JPS61502373A - カノクラビンの製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 カックラビンの製法 本発明は請求の範囲に記載された方法に関する。

カックラビン（Ｃｈａｎｏｃｌａｖｉｎ　）　＝　２−メチル−３−［１，３， ４，５−テトラヒドロ−４−（メチルアミン）−ペンヅ（ｃｄ）−インドール− ５−イルツー２−プロペン−１−オールは公知のように薬理学的に作用を有する 麦角アルカロイドの生合成のための前駆物質であり、特に薬理学的に作用を有す る化合物の合成に使用することができる（　Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ、　、第１７ 巻、１９７４年、第５００頁）。

真菌株クラビセブス・スペック（Ｃ１ａｖｉｃｅｐｓ　５ｐｅｃ、）が他の麦角 アルカロイドを実質的に含まずにカックラビンを高収率で培地、中に産生ずるこ とが見い出された。

この菌株クラビセゾス・スペックは野生のトレスペ（Ｔｒｅｓｐｅ　、スズメノ チャヒキ属）の変角から単離された。これはシエリング（ＳＣＨＥＲ工ＮＧ）内 部名称ＭＢＣＥ３７３１１３を有し、ドイツ微生物保存機関に０８Ｍ２８３７と いう番号で寄託されている。該菌株は炭素源としてグルコース又は蔗糖及び窒素 源としてアスパラギン、コハク酸アンモニウム又はクエン酸アンモニウムを有す る寒天培地に老化において強く光を屈折する空砲を示す菌糸からなり、密で、強 くしわのよった白色の、老化において帯赤色のコロニーを形成する。

菌糸は３〜４μｍの直径を有する。分生子は形成されない。コロニー直径は培養 期間１０日後３〜４ｃＩｒＬ及び培養期間２０日後６〜７０である。

本発明による方法は、物質代謝合成に関する真菌培地の培養に通常適用される条 件下に実施される。こうして、先ず一般に行なわれる前実験において最も有利な 発酵条件、例えば有利な培地の選択／ｉ！！、ｆｇ〆７　Ｙ　ｉｆギｌ〆。

本発明による方法は、物質代謝合成に関する真菌培地の培養に通常適用される条 件下に実施される。こうして、先ず一般（行なわれる前実験において最も有利な 発酵条件、例えば有利な培地の選択、温度、通気、−値のような技術的条件及び 微生物の発芽及び成長のための最適時間の選択、を調べる。

炭素源としては、発酵培地のために、例えばグルコース又は蔗糖を使用する。窒 素源としては、特にアスパラギン、こはく酸アンモニウム又はクエン酸アンモニ ウムを使用する。更に該培地は必要な成長物質（例えば酵母エキス）及び鉱物質 （カリウム−、マグネシウム−、カルシウム−１鉄−及び亜鉛−カチオン、並び に硫酸−１燐酸−１硝酸−アニオン）を常用の濃度で含有する。

発酵は１−又は２工程で行なわれるが、この際予培地に使用した培地と主培地と が同一であっても、又異なっていてもよい。培養及び増殖は有利に低い炭素源濃 度（１０〜１００．！？／ｌ）で行ない、カックラビン産生自体は高い炭素源濃 度（１００〜３００ｇ）で行ない、この際炭素源としては有利にグルコースを使 用する。

発酵の開始のために、培地のβ値を有利に４〜６の範囲に調節する。培養温度は 約１０〜６５℃、有利に２０〜６０℃の範囲である。培養条件は強く有気性であ る。最適な発酵時間は生産されたカックラビンの分析により常法で調べられる。

と混和しない有機溶剤、例えば酢酸エチル、メチルイソブチルケトン、ジクロル メタン、クロロホルム、又はテトラクロルエタンで抽出し、該抽出物を濃縮し、 得られた粗生成物をクロマトグラフィー及び／又は結晶化して精製することによ り単離する。

次に、実施例につき本発明による方法を詳細に説明する。

例 クラビセブス・スペック、ＤＳＭ２８３７を次の成分を含有する培地上に培養す る。

蔗糖（１００ｇ／７）、クエン酸（１０９／ｌ　）、酵母エキス（０，１９／ｌ 　）　、燐醗水素カリウム（５００Ｔｎ９／ｌ）、硫酸マグネシウム−七水和物 （３ＣＪ　０ｍ９／ｌ　）、Ｆｆｊｂ酸アンモニウム（６９ｍ９／ＪＬ硝酸力Ａ ”／ラム・四水和物（１ｇ）、硫酸鉄・七水和物（７■／ｌ）、硫酸亜鉛・、七 水和物Ｃ６ｍ９／ｌ）。培地をｐ）１５．１に調節する。該培養培地を１４〜２ ８日間３０°Ｇで培養器中に保持する。

約１０２の犬ぎさの菌糸体を無菌条件下にウルトラテユラツクス（ｕｌ、ｔｒａ ＺｕｒｒａＸ　）を用いて生理食塩溶液５ｍｌ中で破砕し、これを用いて、５０ ０ｍ１三角コルベン中のグルコース＜５０ｇ／ｌ）、クエン酸（７，５＆／１り 、燐酸二水素カリウム（５００■／ｌ）、硫酸マｌ）、硫酸亜鉛・七水和物（６ ■／ｉ＞、硫酸鉄（Ｉｔ）−七水和物（７ｍ９／ｌ）、酵母工＊、ｒ、　（１０ ０ｍ９／ｌ）を含有する、ｐＨ５，１に調節された予培地５Ｑｍｅに接穐し、振 盪器上で４日間の間２４°Ｃ及び２２０　ｒ、ｐ＋ｍ。

で培養する。

このようにして得られた予培地５ｍｌを５［］（］ｍｌ三角コルベン中の、蔗糖 ＜２００ｇ／ｌ）、クエン酸（１０９／Ｉｔ　）、酵母エキス（０，１、！９／ ｌ　）　、燐酸二水素カリウム（５００ｍｙ／ｌ　）、硫酸マグネシウム・七水 和物（３００１ｎ９／　’　）　、’ｔ−酸アンモニウム（６ｇ／ｌ　）、硝酸 カルシウム・四水和物（１９／ｌ）、ｆｍ酸鉄・七水和物（７■／ｌ）及び硫酸 亜鉛・七水和物（６■／ｌ）を含有する、ｐＨ５，１に調節した培地５０ｍ１中 に導入し、９日間２４°Ｃで振盪機上２４　Ｏｒ、ｐ、ｍ。

で振盪する。

次いで、培地を濾別し、カノクラビ／の含量をパン・ウルクの反応（ｖａｎ　Ｕ ｒｋ’５−Ｒｅａｋｚｉｏｎ　；　Ｍｉｋｒｏｃｈｈｍ。

Ａｃｚａ　、　１９５９年、６１９−６３０頁）を用いて測光法により調べる。

培地濾液の濃度は３９０ｍｇ／ｌである。薄層クロマトグラフィーにより他の麦 角アルカロイドは全く検出されなかった。

国際調査報告 一一自−＾＋ｍ１ｗ１ｍｋＰＣＴ／ＤＥ　８５１００１９１

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 微生物クラビセプス・スペツク、ＤＳＭ２８３７を培養し、発酵の終了後生じた カノクラビンを単離することを特徴とするカノクラビンの製法。