FR3061014A1 - Extrait de fraisier des bois et utilisations - Google Patents
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Abstract
La présente invention concerne un extrait de feuilles et fruits de fraisier des bois de l'espèce Fragaria vesca, obtenu au moyen d'un solvant polaire cosmétiquement acceptable, en particulier un mélange hydroalcoolique. Elle porte également sur ses utilisations notamment pour protéger la peau contre le stress oxydatif et/ou pour stimuler le métabolisme cellulaire de la peau.
Description
Titulaire(s) :
L V M H RECHERCHE.
O Demande(s) d’extension :
(® Mandataire(s) : REGIMBEAU.
(54) EXTRAIT DE FRAISIER DES BOIS ET UTILISATIONS.
(57) La présente invention concerne un extrait de feuilles et fruits de fraisier des bois de l'espèce Fragaria vesca, obtenu au moyen d'un solvant polaire cosmétiquement acceptable, en particulier un mélange hydroalcoolique. Elle porte également sur ses utilisations notamment pour protéger la peau contre le stress oxydatif et/ou pour stimuler le métabolisme cellulaire de la peau.
FR 3 061 014 - A1
i
Extrait de fraisier des bois et utilisations
Domaine de l’invention
La présente invention concerne notamment un extrait de feuilles et de fruits de fraisier des bois de l’espèce Fragaria vesca et son utilisation dans une composition cosmétique, en particulier pour application topique sur la peau, en tant qu’agent protecteur contre le stress oxydant, et/ou agent stimulant le métabolisme cellulaire de la peau.
La peau est la première barrière du corps humain. Elle protège les organes des différences de température, d’humidité, et des agressions de l’environnement extérieur, comme les rayons UV ou les agents polluants. Elle joue également un rôle important dans l’homéostasie, par exemple pour réguler la température corporelle. Cependant, des stimulations chimiques et physiques excessives - exposition au soleil, à la lumière, aux UV, le stress et la pollution -détériorent les fonctions normales de la peau et induisent son vieillissement. Ce vieillissement extrinsèque (vieillissement lié à des facteurs externes) entraîne l’apparition de rides et la formation d’une peau ayant perdu sa fermeté, sa souplesse et son élasticité.
De façon concomitante, le vieillissement intrinsèque, vieillissement « normal » ou chronobiologique, est la conséquence d’une sénescence programmée où interviennent des facteurs endogènes. Ce vieillissement intrinsèque provoque notamment un ralentissement du renouvellement des cellules de la peau, les kératinocytes, ce qui se traduit essentiellement par la réduction du tissu adipeux sous-cutané, l’apparition de fines rides ou ridules, une perte de fibres verticales de la membrane du tissu élastique, et la présence de grands fibroblastes irréguliers dans les cellules de ce tissu élastique.
La présente invention s’intéresse en particulier au vieillissement extrinsèque lié aux agressions de l’environnement extérieur (lumière, rayonnements UV, pollution...), et cherche à en prévenir et/ou atténuer ses effets.
Le stress oxydant est notamment responsable de l’accélération du vieillissement cutané humain. Des radicaux libres et des espèces réactives de l’oxygène (EORs) sont formés au cours du métabolisme cellulaire normal mais également en réponse à des stress physiques et chimiques tels que les UVs ou le peroxyde d’hydrogène (H2O2). Ces effets du stress oxydant sont néfastes pour tous les compartiments et constituants cellulaires (ADN, protéines, lipides...). Ils peuvent également conduire à des rougeurs diffuses sur la peau.
La recherche de nouvelles molécules ou ingrédients actifs utilisables en cosmétique est une nécessité pour pouvoir développer des produits efficaces pour donner un aspect plus jeune à la peau, un teint homogène, sans irrégularité colonelle au niveau de la pigmentation ou de la microcirculation, un teint reflétant sa bonne santé.
Les inventeurs ont justement développé un nouvel extrait de feuilles et de fruits de fraisier des bois de l’espèce Fragaria vesca, la Reine des Vallées, et mis en évidence des performances surprenantes, comme le montrent les tests réalisés sur kératinocytes humains normaux (KHN) et illustrés dans les exemples décrits ci-après. L’extrait de feuilles et de fruits de fraisier des bois de l’espèce Fragaria vesca selon l’invention a notamment six actions clés :
- Action sur le Nrf2 (Nuclear factor E2-related factor 2) en condition basale (sans stress) : l’extrait induit le Nrf2 permettant ainsi d’anticiper les besoins des kératinocytes en termes de défenses et d’énergie ;
- Action sur le Nrf2 en condition de stress (H2O2 ou UVB) : dans ces conditions particulières, l’extrait induit plus fortement le Nrf2 permettant ainsi d’aider la cellule à faire face en termes de défenses et d’énergie ;
- Action sur la production d’énergie cellulaire : l’extrait augmente de façon significative la production d’ATP par les kératinocytes ;
- Action directe sur les espèces radicalaires : l’extrait piège de façon significative les radicaux libres produits par des kératinocytes stressés par H2O2 ;
- Action sur le renforcement de la barrière cutanée : l’extrait augmente de façon significative la quantité de protéines spécifiques impliquées dans la barrière cutanée ; leur présence est un gage de bonne fonction barrière ; et
- Action sur les médiateurs de l’inflammation : l’extrait limite la production de médiateurs de l’inflammation induits par les UVs et contribue ainsi à limiter les rougeurs diffuses.
Etat de la technique
On connaît de l’art antérieur l’effet antioxydant d’extraits hydroalcooliques de fruits de fraisier de l’espèce Fragaria vesca, lié à leur teneur en composés phénoliques, qui diffère selon le génotype des plantes et les conditions de culture (Scalzo et al., Nutrition 21 (2005) 207-213 ; Cheel étal. 2007, Food Chemistry 102 (2007) 36-44). Ces publications scientifiques concluent à l’intérêt de ces extraits de fruits de Fragaria vesca pour la préparation de produits alimentaires antioxydants.
Mais à la connaissance de la Demanderesse, il n’existe pas d’extrait de feuilles et de fruits de fraisier de l’espèce Fragaria vesca, en particulier d’extrait hydroalcoolique de feuilles et de fruits de fraisier de l’espèce de Fragaria vesca, ni leur utilisation dans la préparation d’une composition cosmétique à usage topique, pour prévenir et/ou atténuer les effets du stress sur la peau, et/ou stimuler le métabolisme cellulaire de la peau.
C’est également la première fois que l’on démontre autant de performances complémentaires pour un extrait de fraisier des bois de l’espèce Fragaria vesca, et en particulier un effet sur le facteur de transcription Nrf2, participant ainsi au maintien de l’énergie cellulaire, à la protection contre les stress et au maintien d’une barrière épidermique fonctionnelle.
En effet, Nrf2 agit sur le métabolisme et l’énergie de la cellule : impliqué dans la modulation du métabolisme intermédiaire, Nrf2 facilite le flux du glucose et augmente la régénération de NADPH (co-facteur indispensable aux activités enzymatiques nécessitant de l’énergie). Cette reprogrammation métabolique permettrait en particulier de mieux lutter contre le stress (Hayes étal., 2014, Trends in Biochemical Sciences 2014;39(4): 199-218).
Il est également directement impliqué dans la défense anti-stress. La fixation de Nrf2 sur une zone spécifique de l’ADN (région promotrice) induit la synthèse de nombreux gènes impliqués dans la réponse anti-oxydante, la détoxification des cellules. Nrf2 contribue ainsi également aux processus de réparation et la dégradation des macromolécules endommagées par les stress.
Nrf2 est exprimé dans toutes les couches de l’épiderme et un lien a été observé entre sa concentration et la différenciation épidermique, cette dernière conduisant à la formation de la barrière cutanée (Lee et al, 2014 Archives of Dermatological Research 2014;306:677-82).
Le rôle de Nrf2 est donc majeur dans l’homéostasie cellulaire et la gestion du stress. En l’activant, on participe au bon fonctionnement global de la peau pour un résultat visible à l’extérieur.
Résumé de l’invention
Un premier objet de l’invention vise un extrait de feuilles et fruits de fraisier des bois de l’espèce Fragaria vesca, obtenu au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable.
On parlera indifféremment dans la suite de la description d’extrait de fraisier ou d’extrait de fraisier des bois ou d’extrait de feuilles et de fruits de fraisier de l’espèce Fragaria vesca ou d’extrait de feuilles et de fruits de fraisier des bois de l’espèce Fragaria vesca.
L’extrait selon l’invention pourra être sous forme de poudre (lyophilisée) ou sous forme liquide concentrée ou diluée dans un mélange de solvants polaires (solution d’extrait de fraisier).
Un autre objet de l’invention est une composition cosmétique notamment pour application topique comprenant à titre d’agent actif un extrait de fraisier selon l’invention et au moins un excipient cosmétiquement acceptable.
L’invention porte encore sur l’utilisation, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d’une telle composition, en particulier pour application topique, d’un extrait de fraisier de l’espèce Fragaria vesca selon l’invention, en tant qu'agent actif protecteur du stress oxydatif et/ou stimulant le métabolisme cellulaire de la peau.
On parlera indifféremment dans la description de stress oxydant ou de stress oxydatif.
Un autre objet de l’invention est une méthode de soin cosmétique des matières kératiniques, en particulier de la peau, comprenant l'application sur lesdites matières kératiniques, en particulier la peau du visage et/ou du corps, d’une quantité efficace d’au moins une composition cosmétique comprenant l’extrait de fraisier de l’espèce Fragaria vesca selon l’invention, pour protéger la peau des effets néfastes du stress oxydatif, en particulier des effets des rayonnements UV et/ou des toxines et/ou de la pollution, et/ou pour stimuler le métabolisme cellulaire de la peau, visant notamment à préparer la peau au soleil et/ou prévenir et/ou limiter les effets néfastes des UV, et/ou prévenir les signes du vieillissement cutané extrinsèque, en particulier prévenir et/ou diminuer les rides et/ou ridules, et/ou améliorer l'éclat et/ou l'uniformité du teint, et/ou améliorer la radiance et/ou la transparence de la peau, et/ou améliorer la souplesse et/ou l'élasticité de la peau.
Description détaillée de l’invention
Extrait
Ainsi, selon un premier objet, l'invention concerne un extrait de feuilles et fruits de fraisier des bois de l’espèce Fragaria vesca, obtenu au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable.
Préalablement à l’étape d’extraction elle-même, le matériel végétal constitué des feuilles et fruits de fraisier peut avoir été séché et/ou broyé.
L’extrait peut être préparé par différents procédés d’extraction connus de l’homme du métier.
Selon un mode particulier, l’extrait de fraisier de l’espèce Fragaria vesca est susceptible d'être obtenu par un procédé comprenant les étapes suivantes :
- le broyage des feuilles et des fruits de la plante,
- la dispersion de la matière végétale broyée dans l’eau ou un mélange hydroalcoolique,
- éventuellement l’hydrolyse enzymatique de la dispersion obtenue,
- la séparation des phases soluble et insoluble par filtration,
- l'ajout d’au moins un solvant polaire, de préférence un glycol et
- au moins une filtration.
Avantageusement, l’extraction est de préférence réalisée par mise en contact du matériel végétal sélectionné avec un solvant polaire ou un mélange de solvants polaires. Selon la présente invention, l’expression «solvant polaire» signifie que le solvant a une valeur d’indice de Polarité qui est égale ou supérieure à une valeur de 4. L’indice de polarité est une grandeur calculée sur la base de grandeurs thermodynamiques (de solubilité et de changement d’état) qui met en évidence le caractère plus ou moins polaire d’une molécule. On se reportera, pour les indices de polarité des solvants, à l'article de L.R. SNYDER: Classification of the solvent properties of common liquids ; Journal of Chromatography, 92 (1974), 223-230.
Les solvants polaires préférés sont ceux constitués d’un composé comprenant au moins une liaison covalente polaire de type O-H.
A titre de solvant polaire particulièrement préféré, on choisit un solvant ou un mélange de solvants choisi(s) parmi l’eau, les alcools en tel que l’éthanol, les glycols, tels que l’éthylène glycol, le glycérol, le butylèneglycol et le propylèneglycol, et leurs mélanges.
Selon une mise en œuvre préférée, on extrait le matériel végétal à l’aide d’un mélange hydroalcoolique, avantageusement un mélange d’eau et d’éthanol.
En particulier, on extrait le matériel végétal à l’aide d’un solvant constitué d’eau et d’éthanol, l’éthanol représentant de 50% v/v à 99% v/v du mélange eau/éthanol.
De préférence on extrait le matériel végétal à l’aide d’un mélange comprenant 30% v/v d’eau et 70%v/v d’éthanol.
Selon un mode préféré de l’invention, l’extrait de fraisier de l’espèce Fragaria vesca est obtenu par extraction hydroalcoolique des feuilles et des fruits de ladite plante.
L’extraction peut être menée à chaud par reflux ou bien par macération à température ambiante.
On utilise avantageusement les ultrasons en cours d’extraction afin d’améliorer le rendement massique de ladite extraction.
Le procédé d’extraction comprend avantageusement une étape de filtration visant à séparer la phase liquide du matériel végétal épuisé.
On peut reproduire le cycle d’extraction puis filtration, plusieurs fois afin d’épuiser le matériel végétal des substances ayant une affinité pour le solvant d’extraction
Le procédé d’extraction peut également comprendre au moins une étape de décoloration et/ou de purification, par exemple sous la forme d’un traitement de l’extrait par une solution d’au moins un solvant polaire en présence de particules de charbon actif. On élimine ainsi notamment la chlorophylle extraite par le solvant.
Le procédé d’extraction peut en outre être complété par une étape d’élimination partielle ou totale des solvants d’extraction.
On peut avantageusement concentrer l’extrait en éliminant une partie du solvant ou du mélange du solvant d’extraction.
On peut ainsi obtenir un concentré aqueux dépourvu d’une quantité significative de solvants organiques ou bien encore, en éliminant tout le solvant d’extraction, obtenir un résidu sec.
De manière avantageuse, on concentre l’extrait de feuilles et fruits de fraisier en éliminant l’éthanol, de façon à obtenir un extrait aqueux pouvant comprendre jusqu’à 35% en poids, en particulier de 25 à 30% en poids de matière sèche par rapport au poids total de l’extrait.
En particulier, le ratio pondéral feuilles/fruits dans l’extrait sec de fraisier va de 15/1 à 5/1, de préférence de 12/1 à 8/1, et est de préférence de 10/1.
De façon alternative, le produit de l’étape d’extraction peut être, lyophilisé ou atomisé pour se présenter sous la forme d’une poudre.
L’extrait végétal polaire tel que décrit précédemment peut être utilisé dans une composition cosmétique sous la forme d’une poudre ou bien être remis en solution ou en suspension dans au moins un solvant cosmétiquement acceptable, qui peut être identique ou différent de celui ayant servi à l’extraction.
Selon une variante préférée, l’extrait concentré de feuilles et fruits de fraisier est remis en solution dans un mélange d’eau et de butylène glycol. On parlera de solution d’extrait de fraisier selon l’invention.
Selon un mode préféré, la solution d’extrait de fraisier selon l’invention comprend une teneur de 7 à 15% en poids de matière sèche dans un mélange d’eau et de butylène glycol.
Un extrait de fraisier particulier de l’invention sous forme de solution d’extrait de fraisier, comprend 12,5% en poids de matière sèche (et notamment 1,25% fruits et 11,25% de feuilles), 37,5% d’eau et 50% de butylène glycol.
L’extrait de fraisier selon l’invention est notamment caractérisé en ce qu’il comprend :
(i) Des polyphénols en une teneur allant de 15 à 20% en poids par rapport au poids de la matière sèche ;
(ii) et au moins un composé choisi parmi des sucres, des minéraux et oligoéléments, des acides aminés, et leurs mélanges.
Selon un mode préféré, l’extrait de fraisier selon l’invention est caractérisé par une composition intrinsèque comprenant :
• un taux important de polyphénols (15 à 20 % de la matière sèche), parmi lesquels des flavonoïdes glycosylés tels que la quercétine et le kaempferol ; la quantification de ces flavonoïdes serait encore en cours d’analyse ;
• des sucres, parmi lesquels le glucose, le fructose, le saccharose ;
• des minéraux et d’oligo-éléments, parmi lesquels du calcium, du potassium, du magnésium ;
• des vitamines, parmi lesquelles les vitamines B1, B2, B3, B5, B6, et C ;
• des acides aminés, parmi lesquels l’acide aspartique, l’acide glutamique, la proline, l’alanine;
• des anthocyanes.
On pourra utiliser alternativement les formes poudre, liquide concentré ou liquide dilué (solution d’extrait) de l’extrait de feuilles et de fruits de fraisier des bois dans la préparation de compositions cosmétiques.
Selon un mode particulier et préféré de l’invention, on utilisera l’extrait de fraisier des bois selon l’invention sous forme de solution d’extrait de fraisier des bois dans la préparation de compositions cosmétiques.
Galénique
L’invention porte également sur une composition cosmétique, de préférence pour application topique, comprenant à titre d’agent actif un extrait de fraisier des bois selon l’invention et au moins un excipient cosmétiquement acceptable.
Par ‘excipient cosmétiquement acceptable’, on entend une substance dépourvue d’effet cosmétique en tant que telle, mais utile à l’incorporation de l’agent actif dans la composition cosmétique ou à la mise en forme de ladite composition.
L’excipient est avantageusement choisi parmi des pigments, des colorants, des polymères, des agents tensioactifs, des agents de rhéologie, des parfums, des électrolytes, des ajusteurs de pH, des agents anti-oxydants, des filtres UV des conservateurs, et l’un quelconque de leurs mélanges, et de façon optionnelle en outre au moins un autre agent actif cosmétique.
Ladite composition comprend une quantité efficace d’extrait de fraisier des bois selon la présente invention pour obtenir l’effet recherché.
L’extrait de fraisier des bois selon l’invention est avantageusement présent à titre d’agent actif dans la composition selon une teneur comprise entre 0,1 et 5% en poids de matière première par rapport au poids total de la composition, préférentiellement de 0,5 à 2 % en poids de matière première par rapport au poids total de la composition totale, pour une matière première préférée comprenant 12,5% d’extrait sec et 87,5% de solvant polaire comme décrit précédemment (solution d’extrait de fraisier).
L’extrait de fraisier des bois selon l’invention est avantageusement présent à titre d’agent actif dans la composition selon une teneur comprise entre 0,01 et 1% en poids d’extrait sec par rapport au poids total de la composition, préférentiellement de 0,05 à 0,5 %, et de préférence encore de 0,0625% à 0,25% en poids d’extrait sec par rapport au poids total de la composition totale.
La composition selon l’invention est avantageusement destinée à une application topique sur les matières kératiniques, en particulier sur la peau.
Par ‘matières kératiniques’, on entend les lèvres, la peau et ses phanères (ongles, cils, cheveux), en particulier la peau.
ίο
La composition selon l’invention peut notamment se présenter sous la forme d’une émulsion eau-dans-huile, d’une émulsion huile-dans-eau, d’un gel aqueux, d’un sérum, d’une lotion, d’une crème d’un masque, d’un stick, ou d’un patch.
En particulier, la composition selon l’invention pourra être un sérum, une crème, une lotion ou un masque.
La composition selon l’invention pourra être un produit de soin et/ou de maquillage des matières kératiniques, en particulier de la peau.
Les compositions comprenant l’extrait de fraisier selon l’invention, comprennent avantageusement au moins un autre agent actif cosmétiquement acceptable.
Ainsi, les compositions qui comprennent l’extrait de fraisier des bois selon l’invention peuvent en outre comprendre un ou plusieurs autres agents actifs pouvant être choisis parmi les substances ayant une activité éclaircissante de la peau ; les substances ayant une activité hydratante ; les substances ayant une activité calmante, apaisante ou relaxante ; les substances ayant une activité stimulant la microcirculation cutanée pour améliorer l'éclat du teint, en particulier du visage ; les substances ayant une activité sébo-régulatrice pour le soin des peaux grasses; les substances destinées à nettoyer ou purifier la peau ; les substances ayant une activité anti-radicalaire ; les vitamines ; les substances destinées à atténuer ou retarder les effets du vieillissement de la peau, en particulier la formation de rides, par une activité visant à favoriser le maintien de la structure de la peau et/ou à limiter la dégradation de la matrice extracellulaire des couches superficielles du derme et de l’épiderme et/ou à obtenir un effet protecteur, correcteur ou restructurant de la peau, et leurs mélanges.
Selon un mode particulier de l’invention, la composition cosmétique de l’invention comprend au moins un extrait de fraisier des bois selon l’invention et au moins un actif cosmétique choisi parmi les substances ayant une activité éclaircissante de la peau, des vitamines, et leur mélange.
Ainsi et pour compléter le bénéfice de l’extrait de feuilles et de fruits de fraisier des bois, on choisira préférentiellement l’association avec :
- des extraits de mûrier blanc (Morus alba), de concombre (Cucumis sativus) et d’hibiscus (Hibiscus sabdarifa) combinant les activités biologiques requises pour obtenir un teint plus clair et plus uniforme en agissant de concert pour diminuer la synthèse de mélanine, favoriser son transfert et accélérer son élimination ;
- un sel de phosphate de vitamine C et E, dérivé stable de ces 2 vitamines essentielles pour la peau, et leurs mélanges..
Utilisations
L’invention porte encore sur l’utilisation, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d’une telle composition, d’un extrait de fraisier des bois de l’espèce Fragaria vesca selon l’invention, en tant qu'agent actif protecteur du stress oxydatif, en particulier des effets des rayonnements UV et/ou des toxines et/ou de la pollution, et/ou pour stimuler le métabolisme cellulaire de la peau, visant notamment à préparer la peau au soleil et/ou prévenir et/ou limiter les effets néfastes des UV, et/ou prévenir les signes du vieillissement cutané extrinsèque, en particulier prévenir et/ou diminuer les rides et/ou ridules, et/ou améliorer l'éclat et/ou l'uniformité du teint ; et/ou améliorer la radiance et/ou la transparence de la peau; et/ou améliorer la souplesse et/ou l'élasticité de la peau.
Selon un mode particulier, l’invention vise l’utilisation, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d’une telle composition, d’un extrait de fraisier des bois de l’espèce Fragaria vesca selon l’invention, en tant qu'agent actif protecteur du stress oxydatif, en particulier des effets des rayonnements UV et/ou des toxines et/ou de la pollution.
Selon un autre mode particulier, l’invention vise l’utilisation, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d’une telle composition, d’un extrait de fraisier des bois de l’espèce Fragaria vesca selon l’invention, en tant qu'agent pour stimuler le métabolisme cellulaire de la peau.
En particulier, l’invention vise l’utilisation, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d’une telle composition, d’un extrait de fraisier des bois de l’espèce Fragaria vesca selon l’invention, pour préparer la peau au soleil et/ou prévenir et/ou limiter les effets néfastes des UV.
En particulier, l’invention vise l’utilisation, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d’une telle composition, d’un extrait de fraisier des bois de l’espèce Fragaria vesca selon l’invention, pour prévenir les signes du vieillissement cutané extrinsèque, en particulier prévenir et/ou diminuer les rides et/ou ridules.
En particulier, l’invention vise l’utilisation, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d’une telle composition, d’un extrait de fraisier des bois de l’espèce Fragaria vesca selon l’invention, pour améliorer l'éclat et/ou l'uniformité du teint; et/ou améliorer la radiance et/ou la transparence de la peau.
En particulier, l’invention vise l’utilisation, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d’une telle composition, d’un extrait de fraisier des bois de l’espèce Fragaria vesca selon l’invention, pour améliorer la souplesse et/ou l'élasticité de la peau.
Un autre objet de l’invention est une méthode de soin cosmétique des matières kératiniques, en particulier la peau, caractérisée en ce qu'elle comprend l'application sur lesdites matières kératiniques, en particulier la peau du visage et/ou du corps, d’une quantité efficace d’au moins une composition cosmétique selon l’invention.
La méthode de soin cosmétique selon l’invention vise notamment à protéger la peau contre le stress oxydatif, en particulier des effets des rayonnements UV et/ou des toxines et/ou de la pollution, et/ou pour stimuler le métabolisme cellulaire de la peau, visant notamment à préparer la peau au soleil et/ou prévenir et/ou limiter les effets néfastes des UV, et/ou prévenir les signes du vieillissement cutané extrinsèque, en particulier prévenir et/ou diminuer les rides et/ou ridules, et/ou améliorer l'éclat et/ou l'uniformité du teint ; et/ou améliorer la radiance et/ou la transparence de la peau ; et/ou améliorer la souplesse et/ou l'élasticité de la peau.
D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront clairement à la lumière des exemples, donnés simplement à titre d'illustration et qui ne sauraient donc en aucune façon limiter la portée de l'invention.
Dans les exemples, tous les pourcentages sont donnés en poids, la température est en degrés Celsius, sauf indication contraire.
FIGURES
Figure 1 : Représentation graphique de l’effet de l’extrait de feuilles et fruits de Fragaria vesca sur la translocation nucléaire de NRF2, en conditions de stress oxydant.
Figure 2 : Représentation graphique de l’effet de la production de H2O2 sur la production d’EORs sur les milieux testés sans actifs (témoins)
Figures 3 : Représentation graphique de l’effet antioxydant (diminution significative de la production d’EORs) de l’extrait de feuilles et fruits de Fragaria vesca, en condition de stress oxydant.
Figure 4 : Représentation graphique de l’effet anti-MMP de l’extrait de feuilles et fruits de Fragaria vesca, en condition de stress UV.
Figure 5 : Représentation graphique de l’effet apaisant (diminution de la production d’IL-8) de l’extrait de feuilles et fruits de Fragaria vesca, en condition de stress UV.
Figure 6 : Représentation graphique de l’effet apaisant (diminution de la production d’e TGF-
a) de l’extrait de feuilles et fruits de Fragaria vesca, en condition de stress UV.
Figure 7 : Représentation graphique de l’effet l’extrait de feuilles et fruits de Fragaria vesca, sur la synthèse d’ATP et l’activité mitochondriale dans des Kératinocytes Humains Normaux.
EXEMPLES
Exemple 1 : Préparation d’extraits de feuilles et de fruits de Fragaria vesca.
On a préparé un extrait à partir de feuilles et de fruits de fraisier des bois de l’espèce Fragaria vesca.
Après récolte, cette matière végétale est séchée puis broyée.
On utilise pour la préparation de l’extrait, un mélange de feuilles et fruits comprenant 90% en poids de feuilles et 10% en poids de fruits, les pourcentages étant exprimés par rapport au poids de matériel végétal à extraire.
On réalise une extraction solide-liquide à l’aide d’un solvant polaire. On extrait le matériel végétal à reflux pendant une heure sous agitation dans un mélange éthanol/eau (70/30 v/v).
L’extrait est filtré pour éliminer le résidu végétal, puis on reproduit à nouveau une deuxième fois le cycle, de façon à optimiser le rendement. Le résidu végétal épuisé est éliminé après l’étape de filtration.
Le rendement massique après extraction est d’environ 25% en poids par rapport au poids de matériel végétal sec mis en œuvre.
L’extrait obtenu après filtration est décoloré à l’aide de charbon actif, pour éliminer la chlorophylle, d’autres pigments ou encore des métaux. Le filtrat récupéré est limpide.
On concentre l’extrait en éliminant l’éthanol pour récupérer un concentré aqueux. Le concentré aqueux est filtré sur plaque 1 micromètre pour éliminer les résidus solides éventuels.
Pour l’évaluation in vitro des activités de l’extrait de fraisier obtenu dans le présent exemple, on met en solution ledit extrait dans un mélange de butylène glycol et d’eau jusqu’à obtenir un taux de matière sèche compris entre 10 et 15% en poids.
La solution d’extrait de fraisier évaluée dans les tests décrits ci-après comprend 12,5% de matière sèche, 37,5% d’eau et 50% de butylène glycol.
L’extrait selon l’invention contient des sucres (glucose, saccharose et fructose). Il contient également des polyphénols, des minéraux, et en quantité plus faible des vitamines, des acides aminés.
On caractérise les polyphénols par une méthode chromatographique (colonne greffée C18, Agilent Pursuit XRS C18 250*4.6mm, diamètre 5pm) avec une détection UV à
280nm et 365nm). Les composés détectés sont principalement des ellagitanins et des acides phénoliques, mais aussi des flavonols et des flavanolols.
Les polyphénols constituent environ 15% en poids de l’extrait sec.
Exemple 2 : Effet protecteur de l’extrait de feuilles et fruits de Fragaria vesca contre les stress extérieurs (UV, pollution, stress oxydant.
2.1. Effet de l’extrait sur certaines voies métaboliques
2.1.1 Effet sur l’expression NRF2 (défense contre les effets du stress)
L’étude est réalisée sur une culture monocellulaire des cellules de kératinocytes humains normaux (KHN) issues de plastie abdominale d’un donneur féminin de 31 ans. Les cellules ont d’abord été ensemencées dans du milieu Epilife complet (supplémenté en HKGS) à passage 5 (P5), à une densité de 10 000 cellules par puits, dans des plaques 96 puits et incubées à 37°C 5% de CO2. A 80% de confluence,
Les kératinocytes sont prétraités par l’extrait de feuilles et de fruits préparé à l’exemple 1 (solution d’extrait de fraisier), utilisés à des concentrations de 0.025% ou 0.05% pendant 16 heures, puis traités avec une solution oxydante (extrait de fraisier à 0.025% ou 0.05% + H2O2100μΜ, 5minutes 4°C) ou soumises à une irradiation UVB (50mJ/cm2), et enfin traitées à nouveau par l’extrait de fraisier (0.025% ou 0.05%) pendant 1h et 2h après le stress oxydant H2O2, et 2h après l’irradiation UVB. Un marquage immunologique au NRF2 est ensuite réalisé et analysé par criblage haut débit (mesure de l’intensité de l’expression de NRF2/ noyau).
Les résultats sont présentés à la Figure 1. Le traitement des kératinocytes induit une augmentation significative de l’expression de NRF2 dans le noyau de façon dose dépendante (+4.9% et +10.5%) dans les cellules non soumises à un stress, comparativement aux cellules non traitées. Cette augmentation et significativement accentuée en condition de stress (oxydant H2O2 et irradiation UVB).
L’extrait de fraisier selon l’invention appliqué sur la peau permet donc de lutter contre les effets du stress et renforcer les défenses intrinsèques de la peau.
2.1.2 Effet anti-oxydant (anti- radicaux libres)
L’étude des propriétés anti-oxydantes (anti- radicaux libres) de l’extrait de feuilles et de fruits de fraisier préparé à l’exemple 1, a été réalisée à l’aide d’un effectué à l’aide d’une sonde
H2DCF-DA fluorescente, permettant la quantification des espèces réactives de l’oxygène EORs formées en présence d’un stress oxydant à l’H2O2.
La sonde Dichlorodihydrofluorescéine Diacétate (H2DCF-DA) est une sonde perméable et stable utilisée pour la détection des EORs. Lorsqu’elle est utilisée dans une application cellulaire, les groupements acétate sont clivés par les estérases membranaires. On obtient alors le produit dichlorodihydrofluorescéine (H2DCF) non fluorescent, mais dont le produit de réaction avec les EORs générera une entité fluorescente. La répartition de ce dérivé fluorescéine est cytoplasmique. Lorsque la sonde non fluorescente rencontre des EORs (non spécifique d’un type d’EORs) ou du NO, celle-ci est oxydée en un produit fluorescent, la dichlorofluorescéine (DCF). La fluorescence est détectée aux longueurs d’ondes suivantes : Âex=504nm et Âem=529nm.
Ce test permet donc de mettre en évidence le pouvoir antioxydant d’un actif, en montrant sa capacité à diminuer la production d’EORs au sein de la cellule, en situation de stress par rapport à un témoin non traité soumis à ce même stress.
Les kératinocytes humains normaux sont prétraités pendant 24 heures par l’extrait de feuille et fruits de fraisier à la dose de 0,05%, ainsi que par 2 réactifs utilisés comme témoins positifs (Idebenone dans DMSO, Sigma, ΊΟμΜ; et (+)-Y-Tocopherol dans éthanol, Sigma, 25μΜ). En parallèle, les cellules sont également traitées avec le témoin excipient respectif de chaque actif/réactif testé.
Tous les traitements sont effectués en double ; en effet, une partie ne subira pas de stress H2O2 alors que l’autre subira ce stress.
Après 21 heures de traitement avec les différents actifs/réactifs et leur excipient associé, dans du milieu Epilife complémenté en HKGS, le milieu est éliminé, puis elles sont retraitées de la même façon dans du milieu sans HKGS pendant 3 heures (afin d’éviter la présence d’estérases qui déacétyleraient spontanément la sonde).
Après deux rinçages des microplaques avec du milieu Epilife sans HKGS, 200pL de la sonde H2DCF-DA (Sigma) préparée à 50μΜ en milieu Epilife sans HKGS à partir d’une solution mère à 50mM dans du DMSO, sont déposés dans chacun des puits. Les microplaques sont placées à 37°C sous agitation pendant 45 minutes.
A la suite de cette incubation, les cellules sont rincées 2 fois avec du milieu Epilife sans
HKGS avant de recevoir le système générateur d’EORs :
Les cellules sont traitées avec les actifs/réactifs en présence d’H2O2 ΊΟΟμΜ (Sigma) L’autre moitié est traitée avec les actifs sans H2O2100μΜ.
Les cellules sont placées à 37°C 5%CO2 pendant 20 minutes. A la suite de cette incubation, une lecture de la fluorescence est effectuée à l’aide du FLUOstar BMGLabtech (Gain = 1500, 485-535nm).
Après lecture des microplaques, elles sont rincées 2 fois au PBS pour un dosage protéique ultérieur par la méthode du BCA.
Les résultats de fluorescence obtenus (RFU) sont alors normalisés par la quantité de protéines dans chaque puits (en pg).
Une analyse statistique est effectuée, consistant en un calcul de la moyenne, de l’écart type et de l’intervalle de confiance (a = 0,05) de la fluorescence mesurée (RFU) normalisée par la quantité de protéines par puits (pg).
Les résultats sont présentés en moyenne sur n=6 avec les intervalles de confiance. Le test t de Student a été utilisé pour comparer l’effet entre les cellules traitées et non traitées. Les résultats sont considérés comme significatifs pour p<0,05.
Les résultats sont présentés aux Figure 2 et Figure 3 :
L’induction de ROS sans traitements d’actifs est vérifiée. Les différents excipients des actifs/réactifs étudiés, sont testés. Le traitement des cellules par 100pM d’H2O2 induit significativement la production d’EORs par rapport à des KHN non stressés, quel que soit l’excipient utilisé et ce, avec une moyenne de 98%.
Les témoins sont ceux utilisés dans l’analyse des résultats des actifs/réactifs testés dans cette étude. En effet, chaque actif ou réactif testé a été comparé à son témoin excipient respectif.
Cette étude est validée par l’induction significative de la production d’EORs en présence d’H2O2 dans des KHN par rapport au témoin sans H2O2.
De plus, les 2 témoins positifs antioxydants utilisés, permettent tous une diminution significative de la production d’EORs en condition de stress oxydant, par rapport au témoin H2O2.
Ces résultats montrent que l’extrait de feuilles et de fruits de fraisier à la dose de 0,05%, est capable de présenter une très bonne activité anti-oxydante en absence de stress oxydant (-47,5%) et encore plus en présence de stress oxydant (-74,1%).
2.1.3 Effet anti-MMP (fermeté et élasticité de la peau)
L’effet d’un extrait de feuilles et de fruits de fraisier a été évalué sur l’expression de différentes protéines responsables de la dégradation de la matrice extracellulaire, les MMPs (Matrix Metalloproteinases), afin de mettre en évidence une activité protectrice anti-âge.
La MMP-2 est plutôt exprimée par les fibroblastes, notamment pendant les phases de développement et de régénération cellulaire ou tissulaire. Elle dégrade préférentiellement le collagène de type IV, constituant majeur de la membrane basale et du collagène dénaturé. La MMP-1 est un pivot central répondant fortement à un stress UV via le facteur de transcription AP-1, et est donc impliquée dans de nombreuses réactions en cascade, que ce soit au niveau du derme ou de l’épiderme par effet paracrine entre les cellules qui les constituent respectivement.
Ces protéines impliquées dans la dégradation de la matrice extracellulaire jouent un rôle important sur la structure de la peau et sa fermeté, notamment sous différents stimuli ou agressions extérieures comme les rayonnements UVs, ou encore avec l’âge.
Pour évaluer l’efficacité de cet extrait, nous avons utilisé la technologie Luminex pour doser simultanément l’expression protéique de 3 MMPs, à savoir la MMP-1, MMP-2 et MMP-10, sécrétées par des kératinocytes humains normaux, après stimulation par les UVB (24 ou 48 heures de traitement).
Les Kératinocytes humains normaux (KHN), issus d’une plastie abdominale, sont utilisées à 60 % de confluence dans le milieu Epilife complet, à passage 5 (P5), avec une densité d’ensemencement de 150 000 cellules par puits, dans des plaques 12 puits.
Après 24 heures de culture des KHN, le milieu de culture est éliminé et remplacé par du
PBS pour réaliser l’irradiation aux UVB 25 mJ/cm2. Du milieu neuf contenant les différents traitements (extrait, témoin solvant, témoin positif) est alors ajouté par la suite.
Après 24 ou 48 heures de traitement, les surnageants cellulaires sont récupérés et congelés à -20°C, afin de pouvoir réaliser les dosages protéiques par la suite par la technologie Luminex utilisant la technologie ELISA tout en utilisant le fonctionnement de la cytométrie en flux. Les 2 techniques combinées ensemble permettent de doser simultanément plusieurs cibles protéiques d’intérêt, dans un minimum de volume d’échantillons.
En effet, des anticorps spécifiques aux analytes à doser sont préalablement adsorbés sur des microsphères fluorescentes. Pendant l’incubation avec les surnageants de culture, les analytes présents dans le milieu vont se fixer sur leurs anticorps. Après rinçage, un anticorps de détection biotinylé est ajouté, suivie de l’incubation avec la streptavidine-phycoérythrine qui va interagir avec la biotine.
Après un second rinçage, l’ajout du liquide de gaine et aspiration d’un minimum de volume d’échantillon via l’aiguille du système d’analyse, deux lasers permettent de détecter d’une part la fluorescence spécifique de chaque bille (correspondant à un analyte particulier) et d’autre part la coloration de chaque anticorps marqué (coloration proportionnelle à la quantité fixée).
Le dosage a été réalisé au moyen d’un kit de dosage Millipore selon les préconisations du fournisseur.
Une gamme est préparée pour chaque analyte à doser, afin de pouvoir réaliser des courbes de calibration. Le système peut alors calculer directement la concentration en pg/mL de chaque analyte présent dans les surnageants de culture. La concentration est alors exprimée en picogramme de MMP par millilitre de milieu. Le test de Student est appliqué (les résultats sont considérés comme significatifs pour p<0,05)
Les résultats sont présentés à la Figure 4 :
Nous avons pu démontrer une cinétique d’expression de la MMP-1, son taux augmentant de 56% entre 24 et 48 heures après stimulation aux UVB.
L’extrait de fraisier préparé à l’exemple 1 présente une très forte activité inhibitrice de l’expression protéique de la MMP-1, quelle que soit la condition de traitement réalisée et toujours de manière significative (-80% et -68% à 24 heures, -91% et -75% à 48 heures). Il est efficace dès 24 heures, et dès la concentration de 0.025%.
De la même manière que pour la MMP-1, l’extrait de fraisier préparé à l’exemple 1 présente une activité inhibitrice de l’expression protéique de la MMP-2, quelles que soient les conditions de traitement (-36% et -32% à 24 heures, -71% et -64% à 48 heures).
Nous avons pu démontrer une cinétique d’expression de cette MMP-1, son taux augmentant de 85% entre 24 et 48 heures après stimulation aux UVB.
L’extrait de fraisier préparé à l’exemple 1 présente une activité inhibitrice de l’expression protéique de la MMP-10 à 0.05% et après 48 heures de traitement (-72% de la production de MM P-10).
Ces résultats montrent que l’extrait de fraisier selon l’invention présente une activité inhibitrice de la production de 3 métalloprotéinases UV-induites, à savoir MMP-1, MMP-2 et MMP-10, à la dose de 0.05%.
Cet ingrédient est donc intéressant pour son activité protectrice envers les effets néfastes environnementaux type UVs, en jouant tout particulièrement un rôle sur 3 protéines majeures impliquées dans la dégradation de la matrice extracellulaire.
2.1.4 Effet inhibiteur cytokines (apaisant)
L’effet de l’extrait de feuilles et de fruits de fraisier préparé à l’exemple 1 sur l’expression de marqueurs de l’inflammation, les cytokines, a été mesuré, afin de mettre en évidence une activité apaisante via des propriétés anti-inflammatoires.
Les cytokines appartiennent à un groupe de protéines solubles agissant comme des régulateurs, que ce soit en conditions normales, en conditions pathologiques ou de stress. Ces protéines sont des médiateurs de l’inflammation, agissant sur les interactions cellulaires et induisant des phénomènes de réaction en cascade via différentes voies de signalisation, notamment suite à différents stress ou agressions extérieures, comme les rayonnements UVs. Elles jouent un rôle prépondérant dans les désordres inflammatoires chroniques et dans le vieillissement cutané.
L’efficacité de l’extrait de fraisier (0.05 et 0.025%) a été évaluée en utilisant la technologie
Luminex pour doser simultanément l’expression protéique de 3 cytokines, sécrétées par des kératinocytes humains normaux, après stimulation par les UVB.
Les KHN, issus d’une plastie abdominale, sont utilisées à 60 % de confluence dans le milieu Epilife complet à passage 5 (P5), avec une densité d’ensemencement de 150 000 cellules par puits, dans des plaques 12 puits.
Dans le cas de l’étude en conditions basales, le milieu de culture des kératinocytes humains normaux est éliminé et remplacé par du milieu neuf.
Dans le cas de l’étude en conditions stimulées, le milieu de culture des KHN est éliminé et remplacé par du PBS pour réaliser l’irradiation aux UVB 25 mJ/cm2. Du milieu neuf contenant les différents traitements (extrait, témoin solvant, témoin positif) est alors ajouté par la suite.
Après 24 ou 48 heures de traitement, les surnageants cellulaires sont récupérés et congelés à -20°C, afin de pouvoir réaliser les dosages protéiques avec la technologie Luminex précitée.
Le dosage a été réalisé au moyen d’un kit de dosage Millipore selon le protocole de haute sensibilité afin d’optimiser la détection des cytokines. Les cytokines analysées sont l’interleukine 8 (IL-8), et le Transforming Growth Factor-alpha (TGF-a).
Afin de suivre l’évolution de la production des cytokines et visualiser l’impact des UVs, nous avons suivi leur taux selon une cinétique après stimulation aux UVB 25mJ/cm2 (24 et 48 heures) et comparé ce taux avec celui en conditions basales (pas de traitement).
L’extrait a toujours été testé après stimulation aux UVB, afin d’en mesurer l’efficacité curative sur 24 et 48 heures.
Les résultats sont présentés à la Figure 5 (IL-8) et la Figure 6 (TGF-a).
Les UVB ont augmenté très significativement l’expression de l’IL-8 à 24 heures (x5), cette induction diminuant à 48 heures mais étant toujours significative par rapport à la production basale des kératinocytes (x2.8).
Dans nos conditions expérimentales, nous avons pu observer une très forte inhibition dose dépendante de la production d’IL-8 avec l’extrait de fraisier, et notamment à la concentration de 0.05% (significatif à 24 et 48 heures).
Les UVB ont augmenté significativement l’expression de TGF-α, suivant une cinétique croissante au cours du temps : +42% à 24 heures et +70% à 48 heures. Cette cible est donc intéressante à moduler car l’effet néfaste des UVBs semble prolongé.
Nous avons démontré que l’extrait de feuilles et de fruits de fraisier selon l’invention est capable de diminuer significativement la production d’IL-8 et de TGF-α) par des kératinocytes humains normaux après stimulation aux UVB, à la concentration de 0.05% pendant 24 ou 48 heures de traitement.
L’extrait de fraisier selon l’invention est donc intéressant pour son activité protectrice envers les effets néfastes environnementaux type UVs, ou encore son efficacité apaisante.
2.2. Effet de l’extrait sur la barrière physique cutanée (enveloppe cornée) : effet sur l’expression de gènes codant pour protéines de la barrière cutanée
Une étude sur l’effet transcriptionnel de l’extrait de feuilles et de fruits de fraisier préparé à l’exemple 1 a été évaluée à l’aide de la technologie TLDA (TaqMan Low Density Array).
Les cellules de kératinocytes humains normaux sont traitées par l’extrait de fraisier, à deux concentrations (0.025% et 0.05%) ainsi que le témoin excipient (butylène glycol BG/eau).
Après 24 heures de traitement, les cellules sont récupérées afin d’en extraire les ARN totaux à l’aide du kit Nucleospin RNA trace (Macherey-Nagel). Les solutions d’ARN totaux obtenues sont dosées, et leur qualité vérifiée, à l'aide d'un lecteur de microplaques, le spectrostarNANO (BMG Labtech) couplé au MicrolabSTAR. Cet appareil est relié à l'ordinateur pilotant la plateforme robotique et possède un logiciel spécifique d'analyse des résultats (logiciel MARS). La technique nécessite une micro-plaque de 384 puits (Greiner), un contrôle positif (RNA 250 Thermofisher) permettant de valider les pipetages réalisés par le robot ainsi que les valeurs générées par le lecteur spectrostarNANO.
Le kit de reverse transcription (RT) utilisé est le High Capacity Reverse Transcription Kit (Thermo Fisher) et a été employé selon le protocole fourni.
Les gènes contrôles (appelé « endogeneous » gene dans le logiciel) à utiliser pour la normalisation des résultats sont indiqués avant le lancement de la PCR. Cette dernière est réalisée selon le protocole fourni par Applied Biosystems dans l’appareil ABI Prism 7900HT
Sequence détection System.
Aux deux doses testées, respectivement 0.05% et 0.025%, l’extrait de fraisier augmente significativement l’expression de gènes codant pour des protéines de la barrière cutanée / différenciation, comme présenté dans le tableau 1 ci-dessous :
| Gène | Symbole | Extrait de fraisier de l’ex.1 0.05% | Extrait de fraisier de l’ex.1 0.025% |
| Fillagrine | F LG | +80% | +114% |
| Transglutaminase 1 | TGM1 | +180% | +182% |
| Kallikrein related peptidase 7 | KLK7 | +154% | +167% |
| Small Prolin-Rich Protein 1B (Cornifin) | SPRR1B | +436% | +447% |
| Céramide synthase | CERS3 | +72% | - |
| N-acylsphingosine amidohydrolase (Acide céramidase) 1 | ASAH1 | +15% | |
| Cytokératine 1 | KRT1 | +545% | +430% |
| Cytokératine 5 | KRT5 | +46% | - |
| Cytokératine 14 | KRT14 | +26% | +30% |
| Zinc Finger Protein 750 ou Epigenin | ZNF750 | +382% | +311% |
Tableau 1 : Pourcentages de variation d’expression de gènes codant pour des protéines de la barrière cutanée.
Ces résultats montrent que l’extrait de fraisier selon l’invention stimule le niveau d’expression d’un grand nombre de gènes de la barrière cutanée.
Exemple 3 : Effet stimulant sur le métabolisme cellulaire de la peau
L’effet d’un extrait de feuille et de fruits de fraisier selon l’exemple 1 a été évalué à 0.05%,
0.025% et 0.01% sur la synthèse d’ATP et l’activité mitochondriale dans des Kératinocytes
Humains Normaux. Les KHN ont été traités pendant 24 heures avec l’extrait aux différentes concentrations.
Après ce traitement, les cellules ont été immédiatement lysées et ΙΆΤΡ intracellulaire a été dosée par le kit ApoSENSOR Cell viability qui utilise la bioluminescence.
En parallèle l’activité mitochondriale est mesurée par le test colorimétrique du XTT.
Les KHN issus d’une plastie abdominale, sont fournies à confluence dans le milieu Epilife, à passage 5 (P5), à une densité de 10,000 cellules par puits par plaque 96 puits.
Deux types de plaques différentes ont été utilisés :
Des plaques blanches à fond blanc sont utilisées pour la détection de la luminescence Des plaques standard pour la mesure de l’activité mitochondriale
La baisse du niveau d’ATP est un indicateur de la mort cellulaire (apoptose). Au contraire, la prolifération cellulaire peut être reconnue par une augmentation du niveau d’ATP.
Le kit ApoSENSOR Cell viability utilise la bioluminescence pour la détection du niveau d’ATP pour un rapide screening simultané de l’apoptose et de la prolifération. Le kit utilise la luciférase qui catalyse la formation de lumière à partir d’ATP et de luciférine, et la lumière est mesurée par un luminomètre :
ATP+luciferin + 02 Oxyluciferin+AMP+PPÎ+Co2+light.
Les RLU mesuré sont proportionnelles à la concentration d’ATP.
Une gamme étalon allant 0.001 pg/mL to 1000pg/mL est réalisée afin de calculer la concentration d’ATP intracellulaire.
Le test de viabilité cellulaire est réalisé en utilisant le test XTT. C’est un test colorimétrique basé sur la réduction du sel de tétrazolium XTT (jaune) en formazan (orange) par les deshydrogenases mitochondriales des cellules vivantes. Le dérivé formazan absorbe à 450nm.
Le test statistique de Student a été utilisé (les résultats ont été considérés comme significatifs pour p<0.05 (*))
Les résultats sont présentés à la Figure 6.
Les résultats obtenus montrent que l’extrait de feuilles et de fruits de fraisier de l’exemple 1 a la capacité d’augmenter la synthèse d’ATP et l’activité mitochondriale.
La dose 0.01% permet à 24 et 48 heures d’augmenter simultanément la synthèse d’ATP et l’activité mitochondriale.
Au vu des résultats obtenus nous pouvons donc considérer que l’extrait de fraisier selon l’invention possède des propriétés énergisantes.
Exemple 4 : Formulations cosmétiques pour application topique
Les pourcentages sont indiqués en poids par rapport au poids de la composition finale.
Lotion hydratante
| Solution d’extrait de feuilles et de fruits de Fragaria vesca* | 2,0 % |
| Acétate de tocophérol | 0,2 % |
| Autres excipients (dont parfums, conservateurs) | qs |
| Eau | qsp 100% |
| *obtenue selon le procédé décrit à l’exemple 1 (12,5%en poids de matière sèche) | |
| Cette composition est une lotion appliquée sur | la peau du visage, |
| quotidiennement pour obtenir l’effet de protection recherché | vis-à-vis de stress |
| environnementaux. | |
| Crème pour peaux normales | |
| Solution d’extrait de feuilles et de fruits de Fragaria vesca* | 0,75 % |
| Acide hyaluronique | 1,0 % |
| Ascorbyl glycoside | 0,4 % |
| Acétate de tocophérol | 0,2 % |
| Glyccyrhizinate de potassium | 0,05 % |
| Excipients émulsionnés (dont parfums, conservateurs) | qs |
| Eau purifiée | qsp 100% |
*obtenue selon le procédé décrit à l’exemple 1 (12,5%en poids de matière sèche)
Cette composition est une émulsion huile-dans-eau. La crème est appliquée sur la peau du visage, quotidiennement pour obtenir l’effet de prévention ou d’atténuation des signes de vieillissement cutané
Fond de teint antiride
Solution d’extrait de feuilles et de fruits de Fragaria vesca* acide hyaluronique:
pigments :
beurre de karité:
1,0 %
2,0 %
3,0 %
0,8 %
| filtres UV : | 5,0 % |
| oxyde de titane micronisé : | 2,0 % |
| excipient | qsp 100 % |
*obtenue selon le procédé décrit à l’exemple 1 (12,5%en poids de matière sèche)
Le fond de teint est appliqué sur la peau du visage, quotidiennement pour obtenir l’effet de prévention ou d’atténuation des signes de vieillissement cutané extrinsèque lié aux stress UV et/ou de la pollution.
Claims (10)
- REVENDICATIONS1. Extrait de feuilles et fruits de fraisier des bois de l’espèce Fragaria vesca, obtenu au moyen d’un solvant polaire cosmétiquement acceptable, de préférence un mélange hydroalcoolique.
- 2. Extrait de feuilles et fruits de fraisier des bois selon la revendication 1, caractérisé en ce que le ratio pondéral feuilles/fruits dans l’extrait sec de fraisier va de 15/1 à 5/1, de préférence de 12/1 à 8/1, et est de préférence de 10/1.
- 3. Extrait de feuilles et fruits de fraisier des bois selon l’une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce qu’il comprend de 10 à 35% en poids de matière sèche, en particulier de 10 à 20% en poids, et de préférence de 10 à 15% en poids de matière sèche par rapport au poids total de l’extrait.
- 4. Extrait de feuilles et fruits de fraisier des bois selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu’il comprend une teneur de 10 à 15% en poids de matière sèche dans un mélange d’eau et de butylène glycol.
- 5. Extrait de feuilles et fruits de fraisier des bois selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il comprend au moins :(i) Des polyphénols en une teneur allant de 15 à 20% en poids par rapport au poids de la matière sèche ;(ii) et au moins un composé choisi parmi des sucres, des minéraux et oligoéléments, des acides aminés, et leurs mélanges.
- 6. Composition cosmétique notamment pour application topique comprenant à titre d’agent actif un extrait de feuilles et de fruits de fraisier des bois selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, et au moins un excipient cosmétiquement acceptable, choisi notamment parmi des pigments, des colorants, des polymères, des agents tensioactifs, des agents de rhéologie, des parfums, des électrolytes, des ajusteurs de pH, des agents anti-oxydants, des conservateurs, des filtres UV, et l’un quelconque de leurs mélanges, et de façon optionnelle en outre au moins un autre agent actif cosmétique.
- 7. Composition cosmétique selon la revendication 6, caractérisée en ce qu’elle comprend de 0,01 à 1% en poids d’extrait sec de fraisier des bois par rapport au poids total de la composition, préférentiellement de 0,05 à 0,5 %, et de préférence encore de 0,0625% à 0,25% en poids d’extrait sec de fraisier des bois par rapport au poids total de la composition totale.
- 8. Composition cosmétique selon l’une des revendications 6 ou 7, caractérisée en ce qu’elle se présente sous la forme d’une émulsion eau-dans-huile, d’une émulsion huile-dans-eau, d’un gel aqueux, d’un sérum, d’une lotion, d’une crème, d’un masque, d’un stick, d’un patch.
- 9. Utilisation, dans une composition cosmétique ou pour la préparation d’une telle composition, d’un extrait de feuilles et de fruits de fraisier des bois de l’espèce Fragaria vesca tel que défini dans l’une quelconque des revendications 1 à 5, en tant qu'agent actif protecteur du stress oxydatif, en particulier des effets des rayonnements UV et/ou des toxines et/ou de la pollution, et/ou pour stimuler le métabolisme cellulaire de la peau, visant notamment à préparer la peau au soleil et/ou prévenir et/ou limiter les effets néfastes des UV, et/ou prévenir les signes du vieillissement cutané extrinsèque, en particulier prévenir et/ou diminuer les rides et/ou ridules, et/ou améliorer l'éclat et/ou l'uniformité du teint, et/ou améliorer la radiance et/ou la transparence de la peau, et/ou améliorer la souplesse et/ou l'élasticité de la peau.
- 10. Méthode de soin cosmétique des matières kératiniques, en particulier de la peau, caractérisée en ce qu'elle comprend l'application sur lesdites matières kératiniques, en particulier la peau du visage et/ou du corps, d’une quantité efficace d’au moins une composition cosmétique selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, pour protéger la peau des effets néfastes du stress oxydatif, en particulier des effets des rayonnements UV et/ou des toxines et/ou de la pollution, et/ou pour stimuler le métabolisme cellulaire de la peau, visant notamment à préparer la peau au soleil et/ou prévenir et/ou limiter les effets néfastes des UV, et/ou prévenir les signes du vieillissement cutané extrinsèque, en particulier prévenir et/ou diminuer les rides et/ou ridules, et/ou améliorer5 l'éclat et/ou l'uniformité du teint, et/ou améliorer la radiance et/ou la transparence de la peau, et/ou améliorer la souplesse et/ou l'élasticité de la peau.1/7Expression nucléaire de NRF22600 +19%**Témoin non Ext Fraisier Ext Fraisier Témoin non Ext Fraisier traité 0.025% 0.05% traité + 0.025% +H2O2 - lh traité +H2O2 lhExt Fraisier Témoin non Ext Fraisier0.05% + traité + 0.025% +H2O2 - lh H2O2 2h H2O2 - 2hExt Fraisier Témoin non 0.05% + traité+UVB H2O2 - 2h 2hExt Fraisier0.025% + UVB 2hExt Fraisier0.05% +UVB 2h
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|---|---|---|---|
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Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05168684A (ja) * | 1991-12-20 | 1993-07-02 | Lotte Co Ltd | 消臭剤 |
| RU2249977C1 (ru) * | 2003-09-25 | 2005-04-20 | Научно-исследовательский институт пищеконцентратной промышленности и специальной пищевой технологии (Государственное научное учреждение) | Способ производства ароматизированного чайного напитка |
| EP2100593A1 (fr) * | 2008-03-14 | 2009-09-16 | Symrise GmbH & Co. KG | Mélanges ternaires dotés d'un effet croissant de synthèse du collagène |
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-
2016
- 2016-12-22 FR FR1663109A patent/FR3061014B1/fr active Active
-
2017
- 2017-12-22 WO PCT/EP2017/084317 patent/WO2018115407A1/fr active Application Filing
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MUDNIC I ET AL: "Cardiovascular effects in vitro of aqueous extract of wild strawberry (Fragaria vesca, L.) leaves", PHYTOMEDICINE, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 16, no. 5, 1 May 2009 (2009-05-01), pages 462 - 469, XP026043118, ISSN: 0944-7113, [retrieved on 20090107], DOI: 10.1016/J.PHYMED.2008.11.004 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR3061014B1 (fr) | 2020-02-14 |
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