FI85856C - Foerfarande foer framstaellning av farmaceutiskt aktiva pyrrolo/3,2-d/pyrimidinoner. - Google Patents

Description

85856

Menetelmä farmaseuttisesti aktiivisten pyrrolof3,2-d]py-rimidinonien valmistamiseksi

Erilaisten puriinijohdannaisten, mukaan luettuna guanii-nijohdannaiset, tiedetään olevan aktiivisia puriini-nukleosidi-fosforylaasin inhibiittoreina (PNP-4), US 767,202 jätetty 22. elokuuta 1985, joka on jatkoa US-hakemukselle n:o 660,152, jätetty 12. lokakuuta 1984 ja joka nyt on jätetty sillensä. Aikaisemmin tunnetut valitut guaniinijohdannaiset sisältyvät myös hakemukseen. Sen vuoksi US-hakemus n:o 767,202 liitetään tähän viitejul-kaisuna.

Tarkemmin sanoen seuraavat pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-onit, joilla on kaavat <4 . .

CH,

W

HO OH O

ja 11 0 2 R = OH

3 R = I

bo-i^ov V7 HO OH 4 . . ovat tunnettuja. Kaavan (1) mukainen yhdiste on esitetty julkaisussa J. Orq. Chem., 1979, 44:3826, ja kaavojen (2), (3) ja (4) mukaiset yhdisteet on esittänyt J.D.

*:**: Stoeckler et ai., Cancer Res., 1986, 46:1774. Edelleen

Stoeckler et ai. esittävät PNP-aktiivisuuden kaavojen .* . (2), (3) ja (4) mukaisille yhdisteille. Nämä yhdisteet 2 85856 eroavat tämän keksinnön mukaisista aryyli- tai heteroa-ryylisubstituentilla verrattaessa kaavan (1) metyyliin ja sokeriosalla verrattaessa kaavojen (2), (3) ja (4) mukaisiin yhdisteisiin. Näin tämän keksinnön mukaisesti val-misteetaan yhdisteitä, jotka aivan ilmeisesti eivät ole näiden muunnoksia.

Tämä keksintö koskee menetelmää farmaseuttisesti aktiivisten, kaavan (I) mukaisten pyrrolo[3,2-d]pyrimidinonien valmistamiseksi

OH

I h L JL>-NH2 (I) CH2

Ar jossa kaavassa Ar on (i) fenyyli, joka on substituoimaton tai substituoitu 1-4 hiiliatomia sisältävällä alkoksilla (ii) 2- tai 3-tienyyli tai (iii) 2-furanyyli; tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditio- tai emässuo-lojen valmistamiseksi.

Tämän keksinnön piiriin kuuluvista yhdisteistä muodostettuja farmaseuttisia koostumuksia voidaan käyttää autoimmuunisairauksien, kuten niveltulehduksen, systeemisen pu-./· nahukan, tulehduksellisten suolistosairauksien, nuoruuden aikaisen sokeritaudin, lihasheikkouden (myasthenia gravis), MS-taudin (multiple sclerosis), kihdin ja kihtini-veltulehdusten sekä psoriasiksen, virusinfektioiden ja syövän tai kudossiirrännäisen hylkimisreaktion hoitamiseksi, jotka koostumukset sisältävät immuunimoduloivasti tai hylkimistä vastustavan tehokkaan määrän; kuten T-soluille sytotoksisen määrän kaavan (I) mukaista yhdistettä yhdessä farmaseuttisesti hyväksyttävän kantoaineen kanssa.

li 3 85856 Tässä keksinnössä käytetään uusia välituotteita, kuten seuraavia: (1) yhdiste, jonka kaava (II) on

O

JL / n°2 HN * nh2-^^n'^sV^ CN (II)

Ar jossa Ar tarkoittaa samaa kuin edellä; ja (2) yhdiste, jonka kaava (III) on

HrV°2 ( m.

COOCH« NH, N 3

2 J^CN

Air jossa Ar tarkoittaa samaa kuin edellä.

Tämän keksinnön mukaiset uudet menetelmät ovat seuraavat: (A) Menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistami- : seksi käsittää edellä määritellyn kaavan (II) mukaisen yhdisteen käsittelemisen Na2S204:llä, jonka jälkeen emäksisellä liuoksella, kuten 1 N NaOH:lla kuumuuden läs-*:· näollessa, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste.

Lopuksi kaavan (I) mukaista yhdistettä voidaan käyttää valmistettaessa sen farmaseuttisesti hyväksyttävää happo-additio- tai emässuolaa.

(B) Menetelmä edellä määritellyn kaavan (II) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi käsittää edellä määritellyn kaa- 4 85856 van (III) mukaisen yhdisteen käsittelemisen (1) emäksellä, kuten 1 N NaOH-liuoksella suunnilleen huoneen lämpötilassa, ja sen jälkeen (2) hapolla, kuten kloorivetyha-polla kaavan (II) mukaisen yhdisteen saamiseksi.

(C) Menetelmässä, jolla edellä määritellyn kaavan (III) mukainen yhdiste valmistetaan, saatetaan yhdiste, jonka kaava (IV) on hnVN°2 reagoimaan kaavan (V) mukaisen yhdisteen kanssa

CN

/ /-CH (V) / \

Ar 'COOCH3 jossa Ar tarkoittaa samaa kuin edellä; natriumhydridin läsnäollessa dimetyyliformamidissa tai kalium-tert.-bu-toksidin läsnäollessa DMSO:n tai vastaavissa olosuhteis-’ sa.

Tietyissä olosuhteissa voi olla tarpeellista suojata edellä esitetyssä menetelmässä välituotteen N tai O sopivilla suojaryhmillä, jotka ovat tunnettuja. Tällaisten sopivien happi- ja typpisuojaryhmien liittäminen ja pois-taminen on hyvin tunnettua orgaanisessa kemiassa; katso esimerkiksi julkaisuja (1) "Protective Groups in Organic Chemistry", J.F.W. McOmie, ed., (New York, 1973), sivut 43ff, 95ff; (2) J.F.W. McOmie, Advances in Organic Chemistry. Vol. 3, 191-281 (1963); (3) R.A. Borssonas, : Advances in Organic Chemistry. Vol. 3, 159-190 (1963); ja (4) J.F.W. McOmie, Chem. & Ind.. 603 (1979).

I; . 85856

Esimerkkejä sopivista happisuojaryhmistä ovat bentsyyli, tert.-butyylidimetyylisilyyli, metyyli, isopropyyli, etyyli, tert.-butyyli, etoksietyyli ja vastaavat. Ryhmän N-H sisältävän osan suojaaminen on tarpeellista eräissä tässä kuvatuissa menetelmissä tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi. Sopivia typpisuojaryhmiä ovat bentsyyli, trifenyylimetyyli, trialkyylisilyyli, trikloorietyylikarbamaatti, trikloorietoksikarbonyyli, vinyylioksikarbamaatti ja vastaavat.

Tietyissä olosuhteissa on tarpeellista suojata kaksi eri happiatomia erilaisilla suojaryhmillä siten, että toinen voidaan selektiivisesti poistaa, toisen jäädessä paikoilleen. Tällä tavalla käytetään bentsyyli- ja tert.-butyy-lidimetyylisilyyliryhmiä; toinen on poistettavissa toisen läsnäollessa, bentsyyli poistetaan katalyyttisesti hyd-raamalla ja tert.-butyylidimetyylisilyyli poistetaan reaktiolla esimerkiksi tetra-n-butyyliammoniumfluoridin kanssa.

Tässä kuvatussa menetelmässä tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi suojaryhmien asettamat vaatimukset orgaanisen alan ammattimies yleensä hyvin tunnis-·; taa ja niin ollen sopivien suojaryhmien käyttö ehdotto- '-· masti kuuluu tässä esitettyihin menetelmiin, vaikka sitä ei nimenomaisesti kuvata.

Tässä kuvattujen reaktioiden tuotteet eristetään tavanomaisin keinoin, kuten uuttamalla, tislaamalla, kroma-tografoimalla ja vastaavilla tavoilla.

Edellä kuvatun kaavan (I) mukaisten yhdisteiden suolat valmistetaan saattamalla sopiva emäs reagoimaan kaavan (I) mukaisten happoyhdisteiden stökiömetrisen ekvivalentin kanssa, yhdisteen farmakologisesti hyväksyttävien suolojen saamiseksi.

6 85856 Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet voivat olla myös hyd-ratoiduissa tai solvatoiduissa muodoissa.

Uudet menetelmät vaiheissa alkaen (C):stä ja jatkuen vaiheiden (B) ja (A) kautta, voidaan yhdistää yksivaihe-menetelmäksi. Kuitenkin on edullista erottaa kaavan (III) mukainen tuote ja kaavan (II) mukainen tuote ennen kuin jatketaan menetelmän seuraavassa vaiheessa.

Tämän keksinnön mukaiset, kaavan (I) mukaiset yhdisteet ja kaavojen (II) ja (III) mukaiset välituotteet ovat tau-tomeerisissa muodoissa puriineina tai guaniineina kuten jäljempänä kuvataan. Molemmat muodot kuuluvat osana keksintöön ja ne on erottelemattomasti kuvattu selityksessä.

OH

—-XÄ- k'

Guaniini Puriini .·. 1 1

O OH

»V _ -- ΝΗ2Α.^γεΝ ^- Ν„2ΑΝ^γΟΝ

Ar ^ Kt

• . II II

I: 7 85856

S 0H

BN^\^N°2 -^ Ν^γ^Ν02

^ nh,AA/CN

I COOCH3 ΓΝγΟΟΟΗ-, AC Ar 3

III III

Käsite "1-4 hiiliatomia sisältävä alkyyli" tarkoittaa suoraketjuista tai haarautunutta, korkeintaan 4 hiiliatomia sisältävää hiilivetyketjua, kuten esimerkiksi metyyliä, etyyliä, propyyliä, isopropyyliä, butyyliä, isobu-tyyliä, sek.-butyyliä tai tert.-butyyliä, "1-4 hiiliatomia sisältävä alkoksi" on metoksi, etoksi, propoksi, bu-toksi ja näiden isomeerit. Halogeeni on fluori, kloori, bromi tai jodi.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet ovat käyttökelpoisia sekä vapaan emäksen muodossa, emässuolojen muodossa, milloin ne ovat mahdollisia, ja happoadditiosuolojen muodossa. Nämä kolme muotoa kuuluvat keksinnön piiriin. Käytännössä suolamuodon käyttö vastaa emäsmuodon käyttöä. Sopivia i farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja, jotka kuuluvat keksinnön piiriin, ovat sellaiset, jotka johdetaan mine-raalihapoista, kuten kloorivetyhaposta ja rikkihaposta ja orgaanisista hapoista, kuten metaanisulfonihaposta, bent-seenisulfonihaposta, p-tolueenisulfonihaposta, isotieeni-haposta ja vastaavista, jolloin saadaan vastaavasti hyd-rokloridi, sulfaatti, metaanisulfonaatti, bentseenisulfo-naatti, p-tolueenisulfonaatti ja vastaavat suolat, tai sellaiset suolat, jotka johdetaan emäksistä, kuten sopivista orgaanisista ja epäorgaanisista emäksistä. Esimerkkejä sopivista epäorgaanisista emäksistä, jotka soveltuvat tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden suolojen muodostukseen, ovat ammonium-, natrium-, litium-, kalium-, kalsium-, magnesium-, aluminium-, sinkkihydroksidit ja vastaavat.

8 85856

Suolat voidaan muodostaa myös sopivien orgaanisten emästen kanssa. Emäksiä, jotka ovat sopivia farmaseuttisesti hyväksyttävien emäsadditiosuolojen valmistukseen tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden kanssa, ovat orgaanisia emäksiä, jotka ovat myrkyttömiä ja tarpeeksi vahvoja tällaisten suolojen muodostamiseksi. Nämä orgaaniset emäkset muodostavat luokan, jonka rajat alan ammattimies helposti tunnistaa. Pelkästään kuvaavassa tarkoituksessa luokan voidaan sanoa sisältävän mono-, di- ja trialkyyliamiine-ja, kuten metyyliamiinin, dimetyliamiinin ja trietyylia-miinin; mono-, di- tai trihydroksialkyyliamiineja, kuten mono-, di- ja trietanoliamiinin, aminohappoja, kuten ar-giniinin ja lysiinin; guanidiinin; N-metyyliglukamiinin; L-glutamiinin; N-metyylipiperatsiinin; morfoliinin; ety-leenidiamiinin; N-bentsyylifenetyyliamiinin; tri(hydrok-simetyyli)aminometaanin ja vastaavia. (Katso esimerkiksi "Pharmaceutical Salts", J.Pharm.Sci. (1977) 66 (1):1-19.)

Mainittujen emäksisten yhdisteiden happoadditiosuolat valmistetaan joko liuottamalla yhdisteen (I) vapaa emäs vesipitoiseen tai vesipitoiseen, alkoholiseen liuokseen tai muihin sopiviin liuottimiin, jotka sisältävät sopivan hapon tai emäksen ja suola eristetään haihduttamalla liuos, tai yhdisteen (I) vapaa emäs saatetaan reagoimaan hapon kanssa, sekä kaavan (I) mukainen yhdiste, joka sisältää happoryhmän, saatetaan reagoimaan emäksen kanssa siten, että reaktiot ovat orgaanisessa liuottimessa, jolloin suola erottuu suoraan tai se voidaan saada konsentroimalla liuos.

Tämän keksinnön edullinen suoritusmuoto on kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa Ar on joko fenyyli tai 2- tai 3-tienyyli. Edullisempi suoritusmuoto on 2,6-diamino-3,5-dihydro-7-(fenyylimetyyli)-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-oni, 2,6-diamino-3,5-dihydro-7-(2-tienyylimetyyli)-4H-Pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-oni tai 2,6-diamino-3,5-di- li 9 85856 hydro-7-(3-tienyylimetyyli)-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin- 4-oni. Kaikkein edullisin on näistä kolmesta viimeksi mainittu.

Kaavan (I) mukainen yhdiste voidaan yleensä valmistaa seuraavassa kaaviossa esitetyn menetelmän mukaisesti.

85856 1 o

Kaavio 1 HNO3 hnA^™2 (C) HN-*VN02 TJL. vT.VC .A.JL·» N^N^cl 2 * «2 ^C1 DM? R2 " j^coocH,

70°C CN

IV '

/-CH

A/ ^ 111

Ar coocb3 R2 on NH2 V 1) IN NaOH, huo- (B) neen länpötila 2) HC1.

1 ’

0 (A) O

Il 8 8i2S204 hn^^'N02

bitV^\ <—| T

JL J1 ff MB2 IN NaOH F x'^N^J'vI^CN

F-Sr^ Δ 2 T

J . Kt'

Ar ^ 1 11 : ^--N/vfi' : jossa Rg on happi

ja Rg on NH2 s' J

.,i>—· .xte-

Ar^ Ar' I 1 jossa R, on happi jossa R, on rikki ! 6 ° • " ja R on vety

O

il li 85856

Yleensä kaavojen (IV) ja (V) mukaiset lähtöaineet ovat joko kaupallisesti saatavissa tai niitä voidaan valmistaa tunnetuilla menetelmillä. Esimerkiksi kaavan (IV) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa menetelmällä, joka on kuvattu julkaisussa Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry Voi. 1 (1973) sivu 94, ja kaavan (V) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa menetelmillä, jotka ovat analogiset US-patentissa nro 4,279,903 kuvattujen ja tähän viitteenä liitettyjen menetelmien kanssa.

Edelleen edellä esitetyssä menetelmässä (C) kaavojen (V) ja (IV) mukaisten yhdisteiden reaktio-olosuhteissa natriumhydridi-öljysuspensio lisätään tipoittain liuokseen, jossa on kaavan (V) mukainen yhdiste liuottimessa, kuten dimetyyliformamidissa (DMF), jonka jälkeen lisätään edelleen kaavan (IV) mukaisen yhdisteen liuos myös liuottimessa, kuten DMF:ssä kuivassa typpiatmosfäärissä. Muodostunutta reaktioseosta kuumennetaan lämpötilassa 60°C -90eC, reaktioajan ollessa 30 minuutista kahteen tuntiin, jonka jälkeen hapotetaan 1-6 N HCltllä pH-arvoon noin 3 tai 4. Menetelmän (C) kondensaatio voidaan suorittaa myös liuottimessa, kuten DMSO:ssa ja tert.-butoksidin läsnäollessa.

Menetelmän (B) olosuhteet menetelmässä (C) saadun tuotteen, jolla on edellä määritelty kaava (III), käsittelemiseksi sisältävät ensin yhdisteen liuoksen käsittelemisen esimerkiksi 1 N NaOHrlla suunnilleen huoneen lämpötilassa, jonka jälkeen hapotetaan, esimerkiksi 4 N HCl:llä kaavan (II) mukaisen tuotteen saostamiseksi.

Menetelmässä (A) kaavan (II) mukaisen yhdisteen liuos 1 N NaOHissa käsitellään natriumditioniitilla lämpötilan ollessa 70°C - 95eC ja mieluimmin 90°C, reaktioaika on 10 ; minuutista 60 minuuttiin, mieluimmin 25-45 minuuttia, jon- ka jälkeen hapotetaan pH-arvoon noin 3 tai 4, kaavan (I) mukaisen tuotteen saamiseksi.

i2 85856 Tämän keksinnön mukaisilla yhdisteillä, joilla on kaava (I), on todettu olevan merkittävä entsyymi-inhibitioak-tiivisuus ja sytotoksinen aktiivisuus. Puriini-nukleosi-di-fosforylaasi (PNP-4-)-entsyymikokeessa saavutetaan IC50-arvo tämän keksinnön valituilla yhdisteillä annoksella, joka on noin 0,9-3,18 mikromoolia. Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden PNP-4-aktiivisuus mitataan radiokemi-allisesti mittaamalla [^C]hypoksantiinin muodostuminen [ 14C] inosiinista [Biomedicine, .33., 39 ) 1980)] käyttäen ihmisen erytrosyyttejä entsyymilähteenä. Puriini-nukleo-sidi-fosforylaasi(HPLC)-entsyymin in vivo-inhibitio -koetta käytetään olennaisesti kuten se esitetään julkaisussa the Annals of New York Academy of Sciences, Volume 451, sivu 313 (1985) joka koe edelleen kuvaa tämän keksinnön mukaisen kaavan (I) mukaisten yhdisteiden aktiivisuutta. Samojen yhdisteiden havaittiin myös standardi-testillä (HTBA-1) [Science, 214, 1137 (1981)] olevan selektiivisesti sytotoksisia T-soluille 2'-deoksiguanosii-nin läsnäollessa samoissa konsentraatiorajoissa ja myrkyttömiä B-soluille saman määrän 2/-deoksiguanosiinia läsnäollessa, osoittaen tässä kuvattujen, kaavan (I) mukaisten yhdisteiden käyttökelpoisuutta. Koska T-solujen poistaminen tai T-solujen moduloiminen on hyödyllistä an-toimmuunisairauksien hoidossa, nämä yhdisteet, niiden ollessa selektiivisesti sytotoksisia T-soluille, ovat sen vuoksi käyttökelpoisia näiden sairauksien hoidossa.

8-aminoguanosiinin, joka on tunnettu PNP-inhibiittori, on osoitettu olevan tehokas estäen ihosiirrännäisen hylkimisreaktion koirilla [J.B. Benear, et ai., Transplantation, 1986, 41:274]. Kliinisesti on osoitettu, että T-solujen moduloiminen ja/tai poistaminen rintatiehyt kanavoinnilla, lymfafereesilla tai totaalisella lymfoidisä-teilytyksellä, tuotti tuloksena osittaisen tai täydellisen helpotuksen nivelreumasta potilailla, jotka olivat täysin vastaanottamattomia muille terapiamuodoille (A.

i3 85856

Tanay et al., Arthritis and Rheumatism. Voi. 30, No. 1, sivu 1 (1987). S. Strober, et al., Annual of Internal Medicine. V-102, No. 4, 441-449 (1985); H.G. Nusslein, et al., Arthritis and Rheumatism. V-28, No. 11, 1205-1210 (1985); E. Brahn, et al., ibid, V-27, No. 5, 481-487 (1984), ja J. Karsh, et al., ibid, V-24, No. 7, 867-873 (1981)).

Syklosporiini A:11a, joka on T-solu-modulaattori, saatiin hyödyllisiä vaikutuksia hoidettaessa nuoruuden aikaista sokeritautia. (A. Ässän et al., The Lancet, January 12, s. 67 (1985)). Lisäksi syklosporiini A on esitetty vaih-toehtolääkkeksi kudossiirrännäisen hylkimisreaktion estämiseen (R.M. Merion, et al., New Ena. J. Med.. 1984), 148) .

Aivan äskettäin syklosporiini A:n on osoitettu olevan käyttökelpoinen hoidettaessa psoriasista. Edelleen on esitetty, että syklosporiiniterapian on havaittu huomattavasti vähentävän aktivoituneita T-soluja psoriasisvam-moissa.

Tämän vuoksi on syytä uskoa, että psoriasiksen menestyksellisen hoidon perustana on T-solu-aktiivisuuden modulaatio (Katso C.N. Ellis, et al., JAMA. V-256, No. 22, Dec. 12, 1986, sivut 3110-3116). Lopuksi syklosporiini A:n on osoitettu olevan hyödyllinen nivelreumassa. (M.E. Weinblatt, et al., Arthritis and Rheumatism. V-30, No. 1, sivut 11-17 (January, 1987); O. Forre, et al., Arthritis and Rheumatism. V-30, No. 1, sivut 88-92 (January, 1984); M. Dougados, et al., Arthritis and Rheumatism. Voi. 30, No. 1, sivut 83-87 (January, 1987).

Tyypillisiä esimerkkejä tästä keksinnöstä on esitetty • seuraavassa aktiivisuustaulukossa, edellä esitetyn aktii- visuuskeskustelun tueksi.

i4 858S6

Aktiivisuustaulukko

M H

Λ/N

HN |f \ R

A. JL/~*·

Bjir

At' HTBA-l PKP-4 HPLC-1 (mg/kg; PO)

Numero Re Ar* T-solu ♦ 10 μΜ ICS0(mM) 2'-d Gua; ICS0 μΜ Inosiini (μΜ) Guanosiini 3 NH2 C6Hs 1.6 1.7 2.93 0,54 (100) 6 NH2 2-Th 1,0 1.9 2,64 0,36 (100) 9 NH2 3-Th 0,9 2.3 2,62 0,26 (150) 13 NH2 2-met.-3,18 tai 3,09 oksifenyyli

Th = tiofeeni

In vivo-tutkimuksia, jotka perustuvat edellä mainittuihin tietoihin, voidaan käyttää määritettäessä aktiivisuutta tietyissä esitetyissä sairaustiloissa.

Koska T-solut näyttelevät keskeistä osaa immuunireaktiossa, keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää immuu-nisäätelyssä hylkimisreaktion estämiseksi kudossiirrän-näisillä tai hoidettaessa psoriasista ja hoidettaessa autoimmuunisairauksia, kuten nivelreumaa, systeemistä puna-"" hukkaa, tulehduksellista suolistosairautta, MS-tautia, '"· lihasheikkoutta, kihtiä tai kihtitulehdusta, nuoruuden aikaista sokeritautia, syöpää ja virussairauksia. Näin tämä keksintö koskee koostumuksia, jotka sisältävät kaavan (I) mukaisen yhdisteen ja joita käytetään hoidettaessa kudosiirrännäisen hylkimisreaktiota tai sairauksia, kuten psoriasista ihmisillä, tai autoimmuunisairautta i, is 85856 jolle on tunnusomaista epänormaali immuunireaktio imettäväisissä tai ihmisissä. Keksinnön tämän näkökohdan mukaisesti keksinnön mukaisten yhdisteiden ominaisuuksia käytetään hyväksi annostamalla lämminveriselle eläimelle tehokas määrä farmaseuttista koostumusta, joka sisältää ak-tiiviaineena ainakin noin 0,1 painoprosenttia, laskettuna koostumuksen kokonaispainosta, ainakin yhtä tällaista keksinnön mukaista yhdistettä.

EP-patentissa 145 207 ja EP-patenttihakemuksessa on kuvattu guaniinijohdannaisia, joilla on todettu samanlaista aktiivisuutta kuin tämän keksinnön mukaisilla pyrrolo-[3,2 -d]pyrimidinoneilla, jotka eroavat rengasrakenteeltaan em. tekniikan tason mukaisista yhdisteistä ollen 9-deatsagua-niineja.

Tämän keksinnön mukaisilla yhdisteillä on kuitenkin edullisempi liukoisuusprofiili kuin em. yhdisteillä, kuten nähdään seuraavasta taulukosta. Taulukossa on esitetty yhdisteiden liukoisuus veteen (mg/ml), joka on keksinnön mukaisilla yhdisteillä suurempi kuin tekniikan tason mu-Y; kaisilla yhdisteillä. Lisäksi taulukossa on annettu yhdis teiden log P -arvo, joka osoittaa yhdisteen tunnusluvun, jota kutsutaan jakaantumiskertoimeksi (partition coefficient). Tämän kertoimen merkitys yhdisteiden biologisen vaikutuksen mittana tunnustetaan yleisesti. (J. J. Zimmerman ja S. Feldman, Physical-Chemical Properties and Biological Activity, julkaisussa "Principles of Medicinal Chemistry", ed. William O. Foye, Lea & Febiger, Philadelphia, London, 1989). Artikkelin sivulla 9 on käsitelty jakaantu-miskertoimen merkitystä arvioitaessa yhdisteen biologista aktiivisuutta.

Jakaantumiskerroin P (joka ilmoitetaan logaritmiarvona log P) määritetään oktanoli-vesi-systeemissä suhteena C0/Cw, jossa CQ on lääkeaineen tasapainokonsentraatio ok- ie 85 856 tanolissa ja Cw on vastaava konsentraatio vesifaasissa. Yhdisteluokalla, johon keksinnön mukaiset yhdisteet kuuluvat, on havaittu lisääntyvää aktiivisuutta jakaantumis-kertoimen arvon kasvaessa, so. silloin kun lääkeaine lisääntyvässä määrin lokalisoituu lipidifaasiin.

Taulukko EP-patenttihakemuksen 178 178 mukaiset yhdisteet V\ λϊ λ”’ h m ^n/ ___ pH:ssa 7,4_________

Ar Sul.p. log P liukoisuus rng/ml C6H5 >300° (B) 0,58 <0,1 .... 2-Th 223-226° 0,19 0,034 (Hei) •'X 3-Th 275-278° 0,48 <0,1 (HC1) li 17 858S6 EP-patentin 0145207 mukainen yhdiste

O

A^n m\ i / nh2 ~2'23 0,27 H/'

OH

sul.p. >200° (HC1) Tämän keksinnön mukaiset yhdisteet

Vv HN , \ ανΛ/ΝΗ2 h2n n ·;·; hr' _pH : s s a 7,4_ * Ar Sul.p. log P liukoisuus mg/ml C6H5 >250° 0,67 0,60 (HCl) 2- Th 220-225° 1,01 0,30 :T: (HCl) 3- Th 205-215° 1,07 0,90 (HC1) 18 85856 Tätä keksintöä kuvataan edelleen seuraavilla esimerkeillä: ÄTcooc, Φ

Esimerkki 1 2-amino-g-svaani-l. 6-dihvdro-5-nitro-or- (fenvvlimetvvli^ - 6-okso-4-pvrimidiinietikkahapon etvvliesteri

Liuos, jossa on etyyli-2-syaani-3-fenyylipropionaattia (JCS, 1944, 13) (6,0 g) DMFrssä (25 ml), lisätään tipoit- tain suspensioon, jossa on natriumhydridiä (1,2 g, 60%:inen suspensio öljyssä, pesty heksaanilla) MF:ssä (25 ml), kuivassa typpiatmosfäärissä. Reaktioseosta hämmennetään 15 minuuttia huoneen lämpötilassa, jonka jälkeen anioniin lisätään liuos, jossa on 2-amino-6-kloori- 5-nitro-4(3H)-pyrimidinonia (Synthetic Procedures in Nucleic Acid, -1, 1973, s. 94) (1,9 g, juuri kiteytettynä metanolista) DMF:ssä (50 ml). Reaktioseosta kuumennetaan 65eC:ssa 24 tuntia, jonka jälkeen hapotetaan 1 N HCl:llä pH-arvoon 3.

Suurin osa DMF:ää poistetaan haihduttamalla pyöröhaihdut-timessa tyhjössä. Jäännösöljy jaetaan etyyliasetaattiin (500 ml) ja veteen. Orgaaninen kerros kuivataan (Na 2S°4)' haihdutetaan kumimaiseksi, kiinteäksi aineeksi. Jäännös hierretään eetterin kanssa ja kerätään suodattamalla. Kuivataan tyhjössä, saadaan 2-amino-a-syaani-l,6-dihydro-··’ 5-nitro-a- (fenyylimetyyli) -6-okso-4-pyrimidiinietikka- hapon etyyliesteri osittain hydraattina (2,25 g, 62 %) .

Il 85856

Xv-

Βί" H

Esimerkki 2 2-amino-l.6-dihydro-5-nitro-6-okso-a-(fenvvlimetvvli)-4-pyrimidiiniasetonitriili

Liuosta, jossa on 2-amino-cr-syaani-l,6-dihydro-5-nitro-a-(fenyylimetyyli)-6-okso-4-pyrimidiinietikkahapon etyy-liesteri, joka edellä valmistettiin, (2,0 g) IN NaOH:ssa (100 ml), sekoitetaan huoneen lämpötilassa 1 tunti ja ha-potetaan 4 N HCltllä (30 ml).

Sakka kerätään suodattamalla ja kuivataan tyhjössä, saadaan 2-amino-l,6-dihydro-5-nitro-6-okso-a-(fenyylimetyyli) -4-pyrimidiiniasetonitriili (600 mg, 36 %).

S*

Esimerkki 3 2.6-diamino-3.5-dihvdro-7-(fenyvlimetvvli)-4H-pvrrolo-Γ3.2-dlpyrimidin-4-oni

Liuokseen, jossa on 2-amino-l,6-dihydro-5-nitro-6-okso-Qf-(fenyylimetyyli)-4-pyrimidiiniasetonitriiliä, joka edellä valmistettiin, (10,0 g) 1 N NaOH:ssa (600 ml), lisätään natrium-ditioniittia (35 g). Reaktioseosta kuumen- 20 85856 netaan 90°C:ssa 35 minuutin ajan ja se hapotetaan 4 N HCl:llä pH-arvoon 4 sen ollessa vielä kuuma. Reaktioseos jäähdytetään jäähauteesa ja sakka kerätään suodattamalla. Kuivataan P205:n päällä tyhjössä (4,0 g). Raaka (dekar-boksyloimaton) tuote liuotetaan 300 ml:aan kons. HCl:ää ja suodatetaan nopeasti lasisintterin läpi ennenkuin se kiteytyy. Muodostunutta suspensiota keitetään 5 minuuttia ja jäähdytetään. Tuote 2,6-diamino-3,5-dihydro-7-(fenyy-limetyyli)-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-oni kerätään suodattamalla (1,98 g, 23 %), sul.p. > 250°C (haj.).

H-tr n 2 COOCH,

Esimerkki 4 2-amino-a-svaani-l.6-dihvdro-5-nitro-6-okso-ot-(2-tienvv-limetvvlil-4-Pvrimidiinietikkahapon metvvliesteri

Natriumhydridi (4,5 g, 60%:inen suspensio öljyssä, pesty heksaanilla) suspendoidaan kuivaan DMF:ään (50 ml) kui-1 vassa typpiatmosfäärissä ja liuos, jossa on metyyli-2- syaani-3-(2-tienyyli)propionaattia (US-patentti nro 4,279,903) (22,0 g) kuivassa DMF:ssä (50 ml), lisätään tipoittain, jolloin alkaa muodostua tumman sininen liuos. Liuos, jossa on juuri uudelleen kiteytettyä 2-amino-6-kloori-5-nitro-4(3H)-pyrimidinonia (8,57 g) DMFrssä (75 ml), lisätään yhtenä annoksena. Reaktioseosta kuumennetaan 60°C:ssa yön yli ja jäähdytetään, jonka jälkeen hapotetaan 1 N HClillä pH-arvoon 5. Kaadetaan 1000 ml:aan etyyliasetaattia ja uutetaan vedellä (4 x 300 ml). Orgaaninen kerros haihdutetaan melkein kuiviin ja jäännös suspendoidaan eetteriin ja kerätään suodattamalla. Raakatuo- l· 21 85856 tetta pestään heksaanilla, kunnes pesuvesi ei enää ole vihreää. Kiinteä aine kuivataan tyhjössä, saadaan 2-amino-a-syaani-l, 6-dihydro-5-nitro-6-okso-or- (2-tie-nyylimetyyli)-4-pyrimidiinietikkahapon metyyliesteri.

Jx>

Lp

Esimerkki 5 2-aroino-l.6-dihydro-5-nitro-6-okso-a-(2-tienvvlimetyvli)- 4-pvrimidiiniasetonitriili

Liuosta, jossa on 2-amino-a-syaani-l,6-dihydro-5-nitro- 6-okso-a-(2-tienyylimetyyli)-4-pyrimidiinietikkahapon etyyliesteriä, joka edellä valmistettiin, (5,0 g) IN NaOH:ssa (200 ml), sekoitetaan huoneen lämpötilassa 90 minuutin ajan. Reaktioseos hapotetaan 4 N HCl:llä pH-arvoon 1 ja sekoitetaan 5 minuuttia. Reaktioseos neutraloidaan (pH 7) IN NaOH:lla ja tuote 2-amino-l,6-dihydro-. . 5-nitro-6-okso-a-(2-tienyylimetyyli)-4-pyrimidiiniaseto- ; nitriili (4,1 g, 98 %) kerätään suodattamalla.

22 85856 λΙ)·”· U>

Esimerkki 6 2.6-diamino-3.5-dihvdro-7-(2-tienvvlimetvvlil-4H-pvrrolo-Γ 3.2-dlpyrimidin-4-oni

Liuokseen, jossa on 2-amino-l,6-dihydro-5-nitro-6-okso-a-(2-tienyylimetyyli)-4-pyrimidiiniasetonitriili, joka edellä valmistettiin, (4,0 g) 1 N NaOHissa (250 ml), lisätään natriumditioniittia (17 g) ja reaktioseosta kuumennetaan 90°C:ssa 20 minuuttia. Reaktioseos hapotetaan 4 N HCl:llä pH-arvoon 2, sen ollessa vielä kuuma ja suodatetaan, jonka jälkeen jäähdytetään ja neutraloidaan 1 N NaOHilla. Muodostunut sakka kerätään suodattamalla ja kuivataan. Raakatuote lisätään kons. HCl:n sekoitettuun liuokseen (150 ml) ja hydrokloridisuola kerätään suodattamalla. Suola liuotetaan vesipitoiseen NaOH:hon ja saos-tetaan uudestaan 1 N HCl:llä. Uudelleenkiteyttäminen 2 N HCl:stä tuotti 2,6-diamino-3,5-dihydro-7-(2-tienyylime-tyyli)-4H-pyrrolo[3,2-d]-pyrimidin-4-onin analyyttisen hydrokloridisuolan monohydraatin (0,82 g, 19 %), sul.p. 220-225°C (haj.).

li 4 » « o 85856

RtÄr^"0* aL» Δ ^COOCH3

Esimerkki 7 2-amino-a-svaani-l.6-dihvdro-5-nitro-6-okso-a-(3-tienyv-limetvvlil-4-pvrimidiinietikkahapon etvvliesteri

Natriumhydridi (5,7 g; 60 %:inen suspensio öljyssä, pesty heksaanilla) suspendoidaan kuivaan DMF:ään (50 ml) kuivassa typpiatmosfäärissä ja liuos, jossa on metyyli-2-syaani-3-(3-tienyyli)propionaattia (US-patentti nro 4,279,903) (28,0 g) DMF:ssä (50 ml), lisätään tipoittain.

Lisätään 2-amino-6-kloori-5-nitro-4(3H)-pyrimidinonia (9/1 9# juuri uudelleenkiteytettyä) DMF:ssä (50 ml). Re-aktioseosta kuumennetaan 70°C:ssa yön yli, jäähdytetään, jonka jälkeen hapotetaan 1 N HClrllä pH-arvoon 4, samalla jäähauteella jäähdyttäen. Reaktioseos laimennetaan 1000 ml:ksi kylmällä vedellä ja muodostunut sakka kerätään suodattamalla. Se huuhdotaan heksaani/etyyliasetaatilla ja kuivataan, saadaan 2-amino-a-syaani-l,6-dihydro-5-nitro-6-okso-a-(3-tienyylimetyyli)-4-pyrimidiinietikka-hapon etyyliesteri (Ar = 3-tienyyli) (8,8 g, 52 %).

24 85856 o 11 mo7 ΗΡΐΓ

L. 1| CH

Esimerkki 8 2-amino-l.6-dihvdro-5-nitro-6-okso-g-(3-tienvvlimetyylil- 4-pvrimidiiniasetonitriili

Liuosta, jossa on 2-amino-a-syaani-l,6-dihydro-5-nitro- 6-okso-a-(3-tienyylimetyyli)-4-pyrimidiinietikkahapon etyyliesteriä l N NaOHrssa (200 ml), sekoitetaan 2 tuntia huoneen lämpötilassa, jonka jälkeen hapotetaan pH-arvoon 1 lisäämällä tipoittain kons. HCltää. Muodostunutta suspensiota kuumennetaan (45°C) 2 minuutin ajan, jonka jälkeen jäähdytetään. Säädetään NH4OH:lla pH-arvoon 3. Kiinteä aine kerätään suodattamalla, pestään vedellä ja kuivataan tyhjössä, saadaan 2-amino-l,6-dihydro-5-nitro- 6-okso-a-(3-tienyylimetyyli)-4-pyrimidiiniasetonitriiliä (3,03 g).

I: 25 85856 τ>

Esimerkki 9 2.6-diamino-3.5-dihvdro-7-(3-tienyvlimetvvli)-4H-pyrrolo-r3.2-dTpvrimidin-4-oni

Liuokseen, jossa on 2-amino-l,6-dihydro-5-nitro-6-okso-a-(3-tienyylimetyyli)-4-pyrimidiiniasetonitriili, joka edellä valmistettiin (5,0 g) 1 N NaOHrssa (300 ml), lisätään natriumditioniittia (20 g). Reaktioseosta kuumennetaan 30 minuutin ajan 90°C:ssa, jonka jälkeen hapotetaan (pH 1) kons. HClrllä reaktioseoksen ollessa vielä kuuma. Reaktioseos jäähdytetään ja neutraloidaan ammoniumhydrok-sidillä. Muodostunut sakka kerätään suodattamalla, pestään kylmällä vedellä ja kuivataan tyhjössä. Raakatuote lisätään 100 ml:aan kons. HCl:ää pienissä annoksissa, samalla sekoittaen, ja hydrokloridisuola kerätään suodattamalla. Tuote kiteytetään uudestaan 1 N HCl:stä, saadaan 2,6-di-amino-3,5-dihydro-7-(3-tienyylimetyyli)-4H-pyrrolo[3,2- d]pyrimidin-4-oni monohydrokloridisuolana (2,35 g) sul.p.

> 185°C (haj.).

• * * 85856 26 o NO- XL·- B2" N >CCOoch3

Esimerkki 10 2-amino-a-svaani-at-(2-furanvvlimetvvli)-1.6-dihydro-5-nitro-6-okso-4-pvrimidiinietikkahapon etvvljesteri

Natriumhydridi (8,4 g; 60%:inen suspensio öljyssä, pesty heksaanilla) suspendoidaan kuivaan DMF:ään (100 ml) kuivassa typpiatmosfäärissä ja liuos, jossa on metyyli-2-syaani-3-(2-furanyyli)propionaattia (US-patentti nro 4,279,903) (37,6 g) DMF:ssä (100 ml), lisätään tipoit- tain. Kun lisäys on kokonaan suoritettu, muodostuu kirkas, punainen liuos. 2-amino-6-kloori-5-nitro-4(3H)-pyrimidinoni (kiteytetty uudestaan metanolista) (13,34 g) lisätään kinteänä aineena. Reaktioseosta kuumennetaan 100°C:ssa 1 tunti ja 65°C:ssa yön yli. Reaktioseos jäähdytetään jäähauteessa, hapotetaan 10%:isella vesipitoisella Helillä ja laimennetaan tarpeellisella määrällä vettä tuotteen 2-amino-a-syaani-a-(2-furanyylimetyyli)- 1,6-dihydro-5-nitro-6-okso-4-pyrimidiinietikkahapon etyy-liesterin saostamiseksi. Tuote kerätään suodattamalla ja huuhdotaan vedellä ja eetterillä (18,5 g).

tl 85856 27 aV-°™ k>

Esimerkki 11 2-amino-or- (2-furanvvlimetvvli) -1.6-dihydro-5-nitro-6-okso-4-pyrimidiiniasetonitriili

Liuosta, jossa on 2-amino-a-syaani-a-(2-furanyylimetyy-li)-1,6-dihydro-5-nitro-6-okso-4-pyrimidiinietikkahapon etyyliesteri (5,0 g) 1 N NaOHrssa (200 ml), sekoitetaan huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Reaktioseos hapotetaan (pH

1) lisäämällä tipoittain kons. HCl:ää ja sekoitetaan huoneen lämpötilassa 2 minuuttia. Sakka kerätään suodattamalla, pestään vedellä ja kuivataan, saadaan 2-amino-a-(2-furanyylimetyyli)-1,6-dihydro-5-nitro-6-okso-4-pyri-midiiniasetonitriili (3,02 g, 73 %).

0 U3

Esimerkki 12 2,6-diamino-3,5-dihydro-7- f 2-furanvvlimetvvli^ -4H-Pvrro-lor3.2-dlpyrimidin-4-oni ; Liuokseen, jossa on 2-amino-a-(2-furanyylimetyyli)-1,6-dihydro-5-nitro-6-okso-4-pyrimidiiniasetonitriili (4,0 g)

Claims (4)

28 85856

1. Menetelmä farmaseuttisesti aktiivisten, kaavan (I) mukaisten pyrrolo[3,2-d]pyrimidinonien valmistamiseksi OH I H Λ m "«2^7 ch2 ·-·: I -· Ar jossa kaavassa Ar on (i) fenyyli, joka on substituoimaton tai substituoitu 1-4 hiiliatomia sisältävällä alkoksilla (ii) 2- tai 3-tienyyli tai (iii) 2-furanyyli; tai niiden i. 29 85856 farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditio- tai emässuo-lojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että kaavan (II) mukainen yhdiste O A/N02 hn II Kz' jossa Ar tarkoittaa samaa kuin edellä; käsitellään Na2S204:llä ja sitten emäksisellä liuoksella kuumentaen, ja, haluttaessa, valmistetaan kaavan (I) mukaisen yhdisteen farmaseuttisesti hyväksyttävä happoadditio- tai emäs-suola.

1. NaOH:ssa (250 ml), lisätään natriumditioniittia (16 g) ja reaktioseosta kuumennetaan 90°C:ssa 30 minuuttia. Reaktioseos jäähdytetään jäähauteessa ja neutraloidaan 4 N HCl:llä. Muodostunut sakka kerätään suodattamalla ja puhdistetaan sarjalla happo/emäs-uudelleen-kiteytyksiä. Ensi tuote kiteytetään uudestaan 1 N NaOH:sta hapottamalla (pH 2) oksaalihapon kyllästetyllä liuoksella. Tämä NaOH/ oksaalihappo-uudelleenkiteytys toistetaan. Sen jälkeen yhdiste kiteytetään uudestaan 1 N NaOHrsta säätämällä 4 N HCl:llä pH-arvoon 11. Tuote 2,6-diamino-3,5-dihydro-7-(2-furanyylimetyyli)-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-oni kuivataan tyhjössä. Esimerkki 13 Seuraava yhdiste valmistetaan edellä esitetyn Esimerkin 3 menetelmän mukaisesti lähtemällä sopivista lähtöaineista: 2,6-diamino-3,5-dihydro-7-(2'-metoksifenyylimetyyli)-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-oni-monohydrokloridi, jossa kolme moolia vettä, sul.p. 215-240°C (haj.).

2. Förfarande enligt patentkravet 1, känneteck-n a t därav, att man framställer 2,6-diamino-3,5-dihydro- 7-(fenylmetyl)-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-on eller ett monohydrokloridsalt därav.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että valmistetaan 2,6-diamino-3,5-dihydro-7-(fenyylimetyyli)-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-oni tai sen monohydrokloridisuola.

3. Förfarande enligt patentkravet 1, känneteck-n a t därav, att man framställer 2,6-diamino-3,5-dihydro- 7-(2-tienylmetyl) -4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-on eller ett monohydrathydrokloridsalt därav.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että valmistetaan 2,6-diamino-3,5-dihydro-7-(2-tienyylimetyyli)-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-oni tai sen monohydraattihydrokloridisuola.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että valmistetaan 2,6-diamino-3,5-dihydro-7-(3-tienyylimetyyli)-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-oni tai sen monohydrokloridisuola. “" Patentkrav: ‘ : 1. Förfarande för framställning av farmaceutiskt aktiva pyrrolof3,2-d]pyrimidinoner med formeln (I) 30 85856 OH I H Ν<ί^γ^Ν\ I I /)—NH-, 2 (i) NH£ N CH2 Ar i vilken formel Ar är (i) fenyl, som är osubstituerad el-ler substituerad med alkoxi med 1-4 kolatomer, (ii) 2- el-ler 3-tienyl eller (iii) 2-furanyl; eller deras farmaceu-tiskt godtagbara syraadditions- eller bassalter, k ä n -netecknat därav, att en förening med formeln (II) 0 Il no2 HN i Jk- Jk ^ CN (H) Ar i vilken Ar betecknar detsamma som ovan, behandlas med Na2S204 och därefter med en basisk lösning genom att upp-hetta, och, om sh önskas, framställs ett farmaceutiskt godtagbart syraadditions- eller bassalt av föreningen med formeln (I) .

4. Förfarande enligt patentkravet 1, känneteck-n a t därav, att man framställer 2,6-diamino-3,5-dihydro- il 31 85856 7-(3-tienylmetyl)-4H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-on eller ett monohydrokloridsalt därav.