FR2492384A1

FR2492384A1 - Procede de preparation de nouveaux composes cytostatiques et compositions pharmaceutiques les contenant

Info

Publication number: FR2492384A1
Application number: FR8115835A
Authority: FR
Inventors: L Dancsi; T Keve; G Fekete; E Dezseri; S Gorog; T Acs; C Szantay; L Szabo; K Honty; S Eckhardt; I Hindi; S Kerpel-Fronius; Z Relle-Nee-Somfai; J Sugar
Original assignee: Richter Gedeon Nyrt; Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar RT
Current assignee: Richter Gedeon Nyrt; Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar Nyrt
Priority date: 1980-10-22
Filing date: 1981-08-17
Publication date: 1982-04-23
Also published as: NL8103844A; ES505310A0; DE3132476C2; BE889989A; IT1138154B; FR2492384B1; SU1053757A3; CH648320A5; ATA358681A; JPS5772992A; JPH0161118B2; HU181745B; IT8123540A0; SE442116B; GB2086378B; GB2086378A; DE3132476A1; IL63593A0; CA1174672A; ES8300777A1

Abstract

PROCEDE DE PREPARATION DE NOUVEAUX COMPOSES CYTOSTATIQUES ET COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES LES CONTENANT. COMPOSES DE FORMULE I: (CF DESSIN DANS BOPI) OU R DESIGNE B-HYDROXYLE ET R DESIGNE A-ETHYLE;OU R DESIGNE HYDROGENE ET R DESIGNE B-ETHYLE;R DESIGNE UN ETHYLE OU UN ALKYLE A CHAINE DROITE OU RAMIFIEE EN C-C;R METHOXY;R ACETYLE. CES COMPOSES SONT PREPARES PAR REACTION D'UN COMPOSE DE DEPART CORRESPONDANT DANS LEQUEL L'ATOME D'AZOTE EN POSITION 1 EST SUBSTITUE PAR UN GROUPE -CH, AVEC UN GRAND EXCES D'ALCOOL DE FORMULE R-OH III OU R A LA SIGNIFICATION CI-DESSUS INDIQUEE, EN PRESENCE DE DIOXYDE DE CHROME, D'UN SOLVANT ORGANIQUE, D'ANHYDRIDE ACETIQUE ET D'UN ACIDE A UNE TEMPERATURE DE -60 A 30C, A UN PH DE 8-10. LES COMPOSES PRECITES ONT UNE FORTE ACTIVITE CYTOSTATIQUE.

Description

"Procédé de préparation de nouveaux composés cytostatiques et compositions pharmaceutiques les contenant.

La présente invention a pour objet un procédé de préparation de nouveaux composés cytostatiques et leur utilisation dans des compositions cosmétiques.

Plus particulièrement, l'invention a pour objet la préparation de nouveaux composés de formule générale

où R# désigne γ-hydroxyle et
R3 désigne 6 -éthyle, ou bien
R4 désigne hydrogène et
R3 désigne t-éthyle;
R" désigne un alkyle à chaine droite ayant de 1 à 10 atomes
de carbone à l'exception d'éthyle, ou une chaine alkyle
ramifiée ayant de 3 à 10 atomes de carbone dans laquelle
l'atome de carbone attaché au groupe fi -CH2,O- a une
configuration primaire ou secondaire ou un groupe aralky
le dont la partie alkyle contient de 1 à 3 atomes de
carbone;
R1 désigne méthoxy et
R2 désigne acétyle.

Les nouveaux composés de formule générale (I) dans lesquels R11 R2, R3, R4 et R" ont la définition ci-dessus indiquée présentent une activité cytostatique.

Les composés de formule générale (I) peuvent être préparés à partir des composés de formule générale (II)

ou à partir de leurs sels d'addition acide, par oxydation, en présence de composés de formule générale
R" - OH (II)
Dans les formules ci-dessus R1, R2, R3, R4 et R" ont la signification sus-indiquée. La réaction comprend essentiellement la modification de la structure du groupe

dans les composés de formule générale (II). Cette modification peut être réalisée dans tout bis-indol alcaloïde contenant un groupe

Les composés de départ de formule générale (II) sont con nus. La Vinblastine (R1 = méthoxy, R2 = acétyle, R3 = i-éthyle et R4 = -hydroxyle) est par exemple décrite dans le brevet
U.S.N 3 097 137 et la 20'-désoxy-leurosidine (R1 = méthoxy,
R2 = acétyle, R3 = p-éthyle et R4 = hydrogène) et son isolation sont décrites par N. NEUSS ET AL. [Tetrahedron Letters 1968, 7833 tandis que sa synthèse est décrite par Potier et al. CJ. Am. Chem. Soc. 98, 7017 (1976)3 . Les composés de départ possèdent une activité cytostatique mais sont plus toxiques que les composés de formule générale (I) qu'on peut en préparer.

La toxicité aiguë des composés selon l'invention a été contrôlée sur des souris males d'origine suisse1 pesant entre 27 et 31 g. Les essais ont été réalisés sur des groupes de six souris. Les composés à essayer ont été administrés par voie intrapéritonéale, sous forme de solutions injectables préparées à partir de solutions salines physiologiques et contenant éventuellement une goutte de Tween 80. Les doses ont été successivement augmentées à partir dlune dose ne provoquant pas de mortalité jusqu'à la dose léthale. Les résultats ont été appréciés d'après la méthode de Lichfield et Wilcoxon et fiqurent sur le tableau 1 ci-après1en comparaison avec ceux ae vinblastine, vindesine et vincristine.

TABLEAU 1
Composé LD50 Effet se
(mg/kg, condaire
paralysant
Souris)
N-desméthyl-N-(méthoxyméthyl)-vinblastine ~ 100 N-desméthyl-N-(propoxyméthyl)-vin- balastine ~ 80
N-desméthyl-N-(isobutoxyméthyl)-vinblastine ,j 60
N-desméthyl-N-(heptoxyméthyl)-vinblastine nJ 60 N-desméthyl-N- (benzyloxyméthyl) - vinblastine "J 70 vincristine 4,2 + vinblastine 7,6 vindesine 4,0 +
Selon les résultats figurant sur le tableau 1, les nouveaux composés sont de 15 à 25 fois moins toxiques que la vincristine et vindesine et 8 à 13 fois moins toxiques que la vinblastine.

Contrairement à la vincristine et vindesine, on n'a pas observé d'effet secondaire paralysant à des doses allant jusqu'à DL50.

L'activité cytostatique des nouveaux composés, selon l'invention, a été contrôlée également dans des tissus en culture et dans différentes sortes de tumeurs transplantées.

Les composés essayés ont été dissous dans le tissu en culture (culture de cellule HeLa) à des concentrations allant d'une dose seuil de lx10 3 ,ug/ml jusqu'à 100 pg/ml. L'estimation microscopique in vivo de l'essai arrêtant la métaphase, dans des cultures au bout de 24 heures, ont fourni les résultats suivants.

TABLEAU 2
Composé Dose conduisant
à un fort blocage g/ml)
N-desméthyl-N-(méthoxyméthyl)vinblastine 0,001 N-desméthyl-N- (propoxyméthyl)- vinblastine 0,001
N-desméthyl-N-(isobutoxyméthyl)vinblastine 0,001 N-desméthyl-N- (heptoxyméthyl) - vinblastine 0,001
N-desméthyl-N-(benzyloxyméthyl)vinblastine 0,01
Dans des conditions similaires mais utilisant des cultures de tissus teintées, on a également pu observer des différences plus faibles qu'on peut Classer comme suit
Le premier stade (dose efficace minimale) est caractérisé par une augmentation du taux de mitoses bloquées. A part cela, on constate également des mitoses anormales, par exemple des mitoses à trois groupes ou des chromosomes polaires. Généralement les anaphases ont déjà disparu.

Dans le second stade, on observe un fort blocage de la métaphase et pratiquement on n'observe pas de mitose régulière.

Les chromosomes sont sous la forme de "glomus" (anastomose artéro-veineux) délié. La proportion des cellules à l'état d'interphase est faible.

Au troisième stade, les chromosomes sont assemblés en masse, au milieu de la cellule. Ce stade est appelé pycnomitose de "Ball-Metaphase".

Au quatrième stade, les cellules de l'interphase sont déjà influencées. Plus particulièrement, le nombre de cellules bloquées a diminué car elles ne sont pas en état de participer à la mitose. Le citoplasme des cellules (dans l'interphase) est allongé, ses bords sont irréguliers, présentent des franges, les cellules ont souvent une forme rappelant les fibroplastes.

Enfin, au cinquième stade, le citoplasme est rempli d'une structure réticulaire fine et la cellule d'interphase a été tuée sans équivoque par le traitement.

Les stades ci-dessus peuvent etre bien distingués lorsqu'on contrôle les composés selon l'invention.

Les observations suivantes ont été faites : Le composé le plus efficace est le dérivé heptoxy, qui provoque un fort blocage de la métaphase,déjà à une dose de 0,001Jug/ml. Pycnomitose a été observé à une dose de 0,1 g/ml,tandis que des cellules interphase ont été influencées à des doses comprises entre 1 et 10 g/ml.

Le dérivé isobutoxy a une action d'un ordre de grandeur moindre, notam- ment à une dose de 0,001 g/ml, on peut encore observer des mitoses normales.

Le dérivé benzyloxy a 1' effet le plus faible. A la dose la plus faible ap pliquée, ce composé induit un blocage minimal avec plusieurs mitoses défor mées, mais sans anaphases. A O,OltgXml, le blocage est modéré et un blocage fort et pycnanitose ne sont induits qu' une dose de 1.

On décrit ci-après l'effet des nouveaux composés sur des tumeurs intrapéritonéales transplantables (leucémie P388 de la souris et lymphome ascite NK/Ly). Les essais concernant la leucémie P 388 ont été réalisés sur des souris hybrides BDF.

Les essais ont été réalisés sur des groupes de six souris et 106 cellules de tumeur animale ont été transplantées par voie intrapéritonéale. L'administration des composés essayés a commencé dans les 24 heures après la transplantation. Le traitement a été réalisé par voie intrapéritonéale et on a contrôlé le poids et l'état des animaux tous les jours. L'effet obtenu sur les animaux traités est exprimé en % de durée de vie moyenne du groupe témoin, exprimé en jours.

Les résultats figurant sur le tableau ci-après montrent que la durée de vie de la souris atteinte de leucémie P 388 est considérablement augmentée par les composés essayés.

TABLEAU 3
Composé Dose Durée moyenne de Souris trai- Toxi
vie (jours) tées/souris cité
témoins
souris Témoins
traitées
N-desméthyl-N- 8x0,4 14,3 10,3 139 heptoxy- 8x4,0 18,7 10,3 181 méthyl-VLB 8x8,0 21,3 9,9 217
N-desméthyl-N- 8x0,4 13,0 10,3 126 (benzyloxymé- 8x4,0 18,3 10,3 178 thyl)vinblasti- 5x8,0 19,2 9,9 195 ne
N-desméthyl-N- 8x0,4 13,7 10,3 133 (isobutoxymé- 8x4,0 20,0 10,3 194 thyl)-vinblas- 8x8,0 20,5 9,9 208 tine
N-desméthyl-N- 8x1,0 12,7 10,3 122 méthoxyméthyl)- 8x2,0 18,7; 10,5 178;155 vinblastine 16,8
8x4,0 19,0; 11,1 171;163
17,7
8x6,0 19,2 10,5 182
8x8,0 18,7; 10,8 172;205
20,2
N-desméthyl-N- 8x1,0 15,0 10,3 145 (propoxyméthyl)-8x2,0 20,8 10,5 198 vinblastine 8x4,O 19,0 11,1 171
8x8,0 20,2 9,9 205
8x10,0 14,7 10,3 142 toxique + Les animaux sont morts exempts de tumeurs.

Dans des groupes de souris suisses H/Riop non consanguines, de notre propre élevage, 5x106 cellules de tumeur ascites ont été transplantées intrapéritonéalement. Dans les 24 heures après la transplantation, on a commencé le traitement et on a administré les composés journellement, en tout cinq fois.

La durée moyenne de vie du groupe témoin était de 15,7 jours.

Des essais similaires ont été réalisés avec la N-desméthyl N-(méthoxyméthyl) -20 '-désoxy-leurosidine. Dans ces essais, les doses et le nombre des traitements ont varié. Les résultats suivants ont été obtenus.

TABLEAU 4
Composé Dose Durée moyenne Souris trai
(mg/kg) de vie (jours) tées/témoins
i.p. souris
traitées témoins
N-desméthyl- 4x8 21,8 12,1 180 N-(méthoxyméthyl)- 8x4 20,8 11,6 180 -20'-désoxy- 4x7 17,1 12,1 142 leurosidine 8x1 21,7 12,2 178
8 x 0,5 15,3 12,2 126
Les composés provoquent une augmentation considérable de la durée de vie comme il ressort du tableau ci-après.

TABLEAU 5
Composé Dose au 25ème jour au 30ème jour
mg/kg
i.p. vivan--exemptes - exemptes
tes de de
tumeurs tumeurs
N-desméthyl- 5x6,0 10/10 7/10 3/10
N-(heptoxyméthyl)-VLB N-dexmhyl- 5x4,0 10/10 10/10 7/10 N- (isobuto- xyméthyl) VLB
L'effet d'inhibition sur les tumeurs des nouveaux composés sur les souches P 388 et NK/Ly est significative pour une dose de 4 à 8 mg/kg/jour et est équivalent à l'effet des alcaloides diindole connus. En meme temps, les composés selon l'invention sont beaucoup moins toxiques que les composés connus ayant une structure analogue.

Les composés peuvent etre utilisés pour le traitement des humait due préférence par voie intraveineuse ou sous forme d'infusions.

L'invention a également pour objet un procédé de préparation des composés de formule générale

où R3, R4, R", R1 et R2 ont la signification ci-dessus indiquée. Selon l'invention, les composés de formule générale (I) sont préparés par réaction d'un composé de formule générale

où R1, R2, R3 et R4 ont la signification ci-dessus indiquée, ou sur un sel d'addition d'acide de ces composés, avec un grand excès d'alcool de formule générale
R" - OH (III) où R" a la signification indiquée, en présence de trioxyde de chrome, un solvant organique approprié et l'anhydride acétique et d'un acide, à une température comprise entre -60 C et -300C et de préférence entre -50 et -600C, en ajustant le pH du mélange réactionnel à 8 - 10 et en purifiant éventuellement le produit de formule générale (I) obtenu, suivi de l'isolation du produit.

Selon ce procédé, on utilise comme matière de départ un composé de-formule générale (II) ou son sel d'addition acide.

Le composé de départ est dissous dans un solvant organique approprié, de préférence l'acétone ou un hydrocarbure chloré, par exemple dans le dichlorométhane, chloroforme ou dichloro-éthane exempt d'alcool. La dissolution et la réaction sont sensiblement favorisées par la présence d'un acide. I1 est par conséquent conseillé de réaliser la réaction dans un milieu faiblement acide. On ajoute au milieu réactionnel,de préférence un acide organique, par exemple de l'acide acétique glacial, l'acide adipique, l'acide pélargonique et éventuellement une petite quantité d'acide minéral. Comme acide minéral, on peut utiliser un acide minéral formant un sel d'addition acide avec des composés de formule générale (II) et on peut les utiliser en une quantité allant des traces à des quantités sensiblement équimolaires.

Le réactif de formule générale (III) est utilisé en grand excès. On peut utiliser comme alcool, par exemple des alcanols à chaine droite ayant de 1 à 10 atomes de carbone. La réaction avec l'éthanol est décrite dans la demande de brevet européen NO 0018231. On peut utiliser avantageuseusement, plus particulièrement le méthanol, le propanol, le butanol, l'alcool amylique et l'heptanol. On peut également utiliser des alcanols à chaine ramifiée ayant de 3 à 10 atomes de carbone et dans lesquels le groupe OH est attaché à un atome de carbone primaire ou secondaire. La réaction ne peut pas être réalisée avec des alcanols tertiaires. On utilise de préférence l'isobutanol, l'isopropanol et composés similaires.Enfin, les arylalkylalcools ayant de l à 3 atomes de carbone dans la partie alkyle de la molécule sont également des réactifs alcool appropriés. Parmi ces derniers on peut utiliser l'alcool benzylique ou l'alcool phényléthylique.

Les alcools de formule générale (III) sont utilisés dans un grand excès molaire. Le rapport molaire d'alcool au composé de formule générale (Il) peut varier selon l'alcool, mais de préférence, on utilise 50 à 150 équivalents molaires d'alcool de formule générale (III).

On fait réagir-les composés de formule générale (II) et (III), en présencede trioxyde de chrome. On ajoute le trioxyde de chrome au mélange réactionnel sous forme d'une solution et de préférence dans l'anhydride acétique.

La réaction est de préférence mise en oeuvre dans une atmosphère de gaz inerte, à une température comprise entre -60 et -300C et de préférence entre -50 et -600C. On contrôle le progrès de la réaction par une méthode analytique, par exemple par chromatographie en couche mince. Selon l'alcool de formule générale (III) utilisé, la réaction se termine dans un délai de 20 minutes à 1 heure et 40 minutes.

Lorsque la réaction est complète, on ajuste le pH du mélange réactionnel à 8-10 pour éliminer complètement l'anhydride acétique. L'ajustement du pH est commencé de préférence à une température de -500C et se termine généralement à une température entre 0 OC et +300C. Le mélange réactionnel est de préférence agité à la température ambiante pendant 5 à 10 minutes.

Le produit brut obtenu est ensuite isolé par extraction et évaporation. Le produit peut contenir une petite quantité respectivement de dérivés N-desméthyle et N-desméthyl-N-formyle, qu'on sépare de préférence du produit désiréwpar chromatographie. La purification par chromatographie est de préférence réalisée sur un absorbant d'alumine ou de gel de silice en grains, partiellement désactivé, et si on le désire, on continue de purifier le produit isolé par recristallisation.

Les exemples illustratifs ci-après fournissent des détails complémentaires, sans aucunement limiter l'invention.

EXEMPLE 1 N-desméthYl-N-(méthoxyméthol)-vinblastine
On dissout 1,0 g (1,1 mole) de sulfate de vinblastine, dans un mélange de 240 ml de dichlorométhane absolu exempt d'alcool,de 8,0 ml de méthanolet de 25 mi d'acide acétique glacial.

La solution est refroidie à -55 C. On ajoute ensuite à la solution de vinblastine, sous atmosphère d'azote sec, goutte à goutte, en l'espace de 5 minutes, en agitant vigoureusement, une solution de 0,5 g (5,0 mmoles) de trioxyde de chrome dans 40 ml d'anhydride acétique refroidi à -550C.

Pendant l'addition, la température du mélange réactionnel ne doit pas dépasser -50 C. On contrôle le progrès de-la réaction par chromatographie en couche mince (feuille d'Alu DC, gel de silice 60 F254, mélange 10:0,5:0,5:0,5 d'éther diéthylique, d'éthanol, de benzène et de diéthylamine2. Généralement l'oxydation se termine en 20 à 30 minutes. On ajoute ensuite au mélange réactionnel refroidi un mélange de 190 ml de solution aqueuse d'ammoniac concentré et 200 g de glace. La température augmente de -550C entre environ OOC et+100C. Quand on atteint cette dernière température, on met fin au refroidissement extérieur et on agite vigoureusement la solution ayant un pH de 8,5 à 9pendant 10 minutes.On sépare les phases, on extrait la-phase aqueuse avec 3 portions de 30 ml de dichlorométhane et on lave les extraits avec 4 portions de 25 ml cha cune > d'un mélange d'eau et d'ammoniaque 1:1 et ensuite avec 2 portions de 30 ml chacune d'eau. On sèche la phase organique sur du sulfate de magnésium anhydre, on sépare par filtration et on fait évaporer le filtrat sous vide. On obtient 0,35 g de produit brut . On purifie le produit par chromatographie sur une colonne remplie avec 0,3 g d'alumine ayant un degré d'activité II-III en solution de dichlorométhane.On réunit 6 ml de fractions dichlorométhane,que l'on analyse par chromatographie en couche mince (feuille d'Alu DC, gel de silice 60 F254, Art. 5554; solvant : mélange de dichlorométhane et de méthanol 5:0,4; détection par vapeur d'iode en lumière ultraviolette de 254 nml
On réunit les fractions contenant le même alcaloïde et on les fait évaporer séparément. Le produit final désiré est contenu dans les fractions du 6ème au 25ème.

Rendement : 64 X de composé préparé, qui est chromatographiquement uniforme. P.F. : (point de fusion) : 205-2100C (éthanol.

[α]# = +23 (c = 1, chloroforme).

1H-NMR(CDCl3, 100 MHz) : # 9,05/s, 1H, C16-OH/, 8.05/s, 1H, NA,H/, 7.35/s, 1H, C1 C12,-H/, 7.13-7.261m, 3H,
C9, -C11, -H/, 6.68/e, 1H, C9-H/, 6,33/s, 1H, C12-H/,
5.84/d, 1H, C14-H/, 5.37/s, 1H, C17-H/, 5.28/d, 1H,
C15-H/, 4.42/2H,

4.18/s, 1H, C2-H/, 3.97/s,
3H, C16-CO2CH3/, 3.77/s, 3H, C11-OCH3/, 3.62/s, 3H,
C16, -CO2CH3/, 3.26/s, 3H, -OCH3/, 2.73/s, 1H, C21-H/,
2.00/s, 3H, OCOCH3/, 0.8-0.96/2t, 6H, C18-H3, C18, -H3/.

MS m/e : 840 (M+ 100 %), 810,.809,. 781, 751, 681, 651,
650, 601, 499, 355, 282, 243, 241, 154, 149.

EXEMPLE 2 N-desméthvl-N- (isobutoxvméthvl) -vinblastine
On dissout 0,5 g (0,55 mmoles) de sulfate de vinblastine dans un mélange de 120 ml de dichlorométhane absolu, 3,7 ml d'isobutanol et 12,5 ml d'acide acétique glacial et on refroidit la solution à -550C. On ajoute ensuite 0,25 g (2,5 mmoles) de trioxyde de chrome dans 40 ml d'acide acétique glacial refroidi à -55 C et on contrôle le progrès de la réaction par chromatographie en couche mince1 comme indiqué dans l'exemple 1 (feuille plastique DC, gel de silice 60 F254, Art. 5735; mélange éther, éthanol, benzène et diéthylamine 10:0,5:0,5:0,5).

La réaction est terminée en 140 minutes. En traitant ensuite le mélange réactionnel,comme indiqué dans l'exemple 1, on obtient 0,65 g de produit brut. On purifie le produit brut par chromatographie en colonne sur gel de silice 60, (Art.

9385) adsorbant, dans le solvant dichlorométhane. On lave la colonne et on l'élue avec du dichlorométhane. On réunit des fractions de 10 ml. Les premières fractions de 330 ml ne contiennent pas d'alcaloïde. On continue l'élution avec du dichlorométhane contenant 3 % de méthanol. Les premiers 90 ml d'éluat contiennent le composé désiré que l'on isole par évaporation.

Rendement : 169 mg (35 %) du composé désiré.

Point de fusion : 215-2180C (acétone et éther).

Spectre IR (KBr) : 3400 (NH,OH), 1730 (CO2CH3), 1605,
1220 (cm/OAc). 1H-NMR/CDCl3, 100 MHZ/ : # 8.1/s, 1H, Na, H/,
7.5/m, 1H, C12, -H/, 7.05-7.2/m, 3H, C9,-C11. -H/, 6.70/s,
1H, C9-H/, 6.36/9, 1H, C12-H/, 5.87/d, 1H, C14-H/,
5.37/s, 1H, C17-H/, 5.30/d, 1H, C15-H/, 4.75, 4.15/2H,
JAB10 Hz,

4.0/s, 1H, C2-H/, 3.78, 3.75/2s,
6H, CO2CH3/, 3.63/s, 3H, C11-OCH3/, 2.75/s, 1H, C21H/,
2.1/9, 3H, OCOCH3/, 0.95-0.70/12H, CH3-groups/.

MS ni/e: 882 (M+, 100 %), 864, 851, 823, 810, 779, 751,
723, 651, 650, 514, 355, 346, 329, 154.

EXEMPLE 3
N-desméthyl-N-(heptoxyméthyl)-vinblastine.

On répète le procédé décrit dans l'exemple 2,sauf que 3,7 ml d'isobutanol sont remplacés par 3,7 ml de 1-heptanol.

Durée de réaction 90 minutes environ. On obtient à partir du mélange réactionnel 4 g de produit brut. On réalise la purification sur du gel de silice 60 (Art. 9385) sur une colonne chromatographique de 30 ml dans du dichlorométhane.

On lave la colonne et on l'élue avec du dichlorométhane. On réunit des fractions de 10 ml. Les premiers 300 ml ne contiennent pas d'alcaloïde. On continue l'6lution avec du dichlorométhane contenant 3 % de méthanol. Les premiers 120 ml d'éluat contiennent le composé désiré.

Rendement 21 % du composé désiré.

Point de fusion : 200 à 2050C (acétone/éther).

Spectre IR (KBr): 3450 /OH,NH/, 1740 /C02CH3/, 1610, 1220/cm /OAc/. 1H-NMR (CDCl3, 100 MHz) : # 8.07/s, 1H,
Na, H/, 7.52/m, 1H, C12, -H/, 7.2-7.02/m, 3H, C9, -C11, -H/, 6,70/s, 1H, C,-H/,.6,35/s,.lH, C12 -H/, 5.85/dd, 1H,
C14-H/, 5.39/s, 1H, C17-H/, 5.30/d, 1H, C15-H/, 4.75, 4.15/2H, JAB 10Hz,

4,0 /s, 1H, C2-H/, 3.80,
3.75 /2s, 6H, CO2CH3/, 3.65/s, 3H, C11-OCH3/, 2.75/s,
1H, C21-H/, 2.10/s, 1H, OCOCH3/, 0.7-1.0/3t, 9H,
CH3-groups/.

MS m/e : 924 (M+, 100%), 906, 893, 865, 822, 810, 765,
751, 737, 651, 650, 649, 469, 455, 355, 282, 154, 135, 122.

EXEMPLE 4
N-desméthyl-4-(benzyloxyméthyl)-vinblastine
On répète le procédé de l'exemple 2 sauf que; 3,7 ml d'isobutanol sont remplacés par 4,3 ml d'alcool benzylique.

Après 45 minutes, on obtient 4 ml de produit huileux, que l'on isole par chromatographie en couche mince (gel de silice
PF254+366; un mélange de 100 ml de dichlorométhane et 8 ml de méthanol).

Rendement : 75 mg (15 S) du composé désiré.

Point de fusion : 215 à 2180C (chlorure de méthylène/éther)
Spectre IR (KBr): 3400 /OH, NH/, 1740 /c020H3/,.1610, 1230/cm /OAc/. 1H-NMR/CDCl3, 100 MHz/ : # 8.07/s, 1H,
Na,H/, 7.52/m, 1H, C12, -H/, 7.2-7.08/m, 3H, C9, -C11, -H,
3H, aromatic/, 6.75/s, 1H, Co-H/, 6.20/s, 1H, C12-H/,
5.85/dd, 1H, C14-H/, 5.41/s, 1H, C17-H/, 5.30/d, 1H,
C15-H/, 4.80, 4.20/2H, JAB 10HZ,

4.40/s, 2H, bencyl-CH2/, 4.00/s, 1H, C2-H/, 3.70, 3.68/2s,.6H,
CO2CH3/, 3.63/s, 3H, C11-OCH3/, 2.75/s, 1H, C21-H/, 1.0-0.70/2ts 6H, CH3-groups/.

MS m/e: 916 (X+, 100%), 885, 857, 822, 810, 796, 779, 757,
751, 737, 651, 650, 649, 514, 355, 346, 329, 282, 154, 135.

EXEMPLE 5
N-desméthyl-N-(méthoxyméthyl)-vinblastine
On dissout 5 g (5,5 mmoles) de sulfate de vinblastine dans 150 ml d'eau. On libère la vinblastine base en ajoutant une solution aqueuse d'ammoniac concentré (pH 8) et l'on traite avec quatre fractions de 50 ml de dichlorométhane. On sèche la solution de dichlorométhane sur du sulfate de sodium, on filtre et on fait évaporer le filtrat jusqu'à siccité sous vide. On obtient 4 g de vinblastine que l'on dissout dans un mélange de 1000 ml de dichlorométhane exempt d'alcool, 120 ml d'acide acétique et 6 ml de méthanol. On refroidit la solution à -550C.On ajoute à cette solution 2,5 g (25 mmoles) de dioxyde de chrome dans 470 ml d'anhydride acétique refroidi à -550C, l'addition se faisant dans l'espace de 5 minutes. On agite le mélange réactionnel à -550C pendant 45 minutes, puis on y ajoute un mélange de 940 ml de solution d'ammonium aqueux concentré et de 940 ml d'eau glacée. La température ne doit pas dépasser 3000C. On sépare les phases et on mélange la phase de dichlorométhane avec 1000 ml d'une solutiond1aroniaque aqueuse à 1 X. On sépare la phase organique, on la sèche sur du sulfate de sodium anhydre, on la sépare par filtration et on fait évaporer le filtrat jusqu'à siccité, sous vide, et on obtient 3,8 g de produit brut.On le puririe sur colonne chromatographique préparée avec 230 g d'alumine ayant un degré d'activité de II-III (Brockmann) et benzène On dissout le produit brut dans 20 ml de mélange de benzène:chloroforme 8:2 et on laisse séparer les couches dans la colonne. On réalise l'élution avec environ 8 litres de mélange contenant du benzène et du chloroforme dans les proportions sus- indiquées. On réunit des fractions de 100 ml que l'on analyse par chromatographie en couche mince (gel de silice; mélange de benzène, éthanol, diéthylamine et diéthyléther 5:5:5:100). On réunit les fractions contenant la rneme substance et on fait évaporer. On obtient 2,1 g de composé cherché.

Rendement (après recristallisation dans 6 mi d'éthanol); 1,5 g.

Les caractéristiques du produit sont les memes que celles du produit de l'exemple 1.

EXEMPLE 6
N-de sméthyl-N-(propoxyméthyl)-Vinblastine
On répète le procédé décrit dans l'exemple 5 sauf qu'on utilise comme réactif 4,5 ml de propanol à la place du méthanol. On obtient 0,6 g de composé recherché.

Point de fusion 200-2100C (éthanol [α]20 ~ +31.2 (c = 1, ohloroformes) 1H-NMR/CDCl3, 100 NHz/ : # 9.05/s, 1H, C16-OH/, 8,06/s, 1H, Na, H/, 7.34/m, 1H, C12, -H/, 7.34-7.12/m, 3H,
C9, -C11, -H/, 6,68/s, 1H, C9-H/, 6.35/s, 1H, C12-H/, 5.84/dd, 1H, C14-H/, 5.36/s, 1H, C17-H/, 5.28/d, 1H,
C15-H/, 4.75, 4.15/2H, JAB 10 Hz,

4.18/a, 1H, C2-H/, 3.78/s, 3H, CO2CH3/, 3.75/s, 3H, C11-OCH3/, 3.62/s, 3H, C02CH3/, 2.73/s, 1H, C21-H/, 2.09/s, 3H,
OCOCH3/, 0.65-0.94/m, 9H, CH3-grpoupes
EXEMPLE 7
N-desméthyl-N-(méthoxyméthyl)-vinblastine
On répète le procédé décrit dans ltexemple 1 sauf qu'on utilise comme matière de départ le dichlorhydrate de vinblastine au lieu de sulfate de vinblastine O On obtient le composé recherché avec le rendement de 28 S.

Les caractéristiques physiques de ce produit sont identiques à celles indiquées dans l'exemple 1.

EXEMPLE 8
N-desméthyl-N-(méthoxyméthyl)-vinblastine
On répète le procédé décrit dans l'exemple 1 sauf qu'on utilise du chloroforme exempt d'alcool, du dichloro-éthane ou de l'acétone comme solvant à la place du dichlorométhane. On obtient le composé recherché avec un rendement de 40 à 50 S selon le solvant utilisé.

EXEMPLE 9
N-desméthyl-N-(méthoxyméthyl)-20'-désoxy-leurosidine
On dissout 60 mg (0,067 mmoles) de sulfate de 20'-désoxyleurosidine préparé par hydrogénation catalytique (Pd/C, méthanol) de 3',4'-anhydrovinblastine et transformation subséquente en sulfate correspondant, dans un mélange de 20 ml de dichlorométhane absolu, 1,5 ml d'acide acétique glacial et 0,5 ml de méthanol. On refroidit la solution à -550C et on y ajoute une solution de 30 mg (O,3 mmole ) de trioxyde de chrome dans 3,5 ml d'anhydride acétique refroidi à -550C.

La réaction se termine en 60 minutes. On ajoute au mélange réactionnel un mélange de 12 ml de solution aqueuse d'ammoniaque concentrée et 12 g de glace et on laisse séparer les phases. On agite la phase aqueuse avec 3 portions de 10 ml chacune de dichlorométhane. On lave les phases organiques réunies avec 2 portions de 10 ml chacune contenant un mélange d'ammoniaque et d'eau à 1:1 puis avec deux fois 5 ml d'eau. Le séchage et l'évaporation de la phase organique fournit 48 mg de produit brut qu'on purifie par chromatographie sur colonne (gel de silice 0,040 à 0,063 mm, Merck, Art. 9 385; solvant : CH2Cl2 suivi par un mélange de 3 % de méthanol et de CH2Cl2 ). On obtient 18 mg (32 %) de composé recherché.

Point de fusion : 185 - 190 C (décomposition).

= + 50 (c = 1, chloroforme)
Spectre IR (KBr) ; 3400 /NH/, 1720/CO2CH3/, 1610, 1230/cm /OAc/. 1H-NMR/CDCl3/ : # 7.95/s, 1H, Na, -H/, 7.54/m, 1H,
C12, -H/, 7.2-7.1/m. 3H, C9, -C11, -H/, 6,56/s, 1H, C9-H/, 6.11/s, 1H, C12-H/, 5.87/ad, III, Cl4-H/, 5.46/s, 1H, C17-H/, 5.37/d, 1H, C15-H/, 4.72, 4.15/2H,

3.80, 3.75 3.61/9H, CO2CH3/, 2.11/s, 1H, OCOCH3/, 1.0-0.6/6H, CH3groupes/
Par la purification chromatographique ci-dessus, on isole à titre de produit secondaire, 46 mg (22 %) de N-desméthyl-Nformyl-20'-désoxyleurosidine.

Point de fusion : 205-2100C (décomposition).

[α] D D = +54 (c = 1, chloroforme).

Claims

REVENDICATIONS

1.- Procédé de préparation de composés de formule générale (I)

où R# désigne #-hydroxy le et

R3 désigne ck-éthyle; ou bien

R4 désigne hydrogène et

R3 désigne P-éthyle;

R" désigne alkyle à chai ne droite ayant de 1 à 10 atomes de

carbone, à l'exception de l'éthylewou un alkyle ramifié

ayant de 3 à 10 atomes de carbone dans lequel l'atome

de carbone attaché au groupe Na-CH2-CO- possède une

configuration primaire ou secondaire ou un groupe ara lky le

ayant de 1 à 3 atomes de carbone dans la partie alkyle;

R1 désigne méthoxy et

R2 désigne acétyle, comprenant la réaction d'un composé de formule générale (voir formule page 20).

R" - OH (III) où R" a la signification ci-dessus indiquée, en présence de trioxyde de chrome, d'un solvant organique approprié, d'anhydride acétique et d'un acide, à une température comprise entre -600C et -30oC et de préférence entre -500C et -600C, le pH du milieu réactionnel étant ajusté à 8-10 et en isolant le produit obtenu, éventuellement après purification.

où R, R, R et R4 ont les significations ci-dessus, on leurs sels d'addition acide, avec un grand excès d'alcool de formule générale

2.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'on utilise 50 à 150 équivalents molaires d'alcool de formule générale (III) par rapport au composé de formule générale (II).

3.- Procédé selon les revendications 1 ou 2, caractérisé par le fait qu'on utilise comme solvant organique un hydrocarbure chloré.

4.- Composition pharmaceutique contenant comme ingrédient actif une quantité pharmaceutiquement active d'un composé selon la revendication 1 et au moins un support ou diluant pharmaceutiquement inerte.