HU197944B - Process for producing chanoclavine - Google Patents

Description

A találmány tárgya eljárás chanoclavin előállítására, melyet az jellemez, hogy a DSM 2837 számon deponált Claviceps spec. mikroorganizmust tenyésztjük és a fermentáció befejezése után a képződött chanoclavint izoláljuk.

Ismert tény, hogy a chanoclavint (: 2-metil-3- [ 1,3,4,5-tetrahidro-4- (metil-amino) -benz[cd] indol-5-il]-2-propen-l-ol :) elővegyületként lehet használni farmakológiailag hatásos ergotalkaloidok bioszintéziséhez, így — többek között — farmakológiailag hatásos vegyületek előállításához (lásd: J. Med. Chem. 17, 1974, 300) lehet hasznosítani.

Azt találtuk, hogy egy Claviceps spec. gombatörzs magas kitermeléssel és másféle ergotalkaloldoktó) gyakorlatilag mentesen képes a tenyésztési közegben chanoclavint termelni. Az említett Claviceps spec. törzset egy vadon termő rozsnok (Bromus) anyarozsából izoláltuk. A törzset — vállalaton belüli használatra — a SCHERING MBCE 373113 megjelöléssel láttuk el, és azt a Német Szövetségi Köztársaság Mikroorganizmus Gyűjteményénél (Deutsche Sammlung für Mikroorganismen) DSM 2837 szám alatt depó náltuk. A törzs szénforrásként glükózt vagy szacharózt és nitrogénforrásként aszparagint, ammónium-szukcinátot vagy ammónium-citrátot tartalmazó agar-táptalajon tömör, erősen redőzött, fehér telepeket képez. A telepek hifákból állnak, a színük idővel vöröses árnyalatú lesz és azokban egy idő múlva erősen fénytörő vakuolák láthatók.

A hifák átmérője: 3—4 μπι. Konidiumok nem képződnek. A telep átmérője 10 napig tartó tenyésztés után: 3—4 cm, 20 napos tenyésztés után: 6—7 cm.

A találmány szerinti eljárást olyan körülmények között valósítjuk meg, melyeket rendszerint anyagcserén alapuló szintézisre szolgáló gombakultúrák tenyésztésénél szoktak alkalmazni. így az általában szokásos előkísérletekkel előbb meghatározzuk a legalkalmasabb fermentációs körülményeket, mint pl. kiválasztjuk a legmegfelelőbb táptalajt, a technikai körülményeket, mint pl. a hőmérsékletet, a levegőztetés mértékét, a pH-értéket, valamint a mikroorganizmus fejlődésének és germinációjának optimális idejét.

A fermentációs közegben szénforrásként például glükózt vagy szacharózt használhatunk. A nitrogénforrás — többek között — aszparagint, ammónium-szukcinát vagy ammónium-citrát lehet. A táptalaj tartalmaz még a növekedés serkentésére szükséges anyagokat, példának okáért élesztőkivonatot, továbbá ásványi anyagokat, így kálium-, magnézium-, kalcium-, vas- és cinkkationokat, valamint szulfát-, foszfát-, nitrát- és kloridanionokat, a szokásosan alkalmazott koncentrációkban.

A fermentációt egy vagy két lépésben lehet lefolytatni, mimellett az előfermentáláshoz alkalmazott közeg a főfermentálás közegével azonos lehet, vagy attól különbözhet. 2

A tenyésztési és a szaporítási műveletek során előnyösen alacsony koncentrációban alkalmazzuk a szénforrást (10—100 g/1), míg magánál a chanoclavin előállításánál a szénforrást előnyösen magasabb koncentrációra (100—300 g/liter) állítjuk be és szénforrásként előnyösen glükózt használunk.

A fermentáció kezdetén a közeg pH-ját előnyösen 4 és 6 közötti értékre állítjuk be. A tenyésztést kb. 10—35°C közötti hőmérsékleti határok között végezzük, a 20—30°C hőmérséklet-tartomány előnyös. A tenyésztést szigorúan aerob körülmények között valósítjuk meg, és az optimális fermentációs időt a szokásos módon, a képződött chanoclavin analitikai meghatározásával állapítjuk meg.

A fermentáció befejeződése után a keletkezett chanoclavint önmagában véve ismert módon izoláljuk. Példul úgy járunk el, hogy a fermentálással kapott sarzsot valamilyen vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel, így etil-acetáttal, metil-izobutil-ketonnal, diklór-metánnal, kloroformmal vagy tetraklór-etánnal extraháljuk, a kivonatokat bepároljuk és a kapott nyers terméket kromatografálással és/vagy kristályosítással tisztítjuk.

Az alábbi kiviteli példa a találmány szerinti eljárás tüzetesebb megmagyarázására szolgál.

Példa

Claviceps spec. DSM 2837 mikroorganizmust az alábbi összetételű táptalajon tenyészttünk:

Szacharóz (100 g/1), citromsav (10 g/1), élesztőkivonat (0,1 g/1), kálium-dihidrogén-foszfát (500 mg/1), magnézium-szulfát-heptahidrát (300 g/1) .ammónium-szulfát (69 mg/ /1), kalcium-citrát-tetrahidrát (1 g/1), vas-szulfát-heptahidrát (7 mg/1), cink-szulfát-heptahidrát (6 mg/1). A táptalaj pH-ját 5,1 értékűre állítjuk be. Ezt a nevelőtenyészetet 14—28 napon át 30°C hőmérsékletű inkubátorban tartjuk.

Kb. 1 cm²-nyi micéliumdarabot steril körülmények között egy Ultraturrax-berendezés segítségével felaprítunk 5 ml élettani konyhasóoldatban és ezzel beoltunk egy 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban levő 50 ml előfermentációs közeget, amely 5,1 pH-ra beállítva és glükózt (50 g/1), citromsavat (7,5 g/1), kálium-dihidrogén-foszfátot (500 mg/1), magnézium-szulfát-heptahidrátot (300 mg/1), ammónium-nitrátot (6 g/1), kalcium-nitrát-tetrahidrátot (1 g/1), cink-szulfát-heptahidrátot (6 mg/1), vas(II)-szulfát - heptahidrátot (7 mg/1), valamint élesztőkivonatot (100 mg/ /1) tartalmaz. Ezután az előtenyésztést 4 napon át, 24°C hőmérsékleten és 220 fordulat/ /perc sebességgel egy forgó-rázó berendezésben végezzük.

Az így kapott előtenyészet 5 ml-nyi menynviségét hozzáadjuk egy 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban levő 50 ml táptalajhoz, amely 5,1 pH-ra van beállítva és az alábbi komponensekből áll: szacharóz (200 g/1),

-2197944 citromsav (10 g/1), élesztőkivonat (0,1 g/1), kálium-dihidrogén-foszfát (500 mg/1), magnézium-szulfát-heptahidrát (300 mg/1), ammónium-szulfát (6 g/1), kalcium-nitrát-tetrahidrát (1 g/1), vas-szulfát-heptahidrát (7 mg/ /1) és cink-szulfát-heptahidrát (6 mg/1). Ezután a beoltott táptalajt 9 napon át egy forgó-rázó berendezésben, 240 fordulat/perc sebességgel rázatjuk, 24°C hőmérsékleten. Ezt követően a tenyészközeget megszűrjük és a chanoclavin-tartalmát van Urk-féle reakcióval (Mikrochim. Acta, 1959, 619—630) fotometriásan meghatározzuk. A tenyésztésből kapott szűrlet koncentrációja: 390 mg/1. További ergotalkaloidokat vékonyréteg-kromatográfiával nem lehet kimutatni.

Claims (1)

1. Eljárás chanoclavin előállítására, azzal jellemezve, hogy a DSM 2837 számon depo10 nált Claviceps spec. mikroorganizmust tenyésztjük és a képződött chanoclavint a fermentáció befejezése után izoláljuk.

   Rajz nélkül