FR2837702A1 - Composition cosmetique pour le soin de la peau plus particulierement comme soin de nuit - Google Patents
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Abstract
La présente invention concerne une composition cosmétique caractérisée en ce qu'elle contient un extrait de Mirabilis jalapa, un extrait de Laminaria cloustoni, et un extrait de Citrus reticulata. La présente invention concerne également l'utilisation de ladite composition pour prévenir ou lutter contre le vieillissement cutané et comme soin de nuit.
Description
COMPOSITION COSMÉTIQUE POUR LE SOIN DE LA
PEAU PLUS PARTICULIÈREMENT COMME SOIN DE NUIT.
La présente invention concerne une nouvelle composition cosmétique, préférentiellement destinée au visage la nuit, et qui permet à la peau de se ressourcer et de luLter efficacement contre le vieillissement cutané grâce à l' association synergique de 3 actifs végétaux et marins que sont la belle de nuit (Mirabilis jalapa), une algue brune (Laminaria cloustoni) et la
mandarine (Citrus reticulata).
Par composition cosmétique "qui permet à la peau de se ressourcer et de lutter efficacement contre le vieillissement cutané", on entend toute composition cosmétique capable d'offrir à la peau tous les éléments dont elle a besoin pour lutter contre les stress capables d'induire un vieillissement cutané. Ces éléments sont principalement les facteurs environnementaux: pollution, stress oxydatif, radicaux libres, UV, capables d'engendrer progressivement l 'apparition de rides, ridules, sécheresse cutance, relâchement des tissus, diminution des défenses immunitaires cutanées Il y a deux facons de luLter contre le vieillissement cutané: une action curative et une
action préventive.
L' action curative permet à la peau de limiter l'action de ces différents stress au moment o ils agissent, par exemple les anti-radicaux libres capables de piéger le radical au moment o il se présente à la surface cutanée. Les soins de j our sont
principalement capables de cette action curative.
On peut aussi agir de facon préventive en choisissant d' offrir à la peau un cocktail d' actifs la nuit qui va lui permettre de "recharger ses défenses naturelles" et d'être prête à affronter dès le matin les différents stress diurnes. Apporter à la peau ses actifs la nuit n'est pas anodin. En effet, on sait que la peau, comme le reste du corps humain, est soumise à des rythmes biologiques appelés aussi rythmes circadiens. Ces rythmes font varier la physiologie cutanée (pH, taux de sébum cutané) mais aussi la réactivité de la peau selon l'horaire. Ainsi, on constate une augmentation considérable dans lintensité de renouvellement de la peau la nuit. C'est à ce moment que le taux de mitoses
est maximal au niveau de l'épiderme.
De même, la micro-circulation capillaire cutanée est à son maximum la nuit, son pic cTrcadien se situant vers 23 H 30, c'est le signe d'une grande activité cutanée, les échanges cellulaires sont
également à leur maximum.
En fait, tous les pics d'activité (mitoses, cTrculation capillaire) et le maximum des taux d'acides aminés et de triglycérides cutanés se situant la nuit, la peau favorise pendant cette période de repos ses fonctions de renouvellement et divers processus métaboliques. En outre, c'est pendant ces mêmes heures que la surface cutanée est plus vulnérable à certains agents, et plus facilement pénétrable par certains autres. En effet, le taux de cortisol, défense de notre organisme vis-à-vis de l'inflammation, est diminué la nuit et le cycle nocturne contribue à une amplification
des mécanismes inflammatoires.
La peau a donc des besoins spécifiques la nuit provoqués par un taux de renouvellement cellulaire
élevé et par la baisse des défenses cutanées.
Les travaux de la Demanderesse ont permis de mettre en évidence que l' association des 3 actifs (Mirabilis jalapa, Laminaria cloustoni et Citrus reticulata) permet de luLter à la fois contre la baisse des défenses cutances, daider la peau à assurer un taux de renouvellement plus important, tout en lui apportant les ressources énergétiques nécessaires à laugmentation
des activités métaboliques.
- Ces différents éléments aident la peau à se réparer la nuit pour mieux assurer son rôle de défense
pendant la journée.
L' invention concerne tout particulièrement une composition cosmétique contenant un extrait de Mirabilis jalapa, un extrait de Laminaria cloustoni et
un extrait de Citrus reticulata.
Mirabilis Jalapa aussi appelé selle de nuit est une fleur originaire du Pérou. Elle est présente en Europe depuis 1525, et a la particularité de ne s'ouvrir
quà la fin de la journée, ce qui explique son nom.
De façon avantageuse, l'extrait de Mirabilis Jalapa que contient la composition objet de la présente invention est issu de la partie aérienne de Mirabilis jalapa et, de préférence, il s'agit d'un extrait liposoluble. Cet extrait liposoluble est avantageusement obtenu selon le protocole suivant: (i) broyage à 0,25,um de la partie aérienne de Belle de nuit, (ii) macération pendant 72 heures à 40 C dans de léthylhéxyl palmitate (4 unités vol./ unité poids de Belle de nuit), (iii) différentes filtrations dont la dernière à 1,um. L'extrait liposoluble de Mirabilis Jalapa utilisé dans la composition selon l' invention a l' aspect d'un liquide huileux de couleur vert-jaune présentant odeur caractéristique. Il est titré en G-sitostérol à 500 à 1.000 ppm, le G-sitostérol étant un phytostérol caractéristique présentant des propriétés anti inflammatoires. Il a été démontré in vivo que l 'application de l'extrait de Mirabilis Jalapa juste avant la nuit permet à la peau de diminuer son taux de prostaglandine PGE2 médiateur pro-inflammatoire au niveau cutané. Le taux de PGE2 dosé le soir reilète le niveau de stress inflammatoire subit par la peau agressée par l'environnement tout au long de la journée. Le dosage de PGE2, le lendemain matin, est significativement plus faible (d'un facteur 2) dans les échantillons traités par rapport au témoin. Le dosage matinal permet d'évaluer la capacité réparatrice améliorée de la peau
la nuit après application de Mirabilis Jalapa.
Laminaria cloustoni est une algue brune de la famille des laminaires. Elle vit en Norvège, Ecosse et Bretagne o elle est récoltée. Elle est réputée pour
sa grande résistance et sa longévité.
L'extrait de Laminaria cloustoni que contient la composition cosmétique, objet de la présente invention est issu de l'algue entière et de préférence, il s'agit d'un extrait sec hygroscopique. Cet extrait peut être obtenu selon le protocole suivant: (i) lavage de l'algue brune, (ii) broyage de l'algue brune, (iii) extraction aqueuse et
(iv) atomisation.
L'extrait sec de Laminaria cloustoni ainsi obtenu a l' aspect d'une poudre fine, de couleur beige clair à odeur protéinée. Il présente les caractéristiques analytiques suivantes: - pH < 7 - Densité (à 20 C produit non tassé) = 0,41
- Teneur en azote = 9, %.
C'est en partant de l'analogie entre les plasmodermes de Laminaria cloustoni et les jonctions communicantes (" gap jonctions ") au niveau de l'épiderme humain (tous deux systèmes de canaux permettant la communication inter-cellulaire) que la Demanderesse a pensé à l'intérêt d'un extrait de Laminaria cloustoni pour améliorer la communication intercellulaire cutanée et donc favoriser le maximum d'échanges cellulaires. L'extrait de Laminaria Clousoni permet donc à la peau d'améliorer sa différenciation cellulaire en maintenant une bonne communication intercellulaire et, ce, en particulier la nuit, o la mobilisation des cellules en terme déchanges dinformations liées aux divisions cellulaires et à la
différentiation épidermique est à son maximum.
La composition cosmétique, objet de la présente invention contient, en plus d'un extrait de Mirabilis jalapa et dun extrait de Laminaria cloustoni, également un extrait de Citrus reticulata. Cet extrait riche en vitamine C, en sucres et oligo-éléments permet d'apporter à la peau les éléments énergétiques dont elle a besoin la nuit pour se ressourcer et se réparer afin
d' assurer pleinement son rôle protecteur diurne.
De facon avantageuse, l'extrait de Citrus reticulata contenu dans la composition cosmétique, objet de la présente invention est un extrait du fruit pelé entier de mandarine, il s'agit d'un extrait hydrosoluble. Cet extrait est obtenu avantageusement extraction à froid en mélangeant 1 kg de fruit frais avec 1 kg de solvant ce qui permet d'obtenir 1 kg de concentré, lui-même dilué au 1/5 dans le même solvant
pour donner l'extrait de Citrus reticulata.
L'extrait hydrosoluble de Citrus Reticulata utilisé dans la composition selon linvention, a un aspect liquide jaune-orangé et une odeur caractéristique. Il présente les caractéristiques analytiques suivantes: matières sèches = 90-100 g;
- matières minérales totales = 0,01-2 g.
La composition cosmétique, objet de la présente invention contient: - de l'ordre de 0,1 à 10 % en poids et de préférence de 0,5 à 5 % en poids d'un extrait de Mirabilis jalapa, - de l'ordre de 0,1 à 10 % en poids et de préférence de 0,5 à 5 % en poids d'un extrait de Laminaria cloustoni et de l'ordre de 0,1 à 10 % en poids et de préférence de 0,5 à 5 % en poids d'un extrait de Citrus reticulata. De préférence, la composition cosmétique, objet de la présente invention contient au moins un actif végétal choisi dans le groupe constitué par un extrait végétal ou une protéine végétale présentant une activité inhibitrice de la trypsine, un extrait de Mourera flaviatilis, un extrait de buddleja (Buddleja davidii), un extrait d'anChyllis (Anthyllis vulneraria), un extrait de Bocoa prouacensis, de l'huile de Péqui, un extrait de cardère sauvage (Dipsacus sylvestris nill.)
et un extrait de galanga (Alpinia officinarum).
Ainsi, la composition de l' invention peut contenir un extrait végétal ou une protéine végétale présentant une activité inhibitrice de la trypsine. Un extrait végétal ou une protéine végétale présentant une activité inhibitrice de la trypsine présentent des activités anti-élastasique et anti-inflammatoire, ils sont donc utiles dans la protection ou la régénération du collagène de la peau et donc utiles pour la préparation d'une composition cosmétique, notamment anti-vieillissement ou hydratante. Les extraits végétaux ou les protéines végétales présentant une activité inhibitrice de la trypeine utilisables dans le cadre de la présente invention sont décrits dans la demande de brevet français N 00/07156. L'enseignement relatif auxdits extraits végétaux et auxdites protéines
végétales est incorporé par référence.
L'extrait de Mourera fluviatilis (plante aquatique poussant dans les eaux tumultueuses des rivières guyanaises) utilisable dans la composition cosmétique selon l' invention est avantageusement un extrait hydrosoluble obtenu, après une étape d' extraction aqueuse et une étape de purification/ filtration, à partir de la plante entière sans les racines broyée. Cet extrait agit spécifiquement sur les couches cornées épidermiques et exerce à la fois un effet réqulateur d'hygroscopicité, un effet hydroréqulateur substantif, un effet ralentisseur de
déshydratation et un effet prolongateur dhydratation.
Dans le cadre de la présente invention, il permet de freiner la déshydratation cutance induite par le vieillissement. L'extrait de buddleja (Buddle ja davidii) utilisable dans le cadre de la présente invention est avantageusement un extrait hydrosoluble de buddleja obtenu à partir de plantes séchées et plus particulièrement à partir de fleurs et de feuilles séchées. Les fleurs et feuilles séchées sont broyées puis une extraction éthanol/ eau est réalisoe. L'extrait ainsi obtenu est concentré après une étape de filtration et, éventuellement, une étape de formulation dans la glycérine. L'extrait hydrosoluble de buddleja utilisable dans la composition de l' invention contient des iridoïdes (agents anti-bactériens), des flavonoïdes (agents anti-inflammatoires, anti-oxydants et inhibiteurs de tyrosinase), des esters de l'acide caféique (agents anti-bactériens, anti-inflammatoires et anti-oxydants) et des triterpénoïdes (agents anti inflammatoires). L'anChyllis (Anthyllis vulneraria), plante fleurie courante en France et en Europe de la famille des Eabacoes est riche en polyphénols, et principalement en flavonols connus pour leurs propriétés anti-oxydantes et inhibitrices deuzymes de détoxifications. Ainsi, la structure des flavonols leur procure des activités dinLibition de xanthine oxydase et lipoxygénase, ces enzymes catalysant les réactions engagées dans la chaîne inflammatoire. L'extrait d'anthyllis utilisable dans la composition de l' invention est capable de stimuler les molécules responsables de l'hydratation de la peau (synChèse augmentée de glycosaminoglycanes et de protéoglycanes) et de limiter la libération et de normaliser le taux d'interleukine-1, cytoLine pro inflammatoire présente au début de la cascade inflammatoire. L'extrait danthyllis utilisable dans les compositions de l' invention est avantageusement un extrait hydrosoluble obtenu à partir de fleurs et, plus particulièrement, de fleurs séchées. Les fleurs séchées sont broyées, la poudre de fleurs ainsi obtenue est solubilisoe dans de l'eau. La solution subit une hydrolyse enzymatique à lt aide d'une protéase avant d'être mise à décanter. La phase soluble contenant les moléaules actives est concentrée avant de subir une filtration stérilisante. L'extrait hydrosoluble danChyllis ainsi obtenu présente les caractéristiques suivantes: de 18 à 27 g/l de matières sèches, de 9 à 14 g/l de protéines, de 2,5 à 5 g/l de sucres totaux et un
pH compris entre 6,5 et 7,5.
Le Bocoa prouacensis, arbre de la famille des Caesalpiniaccae est une espèce endémique du bouclier des Guyanes. La composition cosmétique objet de la présente invention peut contenir un extrait de Bocca prouacensis et, plus particulièrement, un extrait hydroglycolique issu de feuilles de Bocoa prouacensis présentant les caractéristiques analytiques suivantes: matières sèches = 22 g/l, polyphénols = 1250 mg/ml et pH = 5,9. Cet extrait présente à la fois une activité anti collagénase et une activité anti-radicalaire qui en font un composant utile pour luLter contre le vieillissement cutané. Il peut être obtenu de la façon suivante: (i) Solubilisation dans un milieu eau/ aleool, (ii) traitement thermique durant 1 à 4 heures entre 40 et C, (iii) Séparation des phases solubles et insolubles par filtration, décantation ou centrifugation et (iv)
Filtration stérilisante sur membrane 0,45 m.
L'arbre fruitier du nom commun de Péqui (Caryoca brasiliens ou Caryoca corieaceum) appartient à la famille des Caryocaceae qui comporte 20 espèces disséminées dans l'Amazonie du Nord et du Nord-Ouest du Brésil. L'huile de Péqui est obtenue par pression à froid de la pulpe du fruit de Péqui. Les acides gras présents en majorité dans cette huile sont des acides gras mono-insaturés du type oléique. Cette huile, comme toutes les huiles végétales, apporte douceur, corps et texture aux crèmes et lotions cosmétiques. De plus, elle
protège la peau contre la déshydratation.
La composition objet de la présente invention peut également contenir un extrait de cardère sauvage (Dipsacus sylvestris Mill.). La cardère sauvage également appelée " Peigne-de-loup ", " Baignoire de Vénus " ou " Cabaret-des-oiseaux " est une plante herbacoe bisannuelle de 60 à 150 cm que l' on trouve
partout en Europe au bord des chemins et des fossés.
L'extrait de cardène sauvage utilisable est un extrait hydroglycolique obtenu par digestion dans un mélange hydroglycolique à partir de la partie aérienne de la plante finement broyée, puis il est décoloré, clarifié, standardisé et conservé. Cet extrait est riche en tanins qui lui confèrent des activités stimulante, anti oxydante utile pour luLter contre le vieillissementet protectrice. Le galanga (Alpinia officinarum) de la famille des Zingibéracées est un arbrisseau originaire de l'Est de l'Asie dont le rhizome noir et noueux ressemble à celui du gingembre. L'extrait de galanga utilisable dans la composition de l' invention est un extrait hydrosoluble de rhizome de galanga contenant des flavonoïdes. Cet extrait de galanga est obtenu par extraction contrôlée par le mélange eau/ propylène
glycol suivie d'une étape de centrifugation/ filtration.
Cet extrait de galanga est riche en phytostérols et flavonoïdes (1,5 g/l équivalent rutine) tels que la galangine et le kaempférol et en huiles essentielles comme le bornécl, le cinéole, le caryophyllène et le géranlol. La composition selon l' invention peut encore comprendre un ou plusieurs agents de formulation ou additifs d' usage connu et classique dans les compositions cosmétiques et dermatologiques telles que, à titre d'exemple et de facon non limitative, des adoucissants, des colorants, des actifs filmogènes, des tensio-actifs, des conservateurs, des émulelonnants, des huiles, des glycols, des vitamines comme la vitamine E, etc... Grâce à ces connaissances en matière de cosmétiques, l'homme du métier saura quels agents de formulation aj outer aux compositions de linvention et en quelles quantités en fonction des propriétés recherchées. De par sa composition, le parfum sera choisi en fonction de ses caractéristiques non seulement olfactives mais surtout aromathérapiques, en particulier par addition de plantes calmantes et relaxantes, telles que tilleul, fleur d'oranger, ylang ylang, etc La composition selon l' invention peut se présenter sous toute forme connue de l'homme du métier dans le domaine de la cosmétologie et de la dermatologie sans autre restriction galénique que l 'application plus particulièrement au visage. De façon avantageuse, la composition selon l' invention se présente sous la forme d'une crème, d'un lait (émulelon huile dans l'eau et eau dans l'huile), d'une lotion, dun spray, d'un gel, etc La présente invention concerne également l'utilisation d'une composition selon l' invention pour prévenir et lutter contre le vieillissement cutané et
également comme soin de nuit.
La présente invention concerne également l'utilisation d'extraits de Miratilis jalapa, Laminaria cloustoni et Citrus reticulata, pour la préparation d'une composition cosmétique ou dermatologique pour
prévenir et luLter contre le vieillissement cutané.
D'autres avantages et caractéristiques de l' invention apparaîtront à la lecture des exemples qui suivent et qui concernent l'effet de l'extrait de Laminaria cloustoni sur les jonctions communicantes et des exemples de formulation qui sont donnés à titre illustratif et ne sauraient être interprétés comme
limitant la portée de linvention.
I. Effet de l'extrait de Laminaria cloustoni sur les jonctions communicantes (" gap jonctions ") au
niveau de léépiderme humain.
L'effet de l'extrait de Laminaria cloustoni a été étudié in vitro et in vivo en suivant les protéines clés des jonctions communicantes que sont les
connexines 43.
I.1. Etude in vitro.
a. KératinocyLes en culture.
A partir d'une biopsie de peau humaine, des cultures primaires de kératinocytes sont obtenues par digestion euzymatique. Les essais ont été réalisée sur les kératinocyLes entre le 2ième et le 4ième passage afin
d'assurer une reproductibilité des expériences.
b. Dosage des connexines 43.
Les kératinocyLes humains en culture sont récupérés après trypsinisation et centrifugation. Le culot cellulaire est resuspendu dans 10 ml de milieu supplémenté avec de 1'EGF, de l'hydrocortisone et de l'insuline. Après homogéncisation, les cellules sont réparties dans des plaques multipuits à raison de 1.105 cellules/ml. Les plaques sont incubées 24 heures. Le milieu est ensuite éliminé et du milieu frais est ajouté soit seul, soit additionné de différentes concentrations (4,ug/ml, 10,ug/ml et 20,ug/ml) d'extrait de Laminaria cloustoni. Les lots suivants sont constitués: - Lot 1: témoin négatif non traité, non irradié; - Lot 2: témoin positif irradié aux WB (150 mJ/cm2); - Lot 3: traité par 4,ug/ml d'extrait de Laminaria cloustoni et irradié aux WB (150 mJ/cm2); - Lot 4: traité par 10,ug/ml d'extrait de Laminaria cloustoni et irradié aux WB (150 mJ/cm2); - Lot 5: traité par 20,ug/ml d'extrait de Laminaria
cloustoni et irradié aux WB (150 mJ/cm2).
Après un temps d'incuLation de 24 heures, les cellules sont réaupérces par grattage puis soniquées
à 75 mV pendant 30 secondes.
Le dosage des connexines 43 est réalisé sur les homogénats cellulaires. Après extraction des protéines, la quantification des connexines 43 est réalisée par ELISA grâce à des anticorps monoalonaux les
reconnaissant spécifiquement.
c. Résultats.
Le dosage des connexines 43 est réalisé par ELISA à l' aide d'anticorps monoclonaux reconnaissants les connexines 43 spécifiquement. Les résultats sont regroupés dans le tableau 1 ci-dessous. Tableau 1: Dosage des connexines 43
dans les kératinocyLes humains en culture.
Connexines 43 % (pg/mg protéines) Lot 1: témoin négatif (non traité, non irradié) 342 57 Lot 2: témoin positif irradié aux UVB 230 1S* - 32 Lot 3: traité par 4,ug/ml d'extrait de Laminaria 258 13 + 12 cloustoni et irradié aux UVB: Lot 4: traité par 10 g/ml d'extrait de Laminaria 312 58** + 35 cloustoni et irradié aux UVB Lot S: traité par 20 g/ml d'extrait de Laminaria 298 + 44** + 29 cloustoni et irradié aux UVB * p<O,05 significativement différent par rapport au témoin négatif (Wilcoxon Rank Sum Test) ** p<O,05 significativement différent par rapport au témoin positif (Wilcoxon Rank Sum Test) Les résultats montrent que l' irradiation aux rayonnements UVB de kératinocyLes humains en culture entraîne une diminution significative du taux des connexines 43 (- 32%). L'extrait de Laminaria cloustoni aux concentrations 10 et 20,ug/ml a protogé la dégradation des connexines 43, les dosages ayant révélé la présence respectivement de 35 et 29% de connexines 43 comparativement au témoin irradié aux UVB. Une faible protection non significative est observée à la concentration de 4,ug/ml dextrait de aminaria
cl oustoni ( +12%).
I.2. Etude in vivo: expression de l'ARN
messager des connexines 43.
a. Explants de peau humaine.
Les blopsies de peau humaine proviennent d'une plastie aLdominale réalisée chez un sujet de sexe féminin, âgé de 20 ans. Après le prélèvement, les blopsies sont lavoes avec du sérum physiologique puis conservées dans un milieu de culture contenant 0,8% de gentamicine. Les essais sont réalisés le même j our pour conserver les caractéristiques physiologiques et
blochimiques du tissu cutané.
b. Expression de l'ARNm des connexines 43:
dosage par RT-PCR.
i. L'ARN cytoplasmique est extrait grâce au kit RN Easy Mini (QIAGEN) de la facon suivante: - resuspension du culot cellulaire dans un tampon RLN composé de Tris-HCl 50 mM, pH 8, contenant du NaCl 140 mM et du MgCl2 1,5 mM; - homogénoisation au vortex puis centrifugation à 2000 rpm pendant 2 minutes; - addition de 600,ul de tampon RLN contenant 10,ul de $ mercaptoéthanol; - addition de 430,ul d'éthanol à 95%; homogénoisation au vortex; - filtration de 600,ul du lysat cellulaire sur une colonne RN Easy; - centrifugation à 8000 rpm pendant 15 secondes; - lavage de la colonne avec le tampon RPE dilué au 1/5 dans l'éthanol à 95%; centrifugation à 8000 rpm pendant 15 secondes; - élution de la colonne avec 50,ul d'eau RNase-frce; - centrifugation à 8000 rpm pendant 1 min; récupération du filtrat dans des tubes stériles; addition de 50 U de Rnasin au filtrat pour inhiber les Rnases; - vérification du degré de pureté de l'ARN total et dosage quantitatif par la rtéalisation du psectre d'action de l'ARN entre 240 et 300 nm;
- conservation de l'ARN otal à -20 C.
ii. Préparation de l'ARN complémentaire (ADNc). Après une vérification de la pureté de l'ARN total ainsi que de la quantité extraite, les échantillons sont utilisés pour la préparation d'ADNc à partir de l'ARNm. Les diférentes étapes ont été réalisées comme suit: - prélèvement d'un aliquat correspondant à 125 mDD260 d'ARN de chaque échantillon; - addition de 1,5,ul d'oligo dT (0,5 ug/,ul); - incubatin à 70 C pendant 5 min; refroidissement immédiat dans la glace pendant 5 min; - addition de tampon réactionnel 5,ul, dNTP (10 mM) de chaque nucléctide 2,5,ul, RNAsin 40 unités, Na pyrophosphate 2,5,ul, Eau nuclease free qsp 24,ul; - incubation du mélange réactionnel à 42 C pendant 5 min; - addition de la reverse transcriptase (RT) (30 unités); - déroulement de la réaction selon le programme suivant: 1 heure à 42 C, 10 min à 37 C, 5 min à 95 C,
refroidissement à 4 C pour arrêter la réaction.
iii. Amplification de l'ADNc des connexines 43. Pour amplifier le gène spécifique des connexines 43, le mélange réactionnel est le suivant: tampon PCR contenant du MgCl2 10 pl, dNTP 2,ul, ADNc (purifié) 1,ul, Taq polymerase 2,5 U. eau stérile qsp 96 ul. Après ajout de 1,ul du primer 2 du gène des connexines 43, 48,ul de ce mélange réactionnel sont soumis à une amplification par PCR. L' ensemble est recouvert d'une gouLte d'huile minérale puis est amplifié. iv. Electrophorèse des produits de la RT PCR. L'élecrophorèse est réalisée de la facon
suivante: -
- récupération de la phase aqueuse (environ 47,ul); - addition de 8,ul de bleu de charge; - homogénoisation au vortex; - dépôt de 10,ul de ce mélange sur un gel d'agarose à 1% dans un tampon Tris-HCl; - déroulement de l'électrophorèse dans une minicuve à 40 mA. A la fin de la migration, une photo polaroïd est prise après illumination par un transilluminateur UV.
c. Résultats.
Les résultats obtenus montrent que l' irradiation aux rayonnements WB diminue le taux d'ARN messager spécifique des connexines 43. Ces résultats sont en parfaite concordance avec ceux de dosage quantitatif des connexines 43. En effet, une restauration de 1'ARN messager des connexines 43 signifie une forte expression de ces dernières et, par conséquent, une protection des connexines 43 au niveau des kératinocyLes humains en culture, soumis à l' action
des WB.
I.2. Etude in vivo: Immunolocalisation des
connexines 43.
a. Explants de peau humaine.
Des biopsies de peau humaine provenant d'une plastie abdominale réalisée chez un sujet de sexe féminin, âgé de 20 ans, sont nettoyées afin d'éliminer totalement l'hypoderme, puis découpées de façon à obtenir 10 explants de 1 cm2 répartis en 5 lots de 2 explants: - Lot 1: témoin négatif non traité, non irradié; - Lot 2: témoin positif irradié aux WB (150 mJ/cm2); - Lot 3: traité par 4,ug/ml d'extrait de Laminaria cloustoni et irradié aux WB (150 mJ/cm2); - Lot 4: traité par 10,ug/ml d'extrait de Laminaria cloustoni et irradié aux WB (150 mJ/cm2); - Lot 5: traité par 20,ug/ml d'extrait de Laminaria
cloustoni et irradié aux WB (150 mJ/cm2).
L'extrait de Laminaria cloustoni est ensuite appliqué à toute la surface de chaque explant à raison de 10,ul/cm2. Les explants sont, immédiatement après
l'application, irradiés à raison de 150 mJ/cm2 d'UVB.
Cette dose a été retenue afin d'induire une atteinte du métabolisme cellulaire mais sans altération morphologique (mortalité ou nocrose). Les explants sont fixés dans le formol 10%, 24 heures après le traitement, puis inclus dans la paraffine. Les blocs de paraffine - sont coupés à l' aide de microtome en vue du marquage et de la révélation immunohistochimique. Ces coupes sont colorées à l'hématoxyline/ éosine/ safran (HES) en vue
d'un examen morphologique des explants.
Les connexines sont marquées grâce à un anticorps monoalonal humain dirigé spécifiquement contre les connexines 43. Ce marquage est révélé par un
anticorps secondaire anti-lapin couplé à la péroxydase.
L'analyse du marquage immunohistochimique est réalisée
grâce à un microscope photonique.
b. Résultats. L'examen au microscope montre, sur le plan morphologique, des images
comparables d'un lot à l'autre, ne révélant aucune alétration cellulaire significative, prouvant une absence de texicité du produit associé ou non aux WB et donc une irradiation aux UVB induisant une agression modérée avec une absence
de modification morphologique microscopique.
Sur le plan immunahistochimique, l'examen au microscope montre: - Lot 1: un marquage de la couche basale et de la couche spineuse; - Lot 2: un très faible marquage de la couche basale et l'absence de marquage au niveau de la couche spineuse; - Lot 3: un faible marquage de la couche basale et lt absence de marquage au niveau de la couche spineuse. Les images histologiques à cette dose sont sensiblement comparables à celles du lot 1; - Lot 4: un marquage de la couche basale et un très faible marquage de la couche granuleuse; - Lot 5: un marquage net des couches basale et granuleuse, ainsi que de la couche spineuse. le marquage de la couche basale est comparable à celui du lot témoin négatif, celui de la couche spineuse étant plus diffus. Le marquage de la couche granuleuse est non
observé au niveau des explants témoins négatifs.
2 o 2837702
II. Formulations.
II.1. Crème pour le visage.
GLYCERINE 4,0 %
AGENT SEQUESTRANT 0,1 %
CONSERVATEURS 1,0 %
AGENTS EPAISSISSANTS 1,0 %
ALCOOL GRAS 1,0 %
EMULSIONNANT 6,5 %
TRIGLYCERIDES 1,0 %
ESTER D'ACIDE GRAS 5,0 %
HUILES DE SILICONE 5,5 %
EXTRAIT DE BELLE DE QUIT 3,0 %
EXTRAIT DE CITRUS RETICULATA 2,0 %
EXTRAIT DE LAMINARIA CLOUSTONI 3,0 %
EXTRAIT DE MOURERA FL W IATILIS 2,0 %
HUILE DE PEQUI 1,0 %
BEURRE DE KARITÉ 1,0 %
PARFUM 0, 5 %
EAU PURIFIEE qsp 100
II.2. Sérum pour le visage.
PROPYLENE GLYCOL 2, O %
BUTYLENE GLYCOL 4,0 %
AGENT SEQUESTRANT 0,1 %
CONSERVATEUR 0,6 %
C.M.C. 0,4 %
EXTRAIT DE BOCOA PROUACENSIS 2, O %
EXTRAIT DE CARDERE 2, O %
EXTRAIT DE BELLE DE QUIT 2, O %
EXTRAIT DE CITRUS RETICULATA 2,0 %
EXTRAIT DE LAMINARIA CLOUSTONI 4,0 %
EXTRAIT DE BUDDLEJA 2,0 %
PARFUM 0,2 %
SOLUBILISANT 1,0 %
EAU DE FLEUR D'ORANGER 10,0 %
EAU PURIFIEE q. s. p. 10 0
Claims (7)
1) Composition cosmétique caractérisée en ce qu'elle contient: - un extrait de Mirabilis jalapa, - un extrait de Laminaria cloustoni, et
- un extrait de Citrus reticulata.
2) Composition cosmétique, selon la revendication 1, caractérisoe en ce que l'extrait de Mirabilis jalapa est un extrait issu de partie aérienne de la plante et dont la concentration en C-sitostérol
- - est de 500 à 1.000 ppm.
15. 3) Composition cosmétique, selon l'une
quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce
que l'extrait de Laminaria cloustoni est un extrait sec hygroscopique issu de l'algue entière dont la teneur en
azote est de 9,8.
4) Composition cosmétique selon l'une
quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce
que l'extrait de Citrus reticulata est un extrait de fruit entier pelé, riche en vitamine C, sueres et oligo éléments. ) Composition cosmétique selon l'une
quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce
qu'elle contient: - de l'ordre de 0,1 à 10 % en poids et de préférence de 0,5 à 5 % en poids d'un extrait de Mirabilis jalapa, - de l'ordre de 0,1 à 10 % en poids et de préférence de 0,5 à 5 % en poids d'un extrait de Laminaria cloustoni et - de l'ordre de 0,1 à 10 % en poids et de préférence de 0,5 à 5 % en poids d'un extrait de Citrus reticulata. 6) Composition cosmétique selon l'une
quelconque des revendications 1 à 5, caractérisée en ce
qu'elle contient en outre au moins un actif végétal choisi dans le groupe constitué par un extrait végétal ou une protéine végétale présentant une activité inhibitrice de la trypsine, un extrait de Mourera fluviatilis, un extrait de buddleja (Buddleja davidii), un extrait d'anthyllis (Anthyllis vulreraria), un extrait de Bocoa prouacensis, de l'huile de Péqui, un extrait de cardère sauvage (Dipsacus sylvestris Mill.)
et un extrait de galanga (Alpinia officinarum).
7) Composition cosmétique selon l'une
quelconque des revendications précédentes caractérisoe
en ce qu'elle comprend en outre un ou plusieurs agents de formulation ou additifs tels que des adoucissants, des colorants, des actifs filmagènes, des tensio-actifs, des conservateurs, des émuleionnants, des huiles, des
glycols, des vitamines et des parfums.
8) Composition cosmétique selon la revendication 7, caractérisée en ce ledit parfum est à
base de plantes calmantes et relaxantes.
9) Utilisation d'une composition selon les
revendications de 1 à 8, pour prévenir ou luLter contre
le vieillissement cutané.
) Utilisation cosmétique d'une composition
selon les revendications de 1 à 8, comme soin de nuit.
11) Utilisation d'une composition selon les
revendications de 1 à 8, pour la préparation d'un
produit cosmétique ou dermatologique destinée à prévenir
ou luLter contre le vieillissement cutané.
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