FR2942136A1 - Utilisation d'un extrait d'une algue brune du genre halidrys dans les domaines cosmetiques et/ou dermatologiques - Google Patents

Abstract

La présente invention a pour objet l'utilisation d'un extrait d'une algue brune appartenant au genre Halidrys en tant qu'agent actif, seul ou en association avec au moins un autre agent actif, pour la préparation d'un produit cosmétique et/ou dermatologique à usage topique pour la peau, les muqueuses etlou les phanères.

Description

-- UTILISATION D'UN EXTRAIT D'UNE ALGUE BRUNE DU GENRE HALIDRYS DANS LES DOMAINES COSMETIQUES ET / OU DERMATOLOGIQUES La présente invention concerne des utilisations d'un extrait de l'algue brune appartenant au genre Halidrys, préférentiellement Halidrys siliquosa dans des préparations cosmétiques et /ou dermatologiques.

10 Le genre Halidrys a été décrit par Lyngbye en 1819. Il appartient au Phylum des Heterokontophyta, à la classe des Phaeophyta (algues brunes) et à la famille des Cystoseiracea. Il regroupe plusieurs espèces dont Halidrys dioica présente sur les côtes américaines de Californie et du Mexique, Halidrys murmanica présente sur les côtes arctiques russes et Halidrys siliquosa endémique des côtes atlantiques 15 européennes.

L'algue Halidrys siliquosa (Linnaeus ) Lyngbye se caractérise par sa richesse en oligomères de phioroglucinol (cf Glombitza ,K.W., 1979 in Marine Algae in Pharmaceutical Science, eds H.A. Hoppe et al., :303-342 , Walter de 20 Gruyter , Berlin, N.Y.) et en divers métabolites secondaires tels des méroditerpènes (Culioli G. et al., 2008 ù J. Natural Products , 71(7): 1121-1126) et différents hydroquinols (Higgs , M.D. & Mulheiron, L.J., 1981 ù Tetrahedron, 37 (18) : 3209-3213). 25 Ses propriétés antibactériennes et antibiotiques sont liées à la présence de phénols acetyls (Sauter, E. et al., 1977 ù Tetrahedron, 33(10): 1239-1244) et de l'acide acrylique (Chesters, G.C.C. & Stott, J.A., 1956 ù Proc. 2"d Int. Seaweed Symp. 49-53 ; Hornsey, I.S. & Hide, D., 1974 ù Br. Phycol. J., 9:353-361). 30 Halidrys siliquosa contient aussi de l'acide alginique et de ce fait peut servir comme matière première pour la fabrication d'alginates (Chapman, V.J. & Chapman, D.J., 1980 ù Seaweeds and their uses , 334 p. Chapman & Hall, London, N-Y).

-2- L'utilisation d'Halidrys siliquosa dans l'art antérieur concerne le domaine pharmaceutique et médical ainsi que le domaine industriel lié à la fabrication de peintures.

Le brevet WO 2005/023227 décrit une application dans des compositions pharmaceutiques contenant de la nicotine. La nicotine est absorbée dans et / ou adsorbée sur de la cellulose extraite de divers organismes dont les algues et notamment Halidrys siliquosa. La libération mieux contrôlée de la nicotine permet de réaliser des compositions telles que chewing gums, sprays buccaux et nasaux, comprimés sublingaux, patch transdermiques ou poudres.

La demande brevet WO 200/ 018698 se rapporte à des compositions à finalité médicale comportant des lectines et à une méthode modulant une réponse immune chez l'animal, en particulier chez l'Homme. Dans ce cas, c'est l'utilisation des lectines et plus particulièrement des hémagglutinines présentes chez Halidrys siliquosa (Blunden G. et al., 1978 in Irvine, D.E.G. et al., ù Modern Approaches to the Taxonomy of Red and Brown Algae, Academic Press, London, U.K) qui est revendiquée.

Les demandes de brevets WO 1998 / 051154 et WO 1998 / 039969 s'appuient sur les propriétés anti-bactériennes de l'algue pour élaborer des algicides complexes (produits chimiques ù algues) destinés à des applications anti-fouling en vue de contrôler la croissance des algues sur les peintures.

L'utilisation d'algue du genre Halidrys, notamment Halidrys siliquosa dans les domaines cosmétique et dermatologique n'a pas été envisagée.

Or les auteurs de la présente invention ont découvert que les extraits d'Halidrys, notamment d'Halidrys siliquosa présente diverses activités biologiques et biochimiques, associées à une grande tolérance cutanée, les rendant directement utilisables dans des compositions à usage cosmétique et/ou dermatologique. 5 -3- Dans un mode de réalisation avantageux, les extraits d'algue selon la présente invention sont des extraits aqueux caractérisés en ce que l'on réalise l'extraction à partir de thalles ou toute partie de thalles sous forme fraîche, congelée, sèche, entière, fragmentée ou broyée. Les extraits sont avantageusement obtenus par macération des thalles dans un solvant ou un mélange de solvants suivie d'une filtration et d'une centrifugation pour éliminer les particules.

10 Dans un mode préféré de réalisation de la présente invention, l'extrait ainsi obtenu peut être calibré par des ultrafiltrations et concentrations successives afin d'obtenir un extrait de poids moléculaire compris entre 500 000 à 10 000 Daltons.

A titre de solvants avantageusement employés, on citera l'eau, les solvants 15 chlorés tel que le chloroforme, les éthers tels que l'éther éthylique, l'acétone, les esters en C2 à c8 tels que l'acétate d'éthyle et l'acétate de butyle, des alcools en Cl à C6 tels que le méthanol, l'éthanol, l'isopropanol et le butanol, des polyols en C2 à C6 tels que le propylène glycol et le butylène glycol, sans que cette liste soit limitative. Ces solvants peuvent être utilisés seuls ou en mélange. 20 L'extraction peut être renouvelée plusieurs fois jusqu'à épuisement des thalles conformément aux procédés bien connus de l'homme de l'art. La proportion en masse entre le solvant et le matériau à extraire peut varier dans de larges limites. Plus précisément elle peut être comprise entre 20:1 et 5:1 25 et de préférence 10:1.

Des améliorations, optimisations et modifications du procédé de préparation des extraits sont envisageables. A la place de la macération simple, on peut employer les techniques à contre courant, la décoction, la lixiviation, l'extraction 30 sous reflux, l'extraction à l'aide d'ultrasons ou de micro-ondes associée ou non aux solvants, l'extraction au moyen de fluides supercritiques, notamment le CO2 supercritique avec ou sans co-solvant.

-4- Pour certaines applications cosmétiques, il peut s'avérer judicieux de concentrer et de purifier l'extrait liquide ou encore de préparer un extrait sec à partir d'extrait liquide par exemple par des techniques classiques de séchage, précipitation, évaporation, atomisation ou lyophilisation. L'objet de la présente invention consiste donc en l'utilisation d'extraits du genre Halidrys, notamment d'Halidrys siliquosa en tant qu'agents actifs pour la préparation de compositions cosmétiques et/ou dermatologiques à usage topique pour la peau, les muqueuses et/ou les phanères. 10 Le vieillissement cutané est un phénomène lent et irréversible. Il résulte de la conjonction de plusieurs facteurs puisqu'il est inscrit dans notre patrimoine génétique et soumis à une dépendance hormonale. Il est aussi influencé par le comportement individuel et les facteurs de l'environnement, avec notamment 15 l'exposition aux radicaux libres et au soleil. Toutes les structures de la peau sont atteintes et subissent des modifications cliniques, fonctionnelles ou structurales, mais à des degrés divers selon le type de vieillissement considéré: physiologique ou intrinsèque, actinique ou extrinsèque, hormonal. L'âge ralentit la capacité de prolifération des cellules cutanées, ainsi que leurs activités métaboliques. Le 20 vieillissement cutané intrinsèque se caractérise par des altérations profondes au niveau de la matrice du derme avec, en particulier, des modifications des fibres collagènes et des fibres élastiques. Le vieillissement cutané actinique altère aussi la structure des fibres du derme superficiel.(cf Le Bozec & Belaïch, 1990 - Vieillissement cutané : 27-34, Sauramps médical ed). 25 L'extrait d'algue brune du genre Halidrys, notamment Halidrys siliquosa est capable de stimuler la prolifération des cellules cutanées, de les protéger contre les effets délétères des radicaux libres et des radiations ultraviolettes, notamment des UVA et des UVB mais aussi il est capable de les protéger des effets néfastes 30 des protéases matricielles, notamment de la collagénase et de l'élastase, en inhibant leur activité.5

-5- Un objet de l'invention est donc l'utilisation de compositions cosmétiques et/ou dermatologiques comprenant un extrait d'algue du genre Halidrys notamment Halidrys siliquosa, pour lutter contre le vieillissement cutané, aussi bien intrinsèque ou chronologique qu'actinique ou extrinsèque et pour protéger la peau des agressions extérieures, notamment des radicaux libres et des irradiations ultraviolettes, en particulier des UVA et des UVB.

L'extrait d'algue du genre Halidrys, notamment Halidrys siliquosa est également utile en tant qu'agent anti-inflammatoire.

Toute atteinte de la peau induit des processus inflammatoires qui se traduisent par des lésions plus ou moins importantes de l'épiderme et par l'apparition d'un syndrome inflammatoire au niveau de la jonction dermoépidermique et du derme. Au niveau des membranes cellulaires, il se produit une altération des phospholipides provoquant la libération de l'acide arachidonique. L'acide arachidonique est ensuite métabolisé selon deux voies par deux enzymes : la 5-cyclo-oxygénase et la 5-lipoxygénase. La 5-lipoxygénase est l'enzyme-clé de la synthèse des leucotriènes qui participent aux processus d'hypersensibilité en amplifiant l'inflammation.

Les inventeurs ont mis en évidence que l'extrait d'algue du genre Halidrys, notamment Halidrys siliquosa est capable d'inhiber la 5-lipoxygénase.

Un objet de l'invention est donc l'utilisation de compositions cosmétiques et/ou dermatologiques comprenant un extrait d'algue du genre Halidrys, notamment Halidrys siliquosa, utile pour la prévention ou le traitement des inflammations, en particuliers des inflammations cutanées.

L'extrait d'algue du genre Halidrys, notamment Halidrys siliquosa est 30 également utile en tant qu'agent blanchissant et dépigmentant.

-6- La pigmentation de la peau est due à des pigments appelés mélanines qui sont synthétisés par des cellules spécifiques de l'épiderme : les mélanocytes. De la même manière, la couleur des poils et des cheveux est due à la mélanine.

En fait les différences ethniques, en terme de pigmentation, ne sont pas dues au nombre de mélanocytes mais aux propriétés de leurs mélanosomes. Ces mélanosomes sont des organelles hautement spécialisés qui produisent la mélanine. Au fur et à mesure que la mélanine est synthétisée dans les mélanosomes, ceux-ci se déplacent vers l'extrémité des dendrites des mélanocytes. Par phagocytose, l'extrémité des dendrites est capturée par les kératinocytes et les mélanosomes sont redistribués dans les kératinocytes. Ainsi les prolongement dendritiques des mélanocytes jouent un rôle essentiel dans le transfert de la mélanine.

La synthèse de mélanine se fait à partir d'un acide aminé : la tyrosine et 15 nécessite l'intervention de plusieurs enzymes. La tyrosinase et la tyrosinase-related-protein 1 (TRP-1) sont des enzymes essentielles. La tyrosinase catalyse l'hydroxylation de la Dopa en Dopaquinone conduisant à la formation des pigments mélaniques. Son activité est totalement dépendante et indissociable de la présence de la TRP-1 qui joue un rôle crucial 20 dans la mélanogenèse en agissant au cours de la régulation de la maturité des mélanocytes, sur le transfert de mélanine des mélanosomes vers les kératinocytes.

L'extrait d'algue brune du genre Halidrys, notamment Halidrys siliquosa s'est montré efficace pour inhiber la synthèse de mélanine en diminuant l'activité 25 d'une enzyme, la tyrosinase, indispensable à la synthèse de ce pigment. Il est aussi capable d'inhiber l'activité de la tyrosinase-related-protein 1 (TRP-1) et donc de diminuer la quantité de mélanine transférée aux kératinocytes.

Un objet de l'invention est donc l'utilisation de compositions cosmétiques 30 et/ou dermatologiques comprenant un extrait d'algue du genre Halidrys, notamment Halidrys siliquosa, pour le blanchiment et la dépigmentation de la peau et des phanères.

-7- L'extrait d'algue du genre Halidrys, notamment Halidrys siliquosa est également utile en tant qu'agent amincissant. Les inventeurs ont mis en évidence l'action lipolytique de l'extrait d'Halidrys siliquosa par inhibition de la phosphodiestérase (PDE).

La 3',5'-AMPc-phosphodiestérase (PDE) est l'enzyme qui transforme le 3',5'-adénosine monophosphate cyclique (AMPc) en adénosine monophosphate (AMP) inactif. L'inhibition de la PDE par une substance inhibitrice permet de maintenir un taux intracellulaire élevé en AMPc, ce qui conduit à une activation 1 o des protéines kinases A et donc par ce processus permet de favoriser la dégradation de lipides. L'inhibition de la PDE conduit ainsi à une action amincissante.

Un objet de l'invention est donc l'utilisation de compositions cosmétiques et/ou dermatologiques comprenant un extrait d'algue du genre Halidrys, 15 notamment Halidrys siliquosa , en tant que composition amincissante.

Les exemples suivants illustrent l'invention sans en limiter la portée. Exemple n°1 : Préparation d'un extrait selon l'invention 20 100 g de thalles d' Halidrys siliquosa, préalablement séchés et broyés, sont introduits dans 600 ml d'eau, éventuellement acidifiée. La suspension est laissée à une température comprise entre 25°C et 80°C, sous agitation modérée pendant 60à 180 minutes. 25 Elle est ensuite filtrée et centrifugée pour éliminer les particules. Le surnageant est alors soumis à des ultrafiltrations successives de façon à obtenir un extrait de poids moléculaire compris entre 500 000 et 10 000 Daltons. L'extrait est concentré jusqu'à la calibration de ses activités. Il est enfin filtré et stérilisé. 30 Cette extraction permet d'obtenir un extrait dont l'efficacité a été testée vis-à -vis de différentes propriétés cosmétiques. -8- Exemple n° 2 Stimulation in vitro de la viabilité cellulaire

L'objectif de ce test consiste à détecter une activité stimulante de l'extrait d'Halidrys, notamment Halidrys siliquosa, selon l'invention sur la viabilité de 5 keratinocytes humains in vitro.

Conditions expérimentales Des kératinocytes sont ensemencés dans des microplaques 96 puits à raison de 8000 cellules/puits dans un milieu adapté. Après 24 h d'incubation, le milieu de 10 culture est éliminé et remplacé par du milieu additionné de l'extrait selon l'invention : 0,5% - 1% - 1,5% et 2%. La viabilité cellulaire est estimée par un dosage colorimétrique au MTT, 48 heures après l'ajout de l'extrait.

Résultats 15 Les résultas sont exprimés en pourcentages par rapport au témoin sans extrait (cf tableau ci-après). Ils représentent la moyenne de 2 expérimentations avec 4 valeurs pour chaque concentration.

Ces résultats ont été validés statistiquement selon deux méthodes : 20 - l'analyse de variance ANOVA, modèle fixe avec ul=4 et u2=20 a : 0,001 Fa : 14,819 Fc : 50,795 *** - la plus petite différence significative avec : Ac= ~ ml-m21 A =taV (2. ui)/2 uI : variance intrinsèque. C=0.5% 1% < 1.5% = 2%. C: témoin. 25 Viabilité cellulaire (%) Témoin 100 Extrait d'Halidrys siliquosa à 0,5 % 104 Extrait d'Halidrys siliquosa à 1 % 120 Extrait d'Halidrys siliquosa à 1,5 % 131 Extrait d'Halidrys siliquosa à 2 % 138

-9- L'ajout de l'extrait à 2% dans le milieu de culture permet d'augmenter de 38% la viabilité des kératinocytes. Exemple n°3 : Mise en évidence du potentiel anti-oxydant Les radicaux libres sont des constituants chimiques très réactionnels intervenant dans de nombreux mécanismes cellulaires. S'ils sont incontrôlés, ils peuvent réagir rapidement avec des molécules avoisinantes et donner naissance à des produits toxiques pour le fonctionnement cellulaire. Il en découle un stress Io oxydant provoquant des dégâts importants au niveau des macromolécules, des membranes cellulaires et de l'ADN. L'organisme possède des mécanismes de défense qui s'avèrent parfois insuffisants.

Il est donc impératif de se protéger contre les radicaux libres qui de plus 15 constituent une cause importante du vieillissement cutané.

L'objet de cette étude est d'évaluer les capacités anti-oxydantes de l'extrait d'algue du genre Halidrys, notamment d'Halidrys siliquosa par le test DPPH.

20 Principe Le DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl) est un radical libre stable coloré en violet. Il est peu spécifique mais permet d'évaluer le potentiel anti-oxydant d'une substance ( effet scavenger ). Le taux de réduction du radical DPPH est évalué par le changement d'absorbance d'une solution de DPPH en présence et en 25 absence de ladite substance à 517nm. L'extrait d' Halidrys siliquosa préparé selon l'invention est testé à quatre concentrations différentes (0,2%- 0,5%- 1%- et 2%).

Résultats Chaque essai est réalisé en triplicate. Les résultats des moyennes de ces 30 essais figurent dans le tableau inséré ci-après. Ils sont exprimés en pourcentages d'inhibition du DPPH sous forme radicalaire par rapport au témoin sans extrait. - 10- DPPH Pouvoir anti-oxydant (%) Témoin 0 Extrait d'Halidrys siliquosa à 0,2 % 85 Extrait d'Halidrys siliquosa à 0,5 % 98 Extrait d'Halidrys siliquosa à 1 % 99 Extrait d'Halidrys siliquosa à 2 % 99 Aux concentrations testées, l'extrait d'Halidrys siliquosa présente un pouvoir réducteur dose - dépendant vis-à-vis du radical DPPH. Plus précisément, plus la concentration en extrait selon l'invention 5 augmente, plus le pouvoir anti-oxydant ( pouvoir scavenger ) est important.

De fait l'utilisation de l'extrait de l'algue brune du genre Halidrys, notamment Halidrys siliquosa selon l'invention en tant qu'agent actif s'avère avantageux pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou Io dermatologique destinée à protéger les cellules cutanées contre le stress oxydant.

Exemple n°4 : Mise en évidence de l'effet cytophotoprotecteur vis-à-vis des radiations UV

15 La peau est régulièrement exposée aux radiations ultraviolettes qui provoquent des dommages importants.

L'objet de cette étude est d'évaluer l'activité cytophotoprotectrice de l'extrait d' Halidrys siliquosa selon l'invention sur des kératinocytes soumis aux 20 effets délétères induits par des radiations ultra-violettes UVA et UVB.

Cette activité cytoprotectrice est déterminée par évaluation de la viabilité cellulaire. 25 -11- 4-1 Effet cytophotoprotecteur vis-à-vis des UVA

Les UVA ont une importance décisive dans l'accélération du vieillissement cutané et la formation des rides car ils pénètrent profondément dans le tissu 5 dermique où ils endommagent les fibres collagènes et élastiques. Ils génèrent à l'intérieur des cellules plusieurs espèces réactives oxygénées, notamment de l'oxygène singulet, du radical hydroxyle et du peroxyde d'hydrogène. Ils sont capables de provoquer des dommages cutanés profonds et insidieux. 10 Conditions expérimentales Des suspensions de kératinocytes sont ensemencées dans un milieu adapté dans des microplaques 96 puits à raison de 8000 cellules par puits. L'extrait d' Halidrys siliquosa préparé selon l'invention est testé à quatre 15 concentrations différentes (0,5 %- 1 %- 1,5 % et 2 %) . Après 24 h d'incubation, à 37°C dans une atmosphère à 5% de CO2, le milieu est éliminé et remplacé par du PBS .Les cellules sont alors soumises à une irradiation UVA de 15 J.cm2. Le milieu est ensuite changé et supplémenté en actif. 48 heures après l'agression, l'effet cytoprotecteur est déterminé par la 20 mesure de la viabilité cellulaire réalisée par la méthode au MTT.

Résultats Les résultats ci-après représentent la moyenne de deux expérimentations. Ils sont insérés dans le tableau ci-après. 25 Les résultats ont été validés statistiquement selon deux méthodes : - l'analyse de variance ANOVA, modèle fixe avec ul=4 et u2=20 a : 0,001 Fa : 14,819 Fc : 117 *** - la plus petite différence significative avec : 30 Ac= ml-m21 A =taV (2. ui)/2 uI : variance intrinsèque. C =0.5% < 1%=1.5%=2% C: témoin. -12- Activité cytophotoprotectrice (%) Témoin 100 Extrait d'Halidrys siliquosa à 0,5 % 111 Extrait d'Halidrys siliquosa à 1 % 180 Extrait d'Halidrys siliquosa à 1,5 % 199 Extrait d'Halidrys siliquosa à 2 % 231 On constate que l'extrait d'Halidrys siliquosa à 1% présente une activité protectrice vis-à-vis des radicaux libres émis par les UVA de 80% sur des kératinocytes. 4-2 Effet cytophotoprotecteur vis-à-vis des UVB

Les UVB sont plus énergétiques et agressifs que les UVA. Ils affectent essentiellement l'épiderme. Ils stimulent les cellules pigmentaires qui produisent la 10 mélanine. Comme les UVA, ils accélèrent le vieillissement précoce de la peau. Ils provoquent la formation des rides dues à une modification des tissus élastiques de la matrice extracellulaire et à l'altération de la jonction dermo-épidermique.

Conditions expérimentales 15 Des kératinocytes sont ensemencés comme précédemment dans des plaques multipuits. L'extrait d' Halidrys siliquosa préparé selon l'invention est testé à quatre concentrations différentes (0,5 %- 1 %- 1,5 % et 2 %). Après 24 h d'incubation, à 37°C dans une atmosphère à 5% de CO2, le milieu est éliminé et remplacé par du PBS .Les cellules sont alors soumises à deux 20 doses d' irradiation UVB : 15 mJ.cm2 et 30 mJ.cm2 . Le milieu est ensuite changé et supplémenté en actif. 48 heures après l'agression, les cellules sont soumises au test de viabilité cellulaire du MTT.

Résultats 25 Les résultats ci-après représentent la moyenne de deux expérimentations. Ils sont insérés dans le tableau ci-après.5 - 13 - Les résultats ont été validés statistiquement selon deux méthodes : - l'analyse de variance ANOVA, modèle fixe avec ul=4 et u2=20 pour 15 mJ.cm2 a : 0,001 Fa : 14,819 Fc : 40,871 *** pour 30 mJ.cm2 a : 0,001 Fa : 14,819 Fc : 51,867 *** - la plus petite différence significative avec : Ac= m l -m21 A =taV (2. ui)/2 uI : variance intrinsèque. Control = 0,5%< <1%=1.5%=2% C: témoin. Activité cytophotoprotectrice (%) 15 mJ.cm2 30 mJ.cm2 Témoin stressé 103 103 Extrait d'Halidrys siliquosa à 0,5 % 107 105 Extrait d'Halidrys siliquosa à 1 % 124 135 Extrait d'Halidrys siliquosa à 1,5 % 131 150 Extrait d'Halidrys siliquosa à 2 % 133 159 On constate que l'extrait d'Halidrys à 1% présente une activité protectrice quelle que soit la dose d'UVB appliquée sur les kératinocytes.

L'extrait de l'algue brune du genre Halidrys, notamment Halidrys siliquosa est donc capable de lutter contre les radiations ultraviolettes aussi bien UVA qu'UVB. De fait l'utilisation de l'extrait selon l'invention en tant qu'agent actif s'avère avantageux pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermatologique destinée à protéger les cellules cutanées contre les effets délétères des radiations UVA et UVB.

Exemple n°5 : Mise en évidence des activités anti-protéases

Avec l'âge, la capacité de la peau à se régénérer diminue. Il se produit une augmentation de l'activité enzymatique des protéases, ce qui entraîne une

- 14 - dégradation excessive des protéines qui structurent la matrice extracellulaire du derme. La peau perd donc son élasticité et sa souplesse. Elle devient plus mince et plus fragile.

L'extrait de l'algue brune du genre Halidrys, notamment Halidrys siliquosa selon l'invention se propose de limiter l'activité enzymatique de deux types de protéases : l'élastase et la collagénase.

5-1 ù Activité anti-élastase L'élastase est l'enzyme qui dégrade l'élastine présente dans les cellules dermiques (fibroblastes). Au cours du vieillissement cutané, aussi bien intrinsèque qu'actinique, la quantité et l'activité de l'élastase augmentent. En dégradant les fibres d'élastine, l'élastase provoque une perte de 15 l'élasticité cutanée, un relâchement de la peau et l'apparition des rides.

Principe Le substrat N- succinyl (Ala)3-paranitroanilide en solution à 0,5 mg/ml dans un tampon est mis en présence d'élastase. Après incubation en présence et en 20 absence d'extrait selon l'invention, l'évolution de la réaction est suivie au spectrophotomètre à 379 nm. Les valeurs d'absorbance prises en compte sont celles correspondant à la période linéaire de l'évolution de l'absorbance en fonction du temps. L'extrait d'Halidrys siliquosa préparé selon l'invention est testé à cinq 25 concentrations différentes (0,2 %- 0,5 %- 1 %- 2 % et 5 %).

Résultats Les résultats figurent sur le tableau ci-après. Ils sont exprimés en pourcentage d'inhibition enzymatique par rapport au témoin (% 1). Chaque essai 30 est réalisé en triplicate. Les valeurs rapportées sont des moyennes arithmétriques. -15- Activité inhibitrice anti-élastase (% I) Extrait d'Halidrys siliquosa à 0,2 % 33 Extrait d'Halidrys siliquosa à 0,5 % 64 Extrait d'Halidrys siliquosa à 1 % 83 Extrait d'Halidrys siliquosa à 2 % 89 Extrait d'Halidrys siliquosa à 5 % 97 Ces résultats montrent que dosé à 1%, l'extrait d'Halidrys selon l'invention limité de 83% l'activité de l'élastase. 5-2 ù Activité anti-collagénase

Les fibres de collagène assurent la solidité du derme et participent à l'élasticité et à la tonicité de la peau et ou des muqueuses. Elles sont constamment renouvelées mais ce renouvellement diminue avec l'âge ce qui provoque un amincissement du derme. Les fibres de collagène peuvent être aussi dégradées par certaines enzymes appelées collagénases ce qui entraîne l'apparence de peau molle et ridée. Il est donc important de combattre la dégradation du collagène.

Le but de cette étude est d'évaluer l'activité anti-collagénase de l'extrait de 15 l'algue brune du genre Halidrys, notamment Halidrys siliquosa.

Principe Le test est réalisé avec une collagénase de Clostridium hystoliticum et un substrat spécifique chromogène : le FALGPA. 20 L'activité anti-collagénase de l'extrait selon l'invention dosé à 0,2%- 0,5%-1% et 2% est évaluée par l'inhibition de la diminution de l'absorbance à 324 nm.

Résultats Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition enzymatique par 25 rapport au témoin sans actif (% I). Chaque essai est réalisé en triplicate. Les valeurs - 16- rapportées sont des moyennes arithmétriques. Les résultats figurent sur le tableau ci-après. Activité inhibitrice anti-collagénase (% I) Extrait d'Halidrys siliquosa à 0,2 % 50 Extrait d'Halidrys siliquosa à 0,5 % 66 Extrait d'Halidrys siliquosa à 1 % 87 Extrait d'Halidrys siliquosa à 2 % 100 Ces résultats montrent que dosé à 1%, l'extrait d'Halidrys selon l'invention limité de 87% l'activité de la collagènase.

De fait l'utilisation de l'extrait d'algue du genre Halidrys, notamment d'Halidrys siliquosa préparé selon l'invention, en tant qu'agent actif s'avère avantageux pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermatologique destinée à protéger le derme vis-à-vis des dégradations occasionnées par les protéase : élastase et collagénase et donc à lutter contre le vieillissement cutané.

Exemple n°6: Mise en évidence de l'activité protectrice contre l'inflammation

L'inflammation est un processus réversible résultant d'une atteinte des structures cellulaires.

Les médiateurs pro-inflammatoires sont libérés à partir d'un constituant normal des membranes cellulaires : l'acide arachidonique. Il se produit alors une oxydation progressive réalisée par la cyclo-oxygénase qui forme les prostaglandines et les thromboxanes et par la 5-lipoxygénase qui forme les leucotriènes. Le rôle des leucotriènes dans la réponse inflammatoire semble prépondérant (Rapin, 1998 û A.I.M. n°46: 24-25). 20

- 17 - L'objet de cette étude est d'évaluer l'activité anti-inflammation de l'extrait d' Halidrys siliquosa selon l'invention en étudiant l'inhibition de la 5-lipoxygénase.

Inhibition de la 5-lipoxygénase

Principe Le substrat utilisé est l'acide linoleique qui se transforme en présence de l'enzyme 5-lipoxygénase en acide 5-hydroperoxy-6,8,11,14-eicosatétraénoique (5 HPETE). On mesure l'absorbance des milieux réactionnels en fonction du temps et on calcule pour la partie linéaire de l'évolution de l'absorbance le pourcentage d'inhibition (% I) de la 5-lipoxygénase.

Résultats Les résultats figurent sur le tableau ci-après. Ils sont exprimés en pourcentage d'inhibition enzymatique par rapport au témoin sans actif (% I). Chaque essai est réalisé en triplicate. Les valeurs rapportées sont des moyennes arithmétriques. Activité inhibitrice anti-lipoxygénase (% I) Extrait d'Halidrys siliquosa à 0,5 % 31 Extrait d'Halidrys siliquosa à 1 % 72 Extrait d'Halidrys siliquosa à 2 % 100 Ces résultats montrent que dosé à 1%, l'extrait d'Halidrys selon l'invention limité de 72% l'activité de la 5-lipoxygénase. Cet extrait possède donc une activité anti-inflammatoire.

25 De fait l'utilisation de l'extrait d'algue du genre Halidrys, notamment d'Halidrys siliquosa en tant qu'agent actif s'avère avantageux pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermatologique utile pour la prévention des inflammations cutanées.

- 18 - Exemple n°7: Mise en évidence de l'activité dépigmentante L'activité dépigmentante de l'extrait d' Halidrys siliquosa selon l'invention a été prouvée par 1' inhibition de l'activité de la tyrosinase, l'inhibition de la 5 synthèse de mélanine et l'inhibition de la tyrosinase-related-protein 1 (TRP-1).

7-1 û Inhibition de l'activité de la tyrosinase

La tyrosinase est l'enzyme limitante de la mélanogenèse et l'enzyme-clé du 1 o métabolisme de la pigmentation cutanée.

Principe Le dosage est basé sur la formation de dopachrome à partir de la L-tyrosine, après action de la tyrosinase. En présence de tyrosinase et d'oxygène, la L-tyrosine 15 s'oxyde en L-DOPA puis en Dopaquinone. Cette dernière se cyclise en cyclodopa qui s'oxyde en dopachrome. La formation du dopachrome est suivie par spectrophotométrie à la longueur d'onde de 480 nm. Résultats 20 Les résultats figurent sur le tableau ci-après. Ils sont exprimés en pourcentage d'inhibition enzymatique par rapport au témoin sans actif (% I). Chaque essai est réalisé en triplicate. Les valeurs rapportées sont des moyennes arithmétriques. Activité inhibitrice anti-tyrosinase (% I) Extrait d'Halidrys siliquosa à 0,2 % 51 Extrait d'Halidrys siliquosa à 0,5 % 82 Extrait d'Halidrys siliquosa à 1 % 93 Extrait d'Halidrys siliquosa à 2 % 97 Extrait d'Halidrys siliquosa à 5 % 99 255 - 19 - Ces résultats montrent que dosé à 1%, l'extrait d'Halidrys selon l'invention limité de 93% l'activité de la tyrosinase. Cet extrait possède donc une activité inhibitrice de l'activité de la tyrosinase et donc une activité dépigmentante. 7-2 - Inhibition de la synthèse de mélanine

L'activité dépigmentante de l'extrait selon l'invention a été mise en évidence sur des échantillons de peau humaine. 10 Méthode Des biopsies de peau humaine sont maintenues en survie ex vivo par culture en présence d'un milieu spécifique. Elles sont traitées tous les deux jours avec l'actif à la concentration de 2% dans un excipient cosmétique connu pour n'avoir 15 aucune propriété dépigmentante. Les témoins ne reçoivent aucun traitement. Les lots T et F ne reçoivent aucune irradiation. Les lots TUV et F2UV reçoivent quotidiennement une irradiation UVA de 1,125 J/cm2 (6-8% d'UVB), correspondant au spectre d'irradiation solaire. Les irradiations sont réalisées 30 minutes avant le traitement avec le produit, pour 20 éviter un éventuel effet filtre. Elles ont lieu aux jours JI, J2, J3, J4, J5, J6, J7, J8 et J9. Après traitement avec les produits, les explants sont remis en survie. Ils sont prélevés à J6 et J10 pour être préparés histologiquement.

25 La mélanine a été visualisée sur coupes paraffine par imprégnation à l'argent suivant la technique Fontana-Masson. Cette technique permet de suivre la mélanogénèse au cours de l'étude. Résultats 30 La visualisation au microscope optique, de la quantité de mélanine a permis de noter les faits suivants au début de l'expérience (JO), à 6 jours (J6) et à 10 jours (J10).

A JO La morphologie des mélanocytes est bonne. Leur charge en mélanine est modérée. Elle est nette dans la couche basale et faible dans les couches supra-basales. A J6 Le lot non traité (TJ6) présente, par rapport à TJO, une légère diminution de la charge en mélanine dans les mélanocytes.

10 Le lot non traité et irradié (TUVJ6), présente, par rapport à TJ6, une légère augmentation de la charge en mélanine dans les mélanocytes. L'irradiation présente une activité pro-pigmentante.

Le lot traité avec l'extrait selon l'invention à la dose de 2% et irradié 15 (P2UVJ6), induit par rapport à TUVJ6, une diminution de la charge en mélanine dans les mélanocytes. L'extrait selon l'invention présente une activité dépigmentante modérée.

A J10 20 Le lot non traité (TJ 10) présente, par rapport à TJO, une légère diminution de la charge en mélanine dans les mélanocytes.

Le lot non traité et irradié (TUVJ 10), présente, par rapport à TJ 10, une nette augmentation de la charge en mélanine dans les mélanocytes. L'irradiation présente 25 une activité pro-pigmentante.

Le lot traité avec l'extrait selon l'invention à la dose de 2% et irradié (P2UVJ10), induit par rapport à TUVJ10, une diminution modérée de la charge en mélanine dans les mélanocytes. L'extrait selon l'invention présente donc une nette 30 activité dépigmentante. - 20 -5

-21 - Ces résultats nous permettent de conclure que la synthèse de mélanine est nettement atténuée dès 10 jours d'irradiations ultraviolettes lorsque l'extrait d'algue du genre Halidrys, notamment Halidrys siliquosa, préparé selon l'invention est appliqué tous les deux jours à la dose de 2 %. 7-1 û Inhibition de la tyrosinase-related ûprotein 1 (TRP-1)

La TRP-1 joue un rôle crucial dans la régulation de la pigmentation cutanée en intervenant au cours de la maturation des mélanocytes. lo Son étude par immunomarquage a été réalisée sur des échantillons de peau humaine.

Méthode Des biopsies de peau humaine sont traitées comme précédemment. Les 15 Tyrosinase Related Protein 1 (TRP 1) ont été marquées sur coupes congelées avec un anti-TRP 1, monoclonal, clone Ta99 fait sur souris au 1 /25ème pendant 2h à température ambiante avec un système amplificateur biotine/streptavidine révélé en VIP. Les noyaux ont été contre colorés à l'hémalun de Masson.

20 Les cellules marquées ont été comptées sur toute la longueur de l'épiderme et les résultats moyennés par cm d'épiderme. L'analyse statistique a été réalisée selon le test de Student. Résultats 25 Les cellules ont été dénombrées à 6 jours et à 10 jours de traitement avec l'extrait selon l'invention dosé à 2 % dans un excipient. connu pour n'avoir aucune propriété dépigmentante. A J6 30 L'exposition chronique aux UV pendant 6 jours, induit une augmentation significative de 92 % du nombre de cellules TRP-1 positives par rapport au témoin non irradié à J6.5

- 22 - L'exposition aux UV et le traitement chronique avec l'extrait selon l'invention dosé à 2 % (P2UV) pendant 6 jours, induit une diminution non significative de 22 % du nombre de cellules TRP-1 positives par rapport au témoin irradié. A J10 L'exposition chronique aux UV pendant 10 jours, induit une augmentation significative de 85 % du nombre de cellules TRP-1 positives par rapport au témoin non irradié à J10. L'exposition aux UV et le traitement chronique avec l'extrait selon l'invention dosé à 2 % (P2UV) pendant 10 jours, induit une diminution significative de 98 % du nombre de cellules TRP-1 positives par rapport au témoin irradié. 15 La dendricité des mélanocytes TRP-1 positifs a été également observée au microscope optique après 6 et 10 jours d'irradiations, l'extrait selon l'invention étant dosé à 2 %. 20 A J6 comme à J10, l'observation des mélanocytes TRP-1 positifs montre que l'irradiation chronique augmente leur dendricité. Le traitement avec l'extrait selon l'invention simultanément à l'irradiation chronique, inhibe quasi-totalement la dendricité des mélanocytes. L'extrait 25 d'Halidrys siliquosa dosé à 2% présente une activité inhibitrice de la maturation des mélanosomes et de leur transfert vers les kératinocytes. Tous ces résultats prouvent que dosé à 2%, l'extrait d'Halidrys selon l'invention induit une activité dépigmentante en inhibant à la fois les activités de la 30 tyrosinase et de la TRP-1 et en réduisant la synthèse de mélanine. 10 5 - 23 - Exemple n°8 : Mise en évidence de l'activité amincissante

Le but de cette étude est d'évaluer l'activité inhibitrice de la PDE par l'extrait selon l'invention et donc la présence d'une action amincissante. Principe Le test est basé sur l'hydrolyse de la 3',5'-adénosine monophosphate cyclique (AMPc) en adénosine monophosphate (AMP). La formation d'AMP avec et sans extrait est mesurée par analyse HPLC.

Résultats Cet essai est réalisé en triplicate. La valeur fournie correspond à la moyenne arithmétique. A la dose de 0,5%, l'extrait d'Halidrys siliquosa selon l'invention présente 15 un taux d'inhibition de la phosphodiestérase égal à 83%, donc une activité inhibitrice de cette enzyme et donc une activité lipolytique.

Les exemples exposés ci-dessus démontrent que l'extrait préparé à partir de la macroalgue du genre Halidrys, notamment Halidrys siliquosa selon l'invention 20 peut avantageusement être utilisé dans différentes applications cosmétiques et dermatologiques.

La présente invention a également pour objet des compositions cosmétiques et/ou dermatologiques à usage topique pour la peau, les muqueuses et / ou les 25 phanères, les dites compositions contenant, seul ou en association avec au moins un autre principe actif, mais en quantité efficace, de préférence avec un excipient approprié pour une application topique, un extrait de l'algue brune du genre Halidrys, notamment Halidrys siliquosa.

30 La composition finale de l'extrait destiné à être utilisé dans lesdites compositions consiste dans une proportion pouvant varier entre 0,1% et 40 % (p/p), préférentiellement entre 0,1 et 4 %. - 24 - Diverses formes de formulations pour applications topiques peuvent être réalisées. Elles incluent toute forme galénique employée en cosmétique et / ou en dermatologie: polymères gélifiants et viscosants, tensioactifs et émulsifiants, émulsions H/E et E/H, émulsions multiples, solutions, suspensions, laits, lotions, gels, pommades, huiles corporelles, shampooings, savons, poudres, sticks et crayons, patchs, sprays.

L'extrait d'algue brune du genre Halidrys, notamment Halidrys siliquosa préparé selon l'invention, peut être combiné dans lesdites compositions cosmétiques et/ou dermatologiques avec tout autre ingrédient habituellement utilisé dans les formulations : lipides d'extraction et/ ou de synthèse, polymères gélifiants et viscosants, tensioactifs et émulsifiants, principes actifs hydro- ou liposolubles, extraits de plantes, extraits marins, extraits tissulaires sans que cette liste soit limitative.

Il est possible d'incorporer cet extrait algal selon l'invention dans tout vecteur cosmétique adéquat comme par exemple des agents filmogènes, des liposomes, des chylomicrons, des cyclodextrines, des micelles, des macro-, micro-et nanoparticules des macro-, micro- et nanocapsules, ou encore de les absorber sur des polymères organiques et des supports minéraux.

Il est également possible d'incorporer l'extrait d'Halidrys préparé selon l'invention dans des textiles pour en assurer une libération topique continue.25

Claims (17)

1. REVENDICATIONS1 û Utilisation d'au moins un extrait d'une algue brune appartenant au genre Halidrys, en tant qu'agent actif , seul ou en association avec au moins un autre agent actif, pour la préparation d'un produit cosmétique ou dermatologique à usage topique pour la peau, les muqueuses et/ ou les phanères.
2. 2 - Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'actif est constitué par au moins un extrait de l'algue brune Halidrys siliquosa.
3. 3 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 et 2 en ce que 10 l'on réalise l'extraction à partir de thalles ou toute partie de thalles de ladite algue sous forme fraîche, congelée, sèche, entière, fragmentée ou broyée.
4. 4 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 en ce que ledit extrait est obtenu par macération des thalles de ladite algue, suivie de filtrations, centrifugation, ultrafiltrations et concentration. 15
5. 5 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 en ce que le solvant d'extraction est choisi parmi le groupe formé par l'eau, les alcools, les cétones, les esters, les polyols, les solvants chlorés et les mélanges d'au moins deux des solvants précités.
6. 6 - Utilisation selon les revendications 1 à 4 en ce que la macération peut 20 être remplacée par des techniques à contre courant, la décoction, l'extraction sous reflux, l'extraction à l'aide d'ultrasons, de micro-ondes associée ou non aux solvants, l'extraction par des fluides supercritiques, notamment le CO2 supercritique avec ou sans co-solvant.
7. 7 - Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 caractérisées 25 en ce que ledit extrait est utilisé soit sous forme liquide soit sous forme sèche obtenue par séchage, précipitation, atomisation, évaporation ou lyophilisation.
8. 8- Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 7 caractérisée en ce que l'agent actif est utilisé pour ses activités cytostimulantes, antiradicalaires, cytophotoprotectrices, anti-élastase, anti-collagénase, inhibitrices de la 30 lipoxygénase, de la tyrosinase et de la tyrosinase-related protein 1 (TRP-1), de la mélanogenèse et / ou de la phosphodiesterase. - 26 -
9. 9- Composition cosmétique ou dermatologique à usage topique pour la peau, les muqueuses et /ou les phanères, caractérisée en ce qu'elle comporte à titre d'agent actif présentant une activité stimulante des cellules cutanées, seul ou associé à au moins un autre agent actif, un extrait d'une algue brune du genre Halidrys, préférentiellement de l'algue Halidrys siliquosa, tel que défini selon d'une quelconque des revendications 1 à 7.
10. 10- Composition cosmétique ou dermatologique à usage topique pour la peau, les muqueuses et /ou les phanères, caractérisée en ce qu'elle comporte à titre d'agent actif présentant une activité antiradicalaire, seul ou associé à au moins un Io autre agent actif, un extrait d'une algue brune du genre Halidrys, préférentiellement de l'algue Halidrys siliquosa, tel que défini selon d'une quelconque des revendications 1 à 7.
11. 11- Composition cosmétique ou dermatologique à usage topique pour la peau, les muqueuses et /ou les phanères, caractérisée en ce qu'elle comporte à titre 15 d'agent actif présentant une activité cytophotoprotectrice, notamment anti-UVA, et / ou anti-UVB, seul ou associé à au moins un autre agent actif, un extrait d'une algue brune du genre Halidrys, préférentiellement de l'algue Halidrys siliquosa, tel que défini selon d'une quelconque des revendications 1 à 7.
12. 12- Composition cosmétique ou dermatologique à usage topique pour la 20 peau, les muqueuses et /ou les phanères, caractérisée en ce qu'elle comporte à titre d'agent actif présentant une activité anti-vieillissement intrinsèque et/ou extrinsèque, seul ou associé à au moins un autre agent actif, un extrait d'une algue brune du genre Halidrys, préférentiellement de l'algue Halidrys siliquosa, tel que défini selon d'une quelconque des revendications 1 à 7. 25
13. 13- Composition cosmétique ou dermatologique à usage topique pour la peau, les muqueuses et /ou les phanères, caractérisée en ce qu'elle comporte à titre d'agent actif présentant une activité destinée à atténuer ou à supprimer les manifestations des inflammations, seul ou associé à au moins un autre agent actif, un extrait d'une algue brune du genre Halidrys, préférentiellement de l'algue 30 Halidrys siliquosa, tel que défini selon d'une quelconque des revendications 1 à 7.
14. 14- Composition cosmétique ou dermatologique à usage topique pour la peau, les muqueuses et /ou les phanères, caractérisée en ce qu'elle comporte à titre - 27 - d'agent actif présentant une activité dépigmentante et/ou éclaircissante, seul ou associé à au moins un autre agent actif, un extrait d'une algue brune du genre Halidrys, préférentiellement de l'algue Halidrys siliquosa, tel que défini selon d'une quelconque des revendications 1 à 7.
15. 15- Composition cosmétique ou dermatologique à usage topique pour la peau, les muqueuses et /ou les phanères, caractérisée en ce qu'elle comporte à titre d'agent actif présentant une activité amincissante, seul ou associé à au moins un autre agent actif, un extrait d'une algue brune du genre Halidrys, préférentiellement de l'algue Halidrys siliquosa, tel que défini selon d'une quelconque des revendications 1 à 7.
16. 16- Composition cosmétique ou dermatologique à usage topique pour la peau, les muqueuses et /ou les phanères selon l'une quelconque des revendications 9 à 15 caractérisée en ce qu'elle contient entre 0,1% et 40% en poids, préférentiellement entre 0,1% et 4% en poids d'un extrait d'une algue brune du genre Halidrys, préférentiellement de l'algue Halidrys siliquosa.
17. 17 - Composition cosmétique ou dermatologique à usage topique pour la peau, les muqueuses et /ou les phanères selon l'une quelconque des revendications 9 à 16 caractérisée en ce que ledit extrait est employé sous une forme galénique utilisable en cosmétique, notamment sous une forme galénique choisie dans le groupe formé par les émulsions huile dans l'eau, les émulsions eau dans l'huile, les émulsions multiples, les solutions, les suspensions ou les poudres. 18ù Composition cosmétique ou dermatologique à usage topique pour la peau selon l'une quelconque des revendications 9 à 17 caractérisée en ce que ledit extrait est incorporé ou associé à un vecteur cosmétique adéquat tel que par exemple des agents filmogènes, des liposomes, des chylomicrons, des micelles, des cyclodextrines, des macro-, micro- et nanoparticules, des macro-, micro- et nanocapsules ou absorbés sur des polymères organiques et des supports minéraux.