FR2962902A1 - Utilisation cosmetique d'une eau de source et compositions cosmetiques ou dermatologiques la contenant - Google Patents

Abstract

L'invention concerne l'utilisation d'une eau de source dans une composition cosmétique, l'eau de source présentant un pH compris entre 7,8 et 10, une dureté comprise entre 17,1 - 60mg/L, et une concentration en matières solides dissoutes totales (TDS) comprise entre 50 et 250 mg/L, ainsi qu'une composition cosmétique ou dermatologique la contenant. L'invention concerne en particulier une méthode de soin cosmétique pour prévenir ou atténuer les taches pigmentaires cutanées, la coloration de zones de peau hyperpigmentées; à atténuer la pigmentation de la périphérie des zones dépigmentées; à améliorer l'homogénéité de la coloration de la peau ; ou à en éclaircir le teint.

Description

La présente invention a pour objet l'utilisation d'une eau de source comme agent cosmétique, et en particulier un agent cosmétique dépigmentant, éclaircissant ou blanchissant la peau et les fibres kératiniques, une composition cosmétique ou dermatologique la contenant, ainsi qu'une méthode de soin cosmétique ou dermatologique.

ETAT DE LA TECHNIQUE Chez l'homme, la pigmentation résulte de la synthèse et de la distribution des pigments mélaniques dans la peau, les follicules ou les cheveux. Elle est régulée par de nombreux facteurs internes ou externes. La pigmentation de la peau et des fibres kératiniques résulte de l'activité métabolique de cellules spécialisées, les mélanocytes. Ces cellules dendritiques de l'épiderme proviennent des précurseurs indifférenciés (mélanoblastes) de la crête neurale au cour de l'embryogénèse. Les mélanocytes produisent la mélanine au sein d'organites dénommés mélanosomes, qui sont transférés aux kératinocytes avoisinants via leurs dendrites. La surproduction de mélanine provoque des hétérogénéités de coloration de la peau et est liée à la formation de lentigo.

Des agressions externes, comme l'exposition aux ultra-violets, ou des situations naturelles, comme la vieillesse ou de brusques modifications hormonales, peuvent induire une pigmentation hétérogène qui se manifeste par l'apparition de taches brunes, en particulier sur le dos des mains, sur le visage, le décolleté, ou encore le crâne des hommes.

Les peaux sèches sont également connues pour être des peaux sans éclat et plus sensibles aux désordres pigmentaires. Les agressions extérieures, une barrière cutanée fragilisée ou lésée provoquent ou renforce la sécheresse cutanée. On connaît de nombreuses techniques et substances dépigmentantes qui visent, dans un but esthétique ou cosmétique, à améliorer l'homogénéité de la couleur de la peau, à en éclaircir le teint ou à corriger ou atténuer les taches pigmentaires cutanées, La recherche de nouvelles substances dépigmentantes efficaces et dépourvues de toxicité est donc une nécessité en cosmétique.35 BUTS DE L'INVENTION L'invention a pour but principal de résoudre le problème technique consistant en la fourniture d'une composition cosmétique présentant des propriétés blanchissante, éclaircissante ou dépigmentante de la peau et des fibres kératiniques. L'invention a également pour but de fournir une méthode de soins cosmétiques ou dermatologiques, et notamment une méthode de soins de la peau et des fibres kératiniques en réalisant un blanchissement, un éclaircissement ou une dépigmentation de la peau et des fibres kératiniques, au moins au niveau de zones hyperpigmentées. L'invention a aussi pour but de trouver un nouvel agent actif cosmétique peu coûteux, disponible en quantité suffisante pour l'industrie cosmétique ou dermatologique, et dont l'utilisation est industrialisable facilement.

RESUME DE L'INVENTION Ainsi, la présente invention décrit d'une composition cosmétique présentant des propriétés blanchissantes, éclaircissante ou dépigmentante de la peau et des fibres kératiniques, ainsi qu'une méthode de soin cosmétique ou dermatologique. Les inventeurs de la présente invention ont découvert de manière très surprenante qu'un certain type d'eau de source présente, sur les mélanocytes humains normaux (ME-IN), une activité de modulation de l'expression du gène codant pour la tyrosinase-related protein-1 (TRP-1) et/ou du gène codant pour la tyrosinase, enzymes clefs de la mélanogenèse. Par l'expression «eau de source », on entend une eau issue d'eaux souterraines, avantageusement naturellement propre à la consommation humaine. Ils ont mis en évidence que l'eau de source de l'invention présente un effet d'inhibition de l'expression des gènes TRP-1 et tyrosinase. Un tel effet d'inhibition sur l'expression de gènes codant pour des protéines impliquées dans la mélanogénèse, permet de réaliser une inhibition de la mélanogénèse induisant une activité blanchissante, éclaircissante ou dépigmentante de la peau et des fibres kératiniques. 2 2962902 DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION Selon un premier objet la présente invention concerne l'utilisation 5 d'une eau de source dans une composition cosmétique ou dermatologique, l'eau de source présentant un pH compris entre 7,8 et 10, et de préférence compris entre 7,8 et 8,6, une dureté comprise entre 17,1 - 60mg/L, et une concentration en matières solides dissoutes totales (TDS) comprise entre 50 et 250 mg/L, et de préférence comprise entre 55 et 100 mg/L. 10 On peut définir une eau selon divers paramètres résultant d'une analyse physicochimique, et notamment selon:

- sa dureté ou "TOTAL HARDNESS », exprimée en mg/L, calculée selon la formule : dureté =2,5[Ca'']x4[Mg2l, avec la classification suivante :

Tableau 1 Douce (« soft ») Peu dure (« Slightly Hard ») 17.1- 60 mg/L I Modérément dure (« Moderately Hard 60 -120 mg/L Dure (« Hard ») 120 -180 mg/L 1 Très dure (« Very Hard » >180 mg/L - sa concentration en matières solides dissoutes totales (TDS), exprimée en mg/L, avec la classification suivante :

Tableau 2 Extrêmement basse Super Low » 0 - 50 mg/L Basse (« Low ») 50- 250 mg/L Moyenne Medium 250- 800 mg/L Elevée High 800 - 1.500 mg/L Trés élevée (« Very High >1.500 mg/L - son pH, avec la classification suivante : 15 20 Tableau 3 Acide j5-6.7 pH Neutre pH 6.7 - 7.3 Légèrement alcaline pH 7.3 - 7.8 Alcaline pH 7.8 - 10 Avantageusement, l'eau de l'invention comprend les concentrations 5 suivantes: - Calcium (Ca2» comprise entre 3 et 10 mg/L, et de préférence compris entre 4 et 7 mg/L ; - Chlorure (CI-) comprise entre 8 et 16 mg/L, et de préférence compris entre 10 et 14 mg/L ; 10 - Magnesium (Mg2» comprise entre 1 et 5 mg/L, et de préférence compris entre 1 et 3 mg/L ; - Potassium (K» comprise entre 0,01 et 2 mg/L, et de préférence compris entre 0.1 et 1 mg/L ; - Sodium (Na) comprise entre 8 et 14 mg/L, et de préférence compris 15 entre 10 et 13 mg/L ; - Bicarbonates (HCO3-) comprise entre 10 et 50 mg/L, et de préférence compris entre 25 et 40 mg/L ; - Sulfates (SO42-) comprise entre 1 et 5 mg/L, et de préférence compris entre 2 et 4 mg/L. 20 De préférence, l'eau présente un pH compris entre 8,2 et 8,6. L'eau de l'invention présente avantageusement une concentration de matières solides dissoutes totales (TDS) comprise entre 50 et 100 mg/L, et de préférence compris entre 55 et 75 mg/L. 25 Selon une variante préférée, l'eau est extraite de la source Hlidarendi (également orthographiée « Hlidarendi ») dans la région Ôlfus, en Islande. On peut notamment caractériser cette eau par la composition suivante (concentration en poids) : 30 - Calcium (Ca2 d'environ 6,4 mg /L ; - Chlore (Cl- d'environ 13 - Magnésium (Mg2» d'environ 2,4 mg/L ; - Potassium (K» d'environ 0,6 mg /L ; - Sodium (Na) d'environ 12 mg/L - Bicarbonates (HCO3-) d'environ 33 L - Sulfates (SO42-) d'environ 3,4 mg/L ; - TDS d'environ 62 mg/L ; et présente un pH d'environ 8,4.

La composition est analysée selon la méthode EPA 200.7 pour les ions calcium, potassium, magnésium, sodium, et la dureté totale (« Total Hardness ») ; EPA 300.0 pour les ions chlorure, nitrates, bicarbonate, et sulfates ; SM 2540-C pour la concentration de matières solides dissoutes totales (TDS) ; et SM 4500-HB pour le pH. Une telle eau de source est commercialisée sous la dénomination ICELANDIC GLACIAL WATER® par la société Icelandic Water Holdings ehf, et distribuée par exemple en France par International Breweries & Beers (IBB), Raimbeaucourt 59283 - France.

La source est alimentée par le ruissellement d'eau de pluie, la fonte de neige et de glace, sur un terrain volcanique. Selon une variante particulière, on utilise l'eau de source de l'invention en tant qu'agent cosmétique dépigmentant, blanchissant ou éclaircissant de la peau et des fibres kératiniques (cheveux, poils), dans une composition cosmétique. De préférence, l'eau de source de l'invention est utilisée en tant qu'agent cosmétique inhibiteur de l'expression du gène codant pour la tyrosinase related protein-1 (TRP-1) et/ou tyrosinase dans des mélanocytes humains. Comme expliqué, cette eau de source présente une activité en tant qu'agent inhibiteur de la mélanogenèse. Du fait de cette activité, elle peut être utilisée en tant qu'agent dépigmentant, éclaircissant ou blanchissant dans des compositions cosmétiques ou dermatologiques. La présente invention concerne, selon un deuxième aspect, une 35 composition cosmétique ou dermatologique comprenant au moins une eau de source telle que définie précédemment.

Selon une variante préférée, la concentration en poids d'eau de source de l'invention par rapport au poids total de la composition est d'au moins 15°l0, de préférence d'au moins 40%, de préférence d'au moins 6 et encore de préférence d'au moins 80%.

La composition de l'invention est avantageusement une composition cosmétique ou dermatologique comprenant à titre d'agent actif au moins une eau de source telle que définie précédemment et au moins un excipient, tel qu'un excipient cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable. Selon un mode de réalisation, la composition est une composition 10 dépigmentante, blanchissante ou éclaircissante de la peau et des fibres kératiniques. La composition selon l'invention est avantageusement destinée à une application topique. La composition de l'invention peut être avantageusement formulée 15 sous forme de solution, sérum, lotion, spray, solution, lait, émulsion, de préférence du type huile dans eau, ou hydrogel. Selon un mode de réalisation particulier, la composition de l'invention comprend au moins un autre agent actif et au moins un excipient cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable. 20 De telles compositions visent en particulier à dépigmenter la peau et les fibres kératiniques, notamment à éclaircir le teint ou à améliorer l'homogénéité de la coloration de la peau, ou encore à corriger ou atténuer les taches pigmentaires de peau ou les zones de peau hyperpigmentées. Ainsi, la composition selon l'invention peut en outre comprendre un ou 25 plusieurs autres agents actifs pouvant être choisis parmi les substances ayant une activité dépigmentante ou une activité éclaircissante de la peau et des fibres kératiniques ou une activité blanchissante de la peau et des fibres kératiniques. Les agents dépigmentants connus de l'homme du métier sont par exemple l'arbutine, l'acide kojique, l'acide azélaïque, l'acide férulique, la vitamine B3 ou PP, le calcium D-pantetheine-S-sulfonate, les dérivés du résorcinol, le resvératrol, des extraits de licorice ou de mûrier blanc, l'acide alpha-lipoïque, l'acide linoléique, des chélateurs de cations tels que l'EDTA (acide éthylène diamine tétra acétique), un extrait de soja, un extrait de citrus unshiu, la diacetylboldine, le rétinol, un ester de rétinol tel que le propionate de rétinol ou le 35 palmitate de rétinol, la bêta-ecdysone, les dérivés de tocophérol tels que le tocophérol phosphate ou le potassium ascorbyl tocopheryl phosphate.

Elle peut également comprendre d'autres agents actifs, ayant d'autres activités cosmétiques, pouvant être choisis par exemple parmi les substances ayant une activité amincissante ; les substances ayant une activité hydratante ; les substances ayant une activité calmante, apaisante ou relaxante ; les substances ayant une activité stimulant la microcirculation cutanée pour améliorer l'éclat du teint, en particulier du visage ; les substances ayant une activité séborégulatrice pour le soin des peaux grasses ; les substances destinées à nettoyer ou purifier la peau ; les substances ayant une activité anti-radicalaire ; les substances destinées à atténuer ou retarder les effets du vieillissement de la peau, en particulier la formation de rides, par une activité visant à favoriser le maintien de la structure de la peau et/ou à limiter la dégradation de la matrice extracellulaire des couches superficielles du derme et de l'épiderme et/ou à obtenir un effet protecteur, correcteur ou restructurant de la peau ; les substances ayant une activité anti-inflammatoire. La composition selon l'invention comprend également avantageusement au moins un excipient cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable, pouvant être avantageusement choisi parmi des polymères, des agents tensioactifs, des agents de rhéologie, des parfums, des électrolytes, des ajusteurs de pH, des agents anti-oxydants, des conservateurs, des colorants, des nacres, des pigments et leurs mélanges. Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne l'utilisation de l'eau de source décrite précédemment dans une composition cosmétique ou dermatologique ou pour la préparation d'une composition cosmétique ou dermatologique, dans laquelle ladite composition est destinée à : - prévenir ou atténuer les taches pigmentaires cutanées (zones d'hyperpigmentation) ou la coloration de zones de peau hyperpigmentées, en particulier celles consistant en diverses dyschromies cutanées, notamment les dermatoses de contact, les photo-dermatoses médicamenteuses, le mélasma, les kératoses, par exemple séniles ou actiniques, le lentigo sénile (taches de vieillesse) ou le lentigo solaire, les taches pigmentaires résultant de cicatrices ou brûlures, ou les taches pigmentaires induites par des réactions allergiques ou photo-toxiques ; - prévenir ou atténuer la pigmentation de la périphérie des zones 35 dépigmentées, notamment induites par des leucodermies telles que le vitiligo - améliorer l'homogénéité de la coloration de la peau ; ou encore à en éclaircir le teint. La présente invention concerne selon un troisième aspect une méthode de soin cosmétique ou dermatologique comprenant l'application topique 5 d'au moins une eau de source ou d'une composition telle que définie précédemment. Selon un mode de réalisation particulier, la méthode de soin cosmétique est destinée à : - prévenir ou atténuer les taches pigmentaires cutanées (zones 10 d'hyperpigmentation) ou la coloration de zones de peau hyperpigmentées, en particulier celles consistant en diverses dyschromies cutanées, notamment les dermatoses de contact, les photo-dermatoses médicamenteuses, le mélasma, les kératoses, par exemple séniles ou actiniques, le lentigo sénile (taches de vieillesse) ou le lentigo solaire, les taches pigmentaires résultant de cicatrices ou 15 brûlures, ou les taches pigmentaires induites par des réactions allergiques ou photo-toxiques ; - prévenir ou atténuer la pigmentation de la périphérie des zones dépigmentées, notamment induites par des leucodermies telles que le vitiligo ; - améliorer l'homogénéité de la coloration de la peau ; ou encore à en 20 éclaircir le teint. La présente invention concerne notamment une méthode de soin cosmétique de la peau et des fibres kératiniques comprenant l'application sur au moins une zone hyperpigmentée de la peau ou des fibres kératiniques, du corps ou du visage, d'une quantité efficace d'au moins une composition cosmétique telle 25 que définie ci-dessus. Par "quantité efficace", pour tout aspect de l'invention, on entend une quantité qui est au moins égale à la quantité nécessaire pour produire l'effet cosmétique spécifié. D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront 30 clairement à l'homme de l'art suite à la lecture de la description explicative qui fait référence à des exemples donnés à titre d'illustration et qui ne sauraient en aucune façon limiter la portée de l'invention. Les exemples font partie intégrante de la présente invention et toute caractéristique issue de la description prise dans son ensemble, incluant les 35 exemples, apparaissant nouvelle par rapport à un état de la technique antérieure quelconque, fait partie intégrante de l'invention dans sa fonction et dans sa généralité. D'autre part, dans les exemples, tous les pourcentages sont donnés en poids, sauf indication contraire, et la température est exprimée en degré Celsius sauf indication contraire, et la pression est la pression atmosphérique, sauf indication contraire.

DESCRIPTION DES FIGURES

10 La Figure 1 est relative à un histogramme représentant l'effet d'une eau de l'invention (El) sur l'expression du gène codant pour la tyrosinase de mélanocytes humains normaux (donneur 1). En particulier, la figure 1 est relative à l'effet de l'Eau d'Islande sur le taux de transcrits du gène tyrosinase dans des mélanocytes humains normaux traités pendant 24 heures. 15 La Figure 2 est relative à un histogramme représentant l'effet de l'eau (EM) sur l'expression du gène codant pour la tyrosinase de mélanocytes humains normaux (donneur 1). En particulier, la figure 2 est relative à l'effet de l'Eau MilliQ sur le taux de transcrits du gène tyrosinase dans des mélanocytes humains normaux traités pendant 24 heures. 20 La Figure 3 est relative à un histogramme représentant l'effet d'une eau de l'invention (El) sur l'expression du gène codant pour la TRP-1 de mélanocytes humains normaux (donneur 2). En particulier, la figure 3 est relative à l'effet de l'Eau d'Islande sur le taux de transcrits du gène TRP-1 dans des mélanocytes humains normaux traités pendant 24 heures. 25 La Figure 4 est relative à un histogramme représentant l'effet d'une eau de l'invention (El) sur l'expression du gène codant pour la tyrosinase de mélanocytes humains normaux (donneur 2). En particulier, la figure 4 est relative à l'effet de l'Eau d'Islande sur le taux de transcrits du gène tyrosinase dans des mélanocytes humains normaux traités pendant 24 heures. 30 Dans les figures 1 à 4, le test statistique de Student a été utilisé pour comparer l'effet transcriptionnel entre les cellules traitées et les cellules non traitées (NT). Les résultats sont considérés comme significatifs pour une valeur de p<0.05, et indiqués par une astérisque sur les figures 1 à 4 (*). 35 EXEMPLES EXEMPLE 1 - EFFET DU TRAITEMENT PAR L'EAU PURE LI-0® ») ET L'EAU DE L'INVENTION, DITE EAU D'ISLANDE. SUR 5 L'EXPRESSION DE GENES IMPLIQUES DANS LA MELANOGENESE ET LES DEFAUTS DE PIGMENTATION CUTANEE.

Le terme « eau » utilisé seul fait référence à une eau de laboratoire purifiée. L'eau de l'invention (El) utilisée dans les exemples est dénommée « Eau 10 d'Islande » ou « ICELANDIC GLACIAL WATER® ».

L'objectif de cette étude a été d'évaluer l'effet d'un actif, l'Eau d'Islande, sur l'expression des gènes codant pour la tyrosinase-related protein 1 (TRP-1) ou la tyrosinase. 15 Des mélanocytes humains normaux (MHN) issus de deux donneurs caucasiens sont mis en culture en présence d'une eau testée à une concentration définie non cytotoxique, pendant 24 heures. Les ARN totaux sont ensuite extraits puis soumis à transcription inverse afin d'en obtenir les ADNc. Puis une étude par RT-PCR quantitative en temps réel des gènes d'intérêt est effectuée. 20 METHODES Composition du milieu 1 : Fournisseur/référence Concentration finale 25 Milieu E-199 avec glutamax Fisher/41150-087 Sérum de veau foetal Abcys/51800 10 °Io Composition du milieu 2 : Fournisseur/référence Concentration finale 30 KSFM Fisher /17005-075 Extraits pituitaires Fisher /17005-034 50 pg/ml de KSFM 0 35 Composition du milieu 3 : Fournisseur/référence Concentration finale Milieu 2 90% Milieu 1 10% b-Fibroblast Growth Factor Fisher /13256-029 10 ng/ml Des MHN mis en culture sont ensemencés en plaques 6 puits à raison de 2,5 05 cellules/puit en milieu 3 (composition ci-dessus). Trois puits sont ensemencées par condition de culture, trois puits témoin non traités et trois puits 10 traitées pour un temps de traitement de 24 heures.

Traitement avec l'Eau d'Islande

L'eau selon l'invention, également dénommée eau d'Islande dans 15 l'exemple, est commercialisée sous la dénomination commerciale ICELANDIC GLACIAL WATER®. 48 heures après l'ensemencement, les cellules sont traitées par mise en contact avec 15 % d'Eau d'Islande (ICELANDIC GLACIAL WATER®) dans du milieu 3, filtré sur filtre 0,22 pm. Un témoin non traité est également préparé. 20 Après 24 heures de traitement, les cellules sont récupérées afin d'en extraire les ARN totaux.

Obtention des ARN totaux à l'aide du kit Rneasv (Qiagen) Le milieu de culture des cellules est éliminé, et 350 pL de tampon de 25 lyse RLT (fourni dans le kit) sont ajoutés. Les cellules sont raclées à l'aide d'un Cell Scraper et le lysat cellulaire est homogénéisé à l'aide d'une seringue. Les ARN totaux sont extraits selon le protocole du fournisseur. Les solutions d'ARN totaux ainsi obtenues sont dosées, et leur qualité vérifiée, à l'aide du Bioanalyseur 2100 (Agitent Technologies), relié à un ordinateur possédant le logiciel spécifique d'analyse des résultats (logiciel 2100 expert). La technique nécessite une micro-plaque de 12 puits (RNA 6000 NanoChips) et un kit de réactifs (RNA 6000 Nano Reagents Supplies), spécifiques du dosage des ARN totaux eucaryotes. 35 Synthèse des ADN complémentaire

Le kit de reverse transcription (RT) utilisé est le « High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit, 1000 Reactions », (Applied Biosystems) utilisé selon le 5 protocole du fournisseur. 100 ng d'ARN totaux, après DNAse, sont dilués dans de l'eau pour un volume final de 25 pL. Ils sont ensuite incubés pendant 10 minutes à 25°C puis 2 heures à 37°C avec 25 pL de mélange réactionnel de High capacity cDNA archive kit 2X préalablement préparé comme indiqué ci dessous.

10 Réactifs volume RT buffer 10 pL dNTP buffer 4 pL Random primer 10 pL RNAse out 1 pL 15 RT 5 pL H2O 20 pL

RT-PCR quantitative en temps réel 20 Réactifs utilisés pour l'analyse

Kit RNeasy RNAse out Taqman Fast Universal master mix 25 TaqMan B-2-m expression Taqman TRP-1 expression Taqman Tyrosinase expression

L'effet des traitements est évalué par PCR quantitative en temps réel 30 (QRT-PCR) avec le bloc 96 puits fast du 7900HT de chez Applied biosystems.

Préparation du mélange réactionnel pour 1 réaction TaqMan Fast universel PCR master mix (2x) 10 pL TaqMan gene expression assay 1 pL 35 H2O 4 pL 12 Fournisseur/référence Qiagen/74104 Invitrogen/10777-019 Applied/4352042 Applied/Hs99999907_m 1 Applied/HsO0167051_m 1 Applied/HsO0165976_ml Les 15 pL du mélange sont placés dans les puits d'une plaque 96 puits spécialement conçue pour l'appareil 7900HT, 5 pL d'eau sont ajoutés (pour le blanc) ou 5 pL de dilutions successives d'ADNc (pour la gamme) ou 5 pL d'échantillons au 1/50ème dilués dans de l'eau purifiée, quelque soit le gène, dans les puits correspondants.

Analyse des résultats La PCR quantitative en temps réelle peut être exploitée si son efficacité est comprise entre 90 et 110%. Cette efficacité est évaluée par la mise en place d'une gamme étalon à partir de dilutions en série d'ADNc extraits des cellules appropriées. La valeur de pente obtenue traduit l'efficacité d'amplification ; une PCR est efficace à 100% lorsque la règle du 2n (n=nombre de cycles, à savoir 40) est respectée et que la valeur de pente est de -3,32. Pour chaque échantillon, le nombre de cycles auquel apparaît le signal est déterminé par le logiciel SDS 2.3 (Applied Biosystems), grâce à la droite de calibration établie avec la gamme étalon, la concentration en nombre de copies de transcrit peut ainsi être calculée.

Pour un même essai, les niveaux d'expression des transcrits TRP-1 et tyrosinase obtenus sont normalisés par rapport à la valeur obtenue pour le gène -2-m. Ce gène dont l'expression est constitutive et invariante permet de s'affranchir de toute variation de quantités entre les essais et notamment celles dues à des efficacités de transcription inverse différentes.

Analyse statistique On évalue des variations d'activité transcriptionnelle statistiquement significative en appliquant le test de Student. Chaque condition est en triplicate (3 témoins non traités et 3 traités). Le test Fischer est tout d'abord appliqué en comparant les deux matrices de données, Lorsque le test Fischer est supérieur à 0,05 alors la variance pour le test de Student est égale à 2. Lorsque le test Fischer est inférieur à 0,05, alors la variance est égale à 3. 35 Les variations transcriptionnelles retenues seront celles qui ont un test de Student inférieur à 0,05. Les données présentées dans la partie résultat sont les ratios des quantités obtenues dans les échantillons traités versus les échantillons témoins non traités, le tout rapporté au gène invariant 3-2-m.

RESULTATS 1.1 - Effet du traitement par une gamme de concentration d 'eau Milli-Q® ou d' Eau d'Islande sur l'expression du gène tyrosinase dans des MHN après 24 heures de traitement.

0 Des mélanocytes humains normaux, d'un donneur 1, ensemencés en plaques 6 puits sont traités, à confluence, en triplicate, par 5 ou 15 % d'eau Milli-Q® ou d'Eau d'Islande pendant 24 heures. Un témoin non traité est également préparé. Le taux de transcrits codant pour le gène codant pour la tyrosinase est 15 mesuré pour un échantillon et rapporté aux taux de transcrits codant pour le gène invariant I3-2-m. Les résultats obtenus sont traités sous forme d'histogrammes. La figure 1 montre une diminution du taux de transcrits du gène codant pour la tyrosinase de 16 % après 24 heures de traitement avec l'Eau 20 d'Islande. La figure 2 montre que l'eau Milli-Q® n'a aucun effet sur l'expression du gène tyrosinase. Contrairement à l'eau une eau de l'invention permet d'inhiber significativement l'expression du gène codant pour la tyrosinase, impliqué dans la 25 mélanogenèse et dans la pigmentation cutanée. 1.2 - Effet du traitement par l'Eau d'Islande sur l'expression du gène codant pour la TRP-1 dans des MHN après 24 heures de traitement.

30 Des mélanocytes humains normaux, issus d'un donneur 2, ensemencés en plaques 6 puits sont traités, à confluence, en triplicate, par 15 % d'Eau d'Islande pendant 24 heures. Un témoin non traité est également préparé. Le taux de transcrits codant pour le gène TRP-1 est mesuré pour un échantillon et rapporté aux taux de transcrits codant pour le gène invariant [3-2-m. 35 Les résultats obtenus sont traités sous forme d'histogrammes.5 La figure 3 montre une diminution du taux de transcrits du gène TRP-1 47.10 % après 24 heures de traitement avec l'Eau d'Islande. Une eau de l'invention permet d'inhiber significativement l'expression du gène codant pour la TRP-1 impliqué dans la mélanogenèse et dans la 5 pigmentation cutanée.

1.3 - Effet du traitement dans des mélanocytes humains normaux par de l'Eau d'Islande à 15% sur l'expression du gène codant pour la tyrosinase après 24 heures de traitement. 10 Des mélanocytes humains normaux issus d'un donneur 2, ensemencés en plaques 6 puits sont traités à confluence, en triplicate, par 15 % d'Eau d'Islande pendant 24 heures. Un témoin non traité est également préparé. Le taux de transcrits codant pour le gène tyrosinase est mesuré pour 15 un échantillon et rapporté aux taux de transcrits codant pour le gène invariant [3-2-m. Les résultats obtenus sont traités sous forme d'histogrammes. La figure 4 montre une diminution du taux de transcrits du gène codant pour la tyrosinase de 37.60 °Io après 24 heures de traitement avec l'Eau 20 d'Islande. CONCLUSION Cette étude a permis de montrer qu'une eau de l'invention inhibe en 25 partie la transcription des gènes codant pour TRP-1 et tyrosinase dans des mélanocytes humains normaux (MI-IN). Le traitement de 24 heures avec l'Eau d'Islande entraîne une diminution significative de l'expression des gènes codant pour la TRP-1 et tyrosinase. Ainsi l'eau de l'invention est utilisée en tant qu'agent actif 30 dépigmentant, blanchissant ou éclaircissant de la peau, dans une composition cosmétique. EXEMPLE 2 - FORMULATIONS COSMETIQUES SELON L'INVENTION

35 On prépare des compositions selon les formules ci-dessous, dans lesquelles les pourcentages sont exprimés en poids par rapport à la composition finale. 2.1 - Emulsion-gel visage de jour d pigmentante On prépare une émulsion-gel selon la composition ci-dessous :.

Glycérine 5 % Triglycérides caprylique/caprique/succinique 5 % Méthoxycinnamate d'octyle 1 % Diméthicone copolyol 0,5 % crosspolymère acrylates CIO-30 alkyl acrylate 0,5 % Ascorbyl-2 glucoside 2 % Eau d'Islande 90 % Conservateurs, parfum, colorants qs.

Certaines personnes soumises au rayonnement plus ou moins intense de la lumière du jour, voire du soleil directement, souhaitent conserver un teint clair et éviter l'apparition de taches pigmentées. L'utilisation de l'émulsion-gel ci-dessus permet d'atteindre ce but. Cette composition s'applique sur le visage généralement le matin. Elle agit manière préventive ou curative sur la pigmentation, régulière ou non, du visage. 2.2 - Fluide protecteur SPF 30 préventif des taches pigmentaires On prépare un fluide protecteur selon la composition ci-dessous : Pentacyclométhicone volatile 49 % Dioxyde de titane 15 % Méthoxycinnamate d'octyle 7,5 % Glycérine 5 % Phényltriméthicone 3 % Diméthicone copolyol Polyméthylméthacrylate 2,5 % Butyl méthoxydibenzoyle méthane 1 % Eau d'Islande 15%30 Neutralisant, Parfum, Conservateurs, antioxydants qs. Le fluide protecteur est utilisé pour prévenir l'apparition de taches pigmentaires, chez les personnes prédisposées à ce phénomène, avant l'exposition à un rayonnement solaire intense. Il est à noter que la présence d'une concentration élevée en filtre solaire permet de compenser la diminution de la protection naturelle, conséquence de la baisse du taux de mélanine. 2.3 - Crème visage dépigmentante 0 On prépare une crème selon la composition ci-dessous : Glycéryl stéarate + Peg-100 stéarate 5 oh Polyisobutène hydrogéné 4 % Magnésium ascorbyl phosphate 3 Tricaprylate /caprate de glycérol 3 0/0 Squalane 3 % Glycérine 2 °Io Cire d'abeille 1 % Cétéaryl octanoate 1,5 % Alcool cétylique 1 % Alcool stéarylique 1 % Diméthicone 1 °Io Gomme xanthane 0,3 % Acide éthylène diamine tétracétique 0,2 % di-glycerrhyzinate de potassium 0,2 % Acétate de tocopherol 0,2 % Acide salicylique 1 % Citrate de sodium 0, Eau de l'Invention 70 % Neutralisant, Parfum, Conservateurs qs. L'utilisation de cette crème, qui se présente sous forme d'une émulsion huile-dans-eau, permet de traiter les irrégularités de la pigmentation cutanée, en atténuant ou supprimant les taches de sénescence ou les taches pigmentaires actiniques. Elle homogénéise la coloration de la peau et éclaircit le teint.

2.4 - lotion visage pour éclaircir le teint On prépare une lotion selon la composition ci-dessous Alcool éthylique 30 % PPG-3 Myristyl éther 5% Glycérine 2% Carbomère 0,2 0/0 Butylene glycol 3% Polysorbate 20 0,2 0/0 calcium D-pantetheine-Ssulfonate 0,2 % Extrait de Citrus unshiu 2% Eau de l'invention 56 °la Neutralisant, Parfum, Conservateurs qs. Cette lotion pour éclaircir le teint s'utilise après le démaquillage et le nettoyage de la peau. 2.5 - Sérum Visage éclaircissant On prépare un sérum selon la composition ci-dessous : Eau d'Islande 88 % Glycerine 2% EDTA tétrasodique/Acide citrique/Citrate trisodique qsp pH souhaité Gomme xanthane 0,25 °/o Extrait de burnett 0,5 % Ascorbyl-2 glucoside 2% Polymethylsilsesquioxane 2 % Alcool ethylique 2 % Acide lactique 1 % Polyacrylamide, C13-14 isoparaffine, laureth-7 0,5% Dimethicone copolyol 0,25% Parfum, colorant, conservateur qs Une goutte de cette composition très concentrée de sérum, s'applique sur le visage généralement avant l'application d'une crème pour le visage. Ce sérum s'utilise habituellement par cures d'une à deux semaines pour obtenir ou entretenir un éclaircissement du teint. 2.6 - Lotion capillaire pour éclaircir la chevelure On prépare une lotion capillaire selon la composition ci-dessous : Eau d'Islande 46 Alcool 50 °10 Panthenylethyl ether 0,5 % Acétate DL- a -tocopherol 0,2 Polysorbate 60 1% Extrait de licorice 0,1 Parfum 0,2 010 Glycerine 0,5 0/0 Colorant qs Cette lotion s'applique sur les cheveux matin et soir pendant plusieurs semaines, pour obtenir un éclaircissement progressif de la chevelure.

25 2.7 - Gel crème asti-taches pour les mains On prépare un gel-crème selon la composition ci-dessous : Eau d'Islande 69 % Caprilic/capric diglyceryl succinate 6 % Octyl octanoate 2, Methoxycinnamate d'octyle 6 % Ascorbyl-2 glucoside 2 % Phenyltriméticone 2,5 % 0 Benzophenon-3 0,5 Hyaluronate de sodium 0 05 % Gomme xanthane 0,2% Acrylates/C10.30 aikyl acrylate copolymere 0,5% Polymethylmetaacrylate 1 % Glycerine 2 % PEG 150 3 % Neutralisants, Colorants, parfum, conservateurs qs Ce gel-crème doit être appliqué directement sur les taches de sénescence (lentigos séniles) des mains, pour en atténuer la coloration. Dans les exemples « qs » signifie « quantité suffisante », c'est-à-dire la quantité suffisante pour le solde à 100%.

Claims (14)

1. REVENDICATIONS1. Utilisation d'une eau de source dans une composition cosmétique, caractérisée en ce que l'eau de source présente un pH compris entre 7,8 et 10, et de préférence compris entre 7,8 et 8,6, une dureté comprise entre 17,1 - 60mg/L, et une concentration en matières solides dissoutes totales (TDS) comprise entre 50 et 250 mg/L, et de préférence comprise entre 55 et 100 mg/L.
2. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'eau comprend les concentrations suivantes: - Calcium (Ca2+) comprise entre 3 et 10 mg/L, et de préférence i compris entre 4 et 7 mg/L ; - Chlorure (Cr) comprise entre 8 et 16 mg/L, et de préférence compris entre 10 et 14 mg/L ; - Magnesium (Mg2+) comprise entre 1 et 5 mg/L, et de préférence 15 compris entre 1 et 3 mg/L ; - Potassium (K+) comprise entre 0,01 et 2 mg/L, et de préférence compris entre 0.1 et 1 mg/L ; - Sodium (Na+) comprise entre 8 et 14 mg/L, et de préférence compris entre 10 et 13 mg/L ; 20 - Bicarbonates (HCO3) comprise entre 10 et 50 mg/L, et de préférence compris entre 25 et 40 mg/L ; - Sulfates (SO42-) comprise entre 1 et 5 mg/L, et de préférence compris entre 2 et 4 mg/L.
3. 3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que l'eau 25 présente un pH compris entre 8,2 et 8,6.
4. 4. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que l'eau présente une concentration de matières solides dissoutes totales (TDS) comprise entre 50 et 100 mg/L, et de préférence compris entre 55 et 75 mg/L.
5. 5. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'eau 30 présente la composition suivante : - Calcium (Ca2+) d'environ 6,4 mg/L ; - Chlore (Cr) d'environ 13 mg/L ; - Magnésium (Mg2+) d'environ 2,4 mg/L ; - Potassium (K+) d'environ 0,6 mg/L ; 35 - Sodium (Na+) d'environ 12 mg/L ; 2962902 22 2610.2010 - Bicarbonates (HCO3) d'environ 33 mg/L ; - Sulfates (SO42") d'environ 3,4 mg/L ; - TDS d'environ 62 mg/L ; et présente un pH d'environ 8.4. 5
6. 6. Utilisation d'une eau de source telle que définie à l'une quelconque des revendications précédentes en tant qu'agent dépigmentant, blanchissant ou éclaircissant de la peau et des fibres kératiniques, dans une composition cosmétique.
7. 7. Utilisation d'une eau de source telle que définie à l'une quelconque 10 des revendications précédentes en tant qu'agent cosmétique inhibiteur de l'expression du gène codant pour la tyrosinase related protein-1 (TRP-1) et/ou tyrosinase dans des mélanocytes humains.
8. 8. Composition cosmétique ou dermatologique caractérisée en ce qu'elle comprend au moins une eau de source telle que définie à l'une quelconque 15 des revendications 1 à 5.
9. 9. Composition selon la revendication 8, caractérisée en ce que la concentration en poids d'eau de source par rapport au poids total de la composition est d'au moins 15%, de préférence d'au moins 40%, de préférence d'au moins 60%, et encore de préférence d'au moins 80%. 20
10. 10. Composition selon la revendication 8 ou 9, caractérisée en ce que la composition est une composition dépigmentante, blanchissante ou éclaircissante de la peau et des fibres kératiniques.
11. 11. Composition selon l'une quelconque des revendications 8 à 10 caractérisée en ce que est formulée sous forme de : solution, sérum, lotion, spray, Z 25 solution, lait, émulsion, de préférence du type huile dans eau, ou hydrogel.
12. 12. Composition selon l'une quelconque des revendications 8 à 11 caractérisée en ce que la composition comprend au moins un autre agent actif et au moins un excipient cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable.
13. 13. Méthode de soin cosmétique caractérisée en ce qu'elle comprend 30 l'application topique d'au moins une eau de source telle que définie à l'une quelconque des revendications 1 à 5 ou d'une composition cosmétique telle que définie à l'une quelconque des revendications 8 à 12.
14. 14. Méthode de soin selon la revendication 13, caractérisée en ce qu'elle est destinée à : 35 - prévenir ou atténuer les taches pigmentaires cutanées (zones dliyperpigmentation) ou la coloration de zones de peau hyperpigmentées, en26.10.2010 particulier celles consistant en diverses dyschromies cutanées, notamment les dermatoses de contact, les photo-dermatoses médicamenteuses, le mélasma, les kératoses, par exemple séniles ou actiniques, le lentigo sénile (taches de vieillesse) ou le lentigo solaire, les taches pigmentaires résultant de cicatrices ou brûlures, ou les taches pigmentaires induites par des réactions allergiques ou photo-toxiques ; - prévenir ou atténuer la pigmentation de la périphérie des zones dépigmentées, notamment induites par des leucodermies telles que le vitiligo ; - améliorer l'homogénéité de la coloration de la peau ; ou encore à en éclaircir le teint.