FR3053589A1 - Utilisation de compositions pour peaux matures - Google Patents
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Abstract
La présente invention a pour objet l'utilisation d'une composition contenant au moins du phosphate d'ascorbyle de magnésium, un extrait de pois, un extrait de crocus et un composé de formule (I) pour stimuler la synthèse de neurotransmetteurs par les cellules nerveuses et limiter l'inflammation basale de la peau liée à l'âge et qui se développe chez des sujets à peau mature : il s'agit de rétablir la communication entre cellules cutanées et cellules nerveuses pour restituer l'intégrité tissulaire.
Description
® RÉPUBLIQUE FRANÇAISE
INSTITUT NATIONAL DE LA PROPRIÉTÉ INDUSTRIELLE © N° de publication :
(à n’utiliser que pour les commandes de reproduction)
©) N° d’enregistrement national
053 589
56560
COURBEVOIE © Int Cl8 : A 61 K8/68 (2017.01), A 61 K8/97, 8/67, A 61 Q 19/ 08, A 61 P 17/00
DEMANDE DE BREVET D'INVENTION A1
| ©) Date de dépôt : 07.07.16. | (© Demandeur(s) : CASTER Société par actions simpli- |
| (30) Priorité : | fiée — FR. |
| @ Inventeur(s) : HAJEM NEILA et CHOULOT JEAN- | |
| CHRISTOPHE. | |
| (43] Date de mise à la disposition du public de la | |
| demande : 12.01.18 Bulletin 18/02. | |
| ©) Liste des documents cités dans le rapport de | |
| recherche préliminaire : Se reporter à la fin du | |
| présent fascicule | |
| (© Références à d’autres documents nationaux | ©) Titulaire(s) : CASTER Société par actions simplifiée. |
| apparentés : | |
| ©) Demande(s) d’extension : | © Mandataire(s) : CASALONGA & ASSOCIES. |
(04/ UTILISATION DE COMPOSITIONS POUR PEAUX MATURES.
FR 3 053 589 - A1 (5/] La présente invention a pour objet l'utilisation d'une composition contenant au moins du phosphate d'ascorbyle de magnésium, un extrait de pois, un extrait de crocus et un composé de formule (I) pour stimuler la synthèse de neurotransmetteurs par les cellules nerveuses et limiter l'inflammation basale de la peau liée à l'âge et qui se développe chez des sujets à peau mature: il s'agit de rétablir la communication entre cellules cutanées et cellules nerveuses pour restituer l'intégrité tissulaire.
i
Utilisation de compositions pour peaux matures
La présente invention a pour objet l’utilisation d’une composition contenant au moins du phosphate d'ascorbyle de magnésium, un extrait de pois, un extrait de crocus et un composé de formule (I) pour limiter l’inflammation basale de la peau liée à l’âge, et qui se développe chez des sujets à peau mature.
La peau est l'organe de revêtement recouvrant la totalité de la surface du corps, constituée de trois compartiments distincts superposés : l'épiderme, le derme et l'hypoderme.
L'épiderme est un épithélium squameux stratifié qui constitue la structure externe de la peau et assure sa fonction de protection. Les kératinocytes sont le principal type cellulaire représenté dans l'épiderme. L’épiderme n’est irrigué par aucun vaisseau sanguin. Il contient par contre de nombreuses terminaisons nerveuses libres, permettant d’avoir une perception tactile et douloureuse. Au sein de l’épiderme, quatre couches sont à distinguer :
- la couche cornée (Stratum corneum) est une couche constituée de cellules très épaisses, les cornéocytes qui sont anucléées.
- la couche granuleuse (Stratum granulosum) est une couche contenant 3 ou 4 assises de cellules.
- la couche des cellules à épines (Stratum spinosum) contient des kératinocytes, des tonofilaments précurseurs de la kératine, des mélanocytes et des terminaisons nerveuses.
- la couche basale (Stratum germinativum) où les kératinocytes forment une seule assise de cellules, tenues entre elles par des desmosomes.
Le derme est un tissu de soutien. Il se compose de protéines fibreuses dont le collagène et l'élastine, qui participent à la résistance, l'élasticité et surtout à la tonicité de la peau et/ou des muqueuses. Le derme est irrigué par un réseau sanguin microcirculatoire qui prend en charge la nutrition de l'épiderme par diffusion. Outre son rôle nutritif, le derme joue également un rôle primordial dans la thermorégulation chez l’homme et dans la cicatrisation ainsi que dans l'élimination de produits toxiques par la sueur.
Au-dessous du derme se trouve un tissu conjonctif lâche richement vascularisé : l'hypoderme.
L’épiderme, épithélium de revêtement, est la principale structure protectrice du corps. L’épiderme est constitué à 90% de kératinocytes, lesquels sont constitués principalement de kératines, protéines fibreuses et insolubles dans l’eau, conférant aux cellules de l’épiderme leurs propriétés protectrices. Trois autres types cellulaires, les mélanocytes, les cellules de Langerhans et les cellules de Merkel, cohabitent dans l’épiderme (Holbrook, 1987). Les mélanocytes ont pour fonction de synthétiser la mélanine, pigment contribuant à la couleur de la peau et protégeant les kératinocytes de la couche basale de l’épiderme des rayons ultra-violets (Lanza, 1997). Les cellules de Langerhans constituent quant à elles des éléments essentiels du système de défense de l’organisme. Enfin, les cellules de Merkel jouent un rôle de mécanorécepteur et sont impliquées dans la fonction du toucher.
L’épaisseur moyenne de l’épiderme est de 100 pm mais peut varier de 50pm sur les paupières à 1 mm sur la paume des mains ou la plante des pieds.
Les trois compartiments cutanés, hypoderme, derme et épiderme (à part la couche cornée) sont innervés.
La peau étant le principal site d’interaction de l’organisme avec son environnement, le système nerveux cutané reçoit et répond continuellement à toute une variété de stimuli qui peuvent être physiques (thermique, mécanique, électrique, rayonnement UV), chimiques, ou indirects tels que ceux produits par des allergènes, des haptènes, des agents microbiologiques, des chocs ou une inflammation. Les nerfs cutanés peuvent également répondre à des stimuli issus de la circulation sanguine ou à des stress émotionnels.
La densité d’innervation varie en fonction de la zone du corps, ainsi, chez les humains, les mains et le visage sont richement innervés par rapport au dos ou à l’abdomen.
Il existe donc un dialogue entre les cellules de la peau et les neurones sensitifs. Ces interactions participent à la sensation de bienêtre, un équilibre homéostatique de l’épiderme, une augmentation de la mélanogénèse, mais sont également responsables de réactions inflammatoires, comme le prurit, les rougeurs... Ces réactions inflammatoires locales sont liées à une activité excessive des neurones sensitifs qui libèrent des neuropeptides alimentant à leur tour la réaction des kératinocytes.
De plus, le système nerveux central peut moduler soit directement par les nerfs efférents ou des médiateurs chimiques, ou indirectement, un grand nombre de fonctions au sein de la peau, dont la vasomotricité, la thermorégulation, la sécrétion des glandes et des cellules ou la croissance et la différenciation des tissus.
De plus, les nerfs ont un rôle important dans la médiation de l’inflammation cutanée. En fait, les influences provenant des systèmes nerveux central et périphérique font que le système endocrine et immun et pratiquement toutes les cellules de la peau sont interconnectés.
En effet, la plupart des cellules de la peau expriment des récepteurs pour des neuromédiateurs et les cellules de la peau ellemême en synthétisent. En particulier, les kératinocytes humains synthétisent des neurotrophines et des endorphines et d’autres neuropeptides.
En plus de leur activité neurotoxique, les neuromédiateurs sont impliqués dans l’homéostasie cellulaire de la peau, le trophisme et les réponses au stress.
Les facteurs neurotrophiques tels que le NGF sont produits dans des organes cibles (épiderme) et transportés vers la ganglia où ils favorisent le développement des neurones et le trophisme ainsi que la synthèse des neuropeptides.
Les neuropeptides sont en retour relâchés par les fibres nerveuses périphériques et exercent leur influence sur un certain nombre de cellules de la peau pour médier une cascade d’activités inflammatoires et prolifératives.
Le vieillissement de la peau semble corrélé avec une diminution de l’innervation épidermique de la face. Ainsi, il semble que les altérations de la peau dues à l’âge sont le résultat d’un amoindrissement de l’activité des facteurs nerveux. En effet, la formation de rides est associée au vieillissement de la peau et les signes cutanés de l’âge, tels que les rides de la peau, la perte d’élasticité, et d’autres changements cosmétiques résultent de l’inflammation au niveau cellulaire. La prise d’âge semble être ainsi être associée à une décroissance de l’innervation épidermique de la face soulevant les hypothèses qu’au moins quelques-unes des altérations observées dans la peau âgée sont dues à une implication réduite de facteurs neuro.
Le stress psychologique est également un évènement pro inflammatoire dû au relargage de neuropeptides tels que la substance P dans la peau.
De plus, la destruction cellulaire est médiée par les espèces oxygène réactives (ROS) d’où l’activation des cascades inflammatoires.
Comme la formation d'une quantité excessive d’espèces oxygène réactive et d'anions super oxydes est toxique pour la cellule, les systèmes de métabolisation et de dégradation pour diminuer ces taux sont critiques et normalement contrôlés de façon étroite dans la cellule. La GSH peroxydase avec la catalase et la super oxyde dismutase fonctionnent pour protéger la cellule des dommages dus à ces espèces oxygène réactives. Les GST sont une famille d’enzymes de détoxification de phase 2 qui sont abondants à travers la plupart des formes de vie. Les GST catalysent la conjugaison de GSH à une grande variété de composés endogènes ou exogènes.
GSTM 2 a en particulier été montré comme catalysant la conjugaison de GSH à un aminochrome qui est une espèce oxygène radicalaire réactive générée dans le cycle rédox des orthoquinones avec des neurones dopaminergiques.
Mais le stress oxydant conduit à une modification des molécules environnantes dont l'effet devient alors non spécifique et irréversible, ce qui entraîne une simulation chronique des voies de signalisation.
Enfin, les neurotransmetteurs sont émis par les cellules nerveuses, exprimés mais également reconnus par l’ensemble des cellules présentes dans le tissu cutané grâce à des récepteurs spécifiques. Cette détection transversale par les cellules de la peau, les cellules de l’immunité et celles du système nerveux permet d’établir une communication permanente entre les cellules de la peau, le système nerveux et le système immunitaire. Les neurotransmetteurs jouent donc un rôle capital pour la communication intercellulaire.
Ainsi, le développement de l’inflammation de la peau est critique pour l’apparition des signes de l’âge.
Il est donc nécessaire de préserver le microenvironnement complet, réseau neuronal compris, pour maintenir l’intégrité et l’homéostasie cutanée perturbées par une inflammation chronique.
De nombreuses compositions anti-âge sont connues dans l'état de la technique. Toutefois, ces compositions ne permettent pas de lutter, de manière systématique et prononcée, contre les effets du vieillissement cutané dû à une inflammation chronique.
Il subsiste donc un besoin de compositions permettant de limiter les effets de l'âge sur la peau chez des sujets à peau mature, tout en maintenant et améliorant son élasticité, sa fermeté et sa densité.
La demanderesse a ainsi mis au point des compositions permettant de stimuler les cellules nerveuses pour limiter l’inflammation basale de la peau liée à l’âge se développant chez des sujets à peau mature, qui constitue l’objet de l’invention.
Un objet de l'invention est ainsi une composition pour son utilisation dans la stimulation des cellules nerveuses chez des sujets matures.
Un autre objet est une composition pour son utilisation pour la limitation de l'inflammation basale de la peau liée à l'âge chez des sujets matures.
Un autre objet est l'utilisation de cette composition comme médicament.
Un autre objet est un procédé de soin cosmétique de la peau chez des sujets âgés comprenant l'administration de cette composition.
D'autres objets, caractéristiques, aspects et avantages de l'invention apparaîtront encore plus clairement à la lecture de la description et des exemples qui suivent.
La figure 1 montre l'effet des compositions SI à S3 à différentes dilutions, allant de O.lx à 0.04x pour chaque composition, sur la survie des neurones sensitifs. Les donnés sont exprimées en pourcentage par rapport à la moyenne du témoin, 100% étant considéré comme le milieu contrôle).
La Figure 2 montre l'effet des compositions SI et S2 à 0.02x et 0.04x sur la libération de CGRP par les neurones sensitifs. Les données sont exprimées en pourcentage par rapport à la moyenne du témoin +/SEM (100 % = milieu contrôle). *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.005
Comme tous les autres organes, la peau est soumise au vieillissement. Les facteurs chronologiques, génétiques et les facteurs endocriniens déterminent le vieillissement cutané intrinsèque.
La peau est également soumise à des agressions extrinsèques qui, au fil du temps, amplifient le phénomène de vieillissement intrinsèque. Les rayons ultraviolets (UV) ou les facteurs environnementaux, tels que le tabac et l'alcool, contribuent aussi au vieillissement cutané.
Le vieillissement intrinsèque et le vieillissement extrinsèque additionnent donc leurs effets délétères sur toutes les structures cutanées. Avec l'âge, les différentes structures cutanées sont modifiées à la fois sur le plan morphologique et fonctionnel. Les principales conséquences sont un déclin des fonctions de défense, de cicatrisation, de perception et de thermorégulation ainsi que l'installation d'un état inflammatoire chronique correspondant à une augmentation du nombre de macrophages et d'une sécheresse cutanée persistante.
Les compositions utilisées dans l'invention comme médicament, comportent dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins du phosphate d'ascorbyle de magnésium, un extrait de pois, un extrait de crocus et un composé céramide de formule (I).
OH
Ces compositions sont utiles pour le traitement anti-âge des peaux matures des mammifères.
Le traitement à l'aide de ces compositions s'effectue par régulation de l’expression de neurotransmetteurs par les cellules nerveuses de la peau. Le traitement à l'aide de ces compositions peut également s'effectuer par limitation de l'inflammation basale de la peau.
Dans la présente par «extrait » on entend un extrait obtenu par exemple à partir d'une plante et/ou d'une partie d'une plante. II peut s'agir par exemple d'un extrait obtenu à partir de fleurs ou sommités fleuries, feuilles, graines, racines, tiges, graines, péricarpe.
Le phosphate d'ascorbyle de magnésium est de préférence dissous dans du glycérol et de l'éthanol.
De préférence, le phosphate d'ascorbyle de magnésium est présent dans des proportions de 0.1 à 10 % en poids par rapport au poids total de la composition, et encore plus préférentiellement dans des proportions de 0.6 à 5 % en poids par rapport au poids total de la composition.
Comme source de phosphate d'ascorbyle, on pourra utiliser la dispersion de liposomes vendue sous le nom de Lipoid par la société Cosmetochem (Suisse).
La composition utilisée dans l'invention comprend également un extrait de pois, et plus particulièrement un extrait du pois Pisum sativum. De façon préférée, la partie du pois utilisés est la graine de pois.
De préférence, l'extrait de Pisum sativum est présent dans des proportions de 0.2 à 10% en poids et encore plus préférentiellement dans des proportions de 0.5 à 5% en poids par rapport au poids total de la composition.
Comme source d'extrait de Pisum sativum, on pourra utiliser la solution liquide contenant 3% de matière active de la société BASF, vendue sous le nom de Proteasyl TP POE LS 9818.
La composition utilisée dans l'invention comprend également un extrait de crocus, plus particulièrement un extrait de bulbe de crocus. De préférence, le crocus utilisé est le Crocus chrysanthus.
De préférence, l'extrait de bulbe de Crocus chrysanthus est présent dans des proportions de 0.2 à 10% en poids et encore plus préférentiellement dans des proportions de 0.5 à 5% en poids par rapport au poids total de la composition.
Comme source d'extrait de bulbe de Crocus chrysanthus, on pourra utiliser l'extrait de bulbe de Crocus chrysanthus à 1% de la société Mibelle, vendue sous le nom de DermCom.
La composition utilisée dans l'invention comprend également un composé céramide de formule (I)
o.
HO
OH
De préférence, le composé de formule (I) est présent dans des proportions de 0.1 à 5% en poids et plus préférentiellement de 0.2 à 3% en poids par rapport au poids total de la composition.
Comme source de composé céramide de formule (I), on peut utiliser la sphingokine NP vendue par la société Evonik.
La présente invention concerne donc l'utilisation d'une composition selon l'invention pour son effet limitant de l'inflammation cutanée basale chez des sujets âgés, comprenant au moins une étape d'application sur la peau d'une composition conforme à l'invention. En particulier la composition selon l'invention permet avantageusement et de façon simultanée de réduire les rides et ridules tout en repulpant la peau et en améliorant son élasticité.
Les compositions selon l'invention doivent leur effet anti-âge à la restauration de la communication intercellulaire, notamment par la stimulation des cellules nerveuses qui vont induire sur les cellules de la peau :
la restauration de l'homéostasie par la stimulation des mécanismes de protection et de réparation endogène, notamment la prolifération cellulaire et la prévention de l’apoptose, ainsi que l'hormèse par la réduction des cytokines inflammatoires en parallèle à la réparation de l'ADN, l'activation des réseaux liés à l'intégrité de la peau via des effets sur l’amélioration de la différenciation épidermique, l’architecture cellulaire et le métabolisme lipidique, , l’amélioration des systèmes de détoxification, via des effets sur le transport vésiculaire et l’autophagie la stimulation du facteur neurotrophique NTF4 qui influence le développement neural lui-même source de réépithélisation cutanée.
La composition utilisée dans l'invention est adaptée à une application topique sur la peau et comprend donc un milieu physiologiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec la peau. Il s'agit de préférence d'un milieu cosmétiquement, pharmaceutiquement et/ou dermatologiquement acceptable, c'est-à-dire qui présente une couleur, une odeur et un toucher agréables et qui ne génère pas d'inconforts inacceptables (picotements, tiraillements, rougeurs), susceptibles de détourner la consommatrice d'utiliser cette composition.
La composition utilisée dans l'invention peut comprendre avantageusement une phase aqueuse. La composition peut comprendre de l'eau en une teneur allant de 10% à 90% en poids par rapport au poids total de la composition, de préférence allant de 50% à 70% en poids par rapport au poids total de la composition.
ίο
La composition utilisée dans l'invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées pour une application topique sur la peau, notamment sous forme d'une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile ou multiple, éventuellement gélifiée, d'une émulsion siliconée, d'une microémulsion ou nanoémulsion, d'un produit anhydre liquide, pâteux ou solide, d'une dispersion d'huile dans une phase aqueuse en présence de sphérules, ces sphérules pouvant être des nanoparticules polymériques telles que les nanosphères et les nanocapsules ou, mieux, des vésicules lipidiques de type ionique et/ou non-ionique.
Cette composition peut être plus ou moins fluide et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse ou d'un gel. Elle peut éventuellement être appliquée sur la peau sous forme d'aérosol. Elle peut également se présenter sous forme solide, et par exemple sous forme de stick.
Avantageusement, la composition utilisée dans l'invention est sous forme d’une émulsion huile dans eau ou d’un gel, une crème ou un sérum.
De façon connue, la composition de l'invention peut contenir également les adjuvants habituels dans les domaines cosmétique et dermatologique, tels que les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les actifs hydrophiles ou lipophiles, les agents hydratants (tels que la glycérine, le propylène glycol, le butylène glycol, le pentylène glycol, l'hexylène glycol, le dipropylène glycol, le diéthylène glycol), les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les pigments, les filtres hydrophiles, les absorbeurs d'odeur et les matières colorantes. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés, et par exemple de 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent être introduits dans la phase grasse, dans la phase aqueuse, dans les vésicules lipidiques et/ou dans les nanoparticules.
Lorsque la composition selon l'invention est une émulsion, la proportion de la phase grasse peut aller de 5 à 50 % en poids, et de préférence de 5 à 30 % en poids par rapport au poids total de la composition.
Comme matières grasses utilisables dans l'invention, on peut utiliser les huiles minérales, les huiles d'origine animale, les huiles de synthèse, les huiles siliconées et les huiles fluorées. On peut aussi utiliser comme matières grasses des acides gras, des cires et des gommes et en particulier les gommes de silicone.
Les émulsionnants et les coémulsionnants éventuellement utilisés dans la composition sous forme d'émulsion sont choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. Ces émulsionnants et coémulsionnants sont de préférence présents, dans la composition, en une proportion allant de 0,3 à 20 % en poids, et de préférence de 0,5 à 5 % en poids par rapport au poids total de la composition. Comme émulsionnants et coémulsionnants utilisables dans l'invention, il est particulièrement avantageux d'utiliser les esters d'acide gras et de polyol tels que le stéarate de PEG-100, le stéarate de PEG-50 et le stéarate de PEG-40, le tristéarate de sorbitane, les stéarates de sorbitane oxyéthylénés disponibles sous les dénominations commerciales Tween 20 ou Tween 60, par exemple et leurs mélanges.
Comme gélifiants hydrophiles, on peut citer en particulier les polymères carboxyvinyliques (carbomer), les copolymères acryliques tels que les copolymères d'acrylates/alkylacrylates, les polyacrylamides, les polysaccharides, les gommes naturelles et les argiles, et, comme gélifiants lipophiles, on peut citer les argiles modifiées comme les bentones, les sels métalliques d'acides gras et la silice hydrophobe.
Bien entendu, l'homme de l'art veillera à choisir le ou les éventuels composés à ajouter aux compositions selon l'invention, ainsi que leur concentration, de manière telle que les propriétés avantageuses attachées intrinsèquement aux compositions conformes à l'invention ne soient pas, ou substantiellement pas, altérées par l'addition envisagée.
L'invention est également relative à un procédé de soin cosmétique de la peau anti-âge comprenant au moins une étape d'application sur la peau d'un mammifère de la composition de l'invention, ainsi qu'à l'utilisation cosmétique de cette composition anti-âge pour améliorer l'élasticité de la peau et diminuer ou atténuer les rides de la peau d'un mammifère.
L'application sur la peau peut être réalisée en fonction de la forme galénique utilisée. II peut s'agir, par exemple d'une simple application sur la peau ou d'une application accompagnée, par exemple, d'un massage de la peau avec la composition de la présente invention. L'application est de préférence réalisée avec une quantité suffisante de la composition afin que toute la surface de la peau à traiter soit traitée. II peut s'agir par exemple d'une application classique, comme une crème sur la peau. II peut s'agir par exemple aussi d'une application pour former un masque traitant. L'application peut être toute application souhaitée par l'utilisateur/l'utilisatrice, par exemple une application quotidienne, biquotidienne, hebdomadaire et/ou bimensuelle. II peut s'agir par exemple d'une application une fois par jour, deux fois par jour ou plus.
L'invention sera maintenant illustrée à l'aide des exemples non limitatifs suivants.
Exemple 1 : Détermination des conditions non cytotoxiques
a) Culture des neurones sensitifs
Les neurones sensitifs sont issus de ganglions rachidiens embryonnaires de 15 jours. Les ganglions rachidiens isolés ont été placés dans du milieu froid Leibovitz (L15, PanBiotech; ref P0427055) contenant 2% de pénicilline lOOOOU/mL et Streptomycine lOmg/mL (PS, PanBiotech; ref P06-07100) et 1% de BSA (BSA, Sigma Aldrich; ref P06-1391100). Les ganglions ont été dissociés par trypsination pendant 20 minutes à 37°C (Trypsin EDTA IX, PanBiotech; ref P10-023 100). La réaction a été stoppée par addition de Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM, PanBiotech; ref P0403600) contenant de la DNAse I grade II (0.1 mg/ml, PanBiotech; ref
P60-37780100) et 10% de sérum de veau foetal (SVF, Invitrogen; ref 10270106). Les cellules ont été dissociées mécaniquement par 3 passages dans une pipette lOmL. Les cellules ont été centrifugées à 515g pendant 10 minutes à 4°C. Le surnageant a été éliminé et le culot cellulaire a été remis en solution dans un milieu DMEM F-12 (PanBiotech; ref P04- 41450) contenant le supplément N2 (Fisher Scientific; ref 17502048), de la L-glutamine (PanBiotech; ref P0480100), 2% de PS, lOng/mL de Nerve Growth Factor (NGF, Sigma Aldrich; ref N1408) et 5ng/mL de Neurotrophine 3 (NT3, PanBiotech; ref CB-1125032). La viabilité des cellules est établie par comptage cellulaire au bleu de trypan.
Les cellules sont ensuite ensemencées en plaques de culture à raison de 15 000 cellules par puits en plaques de 96 puits recouvertes de poly L-lysine (Greiner; ref 655936) en milieu DMEM F-12 (PanBiotech; ref P04- 41450) contenant le supplément N2 (Fisher Scientific; ref 17502048), de la L-glutamine (PanBiotech; ref P0480100), 2% de PS, lOng/mL de Nerve Growth Factor (NGF, Sigma Aldrich; ref N1408) et 5ng/mL de Neurotrophine 3 (NT3, PanBiotech; ref CB-1125032) à 37°C et 5% de CO2.
Après 8 jours de culture, les neurones représentent 5% des cellules, les autres cellules sont constituées de cellules de Schwann non myélinisantes et de fibroblastes.
b) détermination des conditions non toxiques
Après 10 jours de culture, le milieu est remplacé par du milieu sans facteur de croissance contenant les compositions SI à S3 à raison de 6 puits par condition expérimentale.
La composition S3 contient ainsi au moins 16 milligrammes de Magnésium Ascorbyl Phosphate (Cosmetochem, Lipoid) 665 milligrammes d’une fraction peptidique de pois (BASF), 6,4 milligrammes d’extrait de bulbe de Crocus chrysanthus (Mibelle) et 720 milligrammes de Caprooyl Phytosphingosine (Evonik) dans une solution de tampon phosphate en quantité suffisante pour obtenir un volume final de 20mL de PBS (PanBiotech, ref: P04-36500). Les compositions S2 et SI sont des dilutions dans du PBS de la composition S3 de facteurs 5 et 10 respectivement.
Après 48 h d’incubation, le milieu de culture est éliminé et les cellules sont lavées deux fois par du PBS. Les cellules sont ensuite fixées par une solution d’éthanol-acide acétique 95-5 pendant 5 minutes à -20°C. Les cellules sont perméabilisées et les sites non spécifiques bloqués par une solution de PBS contenant 0,1% de saponine (Sigma Aldrich, ref S7900) et 1% de sérum de veau fœtal pendant 15 minutes à température ambiante. Les cellules sont ensuite incubées 2h avec un anticorps monoclonal de souris anti β-tubuline (SIGMA-Aldrich, ref T8660) à la dilution de l/400è en PBS contenant 1% de SVF et 0.1% de saponine. Cet anticorps marque les neurones sensitifs et leurs prolongements. Cet anticorps est ensuite révélé par un anticorps Alexa Fluor 488 chèvre anti-souris (Molecular probe, ref Al 1001) pendant 1 heure. Les noyaux cellulaires sont révélés par un marqueur fluorescent (Hoechst solution, SIGMA-Aldrich, ref Bl 155)
La figure 1 montre l'effet des compositions SI à S3 à différentes dilutions allant de O.lx à 0.04x pour chaque composition.
Comme observé sur cette figure 1, la composition S3 est toxique pour les neurones sensitifs à toutes les concentrations évaluées. Les compositions SI et S2 sont toxiques pour les neurones sensitifs à la concentration de 0,lx mais non toxiques pour les concentrations 0,02x et 0,04x.
Les compositions SI et S2 sont donc évaluées aux concentrations de 0,02x et 0,04x pour les expériences suivantes.
Exemple 2 : Stimulation des neurones
Après 10 jours de culture des neurones comme dans l'exemple la), le milieu de culture est remplacé par du milieu de culture sans facteur de croissance contenant les compositions SI ou S2 à raison de 12 puits par condition expérimentale.
Après 1 h, 6 h, 24 h et 48 h d’incubation, les surnageants de culture ont été récupérés et rassemblés dans deux puits par condition. Le CGRP a été dosé (n= 4) par le kit ELISA de la société Bertin selon les indications du fabriquant (ref A05482.96). Les surnageants restants ont été aliquotés en 50 qL et congelés à -80°C.
Les études statistiques ont été faites, pour la libération de CGRP par le test one way anova suivi par le test de Dunnett’s multiple comparaison.
La Figure 2 montre l'effet des compositions SI et S2 à 0.02x et 0.04x sur la libération de CGRP par les neurones sensitifs. Les données sont exprimées en pourcentage par rapport à la moyenne du témoin +/SEM (100 % = milieu contrôle). *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.005
Les compositions SI et S2 à la concentration de 0.02x augmentent significativement la quantité de CGRP libérée spontanément par les neurones sensitifs en culture à partir de 24 heures d’incubation.
Le composé S2 à la concentration de 0.02x augmente également la quantité de CGRP libérée spontanément par les neurones sensitifs après 48 heures d’incubation.
Une incubation de 24 heures des neurones sensitifs en présence du composé S2 à la concentration de 0.02X semble ainsi être nécessaire pour obtenir une augmentation maximale de la quantité de CGRP libérée par les neurones sensitifs.
Exemple 3 : Evaluation de l’effet des surnageants de milieux de culture conditionnés par des cellules nerveuses traitées par les compositions selon l’exemple 2 sur la modulation d’ARN d'explants de peau humaine
a. Préparation des expiants expiants d’un diamètre d’environ 12 mm chacun (±lmm) ont été préparés à partir d’une plastie abdominale d’une femme de type caucasien âgée de 46 ans.
Les expiants ont été mis en survie en milieu BEM (BIO-EC’s Expiants Medium, réf Bio-EC F0120, Bio-EC Longjumeau, France) à 37°C en atmosphère humide, enrichie de 5 % de CO2.
A J-l et J0, les 3 expiants de chaque lot, ont été prélevés. Les ARNs sont extraits des cellules par une solution de RNA later (RNAlater® RNA stabilization Reagent, Qiagen). Les ARNs sont ensuite validés qualitativement (Exprion BioRad) et quantitativement.
b. Analyse des profils d’expression
L’objectif de cette étude est l’identification de la modulation de l’expression génique sur des expiants engendrée par les surnageants de milieux de culture conditionnés par des cellules nerveuses traitées par les compositions via une étude du profil des ARN messagers des expiants ainsi traités sur puces Agilent 8X60K.
Des puces contenant 60 000 séquences géniques ont été hybridées par les ARNs totaux extraits d’explants de peaux humaines non traités en duplicates (après 8h et 24h de culture -TA-8h ; TB-8h ; TA-24h ; TB24h) ou traités par les surnageants de milieux de culture conditionnés par des cellules nerveuses traitées par les compositions défini selon l’exemple 2 utilisant sur les cellules nerveuses la solution S2, ultérieurement dénommé P2 (P2A-8h ; P2B-8h et P2A-24H ; P2B-24h).
c. Vérification de la qualité des ARNs
Au préalable, l'intégrité et la qualité des ARNs ont été vérifiés par électrophorèse capillaire avec le kit Experion de BioRad (Réf 7007106).
Dans chaque échantillon, un profil électrophorétique des ARN ribosomaux est réalisé et l'absence de contamination par de l’ADN génomique est validée.
d. Amplification, marquage, hybridation des ARNs sur puces à ADN, et données brutes
Les échantillons ARNs ont été hybridés sur des lames humaines Agilent 8X60K (n° de ref, France) selon l’approche simple couleur. Cette approche permet une comparaison directe des intensités de fluorescence entre les puces sans avoir recours à une référence commune.
Brièvement, les marquages sont réalisés sur lOOng d’ARN totaux. Le kit utilisé, Low Input Quick Amp Labeling Kit, One color (Agilent
Technologies, France), permet la synthèse d’ARNc marqués par amplification linéaire et consiste en :
- une synthèse d’ADNc par transcription inverse en utilisant comme amorce un oligonucléotide de type oligo-dT qui possède à son extrémité
5’ le site pour l’enzyme T7 ARN polymérase ;
- une synthèse de l’ARNc avec incorporation simultanée de CTP couplés à la cyanine 3 puis une purification sur colonne RNeasy Mini kit (QIAgen, France).
Après amplification, les échantillons ont été hybridés sur des 10 puces 8x60k, puis les signaux fluorescents (Cy3) ont été quantifiés au moyen du logiciel « Feature Extraction 11.0.1 » (Agilent, France) puis les données ont été soumises à une normalisation intra-puces et interpuces par la méthode des quantités au moyen du logiciel R (http://www.bioconductor.org/).
Enfin, suite à la normalisation, seuls les gènes présentant des intensités relatives distinctes du bruit de fond sont retenus pour le calcul du rapport des intensités (Ri) échantillons traités versus le contrôle pour chaque gène et chaque condition de traitement.
Les résultats suivants sont obtenus:
| Les intensités pour chaque condition testée | ||||
| Nom du gène | TA8h | TB8h | TA24h | TB-24h |
| ITIH4 | 200,5459 | 336,4898 | 449,6254 | 331,0396 |
| NTF4 | 319,3514 | 386,4405 | 544,4472 | 492,6994 |
| BHLHE23/ BHLHB4 | 2540,124 | 2389,5 | 2633,906 | 4237,886 |
| LHX3 | 2456,526 | 2623,967 | 3131,283 | 3599,841 |
| CASKIN1 | 7187,276 | 11072,38 | 12951,62 | 11787,97 |
| CCL3 | 1200,812 | 409,5497 | 145,1025 | 318,9065 |
| CCL19 | 538,0205 | 532,4528 | 89,28105 | 208,4559 |
| GSTM2 | 70,01584 | 156,5887 | 82,97786 | 95,53059 |
| CYP4B1 | 576,3537 | 544,3846 | 1128,2 | 1117,695 |
| CYP4B1 | 586,3364 | 527,4771 | 1120,823 | 1057,892 |
| CYP4B1 | 593,5071 | 548,6305 | 1224,917 | 1089,738 |
SULT1A4 I 200,4375 | 211,242 | 194,4007 | 228,2419
| Les intensités pour c | laque condition testée | |||
| Nom du gène | P2A-8h | P2B-8h | P2A-24h | P2B-24h |
| ITIH4 | 481,1972 | 445,6877 | 569,8425 | 758,6306 |
| NTF4 | 619,0347 | 597,8326 | 622,3205 | 688,8103 |
| BHLHE23/ BHLHB4 | 8908,441 | 5458,836 | 2780,104 | 5436,447 |
| LHX3 | 7786,453 | 4071,432 | 3141,168 | 2873,972 |
| CASKIN1 | 23551,57 | 13593,14 | 13310,02 | 11062,62 |
| CCL3 | 173,5089 | 206,4848 | 346,7469 | 155,7927 |
| CCL19 | 206,4848 | 193,9465 | 150,3764 | 196,4348 |
| GSTM2 | 99,62202 | 98,69344 | 122,0475 | 140,5398 |
| CYP4B1 | 821,5138 | 922,7136 | 1233,818 | 1057,892 |
| CYP4B1 | 813,7817 | 875,1483 | 1125,336 | 1051,988 |
| CYP4B1 | 818,4253 | 890,7959 | 1159,28 | 1056,018 |
| SULT1A4 | 313,8241 | 321,0651 | 262,0668 | 340,9058 |
Les valeurs de ratios sont ensuite calculées à partir de ce premier tableau, à 8h et à 24h.
| Les valeurs de ratio ( traii | tement versus contrôle) | |||
| Nom du gène | P2A-8h vTA8h | P2A-8h vTB8h | P2B-8h vTA8h | P2B-8h vTB8h |
| ITIH4 | 2,40 | 1,43 | 2,22 | 1,32 |
| NTF4 | 1,94 | 1,60 | 1,87 | 1,55 |
| BHLHE23/ BHLHB4 | 3,51 | 3,73 | 2,15 | 2,28 |
| LHX3 | 3,17 | 2,97 | 1,66 | 1,55 |
| CASKIN1 | 3,28 | 2,13 | 1,89 | 1,23 |
| CCL3 | 0,14 | 0,42 | 0,17 | 0,50 |
| CCL19 | 0,38 | 0,39 | 0,36 | 0,36 |
| GSTM2 | 1,42 | 0,64 | 1,41 | 0,63 |
| CYP4B1 | 1,43 | 1,51 | 1,60 | 1,69 |
| CYP4B1 | 1,39 | 1,54 | 1,49 | 1,66 |
| CYP4B1 | 1,38 | 1,49 | 1,50 | 1,62 |
| SULT1A4 | 1,57 | 1,49 | 1,60 | 1,52 |
| Les valeurs de ratio ( traitement versus contrôle) | ||||
| Nom du gène | P2A-24h vTA24h | P2A-24h vTB24h | P2B-24h vTA24h | P2B-24h vTB824h |
| ITIH4 | 1,27 | 1,72 | 1,69 | 2,29 |
| NTF4 | 1,14 | 1,26 | 1,27 | 1,40 |
| BHLHE23/ BHLHB4 | 1,06 | 0,66 | 2,06 | 1,28 |
| LHX3 | 1,00 | 0,87 | 0,92 | 0,80 |
| CASKIN1 | 1,03 | 1,13 | 0,85 | 0,94 |
| CCL3 | 2,39 | 1,09 | 1,07 | 0,49 |
| CCL19 | 1,68 | 0,72 | 2,20 | 0,94 |
| GSTM2 | 1,47 | 1,28 | 1,69 | 1,47 |
| CYP4B1 | 1,09 | 1,10 | 0,94 | 0,95 |
| CYP4B1 | 1,00 | 1,06 | 0,94 | 0,99 |
| CYP4B1 | 0,95 | 1,06 | 0,86 | 0,97 |
| SULT1A4 | 1,35 | 1,15 | 1,75 | 1,49 |
Un gène est dit modulé à la hausse lorsque au moins 3 combinaisons sur 4 de ratio pour chaque point de cinétique montrent un Ri supérieur ou égal à 1,45.
Un gène est dit modulé à la baisse lorsque au moins 3 combinaisons sur 4 de ratio pour chaque point de cinétique montrent un Ri inférieur ou égal à 0,65.
Ces données montrant ainsi qu'une forte activité transcriptionnelle est observée par le traitement à 8h
L’inflammation et les réactions immunitaires sont des signes visibles de la réactivité de la peau. Les résultats montrent la répression d’une proportion significative des gènes codant pour des chemokines tels que CCL3 ou CCL19. Au niveau cutané, ces chemokines participent non seulement à l’inflammation mais contribuent aussi à la régulation de l’épithélialisation, la formation du tissu de granulation, de l’angiogenèse et du remodelage tissulaire. De même, le gène induit ITIH4 est un inhibiteur de l’inflammation.
Plusieurs gènes impliqués dans les voies de détoxification sont également induits: CYP4B1, un gène de la famille P450 des cytochromes, SULT1A1 qui code pour une sulfotransférase, et GSTM2 une glutathione-S transférase.
Les cytochromes catalysent des réactions afin de métaboliser des drogues, xénobiotiques, et elles participent à la synthèse du cholestérol, des stéroïdes et des lipides.
SULT1A1 est un enzyme cytoplasmique qui aide à métaboliser des xénobiotiques.
GSTM2 catalyse la conjugaison des carcinogènes, drogues, toxines et les produits générés par le stress oxydant, à la molécule glutathion destinée à l’élimination. Il existe une interaction entre les cytochromes et la glutathion S-transférase afin de garder les cytochromes dans un état moins oxydé. L’intérêt de ces enzymes est leur capacité à métaboliser et détoxifier les cellules.
Le point important de ce réseau réside dans la répression de l’expression de chemokines probablement en réponse à un taux basal d'inflammation. Ainsi, l’impact global du traitement conduit à réduire un état inflammatoire et a donc un effet apaisant sur la peau. De plus, un processus de détoxification accompagne une diminution de la production de chemokines.
Ainsi, un nombre significatif de gènes, connus pour être associés à une régulation neuronale sont induits, en particulier, NTF4 qui contrôle la survie et la différenciation des neurones.
LHX3 impliqué dans la spécification des motoneurones, est également induit, ainsi que BHLHB4/BHLHE23, qui fait partie d’une famille de régulateurs transcriptionnels connus sous le nom de «basic hélix-loop-helix» et est requis pour la différenciation et/ou la maintenance des cellules neuronales et CASKIN1 (CASK interacting protein 1), qui code pour une protéine adaptatrice dans les régions préet post-synaptiques.
Ces expériences montrent la co-expression de gènes impliqués dans le développement/l’activation des neurones, permettant la ré3053589 innervation de la peau, via l’induction du facteur neutrophique NTF4 et de régulateurs du développement neuronal.
Les modulations présentées démontrent ainsi une activité positive sur les expiants - traités par les surnageants de milieux de culture conditionnés par des cellules nerveuses préalablement traitées par les compositions, - permettant de maximiser la stimulation des cellules nerveuses. Cet effet est en particulier démontré par une augmentation maximale de synthèse de CGRP en présence de S2, au niveau en particulier du facteur de croissance Neurotrophin-4 et de l'effet anti-inflammatoire dû à la répression des chémokines (voir exemple 2).
Ainsi, la communication entre le système nerveux périphérique cutané et les cellules de la peau influence la morphogénèse et l’homéostasie de ce tissu.
Exemple 4 : Composition crème soyeuse regalbante
Toutes les quantités sont indiquées en pourcentage massique de matière active par rapport au poids total de la composition.
| Composé | % |
| Eau | Q SP 100 |
| Glycérine | 5, 0 |
| Polyacrylate de sodium | 0, 5 |
| Cellulose microcrystalline | 0, 5 |
| Stéarate de glycéryl / candelilla / jojoba / esters de polyglycéryl de son de riz / lactylate stéaroyl sodium / alcool cétéarylique | 4, 0 |
| Polystéarate de sucrose / polyisobutème hydrogéné | 2, 5 |
| Triglycérides en C10-C18 | 2, 0 |
| Acide palmitique / acide stéarique | 1, 5 |
| Huile de Cocos nucifera | 2, 0 |
| Isodécyle néopentanoate | 4, 0 |
| Coco-caprylate | 3, 0 |
| Diméthicone / copolymères de diméthicone | 4, 0 |
| Extrait de bulbe de Crocus chrysanthus | 0, 5 |
| Alcool / glycérine / phosphate d'ascorbyle magnésium | o, 5 |
| Extrait de Pisum sativum | 3, 0 |
| Caprooyl phytosphingosine | o, 2 |
| Octénylsuccinate aluminium starch | 4, 0 |
| Conservateurs | Q s |
Exemple 5 : Sérum liftant intensif
Toutes les quantités sont indiquées en pourcentage massique de matière active par rapport au poids total de la composition.
| Composé | % |
| Eau | QSP 100 |
| Polyacrylate de sodium | 0,8 |
| Diméthicone | 3,0 |
| Diméthicone / copolymères de diméthicone | 1,5 |
| Caprooyl phytosphingosine | 0,2 |
| Extrait de bulbe de Crocus chrysanthus | 0,5 |
| Alcool / glycérine / phosphate d'ascorbyle magnésium | 0,5 |
| Extrait de Pisum sativum | 5,0 |
| Glycérine | 5,0 |
| Fluorphlogopite synthétique / silice | 1,0 |
| Conservateurs | QS |
Claims (15)
- REVENDICATIONS1. Composition comprenant dans un milieu physiologiquement acceptable:• du phosphate d’ascorbyle de magnésium • un extrait de Pisum sativum • en extrait de bulbe de Crocus chrysanthus • un composé céramide de formule (I) comme médicament.
- 2. Composition selon la revendication 1K dans laquelle le phosphate d’ascorbyle de magnésium est présent dans des proportions de 0.1 à 10% en poids par rapport au poids total de la composition.
- 3. Composition selon l’une des revendications 1 à 2, dans laquelle le phosphate d’ascorbyle de magnésium est présent dans des proportions de 0.6 à 5 % en poids par rapport au poids total de la composition.
- 4. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à3, dans laquelle l’extrait de Pisum sativum est présent dans des proportions de 0.2 à 10% en poids par rapport au poids total de la composition.
- 5. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à4, dans laquelle l'extrait de Pisum sativum est présent dans des proportions de 0.5 à 5% en poids par rapport au poids total de la composition.
- 6. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à5, dans laquelle l'extrait de bulbe de Crocus chrysanthus est présent dans des proportions de 0.2 à 10% en poids par rapport au poids total de la composition.
- 7. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à6, dans laquelle l'extrait de bulbe de Crocus chrysanthus est présent dans des proportions de 0.5 à 5% en poids par rapport au poids total de la composition.
- 8. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à7, dans laquelle le composé de formule (I) est présent dans des proportions de 0.1 à 5 % en poids par rapport au poids total de la composition.
- 9. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à8, dans laquelle le composé de formule (I) est présent dans des proportions de 0.2 à 3% en poids par rapport au poids total de la composition.
- 10. Composition selon l’une quelconque des revendications 1 à9, caractérisée par le fait qu'elle se présente sous la forme d'émulsion huile-dans-eau, de gel, de crème, ou sous la forme d'un sérum.
- 11. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à10, pour son utilisation comme médicament.
- 12. Composition selon la revendication 11, pour le traitement anti-âge des peaux matures des mammifères.
- 13. Composition selon la revendication 11, pour son utilisation dans la limitation de l'inflammation basale de la peau.
- 14. Composition selon la revendication 11, pour améliorer l'élasticité de la peau d’un mammifère.
- 15. Composition selon la revendication 11, pour diminuer ou atténuer les rides de la peau d'un mammifère.1/1
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR1656560A FR3053589A1 (fr) | 2016-07-07 | 2016-07-07 | Utilisation de compositions pour peaux matures |
Applications Claiming Priority (2)
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| FR1656560A FR3053589A1 (fr) | 2016-07-07 | 2016-07-07 | Utilisation de compositions pour peaux matures |
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Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR3053589A1 true FR3053589A1 (fr) | 2018-01-12 |
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| FR1656560A Withdrawn FR3053589A1 (fr) | 2016-07-07 | 2016-07-07 | Utilisation de compositions pour peaux matures |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| FR (1) | FR3053589A1 (fr) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115634174A (zh) * | 2022-09-02 | 2023-01-24 | 广东丸美生物技术股份有限公司 | 用于皮肤的舒缓抗敏组合物及其制备方法以及化妆品 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR3021540A1 (fr) * | 2014-06-03 | 2015-12-04 | Caster | Compositions de soins de la peau |
-
2016
- 2016-07-07 FR FR1656560A patent/FR3053589A1/fr not_active Withdrawn
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| FR3021540A1 (fr) * | 2014-06-03 | 2015-12-04 | Caster | Compositions de soins de la peau |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| DATABASE GNPD [online] MINTEL; October 2014 (2014-10-01), "Nutri Rich Reshaping Cream", XP002768163, Database accession no. 2623763 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115634174A (zh) * | 2022-09-02 | 2023-01-24 | 广东丸美生物技术股份有限公司 | 用于皮肤的舒缓抗敏组合物及其制备方法以及化妆品 |
| CN115634174B (zh) * | 2022-09-02 | 2023-09-19 | 广东丸美生物技术股份有限公司 | 用于皮肤的舒缓抗敏组合物及其制备方法以及化妆品 |
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