HU187803B

HU187803B - Process for producing n-bracket-vinblastinoyl-23-bracket closed-derivatives of amino acids and pharmaceutical compositions containing them

Info

Publication number: HU187803B
Application number: HU823919A
Authority: HU
Inventors: Andre B L Trueet; Kandukuri S B Rao; Jean A A Hannart
Original assignee: Omnichem Sa,Be
Priority date: 1981-12-08
Filing date: 1982-12-07
Publication date: 1986-02-28
Also published as: FR2517680A1; CH655727A5; DD205906A5; ZA828823B; GB2111055A; NZ202708A; NL8204711A; IT8268431A0; LU83822A1; ES517942A0; IL67366A0; ES8401768A1; BE895262A; PT75949B; AU564951B2; JPH0449557B2; DK161833B; GB2111055B; AT390958B; JPS58116491A

Description

A találmány tárgya eljárás új bisz-indol-alkaloidok előállítására, közelebbről a találmány L-triptofán, L-izoleucin-vinblasztin-származékokkal képezett vegyületeknek előállítására vonatkozik. Ezek a vegyületek tumorellenes szerek és ezért a találmány kiterjed a vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására is.

A vinblasztin új származékai leukémia és humán rosszindulatú daganatok kezelésére alkalmasak.

Az (I) általános képletű vázat tartalmazó vinblasztin típusú bisz-indol-alkaloidok ismert vegyületek.

Az ilyen alkaloidokhoz tartozik a vinkaleukoblasztin (3 097 137. számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás), a leurokrisztin vagy vink risztin és leurozidin (3 205 220. számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás), a vinglicinát (659 112. számú belga szabadalmi leírás) és a vindezin (813 168. számú belga szabadalmi leírás). Az utóbbi vegyületet a természetes vinblasztinból [(I) képlet, ahol R, = —OCHj^ R₂ = —COCH₃] állíthatjuk elő kémiai átalakítással és utóbbi vegyületet a Catharanthus roseus levelekből extrakcióval vonhatjuk ki.

A vinblasztin, a vinkrisztin és vindezin kereskedelmi forgalomban lévő gyógyszerek, melyeket leukémia és más szolid tumor kezelésére használnak.

Ezeknek a gyógyszereknek azonban sok kedvezőtlen mellékhatása van. A vinkrisztin neurotoxikus hatást mutat és a vinblasztin igen toxikus a vérképző szövetek tekintetében.

Ezen gyógyszerek hatásmechanizmusáról feltételezik, hogy hasonló a colchicin antimitozisos hatásmechanizmusához. Ebben az esetben ezek a gyógyszerek a tubulin polimerizációjának gátlása útján hatnak, mikrotubulusokat képeznek, majd a mitozisos fázisban a sejtciklust leállítják.

A 854 053. számú belga szabadalmi leírásban a tubulin tumorgátló bisz-indol-alkaloidokkal képezett 1: 1 arányú komplexeinek felhasználását írták le. Bizonyos esetekben a vegyületek toxicitása alacsonyabb és kemoterápiás hatása jobbnak bizonyult, mint a szabad alkaloidoké.

A vinblasztin molekula számos más kémiai módosulatát próbálták ki. Az egyik ilyen módosulat volt például a vinglicinát-szulfát [(I) általános képletű vegyület szulfátja, R, = —OCH₃; R₂ = —COCH₂N(CH₃)₂ (Cancer Research 1967, 27, 221-227)], a klinikai kipróbálás azonban azt mutatta, hogy ezen vegyület hatása nem jobb, mint a vinblasztiné vagy a vinkrisztiné.

A 813 168. számú belga szabadalmi leírásban a vindezin leírása és a vinblasztin-karboxamid-származékok leírása található. [A vindezin olyan (I) általános képletű vegyület, ahol R = —NH₂ és R₂ = H], A jelentések azt mutatják, hogy bár a vindezin vagy a 3-karboxamid-4-0-dezacetil-vinblasztin általában hasznosak, nem hatékonyak azonban az égénél indukált egér 1210 leukémia kezelésében (C. J. Bamett és társai, J. Med. Chem.

21, 88, 1978],

Meglepő módon azt találtuk, hogy a találmány szerint előállított új vegyületek jelentősen képesek késleltetni az intravénásán P 388 és L 1210 leukémiával beoltott egerek halálát.

A kísérleti P 388 tumorok ellen is meglepően jó hatást sikerült elérni a vinka-alkaloidokkal összevetve. Számos totális javulást figyeltünk meg. A vinblasztinnal és ismert analógjaival, például a vindezinnel összehasonlítva is, igen fontos és meglepő előnyöket tapasztaltunk. A megfigyelt toxicitás lényegesen alacsonyabb, mint a vindezin vagy vinkrisztin megfelelő toxicitása.

A találmány szerint előállított új vegyületeket a (II) általános képlettel jellemezhetjük - ahol a képletben

R jelentése a vinblasztin-23-oil-csoporthoz amidkötéssel kapcsolódó 1-4 szénatomos alkil-L-triptofanát vagy 1-4 szénatomos alkil-L-izoleucinát aminosavésztere,

Ri jelentése hidrogénatom vagy β-hídroxilcsoport,

R₂ jelentése hidrogénatom,

R₅ jelentése hidrogénatom, metil- vagy formilcsoport, kivéve azokat a vegyületeket, ahol egyidejűleg R₅ metilcsoportot és Rj β-hidroxilcsoportot jelent, valamint ezen vegyületek ásványi vagy szerves savakkal képezett savaddíciós sói.

Ezeket a vegyületeket úgy állíthatjuk elő, hogy egy (II) általános képletű vinblasztin-származékot - ahol R jelentése metoxicsoport - vízmentes hidrazinnal reagáltatjuk és igy egy módosított 3-karboxhidrazin-vinblasztint kapunk, melyet nitrozálószerrel reagáltatunk savas közegben és így a megfelelő 3-karboxazidot kapjuk, melyet 1-5 mólekvivalens megfelelő aminosavészterrel reagáltatunk és adott esetben az így kapott N-dezmetilvinblasztin-származékot ismert módon formilezzük.

A nitrozálószer előnyösen nátriumnitrit metanolos sav jelenlétében.

fgy például az N-(04-dezacetil-4'-dezoxi-vinblasztin-23-oil B)-etiltriptofonát előállítására 04-dezacetil-dezoxi-vinblasztin-23-savazidot 1-5 mólekvivalens etil-L-triptofonáttal reagáltatjuk.

A találmány tárgyát képezik a következő (III) általános képletű vegyületek, ahol

Rj jelentése β-hidroxilcsoport vagy hidrogénatom,

R₂ jelentése hidrogénatom, és

R₃ jelentése elágazó láncú 4 szénatomos alkilcsoport, vagy (1) képletű csoport,

Rj jelentése hidrogénatom, metilcsoport vagy formilcsoport,

R₄ jelentése egyenes láncú 1-4 szénatomos alkilcsoport, azzal a megkötéssel, hogy kizártak azok a vegyületek, ahol Rj egyidejűleg β-hidroxilcsoportot és R_s metilcsoportot jelent, —COOR4 előnyösen etoxi-karbonil vagy metoxi-karbonil-csoport vagy ezek ásványi vagy szerves

187.803 savakkal képezett addíciós sói.

* A (III) általános képletben a (3) képletű csoport izoleucinból, triptofánból származó észtert jelent.

A vegyületeket 3-demetoxi-karbonil-0-dezacetilvinblasztin-3-karboxamidnak nevezzük. Ezeket előnyösen azonban az aminosavak N-(vinblasztin23-oil)- vagy N-(vinkrisztinoil-23)-származékokként fogjuk feltüntetni.

A találmány szerint különösen aminosavak és vinkrisztin-O-4-dezacetil-vinkrisztin, deformil-0-4dezacetil-vinkrisztin és dezoxi-vinblasztin-B reakciótermékeit állítjuk elő.

Ez utóbbi vegyületet úgy kapjuk, hogy anhidrovinblasztint, melyet vinblasztin dehidratálásával kapunk, dehidrogénezünk, vagy vindolin-katarantinnal kapcsolunk össze. (Potier és társai, JACS 98, 7017 [1976]).

Ha a (III) általános képletű aminosav az R₃oldalláncban funkciós csoportokat tartalmaz, akkor a funkciós csoportokat ismert módon védőcsoportokkal láthatjuk el. A védelmet a védendő csoport természetétől függően úgy kaphatjuk, hogyha a vegyületet benzil-, t-butil-, benziloxikarbonil-, t-butoxi-trifluoracetilkarbonil- vagy tritilcsoporttaí kondenzáljuk. Használhatunk sikeresen más peptid-kémiából ismert védőcsoportot is.

A találmány szerint a vegyületeket ismert módon állíthatjuk elő a megfelelő vinblasztin-származékokból hidrazilolízissel vagy nitrozálással és aminosavészterrel történő reagáItatással, az 1. reakcióvázlat szerint.

Az eljárás első lépése előnyösen abból áll, hogy vízmentes hidrazint feleslegben vinblasztin bázis vízmentes metanollal képezett oldatához adunk Az oldatot inért atmoszférában 12 órától 12 napig terjedő ideig 30-70 °C közötti hőmérsékleten meL gítjük. Előnyösen 60 °C-on tartjuk a hőmérsékletet.

A bisz-indol-származék hidrazidját ezután víz hozzáadásával izoláljuk, diklórmetánnal extraháljuk és koncentráljuk. A vegyületet később preparatív kromatografálással semleges szilíciumdioxidon tisztítjuk. Vinkrisztin esetében a kapott termék 0-4-dezacetil-deformil-vinkrisztin-karbohidrazid.

A második lépésben a módosított vinblasztin hidrazid-csoportját acilaziddá alakítjuk. Ezt az átalakítást legjobban úgy érjük el, ha a hidrazid vizessavas metanolos elegyével készített oldatához nátrium-nitritet adunk, sávként például sósavat alkalmazunk. A reakció hőmérsékletét 0 és 5 °C között tartjuk.

A vízzel nem-elegyedő aprotikus oldószerrel, előnyösen kloroformmal vagy metilén-kloriddal történő extrahálás után a szerves fázist elkülönítjük és részben bepároljuk.

Az acilazidot általában nem izoláljuk, h^nem közvetlenül adjuk az aminosav-észterhez vagy a polipeptidhez vagy annak védett származékához, amelyet megfelelő oldószerben, például metilénkloridban feloldunk.

Az aminosavat a vinblasztin-karboxazidhoz viszonyítva körülbelül 1-5 mólekvivalens mennyiségben használjuk.

A reakcióelegyet -3 és +10’C között tartjuk 8-72 óráig, általában 15 óráig. A reakciót legjobban vékonyrétegkromatográfiával követjük nyomon. A reakció befejeződése után az oldószert csökkentett nyomáson eltávolíthatjuk és a kapott terméket szulfát-sóvá vagy más ásványi vagy szerves savból levezethető megfelelő sóvá alakíthatjuk a megfelelő sav metanolos oldatából történő kristályosítással. A találmány szerint előállított tiszta vegyületet izolálhatjuk és ismert módon kristályosítással és kromatografálással tisztíthatjuk.

A jelen találmány szerint az új bisz-indol-alkaloidokat tartalmazó gyógyászati készítményeket is állítunk elő.

A találmány szerint előállított vegyületek különösen hasznos tumorellenes tulajdonságokat mutatnak, melyeket á humán gyógyászatban hasznosíthatunk.

Hasznosak lehetnek például, ha az L 1210, P 388, glioma, limfoszarkoma és más leukémia vagy rosszindulatú tumor kezelésére alkalmazzuk. A humán gyógyászatban a Hodgkins betegség és más szolid tumor kezelésére használható, melyeket egyébként vinblasztinnal, vinkrisztinnel vagy vindezinnel lehet kezelni. A vegyületek az állatgyógyászatban is hasznosak lehetnek állati tumorok kezelésére.

Az új vegyületeket a vinblasztinhoz hasonlóan más ter ületen is alkalmazhatjuk a gyógyászatban, így például az aríritisz bizonyos formáinak kezelésér· (4 208 411. számú Amerikai Egyesült Állasok-beii szabadalmi leírás) vagy a vinkrisztinhez hasonlóan pszoriázis kezelésére (3 749 784. számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás). _____

Gyógyászati célokra a találmány szerint előállított gyógyászati készítményeket lehetőleg liofilizált formában, előnyösen parenterális, gyógyászatilag elfogadható hordozóban feloldva bázis vagy gyógyászatilag elfogadható savaddíciós só formájában adagoljuk. Savaddíciós sók között megemlíthetők a nem-toxikus és gyógyászatilag elfogadható sók, például a szervetlen savak sói, így sósavval, foszforsavval, kénsavval vagy szerves savakkal, például ecetsavval, propionsawal, borostyánkősavval, borkősawal, oxálsawal, metán-szulfonsawal és benzol-szulfonsawal képezett sók. Oldószerként fiziológiai vizet vagy más fiziológiai sóoldatot használunk megfelelően, például foszfát-pufferrel pufferezve. Általában a vegyületeket a humán gyógyászatban analóg módon alkalmazhatjuk, mint a vinka-alkaloidokat.

A hatóanyagot általában 0,01-5 mg/kg dózisban adagoljuk a használt származéktól és az előírt terápiától függően. Egy héten a dózis általában 0,1-35 mg/kg között változik.

A találmány szerint előállított készítményt 2-900 mg-os dózisokban készítjük.

187.803

A hatóanyagokat önmagukban vagy más, a hatóanyaggal szinergetikus hatást nem mutató karcinosztatikus szerekkel együtt, pl. alkilezőszerekkel, antimetabolitokkal, például metotrexáttal, 5-fluoruracillal, 6-merkaptopurinnal, 6-merkaptopurinnal, 6-tioguaninnal, citozin arabinozidokkal és antibiotikumokkal, pl. aktinomicin D-vel, daunoribicinnel, adriamicinnel és cisz-diamino-diklór-platinával alkalmazhatjuk. Az új vinblasztin-származékok különösen kombinációban előnyösek.

A találmány további részleteit a következő példákkal szemléltetjük:

1. példa

1. O-dezacetil-N-deformil-vinkrisztin-monohidrazid előállítása /

985 mg vinkrisztin bázist feloldunk 10 ml vízmentes hidrazin és 10 ml metanol elegyében. A reakcióelegyet 60 °C-on tartjuk keverés közben 22 óra hosszat. Ezután az elegyet vízzel, majd nátriumkloriddal telített vízzel kezeljük. A vizes oldatot nyolcszor extraháljuk 15 ml diklórmetánnal. Az összegyűjtött szerves fázisokat 20 ml vízzel, majd 25 ml nátriumkloriddal telített vízzel kezeljük, végül vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk. Szűrés és vákuumban történő bepárlás után 900 mg 0-4dezacetil-N-deformil-vinkrisztin-monohidrazidot kapunk, amely 90%-nál nagyobb tisztaságú.

NMR spektrum (CDC13, 360 MHz)

9,76 (s, IH), 8,37 (s, IH), 8,06 (s, IH), 3,5, 7,53 (d, IH), 7,24 és 7,07 (m, 3H), 6,82 (s, IH), 6,22 (s, 1), 5,87 (dd, lh), 5,67 (d, IH), 5,43 (s, IH), 4,03 (s, IH), 3,94 (s, 3H), 3,86 (s, IH), 3,73 (s, 3H), 3,52 (s, 3H), 2,82 (s, 2H), 2,51 (s, IH), 0,93 (20, 2 x 3H).

Tömegspektrum (elektronionizációs ütközés)

154, 294, 355, 413, 524, 555, 695, 710, 723, 736, 739, 755 (M + l) - 768, 769, 782 számított a C₄₂H₅₄N₆O₇ képlet alapján a molekulasúly 754, 942.

2. Vinkrisztin savazidjának előállítása

850 mg vinkrisztin monohidrazidot 20 ml metanolban feloldunk és az oldatot 63 ml In sósavval és 175,5 mg nátriumnitrittel kezeljük 15 percig 0 ’C-on.

Az oldatot 0 C-on tartjuk, majd nátriumhidrogénkarbonáttal semlegésitjuk 0 °C-on, ezután háromszor extraháljuk diklórmetánnal. Az összeöntött szerves fázisokat nátriumszulfát felett szárítjuk, leszűrjük és a vákuumban melegítés nélkül koncentráljuk, míg 10 ml oldatot kapunk.

3. Etil-triptofanáttal végbemenő reakció

300 mg etiltriptofanátot hozzáadunk az elegyhez 4 ’C-on keverés közben, majd a reakciót vékonyrétegkromatográfiásan ellenőrizzük. 10 nap múlva a terméket kromatográfiásan tisztítjuk (40 g szilikagél 50, eluálószer éter és ammóniával telített metanol 96 : 4 térfogatarányú elegye). 15 ml-es frakciókat gyűjtünk össze, melyeket vékonyrétegkromatográfiásan ellenőrzünk. A nem reagált aminosavat különítjük el először (30-40-es frakció). Az eluálószert változtatjuk (éter és ammóniával telített metanol 86: 14 térfogatarányú elegye), majd a reagált származékokat három frakcióban különítjük el, 44 és 45-ös frakció 30 mg; 46-53 frakciók .257 mg; 54-60 frakciók 115 mg.

A második rész N-(0,4-dezacetil-deformil-vinkrisztin-23-oil)etil-triptofanát (la), mely a vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatok szerint homogén.

Tömegspektrum: 984,970,956 (M⁺ + 1)913,912, 899 (DCJ izobután), C_5SH_6eN₆O₉ képlet alapján a mólsúly: 955,181.

UV spektrum: (CH₃OH):

maximális: 282 (4,20) - 290 (4,18) - 322 (3,96) minimális: 254 - 287 - 305

IR spektrum: (cm¹) 3400 - 2920 - 1720 - 1660

- 1610 - 1485 - 1450 - 1370 - 1345 - 1330 - 1290

- 1220 - 1165 - 1130 - 1025 - 1005 - 920 - 885 830 - 740

NMR spektrum (CDC1₃) 360 MHz (ppm) 850 (s, IH), 8,03 (s, 2H), 7,77 (d, IH), 7,60 (d, IH), 7,57 (d, IH), 6,95 (s, IH) 6,35 (s, IH), 5,89 (dd, IH), 5,78 (d, IH), 4,75 (q, IH), 3,88 (s, 3H), 3,67 (s, 3H), 1,23 (t, 3H), 0,98 (t, 3H), 0,89 (t, 3H).

N-(0,4-dezacetil-vinkrisztin-23-oil)-etil-triptofanát (lb). Az (la) deformilezett származékból 257 mg-ot újraformilezünk a 811 110. számú belga szabadalmi leírásban leírt módon. Az így kapott nyers terméket kromatográfiásan 20 cm-es 30 g-os szilikagél oszlopon tisztítjuk, majd 3 eluálószerrel eluáljuk: éter és ammóniával telített metanol 92 : 8, 88 : 12,86 : 14 arányú elegyével. A lefolyó terméket 15 ml-es frakciók formájában izoláljuk a 44-54 frakciók 34,1 mg súlyban N-újraformilezett (lb) származékot tartalmaznak.

Tömegspektrum (izobután DCI): 1011, 997, 983 (M⁺ + 1), 970, 982, 996, 998, 999, 1012 a C_5eH₆₆N₆O₁₀ képletre számítva a mólsúly 983 192

UV spektrum (CH₃OH) max: 270 (4,18)-290(4,11) lemez 280 (4,12) inflexiós pont (4,03)

IR spektrum: (KBr) sávok: 3400 - 3040 - 2960 - 2920 - 2880 - 2850

- 1735 - 1725 - 1680 - 1670 - 1665 - 1610 - 1490

- 1450 - 1225 - 745.

2. példa

N-(0,4-dezacetil-4'-dezoxi-vinblasztin-23-oil-fi)etil-triptofanát (Ic)

Az 0-dezacetil-4'-dezoxi-vinblasztin-hidrazidot a 4 203 898. számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás 24. oszlopának 51. és azt követő sorai szerint állítottuk elő.

500 mg hidrazidot 12 ml metanolban feloldunk, majd 37 ml 1 n sósavval és 104 mg nátriumnitrittel

187.803 keverjük 15 percig 0 ’C-on.

Az oldatot ezután nátriumhidrogénkarbonáttal semlegesítjük és hatszor extraháljuk 15 ml diklórmetánnal. A szerves fázisokat vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk és addig koncentráljuk, amíg 10 ml-es térfogatot nem kapunk. Az azidoldatot ezután 300 mg etiltriptofanáttal reagáltatjuk 4 ’Con keverés közben. A reakciót vékonyrétegkromatográfiásan ellenőrizzük (éter, metanol). 6 nap múlva a reakciót befejezzük és a reakcióterméket szilikagél oszlopon (18 cm, 30 g), tisztítjuk. 15 ml-es frakciónként eluáljuk.

Eluálószerként egymást követőleg a következő elegyeket használtuk:

rész ammóniával telített éter 4 rész metanol frakciók 1-49, rész ammóniával telített éter 8 rész metanol frakciók 50-57, rész ammóniával telített éter 14 rész metanol frakciók 71-90.

Az 50-57. frakciók tartalmazzák az Ic reakcióterméket (108 mg).

A szulfátot éteres kicsapással állítjuk elő (2%-os kénsav/etanol).

A szulfát UV-spektruma (CH₃OH) max: 224 (4,63) - 272 (4,32) min: 247 (4,03).

inflexiós pont: 286 (4,22) - 312 (3,72)

IR spektrum (szulfát) (KBr)

3420 - 3060 - 2960 - 2930 - 2880 - 2600 (csúcs)

- 1725 - 1660 - 1615 - 1500 - 1455 - 1430 - 1375

- 1230- 1105- 1060- 1015 - 920 - 745 cm¹.

A bázis NMR spektruma (CDCl₃ 360 MHz ppmban

9,46 s 1 H	7,53 4 1 H	4,94	q	IR
8,34 s 1 H	7,30 d 1 H	4,18	d	1H
7,92 s 1 H	6,51 s 1 H	4,05	2	2H
7,67 d 1 H	6,04 s 1 H	3,77	s	3H
7,59 d 1 H	m. s. körül	központ	5,81-nél

3,58 s RH

3,47 s ÍH

2,82 s 2H

2,77 s 3H

2,59 s ÍH

1,14 t 3H

0,95 t 3H

0,87 t 3H

A bázis tömegspektruma

DCI izobután

Μ +1⁺ 954-nél M + 14 + 1⁺ 968-nál M + 28 +1⁺982-nél ionok 153 - 155 - 157 - 171 - 172 185 186 - 199 - 213 - 223 - 227 - 255 - 257 - 279 - 281 - 283 - 285 - 349 - 398 - 459 - 516 - 569 - 952 953 - 955 - 967 - 969 - 981 - 983-nél a C_seH₆₈N₆O_g képlet alapján a mólsúly: 953,208.

N-(0,4-dezacetil-4'-dezoxi-vinblasztin-23-cil-B)izoleucinát

0,4-dezacetil-4'-dezoxi-vinblasztin-P-hidroxid 15 ml metanollal és 45 ml In sósavval készített oldatát -7’C-ra hűtjük (0,6 g, 0,79 mmól fenti vinblasztint a 4 203 898 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás 24. oszlopa, 51. sora szerint állítottuk elő). 0,15 g nátriumnitritet adunk az oldathoz és 13 percig -7’C-ig keverjük. Vizes telített nátriumhidrogénkarbonát oldatot adunk hozzá, amíg a pH = 9 értéket el nem érjük, majd a kapott oldatot négyszer extraháljuk diklórmetánnal. Az összeöntött szerves fázisokat telített vizes nátriumklorid oldattal mossuk és vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk. Az oldatot 15 ml-re koncentráljuk és 1,25 mmól etiüzoleucinátot adunk hozzá. Az elegyet négy napig hűtőszekrényben hagyjuk állni. Az oldószert csökkentett nyomáson lepároljuk, a maradékot 60 g szilíciumdioxidot tartalmazó oszlopon kormatografálva tisztítjuk. Eluálószerként éter és ammóniával telített metanol 96 : 4 arányú elegyét használjuk. Ily módon 0,25 g (35%) amorf cím szerinti terméket kapunk.

Tömegspektrum: (molekula ionizáció izobután) 880 (M⁺), 894, 836, 849, 832, 445; 391, 335 cm'¹C₅,H₆₉N₅O₈ képlet alapján mólsúly: 880,1 Op.: 180-190 ’C a_D = 104° (c = 0,154)

IR (Cl Cí₃) 3470, 2970, 1728, 1655, 1612, 1502 cm ¹

UV , .?H₃OH) 289, 268, 216 nm

NMR (CDClj) 7,9 (NH), 654 és 6,06 H₉, H₁₂,

5,81 (H₁₄-H₁₅) 4,60 (CHCo₂(NH), 3,76 CO₂CH₃, 3,58 CH₃--O, 3,33 és 2,85 (H₃A és H₃B), 2,73 (N—CHj), 0,69 (H-15).

Akut toxicitás - LD_Sfi meghatározás

A 2. példa szerinti N-(0,4-dezacetil-dezoxi-4'vinb!asztin-23-oil-P)-etil-triptofanát akut toxicitását nőnemű NMRI egéren határoztuk meg. Egyszeri injekcióval intravénásán oltottuk be a gyógyszert növekvő dózisokban. A mortalitás %-át idő függvényében határoztuk meg. A fenti vegyület (dezoxi VTrpE) LD₅₀ értékeit és a referens vegyület LD,₀értékeit az alábbiakban tüntetjük fel:

A dezoxi-vinblasztin (dezoxi VBL)-ként jelöljük:

Gyógyszer LD_j0 dezoxi-VBL 20 dezoxi-VTrpE 91,5 (azaz Ic vegyület)

A dezoxi VTrpE vegyület tehát az összehasonlító vcgyületnél kevésbé toxikus.

Ántitumor hatás

A dezoxi VRrpE szulfát sójának kemoterápiás hatását limfoblasztikus leukémia L 1210 és P 388 esetében vizsgáltuk.

3. példa

1. L 1210

187.803

Nőstény DBA₂ egereket beoltottunk 10⁴ leukémiás sejttel. A terméket intravénásán adagoltuk 50 mg/kg dózisban a beoltás után egy nappal. Az állatok mortalitását idő függvényében figyeltük ⁵meg. Az 1. táblázat a 2. példa (Ic) termékével kapott eredményeket mutatja. A tesztelt dózisnál a vegyület a vinblasztinnál hatásosabbnak mutatkozott.

Ezt a többlethatást dezoxí-vinblasztinnal összehasonlítva is igazoltuk.

2. P 388

Nőstény DBA₂ egereket intravénásán 10⁴ leuké- 15 miás sejttel oltottunk be. A termékeket intravénásán adagoltuk a beoltás utáni napon. Az állatok mortalitását az idő függvényében figyeltük meg. Az eredményeket az 1. táblázat mutatja. A dezoxi VTrpE világosan hatásosabbnak mutatkozik, mint 20 az összehasonlításra használt anyag, és így hosszú távon nagyobb túlélési %-ot mutat.

Fll.E:C,K97 M: 4 4 PTH4 4j n sta 19/4 Saab

I. táblázat

Tumor	Termék	Dózis	Állatok száma	Átlagos túlélési idő 30 nap	Az élettartam megnövekedése %	A túlélő állatok száma 30 napnál %	A túlélő állatok száma a 60. napon %-ban
L 1210	VBL	8	10	10,4	57,6	0	0
	VBL	19	10	5,8	21,6	0	0
	dezoxi VTrpE	50	10	11,2	70	0	0
P 388	dezoxiVBL	4	5	15,6	56	0	0
	dezoxi VBL	8	5	5,8	42	0	0
	dezoxt VTrpE	30	10	16,5	58,7	0	0
		40	15	30	191	67	53
		50	15	30	191	87	73,3
		55	10	30	212	80	60
		60	10	30	212	90	90

A DBA₂ egereket intravénásán 10⁴ leukémiás sejttel oltottuk be. A gyógyszereket intravénásán adagoltuk a megadott dózisokban

Claims

Szabadalmi igénypontok

1. Eljárás (II) általános képletű vegyületek ahol

R jelentése a vinblasztin-23-oilcsoporthoz amidcsoporltal kötődő L-triptofán vagy L-izoleucin 1-4 szénatomos alkilésztere,

R, jelentése hidrogénatom vagy β-hidroxilcsoport,

R₂ jelentése hidrogénatom,

R₅ jelentése hidrogénatom, metilcsoport vagy formilcsoport, kivéve, ha egyidejűleg R₅ jelentése metil- és R, jelentése β-hidroxilcsoport - vagy ásványi vagy szerves savakkal képezett addíciós sói előállítására azzal jellemezve, hogy valamely (II) általános képletű vinblasztin-származékot - ahol R jelentése me toxicsoport és R_u R₂, R_s jelentése a fenti - vízmert³³ tes hidrazinnal reagáltatunk és a kapott 3-karbo hidrazid-vinblasztint nitrozálószerrel, savas közegben reagáltatjuk és a kapott 3-karboxazidot 1-5 mólekvivalens megfelelő 1-4 szénatomos alkil-Ltriptofanáttal vagy 14 szénatomos alkil-L-izoleucináttal reagáltatjuk.

187.803
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy nitrozálószerként nátriumnitritet használunk metanolos sósav jelenlétében. ⁵
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja N-(4-dezacetil-4'-dezoxi-vinblasztin-23-oilβ(-βΙϊΐ4ΓΪρΙοΓ3ηέΐ előállítására azzal jellemezve, hogy a 4-dezacetil-4'-dezoxi-vinblasztin-23-savazidot 1-5 mólekvivalens etil-L-triptofanáttal reagál- ’θ tatjuk.
4. Eljárás gyógyászati készítmények előállítására azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerint előállított (II) általános képletű vegyületet - ahol R, R,, R₂, R₅ jelentése az 1. igénypont szerinti - gyógyászatilag elfogadható segédanyagokkal összekeverjük, és adott esetben más hatóanyagokkal - melyek a II általános képletű vegyületekkel szinergetikus hatást nem mutatnak - kombinálva gyógyászati készítménnyé alakítjuk.