FR2948877A1

FR2948877A1 - Composition pour la protection et la regeneration de la peau

Info

Publication number: FR2948877A1
Application number: FR0955567A
Authority: FR
Inventors: Didier Arthaud
Original assignee: DAO Sas
Current assignee: DAO Sas
Priority date: 2009-08-07
Filing date: 2009-08-07
Publication date: 2011-02-11
Anticipated expiration: 2029-08-07
Also published as: FR2948877B1

Abstract

L'invention concerne une composition topique utilisable en dermatologie et/ou en cosmétique La composition comprend un complexe d'actifs associant un extrait d'algue Alaria esculenta (extrait a), et un extrait de Crambe maritima (extrait b), complété le cas échéant par un extrait de Budleja davidii (extrait c), et un extrait de Thymus vulgaris (extrait d). Application aux compositions cosmétiques et dermato-logiques destinées à protéger et à régénérer la peau.

Description

1 La présente invention se rapporte à une composition dermatologique et/ou cosmétique destinée à lutter efficacement contre le vieillissement de la peau, et plus particulièrement à protéger et à régénérer la peau.

La peau constitue tout à la fois une barrière anatomique vivante et une zone d'échange entre le corps et son environnement, et l'efficacité de cette barrière conditionne le maintien d'un bon équilibre homéostasique. Elle comprend plusieurs couches allant de la couche superficielle, l'épiderme, aux couches plus profondes, le derme et l'hypoderme. Chacune de ces couches possède des propriétés spécifiques permettant à l'ensemble de réagir et de s'adapter aux conditions de son environnement. L'épiderme, qui est composé de trois types de cellules, à savoir des kératinocytes (90% des cellules épidermiques), des mélanocytes (2 à 3% des cellules épidermiques) et des cellules de Langerhans, constitue la couche externe et joue un rôle fondamental pour assurer la protection et le maintien d'une bonne trophicité. Le derme est 10 à 30 fois plus épais que l'épiderme, auquel il sert de support, et il est principalement constitué de fibroblastes et d'une matrice extracellulaire essentiellement à base de collagène et d'élastine. Les fibres de collagène, qui représentent environ 70% des protéines du derme, contribuent à la texture et à la tonicité de la peau, tandis que l'élastine est responsable de son élasticité. D'autres cellules, comme les macrophages et les leucocytes, sont également présentes dans la couche du derme. L'hypoderme, qui est la couche la plus profonde de la peau, contient les adipocytes qui produisent des lipides pour que le tissu sous-cutané fabrique une couche grasse protégeant les muscles, les os, et les organes internes contre les chocs. La jonction dermo-épidermique est la zone de rattachement de l'épiderme au derme, en particulier par le réseau de fibres de collagène, qui contrôle les échanges entre ces deux couches. Elle constitue le support des kératinocytes lors du processus de cicatrisation.

B1873fr 2 Les premiers signes du vieillissement de la peau, tels que les rides et ridules, sont généralement provoqués par le stress et les changements biologiques et physiologiques, accélérés par les modes de vie ou par l'environnement, en particulier la pollution, l'exposition au soleil, aux rayons ultraviolets, les variations de températures et les radicaux libres, qui peuvent contribuer à accélérer la dégradation du collagène du derme. L'apparition de marques pigmentaires, la diminution de l'épaisseur de la peau, sa perte d'élasticité et son affaissement sont également des changements observés au cours du vieillissement. On sait que la capacité de la peau à remplacer le collagène endommagé diminue avec le temps, et en conséquence des espaces et des irrégularités apparaissent dans le réseau du collagène.

De nombreuses études ont été consacrées au traitement et à la prévention des signes du vieillissement cutané, notamment pour mettre au point des compositions dermatologiques et/ou cosmétiques susceptibles de favoriser la restructuration tissulaire, et en particulier la néosynthèse d'éléments constitutifs de la peau comme le collagène, les glycosaminoglycannes (GAGs) et les protéoglycannes (PGs) de la matrice extracellulaire. Par "néosynthèse", on entend la synthèse du collagène, du GAGs ou du PGs, qui se forme uniquement en cas de besoin, par exemple pour le comblement des rides.

Par ailleurs, on sait que, pour être acceptées par les utilisateurs, les compositions topiques utilisables en dermatologie et/ou cosmétique doivent être agréables à utiliser et doivent présenter de bonnes propriétés physiques, notamment de consistance et d'onctuosité, tout en garantissant une efficacité satisfaisante et en évitant les inconvénients tels que tiraillements, irritations ou démangeaisons, que peuvent occasionner certains principes actifs. Dans l'état de la technique, le brevet FR-A-2.761.607 décrit une composition dermatologique destinée au traitement des symptômes du vieillissement de la peau, comportant un dérivé de silanol méthylé et un dérivé d'une protéine végétale

B1873fr 3 hydrolysée, additionnée le cas échéant d'un dérivé de vitamine C. Le brevet EP-A-662.319 décrit des compositions cosmétiques et dermatologiques comprenant un céramide comme agent apaisant pour compenser l'effet irritant du principe actif anti- vieillissement. Le brevet FR-A-2.783.169 décrit l'utilisation de pentapeptides du type Lys-Thr-Thr-Lys-Ser dans des compositions topiques pour favoriser la synthèse du collagène et des glycosaminoglycannes, et par conséquent la régénération cutanée. On connaît également, du brevet FR-A-2 848 116, une composition cosmétique et/ou dermatologique à base d'inhibiteurs de métallo-protéinases matricielles, en particulier d'extrait de Siegesbeckia, et de lipopeptides permettant le traitement et la prévention des signes du vieillissement cutané tels que l'apparition de rides et la perte d'élasticité de la peau. Cependant, malgré les diverses compositions dermatologiques et/ou cosmétiques disponibles, il existe toujours un besoin de pouvoir disposer de nouvelles compositions topiques alternatives permettant de lutter efficacement contre les effets du vieillissement cutané, et notamment des compositions topiques à base d'extraits végétaux appropriés provenant préférentiellement de plantes connues pour leurs propriétés favorables. La présente invention vise à fournir notamment une composition dermatologique et/ou cosmétique efficace pour protéger la peau du vieillissement induit tout en la régénérant. La présente invention a pour objet une nouvelle composition topique utilisable en dermatologie et en cosmétique comprenant un complexe d'actifs, caractérisée en ce que ledit complexe d'actifs comprend l'association des deux extraits de plantes suivants : un extrait d'algue Alaria esculenta (extrait a), et un extrait de Crambe maritima (extrait b). B1873fr 4 Plus particulièrement, les travaux réalisés par la demanderesse ont montré qu'il est possible d'agir efficacement contre: i. la perte de protéoglycannes et de glycosamino- glycannes, ii. la dégradation de l'ADN par les rayonnements ultraviolets, iii. la micro inflammation et l'inflammation en général générées par divers stress, dont les rayons ultraviolets, et iv. la diminution du potentiel énergétique de la cellule (respiration cellulaire) responsable des signes du vieillissement cutané et en particulier des rides d'expression, au moyen de compositions topiques à base de l'association de ces deux extraits de plantes (extrait a et extrait b) selon la présente invention. La composition selon l'invention permet ainsi d'avoir un effet protecteur et régénérant de la peau ainsi qu'un effet efficace sur l'hydratation cutanée, la surface cutanée et l'eau liée (augmentation des protéoglycannes et GAGs ainsi que formation d'eau métabolique par consommation du glucose). Dans un mode de réalisation préféré, le complexe d'actifs de l'invention comprend en outre l'association d'au moins un extrait de plantes choisi parmi : un extrait de Budleja davidii (extrait c), et un extrait de Thymus vulgaris (extrait d). Lorsque le complexe d'actifs comprend trois extraits de plantes (extraits a, b et c ou extraits a, b et d), on préférera l'association de l'extrait c avec les extraits a et b du fait des très bonnes propriétés anti-radicalaire de l'extrait de Budleja davidii. De manière particulièrement préférée, le complexe d'actifs de l'invention comprend l'association des quatre 35 extraits a, b, c et d, les propriétés mentionnées aux points i

B1873fr à iv cités précédemment étant alors optimisées de façon significative. L'extrait d'algue Alaria esculenta provient d'une algue de couleur marron que l'on trouve notamment sur les côtes 5 bretonnes. Cette algue est connue pour améliorer les propriétés d'élasticité et de souplesse de la peau ainsi que pour renforcer sa barrière hydro-lipidique. L'extrait de Crambe maritima provient généralement d'une plante halophyte et comestible, à savoir le chou marin. Ce type de plante vit au contact d'un milieu très riche en sel et est connu comme un actif liposoluble. L'extrait de Budleja davidii (arbre à papillons) comme l'extrait de Thymus vulgaris (Thym) sont des extraits de plantes capables de combattre les effets de la pollution et du vieillissement cutané grâce à leur action anti-oxydante. Les extraits d'algue Alaria esculenta et/ou les extraits de Crambe maritima peuvent être typiquement des extraits huileux. Quant aux extraits de Budleja davidii et/ou de Thymus 20 vulgaris, ils peuvent être de préférence des extraits hydroglycérinés. Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, le complexe d'actifs comprend entre 25 et 75% en poids de l'extrait d'Alaria esculenta (extrait a), et entre 25 et 75% 25 en poids de l'extrait de Crambe maritima (extrait b). Lorsque le complexe d'actifs comprend l'association des extraits a, b c et d, il comprend de préférence entre 25 et 60% en poids de l'extrait d'Alaria esculenta (extrait a), entre 25 et 60% en poids de l'extrait de Crambe maritima 30 (extrait b), entre 0,1 et 8% en poids de l'extrait de Budleja davidii (extrait c) et entre 0,1 et 8% en poids de l'extrait de Thymus vulgaris (extrait d). De préférence, le complexe d'actifs comprend une quantité d'extrait a sensiblement identique à la quantité d'extrait b, 35 et une quantité d'extrait c sensiblement identique à la quantité d'extrait d.

B1873fr 6 Dans un autre mode de réalisation particulier de l'invention, la composition comprend au plus 10% en poids du complexe d'actifs. En outre, il est préférable que la composition comprenne 5 au moins 0,1% en poids du complexe d'actifs. Les compositions conformes à la présente invention peuvent être présentées sous les formes classiquement utilisées pour une application topique, c'est-à-dire sous forme de gel, lotion, émulsion (en particulier crème ou lait), 10 sérum (ou essence), masque ou pommade, contenant des excipients et supports usuels compatibles et pharmaceutiquement acceptables. Elles peuvent aussi se présenter sous forme de lingettes imbibées d'une solution contenant les extraits suivant l'invention. 15 Ces formes d'administration par voie topique sont préparées par les techniques connues, et par exemple, dans le cas d'une crème, par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse pour obtenir une émulsion huile dans eau, ou inversement pour préparer une émulsion eau dans huile. Dans le 20 cas de crèmes, on utilise de préférence des émulsions à structure lamellaire contenant peu ou pas de produits éthoxylés. Les compositions topiques selon l'invention peuvent comprendre divers excipients usuels adaptés à une adminis- 25 tration topique externe, en particulier des excipients acceptables sur le plan dermatologique et cosmétologique. Ces excipients appropriés pour la formulation sont bien connus de l'homme du métier et comprennent par exemple des agents favorisant la pénétration tels que l'éthoxydiphénol, le 30 phytantriol, l'octyl dodécanol (par exemple l'Eutanol G ) et l'escine ; des agents hydratants tels que le propylène glycol, la glycérine, le butylène glycol et le hyaluronate de sodium ; des épaississants tels que les gommes naturelles et les polymères de synthèse ; des émollients et des tensioactifs 35 tels que l'octanoate de cétéaryle, le myristate d'isopropyle, l'isononanoate de cétéaryle, la diméthicone, la cyclométhi-

B1873fr 7 cone, le 3-diisostéarate de polyglycéryle, le polyisobutène hydrogéné, l'alcool cétylique, le palmitate cétylique, le phosphate cétylique, l'octyl dodécanol ; des émulsifiants ; des colorants ; des parfums ; etc. On peut aussi ajouter des vitamines antioxydantes telles que la vitamine E, par exemple l'acétate de tocophérol ou le tocotriénol, l'acide phytique, la vitamine C, les polyphénols naturels, ou encore des agents de gommage de la peau tels que le nylon et le nitrure de bore. Le cas échéant, on peut ajouter des conservateurs tels que le benzoate de sodium, l'acide dehydroacétique ou son sel de sodium, la chlorphénésine, le sorbate de potassium, le phénoxyéthanol, le Phenonip associant du phénoxyéthanol et des parahydroxybenzoates de méthyle, éthyle, butyle et isobutyle.

D'autres caractéristiques et avantages de la présente invention apparaîtront à la lumière des exemples qui vont suivre, lesdits exemples étant donnés à titre illustratif et nullement limitatif. Des exemples de formulations sont rapportés aux exemples 20 1 à 3. Dans ces exemples, les parties sont exprimées en poids, sauf indication contraire. L'exemple 4 est relatif à l'évaluation du potentiel régénérant du complexe d'actifs de l'invention sur une matrice extracellulaire de fibroblastes humains en co-culture avec des 25 épidermes reconstitués SKINETHICTM L'exemple 5 est relatif à l'évaluation de l'effet protecteur du complexe d'actifs de l'invention vis-à-vis des agressions dues aux rayons ultraviolets B par le Test dit "des Comètes". 30 L'exemple 6 est relatif à l'évaluation de l'effet du complexe d'actifs de l'invention quant à sa capacité à inhiber la libération des médiateurs de l'inflammation. L'exemple 7 est relatif à l'évaluation de l'effet du complexe d'actifs de l'invention sur la régulation des 35 processus métaboliques et respiratoires cutanés.

B1873fr 8 Exemple 1 Suivant les techniques classiques, on prépare une émulsion fluide à base du complexe d'actifs selon l'invention pour régénérer la peau ayant la composition pondérale suivante: Phase A Eau déminéralisée, q.s.p. 100,00 Cellulose gum 0,50 Gomme xanthane 0,70 Glycérine végétale 6,00 Acide phytique 0,05 Chlorphénésine 0,20 Sodium tetrahydroacetate 0,10 Phase B Polyglyceryl-6 distearate 3,50 Trihydroxystearine 0,50 Acide stearique 2,00 Eutanol G (octyldodécanol) 1,00 Stéarate de glycérol 1,00 Huile de palme hydrogénée 2,00 Beurre de karité 0,50 Huile de sésame 4,00 Ethylhexylstearate 2,00 Acide dehydroacétique 0,10 Tocophérol 0,70 Phase C Eau déminéralisée 5,00 Complexe d'actifs 5,00 Sodium pyrrolidone carboxylic acid 1,00 30 Phase D Parfums 0,50 Le complexe d'actifs est constitué des trois produits suivants: Kalpariane est un produit commercialisé par la 35 société Biotech Marine : c'est un extrait huileux dans le capric/caprilic tryglycerides d'algue Alaria

B1873fr 9 esculenta (environ 20% en poids d'extrait sec d'algue Alaria esculenta dans le produit), Blue Seakale SC est un produit commercialisé par la société Biotech Marine : c'est un extrait huileux dans le capric/caprilic triglycérides de Crambe maritima (environ 20% en poids d'extrait sec de Crambe maritima dans le produit), et Nectapure PF est un produit commercialisé par la société Pentapharm Ltd : c'est un extrait hydroglycériné de Budleja davidii (1 à 5% en poids d'extrait sec de Budleja davidii dans le produit) et de Thymus vulgaris (1 à 5% en poids d'extrait sec de Thymus vulgaris dans le produit). Le ratio en poids de ces trois produits dans le complexe d'actifs est de 1:1:1. La phase aqueuse (Phase A) est homogénéisée à 80°C et versée dans la phase huileuse (Phase B) préalablement mélangéé à 80°C, puis on ajoute sous agitation la phase C contenant le complexe d'actifs à 40°C, et on complète par les parfums à 37°C.

Exemple 2 Suivant les techniques classiques, on prépare une crème riche à base du complexe d'actifs selon l'invention pour régénérer la peau ayant la composition pondérale suivante: Phase A Eau déminéralisée, q.s.p. 100,0 Chlorphénésine 0,25 Dehydro-acétate de sodium 0,10 Acide phytique 0,10 Glycérine végétale 5,00 0-cymène-5-ol 0,05 Phase B Phytocream 2000 4,00 Huile d'amande douce 2,00 Dicaprylyl ether (and) lauryl alcohol 4,00

B1873fr 10 Cire d'abeille 4,50 Huile de coton hydrogénée 1,50 Hydroxy stearic, linoleic, oleic polypeptides 1,00 Palmitoyl proline 0,50 Acide dehydroacétique 0,10 Tocophérol 1,00 Phase C Eau déminéralisée 5,00 Complexe d'actifs 7,00 10 Phase D Parfums 0,50 Le composé Phytocream 2000 mentionné dans la phase B est commercialisé par la société Sinerga. Ce composé est un mélange de sel de potassium de chlorure d'acide palmitique et 15 de protéines de blés hydrolysées, de stéarate de glycéryle et d'alcool cétyl-stéarylique. Le complexe d'actifs dans la phase C de l'exemple 2 est identique à celui mentionné dans l'exemple 1. La phase aqueuse (Phase A) est homogénéisée à 80°C et 20 versée dans la phase huileuse (Phase B) préalablement mélangéé à 75°C, puis on ajoute sous agitation la phase C contenant le complexe d'actifs à 40°C, et on complète par les parfums à 25 37°C. Exemple 3 Suivant les techniques classiques, on prépare une lotion à base du complexe d'actifs selon l'invention pour régénérer la peau ayant la composition pondérale suivante: Eau déminéralisée, q.s.p. 100,00 Eau de rose 50,00 30 Eau de bleuets 25,00 1ù3 Propanediol 5,00 Acide anisique 0,10 Complexe d'actifs 2,00 Sodium PCA (pyrrolidone carboxylic acid) 1,00 35 Sodium hyaluronate 0,02 B1873fr 11 Ficus carica (extrait) 1,00 Acide dehydroacétique 0,05 Le complexe d'actifs dans l'exemple 3 est identique à celui mentionné dans l'exemple 1.

On mélange à température ambiante les différents composés ci-dessus après avoir pris soin de dissoudre l'acide anisique dans le 1-3 propanediol.

Exemple 4 Le but de l'étude décrite ci-après est d'évaluer le potentiel régénérant des produits suivants : - Kalpariane (extrait a), - Blue Seakale SC (extrait b), - Nectapure PF (extraits c et d), et complexe d'actifs suivant l'invention (extraits a, b, c et d) tel que défini dans l'exemple 1, sur une matrice extracellulaire de fibroblastes humains en co-culture avec des épidermes reconstitués SKINETHICTM Pour cela, les dosages suivants ont été réalisés : - Protéoglycannes, et - Glycosaminoglycannes (GAGs).

4-1. PROTOCOLE EXPERIMENTAL 4.1.1. Epidermes reconstitués, modèle SKINETHICTM Des kératinocytes d'origine humaine sont ensemencés sur des filtres en polycarbonate de 0,5 cm2 dans un milieu défini (MCDB 153 modifié) et supplémenté. Les cellules sont cultivées pendant 14 jours à l'interface air/liquide, le milieu de culture étant changé tous les deux jours. Les épidermes ainsi formés sont utilisés pour la réalisation de l'étude à partir du 17' jour de la culture. B1873fr 12 4.1.2. Fibroblastes humains en culture On utilise la méthode de la digestion enzymatique permettant d'obtenir des primocultures de fibroblastes à partir d'une biopsie de peau humaine. Les essais sont réalisés sur des fibroblastes entre le 2ème et le et' passage afin d'assurer une reproductibilité entre les différentes expériences.

4.1.3. Evaluation de l'effet d'un produit sur les constituants de la matrice extracellulaire des fibroblastes humains Pour l'étude de l'effet du produit sur les protéoglycannes synthétisés par les fibroblastes humains en coculture avec des épidermes reconstitués, la constitution des lots est la suivante : Lot 1 : épidermes/fibroblastes témoins, Lot 2 : épidermes/fibroblastes traités par Kalpariane à 1%, Lot 3 : épidermes/fibroblastes traités par Blue Seakale SC à 1%, Lot 4 : épidermes/fibroblastes traités par Nectapure PF à 1%, et Lot 5 : épidermes/fibroblastes traités par le complexe d'actifs (Kalpariane à 1%, Blue Seakale SC à 1%, et Nectapure PF à 1%). Pour l'étude de l'effet du produit sur les glycosamino- glycannes synthétisés par les fibroblastes humains en coculture avec des épidermes reconstitués, la constitution des lots est la suivante : Lot 1 : épidermes/fibroblastes témoins, Lot 2 : épidermes/fibroblastes traités par Kalpariane à 1%, Lot 3 : épidermes/fibroblastes traités par Nectapure PF à 1%, et Lot 4 : épidermes/fibroblastes traités par le complexe d'actifs (Kalpariane à 1%, Blue Seakale SC à 1%, et Nectapure PF à 1%). B1873fr Les essais sont réalisés en triplicate après 24 heures de contact des produits avec les épidermes en co-culture avec des fibroblastes humains en culture. Un précurseur radioactif ([3H]-Glucosamine) est rajouté aux différents lots 18h avant leur récupération pour les essais. Ce précurseur permet, par la technique de pulse, d'étudier la capacité des lots à incorporer ledit précurseur, et de ce fait de pouvoir doser facilement les protéoglycannes, les glycosaminoglycannes (GAGs), et les protéines totales. - Extraction des protéoglycannes et des glycosaminoglycannes Les extractions sont effectuées par des techniques bien connues de l'homme du métier. En outre, les protéoglycannes sont purifiées par chromatographie du type FPLC pour l'anglicisme "Fast Protein Liquid Chromatography". Ce type de chromatographie permet de séparer les protéines en fonction de leur densité de charge. L'élution est suivie par détection au spectrofluoromètre à longueur d'onde 280 nm. Le pic contenant les protéoglycannes est élué à 1 M de NaCl.

- Dosage Le dosage de la radioactivité est réalisé grâce à un compteur Packard (Flow-one). 4-2. RESULTATS 4.2.1. Evaluation du taux des protéoglycannes - Protéoglycannes péri-membranaires Les résultats sont regroupés dans le tableau ci-après : Incorporation du [3H]- % d'incorporation Glucosamine (cpm) Témoin 145 10 - Kalpariane (1%) 175 12* +21 Blue Seakale SC (1%) 169 17* +17 Nectapure PF (1%) 170 13* +17 Complexe d'actifs 190 19* +31 B1873fr25 * : significativement différent par rapport au témoin p<0,05

Les résultats obtenus montrent que le complexe d'actifs stimule significativement la néosynthèse des protéoglycannes péri-membranaires de 31%, stimulation bien supérieure à celles obtenues respectivement avec Kalpariane, Blue Seakale SC, ou Nectapure PF. - Protéoglycannes transmembranaires Les résultats sont regroupés dans le tableau ci-dessous : Incorporation du [3H]- d'incorporation Glucosamine (cpm) Témoin 176 14 - Kalpariane (1%) 213 17* +21 Blue Seakale SC (1%) 207 11* +18 Nectapure PF (1%) 203 19* +15 Complexe d'actifs 227 22* +29 * : significativement différent par rapport au témoin p<0,05 Les résultats obtenus montrent que le complexe d'actifs stimule significativement la néosynthèse des protéoglycannes transmembranaires de 29%, stimulation bien supérieure à celles obtenues respectivement avec Kalpariane, Blue Seakale SC, ou Nectapure PF. - Protéoglycannes matriciels Les résultats sont regroupés dans le tableau ci-après : Incorporation du [3H]- d'incorporation Glucosamine (cpm) Témoin 253 18 - Kalpariane (1%) 312 25* +23 Blue Seakale SC (1%) 300 15* +19 Nectapure PF (1%) 294 27* +16 Complexe d'actifs 342 20* +35 * : significativement différent par rapport au témoin p<0,05 Les résultats obtenus montrent que le complexe d'actifs stimule significativement la néosynthèse des protéoglycannes B1873fr matriciels de 35%, stimulation bien supérieure à celles obtenues respectivement avec Kalpariane, Blue Seakale SC, ou Nectapure PF. 4.2.2. Evaluation des glycosaminoglycannes Les résultats sont regroupés dans le tableau ci-dessous : [3H]-Glucosamine (cpm) % d'incorporation Témoin 485 26 - Kalpariane (1%) 605 42* +25 Nectapure PF (1%) 579 22* +19 Complexe d'actifs 618 45* +32 * : significativement différent par rapport au témoin p<0,05

Les résultats obtenus montrent que le complexe d'actifs stimule significativement la néosynthèse des glycosaminoglycannes de 32%, stimulation bien supérieure à celles obtenues respectivement avec Kalpariane ou Nectapure PF.

Conclusion Dans les conditions expérimentales retenues et au vu des résultats obtenus, le complexe d'actifs de l'invention présente une augmentation significative de la néosynthèse des protéoglycannes et des glycosaminoglycannes comparativement aux produits Kalpariane, Blue Seakale SC et Nectapure PF utilisés seuls. Le complexe d'actifs de l'invention présente ainsi un effet régénérant de la matrice extracellulaire des fibroblastes humains en co-culture avec des épidermes reconstitués, permettant d'agir efficacement contre la perte de protéoglycannes et de glycosaminoglycannes.

Exemple 5 Le but de l'étude décrite ci-après est d'évaluer l'effet protecteur des produits suivants : - Kalpariane (extrait a), - Blue Seakale SC (extrait b), B1873fr 16 - Nectapure PF (extraits c et d), et - le complexe d'actifs (extraits a, b, c et d) tel que défini dans l'exemple 1, vis-à-vis des agressions dues aux rayons ultraviolets B par le 5 Test dit "des Comètes". Le Test des Comètes, bien connu de l'homme du métier, consiste à évaluer les dommages de l'ADN en mesurant la proportion de l'ADN dans la queue des comètes après une irradiation aux UVB, cette proportion d'ADN étant fonction de 10 la dose d'irradiation.

5-1. PROTOCOLE EXPERIMENTAL 5.1.1. Principe de la culture Des kératinocytes d'origine humaine ont été ensemencés 15 sur des filtres en polycarbonate de 0,5 cm2 dans un milieu défini (MCDB 153 modifié) et supplémenté. Les cellules ont été cultivées pendant 14 jours à l'interface air/liquide, le milieu de culture étant changé tous les deux jours. Les épidermes ainsi formés ont été utilisés pour la 20 réalisation de l'étude à partir du 17ème jour de la culture.

5.1.2. Evaluation de l'effet protecteur d'un produit vis-à-vis de l'agression due aux rayons ultraviolets B

25 L'essai a été conduit en triplicate après 24 heures de traitement des épidermes reconstitués Skinethic avec le produit à l'étude, la constitution des lots est la suivante : Lot 1 : 3 épidermes témoins non traités, Lot 2 : 3 épidermes témoins positifs irradiés aux UVB (50 30 mJ/cm2), Lot 3 : 3 épidermes traités par Kalpariane à 1%, Lot 4 : 3 épidermes traités par Blue Seakale SC à 1%, Lot 5 : 3 épidermes traités par Nectapure PF à 1%, B1873fr 17 Lot 6 : 3 épidermes traités par le complexe d'actifs (Kalpariane à 1%, Blue Seakale SC à 1%, et Nectapure PF à 1%), Lot 7 : 3 épidermes traités par Kalpariane à 1% puis irradiés aux UVB (50 mJ/cm2), Lot 8 : 3 épidermes traités par Blue Seakale SC à 1% puis irradiés aux UVB (50 mJ/cm2), Lot 9 : 3 épidermes traités par Nectapure PF à 1% puis irradiés aux UVB (50 mJ/cm2), et Io Lot 10 : 3 épidermes traités par le complexe d'actifs (Kalpariane à 1%, Blue Seakale SC à 1%, et Nectapure PF à 1%) puis irradiés aux UVB (50 mJ/cm2).

24 heures après l'irradiation des épidermes, les celluls 15 ont été individualisées puis incorporées dans un gel d'agarose et placées sur une lame de microscope. Les cellules ont été ensuite lysées. La fraction nucléaire obtenue a été soumise à une électrophorèse. La quantification de la quantité d'ADN présente dans la queue des comètes a été évaluée par un 20 microscope muni d'une caméra et couplé à un analyseur d'images.

5-2. RESULTATS 5.2.1. Evaluation de l'effet protecteur en absence 25 d'irradiation aux UVB Les résultats exprimant le Tail Moment sont regroupés dans le tableau ci-après : des cellules présentant un Tail Moment Grade du Tail Moment 10-20 20-30 30-40 40-50 >50 Témoin 78~ 22~ - - - Kalpariane (1 87~ 13~ - - - Blue Seakale SC (1%) 85 15~ - - - Nectapure PF (1%) 80 18% 2% - - Complexe d'actifs 90 10~ - - - B1873fr 18 Dans les conditions physiologiques, les actifs Kalpariane, Blue Seakale SC, et Nectapure PF ainsi que le complexe d'actifs n'entraînent aucune fragmentation de l'ADN comparativement aux témoins. 5.2.2. Evaluation de l'effet protecteur après irradiation aux UVB Les résultats exprimant le Tail Moment sont regroupés dans le tableau ci-après : des cellules présentant un Tail Moment Grade du Tail Moment 10-20 20-30 30-40 40-50 >50 Témoin négatif 78~ 22~ - - - Témoin positif UVB 3% 8% 15% 23% 51% (50mJ/cmZ) Kalpariane (1%) + UVB 54~ 23~ 18~ 5~ - (50mJ/cmZ) Blue Seakale SC (1%) + 50~ 21~ 22% 7~ - UVB (50mJ/cmZ) Nectapure PF (1%) + UVB 47~ 28~ 25~ - - (50mJ/cmZ) Complexe d'actifs + UVB 62~ 34~ 4~ - - (50mJ/cmZ) 10 Dans les conditions d'irradiation, les actifs Kalpariane, Blue Seakale SC, et Nectapure PF ainsi que le complexe d'actifs entraîne une nette diminution de la fragmentation de l'ADN due aux rayons ultraviolets B. Cette diminution de la 15 fragmentation est plus importante après traitement des épidermes par le complexe d'actifs comparativement aux actifs utilisés seuls.

Conclusion 20 Dans les conditions expérimentales retenues et au vu des résultats obtenus, le complexe d'actifs de l'invention n'a entraîné aucun dommage de l'ADN au niveau des épidermes reconstitués traités pendant 24 heures comparativement au témoin négatif. En outre, le complexe d'actifs a induit une 25 nette diminution de la fragmentation de l'ADN due aux ultraviolets B au niveau des épidermes reconstitués après 24

B1873fr5 19 heures de traitement comparativement aux produits Kalpariane, Blue Seakale SC et Nectapure PF utilisés seuls. Le complexe d'actifs de l'invention permet ainsi d'agir efficacement contre la dégradation de l'ADN par les 5 rayonnements ultraviolets.

Exemple 6 Le but de l'étude décrite ci-après est d'évaluer l'effet des produits suivants : - Kalpariane (extrait a), 10 - Blue Seakale SC (extrait b), - Nectapure PF (extraits c et d), et - le complexe d'actifs (extraits a, b, c et d) tel que défini dans l'exemple 1, quant à leur capacité respective à inhiber la libération des 15 médiateurs de l'inflammation, à savoir: - l'Interleukine 1-a (IL1-a), - l'Interleukine 6 (IL-6), et - la Prostaglandine E2 (PGE2).

20 6-1. PROTOCOLE EXPERIMENTAL 6.1.1. Principe de la culture La méthode utilisée a été celle de la digestion enzymatique permettant d'obtenir à partir d'une biopsie de peau humaine des primocultures de kératinocytes. Les essais 25 ont été réalisés sur des kératinocytes entre le 2eme et le 4eme passage afin d'assurer une reproductibilité entre les différentes expériences.

6.1.2. Evaluation de l'activité anti-inflammatoire 30 Les essais ont été conduits en duplicate après 24 heures de traitement. La concentration finale mise au contact des cellules est 1/100. 1011l des solutions mères à 1% ont été mélangés à 1 ml du volume total de la culture. La constitution des lots est la suivante : B1873fr 20 Lot 1 : témoins non traités, Lot 2 : témoins positifs irradiés aux UVB (150 mJ/cm2), Lot 3 : traités par Kalpariane à 1%, Lot 4 : traités par Nectapure PF à 1%, Lot 5 : traités par le complexe d'actifs (Kalpariane à Blue Seakale SC à 1%, et Nectapure PF à 1%), Lot 6 : traités par Kalpariane à 1% puis irradiés aux UVB (150 mJ/cm2), Lot 7 : traités par Nectapure PF à 1% puis irradiés aux UVB (150 mJ/cm2), et Lot 8 : traités par le complexe d'actifs (Kalpariane à 1%, Blue Seakale SC à 1%, et Nectapure PF à 1%) puis irradiés aux UVB (150 mJ/cm2).

A la fin du temps d'incubation, les milieux de culture ont été prélevés, et les dosages de IL1-a, IL-6 et PGE2 ont été réalisés conformément aux protocoles décrits dans les kits de dosage. Les kits de dosage utilisés ont été le kit de détection PG2 de la société Gyman Chemical, et les kits de détection IL1-a et IL-6 de la société R&D Systems.

6-2. RESULTATS 6.2.1. Dosage de 1'Interleukine 1-a (IL1-a) Dans les conditions physiologiques, sans induction par les UVB, les produits Kalpariane, Nectapure PF et le complexe d'actifs n'ont pas d'effet sur la libération de IL1-a. Toutefois, après induction par les UVB, la libération de IL1-a est inhibée significativement par les produits Kalpariane, Nectapure PF et le complexe d'actifs, à hauteur respective de 27%, 25% et 36%.

6.2.2. Dosage de 1'Interleukine 6 (IL-6) Dans les conditions physiologiques, sans induction par les UVB, les produits Kalpariane, Nectapure PF et le complexe 35 d'actifs n'ont pas d'effet sur la libération de IL-6. B1873fr 21 Toutefois, après induction par les UVB, la libération de IL-6 est inhibée significativement par les produits Kalpariane, Nectapure PF et le complexe d'actifs, à hauteur respective de 31%, 26% et 33%. 6.2.3. Dosage de la Prostaglandine E2 (PGE2) Dans les conditions physiologiques, sans induction par les UVB, les produits Kalpariane, Nectapure PF et le complexe d'actifs n'ont pas d'effet sur la libération de PGE2.

Toutefois, après induction par les UVB, la libération de PGE2 est inhibée significativement par les produits Kalpariane, Nectapure PF et le complexe d'actifs à hauteur respective de 21%, 19% et 27%.

Conclusion Dans les conditions expérimentales retenues et au vu des résultats obtenus, le complexe d'actifs de l'invention inhibe significativement les phénomènes irritatifs et inflammatoires induits in vitro sur des kératinocytes humaines en culture.

Le complexe d'actifs de l'invention permet ainsi d'agir efficacement contre la micro inflammation et l'inflammation en général générées par divers stress, dont les rayons ultraviolets.

Exemple 7 Le but de l'étude décrite ci-après est d'évaluer l'effet du complexe d'actifs (extraits a, b, c et d) tel que défini dans l'exemple 1 sur la régulation des processus métaboliques et respiratoires cutanés. 7-1. PROTOCOLE EXPERIMENTAL 7.1.1. Principe de la culture Des kératinocytes d'origine humaine ont été ensemencés sur des filtres en polycarbonate de 0,5 cm2 dans un milieu défini (MCDB 153 modifié) et supplémenté. Les cellules ont été B1873fr 22 cultivées pendant 14 jours à l'interface air/liquide, le milieu de culture étant changé tous les deux jours. Les épidermes ainsi formés ont été utilisés pour la réalisation de l'étude à partir du 14ème jour de la culture. 5 7.1.2. Evaluation de la respiration et de la viabilité des cellules de l'épiderme L'activité du complexe d'actifs sur le métabolisme cellulaire et respiratoire a été évaluée par la métabolisation 10 du glucose par les cellules de l'épiderme dans des conditions d'hypoxie. Pour ce faire, la respiration et la viabilité des cellules par le dosage du relargage du 14CO2 ont été évaluées. Ainsi, l'activité du complexe d'actifs sur le métabolisme cellulaire et sur son pouvoir oxygénant ont été évalué par la 15 métabolisation du D-[14C]-glucose-6-phosphate (288 mCi/mmol, NEN, France) et le dosage du 14CO2. L'asphyxie des épidermes a été réalisée par une privation de l'oxygène 24 heures avant le traitement par le complexe d'actifs. 20 L'essai a été conduit en duplicate après 24 heures de contact du complexe d'actifs avec les épidermes. La constitution des lots est la suivante : Lot 1 : épidermes témoins négatifs ne recevant aucun produit, 25 Lot 2 : épidermes traités recevant le complexe d'actifs (Kalpariane à 1%, Blue Seakale SC à 1%, et Nectapure PF à 1%) (10111), Lot 3 : épidermes témoins positifs ne recevant aucun produit (Asphyxie 24 heures), et 30 Lot 4 : épidermes traités recevant le complexe d'actifs (Kalpariane à 1%, Blue Seakale SC à 1%, et Nectapure PF à 1%) (10111) (Asphyxie 24 heures). Le 14CO2 libéré à partir du métabolisme du D-[14C]-glucose- 6-phosphate a été évalué par la capture du 14CO2 sur des 35 filtres placés au-dessus des épidermes. Le D-[14C]-glucose-6- B1873fr 23 phosphate est mis au contact avec les épidermes pendant toute la durée du traitement par le complexe d'actifs (24 heures). A la fin du temps du traitement, les filtres sont récupérés, puis la radioactivité comptée à l'aide d'un compteur à scintillation (Packard 2000).

7-2. RESULTATS Dans les conditions expérimentales retenues et au vu des résultats obtenus, l'étude du métabolisme du glucose montre que le complexe d'actifs de l'invention augmente le relargage du 14CO2 de 18% dans les conditions physiologiques et de 27% dans les conditions d'asphyxie. Ce résultat montre clairement que le complexe d'actifs stimule le métabolisme cellulaire en métabolisant le glucose.

Conclusion Dans les conditions expérimentales retenues et au vu des résultats obtenus, le complexe d'actifs de l'invention prévient contre l'altération du métabolisme physiologique et notamment respiratoire. Le complexe d'actifs de l'invention permet ainsi d'agir efficacement contre la diminution du potentiel énergétique de la cellule (respiration cellulaire) responsables des signes du vieillissement cutané et en particulier des rides d'expression. B1873fr

Claims

REVENDICATIONS1. Composition topique utilisable en dermatologie et/ou en cosmétique comprenant un complexe d'actifs, caractérisée en ce que ledit complexe d'actifs comprend l'association des deux extraits de plantes suivants : - un extrait d'algue Alaria esculenta (extrait a), et - un extrait de Crambe maritima (extrait b).
2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le complexe d'actifs comprend en outre l'association d'au moins un extrait de plantes choisi parmi : - un extrait de Budleja davidii (extrait c), et - un extrait de Thymus vulgaris (extrait d).
3. Composition selon les revendications 1 et 2, caractérisée en ce que le complexe d'actifs comprend l'association des quatre extraits a, b, c et d.
4. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les extraits a et/ou b sont des extraits huileux.
5. Composition selon l'une quelconque des revendications 2 à 4, caractérisée en ce que les extraits c et/ou d 20 sont des extraits hydroglycerinés.
6. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le complexe d'actifs comprend entre 25 et 75% en poids de l'extrait a, et entre 25 et 75% en poids de l'extrait b. 25
7. Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce que le complexe d'actifs comprend entre 25 et 60% en poids de l'extrait a, entre 25 et 60% en poids de l'extrait b, entre 0,1 et 8% en poids de l'extrait c et entre 0,1 et 8% en poids de l'extrait d. 30
8. Composition selon la revendication 3, caractérisée en ce que le complexe d'actifs comprend une quantité d'extrait a sensiblement identique à la quantité d'extrait b, et une quantité d'extrait c sensiblement identique à la quantité d'extrait d. B1873fr
9. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend entre 0,1% et 10% en poids du complexe d'actifs.
10. Utilisation cosmétique de la composition selon l'une 5 quelconque des revendications précédentes pour protéger et régénérer la peau. B1873fr