FR2766207A1 - Gene chimere codant pour la drosomycine, vecteur le contenant pour la transformation des cellules vegetales et plantes transformees obtenues resistantes aux maladies - Google Patents
Gene chimere codant pour la drosomycine, vecteur le contenant pour la transformation des cellules vegetales et plantes transformees obtenues resistantes aux maladies Download PDFInfo
- Publication number
- FR2766207A1 FR2766207A1 FR9709663A FR9709663A FR2766207A1 FR 2766207 A1 FR2766207 A1 FR 2766207A1 FR 9709663 A FR9709663 A FR 9709663A FR 9709663 A FR9709663 A FR 9709663A FR 2766207 A1 FR2766207 A1 FR 2766207A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- chimeric gene
- drosomycin
- sequence
- diseases
- plant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 67
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims abstract description 21
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract description 21
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims abstract description 18
- 101710164770 Drosomycin Proteins 0.000 title claims description 62
- 230000009466 transformation Effects 0.000 title claims description 11
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 title 1
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 24
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 74
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 26
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 25
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims description 14
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 claims description 13
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 13
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 8
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 6
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 6
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 claims description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 6
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 claims description 5
- 241000701489 Cauliflower mosaic virus Species 0.000 claims description 4
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 4
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 4
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 4
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 claims description 3
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 3
- 241000589156 Agrobacterium rhizogenes Species 0.000 claims description 2
- 235000011299 Brassica oleracea var botrytis Nutrition 0.000 claims description 2
- 240000003259 Brassica oleracea var. botrytis Species 0.000 claims description 2
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 claims description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 37
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 20
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 18
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- UPMXNNIRAGDFEH-UHFFFAOYSA-N 3,5-dibromo-4-hydroxybenzonitrile Chemical compound OC1=C(Br)C=C(C#N)C=C1Br UPMXNNIRAGDFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 239000005489 Bromoxynil Substances 0.000 description 7
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 description 6
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 6
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 6
- FTMRPIVPSDVGCC-GUBZILKMSA-N Arg-Val-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N FTMRPIVPSDVGCC-GUBZILKMSA-N 0.000 description 5
- FTNVLGCFIJEMQT-CIUDSAMLSA-N Asp-Cys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N FTNVLGCFIJEMQT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- PBIPLDMFHAICIP-DCAQKATOSA-N Lys-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PBIPLDMFHAICIP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 5
- AEGUWTFAQQWVLC-BQBZGAKWSA-N Ser-Gly-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AEGUWTFAQQWVLC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 5
- ABLQPNMKLMFDQU-BIIVOSGPSA-N Cys-Ser-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CS)N)C(=O)O ABLQPNMKLMFDQU-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 4
- QNNYDGBKNFDYOD-UBHSHLNASA-N Cys-Trp-Cys Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N QNNYDGBKNFDYOD-UBHSHLNASA-N 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- GWCRIHNSVMOBEQ-BQBZGAKWSA-N Gly-Arg-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GWCRIHNSVMOBEQ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 4
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108700001094 Plant Genes Proteins 0.000 description 4
- IXCHOHLPHNGFTJ-YUMQZZPRSA-N Ser-Gly-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)N IXCHOHLPHNGFTJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Lys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- 241000723792 Tobacco etch virus Species 0.000 description 4
- VTCKHZJKWQENKX-KBPBESRZSA-N Tyr-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O VTCKHZJKWQENKX-KBPBESRZSA-N 0.000 description 4
- UMPVMAYCLYMYGA-ONGXEEELSA-N Val-Leu-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O UMPVMAYCLYMYGA-ONGXEEELSA-N 0.000 description 4
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 4
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 4
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 4
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- PXKLCFFSVLKOJM-ACZMJKKPSA-N Ala-Asn-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PXKLCFFSVLKOJM-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 3
- NHCPCLJZRSIDHS-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NHCPCLJZRSIDHS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 3
- VHVVPYOJIIQCKS-QEJZJMRPSA-N Ala-Leu-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 VHVVPYOJIIQCKS-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 3
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 3
- LYCDZGLXQBPNQU-WDSKDSINSA-N Glu-Gly-Cys Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O LYCDZGLXQBPNQU-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- MFBYPDKTAJXHNI-VKHMYHEASA-N Gly-Cys Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](CS)C([O-])=O MFBYPDKTAJXHNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- FKKHDBFNOLCYQM-FXQIFTODSA-N Pro-Cys-Ala Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FKKHDBFNOLCYQM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- BZOSBRIDWSSTFN-AVGNSLFASA-N Val-Leu-Met Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N BZOSBRIDWSSTFN-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- SUGRIIAOLCDLBD-ZOBUZTSGSA-N Val-Trp-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N SUGRIIAOLCDLBD-ZOBUZTSGSA-N 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 3
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 3
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 3
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 3
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 108010058731 nopaline synthase Proteins 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 3
- 230000025540 plastid localization Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- GFFRWIJAFFMQGM-NUMRIWBASA-N Asn-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GFFRWIJAFFMQGM-NUMRIWBASA-N 0.000 description 2
- 241000123650 Botrytis cinerea Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- RRIJEABIXPKSGP-FXQIFTODSA-N Cys-Ala-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CS RRIJEABIXPKSGP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 2
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- LWYUQLZOIORFFJ-XKBZYTNZSA-N Glu-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O LWYUQLZOIORFFJ-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 2
- LBCAQRFTWMMWRR-CIUDSAMLSA-N His-Cys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LBCAQRFTWMMWRR-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N L-leucyl-L-phenylalanine Natural products CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- LZDNBBYBDGBADK-UHFFFAOYSA-N L-valyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LZDNBBYBDGBADK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZDBMWELMUCLUPL-QEJZJMRPSA-N Leu-Phe-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZDBMWELMUCLUPL-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 2
- RFQATBGBLDAKGI-VHSXEESVSA-N Lys-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O RFQATBGBLDAKGI-VHSXEESVSA-N 0.000 description 2
- MIMXMVDLMDMOJD-BZSNNMDCSA-N Lys-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MIMXMVDLMDMOJD-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- AWOMRHGUWFBDNU-ZPFDUUQYSA-N Met-Gln-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCSC)N AWOMRHGUWFBDNU-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 2
- WXUUEPIDLLQBLJ-DCAQKATOSA-N Met-Met-Gln Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N WXUUEPIDLLQBLJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010066427 N-valyltryptophan Proteins 0.000 description 2
- LNICFEXCAHIJOR-DCAQKATOSA-N Pro-Ser-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LNICFEXCAHIJOR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- 241000561282 Thielaviopsis basicola Species 0.000 description 2
- IQGJAHMZWBTRIF-UBHSHLNASA-N Trp-Asp-Asn Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N IQGJAHMZWBTRIF-UBHSHLNASA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 2
- 108010044056 leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 2
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- ZQBAKBUEJOMQEX-UHFFFAOYSA-N phenyl salicylate Chemical compound OC1=CC=CC=C1C(=O)OC1=CC=CC=C1 ZQBAKBUEJOMQEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 1-naphthaleneacetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CC=CC2=C1 PRPINYUDVPFIRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001488 Aggression Diseases 0.000 description 1
- SSQHYGLFYWZWDV-UVBJJODRSA-N Ala-Val-Trp Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](C)N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(O)=O SSQHYGLFYWZWDV-UVBJJODRSA-N 0.000 description 1
- 241000724328 Alfalfa mosaic virus Species 0.000 description 1
- 241000219195 Arabidopsis thaliana Species 0.000 description 1
- FRBAHXABMQXSJQ-FXQIFTODSA-N Arg-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FRBAHXABMQXSJQ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- ULRPXVNMIIYDDJ-ACZMJKKPSA-N Asn-Glu-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N ULRPXVNMIIYDDJ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- WSWYMRLTJVKRCE-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WSWYMRLTJVKRCE-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- ZELQAFZSJOBEQS-ACZMJKKPSA-N Asp-Asn-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZELQAFZSJOBEQS-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- 244000003416 Asparagus officinalis Species 0.000 description 1
- 235000005340 Asparagus officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 101150075884 BRX gene Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241001465180 Botrytis Species 0.000 description 1
- 101100512078 Caenorhabditis elegans lys-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100262626 Caenorhabditis elegans ubql-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241001157813 Cercospora Species 0.000 description 1
- 241000530549 Cercospora beticola Species 0.000 description 1
- UKVGHFORADMBEN-GUBZILKMSA-N Cys-Arg-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UKVGHFORADMBEN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- UXUSHQYYQCZWET-WDSKDSINSA-N Cys-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O UXUSHQYYQCZWET-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- SRIRHERUAMYIOQ-CIUDSAMLSA-N Cys-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SRIRHERUAMYIOQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- BNCKELUXXUYRNY-GUBZILKMSA-N Cys-Lys-Glu Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N BNCKELUXXUYRNY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 102000001477 Deubiquitinating Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010093668 Deubiquitinating Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000255601 Drosophila melanogaster Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 1
- 241000223194 Fusarium culmorum Species 0.000 description 1
- PXXGVUVQWQGGIG-YUMQZZPRSA-N Glu-Gly-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PXXGVUVQWQGGIG-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- JSIQVRIXMINMTA-ZDLURKLDSA-N Glu-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JSIQVRIXMINMTA-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- XUORRGAFUQIMLC-STQMWFEESA-N Gly-Arg-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)CN)O XUORRGAFUQIMLC-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- FFJQAEYLAQMGDL-MGHWNKPDSA-N Ile-Lys-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FFJQAEYLAQMGDL-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 1
- 241000588744 Klebsiella pneumoniae subsp. ozaenae Species 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- 101710138460 Leaf protein Proteins 0.000 description 1
- DDVHDMSBLRAKNV-IHRRRGAJSA-N Leu-Met-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DDVHDMSBLRAKNV-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- VSJXPNCQYGOLFM-XIRDDKMYSA-N Lys-Cys-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O VSJXPNCQYGOLFM-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 101100342977 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010033272 Nitrilase Proteins 0.000 description 1
- 102100026056 Oligodendrocyte transcription factor 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710195927 Oligodendrocyte transcription factor 3 Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241001533598 Septoria Species 0.000 description 1
- SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N Ser-Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SRSPTFBENMJHMR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 101800002927 Small subunit Proteins 0.000 description 1
- NRUPKQSXTJNQGD-XGEHTFHBSA-N Thr-Cys-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O NRUPKQSXTJNQGD-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- WEAPHMIKOICYAU-QEJZJMRPSA-N Trp-Cys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WEAPHMIKOICYAU-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- WDGDKHLSDIOXQC-ACRUOGEOSA-N Tyr-Leu-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WDGDKHLSDIOXQC-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 241001360088 Zymoseptoria tritici Species 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000016571 aggressive behavior Effects 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 description 1
- 230000001408 fungistatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 108010020688 glycylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000006870 ms-medium Substances 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000969 phenyl salicylate Drugs 0.000 description 1
- 230000029553 photosynthesis Effects 0.000 description 1
- 238000010672 photosynthesis Methods 0.000 description 1
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000012882 rooting medium Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/43504—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
- C07K14/43563—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from insects
- C07K14/43577—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from insects from flies
- C07K14/43581—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from insects from flies from Drosophila
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8216—Methods for controlling, regulating or enhancing expression of transgenes in plant cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
- C12N15/8282—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for fungal resistance
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
La présente invention a pour objet un gène chimère contenant une séquence d'ADN codant pour la drosomycine, un vecteur contenant le gène chimère, un procédé pour la transformation des plantes et les plantes transformées.La drosomycine produite par les plantes transformées leur confère une résistance aux maladies, en particulier d'origine fongique.
Description
Gène chimère codant pour la drosomycine, vecteur le contenant pour la tranformation
des cellules végétales et plantes transformées obtenues résistantes aux maladies
La présente invention a pour objet une séquence d'ADN codant pour la drosomycine, un gène chimère la contenant, un vecteur contenant le gène chimère et un procédé pour la transformation des plantes et les plantes transformées résistantes aux maladies.
des cellules végétales et plantes transformées obtenues résistantes aux maladies
La présente invention a pour objet une séquence d'ADN codant pour la drosomycine, un gène chimère la contenant, un vecteur contenant le gène chimère et un procédé pour la transformation des plantes et les plantes transformées résistantes aux maladies.
Il existe aujourd'hui un besoin grandissant de rendre les plantes résistantes contre les maladies notamment fongiques afin de diminuer, voire d'éviter, d'avoir recours à des traitements avec des produits de protection antifongiques, en vue de protéger l'environnement. Un moyen d'augmenter cette résistance aux maladies consiste à transformer les plantes de manière qu'elles produisent des substances à même d'assurer leur défense contre ces maladies.
On connaît différentes substances d'origine naturelle, en particulier des peptides, présentant des propriétés bactéricides ou fongicides, notamment contre les champignons responsables des maladies des plantes. Toutefois, le problème consiste à trouver de telles substances qui pourront non seulement être produites par des plantes transformées, mais encore conserver leurs propriétés bactéricides ou fongicides et les conférer aux dites plantes. Au sens de la présente invention, on entend par bactéricide ou fongicide tant les propriétés bactéricides ou fongicides proprement dites que les propriétés bactériostatiques ou fongistatiques.
La drosomycine est un peptide produit par les larves et adultes de drosophiles par induction à la suite d'une blessure septique ou de l'injection d'une faible dose de bactéries. Ce peptide a été décrit comme présentant certaines propriétés antifongiques et antibactériennes in vitro, notamment dans la demande de brevet français 2 725 992, où le peptide est obtenu par induction sur les drosophiles et purification. Le gène codant pour le dit peptide a également été décrit par Fehlbaum & coll. (1994). La possibilité d'intégrer ce gène à une plante pour lui conférer une résistance aux maladies d'origine fongique ou bactérienne n'a toutefois pas été décrite à ce jour.
On a maintenant trouvé que le gène de la drosomycine pouvait être inséré dans une plante pour lui conférer des propriétés de résistance aux maladies fongiques et aux maladies d'origine bactérienne, apportant une solution particulièrement avantageuse au problème énoncé ci-dessus.
L'invention a donc d'abord pour objet un gène chimère comprenant une séquence ADN codant pour la drosomycine ainsi que des éléments de régulation en position 5' et 3' hétérologues pouvant fonctionner dans les plantes et un vecteur pour la transformation des plantes contenant ce gène chimère. Elle comprend aussi une cellule végétale transformée contenant au moins un ADN codant pour la drosomycine et une plante résistante aux maladies contenant la dite cellule. Elle concerne enfin un procédé de transformation des plantes pour les rendre résistantes aux maladies dans lequel on insère un gène codant pour la drosomycine.
Par drosomycine, on entend selon l'invention tout peptide comprenant essentiellement la séquence peptidique définie dans la demande de brevet FR 2 725 992, ainsi que les séquences homologues équivalentes dans lesquelles certains acides aminés sont remplacés par des acides aminés différents mais équivalents sur des sites n'induisant pas de modification substantielle de l'activité antifongique ou antibactérienne de la dite séquence homologue. Par séquence peptidique comprenant essentiellement la séquence peptidique définie dans la demande de brevet FR 2 725 992, on entend non seulement la drosomycine mature décrite dans cette demande et définie par l'identificateur de séquence n" 4, mais également une telle séquence comprenant à l'une ou l'autre de ses extrémités, ou les deux, des résidus peptidiques nécessaires à son expression et ciblage dans la plante transformée, notamment la séquence dite "pre-pro" définie par l'identificateur de séquence n" 6.
La présente invention concerne donc un gène chimère comprenant une séquence codante pour la drosomycine ainsi que des éléments de régulation en position 5' et 3' hétérologues pouvant fonctionner dans les plantes, la séquence codante comprenant au moins une séquence d'ADN codant pour la drosomycine telle que définie ci-dessus, et notamment l'ADN codant pour la protéine mature ou I'ADN "longueur totale" (full-length) codant pour la séquence dite "pre-pro", en particulier l'ADN tel que défini par les identificateurs de séquences n"l, 3 ou 5. Elle peut comprendre également une séquence d'ADN codant pour une protéine de fusion protéine-drosomycine , dont la coupure par les systèmes enzymatiques de la plante permet la libération de la drosomycine. C'est le cas notamment d'une protéine de fusion ubiquitine-drosomycine.
On entend par "plante" tout organisme multicellulaire différentié capable de photosynthèse et par "cellule végétale" toute cellule issue d'une plante et pouvant constituer des tissus indifférenciés tels que des cals, ou des tissus différentiés tels que des embryons ou des parties de plantes ou des plantes ou des semences.
Les éléments de régulation sont bien connus de l'homme du métier, et comprennent notamment des séquences promotrices, des activateurs de transcription, des peptides de transit, des séquences terminatrices, etc.
Comme séquence de régulation promotrice on peut utiliser toute séquence promotrice d'un gène s'exprimant naturellement dans les plantes en particulier un promoteur d'origine bactérienne, virale ou végétale tel que, par exemple, celui d'un gène de la petite sous-unité de ribulose-biscarboxylase (RuBisCO) ou d'un gène de virus de plante tel que, par exemple, celui de la mosaique du choux fleur (CAMV 19S ou 35S), ou un promoteur inducible par les pathogènes comme PR-la du tabac ou
AoPRT-L d asperge, tout promoteur convenable connu pouvant être utilisé. De préférence on a recours à une séquence de régulation promotrice qui favorise la surexpression de la séquence codante de manière constitutive ou induite par l'attaque d'un pathogène. tel que par exemple, celle comprenant au moins un promoteur d'histone tel que décrit dans la demande EP 0 507 698.
AoPRT-L d asperge, tout promoteur convenable connu pouvant être utilisé. De préférence on a recours à une séquence de régulation promotrice qui favorise la surexpression de la séquence codante de manière constitutive ou induite par l'attaque d'un pathogène. tel que par exemple, celle comprenant au moins un promoteur d'histone tel que décrit dans la demande EP 0 507 698.
Selon l'invention, on peut également utiliser, en association avec la séquence de régulation promotrice, d'autres séquences de régulation, qui sont situées entre le promoteur et la séquence codante, telles que des activateurs de transcription "enhancer", comme par exemple l'activateur de translation du virus etch du tabac (TEV) décrit dans la demande WO 87/07644, ou des peptides de transît, soit simples, soit doubles, et dans ce cas éventuellement séparés par une séquence intermédiaire, c'est à dire comprenant, dans le sens de la transcription, une séquence codant pour un peptide de transit d'un gène végétal codant pour une enzyme à localisation plastidiale, une partie de séquence de la partie mature N-terminale d'un gène végétal codant pour une enzyme à localisation plastidiale, puis une séquence codant pour un second peptide de transit d'un gène végétal codant pour une enzyme à localisation plastidiale.constituée d'une partie de séquence de la partie mature N-terminale d'un gène végétal codant pour une enzyme à localisation plastidiale, tels que décrit dans la demande EP 0 508 909.
Comme séquence de régulation terminatrice ou de polyadénylation, on peut utiliser toute séquence correspondante d'origine bactérienne, comme par exemple le terminateur nos d'Agrobacterium tumefaciens, ou encore d'origine végétale, comme par exemple un terminateur d'histone tel que décrit dans la demande EP 0 633 317.
La présente invention concerne également un vecteur d'intégration pour la transformation des plantes contenant au moins un gène chimère tel que défini cidessus.
L'invention a encore pour objet un procédé de transformation des cellules végétales par intégration d'au moins un gène chimère tel que défini ci-dessus, transformation qui peut être obtenue par tout moyen connu approprié, amplement décrit dans la littérature spécialisée et notamment les demandes citées dans la présente demande.
Une série de méthodes consiste à bombarder des cellules ou des protoplastes avec des particules auxquelles sont accrochées les séquences d'ADN.
Une autre série de méthodes consiste à utiliser comme moyen de transfert dans la plante un gène chimère inséré dans un plasmide Ti d'Agrobacterium tumefaciens ou
Ri d'Agrobacterium rhizogenes.
Ri d'Agrobacterium rhizogenes.
D'autres méthodes peuvent être utilisées telles que la micro-injection ou l'électroporation.
L'homme du métier fera le choix de la méthode appropriée en fonction de la nature de la plante, notamment de son caractère monocotylédone ou dicotylédone.
La présente invention a encore pour objet les cellules végétales, de plantes monocotylédones ou dicotylédones, notamment de cultures, transformées et contenant dans leur génome une quantité efficace d'un gène comprenant une séquence codante pour la drosomycine définie ci-dessus.
La présente invention a encore pour objet les plantes contenant des cellules transformées, en particulier les plantes régénérées à partir des cellules transformées. La régénération est obtenue par tout procédé approprié qui dépende de la nature de l'espèce, comme par exemple décrit dans les demandes ci-dessus.
Les plantes ainsi transformées sont résistantes à certaines maladies, en particulier à certaines maladies fongiques. De ce fait, la séquence d'ADN codant pour la drosomycine peut être intégré avec pour objectif principal la réalisation de plantes résistantes aux dites maladies, la drosomycine étant efficace contre des maladies fongiques telles que celles causées par Botrytis, en particulier Botrytis cinerea (mycélium ou spores), Cercospora, en particulier Cercospora beticola, Septoria, en particulier Septoria tritici, ou Fusarium, en particulier Fusarium culmorum (mycélium ou spores) ou Fusariurn graminearum.
Dans ce cas, le gène chimère pourra comprendre également et de manière avantageuse au moins un marqueur de sélection, tel qu'un ou plusieurs gènes de tolérance aux herbicides.
La séquence d'ADN codant pour la drosomycine peut également être intégrée comme marqueur de sélection lors de la transformation de plantes avec d'autres séquences codant pour d'autres peptides ou protéines d'intérêt, comme par exemple des gènes de tolérance aux herbicides. De tels gènes de tolérance aux herbicides sont bien connus de l'homme du métier.
Bien entendu, les cellules et plantes transformées selon l'invention peuvent comprendre outre la séquence codant pour la drosomycine, d'autres séquences hétérologues codant pour d'autres peptides complémentaires susceptibles de conférer à la plante des résistances à d'autres maladies d'origine bactérienne ou fongique.
Les autres séquences peuvent être intégrées au moyen du même vecteur comprenant un gène chimère, lequel comprend une première séquence codant pour la drosomycine et au moins une autre séquence codant pour un autre peptide ou protéine d'intérêt.
Elles peuvent également être intégrées au moyen d'un autre vecteur comprenant au moins la dite autre séquence, selon les techniques usuelles définies ci-dessus.
Les plantes selon l'invention peuvent encore être obtenues par croisement de parents, l'un portant le gène selon l'invention codant pour la drosomycine, l'autre portant un gène codant pour au moins un autre peptide ou protéine d'intérêt.
Les exemples ci-après permettent d'illustrer l'invention, la préparation du gène chimère, du vecteur d'intégration, des plantes transformées et leur résistance à différentes maladies d'origine fongique. Les figures I à 7 en annexe décrivent les structures schématiques de certains plasmides préparés pour la construction des gènes chimères. Dans ces figures, les différents sites de restriction sont marqués en italiques.
Exemple 1: Construction des mènes crinières
Toutes les techniques employées ci-après sont des techniques standard de laboratoire. Les protocoles détaillés de ces techniques sont notamment décrits dans
Ausubel & coll.
Toutes les techniques employées ci-après sont des techniques standard de laboratoire. Les protocoles détaillés de ces techniques sont notamment décrits dans
Ausubel & coll.
pRPA-RD-180:
On insère un clone entier de l'ADNc codant pour la drosomycine décrit par
Fehlbaum & coll (SEQ. ID N 1) dans le plasmide pCR-1000 (INVITROGEN) comme fragment EcoRI-HindIII.
On insère un clone entier de l'ADNc codant pour la drosomycine décrit par
Fehlbaum & coll (SEQ. ID N 1) dans le plasmide pCR-1000 (INVITROGEN) comme fragment EcoRI-HindIII.
pRPA-RD-182: Création d'une région codant pour la drosomycine dite "longueur totale" (correspondant au peptide pre-pro) en éliminant la région non transcrite en 5' et en supprimant le premier codon ATG.
Le plasmide pRPA-RD- 180 est digéré avec les enzymes de restriction Scal et
EcoRI, et le grand fragment d'ADN est purifié. Un oligonucléotide synthétique double brins de séquence Oligo 1 suivante est ensuite lié à la séquence d'ADN purifiée dérivée de pRPA-RD-180: Oligo 1: 5' AATTCCCGAAGACGACATGCAGATCAAGT 3'
GGGCTTCTGCTGTACGTCTAGTTCA pRPA-RD-183: Création d'une séquence codant pour la drosomycine mature qui ne comprend pas la région non transcrite en 3'.
EcoRI, et le grand fragment d'ADN est purifié. Un oligonucléotide synthétique double brins de séquence Oligo 1 suivante est ensuite lié à la séquence d'ADN purifiée dérivée de pRPA-RD-180: Oligo 1: 5' AATTCCCGAAGACGACATGCAGATCAAGT 3'
GGGCTTCTGCTGTACGTCTAGTTCA pRPA-RD-183: Création d'une séquence codant pour la drosomycine mature qui ne comprend pas la région non transcrite en 3'.
Les deux oligonucléotides synthétiques complémentaires de séquences Oligo 2 et Oligo 3 ci-après sont hybridés à 65 C pendant 5 minutes puis par diminution lente de la température à 30 C pendant 30'.
Oligo 2: 5' GAGAGATCCC CCGCGGTGGT GACTGCCTGT CCGGAAGATA
CAAGGGTCCC TGTGCCGTCT GGGACAACGA GACCTGTCGT
CGTGTGTGCA AGGAGGAGGG 3'
Oligo3: 5' GCGCGCGGAT CCTTAGCATC CTTCGCACCA GCACTTCAGA
CTGGGGCTGC AGTGGCCACT GGAGCGTCCC TCCTCCTTGC
ACACACGACG 3'
Après hybridation entre l'Oligo 2 et l'Oligo 3. l'ADN resté simple brin sert de matrice au fragment klenow de la polymérase 1 de E. coli (dans les conditions standard préconisées par le fabriquant (New England Biolabs)) pour la création de l'oligonucléotide double brin. Cet oligonucléotide double brin est ensuite digéré par les enzymes de restriction Sac!! et EcoRI et clonés dans le plasmide pBS II SK(-) (Stratagene) digéré par les même enzymes de restriction. On obtient alors un clone comprenant la région codant pour la drosomycine mature située entre les sites de restriction Sac!! et BamHI (SEQ ID 3).
CAAGGGTCCC TGTGCCGTCT GGGACAACGA GACCTGTCGT
CGTGTGTGCA AGGAGGAGGG 3'
Oligo3: 5' GCGCGCGGAT CCTTAGCATC CTTCGCACCA GCACTTCAGA
CTGGGGCTGC AGTGGCCACT GGAGCGTCCC TCCTCCTTGC
ACACACGACG 3'
Après hybridation entre l'Oligo 2 et l'Oligo 3. l'ADN resté simple brin sert de matrice au fragment klenow de la polymérase 1 de E. coli (dans les conditions standard préconisées par le fabriquant (New England Biolabs)) pour la création de l'oligonucléotide double brin. Cet oligonucléotide double brin est ensuite digéré par les enzymes de restriction Sac!! et EcoRI et clonés dans le plasmide pBS II SK(-) (Stratagene) digéré par les même enzymes de restriction. On obtient alors un clone comprenant la région codant pour la drosomycine mature située entre les sites de restriction Sac!! et BamHI (SEQ ID 3).
oRPA-RD-186: Elimination de la région 3' non transcrite de la région codant pour la drosomycine longueur totale de pRPA-RD-182.
Le plasmide pRPA-RD- 182 est digéré avec les enzymes de restriction BspEI et
Kpnl, et le grand fragment d'ADN est purifié. Le plasmide pRPA-RD-183 est ensuite digéré avec les enzymes de restriction BspEI et Kan!, et le petit fragment d'ADN est purifié. Ces deux fragments purifiés sont ensuites liés de manière à obtenir un plasmide contenant la région codant pour le peptide pre-pro de la drosomycine dont le premier codon ATG et les deux régions non codantes en 5' et 3' ont été supprimées (SEQ ID 5).
Kpnl, et le grand fragment d'ADN est purifié. Le plasmide pRPA-RD-183 est ensuite digéré avec les enzymes de restriction BspEI et Kan!, et le petit fragment d'ADN est purifié. Ces deux fragments purifiés sont ensuites liés de manière à obtenir un plasmide contenant la région codant pour le peptide pre-pro de la drosomycine dont le premier codon ATG et les deux régions non codantes en 5' et 3' ont été supprimées (SEQ ID 5).
pRPA-RD-187: Création d'un vecteur d'expression dans les plantes comprenant la séquence codant pour la forme mature de la drosomycine.
Le plasmide pUGUS(118), dérivé du pUC-19, a été obtenu auprès du Dr.
Richard Vierstra de l'Université du Wisconsin (plasmide non décrit). Ce plasmide dont la structure schématique est représentée sur la figure 1, contient le promoteur CaMV 35S qui dirige l'expression d'un ARN contenant la séquence non traduite en 5' du virus de la mosaïque alfalfa (AMV 5' UTR; Brederode & coll., 1980), la région N-terminale du gène de l'ubiquitine ubqll d'Arabidopsis thaliana jusqu'au site de clivage de l'ubiquitine hydrolase (ubql 1 N-term; Callis & coll., 1993) laquelle est fusionnée dans le même cadre de lecture avec le gène de la ss-glucuronidase de E. coli (GUS; Jefferson & coll., 1987), suivi du site de polyadenylation du gène de la nopaline synthase d'Agrobacterium tumefaciens (NOS polyA; Bevan & coll., 1983).
Le plasmide pUGUS(118) est digéré avec les enzymes de restriction Sac!! et
BamHI et le grand fragment d'ADN est purifié. Le plasmide pRPA-RD-183 est digéré avec les enzymes de restriction Sac!! et BamHI et le petit fragment d'ADN contenant la région codante pour la forme mature de la drosomycine est ensuite purifié. Les deux fragments d'ADN purifiés sont liés ensemble dans une cassette d'expression dans les plantes qui synthétisent une protéine de fusion ubiquitine-drosomycine dans le cytoplasme des cellules végétales. La structure schématique de cette cassette d'expression est représentée sur la figure 2. Sous l'action de l'ubiquitine hydrolase sur cette protéine de fusion la drosomycine mature est libérée dans le cytoplasme des cellules de la plante.
BamHI et le grand fragment d'ADN est purifié. Le plasmide pRPA-RD-183 est digéré avec les enzymes de restriction Sac!! et BamHI et le petit fragment d'ADN contenant la région codante pour la forme mature de la drosomycine est ensuite purifié. Les deux fragments d'ADN purifiés sont liés ensemble dans une cassette d'expression dans les plantes qui synthétisent une protéine de fusion ubiquitine-drosomycine dans le cytoplasme des cellules végétales. La structure schématique de cette cassette d'expression est représentée sur la figure 2. Sous l'action de l'ubiquitine hydrolase sur cette protéine de fusion la drosomycine mature est libérée dans le cytoplasme des cellules de la plante.
pRPA-RD-l88: Création d'un vecteur d'expression dans les plantes comprenant la longueur totale de la séquence codant pour la drosomycine (pre-pro).
Le plasmide pRTL-2 GUS, dérivé du plasmide pUC-19, a été obtenu auprès du
Dr. Jim Carrington (Texas A & M University, non décrit). Ce plasmide dont la structure schématique est représentée sur la figure 3, contient le promoteur CaMV 35S dupliqué isolé du virus de la mosaïque du choux fleur (Promoteur CaMV 2x35S; Odell & coll., 1985) qui dirige l'expression d'un ARN contenant séquence non traduite en 5' du virus etch du tabac (TEV 5' UTR; Carrington & Freed, 1990), le gène de la -glucuronidase de E. coli (GUS Jefferson & coll., 1987) suivi du site de polyadenylation de l'ARN 35S de CaMV (CaMV polyA; Odell & coll., 1985).
Dr. Jim Carrington (Texas A & M University, non décrit). Ce plasmide dont la structure schématique est représentée sur la figure 3, contient le promoteur CaMV 35S dupliqué isolé du virus de la mosaïque du choux fleur (Promoteur CaMV 2x35S; Odell & coll., 1985) qui dirige l'expression d'un ARN contenant séquence non traduite en 5' du virus etch du tabac (TEV 5' UTR; Carrington & Freed, 1990), le gène de la -glucuronidase de E. coli (GUS Jefferson & coll., 1987) suivi du site de polyadenylation de l'ARN 35S de CaMV (CaMV polyA; Odell & coll., 1985).
Le plasmide pRTL-2 GUS est digéré avec les enzymes de restriction Ncol et BamHI et le grand fragment d'ADN est purifié. Le plasmide pRPA-RD-186 est digéré avec les enzymes de restriction Bbsll et BamHI et le petit fragment d'ADN contenant la région codant pour la drosomycine pre-pro est purifié. Les deux fragments d'ADN purifiés sont ensuite liés ensemble dans une cassette d'expression dans les plantes qui synthétisent une protéine de drosomycine pre-pro. La structure schématique de cette cassette d'expression est représentée sur la figure 4. pre-pro-drosomycine représente la région codante pour la drosomycine de pRPA-RD-186. La drosomycine est transportée vers la matrice extra-cellulaire de la plante par l'action d'un peptide signal (pre-pro).
pRPA-RD-195: Création d'un plasmide contenant un site de clonage multiple modifié.
Le plasmide pRPA-RD-195 est un plasmide dérivé du pUC-19 qui contient un site de clonage multiple modifié. Les oligonucléotides synthétiques complémentaires
Oligo 4 et Oligo 5 ci-après, sont hybridés et rendus double brin selon la procédure décrite pour pRPA-RD-183.
Oligo 4 et Oligo 5 ci-après, sont hybridés et rendus double brin selon la procédure décrite pour pRPA-RD-183.
Oligo4: 5' AGGGCCCCCT AGGGTTTAAA CGGCCAGTCA GGCCGAATTC
GAGCTCGGTA CCCGGGGATC CTCTAGAGTC GACCTGCAGG
CATGC 3'
Oligo5: 5' CCCTGAACCA GGCTCGAGGG CGCGCCTTAA TTAAAAGCTT
GCATGCCTGC AGGTCGACTC TAGAGG 3'
L'oligonucléotide double brin obtenu est ensuite lié dans pUC-19 qui a été préalablement digéré avec les enzymes de restriction EcoRI et Hindi! et rendu bouts francs en employant le fragment klenow de l'ADN polymérasc 1 de E: coli. On obtient un vecteur contenant de multiples sites de clonage pour faciliter l'introduction des cassettes d'expression dans un plasmide vecteur d'AgrobacteHum tumqaciens. La structure schématique de ce site de clonage multiple est représentée sur la figure 5.
GAGCTCGGTA CCCGGGGATC CTCTAGAGTC GACCTGCAGG
CATGC 3'
Oligo5: 5' CCCTGAACCA GGCTCGAGGG CGCGCCTTAA TTAAAAGCTT
GCATGCCTGC AGGTCGACTC TAGAGG 3'
L'oligonucléotide double brin obtenu est ensuite lié dans pUC-19 qui a été préalablement digéré avec les enzymes de restriction EcoRI et Hindi! et rendu bouts francs en employant le fragment klenow de l'ADN polymérasc 1 de E: coli. On obtient un vecteur contenant de multiples sites de clonage pour faciliter l'introduction des cassettes d'expression dans un plasmide vecteur d'AgrobacteHum tumqaciens. La structure schématique de ce site de clonage multiple est représentée sur la figure 5.
pRPA-RD-190: Introduction de la cassette d'expression de la drosomycine de pRPA-RD-187 dans pRPA-RD-195.
Le plamide pRPA-RD-187 est digéré avec les enzymes de restriction Kpnl et Salol, et le fragment d'ADN contenant la cassette d'expression de la drosomycine est purifié. Le fragment purifié est ensuite lié dans pRPA-RD-195 qui a été préalablement digéré avec les même enzymes de restriction.
x)RPA-RD-191: Introduction de la cassette d'expression de la drosomycine de pRPA-RD-188 dans pRPA-RD-195.
Le plasmide pRPA-RD-188 est digéré avec l'enzyme de restriction Hindlll et déphosphorylé avec de la phosphatase intestinale de veau. Le fragment d'ADN contenant la cassette d'expression de la drosomycine est purifié. Le fragment purifié est ensuite lié dans pRPA-RP-195 qui a été préalablement digéré avec l'enzyme de restriction Hindi!!.
PRPA-RD-174: Plasmide dérivé de pRPA-BL-1SOA (EP 0 508 909) contenant le gène de tolérance au bromoxynil de pRPA-BL-237 (EP 0 508 909).
Le gène de tolérence au bromoxynil est isolé de pRPA-BL-237 par une amplification génique par PCR. Le fragment obtenu est à bouts francs et est cloné dans le site EcoRI de pRPA-BL-150A qui a été rendu bouts francs par l'action de la polymérase klenow dans des conditions standard. On obtient un vecteur d'Agrobacterium tumefaciens qui contient le gène de tolérance au bromoxynil à proximité de sa bordure droite, un gène de tolérance à la kanamycine à proximité de sa bordure gauche et le site de clonage multiple de pUC-19 entre ces deux gènes.
La structure schématique de pRPA-RD-174 est représentée sur la figure 6. Sur cette figure, "nos" représente le site de polyadenylation de la nopaline synthase d'Agrobacterium tumefaciens (Bevan & coll., 1983), "NOS pro" représente le promoteur de la nopaline synthase d'Agrobacterium tumefaciens (Bevan & coll., 1983), "NPT Il" représente le gène de la néomycine phosphotransphérase du transposon Tn5 de E. coli (Rothstein & coll., 1981), "35S pro" représente le promoteur 35S isolé du virus de la mosaique du choux fleur (Odell & coll., 1985), "BRX" représente le gène de la nitrilase isolé de K. ozaenae (Stalker & coll., 1988), "RB" et "LB" représentent respectivement les bordures droite et gauche de la séquence d'un plasmide Ti d'Agrobacterium tumefaciens.
pRPA-RD-184: Addition d'un nouveau site de restriction, unique, dans pRPA KD-17-I.
Les oligonucléotides synthétiques complémentaires Oligo 6 et Oligo 7 ci-après, sont hybridés et rendus double brin selon la procédure décrite pour pRPA-RD- 183.
Oligo6: 5' CGGGCCAGTC AGGCCACACT TAATTAAGTT TAAACGCGGC
CCCGGCGCGC CTAGGTGTGT GCTCGAGGGC CCAACCTCAG
TACCTGGTTC AGG 3'
Oligo7: 5' CCGGCCTGAA CCAGGTACTG AGGTTGGGCC CTCGAGCACA
CACCTAGGCG CGCCGGGGCC GCGTTTAAAC TTAATTAAGT
GTGGCCTGAC TGG 3
L'oligonucléotide double brin hybridé (95 paires de bases) est purifié après séparation sur un gel d'agarose (3 % Nusieve, FMC). Le plasmide pRPA-RD-174 est digéré avec l'enzyme de restriction XmaI, et le grand fragment d'ADN est purifié. Les deux fragents d'ADN obtenus sont ensuite liés.
CCCGGCGCGC CTAGGTGTGT GCTCGAGGGC CCAACCTCAG
TACCTGGTTC AGG 3'
Oligo7: 5' CCGGCCTGAA CCAGGTACTG AGGTTGGGCC CTCGAGCACA
CACCTAGGCG CGCCGGGGCC GCGTTTAAAC TTAATTAAGT
GTGGCCTGAC TGG 3
L'oligonucléotide double brin hybridé (95 paires de bases) est purifié après séparation sur un gel d'agarose (3 % Nusieve, FMC). Le plasmide pRPA-RD-174 est digéré avec l'enzyme de restriction XmaI, et le grand fragment d'ADN est purifié. Les deux fragents d'ADN obtenus sont ensuite liés.
On obtient un plasmide dérivé de pRPA-RD-174 comprenant d'autres sites de restriction entre le gène de tolérance au bromoxynil et le gène de la kanamycine marqueur de sélection.
La strucure schématique du plasmide pRPA-RD-184 est représentée sur la figure 7 où les termes "nos", "NPT II", "NOS pro", "35S pro", "BRX gene", "RB" et "LB" ont la même signification que pour la figure 6.
pRPA-RD-192: Création d'un vecteur d'Agrobacterium tumefaciens contenant la construction du gène codant pour la drosomycine dirigée vers le cytosol des cellules.
Le plasmide pRPA-RD-190 est digéré avec les enzymes de restriction Apal et Ascl, et le fragment d'ADN contenant la cassette d'expression de la drosomycine est purifié. Le fragment d'ADN purifié contenant la cassette d'expression de la drosomycine est lié dans pRPA-RD- 184, après digestion préalable avec les même deux enzymes. On obtient ainsi un vecteur d'Agrobacterium tumefaciens contenant la séquence codant pour la protéine de fusion drosomycine-ubiquitine qui conduit à l'expression de la drosomycine dans le cytosol des cellules de la plante.
pRPA-RD-193: Création d'un vecteur d'Agrobacterium tumefaciens contenant la construction du gène codant pour la drosomycine dirigée vers la matrice etracellulaire.
On reprend le mode opératoire décrit ci-dessus avec le plasmide pRPA-RD-191 et les enzymes de restriction Pmel et Ascl, remplaçant le plasmide pRPA-RD-190 et les enzymes de restriction Apal et Ascl. On obtient ainsi un vecteur d'Agrobacterium tumefaciens contenant la séquence codant pour la protéine pre-pro de la drosomycine qui conduit à l'expression de la drosomycine dans la matrice extracellulaire de la plante.
ExemPle 2: Tolérance aux herbicides des tabacs transformés.
2.1- Transformation
Les vecteurs pRPA-RD-192 and pRPA-RD-193 sont introduit dans la souche d'Agrobacterium tumefaciens EHAlOl (Hood & coll., 1987) porteuse du cosmide pTVK29 1 (Komari & coll., 1986). La technique de transformation est basée sur la procédure de Horsh & coll. (1985).
Les vecteurs pRPA-RD-192 and pRPA-RD-193 sont introduit dans la souche d'Agrobacterium tumefaciens EHAlOl (Hood & coll., 1987) porteuse du cosmide pTVK29 1 (Komari & coll., 1986). La technique de transformation est basée sur la procédure de Horsh & coll. (1985).
2.2- Régénération
La régénération du tabac PBD6 (provenance SEITA France) à partir d'explants foliaires est réalisée sur un milieu de base Murashige et Skoog (MS) comprenant 30 g/l de saccharose ainsi que 200 llg/ml de kanamycine. Les explants foliaires sont prélevés sur des plantes cultivées en serre ou in vitro et transformées selon la technique des disques foliaires (Horsh & coll., 1985) en trois étapes successives: la première comprend l'induction des pousses sur un milieu additionné de 30 g/l de saccharose contenant 0,05 mg/l d'acide naphtylacétique (ANA) et 2 mg/l de benzylaminopurine (BAP) pendant 15 jours. Les pousses formées au cours de cette étape sont ensuite développées pendant 10 jours par culture sur un milieu MS additionné de 30 g/l de saccharose mais ne contenant pas d'hormone. Puis on prélève des pousses développées et on les cultive sur un milieu d'enracinement MS à teneur moitié en sels, vitamines et sucre et ne contenant pas d'hormone. Au bout d'environ 15 jours, les pousses enracinées sont passées en terre.
La régénération du tabac PBD6 (provenance SEITA France) à partir d'explants foliaires est réalisée sur un milieu de base Murashige et Skoog (MS) comprenant 30 g/l de saccharose ainsi que 200 llg/ml de kanamycine. Les explants foliaires sont prélevés sur des plantes cultivées en serre ou in vitro et transformées selon la technique des disques foliaires (Horsh & coll., 1985) en trois étapes successives: la première comprend l'induction des pousses sur un milieu additionné de 30 g/l de saccharose contenant 0,05 mg/l d'acide naphtylacétique (ANA) et 2 mg/l de benzylaminopurine (BAP) pendant 15 jours. Les pousses formées au cours de cette étape sont ensuite développées pendant 10 jours par culture sur un milieu MS additionné de 30 g/l de saccharose mais ne contenant pas d'hormone. Puis on prélève des pousses développées et on les cultive sur un milieu d'enracinement MS à teneur moitié en sels, vitamines et sucre et ne contenant pas d'hormone. Au bout d'environ 15 jours, les pousses enracinées sont passées en terre.
2.3- Tolérance au bromoxynil
Vingt plantes transformées ont été régénérées et passées en serre pour chaque construction pRPA-RD-192 et pRPA-RD-193. Ces plantes ont été traitées en serre au stade 5 feuilles avec une suspension aqueuse de Pardner correspondant à 0,2 kg de matière active bromoxynil par hectare.
Vingt plantes transformées ont été régénérées et passées en serre pour chaque construction pRPA-RD-192 et pRPA-RD-193. Ces plantes ont été traitées en serre au stade 5 feuilles avec une suspension aqueuse de Pardner correspondant à 0,2 kg de matière active bromoxynil par hectare.
Toutes les plantes montrant une tolérance complète au bromoxynil sont employées dans les expérimentations suivantes pour tester les effets de l'expression de la drosomycine sur la tolérance des plantes transformées aux agressions fongiques.
Exemple 3: Détection de la drosomycine dans les tabacs transformés
Une analyse immunoblot (telle que décrites par Coligan & coll.) est employée pour détecter la drosomycine produite par les tabacs transformés, en employant un anticorps de lapin dirigé contre la drosomycine synthétique fixée sur une protéine porteuse KLH, avec la drosomycine synthétique comme antigène.
Une analyse immunoblot (telle que décrites par Coligan & coll.) est employée pour détecter la drosomycine produite par les tabacs transformés, en employant un anticorps de lapin dirigé contre la drosomycine synthétique fixée sur une protéine porteuse KLH, avec la drosomycine synthétique comme antigène.
Les protéines de feuilles sont extraites d'abord par broyage des tissus congelés à -180 C, suivi par l'addition d'un tampon d'extraction (urée 8 M, tris HCI pH 6,8 50 mM, SDS 2 %, ss-mercaptoéthanol 5 %, saccharose 10 %, EDTA 2 mM et dithiothreitol 10 mM). La quantité totale de protéines extractables est ensuite mesurée.
100 g de protéines extraites sont ensuite chargées dans des puits de gel SDS-PAGE (20 % acrylamide) pour une analyse immunoblot (selon Coligan & coll.).
Pour les plantes transformées avec le plasmide pRPA-RD- 193 (drosomycine pre-pro), on a trouvé jusqu'à 160 ng de drosomycine pour 100 g du total de protéines extraites des feuilles.
Pour les plantes transformées avec le plasmide pRPA-RD-192 (drosomycine mature), on a trouvé jusqu'à 50 ng de drosomycine pour 100 pg du total de protéines extraites des feuilles.
La drosomycine synthétisée et isolée dans les plantes transformées avec les plasmides pRPA-RD-192 et pRPA-RD-193 co-migre avec la drosomycine isolée des drosophiles. Ce résultat montrent que chacune des drosomycines dirigée soit vers le cytoplasme (pRPA-RD-192) soit vers la mat extra-cellulaire), on observe une absence d'augmentation des diamètres des disques, ou une augmentation très minime, ce qui indique une forte résistance aux infections causees par Botritis cinerea.
Exemple 5: Résistance à Chalara elegans des tabacs transformés.
On reprend le mode opératoire précédent avec les conditions opératoires suivantes:
- température: 18 C durant la nuit; 220 C durant le jour;
- photopériode: 14 h de nuit; 10 h de jour.
- température: 18 C durant la nuit; 220 C durant le jour;
- photopériode: 14 h de nuit; 10 h de jour.
L'innoculation est effectuée 18 jours après le semis par apport dans chaque pot de 1 ml d'une suspension d'endoconidies à 1 000 000 conidies/ml. La lecture des résultats de l'infection est effectuée 21 jours après l'innoculation en observant les racines des plantules préalablement nettoyées à l'eau. L'évolution de la maladie est appréciée par une échelle de notation de 0 à 11, 0 correspodant à une absence d'infection. Pour les plantes transformées par le plasmide pRPA-RD-192 (protéine mature dans le cytoplasme) et celles transformées par le plasmide pRPA-RD-193 (drosomycine extra-cellulaire), la notation moyenne est de 4, ce qui correspond à une forte résistance à Chalara elegans.
Les résultats obtenus in vivo dans les exemples 4 et 5 montrent que la transformation par le gène chimère selon l'invention confère à la plante transformée de nouvelles propriétés de résistance aux champignons, activité est liée à la conservation des propriétés antifongiques de la drosomycine produite par les plantes transformées selon l'invention.
REFERENCES
Ausubel, F. A. & coll. (eds. Greene). Current Protocols in Molecular Biology. Publ.
Ausubel, F. A. & coll. (eds. Greene). Current Protocols in Molecular Biology. Publ.
Wiley & Sons.
Bevan, M. & coll. (1983). Nuc. Acids Res. 11:369-385.
Brederode, F.T.M. & coll. (1980). Nuc. Acids Res. 8:2213-2223.
Callis & coll. (1993). Plant Mol. Biol. 21:895-906.
Carrington and Freed (1990). J. Virol. 64:1590-1597.
Coligan, J.E. & coll. (ed. V.B. Chanda). Current Protocols in Protein Science. Publ.
Wiley & Sons.
Fehlbaum & coll. (1994). J. Biol. Chem 269: 331459-33163.
Horsch & coll. (1985). Science 227:1229-1231.
Jefferson & coll. (1987). EMBO J. 6:3901-3907.
Komari & coll. (1986). J. Bacteriol. 166:88-94.
Rothstein & coll. (1981). Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 45: 99-105.
Stalker & coll. (1988). J. Biol. Chem. 263:6310-6314.
Odeil, J.T. & colt. (1985). Nature 313:810-812.
LISTE DE SEQUENCES
(1) INFORMATION GENERALE:
(iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 6
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO:1:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 488 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: double
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc
(vi) SOURCE D'ORIGINE:
(A) ORGANISMEE: Drosophila melanogaster
(vii) SOURCE IMMEDIATE:
(B) CLONE: pRPA-RD-180
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONNELLE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT: 101..310
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO:1:
GAATTCGAGC TCGGTACCCC TCGAGACCAT GGTCGACCCC ACGCGTCCGG ATAATTCTTT 60
CAGAAATCAT TTACCAAGCT CCGTOAGAAC CTTTTCCAAT ATG ATG CAG ATC AAG 115
Met Met Gln Ile Lys
1 5
TAC TTG TTC GCC CTC TTC GCT GTC CTG ATG CTG GTG GTG CTG GGA GCC 163
Tyr Leu Phe Ala Leu Phe Ala Val Leu Met Leu Val Val Leu Gly Ala
10 15 20
AAC GAG GCC GAT GCC GAC TGC CTG TCC GGA AGA TAC AAG GGT CCC TGT 211
Asn Glu Ala Asp Ala Asp Cys Leu Ser Gly Arg Tyr Lys Gly Pro Cys
25 30 35
GCC GTC TGG GAC AAC GAG ACC TGT CGT CGT GTG TGC AAG GAG GAG GGA 259
Ala Val Trp Asp Asn Glu Thr Cys Arg Arg Val Cys Lys Glu Glu Gly
40 45 50
CGC TCC AGT GGC CAC TGC AGC CCC AGT CTG AAG TGC TGG TGC GAA GGA 307
Arg Ser Ser Oly His Cys Ser Pro Ser Leu Lys Cys Trp Cys Glu Gly
55 60 65
TGC TAAATCCATG AGCAATTAGC ATGAACGTTC TGAAAAGCGC GTTTAGCTCT 360
Cys
70
CCACTACTTA CGACATATTC TATGCTGCAA TATTGAAAAT CTAATAAACA AAACTAATGT 420
ACATTAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAGGG CGGCCGCGAC CTGCAGGCAT 480 GCAAGCTT 488
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO:2:
(i) CHARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 70 acides aminés
(B) TYPE: acides aminés
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO:2:
Met Met Gln Ile Lys Tyr Leu Phe Ala Leu Phe Ala Val Leu Met Leu
1 5 10 15
Val Val Leu Gly Ala Asn Glu Ala Asp Ala Asp Cys Leu Ser Gly Arg
20 25 30
Tyr Lys Gly Pro Cys Ala Val Trp Asp Asn Glu Thr Cys Arg Arg Val
35 40 45
Cys Lys Glu Glu Gly Arg Ser Ser Gly His Cys Ser Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Cys Trp Cys Glu Gly Cys
65 70
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO:3:
(i) CHARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 167 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: double
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc
(vi) SOURCE D'ORIGINE:
(A) ORGANISME: SynThetique
(vii) SOURCE IMMEDIATE:
(B) CLONE: pRPA-RD-183
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONNELLE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT: 21..152
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO:3:
GAGAGATCCC CCGCGGTGGT GAC TGC CTG TCC GGA AGA TAC AAG GGT CCC 50
Asp Cys Leu Ser Gly Arg Tyr Lys Gly Pro
1 5 10
TGT GCC GTC TGG GAC AAC GAG ACC TGT CGT CGT GTG TGC AAG GAG GAG 98
Cys Ala Val Trp Asp Asn Glu Thr Cys Arg Arg Val Cys Lys Glu Glu
15 20 25
GGA CGC TCC AGT GGC CAC TGC AGC CCC AGT CTG AAG TGC TGG TGC GAA 146
Gly Arg Ser Ser Gly His Cys Ser Pro Ser Leu Lys Cys Trp Cys Glu
30 35 40
GGA TGC TAAGGATCCG CGCGC 167
Gly Cys
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO:4:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 44 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO:4:
Asp Cys Leu Ser Gly Arg Tyr Lys Gly Pro Cys Ala Val Trp Asp Asn
1 5 10 15
Glu Thr C7s Ary Arg Val Cys Lys Glu Glu Gly Arg Ser Ser Gly His
20 25 30
Cys Ser Pro Ser Leu Lys Cys Trp Cys Glu Gly Cys
35 40
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO:5:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 236 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: double
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc
(vi) SOURCE ORIGINE:
(A) ORGANISME: Synthetique
(vii) SOURCE IMMEDIATE:
(B) CLONE: pRPA-RD-186
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONNELLE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT: 15..221
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO:5:
GAATTGAAGA CGCC ATG CAG ATC AAG TAC TTG TTC GCC CTC TTC GCT GTC 50
Met Gln Ile Lys Tyr Leu Phe Ala Leu Phe Ala Val
1 5 10
CTG ATG CTG GTG GTG CTG GGA GCC AAC GAG GCC GAT GCC GAC TGC CTG 98
Leu Met Leu Val Val Leu Gly Ala Asn Glu Ala Asp Ala Asp Cys Leu
15 20 25
TCC GGA AGA TAC AAG GGT CCC TGT GCC GTC TGG GAC AAC GAG ACC TGT 146
Ser Gly Arg Tyr Lys Gly Pro Cys Ala Val Trp Asp Asn Glu Thr Cys
30 35 40
CGT CGT GTG TGC AAG GAG GAG GGA CGC TCC AGT GGC CAC TGC AGC CCC 194
Arg Arg Val Cys Lys Glu Glu Gly Arg Ser Ser Gly His Cys Ser Pro
45 50 55 60
AGT CTG AAG TGC TGG TGC GAA GGA TGC TAAGGATCCG CGCGC 236
Ser Leu Lys Cys Trp Cys Glu Gly Cys
65
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO:6:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 69 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO:6:
Met Gln Ile Lys Tyr Leu Phe Ala Leu Phe Ala Val Leu Met Leu Val
1 5 10 15
Val Leu Gly Ala Asn Glu Ala Asp Ala Asp Cys Leu Ser Gly Arg Tyr
20 25 30
Lys Gly Pro Cys Ala Val Trp Asp Asn Glu Thr Cys Arg Arg Val Cys
35 40 45
Lys Glu Glu Gly Arg Ser Ser Gly His Cys Ser Pro Ser Leu Lys Cys
50 55 60
Trp Cys Glu Gîy Cys
65
(1) INFORMATION GENERALE:
(iii) NOMBRE DE SEQUENCES: 6
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO:1:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 488 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: double
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc
(vi) SOURCE D'ORIGINE:
(A) ORGANISMEE: Drosophila melanogaster
(vii) SOURCE IMMEDIATE:
(B) CLONE: pRPA-RD-180
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONNELLE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT: 101..310
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO:1:
GAATTCGAGC TCGGTACCCC TCGAGACCAT GGTCGACCCC ACGCGTCCGG ATAATTCTTT 60
CAGAAATCAT TTACCAAGCT CCGTOAGAAC CTTTTCCAAT ATG ATG CAG ATC AAG 115
Met Met Gln Ile Lys
1 5
TAC TTG TTC GCC CTC TTC GCT GTC CTG ATG CTG GTG GTG CTG GGA GCC 163
Tyr Leu Phe Ala Leu Phe Ala Val Leu Met Leu Val Val Leu Gly Ala
10 15 20
AAC GAG GCC GAT GCC GAC TGC CTG TCC GGA AGA TAC AAG GGT CCC TGT 211
Asn Glu Ala Asp Ala Asp Cys Leu Ser Gly Arg Tyr Lys Gly Pro Cys
25 30 35
GCC GTC TGG GAC AAC GAG ACC TGT CGT CGT GTG TGC AAG GAG GAG GGA 259
Ala Val Trp Asp Asn Glu Thr Cys Arg Arg Val Cys Lys Glu Glu Gly
40 45 50
CGC TCC AGT GGC CAC TGC AGC CCC AGT CTG AAG TGC TGG TGC GAA GGA 307
Arg Ser Ser Oly His Cys Ser Pro Ser Leu Lys Cys Trp Cys Glu Gly
55 60 65
TGC TAAATCCATG AGCAATTAGC ATGAACGTTC TGAAAAGCGC GTTTAGCTCT 360
Cys
70
CCACTACTTA CGACATATTC TATGCTGCAA TATTGAAAAT CTAATAAACA AAACTAATGT 420
ACATTAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAGGG CGGCCGCGAC CTGCAGGCAT 480 GCAAGCTT 488
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO:2:
(i) CHARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 70 acides aminés
(B) TYPE: acides aminés
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO:2:
Met Met Gln Ile Lys Tyr Leu Phe Ala Leu Phe Ala Val Leu Met Leu
1 5 10 15
Val Val Leu Gly Ala Asn Glu Ala Asp Ala Asp Cys Leu Ser Gly Arg
20 25 30
Tyr Lys Gly Pro Cys Ala Val Trp Asp Asn Glu Thr Cys Arg Arg Val
35 40 45
Cys Lys Glu Glu Gly Arg Ser Ser Gly His Cys Ser Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Cys Trp Cys Glu Gly Cys
65 70
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO:3:
(i) CHARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 167 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: double
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc
(vi) SOURCE D'ORIGINE:
(A) ORGANISME: SynThetique
(vii) SOURCE IMMEDIATE:
(B) CLONE: pRPA-RD-183
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONNELLE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT: 21..152
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO:3:
GAGAGATCCC CCGCGGTGGT GAC TGC CTG TCC GGA AGA TAC AAG GGT CCC 50
Asp Cys Leu Ser Gly Arg Tyr Lys Gly Pro
1 5 10
TGT GCC GTC TGG GAC AAC GAG ACC TGT CGT CGT GTG TGC AAG GAG GAG 98
Cys Ala Val Trp Asp Asn Glu Thr Cys Arg Arg Val Cys Lys Glu Glu
15 20 25
GGA CGC TCC AGT GGC CAC TGC AGC CCC AGT CTG AAG TGC TGG TGC GAA 146
Gly Arg Ser Ser Gly His Cys Ser Pro Ser Leu Lys Cys Trp Cys Glu
30 35 40
GGA TGC TAAGGATCCG CGCGC 167
Gly Cys
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO:4:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 44 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO:4:
Asp Cys Leu Ser Gly Arg Tyr Lys Gly Pro Cys Ala Val Trp Asp Asn
1 5 10 15
Glu Thr C7s Ary Arg Val Cys Lys Glu Glu Gly Arg Ser Ser Gly His
20 25 30
Cys Ser Pro Ser Leu Lys Cys Trp Cys Glu Gly Cys
35 40
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO:5:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 236 paires de bases
(B) TYPE: acide nucléique
(C) NOMBRE DE BRINS: double
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: ADNc
(vi) SOURCE ORIGINE:
(A) ORGANISME: Synthetique
(vii) SOURCE IMMEDIATE:
(B) CLONE: pRPA-RD-186
(ix) CARACTERISTIQUE ADDITIONNELLE:
(A) NOM/CLE: CDS
(B) EMPLACEMENT: 15..221
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO:5:
GAATTGAAGA CGCC ATG CAG ATC AAG TAC TTG TTC GCC CTC TTC GCT GTC 50
Met Gln Ile Lys Tyr Leu Phe Ala Leu Phe Ala Val
1 5 10
CTG ATG CTG GTG GTG CTG GGA GCC AAC GAG GCC GAT GCC GAC TGC CTG 98
Leu Met Leu Val Val Leu Gly Ala Asn Glu Ala Asp Ala Asp Cys Leu
15 20 25
TCC GGA AGA TAC AAG GGT CCC TGT GCC GTC TGG GAC AAC GAG ACC TGT 146
Ser Gly Arg Tyr Lys Gly Pro Cys Ala Val Trp Asp Asn Glu Thr Cys
30 35 40
CGT CGT GTG TGC AAG GAG GAG GGA CGC TCC AGT GGC CAC TGC AGC CCC 194
Arg Arg Val Cys Lys Glu Glu Gly Arg Ser Ser Gly His Cys Ser Pro
45 50 55 60
AGT CTG AAG TGC TGG TGC GAA GGA TGC TAAGGATCCG CGCGC 236
Ser Leu Lys Cys Trp Cys Glu Gly Cys
65
(2) INFORMATION POUR LA SEQ ID NO:6:
(i) CARACTERISTIQUES DE LA SEQUENCE:
(A) LONGUEUR: 69 acides aminés
(B) TYPE: acide aminé
(D) CONFIGURATION: linéaire
(ii) TYPE DE MOLECULE: peptide
(xi) DESCRIPTION DE LA SEQUENCE: SEQ ID NO:6:
Met Gln Ile Lys Tyr Leu Phe Ala Leu Phe Ala Val Leu Met Leu Val
1 5 10 15
Val Leu Gly Ala Asn Glu Ala Asp Ala Asp Cys Leu Ser Gly Arg Tyr
20 25 30
Lys Gly Pro Cys Ala Val Trp Asp Asn Glu Thr Cys Arg Arg Val Cys
35 40 45
Lys Glu Glu Gly Arg Ser Ser Gly His Cys Ser Pro Ser Leu Lys Cys
50 55 60
Trp Cys Glu Gîy Cys
65
Claims (22)
- Gène chimère comprenant une séquence codante ainsi que des éléments de régulation en position 5' et 3' hétérologues pouvant fonctionner dans une plante, caractérisé en ce que la séquence codante comprend au moins une séquence d'ADN codant pour la drosomycine.REVENDICATIONS
- 2. Gène chimère selon la revendication 1, caractérisé en ce que la séquence d'ADN code pour la drosomycine mature.
- 3. Gène chimère selon la revendication 2, caractérisé en ce que la séquence d'ADN est représentée par la SEQ ID 3.
- 4. Gène chimère selon la revendication 1, caractérisé en ce que la séquence d'ADN code pour la drosomycine pre-pro.
- 5. Gène chimère selon la revendication 4, caractérisé en ce que la séquence d'ADN est représentée par la SEQ ID 5.
- 6. Gène chimère selon la revendication 1, caractérisé en ce que la séquence d'ADN code pour une protéine de fusion ubiquitine-drosomycine.
- 7. Gène chimère selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que la séquence codante comprend en outre au moins un gène de tolérance aux herbicides.
- 8. Gène chimère selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que la séquence codante comprend en outre au moins une séquence codante pour un autre peptide susceptible de conférer à la plante des résistances à d'autres maladies d'origine bactérienne ou fongique.
- 9. Gène chimère selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que les éléments de régulations comprennent les séquences promotrices, les activateurs de transcription, les peptides de transit et/ou les séquences terminatrices.
- 10. Gène chimère selon l'une des revendications l à 8, caractérisé en ce que la séquence de régulation promotrice est choisie parmi les séquences promotrices d'origine bactérienne, virale ou végétale.
- 11. Gène chimère selon la revendication 10, caractérisé en ce que la séquence de régulation promotrice est choisie parmi le promoteur du gène de la petite sous-unité de ribulose-biscarboxylase (RuBisCO) ou celui de la mosaïque du choux fleur (CAMV 19S ou 35S).
- 12. Gène chimère selon la revendication 10, caractérisé en ce que la séquence de régulation promotrice comprend au moins un promoteur d'histone.
- 13. Vecteur pour la transformation des plantes caractérisé en ce qu'il contient au moins un gène chimère selon l'une des revendications 1 à 12.
- 14. Cellule végétale transformée contenant au moins un ADN tel que défini dans l'une des revendications 1 à 12.
- 15. Plante résistante aux maladies, caractérisée en ce qu'elle comprend une cellule transformée selon la revendication 14.
- 16. Plante selon la revendication 15, caractérisée en ce qu'elle est obtenue par régénération à partir d'une cellule transformée selon la revendication 13.
- 17. Procédé de transformation des plantes pour les rendre résistantes aux maladies, caractérisé en ce qu'on insère un ADN selon l'une des revendications 1 à 6.
- 18. Procédé de transformation des plantes pour les rendre résistantes aux maladies fongiques, caractérisé en ce qu'on insère un ADN selon l'une des revendications 1 à 6.
- 19. Procédé selon l'une des revendications 17 ou 18, caractérisé en ce que le transfert est effectué avec Agrobacterium tumefaciens ou Agrobacterium rhizogenes.
- 20. Procédé selon l'une des revendications 17 ou 18, caractérisé en ce que le transfert est effectué par apport par bombardement à l'aide de particules chargées de l'ADN.
- 21. Procédé selon l'une des revendications 17 à 20, caractérisé en ce que l'on insère également au moins un gène de tolérance aux herbicides.
- 22. Procédé selon l'une des revendications 17 à 21, caractérisé en ce que l'on insère également au moins une séquence codante pour un autre peptide susceptible de conférer à la plante des résistances à d'autres maladies d'origine bactérienne ou fongique.
Priority Applications (14)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR9709663A FR2766207B1 (fr) | 1997-07-11 | 1997-07-24 | Gene chimere codant pour la drosomycine, vecteur le contenant pour la transformation des cellules vegetales et plantes transformees obtenues resistantes aux maladies |
CA002296046A CA2296046A1 (fr) | 1997-07-11 | 1998-07-08 | Gene chimere codant pour la drosomicine, vecteur le contenant et obtention des plantes transgeniques resistantes aux maladies |
HU0004938A HUP0004938A3 (en) | 1997-07-11 | 1998-07-08 | Chimeric gene coding for drosomicine, vector containing it and production of transgenic plants resistant to diseases |
IL13396198A IL133961A0 (en) | 1997-07-11 | 1998-07-08 | Chimeric gene coding for drosomicine, vector containing it and production of transgenic plants resistant to diseases |
AU85451/98A AU739137B2 (en) | 1997-07-11 | 1998-07-08 | Chimeric gene encoding drosomycin, vector containing it and production of disease-resistant transgenic plants |
PCT/FR1998/001462 WO1999002717A1 (fr) | 1997-07-11 | 1998-07-08 | Gene chimere codant pour la drosomicine, vecteur le contenant et obtention des plantes transgeniques resistantes aux maladies |
PL98337994A PL337994A1 (en) | 1997-07-11 | 1998-07-08 | Drozomycin coding hybrid gene, vector incorporating same, and method of obtaining transgenic plants resistant to plant diseases |
BR9815507-5A BR9815507A (pt) | 1997-07-11 | 1998-07-08 | Gene-quimérico, peptìdeo de fusão peptìdeo - drosomicina, vetor para a transformação das plantas, célula vegetal transformada, planta resistente às doenças, planta transformada resistente às doenças, sementes de plantas, processo de transformação das plantas, processo de cultura das plantas transformadas |
EP98936469A EP0998575A1 (fr) | 1997-07-11 | 1998-07-08 | Gene chimere codant pour la drosomicine, vecteur le contenant et obtention des plantes transgeniques resistantes aux maladies |
HR9709663A HRP980385A2 (en) | 1997-07-11 | 1998-07-09 | Chimera gene coding for drosomycine, the vector for the transformation of plant cells containing it, and obtained transformed plants resistant to diseases |
ARP980103381A AR016326A1 (es) | 1997-07-11 | 1998-07-10 | Gen quimerico codificador de la drosomicina, vector que lo contiene para la transformacion de las celulas vegetales y plantas transformadas obtenidasresistentes a las enfermedades |
CO98039656A CO4810248A1 (es) | 1997-07-11 | 1998-07-13 | Gen quimerico codificador de la drosomicina, vector que lo contiene para la transformacion de las celulas vegetales y plantas transformadas obtenidas resistentes a las enfermedades |
US09/480,251 US6465719B1 (en) | 1997-07-11 | 2000-01-11 | Chimeric gene encoding drosomycin, vector containing it and production of disease-resistant transgenic plants |
US10/180,247 US20030167519A1 (en) | 1997-07-11 | 2002-06-26 | Chimeric gene encoding drosomycin, vector containing it and production of disease-resistant transgenic plants |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR9709115A FR2766206A1 (fr) | 1997-07-11 | 1997-07-11 | Gene chimere codant pour la drosomycine, vecteur le contenant pour la transformation des cellules vegetales et plantes transformees obtenues resistantes aux maladies |
FR9709663A FR2766207B1 (fr) | 1997-07-11 | 1997-07-24 | Gene chimere codant pour la drosomycine, vecteur le contenant pour la transformation des cellules vegetales et plantes transformees obtenues resistantes aux maladies |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
FR2766207A1 true FR2766207A1 (fr) | 1999-01-22 |
FR2766207B1 FR2766207B1 (fr) | 2000-12-08 |
Family
ID=26233684
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
FR9709663A Expired - Fee Related FR2766207B1 (fr) | 1997-07-11 | 1997-07-24 | Gene chimere codant pour la drosomycine, vecteur le contenant pour la transformation des cellules vegetales et plantes transformees obtenues resistantes aux maladies |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US6465719B1 (fr) |
EP (1) | EP0998575A1 (fr) |
AR (1) | AR016326A1 (fr) |
AU (1) | AU739137B2 (fr) |
BR (1) | BR9815507A (fr) |
CA (1) | CA2296046A1 (fr) |
CO (1) | CO4810248A1 (fr) |
FR (1) | FR2766207B1 (fr) |
HR (1) | HRP980385A2 (fr) |
HU (1) | HUP0004938A3 (fr) |
IL (1) | IL133961A0 (fr) |
PL (1) | PL337994A1 (fr) |
WO (1) | WO1999002717A1 (fr) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2766207B1 (fr) * | 1997-07-11 | 2000-12-08 | Rhone Poulenc Agrochimie | Gene chimere codant pour la drosomycine, vecteur le contenant pour la transformation des cellules vegetales et plantes transformees obtenues resistantes aux maladies |
FR2777568B1 (fr) * | 1998-04-15 | 2002-10-31 | Rhone Poulenc Agrochimie | Gene codant pour l'heliomicine, proteine obtenue, vecteur le contenant, organismes transformes obtenus et procede de preparation |
FR2810993B1 (fr) * | 2000-06-29 | 2002-08-23 | Rhobio | Peptides antimicrobiens de la famille des defensines, polynucleotides codant ces peptides, vecteurs et organismes transformes les contenant |
EP2186524B1 (fr) * | 2001-05-25 | 2018-02-21 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Utilisation d'hepcidine en tant qu'homéostasie de fer |
FR2844142B1 (fr) | 2002-09-11 | 2007-08-17 | Bayer Cropscience Sa | Plantes transformees a biosynthese de prenylquinones amelioree |
FR2848064B1 (fr) * | 2002-12-06 | 2006-01-13 | Bayer Cropscience Sa | Plantes legumineuses transplastomiques fertiles |
FR2848570B1 (fr) | 2002-12-12 | 2005-04-01 | Bayer Cropscience Sa | Cassette d'expression codant pour une 5-enol pyruvylshikimate-3-phosphate synthase (epsps) et plantes tolerantes aux herbicides la contenant |
AR074941A1 (es) | 2009-01-07 | 2011-02-23 | Bayer Cropscience Sa | Plantas transplastomicas exentas de marcador de seleccion |
WO2011095460A1 (fr) | 2010-02-02 | 2011-08-11 | Bayer Cropscience Ag | Transformation du soja faisant appel à des inhibiteurs de l'hppd en tant qu'agents de sélection |
CN110305887A (zh) * | 2018-03-27 | 2019-10-08 | 华南农业大学 | 抗真菌肽Drosomycin、制备方法及其应用 |
CN109182370B (zh) * | 2018-08-03 | 2022-06-17 | 浙江大学 | 一种植物多基因表达载体、转化子及其应用 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1991019738A1 (fr) * | 1990-06-15 | 1991-12-26 | Hoechst Aktiengesellschaft | Polypeptide fongicide et son procede de production |
EP0507698A1 (fr) * | 1991-03-05 | 1992-10-07 | Rhone-Poulenc Agrochimie | Promoteurs d'histone |
EP0508909A1 (fr) * | 1991-03-05 | 1992-10-14 | Rhone-Poulenc Agrochimie | Gène chimère pour la transformation des plantes |
WO1993019188A1 (fr) * | 1992-03-20 | 1993-09-30 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Gene chimerique sensible aux champignons |
WO1995014098A1 (fr) * | 1993-11-19 | 1995-05-26 | Biotechnology Research And Development Corporation | Regions regulatrices chimeres et cassettes de genes destines a l'expression de genes dans des plantes |
WO1996003522A1 (fr) * | 1994-07-22 | 1996-02-08 | Demeter Biotechnologies, Ltd. | Produit d'assemblage de genes par fusion de peptides ubiquitine-lytiques, produits proteiques en derivant et leurs procedes d'obtention et d'utilisation |
FR2725992A1 (fr) * | 1994-10-25 | 1996-04-26 | Rhone Poulenc Agrochimie | Peptide antifongique |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2673703B1 (fr) | 1991-03-06 | 1996-12-06 | Innovations Tech | Appareil a gaz a securite de surchauffe. |
US5390926A (en) | 1994-05-31 | 1995-02-21 | Gt Sports Marketing | Practice putting green |
FR2766207B1 (fr) * | 1997-07-11 | 2000-12-08 | Rhone Poulenc Agrochimie | Gene chimere codant pour la drosomycine, vecteur le contenant pour la transformation des cellules vegetales et plantes transformees obtenues resistantes aux maladies |
-
1997
- 1997-07-24 FR FR9709663A patent/FR2766207B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-07-08 PL PL98337994A patent/PL337994A1/xx unknown
- 1998-07-08 WO PCT/FR1998/001462 patent/WO1999002717A1/fr not_active Application Discontinuation
- 1998-07-08 AU AU85451/98A patent/AU739137B2/en not_active Ceased
- 1998-07-08 CA CA002296046A patent/CA2296046A1/fr not_active Abandoned
- 1998-07-08 IL IL13396198A patent/IL133961A0/xx unknown
- 1998-07-08 EP EP98936469A patent/EP0998575A1/fr not_active Withdrawn
- 1998-07-08 HU HU0004938A patent/HUP0004938A3/hu unknown
- 1998-07-08 BR BR9815507-5A patent/BR9815507A/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-07-09 HR HR9709663A patent/HRP980385A2/hr not_active Application Discontinuation
- 1998-07-10 AR ARP980103381A patent/AR016326A1/es not_active Application Discontinuation
- 1998-07-13 CO CO98039656A patent/CO4810248A1/es unknown
-
2000
- 2000-01-11 US US09/480,251 patent/US6465719B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-06-26 US US10/180,247 patent/US20030167519A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1991019738A1 (fr) * | 1990-06-15 | 1991-12-26 | Hoechst Aktiengesellschaft | Polypeptide fongicide et son procede de production |
EP0507698A1 (fr) * | 1991-03-05 | 1992-10-07 | Rhone-Poulenc Agrochimie | Promoteurs d'histone |
EP0508909A1 (fr) * | 1991-03-05 | 1992-10-14 | Rhone-Poulenc Agrochimie | Gène chimère pour la transformation des plantes |
WO1993019188A1 (fr) * | 1992-03-20 | 1993-09-30 | MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Gene chimerique sensible aux champignons |
WO1995014098A1 (fr) * | 1993-11-19 | 1995-05-26 | Biotechnology Research And Development Corporation | Regions regulatrices chimeres et cassettes de genes destines a l'expression de genes dans des plantes |
WO1996003522A1 (fr) * | 1994-07-22 | 1996-02-08 | Demeter Biotechnologies, Ltd. | Produit d'assemblage de genes par fusion de peptides ubiquitine-lytiques, produits proteiques en derivant et leurs procedes d'obtention et d'utilisation |
FR2725992A1 (fr) * | 1994-10-25 | 1996-04-26 | Rhone Poulenc Agrochimie | Peptide antifongique |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
H. LEE ET AL.,: "Structure and expression of ubiquitin genes of drosophila melanogaster", MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY, vol. 8, no. 11, 1988, WASHINGTON, DC, US, pages 4727 - 4735, XP000644354 * |
P. FELHBAUM ET AL.,: "Insect immunity. Septic injury of Drosophila induces the synthesis of a potent antifungal peptide with sequence homology to plant antifungal peptides", JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, vol. 269, 1994, BETHESDA, MD, US, pages 33159 - 33163, XP002061373 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FR2766207B1 (fr) | 2000-12-08 |
CA2296046A1 (fr) | 1999-01-21 |
US6465719B1 (en) | 2002-10-15 |
AU8545198A (en) | 1999-02-08 |
PL337994A1 (en) | 2000-09-25 |
AR016326A1 (es) | 2001-07-04 |
HUP0004938A3 (en) | 2002-11-28 |
AU739137B2 (en) | 2001-10-04 |
HRP980385A2 (en) | 1999-12-31 |
CO4810248A1 (es) | 1999-06-30 |
EP0998575A1 (fr) | 2000-05-10 |
IL133961A0 (en) | 2001-04-30 |
US20030167519A1 (en) | 2003-09-04 |
HUP0004938A2 (hu) | 2001-04-28 |
BR9815507A (pt) | 2000-11-07 |
WO1999002717A1 (fr) | 1999-01-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR100228326B1 (ko) | 토스포바이러스 rna를 암호화 하는 dna 서열을 포함하는 재조합 dna 구조체, 이 구조체로 형질전환된 식물 및 그 식물의 제조방법 | |
AU2021258028A1 (en) | Copi coatomer alpha subunit nucleic acid molecules that confer resistance to coleopteran and hemipteran pests | |
KR20170068467A (ko) | 딱정벌레류 및 노린재류 해충에 대한 저항성을 부여하는 copi 코토머 델타 서브유닛 핵산 분자 | |
KR20170067756A (ko) | 딱정벌레류 및 노린재류 해충에 대한 저항성을 부여하는 copi 코토머 감마 서브유닛 핵산 분자 | |
KR20160093727A (ko) | 딱정벌레류 및/또는 노린재류 해충에 대한 저항성을 부여하는 ras 오포지트 (rop) 및 관련 핵산 분자 | |
CA2325658A1 (fr) | Gene codant pour l'heliomicine et son utilisation | |
KR20170013885A (ko) | 딱정벌레류 및 노린재류 해충에 대한 저항성을 부여하는 sec23 핵산 분자 | |
FR2766207A1 (fr) | Gene chimere codant pour la drosomycine, vecteur le contenant pour la transformation des cellules vegetales et plantes transformees obtenues resistantes aux maladies | |
FR2772787A1 (fr) | Promoteur h3c4 de mais associe au premier intron de l'actine de riz, gene chimere le comprenant et plante transformee | |
CA2440358A1 (fr) | Proteines oligomeres semblables a une chaperone, stables face aux denaturants et/ou resistant a la protease, polynucleotides codant les memes proteines et utilisations correspondantes | |
FR2770853A1 (fr) | Gene codant pour la thanatine, vecteur le contenant et plantes transformees obtenues resistantes aux maladies | |
CA2978766A1 (fr) | Molecules d'acide nucleique d'arn polymerase ii215 pour lutter contre les insectes nuisibles | |
JP4320399B2 (ja) | 新規ネコブセンチュウ抵抗性遺伝子とその利用 | |
FR2767537A1 (fr) | Gene codant pour l'androctonine, vecteur le contenant et plantes transformees obtenues resistantes aux maladies | |
FR2766206A1 (fr) | Gene chimere codant pour la drosomycine, vecteur le contenant pour la transformation des cellules vegetales et plantes transformees obtenues resistantes aux maladies | |
KR950012900B1 (ko) | 항바이러스성 단백질 발현벡터와 이것으로 형질전환된 식물체의 제조방법 | |
FR2799204A1 (fr) | Nouvelle classe de proteines et leurs applications a la resistance de plantes a divers agents pathogenes | |
CA3019837A1 (fr) | Molecules d'acides nucleiques fsh pour lutter contre des insectes nuisibles | |
WO2017053662A1 (fr) | Molécules d'acides nucléiques du gène shibire/de la dynamine visant à lutter contre les coléoptères et hémiptères nuisibles | |
TW201728757A (zh) | 控制昆蟲害蟲的gawky(gw)核酸分子 | |
CA2410575A1 (fr) | Peptides antimicrobiens de la famille des defensines, polynucleotides codant ces peptides, vecteurs et organismes transformes les contenant | |
CZ20001683A3 (cs) | Gen kódující thanatin, vektor obsahující tento gen, způsob přípravy transgenních rostlin a transgenní rostliny odolné vůči chorobám | |
CZ2000601A3 (cs) | Gen kódující androctonin, vektor obsahující tento gen, způsob přípravy transgenních rostlin a transgenní rostliny odolné vůči chorobám | |
CZ200067A3 (cs) | Chimérický gen kódující drosomicin, vektor obsahující tento gen a způsob přípravy transgenních rostlin rezistentních k chorobám | |
AU4892702A (en) | Gene coding for androctonine vector containing same and transformed disease-resistant plants obtained |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
ST | Notification of lapse |
Effective date: 20060331 |