FR2924334A1 - Composition cosmetique comprenant l'acide 2-glucoside ascorbique et l'ergothioneine. - Google Patents
Composition cosmetique comprenant l'acide 2-glucoside ascorbique et l'ergothioneine. Download PDFInfo
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Abstract
La présente invention a pour objet une composition cosmétique permettant de réduire ou retarder les effets du vieillissement sur la peau comprenant, à titre de principes cosmétiquement actifs, l'acide 2-glucoside ascorbique et l'ergothionéine. L'invention a également pour objet l'utilisation de ces principes cosmétiquement actifs dans une composition cosmétique, comme agents de stimulation des enzymes de réparation de l'ADN, en particulier les enzymes de réparation des bases oxydées de l'ADN des cellules du derme et de l'épiderme. Enfin, l'invention concerne le procédé de traitement cosmétique impliquant cette utilisation.
Description
La présente invention a pour objet une composition cosmétique permettant d'atténuer ou de retarder l'apparition des effets du vieillissement sur la peau comprenant, à titre de principes cosmétiquement actifs, l'acide 2-glucoside ascorbique et l'ergothionéine. L'invention a également pour objet l'utilisation de ces principes cosmétiquement actifs dans une composition cosmétique, comme agents de stimulation des enzymes de réparation de l'ADN, en particulier les enzymes de réparation des bases oxydées de l'ADN des cellules du derme et de l'épiderme. Enfin, l'invention concerne le procédé de traitement cosmétique impliquant cette utilisation. Le vieillissement cutané est déterminé par des facteurs génétiques et environnementaux.
On distingue ainsi plus particulièrement deux types de vieillissement cutané : - le vieillissement intrinsèque, ou chronologique, qui affecte la peau comme les autres organes et correspond aux modifications inévitables liées à l'âge, û le vieillissement extrinsèque qui est lié aux facteurs de l'environnement. Le terme de vieillissement actinique ou héliodermie correspond à des modifications cliniques, histologiques et fonctionnelles caractéristiques de la peau liées à l'exposition solaire chronique et siégeant donc sur les zones photo-exposées. Ces deux processus sont étroitement associés et dans les deux cas, la production d'espèces oxygénées réactives (ROS), conduisant à un stress oxydant est un élément déterminant du vieillissement de la peau.
Le stress oxydant, également indifféremment mentionné dans la littérature sous le terme stress oxydatif , est défini comme un excès de radicaux libres présents dans l'organisme résultant d'une production excessive par divers mécanismes physiologiques ou de phénomènes toxiques exogènes. Ces espèces oxygénées réactives (ROS) et radicaux libres peuvent ainsi être générés soit par le métabolisme cellulaire tel que la respiration mitochondriale ou bien les infections pathogènes, la détoxification xénobiotique ou le rayonnement solaire.
Cette production physiologique de radicaux libres est maîtrisée par les systèmes de défense cellulaire et la balance défenses anti-oxydantes / pro-oxydants est en équilibre. Que ce soit par déficit en anti-oxydants, en activités d'enzymes anti-oxydantes ou la surproduction d'espèces oxygénées réactives, le déséquilibre de la balance défenses anti- oxydantes / pro-oxydants conduit à l'excès d'espèces oxygénées réactives et de radicaux libres qui induisent un état appelé stress oxydant provoquant l'oxydation des composants cellulaires dont l'ADN (Sauvaigo S. et al, Brit. J. Dermatol., 157, 26 û 32, 2007).
Les dommages oxydatifs de l'ADN sont très néfastes pour les cellules et il a été montré que la survie d'un demi million d'années de bactéries de l'espèce Arthrobacter était liée à leur capacité de réparation de l'ADN (Stewart Johnson et al. ; Proc. Natl. Acad. Sci., 104, 11401-14405, 2007). Chez l'homme, malgré les systèmes de défenses cellulaires, les dommages continuels de l'ADN altèrent progressivement les séquences génomiques et conduisent au développement de désordres cellulaires tel que le vieillissement (King et al., Mut. Res.1994, 316, 79-90). Cela suggère que les agressions physiques ou chimiques qui augmentent le taux de dommages de l'ADN accélèrent le vieillissement, réduisant par conséquent l'espérance de vie (Weirich-Schwaiger H, et al., 1994, Mut. Res., 316, 37-48). La recherche en cosmétologie tente de trouver des moyens efficaces pour préserver les fonctions essentielles de la peau en réponse au temps et aux agressions telles que le stress oxydant. Un premier moyen connu consiste à prévenir les dommages qui peuvent être causés à l'ADN cellulaire, en particulier l'ADN des cellules de la peau telles que les kératinocytes, les mélanocytes ou les fibroblastes, en utilisant des composés qui vont agir pour inhiber chimiquement les espèces oxygénées réactives avant qu'elles ne réagissent avec l'ADN. Les agents anti-oxydants sont couramment utilisés dans des compositions 30 cosmétiques pour leur capacité à réduire ou à prévenir les dommages causés par le stress oxydant sur les cellules de la peau.
D'un point de vue chimique, l'anti-oxydant est un composé qui va se comporter comme un agent réducteur et donc réagit avec l'espèce oxydante pour la désactiver et la neutraliser, et ainsi diminuer ou empêcher l'oxydation d'autres substances chimiques et stopper ces réactions en chaîne.
L'anti-oxydant est donc réputé prévenir les dommages causés à la cellule et à l'ADN cellulaire par les espèces oxygénées réactives, radicaux libres et espèces oxydées formées sous l'effet d'un stress oxydant, mais n'est pas chimiquement en mesure de réparer a posteriori, les dommages causés à l'ADN cellulaire. Les dommages liés au stress oxydant sont de deux types, d'une part la modification de bases par un processus chimique d'oxydation qui entraîne une altération de la séquence de la double hélice d'ADN, et d'autre part, des cassures simple brin et double brin de l'ADN cellulaire. Les dommages de l'ADN cellulaire sont liés au développement de pathologies telles que les tumeurs cutanées.
Des études ont par ailleurs suggéré que les dommages à l'ADN et/ou la réparation de ces dommages est un signal important pour l'activation de la synthèse de mélanine induite par les UV (Eller et al., 1996 Proc. Natl. Acad. Sci., 93 1087-92). L'étude de ces dommages et des mécanismes de réparation est également un enjeu majeur de la lutte contre le vieillissement.
En effet, ces dommages de l'ADN cellulaire, de part leur accumulation et leur pouvoir mutagène, conduisent à des dommages et dysfonctionnements cellulaires variés ayant, au niveau cutané, notamment un effet promoteur et activateur du vieillissement cellulaire. Les inventeurs ont montré qu'en réponse à un stress oxydant, les capacités de réparation de l'ADN de fibroblastes issus de femmes japonaises baissaient avec l'âge et que cette diminution était aggravée par l'usage du tabac (Sauvaigo et al., Int. J. Cosmet. Sci., 2005, 27, 76-79). Beaucoup d'études s'intéressent aux altérations de l'ADN cellulaire résultant de processus d'oxydation de bases soumises à un stress oxydant.
Parmi les nombreuses bases modifiées recensées par la littérature, la 8-Oxo-7,8-dihydro-2'-deoxyguanosine (8-oxo-dG) est un biomarqueur reconnu des lésions provoquées sur l'ADN.
Des travaux menés sur des kératinocytes humains in vivo (Kang et al., Exp. Cell Res., 2005, 310, 186-195) divulgue que la 8-oxo-dG et les espèces oxygénées réactives s'accumulent dans l'ADN des cellules sénescentes, et indique également que l'enzyme 8-oxo-dG DNA glycosylase (hOGG1), impliquée dans l'excision de la 8-oxo- dG, est présente en moindre quantité dans ces mêmes cellules. Des auteurs ont montré sur des cultures de fibroblastes de peau humaine, que l'accumulation de la 8-oxo-dG dans l'ADN des cellules âgées est liée à une diminution de l'activité des enzymes de réparation des dommages (Kaneko et al., Mutat Res., 2001, 487, 19-30).
De même, une étude menée sur des échantillons de biopsie colorectale suggère une augmentation de la 8-oxo-dG avec l'âge des patients prélevés (Tsurudome et al., Gerontol A Biol Sci Med Sci., 2001, 56, B483-5). L'élimination des bases oxydées de l'ADN met en oeuvre une voie enzymatique de réparation par excision des bases oxydées, voie qu'on retrouve également chez de nombreux organismes vivants (Boiteux et al., Biochimie, 1999, 81, 59-67). Le niveau d'expression des gènes codant les enzymes responsables de l'excision des bases oxydées d'ADN est également un marqueur sensible du stress oxydant (Powell et al. Cancer Letters, 2005, 22, 1-11). Une publication récente suggère qu'un moyen de renforcer la protection de l'ADN contre les radiations UV serait d'administrer des enzymes de réparation de l'ADN cellulaire pour réduire les dommages photo-induits (Yaar and Gilchrest, Br J Dermatol. 2007 Nov;157(5):874-87). Or, la présente invention repose sur la mise en évidence d'une voie nouvelle, alternative à l'administration exogène d'enzymes de réparation de l'ADN cellulaire, qui consiste en la stimulation directe de l'activité des enzymes de réparation de l'ADN cellulaire. A l'heure actuelle, très peu de méthodes autorisent la mesure directe de l'activité enzymatique liée à la réparation des bases altérées de l'ADN dans les cellules, en particulier parce qu'il existe un grand nombre d'altérations et donc qu'une forte spécificité est requise. Les inventeurs de la présente demande de brevet ont étudié l'activité enzymatique de réparation de bases oxydées de l'ADN cellulaire sous l'influence du stress oxydant, à l'aide d'une méthode leur permettant de mesurer spécifiquement l'activité des enzymes de réparation de l'ADN pour un ensemble de bases modifiées générées de façon caractéristique consécutivement à un stress oxydatif. Au cours de ces recherches, contre toute attente, la Demanderesse s'est aperçue que l'acide 2-glucoside ascorbique et l'ergothionéine stimulent chacun l'activité enzymatique de réparation des bases de l'ADN cellulaire, altérées chimiquement sous l'effet d'un stress oxydant. La stimulation de l'activité des enzymes de réparation des bases oxydées de l'ADN cellulaire permet d'améliorer les capacités de réparation de l'ADN de la cellule, lesquelles capacités diminuent avec l'âge, et d'éviter plus particulièrement l'accumulation de bases oxydées dans la cellule, source de dysfonctionnement cellulaire et du vieillissement cutané. Il est ainsi possible de lutter efficacement contre le vieillissement cellulaire en utilisant un agent actif qui stimule l'activité enzymatique de réparation de l'ADN de la cellule, et ainsi assurer le maintien de l'intégrité de l'ADN de la cellule, malgré les dommages causés par le stress oxydant. La Demanderesse s'est également aperçue de façon tout à fait surprenante et inattendue, que l'activité enzymatique de réparation de l'ADN n'est pas stimulée uniformément par chacun des composés qu'elle a particulièrement étudiés.
Chaque composé pris individuellement stimule plus spécifiquement certains types de réparation que d'autres. Il est ainsi possible, en combinant l'acide 2-glucoside ascorbique et l'ergothionéine, de couvrir un spectre de réparation plus large parmi les différentes altérations connues au niveau des bases de la double hélice que si chacune des molécules est utilisée seule. La Demanderesse s'est enfin aperçue que les cellules de peau issues d'un donneur caucasien et celles d'un donneur asiatique ne répondent pas de façon identique au traitement par une même molécule quand on étudie les différentes réparations de bases oxydées.
L'association de l'acide 2-glucoside ascorbique et de l'ergothionéine dans une même composition cosmétique permet de couvrir de façon complémentaire un large spectre de réparation par les enzymes cellulaires de l'ADN altéré, à la fois pour le donneur de type caucasien et pour le donneur de type asiatique. Selon un premier aspect, l'invention a donc pour objet une composition cosmétique comprenant, à titre de principes cosmétiquement actifs, l'acide 2-glucoside ascorbique et l'ergothionéine, de préférence la L-ergothionéine, et au moins un excipient cosmétiquement acceptable. L'ergothionéine est connue comme anti-oxydant naturel efficace contre les dommages cellulaires oxydatifs, inhibant plus particulièrement la mort cellulaire provoquée par le peroxyde d'hydrogène et l'oxydation de l'ADN provoquée par les peroxynitrites dans des lignées cellulaires humaines (Aruoma et al., Food Chem Toxicol. 1999 Nov;37(11):1043-53). L'acide 2-glucoside ascorbique, également indifféremment dénommé ascorbyl glucoside ou acide 2-O-a-D-Glucopyranosyl L-ascorbique, est un agent efficace pour protéger les kératinocytes de la cytotoxicité induite par des UV B (Yasuda et al., In Vitro Cell. Dev. Biol. Animal., 2004, 40, 71-73). D'autre part l'acide 2-glucoside ascorbique joue un rôle protecteur des cellules de peau de souris mises en cultures, vis-à-vis des dommages induits par les UV A ou UV B, se traduisant par une réduction de la fragmentation de l'ADN cellulaire (Masatsuji-Kato E et al., J. of Health Science, 2005 , 51 , 122-129).
Selon une caractéristique particulière de la présente invention, l'acide 2-glucoside ascorbique est présent dans la composition cosmétique en une quantité comprise entre 0,0001 % et 10 %, avantageusement entre 0,001 % et 5 %, encore plus avantageusement entre 0,001 % et 2,5 %, de manière préférée entre toutes entre 0,1 % et 2,2 % en poids par rapport au poids total de la composition.
Selon une autre caractéristique particulière de la présente invention, l'ergothionéine est présente dans la composition cosmétique en une quantité comprise entre 0,0001 % et 10 %, avantageusement entre 0,001 % et 1 %, encore plus avantageusement entre 0,005 % et 0,8 %, de manière préférée entre toutes entre 0,01 % et 0,5 % en poids par rapport au poids total de la composition.
Avantageusement selon la présente invention, l'ergothionéine et l'acide 2-glucoside ascorbique sont présents dans ladite composition cosmétique selon un ratio ergothionéine/acide 2-glucoside ascorbique compris entre 0,001 et 100, de préférence entre 0,002 et 80, de manière encore plus préférée entre 0,003 et 70, de manière préférée entre toutes entre 0,005 et 60. La composition selon l'invention peut contenir également les adjuvants habituels dans le domaine cosmétique, tels que les stabilisants, les anti-oxydants, les solvants, les parfums, les agents chélateurs, les absorbeurs des filtres chimiques ou minéraux, des pigments minéraux, les tensioactifs, les polymères, les huiles de silicone et les matières colorantes, cette liste n'étant pas limitative. Dans un mode de réalisation particulier de la présente invention, la composition cosmétique comprend en outre au moins un agent dépigmentant et/ou un agent destiné à atténuer les effets du vieillissement cutané, ou à retarder l'apparition desdits effets. Les agents dépigmentants connus de l'homme du métier sont par exemple l'arbutine, l'acide kojique, l'acide azélaïque, la vitamine B3 ou PP, le calcium D-pantetheine-S-sulfonate les dérivés du résorcinol, le resvératrol, des extraits de licorice ou de mûrier blanc, l'acide alpha-lipoïque, l'acide linoléique, des chélateurs de cations tels que 1'EDTA (acide éthylène diamine tétra acétique), un extrait de soja, un extrait de citrus unshiu, la diacetylboldine, cette liste étant non limitative. De préférence, l'agent dépigmentant est choisi dans le groupe comprenant la vitamine B3, un extrait de licorice, le calcium D-pantetheine-S-sulfonate, l'acide férulique et ses dérivés, un extrait de citrus unshiu, la diacetylboldine.
Les agents destinés à atténuer les effets du vieillissement cutané, ou à retarder l'apparition desdits effets, connus de l'homme du métier sont avantageusement choisis dans le groupe comprenant le rétinol, un ester de rétinol tel que le propionate de rétinol ou le palmitate de rétinol, la bêta-ecdysone, les dérivés de tocophérol tels que le tocophérol phosphate ou le potassium ascorbyl tocopheryl phosphate, et l'asiaticoside.
La composition cosmétique selon l'invention comprend un excipient cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire un excipient compatible avec la peau. Elle peut avantageusement se présenter sous toutes les formes normalement utilisées pour une application topique, notamment sous forme d'une solution aqueuse, hydro-alcoolique ou huileuse, d'une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile, d'un gel aqueux ou huileux, d'un produit anhydre liquide, pâteux ou solide, ou sous toute autre forme pour application topique.
Cette composition peut être plus ou moins fluide et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse ou d'un gel. Elle peut éventuellement être appliquée sur la peau sous forme d'aérosol ou bien au moyen d'un patch ou d'un masque ou d'un applicateur. Elle peut également se présenter sous forme solide par exemple une poudre libre ou compactée ou un stick. Avantageusement, la composition cosmétique se présente sous la forme d'une lotion, d'un gel, d'un sérum, d'une crème, d'un patch ou d'un masque. De préférence, la composition cosmétique selon l'invention est une émulsion sous la forme d'un sérum, d'une crème de jour, d'une crème de nuit ou d'une crème après-soleil. Dans un mode de réalisation particulier de la présente invention, la composition cosmétique sous l'une de ses différentes formes est appliquée sur au moins une partie de la peau du corps, en particulier les mains ou le visage. De préférence, la composition cosmétique selon l'invention sous l'une de ses différentes formes est appliquée consécutivement à une exposition unique ou répétée de la peau à un stress oxydant ou au rayonnement solaire, en particulier au rayonnement solaire ultra-violet (UV). Selon un deuxième aspect, l'invention a pour objet l'utilisation de l'acide 2-glucoside ascorbique, en association ou non avec l'ergothionéine, à titre de principe cosmétiquement actif dans une composition cosmétique destinée à atténuer les effets du vieillissement cutané, ou à retarder l'apparition desdits effets. La composition cosmétique selon l'invention est plus particulièrement destinée à atténuer les effets du vieillissement chronologique et/ou actinique affectant la peau, ou à retarder l'apparition desdits effets.
Avantageusement, la composition cosmétique permet de réduire ou retarder la formation des rides, et/ou réduire ou retarder la perte de fermeté de la peau, et/ou réduire ou retarder les taches de pigmentation de la peau, en particulier les taches de pigmentation photo-induites et/ou les taches de sénescence. La composition cosmétique est avantageusement telle que définie précédemment.
Selon un autre mode de réalisation préféré de l'invention, la composition cosmétique est destinée à stimuler les enzymes de réparation des dommages causés à l'ADN par une exposition unique ou répétée de la peau à un stress oxydant ou au rayonnement solaire, en particulier au rayonnement solaire ultra-violet (UV). La composition cosmétique est plus particulièrement destinée à stimuler les enzymes de réparation des bases oxydées de l'ADN des cellules du derme et de l'épiderme. Dans un mode de réalisation particulier, l'utilisation selon la présente invention est caractérisée en ce que la composition cosmétique comprend l'acide 2-glucoside ascorbique et l'ergothionéine. Avantageusement, l'ergothionéine et l'acide 2-glucoside ascorbique sont présents dans ladite composition cosmétique selon un ratio ergothionéine/acide 2-glucoside ascorbique compris entre 0,001 et 100, de préférence entre 0,002 et 80, de manière encore plus préférée entre 0,003 et 70, de manière préférée entre toutes entre 0,005 et 60.. Les quantités avantageuses d'acide 2-glucoside ascorbique et d'ergothionéine sont telles qu'indiquées précédemment.
Avantageusement, la composition cosmétique comprend en outre un excipient cosmétiquement acceptable et au moins un agent dépigmentant et/ou anti-vieillissement cutané. Les agents dépigmentants et/ou destinés à atténuer les effets du vieillissement cutané, ou à retarder l'apparition desdits effets, qui sont préférés, sont tels qu'indiqué précédemment.
Selon un dernier aspect, la présente invention concerne un procédé de traitement cosmétique pour atténuer les effets du vieillissement cutané, ou retarder l'apparition desdits effets, caractérisé en ce qu'on applique sur la peau une quantité suffisante d'une composition cosmétique comprenant l'acide 2-glucoside ascorbique et l'ergothionéine à titre de principe cosmétiquement actif. La composition est avantageusement telle que définie précédemment. Le procédé de traitement cosmétique vise plus particulièrement à atténuer les effets du vieillissement chronologique et/ou actinique affectant la peau, ou a retarder l'apparition desdits effets. Avantageusement, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que la composition cosmétique permet de réduire ou retarder la formation des rides, et/ou réduire ou retarder la perte de fermeté de la peau, et/ou réduire ou retarder les taches de pigmentation de la peau, en particulier les taches de pigmentation photo-induites et/ou les taches de sénescence. De préférence, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que la composition cosmétique sous l'une de ses différentes formes est appliquée sur au moins une partie de la peau du corps, en particulier les mains ou le visage. De manière également préférée, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que la composition cosmétique sous l'une de ses différentes formes est appliquée consécutivement à une exposition unique ou répétée de la peau à un stress oxydant ou au rayonnement solaire, en particulier au rayonnement solaire ultra-violet (UV).
Les modes d'administration, les posologies et les formes optimales des compositions selon l'invention peuvent être déterminés selon les critères généralement pris en compte dans l'établissement d'un traitement cosmétique.
Les figures et exemples ci-après sont donnés à titre illustratif et ne sont pas limitatifs.
FIGURES
Figure 1 : Principe de la mesure de l'activité DNA-N-glycosylase sur la biopuce Figure 2 : Lésions étudiées et schéma de répartition sur la biopuce Uracile = uracile OxodG = 8-oxo Gua = 8-Oxo-7,8-dihydro-2'-desoxyguanosine Inosine = inosine HmdU = 5 hydroxymethyl-2'-desoxyuridine Formylamine = N-(desoxy-beta-D-erythropentofuranosyl)-formylamine EthenodA = N6-etheno-desoxyadenosine Figure 3 : Effet de l'ergothionéine sur la digestion de l'oligonucléotide témoin (sans lésion) après traitement de 24 heures Figure 4: Effet de l'acide 2-glucoside ascorbique sur la digestion de l'oligonucléotide témoin (sans lésion) après traitement de 24 heures Figure 5 : Effet de l'ergothionéine sur la digestion des différentes lésions des fibroblastes issus du donneur caucasien juste après le traitement (A) ou 24 heures après le traitement (B) Les valeurs reportées sont les pourcentages résiduels de lésions normalisées par rapport à l'oligonucléotide témoin. Une valeur supérieure à 100% indique que le traitement inhibe la réparation de la lésion Une valeur inférieure à 100% indique que le traitement augmente la réparation de la lésion
Exemple 1 : Mesure de l'activité biologique d'un traitement respectivement par l'ergothionéine et par l'acide 2-glucoside ascorbique, sur la capacité de réparation de dommages de l'ADN des fibroblastes humains normaux en culture.
Les fibroblastes sont issus d'une plastie mammaire d'une femme caucasienne de 52 ans et de la peau photo-protégée d'une femme asiatique (japonaise) de 39 ans. 1.1. Méthodes
1.1.1. Traitement des fibroblastes Les fibroblastes de chacun des donneurs, caucasien (FHN52) et asiatique (FHN 20 1C) sont remis en cultures et traités en phase exponentielle de croissance. Les fibroblastes sont traités par l'ergothionéine (AGI Dermatics, Newport, NY, USA) à une concentration non cytotoxique de 4mM pendant 24 heures. Le traitement des fibroblastes par l'acide 2-glucoside ascorbique (Siber Hegner, Miribel, France) est réalisé à la concentration non cytotoxique de 50 M de acide 2-25 glucoside ascorbique pendant 24 heures. Les cellules sont ensuite rincées et isolées par un traitement à la trypsine. Des contrôles non traités (NT) sont effectués an parallèle pour chaque point. Les culots cellulaires sont congelés en milieu de culture (Medium 199 + Earle's + L-glutamine complété avec SVF, pénicilline et streptomycine) + 10% de DMSO. 30 Six boîtes de Petri de diamètre 100 mm sont prévues pour chaque condition.
1.1.2. Préparation des extraits15 Des extraits nucléaires ont été préparés afin d'obtenir des solutions protéiques contenant les enzymes de réparation d'intérêt. Les protéines sont dosées avec le kit Micro BCA (Interchim, Montlucon, France). Les extraits sont aliquotés par fraction de 5 l et conservés à -80°C.
Les extraits sont utilisés à la concentration finale de 10 g/ml. Après deux décongélations, ils sont éliminés.
1.1.3. Technologie OLISA appliquée à la réparation de l'ADN La technologie OLISA (Bonnet-Duquennoy et al., Fur. J. Dermatol., 16, 2, 136- 140 2006) a été utilisée pour mesurer l'excision des bases nucléiques modifiées par les enzymes de réparation de l'ADN de type glycosylases. Le principe (fig .1) a été décrit dans la publication : an oligonucleotide microarray for the monitoring of repair enzyme activity toward different DNA damage , Sauvaigo et al., Annal. Biochem. (2004) ; 333 : 182-192.
Les sondes oligonucléotidiques marquées et immobilisées sur le support génèrent un double brin d'ADN synthétique renfermant dans leur séquence de bases, la base altérée dont on étudie l'activité de réparation par les enzymes cellulaires. Les sondes sont déterminées pour étudier la réparation enzymatique de lésions caractéristiques de la résultante d'une exposition à un stress oxydant (fig.2).
Une puce de format OLISA (plaque 96 puits ; bioMérieux, Grenoble, France) possédant 17 spots est fonctionnalisée par des oligonucléotides contenant les différentes lésions d'intérêt (synthèses LAN, CEA, Grenoble, France). On utilise pour cette étude deux spots par lésion d'intérêt ou oligonucléotide témoin (sans lésion) et trois spots qui servent à diriger la lecture.
Les puits fonctionnalisés sont incubés à 30°C en présence de l'extrait d'intérêt. La durée de digestion choisie est de 45 minutes pour ces expérimentations. Les extraits sont déposés dans quatre puits. En parallèle, des puits contrôles sans extrait (uniquement du tampon) sont effectués.
Après lecture des puces, pour chaque condition (ou barrette), on obtient 8 valeurs brutes par lésion d'intérêt (2 spots x 4 puits).
La moyenne de ces valeurs est calculée pour les puits "contrôle" comme pour les puits "extrait", les lésions n'étant pas digérées dans les puits "contrôle". Ainsi pour chaque lésion, le pourcentage de lésions restant après action de l'extrait est déterminé en faisant le ratio du signal du puits extrait par rapport au puits contrôle qui représente le 100% de lésions (calcul effectué avec la moyenne des 8 valeurs obtenues). 8 valeurs de pourcentage sont obtenues pour chaque lésion résiduelle. Le signal correspond à la quantité de sonde non digérée restante, ainsi un signal faible correspond à une forte digestion et donc à une forte activité enzymatique. 10 Chaque expérimentation a été effectuée en duplicate ou triplicate.
1.1.4. Analyses statistiques Pour déterminer l'effet de l'ergothionéine d'une part, et de l'acide 2-glucoside ascorbique d'autre part, sur la digestion non spécifique des extraits, les données 15 obtenues avec l'oligonucléotide témoin normalisées par le contrôle ont été utilisées. De la même façon, pour déterminer l'effet de chacun des deux actifs sur l'activité de digestion spécifique des extraits, les données obtenues pour chaque lésions ont été normalisées par les données obtenues avec l'oligonucléotide témoin normalisées par le contrôle ont été utilisées. 20 Les expériences ont été analysées de manière indépendante pour tenir compte de la variabilité de fabrication des puces. De même, l'analyse a été effectuée pour chacun des 2 donneurs testés. Seule l'activité sur l'oligonucléotide témoin a été effectuée sur les 2 donneurs. Le test statistique utilisé est l'analyse de variance ANOVA. 25 1.2. Résultats :
1.2.1 Activité de l'ergothionéine sur l'activité de digestion non spécifique Un traitement par l'ergothionéine pendant 24 heures n'a pas d'effet significatif 30 sur l'oligonucléotide témoin juste après le traitement (cf. fig. 3). Ceci indique que le traitement ne modifie pas l'activité de digestion (nucléase) non spécifique des extraits cellulaires. 1.2.2 Effet de l'acide 2-glucoside ascorbique sur l'activité de digestion non spécifique: L'incubation de l'acide 2-glucoside ascorbique pendant 24 heures n'a pas d'effet 5 significatif sur l'oligonucléotide témoin juste après le traitement (cf. fig.4). Ceci indique que le traitement ne modifie pas l'activité de digestion (nucléase) non spécifique des extraits cellulaires. 5.2.3 Activité de l'ergothionéine sur l'activité de digestion spécifique: FHN52 FHN 1 C 1 2 3 1 2 EthenodA NS NS NS NS NS OxodG 92% NS NS NS NS Inosine 94% NS NS NS Formylamine NS NS 80% NS J Uracile NS 93% NS 96% HmdU NS NS NS NS NS 10 Tableau 1 : récapitulatif des résultats du traitement avec l'ergothionéine sur les 2 donneurs après 24 heures du traitement : Les valeurs reportées sont les pourcentages résiduels de lésions normalisées par rapport à l'oligonucléotide témoin. 15 Une valeur supérieure à 100% indique que le traitement inhibe la réparation de la lésion Une valeur inférieure à 100% indique que le traitement augmente la réparation de la lésion En gras 0,05<p<0,15. En grisé 0,05<p. N.S : variation non significative
20 On observe dans le tableau que : • le donneur caucasien (FHN 52) est plus répondant que le donneur asiatique (FHN 1C). • le pourcentage résiduel des 4 lésions : 8 oxodG, inosine, formylamine et uracile baisse significativement juste après le traitement à l'érgothionéine 25 chez le donneur caucasien (FHN 52) (cf. fig.5) • le pourcentage résiduel des lésions formylamine et uracile baisse significativement juste après le traitement à 1' érgothionéine chez le donneur asiatique.
Une étude complémentaire a été effectuée sur les cellules du donneur caucasien (FHN 52) pour mesurer l'effet à long terme de l'ergothionéine sur la capacité des fibroblastes à réparer l'ADN. Les cellules ont été incubées pendant 24 heures avec l'ergothionéine (4mM), rincées et remises en culture (sans ergothionéine) pendant 24 heures supplémentaires.
La figure 5 montre que le pourcentage résiduel des lésions ethenodA, 8-oxo-dG, inosine, formylamine et HmdU baisse significativement avec les cellules traitées 24 heures puis cultivées pendant 24 heures supplémentaires.
1.2.4 Conclusions : Ces résultats montrent qu'un traitement avec de l'ergothionéine à la concentration de 4 mM augmente significativement l'activité de digestion et donc d'élimination des bases modifiées de l'ADN formées consécutivement à un stress oxydant. L'augmentation des activités enzymatiques induites dans les extraits de fibroblastes démontre que l'ergothionéine stimule la réparation de l'ADN au sein de fibroblastes 20 humains normaux. Cette stimulation reste mesurable 24 heures après le traitement par l'ergothionéine. Cette observation suggère un effet long terme et efficace de ce traitement sur la réparation de l'ADN.
25 1.2.5 Effet de l'acide 2-glucoside ascorbique sur l'activité de digestion spécifique: FHN52 FHN 1C 1 2 1 2 EthenodA NS NS NS NS OxodG 92% NS r NS Inosine NS 92% NS Formylamine 93% 89% NS 89% Uracile NS NS 1 HmdU NS NS NS NS Tableau 2 : récapitulatif des résultats du traitement avec l'acide 2-glucoside ascorbique sur les 2 donneurs après 24 heures du traitement : Les valeurs reportées sont les pourcentages résiduels de lésions normalisées par rapport à l'oligonucléotide témoin.
Une valeur supérieure à 100% indique que le traitement inhibe la réparation de la lésion Une valeur inférieure à 100% indique que le traitement augmente la réparation de la lésion En gras 0,05<p<0,15. En grisé 0,05<p. N.S : variation non significative On observe que : • le pourcentage résiduel des 4 lésions : 8-oxo-dG, inosine, formylamine et uracile baisse significativement 24 heures après le traitement à l'acide 2-glucoside ascorbique chez le donneur caucasien (FHN 52) • le pourcentage résiduel des 4 lésions : 8 oxodG, inosine, formylamine et 15 uracile baisse significativement 24 heures après le traitement à l'acide 2-glucoside ascorbique chez le donneur asiatique (FHN 1C).
1.2.6 Conclusion Ces résultats montrent qu'un traitement par l'acide 2-glucoside ascorbique à la 20 concentration de 50 M augmente significativement l'activité de digestion et donc d'élimination des bases modifiées de l'ADN formées consécutivement à un stress oxydant. L'augmentation des activités enzymatiques induites dans les extraits de fibroblastes démontre que l'acide 2-glucoside ascorbique stimule la réparation de l'ADN au sein de 25 fibroblastes humains normaux issus de donneur caucasien ou asiatique. Cette stimulation reste mesurable 24 heures après le traitement par l'acide 2-glucoside ascorbique. Cette observation suggère un effet long terme et efficace de ce traitement sur la réparation de l'ADN. 30 Exemple 2 : crème de soin visage Les proportions des quatre compositions suivantes sont exprimées en pourcent en poids par rapport au poids total. 12,90 Cyclopentasiloxane Butylène Glycol 11,00 PEG-7 Diméthicone 5,00 Phényl Triméthicone 2,50 Glycérine 2,00 Vinyl diméthicone/méthicone silsesquioxane crosspolymer 1,50 Néopentyl glycol diéthylhexanoate 1,00 Silica diméthyl silylate 0,80 Citrate de sodium 0,50 Chlorure de sodium 0,50 Triméthylsiloxysilicate 0,50 Conservateur 0,70 Tocophéryl acétate 0,20 Ergothionéine 0,01 Tétrasodium EDTA 0,10 Parfums 0,04 Hyaluronate de sodium 0,01 Sorbate de potassium < 0,01 Eau qsp 100% Exemple 3 : sérum de nuit pour contour des yeux Glycérine 3,05 Butylène glycol 3,00 Squalane 2,90 Cétéaryl éthylhexanoate 2,60 Acide ascorbique 2-glucoside 2,00 Stéareth-21 1,20 Myristyl myristate 1,00 Polyméthyl méthacrylate 1,00 Glycéryl stearate 0,80 Conservateurs 0,70 Mica 0,65 Citrate de sodium 0,45 Alcool cétylique 0,40 Alcool stéarylique 0,40 Hydroxide de sodium 0,30 Acrylates/C10-30 alkyl acrylate crosspolymer 0,30 Polyacrylamide 0,24 Gomme xanthane 0,20 Diméthicone 0,20 Tétrasodium EDTA 0,20 C13-14 Isoparaffine 0,15 Acide stéarique 0,05 Acide palmitique 0,05 Parfums 0,03 Laureth-7 0,03 Acide citrique 0,02 Sorbate de potassium < 0,01 Eau qsp 100% Exemple 4 : Essence Butylène glycol 7,00 Glycérine 4,00 Polyméthylsilsesquioxane 4,00 Acide ascorbique 2-glucoside 2,00 Isohexadécane 1,50 Cyclopentasiloxane 1,30 Aminométhyl propanediol 1,00 Acrylates/C10-30 alkyl acrylate crosspolymer 0,45 Citrate de sodium 0,45 Conservateurs 0,70 Diméthicone 0,20 EDTA Tétrasodique 0,20 PEG-7 Glycéryl cocoate 0,20 Ergothionéine 0, 10 Gomme xanthane 0,05 Acide citrique 0,02 Parfums 0,02 Sorbate de potassium <0,01% Eau qsp 100% 19 REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
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Claims (30)
1. Composition cosmétique comprenant, à titre de principes cosmétiquement actifs, l'acide
2-glucoside ascorbique et l'ergothionéine, et au moins un excipient cosmétiquement acceptable. 2. Composition cosmétique selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'ergothionéine est la L-ergothionéine.
3. Composition cosmétique selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que l'acide 2-glucoside ascorbique est présent en une quantité comprise entre 0,0001 % et 10 %, avantageusement entre 0,001 % et 5 %, encore plus avantageusement entre 0,001 % et 2,5 %, de manière préférée entre toutes entre 0,1 % et 2,2 % en poids par rapport au poids total de la composition.
4. Composition cosmétique selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'ergothionéine est présente en une quantité comprise entre 0,0001 % et 10 %, avantageusement entre 0,001 % et 1 %, encore plus avantageusement entre 0,005 % et 0,8 %, de manière préférée entre toutes entre 0,01 % et 0,5 % en poids par rapport au poids total de la composition.
5. Composition cosmétique selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'ergothionéine et l'acide 2- glucoside ascorbique sont présents dans ladite composition cosmétique selon un ratio ergothionéine/acide 2-glucoside ascorbique compris entre 0,001 et 100, de préférence entre 0,002 et 80, de manière encore plus préférée entre 0,003 et 70, de manière préférée entre toutes entre 0,005 et 60.
6. Composition cosmétique selon l'une des revendications précédentes, comprenant en outre au moins un agent dépigmentant et/ou un agent destiné à atténuer ou a retarder les effets du vieillissement cutané, tel que les effets du vieillissement chronologique et/ou actinique.
7. Composition cosmétique selon la revendication 6, caractérisée en ce que l'agent dépigmentant est choisi dans le groupe comprenant la vitamine B3, le calcium D-pantetheine-S-sulfonate, un extrait de licorice, l'acide férulique et ses dérivés, un extrait de citrus unshiu, la diacetylboldine
8. Composition cosmétique selon la revendication 6 ou 7, caractérisée en ce que l'agent destiné à atténuer les effets du vieillissement cutané ou à en retarder l'apparition est choisi dans le groupe comprenant le rétinol, un ester de rétinol tel que le propionate de rétinol ou le palmitate de rétinol, la bêta-ecdysone, les dérivés de tocophérol tels que le tocophérol phosphate ou le potassium ascorbyl tocopheryl phosphate, et l'asiaticoside.
9. Composition cosmétique selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme d'une poudre, éventuellement compactée, d'une lotion, d'un gel, d'un sérum, d'un patch ou d'un masque.
10. Composition cosmétique selon la revendication 9, caractérisée en ce qu'elle est une émulsion sous la forme d'une crème de jour, d'une crème de nuit ou d'une crème après-soleil.
11. Utilisation de l'acide 2-glucoside ascorbique et de l'ergothionéine à titre de principe cosmétiquement actif dans une composition cosmétique destinée à atténuer les effets du vieillissement cutané, ou à retarder l'apparition desdits effets. 25
12. Utilisation selon la revendication 11, caractérisée en ce que la composition cosmétique permet de réduire ou retarder la formation des rides, et/ou réduire ou retarder la perte de fermeté de la peau, et/ou réduire ou retarder les taches de pigmentation de la peau, en particulier les taches de pigmentation photo-induites et/ou les taches de sénescence. 30
13. Utilisation selon la revendication 11 ou 12 caractérisée en ce que la composition cosmétique est destinée à stimuler les enzymes de réparation des dommages causés à20l'ADN par une exposition unique ou répétée de la peau à un stress oxydant ou au rayonnement solaire, en particulier au rayonnement solaire ultra-violet (UV).
14. Utilisation selon la revendication 13, caractérisée en ce que la composition cosmétique est destinée à stimuler les enzymes de réparation des bases oxydées de l'ADN des cellules du derme et de l'épiderme.
15. Utilisation selon l'une des revendications 11 à 14, caractérisée en ce que l'acide 2-glucoside ascorbique est présent en une quantité comprise entre 0,00001 % et 10 %, avantageusement entre 0,001 % et 5 %, encore plus avantageusement entre 0,001 % et 5 %, de manière préférée entre toutes entre 0,1 % et 2,2 % en poids par rapport au poids total de la composition.
16. Utilisation selon l'une des revendications 11 à 15, caractérisée en ce que l'ergothionéine est présente en une quantité comprise entre 0,0001 % et 10 %, avantageusement entre 0,001 % et 1 %, encore plus avantageusement entre 0,005 % et 0,8 %, de manière préférée entre toutes entre 0,01 % et 0,5 % en poids par rapport au poids total de la composition.
17. Utilisation selon l'une des revendications 11 à 16, caractérisée en ce que l'ergothionéine et l'acide 2-glucoside ascorbique sont présents dans ladite composition cosmétique selon un ratio ergothionéine/acide 2-glucoside ascorbique compris entre 0,001 et 100, de préférence entre 0,002 et 80, de manière encore plus préférée entre 0,003 et 70, de manière préférée entre toutes entre 0,005 et 60.
18. Utilisation selon l'une des revendications 11 à 17, caractérisée en ce que la composition cosmétique comprend en outre un excipient cosmétiquement acceptable et au moins un agent dépigmentant et/ou un agent destiné à atténuer les effets du vieillissement cutané ou à en retarder l'apparition desdits effets.
19. Utilisation selon la revendication 18, caractérisée en ce que l'agent dépigmentant est choisi dans le groupe comprenant la vitamine B3, le calcium D-pantetheine-S-sulfonate,30un extrait de licorice, l'acide férulique et ses dérivés, un extrait de citrus unshiu, la diacetylboldine.
20. Utilisation selon la revendication 18 ou 19, caractérisée en ce que un agent destiné à atténuer les effets du vieillissement cutané, ou à retarder l'apparition desdits effets, est choisi dans le groupe comprenant le rétinol, un ester de rétinol tel que le propionate de rétinol ou le palmitate de rétinol, la bêta-ecdysone, les dérivés de tocophérol tels que le tocophérol phosphate ou le potassium ascorbyl tocopheryl phosphate, et l'asiaticoside.
21. Utilisation selon l'une des revendications 11 à 20, caractérisée en ce que la composition cosmétique se présente sous la forme d'une poudre, éventuellement compactée, d'une lotion, d'un gel, d'une émulsion, d'un patch, d'un masque.
22. Utilisation selon la revendication 21, caractérisée en ce que la composition cosmétique sous l'une de ses différentes formes est appliquée sur au moins une partie de la peau du corps, en particulier les mains ou le visage.
23. Utilisation selon la revendication 21 ou 22, caractérisée en ce que la composition cosmétique sous l'une de ses différentes formes est appliquée consécutivement à une exposition unique ou répétée de la peau à un stress oxydant ou au rayonnement solaire, en particulier au rayonnement solaire ultra-violet (UV).
24. Procédé de traitement cosmétique pour réduire ou retarder les effets du vieillissement sur la peau, tel que les effets du vieillissement chronologique et/ou actinique, caractérisé en ce qu'on applique sur la peau une composition cosmétique selon l'une des revendications 1 à 10, en quantité suffisante pour atténuer les effets du vieillissement cutané, ou en retarder l'apparition desdits effets.
25. Procédé selon la revendication 24, caractérisé en ce que la composition cosmétique permet de réduire ou retarder la formation des rides, et/ou réduire ou retarder la perte de fermeté de la peau, et/ou réduire ou retarder les taches de pigmentation de la peau, en particulier les taches de pigmentation photo-induites et/ou les taches de sénescence.
26. Procédé selon la revendication 24 ou 25, caractérisé en ce que la composition cosmétique sous l'une de ses différentes formes est appliquée sur au moins une partie de la peau du corps, en particulier les mains ou le visage.
27. Procédé selon l'une des revendications 24 à 26, caractérisé en ce que la composition cosmétique se présente sous la forme d'une lotion, d'un gel, d'une émulsion, d'un patch ou d'un masque. 10
28. Procédé selon la revendication 27, caractérisé en ce que la composition cosmétique est une émulsion sous la forme d'une crème de jour, d'une crème de nuit ou d'une crème après-soleil.
29. Procédé selon l'une des revendications 26 à 28, caractérisé en ce que la composition 15 cosmétique sous l'une de ses différentes formes est appliquée consécutivement à une exposition unique ou répétée de la peau à un stress oxydant ou au rayonnement solaire, en particulier au rayonnement solaire ultra-violet (UV).
30. Utilisation d'une combinaison de l'ergothionéine et de l'acide 2-glucoside ascorbique 20 dans une composition cosmétique.5
Priority Applications (7)
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|---|---|---|---|
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| FR0853439A FR2924335B1 (fr) | 2007-11-30 | 2008-05-27 | Utilisation de l'acide 2-glucoside ascorbique dans une composition cosmetique contre le vieillissement. |
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