JP4833410B2 - 抗ラジカル型作用を有する植物抽出物の使用 - Google Patents
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Description
【０００１】
本発明は化粧品分野、特に皮膚用化粧品における植物抽出物の使用に関する。その主題は、皮膚、粘膜及び／または上皮または身体付属器官（毛髪、爪等）用化粧品または皮膚用医薬品を製造するための仏ガイアナ産の特定医薬ハーブの使用にある。
【０００２】
仏ガイアナのクレオール人及びパリクール人は伝統医薬品中に多数の在来植物を使用している。これらの植物及びその治療用途は、特にＧｒｅｎａｎｄ Ｐ．、Ｍｏｒｅｔｔｉ Ｃ．及びＪａｃｑｕｅｍｉｎ Ｈ．の表題“Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｅｓ ｔｒａｄｉｔｉｏｎｅｌｌｅｓ ｅｎ Ｇｕｙａｎｅ：Ｃｒｅｏｌｅｓ．Ｐａｌｉｋｕｒ，Ｗａｙａｐｉ”の論文（Ｏｒｓｔｏｍ（１９８７年）発行）に記載されている。
【０００３】
しかしながら、本発明者らは、上記種類の特定植物の抽出物は非常に高い皮膚寛容と共に各種生物学的及び生物化学的作用を有し、化粧品及び特に皮膚用化粧品で使用するための組成物中に直接使用することができることを知見した。
【０００４】
従って、本発明者らが選択した植物は抽出物を得ることができ、予期せぬことに、また驚くべきことに、これらの植物はすべて強い抗ラジカル型作用を有することに加えて、チロシンに対する抑制（色素脱失）作用、チロシナーゼ活性剤に対する抑制（色素沈着）作用、抗ＵＶＡ及び抗ＵＶＢ作用、ＵＶＡからのカタラーゼ保護作用、並びに抗エラスターゼ、抗コラゲナーゼ、抗グリケーション及び／または脂肪分解作用（スリミングのために）をも有する。
【０００５】
従って、本発明の主題は、皮膚、粘膜及び／または上皮または身体付属器官に対して局所外用するための化粧品または皮膚用医薬品の製造においてＣｌｉｄｅｍｉａ、Ｉｎｇａ、Ｓａｂｉｃｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ、Ｓｉｐａｒｕｎａ、Ｅｐｅｒｕａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ、Ｐｒｉｖａ、Ｃｏｕｔｏｕｂｅａ及びＧｏｕｐｉａから成る群に属する植物属の植物の少なくとも１つの抽出物を活性成分として、特に抗ラジカル作用を有する活性成分として使用することにある。
【０００６】
有利には、上記属から下記の特定種が選択され得る：
Ｃｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ（アメリカクサノボタン）、Ｃｌｉｄｅｍｉａ ｄｅｎｔａｔａ；
Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｉｎｇａ ｐｅｚｉｚｉｆｅｒａ、Ｉｎｇａ ａｌａｔａ、Ｉｎｇａ ａｌｂａ、Ｉｎｇａ ｃａｐｉｔａｔａ、Ｉｎｇａ ｍｅｉｓｓｎｅｒｉａｎａ；
Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ｓａｂｉｃｅａ ｇｌａｂｒｅｓｃｅｎｓ、Ｓａｂｉｃｅｒａ ｖｅｌｕｔｉｎａ、Ｓａｂｉｃｅａ ｖｉｌｌｏｓａ、Ｓａｂｉｃｅａ ｈｉｒｓｕｔａ；
Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ（ワラバ）；
Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｃｒａｓｓｉｆｏｌｉａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｃｈｒｙｓｏｐｈｙｌｌａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｃｏｒｉａｃｅａ；
Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｍｕｒｕｍｕｒｕ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｃｈａｍｂｉｒａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｊａｕａｒｉ、Ａｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｍａｃｒｏｃａｌｙｘ；
Ｐｒｉｖａ ｌａｐｐｕｌａｃｅａ；
Ｃｏｕｔｏｕｂｅａ ｓｐｉｃａｔａ、Ｃｏｕｔｏｕｂｅａ ｒａｍｏｓａ； Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｅｍａｒｇｉｎａｔａ；
Ｇｏｕｐｉａ ｇｌａｂｒａ（ゴウピ）。
【０００７】
しかしながら、特に抗ラジカル型作用に関して定性的及び定量的に最適の作用を有する抽出物を与える本発明の好ましい実施態様において、活性成分はＣｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ、Ｐｒｉｖａ ｌａｐｐｕｌａｃｅａ、Ｃｏｕｔｏｕｂｅａ ｓｐｉｃａｔａ及びＧｏｕｐｉａ ｇｌａｂｒａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物から構成される。
【０００８】
上記した各種作用により、抽出物を主に皮膚の老化、皮膚の高い色素沈着、色素斑、皮膚弾性の低下、しわ、過敏状態及び炎症（過敏性皮膚の治療）、環境汚染及び／または日光により引き起こされる刺激の抑制、及び／またはスリミングを意図する製品中に単独で、相互混合物として、または他の活性化合物との混合物として使用することが有利である。
【０００９】
上記抽出物を作成及び得るために使用される植物の部分は根、皮層（植物の根、柄及び／または幹）、葉、葉柄、果実、子実及び／または花である。
【００１０】
適当な植物の部分を集め、乾燥したら、抽出する。使用される溶媒は、有利には水、アルコール類、ケトン類、エステル類、エーテル類、塩素系溶媒類、多価アルコール類、及び前記混和性溶媒を少なくとも２つ含む混合物から選択され得る。
【００１１】
本発明の特定実施態様において、抽出物は照射波、例えばマイクロ波または超音波を利用する抽出方法により得られる。
【００１２】
或いは、本発明の抽出物は超臨界ＣＯ２単独または二次溶媒との混合物での抽出により得られ得る。
【００１３】
本発明の特定実施態様において、植物抽出物は上記抽出方法の１つにより得た１つ以上の植物抽出物を特にクロマトグラフィーにより精製した１つ以上の分画からなる。
【００１４】
本発明の範囲を限定することなく本発明を例示するために、上記植物抽出物を得るために実施され得る各種方法を記載する。
【００１５】
下記実施例において、使用した植物の部分は例として示したにすぎない。本発明に含まれる抽出物は上記植物の入手可能な部分から得ることができる。
【００１６】
実施例１
Ｅｐｕｒｅａ ｆａｌｃａｔａ幹の皮層を粉砕後、ブレードタイプのパルプ製造機により細かく潰す。
【００１７】
蒸留水（３Ｌ）を攪拌機を備えた反応器に投入した後、
パルプ化皮層（３００ｇ）を反応器に添加する；
沸騰させつつ、撹拌しながら１時間抽出する；
周囲温度に冷却する；
遠心または濾過により不溶性物質を除去する；
表面上に浮遊している物質を約０．４５μｍの多孔度を介して濾過する；
濾液を集める；
残渣を同一の操作条件で蒸留水（２Ｌ）を用いて抽出し、上記のように操作する；
得られた水性抽出物に対する乾燥物質の含量を測定した後、抽出乾燥物質１／３に対して添加物質２／３となるようにマルトデキストリンタイプの物質を添加する；
得られた溶液を噴霧または当業界で公知の他の方法（脱水、凍結乾燥、乾燥チャンバでの乾燥）により脱水する；
の操作を逐次実施する。
【００１８】
この方法からの乾燥抽出物の総収率は、皮層に対して１５重量％である。
【００１９】
実施例２
Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ幹の皮層を粉砕後、ブレードタイプのパルプ製造機により細かく潰す。
【００２０】
５０％エタノール（３Ｌ）を攪拌機を備えた反応器に投入した後、
パルプ化皮層（３００ｇ）を反応器に添加する；
（還流）加熱しつつ、撹拌しながら１時間抽出する；
周囲温度に冷却する；
濾過により不溶性物質を除去する；
表面上に浮遊している物質を約０．４５μｍの多孔度を介して濾過する；
濾液を集める；
残渣を同一条件で５０％エタノール（１．５Ｌ）を用いて抽出後、上記のように処理する；
両濾液のアルコール相を真空下で蒸発させる；
遠心し、乾燥物質の含量を測定後、所要により得られた水性相に実施例１と同一比率で添加物質を添加する；
所要により、得られた溶液を慣用方法により脱水する；
の操作を逐次実施する。
【００２１】
この方法からの乾燥抽出物の総収率は、皮層に対して１３．８重量％である。
【００２２】
実施例３
Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ根の皮層を粉砕後、ブレードタイプのパルプ製造機により細かく潰す。
【００２３】
８０％メタノール（３Ｌ）を攪拌機を備えた反応器に投入した後、
パルプ化皮層（３００ｇ）を反応器に添加する；
（還流）加熱しつつ、撹拌しながら１時間抽出する；
周囲温度に冷却する；
不溶性物質を濾別する；
表面上に浮遊している物質を約０．４５μｍの多孔度を介して濾過する；
濾液を集める；
残渣を同一の操作条件で８０％メタノール（１．５Ｌ）を用いて抽出後、上記のように処理する；
両濾液のメタノール相を真空下で蒸発させる；
遠心し、乾燥物質の含量を測定後、得られた水性相に実施例１と同一比率で添加物質を添加する；
所要により、得られた溶液を慣用方法により脱水する；
の操作を逐次実施する。
【００２４】
この方法からの乾燥抽出物の総収率は、皮層に対して１７．４重量％である。
【００２５】
実施例４
Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅの根を粉砕後、最後にパルプ化する。
【００２６】
無水エタノール（３Ｌ）を攪拌機を備えた反応器に投入した後、
粉砕したＡｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅの根（３００ｇ）を反応器に添加する；
（還流）加熱しつつ、撹拌しながら１時間抽出する；
周囲温度に冷却する；
不溶性物質を濾別する；
表面上に浮遊している物質を約０．４５μｍの多孔度を介して濾過する；
抽出物１に相当する濾液を集める；
残渣を同一の操作条件でエタノール（３Ｌ）で抽出後、上記と同様に処理して抽出物２を得る；
両濾液のエタノール相を真空下４０℃で蒸発させる；
抽出物を換気付き乾燥オーブンにおいて４０〜５０℃で乾燥して痕跡量の溶媒を除去する；
の操作を逐次実施する。
【００２７】
こうして、７．１５ｇのＥ１抽出物及び１．４７ｇのＥ２抽出物を得、これらを最後に混合した。抽出物の総収率は、根に対して２．８７重量％である。
【００２８】
本発明者らが実施した植物及び抽出物のすべてを下表にリストする。
【００２９】
【表１】
【００３０】
化粧品として有用な製品に直接使用することができる植物抽出物の生物学的及び生化学的特性及び作用は当業者に公知の試験により測定することが可能であった。試験の原理を簡単に下記し、結果をそれぞれの表に示す。
【００３１】
Ｉ． 抗ラジカル型作用
酸化抗ストレス特性をｉｎ ｔｕｂｏ試験及びｉｎ ｖｉｔｒｏ試験で評価した。
【００３２】
ｉｎ ｔｕｂｏ試験のグループには、酸素の初期ラジカル形態及びｉｎ ｖｉｖｏで導入した反応形態、すなわちラジカルヒドロキシル（ＨＯ゜及びアニオンスーパーオキシド（Ｏ２゜ −））を含める。
【００３３】
１）ｉｎ ｔｕｂｏでの「化学」試験
ａ）抗ＤＰＰＨ試験
ＤＰＰＨ（ジフェニルピクリルヒドラジル）は遊離で安定な紫色発色性ラジカルであり、そのロイコ誘導体では遊離ラジカルを捕捉する物質により修飾されている（中和効果、「スカベンジャー効果」とも言う）。
【００３４】
結果を、植物抽出物を含まない対照物質に対するラジカル形態のＤＰＰＨ゜の抑制％として示す。
【００３５】
ｂ）サリチル酸を用いる抗ＨＯ゜試験（Ｆｅｎｔｏｎ反応）
（ＥＤＴＡの存在下でＨ２Ｏ２とＦｅ＋＋により形成される）ＨＯ゜はサリチル酸をヒドロキシル化し、これは赤みがかった化合物を形成する。
【００３６】
４９０ｎｍでの光学濃度はヒドロキシル化サリチル酸含量に相当する。
【００３７】
抗ラジカル物質はＨＯ゜ラジカルと反応し、上記赤色化合物の形成を減ずる。
【００３８】
結果をヒドロキシル化含量の抑制％として示す（２つの試験の平均）。
【００３９】
ｃ）デオキシリボースを用いる抗ＨＯ゜試験（Ｆｅｎｔｏｎ反応）
（ＥＤＴＡの存在下でＨ２Ｏ２とＦｅ＋＋により形成される）ＨＯ゜はデオキシリボースをアルデヒド誘導体に酸化し、このアルデヒド誘導体はチオバルビツール酸により測定される。
【００４０】
チオバルビツール酸はアルデヒドと縮合してピンク色化合物（５３２ｎｍでＤＯ）を形成する。
【００４１】
鉄を複合化する能力を測定するために、Ｆｅｎｔｏｎ反応をＥＤＴＡの非存在下でも実施する。この場合、デオキシリボースはＨＯ゜により酸化される。
【００４２】
結果を抑制％として示す（２つの試験の平均）。
２）「生化学」ｉｎ ｔｕｂｏ試験＝抗アニオンスーパーオキシドＯ２゜ −試験
キサンチンオキシダーゼは、酸化ストレス中に導入され、プリン塩基（アデニン及びグアニン）を尿酸及びＯ２゜ −に変化させる酵素である。
【００４３】
Ｏ２゜ −は自然と（または、ＳＤＳ＝スーパーオキシドジスムターゼにより）Ｈ２Ｏ２及びＯ２に不均化される。
【００４４】
ａ）抗Ｏ２゜ −作用：ルミノールを用いる方法
Ｏ２゜ −はルミノールにより蛍光で認識され得る。
【００４５】
酵素系（ヒポキサンチン／キサンチンオキシダーゼ）はスーパーオキシドアニオンＯ２゜ −を形成し、これはルミノールと反応して中間化合物を形成する。安定化させると、この化合物は光電子増倍管により捕らえられるルミネセンスを発する。
【００４６】
抗ラジカル作用を有する物質はアニオンＯ２゜ −を吸収または分解し、これによりルミネセンスの形成が減ずる。
【００４７】
ｂ）抗Ｏ２゜ −及びＨ２Ｏ２作用：ミクロペルオキシダーゼの存在下でルミノールを用いる方法
酵素系（ヒポキサンチン／キサンチンオキシダーゼ）はスーパーオキシドアニオンＯ２゜ −を形成し、これは次第にＯ２゜ −及びＨ２Ｏ２に不均化される。Ｈ２Ｏ２及びＯ２゜ −はミクロペルオキシダーゼ（Ｍ）と反応してＯ２ １（一重項酸素）を形成し、これはルミノール（Ｌｕｍ）を分解して発光化合物を形成する。該化合物から発せられる光は光電子増倍管により捕らえられる。
【００４８】
抗ラジカル物質はＨ２Ｏ２またはＯ２゜ −もしくはＯ２ １を吸収し、これによりルミネセンスの形成が減ずる。
【００４９】
ｃ）抗Ｏ２゜ −作用：ＮＢＴ（テトラゾール塩）を用いる方法
酵素系（ヒポキサンチン／キサンチンオキシダーゼ）はスーパーオキシドアニオンＯ２゜ −を形成し、これはＮＢＴと形成して赤色組成物のフォルマザンを形成する。
【００５０】
抗ラジカル物質はＯ２゜ −を吸収または分解し、これによりフォルマザンの形成が減ずる。
【００５１】
上記試験ａ）、ｂ）及びｃ）の結果を抑制％として示す（２回の試験の平均）。
【００５２】
上記試験１）及び２）の結果を下表に示す。
【００５３】
【表２】
【００５４】
ＩＩ．ｉｎ ｖｉｔｒｏ生存におけるヒト線維芽細胞に対する抗ＵＶＡ細胞保 護
（Ａ）塩析ＭＤＡの測定（Ｍｏｒｌｉｅｒｅ Ｐ．ら、「培養ヒト線維芽細胞におけるＵＶＡ誘発脂質過酸化(UV-A-induced lipid peroxydation in cultured human fibroblasts)」，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１０８４，３：２６１−２６９（１９９１））。
【００５５】
１）理論
ＵＶＡは真皮に浸透し、そこで特に細胞膜の脂肪過酸化により引き起こされる酸化ストレスを生じさせる。
【００５６】
リポペルオキシドはマロナルジアルデヒドに分断され、これは多くの生物学的分子、例えばタンパク質（酵素阻害）及びヌクレイン塩基（突然変異誘発）と架橋／結合する。
【００５７】
２）手順
線維芽細胞をウシ胎仔血清で規定される培地に注入する。注入から７２時間後（２％血清で規定される培地中の）植物抽出物を添加する。３７℃、ＣＯ２＝５％で４８時間インキュベート後、培地を食塩水溶液と交換し、線維芽細胞にＵＶＡ（１５Ｊ／ｃｍ２）を照射する。照射が済んだら、表面上に浮遊している食塩水溶液中のＭＤＡ（マロナルジアルデビト）の量を測定し、線維芽細胞中のタンパク質の量を測定する。
【００５８】
ＭＤＡはチオバルビツール酸との反応、タンパク質は所謂Ｂｒａｄｆｏｒｄ反応により測定される。
【００５９】
（Ｂ）ＵＶＡからのカタラーゼ酵素作用の保護
１）理論
ＵＶＡは真皮に浸透し、そこで酸化ストレスを生じさせ、カタラーゼを含めた多くの酵素の作用を劣化させる。
【００６０】
カタラーゼは、グルコースまたはヒポキサンチンのような物質の酸化により自然に産生されるＨ２Ｏ２を除去することができる酵素である。
【００６１】
Ｈ２Ｏ２は迅速に除去されなければならない。さもなければ、鉄が存在するときに非常に有毒なヒドロキシルラジカル（ＨＯ゜）が形成されるからである。
【００６２】
２）手順
（Ｌ．Ｈ．Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ及びＬ．Ａ．Ｈ．Ｂｏｒｇ，「小さな組織サンプル中のカタラーゼ活性の分光光度測定法(A spectrophtomeric method for determination of catalase activity in small tissue samples)」，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１７４，３３１−３３６（１９８８）による）。
【００６３】
線維芽細胞をウシ胎仔血清で規定される培地に注入する。注入から７２時間後（０．０１〜０．０５％ｗｔ／ｖｏｌの濃度で２％血清を含有する規定培地中に溶解した）植物抽出物を添加する。３７℃、ＣＯ２＝５％で４８時間インキュベート後、培地を食塩水溶液と交換し、線維芽細胞にＵＶＡ（５Ｊ／ｃｍ２）を照射する。照射が済んだら、活性カタラーゼの量を分光光度法により測定し、その活性を線維芽細胞中で測定したタンパク質の量に相関させる。
【００６４】
植物抽出物の作用を、植物抽出物の非存在下での照射対照物質に対するカタラーゼ活性の増加％として示す（２回の試験の平均）。
【００６５】
ＩＩＩ．ｉｎ ｖｉｔｒｏ生存におけるヒトケラチン細胞に対する抗ＵＶＢ細胞保護効果
１）理論
ＵＶＢは、酵素ホスホリパーゼＡ２の活性化により軽度の炎症（紅斑、水腫）を引き起こす。
【００６６】
この酵素により、細胞形質膜のリン脂質からアラキドン酸が除去される。アラキドン酸は、シクロオキシゲナーゼにより形成されるＥ２プロスタグランジン（＝ＰＧＥ２）を含めたプロスタグランジンの前駆体である。
【００６７】
２）手順
Ａ４３１ケラチン細胞をウシ胎仔血清で規定される培地に注入する。３７℃、ＣＯ２＝５％で７２時間インキュベート後、培地を被験植物抽出物を含む食塩水溶液と交換する。直ちに、ケラチン細胞にＵＶＢ（３０ｍＪ／ｃｍ２）を照射し、３７℃で４８時間インキュベート後、表面上に浮遊している培地中のＰＧＥ２及びＬＤＨの量を測定する。
【００６８】
付着ケラチン細胞の数は（トリプシン処理後に）粒子計数器を用いて測定し、ＰＧＥ２の量はＥＬＩＳＡ試験で測定する。
【００６９】
ＬＤＨ（ラクテートデヒドロゲナーゼ）の量は酵素反応によっても測定する。
ＬＤＨは、細胞障害のマーカーである細胞質酵素である。
【００７０】
植物抽出物の活性を測定し、対照物質で達する値に対する２つのマーカーの抑制率として示す（２つの試験の平均値）。
【００７１】
ＩＶ．抗プロテアーゼ活性
軽度の炎症中またはＵＶＡ線に暴露した線維芽細胞により好中性多形核物質から分離したプロテアーゼにより、真皮の細胞外マトリックスを形作るタンパク質が分解する。
【００７２】
２つのタイプのプロテアーゼをｉｎ ｔｕｂｏでの酵素反応により試験した。
【００７３】
１）抗エラスターゼ試験（Ｂｉｅｔｈ，Ｊ．，「エラスターゼ：構造、機能及び病理学的役割(Elastase: structure, function and pathological role)」，Ｆｒｏｎｔ Ｍａｔｒｉｘ Ｂｉｏｌ．，６：１−８２，Ｋａｒｇｅｒ（１９７８））
ＰＮＮは、エラスチン（セリンプロテアーゼ）、プロテオグリカン及びコラーゲンに対して活性なエラスターゼを分離する。
【００７４】
ｉｎ ｔｕｂｏ試験を、２種類の基質、すなわち合成色素原性基質（ＳＳ試験）及びコンゴーレッドと組合せたエラスチンである天然基質（Ｒｃ試験）を用いて膵臓からのエラスターゼ（血清プロテアーゼ）に対して実施する。
【００７５】
周囲温度で３０分間または３７℃で２時間インキュベートし、それぞれの場合に発色効果を４１０及び５２０ｎｍで測定する。
【００７６】
比較として試験した阻害校正物質はα−１アンチトリプシンである。
【００７７】
２）抗コラゲナーゼｉｎ ｔｕｂｏ試験（Ｖａｎ Ｗａｒｔら，「ヒストリチクス菌コラゲナーゼに対する連続分光アッセイ(A continuous spectrophotometric assay for Clostridium histolyticum collagenase)」，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１３，３５６−３６５（１９８１））
ＰＮＮは、軽度の炎症中、「古い」または照射された線維芽細胞によりコラゲナーゼを分離する。
【００７８】
試験をヒストリチクス菌コラゲナーゼ及び合成色素原性基質ＦＡＬＧＢＡを用いて実施する。
【００７９】
周囲温度で３０分間インキュベートし、光学濃度を３２４ｎｍで測定する。
【００８０】
結果を活性剤を含まない対照物質に対する酵素の阻害％として示す。
【００８１】
比較として試験した阻害対照物質はシステインである。
【００８２】
一連の試験ＩＩ〜ＩＶの結果を下表に要約する。
【００８３】
【表３】
【００８４】
Ｖ．メラニン形成の抑制
１）ｉｎ ｔｕｂｏでのチロシナーゼ阻害
チロシナーゼは、ヒト皮膚のメラニン細胞におけるメラニン合成の主要酵素である。この酵素は、チロシンからメラニンへの変換の最初の２段階、すなわちメラニンのＤＯＰＡ（ジヒドロキシフェニルアラニン）への酸化及びその後のドパクロムへの酸化を触媒する。
【００８５】
ドパクロムは、４７５ｎｍで分光光度法により定量される着色化合物である。
【００８６】
（真菌から得た）ｉｎ ｔｕｂｏで使用した酵素の活性を反応速度により２０秒として測定する。
【００８７】
校正物質はヒドロキノン（Ｃ１５０＝０．０２５％ｗｔ／ｖｏｌ）である。
【００８８】
結果を対照物質に対する阻害％として示す。
【００８９】
２）ｉｎ ｖｉｔｒｏ培養におけるＢ１６メラニン細胞に対するメラニン形成の抑制
メラニン形成の抑制を、被験植物抽出物の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏでインキュベートしたメラニン細胞（Ｂ１６系）より産生したメラニンの量を分光光度法により測定する。
【００９０】
Ｂ１６メラニン細胞を規定成長培地で培養し、３７℃、ＣＯ２＝５％で３日間インキュベートする。植物抽出物を、メラニン形成を活性化する培地中に溶解し、Ｂ１６と３７℃で３日間接触させる。表面上に浮遊している培地中の塩析メラニンの量を４７５ｎｍで分光光度法により定量する。
【００９１】
細胞内メラニンの量は、１Ｎ ＮａＯＨ＋１０％（ｖ／ｖ） ＤＭＳＯ混合物中に溶解させた均質化Ｂ１６細胞において４７５ｎｍで分光光度法により定量する。
【００９２】
均質化Ｂ１６細胞中のタンパク質の量を所謂Ｂｒａｄｆｏｒｄ法により定量する。
【００９３】
比較物質はヒドロキノン及びアルブチンである。
【００９４】
ＶＩ．非酵素的ｉｎ ｔｕｂｏグリケーションを抑制する活性（抗グリケーション活性）
（ＤＥＹＬら，「高齢及び若年副生ラット及びマウスにおけるコラーゲンの高いグリケーション及び色素沈着(Increased glycation and pigmentation of collagen in aged and young parabiotic rats and mice)」，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ａｇｅｉｎｇ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，５５，３９−４７（１９９０）；ＭＯＮＮＩＥＲら，「真性糖尿病におけるヒトコラーゲンの促進老化関連褐変(Accelerated age-related browning of human collagen in diabetes mellitus)」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８１，５８３−５８７（１９８４））。
【００９５】
タンパク質の非酵素的グリケーションはヒト組織の老化の決定的プロセスである。
【００９６】
この反応はＭａｉｌｌａｒｄが発見したが、糖尿病で見られる病理に主に関与する細胞外マトリックス及び塩基膜の網状化を説明する。
【００９７】
更に、シッフ塩基は、非酵素的グリケーションの効果を悪化させる反応型酸素の生成を触媒する。
【００９８】
ｉｎ ｔｕｂｏ試練は、１％（ｐ／ｖ）グルコースの存在下で４５℃で２１日間インキュベートしたＩ型コラーゲンに対して実施する。
【００９９】
シッフ塩基の量を、表面上に浮遊している物質（ｆｓ）及び遠心沈着物（ｆｇｃ）において４３０ｎｍ（３５０ｎｍで励起）で蛍光定量法により測定する。結果を、植物抽出物を含まない対照物質に対する抑制％として示す。
【０１００】
ＶＩＩ．ｉｎ ｖｉｔｒｏ生存におけるヒト脂肪細胞に対する脂肪分解の活性化
脂肪分解は、脂肪細胞に蓄積されたトリグリセリド（ＴＧ）の酵素トリグリセリドリパーゼ（ＴＧＬ）により除去であり、これによりＴＧが遊離脂肪酸及びグリセロールに分解し、前記遊離脂肪酸及びグリセロールは血流から除去される。
【０１０１】
その後、脂肪酸は筋肉細胞により吸着されてエネルギーを生ずる。
【０１０２】
ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験は以下のようにして実施される：
脂肪分解の活性化は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで被験物質の存在下でインキュベートした肥満細胞により塩析したグリセリンの量を分光光度法により測定する。
【０１０３】
肥満細胞は、所謂Ｒｏｄｂｅｌｌ法（Ｒｏｄｂｅｌｌ Ｍ．，「単離脂肪細胞の代謝(Metabolism of isolated fat cells)」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．２３９，Ｎｏ．２，ｐ．３７５−３８０（１９６４）)に従って皮下ヒト組織を酵素消化することにより遊離する。
【０１０４】
植物抽出物を規定培地に溶解し、肥満細胞と３７℃で９０分間接触させる。
【０１０５】
塩析したグリセリンの量は、表面上に浮遊している培地においてＣａｒｐｅｎｅ Ｃ．ら（Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，Ｖｏｌ．１２，Ｎｏ．２，ｐ．２１９−２２４（１９８１））の方法に従って分光光度法により定量する。
【０１０６】
遊離したグリセリンの量を濁度測定法により測定したすべての脂質の量と比較する。結果を植物抽出物を含まない対照物質に対する増加％として示す。
【０１０７】
比較物質はテオフィリン及びイソプレナリンである。
【０１０８】
一連の試験Ｖ〜ＶＩＩの結果を下表に要約する。
【０１０９】
【表４】
上表中、
Ｃ１５０は５０％抑制を与える活性物質の濃度（重量／容量）を指し、
ＣＡ５０は５０％活性化を与える活性物質の濃度（重量／容量）を指し、
用量は調べた活性物質の濃度（重量／容量）を指し、
指数（Ｂ１６メラニン）はタンパク質量／細胞内メラニン量を指し、
Ｍｅｌ．ｅｘｔｒａは抑制％としての（表面上に浮遊している物質中に塩析した）細胞外メラニンの量を指す。
【０１１０】
上表の試験結果を評価する際に、本発明者らは多数の本発明の好ましい実施態様を実施した。
【０１１１】
高い抗エラスターゼ作用及び抗ラジカル型作用を有する化粧品または皮膚用医薬品組成物を得るために、前記組成物中に含まれ、前記特性を調べる活性成分は、有利にはＣｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ及びＰｒｉｖａ ｌａｐｐｕｌａｃｅａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物から構成される。
【０１１２】
高い抗コラゲナーゼ作用及び抗ラジカル型作用を有する化粧品または皮膚用医薬品組成物を得るために、前記組成物中に含まれ、前記特性を調べる活性成分は、有利にはＣｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ及びＰｒｉｖａ ｌａｐｐｕｌａｃｅａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物から構成される。
【０１１３】
高い色素脱失作用及び抗ラジカル型作用を有する化粧品または皮膚用医薬品組成物を得るために、前記組成物中に含まれ、前記特性を調べる活性成分は、有利にはＣｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ、Ｐｒｉｖａ ｌａｐｐｕｌａｃｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ及びＣｏｕｔｏｕｂｅａ ｓｐｉｃａｔａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物から構成される。
【０１１４】
高い抗ＵＶＢ作用及び抗ラジカル型作用を有する化粧品または皮膚用医薬品組成物を得るために、前記組成物中に含まれ、前記特性を調べる活性成分は、有利にはＣｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ及びＰｒｉｖａ ｌａｐｐｕｌａｃｅａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物から構成される。
【０１１５】
高い抗ＵＶＡ作用及び抗ラジカル型作用を有する化粧品または皮膚用医薬品組成物を得るために、前記組成物中に含まれ、前記特性を調べる活性成分は、有利にはＣｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ及びＰｒｉｖａ ｌａｐｐｕｌａｃｅａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物から構成される。
【０１１６】
ＵＶＡからのカタラーゼ保護作用及び抗ラジカル型作用を有する化粧品または皮膚用医薬品組成物を得るために、前記組成物中に含まれ、前記特性を調べる活性成分は、有利にはＳａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ及びＢｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物から構成される。
【０１１７】
強い抗グリケーション作用及び抗ラジカル型作用を有する化粧品または皮膚用医薬品組成物を得るために、前記組成物中に含まれ、前記特性を調べる活性成分は、有利にはＣｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ及びＥｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物から構成される。
【０１１８】
高い色素沈着作用及び抗ラジカル型作用を有する化粧品または皮膚用医薬品組成物を得るために、前記組成物中に含まれ、前記特性を調べる活性成分は、有利にはＧｏｕｐｉａ ｇｌａｂｒａ植物の抽出物から構成される。
【０１１９】
優れたスリミング（脂肪分解）作用及び抗ラジカル型作用を有する化粧品または皮膚用医薬品組成物を得るために、前記組成物中に含まれ、前記特性を調べる活性成分は、有利にはＥｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ植物の抽出物から構成される。
【０１２０】
しかしながら、活性成分がＣｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ及びＰｒｉｖａ ｌａｐｐｕｌａｃｅａから成る群から選択される１つ以上の植物から得た抽出物または抽出物混合物から構成されることが好ましい。
【０１２１】
また、本発明の主題は、皮膚、粘膜及び／または上皮または身体付属物に局所外用用化粧品または皮膚用医薬品組成物に関し、前記組成物は特に抗ラジカル型作用を有する活性成分として、Ｃｌｉｄｅｍｉａ、Ｉｎｇａ、Ｓａｂｉｃｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ、Ｓｉｐａｒｕｎａ、Ｅｐｅｒｕａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ、Ｐｒｉｖａ、Ｃｏｕｔｏｕｂｅａ及びＧｏｕｐｉａ属から成る群に属する植物属の植物の抽出物を単独でまたは少なくとも１つの他の添加成分と共に含む。好ましくは、植物はＣｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ、Ｐｒｉｖａ ｌａｐｐｕｌａｃｅａ、Ｃｏｕｔｏｕｂｅａ ｓｐｉｃａｔａ及びＧｏｕｐｉａ ｇｌａｂｒａから成る群から選択される。
【０１２２】
化粧品または皮膚用医薬品組成物が有していることが必要であり得る抗ラジカル型作用に関連する他の追加特性によれば、上記した群から選択され得る植物には上記試験結果を示す表に示した各植物の作用に従って各種代表物が含まれる。
【０１２３】
すなわち、本発明の第１実施態様では、化粧品または皮膚用医薬品組成物は、Ｃｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ及びＢｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物からなる抗ＵＶＡ、抗ＵＶＢ及び抗コラゲナーゼ作用を有する活性成分を含み得る。
【０１２４】
本発明の第２実施態様では、化粧品または皮膚用医薬品組成物は、Ｃｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ及びＢｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物からなる抗ＵＶＡ、抗ＵＶＢ、抗コラゲナーゼ及び抗エラスターゼ作用を有する活性成分を含み得る。
【０１２５】
本発明の第３実施態様では、化粧品または皮膚用医薬品組成物は、Ｃｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ及びＥｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物からなる抗ＵＶＡ、抗ＵＶＢ、抗コラゲナーゼ及び抗グリケーション作用を有する活性成分を含み得る。
【０１２６】
本発明の第４実施態様では、化粧品または皮膚用医薬品組成物は、Ｃｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ及びＢｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物からなる抗ＵＶＡ、抗ＵＶＢ、抗コラゲナーゼ、抗エラスターゼ及び色素脱失作用を有する活性成分を含み得る。
【０１２７】
本発明の第５実施態様では、化粧品または皮膚用医薬品組成物は、Ｇｏｕｐｉａ ｇｌａｂｒａ植物の抽出物からなる色素沈着作用を有する活性成分を含み得る。
【０１２８】
本発明の第６実施態様では、化粧品または皮膚用医薬品組成物は、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ植物の抽出物からなるスリミング作用を有する活性成分を含み得る。
【０１２９】
本発明の化粧品組成物は、有利には活性成分として０．００１〜２０重量％、好ましくは０．１〜３重量％の上記植物から上記したようにして得られる抽出物または抽出物混合物を単独でまたは他の活性成分と共に含む。
【０１３０】
活性成分を構成する抽出物または抽出物混合物は、化粧品上可能なガレヌス形態、特に水中油型エマルション、油中水型エマルション、フェースローション、化粧品乳液、ゲル、ヒドロゲル、クリーム、ポマード、セッケン、ペレット、スプレー、ヘアローション及びシャンプーから成る群から選択されるガレヌス形態で使用される。
【０１３１】
抽出物または抽出物混合物はまた、１つ以上の化粧品用ベクター、特にリポソーム、マクロカプセル、マイクロカプセル、ナノカプセル、マクロ粒子、ミクロ粒子及びナノ粒子から選択される１つ以上のベクターに添加され得る。
【０１３２】
上記植物抽出物を含む各種製品または化粧品をここに例示するが、本発明の実際の使用はこれらの例に限定されない。
【０１３３】
実施例１
皮膚脱色クリームの形態の化粧品は、例えば以下の組成を有し得る。
【０１３４】
【表５】
【０１３５】
このクリームの製造方法は、Ａ部の成分を７５℃で撹拌しながら融解し、Ｂ部を７５℃で作成し、次いでＢ部をＡ部にタービン攪拌機で撹拌しながら注入し、遊星型攪拌機で撹拌しながら冷却し、その後Ｃ部に添加することからなる。
【０１３６】
実施例２
皮膚色素斑を治療するための手に対する抗斑点エマルションの形態の化粧品は、例えば以下の組成を有し得る。
【０１３７】
本発明によれば、前記製品は複数の作用、特に抗ラジカル、抗エラスターゼ及び抗コラゲナーゼ作用を有する。
【０１３８】
【表６】
【０１３９】
このエマルションの製造方法は、Ａ部及びＢ部をそれぞれ７５℃で作成し、Ａ部をＢ部に７５℃でタービン攪拌機で撹拌しながら添加し、５０℃に冷却し、Ｃ部を添加し、最後に最終混合物を周囲温度に冷却することからなる。
【０１４０】
実施例３
しわ取りデイクリーム及び複数の作用を有する老化防止クリームの形態の化粧品は、例えば以下の組成を有し得る。
【０１４１】
【表７】
【０１４２】
このクリームの製造方法は、Ａ部及びＢ部をそれぞれ８０℃で撹拌しながら作成し、Ａ部をＢ部にタービン攪拌機で撹拌しながら添加し、混合物を４５℃に冷却し、Ｃ部を添加し、最後に最終混合物を周囲温度に戻すことからなる。
【０１４３】
本発明は、勿論本明細書に記載、例示されている実施態様に限定されない。本発明の範囲を逸脱せずに変更、特に各種成分の組成の変更または工業的均等物による置換による変更は可能である。
本発明は化粧品分野、特に皮膚用化粧品における植物抽出物の使用に関する。その主題は、皮膚、粘膜及び／または上皮または身体付属器官（毛髪、爪等）用化粧品または皮膚用医薬品を製造するための仏ガイアナ産の特定医薬ハーブの使用にある。
【０００２】
仏ガイアナのクレオール人及びパリクール人は伝統医薬品中に多数の在来植物を使用している。これらの植物及びその治療用途は、特にＧｒｅｎａｎｄ Ｐ．、Ｍｏｒｅｔｔｉ Ｃ．及びＪａｃｑｕｅｍｉｎ Ｈ．の表題“Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｅｓ ｔｒａｄｉｔｉｏｎｅｌｌｅｓ ｅｎ Ｇｕｙａｎｅ：Ｃｒｅｏｌｅｓ．Ｐａｌｉｋｕｒ，Ｗａｙａｐｉ”の論文（Ｏｒｓｔｏｍ（１９８７年）発行）に記載されている。
【０００３】
しかしながら、本発明者らは、上記種類の特定植物の抽出物は非常に高い皮膚寛容と共に各種生物学的及び生物化学的作用を有し、化粧品及び特に皮膚用化粧品で使用するための組成物中に直接使用することができることを知見した。
【０００４】
従って、本発明者らが選択した植物は抽出物を得ることができ、予期せぬことに、また驚くべきことに、これらの植物はすべて強い抗ラジカル型作用を有することに加えて、チロシンに対する抑制（色素脱失）作用、チロシナーゼ活性剤に対する抑制（色素沈着）作用、抗ＵＶＡ及び抗ＵＶＢ作用、ＵＶＡからのカタラーゼ保護作用、並びに抗エラスターゼ、抗コラゲナーゼ、抗グリケーション及び／または脂肪分解作用（スリミングのために）をも有する。
【０００５】
従って、本発明の主題は、皮膚、粘膜及び／または上皮または身体付属器官に対して局所外用するための化粧品または皮膚用医薬品の製造においてＣｌｉｄｅｍｉａ、Ｉｎｇａ、Ｓａｂｉｃｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ、Ｓｉｐａｒｕｎａ、Ｅｐｅｒｕａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ、Ｐｒｉｖａ、Ｃｏｕｔｏｕｂｅａ及びＧｏｕｐｉａから成る群に属する植物属の植物の少なくとも１つの抽出物を活性成分として、特に抗ラジカル作用を有する活性成分として使用することにある。
【０００６】
有利には、上記属から下記の特定種が選択され得る：
Ｃｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ（アメリカクサノボタン）、Ｃｌｉｄｅｍｉａ ｄｅｎｔａｔａ；
Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｉｎｇａ ｐｅｚｉｚｉｆｅｒａ、Ｉｎｇａ ａｌａｔａ、Ｉｎｇａ ａｌｂａ、Ｉｎｇａ ｃａｐｉｔａｔａ、Ｉｎｇａ ｍｅｉｓｓｎｅｒｉａｎａ；
Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ｓａｂｉｃｅａ ｇｌａｂｒｅｓｃｅｎｓ、Ｓａｂｉｃｅｒａ ｖｅｌｕｔｉｎａ、Ｓａｂｉｃｅａ ｖｉｌｌｏｓａ、Ｓａｂｉｃｅａ ｈｉｒｓｕｔａ；
Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ（ワラバ）；
Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｃｒａｓｓｉｆｏｌｉａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｃｈｒｙｓｏｐｈｙｌｌａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｃｏｒｉａｃｅａ；
Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｍｕｒｕｍｕｒｕ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｃｈａｍｂｉｒａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｊａｕａｒｉ、Ａｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｍａｃｒｏｃａｌｙｘ；
Ｐｒｉｖａ ｌａｐｐｕｌａｃｅａ；
Ｃｏｕｔｏｕｂｅａ ｓｐｉｃａｔａ、Ｃｏｕｔｏｕｂｅａ ｒａｍｏｓａ； Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｅｍａｒｇｉｎａｔａ；
Ｇｏｕｐｉａ ｇｌａｂｒａ（ゴウピ）。
【０００７】
しかしながら、特に抗ラジカル型作用に関して定性的及び定量的に最適の作用を有する抽出物を与える本発明の好ましい実施態様において、活性成分はＣｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ、Ｐｒｉｖａ ｌａｐｐｕｌａｃｅａ、Ｃｏｕｔｏｕｂｅａ ｓｐｉｃａｔａ及びＧｏｕｐｉａ ｇｌａｂｒａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物から構成される。
【０００８】
上記した各種作用により、抽出物を主に皮膚の老化、皮膚の高い色素沈着、色素斑、皮膚弾性の低下、しわ、過敏状態及び炎症（過敏性皮膚の治療）、環境汚染及び／または日光により引き起こされる刺激の抑制、及び／またはスリミングを意図する製品中に単独で、相互混合物として、または他の活性化合物との混合物として使用することが有利である。
【０００９】
上記抽出物を作成及び得るために使用される植物の部分は根、皮層（植物の根、柄及び／または幹）、葉、葉柄、果実、子実及び／または花である。
【００１０】
適当な植物の部分を集め、乾燥したら、抽出する。使用される溶媒は、有利には水、アルコール類、ケトン類、エステル類、エーテル類、塩素系溶媒類、多価アルコール類、及び前記混和性溶媒を少なくとも２つ含む混合物から選択され得る。
【００１１】
本発明の特定実施態様において、抽出物は照射波、例えばマイクロ波または超音波を利用する抽出方法により得られる。
【００１２】
或いは、本発明の抽出物は超臨界ＣＯ２単独または二次溶媒との混合物での抽出により得られ得る。
【００１３】
本発明の特定実施態様において、植物抽出物は上記抽出方法の１つにより得た１つ以上の植物抽出物を特にクロマトグラフィーにより精製した１つ以上の分画からなる。
【００１４】
本発明の範囲を限定することなく本発明を例示するために、上記植物抽出物を得るために実施され得る各種方法を記載する。
【００１５】
下記実施例において、使用した植物の部分は例として示したにすぎない。本発明に含まれる抽出物は上記植物の入手可能な部分から得ることができる。
【００１６】
実施例１
Ｅｐｕｒｅａ ｆａｌｃａｔａ幹の皮層を粉砕後、ブレードタイプのパルプ製造機により細かく潰す。
【００１７】
蒸留水（３Ｌ）を攪拌機を備えた反応器に投入した後、
パルプ化皮層（３００ｇ）を反応器に添加する；
沸騰させつつ、撹拌しながら１時間抽出する；
周囲温度に冷却する；
遠心または濾過により不溶性物質を除去する；
表面上に浮遊している物質を約０．４５μｍの多孔度を介して濾過する；
濾液を集める；
残渣を同一の操作条件で蒸留水（２Ｌ）を用いて抽出し、上記のように操作する；
得られた水性抽出物に対する乾燥物質の含量を測定した後、抽出乾燥物質１／３に対して添加物質２／３となるようにマルトデキストリンタイプの物質を添加する；
得られた溶液を噴霧または当業界で公知の他の方法（脱水、凍結乾燥、乾燥チャンバでの乾燥）により脱水する；
の操作を逐次実施する。
【００１８】
この方法からの乾燥抽出物の総収率は、皮層に対して１５重量％である。
【００１９】
実施例２
Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ幹の皮層を粉砕後、ブレードタイプのパルプ製造機により細かく潰す。
【００２０】
５０％エタノール（３Ｌ）を攪拌機を備えた反応器に投入した後、
パルプ化皮層（３００ｇ）を反応器に添加する；
（還流）加熱しつつ、撹拌しながら１時間抽出する；
周囲温度に冷却する；
濾過により不溶性物質を除去する；
表面上に浮遊している物質を約０．４５μｍの多孔度を介して濾過する；
濾液を集める；
残渣を同一条件で５０％エタノール（１．５Ｌ）を用いて抽出後、上記のように処理する；
両濾液のアルコール相を真空下で蒸発させる；
遠心し、乾燥物質の含量を測定後、所要により得られた水性相に実施例１と同一比率で添加物質を添加する；
所要により、得られた溶液を慣用方法により脱水する；
の操作を逐次実施する。
【００２１】
この方法からの乾燥抽出物の総収率は、皮層に対して１３．８重量％である。
【００２２】
実施例３
Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ根の皮層を粉砕後、ブレードタイプのパルプ製造機により細かく潰す。
【００２３】
８０％メタノール（３Ｌ）を攪拌機を備えた反応器に投入した後、
パルプ化皮層（３００ｇ）を反応器に添加する；
（還流）加熱しつつ、撹拌しながら１時間抽出する；
周囲温度に冷却する；
不溶性物質を濾別する；
表面上に浮遊している物質を約０．４５μｍの多孔度を介して濾過する；
濾液を集める；
残渣を同一の操作条件で８０％メタノール（１．５Ｌ）を用いて抽出後、上記のように処理する；
両濾液のメタノール相を真空下で蒸発させる；
遠心し、乾燥物質の含量を測定後、得られた水性相に実施例１と同一比率で添加物質を添加する；
所要により、得られた溶液を慣用方法により脱水する；
の操作を逐次実施する。
【００２４】
この方法からの乾燥抽出物の総収率は、皮層に対して１７．４重量％である。
【００２５】
実施例４
Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅの根を粉砕後、最後にパルプ化する。
【００２６】
無水エタノール（３Ｌ）を攪拌機を備えた反応器に投入した後、
粉砕したＡｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅの根（３００ｇ）を反応器に添加する；
（還流）加熱しつつ、撹拌しながら１時間抽出する；
周囲温度に冷却する；
不溶性物質を濾別する；
表面上に浮遊している物質を約０．４５μｍの多孔度を介して濾過する；
抽出物１に相当する濾液を集める；
残渣を同一の操作条件でエタノール（３Ｌ）で抽出後、上記と同様に処理して抽出物２を得る；
両濾液のエタノール相を真空下４０℃で蒸発させる；
抽出物を換気付き乾燥オーブンにおいて４０〜５０℃で乾燥して痕跡量の溶媒を除去する；
の操作を逐次実施する。
【００２７】
こうして、７．１５ｇのＥ１抽出物及び１．４７ｇのＥ２抽出物を得、これらを最後に混合した。抽出物の総収率は、根に対して２．８７重量％である。
【００２８】
本発明者らが実施した植物及び抽出物のすべてを下表にリストする。
【００２９】
【表１】
化粧品として有用な製品に直接使用することができる植物抽出物の生物学的及び生化学的特性及び作用は当業者に公知の試験により測定することが可能であった。試験の原理を簡単に下記し、結果をそれぞれの表に示す。
【００３１】
Ｉ． 抗ラジカル型作用
酸化抗ストレス特性をｉｎ ｔｕｂｏ試験及びｉｎ ｖｉｔｒｏ試験で評価した。
【００３２】
ｉｎ ｔｕｂｏ試験のグループには、酸素の初期ラジカル形態及びｉｎ ｖｉｖｏで導入した反応形態、すなわちラジカルヒドロキシル（ＨＯ゜及びアニオンスーパーオキシド（Ｏ２゜ −））を含める。
【００３３】
１）ｉｎ ｔｕｂｏでの「化学」試験
ａ）抗ＤＰＰＨ試験
ＤＰＰＨ（ジフェニルピクリルヒドラジル）は遊離で安定な紫色発色性ラジカルであり、そのロイコ誘導体では遊離ラジカルを捕捉する物質により修飾されている（中和効果、「スカベンジャー効果」とも言う）。
【００３４】
結果を、植物抽出物を含まない対照物質に対するラジカル形態のＤＰＰＨ゜の抑制％として示す。
【００３５】
ｂ）サリチル酸を用いる抗ＨＯ゜試験（Ｆｅｎｔｏｎ反応）
（ＥＤＴＡの存在下でＨ２Ｏ２とＦｅ＋＋により形成される）ＨＯ゜はサリチル酸をヒドロキシル化し、これは赤みがかった化合物を形成する。
【００３６】
４９０ｎｍでの光学濃度はヒドロキシル化サリチル酸含量に相当する。
【００３７】
抗ラジカル物質はＨＯ゜ラジカルと反応し、上記赤色化合物の形成を減ずる。
【００３８】
結果をヒドロキシル化含量の抑制％として示す（２つの試験の平均）。
【００３９】
ｃ）デオキシリボースを用いる抗ＨＯ゜試験（Ｆｅｎｔｏｎ反応）
（ＥＤＴＡの存在下でＨ２Ｏ２とＦｅ＋＋により形成される）ＨＯ゜はデオキシリボースをアルデヒド誘導体に酸化し、このアルデヒド誘導体はチオバルビツール酸により測定される。
【００４０】
チオバルビツール酸はアルデヒドと縮合してピンク色化合物（５３２ｎｍでＤＯ）を形成する。
【００４１】
鉄を複合化する能力を測定するために、Ｆｅｎｔｏｎ反応をＥＤＴＡの非存在下でも実施する。この場合、デオキシリボースはＨＯ゜により酸化される。
【００４２】
結果を抑制％として示す（２つの試験の平均）。
２）「生化学」ｉｎ ｔｕｂｏ試験＝抗アニオンスーパーオキシドＯ２゜ −試験
キサンチンオキシダーゼは、酸化ストレス中に導入され、プリン塩基（アデニン及びグアニン）を尿酸及びＯ２゜ −に変化させる酵素である。
【００４３】
Ｏ２゜ −は自然と（または、ＳＤＳ＝スーパーオキシドジスムターゼにより）Ｈ２Ｏ２及びＯ２に不均化される。
【００４４】
ａ）抗Ｏ２゜ −作用：ルミノールを用いる方法
Ｏ２゜ −はルミノールにより蛍光で認識され得る。
【００４５】
酵素系（ヒポキサンチン／キサンチンオキシダーゼ）はスーパーオキシドアニオンＯ２゜ −を形成し、これはルミノールと反応して中間化合物を形成する。安定化させると、この化合物は光電子増倍管により捕らえられるルミネセンスを発する。
【００４６】
抗ラジカル作用を有する物質はアニオンＯ２゜ −を吸収または分解し、これによりルミネセンスの形成が減ずる。
【００４７】
ｂ）抗Ｏ２゜ −及びＨ２Ｏ２作用：ミクロペルオキシダーゼの存在下でルミノールを用いる方法
酵素系（ヒポキサンチン／キサンチンオキシダーゼ）はスーパーオキシドアニオンＯ２゜ −を形成し、これは次第にＯ２゜ −及びＨ２Ｏ２に不均化される。Ｈ２Ｏ２及びＯ２゜ −はミクロペルオキシダーゼ（Ｍ）と反応してＯ２ １（一重項酸素）を形成し、これはルミノール（Ｌｕｍ）を分解して発光化合物を形成する。該化合物から発せられる光は光電子増倍管により捕らえられる。
【００４８】
抗ラジカル物質はＨ２Ｏ２またはＯ２゜ −もしくはＯ２ １を吸収し、これによりルミネセンスの形成が減ずる。
【００４９】
ｃ）抗Ｏ２゜ −作用：ＮＢＴ（テトラゾール塩）を用いる方法
酵素系（ヒポキサンチン／キサンチンオキシダーゼ）はスーパーオキシドアニオンＯ２゜ −を形成し、これはＮＢＴと形成して赤色組成物のフォルマザンを形成する。
【００５０】
抗ラジカル物質はＯ２゜ −を吸収または分解し、これによりフォルマザンの形成が減ずる。
【００５１】
上記試験ａ）、ｂ）及びｃ）の結果を抑制％として示す（２回の試験の平均）。
【００５２】
上記試験１）及び２）の結果を下表に示す。
【００５３】
【表２】
ＩＩ．ｉｎ ｖｉｔｒｏ生存におけるヒト線維芽細胞に対する抗ＵＶＡ細胞保 護
（Ａ）塩析ＭＤＡの測定（Ｍｏｒｌｉｅｒｅ Ｐ．ら、「培養ヒト線維芽細胞におけるＵＶＡ誘発脂質過酸化(UV-A-induced lipid peroxydation in cultured human fibroblasts)」，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１０８４，３：２６１−２６９（１９９１））。
【００５５】
１）理論
ＵＶＡは真皮に浸透し、そこで特に細胞膜の脂肪過酸化により引き起こされる酸化ストレスを生じさせる。
【００５６】
リポペルオキシドはマロナルジアルデヒドに分断され、これは多くの生物学的分子、例えばタンパク質（酵素阻害）及びヌクレイン塩基（突然変異誘発）と架橋／結合する。
【００５７】
２）手順
線維芽細胞をウシ胎仔血清で規定される培地に注入する。注入から７２時間後（２％血清で規定される培地中の）植物抽出物を添加する。３７℃、ＣＯ２＝５％で４８時間インキュベート後、培地を食塩水溶液と交換し、線維芽細胞にＵＶＡ（１５Ｊ／ｃｍ２）を照射する。照射が済んだら、表面上に浮遊している食塩水溶液中のＭＤＡ（マロナルジアルデビト）の量を測定し、線維芽細胞中のタンパク質の量を測定する。
【００５８】
ＭＤＡはチオバルビツール酸との反応、タンパク質は所謂Ｂｒａｄｆｏｒｄ反応により測定される。
【００５９】
（Ｂ）ＵＶＡからのカタラーゼ酵素作用の保護
１）理論
ＵＶＡは真皮に浸透し、そこで酸化ストレスを生じさせ、カタラーゼを含めた多くの酵素の作用を劣化させる。
【００６０】
カタラーゼは、グルコースまたはヒポキサンチンのような物質の酸化により自然に産生されるＨ２Ｏ２を除去することができる酵素である。
【００６１】
Ｈ２Ｏ２は迅速に除去されなければならない。さもなければ、鉄が存在するときに非常に有毒なヒドロキシルラジカル（ＨＯ゜）が形成されるからである。
【００６２】
２）手順
（Ｌ．Ｈ．Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ及びＬ．Ａ．Ｈ．Ｂｏｒｇ，「小さな組織サンプル中のカタラーゼ活性の分光光度測定法(A spectrophtomeric method for determination of catalase activity in small tissue samples)」，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１７４，３３１−３３６（１９８８）による）。
【００６３】
線維芽細胞をウシ胎仔血清で規定される培地に注入する。注入から７２時間後（０．０１〜０．０５％ｗｔ／ｖｏｌの濃度で２％血清を含有する規定培地中に溶解した）植物抽出物を添加する。３７℃、ＣＯ２＝５％で４８時間インキュベート後、培地を食塩水溶液と交換し、線維芽細胞にＵＶＡ（５Ｊ／ｃｍ２）を照射する。照射が済んだら、活性カタラーゼの量を分光光度法により測定し、その活性を線維芽細胞中で測定したタンパク質の量に相関させる。
【００６４】
植物抽出物の作用を、植物抽出物の非存在下での照射対照物質に対するカタラーゼ活性の増加％として示す（２回の試験の平均）。
【００６５】
ＩＩＩ．ｉｎ ｖｉｔｒｏ生存におけるヒトケラチン細胞に対する抗ＵＶＢ細胞保護効果
１）理論
ＵＶＢは、酵素ホスホリパーゼＡ２の活性化により軽度の炎症（紅斑、水腫）を引き起こす。
【００６６】
この酵素により、細胞形質膜のリン脂質からアラキドン酸が除去される。アラキドン酸は、シクロオキシゲナーゼにより形成されるＥ２プロスタグランジン（＝ＰＧＥ２）を含めたプロスタグランジンの前駆体である。
【００６７】
２）手順
Ａ４３１ケラチン細胞をウシ胎仔血清で規定される培地に注入する。３７℃、ＣＯ２＝５％で７２時間インキュベート後、培地を被験植物抽出物を含む食塩水溶液と交換する。直ちに、ケラチン細胞にＵＶＢ（３０ｍＪ／ｃｍ２）を照射し、３７℃で４８時間インキュベート後、表面上に浮遊している培地中のＰＧＥ２及びＬＤＨの量を測定する。
【００６８】
付着ケラチン細胞の数は（トリプシン処理後に）粒子計数器を用いて測定し、ＰＧＥ２の量はＥＬＩＳＡ試験で測定する。
【００６９】
ＬＤＨ（ラクテートデヒドロゲナーゼ）の量は酵素反応によっても測定する。
ＬＤＨは、細胞障害のマーカーである細胞質酵素である。
【００７０】
植物抽出物の活性を測定し、対照物質で達する値に対する２つのマーカーの抑制率として示す（２つの試験の平均値）。
【００７１】
ＩＶ．抗プロテアーゼ活性
軽度の炎症中またはＵＶＡ線に暴露した線維芽細胞により好中性多形核物質から分離したプロテアーゼにより、真皮の細胞外マトリックスを形作るタンパク質が分解する。
【００７２】
２つのタイプのプロテアーゼをｉｎ ｔｕｂｏでの酵素反応により試験した。
【００７３】
１）抗エラスターゼ試験（Ｂｉｅｔｈ，Ｊ．，「エラスターゼ：構造、機能及び病理学的役割(Elastase: structure, function and pathological role)」，Ｆｒｏｎｔ Ｍａｔｒｉｘ Ｂｉｏｌ．，６：１−８２，Ｋａｒｇｅｒ（１９７８））
ＰＮＮは、エラスチン（セリンプロテアーゼ）、プロテオグリカン及びコラーゲンに対して活性なエラスターゼを分離する。
【００７４】
ｉｎ ｔｕｂｏ試験を、２種類の基質、すなわち合成色素原性基質（ＳＳ試験）及びコンゴーレッドと組合せたエラスチンである天然基質（Ｒｃ試験）を用いて膵臓からのエラスターゼ（血清プロテアーゼ）に対して実施する。
【００７５】
周囲温度で３０分間または３７℃で２時間インキュベートし、それぞれの場合に発色効果を４１０及び５２０ｎｍで測定する。
【００７６】
比較として試験した阻害校正物質はα−１アンチトリプシンである。
【００７７】
２）抗コラゲナーゼｉｎ ｔｕｂｏ試験（Ｖａｎ Ｗａｒｔら，「ヒストリチクス菌コラゲナーゼに対する連続分光アッセイ(A continuous spectrophotometric assay for Clostridium histolyticum collagenase)」，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１３，３５６−３６５（１９８１））
ＰＮＮは、軽度の炎症中、「古い」または照射された線維芽細胞によりコラゲナーゼを分離する。
【００７８】
試験をヒストリチクス菌コラゲナーゼ及び合成色素原性基質ＦＡＬＧＢＡを用いて実施する。
【００７９】
周囲温度で３０分間インキュベートし、光学濃度を３２４ｎｍで測定する。
【００８０】
結果を活性剤を含まない対照物質に対する酵素の阻害％として示す。
【００８１】
比較として試験した阻害対照物質はシステインである。
【００８２】
一連の試験ＩＩ〜ＩＶの結果を下表に要約する。
【００８３】
【表３】
Ｖ．メラニン形成の抑制
１）ｉｎ ｔｕｂｏでのチロシナーゼ阻害
チロシナーゼは、ヒト皮膚のメラニン細胞におけるメラニン合成の主要酵素である。この酵素は、チロシンからメラニンへの変換の最初の２段階、すなわちメラニンのＤＯＰＡ（ジヒドロキシフェニルアラニン）への酸化及びその後のドパクロムへの酸化を触媒する。
【００８５】
ドパクロムは、４７５ｎｍで分光光度法により定量される着色化合物である。
【００８６】
（真菌から得た）ｉｎ ｔｕｂｏで使用した酵素の活性を反応速度により２０秒として測定する。
【００８７】
校正物質はヒドロキノン（Ｃ１５０＝０．０２５％ｗｔ／ｖｏｌ）である。
【００８８】
結果を対照物質に対する阻害％として示す。
【００８９】
２）ｉｎ ｖｉｔｒｏ培養におけるＢ１６メラニン細胞に対するメラニン形成の抑制
メラニン形成の抑制を、被験植物抽出物の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏでインキュベートしたメラニン細胞（Ｂ１６系）より産生したメラニンの量を分光光度法により測定する。
【００９０】
Ｂ１６メラニン細胞を規定成長培地で培養し、３７℃、ＣＯ２＝５％で３日間インキュベートする。植物抽出物を、メラニン形成を活性化する培地中に溶解し、Ｂ１６と３７℃で３日間接触させる。表面上に浮遊している培地中の塩析メラニンの量を４７５ｎｍで分光光度法により定量する。
【００９１】
細胞内メラニンの量は、１Ｎ ＮａＯＨ＋１０％（ｖ／ｖ） ＤＭＳＯ混合物中に溶解させた均質化Ｂ１６細胞において４７５ｎｍで分光光度法により定量する。
【００９２】
均質化Ｂ１６細胞中のタンパク質の量を所謂Ｂｒａｄｆｏｒｄ法により定量する。
【００９３】
比較物質はヒドロキノン及びアルブチンである。
【００９４】
ＶＩ．非酵素的ｉｎ ｔｕｂｏグリケーションを抑制する活性（抗グリケーション活性）
（ＤＥＹＬら，「高齢及び若年副生ラット及びマウスにおけるコラーゲンの高いグリケーション及び色素沈着(Increased glycation and pigmentation of collagen in aged and young parabiotic rats and mice)」，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ａｇｅｉｎｇ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，５５，３９−４７（１９９０）；ＭＯＮＮＩＥＲら，「真性糖尿病におけるヒトコラーゲンの促進老化関連褐変(Accelerated age-related browning of human collagen in diabetes mellitus)」，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８１，５８３−５８７（１９８４））。
【００９５】
タンパク質の非酵素的グリケーションはヒト組織の老化の決定的プロセスである。
【００９６】
この反応はＭａｉｌｌａｒｄが発見したが、糖尿病で見られる病理に主に関与する細胞外マトリックス及び塩基膜の網状化を説明する。
【００９７】
更に、シッフ塩基は、非酵素的グリケーションの効果を悪化させる反応型酸素の生成を触媒する。
【００９８】
ｉｎ ｔｕｂｏ試練は、１％（ｐ／ｖ）グルコースの存在下で４５℃で２１日間インキュベートしたＩ型コラーゲンに対して実施する。
【００９９】
シッフ塩基の量を、表面上に浮遊している物質（ｆｓ）及び遠心沈着物（ｆｇｃ）において４３０ｎｍ（３５０ｎｍで励起）で蛍光定量法により測定する。結果を、植物抽出物を含まない対照物質に対する抑制％として示す。
【０１００】
ＶＩＩ．ｉｎ ｖｉｔｒｏ生存におけるヒト脂肪細胞に対する脂肪分解の活性化
脂肪分解は、脂肪細胞に蓄積されたトリグリセリド（ＴＧ）の酵素トリグリセリドリパーゼ（ＴＧＬ）により除去であり、これによりＴＧが遊離脂肪酸及びグリセロールに分解し、前記遊離脂肪酸及びグリセロールは血流から除去される。
【０１０１】
その後、脂肪酸は筋肉細胞により吸着されてエネルギーを生ずる。
【０１０２】
ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験は以下のようにして実施される：
脂肪分解の活性化は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで被験物質の存在下でインキュベートした肥満細胞により塩析したグリセリンの量を分光光度法により測定する。
【０１０３】
肥満細胞は、所謂Ｒｏｄｂｅｌｌ法（Ｒｏｄｂｅｌｌ Ｍ．，「単離脂肪細胞の代謝(Metabolism of isolated fat cells)」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．２３９，Ｎｏ．２，ｐ．３７５−３８０（１９６４）)に従って皮下ヒト組織を酵素消化することにより遊離する。
【０１０４】
植物抽出物を規定培地に溶解し、肥満細胞と３７℃で９０分間接触させる。
【０１０５】
塩析したグリセリンの量は、表面上に浮遊している培地においてＣａｒｐｅｎｅ Ｃ．ら（Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，Ｖｏｌ．１２，Ｎｏ．２，ｐ．２１９−２２４（１９８１））の方法に従って分光光度法により定量する。
【０１０６】
遊離したグリセリンの量を濁度測定法により測定したすべての脂質の量と比較する。結果を植物抽出物を含まない対照物質に対する増加％として示す。
【０１０７】
比較物質はテオフィリン及びイソプレナリンである。
【０１０８】
一連の試験Ｖ〜ＶＩＩの結果を下表に要約する。
【０１０９】
【表４】
Ｃ１５０は５０％抑制を与える活性物質の濃度（重量／容量）を指し、
ＣＡ５０は５０％活性化を与える活性物質の濃度（重量／容量）を指し、
用量は調べた活性物質の濃度（重量／容量）を指し、
指数（Ｂ１６メラニン）はタンパク質量／細胞内メラニン量を指し、
Ｍｅｌ．ｅｘｔｒａは抑制％としての（表面上に浮遊している物質中に塩析した）細胞外メラニンの量を指す。
【０１１０】
上表の試験結果を評価する際に、本発明者らは多数の本発明の好ましい実施態様を実施した。
【０１１１】
高い抗エラスターゼ作用及び抗ラジカル型作用を有する化粧品または皮膚用医薬品組成物を得るために、前記組成物中に含まれ、前記特性を調べる活性成分は、有利にはＣｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ及びＰｒｉｖａ ｌａｐｐｕｌａｃｅａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物から構成される。
【０１１２】
高い抗コラゲナーゼ作用及び抗ラジカル型作用を有する化粧品または皮膚用医薬品組成物を得るために、前記組成物中に含まれ、前記特性を調べる活性成分は、有利にはＣｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ及びＰｒｉｖａ ｌａｐｐｕｌａｃｅａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物から構成される。
【０１１３】
高い色素脱失作用及び抗ラジカル型作用を有する化粧品または皮膚用医薬品組成物を得るために、前記組成物中に含まれ、前記特性を調べる活性成分は、有利にはＣｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ、Ｐｒｉｖａ ｌａｐｐｕｌａｃｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ及びＣｏｕｔｏｕｂｅａ ｓｐｉｃａｔａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物から構成される。
【０１１４】
高い抗ＵＶＢ作用及び抗ラジカル型作用を有する化粧品または皮膚用医薬品組成物を得るために、前記組成物中に含まれ、前記特性を調べる活性成分は、有利にはＣｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ及びＰｒｉｖａ ｌａｐｐｕｌａｃｅａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物から構成される。
【０１１５】
高い抗ＵＶＡ作用及び抗ラジカル型作用を有する化粧品または皮膚用医薬品組成物を得るために、前記組成物中に含まれ、前記特性を調べる活性成分は、有利にはＣｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ及びＰｒｉｖａ ｌａｐｐｕｌａｃｅａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物から構成される。
【０１１６】
ＵＶＡからのカタラーゼ保護作用及び抗ラジカル型作用を有する化粧品または皮膚用医薬品組成物を得るために、前記組成物中に含まれ、前記特性を調べる活性成分は、有利にはＳａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ及びＢｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物から構成される。
【０１１７】
強い抗グリケーション作用及び抗ラジカル型作用を有する化粧品または皮膚用医薬品組成物を得るために、前記組成物中に含まれ、前記特性を調べる活性成分は、有利にはＣｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ及びＥｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物から構成される。
【０１１８】
高い色素沈着作用及び抗ラジカル型作用を有する化粧品または皮膚用医薬品組成物を得るために、前記組成物中に含まれ、前記特性を調べる活性成分は、有利にはＧｏｕｐｉａ ｇｌａｂｒａ植物の抽出物から構成される。
【０１１９】
優れたスリミング（脂肪分解）作用及び抗ラジカル型作用を有する化粧品または皮膚用医薬品組成物を得るために、前記組成物中に含まれ、前記特性を調べる活性成分は、有利にはＥｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ植物の抽出物から構成される。
【０１２０】
しかしながら、活性成分がＣｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ及びＰｒｉｖａ ｌａｐｐｕｌａｃｅａから成る群から選択される１つ以上の植物から得た抽出物または抽出物混合物から構成されることが好ましい。
【０１２１】
また、本発明の主題は、皮膚、粘膜及び／または上皮または身体付属物に局所外用用化粧品または皮膚用医薬品組成物に関し、前記組成物は特に抗ラジカル型作用を有する活性成分として、Ｃｌｉｄｅｍｉａ、Ｉｎｇａ、Ｓａｂｉｃｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ、Ｓｉｐａｒｕｎａ、Ｅｐｅｒｕａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ、Ｐｒｉｖａ、Ｃｏｕｔｏｕｂｅａ及びＧｏｕｐｉａ属から成る群に属する植物属の植物の抽出物を単独でまたは少なくとも１つの他の添加成分と共に含む。好ましくは、植物はＣｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ、Ｂｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａ、Ｐｒｉｖａ ｌａｐｐｕｌａｃｅａ、Ｃｏｕｔｏｕｂｅａ ｓｐｉｃａｔａ及びＧｏｕｐｉａ ｇｌａｂｒａから成る群から選択される。
【０１２２】
化粧品または皮膚用医薬品組成物が有していることが必要であり得る抗ラジカル型作用に関連する他の追加特性によれば、上記した群から選択され得る植物には上記試験結果を示す表に示した各植物の作用に従って各種代表物が含まれる。
【０１２３】
すなわち、本発明の第１実施態様では、化粧品または皮膚用医薬品組成物は、Ｃｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ及びＢｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物からなる抗ＵＶＡ、抗ＵＶＢ及び抗コラゲナーゼ作用を有する活性成分を含み得る。
【０１２４】
本発明の第２実施態様では、化粧品または皮膚用医薬品組成物は、Ｃｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ａｓｔｒｏｃａｒｙｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ、Ｓｉｐａｒｕｎａ ｇｕｉａｎｅｎｓｉｓ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ及びＢｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物からなる抗ＵＶＡ、抗ＵＶＢ、抗コラゲナーゼ及び抗エラスターゼ作用を有する活性成分を含み得る。
【０１２５】
本発明の第３実施態様では、化粧品または皮膚用医薬品組成物は、Ｃｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ及びＥｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物からなる抗ＵＶＡ、抗ＵＶＢ、抗コラゲナーゼ及び抗グリケーション作用を有する活性成分を含み得る。
【０１２６】
本発明の第４実施態様では、化粧品または皮膚用医薬品組成物は、Ｃｌｉｄｅｍｉａ ｈｉｒｔａ、Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ、Ｓａｂｉｃｅａ ｃｉｎｅｒｅａ、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ及びＢｙｒｓｏｎｉｍａ ｖｅｒｂａｓｃｉｆｏｌｉａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物からなる抗ＵＶＡ、抗ＵＶＢ、抗コラゲナーゼ、抗エラスターゼ及び色素脱失作用を有する活性成分を含み得る。
【０１２７】
本発明の第５実施態様では、化粧品または皮膚用医薬品組成物は、Ｇｏｕｐｉａ ｇｌａｂｒａ植物の抽出物からなる色素沈着作用を有する活性成分を含み得る。
【０１２８】
本発明の第６実施態様では、化粧品または皮膚用医薬品組成物は、Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ植物の抽出物からなるスリミング作用を有する活性成分を含み得る。
【０１２９】
本発明の化粧品組成物は、有利には活性成分として０．００１〜２０重量％、好ましくは０．１〜３重量％の上記植物から上記したようにして得られる抽出物または抽出物混合物を単独でまたは他の活性成分と共に含む。
【０１３０】
活性成分を構成する抽出物または抽出物混合物は、化粧品上可能なガレヌス形態、特に水中油型エマルション、油中水型エマルション、フェースローション、化粧品乳液、ゲル、ヒドロゲル、クリーム、ポマード、セッケン、ペレット、スプレー、ヘアローション及びシャンプーから成る群から選択されるガレヌス形態で使用される。
【０１３１】
抽出物または抽出物混合物はまた、１つ以上の化粧品用ベクター、特にリポソーム、マクロカプセル、マイクロカプセル、ナノカプセル、マクロ粒子、ミクロ粒子及びナノ粒子から選択される１つ以上のベクターに添加され得る。
【０１３２】
上記植物抽出物を含む各種製品または化粧品をここに例示するが、本発明の実際の使用はこれらの例に限定されない。
【０１３３】
実施例１
皮膚脱色クリームの形態の化粧品は、例えば以下の組成を有し得る。
【０１３４】
【表５】
このクリームの製造方法は、Ａ部の成分を７５℃で撹拌しながら融解し、Ｂ部を７５℃で作成し、次いでＢ部をＡ部にタービン攪拌機で撹拌しながら注入し、遊星型攪拌機で撹拌しながら冷却し、その後Ｃ部に添加することからなる。
【０１３６】
実施例２
皮膚色素斑を治療するための手に対する抗斑点エマルションの形態の化粧品は、例えば以下の組成を有し得る。
【０１３７】
本発明によれば、前記製品は複数の作用、特に抗ラジカル、抗エラスターゼ及び抗コラゲナーゼ作用を有する。
【０１３８】
【表６】
このエマルションの製造方法は、Ａ部及びＢ部をそれぞれ７５℃で作成し、Ａ部をＢ部に７５℃でタービン攪拌機で撹拌しながら添加し、５０℃に冷却し、Ｃ部を添加し、最後に最終混合物を周囲温度に冷却することからなる。
【０１４０】
実施例３
しわ取りデイクリーム及び複数の作用を有する老化防止クリームの形態の化粧品は、例えば以下の組成を有し得る。
【０１４１】
【表７】
このクリームの製造方法は、Ａ部及びＢ部をそれぞれ８０℃で撹拌しながら作成し、Ａ部をＢ部にタービン攪拌機で撹拌しながら添加し、混合物を４５℃に冷却し、Ｃ部を添加し、最後に最終混合物を周囲温度に戻すことからなる。
【０１４３】
本発明は、勿論本明細書に記載、例示されている実施態様に限定されない。本発明の範囲を逸脱せずに変更、特に各種成分の組成の変更または工業的均等物による置換による変更は可能である。
Claims (14)
- Ｅｐｅｒｕａ植物属およびＩｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ種から成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物の、第一の活性成分として単独での、または少なくとも第二の活性成分と一緒での、皮膚、粘膜および／または上皮または身体付属器官に対する局所外用用化粧品または皮膚用医薬品の製造における使用。
- Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉおよびＥｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物が、高い抗エラスターゼ作用をも有することを特徴とする請求の範囲第１項に記載の使用。
- Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉおよびＥｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物が、高い色素脱失作用をも有することを特徴とする請求の範囲第１項に記載の使用。
- Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉおよびＥｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物が、高い抗コラゲナーゼ作用をも有することを特徴とする請求の範囲第１項に記載の使用。
- Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉおよびＥｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物が、優れた抗ＵＶＢ作用をも有することを特徴とする請求の範囲第１項に記載の使用。
- Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉおよびＥｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物が、優れた抗ＵＶＡ作用をも有することを特徴とする請求の範囲第１項に記載の使用。
- Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉおよびＥｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物が、強い抗グリケーション作用をも有することを特徴とする請求の範囲第１項に記載の使用。
- Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ植物の少なくとも１つの抽出物が、高いスリミング作用をも有することを特徴とする請求の範囲第１項に記載の使用。
- 皮膚、粘膜および／または上皮または身体付属器官に対する局所外用用化粧品または皮膚用医薬品組成物であって、第一の活性成分としてＥｐｅｒｕａ植物属およびＩｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉ種から成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物を単独で、または少なくとも第二の活性成分と一緒に、含むことを特徴とする前記組成物。
- Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉおよびＥｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物からなる抗ＵＶＡ、抗ＵＶＢおよび抗コラゲナーゼ作用を有する活性成分を含むことを特徴とする請求の範囲第９項に記載の化粧品または皮膚用医薬品組成物。
- 抗ＵＶＡ、抗ＵＶＢ、抗コラゲナーゼ及び抗エラスターゼ作用を有する活性成分を含み、前記活性成分がＩｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉおよびＥｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物からなることを特徴とする請求の範囲第９項に記載の化粧品または皮膚用医薬品組成物。
- Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉおよびＥｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物からなる抗ＵＶＡ、抗ＵＶＢ、抗コラゲナーゼおよび抗グリケーション作用を有する活性成分を含むことを特徴とする請求の範囲第９項に記載の化粧品または皮膚用医薬品組成物。
- Ｉｎｇａ ｂｏｕｒｇｏｎｉおよびＥｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａから成る群から選択される植物の少なくとも１つの抽出物からなる抗ＵＶＡ、抗ＵＶＢ、抗コラゲナーゼ、抗エラスターゼおよび色素脱失作用を有する活性成分を含むことを特徴とする請求の範囲第９項に記載の化粧品または皮膚用医薬品組成物。
- Ｅｐｅｒｕａ ｆａｌｃａｔａ植物の抽出物からなるスリミング作用を有する活性成分を含むことを特徴とする請求の範囲第９項に記載の化粧品または皮膚用医薬品組成物。
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