FR2985186A1 - Extrait polaire de kniphofia uvaria, composition cosmetique ou dermatologique en contenant, et ses utilisations - Google Patents

Abstract

L'invention concerne un extrait de Kniphofia uvaria obtenu au moyen d'un solvant polaire acceptable d'un point de vue cosmétique ou dermatologique, ainsi qu'une composition cosmétique ou dermatologique comprenant cet extrait. L'invention concerne l'utilisation de cet extrait dans une composition cosmétique en tant qu'agent actif, pour lutter contre le vieillissement cutanée intrinsèque ou actinique, et pour lutter le relâchement cutané. Elle concerne également son utilisation dans une composition dermatologique pour lutter contre les états inflammatoires de la peau.

Description

Extrait polaire de Kniphofia uvaria, composition cosmétique ou dermatologique en contenant, et ses utilisations L'invention concerne un extrait polaire de la plante Kniphofia uvaria, une composition cosmétique ou dermatologique comprenant ledit extrait, et son utilisation comme agent anti-âge ou agent anti-inflammatoire. ETAT DE LA TECHNIQUE La plante Kniphofia uvaria est une espèce rhizomateuse vivace de la famille des Liliaceae (classification classique) et des Asphodelaceae (classification phylogénétique). Cette espèce rustique possède des feuilles étroites et retombantes, pouvant atteindre 1 mètre de long. Les inflorescences forment un épi composé de nombreuses fleurs tubulaires aux couleurs flamboyantes.

Les fleurs produisent pendant deux mois de l'année une grande quantité de nectar, lequel contient essentiellement de l'eau, des acides aminés, du glucose, du fructose, des sels minéraux et des oligo-éléments. Ce nectar contient de la superoxydismutase (SOD), une enzyme luttant contre le stress oxydant pouvant entrainer la peroxydation des lipides membranaires ou l'oxydation des protéines. Compte-tenu de sa composition, le nectar des fleurs de Kniphofia uvaria est particulièrement adapté au soin des peaux sèches pour les nourrir en profondeur et les revitaliser, et il a déjà été incorporé dans un soin cosmétique régénérant et revitalisant. Il a également été proposé dans un autre soin cosmétique en combinaison avec des actifs anti-âge dont il complète l'action. La demanderesse a mis en évidence de façon tout à fait surprenante qu'un extrait de la plante Kniphofia uvaria, en particulier un extrait de tiges, avantageusement cueillies vertes puis séchées, obtenu avec un solvant hydroalcoolique, est lui-même doté d'une activité anti-âge.

A ce jour, aucun procédé d'extraction mettant en oeuvre la plante Kniphofia uvaria par mise en contact de la plante avec un solvant polaire n'a été décrit. Il est donc particulièrement surprenant d'avoir mis en évidence qu'un tel extrait de la plante Kniphofia uvaria présente une activité cosmétique. Les inventeurs de la présente invention ont également mis en évidence que des extraits végétaux de l'espèce Kniphofia uvaria obtenu par extraction à l'aide de solvants polaires présentent une activité anti-inflammatoire en inhibant notamment de façon significative la production de prostaglandine de type E2 (PGE2).

Les inventeurs ont encore trouvé que ces extraits augmentent significativement la production de deux types de fibres de la matrice extracellulaire, le pro-collagène I et la fibronectine. Les inventeurs ont aussi trouvé que ces extraits diminuent la production de pro-Matrix MetalloProtéinase de type 1 (pro-MMP1), enzyme clé responsable de la dégradation de la matrice extracellulaire, laquelle dégradation est particulièrement accélérée par les rayonnements UV. Enfin, il a été mis en évidence qu'un extrait de l'invention inhibe significativement l'expression de Cathepsin K dans des fibroblastes humains normaux, traités par ledit extrait, et qu'il est ainsi possible de limiter la dégradation de l'élastine intracellulaire par cette protéase, au moment d'une exposition aux UV. De part leur activité sur de nombreuses cibles, ces extraits présentent un intérêt pour une utilisation en tant qu'agent actif dans des compositions cosmétiques ou dermatologiques, notamment destinées à lutter contre le vieillissement cutanée intrinsèque, le vieillissement cutané photo-induit, le relâchement cutané, les dégradations de la structure de la peau induites par les UV, ou les états inflammatoires.

BUTS DE L'INVENTION L'invention a pour but principal de fournir un nouvel extrait végétal, notamment utilisable en tant qu'agent actif dans des compositions cosmétiques ou dermatologiques, notamment destinées à prévenir ou retarder l'apparition des signes du vieillissement cutané ou à en ralentir ou atténuer les effets. L'invention a aussi pour but de fournir un nouvel extrait d'origine végétale ayant pour effet de lutter contre l'inflammation et les effets induits par l'exposition aux UV tels que la dégradation de la matrice métallo-protéique, ou bien encore de contribuer au maintien de la fermeté de la peau.

L'invention a également pour but de fournir une méthode de soin cosmétique utilisant ces compositions cosmétiques. L'invention a enfin pour but de résoudre l'ensemble des problèmes techniques par une solution simple, relativement peu coûteuse et utilisable à l'échelle industrielle, en particulier dans l'Industrie cosmétique.35 DESCRIPTION DE L'INVENTION Ainsi, selon un premier objet, l'invention concerne un extrait de la plante Kniphofia uvaria, obtenu par extraction du matériel végétal au moyen d'un solvant polaire acceptable d'un point de vue cosmétique ou dermatologique. Le matériel végétal utilisé peut être la plante entière ou une partie de la plante telle que les feuilles, la tige, les fleurs, les graines ou les racines. L'extrait végétal polaire est préférentiellement obtenu à partir d'un matériel végétal choisi parmi la tige, les graines et leurs mélanges. Préalablement à l'étape d'extraction elle-même, le matériel végétal peut avoir été séché et/ou broyé. Une alternative consiste à faire sécher la plante sur pied et à récolter ensuite la partie intéressante. Selon un mode préféré, le matériel végétal est séché après récolte de la plante. L'extrait de l'invention peut être préparé par différents procédés d'extraction connus de l'homme du métier. Au sens de l'invention, on entend par « extrait végétal polaire » un extrait obtenu par mise en contact d'un matériel végétal avec un solvant polaire, et l'on entend par « solvant polaire » un liquide dont le moment dipolaire est non nul, plus particulièrement un composé comprenant au moins une liaison covalente entre deux atomes dont la différence d'électronégativité AE, est supérieure à 0,4 et inférieure à 1,7 (0,4 < AE, < 1,7) selon l'échelle de Pauling 25 (1 Am. Chem. Soc., 1932, 54(9), 3570-3582). Les solvants polaires préférés sont ceux constitués d'un composé comprenant au moins une liaison covalente polaire de type O-H. A titre de solvant polaire particulièrement préféré, le solvant polaire est choisi pan-ni l'eau ; un mono-alcool en Ci-C4, par exemple l'éthanol ; un glycol en 30 C2-C6, choisi préférentiellement parmi le glycérol, le butylène glycol et le propylène glycol ; et l'un quelconque de leurs mélanges. Selon une mise en oeuvre préférée, on extrait le matériel végétal à l'aide d'un solvant polaire constitué d'un mélange hydroalcoolique, avantageusement un mélange d'eau et d'éthanol. En particulier, on peut extraire le 35 matériel végétal à l'aide d'un solvant constitué d'eau et d'éthanol, l'éthanol représentant de 50% v/v à 99% v/v du mélange eau/éthanol. L'extraction peut être menée à chaud par reflux ou bien par macération à température ambiante (comprise entre 20 et 25°C).

On utilise avantageusement les ultrasons en cours d'extraction afin d'améliorer le rendement massique de ladite extraction. Le procédé d'extraction peut également comprendre au moins une étape choisie parmi une étape de décoloration, une étape de purification, une étape de délipidation, et leurs combinaisons. Cette étape supplémentaire peut par exemple correspondre à - un traitement de l'extrait par une solution d'au moins un solvant polaire en présence de particules de charbon actif, ou à - un traitement de l'extrait à l'aide d'un solvant apolaire acceptable d'un point de vue cosmétique ou dermatologique, notamment un alcane en C6-C7 ou le CO2 à l'état supercritique. Le procédé d'extraction peut en outre être complété par une étape d'élimination partielle ou totale du solvant d'extraction. Selon une variante, on concentre l'extrait jusqu'à obtenir un concentré aqueux dépourvu d'une quantité significative de solvants organiques. Dans une autre variante, on élimine le solvant jusqu'à obtenir un résidu sec. L'extrait obtenu à Ilssu de l'étape d'extraction peut être lyophilisé ou atomisé pour se présenter sous la forme d'une poudre. L'extrait végétal tel que décrit précédemment peut être utilisé dans une composition cosmétique ou dermatologique sous la forme d'une poudre ou bien sous la forme d'une solution ou d'une suspension de ladite poudre dans au moins un solvant cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable, qui peut être identique ou différent de celui ayant servi à l'extraction. Un deuxième objet de la présente invention vise une composition cosmétique ou dermatologique comprenant un extrait de Kmphofia Uvaria tel que 30 défini précédemment et au moins un excipient cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable. Avantageusement, la composition de l'invention comprend au moins un excipient acceptable d'un point de vue cosmétique ou dermatologique pouvant être choisi parmi des pigments, des colorants, des polymères, des 35 agents tensioactifs, des agents de rhéologie, des parfums, des électrolytes, des ajusteurs de pH, des agents anti-oxydants, des conservateurs, et l'un quelconque de leurs mélanges.

La composition cosmétique comprend une quantité efficace dudit extrait pour obtenir l'effet recherché. La composition comprend ainsi préférentiellement de 0,0001% à 2% en poids dudit extrait en poids sec, de préférence de 0,01% à 1% en poids, par rapport au poids total de la composition. Les propriétés de l'extrait de l'invention peuvent être également complétées ou améliorées dans des compositions cosmétiques ou dermatologiques, dans lesquelles l'extrait de l'invention est associé avec d'autres agents actifs cosmétiques ou dermatologiques, sous forme de molécules purifiées et/ou d'extraits, notamment d'extraits végétaux, présentant des effets cosmétiques similaires et/ou complémentaires de ceux dudit extrait de l'invention.

Ladite composition peut ainsi également comprendre à titre d'agents actifs, des molécules ou extraits choisies parmi les substances ayant une activité éclaircissante de la peau ; les substances ayant une activité amincissante ; les substances ayant une activité hydratante ; les substances ayant une activité calmante, apaisante ou relaxante ; les substances ayant une activité stimulant la microcirculation cutanée pour améliorer l'éclat du teint, en particulier du visage ; les substances ayant une activité sébo-régulatrice pour le soin des peaux grasses ; les substances destinées à nettoyer ou purifier la peau ; les substances ayant une activité anti-radicalaire ; les substances destinées à atténuer ou retarder les effets du vieillissement de la peau, en particulier la formation de rides, par une activité visant à favoriser le maintien de la structure de la peau et/ou à limiter la dégradation de la matrice extracellulaire des couches superficielles du derme et de l'épiderme et/ou à obtenir un effet protecteur, correcteur ou restructurant de la peau ; les substances ayant une activité anti-inflammatoire.

La composition peut être par exemple un sérum, une lotion, une crème, une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile, un hydrogel, un masque pour le visage, une composition anhydre, ou encore se présenter sous la forme d'un stick, d'un patch, ou d'un produit de maquillage de type rouge-à-lèvres, mascara ou fond de teint.

L'extrait et la composition de l'invention présentent un effet particulièrement recherché pour prévenir ou retarder l'apparition des signes du vieillissement cutané, ou pour en ralentir ou atténuer les effets.

Un autre objet de l'invention vise l'utilisation, dans une composition cosmétique, d'un extrait tel que décrit précédemment, - comme agent actif destiné à prévenir ou retarder l'apparition des signes du vieillissement cutané ou à en ralentir ou atténuer les effets, et/ou - comme agent actif destiné à favoriser la longévité cellulaire ou tissulaire. Selon un autre objet de l'invention, l'extrait peut être également utilisé, dans une composition cosmétique, comme agent actif pour conserver ou améliorer l'élasticité et la fermeté de la peau, pour augmenter la production de collagène, en particulier de pro-collagène I, pour augmenter la production de fibronectine, pour ralentir la dégradation de la matrice extracellulaire, pour augmenter la production de fibres de la matrice extracellulaire, ou pour le maintien de la structure de la peau.

L'extrait peut encore être utilisé dans une composition cosmétique comme agent actif destiné à - apaiser une peau irritée par les radicaux libres endogènes ou produits par les rayons UV, et/ou - à inhiber la production de prostaglandine E2, et/ou - apaiser une peau irritée par l'utilisation d'alpha hydroxy-acides, par exemple au cours d'un soin de gommage ou un peeling. Selon un autre de ses aspects, l'invention concerne la composition dermatologique ou l'extrait décrits précédemment pour leur utilisation dans le traitement ou la prévention des états inflammatoires de la peau d'un patient. La composition cosmétique ou dermatologique ou l'extrait décrits précédemment peut également être utilisée pour le traitement ou la prévention du vieillissement cutané, ou bien encore pour augmenter la longévité cellulaire ou tissulaire.

Un autre objet de l'invention vise une méthode de soin cosmétique comprenant l'application sur au moins une partie de la peau du visage ou du corps pouvant présenter des signes du vieillissement comme des rides ou un relâchement, d'une quantité efficace d'une composition ou d'un extrait tels que définis précédemment, notamment pour prévenir ou retarder l'apparition des signes du vieillissement cutané ou à en ralentir ou atténuer les effets.

Avantageusement, la composition cosmétique est appliquée sur une zone de peau du corps ou du visage présentant au moins un signe visible de vieillissement choisi parmi la présence de rides ou de ridules, une perte d'éclat du teint, une perte d'élasticité et/ou de souplesse, une diminution de l'épaisseur de la peau, et une augmentation de la sécheresse ou de la rugosité cutanée. Avantageusement, l'extrait et la composition auxquels les utilisations de l'invention font référence sont de préférence tels que définis précédemment ou ci-après.

D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront clairement à la lumière de la description explicative qui va suivre faite en référence à des exemples de préparation d'extrait et de tests mettant en évidence les propriétés de l'extrait et à des exemples de composition cosmétique utilisant un tel extrait, qui sont donnés à titre d'illustration de l'invention sans pour autant en limiter la portée. Dans les exemples, tous les pourcentages sont donnés en poids, la température est en degrés Celsius, la pression est la pression atmosphérique, sauf indication contraire. EXEMPLES Exemple 1 : Préparation d'extraits de Kniphofia uvaria. 1) Préparation d'un extrait de tiges (EXTRAIT 1) On a préparé un premier extrait en utilisant les tiges de la plante Kniphofia uvaria. Celles-ci ont été récoltées vertes puis séchées. 30 Cette matière végétale, à l'état sec et broyé, a subi une extraction hydroalcoolique Ethanol/eau 90/10 v/v à reflux pendant 30 min. Le ratio végétal solvant était de 1/15 (p/v). Le résidu végétal a été éliminé par filtration, puis lavé avec 1/3 du volume du solvant d'extraction. 35 Le solvant a ensuite été éliminé pour obtenir un extrait sec. Le rendement massique en extrait sec exprimé en poids par rapport au poids de matière végétale de départ était de 3,3%. 25 2) Préparation d'un extrait de feuilles (EXTRAIT 2) La matière végétale utilisée était constituée de feuilles de la plante Kniphofia uvana. Celles-ci ont été séchées après récolte.

Cette matière végétale, à l'état sec et broyé, a subi une extraction hydroalcoolique Ethanol/eau 90/10 v/v à reflux pendant 30 min. Le procédé mis en oeuvre était conforme à celui décrit pour l'extraction des tiges. Le rendement massique en extrait sec exprimé en poids par rapport au poids de matière végétale de départ était de 11%. 3) Préparation d'un extrait de graines (EXTRAIT 3) La matière végétale était constituée de graines de la plante Kniphofia uvaria. Celles-ci ont été séchées après récolte. Cette matière végétale, à l'état sec et broyé, a subi une extraction hydroalcoolique Ethanol/eau 90/10 v/v à reflux pendant 30 min. Le procédé mis en oeuvre était conforme à celui décrit pour l'extraction des tiges.

Le rendement massique en extrait sec exprimé en poids par rapport au poids de matière végétale de départ était de 23,9%. 4) Préparation d'un extrait de tiges (EXTRAIT 4) La matière végétale était constituée de tiges de la plante Kniphofia uvaria. Celles-ci ont été séchées après récolte. Cette matière végétale, à l'état sec et broyé, a subi une extraction hydroalcoolique (Ethanol/eau 70/30 v/v) à reflux pendant 5 min, assisté d'ultrasons. Le ratio végétal/solvant est de 1/15 m/v.

L'utilisation d'ultrasons permet d'améliorer significativement le rendement massique d'extraction obtenu avec cette partie de plante, si on compare le rendement de l'EXTRAIT 4 avec celui de l'EXTRAIT 1. Après séparation solide/liquide par filtration, on soumet le résidu solide obtenu à une nouvelle extraction dans les mêmes conditions, incluant l'assistance d'ultrasons, que la première, afin d'épuiser complètement le végétal. Le rendement massique en extrait sec exprimé en poids par rapport au poids de matière végétale de départ était de 13%.

Exemple 2 - Tests d'activité des extraits de l'invention Pour les tests d'activité cosmétique ci-dessous, on a préparé une solution-mère pour chaque extrait préparé à l'exemple 1, dans laquelle un extrait sec de l'invention a été solubilisé dans du DMSO à la concentration de 12,5 ; 25 ou 50 mg d'extrait par mL de solvant. Au moment du traitement des cellules par l'extrait de l'invention, la solution-mère est diluée au 1/1000ème dans le milieu de culture pour atteindre la concentration souhaitée. 1) Marqueurs de l'inflammation (PGE_) La prostaglandine E2 (PGE2) est le médiateur majeur des phénomènes de réponses inflammatoires lors de dommages tissulaires. De nombreux agents pharmacologiques peuvent inhiber la libération de PGE2 par des kératinocytes en culture, tel l'indométhacine ou encore des molécules issues de plantes. Protocole du dosage de PGE2 Des cellules HaCaT (lignée kératinocytaire génétiquement modifiée) ont été ensemencées à raison de 10000 cellules/puits (milieu de culture KSFM complémenté, Gibco) dans une microplaque 96 puits. La plaque a été placée à l'étuve (37°C et 5% CO2) pour 24 heures. Les extraits ont été mis en présence des cellules après dilution au 1/1000ème dans du milieu de culture. Une colonne a été traitée avec un témoin positif (indométhacine (Sigma) à 1 pg/mL) et une autre colonne non traitée a été mise en présence du DMSO. Les extraits, le témoin positif (indométhacine dans le DMSO) et le témoin sans traitement (DMSO), ont été évalués sur 4 puits de cellules (HaCaT).

Après 24 heures de traitement, les surnageants de culture ont été prélevés et stockés à -20°C. Le dosage a été effectué selon le protocole décrit dans le kit de dosage PGE2 (R&D Systems). Ce test immunoenzymatique permet de doser, par mesure spectrophotométrique à 450 nm, la quantité de PGE2 présente dans les surnageants qui est inversement proportionnelle à l'absorbance mesurée. 2) Maintien de la structure de la peau Les tests ont été faits sur fibroblastes humains normaux (FHN), cellules du derme favorisant le maintien de la structure de la peau.

Les fibres de la matrice extracellulaire sont indispensables au bon maintien de la peau. Différents facteurs, intrinsèques ou extrinsèques, peuvent moduler le taux de ces fibres, jouant ainsi sur l'élasticité de la peau. Protocole du dosage des fibres de pro-collagène I et fibronectine Les FHN ont été ensemencés à la densité de 5000 cellules/puits et 200 pL/puits de milieu de culture MEM (Gibco Invitrogen) complété avec de la glutamine (Gibco Invitrogen, concentration finale 2mM) et 10% de SVF (sérum de veau foetal), dans une microplaque 96 puits (Falcon). La plaque de culture a été placée à l'étuve pendant 24 heures afin d'obtenir 80% de confluence cellulaire. Les extraits ont été mis en présence des cellules après dilution adéquate dans du milieu de culture. Une colonne a été traitée avec un témoin positif (Acide ascorbique (Sigma) 0.1 pM), et une colonne a été mise en présence du solvant de solubilisation DMSO (témoin). Chaque extrait, le témoin positif (acide ascorbique dans le DMSO) et le témoin sans traitement (Témoin solvant DMSO), ont été évalués sur 4 puits de FHN (Fibroblastes Humains Normaux). Après 48 heures de traitement, les surnageants de culture ont été prélevés et stockés à -20°C. Le dosage a été effectué selon les protocoles décrits dans les kits EIA de Takara. Ces deux tests utilisent une technique 25 immunoenzymatique permettant de doser respectivement, par mesure spectrophotométrique à 450 nm, la quantité de fibres de collagène et fibronectine présentes dans les surnageants. 3) Marqueur du vieillissement cutané 30 Ce test a permis d'évaluer le vieillissement cellulaire. La MMP-1 est une enzyme majeure impliquée dans la dégradation de la matrice extracellulaire. La production de MMP-1 est gouvernée par le facteur de transcription AP-1 qui est directement influencé par des stress environnementaux, comme les 35 rayonnements UV, qui aboutissent à l'accélération du vieillissement cutané.

Protocole de dosage de la pro-MMP-1 Ce test a été réalisé sur fibroblastes humains normaux (FHN). Ces FHN ont été ensemencés à la densité de 5000 cellules/puits et 200 pL/puits de milieu de culture MEM (Gibco Invitrogen) complété avec de la glutamine (Gibco Invitrogen, concentration finale 2mM) et 10% de SVF (sérum de veau foetal), dans une microplaque 96 puits (Falcon). La plaque de culture a été placée à l'étuve pendant 24 heures afin d'obtenir 80% de confluence cellulaire. Les extraits ont été mis en présence des cellules après dilution adéquate dans du milieu de culture. On a traité les cellules avec un témoin positif (Anogeissus leiocarpus 25 pg/mL) et un témoin solvant (DMSO). L'extrait, le témoin positif et le témoin solvant, ont chacun été évalués sur 4 puits de FHN. Après 48 heures de traitement, les surnageants de culture ont été prélevés et stockés à -20°C. Le dosage de pro MMP-1 a été effectué selon le protocole décrit dans le kit Quantikine (R&D Systems). Ce test selon la technique immunoenzymatique du « sandwich » permet de doser la quantité de pro MMP-1 dans les surnageants par mesure spectrophotométrique à 450 nm.

Résultats Le tableau ci-dessous résume les données obtenues pour chaque extrait (dose d'utilisation non cytotoxique en pg/mL). T T + EXTRAIT 1 EXTRAIT 2 EXTRAIT 3 DMSO Partie de plante Tiges Feuilles Graines Dose (pg/mL) 0,1%v/v 25 25 50 12,5 PGE2 100% -64 - 32 - 34 -24 Pro-col. I 100% +58 + 75 + 39 + 5 Fibronectine 100% +54 + 89 - 6 + 62 Pro-MMP1 100% -85 - 23 - 8 - 35 Légendes du tableau; T DM50 = témoin solvant de solubilisation, (DM50), = témoin positif du test (anogelline), 1Z5 /mL ;25 pg/mL et 50 pg/mL = doses testées de l'extrait de Kniphofia - PGE2 : prostaglandine type E2 - Pro-col. I: pro-collagène I - Pro-MMP1 : pro-MatnX MetalloProtéinase de type 1 Les valeurs du tableau sont exprimées en pourcentage par rapport à l'activité du témoin solvant dont l'activité est normalisée à 100%. Une valeur positive traduit une stimulation de la production du marqueur par les cellules cutanées, sous l'effet du traitement par l'extrait testé. Une valeur négative caractérise un effet d'inhibition sur la production du marqueur considéré. Les trois extraits ont inhibé la production de PGE2. Ils ont ainsi un potentiel anti-inflammatoire qui les rend utilisables en tant qu'agent actif dans des compositions cosmétiques ou dermatologiques. L'extrait végétal polaire présentant le plus grand intérêt est celui obtenu à partir de tiges de Kniphofia uvaria. Cet extrait agit sur tous les marqueurs testés, d'une part en augmentant significativement la production de deux types de fibres de la matrice extracellulaire, le pro-collagène I et la fibronectine, marqueur de la fermeté de la peau, d'autre part en diminuant la production de la pro-MMP1, enzyme responsable de la dégradation de la matrice extracellulaire, plus particulièrement liée au vieillissement photo-induit.

Exemple 3 -Effet du traitement par un extrait de l'invention sur des fibroblastes Humains Normaux. On étudie ici l'activité biologique in vitro d'un extrait de l'invention sur des fibroblastes humains normaux (FHN) cultivés en monocouche. L'étude a été réalisée à l'aide de la technologie TLDA pour Taqman Low density Array. On a étudié la modulation de l'expression du gène codant pour la Cathepsin K, en réponse à un traitement d'une durée de 24h par l'EXTRAIT 4 de l'exemple 1. La cathepsin K est une protéase qui est exprimée à des hauts niveaux dans certaines conditions pathologiques. Il a été formulé l'hypothèse que cette protéine, responsable de la dégradation intracellulaire de l'élastine (5D Gan, J. Invest. Dermatol., 2009, 537), est particulièrement exprimée par les fibroblastes dans le cas d'une exposition de la peau au rayonnement solaire. Cette élastase jouerait ainsi un rôle important dans la dégradation de l'élastine participant au photovieillissement de la peau (Codriansky et al., Photochem. Photobiol. ; 2009, 85(6):1356-63) 1. Matériels et Méthodes Culture cellulaire Les fibroblastes humains normaux (FHN), issus d'un donneur adulte caucasien, ont été ensemencés en plaque 6 puits, à raison de 2.5.104 cellules/puits dans du milieu 1 de composition ci-dessous : Milieu 1 Fournisseur Concentration finale SVF Biowest 10% DMEM Fisher qs Trois puits de FHN ont été ensemencés par condition de culture. 24 heures avant le traitement, à confluence, les cellules ont été déplétées en sérum de veau foetal (milieu 2) de composition ci-dessous : Milieu 2 Fournisseur DMEM Fisher 2. Traitement Après 24 heures de culture sans sérum de veau foetal, les cellules ont été traitées par un extrait de l'invention selon l'exemple 1, à 0,1% en poids dans du milieu 2. Après 24 heures de traitement, les cellules ont été récupérées afin d'en extraire les ARN totaux. Un témoin non traité est également réalisé dans les mêmes conditions. 3. PCR Taqman Low Density Array 3.1 Obtention des ARN totaux Le milieu de culture des cellules a été éliminé, et 250 pL de tampon de lyse RLT (fourni dans le kit Nucleospin RNA trace) ont été ajoutés. Les cellules ont été raclées à l'aide d'un Cell Scraper puis le lysat cellulaire, récupéré dans une deepwell 1,2 mL (fourni dans le kit). Les ARN totaux ont été extraits à l'aide d'un Epimotion 5075 (Eppendorf) avec le kit Nucleospin RNA trace (Macherey Nagel). Les solutions d'ARN totaux obtenues ont été dosées et leur qualité vérifiée, à l'aide du Bioanalyseur 2100 (Agilent Technologies). Cet appareil était relié à un ordinateur possédant le logiciel spécifique d'analyse des résultats (logiciel 2100 expert). La technique a nécessité une micro-plaque de 12 puits (RNA 6000 NanoChips) et un kit de réactifs (RNA 6000 Nana Reagents Supplies), spécifiques du dosage des ARN totaux eucaryotes 3.2 Synthèse des ADN complémentaires Le kit de reverse transcription (RT) utilisé était le High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (APPLIED BUIOSYTEMS). 100 ng d'ARN totaux, ont été dilués dans de l'eau pour un volume final de 50 pL. Ils ont été ensuite incubés pendant 10 minutes à 25°C puis 2 heures à 37°C avec 50 pL de mélange réactionnel de High capacity reverse transcription kit 2X préalablement préparé comme indiqué ci dessous. Réactifs volume RT buffer 10 pL dNTP buffer 4 pL Random primer 10 pL RNAse out 1 ,uL RT 5 pL H20 2O pL 3.3 PCR Taqman Low Densitv Array 50 pL de chaque RT ont été prélevés et mélangés à 50 pL de « Taqman Gene Expression master mix ». Après homogénéisation, les 100 pL ont été déposés sur les cartes microfluidiques, ces dernières ont été centrifugées puis scellées. On a utilisé des gènes contrôles pour la normalisation des résultats. La PCR a été réalisée selon le protocole fourni par Applied Biosystems dans l'appareil ABI Prism 7900HT Sequence detection system. Les étapes de la qPCR ont été 2 min à 50°C, 10 min à 94,5°C puis 30 s à 97°C et 1 min à 59,7°C pour 40 cycles. 3.4 Analyse des résultats Dans la méthode de RT-PCR TLDA, la quantification est effectuée en utilisant la méthode comparative de ACt. Cette méthode détermine le nombre de cyles (Ct) de chaque gène de la carte en utilisant le logiciel RQ Manager qui prend en compte du bruit de fond pour chaque gène. Ce nombre de cycles (Ct) a été normalisé par rapport au Ct d'un gène de ménage GAPDH invariant dans les cellules. 4. Résultats Le traitement des FHN par l'extrait de l'invention induit une inhibition significative (- 31%) de l'expression de Cathepsin K par le gène CTSK 1 par rapport au témoin. L'effet de l'extrait de l'invention sur l'expression du gène Cathepsin K est donc particulièrement intéressant pour prévenir ou ralentir la dégradation de l'élastine, notamment au moment d'une exposition de la peau aux UVs. Il est ainsi possible de lutter efficacement contre le vieillissement cutané, et plus particulièrement sur le photovieillissement de la peau en agissant sur l'inhibition de ce gène à l'aide de l'extrait de l'invention.

Exemple 3 - Crème anti-vieillissement pour le visage L'extrait de tiges de Kniphofia uvaria utilisé à titre d'agent actif dans cette composition cosmétique, a été obtenu selon l'exemple 1 (EXTRAIT 4). L'extrait sec a été mis en solution à 2% p/p dans un mélange glycérol/eau 60/40 v/v. Cette solution d'extrait a été utilisée à titre d'agent actif pour la préparation de la composition cosmétique ci-dessous (% exprimé en poids par rapport à la composition finale) : Phase A Solution à 2% en extrait de Kniphofia uvaria 1 Phénoxyéthanol 0,5 Gomme xanthane 0,2 Acrylates/C20-30 alkylacrylate crospolymères 0,2 EDTA tétrasodique 0,1 Eau qs qs : quantité suffisante pour solubiliser les composés de la phase A. Phase B 35 Polyisobutène hydrogéné 4 Squalane 3 30 Caprylique/caprique triglycérides 3 Pentylène glycol 3 Glycéryl stéarate 3 PEG-100 stéarate 2,5 Cire d'abeilles 1,5 Dicaprylyl carbonate 1,5 Cétyl alcool 1 Stéaryl alcool 1 Diméthicone 1 Phase C Hydroxyde de sodium 0,04 Eau qs 100 qs 100 : quantité suffisante pour 100% de la composition finale On a dispersé les excipients de la phase A dans l'eau, puis on a chauffé à 80°C, avant de solubiliser tous les autres composés y compris la solution hydroglycolique d'extrait de Kniphofia uvana. Les composés de la phase B ont été chauffés à 85°C pour former une phase homogène.

On a émulsionné la phase A dans la phase B à l'aide d'un mélangeur Ystral. L'émulsion huile-dans-eau ainsi obtenue a finalement été neutralisée à l'aide d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium 0,04 % p/p (phase C), puis refroidie.

La composition obtenue était une crème anti-âge destinée à être appliquée sur tout ou partie du visage et/ou du décolleté. L'extrait confère à la composition des propriétés qui favorisent le maintien de la fermeté de la peau sur laquelle la composition est appliquée et permet d'atténuer les signes de vieillissement cutané, notamment photo-induit.30

Claims (14)

1. REVENDICATIONS1. Extrait de la plante Kniphofia uvaria, obtenu par extraction du matériel végétal au moyen d'un solvant polaire acceptable d'un point de vue cosmétique ou dermatologique.
2. 2. Extrait selon la revendication 1, caractérisé en ce que le matériel végétal est choisi parmi la plante entière ou une partie de la plante telle que les 10 feuilles, la tige, les fleurs, les graines ou les racines.
3. 3. Extrait selon la revendication 2, caractérisé en ce que le matériel végétal est choisi parmi la tige, les graines et leurs mélanges. 15
4. 4. Extrait selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que le matériel végétal est séché après récolte de la plante.
5. 5. Extrait selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que le solvant polaire est choisi parmi l'eau, un mono-alcool en C1-C4, un glycol en 20 C2-C6, et l'un quelconque de leurs mélanges.
6. 6. Extrait selon l'une des revendications précédentes, caractérisé en ce que le solvant polaire est un mélange d'eau et d'éthanol, l'éthanol représentant de 50% v/v à 99% v/v du mélange. 25
7. 7. Composition cosmétique ou dermatologique comprenant un extrait selon l'une des revendications précédentes et au moins un excipient cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable choisi parmi des pigments, des colorants, des polymères, des agents tensioactifs, des agents de rhéologie, 30 des parfums, des électrolytes, des ajusteurs de pH, des agents anti-oxydants, des conservateurs, et l'un quelconque de leurs mélanges.
8. 8. Composition cosmétique ou dermatologique selon la revendication précédente, caractérisé en ce qu'elle comprend 0,0001% à 10% en poids dudit 35 extrait en poids sec, de préférence de 0,01% à 1% en poids, par rapport au poids total de la composition.
9. 9. Utilisation, dans une composition cosmétique, d'un extrait selon l'une des revendications 1 à 6, comme agent actif destiné à prévenir ou retarder l'apparition des signes du vieillissement cutané, et/ou comme agent destiné à favoriser la longévité cellulaire ou tissulaire.
10. 10. Utilisation, dans une composition cosmétique, d'un extrait tel que défini à l'une des revendications 1 à 6 comme agent actif pour conserver ou améliorer l'élasticité et la fermeté de la peau, pour augmenter la production de collagène, en particulier de pro-collagène I, pour augmenter la production de fibronectine, pour ralentir la dégradation de la matrice extracellulaire, pour augmenter la production de fibres de la matrice extracellulaire, ou pour le maintien de la structure de la peau.
11. 11. Utilisation, dans une composition cosmétique, d'un extrait tel que défini à l'une des revendications 1 à 6, comme agent actif destiné à apaiser une peau irritée par les radicaux libres endogènes ou produits par les rayons UV, et/ou pour inhiber la production de prostaglandine E2.
12. 12. Utilisation, dans une composition cosmétique, d'un extrait tel que défini à l'une des revendications 1 à 6, comme agent actif destiné à apaiser une peau irritée par l'utilisation d'alpha hydroxy-acides.
13. 13. Composition dermatologique selon l'une des revendications 7 ou 8 ou extrait selon l'une des revendications 1 à 6 pour leur utilisation dans le traitement ou la prévention des états inflammatoires de la peau d'un patient.
14. 14. Méthode de soin cosmétique comprenant l'application sur au moins une partie de la peau du visage ou du corps présentant des signes du vieillissement comme des rides ou un relâchement, d'une quantité efficace d'une composition selon l'une des revendications 7 ou 8 ou d'un extrait selon l'une des revendications 1 à 6, pour ralentir le vieillissement cutané ou en atténuer les effets.