HU201965B

HU201965B - Process for producing peptides having anticoagulant effect

Info

Publication number: HU201965B
Application number: HU896448A
Authority: HU
Inventors: John Leonard Krstenansky
Original assignee: Merrell Dow Pharma
Priority date: 1988-12-07
Filing date: 1989-12-06
Publication date: 1991-01-28
Also published as: NO894880D0; CA2004885A1; KR0162893B1; AU630132B2; CN1043134A; DK614489A; EP0372503A3; IL92551A0; ES2131041T3; KR900009699A; PT92503B; CA2004885C; NZ231636A; ZA899247B; DK614489D0; ATE177432T1; HUT53125A; DE68928942T2; DE68928942D1; HU896448D0

Description

A találmány tárgya eljárás új, antikoaguláns hatású, hirudin-peptidek előállítására.

Az antikoagulánsok hasznos gyógyászati anyagok például az akut mélyvénás trombózis a tüdőembólia, a végtagok akut artériás embolizálódása, a miokartüális infarktus és a szórt intavaszkuláris koaguláció (véredényen belüli vérrögképződés) kezelésében. Úgy tartják, hogy az antikoagulánsok profilaktikus (megelőző jellegű) beadása reumatikus vagy arterioszÜerózisos szívbetegségben szenvedő betegeknél meggátolja az embóliák ismételt megjelenését, valamint gátolja bizonyos sebészeti tromboembóíiás komplikációk fellépését. Ezen hatóanyagok javallottak továbbá koszorúéri és agy-érrendszeri betegségek kezeléséhez. Az artériás trombózis - különösen a szívizom és a vérellátását biztosító artériákban - a legfőbb halálokok közé tartozik.

A hirudin egy 65 tagú polipeptid, melyet piócák nyálmirigyeiből nyernek ki. Trombin-specifikus inhibitor, koagulálásgátló. Bár a nyálkivonatból izolált hirudin nagyon hatásos, a korlátozott mennyiség, a költségek és a bármely ilyen méretű fehérje beadásával általában együttjáró allergiás reakciók miatt klinikai felhasználásra kevéssé alkalmas.

Kísérleteink során azonosítottuk a hirudinnak azt a specifikus részét, mely - legalábbis részben e peptid koagulálásgátló hatását okozza. Ezt a részt kémiai úton szintetizáltuk, és megállapítottuk, hogy bizonyos analógjai a trombin receptorhelyéhez kötődnek, de nem kötődnek a térben elkülönült enzimes hasítási helyhez. A szintetikus peptidek kötődése kompetitíve megakadályozza a fibrinogén kötődését a trombin receptorhelyéhez, ami a fibrintermelés és a vérrögképződés előfeltétele. A találmány szerinti eljárással előállított peptridek jelentős antikoaguláns hatást mutatnak, és az a szokatlan képességük, hogy a trombinnak csak a receptorhelyéhez kötődnek, a hasítási helyhez pedig nem kötődnek, tudományos szempontból érdekes és számottevően hozzájárul az antikoaguláns terápia fejlődéséhez.

Tehát a találmány tárgya eljárás (I) általános képletű vegyületek, ahol

X jelentése 3-7 szénatomos kétbázisú alkánkarbonsav-maradék,

Ai jelentése egy vegyértékkötés,

A₂ jelentése Tyr,

A3 jelentése Glu,

A4 jelentése Pro, Pip, Azd,

A5 jelentése lle,

Aő jelentése Pro, Pip, Azd,

A7 jelentése Glu,

Ás jelentése Glu,

A9 jelentése Ala-Cha,

A10 jelentése D-Glu,

Y jelentése -OH csoport, azzal a kikötéssel, hogy az A4 és Aő nem lehet azonos jelentésű.

A leírásban az aminosavak neveit a következőképpen rövidítettük:

Ala-alanin lle - izqleucin,

Cha- cjklphexil-alanin,

Pro - prolin,

Tyr - tirozin

Glu - glutaminsav

Pip - L-2-pipekoimsav

Azd - L-azetidin-2-karboxÍlát

A természetben előforduló aminosavak az alanin, izoleucin, tirozin, prolin és a glutaminsav. A „lípofil aminosavak” kifejezésen a következő aminosavakat értjük: Tyr, lle és Pro.

A természetes aminosavak tartalmaznak egy királis szénatomot. Az itt említett aminosavak, hacsak másként nem jelezzük, L-konfigurációjúak. Az A10 szubsztituens helyén szereplő aminosav Dkonfigurációjú. A peptidek szerkezetét szokás szerint úgy írtuk le, hogy a láncvégzáró aminocsoport a lánc baloldalán, a láncvégzáró karboxilcsoport pedig a lánc jobboldalán helyezkedik el.

Az (I) általános képletű polipeptidek bármely nem toxikus szerves vagy szervetlen savval reagáltatva gyógyászatilag elfogadható sót képezhetnek. E célra megfelelő szervetlen savak például a sósav, hidrogén-bromid, kénsav, foszforsav és a savas fémsók, mint például a nátrium-monohidrogén-ortofoszfát és a kálium-hidrogén-szulfát. Szerves savként alkalmazhatunk mono-, di- vagy trikarbonsavakat. Ilyenek például az ecetsav, glikolsav, tejsav, piroszőlősav, malonsav, borostyánkősav, glutársav, fumársav, malonsav, borkősav, citromsav, aszkorbinsav, maleinsav, hidroxi-maleinsav, benzoesav, hidroxi-benzoesav, fenil-ecetsav, fahéjsav, szalicilsav, 2-fenoxi-benzoesav és szulfonsavak, mint például metán- és 2-hidroxi-etán-szulfonsav. Az aminosav molekularész láncvégzáró karboxilcsoportja bármely alkalmas szervetlen vagy szerves bázissal képezhet nem toxikus karbonsavas sót. Ilyenek például az alkálifémekkel, például nátriummal vagy káliummal, az alkáliföldfémekkel, például kalciummal, vagy magnéziummal, a IIIA csoport könnyűféméivel, például alumíniummal, valamint a szerves primer, szekunder és tercier aminokkal, dibenzilamin, 1-etén-amin, Ν,Ν’-dibenzil-etilén-diamin, dihibrabietil-amin, N-(kis szénatomszámú)alkil-piperidin - vagy bármely más alkalmas aminnal képzett sók. Az (I) általános képletű vegyületeket szilárd fázisú szekvenciális - szintézissel állítjuk el. A szilárd fázisú szekvenciális eljárást az ismert automatizált módszerekkel, például automatikus peptidszintetizátorral hajthatjuk végre. Ebben az eljárásban az α-aminosavat egy gyanta jellegű hordozóhoz kötötten alkalmazzuk. Gyanta jellegű hordozóként bármely, a polipeptidek szilárd fázisú előállításához szokásosan alkalmazott gyantát használhatunk. Ez előnyösen 0,5-3% divinil-benzollal térhálósított polisztirol, mely az α-amino-védett aminosav kiindulási anyag észterezési helyeinek biztosítására klór-metilezett vagy hidroxi-metílezett.

A hidroxi-metilezett gyanta egyik példáját írják le Bodanszky és munkatársai [Chem. Ind. (London) 38, 1591-98 (1966)]. Egy klór-metilezett gyanta kereskedelmi forgalomban kapható a Bio Rád Laboratories cégnél, Richmond, Caliornia, és egy ilyen gyanta előállításának leírása megtalálható Stewart és munkatársai „Solis Phase Peptides Synthesis” című könyvében (Freeman & Co., San Francisco 1969), Chapter 1, pp. 1-6. A védett aminosavat a Gisin [Helv. Chem. Acta, 56,1476 (1973)] által leírt

-2HU 201965 Β

4 módon köthetjük a gyantához. A kereskedelemben sokféle, gyantához kötött, védett aminosav kapható. Például olyan (I) általános képletű polipeptid előállítására, melyben a karboxi láncvég egy Thr savmaradék, egy hodroxi-metilezett fenil-acetamido-metil (PAM) gyantához kötött, terc-butil-oxikarbonil-csoporttal védett Thr-t alkalmazunk, mely kereskedelmi forgalomban kapható.

Miután az α-amino-védett aminosavat a hordozó gyantához kötöttük, a védőcsoportot az ismert módszerekkel - például trifluor-ecetsawal metilén-kloridban vagy anélkül, vagy dioxánban sósavval - 0 °C és szobahőmérséklet közötti hőmérsékleten lehasítjuk. Használhatunk más, a specifikus aaminovédő csoportok lehasítására szokásosan alkalmazott módszereket és reagenseket is. Az aamino-védő csoport eltávolítása után a többi amino-védett aminosavat lépésről lépésre a kívánt sorrendben kapcsoljuk össze. Olyan eljárást is követhetünk, hogy a gyantán megkötött aminosav-szekvenciával történő összekapcsolás előtt több aminosavat oldatban összekapcsolunk.

Az α-aminovédő csoport, melyet az aminosavszekvenciába beépítendő aminosavak mindegyikében alkalmazunk, bármely ilyen, a szakmában ismert védőcsoport lehet. Ide tartoznak (1) az acil-típusú védőcsoportok, mint például formil-, trifluoracetil-, ftalil-, toluolszilfonil- (tozil-), benzolszulfonil-, nitrofenilszulfenil-, tritilszulfenil-, o-nitro-fenoxi-acetil-, a-butiril-csoport, (2) az aromás uretán típusú védőcsoportok, mint például benzil-oxi-karbonil- és szubsztituált benzil-oxi-karbonil-, (mint például ρ-klór-benzil-oxi-karbonil-, p-nitrobenzil-, karbonil-, ρ-bróm-benzil-oxi-karbonil-, p-metoxibenzil-oxi-karbonil-, l-(p-bifenil—il)-l-metil-etiloxi-karbonil-, a,a-dimetil-3,5-dimetoxi-benzil-oxikarbonil-, benzihidril-oxi-karbonil-csoport, (3) az alifás uretán védőcsoportok, mint például terc-butil-oxi-karbonil- (Boc), diizopropil-metoxi-karbonil-, izopropil-oxi-karbonil-, etoxi-karbonil-, alliloxi-karbonil-csoport, (4) a ciloalkiluretán típusú védőcsoportok, mint például ciklopentil-oxi-karbonil-, adamantil-oxi-karbonil-, ciklohexil-oxi-karbonil-csoport, (5) a tiouretán tíousú védőcsoportok, mint például a fenil-tiokarbonil-csoport, (6) az alkil típusú védőcsoportok, mint például trifenilmetil- (tritil)- és benzilcsoport, valamint (7) a trialkil-szilán-csoportok, mint például a trimetil-szilán. Előnyösen alkalmazható α-aminovédő csoport a terc-butil-oxi-karbonil-csoport.

A megfelelő kapcsolási reagenst a szakmában ismertek közül választjuk, melyek például a következők: (1) a karbodiimidek (pl. Ν,Ν’-diciklohexilkarbodiimid és N-etil-N'-(-y-dimetil-amino-propilkarbodiimid), (2) a ciánamidok (pl. az N,N’-dibenzil-ciánamid), (4) azizoxazolium-sók (pl. azN-etil5-fenil-izoxazolium-3’-szulfonát), (5) az aromás jellegű monociklus, nitrogéntartalmú heterogyűrűs amidok, melyek a gyűrűben 1-4 nitrogénatomot tartalmaznak, mint például az imiazolidok, pirazolidok és az 1,2,4-triazolidok (így pl. az N,N’-karbonil-diimidazol és azN,N-karbonil-di-l,2,4-triazol), (6) az alkoxilezett acetilének (pl. etoxi-acetilén), (7) az aminosav karboxi-részével vegyes anhidridet képző reagensek (pl. etil-klór-formát és izobutilklór-formát) vagy a kapcsolandó aminosawal szimmetrikus anhidridet képző reagensek (pl. Boc-AlaO-Ala-Boc) és (8) olyan nitrogéntartalmú heterogyűrűs vegyületek, melyek az egyik gyűrű-nitro5 génen egy hidroxicsoportot tartalmaznak (pl. Nhidroxi-ftálimid, N-hidroxi-szukcinimid vagy 1-hidroxi-benzotríazol). Kapoor IJ. Pharm. Sci., 59, pp. 1-27 (1970) leír egyéb aktiváló reagenseket is, valamint ezek alkalmazását peptidek kapcsolására. A kapcsoláshoz előnyösen alkalmazható reagensek a szimmetrikus anhidridek.

Az egyes aminosavakat vagy aminosav-szekvenciákat körülbelül négyszeres feleslegben adagoljuk be a szilárd fázisú reaktorba, és a kapcsolást 1:1 arányú dimetil-formamidmetilén-klorid elegyben vagy csak dimetil-formamidban vagy előnyösen csak metilén-kloridban hajtjuk végre. Ha a kapcsolódás nem megy végbe tökéletesen, akkor - mielőtt a következő aminosavat bevezetnénk a szilárd fázi20 sú reaktorba, és az α-aminovédő csoport eltávolítása előtt - a kapcsolási eljárást megismétejük. A kapcsolási reakció sikerességét a szintézis minden egyes lépésében az E. Kaiser és munkatársai [Anafyt. Biochem. 34, 595 (1970)] által leírt ninhid25 rin-reakcióval figyeljük.

Miután a kívánt aminosav-szekvenciát megkaptuk, a pepiidet eltávolítjuk a gyantáról. Ezt végezhetjük hidrolízissel, pl. úgy, hogy a gyantához kötött polipeptídet dimetil-szulfid, p-krezol és tiokrezol híg vizes hidrogén-fluoridos oldatával kezeljük.

Mint az a szilárd fázisú peptiszintézis gyakorlatából ismert, sok aminosav olyan funkciós csoportokat tartalmaz, melyeket a lánc kialakítása során védeni kell. A megfelelő védőcsoport kiválasztása és alkalmazása a szakmában jártasak számára egyszerű feladat. Az alkalmazandó védőcsoportot a védeni kívánt aminosavtól és a peptidben jelenlevő más védett aminosav-maradéktól függően kell megválasztani. Az ilyen oldalláncvédő csoportok kiválasztása kritikus feladat, mert ezeknek az aaminovédő csoport eltávolítása során nem szabad lehasadniuk.

Ezek a védőcsoportok a szakmában ismert módszerekkel távolíthatók el. A védőcsoportokat álta45 Iában a peptidlánc szintézisének befejezése után hasítjuk le, de ezt a műveletet bármely más alkalmas időpontban is elvégezhetjük.

A találmány szerinti eljárással előállított peptidszármazékok koagulálásgátló mennyisége - a paci50 enstől, a kezelendő trombotikus állapot súlyosságától és a választott vegyülettől függően - a beteg 1 testsúly-kg-jára számítva napi 0,2 mg-tól 250 mg-ig terjed. A beteg számára alkalmas egyedi dózis könnyen meghatározható, általában napi 1-4-szer, dózisonként 5 és 100 mg közötti hatóanyagot tartalmazó készítményt adunk be.

Az antikoaguláns terápia javallott egy sor trombotikus állapot - különösen a szívkoszorúéri és agy-érrednszeri betegségek - kezelésére és megÖ0 előzésére. A szakmában jártasak ismerik az antikoaguláns terápiát igénylő körülményeket. A „beteg” kifejezésen itt emlősöket - mint pl. főemlősök, beleértve az embert, továbbá juhot, lovat, szarvasmarhát, sertést, kutyát, macskát patkányt, egeret - ér65 tünk.

-3HU 201965 Β

Bár egyes peptid-származékok sértetlenek maradhatnak, miközben az orális beadást követően a nyelőcsövön áthaladnak, előnyösebb, ha a készítményt nem orális úton, például szubkután, intravénása«, intramuszkulárisan vagy intraperitoneáli- 5 san, depót injekció vagy implant alakjában adjuk be, vagy pedig az orr, a torok vagy a hörgők nyálkahártyáira alkalmazzuk, például aeroszolként, mely a találmány szerinti eljárással előállított peptidszármazékot spray vagy száraz por alakjában tártál- 10 mázzá.

Parenterális beadás céljára a találmány szerinti eljárással előállított vegyületekből valamely fiziológiailag elfogadható hígítószerben, gyógyászatilag elfogadható hordozóanyag - mely lehet egy steril 15 folyadék, például víz vagy olaj - és felületaktív anyagok vagy egyéb, gyógyászatilag elfogadható adalékok hozzáadásával oldatot vagy szuszpenziót állíthatunk elő injektálható dózisok formájában. E készítményekben olajként alkalmazhatunk ásványi, 20 állati, növényi eredetű vagy szintetikus olajokat, például földimogyoró-, szója- vagy ásványolajat. Általában - és különösen injektálható oldatok készítéséhez - előnyösen alkalmazható folyékony hordozóanyagok a víz, fiziológiás sóoldat, vizes 25 dextróz- vagy invertcukor-oldatok, etanol, és a glikolok, mint propilén-glikol vagy poli-(etilén-glikol).

A szóbanforgó vegyületeket késleltetett hatóanyag-leadású depot-injekció vagy implant készít- 30 mény alakjában is beadhatjuk. A hatóanyagból pelleteket, vagyis apró hengereket sajtolunk, és ezeket szubkután vagy intramuszkulárisan depót injekció, illetve implant formájában adjuk be. Az implantokban alkalmazhatunk inért anyagokat, például bio- 35 lógiai úton lebontható polimereket vagy szintetikus szilikonokat, mint például a Silastic, a Down-Corning Corp. szilikonkaucsuk-gyártmánya. Az alábbi példák a találmány illusztrálására szolgálnak, annak oltalmi körét nem befolyásolják. 40

l.péida

Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Pip-Glu-Glu-Ala-Cha-D -Glu-OH előállítása

A peptidet szilárd fázisú eljárással szitnetizáljuk 45 0,5 mmól 0,56 mmól/g koncentrációjú Boc-DGlu(Blz)-Merrifield gyanta alkalmazásával.

2,0 mmól N_a-Boc-aminosawal (Peptides International) kettős szimmetrikus anhidrid kapcsolást hajtunk végre, kivéve a Boc-Pip-et, melyet csak 50 egyszeresen kapcsolunk. Az oldalláncot Glu(Blz)vel és Tyr(Blz)-vel védjük. A láncvégzáró N_a-Boc védőcsoportot metilén-klorid és trifluorecetsav 50%-os elegyével távolítjuk el. A gyantát metilén6 kloriddal háromszor átmossuk, 10%-os metilénkloridos diizopropil-etil-aminnal háromszor átmosva semlegesítjük, majd metilén-kloriddal ismét 3 x mossuk. A peptidlánc végét dimetil-formamidban oldott 1,0 g szukcinanhidriddel zárjuk, metilénkloriddal 3 x mossuk, majd szabad aminra viszgáljuk. A láncvégzáró reakciót még kétszer megismételjük, majd a gyantát megszárítjuk. A gyantáról a peptidet és a pepiidről a védőcsoportokat 0 °C-on, 45 percen át, 5% anizolt tartalmazó hídrogénfluoriddal hasítjuk el. A hidrogén-fluoridot 0,12800 Pa-os vákuumban, 0 °C-on eltávolítjuk, a peptidet 30%-os vizes acetonitrillel leoldjuk a gyantáról és liofilizáljuk.

A peptidet 50,8 c 150 mm-es C¹⁸ Beckman oszlopon végzett preparatív HPLC kromatográfiával tisztítjuk, eluensként 33-38% acetontrilt tartalmazó 0,1%-os vizes TFA oldatot alkalmazunk 79 ml/perc sebességgel. A legmagasabb csúcshoz tartozó frakciót leszűrjük, liofilizáljuk, majd ugyanazon az oszlopon, gradiensként 80 ml/perc sebességű, 34-35,5% acetonitrilt tartalmazó 0,1%-os vizes TFA oldatot alkalmazva tovább tisztítjuk. A preparatív HPLC 50,8 x 150 mm-es C¹⁸ Beckman oszlopon végezzük, eluensként 33-38% acetonitrilt tartalmazó 0,1%-os vizes TFA oldatot alkalmazunk 79 ml/perc sebességgel. A legmagasabb csúcshoz tartozó frakciót leszűrjük és liofilizáljuk, így 101 mg-ot kaOpunk a kívánt termékből (a gyantán eredetileg kötött peptidre vonatkoztatva 58%os kihozatal). A homogenitást HPLC és TTLC kromatográfiával határozzuk meg. A HPLC-t 250 x

4,6 mm-es Vydac 218TP54 C¹⁸ oszlopon, 2 ml/perc sebességgel végezzük, t₀ = 1,9 perc, eluciós idő 1540%-os acetonitrillel 0,1%-os trifluor-ecetsavban 1%/perc lineáris gradienssel 14,4 perc.

Aminosav elemzési eredmények (hidrolízis 6n sósavval 24 órán át 106 ’C-on): Glx 4,02 (4); Pro 0,99 (1); Alá 0,99 (1); Ile 0,95 (1); Tyr 0,97 (1); Pip 1,08 (1); ε275 = 1490. Peptid-tartalom: 91,5 tömeg%.

Hasonló módon állítjuk elő az alábbi 2-4. példa szerinti peptideket:

2. példa

Suc-Tyr-Glu-Pip-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-D -Glu-OH előállítása

3. példa

Suc-Tyr-Glu-Pro-Ile-Azd-Glu-Glu-Ala-ChaD-Glu-OH előállítása

4. példa

Suc-Tyr-Glu-Azd-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-ChaD-Glu-OH előállítása

Példa Aminosav elemzés (hidrolízis: 6N HCI, 24 Ó, 106 ’C)

száma	Glx	Pro	Alá	Ile	Tyr	Pip	Petid tart.
2.	3,97(4)	1,03(1)	0,98(1)	0,95(1)	0,98(1)	1,09(1)	84%
3.	4,04(4)	1,03(1)	0,98(1)	0,97(1)	0,98(1)		82%
4.	4,01(4)	1,04(1)	0,99(1)	0,96(1)	1,00(1)		86%

-4HU 201965 Β

Ί 8

Fizikai jellemzők

Példa száma	HPLC tr(min) 15-40% gradiens to = 1,65 min	FAB-MS (M + H) ⁺	6275
2.	19,05	1344	1630
3.	15,65	1316	1610
4.	16,25	1316	1560

A Merrifield gyanta egy stirén polimer, mely ~

1% divinil-benzollal keresztkötést alkot (beszerezhető: Peptides International of Lousville, Kentucky, USA).

A tr egy vegyület korrifálatlan retenciós idejét 20 jelenti egy kromatográfiás műveletben. A kromatogram idő-tengelyén a tr egy minta beinjektálási és detektálási pontja közötti érték, a to pedig az időtengelyen mért korrigálatlan távolság az eluens indulásától a detektorba való érkezésig. 25

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás (I) általános képletű peptid-származé- 30 kok - ahol

X jelentése 3-7 szénatomos kétbázisú alkánkarbonsav-meredin,

Αχ jelentése egy vegyértékkötés,

A2 jelentése Tyr, 35

A3 jelenmtése Glu,

A4 jelentése Pro, Pip, Azd,

A5 jelentése Ile,

Aő jelentése Pro, Pip, Azd

A7 jelentése Glu, 40

As jelentése Glu,

A9 jelentése Ala-Cha,

A10 jelentése F-Glu,

Y jelentése -OH csoport, azzal a kikötéssel, hogy A4 és Aő egyidejűleg 45 nem lehet azonos jelentésű, azzal jellemezve, hogy az α-amino-védett és kívánt esetben az oldalláncon védett aminosavakat A10-A2 sorrendben az aktivált gyantához kötjük, miközben az a-aminovédocsoportot lehasítjuk, majd végül a védőcsoportokat és a hordozógyantát lehasítjuk.
2. Az 2. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű peptid-származékok előállítására, melyben

Aő jelentése Pro,

X, A1-A5, A7-A10 és Y jelentése az 1. igénypontban megadott, azzal jellemezve, hogy a megfelelően szubsztituált kiindulási vegyületeket alkalmazzuk.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás Suc-Tyr-GluPro-Ile-Pip-Glu-Glu-Ala-Cha-D-Glu-OH előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelően szubsztituált kiindulási vegyületeket alkalmazzuk.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás Suc-Tyr-GluPip-Ile-Pro-GIu-Glu-Ala-Cha-D-Glu-OH előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelően szubsztituált kiindulási vegyületeket alkalmazzuk.
5. Az 1. igénypont szerinti eljárás Suc-Tyr-GluPro-Ile-Azd-Glu-Glu-Ala-Cha-D-Glu-OH előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelően szubsztituált kiindulási vegyületeket alkalmazzuk.
6. Az 1. igénypont szerinti eljárás Suc-Tyr-GluAzd-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-D-Glu-OH előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelően szubsztituált kiindulási vegyületeket alkalmazzuk.