FR3061013A1 - Composition contenant le digeneaside, son procede d'obtention et son utilisation cosmetique, veterinaire ou nutraceutique - Google Patents
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Abstract
La présente invention concerne l'obtention du digénéaside, sa préparation et son utilisation dans des compositions cosmétiques, vétérinaires ou nutraceutiques destinées à prévenir ou traiter les troubles liés au vieillissement naturel ou prématuré de la peau et des phanères, par voie orale et/ou topique.
Description
@ Titulaire(s) : GREENPHARMA.
O Demande(s) d’extension :
® Mandataire(s) : GREENPHARMA.
® COMPOSITION CONTENANT LE DIGENEASIDE, SON PROCEDE D'OBTENTION ET SON UTILISATION COSMETIQUE, VETERINAIRE OU NUTRACEUTIQUE.
(57) La présente invention concerne l'obtention du digé-neaside, sa préparation et son utilisation dans des compositions cosmétiques, vétérinaires ou nutraceutiques destinées à prévenir ou traiter les troubles liés au vieillissement naturel ou prématuré de la peau et des phanères, par voie orale et/ou topique.
FR 3 061 013 - A1
La présente invention concerne l'utilisation par voie topique ou orale du digénéaside pour entretenir, la peau, le poil ou le cheveux chez l'homme ou l'animal, contre le vieillissement naturel ou induit. Cette fonction comprend l'effet anti-âge, l'effet dépigmentant et l'effet lipolytique conduisant à un entretien ou à une amélioration générale de l'état de la peau ou du système pileux.
La présente invention concerne également la préparation du digénéaside.
Les vieillissements naturel et induit se manifestent par diverses formes au niveau de la peau et du système pileux, comme par exemple l'apparition de rides, un amincissement de la peau, une perte d'hydratation de la peau, une perte d'élasticité de la peau, une perturbation du système circulatoire cutané, une diminution du système immunitaire, l'apparition de tissus fidipeux sous cutanés ou encore l'apparition de taches pigmentaires brunes inesthétiques. Ces manifestations sont en relation avec les facteurs endogènes (vieillissement naturel) ou exogènes caractérisant le vieillissement induit (exposition solaire, stress oxydatifs, pollution, tabac, alcool, agressions
Les effets anti-âge du digénéaside sont particulièrement intéressants pour prévenir ou soigner les problématiques externes, comme les rides, les rougeurs, les taches pigmentaires, les capitons et autres imperfections résultant d'un vieillissement naturel ou induit par les agressions externes comme la pollution, le stress, la fumée de cigarette..., les peaux jeunes à titre préventif contre le vieillissement naturel ou prématuré ainsi que les peaux âgées. Un effet stimulant sur le système immunitaire de la peau viendra renforcer les défenses contre les agressions externes.
La société déposante a découvert selon l'invention que le digénéaside permettait de constater les points suivants:
(a) Sur mélanocytes B16 : effet inhibiteur significatif de la synthèse de mélanine à toutes les concentrations testées).
(b) Effet inhibiteur de la production d'IL8 et de VEGF dans un modèle de stress osmotique dans des kératinocytes humains no rmaux (KHN) .
(c) Effet protecteur des réseaux lysosomaux et mitochondriaux dans des KHN et fibroblastes humains normaux (FHN) irradiés avec des UVA (histochimie) . Une stimulation de l'autophagie est observée dans les FHN (sonde spécifique, marqueur de l'autophagie) à 10pg/ml, 30pg/ml et 100 pg/ml (+20% à 30 pg/ml, effet statistiquement significatif). Le traitement des FHN en présence du composé à ces trois concentrations induit une stimulation de la concentration en ATP cellulaire ( + 46 % à 30 pg/ml, effet statistiquement significatif). Les résultats biochimiques sont corrélés à l'analyse histologique tant sur le réseau lysosomal que mitochondrial.
(d) Effet inhibiteur de la synthèse des triglycérides dans des adipocytes humains normaux à J4, de manière modérée mais statistiquement significative à 10pg/ml, 30 pg/ml et 100 pg/ml (inhibition de 16 %, 17 % et 24 % respectivement).
Ainsi, la société déposante a découvert que, le digénéaside présente un intérêt pour lutter contre liées à la peau sèche et/ou réactive, les réactions cutanées associées aux rougeurs cutanées et à la stimulation excessive de la microcirculation (érythrose, couperose, dilatations excessives de vaisseaux).
Ce composé, en activant l'autophagie des cellules de la peau est destiné à lutter contre le vieillissement cutané et à détoxifier la peau en éliminant les cellules endommagées avec l'âge et la surexposition au soleil. L'autophagie permet en effet de réguler, réparer et éliminer les protéines de longue durée de vie dans les cellules et constitue un mécanisme de recyclage et de détoxification.
La présente invention vise précisément à offrir de nouvelles compositions cosmétiques, dermocosmétiques, vétérinaires ou nutraceutiques capables de prévenir ou réparer les effets cités plus haut induits par le vieillissement naturel ou induit. Ces compositions peuvent être administrées par voie orale ou topique.
L'invention a pour objet une composition cosmétique, dermo-cosmétique, nutraceutique ou vétérinaire utilisable pour préserver ou restaurer diverses manifestations cutanées liées à l'âge, caractérisée en ce qu'elle contient, dans un véhicule acceptable, une quantité efficace de digénéaside ou alpha-D-mannopyranosyl-(1—»2)-D-glycérate répondant à la formule (I):
OH O
(I) formule I alpha-D-mannopyranosyl-(1—»2)-D-glycérate formule dans laquelle ledit composé de formule (I) peut être sous forme de sels. Parmi les bases acceptables, on peut citer, à titre non limitatif, 1'hydroxyde de sodium ou de potassium, la triéthylamine et la tert-butylamine.
Les composés de formule (I) possède plusieurs centre(s) asymétrique(s) et peuvent être isolés sous une forme optiquement pure ou sous forme de leur mélange racémique. Les méthodes permettant d'obtenir des formes optiquement actives, par exemple par résolution d'une forme racémique ou par synthèse utilisant des produits de départ optiquement purs, sont bien connues de l'homme de l'art.
Selon un aspect de l'invention, la composition comporte au moins un agent actif autre que ceux de formule (I) pour exercer au moins une action complémentaire ou synergique.
Selon un autre aspect de l'invention, les compositions ci-dessus comprennent, à titre de principe actif, au moins un extrait d'algue contenant un composé de formule (I). Préférentiellement, l'extrait d'algue provient d'une algue rouge et plus précisément, de
Palmaria palmata, Hypnea leprieurii, Osmundea Eucheuma denticulatum, ou encore de Gelidium », un extrait ou un lus spécialement d'un îles de ces aluues. Ce l'ordre des Ceramiales, des Gelidiales ou des Gigartinales. Citons à titre d'exemple non limitatif les extraits de Solieria chordalis, Kappaphycus alvarezii, Polysiphonia lanosa, Delesseria sanguinea, Pikea robusta, Gigartina stellata, Chondrus crispus, Ceramium botryocarpum, Acrochaetium moniliforme, Asparagops is armata, muciformis, Grateloupia sp. , Caloglossa pinnatifida, Porphyridium sp., Porphyra sp., Mastocarpus stellatus, Gelidium sesquipedale cartilagineum.
On entend par « extrait d'algue mélange d'extraits d'algues. Il s'agit p extrait ou d'un mélange d'extraits de cell· matériel cellulaire peut être obtenu par culture in vitro ou in vivo. Par culture in vitro, on entend l'ensemble des techniques connues de l'homme du métier qui permettent de manière artificielle l'obtention d'un végétal ou d'une partie d'un végétal. Ainsi, l'extrait peut être un extrait ou un mélange d'extraits d'organe, voire de cellules d'organe, d'au moins une algue, ou encore un extrait de cellules indifférenciées d'au moins une telle algue.
Un extrait selon l'invention peut être obtenu par toute méthode d'extraction ou de purification connue de l'homme du métier. On peut en particulier citer les procédés d'extraction solide-liquide en milieux alcooliques (notamment éthanoliques), aqueux, ainsi qu'en milieux utilisant des solvants tels que les cétones, les esters, les éthers, les polyols, les solvants chlorés et les mélanges d'au moins deux des solvants précités, comme les milieux hydroalcooliques, neutres, acides ou basiques.
Avantageusement, un extrait est obtenu par extraction d'une algue précitée en milieu hydroalcoolique, notamment une solution aqueuse d'éthanol. Selon cette variante, la concentration de l'éthanol varie de préférence de 0 à environ 40% (v/v), mieux encore elle est d'environ 30% (v/v).
Les méthodes alternatives aux solvants peuvent aussi être envisagées comme le CO2 supercritique, les micro-ondes, l'eau subcritique...
Ces modes de préparation font partie intégrante de
1'invention.
Ces extraits peuvent être utilisés tels quels sous forme liquide ou en poudre, non purifiés ou purifiés.
Si l'extrait est en poudre, son séchage peut être conduit par toute technique bien connue de l'homme du métier. L'extrait peut être séché par atomisation, évaporation ou lyophilisation. La poudre ainsi obtenue peut être encapsulée dans des liposomes ou autres vecteurs et supports pour une meilleure homogénéité de la composition et une meilleure diffusion du principe actif notamment sur la peau.
Les applications selon l'invention s'étendent au traitement des phanères. Par phanères selon l'invention, on inclut notamment les ongles et le système pileux, en particulier les cheveux. On parlera de peau en général pour désigner peau et phanères.
Ainsi, la présente invention a pour objet une utilisation cosmétique, nutraceutique ou vétérinaire d'un composé de formule (I) pour protéger la peau et les phanères du vieillissement naturel ou induit par des agents extérieurs physiques, chimiques ou biologiques et/ou pour améliorer et/ou renforcer l'état de la peau et des phanères.
Elle a aussi pour objet un procédé de traitement nutraceutique de lutte contre le vieillissement d'une peau ou de traitement cosmétique d'une peau « jeune ou âgée », ledit procédé comprenant une étape selon laquelle on applique au moins un composé de formule (I) par voie orale.
L'invention porte aussi sur un procédé de traitement cosmétique anti-âge de la peau ou de traitement cosmétique d'une peau âgée, comprenant une étape selon laquelle on applique au moins un composé de formule (I), synthétique ou extrait d'une algue sur la peau. Ce traitement permet de retarder les phénomènes de vieillissement de la peau, mais aussi de réparer une peau âgée.
Dans toute application cosmétique de l'invention, un composé de formule (I) peut être associé à un autre ou d'autres agents agissant en complémentarité ou en synergie comme les agents pro-différenciants de la peau (tel que calcium, vitamine D et leurs dérivés...).
Selon un autre aspect de l'invention, la composition selon l'invention se présente sous forme de gélules, crème, gel, lotion, lait, solution, onguent, huile corporelle, shampoing, savon, bâton protecteur des lèvres, crayon pour maquillage, émulsion bi-phasique, huile dans eau ou eau dans huile, émulsion tri-phasique, huile corporelle, shampoing, masque, pommade, bâton, nanocapsules, liposomes ou patch transdermique pour applications topiques.
Sous la forme de gel, la composition peut comprendre des excipients appropriés, tels que les esters de cellulose, ou d'autres agents gélifiants, tels que le polymère carboxylique « Carbopol® » et la gomme de guar, par exemple.
Sous la forme d'émulsions, les compositions selon l'invention jouissent d'une bonne stabilité et peuvent être conservées pendant le temps nécessaire pour l'utilisation à des températures comprises entre 0 et 50 °C, sans qu'il y ait sédimentation des constituants ou séparation des phases.
Selon un autre aspect de 1'invention, dans la composition, le digénéaside est mis en place dans des moyens d'encapsulation choisis dans le groupe formé par des microsphères, des liposomes, des glycosphères, des chylomicrons, des macro- micro-, et nanoparticules, des macro-, micro- et nanocapsules.
Selon un autre aspect de l'invention, dans la composition, le digénéaside est absorbé ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, des talcs, de la bentonite ou d'autres supports minéraux en poudre.
Selon un autre aspect de l'invention, dans la composition, l'agent actif de formule (I) constitue de 0,001% à 5% en poids par rapport au poids total de la composition.
Selon un autre aspect de l'invention, dans la composition, l'agent actif de formule (I) est sous forme encapsulée et constitue, de préférence de 0,001% à 5% en poids par rapport au poids total de la composition.
L'invention a aussi pour objet l'utilisation d'une composition selon l'invention pour prévenir les peaux saines des effets du temps et de l'environnement ou restaurer les peaux ayant subi l'effet d'un vieillissement naturel ou induit.
L'invention a donc mis en évidence la possibilité d'utiliser le composé de formule (I) comme agent actif. Ce composé présente de très bonnes propriétés anti-âges d'une manière générale.
Ainsi, la présente invention pour objet une utilisation cosmétique, dermocosmétique, nutraceutique ou vétérinaire du digénéaside de formule (I) pour prévenir les peaux saines des effets du temps et de
1'environnement ou restaurer les peaux ayant subi l'effet d'un vieillissement naturel ou induit.
Le composé de formule (I) peut, dans les compositions selon l'invention, être associé avec d'autres composés venant compléter l'effet voire engendrer une synergie de cet effet. L'activité protectrice des composés de formule (I) vis-à-vis des radicaux libres et des UV est intéressante dans le domaine capillaire, notamment dans le cas d'association avec des substances facilitant le bon état du cuir chevelu et du cheveu. On peut citer les associations avec des mucopolysaccharides, des minéraux, des vitamines, des céramides, des huiles végétales, des substances antiradicalaires, des filtres U.V., des acides de
fleurs | ou de | fruits. | ||
De | même, l'activité réparatrice du | digénéaside | de | |
formule | (I) | est particulièrement intéressante, | quand il | est |
associé | avec | des substances ayant un effet cicatrisant comme | des |
protéines, l'acide hyaluronique, des acides aminés, ou avec des substances anti-inflammatoires, anti-âge, après-solaire anti-acné ou anti-dermatose.
Ainsi, les compositions de l'invention sont tout particulièrement adaptées à une application topique pour prévenir et/ou traiter de nombreuses altérations cutanées, notamment comme agent réparateur et/ou protecteur de la peau et du système pileux comme les cheveux, pour lutter contre les agressions externes liées à la pollution, au soleil, au stress oxydatif, au vieillissement et aux pathologies cutanées entraînant un dysfonctionnement de l'homéostasie de l'épiderme ou des cheveux.
Ces compositions cosmétiques peuvent aussi prendre la forme de lotion ou solution dans laquelle les dérivés selon l'invention sont sous forme encapsulée, par exemple dans des microsphères. Ces microsphères peuvent, par exemple, être constituées de corps gras, d'agar et d'eau. Les agents actifs peuvent être aussi incorporés dans des vecteurs de type liposomes, glycosphères, dans des chylomicrons, des macro-, micro-, nanoparticules ainsi que les macro-, micro- et nanocapsules et aussi être adsorbés sur des polymères organiques poudreux, les talcs, bentonites et autres supports minéraux.
Pour la préparation des compositions selon l'invention, le composé de formule (I) peut être mélangé aux excipients généralement employés en cosmétique. Les compositions cosmétiques de l'invention peuvent donc contenir des additifs eu des adjuvants usuels en cosmétologie, comme par exemple des agents antibactériens ou des parfums mais aussi des lipides d'extraction et/ou de synthèse, des polymères gélifiants et viscosants, des tensio-actifs, des émulsifiants, des actifs hydro- ou lipo-solubles, des extraits de plantes, des extraits tissulaires, des extraits marins, ou des actifs de synthèse.
L'utilisation dermocosmétique, vétérinaire ou nutraceutique des composés de formule (I) comprend tous les produits de soin du corps et de la peau, y compris les produits solaires, protecteurs et bronzants, les produits anti-âge, antiséborrhéiques, toniques, les produits assurant l'amélioration de l'aspect de la peau y compris le traitement acnéique, le traitement des rougeurs cutanées, le traitement du cuir chevelu et celui de la chute des cheveux.
Les compositions cosmétiques, dermocosmétiques, nutraceutiques ou aussi comprendre vétérinaires de d'autres agents pour leur action, anti-rides, la présente invention actifs complémentaires la protection solaire, peuvent choisis
1'effet par exemple pour l'activité antiradicalaire et antioxydante,
1'activité respiration anti-irritante, la nutrition cellulaire, la cellulaire, l'hydratation (tréhalose ou autres sucres, les régénération cellulaire, les traitements anti-séborrhéiques, ainsi que d'autres agents actifs ayant une action sur la tonicité cutanée et la protection du cheveu.
Les compositions cosmétiques de la présente invention sont, de préférence, à utiliser quotidiennement en les appliquant une ou plusieurs fois par jour.
Les compositions cosmétiques de la présente invention sont très bien tolérées, elles ne présentent aucune phototoxicité et leur application sur la peau, pour des périodes de temps prolongées, n'implique aucun effet systémique.
En résumé, l'invention se rapporte donc à l'utilisation des composés de formule (I) tel que le digénéaside pour la préparation d'une composition cosmétique, dermocosmétique, nutraceutique ou vétérinaire destinée à prévenir et/ou traiter les pathologies et désordres résultant du vieillissement naturel ou prématuré de la peau ou des cheveux tant sur l'aspect éclat du teint, fragilité capillaire que sur les aspects pigmentaire, adipeux, circulatoire ou immunitaire.
La présente invention est maintenant illustrée par les exemples donnés ci-après.
Exemple 1 : Evaluation de l'effet sur la mélanoqénèse dans des cellules B16 (dosage de mélanine)
Le but est d'évaluer l'effet du digénéaside sur la mélanogénèse dans un modèle in vitro de mélanocytes murins B16, cultivés en monocouche. Ce modèle est utile pour identifier des produits dépigmentants ou pour atténuer les taches pigmentaires liées à l'âge.
Le produit à tester est appliqué pendant 72 heures, puis la mélanine produite et libérée est dosée (dans les surnageants, la quantité totale de protéines est également dosée, dans les culots cellulaires).
Au préalable, il est vérifié que les doses à tester . sont non cytotoxiques, en évaluant la viabilité cellulaire par un test XTT.
> Effet sur la viabilité cellulaire (mélanocytes B16)
Des mélanocytes B16 sont ensemencés en microplaque 96 puits, puis sont traités pendant 72h avec le produit, et enfin le test du XTT est réalisé.
Un contrôle positif de cytotoxicité est utilisé, le Diméthylsulfoxyde à 10% (DMSO).
Tableau 1 : viabilité cellulaire sur mélanocytes B16 | Données test XTT I
B16 après 72h de traitement | DO Moyen | i' | ||||
V -A,’ / | 1¾¾¾¾¾¾¾ |
Contrôle de cytotoxicité
Extrait GreenPharma
Voir Figure 5 : Viabilité cellulaire sur mélanocytes B16
Le produit testé n'est pas cytotoxique pour les cellules B16 après 72h de traitement.
> Effet sur la libération de mélanine (mélanocytes B16)
Les cellules B16 sont ensemencées en plaques 24 puits, puis mises en contact avec l'actif pendant 72 heures, et enfin les dosages de mélanine et des protéines sont effectués.
Un contrôle positif inhibant la mélanogénèse (inhibiteur de tyrosinase) est utilisé, l'acide kojique à 1 mM.
Tableau 2 : activité dépigmentante
Voir Figure 6 -.Activité dépigmentante
Un effet dépigmentant aux 3 doses testées apparaît, après 72h de traitement dans ce modèle :
-17%, -15% et -11% avec 30, 100 et 300 pg/mL respectivement (de manière très hautement significative *** ou hautement significative **).
Dans les conditions de cette étude, le digénéaside permet d'inhiber la mélanogénèse (après 72h d'application sur mélanocytes B16). Ainsi, ce produit est efficace pour réduire la synthèse et la libération de mélanine, et par conséquent est potentiellement capable de prévenir les taches de pigmentation photo-induites, ou de favoriser l'éclat du teint.
Exemple 2 : Evaluation de l'effet sur la libération de VEGF et IL8 par des kératinocytes soumis à un stress osmotique
Le but est d'évaluer le potentiel effet protecteur du digénéaside vis-à-vis du relargage de médiateurs inflammatoires dans un modèle in vitro de kératinocytes humains normaux (KHN) soumis à un stress induit par le sorbitol, mimant des conditions de stress osmotique. Dans ces conditions, les KHN libèrent des cytokines pro-inflammatoires, dont le VEGF (Vascular Endothélial Growth Factor) et l'IL8 (interleukine 8).
Le produit à tester est appliqué en préventif pendant 24 heures, puis est ré-appliqué pour 24h pendant que les cellules sont stressées au sorbitol. La cytokine IL8 et le facteur de croissance VEGF sont dosés dans les surnageants de culture (méthode ELISA, dosages rapportés à la quantité totale de protéines dans les culots cellulaires).
Au préalable, les concentrations à tester non cytotoxiques sont déterminées en vérifiant la viabilité cellulaire par un test XTT.
> Effet sur la viabilité cellulaire (kératinocytes)
Des kératinocytes sont ensemencés en microplaque 96 puits (à la même densité cellulaire que par la suite) , puis sont traités pendant 48h avec le produit, et enfin le test du XTT est réalisé.
Un contrôle positif de cytotoxicité est utilisé,
Diméthylsulfoxyde à 10% (DMSO).
Tableau 3 : viabilité cellulaire sur kératinocytes le
Données test XTT
KHN après 48h de traitement
Extrait GreenPharma
Contrôle de cytotoMcité Contrôtejiejjrolifération
9.
DO (4S0-65C Moyenne
I ïô | 1 0,035 | |
J52S | ||
1 | ||
Voir Figure 7 : viabilité cellulaire sur kératinocytes
Le produit testé n'est pas cytotoxique aux conditions testées.
> Effet sur la libération de cytokines (VEGF et IL8) suite à un stress osmotique (kératinocytes)
Les kératinocytes sont ensemencés en - plaque 96 puits, puis pré-traités avec l'extrait pendant 24 heures. L'actif est à nouveau appliqué pendant 24h, durant lesquelles les cellules subissent un stress osmotique au sorbitol. Enfin, les surnageants sont prélevés afin de procéder aux dosages des médiateurs IL8 et VEGF (et les culots cellulaires sont prélevés pour doser les protéines totales).
Tableau 4 libération d'IL8 et de VEGF par les kératinocytes
Voir Figure 8 : libération d'IL8 par les kératinocytes
Données dosage VEGF rapporté aux prot
[ [VEGF] (pg/mL/mg prot)
Dosage de VEGF
Voir Figure 9 : libération de VEGF par les kératinocytes
En cas de stress osmotique, on observe un potentiel protecteur avec la plus faible dose testée de 30pg/mL : baisse significative de la libération kératinocytaire de l'IL8 et du VEGF induites par le sorbitol, de -22% et -36% respectivement (significatif * ou à la limite de la significativité p=0,061).
En conclusion, dans les conditions de cette étude, le produit d'intérêt à faible dose permet de lutter contre la libération de médiateurs inflammatoires majeurs, l'IL8 et le VEGF, dans un contexte de stress osmotique.
Ce produit peut donc présenter des effets hydratant et/ou antiâge et être efficace pour : lutter contre les réactions cutanées liées à la peau sèche (atopie, xérose, dermatose, psoriasis...), réduire ou prévenir des phénomènes cutanés locaux comme 1'hyper-perméabilité vasculaire, la stimulation excessive de la microcirculation ou de la néo-vascularisation (rougeurs de la peau...).
Exemple 3 : Effet sur les réseaux mitochondriaux et lysosomaux (kératinocytes ou fibroblastes), sur l'autophagie et la synthèse d'ATP (dans des fibroblastes)
L'objectif est d'évaluer le potentiel effet protecteur du digénéaside :
- d'une part vis à vis des réseaux mitochondriaux et lysosomaux de kératinocytes ou de fibroblastes irradiés aux UV.
Pour ce faire, le produit à tester est appliqué en préventif pendant 24 heures, puis les cellules sont irradiées, le produit est ré-appliqué pour 24h et enfin les réseaux mitochodriaux ou lysosomaux sont marqués afin de visualiser les effets (marquages au MitoTracker ou au LysoTracker).
- d'autre part sur l'activité autophagique (lysosomes) et la synthèse d'ATP de fibroblastes.
Pour ce faire, les fibroblastes sont traités avec le composé d'intérêt pendant 48h, puis l'ATP produit est dosé ou le marquage à la sonde MDC (monodansyl cadaverine) est réalisé (marquage des vésicules autophagiques, les lysosomes).
Au préalable, avant ces expérimentations de dosages ou de marquages, les doses de digénéaside à tester non cytotoxiques sont déterminées en vérifiant la viabilité cellulaire par un test
XTT (voir plus haut).
- Effet sur les réseaux mitochodriaux et lysosomaux (sur kératinocytes ou fibroblastes irradiés)
Les cellules, kératinocytes ou fibroblastes, sont ensemencées en boîtes de Pétri, puis pré-traitées avec l'extrait pendant 24 heures. Après irradiation UVA, l'actif est à nouveau appliqué pendant 24h et enfin les marquages des mitochondries ou des lysosomes sont effectués.
Le contrôle positif utilisé, protégeant du stress oxydatif engendré par les UVA (effets délétères), est la vitamine C (acide ascorbique) à 500 μΜ.
Effet sur les mitochondries
- Fibroblastes :voir Figure 1
- Kératinocytes : voir Figure 2
Avec le digénéaside, un effet protecteur du réseau cellulaire mitochondrial vis-à-vis de l'irradiation apparaît aux 2 doses testées (de 30 et de 100 pg/mL) , dans les deux modèles (kératinocytaire et fibroblastique).
Effet sur les lysosomes
- Fibroblastes : voir Figure 3
- Kératinocytes : voir Figure 4
Avec le digénéaside, il apparaît aussi une limitation des effets néfastes de l'irradiation, aux 2 concentrations testées, sur kératinocytes et fibroblastes.
Dans les conditions de cette étude, le traitement des cellules durant 48h (préventif et curatif) avec le digénéaside permet de protéger les réseaux mitochondriaux et lysosomaux.
Ainsi, ce produit est efficace pour réduire les effets d'un stress oxydatif comme les radiations UVA, et par conséquent est potentiellement capable de promouvoir l'activité mitochondriale ou lysosomale (autophagie).
- Effet sur l'autophagie et la synthèse d'ATP (sur fibroblastes non irradiés)
Les fibroblastes sont ensemencés en plaques 96 puits, puis traités avec le digénéaside pendant 48 heures et enfin le marquage des lysosomes (sonde MDC) ou le dosage d'ATP sont effectués.
Un contrôle positif est utilisé pour le marquage MDC, à 10, 25 ou 40 μΜ.
Tableau 5 : activité autophagique dans les fibroblastes
DnnnÀi
FHN traités 48h
Marquage MDC (RFU)
Movennp SD
T-Test /tém. NI Mov ons7
Voir Figure 10 : Activité autophagique dans les fibroblastes
Le traitement avec le digénéaside (48h) permet de favoriser le processus basal d'autophagie dans des fibroblastes, aux doses de 10 à 100 pg/mL.
Tableau 6 : effet sur la synthèse d'ATP dans les fibroblastes
Données dosage ATP
FHN traités 48h | D. brutes | Dosage de ΓΑΤΡ (nM) | ||
(mov. RLUI | ||||
Movenne | SD / | - t . i | ||
Voir Figure 11 : effet sur la synthèse d'ATP dans les fibroblastes
Suite à l'application du composé d'intérêt pendant 48h, il apparaît une stimulation de la synthèse basale d'ATP dans des fibroblastes, aux doses de 10 à 100 pg/mL.
Ces résultats confortent les effets observés sur les réseaux de mitochondries et de lysosomes.
Exemple 4 : Effet sur la synthèse de triglycérides par des adipocytes blancs en cours de différenciation
Le but est d'évaluer in vitro le potentiel effet amincissant du digénéaside dans un modèle d'adipocytes blancs humains en différenciation (extraits du tissu adipeux sous-cutané).
Le produit à tester est appliqué pendant 72 heures, durant lesquelles les pré-adipocytes commencent à se différencier en adipocytes et à synthétiser des triglycérides, puis l'extrait est à nouveau appliqué pendant la nutrition (maturation). La synthèse de triglycérides est évaluée par test Adipored.
La viabilité est vérifiée (test alamar blue) tout au long de l'expérience.
> Effet sur la synthèse de triglycérides (adipocytes)
Les pré-adipocytes sont ensemencés en plaques 24 puits, puis mis en contact avec le composé pendant 72 heures (de J0 à J3) en condition différenciante et à nouveau les jours suivant en condition de nutrition (maturation, à partir de J4) . Le dosage des triglycérides est effectué chaque jour (de J0 à J4).
Un contrôle positif d'inhibition est utilisé, la caféine à 1 mM.
Tableau 7 : effet sur la synthèse des triglycérides
Dosage des triglycérides d.brutes AdipoRed (RFU) %/ti
Voir Figure 12 : effet sur la synthèse des triglycérides
Le composé testé inhibe la synthèse de triglycérides par les pré-adipocytes en cours de différenciation en adipocytes, surtout en début de phase de nutrition/maturation : à J4 la diminution est de -16%, -17% et -24% de manière significative (* ou **) avec 10, 30 et 100 pg/mL respectivement. En conclusion, le composé d'intérêt présente un potentiel amincissant. Ceci est particulièrement intéressant pour atténuer les capitons ou restaurer l'ovale du visage ; événements marquant liés à l'âge.
Claims (16)
- REVENDICATIONS1.Composition cosmétique, vétérinaire ou nutracétique caractérisée en ce qu'elle contient, dans un véhicule acceptable, au moins un composé de formule (I) :(I) ledit composé de formule (I) pouvant être sous forme de sel (s), ladite composition permettant d'exercer un effet anti-âge sur la peau ou les phanères humains ou animaux, en restorant une peau ayant subi un vieillissement naturel ou induit et/ou en protégeant une peau saine des effets du temps et/ou en hydratant une peau saine ou atopique et/ou en dépigmentant partiellement la peau et/ou en retirant les imperfections liées à l'accumulation locale d'amas graisseux.
- 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que, lorsque le composé de formule (I) est présent sous forme de sel(s), il constitue un sel d'addition basique, ladite base étant choisie dans le groupe formé par l'hydroxyde de sodium ou de potassium, la triéthylamine ou la tertiobutylamine.
- 3. Composition selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que le (s) composé(s) de formule (I) est contenu dans un extrait d'algue(s).
- 4. Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce que l'extrait d'algue(s) provient d'une algue rouge de l'ordre des Ceramiales, des Gelidiales ou des Gigartinales.
- 5. Composition selon l'une des revendications 3 ou 4, caractérisée en ce que l'extrait d'algue(s) est un extrait deSolieria chordalis, Kappaphycus alvarezii, Polysiphonia lanosa,Delesseria sanguinea,Pikea robusta, Gïgartina stellata, Chondrus crispus, Ceramium botryocarpum, Acrochaetium moniliforme,Asparagopsis armata,Palmaria palmata, Hypnea muciformis,GrateloupiaCaloglossa leprieurii, Osmundea pinnatifida,PorphyridiumPorphyraEucheuma denticulatum,Mastocarpus stellatus, Gelidium sesguipedale ou encore deGelidium cartilagineum.
- 6. Composition selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce qu'elle contient de 0,01 à 5% en poids de composé(s) de formule (I) par rapport au poids total de la composition.
- 7. Composition selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que le (s) composé (s) de formule (I) est sous forme de poudre.
- 8. Composition selon la revendication 7, caractérisée en ce le (s) composé (s) de formule (I) est absorbé sur des polymères organiques poudreux, notamment des talcs ou des bentonites.
- 9. Composition selon l'une des revendications 7 ou 8, caractérisée en ce que le (s) composé (s) de formule (I) est sous forme encapsulée, le moyen d'encapsulation étant choisis dans le groupe formé par des microsphères, des liposomes, des glycosphères, des chylomicrons, des macro-, micro- et nanoparticules et des macro-, micro- et nanocapsules.
- 10. Composition selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisée en ce qu'elle contient au moins un agent actif autre qu'un composé de formule (I) pris dans le groupe formé par les agents de protection solaire, les agents antirides à activité antiradicalaire, antioxydante, anti-irritante, les agents ayant une action sur la pigmentation et les agents après-soleil.favorisant la nutrition cellulaire, la respiration cellulaire, l'hydratation cellulaire, la régénération cellulaire, les traitements anti-séborrhéiques, la tonicité cutanée, la protection des cheveux, les agents cicatrisants, l'acide hyaluronique, les acides aminés, les agents anti-âge, les agents
- 11. Composition selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisée en ce qu'elle est formulée sous forme de gélules, crème, gel, lotion, lait, solution, onguent, huile corporelle, shampoing, savon, bâton protecteur des lèvres, crayon pour maquillage, émulsion bi-phasique, huile dans eau ou eau dans huile, émulsion tri-phasique, huile corporelle, shampoing, masque, pommade, bâton, nanocapsules, liposomes ou patch transdermique pour applications topiques.
- 12. Composition selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisée en ce qu'elle contient des mucopolysaccharides, des vitamines, des céramides, des huiles végétales et des agents efficaces dans le domaine de l'anti-âge.
- 13. Composition selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisée en ce qu'elle contient des agents antibactériens, des parfums, des lipides d'extraction et/ou de synthèse, des polymères gélifiants et viscosants, des tensio-actifs, des émulsifiants, des extraits de plantes, des extraits tissulaires, des extraits marins, des actifs hydro- ou lipo-solubles, des actifs de synthèse.
- 14. Composition selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisée en ce qu'elle est administrable par voie topique ou orale.
- 15. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) utilisé dans une composition selon l'une des revendications 3 à 5, caractérisé en ce que l'on traite la (ou les) algue (s) utilisée (s) par extraction solide-liquide en milieu hydroalcoolique.
- 16. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que le milieu hydroalcoolique utilisé est une solution aqueuse d'éthanol à une concentration choisie entre 0 et 40% en volume.
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