylanase genes from the newly isolated actinomycete Actinomadura sp. strain FC7 and characterization of the gene products
TWI626312B (zh) 具提升活性的木醣苷酶
Shakoori et al. Screening, optimization and characterization of xylanase by locally isolated bacteria
NZ241453A (en) Xylanase and bacillus strains for its production.
CN112410264B (zh) 一株高产耐高温碱性木聚糖酶的菌株及生产方法

Legal Events

Date Code Title Description
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee