FR2902335A1 - Utilisation d'un extrait de mimosa dans une composition cosmetique. - Google Patents

Abstract

L'invention a pour objet une nouvelle utilisation d'un extrait de mimosa pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermatologique pour application topique, destinée à lutter contre les signes du vieillissement cutané.L'invention concerne également un procédé cosmétique pour combattre les signes du vieillissement cutané, qui consiste à appliquer sur la peau une composition contenant une quantité efficace d'extrait de mimosa.

Description

B1654FR 2902335 1 La présente invention concerne une nouvelle utilisation

dans le domaine cosmétique et/ou dermatologique, et plus particulièrement l'utilisation d'extrait de mimosa pour la préparation d'une composition utilisable en cosmétique et en dermatologie pour les soins et la protection de la peau contre les signes du vieillissement. La peau comprend des couches superficielles, à savoir l'épiderme, et des couches plus profondes, le derme et l'hypoderme, et chacune possède des propriétés spécifiques permettant à l'ensemble de réagir et s'adapter aux conditions de son environnement. Le derme sert de support à l'épiderme et est principalement constitué de fibroblastes et d'une matrice extracellulaire essentiellement à base de collagène et d'élastine.

Les fibres de collagène contribuent à la tonicité et à l'élasticité de la peau. Avec l'âge, leur renouvellement diminue, ce qui se traduit par un amincissement de la peau, et leur perte progressive d'élasticité entraîne un durcissement de la peau. L'épiderme, qui est constitué de trois types de cellules dont les plus importantes sont les kératinocytes, constitue la couche externe, et joue un rôle fonda-mental pour assurer la protection et le maintien d'une bonne trophicité. C'est pourquoi de nombreuses compositions ont été mises au point afin de le protéger et d'améliorer les fonctions de la peau. On sait que le vieillissement de la peau s'accompagne d'un certain nombre de signes et en particulier de la formation de rides plus ou moins profondes et étendues, outre une perte d'élasticité et un amincissement. L'apparition des premières rides, qui peut survenir chez des individus dès l'âge de 30 à 40 ans, est un phénomène qui peut être aggravé par des agressions physiques ou chimiques provenant de la pollution, de l'exposition aux rayonnements ultraviolets ou des modes de vie qui accélèrent le vieillissement cutané.

A l'échelle de la peau, le vieillissement provoque notamment une diminution des synthèses protéiques (collagène, élastine), ainsi qu'une élévation des métalloprotéinases de type MMP-3. B1654FR 2902335 2 D'une manière générale, le traitement et la prévention des signes du vieillissement cutané sont l'objet de nombreux travaux et études depuis des années, notamment pour mettre au point des compositions susceptibles de favoriser la 5 restructuration tissulaire, et en particulier la néosynthèse d'éléments constitutifs de la peau comme le collagène. Par néosynthèse , on entend la synthèse du collagène qui se forme uniquement en cas de besoin, par exemple pour le comblement des rides. 10 Par ailleurs, on sait que, pour être acceptées par les utilisateurs, les compositions cosmétiques et/ou dermatologiques destinées au traitement et à la prévention des affections de la peau par application topique doivent être agréables à utiliser et doivent présenter de bonnes propriétés 15 physiques, notamment de consistance et d'onctuosité, tout en garantissant une efficacité satisfaisante et en évitant les inconvénients tels que tiraillements, irritations ou démangeaisons, que peuvent occasionner certains principes actifs. Dans l'état de la technique, par exemple le brevet 20 FR-A-2.761.607 décrit une composition dermatologique destinée au traitement des symptômes du vieillissement de la peau, comportant un dérivé de silanol méthylé et un dérivé d'une protéine végétale hydrolysée, additionnée le cas échéant d'un dérivé de vitamine C. Le brevet EP-A-662.319 décrit 25 des compositions cosmétiques et dermatologiques comprenant un céramide comme agent apaisant pour compenser l'effet irritant du principe actif anti-vieillissement. Le brevet FRA-2.783.169 décrit l'utilisation de pentapeptides du type Lys-Thr-Thr-Lys-Ser dans des compositions topiques pour fa- 30 voriser la synthèse du collagène et des glycosaminoglycannes, et par conséquent la régénération cutanée. On connaît également, du brevet FR-A-2 848 116, une composition cosmétique et/ou dermatologique à base d'inhibiteurs de métallo-protéinases matricielles, en particulier 35 d'extrait de Siegesbeckia, et de lipopeptides permettant le traitement et la prévention des signes du vieillissement cutané tels que l'apparition de rides et la perte d'élasticité de la peau. B1654FR 2902335 3 Cependant, il existe toujours un besoin accru de trou-ver des compositions topiques alternatives permettant de lutter efficacement contre le vieillissement cutané, et notamment de trouver des compositions topiques à base de 5 végétaux appropriés, particulièrement provenant de plantes aisément accessibles et connues pour leurs facultés de résistance. Suivant la présente invention, on a trouvé qu'il était possible d'agir efficacement contre les signes du vieillis- 10 serrent cutané en utilisant des compositions topiques à base d'extraits de mimosa. La présente invention a donc pour objet une nouvelle utilisation d'un extrait de mimosa, pour la préparation d'une composition topique à usage cosmétique et/ou dermato- 15 logique, permettant de lutter contre les signes du vieillissement cutané tels que l'apparition de rides et la perte d'élasticité de la peau. La présente invention a encore pour objet un procédé cosmétique pour combattre les signes du vieillissement 20 cutané, consistant à appliquer sur les zones de la peau affectées une composition contenant une quantité efficace d'extrait de mimosa. Le mimosa, et en particulier les espèces Acacia dealbata, Acacia farnesiana et Acacia decurrens, présente 25 l'avantage d'être extrêmement résistant. Il est en effet capable de repousser aisément, qu'il ait subi le gel ou au contraire une très forte chaleur. En outre, ses graines sont très riches en protéines et en globulines, et possèdent par conséquent un pouvoir tenseur et nutritif. Parmi ces trois 30 espèces, l'Acacia dealbata est préféré, dans la mesure où ses graines sont faciles à se procurer. Dans certaines médecines traditionnelles, les fleurs de l'espèce Acacia farnesiana sont utilisées pour traiter les maux de tête et les indigestions, tandis que des décoctions 35 de cosses sont employées pour traiter la dysenterie et les inflammations de la peau. Les études effectuées par la demanderesse ont montré de manière surprenante que l'utilisation d'une quantité effi- B1654FR 4 cace d'un extrait de mimosa (Acacia dealbata, Acacia farnesiana ou Acacia decurrens) avait notamment pour effet de favoriser fortement la synthèse des collagènes, ce qui entraîne un épaississement de l'épiderme et par conséquent

un aplanissement des rides, d'améliorer la néosynthèse des collagènes de type I et de type III et de diminuer le rapport collagène I/collagène III, et également de diminuer l'expression des métalloprotéinases III (MMP-3) aboutissant à un meilleur stockage de collagène néoformé. Les résultats

des tests in vitro mettant en évidence ces propriétés sont détaillés ci-après.

Les extraits de mimosa utilisés dans les compositions suivant l'invention sont avantageusement obtenus à partir de graines de mimosa, par exemple par macération dans l'eau. A

cet effet, les graines pulvérisées (10 à 20 g pour la préparation de 100 g d'extrait) sont mises à macérer dans de l'eau déminéralisée à une température comprise entre 40 et 50 C pendant 48 heures, en agitant de temps en temps. Le produit est ensuite filtré, le gâteau est exprimé, et les

liqueurs sont réunies et clarifiées. La quantité est ajustée avec de l'eau, et on ajoute 50% d'eau ainsi que 0,5% de conservateur, le tout est complété à 100 et filtré par filtration stérilisante (pourcentages exprimés en poids).

Typiquement, on peut utiliser un extrait aqueux de

graines de mimosa présentant la composition suivante : - matières sèches 2 à 4%

- densité à 22 C 0,980 à 1,020

- indice de réfraction à 22 C 1,330 à 1,350

- pH 5,7 à 7,2

- teneur en protéines totale >0,1% (par rapport aux matières sèches)

Les compositions topiques incluent typiquement entre 0,001 et 15% en poids d'extrait de mimosa par rapport au poids total de la composition. De façon avantageuse, une

telle composition comprend 2% en poids d'extrait de mimosa par rapport au poids total de la composition.

Le pH de la composition est de préférence compris entre 6 et 6,5, et peut être ajusté, selon les compositions, par B1654FR 2902335 5 addition d'un acide tel que l'acide citrique ou d'une base telle que l'hydroxyde de sodium. Il peut être avantageux, suivant une variante de la présente invention, d'incorporer dans la composition des 5 principes actifs ou ingrédients auxiliaires choisis pour leurs propriétés complémentaires, afin de renforcer les effets anti-âge de la composition. Ainsi il est particulièrement avantageux de les combiner avec des quantités appropriées d'une ou plusieurs substances choisies parmi la 10 Vitamine A palmitate, la Vitamine C ou ses dérivés, les protéines de graines d'amarante (Amarantus caudatus), les globulines de pois ou les mucilages tels que le mucilage de fruits de baobab afin d'obtenir un effet tenseur de la peau, l'huile de Calophylum afin de renforcer l'effet anti-rides, 15 l'huile d'Echium pour son effet anti-inflammatoire, un palmitoyl pentapeptide-3 tel que le Matrixyl ou des dérivés tels que le palmitoyl GHK (possédant la chaîne Glycyl-Histidyl-Lysine) et le palmitoyl GQPR (Glycyl-Glutamyl-Prolyl-Arginine) ou le palmitoyl VGVAPG (Valyl-Glycyl-Valyl- 20 Alanyl-Prolyl-Glycine) associé à un céramide-2, ainsi que de manière générale toute association avec un céramide, une association comprenant du Matrixyl et un extrait de Siegesbeckia orientalis, les polyphénols, et notamment les polyphénols de cacao, l'acide oléanolique, les extraits de 25 souci (provenant des espèces Calendula officinalis ou Calendula arvensis), une antihyaluronidase telle que Echinacine B afin de générer un maximum d'eau liée, l'Imperata cylindrica, par exemple MOIST 24 de la société Sederma, afin de favoriser l'hydratation de la peau par modi- 30 fication de la pression osmotique, un extrait de graines de lotus, de graines de coquelicot, de racine de guimauve, les peptides d'Hibiscus de type Myoxynol (commercialisé par les Laboratoires Sérobiologiques), les extraits de fenouil, les peptides d'origine végétale de type Argireline (commercia- 35 lisés par la société Lipotec). Les compositions peuvent également contenir diverses substances et excipients choisis en fonction de leurs propriétés connues et de la forme galénique envisagée. B1654FR 2902335 6 Ainsi, on peut incorporer des agents hydratants, des agents calmants, des agents émulsionnants, des tensioactifs, des épaississants, des gélifiants, des agents viscosants, des conservateurs, des antioxydants, des parfums, des huiles, 5 des lipides, un solvant spécifique ainsi que de l'eau et divers additifs destinés à améliorer les propriétés physiques des compositions. On peut encore avantageusement incorporer des filtres ou écrans solaires choisis en fonction du degré de protection recherché. 10 L'agent hydratant peut être choisi parmi les produits connus dans la préparation de compositions utilisables en cosmétologie et en dermatologie, et par exemple on peut utiliser un polyol, la glycérine (glycérol et des dérivés de glycérol), des alkylène polyols tels que le polyéthylène 15 glycol, le sorbitol, le maltitol, le penta-érythritol, les polyacrylates et polyméthacrylates de glycéryle, les mucopolysaccharides tels que l'acide hyaluronique, des dérivés du chitosan et des dérivés de l'acide pyrrolidone carboxylique. Les compositions suivant la présente invention peuvent 20 être présentées sous les formes classiquement utilisées pour une application topique, c'est-à-dire sous forme de gel, lotion, sérum, émulsion (en particulier crème ou lait), masque, stick, pommade ou patch, contenant les composants décrits ci-dessus, et des excipients et supports usuels 25 compatibles et pharmaceutiquement acceptables. Les formes préférées sont les sérums, les crèmes, les gels ou les patches, sous forme vectorisée ou non. Ces formes d'administration par voie topique sont préparées par les techniques connues, et par exemple, dans 30 le cas d'une crème, par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse pour obtenir une émulsion huile dans eau, ou inversement pour préparer une émulsion eau dans huile. Dans le cas de crèmes, on préfère utiliser des émulsions à structure lamellaire contenant peu de produits éthoxylés ou 35 n'en contenant pas du tout. Dans le cas des émulsions, la phase grasse peut représenter entre 10 et 60% environ du poids de la composition, la phase aqueuse entre 10 et 80% environ et l'agent émul- B1654FR 2902335 7 sionnant entre 2 et 20%, le reste étant constitué par les composants de base de la composition selon l'invention et par les autres substances mentionnées ci-dessus. Si un agent hydratant est incorporé, il est avantageusement introduit 5 dans la phase aqueuse lors de la préparation de l'émulsion. La teneur en agent hydratant est généralement comprise entre 0,1 et 10% en poids par rapport au poids total de la composition. Les exemples qui suivent illustrent la présente inven-10 tion, sans en limiter la portée. Des exemples de formulations sont rapportés aux exemples 1 à 3. Dans ces exemples, les parties sont exprimées en poids, sauf indication contraire. L'exemple 4 est relatif à des tests d'activité sur une 15 co-culture d'épidermes reconstitués/fibroblastes humains, qui ont permis d'évaluer l'effet régénérant d'un extrait aqueux de mimosa (Acacia dealbata), dénommé ci-après par "le produit extrait de mimosa ". Exemple 1 Sodium heptonate 0,1 Pentylène glycol 5,0 Capryl glycol 3,0 Octyl glycérol 0,3 Caprylyl glycocolle 1,5 Extrait de graines de Mimosa 4,0 Extrait de fleurs de Souci 0,5 Extrait de racine de Guimauve 5,0 Stéaryl glucoside 3,0 PEG-20 stéaryl glucoside 2,5 Alcool béhénylique 2,5 Huile d'Inca-Inchi 3, 0 Beurre de mangue 1,5 Huile de noyaux d'abricot 1,0 Acide oléanolique 0,5 Palmitate de Vitamine A à 1 million U.I./g 0,5 Palmitate de Vitamine C 0,15 Tocophérol naturel 0,70 20 Crème anti-rides 25 30 35 B1654FR 2902335 8 Eau déminéralisée 10,00 Hyaluronate de sodium 0,10 Huiles essentielles naturelles 0,30 Acide citrique et hydroxyde de sodium : 5 quantité suffisante pour atteindre pH = 6 Gomme xanthane 0,50 Eau déminéralisée QSP 100,0 Exemple 2 Crème anti-rides fluide 10 Matrixyl 3000 3,0 Extrait de fleurs de souci 0,5 Extrait de graines d'Acacia dealbata 2,0 Mucilage de fruits de Baobab 5,0 Extrait de graines de Lotus Bleu 1,0 15 Extrait de racine de guimauve 2,5 Escine 0,1 Pentylène glycol 5,0 Capryl glycol 3,0 Octyl glycérol 0,3 20 Sodium heptonate 0,1 Acide 10-hydroxydécanoïque 0, 15 PEG-20 sorbitan monostéarate 3,5 Sorbitan monostéarate 2,5 Huile d'Echium 3,0 25 Perhydrosqualène 3,0 Huile de camélia 1,0 Palmitate de Vitamine C 0,15 Tocophérol 0,7 Monostéarate de glycérol 2,0 30 Alcool cétostéarylique 0,3 Eau déminéralisée 10,0 Protéines d'Amande hydrolysées 5,0 Globulines de pois 3,0 Extrait de miel 3,0 35 Essence d'Ylang-Ylang 0,1 Essence de Géranium 0,1 Essence de Cyprès 0,025 Essence d'Oranges Amères 0,05 B1654FR 2902335 9 Essence de romarin Eau déminéralisée QSP 0, 025 100,0 Exemple 3 Crème raffermissante pour l'ovale du visage 5 Pentylène glycol 5,0 Capryl glycol 3,0 Octyl glycérol 0,3 Sodium heptonate 0,1 Lécithine de Soja hydrogénée 3,0 10 Acide palmitique 0,5 Alcools comprenant entre 12 et 16 atomes de carbone 0,5 Glycérine 2,0 Extrait de graines de Mimosa 10,0 15 Extrait de Barbatimao 1,5 Sulfate de dextran 0,5 Escine 0,1 Caféine 1,0 Hyaluronate de sodium 0,1 20 Extrait de Fomes officinalis 0,5 Huile de Calophyllum Inophyllum 0,5 Huile d'Amandes d'Abricot 2,0 Perhydrosqualène 1,5 Beurre de Karité 0,5 25 Alcool béhénylique 0,7 Alcool butylique 0,5 Mucilage de figues 3,0 Tocophérol 0,5 Essence de Géranium 0,1 30 Eau déminéralisée QSP 100,0 Exemple 4 Le but de l'étude décrite ci-dessous est d'évaluer le potentiel régénérant d'un extrait aqueux de mimosa (Acacia 35 dealbata) sur une co-culture d'épidermes reconstitués/fibroblastes humains. Pour cela, les dosages suivants sont réalisés : B1654FR 2902335 10 - dosage des collagènes totaux - dosage du rapport collagène type I / collagène type III - dosage des métalloprotéinases 3 (MMP-3). 4-1. PROTOCOLE EXPERIMENTAL 5 4.1.1. Epidermes reconstitués, modèle SKINETHICTM Des kératinocytes d'origine humaine sont ensemencés sur des filtres en polycarbonate de 0,5 cm2 dans un milieu défini (MCDB 153 modifié) et supplémenté. Les cellules sont cultivées pendant 14 jours à l'interface air/liquide, le 10 milieu de culture étant changé tous les deux jours. Les épidermes ainsi formés sont utilisés pour la réalisation de l'étude à partir du 17e jour de la culture. Pour évaluer la viabilité cellulaire, un essai préliminaire déterminer n'entraînant L' essai expérimental Lot 1 : produit - Lot 2 : mimosa à - Lot 3 : mimosa à 25 - Lot 4 mimosa àest effectué pour chaque produit étudié afin de les temps de contact composition/épiderme pas de cytotoxicité. est conduit en duplicate à chaque temps : 6 et 24 heures. deux épidermes témoins ne recevant pas de

deux épidermes traités recevant un extrait de 0,2% (2 l/cm2) deux épidermes traités recevant un extrait de 0,5% (2 l/cm2) ^ deux épidermes traités recevant un extrait de 1% (2 l/cm2) .

15 20 La viabilité cellulaire est d'abord étudiée par réaction colorimétrique au sel de tétrazonium (MTT). Le sel de tétrazolium a la propriété d'être réduit en 30 cristaux bleux de formazan par la succinate déshydrogénase mitochondriale des cellules. Cet enzyme, qui joue un rôle important dans le cycle de Krebs, catalyse la déshydro- génation du succinate en fumarate. C'est l'activité de cet enzyme, flavoprotéine très fortement liée à la membrane in- 35 terne mitochondriale, qui est mesurée, par réduction du MTT. Par un dosage spectrophotométrique, il est possible de dé- terminer la toxicité d'une population cellulaire donnée. En effet, l'absorbance est directement reliée à l'activité des B1654FR 2902335 11 succinates déshydrogénases, elle-même liée à la toxicité cellulaire. 0,15 ml de milieu de culture contenant 10% vol/vol de solution de MTT est pipetté sous chacun des filtres/support 5 de culture. Après une incubation de 30 minutes à température ambiante, la couleur des différentes cultures est observée et notée. Les cultures doivent être de couleur bleue/pourpre intense, preuve de la viabilité des cellules de l'épiderme. La viabilité cellulaire est également étudiée par 10 examen histologique. Pour cela, les épidermes fixés dans une solution contenant 10% de formaldéhyde sont inclus dans des blocs en paraffine. Les coupes verticales de 4 microns sont colorées à l'hématoxyline/éosine et photographiées sous un microscope optique. 15 4.1.2. Fibroblastes humains en culture On utilise la méthode de la digestion enzymatique per-mettant d'obtenir des primocultures de fibroblastes à partir d'une biopsie de peau humaine. Les essais sont réalisés sur des fibroblastes entre le 2e et le 4e passage afin d'assurer 20 une reproductibilité entre les différentes expériences. La cytotoxicité du produit extrait de mimosa est évaluée par le test de réduction au bleu de Formazan (MTT) après 24 heures de traitement des cellules avec le produit étudié.

25 L'essai est réalisé en effectuant, pour chaque lot, 5 mesures de la densité optique à 570nm. La constitution des lots est la suivante : - Lot 1 : témoin négatif non traité - Lot 2 : traité par un extrait de mimosa à 0,2% 30 - Lot 3 : traité par un extrait de mimosa à 0,5% - Lot 4 : traité par un extrait de mimosa à 1%. Après 24 heures d'incubation des cellules avec les différentes concentrations du produit à l'étude, elles sont mises en contact avec du MTT pendant 3 heures à 37 C, puis 35 lysées avec du DMSO. La densité optique est déterminée à 570 nm à l'aide d'un spectrophotomètre après homogénéisation de la coloration. B1654FR 2902335 12 4.1.3. Co-culture Epidermes reconstitués / fibroblastes humains en culture Les cultures de fibroblastes sont établies à partir de peau de prépuces humains récoltés lors de circoncisions et 5 sont amplifiées en milieu de culture RPMI 1640 supplémenté par du sérum de veau foetal, de la L-glutamine et de la gentamycine. Les essais sont réalisés sur des fibroblastes, entre le 2e et le 4e passage, afin d'assurer une reproductibilité entre les différentes expérimentations. Les fibroblastes sont ensemencés dans des plaques 24 puits à raison de 105 cellules par ml. Ils sont ensuite incubés à 37 C et 5% de CO2. Après 24 heures d'incubation, les cellules sont mises en contact avec les épidermes reconstitués traités avec l'extrait de mimosa à raison de 2 i/cm2. 15 4.1.3.1. Dosage de la néosynthèse des collagènes Dosage quantitatif des collagènes totaux L'essai est conduit en triplicate après 24 heures de traitement. La constitution des lots est la suivante : 20 - Lot 1 : 2 épidermes/fibroblastes témoins ne recevant aucun produit - Lot 2 : 2 épidermes/fibroblastes traités recevant un extrait de mimosa à 0,2% (2 l/cm2) Lot 3 : 2 épidermes/fibroblastes traités recevant un 25 extrait de mimosa à 0,5% (2 l/cm2) - Lot 4 : 2 épidermes/fibroblastes traités recevant un extrait de mimosa à 1% (2 l/cm2). Après le temps d'incubation, les fibroblastes sont récupérés par centrifugation. Les culots sont digérés par 30 les collagénases (1 mg/culot cellulaire) dans l'acide acétique 0,5 ml/l pendant 24 heures à 4 C. Après centrifugation à 10 000 g, les collagènes sont précipités par le chlorure de sodium (NaCl) à 1 M, le précipité est resuspendu puis dialysé.

35 Les acides aminés primaires sont dérivés par l'acide ophtaldéhyde (OPA) éliminant ainsi leur interférence. L'hydroxyproline et la proline sont alors dérivées par le NBD-Cl par couplage des groupement aminés au NBD-C1. Le B1654FR 2902335 13 NBD-Hyp est séparé et identifié par HPLC en phase inverse. Pour la mise au point de la séparation des dérivés d'acides aminés, un couplage au NBD-CL d'un standard contenant l'hydroxyproline est d'abord réalisé. 5 -L'hydroxyproline est dosée par mesure de la fluorescence après séparation par HPLC en phase inverse : o Injecteur automatique o Colonne Ultrasep C18 (30cm*0,18cm) o 6 pm de porosité 10 o Détecteur de fluorescence La phase mobile est constituée d'un mélange d'acétonitrile/tampon phosphate de sodium 0,1 mol/l, pH 7,2 (9:91 v/v), le débit est réglé à 1 ml/min, l'élution est réalisée en mode statique et le cycle est de 10 minutes. La phase mobile 15 est préalablement filtrée, puis dégazée avant utilisation. Les solutions sont préparées de la façon suivante : NBD-Cl : 25 mmol dissous dans le méthanol, OPA = 150 mmol/1 dissous dans du méthanol, Tampon phosphate = 0,4 mmol/l, pH ajusté à 7,2.

20 La gamme étalon est préparée à partir d'une solution d'hydroxyproline à 50 mg/l. Les dilutions successives permettent d'obtenir des solutions allant de 0,5 à 40 mg/1. La dérivatisation et l'établissement de la courbe d'étalonnage sont effectués à partir de 10 pl d'une solution 25 étalon à différentes concentrations mélangées avec 10 pl du tampon. Après addition de 5 pl d'OPA et agitation, les tubes sont gardés 5 minutes à température ambiante puis 10 pl de la solution NBD-Cl sont ajoutés. Le dérivât se fait à 60 C, au bain marie, pendant 3 minutes, à l'abri de la lumière.

30 Les tubes sont ensuite retirés et la coloration orange per-met de vérifier la dérivatisation. Ils sont, par la suite, mis dans la glace afin d'assurer le refroidissement. 50 pl de ce mélange sont ensuite injectés dans la colonne afin d'obtenir la courbe d'étalonnage qui doit être linéaire.

35 Les échantillons sont traités de la même façon. B1654FR Dosage qualitatif des collagènes de type I et de type III. Calcul du rapport collagène de type I / collagène de type III L'essai est conduit en triplicate après 24 heures de trai-5 tement. La constitution des lots est la suivante : - Lot 1 : 2 épidermes/fibroblastes témoins ne recevant aucun produit ; - Lot 2 : 2 épidermes/fibroblastes traités recevant un 10 extrait de mimosa à 0,2% (2 l/cm2) ; - Lot 3 : 2 épidermes/fibroblastes traités recevant un extrait de mimosa à 0,5% (2 l/cm2) - Lot 4 : 2 épidermes/fibroblastes traités recevant un extrait de mimosa à 1% (2 l/cm2).

15 Après le temps d'incubation, un marquage isotopique est réalisé en présence de : - acide ascorbique : 50 g/mL ; - glutamine : 2 mM ; - sérum de veau foetal : 1% v/v ; 20 - [3H]-Proline (réf. TRK323, Amsterdam) : 50 Ci/puits ; -l'extrait de mimosa aux différentes concentrations. Un volume de chaque échantillon contenant le même taux de radioactivité (100 000 dpm) est prélevé, auquel est ajouté 7,5% (v/v) final de R-mercaptoéthanol (Merck), puis déna- 25 turé pendant 3 minutes à 100 C. Les échantillons sont supplémentés par 3 l de bleu de bromophénol. Les échantillons sont passés sur un gel (SDS PAGE) à 7,5% d'acrylamide. Après décoloration du gel, les bandes correspondant aux différentes chaînes collagéniques sont découpées et placées 30 dans des tubes à scintillation en présence de 500 l de Soluène (Packard). Les bandes sont dissoutes à 60 C pendant 18 heures. La radioactivité est ensuite mesurée en scintillation liquide (compteur R Kontron). 35 4.1.3.2. Etude de l'effet du produit sur la suppression de la MMP-3 (Metalloprotéinase 3) A la fin du temps d'incubation (24 heures), les milieux de culture sont prélevés, et le dosage de la MMP-3 est réa-B1654FR 2902335 15 lisé conformément aux protocoles décrits dans les kits de dosage (Kit de détection de la Métalloprotéinase 3 (MMP-3) . Interchim). 4.2.RESULTATS 4.2.1. Evaluation de la cytotoxicité - Epidermes reconstitués L'évaluation de la cytotoxicité par réaction colorimétrique au sel de tétrazonium (MTT) est réalisée en fonction des différentes concentrations du produit extrait de mimosa , après 24 heures de contact. Les résultats sont regroupés dans le tableau ci-dessous : Densité optique % Témoin 1,210 0,03 - Mimosa (0,2%) 1,225 0,04 n.s. Mimosa (0,5%) 1,202 0,05 n.s. Mimosa (1%) 1,214 0,03 n.s. n.s. : non significatif Les épidermes reconstitués traités par les différentes concentrations du produit extrait de mimosa à raison de 2 gl/cm2 montrent une couleur bleue/pourpre intense, preuve de la viabilité des cellules de l'épiderme. Par examen histologique, il apparaît que le produit extrait de mimosa déposé à raison de 2 gl/cm2 sur des épidermes reconstitués traités pendant 48 heures, comparati- vement à des épidermes témoins, n'induit aucune toxicité. Les images histologiques, après coloration HES, d'épidermes traités par les produits sont comparables à celles des épi-dermes témoins et répondent aux paramètres histologiques normaux. - Fibroblastes humains en culture L'évaluation de la cytotoxicité par réaction colorimétrique au sel de tétrazonium (MTT) est réalisée en fonction des différentes concentrations du produit extrait de mimosa , après 24 heures de contact. Les résultats sont regroupés dans le tableau ci-dessous : B1654FR 2902335 16 Densité optique % Témoin 0,330 0,01 - Mimosa (0,2%) 0,345 0,02 n.s. Mimosa (0,5%) 0,355 0,01 n.s. Mimosa (1%) 0,356 0,03 n.s. n.s. : non significatif Les résultats obtenus montrent que le produit extrait de mimosa n'entraîne aucune cytotoxicité aux différentes concentrations testées. 5 4.2.2. Evaluation de la néosynthèse des collagènes totaux Les résultats des mesures des collagènes totaux obtenus dans la couche cellulaire et dans le milieu de culture sont regroupés dans le tableau ci-dessous. Collagènes totaux dans % Collagène total dans % la couche cellulaire le milieu de culture en en [3H] dpm/106 cellules [3H] dpm/106cellules Témoin 4 852 648 244 025 - 6 758 622 86 538 - Mimosa 5 140 312 122 443 +5 6 912 438 148 315 ns (0,2%) ns Mimosa 6 012 412 85 319* +24 7 819 413 82 456* +16 (0, 5%) Mimosa 6 512 538 25 180* +34 8 136 461 68 395* +20 (1%) 10 n.s. : non significatif *Significativement différent par rapport au témoin (p<0,01) (wilcoxon Rank Sum Test) Les résultats montrent que le produit extrait de mimosa aux concentrations 0,5% et 1% entraîne une induc- 15 tion de la néosynthèse des collagènes totaux au niveau de la couche cellulaire respectivement de 24 et 34%. Cette induction de la néosynthèse des collagènes se traduit par une augmentation du relargage des collagènes dans le milieu de culture (+16 et +20%). B1654FR 2902335 17 4.2.3. Evaluation qualitative de la synthèse du collagène : calcul du rapport collagène type I/collagène type III Les résultats sont regroupés dans le tableau ci-dessous. Collagène Collagène Rapport collagène type type I type III I/collagène type III Témoin 6302 421 2080 148 3,03 Mimosa 5945 312 1988 387 2,99 (0,2%) Mimosa 7348 402 3126 504 2,55 (0,5%) Mimosa 7546 982 3559 857 2,12 (1%) 5 Les résultats montrent que le rapport collagène type I / collagène type III est voisin de 3 dans la couche cellulaire témoin, ce qui implique un dépôt de collagène I trois fois supérieur au collagène III. Ce rapport est très voisin de celui montré pour le derme humain in vivo. Le produit 10 extrait de mimosa aux concentrations 0,5% et 1% induit une augmentation des collagènes I et III avec une diminution du rapport collagène type I/collagène type III, ce qui implique une augmentation du collagène III. 4.2.4. Dosage des métalloprotéinases 3 (MMP-3) 15 Le dosage des MMP3 a été réalisé par des kits ELISA au niveau du milieu de culture. Les résultats sont reportés dans le tableau ci-dessous : Concentration % (MMP3)(pg/ml) Témoin 836 33 - Mimosa (0, 2%) 670 21* -20 Mimosa (0, 5%) 605 38* -28 Mimosa (1%) 492 30* -41 *significativement différent par rapport au témoin p<0,01 (wilcoxon Rank Sum Test) 20 Les résultats obtenus montrent que le produit extrait de mimosa aux concentrations 0,2%, 0,5% et 1%, diminue B1654FR 2902335 18 l'expression de la métalloprotéinase 3 respectivement de 20%, 28% et 41%. Conclusion Ainsi, dans les conditions expérimentales retenues et 5 au vu des résultats obtenus, il apparaît que le produit extrait de mimosa présente un effet régénérant de la matrice extracellulaire des fibroblastes humains. Cet effet se traduit par une augmentation de la néosynthèse des collagènes totaux avec une diminution du rap- 10 port collagène type I/collagène type III, ainsi que par une diminution de l'expression des métalloprotéinases 3 (MMP-3). Il est à noter que l'augmentation de synthèse des collagènes est une augmentation du collagène de type III, qui se produit habituellement dans une peau jeune, le collagène de 15 type I n'étant pas diminué. Il s'agit donc bien d'une néosynthèse de collagène jeune dans un rapport favorable. Ces résultats démontrent l'efficacité de l'extrait de mimosa selon l'invention pour la prévention et le traitement des signes du vieillissement cutané.

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Claims (9)

Revendications

1. Utilisation d'un extrait de mimosa pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermatolo- gique pour application topique, destinée à lutter contre les 5 signes du vieillissement cutané.

2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'extrait de mimosa est un extrait d'Acacia dealbata, d'Acacia farnesiana ou d'Acacia decurrens.

3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, 10 caractérisée en ce que l'extrait est obtenu à partir de graines de mimosa.

4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'extrait est obtenu par macération dans l'eau de graines de mimosa 15 pulvérisées.

5. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que l'extrait de mimosa présente les caractéristiques suivantes : - matières sèches 2 à 4% 20 - densité à 22 C 0,980 à 1,020 -indice de réfraction à 22 C 1,330 à 1,350 - pH 5,7 à 7,2 - teneur en protéines totale >0,1% (par rapport aux matières sèches) 25

6. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition comprend entre 0,001 et 15% en poids d'extrait de mimosa.

7. Utilisation selon la revendication 6, caractérisée 30 en ce que la composition comprend 2% en poids d'extrait de mimosa.

8. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que la composition comprend en outre des quantités appropriées 35 d'une ou plusieurs substances choisies parmi la Vitamine A palmitate, la Vitamine C ou ses dérivés, les protéines de graines d'amarante (Amarantus caudatus), les globulines de pois ou des mucilages tels que le mucilage de fruits de B1654FR 2902335 20 baobab, l'huile de Calophylum, l'huile d'Echium, un palmitoyl pentapeptide-3 ou des dérivés tels que le palmitoyl GHK et le palmitoyl GQPR ou le palmitoyl VGVAPG associé à un céramide-2, ainsi qu'un céramide, une association comprenant du palmitoyl pentapeptide-3 et un extrait de Siegesbeckia orientalis, les polyphénols, tels que les polyphénols de cacao, l'acide oléanolique, un extrait de souci (Calendula officinalis ou Calendula arvensis), une antihyaluronidase telle que Echinacine B, l'Imperata cylindrica, un extrait de graines de lotus, de graines de coquelicot, de racine de guimauve, les peptides d'Hibiscus de type Myoxynol , les extraits de fenouil, les peptides d'origine végétale de type Argireline .

9. Procédé cosmétique pour combattre les signes du vieillissement cutané, consistant à appliquer sur les zones de la peau affectées une composition contenant une quantité efficace d'extrait de mimosa.