FR2477016A1

FR2477016A1 - Compositions pharmaceutiques a base de derives de mitomycine pour le traitement de maladie neoplastique chez les animaux

Info

Publication number: FR2477016A1
Application number: FR8108250A
Authority: FR
Inventors: William A Remers
Original assignee: University Patents Inc
Current assignee: University Patents Inc
Priority date: 1979-12-05
Filing date: 1981-04-24
Publication date: 1981-09-04
Also published as: JPS5692288A; FR2478101A1; US4268676A; FR2478101B1; FR2477016B1

Abstract

COMPOSITION PHARMACEUTIQUE DE TRAITEMENT D'ETATS DE MALADIE NEOPLASIQUE CHEZ L'ANIMAL, DE FORMULE: (CF DESSIN DANS BOPI) DANS LAQUELLE Y EST DE L'HYDROGENE OU UN RADICAL ALKYLE LEGER ET Z EST UN RADICAL THIAZOLE-AMINE, UN RADICAL FURFURYLE AMINE, UN RADICAL CYCLOPROPYLE-AMINE, UN RADICAL PYRIDYLE-AMINE OU UN RADICAL DE FORMULE: (CF DESSIN DANS BOPI) MALADIES NEOPLASIQUES.

Description

- 1 - La présente invention concerne des composés mitosane antibiotiques

et l'utilisation de tels composés pour le

traitement des états de maladie néoplasique chez les a-

nimaux. On connait déjà de tels composés antibiotiques isolés à

partir d'un bouillon de culture de "Streptomyces verti-

cillatus" appelés Mitomycine A, B et C. Les structures de ces trois composés sont connues (voir par exemple,

la publication de JS. WEBB et al. dans la revue J.A.C.S.

84, 3185 en 1962) et se présentent sous les formules sui-

vantes: r/ " ' CH2OgNH2 H3C H3CO H3Co

H 3Nt-

H2N H3C'

MITOMYCINE A

MITOMYCINE B

MITOMYCINE C

o0 - 2 -

Les mitomycines A, B et C sont reconnues comme de ex-.

cellents antibiotiques mais de toxicité relativement é-

levée pour les humains. Ceci a incité à développer la

synthèse de nombreux dérivés de la Mitomycine, et ana-

logues, dans le but de donner aux composés une activité antibiotique égale ou supérieure, tout en diminuant leur

toxicité, à celle des mitomycines obtenues par voie na-

turelle. De tels dérivés de la mitomycine sont décrits dans les brevets américains n 3 332 944 (COLUSICH et al) n 3 450 705 (MATSUI et al) et n 3 514 452 (MATSUI et al),dans un article du numéro 2 (1971) de la revue J. Méd. Chem.par KINOSHITA et al et dans le brevet français n 1 449 947. On connait également des mitomycines et

dérivés de mitomycines possédant un certain degré d'acti-

vité antitumorale "in vivo", notamment par les communica-

tions de chercheurs tels que, par exemple, OBOSHI et ai dans la revue "GANN" (1967) 315-321, USUBUCHI et al dans

la revue "GANN, (1967) 307-313, MATSUI et al dans.la re-

vue "J.ANTIBIOTICS" XXI, n 3, 189-198 (1968) et CHENG et al dans la revue J. Med. Chem., 20, n 6, 767-770 (1977) et par le brevet japonais no 6806627 de MATSUI et al (rapporté dans "Chem. Abstracts", volume n 69, 86986K

(1968).

La publication de CHENG et de l'un de ses collaborateurs ré-

vêie l'activité contre la leucémie P388 chez la souris des mitomycines A et C et de la N-méthylmitomycine A.

La mitomycine C est prétendument active contre un éven-

tail relativement large de tumeurs expérimentales com-

prenant les variétés hématologiques et solides. Cepen-

dant, lors d'utilisation clinique, son usage est limité

à certains carcinomes en raison de sa toxicité et notam-

ment de ses effets myélosuppressifs. Voir, à ce sujet, par exemple l'ouvrage "Mitomycine C: Current status and developments" de CARTER et al. Editions Academic Press --35 (1977). De nombreux produits analogues à la mitomycine C ont été prépares dans l'espoir d'obtenir des composés

possédant des propriétés thérapeutiques améliorées, no-

tamment des propriétés antitumorales. Les dérivés analo-

gues semi-synthétiques mentionnés dans les publications et brevets cités précédemment présentent des substituants sur le noyau aziridine, des groupes carbamyles ou acyles

sur la chaine latérale hydroxyméthyle et le rem-

placement du substituant 7 sur le noyau quinone par d'au-

tres groupes fonctionnels, notamment des amines de subs-

titution. Aucun de ces composés analogues n'a pu percer en tant qu'agent clinique, bien qu'un composé 7-hydroxy

de la mitomycine C ait fait récemment l'objet de recher-

ches poussées au Japon. Ce composé est prétendu moins

leucopénique que la mitomycine C, bien qu'il soit égale-

ment moins puissant. Des composés totalement synthétiques analogues de la mitomycine, du type du mitosène (Mott et

al. revue J. Med. Chem. 21, 493 (1978)).et de l'indolo-

quinone (WEISS et al. J. Med. Chem. 11, 742 (1968)) ont

été préparés, mais principalement pour leur activité an-

tibactérienne. L'agent antitumoral le plus actif du type

mitosène est considérablement moins actif que la mitomy-

cine C. Il semble que l'on n'ait pas trouvé de composé

utilisable, de structure apparentée aux mitomycines, pos-

sédant une activité antibiotique, de toxicité faible et manifestant un degré d'activité notable antitumorale sur

les animaux.

L'invention concerne une nouvelle composition pour le traitement des états de maladie néoplasique chez les

animaux, cette composition couportant camé ingrédient actif une quan-

tité efficace thérapeutiquement d'un composé de formule la, as1 ICH O Ni i I OCH3 la HC

353 LN.

t

247?016

dans laquelle, Y est de l'hydrogène ou un radical alkyle

léger; Z est un radical thiazole-amine, un radical fur-

furyle-amine, un radical cyclopropyle-amine, un radical pyridyle-amine ou un radical de formule:

R4..R5

_ _ -C R

* I'

1

R6

4 5 6

dans laquelle R, R et R sont des éléments semblables

ou différents choisis dans le groupe comportant l'hydro-

gene et les alkyles légers, R étant choisi dans le grou-

pe constitué des alcényles légers, des halo-alcènyles lé-

gers, des alkynyles légers, des alkoxycarbonyles, des

halo-alkyles légers, des hydroxyalkyles légers, des pyri-

dyles, des thiényles, des formamyles, des tétrahydrofu-

ryles, des benzyles et des sulfamides benzènes.

Le terme "léger", appliqué aux radicaux alkyles, désigne des radicaux en chaines droites ou ramifiées comportant de un à six atomes de carbone. A titre d'illustration, un"alkyle léger" inclue des radicaux méthyles, éthyles, propyles, butyles, pentyles et hexyles, aussi bien que des radicaux isopropyles, t-butyles. et analogues. De la même manière, 'le terme "léger" appliqué aux radicaux "alcényles" ou "alkynyles", désigne des radicaux ayant de

deux à six atomes de carbone.

Les dérivés de la mitomycine selon l'invention sont pré-

parés par réaction de la mitomycine A avec des composés amines appropriés. Les dérivés de la N-alkyl - mitomycine (par exemple N-méthyl -mitomycine) sont préparés de même

par réaction d'une amine sélectionnée a'vec la N-alkyl-

mjlomycine A préparée à partir de la mitomycine C, selon, t.

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par exemple, les méthodes révélées de façon générale dans 1' article de CHENG et al. dans la revue J. Med. Chem., , n 6, 767-770 (1977). Les réactions préparatoires donnent généralement le produit désiré sous la forme d'un solide cristallin aisément soluble dans l'alcool. Les méthodes d'utili- sation thérapeutique des compositions selon l'invention comprennent l'administration de doses efficaces d'un ou plusieurs composés de formule Ia, comme ingrédient actif, joint

à des diluants, adjuvants et supports de réaction tolé-

rablec; pharmaceutiquement, à un animal souffrant de ma-

ladie néoplasique. La quantité de composés inclus dans dans les doses unitaires de composés, administrées selon la méthode de l'invention, varie entre environ 0,001 mg et environ 5,0 mg, de préférence entre environ 0,004 mg et environ 1,0 mg. De telles quantités de composés sont données pour constituer une dose journalière comprise entre environ 0,1 mg et environ 100 mg, de préférence

entre 0,2 mg et 51,2 mg, par kilogramme de poids de l'a-

nimal soigné. L'administration par voie parentérale, et

plus spécialement par voie intrapéritonéale, est la for-

me préférée lors de la mise en oeuvre de la méthode se-

lon l'invention.

D'autres aspects et avantages de l'invention ressortiront

de la description qui suit. -

Les exemples 1 à 25 suivants, décrivant la préparation

de certains composés actuellement préférés selon l'inven-

tion, ne sont cités qu'à titre d'illustration et ne sau-

raient en aucun cas limiter la portée de l'invention.

Sous réserve d'indications expresses, d'une part toutes les réactions ont eu lieu à température ambiante (20 C)

sans apport de chaleur, et d'autre part tous les procé-

dés chromatographiques encouche fine (TLC) utilisés afin

de contrôler l'évolution des réactions, impliquent l'u-

tilisation d'une lamelle en silica-gel pré-enrobée et

d'un mélange (de 4 pour 1 en volume) d'acétone et de ben-

zène, comme solvant de développement.

t47701.6 _ 6 _

EXEMPLE 1

1, la,288,8a,8b-Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-

- methyl-6-(2-thiazolamino)-azirino[2',3':3,4]pyrrolo- [1,2-alindole-4, 7dione carbamate

Un mélange de carbonate de potassium (80 mg) et de 2-ami-

nothiazole (18 mg) dans 4ml de méthanol anhydre est agité sous atmosphère azotée. A ce mélange, on ajoute de la

mitomycine A (30 mg ou 0,085 mmole) tout en remuant.

L'évolution de la réaction est controlée périodiquement par chromatographie en couche fine (TLC), et la réaction

est terminée en 40 heures. Le carbonate de potassium in-

soluble est filtré, et le filtrat est évaporé sous une pression réduite. Le résidu obtenu est chromatographié

à l'aide de silica-gel comme adsorbant. La fraction ob-

tenue par élution de la colonne avec un mélange de ben-

zène et d'acétone (6 pour 4 en volume) est ensuite éva-

porée. La recristallisation à partir d'un mélange de chloroforme et d'acétone donne 16 mg (rendement de 45%) du produit désiré ayant un point de fusion de 85 -87 C et donnant l'analyse suivante:

NMR (CDCl3, TS): "6" valeurs en ppm.

La disparition d'un singlet à 4,02 (dûe au groupe 6-me-

thoxy dans les matériaux de départ) et l'apparition de nouveaux signaux à 6,46 (s,1), 7,36 (d,l) et 7,80 (d,1)

est mis en évidence.

EXEMPLE 2

1,la,2,8,8a,8b-Hexahydro-8-T(hydroxymethyl) -8a-methoxy-5-

- methyl-6-furfurylamino-azirino[2',3':3,43pyrrolo-1l,2-aI indole-4,7dione carbamate - 7-

On ajoute en agitant 0,5 ml de furfurylamine à une solu-

tion contenant 60 mg (0,17 mmole) de mitomycine A et 8 ml

de méthanol anhydre. L'évolution de la réaction est pé-

riodiquement contrôlée par la méthode TLC jusqu'à la fin de la réaction complète en 3 heures. Le solvant est éli- miné par évaporation sous pression réduite et le résidu

est chromatographié en utilisant du silica-gel comme ad-

sorbant. La fraction obtenue par élution de la colonne

avec de l'acétate d'éthyle est évaporée. La recristalli-

sation à partir d'un mélange de chloroforme et d'hexane donne 30 mg (rendement 42,7%) du produit désiré sous la forme de cristaux de couleur violette ayant un point de

fusion de 62o-63 (décomposition) et fournissant l'ana-

lyse suivante:

NMR (CDCl3, TMS): "6" valeurs en ppm.

Absence du pic 6-methoxy à 4,02 et apparition de nouveaux pics à 4,67 (raie s,2); à 6,33-6,53 (m,2); à 6,57 (t,1) et à 7,33 (raie s,1)

EXEMPLE 3

1,la,2,8,8a,8b-Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-1, -dimethyl-6furfurylamino-azirinot2',3':3,43pyrrolo- E1,2-adindole-4,7-dione carbamate

On ajoute en remuant 0,5 ml de furfurylamine à une solu-

tion contenant 50 mg (0,13 mmole) de N-méthylmitomycine A et 6 ml de méthanol anhydre. Le solvant est éliminé par

évaporation sous pression réduite et le résidu est chro-

matographié à l'aide de silica-gel comme adsorbant. La

fraction obtenue par élution de la colonne avec un mélan-

ge de chloroforme et d'acétate d'éthyle (Ipour 1 en volu-

me), est évaporée sous pression réduite. La recristalli-

sation à partir d'un mélange de chloroforme et d'hexane donne 31 mg (rendement 55,7%) du produit dérivé sous la forme de cristaux de couleur violette ayant un point de

fusion de I40 -141 C (décomposition) et fournissant l'a-

nalyse suivante:

NMR (CDCl3, TMS): "6" valeurs en ppm.

Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 ppm et apparition de nou- veaux à 4,67 (raie s,2); 6,33-6,53 (m,2); 6,57 (t,l)

et 7,33 (raie s,1).

EXEMPLE 4

1,la,2,8,8a,8b-hexahydro-8-(hydroxyméthyl)-8a-methoxy-1, 5-dimethyl-6cyclopropylamino-azirinoC2',3':3,4]pyrrolo [1,2-ejindole-4,7-dione carbamate

On ajoute en remuant 2 ml de cyclopropylamine à une solu-

tion contenant 75 mg (0,2 mmole) de N-méthylmitomycine A

et 10 ml de méthanol anhydre.

Le mélange en réaction est remué toute une nuit, après quoi la méthode TLC n'indique aucun reste d'ingrédient

de départ.

Le solvant est éliminé par évaporation sous pression ré-

duite et le résidu est chromatographié à l'aide de sili-

ca-gel comme adsorbant. La fraction, obtenue par élution de la colonne avec de l'acétate d'éthyle,est évaporée

sous pression réduite.

La recristallisation à partir d'un mélange de chlorurede méthylène et d'hexane donne 47,8 mg (rendement 59,7%) du

produit désiré sous la forme de cristaux de couleur vio-

lette ayant un point de fusion de 166 C-167 C (décompo-

sition) et fournissant l'analyse suivante:

NMR (CDCl3, TMS): "6" valeurs en ppm.

Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics

nouveaux à 0,70-0,90 (large s,5) et à 6,30-6,43 (lar-

ge s,1).

9 -

EXEMPLE 5

1,la,2,8,8a,S8b-Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-(3-pyridylamino)-azirino[2',3':3,4]pyrrolo-[1,2-a]

indole-4,7-dione carbamate.

On ajoute en remuant 61 mg de 3-aminopyridine (1,2 mmole) à une solution contenant 60 mg (0,17 mmole) de mitomycine A et 5 ml de méthanol anhydre. L'évolution de la réaction est périodiquement contrôlée par la méthode TLC jusqu'à

la fin de la réaction complète en 44 heures.

Le solvant est éliminé par évaporation sous pression ré-

duite et le résidu est chromatographié à l'aide de sili-

ca-gel comme adsorbant.

La fraction obtenue par élution de la colonne avec un mélange d'acétate d'éthyle et d'acétone (10 pour 1 en

volume) est évaporée sous pression réduite jusqu'à séchage.

La recristallisation à partir de chloroforme donne 38 mg (rendement 56%) du produit solide vert ayant un point de fusion de 78 C-80 C et fournissant l'analyse suivante:

NMR (CDC13, TMS): "6" valeurs en ppm.

Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics

nouveaux à 7,27 (s,2); à 7,67 (sl} et à 8,35 (s,2).

EXEMPLE 6

1,la,2,8,8a,8b-Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-allylamino-azirino[2',3':3,4]pyrrolo-U1,2-aI indole-4,7-dione carbamate On ajoute en remuant 150 mg (2,6 mmole) de allylamine à une solution contenant 100 mg (0,28 mmole) de mitomycine A et 8 ml de méthanol anhydre. Le mélange en réaction est remué toute une nuit, après quoi la méthode TLC n'indique

aucun ingrédient de départ restant.

_ 10 _

Le solvant est enlevé par évaporation sous pression ré-

duite et le résidu est chromatographié à l'aide de sili-

ca-gel comme adsorbant.

La fraction, obtenue par élution de la colonne avec de l'acétate d'éthyle est évaporée sous pression réduite. La recristallisation à partir d'un mélange de chlorure de méthylène et d'hexane donne 29 mg (rendement 27,0%) du produit désiré comme cristaux de couleur violette ayant un point de fusion de 81 C-82 C (décomposition) et fournissant l'analyse suivante:

NMR (CDCl3, TMS): "" valeurs en ppm.

Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics nouveaux à 3,30-3, 43 (m,2); à 5,10 (d,2); à 5,50-6,10

(m,1) et à 6,50 (t,l).

EXEMPLE 7

1,la,2,8,8a,8b -Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-

1,5-dimethyl-6-allylamino-azirino[2',3';3,4lpyrrolo-

[1,2-aJindole-4,7-dione carbamate On ajoute en remuant 58 mg (immole) d'allylamine à une

solution contenant 100 mg (0,275 mmole) de N-methylmi-

tomycine A et 15 ml de méthanol anhydre.

Le mélange en réaction est remué toute une nuit, après

quoi la méthode TLC n'indique aucun ingrédient de dé-

part restant.

Le solvant est enlevé par évaporation sous pression ré-

duite et le résidu est chromatographié à l'aide de sili-

ca-gel comme adsorbant.

La fraction, obtenue par élution de la colonne avec de

l'acétate d'éthyle est évaporée jusqu'à siccité.

La recristallisation à partir d'un mélange d'acétate d'éthyle et d'hexane donne 38,5 mg (rendement 38,0%) du

produit désiré sous la forme de cristaux de couleur vio-

-1I -

lette ayant un point de fusion de 70 C-71 C (décomposi-

tion) et fournissant l'analyse suivante:

NMR (CDCl3, TMS): "6" valeurs en ppm.

Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics nouveaux à 3,30-3, 43 (m,2); à 5,10 (d,2); à 5,50-6,20

(m,1) et à 6,50 (t,1).

EXEMPLE 8-

1,la,2,8,8a,8b-Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-(2-methylallylamino)-azirinoC2',3':3,4]pyrrolo-

[1,2-a3indole-4,7-dione carbamate.

On ajoute en remuant 29 mg de 2-méthylallylamine à une solution contenant 50 mg (0,138 mmole) de mitomycine A

et 8 ml de méthanol anhydre.

L'évolution de la réaction est périodiquement contrôlée par la méthode TLC, et après deux heures, le solvant est enlevé par évaporation sous pression réduite et le résidu est chromatographié à l'aide de silica-gel comme

adsorbant et d'acétate d'éthyle comme éluant.

La recristallisation à partir d'un mélange de chloroforme

et d'hexane donne 30 mg (rendement 55%) du produit dési-

ré sous la forme de cristaux de couleur violette ayant un point de fusion supérieur à 250 C (décomposition) et fournissant l'analyse suivante:

NMR (CDC13, TMS): "6" valeurs en ppm.

Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et.apparition de pics nouveaux à 1,97 (s, 3); à 4,00 (d,2); à 4,85 (d,2) et

à 6,53 (t,1).

_12 _

EXEMPLE 9

1,la,2,8,8a,8b-Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-1, -dimethyl-6-(2chloroallylamino)-azirino F2',3':3,41pyr- rolo- [,2-alindole-4,7-dione carbamate On ajoute en remuant 0,2 ml de 2-chloroallylamine à une solution contenant 50 mg (0,138 mmole) de N-méthyl-mito-

mycine et 6 ml de méthanol anhydre.

L'évolution de la réaction est périodiquement contrôlée par la méthode TLC jusqu'à la fin de la réaction complète

en trois heures.

Le solvant est enlevé par évaporation sous pression ré-

* duite et le résidu est chromatographié à l'aide de sili-

ca-gel comme adsorbant.

La fraction, obtenue par élution de la colonne avec un mélange de chloroforme et d'acétate d'éthyle (1 pour 1

en volume), est évaporée sous pression réduite.

La recristallisation à partir d'un mélange de chlorofor-

me et d'hexane donne 20 mg (rendement 34%) du produit désiré sous la forme de cristaux de couleur violette ayant un point de fusion de 71 C- 72 C (décompositionY et fournissant l'analyse suivante:

NMR (CDC13, TMS): "6" valeurs en ppm.

Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics nouveaux à 4,03-4, 55 (raie s,2); 5,30-5,4 (large s;2)

et à 6,53 (t,l).

EXEMPLE 10

1,la,2,8,8a,8b-Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6- (N-methylpropargylamino) -azirino[2',3':3,4Ipyr-

rolo[l,2-alindole-4,7-dione carbamate A température ambiante, on ajoute en remuant 150 mg (2mmole)

_ 13 _

de N-méthylepropargylamine à une solution contenant 50 mg

(0,14 mmole) de mitomycine A et 10 ml de méthanol anhydre.

L'évolution de la réaction est périodiquement contrôlée par la méthode TLC jusqu'à la fin de la réaction complète en 3 heures.

Le solvant est enlevé par évaporation sous pression ré-

duite et le résidu est chromatographié à l'aide de silica-

gel comme adsorbant.

La fraction, obtenue par élution de la colonne avec de

l'acétate d'éthyle,est évaporée sous pression réduite.

La recristallisation à partir d'un mélange de chlorure de méthylène et d'hexane donne 20 mg (rendement 37%) du

produit désiré sous la forme de cristaux de couleur vio-

lette ayant un point de fusion de 86 C-87 C (décomposition) et fournissant l'analyse suivante: NMR (CDCl3, TMS): "6" valeurs en ppm

Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics nou-

veaux à 2,00 (s,1); à 3,20 (s,3); à 4,20 (s,2) et à

6,20-6,40 (large s,1).

EXEMPLE 11

1,la,2,8,8a,8b-Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-(.1,1-dimethylpropargylamino)-azirino[2',3':3,43 pyrrolo- r1,2aiindole-4,7-dione carbamate

On ajoute en remuant 1 ml de l,l-diméthylpropargylamine.

à une solution contenant 50 mg (0,14 mmole) de mitomycine

A et 6 ml de méthanol anhydre.

L'évolution de la réaction est périodiquement contrôlée par la méthode TLC jusqu'à la fin de la réaction complète en 72 heures. "

Le solvant est enlevé par évaporation sous pression rédui-

te et le résidu est chromatographié à l'aide de silica-

gel comme adsorbant.

a477016 La fraction, obtenue par élution de la colonne avec un mélange de l'acétate d'éthyle est évaporée sous pression réduite.

La recristallisation à partir d'un mélange de chlorofor-

me et d'hexane donne 11,6 mg (rendement 21%) du produit

désiré sous la forme de cristaux de couleur violette a-

yant un point de fusion de 99 C-100 C (décomposition) et fournissant l'analyse suivante: NMR (CDC13, TMS)-: "6" valeurs en ppm Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics

nouveaux à 1,68 (s,6); à 2,47 (s,1) et à 6,23-6,60 (lar-

ge s,1).

EXEMPLE 12

1,1la,2,8,8a,8b-Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-propargylamino-azirinoC2',3':3,4]pyrrolo- [1,2-a] indole-4,7dione carbamate On ajoute, en remuant pendant 4 heures, 84 mg (1,5 mmole) de propargylamine à une solution -contenant 100 mg (0,28

mmole) de mitomycine A et 10 ml de méthanol anhydre.

Le solvant est-enlevé par évaporation sous pression rédui-

te et le résidu est chromatographié à l'aide de silica-gel

comme adsorbant.

La fraction, obtenue par élution de la colonne avec un

mélange d'acétate d'éthyle et d'acétone (8 pour 2 en volu-

me) est évaporée sous pression réduite.

La recristallisation à partir d'un mélange de chloroforme

et d'hexane donne 36,5 mg (rendement 35%) du produit dési-

ré sous la forme de cristaux de-couleur violette ayant un

point de fusion,de 95 C-96 C (décomposition) et fournis-

sant l'analyse suivante: NMR (CDCl3, TMS): "6" valeurs en ppm

_ 15 _

Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics

nouveaux à 2,40 (s,1); à 4,33 (s,2) et à 6,37 (t,1).

EXEMPLE 13

1, la,2,8,8a,8b-Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-

1,5-dimethyl-6-propargylamino-azirino[2',3':3,4Opyrrolo- 2-ajindole-4,7dione carbamate On ajoute en remuant pendant 3 heures 85 mg (1,5 mmole) de propargylamine à une solution contenant 107 mg (0,27

mmole) de N-méthylmitomycine A dans 10 ml de méthanol an-

hydre, après quoi la méthode TLC n'indique aucun ingré-

dient de départ restant.

Le solvant est enlevé par évaporation sous pression rédui-

te et le résidu est chromatographié à l'aide de silica-

gel comme adsorbant.

La fraction, obtenue par élution de la colonne avec un mélange de l'acétate d'éthyle est évaporée sous pression réduite. La recristallisation à partir d'un mélange de chlorure de méthylène et d'hexane donne 52,2 mg (rendement 50%) du

produit désiré sous la forme de cristaux de couleur vio-

lette ayant un point de fusion de 86 C-87 C (décomposi-

tion) et fournissant l'analyse suivante: NMR (CDC13, TMS): "6" valeurs en ppm Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics

nouveaux à 2,40 (s,1); à 4,33 (s,2) et à 6,38 (tel).

EXEMPLE 14

1,la,2,8,8a,8b-Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-(methoxycarbonyl-methylamino)-azirino2',,3';3,41 pyrrolo-[1,2a3indole-4,7-dione carbamate -16 - On refroidit dans un bain de glace une solution de 40mg (0,42 mole) de l'esther méthylique de l'hydrochlorure de glycine dans du méthanolanhydre... A cette solution refroidie est ajoutée en remuant une solution méthanolique de 23 mg de méthoxyde de sodium (0, 42 mmole). Puis on ajoute, sous atmosphère d'azote, une solution de 76 mg (0,21 mmole) de mitomycine A dans 45 ml de méthanolanhydre. Le mélange résultant est agité à température ambiante et l'évolution de la réaction

est périodiquement contrôlée par la méthode TLC. La réac-

tion est complète en 3 heures et demie.

Le solvant est-enlevé par évaporation sous pression rédui-

te et le résidu est purifié par chromatographie en couche

fine afin de donner 6 mg (rendement 13%) du produit dési-

ré ayant un point de fusion de 95 C-97 C et fournissant l'analyse suivante: NMR (CDCl3, TMS): "" valeurs en ppm Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics

nouveaux à 3,50 (s,2); à 3,73 (s,3) et à 5',33-5,66 (lar-

ge s,l).

EXEMPLE 15

1,la,2,8,8a,8b-Hexahydro-8(hydroxymethyl)-8a-methoxy-1,5-

dimethyl-6-(2-chloroethylamino)-azirino[2',3':3,4]pyrrolo-

[1,2-aiindole-4,7-dione carbamate

A une solution contenant 33 mg (0,09 mmole) de N-methylmi-

tomycine A dans 5 ml de méthanol anhydre,sont ajoutées

alternativement et en agitant constamment pendant 10 minu-

tes, d'une part une solution de 56 mg (0,5 mmole) d'hydro-

- chlorure de 2-chloroethylamine dans 2,5 ml de méthanol, et d'autre part une solution de 41 mg d'acétate de sodium (0,5 mmole) dans 2,5 ml de méthanol. L'évolution de la réaction est périodiquement contrôlée par la méthode TLC jusqu'à la fin de la réaction complète en 24 heures. Le _17 _ solvant est enlevé par évaporation sous pression réduite et le résidu est chromatographié à l'aide de silica-gel

comme adsorbant.

La fraction, obtenue par élution de la colonne avec de l'acétate d'éthyle est évaporée sous pression réduite. La recristallisation à partir d'un mélange de chloroforme

et d'hexane donne 16 mg (rendement 38%) du produit dési-

ré sous la forme de cristaux de couleur violette ayant

un point de fusion de 73 C-74 C (décomposition) et four-

nissant l'analyse suivante: NMR (CDCl3, TMS): "6" valeurs en ppm

Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics nou-

veaux à 3,30-4,00 (2t,4) et à 6,57 (t,1).

EXEMPLE 16

1,la,2,8,8a,8b-Hexahydro-8-(hydroxymnethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-(2-chloroethylamino)-azirino[2',3':3,4]pyrrolo-

[1,2-a indole-4,7-dione carbamate On ajoute alternativement en remuant constamment pendant dix minutes, à une solution de 100 mg de mitomycine A (0,286 mmole) dans 10 ml de méthanol anhydre, d'une part une solution de 82 mg d'acétate de sodium (1 mmole) dans

2,5 ml de méthanol et d'autre part, une solution conte-

nant 116 mg (1 mmole) d'hydrochlorure 2-chloroéthylamine dans 2,5 ml de méthanol. L'évolution de la réaction est périodiquement contrôlée par la méthode TLC jusqu'à la

fin de la réaction complète en 24 heures.

Le chlorure de sodium insoluble est éliminé par filtration et le solvant est enlevé par évaporation sous pression réduite. Le résidu est purifié par chromatographie de la

colonne à l'aided'un mélange d'acétate d'éthyle et d'a-

cétone (4 pour 1 en volume) comme éluant. La recristalli-

sation à partir d'un mélange de chloroforme et d'hexane

- lB -

donne 34 mg (rendement 30%) du produit désiré sous la forme de cristaux decouleur violette ayant un point de fusion de 59 C (décomposition) et fournissant l'analyse suivante: NMR (CDCl3, TMS): "6" valeurs en ppm Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics

nouveaux à 3,30-4,00 (m,4) et à 6,40 (t,1).

EXEMPLE 17

1,la,2,8,8a,8b-Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-(3-chloropropylamino)-azirino[2',3':3,4jpyrrolo-

1l,2-a3indole-4,7-dione carbamate A une solution contenant 100 mg de mitomycine A (0,286

mmole) dans 10 ml de méthanol anhydre, on ajoute alter-

nativement en remuant constamment pendant 10 minutes,

d'une part une solution contenant 82 mg (1 mmole) d'acé-

tate de sodium dans 2,5 ml de méthanol et d'autre part,

une solution de 130 mg d'hydrochlorure de 3-chloropro-

pylamine 41 mmole) dans 2,5 ml de méthanol. L'évolution

de la réaction est périodiquement contrôlée par la mé-

-20 thode TLC jusqu'à la fin de la réaction complète en 24

heures. -

Le chlorure de sodium insoluble est éliminé par filtra-

tion et le solvant est enlevé par évaporation sous pres-

sion réduite. Le résidu est purifié par chromatographie de la colonne à l'aide de silica-gel comme adsorbant et d'un mélange d'acétate d'éthyle et d'acétone (4 pour 1 en

volume) comme éluant.

La recristallisation à partir d'un mélange de chlorofor-

me et d'hexane donne 35 mg (rendement 30%) du produit désiré sous la forme de cristaux de couleur violette ayant un point de fusion de 64 C (décomposition) et fournissant l'analyse suivante: NMR (CDCl3, TMS): "6" valeurs en ppm Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics nouveaux à 1,87-2,30 (m,2); à 3,55-3,95 (m,4) et à

6,28 (t,1).

EXEMPLE 18

1,la,2,8,8a,8b-Hexahydro-8-(hydrôxymethyl)-8a-methoxy-1,5-

dimethyl-6-(3-hydroxypropylamino)-azirinof2,,3':3,4jpyrrolo-

1l,2-a3indole-4,7-dione carbamate (7)

A une solution de 50 mg (0,13 mmole) de N-méthylemitomy-

cine A dans 10 ml de méthanol anhydre, on ajoute alterna-

tivement en remuant vigoureusement pendant 10 minutes d'une part une solution de 82 mg (immole) d'acétate de sodium dans 2,5 ml de méthanol et d'autre part, une solution

contenant 130 mg (1 mmole) d'hydrochlorure de 3-hydroxy-

propylamine dans 2,5 ml de méthanol. L'évolution de la réaction est périodiquement contrôlée par la méthode TLC

jusqu'à la fin de la réaction complete en 24.heures.

Le solvant est enlevé par évaporation sous pression rédui-

te et le résidu est chromatographié à l'aide de silica-

gel comme adsorbant.

La fraction, obtenue par élution de la colonne avec de

l'acétate d'éthyle est évaporée.

La recristallisation à partir d'un mélange de chlorure de

méthylène et d'hexane donne 31 mg (rendement 61%) du pro-

duit désiré sous la forme de cristaux de couleur violette ayant un point de fusion de 139 C-140 C (décomposition) et fournissant l'analyse suivante: NMR (CDC13, TMS): "s" valeurs en ppm Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics nouveaux à 1,83-2,,13 (m,2); à 3,43-4i00 (m,4) et à 6,34 (t,1). -20 -

EXEMPLE 19

1,la,2,8,8a,8b-Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-(3-hydroxypropylamino)-azirino r2',3':3,4] pyrrolo-

[1,2-a indole-4,7-dione carbamate On ajoute en remuant 0,5 ml de 3hydroxypropylamine à une solution contenant 60 mg (0,17 mmole) de mitomycine A dans ml de méthanol anhydre. L'évolution de la réaction est périodiquement contrôlée par la méthode TLC jusqu'à la

fin de la réaction complète en 2 heures.

Le solvant est enlevé par évaporation sous pression rédui-

te. Le résidu est dissous dans 100 ni d'acétate d'éthyle et la couche organique est lavée à l'eau, puis séchée par du sulfate de sodium anhydre et le solvant est éliminé par évaporation sous pression réduite. Le résidu est alors

chromatographié à l'aide de silica-gel comme adsorbant.

La fraction, obtenue par élution de la colonne avec un

mélange d'acétate d'éthyle et d'acétone (9 pour 1 en vo-

lume) est évaporée sous pression réduite jusqu'à assèche-

ment. La recristallisation à partir d'acétone donne 60,7

mg (rendement 91%) du produit désiré sous la forme de -

cristaux de couleur violette ayant un point de fusion su-

périeur à 250 C (décomposition) et fournissant l'analyse suivante NMR (CDCl3, TMS): "" valeurs en ppm

Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics nou-

veaux à 1,52-1,92 (m,2); à 3,43-4,00 (m,4) et à 6,73 (t,1).

EXEMPLE 20

1,la,2,8,8a,8b-Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-(3-pyridylmethylamino)-azirino 2',3':3,4]pyrrolo-

G,2-alindole-4,7-dione carbamate On ajoute 71 mg de 3-aminométhylpyridine (0,66 mmQle) à

347 7016

-21 - une solution contenant 115 mg (0,33 mmole) de mitomycine A dans 5 ml de méthanol anhydre et le mélange obtenu est agité. L'évolution de la réaction est périodiquement contrôlée par la méthode TLC jusqu'à la fin de la réaction complete

en 16 heures.

Le solvant est enlevé par évaporation sous pressiondrédui-

te et le résidu est chromatographie à l'aide de silica-gel

comme adsorbant.

La fraction, obtenue par élution de la colonne avec un mélange de chloroforme et d'acétate d'éthyle (1 pour 1 en volume) est évaporée pour donner 107 mg (rendement 76%) du produit désiré sous la forme de cristaux de couleur violette ayant un point de fusion de 116 C-118 C après recristallisation de l'hexane-chloroforme et fournissant l'analyse suivante: NMR (CDC13, TMS): " ' valeurs en ppm Absence du pic 6-methoxy à 4,02 et apparition de pics nouveaux à 3,88 (s,2); 6,58 (t,l); à 7,00-7,40 (d,l;

à 7,43-7,90 (d,1) et à 8,53 (s,2).

EXEMPLE 21

1,la,2,8a,8b-Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-(2-thienylmethylamino)-azirino 2',3':3,4 pyrrolo-

71,2-a]indole-4,7-dione carbamate

On ajoute en remuant 16,2 mg de 2-aminométhylthiophène.

(0,143 mmole) contenant 25 mg (0,071 mmole) de mitomycine

A dans 2 ml de méthanol anhydre. L'évolution de la réac-

tion est périodiquement contrôlée par la méthode TLC jus-

qu'à la fin de la réaction complète en 24 heures.

Le solvant est enlevé par évaporation sous pression rédui-

te et le résidu obtenu est de couleur bleu foncé. Le ré-

sidu est purifié par la chromatographie en couche fine à l'aide d'une plaquette (épaisseur 2 mm).pré-enduite de

- 22 -

silica-gel et d'acétone comme solvant agissant.

Le produit obtenu est purifié plus avant par la recris-

tallisation à partir d'un mélange de chloroforme et d'he-

xane pour donner 20 mg (rendement 65%) du produit dési-

ré sous la forme de cristaux de couleur violette ayant un

point de fusion de 92 C-94 C (décomposition) et fournis-

sant l'analyse suivante: NMR (CDCl3, TMS): "6" valeurs en ppm Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics

nouveaux à 3,72 (s,2); à 6,47 (t,l) et 6,77-7,33 (m,3).

EXEMPLE 22

1, la,2,8,8a,8b-Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-(aminocarbonylmethylamino)-azirino [2',3':3,4-

pyrrolo-[i,2-ajindole-4,7-dione carbamate

On remue à température ambiante pendant 4 heures un mélan-

ge de mitomycine A(40 mg) (0,11 mmole) et de glycinamide

(42 mg)dans 3,5.ml d'éthanol absolu.

Le solvant est enlevé par évaporation sous pression ré-

duite et le résidu est purifié par chromatographie en cou-

che fine à l'aide d'une plaquette (épaisseur 2mm) pré-en-

duite de silica-gel et d'un mélange d'éthanol et d'acéta-

te d'éthyle (1 pour 3 en volume) comme solvant de déve-

loppement. La zone bleue est éluée avec de l'éthanol et

évaporée sous pression réduite pour donner 12,8 mg (ren-

dement 29,7%) du produit désiré sous la forme de cristaux

de couleur violette ayant un point de fusion de 124 C-

126 C (décomposition) et fournissant l'analyse suivante: NMR (CDC13, TMS) : "6" valeurs en ppm Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics nouveaux à 3,95 '(s,2); à 5,36 (largeur, 2) et à 6,35 (m,1).

- 23 -

EXEMPLE 23

1,la, 2,88a,8b-Hexahydro-8- (hydroxymethyl) -8a-methoxy-5-

methyl-6-(2-tetrahydrofurfurylamino) -azirino[2 e,3' 3,4] pyrrolo-[1,2-a] indole-4,7-dione carbamate On ajoute en remuant 0,2 ml de tetrahydrofurfurylamine à une solution contenant 100 mg (083 mmole) de mitomycine A

et 8 ml de méthanol anhydre.-

LUévolution de la réaction est périodiquement controlée par la méthode TLC à l'aide duune plaquette pré-enduite de silica-gel comme solvant de développement. La reaction

est complète en 3 heures.

Le solvant est enlevé par évaporation sous pression rédui-

te et le résidu est chromatographié à l'aide de silica-

gel comme adsorbant.

La fraction, obtenue par élution de la colonne avec de

l'acétate d'éthyle est évaporée sous pression réduite.

La recristallisation à partir d'un mélange de chlorofor-

me et de pentane donne 52 mg (rendement 43,5%) du pro-

duit désiré sous la forme de cristaux de couleur violet-

te ayant un point de fusion de 236 C-2370C (décomposition) et fournissant l'analyse suivante:

NMR (CDC13, TMS): "6" valeurs en ppm. -

Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics nou-

veaux à 1,26 (s,2); à 1,66-2,37 (m,4); à 3,50-4,10 {m,3)

et à 6,55 (t,i).

EXEMPLE 24

1,la,2,8,8a,8b-Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

* methyl-6-phenylethylamino-azirino 2',3':3,4 pyrrolo- -

i,2-alindole-4,7-dione carbamate On ajoute en remuant 80.mg de phényléthylamine (0,66 mmole)

- 24 -

dans 1 ml de méthanol anhydre à une solution contenant 115 nmg (0,33

mmole) de mitomycine A dans 4 ml de méthanol anhydre.

Apres un délai de 18 heures, le solvant est enlevé par évaporation sous pression réduite. Le résidu est dissous dans 15 ml d'acétate d'éthyle et ensuite lavé avec 5 parts

de 15 ml de solution tampon à pH 4.

Le solvant est éliminé sous pression réduite et le résidu est chromatographié à l'aide de silica-gel comme adsorbant

et d'acétate d'éthyle comme solvant.

La recristallisation du produit à partir d'éther-acétate

d'éthyle donne 85 mg (rendement 58,7%) du produit dési-

ré sous la forme de cristaux de couleur violette ayant

un point de fusion de 94 C-96 C (décomposition) et four-

nissant l'analyse suivante: NMR (CDCl3, TMS): "C6" valeurs en ppm Absence du pic 6-methoxy à 4,02 et apparition de pics

nouveaux à 3,40-3,90 (m,4); à 6,33 (t,1) et à 7,27 (s,5).

EXEMPLE 25

1,1a,2,8,8a,8b-Hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6- (4-sulphonamidophenyl)methylamino]3- azirino02', 3':3,43pyrrolo[1,2-alindole-4,7-dione carbamate On remue à température ambiante un mélange d'une solution

de mitomycine A (76,6 mg; 0,22 mmole) dans 3 ml de iné-

thanol anhydre et 80mg de p-aminométhylbenzènesulfonami-

de. Le mélange est gardé pendant 4 heures à température

ambiante et à 0 C pendant 12 heures. Le solvant est enle-

vé par évaporation sous pression réduite.

Le résidu foncé est chromatographié à l'aide de silica-

gel comme adsorbant. La fraction, obtenue par élution de la colonne avec de l'acétate d'éthyle est évaporée sous pression réduite pour donner 104 mg du produit brut. Le

produit brut est dissous dans un volume minimum de métha-

nol et de l'éther anhydre est ajouté à cet-te solution.

_ 25 _

Le précipité bleu foncé est filtré et séché pour donner 52 mg (47% rendement) du produit désiré ayant un point de fusion de 93 C-96 C après cristallisation à partir du benzene et présentant l'analyse suivante: NMR (CDCl3, TMS): "" valeurs en ppm. Absence du pic 6-méthoxy à 4,02 et apparition de pics nouveaux à 3,66-4,00 (large s,2); à 6,47 (s,1) et à

7,27-8,00 (2d,6).

Avec des références spécifiques aux composants représen-

tés par la formule Ia, les exemples énoncés ci-dessus il-

lustrent les variations de structure suivantes: 1- dans les composés des exemples 3,4,7,13,15 et 18, Y est un alkyle léger et notamment le méthyle. Dans les exemples restants, Y est de l'hydrogène. L'identité de Y est indépendante de celle de Z (comparer par exemple, les exemples 2 et 3 o Y est respectivement de d'hydrogène et

un alkyle léger, bien que Z ait la même identité).

2- Dans l'exemple 1, Z est la thiazolamine; dans les exemples 2 et 3, Z est la furfurylamine; dans l'exemple 4, Z est du cyclopropylamine; et dans l'exemple 5, Z

est du pyridylamine.

3- Dans les exemples 6 à 25, Z est un radical de formule

R4 R5

R R

N C R

R6 R

4 5 6 7

o R, R, R et'-R sont explicités précédemment.

4- R4, R5 et R6 peuvent être identiques ou différents, 26 _ choisis parmi l'hydrogène et les alkyles légers, et de plus choisis indépendamment de R7. Dans certains exemples, (exemples 2 et 6) les composants R4, R5 et R6 sont tous

les trois de l'hydrogène, tandis que dans les autres exem-

ples (exemple 10), R4 est un alkyle léger, de préfé-

rence du méthyle, tandis que R5 et R sont de l'hydro-

gene. Dans d'autres exemples encore, (Exemple 11), R et R6 sont tous les deux un alkyle léger tandis que R4 est de l'hydrogène. L'identité du substituant R7 est sujet à de grandes variations, c'est-à-dire que R7 peut être un alcényle léger (exemples 6, 7 et 8); un halo alcényle léger (exemple 9); un alkynyle léger (exemples 10,11,12, et 13): un alkoxycarbonyle léger (exemple 14); un halo alkyle léger (exemples 15, 16 et 17); un alkyle

hydroxy léger (exemples 18 et 19): du pyridyle (exem-

ple 20); du thiényle (exemple 21); du formamyle (exem-

ple 22); du tétrahydrofuryle (exemple 23); du benzyle

(exemple 24); et du benzène sulfonamide (exemple 25).

6- Dans le cas ou R est un haio-alkyle léger ou un hy-

droxy-alkyle léger, il est préférable que le groupe halo ou hydroxy soit attaché à l'atome de carbone terminal du groupe alkyle (c'est-à-dire que l'atome de carbone soit

distal par rapport à l'atome attaché à la liaison.

Lorsque R7 est un halo-alcényle léger, le groupe halo-

est de préférence attaché à un atome de carbone autre que l'atome de carbone terminal du radical alcényl. Enfin, lorsque R est soit un alcényle ou un alkynyle, le lieu

de non-saturation dans la chaine de carbone est de pré-

férence situé aux deux atomes. de carbone terminaux du ra-

dical.

Les composés selon l'invention ont une activité anti-bac-

térienne, contre des micro-organismes Gram+ positifs ou

Gram- négatifs, similaire à celle observée pour les mito-

- 27 -

mycines apparaissant naturellement, et sont ainsi poten-

tiellement utilisables comme agents thérapeutiques pour le traitement des infections bactériennes pour l'homme

ou l'animal. Le tableau I ci-après montre des données il-

lustrant une telle activité sous la forme de résultats d'une procédure de sélection antibactérienne mettant en jeu de la mitomycine C et les composés préparés selon les méthodesdécrites dans les exemples 4 - 60 120 13 et 15o Dans la procédure de sélection, Bacillus Subtilis est !0 développé dans un bouillon de culture standard (pHI 6) et le produit teste est placé sur un disque de 10 mm dans le centre du récipient de culture. La mesure de lactivité antibiotique consiste à observer le diamètre de la zone,

entourant le disque, dans laquelle des concentrations spé-

cifiques du composé testé inhibent le développement des bactéries.

TABLEAU I

Zone d'inhibition (mm) vs. B Subtilis Concentration (mg/ml) Composé 12,5 3,1 0,8 0,2 0,005 Mitomycine C -(a) - 28 20 11

Exemple 4 - 23 - - -

Exemple 6 14,3 10,2 0(b) 0 0 Exemple 12 - 38 32 25 17 Exemple 13 38 32 26 20 13 Exemple 15 42 - - 33 25 (a) indique que le composé n'a pas été testé

(b) indique qu' aucune activité d'inhibition n'a été cobservée.

- 28 -

L'utilité du composé de formule Ia dans les méthodes thé-

rapeutiques antinéoplasiques selon l'invention, est dé-

montrée par les résultats de procédures de sélection in vivo o les composés sont administrés à des doses variées à des souris auxquelles on a inoculé une condition leu-

cémique P338.

Les procédures sont menées conformément aux instructions

données dans l'article "Leucémie lymphocytique P338-Pro-

tocole 1,200" publié dans Cancer Chemotherapy Reports,

Partie 3, Volume 3, n 2, page 9 (septembre 1072). En ré-

sumé les procédures de sélection comportent l'administra-

tion du composé testé à une souris femelle CDF1 infectée

auparavant avec 106 cellules axites implantées intrapéri-

tonallement. Les composés testés ont été administrés le premier jour du test seulement, et les animaux ont été contrôlés en ce qui concerne leur vitalité, inter alia,

pendant une période de 35 jours.

Les résultats de sélection des composés des exemples 1 à sont portés sur le tableau II ci-dessous. Les données

représentées incluent la dose optimale ("O.D."), c'est-à-

dire le dosage en mg par kg de poids de l'animal pour

lequel les effets thérapeutiques maximum sont observés-u-

niformément. Le tableau mentionne également le temps moyen

de survie ("MST") exprimé comme le temps moyen de de sur-

vie des animaux testés par rapport au temps moyen de sur-

vie des animaux de référence ("%T/C"). Dans le contexte de la procédure P338 décrite précédemment, une valeur de "%T/C" supérieure ou égale à 125, indique une activité thérapeutique antinéoplasique significative. La dose la plus faible, en mg par kg de poids de l'animal testé, pour laquelle la valeur de 125%T/C est obtenue, est appelée dose effective minimum ("MED"). Ces doses sont également portées sur le tableau II. Il est à noter que les valeurs de MST exceptionnellement hautes obtenues dans la procédure de dépistage P338 reportés dans le tableau II,sont également révélatrices de l'absenoe de toxicité nDtable des caposés aux dosages indiqués.

2-4770 16

_ 29 _

TABLEAU II

MST en % T/C ME D 0,2 0,4 1,6 6,4 0,2 3,2 3,2 1,6 3,2 0,8 1,6- 0,2 1,6 0, 4 6,4 1,6 12,8 1,6 3,2 3,2 3,2 0,4 0,4 1,6 6,4 De façon claire, les compoDsés préférés employés comme agents antinéoplasiques selon l'invention, sont ceux qui montrent plus dé-deux fois la capacité de survie relative

généralement caractérisée comme mettant en évidence un po-

tentiel thérapeutique significatif, c'est-à-dire les com-

posés ayant une valeur relative "MST.%T/C" supérieure à

EXEMPLE

O. D. 1,6 12,8 12,8 12,8 3,2 6,4 6,4 ,6 ,6 6,4 ,6 12,8 ,6 12,8 51,2 12,8 12,8 12,8 ,6 *12,8 12,8 3,2 12,8 ,6 ,6

- 30 -

2 xD 125. La catégorie de tels composés comprend les com-

posés des exemples 2,3,12,13,14,18 et 23.

Ainsi que l'on peut le voir sur le tableau II, les dosages uniques initiaux aussi faibles que 0,2 mg/kg montrent une activité antinéoplasique substantielle à long terme. En

conséquence, les méthodes selon l'invention sont suscep-

tibles de mettre en oeuvre l'administration thérapeutique de dosages unitaires aussi faibles que 0,001 mg ou aussi

forts que 5 mg, de préférence de 0,004 à 1,0 mg de compo-

sés comme ingrédient actif dans une préparation pharma-

ceutique adéquate. De telles préparations peuvent être administrées en régime journalier exigeant de 0,1 mg à mg, de préférence environ 0,2 mg à environ 51,2 mg,

par kg de poids de l'animal souffrant de mal néoplasique.

Les composés sont administrés de préférence par voie pa-

rentérale. Les compositions pharmaceutiques utilisables de façon adéquate dans la pratique des méthodes selon l'invention peuvent comprendre des solutions simples à l'eau d'au moins un composé de formule Ia, mais peuvent également

inclure des diluants, adjuvants et/ou porteurs pharmaceu-

tiques acceptables, de type connu, tel que les solutions

salines à usage médical.

D'autres aspects et avantages de la présente invention ' sont susceptibles d'apparaître à l'homme de l'art en se

réferrant à la description qui vient d'être donnée, et

conséquemment, les seules limitations possibles de la

présente invention sont celles cernées par les revendica-

tions attachées.

Claims

R E V E N D I C A T IONS

O- Composition pharmaceutique de traitement d'états de maladie néoplasique chez l'animal, caractérisée en ce quuel]e est constituée d'une part d'un

solvant, diluant, adjuvant ou support de réaction toléra-

ble pharmaceutiquement, et d'autre part, comme ingrédient

actif, d'une dose comprise entre environ 0,00] mg et en-

viron 5 mg d'un composé de formule o

1D0. __ _-- CH2OCNH

2 2

3OCE H C

-3/ NY

dans laquelle Y est de l'hydrogène ou un radical alkyle

léger et z est un radical thiazole-amine, un radical fur-

furyle amine, un radical cyclopropyle-aminer un radical pyridyle-amine ou un radical de formule: R4

i 1.

À RR6 6 dans laquelle R4, R5.et R sont des éléments semblables

ou différents.choisis dans le groupe comportant l'hydro-

gène et des alkyles- légers, R étant choisi dans le groupe

constitué des alcènyles légers, des halo-alcènyles lé-

gers, des alkynyles légers, des alkoxycarbonyles légers, des

halo-alkyles légers, des hydroxyalkyles légers, des py-

ridyles, des thiényles, des formamyles, des tétrahydro-

furyles, des benzyles et des 'sulfamides benzéniques.
2.-Composition selon la revendication 1,

caractérisée en ce que le composé est choisi dans le grou-

pe constitué par:

1,l]a,2,8,8a,8b-hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-(2-thiazoloamino)azirino 2',3':3,4îpyrrolo[1,2-a3 indole-4,7dione carbamate;

1,la,2,8,8a,8b-hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-furfurylamino-azirino[2',3':3,43pyrrolo l1,2-a) indole-4,7-dione carbamate; 1,la,2,8,8a,8b-hexahydro-8-(hydroxymethyl-8a-methoxy-1, dimethyl-6-furfurylamino-azirino[2',3':3,] pyrrolo- Ll[1,2-a indole-4,7dione carbamate; 1,la,2,8,8a,8b-hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-1, -dimethyl-6-cyclopropylamino-azirino-[2',3':3,4J pyrrolo- [1,2-a indole-4, 7-dione carbamate;

1,la,2,8,8a,8b-hexahydro-8-(hydroxymnethyl)-$a-methoxy-5-

mnethyl-6-(3-pyridylamino)-azirino[2',3':3>43pyrroloE,2-aJ indole-4,'7dione carbamate;

1,la,2,8,8a,8b-hexahydro-8- (hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

nmethyl-6-allylamino-azirinco[2' t3':3,4]pyrrolo-4,2-aJ indole-4,7-dione carbamate;

1, l a, 2,8,8.a,8b-hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-

1,5-dimethyl-6-allylamino-azirino-[2',3':3,4]pyrrolo-

51,2-a] indoie-4,7-dione carbamate;

-1,la,2,8,8a,8b-hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-(2-methylallylamino)-azirino ',3':3,4] pyrrolo-

[1,2-a3indole-4,7-dione carbamate; l1,la,2,8,8a,8b-hexahydro-8(hydroxymethyl)-Ba-methoxy-1, -dimethyl-6- (2-chloroallyIamino) azirinoU2', 3 ':3,4] pyrrolo- -1,2-a2indole-4,7-dione carbamate;

1, la,2,8,8a,8b-hexahydro-8- (hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-(N-methylpropargylamino) -azirino[2',3':3,4Jrpyrrolo-

[l1,2-a] indole-4,7-dione carbamate;

1,la,2,8,8a,8b-hexahydro-8- (hydroxymethyl) -Ba-methoxy-

-methyl-6-(1-a dimnethylpropargylamino)-azirino[2', 3':3, 43

pyrrolo[,2-a3 indole-4,7-dione carbamate; -

1,l a,2,8,8a,8b-hexahydro-8 - (hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-propargylamino-azirino[2',3':3,4jpyrrolo[1,2-a3 indole-4,7-dione carbamate;

l,la,2,8,8a. 8b-hexahydro-8-(hydroxymethyl) -Ba-methoxy-

1,5-dimethyl-6-propargylamino-azirino[2', 3':3,4]pyrrolo 2-ajindole-4,7dione carbamate;

l,la,2,8,8a,8b-hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6- (methoxycarbonyl-mnethylamino) -azirino[2',3': 3,43 pyrrolo[l,2a]indole-4,7-dione carbamate;

1,]a,2,8,8a,8b-hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-mnethoxy-1,5-

dimethyl-6- (2-chloroethylamino)-azirino[2',3':3,4]pyrrolo [1,2-a]indole4,7-dione carbamate;

i,]a,2,8,8a,8b-hexahydro-8-(hydroxynmethyl) -a-minethoxy-5-

methyl-6- (2-chloroethylamino) -azirinot2',3':3,4 pyrrolo-

[1,2-a indole-4,7-dione carbamnate;

1,1 a,2,8,8a,8b-hexahydro-8- (hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6- (3-chloropropylamino) -azirino[2',3':3,4 pyrrolo-

[1,2-aj indole-4,7-dione carbamate;

1,la,2,8,8a,8b-hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoXy-1,5-

dimethyl-6-(3-hydroxypropylamino-)-azirino [2 ',3': 3,4jpyrro-

lo-L,2-a] indole-4,7-dione carbamate (7);

1l.a,2,8,8a,8b-hexahydro-8- (hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-(3-hydroxy propylamino)-azirino "2',3':3,4] pyrrolo [1,2ajindole-4,7-dione carbamate;

1,1a,2,8,8a,8b-hexahydro-8- (hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6 (3-pyridylmethylamino)-azirino[2',3':3,4]pyrrolo-

[1,2-a]indole-4,7-dione carbamate;

1, 3 a,2,8,8a,8b-bhexahydro-8- (hydroxymethyl) -Ba-methoxy-5-

methyl-6- (2-thienylmethylamino) -azirino 2' 3':3,4] pyrrolo-

[1,2-a3 indole-4,7-dione carbamate;

1, a,2,8,8a,8b-hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6- (aminocarbonylmethylamino) -azirino[2 ',3':3,43 pyrrolo-[1,2ajindole-4,7-dione carbamate;

1,la,2,8,8a,8b-hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6- (2-tetrahydrofurfurylamino) -azirino[2',3':3,4] pyrrolo[1,2-a] indole-4,7-dione carbamate;

1, la,2,8,8a, 8b-hexahydro-8-(hydroxymethyl)-8a-methoxy-5-

methyl-6-phenylethylamino-azirino [2', 3': 3,43 pyrrolo-[1,2-al indole-4, 7-dione carbamate; et,

1,3a,2,8,8a,8b-hexahydro-8- (hydroxymethyl) -8a-methloxy-5-

methyl-6- [(4-sulphonamidophenyl) methylaminoi -azirino2',3':
3,4]pyrrolo-[1,2-a3indole-4,7-dione carbamate.