HRP20050660A2 - Canine vaccines against bordetella bronchiseptica - Google Patents
Canine vaccines against bordetella bronchiseptica Download PDFInfo
- Publication number
- HRP20050660A2 HRP20050660A2 HR20050660A HRP20050660A HRP20050660A2 HR P20050660 A2 HRP20050660 A2 HR P20050660A2 HR 20050660 A HR20050660 A HR 20050660A HR P20050660 A HRP20050660 A HR P20050660A HR P20050660 A2 HRP20050660 A2 HR P20050660A2
- Authority
- HR
- Croatia
- Prior art keywords
- leptospira
- canine
- dogs
- vaccination
- bordetella bronchiseptica
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 120
- 241000588779 Bordetella bronchiseptica Species 0.000 title claims abstract description 103
- 241000282465 Canis Species 0.000 title claims abstract description 37
- 102100023408 KH domain-containing, RNA-binding, signal transduction-associated protein 1 Human genes 0.000 claims abstract description 234
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 claims abstract description 220
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 114
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 114
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 114
- 241000589902 Leptospira Species 0.000 claims abstract description 66
- 241000701931 Canine parvovirus Species 0.000 claims abstract description 46
- 241001353878 Canine parainfluenza virus Species 0.000 claims abstract description 43
- 241000701114 Canine adenovirus 2 Species 0.000 claims abstract description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 37
- 241000711506 Canine coronavirus Species 0.000 claims abstract description 35
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims abstract description 34
- 241001550390 Leptospira interrogans serovar Canicola Species 0.000 claims abstract description 23
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 21
- 241001518154 Leptospira kirschneri serovar Grippotyphosa Species 0.000 claims abstract description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 66
- 229940001442 combination vaccine Drugs 0.000 claims description 57
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 52
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 34
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 33
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 claims description 17
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 17
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 10
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 7
- 208000000655 Distemper Diseases 0.000 claims description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 35
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 34
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 20
- 241000701101 Canine adenovirus 1 Species 0.000 abstract description 4
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 abstract description 4
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 abstract description 3
- 206010024238 Leptospirosis Diseases 0.000 abstract description 3
- 206010044314 Tracheobronchitis Diseases 0.000 abstract description 3
- 101150104494 CAV1 gene Proteins 0.000 abstract 1
- 101150047856 Cav2 gene Proteins 0.000 abstract 1
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 abstract 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 abstract 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 abstract 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 abstract 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 164
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 74
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 60
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 55
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 50
- 102000054727 Serum Amyloid A Human genes 0.000 description 48
- 108700028909 Serum Amyloid A Proteins 0.000 description 48
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 45
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 42
- 206010022095 Injection Site reaction Diseases 0.000 description 42
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 42
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 39
- 230000004044 response Effects 0.000 description 35
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 32
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 32
- 241000712083 Canine morbillivirus Species 0.000 description 29
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 26
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 25
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 22
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 21
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 21
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 17
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 16
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 16
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 14
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 14
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 12
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 12
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 12
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 12
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 12
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 12
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 10
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 10
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 8
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 8
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 8
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 7
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 7
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 6
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 6
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 6
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 4
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 4
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 238000009529 body temperature measurement Methods 0.000 description 4
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 4
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 4
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 4
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 4
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 4
- 229940031346 monovalent vaccine Drugs 0.000 description 4
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 4
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 4
- 239000012134 supernatant fraction Substances 0.000 description 4
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 3
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 3
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 3
- DRHZYJAUECRAJM-DWSYSWFDSA-N (2s,3s,4s,5r,6r)-6-[[(3s,4s,4ar,6ar,6bs,8r,8ar,12as,14ar,14br)-8a-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3-[(2s,3r,4s,5r,6s)-5-[(2s,3r,4s,5r)-4-[(2s,3r,4r)-3,4-dihydroxy-4-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxyoxan-2-yl]oxy-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-5-[(3s,5s, Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@H](O[C@H]([C@@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@H]5CC(C)(C)CC[C@@]5([C@@H](C[C@@]4(C)[C@]3(C)CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)O)C(=O)O[C@@H]1O[C@H](C)[C@@H]([C@@H]([C@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@H](O)[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@](O)(CO)CO3)O)[C@H](O)CO2)O)[C@H](C)O1)O)O)OC(=O)C[C@@H](O)C[C@H](OC(=O)C[C@@H](O)C[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](CO)O1)O)[C@@H](C)CC)C(O)=O)[C@@H]1OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O DRHZYJAUECRAJM-DWSYSWFDSA-N 0.000 description 2
- GMRQFYUYWCNGIN-UHFFFAOYSA-N 1,25-Dihydroxy-vitamin D3' Natural products C1CCC2(C)C(C(CCCC(C)(C)O)C)CCC2C1=CC=C1CC(O)CC(O)C1=C GMRQFYUYWCNGIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical compound OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 241001148536 Bacteroides sp. Species 0.000 description 2
- 241000588780 Bordetella parapertussis Species 0.000 description 2
- 241000589968 Borrelia Species 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000680578 Canid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 2
- 108010039939 Cell Wall Skeleton Proteins 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229940046168 CpG oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N DDT Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1C(C(Cl)(Cl)Cl)C1=CC=C(Cl)C=C1 YVGGHNCTFXOJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N Dehydroepiandrosterone Natural products C1C(O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 241000605314 Ehrlichia Species 0.000 description 2
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 2
- 238000000729 Fisher's exact test Methods 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 2
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 2
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 2
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 description 2
- 241000589926 Leptospira interrogans serovar Hardjo Species 0.000 description 2
- 241001518163 Leptospira interrogans serovar Hardjo-bovis Species 0.000 description 2
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 description 2
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 241000893980 Microsporum canis Species 0.000 description 2
- 241000187481 Mycobacterium phlei Species 0.000 description 2
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 2
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000605894 Porphyromonas Species 0.000 description 2
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 2
- 108010073443 Ribi adjuvant Proteins 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 2
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 2
- NKVLDFAVEWLOCX-GUSKIFEASA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-3-[(2s,3r,4s,5r,6s)-5-[(2s,3r,4s,5r)-4-[(2s,3r,4r)-3,4-dihydroxy-4-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxyoxan-2-yl]oxy-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl] (4ar,5r,6as,6br,9s,10s,12ar)-10-[(2r,3r,4s, Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)CO[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](C)O[C@H]([C@@H]([C@@H]1O)O)O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1OC(=O)[C@]12CCC(C)(C)CC1C1=CCC3[C@@]([C@@]1(C[C@H]2O)C)(C)CCC1[C@]3(C)CC[C@@H]([C@@]1(C)C=O)O[C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO2)O)[C@H]1O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O)C(=O)NCCCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@](O)(CO)[C@H]1O NKVLDFAVEWLOCX-GUSKIFEASA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 2
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 2
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- WXNRAKRZUCLRBP-UHFFFAOYSA-N avridine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(CCCN(CCO)CCO)CCCCCCCCCCCCCCCCCC WXNRAKRZUCLRBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229950010555 avridine Drugs 0.000 description 2
- 241000385736 bacterium B Species 0.000 description 2
- 229960005084 calcitriol Drugs 0.000 description 2
- GMRQFYUYWCNGIN-NKMMMXOESA-N calcitriol Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@@H](CCCC(C)(C)O)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)C[C@H](O)C1=C GMRQFYUYWCNGIN-NKMMMXOESA-N 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000004520 cell wall skeleton Anatomy 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- -1 coatings Substances 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M dimethyl(dioctadecyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 description 2
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 2
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 2
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 2
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 2
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012009 microbiological test Methods 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 229940055036 mycobacterium phlei Drugs 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 2
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 229960002847 prasterone Drugs 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 2
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000009747 swallowing Effects 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 2
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N trehalose 6,6'-dimycolate Chemical compound C([C@@H]1[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COC(=O)C(CCCCCCCCCCC3C(C3)CCCCCCCCCCCCCCCCCC)C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)O2)O)O1)O)OC(=O)C(C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)CCCCCCCCCCC1CC1CCCCCCCCCCCCCCCCCC XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 239000000277 virosome Substances 0.000 description 2
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 2
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 2
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 2
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 2
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 2
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000004813 Bronchopneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010007556 Cardiac failure acute Diseases 0.000 description 1
- 241000238860 Chrysiogenetes <class> Species 0.000 description 1
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 1
- 206010015548 Euthanasia Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 101710154643 Filamentous hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 206010018367 Glomerulonephritis chronic Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 208000004467 Infectious Canine Hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 241000031168 Leptospira borgpetersenii serovar Hardjo Species 0.000 description 1
- 241001215120 Leptospirales Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000009525 Myocarditis Diseases 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 101710194807 Protective antigen Proteins 0.000 description 1
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 1
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010039897 Sedation Diseases 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940124832 acellular pertussis vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 208000026802 afebrile Diseases 0.000 description 1
- 229910021502 aluminium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003053 completely randomized design Methods 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012769 display material Substances 0.000 description 1
- 230000009843 endothelial lesion Effects 0.000 description 1
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 208000018685 gastrointestinal system disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229910001679 gibbsite Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229960005030 other vaccine in atc Drugs 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 108010021711 pertactin Proteins 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000009021 pre-vaccination Methods 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000009781 safety test method Methods 0.000 description 1
- 230000036280 sedation Effects 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 1
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- WBWWGRHZICKQGZ-HZAMXZRMSA-N taurocholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 WBWWGRHZICKQGZ-HZAMXZRMSA-N 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000012130 whole-cell lysate Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0225—Spirochetes, e.g. Treponema, Leptospira, Borrelia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/099—Bordetella
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
- A61K39/175—Canine distemper virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/23—Parvoviridae, e.g. feline panleukopenia virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/235—Adenoviridae
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/295—Polyvalent viral antigens; Mixtures of viral and bacterial antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/12—Mucolytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K2039/10—Brucella; Bordetella, e.g. Bordetella pertussis; Not used, see subgroups
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/521—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/18011—Paramyxoviridae
- C12N2760/18411—Morbillivirus, e.g. Measles virus, canine distemper
- C12N2760/18434—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Ovaj izum odnosi se na cjepiva i na postupka zaštite pasa od bolesti koju uzrokuje Bordetella bronchiseptica. Ovaj izum također se odnosi na kombinacijska cjepiva i postupci zaštite pasa od bolesti ili poremećaja koje uzrokuju pseći patogeni, primjerice zarazni traheobronhitis, kojeg uzrokuje Bordetella bronchiseptica, štenećak, kojeg uzrokuje virus štenećaka (CD), zarazni pseći hepatitis (ICH), kojeg uzrokuje pseći adenovirus tipa 1 (CAV 1), bolest dišnog sustava koju uzrokuje pseći adenovirustipa 2 (CAV 2), pseća parainfluenca, koju uzrokuje virus pseće parainfluence (CPI), enteritis, kojeg uzrokuje pseći koronavirus (CCV) i pseći parvovirus (CPV), i leptospiroza, koju uzrokuju Leptospira bratislava, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira icterohaemorrhagiae ili Leptospira pomona. Cjepiva prema ovom izumu uključuju antigen p68 bakterije Bordetella bronchiseptica.
Description
Područje izuma
Ovaj izum odnosi se na cjepiva koja sadrže Bordetella bronchiseptica antigen p68, te na njihovu upotrebu u zaštiti pasa od zaraznog traheobronhitisa ("štenarski kašalj"), kojeg uzrokuje bakterija Bordetella bronchiseptica. Ovaj izum također se odnosi na kombinacijska cjepiva koja sadrže Bordetella bronchiseptica antigen p68 i jedan ili više antigena drugih psećih patogena, poput virusa štenećaka (CD), psećeg adenovirusa tipa 2 (CAV-2), virusa pseće parainfluence (CPI), psećeg koronavirusa (CCV), psećeg parvovirusa (CPV), te bakterija Leptospira bratislava, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira icterohaemorrhagiae ili Leptospira pomona. Također su osigurani i postupci zaštite pasa od bolesti koje uzrokuju pseći patogeni uz upotrebu kombinacijskih cjepiva.
Pozadina izuma
Ovaj tržišno dostupan pseći Bordetella bronchiseptica cjepivni proizvod sačinjavaju inaktivirani, Bordetella bronchiseptica cjelostanični bakterin, bez adjuvansa. Takav cjelostanični bakterin može uzrokovati postvakcinacijske reakcije na stanični protein. Protein p68 bakterije B. bronchiseptica antigenski je sličan Proteinu vanjske membrane (OMP) bakterije B. pertussis i OMP bakterije B. parapertussis (Shahin i suradnici: "Characterization of the Protective Capacity and Immunogenicity of the 69-kD Outer Membrane Protein of Bordetella pertussis", J. Exp. Med., 171, 63-73, (1990.)). Zaštitna uloga ovog OMP-a dokazana je za miševe (Shahin i suradnici: supra; Novotny i suradnici: "Biologic and Protective Properties of the 69-kD Outer Membrane Protein of Bordetella pertussis: A Novel Formulation for a Acellular Pertussis Vaccine", J. Infect. Dis., 164, 114-22, (1991.)), ljude (He i suradnici: "Protective Role of Immunoglobulin G Antibodies to Filamentous Hemagglutinin and Pertactin of Bordetella pertussis in Bordetella parapertussis Infection", Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis., 10, 793-798, (1996.)), te svinje (Kobisch i suradnici: "Identification of a 68-Kilodalton Outer Membrane Protein as the Major Protective Antigen of Bordetella bronchiseptica by Using Specific-Pathogen-Free Piglets", Infect. Immun., 58(2), 352-357, (1990.)).
Prije ovog izuma nije bilo dokaza da Bordetella bronchiseptica antigen p68 može biti sigurno i djelotvorno cjepivo kod pasa. Prema tome, postoji potreba za razvojem Bordetella bronchiseptica cjepiva koje sadrži antigen p68 pogodan za upotrebu kod pasa. Bilo bi još pogodnije kad bi takvo Bordetella bronchiseptica p68 cjepivo bilo sigurno za primjenu na štenadi i osiguravalo dugotrajnu zaštitu.
CD je univerzalna, visoko smrtonosna virusna bolest, raznolikih manifestacija. Približno 50 % necijepljenih, neimunih pasa zaraženih virusom CD razvija kliničke znakove, a približno 90 % tih pasa ugiba.
Zarazni pseći hepatitis, odnosno ICH, kojeg uzrokuje pseći adenovirus tipa 1 (CAV-1), je univerzalna, ponekad smrtonosna, virusna bolest pasa, koju karakteriziraju jetrene i generalizirane lezije endotela. CAV-2 uzrokuje bolest dišnog sustava, koja, u teškim slučajevima, može uključivati pneumoniju i bronhopneumoniju.
CPI je česta virusna bolest gornjeg dišnog sustava. Nekomplicirani CPI može biti blag ili supklinički, dok znakovi postaju teži kod popratne zaraze drugim patogenima dišnog sustava.
Zaraza CPV-om uzrokuje bolest probavnog sustava, koju karakterizira iznenadan početak povraćanja i proljeva, često krvavog. Kliničke znakove često prati leukopenija. Mogu oboljeti podložni psi bilo koje starosti, no smrtnost je najveća kod štenadi. Kod štenadi stare 4-12 tjedana CPV može pokatkad uzrokovati miokarditis, koji može dovesti do akutne srčane insuficijencije nakon kratki i nezamijećene bolesti. Nakon zaraze mnogi psi su otporni na bolest godinu dana ili dulje. Slično tome, seropozitivne kuje mogu prenijeti na svoju štenad protutijela na CPV, koja mogu ometati aktivno imuniziranje štenadi stare do 16 tjedana.
CCV također uzrokuje bolest probavnog sustava kod podložnih pasa svih starosnih dobi širom svijeta. Visoko zarazan, virus se primarno prenosi izravnim dodirom sa zaraznom stolicom, te može uzrokovati klinički enteritis unutar 1-4 dana nakon izlaganja. Težinu bolesti može pojačati popratna zaraza drugim uzročnicima. Primarni znakovi zaraze CCV-om uključuju mršavljenje, povraćanje i proljev. Učestalost povraćanja obično se smanjuje unutar 1 ili 2 dana nakon početka proljeva, no proljev se može zadržati tijekom zaraze, a stolica može povremeno sadržavati tragove krvi. Kod zaraze CCV-om većina pasa je afebrilna, a leukopeniju se ne opaža u nekompliciranim slučajevima.
Leptospiroza se pojavljuje kod pasa svih starosti, uz širok raspon kliničkih znakova, a akutnu zarazu obično prati kronični nefritis. Zarazu bakterijama L. canicola i L. icterohaemorrhagiae ne može se razlikovati klinički.
Prije ovog izuma nije bilo djelotvornih kombinacijskih cjepiva koja štite pse od bakterije Bordetella bronchiseptica i jednog ili više drugih psećih patogena, poput virusa CD, CAV-2, virusa CPI, CPV, CCV, te Leptospira vrsta, poput bakterija L. bratislava, L. canicola, L. grippotyphosa, L. icterohaemorrhagiae i L. pomona. Problem razvoja kombinacijskih cjepiva uključuje ometanje djelotvornosti, upravo nemogućnost jednog ili više antigena u kombinacijskom pripravku da održi ili da postigne djelotvornost zbog prisutnosti drugih antigena u pripravku. Vjeruje se da je to zbog ometanja od strane antigena u pripravku primijenjenog na domaćinu, npr. psu, kod imunološkog, antigenskog, odgovora protutijelom ili zaštitnog odgovora koje takav antigen potiče u domaćinu zbog drugih antigena prisutnih u pripravku. Međutim, za druge domaćine, poput mačaka, kombinacijska cjepiva su poznata. Vjeruje se da do ometanja djelotvornosti kod pasa dolazi zbog izvjesne osobitosti psećeg biološkog sustava, ili zbog reakcije antigena s psećim biološkim sustavom.
Prema tome, postoji potreba za razvojem kombinacijskog cjepiva, pogodnog za primjenu na psima, od bakterije Bordetella bronchiseptica i jednog ili više drugih psećih patogena, koji ne pokazuju ometanje djelotvornosti kod pasa. Bilo bi još pogodnije kad bi takvo kombinacijsko cjepivo bilo sigurno za primjenu na štenadi i osiguravalo dugotrajnu zaštitu.
Bit izuma
Ovaj izum osigurava cjepiva i postupke zaštite pasa od bolesti koje uzrokuju pseći patogeni.
U jednoj izvedbi ovaj izum osigurava p68 cjepiva pogodna za primjenu na psima i sposobna zaštititi pse od bolesti koju uzrokuje bakterija Bordetella bronchiseptica. Takva cjepiva prema ovom izumu sadrže Bordetella bronchiseptica antigen p68 i veterinarski prihvatljivu podlogu, poput adjuvansa.
U sljedećoj izvedbi ovaj izum osigurava postupke zaštite pasa od bolesti koju uzrokuje bakterija Bordetella bronchiseptica primjenom na psu cjepiva koje sadrži Bordetella bronchiseptica antigen p68 i veterinarski prihvatljivu podlogu, poput adjuvansa.
U još daljnjoj izvedbi ovaj izum osigurava kombinacijska cjepiva pogodna za primjenu na psima. Kombinacijska cjepiva prema ovom izumu sadrže Bordetella bronchiseptica antigen p68 u kombinaciji s najmanje još jednim antigenom od drugih psećih patogena, koji može potaknuti zaštitni imunosni odgovor kod pasa protiv bolesti koju uzrokuju jedan ili više takvih drugih patogena. Takve druge patogene može se birati između virusa štenećaka (CD), pseće adenovirusa tipa 2 (CAV-2), virusa pseće parainfluence (CPI), psećeg parvovirusa (CPV), psećeg koronavirusa (CCV), psećeg herpesvirusa, virusa bjesnoće, te patogena Leptospira bratislava, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira pomona, Leptospira hardjo-bovis, Porphyromonas spp., Bacteroides spp., Leishmania spp., Borrelia spp., Ehrlichia spp., Mycoplasma spp., te Microsporum canis.
Poželjno kombinacijsko cjepivo prema ovom izumu sadrži atenuirane sojeve virusa štenećaka (CD), psećeg adenovirusa tipa 2 (CAV-2), virusa pseće parainfluence (CPI), te psećeg parvovirusa (CPV); inaktivirani pripravak soja psećeg koronavirusa (CCV); te Bordetella bronchiseptica antigen p68.
Sljedeće poželjno kombinacijsko cjepivo prema ovom izumu sadrži atenuirane sojeve virusa štenećaka (CD), psećeg adenovirusa tipa 2 (CAV-2), virusa pseće parainfluence (CPI), te psećeg parvovirusa (CPV); inaktivirani pripravak soja psećeg koronavirusa (CCV); Bordetella bronchiseptica protein p68, te inaktivirani stanični pripravak od pet Leptospira serovara (Leptospira bratislava, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira icterohaemorrhagiae, te Leptospira pomona).
Još poželjnije kombinacijsko cjepivo prema ovom izumu sadrži atenuirane sojeve virusa CD, CAV-2, virusa CPI, soj CPV; te Bordetella bronchiseptica antigen p68.
Sljedeće poželjno kombinacijsko cjepivo prema ovom izumu sadrži atenuirane sojeve virusa CD, CAV-2, virusa CPI, soj CPV; Bordetella bronchiseptica antigen p68; te inaktivirani stanični pripravak od bakterija Leptospira canicola i Leptospira icterohaemorrhagiae.
Još poželjnije kombinacijsko cjepivo prema ovom izumu sadrži atenuirane sojeve virusa CD, CAV-2, virus CPI, soj CPV, Bordetella bronchiseptica antigen p68, te inaktivirani stanični pripravak od pet Leptospira serovara (Leptospira bratislava, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira icterohaemorrhagiae, te Leptospira pomona).
Sljedeće poželjno kombinacijsko cjepivo sadrži Bordetella bronchiseptica antigen p68 i atenuirani virus CPI.
Još poželjnije kombinacijsko cjepivo sadrži Bordetella bronchiseptica antigen p68, atenuirani virus CPI, te inaktivirani stanični pripravak od bakterija Leptospira canicola i Leptospira icterohaemorrhagiae.
Ovaj izum također osigurava postupke zaštite pasa od bolesti koju uzrokuje pseći patogen primjenom na psu kombinacijskog cjepiva prema ovom izumu.
Kratak opis crteža
Slika 1. Sažeti prikaz geometrijskih sredina konačnih titara ELISA-e p68 kod necijepljenih i pasa cijepljenih Bordetella antigen p68om (15 µg/doza) izlaganih aerosolu s bakterijom Bordetella bronchiseptica.
Slika 2. Sažeti prikaz titara serumskog amiloida A kod pasa nakon izlaganja aerosolu s bakterijom Bordetella bronchiseptica.
Slika 3. Sažeti prikaz geometrijskih sredina konačnih titara ELISA-e p68 kod necijepljenih i pasa cijepljenih Bordetella antigen p68om nakon cijepljenja i izlaganja aerosolu s bakterijom Bordetella bronchiseptica.
Slika 4. Sažeti prikaz titara serumskog amiloida A kod pasa nakon izlaganja aerosolu s bakterijom Bordetella bronchiseptica.
Slika 5. Western blot koji prikazuje reaktivnost p68 monoklonskog protutijela Bord 2-7 na p68 cjelostanični lizat.
Detaljan opis izuma
U jednoj izvedbi ovaj izum osigurava monovalentna cjepiva pogodna za primjenu na psima koja mogu štititi pse od bolesti koju uzrokuje bakterija Bordetella bronchiseptica. Monovalentna cjepiva prema ovom izumu sadrže rekombinantno dobiveni Bordetella bronchiseptica antigen p68 i veterinarski prihvatljivu podlogu, poput adjuvansa.
U sljedećoj izvedbi ovaj izum osigurava postupke zaštite pasa od bolesti koju uzrokuje bakterija Bordetella bronchiseptica primjenom na psu monovalentnog cjepiva koje sadrži rekombinantno dobiveni Bordetella bronchiseptica antigen p68 i veterinarski prihvatljiva podloga, poput adjuvansa.
U još daljnjoj izvedbi ovaj izum osigurava kombinacijska cjepiva pogodna za primjenu na psima. Kombinacijska cjepiva prema ovom izumu sadrže rekombinantno dobiveni Bordetella bronchiseptica antigen p68 u kombinaciji s najmanje još jednim antigenom koji može potaknuti zaštitni imunosni odgovor kod pasa protiv bolesti koju uzrokuje takav drugi antigen.
Poželjno kombinacijsko cjepivo prema ovom izumu sadrži atenuirane sojeve virusa štenećaka (CD), psećeg adenovirusa tipa 2 (CAV-2), virusa pseće parainfluence (CPI), te psećeg parvovirusa (CPV); inaktivirani pripravak soja psećeg koronavirusa (CCV); te Bordetella bronchiseptica protein p68.
Sljedeće poželjno kombinacijsko cjepivo prema ovom izumu sadrži atenuirane sojeve virusa štenećaka (CD), psećeg adenovirusa tipa 2 (CAV-2), virusa pseće parainfluence (CPI), te psećeg parvovirusa (CPV); inaktivirani pripravak soja psećeg koronavirusa (CCV); Bordetella bronchiseptica protein p68, te pripravak od pet Leptospira serovara (Leptospira bratislava, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira icterohaemorrhagiae, te Leptospira pomona).
Još poželjnije kombinacijsko cjepivo prema ovom izumu sadrži atenuirane sojeve virusa CD, CAV-2, virusa CPI, soj CPV; te Bordetella bronchiseptica protein p68.
Sljedeće poželjno kombinacijsko cjepivo prema ovom izumu sadrži atenuirane sojeve virusa CD, CAV-2, virusa CPI, soj CPV; Bordetella bronchiseptica protein p68; te pripravak od bakterija Leptospira canicola i Leptospira icterohaemorrhagiae.
Još poželjnije kombinacijsko cjepivo prema ovom izumu sadrži atenuirane sojeve virusa CD, CAV-2, virus CPI, soj CPV, te pripravak od pet Leptospira serovara (Leptospira bratislava, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira icterohaemorrhagiae, te Leptospira pomona).
Ovaj izum također osigurava postupke zaštite pasa od bolesti koju uzrokuje pseći patogen primjenom na psu kombinacijskog cjepiva prema ovom izumu.
Radi jasnoće otkrića, a nikako kao ograničenje, detaljni opis izuma je podijeljen u sljedeće podpoglavlja koji opisuju ili ilustriraju izvjesne karakteristike, izvedbe ili primjene ovog izuma.
Definicije i kratice
Termin "zaštita psa od bolesti koju uzrokuje pseći patogen", kao što se upotrebljava u ovoj specifikaciji, znači smanjenje ili otklanjanje rizika od zaraze patogenom, ublažavanje ili olakšavanje simptoma zaraze, odnosno ubrzavanje oporavka od zaraze. Zaštitu se postiže ako dolazi do smanjenja virusnog ili bakterijskog opterećenja, smanjenja širenja virusa ili bakterija, smanjenja incidencije ili trajanja zaraza, smanjenja razine serumskih proteina u akutnoj fazi, smanjenja rektalne temperature i/ili povećanog unosa hrane i/ili rasta, kao primjer.
Termin "antigen p68" odnosi se na protein molekulske težine 68 kDa, što je određeno elektroforezom na SDS poliakrilamidnom gelu, kojeg prepoznaje p68-specifično monoklonsko protutijelo Bord 2-7 (ATCC#), a ima aminokiselinski slijed kao što je iznijeto u SEQ ID NO: 1, ili aminokiselinski slijed koji je uglavnom istovjetan s SEQ ID NO: 1.
Pod "uglavnom istovjetan" misli se na stupanj identiteta slijeda od najmanje približno 90 %, po mogućnosti najmanje približno 95 %, ili poželjnije, najmanje približno 98 %.
Termin "monovalentno cjepivo", kao što se upotrebljava u ovoj specifikaciji, odnosi se na cjepivo s jednom osnovnom antigenskom komponentom. Kao primjer, p68 monovalentno cjepivo sadrži Bordetella bronchiseptica antigen p68 kao osnovnu antigensku komponentu cjepiva, te može štititi životinju na kojoj je cjepivo primijenjeno od bolesti koje uzrokuje bakterija Bordetella bronchiseptica.
Termin "kombinacijsko cjepivo" odnosi se na bivalentnu ili multivalentnu kombinaciju antigena koji mogu potaknuti zaštitni imunosni odgovor kod pasa. Zaštitni učinci kombinacijskog cjepiva protiv jednog ili više patogena normalno se postiže poticanjem kod životinjskog subjekta imunosnog odgovora, bilo staničnog ili humoralnog imunosnog odgovora, ili kombinaciju oba.
Pod "imunogenim" misli se na sposobnost pripravka da potakne imunosni odgovor kod pasa protiv određenog patogena. Imunosni odgovor može biti stanični imunosni odgovor, gdje primarno posreduju citotoksične T-stanice i T-stanice koje proizvode citokine, ili humoralni imunosni odgovor, gdje primarno posreduju pomoćničke T-stanice, koje s druge strane aktiviraju B-stanice, što dovodi do proizvodnje protutijela.
Termin "terapijski djelotvorna količina" ili "djelotvorna količina" odnosi se na količinu monovalentnog ili kombinacijskog cjepiva, dovoljnu za postizanje zaštitnog imunosnog odgovora kod psa na kojem je primijenjena. Imunosni odgovor može se, bez ograničenja, sastojati od induciranja stanične i/ili humoralne imunost. Količina cjepiva koja je terapijski djelotvorna može ovisiti o određenom antigenu upotrijebljenom u cjepivu, dobi i stanju psa, i/ili stupnju zaraze, a može je odrediti veterinar.
p68 cjepiva
Ovaj izum po prvi put pokazuje da cjepivni pripravak koji sadrži Bordetella bronchiseptica antigen p68 djelotvorno štiti pse od bolesti koju uzrokuje bakterija Bordetella bronchiseptica. Cjepivni pripravak prema ovom izumu ne uzrokuje značajne postvakcinacijske reakcije, siguran je za primjenu na štenadi, te inducira zaštitnu imunost kod pasa koja traje kroz dulji vremenski period.
Prema tome, jedna izvedba prema ovom izumu odnosi se na cjepivni pripravak koji sadrži Bordetella bronchiseptica antigen p68 (ili "p68 cjepivo"), koji je pogodan za primjenu na psima, te može štititi pse od bolesti koju uzrokuje bakterija Bordetella bronchiseptica, npr. zarazni traheobronhitis ("štenarski kašalj").
U svrhu prema ovom izumu termin "antigen p68" odnosi se na protein molekulske težine 68 kDa, što je određeno elektroforezom na SDS poliakrilamidnom gelu, kojeg prepoznaje p68-specifično monoklonsko protutijelo Bord 2-7 (ATCC#), a ima aminokiselinski slijed kao što je iznijeto u SEQ ID NO: 1 ili aminokiselinski slijed koji je uglavnom istovjetan s SEQ ID NO: 1. Pod "uglavnom istovjetan" misli se na stupanj identiteta slijeda od najmanje približno 90 %, po mogućnosti najmanje približno 95 %, ili poželjnije, najmanje približno 98 %. Primjer antigena p68 s aminokiselinskim slijedom koji je uglavnom istovjetan s SEQ ID NO: 1 je antigen p68, opisan u dokumentu WO 92/17587, koji je iznijet u SEQ ID NO: 3. p68 specifično monoklonsko protutijelo prema ovom izumu prepoznaje nativne proteine p68, rekombinantne proteine p68 i proteine p68 na površini bakterija, kao primjer.
Prema ovom izumu antigeni p68 pogodni za upotrebu u ovom izumu uključuju i nativne proteine p68 (tj. prirodne proteine p68, pročišćene iz bakterije Bordetella bronchiseptica) i rekombinantno dobivene proteine p68.
Pročišćavanje nativnog p68 iz bakterije Bordetella bronchiseptica opisano je, npr., u Montaraz i suradnici: Infection and Immunity, 47, 744-751, (1985.), a također je ilustrirano u primjerima iznijetim niže. Rekombinantnu proizvodnju p68 može se postići bilo kojom tehnikom molekulskog kloniranja i rekombinantne ekspresije poznatom stručnjacima u ovom području tehnike. Kao primjer, molekulu nukleinske kiseline koja kodira p68 može se ubaciti u odgovarajuću stanicu-domaćina, poput bakterije, stanice kvasca (npr. stanica kvasca Pichia), stanice kukca ili stanica sisavca (npr. CHO stanica). Molekulu nukleinske kiseline koja kodira p68 može se staviti u operabilnu vezu s promotorom koji može vršiti ekspresiju antigena p68 u stanica-domaćinu. p68, kojeg eksprimira stanica-domaćin, kako se pročisti rutinskim tehnikama pročišćavanje proteina.
U poželjnoj izvedbi prema ovom izumu nukleotidni slijed kao što je iznijeto u SEQ ID NO: 2 kodira antigen p68 koji ima aminokiselinski slijed SEQ ID NO: 1, klonira se u ekspresijski vektor, te stavi u operabilnu vezu s temperaturno osjetljivim promotorom. Ekspresijski vektor ubacuje se u bakteriju Escherichia coli, a antigen p68 se eksprimira indukcijom grijanjem. Stanice se lizira, a inkluzijska tijela u kojima se nakuplja antigen p68 se odvoji centrifugiranjem. Rekombinantni p68 u inkluzijskim tijelima solubilizira se SDS-om ili drugim solubilizacijskim sredstvima poznatim u struci, poput uree, gvanidin-hidroklorida, natrijevog kolata, taurokolata, te natrijevog deoksikolata. Prema ovom izumu pročišćeni nativni ili rekombinantni protein p68 se kombinira s veterinarski prihvatljivom podlogom kako bi se dobilo p68 cjepivni pripravak.
Termin "veterinarski prihvatljiva podloga" uključuje bilo koje i sva otapala, disperzijske medije, obloge, adjuvanse, stabilizacijska sredstva, razrjeđivače, konzervanse, antibakterijska i antifungalna sredstva, izotonična sredstva, sredstva za odgađanje adsorpcije i slično. Razrjeđivači mogu sadržavati vodu, fiziološku otopinu, dekstrozu, etanol, glicerol i slično. Izotonična sredstva mogu, između ostalog, sadržavati natrijev klorid, dekstrozu, manitol, sorbitol, te laktozu. Sredstva za stabilizaciju uključuju, između ostalog, albumin.
Adjuvansi pogodni za upotrebu prema ovom izumu uključuju, no ne ograničuju se na nekoliko klasa adjuvansa, poput: mineralnih soli, npr. alaun, aluminijev hidroksid, aluminijev fosfat i kalcijev fosfat; površinski aktivna sredstva i mikročestice, npr. neionske blok-polimerne surfaktante (npr. kolesterol), virosome, saponine (npr. Quil A, QS-21 i GPI-0100), proteosome, imunostimulacijske komplekse, kohleate, kvaterne amine (dimetildioktadecilamonijev bromid (DDA)), avridin, vitamin A, vitamin E; bakterijske produkte, poput RIBI sustava adjuvansa (Ribi Inc.), skeleta stanične stijenke Mycobacterium phlei (Detox?), muramildipeptida (MDP) i tripeptida (MTP), monofosforillipida A, Bacillus Calmete-Guérin (BCG), toplinski osjetljivih E. coli enterotoksina, kolera-toksina, trehaloznog dimikolata, CpG oligodeoksinukleotida; citokine i hormone, npr. interleukine (IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-15, IL-18), čimbenik stimulacije kolonija granulocita i makrofaga, dehidroepiandrosteron, 1,25-dihidroksi-vitamin D3; polianione, npr. dekstran; poliakrile (npr. polimetil-metakrilat, Carbopol 934P); podloge npr. tetanusni toksoid, difterijski toksoid, B podjedinicu kolera-toksina, mutantni toplinski osjetljivi enterotoksin enterotoksinoigene E. coli (rmLT), proteine toplinskog šoka; emulzije ulje-u-vodi npr., AMPHIGEN? (Hydronics, USA); te emulzije voda-u-ulju, poput, npr., Freundovog kompletnog i nekompletnog adjuvansa.
Poželjni adjuvansi za upotrebu u cjepivima prema ovom izumu sadrže Quil A i kolesterol.
Antigen p68 i veterinarski prihvatljivu podlogu može se kombinirati na bilo koji pogodan i praktičan način kako bi se dobilo cjepivni pripravak, npr. miješanjem, otapanjem, suspendiranjem, emulgiranjem, inkapsulacijom, apsorpcijom i slično, te ih se može oblikovati u formulacije, poput tableta, kapsula, prašaka, sirupa, te suspenzija pogodnih za injekcije, usatke, inhalacije, pripravke za gutanje i slično. Po mogućnosti, cjepivo se tako formulira da ga se može primijeniti na psima injekcijom u dozi od približno 0,1 do 5 ml, ili po mogućnosti približno 0,5 do 2,5 ml, ili još poželjnije, u dozi od približno 1 ml. Kada je to pogodno, farmaceutske bi pripravke prema ovom izumu trebalo sterilizirati dobro poznatim postupcima.
Količina p68 u cjepivima trebala bi djelotvorno imunizirati, a općenito je u rasponu od 0,5-1000 µg po dozi. Po mogućnosti, količina p68 je u rasponu od 1-260 µg po dozi. Poželjnije, količina p68 je u rasponu od 10-100 µg po dozi. Još poželjnije, količina p68 je približno 15 to 25 µg po dozi.
Količina adjuvansa pogodna za upotrebu u cjepivima ovisi o prirodi upotrijebljenog adjuvansa. Kao primjer, kada se kao adjuvans upotrebljava Quil A i kolesterol, Quil A općenito dolazi u količini od približno 1-1000 µg po dozi, po mogućnosti 30-100 µg po dozi, poželjnije, približno 50-75 µg po dozi; a kolesterol općenito dolazi u količini od približno 1-1000 µg po dozi, po mogućnosti približno 30-100 µg po dozi, poželjnije, približno 50-75 µg po dozi.
U sljedećoj izvedbi ovaj izum osigurava postupke zaštite pasa od bolesti koju uzrokuje bakterija Bordetella bronchiseptica primjenom na psu p68 cjepivnog pripravka, kao što je opisano gore, u ovoj specifikaciji. Prema ovom izumu, p68 cjepivni pripravak osigurava pse dugotrajnom imunošću najmanje približno 4 mjeseca, po mogućnosti najmanje približno 6 mjeseci, ili još poželjnije, približno godinu dana,
Prema ovom izumu, p68 cjepivo se može primijeniti na psu na bilo koji poznat način, uključujući oralno, intranazalno, mukozalno, topikalno, transdermalno, te parenteralno (npr. intravenski, intraperitonealno, intradermalno, supkutano ili intramuskularno). Primjenu se također može izvršiti sredstvima za unos bez igle. Primjena može se postići kombinacijom načina, npr. najprije parentalnom primjenom, a zatim primjenom na sluznicu.
Poželjni načini primjene uključuju supkutanu i intramuskularnu primjenu.
p68 cjepivni pripravak prema ovom izumu može se primijeniti na psima starim najmanje 6 tjedana, po mogućnosti starim najmanje 7 tjedana, poželjnije, starim najmanje 8 ili 9 tjedana. Pse se može cijepiti jednom dozom s više doza p68 cjepiva. Po mogućnosti, 2 doze p68 cjepiva primjenjuje se na psima u intervalu od približno 2-4 tjedna, po mogućnosti približno 3 tjedna, između dvije primjene. Ako su psi cijepljeni prije dobi od 4 mjeseca, preporučuje se da ih se precijepi jednom dozom kada navrše 4 mjeseca starosti, zbog toga što majčinska protutijela mogu ometati razvoj odgovarajućeg imunosnog odgovora kod štenadi mlađe 4 od mjeseca starosti. Pse se također može precjepljivati godišnje, jednom dozom. U slučajevima ako je vjerojatno izlaganje bakteriji B. bronchiseptica, primjerice u slučajevima parenja, držanja u skloništu, te izložaba, može se dati dodatni buster unutar godine dana, ili po mogućnosti 6 mjeseci, od takvih događaja.
p68 kombinacijska cjepiva
U sljedećoj izvedbi ovaj izum osigurava kombinacijska cjepiva i postupke zaštite pasa od bakterije Bordetella bronchiseptica i jednog ili više drugih psećih patogena primjenom takvih kombinacijskih cjepiva. Kombinacijski cjepivni pripravci prema ovom izumu ne pokazuju ometanje djelotvornosti i sigurni su za primjenu na štenadi.
Kombinacijska cjepiva prema ovom izumu sadrže Bordetella bronchiseptica antigen p68, kojeg se može načiniti kao što je opisano gore, u ovoj specifikaciji, u kombinaciji s najmanje jednim antigenom od drugih psećih patogena koji može potaknuti zaštitni imunosni odgovor kod pasa protiv bolesti koju uzrokuju takvi drugi patogeni.
Takvi drugi patogeni uključuju, no ne ograničuju se na virus štenećaka (CD), pseći adenovirus tipa 2 (CAV-2), virus pseće parainfluence (CPI), pseći parvovirus (CPV), pseći koronavirus (CCV), pseći herpesvirus, te virus bjesnoće. Antigeni od tih patogena za upotrebu u cjepivnim pripravcima prema ovom izumu mogu biti u obliku modificiranog živog virusnog pripravka ili inaktiviranog virusnog pripravka. Postupci atenuiranja virulentnih sojeva ovih virusa i postupci priprave inaktiviranog virusnog pripravka poznati su u struci i opisani su u, npr. US patentima br. 4,567,042 i 4,567,043.
Drugi patogeni također uključuju bakterije Leptospira bratislava, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira icterohaemorrhagiae, Leptospira pomona, Leptospira hardjo-bovis, Porphyromonas spp., Bacteroides spp., Leishmania spp., Borrelia spp., Ehrlichia spp., Mycoplasma spp., te Microsporum canis. Antigeni od tih patogena za upotrebu u cjepivnim pripravcima prema ovom izumu mogu biti u obliku inaktiviranog cjelostaničnog ili parcijalnog pripravka, uz postupke dobro poznate u struci. Kao primjer, postupci priprave inaktiviranog cjelostaničnog ili parcijalnog Leptospira staničnog pripravka poznati su u struci i opisani su u, npr. K.-T. Yan: "Aspects of Immunity to Leptospira borgpetersenii serovar hardjo", Doktorat, Dodatak I, (1996.). Faculty of Agriculture and Food Science, The Queen's University of Belfast; Mackintosh i suradnici: "The use of a hardjo-pomona vaccine to prevent leptospiruria in cattle exposed to natural challenge with Leptospira interrogans serovar hardjo", New Zealand Vet. J., 28, 174-177, (1980.); Bolin i suradnici: "Effect of vaccination with a pentavalent leptospiral vaccine on Leptospira interrogans serovar hardjo type hardjo-bovis infection of pregnant cattle", Am. J. Vet. Res., 50, 161-165, (1989.).
Kombinacijska cjepiva prema ovom izumu općenito sadrže veterinarski prihvatljivu podlogu. Kao što je opisano gore, u ovoj specifikaciji, veterinarski prihvatljiva podloga sadrži bilo koje i sva otapala, disperzijske medije, obloge, adjuvanse, stabilizacijska sredstva, razrjeđivače, konzervanse, antibakterijska i antifungalna sredstva, izotonična sredstva, sredstva za odgađanje adsorpcije i slično. Razrjeđivači mogu sadržavati vodu, fiziološku otopinu, dekstrozu, etanol, glicerol i slično. Izotonična sredstva mogu, između ostalog, sadržavati natrijev klorid, dekstrozu, manitol, sorbitol, te laktozu. Sredstva za stabilizaciju uključuju, između ostalog, albumin.
Adjuvansi pogodni za upotrebu prema ovom izumu uključuju, no ne ograničuju se na nekoliko klasa adjuvansa, poput: mineralnih soli, npr. alaun, aluminijev hidroksid, aluminijev fosfat i kalcijev fosfat; površinski aktivna sredstva i mikročestice, npr. neionske blok-polimerne surfaktante (npr. kolesterol), virosome, saponine (npr. Quil A, QS-21 i GPI-0100), proteosome, imunostimulacijske komplekse, kohleate, kvaterne amine (dimetildioktadecilamonijev bromid (DDA)), avridin, vitamin A, vitamin E; bakterijske produkte, poput RIBI sustava adjuvansa (Ribi Inc.), skeleta stanične stijenke Mycobacterium phlei (Detox?), muramildipeptida (MDP) i tripeptida (MTP), monofosforillipida A, Bacillus Calmete-Guérin, toplinski osjetljivih E. coli enterotoksina, kolera-toksina, trehaloznog dimikolata, CpG oligodeoksinukleotida; citokine i hormone, npr. interleukine (IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-15, IL-18), čimbenik stimulacije kolonija granulocita i makrofaga, dehidroepiandrosteron, 1,25-dihidroksi-vitamin D3; polianione, npr. dekstran; poliakrile (npr. polimetil-metakrilat, Carbopol 934P); podloge npr. tetanusni toksoid, difterijski toksoid, B podjedinicu kolera-toksina, mutantni toplinski osjetljivi enterotoksin enterotoksinoigene E. coli (rmLT), proteine toplinskog šoka; emulzije ulje-u-vodi npr., AMPHIGEN? (Hydronics, USA); te emulzije voda-u-ulju, poput, npr., Freundovog kompletnog i nekompletnog adjuvansa.
Poželjni adjuvansi za upotrebu u kombinacijskim cjepivima prema ovom izumu uključuju Quil A i kolesterol.
Antigen p68, jedan ili više antigena od drugih patogena, te veterinarski prihvatljivu podlogu može se kombinirati na bilo koji pogodan i praktičan način kako bi se načinilo kombinacijski cjepivni pripravak, npr. miješanjem, otapanjem, suspendiranjem, emulgiranjem, inkapsulacijom, apsorpcijom i slično, te ih se može oblikovati u formulacije, poput tableta, kapsula, prašaka, sirupa, te suspenzija pogodnih za injekcije, usatke, inhalacije, pripravke za gutanje i slično. Po mogućnosti, cjepivo se tako formulira da ga se može primijeniti na psima injekcijom u dozi od približno 0,1 do 5 ml, ili po mogućnosti približno 0,5 do 2,5 ml, ili još poželjnije, u dozi od približno 1 ml.
Prema ovom izumu, p68 kombinacijska cjepiva se može primijeniti na psu starom najmanje 6 tjedana, po mogućnosti starom najmanje 7 tjedana, poželjnije, starom najmanje 8 ili 9 tjedana. Primjenu se može vršiti na bilo koji poznat način, uključujući oralno, intranazalno, topikalno na sluznicu, transdermalno, te parenteralno (npr. intravenski, intraperitonealno, intradermalno, supkutano ili intramuskularno). Primjenu se također može izvršiti sredstvima za unos bez igle. Primjenu se također može izvršiti kombinacijom načina, npr. najprije parentalnom primjenom, a zatim primjenom na sluznicu. Poželjni načini primjene uključuju supkutanu i intramuskularnu primjenu.
Poželjna p68 kombinacijska cjepiva i postupci cijepljenja
Poželjno kombinacijsko cjepivo prema ovom izumu sadrži atenuirani soj virusa CD, atenuirani soj CAV-2, atenuirani soj virusa CPI, atenuirani soj CPV, inaktivirani pripravak soja CCV, te Bordetella bronchiseptica p68antigen.
Osobito poželjno kombinacijsko cjepivo sadrži atenuirani soj virusa CD, označen kao "Snyder Hill" soj (National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA), atenuirani soj CAV-2, označen kao "Manhattan" soj (National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA), atenuirani soj virusa CPI, s oznakom "NL-CPI-5" (National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA), atenuirani CPV soj, s oznakom "NL-35-D" (National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA), inaktivirani pripravak soja CCV, s oznakom "NL-18" (National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA), te rekombinantni Bordetella bronchiseptica antigen p68 sa slijedom SEQ ID NO: 1. Takvo kombinacijsko cjepivo, koje se također u ovoj specifikaciji navodi kao "p68/5CV kombinacijsko cjepivo", po mogućnosti se pripravlja rehidratacijom pripravka atenuiranih virusnih sojeva osušenog smrzavanjem i virusnog pripravka tekućim pripravkom, gdje tekući pripravak čine antigen p68 otopljen u sterilnoj fiziološkoj otopini, uz dodatak Quil A i kolesterola kao adjuvansa.
Sljedeće osobito poželjno kombinacijsko cjepivo sadrži antigenske komponente p68/5CV kombinacijskog cjepiva, kao i inaktivirane cjelostanične pripravke pet Leptospira vrsta: Leptospira bratislava (npr. Leptospira bratislava soj kojeg se može dobiti od National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA), Leptospira canicola (npr. soj C-5, National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA), Leptospira grippotyphosa (npr. soj MAL 1540, National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA.), Leptospira icterohaemorrhagiae (npr. soj NADL 11403, National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA), te Leptospira pomona (npr. soj T262, National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA). Takvo kombinacijsko cjepivo, koje se također u ovoj specifikaciji navodi kao "p68/5CV-Leptospira kombinacijsko cjepivo", po mogućnosti se pripravlja rehidratacijom pripravka atenuiranih virusnih sojeva osušenog smrzavanjem (ili pripravka načinjenog drugim postupcima, poput sušenja raspršivanjem ili desikacijom) i virusnog pripravka tekućim pripravkom, gdje tekući pripravak čine antigen p68 i Leptospira antigeni, otopljen u sterilnoj fiziološkoj otopini, uz dodatak Quil A i kolesterola kao adjuvansa.
Prema ovom izumu p68/5CV i p68/5CV-Leptospira kombinacijska cjepiva može se primijeniti na zdravim psima starim 4 tjedana ili starijim, po mogućnosti starim 6 tjedana ili starijim, po mogućnosti u 3 doze, gdje se svaku primjenjuje s približno 3 tjedna razmaka. Pse se može precjepljivati godišnje, jednom dozom. U slučajevima ako je vjerojatna izloženost B. bronchiseptica i psećim virusima, primjerice u slučajevima parenja, držanja u skloništu, te izložaba, može se dati dodatni buster unutar godine dana, ili po mogućnosti 6 mjeseci, od takvih događaja.
Još poželjnije kombinacijsko cjepivo prema ovom izumu sadrži atenuirani soj virusa CD, atenuirani soj CAV-2, atenuirani soj virusa CPI, atenuirani soj CPV, te rekombinantni Bordetella bronchiseptica antigen p68.
Osobito poželjno kombinacijsko cjepivo sadrži atenuirani soj virusa CD, označen kao "Synder Hill" soj (National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA), atenuirani soj CAV-2, označen kao "Manhattan" soj (National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA), atenuirani soj virusa CPI, s oznakom "NL-CPI-5" (National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA), atenuirani CPV soj, označen kao "NL-35-D" (National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA), te rekombinantni Bordetella bronchiseptica antigen p68 sa slijedom SEQ ID NO: 1. Takvo kombinacijsko cjepivo, koje se također u ovoj specifikaciji navodi kao "p68/DA2PP kombinacijsko cjepivo", po mogućnosti se pripravlja rehidratacijom pripravka atenuiranih virusnih sojeva osušenog smrzavanjem (ili pripravka načinjenog drugim postupcima, poput sušenja raspršivanjem ili desikacijom) tekućim pripravkom, gdje tekući pripravak čine antigen p68 otopljen u sterilnoj fiziološkoj otopini, uz dodatak Quil A i kolesterola kao adjuvansa.
Sljedeće osobito poželjno kombinacijsko cjepivo sadrži antigenske komponente p68/DA2PP kombinacijskog cjepiva, kao i inaktivirane cjelostanične pripravke dvije Leptospira vrste: Leptospira canicola (npr. soj C-51, National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA), te Leptospira icterohaemorrhagiae (npr. soj NADL 11403, National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA). Alternativno, poželjno kombinacijsko cjepivo može sadržavati antigenske komponente p68/DA2PP kombinacijskog cjepiva, kao i inaktivirane cjelostanične pripravke pet Leptospira vrsta: Leptospira bratislava, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira icterohaemorrhagiae, te Leptospira pomona. Ova kombinacijska cjepiva, koja se također u ovoj specifikaciji navodi kao "p68/DA2PP-Leptospira kombinacijska cjepiva", po mogućnosti se pripravlja rehidratacijom pripravka atenuiranih virusnih sojeva osušenog smrzavanjem (ili pripravka načinjenog drugim postupcima, poput sušenja raspršivanjem ili desikacijom) i virusnog pripravka tekućim pripravkom, gdje tekući pripravak čine antigen p68 i Leptospira antigeni, otopljen u sterilnoj fiziološkoj otopini, uz dodatak Quil A i kolesterola kao adjuvansa.
Prema ovom izumu p68/DA2PP i p68/DA2PP-Leptospira kombinacijska cjepiva može se primijeniti na zdravim psima starim 6 tjedana ili starijim, ili po mogućnosti starim 6 tjedana ili starijim, po mogućnosti u 2 doze, gdje se svaku primjenjuje s približno 3 tjedna razmaka. Jedna doza može biti dovoljna ako se daje psu starom najmanje 12 tjedana. Pse se može precjepljivati godišnje, jednom dozom. U slučajevima ako je vjerojatna izloženost B. bronchiseptica i psećim virusima, primjerice u slučajevima parenja, držanja u skloništu, te izložaba, može se dati dodatni buster unutar godine dana, ili po mogućnosti 6 mjeseci, od takvih događaja. Sljedeće poželjno kombinacijsko cjepivo sadrži antigen p68, po mogućnosti rekombinantni antigen p68 sa SEQ ID NO: 1, u kombinaciji s atenuiranim sojem CPI.
Još poželjnije kombinacijsko cjepivo sadrži antigen p68, po mogućnosti rekombinantni antigen p68 sa SEQ ID NO: 1, atenuirani soj CPI, te najmanje 2 Leptospira vrste, primjerice Leptospira canicola (npr. soj C-51, National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA), te Leptospira icterohaemorrhagiae (npr. soj NADL 11403, National Veterinary Service Laboratory, Ames, IA).
Količina antigena p68 i jednog ili više antigena od jednog ili više drugih patogena u kombinacijskim cjepivima prema ovom izumu trebala bi djelotvorno imunizirati. Općenito, antigen p68 u kombinacijskom cjepivu trebao bi biti u količini od najmanje približno 0,5 µg po dozi. Atenuirani virus CD trebao bi biti u količini od najmanje približno 102 do približno 109 TCID50 po dozi TCID50 (50 % citopatogeni učinak infektivne doze za kulturu tkiva) po dozi, po mogućnosti u rasponu od približno 104 do približno 106 TCID50 po dozi. Atenuirani CAV-2 trebao bi biti u količini od najmanje približno 102 TCID50 do približno 109 TCID50 po dozi, po mogućnosti u rasponu od 104,0 do približno 106,0 TCID50 po dozi. Atenuirani virus CPI trebao bi biti u količini od najmanje približno 102 TCID50 do približno 109 TCID50 po dozi, po mogućnosti u rasponu od 105 do približno 108 TCID50 po dozi. Atenuirani CPV trebao bi biti u količini od najmanje približno 102 TCID50 do približno 109 TCID50 po dozi, po mogućnosti, u rasponu količina od 107 do približno 109 TCID50 po dozi. Količina CCV u inaktiviranom virusnom pripravku trebala bi biti najmanje približno 100 relativnih jedinica po dozi, po mogućnosti u rasponu od 1000-4500 relativnih jedinica po dozi. Svaka Leptospira vrsta u cjepivu trebala bi biti u rasponu od približno 100-3500 n.j. (nefelometrijske jedinice) po dozi cjepiva, po mogućnosti u rasponu od 200-2000 n.j. po dozi.
Kombinacijska cjepiva formulira se tako da se cjepiva može primijeniti na psima injekcijom u dozi od 0,1 ml do 5 ml, po mogućnosti do 0,5 ml do 2,5 ml, poželjnije, približno 1 ml.
Ovaj izum daljnje ilustriraju sljedeći neograničujući primjeri.
Primjer 1
Ispitivanje titracije doze Bordetella rekombinantnog antigena p68 kod pasa
Cjepivo
Eksperimentalni cjepivni antigen je rekombinantni protein p68 (SEQ ID NO: 1) iz vanjske membrane bakterije B. bronchiseptica, dobiven iz E. coli soja LW68. Cjepivo sadrži različite količine SDS (natrijev dodecil-sulfat) solubilizirani p68, uz dodatak 50 µg QAC kao adjuvansa (Quil A/50 µg kolesterol), u dozi od 1 ml.
Materijal za izlaganje
Aerosol bakterije Bordetella bronchiseptica, psećeg izolata br. 85B, pasaže br. 3, serije br. 051597, se upotrijebi kao materijal za izlaganje. Srednji broj u kulturi bio je 1,59 × 108 jedinica koloniziranja/ml.
Životinje
60 komada muške i ženske štenadi nasumično je raspoređeno u 1 od 6 skupina za tretman (10 štenadi po skupini). Od štenadi je uzeta krv, trahealni brisevi su uzeti 41 dan prije prvog cijepljenja, te ponovno 28 dana prije prvog cijepljenja, a sve seropozitivne ili životinje pozivne na kulturu su uklonjene iz ispitivanja.
Životinje su nasumično raspoređene za tretmane i sobe prema randomiziranoj postavi potpune blokade. Opažanja nakon cijepljenja provedena su bez znanja skupina koje raspoređuju cjepivo.
Postava
[image] 1s.c. = supkutano
Postupak
IVP primjena
Životinje su cijepljene 0. dana, bilo placebom, ili eksperimentalnim cjepivom. Drugo cijepljenje primijenjeno je 21. dana. Prvo cijepljenje primijenjeno je supkutano u desni dio vrata, a drugo cijepljenje primijenjeno je supkutano u lijevi dio vrata.
Primjena izlaganja
Sve životinje izložene su 28 dana nakon drugog cijepljenja aerosolu bakterije Bordetella bronchiseptica. Životinje su praćene na kašalj u periodu od 30 minuta, 2 × dnevno (1 × prije podne i 1 × poslije podne) 2. do 14. dana nakon izlaganja (51. do 63. dan).
Opažanja i prikupljanje uzoraka
Sva injekcijska mjesta su palpirana i mjerena u 3 dimenzije 7 dana nakon svakog cijepljenja (0. do 7. dan, te 21. do 28. dan), te 14. dana nakon svakog cijepljenja (14. i 35. dan).
Rektalne temperature bilježene su na dan cijepljenja, te 3 dana nakon svakog cijepljenja (0. do 3. dan, te 21. do 24. dan).
Krv je prikupljana na dan cijepljenja (0. i 21. dan), te 42., 50. i 63. dan, te ispitana ELISA-om na specifična protutijela protiv proteina p68, pročišćenog iz bakterije B. bronchiseptica. Krv je također prikupljana 42., 49., 50., 52., 54., 56. i 58. dana, te analizirana na serumski amiloid A (SAA).
Sve životinje uzeti su trahealni brisevi za izolaciju bakterije B. bronchiseptica, a krv je prikupljana za aglutinacijske titre na bakteriju B. bronchiseptica prije cijepljenja (kod dobavljača, -41. i -28. dan), te 49. dana.
Titracija DAB ELISA-e psećeg i mišjeg protutijela na Bordetella antigen p68
Pročišćeni nativni p68 razrijeđen je do 600 µg/ml u 0,01 M boratnom puferu, te dodan u svaku jažicu u koncentraciji od 100 µl po jažici. Ploče su inkubirane preko noći na 4°C. Ploče su zatim 1 × isprane PBS-om-Tween 20 u suvišku. 1 % bezmasno osušeno mlijeko u PBS-u dodano je na ploče u koncentraciji od 200 µl po jažici. Ploče su zatim inkubirane 1 sat na 37°C. Ploče su zatim 1 × isprane PBS-om-Tween 20 u suvišku.
Pseći ili mišji serum dodan je u razrjeđenju od 1:50 na najgornji red ELISA ploča, te je dvostruko serijski razrijeđen serum dodan po cijeloj ploči. Ploče su inkubirane 1 sat na 37 °C. Ploče su zatim 3 × isprane PBS-om-Tween 20 u suvišku.
Na ploče inkubirane s psećim serumom, gore, dodan je peroksidazom obilježen kozji protupseći IgG (H + L), u razrjeđenju od 1:2000, u koncentraciji od 100 µl po jažici. Ploče su zatim inkubirane 1 sat na 37°C. Na ploče inkubirane s mišjim serumom, gore, dodan je peroksidazom obilježen kozji protumišji IgG (H + L), u razrjeđenju 1:4000, u koncentraciji od 100 µl po jažici. Ploče su zatim inkubirane 1 sat na 37°C. Ploče su zatim 3 × isprane PBS-om-Tween 20 u suvišku.
ABTS supstrat dodan je u koncentraciji od 100 µl po jažici. Približno 20 minuta kasnije, ploče su očitane s Molekularno Devices ili ekvivalentnim čitačem ploča, na 405-490 nm.
Analiza podataka
Razlike između tretmana po broju kašljanja pasa ispitane su Fisherovim egzaktnim testom. Upotrijebljena je razina signifikantnosti od 5 %.
Titri ELISA-e logaritamski su transformirani prije analize pomoću općeg linearnog miješanog modela. Upotrijebljena je razina sigurnosti od 95 % kako bi se procijenilo razlike između tretmana. Opažanja izlaganja praćena su 2 × dnevno, po 30 minuta svako.
Rezultati
Kultura trahealnih briseva i aglutinacijski titri
Kulture trahealnih briseva i aglutinacijski titri procijenjeni su radi praćenja B. bronchiseptica statusa životinja uključenih u ispitivanje. Više pasa dokazalo je povećane titre u različitim vremenskim točkama, no niti jedan povišeni titar iznad 128 prije izlaganja.
Opažanja injekcijskih mjesta
Reakcije injekcijskog mjesta nakon prvog cijepljenja prikazane su u Tablici 1. Najjače reakcije injekcijskog mjesta opažane su kod cijepljenih životinja iz skupine T05 (64 µg), gdje je najjača srednja reakcija injekcijskog mjesta izmjerena kao samo 14,69 cm3 (2 dana nakon cijepljenja). Cijepljene životinje iz skupina T03 (4 µg), T04 (16 µg) i T06 (256 µg) dokazale su različite reakcije injekcijskog mjesta do 7 dana nakon cijepljenja. Cijepljene životinje iz skupine T02 (1 µg) dokazale su reakcije samo 1. dana nakon cijepljenja. Do 7. dana nakon cijepljenja nije bilo statistički značajne razlike u reakcijama injekcijskih mjesta između skupina za tretman. Do 14. dana sve reakcije injekcijskog mjesta su izčezle.
Reakcije injekcijskog mjesta nakon 2. cijepljenja prikazane su u Tablici 2. Nakon 2. cijepljenja najjače srednje reakcije injekcijskog mjesta opažane su za skupinu T06 (256 µg), gdje je najjača srednja reakcija injekcijskog mjesta izmjerena kao 50,03 cm3 (1 dan nakon cijepljenja). Reakcije injekcijskog mjesta dokazane su za životinje iz skupina T05 (64 µg) i T04 (16 µg) do 7 dana nakon 2. cijepljenja. Minimalne reakcije injekcijskog mjesta dokazane su za životinje iz skupina T03 (4 µg) i T02 (1 µg) do 7 dana nakon cijepljenja. Reakcije injekcijskog mjesta koje se nisu statistički razlikovale od placebo skupine dokazane su za skupine T02 (1 µg) i T03 (4 µg) nakon cijepljenja. 14 dana nakon drugog cijepljenja nisu opažene nikakve reakcije injekcijskog mjesta.
Učestalost reakcija injekcijskih mjesta nakon prvog cijepljenja prikazana je u Tablici 3. Najveća ukupna učestalost LSM je 76 %, za injekcijska mjesta koja dokazuju reakciju svaki put nakon prvog cijepljenja, rezultat je cijepljenja skupine T06 (256 µg). Sljedeća najčešća bila su 72 %, za injekcijska mjesta koja dokazuju reakciju nakon prvog cijepljenja skupine T05 (64 µg), 69 % nakon prvog cijepljenja skupine T04 (16 µg), te 63 % nakon prvog cijepljenja skupine T03 (4 µg). Najmanja učestalost je 38 %, nakon prvog cijepljenja skupine T02 (1 µg).
Učestalost reakcija injekcijskih mjesta nakon 2. cijepljenja prikazana je u Tablici 4. Ukupna učestalost LSM za svako cjepivo bila je u skladu s onom opaženom nakon 1. cijepljenja.
Incidencija i trajanje reakcija injekcijskih mjesta nakon cijepljenja sažeto su prikazani u Tablici 5. Incidencija (odnosno broj pasa koji dokazuju reakciju svaki put) mjerljivih reakcija injekcijskog mjesta bila je 100 % za skupine T03, T04, T05 i T06 (4 µg, 16 µg, 64 µg, odnosno 256 µg) nakon 1. i 2. cijepljenja. Životinje koje su primile T02 (1 µg) dokazale su najnižu incidenciju reakcija injekcijskih mjesta nakon cijepljenja (57,1 %).
Trajanje reakcije (izraženo kao najmanji kvadrati sredine za dane s reakcijom prikazani u Tablici 5) bilo je dulje za cijepljene životinje iz skupina T04, T05 i T06 (16 µg, 64 µg, odnosno 256 µg) nakon 1. i 2. cijepljenja (2,7 do 5,1 dana nakon prvog cijepljenja i 6,0 do 6,7 dana nakon 2. cijepljenja). Cijepljene životinje iz skupina T02 i T03 (1 µg, odnosno 4 µg) dokazale su najmanji broj dana s reakcijom injekcijskog mjesta nakon 1. i 2. cijepljenja (0,3 i 1,3 dana nakon prvog cijepljenja i 1,9 i 4,5 dana nakon 2. cijepljenja).
Rektalne temperature
Srednja mjerenja rektalne temperature sažeto su prikazana u Tablici 6. LSM rektalnih temperatura za skupinu T02 (1 µg) 1. i 24. dana, za skupinu T03 (4 µg) 1., 21. i 24. dana, za skupinu T04 (16 µg) 2. i 24. dana, za skupinu T05 (64 µg) 23. dana, te za skupinu T06 (256 µg) 0., 1. i 24. dana značajno su se razlikovale od placeba. 23. dana sve usporedbe su bili statistički beznačajne (p > 0,05) u odnosu na placebo.
Serologija ELISA-e p68
Sažeti prikaz podataka za ELISA-u p68 prikazan je u Tablici 7. Geometrijska sredina virusnih titara kod ELISA-e za protutijela specifična na p68 prije cijepljenja bila je niska za sve skupine (raspon od 24,9 do 28,9), a titri za placebo ostali su niski za vrijeme ispitivanja. 21 dan nakon 1. cijepljenja, ELISA p68 geometrijska sredina titara porasla je kod tretmana cijepljenjem (raspon 55,2 to 4.411,7), međutim T02 (1 µg) se statistički ne razlikuje od placeba (T01). 42 dana nakon 2. cijepljenja, geometrijska sredina titara bila je i dalje povećana za sve cijepljene skupine (raspon 674,6 do 48.382,0), što ukazuje na dobar serološki odgovor na cijepljenje.
Serologija serumskog amiloida A (SAA)
Titri SAA sažeto su prikazani u Tablici 8. Prije izlaganja, geometrijska sredina titara SAA bila je niska za sve skupine za tretman (raspon 0,1 do 0,5). Nakon izlaganja GMT titara za skupinu T01 bila je u rasponu od 1,5 do 146,0, gdje su se skupine za tretman s p68 kretale u rasponu od 0,3 do 23,1. Sve skupine za tretman statistički su se razlikovale od placeba 50., 52., 54. i 56 dana. Između p68 cjepiva nisu dokazane nikakve statističke razlike, s izuzetkom skupine T02 (1 µg) 52. dana, kada se dokazala geometrijska sredina statistički različita od svih drugih skupina za tretman s p68.
Odgovor na izlaganje
Podaci za odgovor na izlaganje prikazani su u Tablici 9. Odgovor je određen praćenjem kašljanja nakon izlaganja, a opažanja su analizirana u 2 postupka: najmanji kvadrat srednjeg broja dana s kašljanjem i 2 uzastopna dana kašljanja (Incidencija bolesti).
Analiza srednjeg broja dana s kašljanjem nije dokazali nikakve statistički značajne razlike između skupina za tretman s p68; no srednji broj dana s kašljanjem za pse cijepljene placebom je bio 8,6 dana, dok su psi na kojima su primijenjena p68 cjepiva kašljali značajno manje, uz raspon srednjeg broja dana između 2,2 i 4,7 dana.
Kada su psi procjenjivani pomoću Incidencije bolesti, za sve iz skupine T01 (placebo) je opaženo kašljanje u 2 uzastopna dana (100 % Incidencija bolesti). Cijepljeni psi iz skupina T04 (16 µg) i T05 (64 µg) dokazali su Incidenciju bolesti od 55,6 %, odnosno 66,7 %. Samo za 28,6 % cijepljenih pasa iz skupina T02 (1 µg), 50 % iz skupine T03 (4 µg), te 33,3 % iz skupine T06 (256 µg) je opaženo kašljanje u 2 uzastopna dana.
Rasprava
U ovom ispitivanju cilj je bio ustanoviti odnos između doze antigena, imunosnog odgovora i zaštite kod pasa. Ispitane doze antigena p68 bile su 1 µg, 4 µg, 16 µg, 64µg i 256 µg.
Analiza mjerenja reakcija injekcijskog mjesta pokazala je zanemarivu reakciju kod skupina za tretman s p68, s izuzetkom skupine T06 (256 µg) 1. dana nakon 2. cijepljenja. Opažene reakcije obično su bile slabe, općenito sve manjih dimenzija tijekom perioda opažanja. Veličina ovih reakcija bila je klinički zanemariva i najvjerojatnije bi prošla neopaženo na neobrijanim psima.
Rektalne temperature nakon cijepljenja nisu bile alarmantne i bile su u normalnim granicama za sve pse u svim skupinama.
Serološki odgovor na cijepljenje bio je izvrstan za skupine T03 do T06. U ovim skupinama za tretman svi su dokazali značajno više titre ELISA-e p68 u odnosu na placebo od 21. dana do 63. dana. Skupina T02 (1 µg) dokazala je značajne titri ELISA-e p68 u odnosu na skupinu T01 (placebo) od 42. dana do 63. dana. Najviši titri opažani su za skupine T05 (64 µg) i T06 (256 µg).
Ispitivanje SAA odgovora kod svih pasa cijepljenih s p68 nakon izlaganja ukazuje na mnogo slabiji porast razine SAA nakon izlaganja u usporedbi s kontrolnim psima. Nikakva razlika nije opažena između razine doze p68 cjepiva nakon izlaganja, s izuzetkom skupine T02 (1 µg) 52. dana, gdje je opažena statistički različita geometrijska sredina od svih drugih skupina za tretman s p68.
Opažanja kašljanja nakon izlaganja su analizirana pomoću najmanjih kvadrata sredine (LSM) broja dana s kašljanjem ili 2 uzastopna dana s kašljanjem (Incidencija bolesti). Uz upotrebu LSM dana s kašljanjem opažena je značajna razlika između placeba i svih skupina cijepljenih s p68 iako nikakva razlika nije opažena između različitih razina doza p68 cjepiva. Uz upotrebu Incidencije bolesti cijepljeni psi iz skupina T02 (1 µg), T03 (4 µg) i T06 (256 µg) kašljali su značajno manje nego za placebo.
Zaključci
Ispitivanje provedeno kako bi se ustanovilo odnos između doze antigena, imunosnog odgovora i zaštite kod pasa. Ispitane doze antigena p68 bile su 1 µg, 4 µg, 16 µg, 64 µg i 256 µg.
Sva cjepiva bila su sigurna, na što ukazuju minimalne reakcije injekcijskog mjesta, normalna rektalna temperatura i odsutnost štetnog odgovora na cijepljenje. Veličina reakcija injekcijskog mjesta i trajanje ovih reakcija bili su manji kod skupina za tretman uz manju dozu antigena. Serološki odgovor na cijepljenje, kao što je izmjereno titrima ELISA-e, bio je izvrstan za skupine s većom dozom antigena koje su pokazivale jače serološke odgovore. Prilikom upotrebe LSM dana s kašljanjem kao postupka za usporedbu sve skupine za tretman dokazale su značajno smanjenje kašljanja u usporedbi s placebom. Nikakve razlike nisu opažene između skupina za tretman. Kada je za usporedbu upotrijebljen postupak 2 uzastopna dana s kašljanjem (odnosno Incidencija bolesti) cijepljeni psi iz skupina T02 (1 µg), T03 (4 µg) i T06 (256 µg) kašljali su značajno manje nego za placebo.
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
[image]
Primjer 2
Ispitivanje i.m. imunogenosti Bordetella p68 antigena kod pasa
Životinje
Nabavljeno je 45 mužjaka i ženki pasa mješanaca. MLV parvovirusno cjepivo primijenjeno je na svu štenad na dan kada je štenad stigla na mjesto ispitivanja. Tijekom ispitivanja, osim cjepiva koja su eksperimentalni proizvodi na štenadi nisu primijenjena nikakva druga cjepiva. Psi bili su približno 9 tjedana starosti (±1 tjedan) 0. dana (1. dan cijepljenja).
Psi su držani u izolacijskoj jedinici kako bi se spriječilo izloženost bakteriji Bordetella i drugim psećim patogenim prije izlaganja. Nakon izlaganja aerosolu s bakterijom Bordetella s izolacijom je nastavljeno kako bi se spriječilo izloženost drugim psećim patogenima.
Cjepiva
Sterilna fiziološka otopina upotrijebljena je kao placebo cjepivo kod skupina za tretman T01 i T02. Pseće rekombinantno p68 Bordetella bronchiseptica cjepivo upotrijebljeno je kod skupina za tretman T03 i T04. Strukturni gen antigena p68 kloniran je u bakteriju Escherichia coli, a ekspresiju gena regulira temperaturno osjetljivi promotor. Stanice su lizirane, a inkluzijska tijela su odvojena centrifugiranjem. Rekombinantni p68 u inkluzijskim tijelima solubiliziran je obradom SDS-om. Rekombinantni p68 (15 µg po ml) pomiješa se s 50 µg Quil A i 50 µg kolesterola po ml u sterilnoj fiziološkoj otopini kao razrjeđivaču. Svaka doza od 1 ml sadrži 0,28 % etanola i 0,01 % timerosala.
Inokulum za izlaganje
Bordetella bronchiseptica soj Bihr Cat pripravljen je kao inokulum za izlaganje postupkom kojeg se trenutno upotrebljava u ustanovi Biologies Control Laboratories-Microbiology. Na ploče Bordet-Genou agara nasadi konfluentno rastućom bakterijom Bordetella bronchiseptica, soj Bihr Cat, te inkubira 48 sati na 37,5 ± 2,5°C. Odabrane su virulentne kolonije, isprugano nasađene na Bordet-Genou agar, te inkubirane 24 sata na 37,5 ± 2,5°C. Nakon inkubacije fiziološka otopina za bakterije Bordetella upotrijebljena je za ispiranje kolonija s agara, a antigen je razrijeđen do optičke gustoće od 0,80 na 600 nm. Brojanje stanica provedeno je prije i nakon izlaganja, kako bi se potvrdilo očitanje nefelometra. Koncentracija za izlaganje mete bila je približno 1 × 109 jedinica koloniziranja. Koncentracija prije izlaganja bila je 2,37 × 109 jedinica koloniziranja (100 % Faza I), a koncentracijski broj nakon izlaganja je bio 1,35 × 109 jedinica koloniziranja (100 % Faza I).
Postava ispitivanja
Tablica sa sažetim prikazom podataka
[image]
Randomizacija/Vezanje
U periodu od cijepljenja do dana izlaganja životinje su raspoređene u tretmane prema generaliziranoj blok-postavi. Tretmani su nasumično raspoređeni po sobama. Na dan izlaganja životinje su nasumično raspoređene u sobe za izlaganje prema bloku.
Kvalificirane su osobe, bez znanja o naznačenim skupinama za tretman, provodile mikrobiološka i serološka ispitivanja i procjenjivanja injekcijskih mjesta, mjerenja rektalne temperature, te opažanja kašljanja.
Analiza podataka
Varijable odgovora nakon cijepljenja su bile: podaci o injekcijskom mjestu, rektalna temperatura i titri ELISA-e p68. Podaci o injekcijskom mjestu zažeto su prikazani na sljedeće načine: 1) broj životinja s mjerljivom reakcijom prema tretmanu i danu ispitivanju, 2) broj vremenskih točaka za životinje s mjerljivom reakcijom prema tretmanu, 3) broj životinja s mjerljivom reakcijom za svaku vremensku točku prema tretmanu.
Posebno za 1. i 2. cijepljenje, podaci o volumenu injekcijskog mjesta (cm3), rektalnoj temperaturi i prirodno logaritamski transformiranom titru ELISA-e p68 analizirani su pomoću općeg linearnog miješanog modela.
Za ispitivanje razlika između skupina za tretman u svakoj vremenskoj točki opažanja, te za usporedbu vremenskih točaka u svakom tretmanu konstruirani su a priori linearni kontrasti za tretman prema vremenskoj točki opažanja najmanji kvadrati sredina. Razina signifikantnosti od 5 % upotrijebljena je za sve usporedbe.
Nakon izlaganja odgovor varijable su bile: opažanje kašljanja po danu, titri ELISA-e p68 i titri serumskog amiloida A. Broj dana s kašljanjem u periodu nakon izlaganja analiziran je pomoću općeg linearnog miješanog modela.
Za ispitivanje razlika između skupina za tretman konstruirani su a priori kontrasti najmanjih kvadrata sredine za tretman. Razina signifikantnosti od 5 % upotrijebljena je za sve usporedbe.
Posebno za 1. i 2. cijepljenje, upotrijebljen je Fisherov egzaktni test za usporedbu skupina za tretman, za incidenciju u 2 uzastopna dana kašljanja. Razina signifikantnosti od 5 % upotrijebljena je za sve usporedbe.
Za podatke o titru serumskog amiloida A (SAA) nakon izlaganja primijenjena je prirodno logaritamska transformacija na vrijednosti titra prije analize pomoću općeg linearnog miješanog modela.
Za ispitivanje razlika između skupina za tretman u svakoj vremenskoj točki opažanja, te za usporedbu vremenskih točaka u svakom tretmanu konstruirani su a priori linearni kontrasti najmanjih kvadrata sredine za tretman prema vremenskoj točki opažanja. Razina signifikantnosti od 5 % upotrijebljena je za sve usporedbe.
Postupak ispitivanja
Detaljni postupci sa životinjama
45 seronegativne i negativne na kulturu štenadi nasumično su raspoređene u jednu od 4 skupine za tretman. 8 i 7 pasa raspoređeno je u intramuskularne (i.m.) odnosno supkutane (s.c.) kontrolne skupine, za ukupno 15 kontrolnih pasa. 15 pasa raspoređeno je u p68 s.c. skupinu za tretman, a 15 pasa raspoređeno je u p68 i.m. skupinu za tretman. Skupine za tretman detaljno su opisane u poglavlju Postava ispitivanja, gore.
0. dan naznačen je kao dan 1. cijepljenja. Cijepljenja su primijenjena 0. dana, te ponovno 21 dan kasnije. Za 1. cijepljenje upotrijebljen je desni dio vrata, a za 2. cijepljenje upotrijebljen je lijevi dio vrata. Intramuskularne injekcije primijenjene su u desni i lijevi semimembranozni mišić za 1., odnosno 2. cijepljenje. Sva injekcijska mjesta mjerena su u 3 dimenzije 7 dana nakon svakog cijepljenja, a naknadno mjerenje provodi se 14 dana nakon cijepljenja. Rektalne temperature praćene su na dan cijepljenja (prije cijepljenja), te 3 dana nakon svakog cijepljenja.
35. dana za sve životinje su uzeti trahealni brisevi za kulturu bakterije B. bronchiseptica, a krv je prikupljana za aglutinacijske titre. Sve životinje bile su negativne prema trahealnom brisu, kao i serološki negativne bakteriju Bordetella, te su procijenjene kao pogodne za izlaganje.
45. dana, 24 dana nakon 2. cijepljenja, izlaganje aerosolu bakterije B. bronchiseptica primijenjeno je na sve pse. Sedirani psi izloženi su pomoću jednokratnog nosnog konusa, pogodno namještenog preko njuške sediranog psa. Nosni konus vezan je na nebulizator, koji je vezan na vakuumsku pumpu, podešenu na 37,9 do 41,4 kPa (5,5 do 6,0 psi). U nebulizator je stavljeno 1 ml materijala za izlaganje, te je aerosolizirani materijal za izlaganje primijenjen na svakom psu u trajanju od 4 minute. Osoblje koje je vršilo opažanja bilo je bez znanja o raspoređivanju u skupine za tretman.
Životinje su praćene na kašalj 14 dana nakon izlaganja (46-59. dan). Opažanja su provedena u 2, približno 30-minutna perioda, približno u isto vrijeme svakog dana, jedno provedeno prije podne, drugo poslije podne, a rezultati su zabilježeni.
Prikupljanje krvi
Krv za aglutinacijske titre prikupljana je prije prvog cijepljenja i prije izlaganja. Krv za procjenu ELISA-e anti-p68 protutijela prikupljana je prije cijepljenja 0. i 21. dana, te 35., 45. i 59. dan. Krv za ispitivanje na serumski amiloid A (SAA) prikupljana je na dan izlaganja (45. dan), te 46., 48., 50., 52 i 54 dan.
Ispitivanja provedena na uzorcima
Trahealni brisevi procijenjeni su na prisutnost bakterije B. bronchiseptica u kulturi. Svaki trahealni bris isprugan je na agarsku ploču selektivnu na bakteriju Bordetella. Uključene su i pozitivne i negativne kontrole. Ploče su inkubirane na 37,5 + 2,5°C, u trajanju od 48 ± 4 sati. Nastale kolonije na svakoj ploči uspoređene su s pozitivnom kontrolom, a svaka kolonija koja je izgledala istovjetna s pozitivnom kontrolom daljnje je ispitana kako bi se potvrdilo prisutnost bakterije B. bronchiseptica. Konfirmacijsko ispitivanje uključilo je upotrebu TSI, citratnog i urea-agara i nitratnog crvenog kao medija.
Serumi su procijenjeni za aglutinacijske titre, ELISA p68 analizu ili SAA analizu uz upotrebu sljedećih postupaka:
Aglutinacijski titri: Serumi su serijski razrijeđeni na mikrotitarskim pločama pomoću fiziološke otopine za bakteriju Bordetella. Uključene su i pozitivne i negativne kontrole na svakoj ploči. B. bronchiseptica soj 87 (uzgojen na Bordet Genou agaru, prikupljen, inaktiviran i razrijeđen do 20 % T na 630 nm) upotrijebljen je kao aglutinacijski antigen, te dodan u svaku jažicu. Ploče se trese, te inkubira 2 sata na 35 ± 2 °C. Ploče su očitane nakon 2. inkubacije na sobnoj temperaturi, u trajanju od 22 sata. Konačni titar, određen pomoću posljednje jažice, pokazao je 50 % aglutinaciju.
Titri ELISA-e p68: Rekombinantni p68 antigen uhvaćen je na mikrotitarskoj ploči s 96 jažica, obloženoj poliklonskim antiserumom specifičnim na Bordetella p68 antigen. Serijska dvostruka razrjeđenja psećeg seruma dodana su na ploču, te inkubirana. Pozitivne i negativne kontrole u 1:1000 razrjeđenju uključene su na svakoj ploči. Peroksidazom obilježen afinitetno pročišćeni kozji protupseći IgG indikatorski konjugat upotrijebljen je za detekciju protutijela specifičnih za p68 antigen. Zatim se doda kromogeni supstrat ABTS, a ploču očita kada su jažice za pozitivnu kontrolu imale O.D. od 1,2 ± 0,2. Titar za dani uzorak izračunat je kao recipročna vrijednost posljednjeg razrjeđenja s optičkom gustoćom većom od srednjeg razrjeđenja negativnog kontrolnog seruma, uz 5 standardnih devijacija.
SAA titri: Titri psećeg serumskog amiloida A procijenjeni su pomoću kompleta nabavljenog od strane firme Accuplex Co., University of Nebraska Medical Center, Omaha, NE 68198. Ukratko, pseći SAA uhvaćen je na mikrotitarskoj ploči obloženoj s monoklonskim antipsećim protutijelom na SAA. Razrijeđeni uzorci psećeg seruma dodani su na ploču nakon biotinom obilježenog konjugata antipsećeg protutijela. Nakon inkubacije doda se kromogeni supstrat za streptavidin konjugiran s peroksidazom. Ploču se očita nakon 30 minuta.
Rezultati
Rektalne temperature
Sažeti prikaz mjerenja rektalne temperature prikazan je u Tablicama 10 i 11.
Tablica 10
Najmanji kvadrati sredine rektalnih temperatura (C°) kod pasa nakon cijepljenja fiziološkom otopinom ili Bordetella antigenom p68 (nakon 1. cijepljenjaa)
[image] a1. cijepljenje primijenjeno 0. dana.
Tablica 11
Najmanji kvadrati sredine rektalnih temperatura (C°) kod pasa nakon cijepljenja fiziološkom otopinom ili Bordetella antigenom p68 (nakon 2. cijepljenjaa)
[image] a2. cijepljenje primijenjeno 21. dana.
Nikakva značajna razlika nije opažena između bilo kojih skupina bilo kojeg dana nakon 1. cijepljenja. Značajna razlika je opažena između pasa cijepljenih fiziološkom otopinom i svih pasa cijepljenih s p68 (p = 0,0053 za T01T02 nasuprot T03T04) 21. dana. Značajna razlika (p = 0,0124) između p68 s.c. i i.m. cjepljenika dokazana je 24. dana.
Reakcije injekcijskog mjesta
Reakcije injekcijskog mjesta sažeto su prikazane u Tablicama 12 i 13. Zbog tehničke omaške nisu provedena nikakva opažanja injekcijskog mjesta tijekom 14-dnevnog opažanje nakon 2. cijepljenja (35. dan).
Mjerljive reakcije injekcijskog mjesta opažene su za skupinu T03 (p68 s.c.) i bile su minimalne veličine. Slaba reakcija injekcijskog mjesta opažena je kod 1 psa u T04 (p68 i.m.) 3. dana, no minimalni utjecaj mjerenja ne odražava se u ukupnoj sredini za skupinu.
Tablica 12
Najmanji kvadrati sredine (cm3) za reakcije injekcijskih mjesta kod pasa nakon cijepljenja fiziološkom otopinom ili Bordetella antigenom p68 (15 µg/doza) (nakon 1. cijepljenjaa)
[image] a1. cijepljenje primijenjeno 0. dana
bstandardna pogreška za T01 = 0,80, T02 = 0,84, T03 = 0,70, te T04 = 0,70
c1 pas imao je slabu reakciju injekcijskog mjesta (0,5 cm2), no zbog zaokruživanja minimalni utjecaj vrijednosti se ne odražava u ukupnoj sredini.
Tablica 13
Najmanji kvadrati sredine (cm3) za reakcije injekcijskih mjesta kod pasa nakon cijepljenja fiziološkom otopinom ili Bordetella antigenom p68 (15 µg/doza) (nakon 2. cijepljenjaa)
[image] a2. cijepljenje primijenjeno 21. dana
bstandardna pogreška za T01 = 1,12, T02 = 1,19, T03 = 0,92, te T06 = 0,92
Značajne razlike u mjerenjima injekcijskog mjesta sažeto su prikazane u Tablici 14. Značajna razlika u mjerenjima injekcijskog mjesta između skupine T02 (fiziološka otopina s.c.) nasuprot skupine T03 (p68 15 µg s.c.) opažena je u 6 dana nakon 1. cijepljenja. Do 7. dana, te ponovno 14. dana (ponovna 2-tjedna procjena), nisu opažene nikakve značajne razlike između bilo kojih skupina za tretman.
Značajna razlika u mjerenjima injekcijskog mjesta između skupine T02 (fiziološka otopina s.c.) nasuprot skupine T03 (p68 15 µg s.c.) opažena je 7 dana nakon 2. cijepljenja.
Tablica 14
Vrijednosti signifikantnosti za a priori kontraste između najmanjih kvadrata sredine mjerenja reakcije injekcijskog mjesta
[image] Samo značajni (p < 0,05) kontrasti su prikazani.
Titri ELISA-e p68
Podaci za ELISA-u p68 sažeto su prikazani u Tablici 15 i na Slici 1. Zbog znatnog titarskog odgovora na p68 kod cijepljenih pasa, upotrijebljeni su različiti titracijski minimumi u različitim vremenskim točkama u ispitivanju. Titracije za 0. i 21. dan započete su na 50. Za 35., 45. i 59. dan titracije su započete na 200. Svaka vrijednost zabilježena kao "manje od" podijeljena je s 2 prije analize. Inkrementni porast opažen za vrijednosti ELISA-e p68 za kontrolne skupine (T01 i T02) tijekom ispitivanja je zbog ovih minimalnih titracijskih vrijednosti. Aglutinacijski titri ostali su < 4.
Sve životinje cijepljene s p68 pokazale su najmanje četverostruki porast titara od prvog dana cijepljenja do dana izlaganja (0. dan nasuprot 45. dana) u usporedbi sa životinjama cijepljenim placebom.
[image]
Značajne razlike za najmanje kvadrate sredine titara ELISA-e nakon cijepljenja i nakon izlaganja iznijete su u Tablici 16. Nikakva značajna razlika nije opažena između životinje cijepljenih s p68 s.c. i i.m. nakon što je cijepljenje gotovo.
Tablica 16
Vrijednosti signifikantnosti za a priori kontraste između najmanjeg kvadrata sredine konačnih titara ELISA-e p68 nakon cijepljenja i nakon izlaganja
[image] Samo značajni (p < 0,05) kontrasti su prikazani.
Titri serumskog amiloida A
Vrijednosti za SAA određene su 0., 1., 3., 5., 7. i 9. dana nakon izlaganja. Vrijednosti za serumski amiloid A prikazane su u Tablici 17 i predstavljene na Slici 2.
[image]
Značajne razlike u titrima SAA sažeto su prikazane u Tablici 18. Fiziološke otopine kao kontrole pokazale su više titre SAA nego cijepljeni psi 1., 3. i 5. dana nakon izlaganja. Fiziološke otopine kao s.c. kontrole i dalje su pokazivale značajno više titre SAA u usporedbi s s.c. cijepljenim psima 7. i 9. dana nakon izlaganja.
Tablica 18
Vrijednosti signifikantnosti za a priori kontraste između najmanjeg kvadrata sredine titara serumskog amiloida A nakon izlaganja
[image] Samo značajni (p < 0,05) kontrasti su prikazani.
Opažanja kašljanja
Izlaganje aerosolu za sve skupine za tretman provedeno je 24 dana nakon 2. cijepljenja (45. dan). Opažanja kašljanja ispitana su u 2 postupka: bolesno stanje na osnovu 2 uzastopna dana s kašljanjem (prikazano u Tablici 19) i postotak dana s kašljanjem (prikazano u Tablicama 20 i 21). Kada su psi procjenjivani uz upotrebu kriterija 2 uzastopna dana s kašljanjem 80 % pasa cijepljenih s p68 (s.c. i i.m.) kašljalo je najmanje 2 uzastopna dana, dok su psi cijepljeni fiziološkom otopinom s.c. i fiziološkom otopinom i.m. kašljali 100 % odnosno 87,5 %. Kada su psi procjenjivani uz upotrebu postotka dana kada je opažano kašljanje, psi cijepljeni s p68 s.c. i i.m. kašljali su 38,72 % odnosno 41,05 % opaženih dana. Psi cijepljeni fiziološkom otopinom s.c. i fiziološkom otopinom i.m. kašljali su 69,04 % odnosno 62,66 %.
Tablica 19
Sažeti prikaz bolesti status kod pasa cijepljenih fiziološkom otopinom i Bordetella antigenom p68 (15 µg/doza) na osnovu 2 uzastopna dana s kašljanjem nakon izlaganja aerosolu s bakterijom Bordetella bronchiseptica
[image]
Nikakva značajna razlika nije dokazana između pasa cijepljenih fiziološkom otopinom i pasa cijepljenih s p68 kada je bolesno stanje bazirano na 2 uzastopna dana s kašljanjem.
Tablica 20
Srednji postotak dana s kašljanjem kod pasa cijepljenih fiziološkom otopinom i Bordetella antigenom p68 (15 µg/doza) nakon izlaganja aerosolu s bakterijom Bordetella bronchiseptica
[image]
Značajna razlika (p = 0,0112) dokazana je između skupine T02 (fiziološka otopina s.c.) i T03 (p68 15 µg s.c.). Nikakva značajna razlika nije dokazana između skupine T01 (fiziološka otopina i.m.) i T04(p68 15 µg i.m.).
Tablica 21
Srednji postotak dana s kašljanjem prema tretmanu kod pasa cijepljenih fiziološkom otopinom i Bordetella antigenom p68 (15 µg/doza) nakon izlaganja aerosolu s bakterijom Bordetella bronchiseptica
[image]
Značajna razlika (p = 0,0022) dokazana je između fizioloških otopina kao kontrola i pasa cijepljenih s p68.
Rasprava
Ispitivanje je tako postavljeno da prikaže sigurnost i djelotvornost cjepiva p68 Bordetella 15 µg/doza kod pasa.
Sigurnost je ispitana putem opažanja injekcijskog mjesta i rektalne temperature. Analiza mjerenja reakcija injekcijskog mjesta pokazala je zanemarivu reakciju za skupinu cijepljenu i.m. i minimalne reakcije za skupinu cijepljenu s.c.. Opažene reakcije obično su bile slabe, općenito sve manjih dimenzija tijekom perioda opažanja. Veličina ovih reakcija najvjerojatnije bi prošla neopaženo na neobrijanim psima. Iako je opažena značajna razlika između fiziološke otopine i pasa cijepljenih 21. dana, te između pasa cijepljenih i.m. i s.c. 24. dana, rektalna temperatura bila je klinički zanemariva i u normalnim granicama za sve pse u svim skupinama.
Djelotvornost je ispitana uz upotrebu opažanja mjerenja konačnih titara ELISA-e p68 i kašljanja. Bez obzira na način primjene, dobar odgovor na protutijelo na p68 pokazan je za skupine cijepljene s p68 do 35. dana. Dobar anamnestički odgovor opažen je za cjepljenike nakon izlaganja. Iako se jača proizvodnja protutijela kao odgovor tradicionalno dobiva za vaskularni, a manje za masni i.m. način u usporedbi s s.c. načinom, razlika između p68 s.c. i i.m. cjepljenika nije značajna tijekom ispitivanja.
Ispitivanje SAA odgovora za pse cijepljene i necijepljene Bordetella antigenom p68 nakon izlaganja ukazuje na mnogo slabiji porast razine vrijednosti za SAA kod skupina cijepljenih životinja, osobito 1., 3. i 5. dan nakon izlaganja.
Zaključci
U ovom ispitivanju, djelotvornost 15 µg/doza p68 pseći Bordetella cjepivo ispitano je koristeći pseći model izlaganja 24 dana nakon cijepljenja. Cjepivo je sigurno, na što ukazuju normalne rektalne temperature, minimalne reakcije injekcijskog mjesta, a djelotvornost je dokazana u kombiniranim i.m. i s.c. skupinama. Usporedba vrijednosti za SAA pokazala je značajnu razliku između pasa cijepljenih fiziološkom otopinom i onih s p68, 1., 3. i 5. dana nakon izlaganja aerosolu.
Primjer 3
Ispitivanje šestomjesečne trajnosti imunosti za cjepivo pseća Bordetella p68
Životinje
Nabavljeno je 90 mužjaka i ženki pasa mješanaca, a većina štenadi bila je stara 9 tjedana (±1 tjedan) na dan 1. cijepljenja.
MLV parvovirusno cjepivo primijenjeno je na psima prilikom dolaska na mjesto ispitivanja. Kako bi bile pogodne za ispitivanje, za životinje je određeno da su negativne na bakteriju B. bronchiseptica prema trahealnom brisu i aglutinacijskom titru. Tijekom ispitivanja nisu primijenjena nikakva cjepiva koja nisu eksperimentalni proizvodi.
Psi su držani u izolacijskoj jedinici kako bi se spriječilo izloženost bakteriji B. bronchiseptica i psećim patogenima prije izlaganja. Nakon izlaganja aerosolu s bakterijom B. bronchiseptica s izolacijom je nastavljeno kako bi se spriječilo izloženost drugim psećim patogenima.
Cjepiva
Sterilna fiziološka otopina upotrijebljena je kao placebo cjepivo kod skupina za tretman T01 i T02. Pseći rekombinantni p68 Bordetella bronchiseptica cjepivo upotrijebljen je kod skupina za tretman T03 i T04. Strukturni gen antigena p68 kloniran je u bakteriju Escherichia coli, a ekspresiju gena regulira temperaturno osjetljivi promotor. Stanice su lizirane, a inkluzijska tijela su odvojena centrifugiranjem. Rekombinantni p68 u inkluzijskim tijelima solubiliziran je obradom SDS-om. Odvojeno od toga 15 µg p68 i 60 µg p68 pomiješano je s 50 µg Quil A i 50 µg kolesterola po ml u sterilnoj Lepto fiziološkoj otopini kao razrjeđivaču. Kombinirane komponente miješane su 24 sata na 4°C, te 3 × propuštene kroz mikrofluidizator. Svaka doza od 1 ml sadrži 2,7 µl etanola i 0,0001 % timerosala. Koncentracije p68 u eksperimentalnim cjepivima mjerene su ELISA-om p68. Sva ispitivanja provedena su u peterostrukim replikatima. Sva cjepiva upotrijebljena su unutar 6 mjeseci nakon gotovljenja.
Inokulum za izlaganje
Na ploče Bordet-Genou agara nasadi se bakterija Bordetella bronchiseptica, soj Bihr Cat, te inkubira 48 sati na 37,5 ± 2,5°C. Odabrane su virulentne kolonije, isprugano nasađene na Bordet-Genou agar, te inkubirane 24 sata na 37,5 ± 2,5°C. Nakon inkubacije fiziološka otopina za bakterije Bordetella upotrijebljena je za ispiranje kolonija s agara, a stanice su razrijeđene do optičke gustoće od 0,80 na 600 nm. Brojanje stanica provedeno je prije i nakon izlaganja kako bi se potvrdilo očitanje nefelometra. Koncentracija za izlaganje mete bila je približno 1 × 109 jedinica koloniziranja. Za Skupinu I koncentracijski broj prije izlaganja bio je 1,94 × 109, a koncentracijski broj nakon izlaganja bio je 1,43 × 109. Za Skupinu II koncentracijski broj prije izlaganja bio je 2,55 × 109, a koncentracijski broj nakon izlaganja bio je 2,13 × 109.
Postava ispitivanja
[image]
Ispitivanje provedeno u 2 faze ili skupine od po 48 pasa u Skupini I i 42 psa u Skupini II. Cijepljenje br. 1 provedeno je 0. dana za svaku Skupinu. Cijepljenje br. 2 provedeno je 20 dana kasnije. Pojave u Skupini 1 bile su u pomaku od pojava u Skupini II približno 15 dana. Psi bili su izlagani aerosolu s bakterijom B. bronchiseptica 181 dana nakon posljednjeg cijepljenja.
Randomizacija/Vezanje
Životinje su nasumično raspoređene za tretmane i sobe prema posve randomiziranoj postavi.
U periodu od cijepljenja br. 1 do dana izlaganja unutar svake skupine za ispitivanje životinje su nasumično raspoređene za tretmane i sobe (3 do 5 pasa po sobi) prema randomizacijskom planu.
Na dan izlaganja prethodno tretirane životinje randomizirano su raspoređene u sobe za izlaganje unutar skupine za ispitivanje prema generaliziranoj blok-postavi.
Kvalificirane su osobe, bez znanja o naznačenim skupinama za tretman, provodile mikrobiološka i serološka ispitivanja i procjenjivanja kašljanja i injekcijskog mjesta.
Analiza podataka
Varijable odgovora nakon cijepljenja su bile: podaci o injekcijskom mjestu, rektalna temperatura i titri ELISA-e p68. Podaci o injekcijskom mjestu zažeto su prikazani kao što slijedi: 1) broj životinja s mjerljivom reakcijom prema tretmanu i danu ispitivanju, 2) broj vremenskih točaka za životinje s mjerljivom reakcijom prema tretmanu, 3) broj životinja s mjerljivom reakcijom za svaku vremensku točku prema tretmanu, 4) trajanje mjerljivih reakcija za svaku životinju.
Posebno za 1. i 2. cijepljenje, podaci o volumenu injekcijskog mjesta (cm3), rektalnoj temperaturi i prirodno logaritamski transformiranom titru ELISA-e p68 analizirani su pomoću općeg linearnog miješanog modela.
A priori linearni kontrasti za tretman prema vremenskoj točki opažanja konstruirani su najmanji kvadrati sredine za ispitivanje razlika između skupina za tretman u svakoj vremenskoj točki opažanja, te za usporedbu vremenskih točaka u svakom tretmanu. Specifične usporedbe od interesa bile su T01 nasuprot T03, T01 nasuprot T05, T03 nasuprot T05, T02 nasuprot T04, T02 nasuprot T06, te T04 nasuprot T06. Ako je interakcijski termin vremenska točka-po tretmanu-po skupini za ispitivanje značajan na p < 0,05, kontrasti između skupina za tretman u svakoj vremenskoj točki i između vremenskih točaka unutar skupine za tretman su postojali unutar svake skupine za ispitivanje, inače su ovi kontrasti izvedeni na osnovu interakcijskog učinka najmanji kvadrati sredine za vremenske točke-po tretmanu. Razina signifikantnosti od 5 % upotrijebljena je za sve usporedbe.
Nakon izlaganja varijable odgovora su bile: titri ELISA-e p68, titri serumskog amiloida A i kašljanje po danu opažanja. Nakon izlaganja titri ELISA-e p68 su analizirani kao što je opisano ranije. Za podatke o titru serumskog amiloida A (SAA) nakon izlaganja primijenjena je prirodno logaritamska transformacija na vrijednosti titra prije analize pomoću općeg linearnog miješanog modela.
Analiza kašljanja prilagođena je tako da odražava odredbe USDA. Za svakog psa izračunat je postotak perioda opažanja tijekom kojeg je opaženo kašljanje. Prije analize postotak je transformiran pomoću arcsin kvadratnog korijena transformacije. Opći linearni miješani model upotrijebljen je za analiza kašljanja.
Najmanji kvadrati sredine iz ove analize transformirani su natrag u postotke, a postotak smanjenja kašljanja izračunat je kao:
[image]
A priori linearni kontrasti najmanjih kvadrata sredine za tretman konstruirani su za ispitivanje razlika između skupina za tretman. Specifične usporedbe od interesa bile su T01 nasuprot T03, T01 nasuprot T05, T03 nasuprot T05, T02 nasuprot T04, T02 nasuprot T06, te T04 nasuprot T06. Ako je interakcijski termin tretman-po skupini za ispitivanje značajan na p < 0,05, kontrasti između skupina za tretman su bili unutar svake skupine za ispitivanje, inače su kontrasti između skupina za tretman bazirani na najmanjim kvadratima sredine glavnog učinka tretmana. Razina signifikantnosti od 5 % upotrijebljena je za sve usporedbe.
Postupak ispitivanja
Detaljni postupci sa životinjama
Prije dolaska u prostorije za ispitivanje i prije 1. cijepljenja, štenadi su uzeti trahealni brisevi za kulturu bakterije B. bronchiseptica, a krv je prikupljana za aglutinacijske titre. Sve životinje bile su negativne prema trahealnom brisu i serološki negativni na bakteriju Bordetella, te procijenjene kao pogodne za ispitivanje. 48 štenadi nasumično je raspoređeno u 1 od 6 skupina za tretman za Skupinu I. Postupak je ponovljen s 42 psa za Skupinu II. Životinje su aklimatizirane na mjesto ispitivanja kroz najmanje 5 dana.
Skupine i tretmani detaljno su opisani u poglavlju 7,4.A. Zbog ograničenja jedinice, te kako bi se povećalo preciznost opažanja kašljanja nakon izlaganja, cijepljenje i odgovarajući periodi izlaganja su odvojeni 15 dana kako bi se dobilo 2 skupine pasa. 0. dan odnosi se na dan cijepljenja br. 1 za obje Skupine I i II. Cijepljenje br. 2 provedeno je 20 dana kasnije. Tretmani T01, T03, i T05 primijenjeni su supkutano. Tretmani T02, T04, i T06 primijenjeni su intramuskularno. Supkutane injekcije primijenjene su u dorzolateralni aspekt vrata. Za cijepljenje br. 1, upotrijebljen je desni dio vrata, a za cijepljenje br. 2 upotrijebljen je lijevi dio vrata. Intramuskularne injekcije primijenjene su u desni i lijevi semimembranozni mišić za cijepljenje br. 1, odnosno cijepljenje br. 2. Sva injekcijska mjesta mjerena su u 3 dimenzije 7 dana nakon svakog cijepljenja, a popratno mjerenje provedeno je 14 dana nakon cijepljenja. Rektalne temperature praćene su na dan cijepljenja (prije cijepljenja), te 3 dana nakon svakog cijepljenja. Krv je prikupljana prije svakog cijepljenja (–1. i 19. dana) i 50. dana za određivanje titra ELISA-e p68.
Svaki mjesec svim psima su uzeti trahealni brisevi za kulturu bakterije B. bronchiseptica pod sedativom kako bi se potvrdilo negativni status na bakteriju B. bronchiseptica. Krv je također prikupljana za aglutinaciju i titre ELISA-a. Postupak je ponovljen 7 dana prije izlaganja za svaku skupinu. Dokaz pozitivne kulture trahealnog brisa ili povišeni aglutinacijski titar isključuju životinju iz ispitivanja.
Izlaganje je primijenjeno na psima 181 dana nakon cijepljenja br. 2. Sedirani psi izloženi su pomoću jednokratnog nosnog konusa, pogodno smještenog preko njuške sediranog psa. Nosni konus vezan je na nebulizator, koji je vezan na vakuumsku pumpu, podešenu na 5,5 to 6,0 psi. U nebulizator je stavljeno 1 ml materijala za izlaganje, te je aerosolizirani materijal za izlaganje primijenjen na svakom psu u trajanju od 4 minute.
Opažanja kašljanja nakon izlaganja su obnovljena prije izlaganja kako bi se bilo u skladu s odredbama USDA. Nakon izlaganje, svaka skupina pasa je opažen između 3. i 10. dana nakon izlaganja, u trajanju od ukupno 8 dana. Životinje opažani su 2 × dnevno na kašalj za približno 45 minuta na svako opažanje period. Interval između perioda opažanja bilo je približno 12 sati. Osoblje bez znanja o naznačenim skupinama za tretman bilježilo je opažanja kašljanja.
Prikupljanje krvi
Krv za aglutinacijske titre prikupljana je prije 1. cijepljenja, mjesečno i prije izlaganja za svaku skupinu.
Krv za procjenu ELISA-e anti-p68 protutijela prikupljana je dan prije cijepljenja br. 1 i br. 2, 50. dana, te u približno 30-dnevnim intervalima nakon toga za svaku skupinu. Krv je također prikupljana dan izlaganja, te konačnog dana opažanja nakon izlaganja.
Krv za ispitivanje na serumski amiloid A (SAA) prikupljana je na dan izlaganja (prije izlaganja), te 1., 3., 5., 7. i 9. dana nakon izlaganja za svaku skupinu.
Ispitivanja provedena na uzorcima
Trahealni brisevi procijenjeni su na prisutnost bakterije B. bronchiseptica u kulturi. Svaki trahealni bris isprugan je na agarsku ploču selektivnu na bakteriju Bordetella. Uključene su pozitivne i negativne kontrole. Ploče su inkubirane na 37,5 ± 2,5°C, u trajanju od 48 ± 4 sati. Nastale kolonije na svakoj ploči uspoređene su s pozitivnom kontrolom, a svaka kolonija koja je izgledala istovjetna s pozitivnom kontrolom daljnje je ispitana kako bi se potvrdilo prisutnost bakterije B. bronchiseptica. Konfirmacijsko ispitivanje uključilo je upotrebu TSI, citratnog i urea-agara i nitratnog crvenog kao medija.
Serumi su procijenjeni za aglutinacijske titre, ELISA p68 analiza ili SAA analiza uz upotrebu sljedećih postupaka:
Aglutinacijski titri: Serumi su serijski razrijeđeni na mikrotitarskim pločama pomoću fiziološke otopine za bakteriju Bordetella. Uključene su i pozitivne i negativne kontrole na svakoj ploči. B. bronchiseptica soj 87 (uzgojen na Bordet Genou agaru, prikupljen, inaktiviran i razrijeđen do 20 % T na 630 nm) upotrijebljen je kao aglutinacijski antigen, te dodan u svaku jažicu. Ploče se trese, te inkubira 2 sata na 35 ± 2 °C. Ploče su očitane nakon 2. inkubacije na sobnoj temperaturi, u trajanju od 22 sata. Konačni titar, određen pomoću posljednje jažice, pokazao je 50 % aglutinaciju.
Titri ELISA-e p68: Rekombinantni p68 antigen uhvaćen je na mikrotitarskoj ploči s 96 jažica, obloženoj poliklonskim antiserumom specifičnim na Bordetella p68 antigen. Serijski 2 × razrjeđenja psećeg seruma dodana su na ploču, te inkubirana. Pozitivne i negativne kontrole u 1:1000 razrjeđenju uključene su na svakoj ploči. Peroksidazom obilježen afinitetno pročišćeni kozji protupseći IgG indikatorski konjugat upotrijebljen je za detekciju protutijela specifičnih za rp68 antigen. Zatim se doda kromogeni supstrat ABTS, a ploču očita kada su jažice za pozitivnu kontrolu imale O.D. od 1,2 ± 0,2. Titar za dani uzorak izračunat je kao recipročna vrijednost posljednjeg razrjeđenja s optičkom gustoćom većom od srednjeg razrjeđenja negativnog kontrolnog seruma uz 5 standardnih devijacija.
SAA titri: Pseći serumski amiloid A uhvaćen je na mikrotitarskoj ploči s 96 jažica, obloženoj s monoklonskim antipsećim SAA protutijelom. Razrijeđeni uzorci psećeg seruma dodani su na ploču, te inkubirani. Dodan je referentni standard kako bi se dobilo standardnu krivulju od 0,31 µg/ml do 20 µg/ml. Doda se biotinom obilježeni konjugat antipsećeg protutijela. Nakon inkubacije biotinom obilježenog antipsećeg protutijela, doda se streptavidin konjugiran s peroksidazom. Doda se kromogeni supstrat TMB, a ploču očita nakon 30 minuta. Koncentraciju serumskog amiloida A odredi se usporedbom uzorka sa standardnom krivuljom, te pomnoži s odgovarajućim faktorom razrjeđenja.
Rezultati
Ukoliko se drugačije ne navede, rezultati su kombinirani podaci iz Skupine I i II.
Kultura trahealnih briseva i aglutinacijski titri
Pozitivni kulture trahealnog brisa i/ili povišeni aglutinacijski titri dokazani su za 11 pasa tijekom ispitivanja. Ovi psi i svaki pas u smještaju s pozitivnim psima uklonjeni su iz ispitivanja, što je rezultiralo gubitkom 20 pasa. Broj pasa uklonjen iz svake skupine bio je: T01: 4 psa, T02: 2 psa, T03: 3 psa, T04: 1 pas, T05: 5 pasa, T06: 5 pasa.
Opažanja injekcijskih mjesta
Reakcije injekcijskog mjesta sažeto su prikazane u Tablicama 22-25. Podaci o injekcijskom mjestu nisu prikupljeni za Psa 81595 21. dana za Skupinu I zbog tehničkog previda. Protokol je obnovljen tako da podaci o reakciji injekcijskog mjesta nisu prikupljeni za pse u Skupini II 22. dana prema tome, sažetak podataka od 22. dana sadrži samo podatke od 8 pasa po skupini za tretman u Skupini I. Reakcije injekcijskog mjesta nisu opažene za svakog psa koji je primio i.m. tretman. Mjerenja injekcijskog mjesta bila su minimalna za obje s.c. cijepljene skupine za tretman (T03 i T05).
Tablica 22
Najmanji kvadrati sredine (cm3) za reakcije injekcijskih mjesta kod pasa nakon cijepljenja fiziološkom otopinom ili Bordetella antigenom p68 (nakon 1. cijepljenjaa)
[image] aCijepljenje br. 1 primijenjeno 0. dana
bstandardna pogreška za sve sredine = 0,64
Tablica 23
Najmanji kvadrati sredine (cm3) za reakcije injekcijskih mjesta kod pasa nakon cijepljenja fiziološkom otopinom ili Bordetella antigenom p68 (nakon 2. cijepljenjaa)
[image] aCijepljenje br. 2 primijenjeno 20. dana
bstandardna pogreška za sredine na taj dan = 0,55
cstandardna pogreška za sredine na taj dan = 0,70
dstandardna pogreška za T06 21. dana = 0,57
Tablica 24
Postotak pasa s mjerljivom reakcijom injekcijskog mjesta nakon cijepljenja fiziološkom otopinom ili Bordetella antigenom p68 (nakon 1. cijepljenjaa)
[image] aCijepljenje br. 1 primijenjeno 0. dana
Tablica 25
Postotak pasa s mjerljivom reakcijom injekcijskog mjesta nakon cijepljenja fiziološkom otopinom ili Bordetella antigenom p68 (nakon 2. cijepljenjaa)
[image] aCijepljenje br. 2 primijenjeno 0. dana
bn = 8 za 22. dan
cn = 14 za T06 21. dana
Značajne razlike u mjerenjima injekcijskog mjesta sažeto su prikazane u Tablici 26. Značajna razlika u mjerenjima injekcijskog mjesta između skupine T01 (fiziološka otopina s.c.) nasuprot skupine T03 (60 µg s.c.) nije opažena 7 dana nakon 1. cijepljenja. Značajna razlika između skupine T01 (fiziološka otopina s.c.) i T05 (15 µg s.c.) nije opažena samo za prvih 4 dana nakon 1. cijepljenja. Značajna razlika opažena je između T03 (60 µg s.c.) i T05 (15 µg s.c.) 3. do 7. dana. Do 14. dana (ponovna 2-tjedna procjena) nikakva razlika nije opažena između bilo koje od skupina.
Značajna razlika (p = 0,0138) u mjerenjima injekcijskog mjesta između skupine T01 (fiziološka otopina s.c.) nasuprot skupine T03 (60 µg s.c.) i T05 (15 µg s.c.) nije opažena 7 dana nakon 2. cijepljenja. Značajna razlika opažena je između T03 (60 µg s.c.) i T05 (15 µg s.c.) on 23. do 27. dana. Do 34. dana (ponovna 2-tjedna procjena) nikakva razlika nije opažena između bilo koje od skupina.
Tablica 26
Vrijednosti signifikantnosti za a priori kontraste između najmanjih kvadrata sredine mjerenja reakcije injekcijskog mjesta
[image] Samo značajni (p < 0,05) kontrasti su prikazani.
Rektalne temperature
Rektalne temperature mjerenja sažeto su prikazani u Tablicama 27 i 28. Protokol je obnovljen tako da podaci o rektalnoj temperaturi nisu prikupljeni za pse iz Skupine II 22. dana, te prema tome sažetak podataka od 22. dana sadrži samo podatke od pasa po skupini za tretman u Skupini I.
Tablica 27
Najmanji kvadrati sredine rektalnih temperatura (°C) kod pasa nakon cijepljenja fiziološkom otopinom ili Bordetella antigenom p68 (nakon 1. cijepljenjaa)
[image] aCijepljenje br. 1 primijenjeno 20. dana.
bstandardna pogreška = 0,09
Tablica 28
Najmanji kvadrati sredine rektalnih temperatura (°C) kod pasa nakon cijepljenja fiziološkom otopinom ili Bordetella antigenom p68 (nakon 2. cijepljenjaa)
[image] aCijepljenje br. 2 primijenjeno 20. dana
bstandardna pogreška = 0,08
cstandardna pogreška = 0,11
Opažena je značajna razlika u rektalnoj temperaturi između skupine T02 (fiziološka otopina i.m.) i T04 (60 µg i.m.) 1. dana nakon 1. cijepljenja. Nije opažena nikakva značajna razlika u rektalnoj temperaturi između bilo kojih skupina bilo kojeg dana nakon 2. cijepljenja.
Titri ELISA-e p68
Podaci prije izlaganja za ELISA-u p68 sažeto su prikazani u Tablici 29. Zbog odgovora pasa iz Skupine I u T06 19. dana, učinak zbog skupine je opažen kod analize podataka za titre ELISA-e p68. Učinak je bio slab i nije utjecao na druge analizirane vremenske točke. Prema tome, podaci iz Skupine I i II su kombinirani radi objavljivanja.
Zbog znatnog titarskog odgovora na p68 kod cijepljenih pasa upotrijebljeni su različiti titracijski minimumi u različitim vremenskim točkama u ispitivanju. Titracije za -1. i 19. dan započete su na 50. Za 50. do 195. dan titracije su započete na 200. Titracije za uzorke prikupljene 201. i 211. dana započete su na 1000. Svaka vrijednost zabilježena kao "manje od" podijeljena je s 2 prije analize. Inkrementni porast opažen za vrijednosti ELISA-e p68 za kontrolne skupine (T01 i T02) tijekom ispitivanja je zbog ovih minimalnih titracijskih vrijednosti. Aglutinacijski titri, izuzev kao što je prethodno navedeno, ostali su < 4.
Svi placebo cijepljeni psi imali su 50. dana titre p68 < 200. Sve životinje cijepljene s p68 pokazale su najmanje četverostruki porast titara nakon drugog cijepljenja (0. dan nasuprot 50. danu) u usporedbi sa životinjama cijepljenim placebom.
Tablica 29
Geometrijska sredina i standardne pogreške konačnih titara ELISA-e p68 kod pasa nakon cijepljenja Bordetella antigenom p68 0. i 20. dana
[image] atitracije za –1. i 19. dan započete su na 50. Svaka vrijednost zabilježena kao "manje od" podijeljena je s 2 prije analize
btitracije za 50. dan započete su na 200. Svaka vrijednost zabilježena kao "manje od" podijeljena je s 2 prije analize
Značajne razlike za najmanje kvadrate sredine titara ELISA-e nakon cijepljenja iznijeti su u Tablici 30. Nikakva značajna razlika u titrima ELISA-e p68 nije opažena između s.c. kontrole i s.c. cjepljenika ili i.m. kontrole i i.m. cjepljenika prije cijepljenja (–1. dan).
Tablica 30
Vrijednosti signifikantnosti za a priori kontraste između najmanjeg kvadrata sredine konačnih titara ELISA-e p68 nakon cijepljenja
[image] Samo značajni (p < 0,05) kontrasti su prikazani.
Titri ELISA-e p68 mjeren tijekom ispitivanja sažeto su prikazani u Tablici 31 i ilustrirani na Slici 3.
Tijekom ispitivanja, učinjeno je sve da se koordinira aktivnosti između Skupine I i II. Za vremenske točke prikupljanja ključnih podataka (tj. pojave oko cijepljenja i izlaganja) to je postignuto. U 3 slučaja tijekom međuispitivanja prikupljanje krvi i trahealnih briseva variralo je za 1 ili 2 dana između skupina. Kako bi se saželo i objavilo podatke za ELISA-u p68 za ovaj međuperiod, podaci od tih dana su kombinirani. Prema tome, 79. dan sadrži kombinirane podatke od 79. dana (Skupina I) i 81. dana (Skupina II), 111. dan odgovara 110. danu (Skupina II) i 111. danu (Skupina I), a 169. dan odgovara 169. danu (Skupina II) i 170. danu (Skupina I). Po protokolu, analiza podataka nije provedena za podatke za ELISA-u p68 nakon 50. dana.
Tablica 31
Sažeti prikaz geometrijske sredine konačnih titara ELISA-e p68 kod necijepljenih i pasa cijepljenih Bordetella antigenom p68 nakon cijepljenja i izlaganja aerosolu s bakterijom Bordetella bronchiseptica
[image] aTitracije 50. do 195. dana započete su na 200. Titracije za uzorke prikupljene 201. i 211. dana započete su na 1000. Svaka vrijednost zabilježena kao "manje od" podijeljena je s 2 prije analize.
bCijepljenje br. 1 i br. 2 primijenjeno je 0., odnosno 20. dana. Izlaganje je primijenjeno 201. dana.
cTijekom ispitivanja učinjeno je sve da se koordinira aktivnosti između Skupine I i II. U 3 slučaja prikupljanje krvi za Skupine variralo je za 1 ili 2 dana. Podaci od tih dana kombinirani su za sažeti prikaz podataka. Analiza nije provedena za vrijednosti titara ELISA-e p68 prikupljene nakon 50. dana. 79. dan odgovara 79. i 81. danu, 110. dan odgovara 110. i 111. danu, a 169. dan odgovara 169. i 170. danu.
Opažanja kašljanja
Izlaganje aerosolu za obje skupine provedeno je 181 dana nakon 2. cijepljenja. Kako bi se udovoljilo odredbama USDA, kriteriji za kašljanje prilagođena su na približno 45-minutna opažanja, s približno 12 sati razmaka, od 3. do 8. dana nakon izlaganja. Opažanja kašljanja sažeto su prikazana u Tablicama 32 i 33.
Tablica 32
Srednji postotak vremenskih točaka kašljanja kod necijepljenih i pasa cijepljenih Bordetella antigenom p68 nakon izlaganja aerosolu s bakterijom Bordetella bronchiseptica
[image]
Tablica 33
Srednji postotak vremenskih točaka kašljanja prema tretmanu kod necijepljenih i pasa cijepljenih Bordetella antigenom p68 nakon izlaganja aerosolu s bakterijom Bordetella bronchiseptica
[image] Postotak smanjenja kašljanja u usporedbi s fiziološkom otopinom kao kontrolom bio je 51,55 % za skupine 15 µg/doza, te 11,09 % za skupine 60 µg/doza. Statistički značajne razlike sažeto su prikazane u Tablici 34.
Tablica 34
Vrijednosti signifikantnosti za a priori kontraste između najmanjih kvadrata sredine postotka vremenskih točaka kašljanja
[image] (Samo značajni (p < 0,05) kontrasti su prikazani.)
Serumski amiloid A
Vrijednosti za SAA određene su 0., 1., 3., 5., 7. i 9. dana nakon izlaganja. Vrijednosti za serumski amiloid A prikazane su u Tablici 35 i predstavljene na Slici 4.
[image]
Značajne razlike u titrima SAA sažeto su prikazane u Tablici 36.
Tablica 36
Vrijednosti signifikantnosti za a priori kontraste između najmanjeg kvadrata sredine titara serumskog amiloida A nakon izlaganja
[image] Samo značajni (p < 0,05) kontrasti su prikazani.
Rasprava
Ispitivanje je tako postavljeno da prikaže sigurnost i 6-mjesečnu djelotvornost rekombinantnog Bordetella p68 cjepiva kod pasa. Dokazana je sigurnost i 15 µg/doza i 60 µg/doza cjepiva. Djelotvornost i 6-mjesečno trajanje imunosti 15 µg/doza dobro su potkrijepljeni u ispitivanju.
Sigurnost je ispitana putem opažanja injekcijskog mjesta i rektalne temperature. Analiza mjerenja reakcija injekcijskog mjesta pokazala je nikakve reakcije za i.m. cijepljene skupine i minimalne reakcije i za 15 µg/doza i za 60 µg/doza s.c. cijepljene skupine. Opažene reakcije obično su bile slabije za 15 µg/doza s.c. cijepljene pse. Takve opažene reakcije bile su prolazne i općenito su izčezle za 14 dana ili prije. Veličina ovih reakcija najvjerojatnije bi prošla neopaženo na psima gdje injekcijska mjesta nisu bila izbrijana. Rektalne temperature nakon cijepljenja nisu bile alarmantne i bile su u normalnim granicama za sve pse u svim skupinama.
Djelotvornost i trajanje imunosti ispitani su 181 dana od cijepljenja uz upotrebu opažanja kašljanja i mjerenja konačnih titara ELISA-e p68. Postotak kašljanja za fiziološke otopine kao kontrole (78,26 %) ukazuje da je izlaganje primijenjeno na ispitivanim životinjama bilo prihvatljivo. Postotak vremenskih točaka kašljanja za 15 µg/doza skupinu (37,92 %) ukazuje na 51,55 % smanjenje kašljanja u usporedbi s kontrolama, čime se zadovoljava kriterije djelotvornosti koje određuje USDA. Nikakva zaštita nije dokazana za 60 µg/doza skupinu (69,58 %), gdje su psi pokazali minimalno smanjenje kašljanja u usporedbi s kontrolama.
Iako to nije statistički usporedivo, iz Tablica 29 i 31 se može vidjeti da s.c. cjepljenici obično imaju višu razinu protutijela kao odgovori u usporedbi s i.m. cjepljenicima. U svrhe rasprave, daljnji komentari u pogledu različitih doznih skupina kombiniraju rezultate i.m. i s.c. načina primjene.
Bez obzira na način primjene, izvrstan odgovor protutijelom na p68 dokazan je za obje cijepljene skupine prema 50. danu i zadržan je kod cjepljenika tijekom ispitivanja. Dobar anamnestički odgovor opažen je za cjepljenike nakon izlaganja.
Usporedba titara ELISA-e p68 za 15 µg/doza i 60 µg/doza tijekom ispitivanja ukazuje da skupina 60 µg/doza pokazuje blago viši titar kao odgovor (Slika 3). Ovaj odgovor, iako izvrstan, ne korelira sa zaštitom nakon izlaganja aerosolu. Titri ELISA-e p68 kao odgovori varirali su kod pasa uklonjenih iz ispitivanja s pozitivnim trahealnim brisevima ili povišenim aglutinacijskim titrima. 3 od 6 kontrola uklonjenih iz ispitivanja s pozitivnim kulturama trahealnog brisa i/ili povišenim aglutinacijskim titrima održavalo je titre ELISA-e p68 < 200. Ovdje očigledno nije bilo korelacija titara ELISA-e p68 s statusom trahealnog brisa ili aglutinacijskog titra za pse uklonjene iz ispitivanja.
Ispitivanje SAA odgovora u pasa cijepljenih i necijepljenih Bordetella antigenom p68 nakon izlaganja ukazuje na mnogo slabiji porast razine vrijednosti za SAA za skupine 15 µg/doza osobito 5. i 7. dana nakon izlaganja.
Zaključci
U ovom ispitivanju djelotvornost 15 µg/doza i 60 µg/doza psećeg Bordetella p68 cjepiva ispitana je pomoću psećeg modela izlaganja 6 mjeseci nakon cijepljenja. Oba cjepiva bila su sigurna, na što ukazuju normalna rektalna temperatura i minimalne reakcije injekcijskog mjesta. Iako i 15 µg/doza i 60 µg/doza cijepljeni psi pokazuju dobar serološki odgovor na cijepljenja, kao što je izmjereno titrima ELISA-e p68, odgovor ne korelira s kliničkom zaštitom kod 60 µg/doza cijepljenih pasa. 60µg/doza cijepljeni psi nisu pokazali značajnu razliku u kašljanju u usporedbi s necijepljenim kontrolama. Dobra djelotvornost 15 µg/doza cjepiva dokazana je za smanjenje kašljanja >50 % u usporedbi s kontrolama. Pretpostavlja se da povišene razine SDS za 60 µg/doza cjepivo mogu rezultirati opaženom razlikom u zaštiti. Usporedba vrijednosti za SAA ukazuje na razliku između cjepljenika i kontrole.
Primjer 4
Sigurnost i djelotvornost cjepiva VANGUARD? Plus 5/CV-L
VANGUARD? Plus 5/CV-L je smrzavanjem osušeni pripravak atenuiranih sojeva CD virusa, CAV-2, CPI virusa, CPV, te inaktiviranih cjelostaničnih kultura bakterija L. canicola i L. icterohaemorrhagiae, uz tekući pripravak inaktiviranog CCV s adjuvansom. Svi virusi razmnožavani su na uspostavljenim staničnim linijama. CPV frakciju atenuira se niskom pasažom na liniji psećih stanica, čime dobije imunogena svojstva koja mogu savladati ometanje od strane majčinskih protutijela u razinama naznačenim u Tablici 38. Tekuća komponenta upotrijebljena je za rehidrataciju smrzavanjem osušene komponente, pakirane s inertnim plinom umjesto vakuuma.
Laboratorijskim procjenjivanjem dokazalo se da VANGUARD? Plus 5/CV-L imunizira pse od bolesti dišnog sustava koju uzrokuju CD, ICH, CAV-2 i CPI, enteritisa kojeg uzrokuju CCV i CPV, te leptospiroze, koju uzrokuju bakterije L. canicola i L. icterohaemorrhagiae, te da nije bilo nikakve imunološke interferencije između frakcija cjepiva. Obimna terenska ispitivanja sigurnosti dokazala su da je sigurno i uglavnom bez reakcije kod pasa starih tek 6 tjedana, u normalnim uvjetima upotrebe.
Također se dokazalo da CAV-2 cjepivo ukriženo štiti od ICH, koju uzrokuju CAV-1. Ispitivanja su dokazala da CAV-2 se samo što štiti od ICH, nego i protiv bolesti dišnog sustava koju uzrokuje CAV-2. Pseći adenovirus tipa 2 kao virus za izlaganje nije nađen kod pasa cijepljenih s CAV-2 u provedenim ispitivanjima.
CPV frakcija VANGUARD? Plus 5/CV-L podvrgnuta je obimnom ispitivanju sigurnosti i djelotvornosti. Pokazalo se da je sigurna i uglavnom bez reakcije u laboratorijskim ispitivanjima i u kliničkim ispitivanjima u terenskim uvjetima. Sigurnost proizvoda daljnje je dokazana ispitivanjem povratnom pasažom, što uključuje oralnu primjenu višestrukih doza cjepivnog soja na podložnim psima, od kojih su svi ostali normalni.
Istraživanje je pokazalo da 3 doze cjepiva s povećanim titrom virusa CPV može savladati serumske neutralizacijske (SN) titre, povezane s majčinskim protutijelima. Drugi autori su dokazali da čak i tako niski serumski neutralizacijski titri kao 1:4 ometaju aktivno imuniziranje konvencionalnim modificiranim živim cjepivima. Kliničko ispitivanje provedeno s 50-oro štenadi stare 6 tjedana [25 cjepljenika (raspon SN titara 4-256) i 25 necijepljenih kontrola (raspon SN titara 4-1024)] (Tablica 37). Skupina cjepljenika koji su primili 3 doze, gdje su cijepljenja primijenjena u razmaku od 3 tjedana, počevši od 6 tjedana starosti. Nakon 1 cijepljenja 13/25 štenadi je pokazalo 4-erostruki ili veći porast SN titra za CPV (seroknverzija) (Tablica 38). 12 od tih 13 štenadi imalo je majčinske SN titre ? 1:16 u vrijeme prvog cijepljenja, dok je preostalo štene imalo SN titar od 1:64. Drugih 9 štenadi s početnim SN titrima između 1:16 i 1:256 serokonvertiralo je nakon 2. cijepljenja. Njihovi SN titri majčinskih protutijela pali su na < 1:64 u vrijeme 2. cijepljenja. Isto tako, posljednjih 3 cjepljenika, s početnim SN titrima od 1:128, serokonvertiralo je nakon 3. cijepljenja, nakon što je njihov titar majčinskih protutijela na CPV pao na ? 1:64. Prema tome, u ovo ispitivanje, kada su dane 3 doze cjepiva, počevši od 6 tjedana starosti, svih 25 cjepljenika, čak i oni s najvišima razinama majčinskih protutijela, bivaju aktivno imunizirani (GM = 1:1176; raspon SN titara 128-4096). Svih 50 pasa izloženo je 3 tjedna nakon 3. cijepljenja heterolognom CPV virusu za izlaganje. 14 od 25 necijepljenih kontrolnih pasa uginulo je ili bilo dovoljno teško bolesno da se dopusti eutanazija, dok su svih 25 cjepljenika ostali uglavnom zdravi. Visokotitrarski, niskopasažni cjepivni virus u VANGUARD? Plus 5/CV-L bio je stoga visoko imunogen i bio sposoban stimulirati aktivnu imunost u prisutnosti majčinskih protutijela.
Djelotvornost CCV frakcije cjepiva VANGUARD? Plus 5/CV-L dokazana je obimnim cijepljenje izlaganje ispitivanje. 16 štenadi 7-8 tjedana starosti cijepljeno je s VANGUARD? Plus 5/CV-L (cjepljenici), a 17 s Vanguard? Plus 5/L (kontrole). Sva štenad primila je 3 doze od 1 ml, u razmacima od 3 tjedna. 3 tjedna nakon 3. cijepljenja štenad je izložena virulentnom soju CCV (CV-6). Klinička opažanja, temperature, težine, te parametri krvi praćeni su 21 dan nakon infekcije. Cjepljenici s CCV-om pokazali su smanjenje pojavnosti proljeva i količine širenja virulentnog CCV u usporedbi s kontrolama. 21. dana nakon izlaganja bojanjem segmenata tankog crijeva fluorescentnim protutijelima za virulentni CCV dokazano je značajno smanjenje (p) opazivih CCV antigena između cjepljenika s CCV-om i kontrola (Tablica 39).
Tablica 37
Početni serumski neutralizacijski (SN) titri kod cjepljenika i kontrola
[image]
[image]
Tablica 39
Bojanje segmenata tankog crijeva fluorescentnim protutijelima 21 dan nakon izlaganja
[image]
Zaključci
U ovom ispitivanju pokazalo se da je kombinacijsko cjepivo koje sadrži CD virus, CAV-2, CPI virus, CPV i inaktivirane cjelostanične kulture bakterija L. canicola i L. icterohaemorrhagiae i CCV, uz dodatak adjuvansa, i sigurno i djelotvorno kao cjepivo prilikom upotrebe na štenadi. Također se pokazalo da kombinacijsko cjepivo savladava serumske neutralizacijske (SN) titre povezane s majčinskim protutijelima.
Primjer 5
Ispitivanje i.m. imunogenosti nativnog Bordetella p68 antigena kod pasa
Životinje
Ispitivanje je uključilo 2 legla SPF biglova i 2 legla pasa različitog podrijetla. Psi su nasumično raspoređeni u cijepljene ili necijepljene skupine. Ispitivanje je uključilo ukupno 10 cijepljenih i 11 necijepljenih pasa.
Priprava eksperimentalnog cjepiva
B. bronchiseptica (soj 110H) prikupi se s 48 sati inkubiranih konfluentnih ploča Bordet-Gengou krvnog agara ispiranjem površine ploče 5-10 ml pufera za toplinsku ekstrakciju. Alternativno se stanice uzgojene u obje kulture (Charlotte Parker Defined Medium) prikupi centrifugiranjem, uz odbacivanje supernatantne frakcije. Prikupljene stanice suspendira se u 25 mM Tris-HCl, pH 8,8, te inkubira 1 sat na 60 °C. Stanični talog odvoji se od toplinskog ekstrakta centrifugiranjem na 20.000 × g, 30 minuta na 4 °C. Natrijev azid (0,01 %) doda se u toplinom ekstrahiranu supernatantnu frakciju, koju se zatim izbistri mikroporoznom filtracijom.
Afinitetna smola za monoklonska protutijela dobije se konjugiranjem monoklonskog protutijela (označenog kao Bord 2-7) na Sepharose? 4B aktiviran s CNBr, uz upotrebu standardnih postupaka. Približno 30,35 mg monoklonskog protutijela konjugira se s 1 g afinitetne smole. Izbistrenu toplinski ekstrahiranu supernatantnu frakciju (gore) i Bord 2-7 afinitetnu smolu pomiješa se u odgovarajućem odnosu od 1 l ekstrakta prema 20 ml smole.
Vezanje nativnog p68 na smolu olakšava se inkubacijom smjese na temperaturi okoliša, uz blago tresenje, preko noći, nakon što se smola slegne, uz odsisavanje supernatantne frakcije. Smolu se zatim pakira u stupac promjera 2,6 cm, a stupac se uzastopce ispere PBS-om, pH 7,5, te 10 mM fosfatnim puferom, pH 8,0, pri brzini protoka od 5 ml/min. Kada apsorbancija na 280 nm dosegne osnovnu razinu, vezani materijal se eluira koristeći 100 mM trietilamin, a frakcije pod jednim velikim pikom apsorbancije od 280 nm se prikupi, te ELISA-om ispita na prisutnost p68. Frakcije koje sadrže p68 se pomiješa, te dijalizira prema PBS-u kao bi se uklonilo trietilamin.
Serijski formulirano eksperimentalno cjepivo formulira se tako da sadrži približno 100 µg pročišćenog p68 i 1 % Al(OH)3 gela. Formalin (0,01 %) upotrijebljen je kao konzervans u volumenu konačne doza cjepiva od 1 ml.
Inokulum za izlaganje
Materijal za izlaganje dobiven je uglavnom na način kao što je opisano u primjerima gore.
Postupak ispitivanja
21 štene, seronegativno i negativno na kulturu, nasumično je raspoređeno u jednu od 2 skupine za tretman. 11 pasa raspoređeno je u necijepljenu, kontrolnu skupinu, a 10 pasa u cijepljenu skupinu. 0. dan naznačen je kao dan 1. cijepljenja. 1 ml cjepiva primijenjen je supkutano 0. dan, te ponovno 21 dan kasnije. Krv je prikupljana za serološku ELISA-u p68 prije 1. i 2. cijepljenja.
35. dana, 14 dana nakon 2. cijepljenja, primijenjeno je izlaganje aerosolu bakterije B. bronchiseptica na sve pse, kao što je opisano gore. Životinje su praćene na kašalj 14 dana nakon izlaganja kao što je opisano u prethodnim primjerima.
Rezultati
Sažeti prikaz kliničkih opažanja i seroloških odgovora na p68 prikazani su u Tablici 40.
[image]
Rasprava
U ovom ispitivanju, 10 od 10 kontrolnih pasa kašljalo je najmanje 2 uzastopna dana. Pas se smatra klinički bolesnim ako kašlje 2 uzastopna dana. Prema ovim kriterijima 100 % necijepljenih kontrolnih pasa su bili bolesni. U cijepljenoj skupini 1 pas kašljao je 4. dan nakon izlaganja, a 1 pas kašljao je 4. i 6. dana nakon izlaganja. 2 psa kašljali su 14. dana. Niti jedan od cijepljenih pasa nije kašljao 2 uzastopna dana. Prema tome, procijenjeno je da je 100 % pasa u skupini cijepljenoj nativnim p68 ostalo normalnima nakon izlaganja.
Zaključci
Ovo ispitivanje dokazuje sposobnost cjepiva s nativnim p68 da štiti od bolesti koju uzrokuje bakterija B. bronchiseptica.
Claims (15)
1. Cjepivni pripravak, naznačen time što sadrži količinu Bordetella bronchiseptica antigena p68 i adjuvansa djelotvornu za zaštitu pasa od bakterije Bordetella bronchiseptica.
2. Cjepivni pripravak prema patentnom zahtjevu 1, naznačen time što navedeni Bordetella bronchiseptica antigen p68 ima aminokiselinski slijed kao što je iznijet u SEQ ID NO: 1 i dobiven je rekombinantno.
3. Cjepivni pripravak prema patentnom zahtjevu 1, naznačen time što navedeni adjuvans sadrži Quil A i kolesterol.
4. Postupak zaštite pasa od bakterije Bordetella bronchiseptica, naznačen time što se sastoji u primjeni na psu cjepivnog pripravka prema bilo kojem od patentnih zahtjeva 1-3.
5. Kombinacijsko cjepivo za imuniziranje pasa od psećih patogena, naznačeno time što sadrži pripravak atenuiranog soja virusa štenećaka (CD), atenuiranog soja psećeg adenovirusa tipa 2 (CAV-2), atenuiranog soja virusa pseće parainfluence (CPI) i atenuiranog soja psećeg parvovirusa (CPV); inaktivirani cjelostanični ili parcijalni pripravak soja psećeg koronavirusa (CCV), Bordetella bronchiseptica protein p68, te adjuvans.
6. Kombinacijsko cjepivo prema patentnom zahtjevu 5, naznačeno time što navedeni Bordetella bronchiseptica antigen p68 ima aminokiselinski slijed kao što je iznijet u SEQ ID NO: 1 i dobiven je rekombinantno.
7. Kombinacijsko cjepivo prema patentnom zahtjevu 5, naznačeno time što navedeni adjuvans sadrži Quil A i kolesterol.
8. Kombinacijsko cjepivo za imuniziranje pasa od psećih patogena, naznačeno time što sadrži pripravak atenuiranog soja virusa štenećaka (CD), atenuiranog soja psećeg adenovirusa tipa 2 (CAV-2), atenuiranog soja virusa pseće parainfluence (CPI) i atenuiranog soja psećeg parvovirusa (CPV), inaktivirani cjelostanični ili parcijalni pripravak soja psećeg koronavirusa (CCV), Bordetella bronchiseptica protein p68, stanični pripravak bakterije Leptospira od najmanje jedne Leptospira vrste, koju se bira iz skupine koju čine Leptospira grippotyphosa, Leptospira icterohaemorrhagiae i Leptospira pomona, te adjuvans.
9. Kombinacijsko cjepivo prema patentnom zahtjevu 8, naznačeno time što navedeni stanični pripravak bakterije Leptospira sadrži stanični pripravak od bakterija Leptospira bratislava, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira icterohaemorrhagiae, te Leptospira pomona.
10. Kombinacijsko cjepivo prema patentnom zahtjevu 8, naznačeno time što navedeni Bordetella bronchiseptica antigen p68 ima aminokiselinski slijed kao što je iznijet u SEQ ID NO: 1 i dobiven je rekombinantno.
11. Kombinacijsko cjepivo prema patentnom zahtjevu 8, naznačeno time što navedeni adjuvans sadrži Quil A i kolesterol.
12. Kombinacijsko cjepivo za imuniziranje pasa od psećih patogena, naznačeno time što sadrži pripravak atenuiranog soja virusa štenećaka (CD), atenuiranog soja psećeg adenovirusa tipa 2 (CAV-2), atenuiranog soja virusa pseće parainfluence (CPI) i atenuiranog soja psećeg parvovirusa (CPV); Bordetella bronchiseptica protein p68, Leptospira bakterin, koji sadrži stanični pripravak od najmanje jedne Leptospira vrste, koju se bira iz skupine koju čine Leptospira bratislava, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira icterohaemorrhagiae i Leptospira pomona; te adjuvans.
13. Kombinacijsko cjepivo prema patentnom zahtjevu 12, naznačeno time što navedeni Leptospira bakterin sadrži stanični pripravak od bakterija Leptospira bratislava, Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira icterohaemorrhagiae, te Leptospira pomona.
14. Kombinacijsko cjepivo prema patentnom zahtjevu 12, naznačeno time što navedeni Bordetella bronchiseptica antigen p68 ima aminokiselinski slijed kao što je iznijet u SEQ ID NO: 1 i dobiven je rekombinantno.
15. Kombinacijsko cjepivo prema patentnom zahtjevu 12, naznačeno time što navedeni adjuvans sadrži Quil A i kolesterol.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US44341803P | 2003-01-29 | 2003-01-29 | |
| PCT/IB2004/000146 WO2004067031A1 (en) | 2003-01-29 | 2004-01-15 | Canine vaccines against bordetella bronchiseptica |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HRP20050660A2 true HRP20050660A2 (en) | 2006-02-28 |
Family
ID=32825327
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HR20050660A HRP20050660A2 (en) | 2003-01-29 | 2005-07-19 | Canine vaccines against bordetella bronchiseptica |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20040185062A1 (hr) |
| EP (1) | EP1592444B1 (hr) |
| JP (3) | JP2006515024A (hr) |
| KR (1) | KR20050103215A (hr) |
| CN (1) | CN1835767A (hr) |
| AR (1) | AR042935A1 (hr) |
| AT (1) | ATE395077T1 (hr) |
| AU (1) | AU2004208556B2 (hr) |
| BR (1) | BRPI0407032A (hr) |
| CA (1) | CA2513352C (hr) |
| DE (1) | DE602004013723D1 (hr) |
| ES (1) | ES2303046T3 (hr) |
| HR (1) | HRP20050660A2 (hr) |
| MX (1) | MXPA05008051A (hr) |
| NO (1) | NO20053734L (hr) |
| PL (1) | PL378001A1 (hr) |
| RU (1) | RU2005124130A (hr) |
| TW (1) | TW200505476A (hr) |
| UY (1) | UY28171A1 (hr) |
| WO (1) | WO2004067031A1 (hr) |
| ZA (1) | ZA200506073B (hr) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050089533A1 (en) * | 2003-01-29 | 2005-04-28 | Joseph Frantz | Canine vaccines against Bordetella bronchiseptica |
| US9023366B2 (en) | 2003-07-01 | 2015-05-05 | The Royal Veterinary College | Vaccine composition for vaccinating dogs against canine infectious respiratory disease (CIRD) |
| JP5393978B2 (ja) * | 2004-04-05 | 2014-01-22 | ゾエティス・ピー・エルエルシー | マイクロ流動化された水中油型乳剤及びワクチン組成物 |
| EP1871410A2 (en) * | 2005-04-07 | 2008-01-02 | Pharmacia & Upjohn Company LLC | Formulations and process for production of bordetella bronchiseptica p68 antigen and vaccines |
| US7682619B2 (en) | 2006-04-06 | 2010-03-23 | Cornell Research Foundation, Inc. | Canine influenza virus |
| BRPI0603490B1 (pt) * | 2006-07-21 | 2018-04-24 | Universidade Federal De Minas Gerais | Vacina recombinante contra a leishmaniose visceral canina |
| EP2377550B1 (en) * | 2006-09-11 | 2015-03-04 | Zoetis P LLC | Heat treated bacterins, and emulsion vaccines prepared from such heat treated bacterins |
| NZ577855A (en) | 2006-12-27 | 2012-07-27 | Pfizer Prod Inc | Vaccination schedule to prevent canine disease |
| PL2134742T3 (pl) * | 2007-02-27 | 2012-10-31 | Zoetis Services Llc | Kompozycje immunogenne do leczenia i profilaktyki zakażeń zwierząt |
| ES2728949T3 (es) * | 2008-06-27 | 2019-10-29 | Zoetis Services Llc | Composiciones adyuvantes novedosas |
| BR112012008861A2 (pt) * | 2009-10-14 | 2019-09-24 | Univ Oklahoma State | parvovírus, vacina, ácido nucleico isolado, composição imunogênica, método para provocar uma resposta imune em um animal contra a infecção por parvovírus, proteína vp-2 de parvovírus purificada, vetor de expressão, e método para exterminar células tumorais em um mamífero. |
| US9381241B2 (en) * | 2010-09-28 | 2016-07-05 | Kyoritsu Seiyaku Corporation | Mucosal adjuvant composition |
| CA2821422C (en) * | 2010-12-22 | 2024-01-02 | Intervet International B.V. | Vaccines comprising live aro mutant bordetella bronchiseptica |
| RU2553222C2 (ru) * | 2011-02-04 | 2015-06-10 | ЗОИТИС ЭлЭлСи | Композиции для лечения и предупреждения комплекса респираторных заболеваний собак |
| EP3858381A1 (en) * | 2011-02-04 | 2021-08-04 | Zoetis Services LLC | Immunogenic bordetella bronchiseptica compositions |
| JP6313752B2 (ja) | 2012-05-31 | 2018-04-18 | ゾエティス・エルエルシー | Ｂ．ブロンキセプチカ（Ｂ．Ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）感染から保護するためのイヌ呼吸器コロナウイルスでのワクチン接種 |
| CZ307883B6 (cs) * | 2013-01-29 | 2019-07-24 | Bioveta, A.S. | Multivalentní vakcína k imunoprofylaxi infekčních onemocnění psů |
| AU2014321369B2 (en) | 2013-09-19 | 2020-04-16 | Zoetis Services Llc | Oil-based adjuvants |
| WO2016115456A1 (en) | 2015-01-16 | 2016-07-21 | Zoetis Services Llc | Foot-and-mouth disease vaccine |
| CN107249629A (zh) * | 2015-02-26 | 2017-10-13 | 生控基因疫苗股份有限公司 | 包含免疫原性蛋白质及组合佐剂并用以诱发抗原特异性t细胞反应的疫苗组合物 |
| CN106399260B (zh) * | 2015-07-31 | 2021-03-02 | 北京大北农科技集团股份有限公司动物医学研究中心 | 一种犬瘟热、细小病毒病二联活疫苗及其制备方法 |
| TW202206098A (zh) * | 2020-08-11 | 2022-02-16 | 美商碩騰服務公司 | 抗冠狀病毒疫苗 |
| IT202100014747A1 (it) * | 2021-06-07 | 2022-12-07 | Consiglio Nazionale Ricerche | Derivati sterolici come nuovi ligandi del recettore dectina-1 nel trattamento terapeutico di patologie correlate a tale recettore |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3950512A (en) * | 1972-07-25 | 1976-04-13 | Pitman-Moore, Inc. | Animal vaccines |
| GB2048669A (en) * | 1979-05-18 | 1980-12-17 | Moskov Nii Virusnykh Preparato | Canine distemper vaccines |
| US4567043A (en) * | 1983-06-15 | 1986-01-28 | American Home Products Corporation (Del.) | Canine corona virus vaccine |
| US4567042A (en) * | 1983-06-15 | 1986-01-28 | American Home Products Corporation | Inactivated canine coronavirus vaccine |
| GB8502399D0 (en) * | 1985-01-31 | 1985-03-06 | Akzo Nv | Canine parvovirus vaccines |
| NZ230747A (en) | 1988-09-30 | 1992-05-26 | Bror Morein | Immunomodulating matrix comprising a complex of at least one lipid and at least one saponin; certain glycosylated triterpenoid saponins derived from quillaja saponaria molina |
| DK0465204T3 (da) * | 1990-07-06 | 2000-10-09 | American Home Prod | Vaccine mod Lyme sygdom |
| GB9106568D0 (en) * | 1991-03-27 | 1991-05-15 | Wellcome Found | Recombinant antigen |
| ZA927037B (en) * | 1991-09-30 | 1993-03-29 | Akzo Nv | Respiratory disease vaccine for cats. |
| JP2521226B2 (ja) * | 1993-01-28 | 1996-08-07 | 株式会社微生物化学研究所 | 犬用多種混合ワクチン |
| UA56132C2 (uk) * | 1995-04-25 | 2003-05-15 | Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. | Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини |
| AUPO517897A0 (en) * | 1997-02-19 | 1997-04-11 | Csl Limited | Chelating immunostimulating complexes |
| GB9718901D0 (en) * | 1997-09-05 | 1997-11-12 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| AU769539B2 (en) * | 1999-01-29 | 2004-01-29 | Zoetis Services Llc | Adjuvants for use in vaccines |
-
2004
- 2004-01-15 JP JP2005518725A patent/JP2006515024A/ja not_active Withdrawn
- 2004-01-15 BR BR0407032-1A patent/BRPI0407032A/pt not_active IP Right Cessation
- 2004-01-15 DE DE602004013723T patent/DE602004013723D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-15 AU AU2004208556A patent/AU2004208556B2/en not_active Expired
- 2004-01-15 WO PCT/IB2004/000146 patent/WO2004067031A1/en active IP Right Grant
- 2004-01-15 RU RU2005124130/15A patent/RU2005124130A/ru not_active Application Discontinuation
- 2004-01-15 CN CNA2004800030872A patent/CN1835767A/zh active Pending
- 2004-01-15 KR KR1020057014122A patent/KR20050103215A/ko not_active Application Discontinuation
- 2004-01-15 MX MXPA05008051A patent/MXPA05008051A/es not_active Application Discontinuation
- 2004-01-15 CA CA2513352A patent/CA2513352C/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-15 AT AT04702384T patent/ATE395077T1/de not_active IP Right Cessation
- 2004-01-15 PL PL378001A patent/PL378001A1/pl not_active Application Discontinuation
- 2004-01-15 ES ES04702384T patent/ES2303046T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-15 EP EP04702384A patent/EP1592444B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-01-27 AR ARP040100232A patent/AR042935A1/es unknown
- 2004-01-28 TW TW093101852A patent/TW200505476A/zh unknown
- 2004-01-28 UY UY28171A patent/UY28171A1/es not_active Application Discontinuation
- 2004-01-29 US US10/767,809 patent/US20040185062A1/en not_active Abandoned
-
2005
- 2005-07-19 HR HR20050660A patent/HRP20050660A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2005-07-28 ZA ZA200506073A patent/ZA200506073B/en unknown
- 2005-08-03 NO NO20053734A patent/NO20053734L/no unknown
-
2006
- 2006-12-20 JP JP2006342944A patent/JP5319882B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2007
- 2007-11-20 US US11/942,843 patent/US7736658B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2011
- 2011-02-17 JP JP2011031652A patent/JP2011137017A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1835767A (zh) | 2006-09-20 |
| NO20053734D0 (no) | 2005-08-03 |
| EP1592444B1 (en) | 2008-05-14 |
| MXPA05008051A (es) | 2005-09-21 |
| US20040185062A1 (en) | 2004-09-23 |
| ZA200506073B (en) | 2006-05-31 |
| TW200505476A (en) | 2005-02-16 |
| CA2513352C (en) | 2010-10-12 |
| EP1592444A1 (en) | 2005-11-09 |
| DE602004013723D1 (de) | 2008-06-26 |
| JP2007161718A (ja) | 2007-06-28 |
| KR20050103215A (ko) | 2005-10-27 |
| ATE395077T1 (de) | 2008-05-15 |
| AU2004208556A1 (en) | 2004-08-12 |
| CA2513352A1 (en) | 2004-08-12 |
| JP2011137017A (ja) | 2011-07-14 |
| US7736658B2 (en) | 2010-06-15 |
| PL378001A1 (pl) | 2006-02-20 |
| JP2006515024A (ja) | 2006-05-18 |
| RU2005124130A (ru) | 2006-01-20 |
| WO2004067031A1 (en) | 2004-08-12 |
| AU2004208556B2 (en) | 2009-06-04 |
| JP5319882B2 (ja) | 2013-10-16 |
| AR042935A1 (es) | 2005-07-06 |
| ES2303046T3 (es) | 2008-08-01 |
| NO20053734L (no) | 2005-10-26 |
| BRPI0407032A (pt) | 2006-01-17 |
| US20080226670A1 (en) | 2008-09-18 |
| UY28171A1 (es) | 2004-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HRP20050660A2 (en) | Canine vaccines against bordetella bronchiseptica | |
| EP1799253B1 (en) | Multivalent canine vaccines against leptospira bratislava and other pathogens | |
| HRP20031079A2 (en) | One dose vaccination with mycoplasma hyopneumoniae | |
| JP2008169207A (ja) | ワクチン投与方法 | |
| US20060251674A1 (en) | Formulations and process for production of Bordetella bronchiseptica P68 antigen and vaccines | |
| AU2012244091A1 (en) | Multivalent canine vaccines against leptospira bratislava and other pathogens | |
| Allam et al. | Use of rabbits as a laboratory model for evaluation of the combined inactivated respiratory virus vaccine (Pneumo-3) adjuvanted by Montanide oil (ISA 206) | |
| JP2008546637A (ja) | ルデテラ・ブロンキセプチカｐ６８抗原及びワクチン製造のための製剤及び製法プロセス |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ODRP | Renewal fee for the maintenance of a patent |
Payment date: 20060116 Year of fee payment: 3 |
|
| A1OB | Publication of a patent application | ||
| ARAI | Request for the grant of a patent on the basis of the submitted results of a substantive examination of a patent application | ||
| OBST | Application withdrawn |