JPS61502375A - フエスツクラビンの製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 フエスツクラビンの製法 本発明は請求の範囲に記載された方法に関する。

フエスツクラビン（Ｆｅ５ｚｕｃｌａｖｉｎ　；　６　＊　８−ジメチル−エル ゴリン）は公知のように薬理学的に作用を有する麦角アルカロイドを生合成する ための前駆物質であり、特に薬理学的に作用を有するＮ１−アルキル−４゜８− ジメチル−エルゴリンを製造するために使用される（　Ｃ８５Ｒ−特許第１８９ ４８５号明細書、Ｃ，Ａ、第９６巻、１９８２年、１４３１４８Ｘに報告）。し かしながら、従来公知の方法によれば、これは酵素法において他の麦角アルカロ イドとの混合物でのみ得られる。

従って、その製造及び単離は非常に費用がかかる。

真菌株クラビ゛セプス・パスパリ（Ｃ１ａｖｉｃｅｐｓｐａｓｐａｌｉ　）が実 質的に他の麦角アルカロイドを伴なわずに高収率でフエスツクラビンを培地中に 産生するということが見い出された。この菌株タラビセプス・パスパリはアルゼ ンチンで野生するキビ属の草の種類の変角かも単離された。これは／エリング（ ＳＣＨＥＲＩＮＧ　）内部名称ＭＢｃＥ１２４２６ｅ有し、ドイツ微生物保存機 関にＤＳＭ　２８３８という番号で寄託されている。該菌株は炭素源としてグル コース又は蔗糖及びアスパラギン、コハク酸アンモニウム又は複合体窒素源、例 えばペプトンを有する寒天培地上に菌糸、分生子及び短かく、厚く、かつ強く空 胞化した細胞からなる平担な、早く成長するコロニーを形成する。

菌糸は直径４〜５μｍを有する。分生子はだ円形であり、６〜１０μｍの幅と、 １０〜２０μｍの長さを有する。コロニーは灰白色で、密であり、かつ編んだよ うに縮んだ表面及び不規則にすり切れた縁を示す。

コロニーの直径は培養期間１０日後に１〜２ｃＩｒＬ及び培養期間３５日後に４ 〜５ｃ！ｒＬである。

本発明による方法は、物質代謝合成に関する真菌培地の培養に通常適用される条 件下に実施される。こうして、先ず一般に行なわれる前実験において最も有利な 発酵条件、例えば有利な培地の選択、温度、通気、ｐｉ（値のような技術的条件 及び微生物の発芽及び成長のための最適時間の選択、を調べる。

炭素源としては、発酵培地のために、例えばグルコース又は蔗糖を使用すること ができる。窒素源としては、特にアスパラギン、こはく酸アンモニウム又は複合 物質、例えばペプトンを使用する。更に該培地は必要な成長物質（例えば酵母エ キス）及び鉱物質（カリウム−、マグネシウム−、カルシウム−１鉄−及び亜鉛 −カチオン、並びに硫酸−１燐酸−１硝酸−及び塩素−アニオン）を常用の濃度 で含有する。

発酵は１−又は２工程で行なわれるが、この際予培地に使用した培地と主培地と が同一であっても、文具なっていてもよい。

発酵の開始のために、培地のＰ＋−を値を有利に４〜６の範囲に調節する。培養 温度は約１０〜３５°Ｃ１有利に２０〜６０°Ｃの範囲である。培養条件は強く 有気性である。最適な発酵時間は生産されたフエスックラビンの分析により常法 で調べられる。

発酵が終った後、生じたフエスックラビンを公知法で、例えば発酵配合物を水と 混和しない有機溶剤、例えば酢酸エチル、メチルイソブチルケトン、ジクロルメ タン、クロロホルム又はテトラクロルエタンで抽出し、該抽出物を濃縮し、得ら れた粗生成物をクロマトグラフィー及び／又は結晶化して精製することにより単 離する。

次に、実施例につき本発明による方法を詳細に説明する。

例 クラビセブス・パスパリ、ＤＳＭ２８！＋８を次の成分を含有する培地上に培養 する： 蔗糖（１００９／ｌ）、アスパラギン（１０＆／ｌ）、酵母エキス（０，１ｇ／ ｌ　）　、燐酸二水素カリウム＜２５０ｍ９／ｌ）、硫酸マグネシウム・七水和 物（２５０ｍｇ／ｌ）、塩化カリウム（，１２０ｍｐ／Ｉり、硝酸カルシウム・ 四水和物（１ｇ）、硫酸鉄・七水和物（２０ｍｙ／ｌ　）、硫酸亜鉛・七水和物 （１５ｍｇ／ｌ　）、寒天（１Ｂ！９／ｌ　）。培地を−５，１に調節する。該 培養培地を５〜２０日間６０°Ｃで培養器中に保持する。

約１ｃｒｒＬ２の大きさの菌糸体を無菌条件下にウルトラテユラツクス（Ｕｌｔ ｒａｚｕｒｒａ、ｘ　）　ｆ用いて生理食塩溶液５ｍｅ中で破砕し、これを用い て、５０３ｍ／三角コルベン中ノｍｌｊＭ　（１００９／　ｌ　）　、ヘプ）７ （２０ｆｌ／ｌ　）、燐酸二水素カリウム（１，！ｉｌ／ｌ）、硫酸マグネシウ ム・七水和物（２５０ｍｐ／ｌ）を含有する予培地５３ｍｇに接種し、振盪器上 で４日間の間２４℃及び２２０ｒ、ｐ、ｍ、で培養する。

このようにして得られた予培地５ｍｌを５００ｍｇ三角コルベン中の、蔗糖（１ ００ｇ／ｌ　）、アスパライン（１０ｇ／ｌ　）、酵母エキス（０，１１７１３ ）　、燐酸二水素カリウム（２５０ｍ９／ｌ　）、ｆｍ酸マグネシウム・七水和 物（２５０ｍｇ／Ｉｌ）、塩化カリウム（１２０Ｉｎｇ／　７り　、硝酸カルシ ウム・四水和物（１，９／’）、硫酸鉄・七水和物＜２０ｍ９／ｌ）及び硫酸亜 鉛（１５ｍ９／（１）を含有する、ｐｉ（５，１に調節した培地５Ｑｍｌ中に導 入し、７日間２４°Ｃで振盪機上２４０　ｒ、ｐ、ｍ、で振盪する。

次いで、培地を濾別し、フエスックラビンの含量をパン・ウルクの反応（”／ａ ｎ　Ｕｒｋ’５−Ｒｅａｋｚｉ＊ｎ　；Ｍｉｋｒｏｃｈｉｍ、ＡｃＴ、ａ　、１ ９５９年、６１９〜６３０）を用いて測光法により調べる。培地濾液の濃度は２ ．２８ｙ／ｌである。

例２ 例１と同じ条件下ではあるが、予培地と主培地を相互に交換した後、９日間の培 養期間後に主培養の培地中に７エスツクラビン２．０７７！／ｌが得られる。

国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 微生物クラビセプス・パスパリ、２８３８を培養し、発酵の終了後生じたフエス ツクラビンを単離することを特徴とするフエスツクラビンの製法。