FI85025B - Foerfarande foer framstaellning av nya -laktamantibiotika. - Google Patents

Description

i 1 85025

Menetelmä uusien β-laktaamiantibioottien valmistamiseksi

Keksintö koskee menetelmää uusien B-laktaamiantl-bioottien valmistamiseksi. Näitä yhdisteitä käytetään 5 lääkeaineissa, erityisesti oraalsiesti vaikuttavina antibiootteina .

Ennestään tunnetaan erilaisia a-aminoasyyli-kefa-losporiineja samoin kuin penisilliiniantibiootteja, esim. kefaleksiini (GB-patenttijulkaisu 1 174 335), kefakloori 10 (DE-hakemusjulkaisut 2 408 698 ja 3 728 578), ampisillii-ni (GB-patenttijulkaisu 938 321) ja amoksisilliini (GB-patentti julkaisu 1 339 605).

Keksinnön kohteena on menetelmä yleisen kaavan (I) mukaisten B-laktaamiyhdisteiden valmistamiseksi, 15

\ H

\ S

CH-CONH —^ NH U) I CT [ R5 20 R2 C00R4 jossa R5 merkitsee vetyä, halogeenia tai suoraketjuista, haarautunutta tai syklistä, tyydyttynyttä tai tyydyttymätön-25 tä alkyyliä, jossa on enintään kuusi C-atomia, R1 merkitsee ryhmää, jolla on kaava : „ «x: äj . «>

H

2 85025 joissa R6 ja R7 ovat samanlaisia tai erilaisia ja merkitsevät vetyä, C6-C10-aryyliä, aminoryhmää tai hydroksiryhmää, Y merkitsee happea tai ryhmää -NH, 5 Z merkitsee happea, rikkiä tai ryhmää -NH, r1°

A merkitsee ryhmää il ^1 . T

XJ Apu R10 ja R11 ovat samanlaisia tai erilaisia ja merkitsevät 10 vetyä tai alkyyliä, jossa on enintään 12 C-atomia, R2 merkitsee vetyä tai β-laktaamikemiassa tavanomaista aminosuojaryhmää, ja R4 tarkoittaa vetyä tai B-laktaami-kemiassa tavanomaista karboksisuojaryhmää.

Jos R2 tarkoittaa aminosuojaryhmää, niin se tar-15 koittaa sellaisia, jotka ovat β-laktaamikemiassa tavallisia, kuten esim. tert-butoksikarbonyyliä (Boc), karbo-bentsoksia (Cbz), trityyliä (Trt), bentsyyliä (Bzl), bentsyylioksikarbonyyliä (Z), formyyliä, klooriasetyyliä tai 2-metoksikarbonyyli-1-metyylivinyyliä.

20 Jos R4 tarkoittaa karboksisuojaryhmää, niin se tarkoittaa edullisesti helposti lohkaistavissa olevia suojaryhmiä, kuten esim. tert-butyyliä, dekyyliä, 2,2,2-trikloorietyyliä, bentsyyliä, 4-metoksibentsyyliä, 2-nit-robentsyyliä, trifenyylimetyyliä, difenyylimetyyliä, ase-25 toksimetyyliä, pivaloyylioksimetyyliä, allyyliä tai tri- metyylisilyyliä.

Kaavan I mukaiset yhdisteet voivat olla vapaina happoina, estereinä, sisäisinä suoloina tai ei-myrkylli-sinä farmaseuttisesti hyväksyttävinä happamien karboksyy-30 liryhmien suoloina, kuten natrium-, kalium-, magnesium-, kalsium-, alumiini- ja ammoniumsuoloina ja eri-myrkylli-sinä substituoituina ammoniumsuoloina, jotka on muodostettu sellaisten amiinien kanssa, joita ovat esim. di-, tri-alempi alkyyliamiinit, prokaiini, dibentsyyliamiini, 35 N,N'-dibentsyylietyleenidiamiini, N-bentsyyli-B-fenyyli- 3 85025 etyyliamiini, N-metyyli- ja N-etyylimorfOliini, 1-efeeni-amiini, dehydroabietyyliamiini, N, N-bis-dehydroabietyyli-etyleenidiamiini, N-alempi-alkyylipiperidiini ja muut amiinit, joita voidaan käyttää penisilliinien ja kefalo-5 sporiinien suolojen muodostukseen.

Asymmetrisen hiiliatomin läsnäolon vuoksi sulkevat kavan I mukaiset uudet β-laktaamiantibiootit, piiriinsä D-, L- ja D,L-muodot. Edullisia ovat keksinnön mukaisten yhdisteiden, joilla on yleinen kaava I, D-muodot.

10 Bakteriaalisten infektiosairausten käsittelyyn voidaan käyttää keksinnön mukaisten yhdisteiden sekä di-astereomeeriseoksia ett myös D-muotoa ja L-muotoa.

Yleisen kaavan I mukaisia yhdisteitä saadaan siten, että yhdisteet, joilla on yleinen kaava Ha 15

H

1 I

R - C* - COOH (Ha)

N

/ \ 2 H R

20 jossa R1 tarkoittaa samaa kuin edellä on esitetty ja jossa R2 tarkoittaa aminosuojaryhmää, karboksyyliryhmän aktivoinnin jälkeen, joka suoritetaan 25 muuttamalla seka-anhydridiksi, esimerkiksi pivaloyyliklo- ridin, kloorimuurahaishappoetyyli- tai isobutyyliesterin avulla, metaanisulfonihappokloridin avulla suoritetun me-sylaatiksi muuttamisen jälkeen tai aktivoiduksi esteriksi muuttamisen jälkeen, joka suoritetaan esim. 1-hydroksi-30 bentstriatsolin ja disykloheksyylikarbodi-imidin avulla,

saatetaan reagoimaan yhdisteiden kanssa, joilla on yleinen kaava III

(III) λ Γ' r> ts r

4 Ο ϋ U L O

H

H9N S

2\_^ \ COOR4 jossa symboleilla R4 ja R5 on edellä mainitut merkitykset, minkä jälkeen suojaryhmät mahdollisesti lohkaistaan 10 pois ja valmistetaan toivotut suolat tai toivotuista suoloista vapaat hapot.

Kaavan II mukaisten aminohappojen kytkemiseen kaavan III mukaisin β-laktaameihin voidaan käyttää lukuisia kefalosporiini- tai penisilliinikemiasta tunnettuja mene-15 telmiä.

On osoittautunut edulliseksi aktivoida yleisen kaavan II mukaiset aminohapot ja sen jälkeen kytkeä yleisen kaavan III mukaisten β-laktaamien kanssa, jotka saatettiin liuokseen amiinin kanssa muodostettuina suoloina. 20 Erityisen edullista on aktivointi pivaliinihappokloridin (IVb) tai kaavan IVa mukaisten sulfonihappojohdannaisten kanssa anhydrideiksi, joilla on kaavat Va ja Vb

H HO

: ; 25 R1 - C* - COOH T-S0--R16 R1-C*-C-0-C0o-R16 I z j z /Nx 2 -* /N\ 2 H RZ iva H R^ II va ’ 30

CH0 O

I 3 II

CH0 - C - C - Cl d i CH^ H O CHq J i I | I 3 tai ---—-» R -C*-C-0-C-C - CH0 I I 3 . 35 IVb N CHo

V

Vb 5 85025 joissa R1 tarkoittaa samaa kuin edellä on esitetty, R2 tarkoittaa aminosuojaryhmää, T tarkoittaa tähdettä R16-S02-0 tai halogeenia ja 5 R16 tarkoittaa alkyyliä (Ca-C10), joka mahdollisesti on substituoitu fluorilla, kloorilla, syanolla, fenyylillä, C1-C4-alkyylillä, C^-C^-alkoksilla tai C^-C^-alkyylitiolla tai mahdollisesti fluorilla, kloorilla, bromilla, syanolla, Cj-C^-alkyylillä, Ci-C^-alkoksilla, C1-C4-alkyylitiol-10 la, C1-C4-alkyylikarbonyylillä, nitrolla, trifluorimetyy- lillä tai fenyylillä substituoitua fenyyliä.

Jos R16 on substituoitu, on läsnä edullisesti 1-3 substituenttia, edullisesti mainitut substituentit.

R16 tarkoittaa aivan erityisen edullisesti metyy-15 li- tai p-tolyylitähdettä.

Kaavojen Va ja Vb mukaisia seka-anhydridejä valmistetaan siten, että kaavan II mukaisia happoja ja 1 - 1,4 ekvivalenttia amiinia liuotetaan liuottimeen ja annetaan reagoida 1-1,2 ekvivalentin kanssa kaavan IVa mu-20 kaista sulfonihappojohdannaista tai 1-1,2 ekvivalentin kanssa kaavan iVb mukaista pivaliinihappokloridia.

Liuottimiksi soveltuvat kaikki liuottimet, jotka ovat stabiileja reaktio-olosuhteissa, kuten esim. dietyy-lieetteri, tetrahydrofuraani, asetonitriili, asetoni, me-25 tyleenikloridi, kloroformi tai dimetyyliformamidi.

Amiineiksi soveltuvat tertiaariset amiinit, kuten esim. trietyyliamiini, etyylidi-isopropyyliamiini tai tributyyliamiini, mutta myöskin steerisesti estyneet sekundaariset amiinit, kuten esim. di-isopropyyliemiini.

.. 30 Reaktiot voidaan suorittaa lämpötiloissa, jotka ovat -80°C:n ja huoneen lämpötilan välillä, edullisesti välillä -60 - 0°C. Aktivointi suoritetaan edullisesti Cl-S02-CH3:n avulla dimetyyliformamidissa välillä -40 --60°C 0,2 - 24 tunnin ajan, edullisesti 0,5-5 tunnin 35 ajan.

6 85025

Kaavan III mukaisten yhdisteiden liuottamiseen käytetään kaavan V mukaisten yhdisteiden valmistuksen yhteydessä mainittuja liuottimia samoin kuin emäksenä siinä yhteydessä mainittuja amiineja.

5 Erityisen edullista on myös yleisen kaavan II mu kaisten happojen aktivointi muuttamalla ne aktivoiduksi esteriksi esimerkiksi N-hydroksisukkinimidin ja disyklo-heksyylikarbodi-imidin tai 1-hydroksibentstriatsolin ja disykloheksyylikarbodi-imidin avulla.

10 Liuottimiksi soveltuvat kaikki liuottimet, jotka soveltuvat myös kaavan V mukaisten anhydridien valmistukseen.

Reaktiot voidaan suorittaa lämpötiloissa, jotka ovat välillä -30 - +100°C. Aktivointi suoritetaan edulli- 15 sesti 1-hydroksibentstriatsolin ja disykloheksyylikarbodi-imidin avulla dimetyyliformamidissa huoneen lämpötilassa 2-6 tunnin ajan, jonka jälkeen saostunut disyklo-heksyylikarbamidi erotetaan imusuodattimella ja reagoite-taan kaavan III mukaisen yhdisteen kanssa sen amiinisuo- 20 lan liuoksen muodossa 2-24 tunnin ajan. Kaavan III mukaisten yhdisteiden liuottamiseen voidaan käyttää kaavan V mukaisten yhdisteiden valmistuksen yhteydessä mainittuja liuottimia samoin kuin emäksenä siinä yhteydessä mainittuja amiineja.

25 Kirjallisuutta aminon ja karboksyylin suojausta varten ja karboksin aktivoimiseksi: M. Bodanszky, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, 1984.

E. Gross, J. Meienhofer, The Peptides Voi. 2, Academic Press, 1980.

30 Keksinnön mukaisten yhdisteiden, joilla on kaava I, stereokemiallisesti yhtenäisiä D- tai L-muotoja saadaan siten, että diastereomeeriseokset erotetaan kompo-nenteikseen toiminimien Merck, DuPont tai Whatman HPLC-pylväitä käyttäen.

35 Toisaalta saadaan puhdasta D- tai L-muotoa (edul lisesti D-muotoa) siten, että jo kaavan II mukaisen ra- 7 85025 seemisen aminohapon vaiheessa suoritetaan kemiallinen ra-semaatin lohkominen, esim. dehydroabietyyliamiinin, fe-nyylietyyliamiinin ja kamferisulfonihapon avulla tai ra-semaatin lohkominen esim. N-asetyyliaminohappojohdannai-5 sen kautta, esim. subtilisiinin, penisilliiniasylaasin tai sianmunuaisasylaasin avulla ja sen jälkeen reagoite-taan kaavan II mukaisten yhdisteiden stereokemiallisesti yhtenäiset D- tai L-muodot ilmoitetulla tavalla.

Yleisen kaavan II mukaiset yhdisteet ovat vain 10 osaksi tunnettuja. Kaavan II mukaisia yhdisteitä voidaan syntetisoida kirjallisuudesta tunnettujen menetelmien avulla, kuten esimerkiksi kaaviossa 1 on esitetty, jolloin kaavan VI mukaiset yndisteet esittävät tärkeimpiä avainyhdisteitä kaavan II mukaisille uusille aminohapoil-15 le.

8 85025

Kaavio 1

R1-C00R*7 VI

5

Pelkistys DIBAL (Vaihe 1)

V

r1-ch2-oh VII

Hapetus MnC>2 (Vaihe 2) 10 i

Rl-CHO VIII

Hydantoiinin (NH^^COg (Vaihe 3)

muodostus NaCN

15

V

H O

HN NH 1Y

20 Ύ o

Hydrolyysi Ba<OH>2* NaOH . Li OH (vaihe 4) HBr. H2S04 25 φ * R1 - CH- COOH Hb

NH

2 30 Symbolilla R on edellä esitetty merkitys, 17 R tarkoittaa -C^-alkyyliä.

Esterien pelkistystä di-isobutyylialumiinihydridin (DIBAL) ja natrium-bis (2-metoksietoksi) alumiinihydridin (Red-Al) avulla alkoholeiksi (vaihe 1) on selostettu kir-35 jallisuudessa: E. Winterfeld, Synthesis 1975, 617; A.E.G. Miller et ai., J. Org. Chem. 24, 627 (1959).

9 85025

Primaaristen alkoholien hapettaminen mangaani(IV)-oksidin tai pyridiniumkloorikromaatin avulla aldehydeiksi (2) on kirjallisuudessa tunnettua: Methoden der Organischen Chemie, Houben-Weyl, osa 4/1 b; G. Piancatelli et ai., 5 Synthesis 1982, 245.

Kaavan Hb mukaisia uusia aminohappoja saadaan rea-goittamalla aldehydejä natriumsyanidin ja ammoniumkarbonaa-tin kanssa kirjallisuudesta tunnetun menetelmän mukaan /E. Ware, Chemical, Reviews 46, 403 (1950)] (vaihe 3) ja 10 sen jälkeen hydrolysoimalla 10-%:isen natronlipeän, 48-%:isen bromivetyhapon, bariumhydroksidi- tai litium-hydroksidiliuoksen avulla (vaihe 4).

Seuraavassa selostetaan esimerkin luontoisesti eräiden uusien aminohappojen II ja niiden esasteiden val- 1 7 15 mistusta, jolloin symboleilla R -R on edellä esitetyt merkitykset: 1) Kinolyyli-, isokinolyyli- ja kinoksalyyli-gly- siinit Lähtömateriaalia näiden bentsokondensoitujen rengas-20 järjestelmien synteesiä varten ovat substituoidut kinolii-ni-, isokinoliini- ja kinoksaliini-karboksyylihappojohdannaiset. Substituoituja kinoksaliinikarboksyylihappojohdannaisia valmistetaan esimerkiksi seuraavan synteesikaavion mukaan.

Kaavio 2 10 85025 \y=VcooR17 ho^-<>COOr17 s > y y h P\R7COCH2Br f N. / OCH-COOBut 10

HjN COOR17 h,/ 15 \ / \

\ / \ CN

o^CvR/ YN

t/ ^

20 L

m—COOR n/^X 17

R‘ HjN^-y>C00R

25 HjN

Kirjallisuutta: G.W.H. Cheesman et ai., Quinoxaline chemistry, Advances in Heterocyclic Chemistry, Voi. 22. 367, Academic Press (1978).

2) 1,4-bentsodioksinyyli-glysiinit 30 Substituoitujen 1,4-bentsodioksinyyli-glysiinien synteesiä varten käytetään lähtöaineena 3,4-dihydroksi-bentsoehappojohdannaisia. Uusia 1,4-bentsodioksiini-6-karboksyylihappoestereitä valmistetaan esimerkin seuraavan : : : synteesikaavion mukaan:

Kaavio 3 li 85025 h°0 COOR17 5 /

HO

emäs R1 °-CH-CH-R 1 1 i i

Br Br 10

Rio C00r17 v°/ R11 15 1) NBS / CC14 2) Nai \' 20 d’o O \\ //— COOR17 / 25 R’1

Kirjallisuutta: W. Adam et ai., Synthesis 1982, 322.

3) 1,4-bentsoksatsinyyli-, 1,4-bentstiatsinyyli- ja 1,2,3,4-tetrahydrokinoksalyyli-glysiinit_ Näiden anelloitujen (anellierten) fenyyliglysiinien 30 synteesiä varten käytetään löhtäaineena 3-hydroksi-4-ami-nobentsoehappoa, 3-amino-4-hydroksibentsoehappoa, 3-amino- 4-merkaptobentsoehappoa ja 3,4-diaminobentsoehappoa niiden esterin muodossa. Uusia bentsokondensoituja karboksyylihap-·'·; poestereitä valmistetaan esimerkiksi seuraavan synteesi- 35 kaavion mukaan:

Kaavio 4 i2 85025

ΗΖ-ζ~^_ COOR17 Z = O, NR13|S

/

5 HN

'h12 Br Br R1“-CH-CH-R11

10 V

-^V-COÖR17 Rio Z yy- /Nnri2 15 R”

Kirjallisuutta: H. Bartsch et ai., J. Heterocyclic Chem. 20, 45 (1983) .

4) Fenoksatsinyyli- ja fenotiatsinyyliglysiinit 20 Lähtöaine fenoksatsiini- ja fenotiatsiiniglysiini- johdannaisten synteesiä varten on fenoksatsiini vast, fe-notiatsiini.

Kaavio 5 COOH

: : : * QC ^ QC^) V 2) CO2 H11 R” 30 Z - S, O, NR13 | COOR17 ¢00

N

35 r” i3 85025

Kirjallisuutta: M. Ionesen et ai., Advances in Heterocyclic Chemistry. Voi. 8. 83. Academic Press (1967) 5) Dibentsopyrrolyyli- ja dibentsofuryyliglysiinit Dibentsofuraani ja dibentsopyrroli ovat lähtöaineita 5 uusien anelloitujen fenyyliglysiinien synteesiä varten. Väliyhdisteitä valmistetaan esimerkiksi seuraavan syntee-sikaavion mukaan:

Kaavio 6

Br,

15 V

COOT

20 J n-BuLi7 EMF 25 | ögcr “ 30 Kirjallisuutta: M.L. Tedjamulia et ai., J. Heterocyclic Chem. 20. 861 (1983) .

6) Bentsofuryyli- ja 1,2-bentsisoksatsolyyliglysiinit Lähtöaineita bentsofuryyli- ja bentsisoksatsolyyli- glysiinien synteesiä varten ovat 3-formyyli-4-hydroksi-35 bentsoehappoesterit. Uusia anelloituja bentsoehappojohdan-naisia valmistetaan esimerkiksi seuraavan synteesikaavion mukaan.

Kaavio 7 i4 85025 HO — ^^-COOR17 /

5 . OHC

. / X H jN-OH

1 )Br-CH-CHa-R·/ \ r' / N.

\l 2) 10% KOH/ etanoli > _ 1h palautustislaus 10 O^~^)-C00R17 HO COOR1/

HO-N=CH

R*

THF/PT CljCCONCO

15

V

HO \^/— COOR17 ? ' 9 Π "

* CljCCONHC-0-N=CH

25 (o-<2^cooi,,7

Kirjallisuutta: R.C. Elderfield et ai., Benzofuran and its Derivatives, Heterocyclic Compounds. Voi. 2. 1 (1951).

30 j. Wiley & Sons; P. Cagniant et al., Advances in Heterocyclic Chemistry, Vol. 18, Academic Press (1975); G.

Stokker, J. Org. Chem. 48, 2613 (1983).

7) Indolyyliglysiinit

Substituoitujen indolyyliglysiinien synteesiä var-35 ten käytetään lähtöaineena 3-metyyli-4-nitrobentsoehappoa, 2-metyyli-3-nitrobentsoehappoa, 3-nitro-4-hydratsinobentsoe- is 85025 happoa niiden esterin muodossa. Substituoituja indolikar-boksyylihappoja valmistetaan esimerkiksi Leimgruber-Batcho-ja Fischer-indolisynteesin mukaan:

Kaavio 8 5 —- COOR17 ^0QR17 HjC -^~^-COOR17 0,N CH, I xOCH,

10 (CH j)jN-CH

i OCHo CH j.

C..-CW <T/>*oor17 CHj / \ /

15 - 0iN / 0,N

CH , \ N-CH, CH , 20 1 H-|pd/c ] H'N^r^COOR17 /^COOR” (fVcoOR17 W/ >λ f!n 25 HN^>

' H

H,N-NH-(fiy- coor17 30 ^ CH j R*

O = C

N R* 16 85025 r8ch, /—ν 17 9 C=N-NH -\^y- C00R 5

Fischer'in indolisynteesi i 10 f-0~ coor17

R^V

15 i8

Kirjallisuutta: R.K. Brown. Synthesis of the Indol Nucleus. Heterocyclic Compounds, osa I, 227, J. Wiley & Sons (1972); B. Robinson, Chemical Reviews 63, 373 (1963); R.D. Clark 20 et al., Heterocycles 22. 195 (1984).

Seuraavia penisilliinin ja kefalosporiinin perusaineita käytetään keksinnön mukaisten yhdisteiden, joilla on kaava I, valmistukseen:

Kefalosporiinin perusaine (III) 25 Tässä käytettyjä tyypillisiä kefalosporiinin perus aineita 7-amino-3-metyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa (7-ADCA) ja 7-amino-3-kloori-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa (7-ACCA), joita selostetaan aikakauslehdessä J. Med-Chem.

12. (310 C.W. Ryan et ai., 1969); US-patentissa 3 925 372, 30 DE-hakemusjulkaisussa 2 606 196 ja US-patentissa 3 994 884, kuvataan seuraavan kaavan avulla: h H2Nv 35 o^V-*5" COOR4 i7 8 5 025 R4 R5 H CH3 t-butyyli CH3 5 H Cl -CH-© C1 0

10 H H

trimetyylisilyyli Cl H Cl t-butyyli CH3 t-butyyli CH3 15 H (tai bentshydryyli) CH=CH2 H CH=CH-CH3

Seuraavissa taulukoissa on esitetty aivan erityisen edullisia keksinnön mukaisia yhdisteitä, joilla on 20 kaava I.

N -(ΓΛ- CH-CO-NH s "<-* NHl 25 R7

COOH

R5 R6 R7

30 CH3 H H

Cl NH2 nh2 ch=ch2 nh2 nh2 35 ie 8 5 025 ch-co-nh s R’H NH 2 sr Ί 5 / 0 J-O-*5 D 1 1 Oi

5 COOH

r5 R10 RU

10 Cl H H

Cl CH3 ch3 15 z-©-CH-co-m s ^ **' XlJ- H*

H O I

COOH

20 Z R5 O Cl ::: 25 o ch3 NH Cl NH CH=CH2 NH CH=CH-CH3 30 19 85025

V —/, ,)-CH-CO-Nu S

COOH

10 Y R5 NH tai 0 CH3 NH tai O Cl NH tai 0 CH=CH-CH3 15 NH tai 0 Cl NH tai 0 CH3 NH tai O Cl 20 Keksinnön mukaiset yhdisteet, joilla on kaava I, osoittavat vähäisen myrkyllisyyden ohella laajaa antibak-teriaalista spektriä gram-positiivisia ja gram-negatiivi-sia bakteereita vastaan, erityisesti stafylokokkeja, streptokokkeja, enterokokkeja ja Haemophilus influen-25 zae'ta vastaan.

Annettaessa uusia yhdisteitä parenteraalisesti ja erityisesti oraalisesti, ne ovat erittäin tehokkaita sellaisia mikro-organismeja vastaan, kuten stafylokokit, esim. Staph, aureus, Staph, epidermidis, streptokokit, 30 kuten esim. Streptococcus pyogenes, Streptococcus fae- calis, Enterobakteerilajit, esim. Escherichia coli, Klebsiella, Salmonella, Shigella, Proteus, esim. Proteus mi-rabilis.

Nämä ominaisuudet tekevät mahdolliseksi näiden yh-35 disteiden käytön kemoterapeuttisinä vaikutusaineina ih- 20 8 5 0 2 5 mis- ja eläinlääketieteessä. Seuraavassa taulukossa on esitetty minimiehkäisykonsentraatiota (MHK-arvot, mg/ml) esimerkille 7 kefaklooriin verrattuna.

MHK-arvot määritetään agar-laimennuskokeen avulla 5 kiinteässä väliaineessa, jolloin tuloksen tarkistus suoritetaan 18-24 tuntia kestäneen 37°C:ssa suoritetun inku-boinnin jälkeen. Kasvatusalustana käytetään Isosensitest-agaria.

10 Bakteeri_Esim. 7_Kefakloori_

Staph. 133 0,5 2

Staph. 25022 0,5 2

Staph. 25470 128 >128

Staph. E 25185 0,125 0,5 15 Strept. faec. 27101 64 >128

Strept. faec. 113 32 >128

Enterococ. 9790 16 64

Enterococ. 27158 8 32 20

Seuraavista vertailukoetuloksista käyvät ilmi kaavan (1) mukaisten kefalosporiinijohdannaisten edulliset ominaisuudet lähimpiin tekniikan tasosta tunnettuihin yhdisteisiin nähden.

25 Taulukossa 1 on esitetty esillä olevan hakemuksen esimerkkien 4 ja 7 mukaisten yhdisteiden MHK-arvot (mg/ml) tunnettuun kefaklooriin verrattuna. MHK-arvot määritettiin agar-laimennus-standarditestillä kiinteässä ravintoalustassa. Määritys suoritettiin 18-24-tuntisen 30 inkuboinnin jälkeen 37°C:ssa. Kasvatusalustana käytettiin Isosensitest-agaria.

2i 85 025

Esimerkki 4: ^ \-CH-CONH s r\ Ί Γ x HNV o^Y^a 5 i

COOH

Esimerkki 7: rp-sr"Vrs

COOH

Kefakloori: V 7-CH-CONH o 15 \=/ Ah, '^ρΓ Ί 0j-Y<a

COOH

20 Taulukko I

Bakteerikanta_Esimerkki 4 Esimerkki 7 Kefakloori

Staph. 133 1 12

Staph. 25022 1 12 ;; 25 Staph. 25470 128 128 >128

Staph. E 25185 0,125 0,125 0,5

Strept. faec. 27101 64 64 >128

Strept. faec. 113 16 16 >128

Enterococ. 9790 16 16 64 30 Enterococ. 27158 8 8 32

Taulukossa II on verrattu esillä olevan hakemuksen esimerkkien 8 ja 9 mukaisten yhdisteiden D-muotojen MHK-arvoja FR-julkaisun 2 418 234 esimerkin 10 mukaisen yh-... 35 disteen vastaaviin arvoihin.

22 85 025

Taulukko II

Esim. 10 Esim. 8 Esim. 9

Bakteerikanta FR 2 418 234 5 E. coli T7 64 16* 32* A 261 4 16

Neumann 32 4* 16* 183/58 >128 >128 >128 F14 128 >128 >128 10 C165 64 4 16* 4322 32 4* 16*

Klebs. 57USA 32 16* 16* 63 64 8* 16* 15 1852 64 64 32* 6097 128 8* 16*

Serratia 16001 >128 >128 >128 16002 >128 >128 >128 20 Provid.12012 128 >128 128

Prot.morg.932 >128 >128 >128 vulg.9023 >128 >128 64 1017 >128 >128 >128 N6 >128 >128 >128 25

Prot.rettg.10007 >128 >128 >128 mir.1235 >128 4* 128

Staph.aur.1756 128 >128 >128 133 64 0,5* 4* 30 25455 4 - 25470 >128 >128 >128

Staph.epi 25185 - 0,25 2*

Strept.faec.27101 128 64* 128 35 113 >128 32* >128

Enterococ. 9790 >128 32* >128 27158 64 8* >128

Psdm.aerug.F41 >128 >128 >128 . .40 Psdm. Walter >128 >128 >128 7035 >128 >128 >128 7451 >128 >128 >128

Enterob.cl.5605 >128 >128 >128 5744 >128 >128 >128 ... 45 Acinetob. 14061 >128 1* >128 ♦erikoisen edullinen 23 8 5 025

Taulukossa III on esitetty esillä olevan hakemuksen esimekrin 8 mukaisen yhdisteen MHK-arvot (pg/ml) julkaisusta EP 122 158 tunnetun yhdisteen vastaaviin arvoihin verrattuna gram-positiivisella alueella. Tuloksista 5 ilmenee, että esillä olevan hakemuksen mukainen yhdiste on huomattavasti tehokkaampi.

EP 122 158 Esimerkki 1: 10 δ/ / y=\ (D) x s / /)-CH-CO-NH—-f η 1 J N J_ch3 15 2 O j

COOH

Esimerkki 8:

20 O /)- CH-CO-NH—,-S'S "N

JiJ-c,

2 O J

COOH

24 85025

Taulukko III

Mikro-orga- Bakteeri- EP 122 158 Esimerkki 8 nismi kanta Esimerkki 1 (MHK) 5 (MHK)

Staphylococcus Xl,l 2 Staph, aur.133: aureus 0,5

Staphylococcus V41 16 Staph.aur.25023: 10 aureus 0,5

Staphylococcus X400 64 aureus

Staphylococcus S13E 16 aureus 15--

Staphylococcus EP11 16 Staph, epiderm.

epidermidis 25185: 0,25

Staphylcoccus 222 8 epidermis 20--

Streptococcus C203 0,25 pyogenes

Streptococcus Park I 1 pneumoniae 25 Streptococcus X66 64

ryhmä D

Streptococcus 2041 32 Streptococcus ryhmä D faec. 113: 32 30 Haemophilus C.L. 4 influenzae

Haemophilus 76 2 influenzae 35 Enterococ.

27158: 8 25 8 5 025

Kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä voidaan esimerkiksi hoitaa ja/tai estää paikallisia ja/tai systeemisiä sairauksia, joita aiheuttavat edellä mainitut bakteerit.

Sairauksina, joita voidaan estää, parantaa ja/tai 5 tervehdyttää keksinnön mukaisten yhdisteiden avulla, mainittakoon esimerkiksi:

Hengitysteiden ja nielun sairaudet otitis; pharyngitis; pneumonie; peritonitis; pyelonephritis; cystitis; endocarditis, systeemiset infektiot, bronchitis, arthri-10 tis ja paikalliset infektiot.

Kaavan (I) mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää farmaseuttisina valmisteina, jotka ei-myrkyllisten, inerttisten farmaseuttisesti sopivien kantaja-aineiden ohella sisältävät yhtä tai useampaa keksinnön mukaista 15 yhdistettä tai koostuvat yhdestä tai useammasta keksinnön mukaisesta vaikutusaineesta.

Valmisteet ovat yksittäisten osien muodossa, esim. tabletteina, rakeina, kapseleina, pillereinä, supposito-rioina ja ampulleina, joiden vaikutusainesisältö vastaa 20 yksittäisen annoksen murto-osaa tai monikertaa. Annostus-yksiköt voivat sisältää esim. 1, 2, 3 tai 4 yksittäistä annosta tai 1/2, 1/3 tai 1/4 yksittäisannoksesta. Yksit-täisannos sisältää edullisesti sellaisen määrän vaikutus-ainetta, joka annetana yhden lääkkeenannon yhteydessä ja ; 25 joka vastaa tavallisesti koko päiväannosta tai puolta, kolmasosaa tai neljäsosaa siitä.

Ei-myrkyllisinä, inerttisinä, farmaseuttisesti sopivina kantaja-aineina ymmärretään kaikenlaisia kiinteitä, puolikiinteitä tai juoksevia laimennusaineita, täyte-30 aineita ja valmistuksen apuaineita.

Edullisina farmaseuttisina valmisteina mainittakoon tabletit, rakeet, kapselit, pillerit, rakeistot, 26 85025 suppositoriot, liuokset, suspensiot ja emulsiot, tahtaat, salvat, hyytelöt, kermat, pesunesteet, puuterit ja suihkeet.

Tabletit, rakeet, kapselit, pillerit ja rakeistot 5 voivat sisältää vaikutusaineen tai vaikutusaineiden ohella tavallisia kantaja-aineita, kuten (a) täyte- ja laimennus-aineita, esim. tärkkelyksiä, maitosokeria, ruokosokeria, glukoosia, mannitolia ja piihappoa (b) sideaineita, esim. karboksimetyyliselluloosaa, alginaatteja, gelatiinia, po-10 lyvinyylipyrrolidonia, (c) kosteutta säilyttäviä aineita, esim. glyserolia, (d) hajottavia aineita, esim. agar-agaria, kalsiumkarbonaattia ja natriumkarbonaattia, (e) liukenemista hidastavia aineita, esim. parafiinia, (f) resorptio-ta nopeuttavia aineita, esim. kvaternaarisia ammoniumyh-15 disteitä, (g) kostutusaineita, esim. setyylialkoholia, glyserolimonostearaattia, (h) adsorptioaineita, esim. kaoliinia ja bentoniittia ja (i) voiteluaineita, esim. talkkia, kalsium- ja magnesiumstearaattia ja kiinteitä poly-etyleeniglykoleja tai kohdissa (a) - (i) mainittujen ai-20 neiden seoksia.

Tabletit, rakeet, kapselit, pillerit ja rakeistot voivat olla varustettuina tavallisilla, mahdollisesti läpinäkymättömäksi tekeviä aineita sisältävillä päällysteillä ja kuorilla ja myös siten kokoonpantuina, että ne luo-25 vuttavat vaikutusaineen tai vaikutusaineet ainoastaan tai : edullisesti suolistoalueen määrätyssä osassa mahdollisesti hidastettuna, jolloin immersioaineena voidaan käyttää esim. polymeerisiä aineita ja vahoja.

Vaikutusaine tai vaikutusaineet voivat mahdollises-30 ti olla yhden tai useamman edellä mainitun kantaja-aineen kanssa myös mikrokapseloidussa muodossa.

Suppositoriot voivat sisältää vaikutusaineen tai * vaikutusaineiden ohella tavallisia vesiliukoisia tai ve teen liukenemattomia kantaja-aineita, esim. polyetyleeni-35 glykoleja, rasvoja, esim. kaakaorasvaa ja korkeampia 27 85025 estereitä (esim. ^-alkoholi g-rasvahapon kanssa) tai näiden aineiden seoksia.

Salvat, pastat, kermat ja hyytelöt voivat sisältää vaikutusaineen tai vaikutusaineiden ohella tavallisia kan-5 taja-aineita, esim. eläin- ja kasvirasvoja, vahoja, para-fiineja, tärkkelyksiä, traganttia, selluloosajohdannaisia, polyetyleeniglykoleja, silikoneja, bentoniitteja, piihap-poa, talkkia ja sinkkioksidia tai näiden aineiden seoksia.

Puuterit ja suihkeet voivat sisältää vaikutusaineen 10 tai vaikutusaineiden ohella tavallisia kantaja-aineita, » esim. maitosokeria, talkkia, piihappoa, alumiinihydroksidia, kalsiumsilikaattia ja polyamidijauhetta tai näiden aineiden seoksia. Suihkeet voivat lisäksi sisältää tavallisia ponneaineita, esim. kloorifluorihiilivetyjä.

15 Liuokset ja emulsiot voivat vaikutusaineen tai vai kutusaineiden ohella sisältää tavallisia kantaja-aineita, kuten liuottimia, liukenemista helpottavia aineita ja emul-gaattoreita, esim. vettä, etyylialkoholia, isopropyylial-koholia, etyylikarbonaattia, etyyliasetaattia, bentsyyli- 20 alkoholia, bentsyylibentsoaattia, propyleeniglykolia, 1,3-butyleeniglykolia, dimetyyliformamidia, öljyjä, erityisesti puuvillansiemenöljyä, maapähkinäöljyä, maissinalkioöl-jyä, oliiviöljyä, risiiniöljyä ja seesamiöljyä, glyserolia, glyseroliformaalia, tetrahydrofurfuryylialkoholia, poly-;; 25 etyleeniglykoleja ja sorbitolin rasvahappoestereitä tai näiden aineiden seoksia.

Parenteraalista lääkkeenantoa varten voivat liuokset ja emulsiot olla myös steriilissä ja veren suhteen isotonisessa muodossa.

30 Suspensiot voivat vaikutusaineen tai vaikutusainei den ohella sisältää tavallisia kantaja-aineita, kuten nestemäisiä laimennusaineita, esim. vettä, etyylialkoholia, propyleeniglykolia, suspendoimisaineita, esim. etoksyloi-; tuja isostearyylialkoholeja, polyoksietyleenisorbitoli- - 35 ja sorbitaaniestereitä, mikrokiteistä selluloosaa, 28 85025 alumiinimetahydroksidia, bentoniittia, agar-agaria ja traganttia tai näiden aineiden seoksia.

Mainitut valmistemuodot voivat sisältää myös väriaineita, säilömisaineita samoin kuin tuoksua ja makua pa-5 rantavia lisäaineita, esim. piparminttuöljyä tai eukalyp-tusöljyä sekä makeutusaineita, esim. sakkariinia.

Terapeuttisesti vaikuttavia yhdisteitä tulee edellä mainituissa farmaseuttisissa valmisteissa olla edullisesti konsentraatioltaan noin 0,1 - 99,5, edullisesti noin 10 0,5-95 paino-% koko seoksesta.

Edellä mainitut farmaseuttiset valmisteet voivat sisältää keksinnön mukaisten yhdisteiden lisäksi myös muita farmaseuttisia vaikutusaineita.

Edellä mainittujen farmaseuttisten valmisteiden val-15 mistus tapahtuu tavalliseen tapaan tunnettujen menetelmien mukaan, esim. sekoittamalla vaikutusaine tai vaikutusalueet kantaja-aineen tai kantaja-aineiden kanssa.

Vaikutusaineita tai farmaseuttisia valmisteita voidaan antaa paikallisesti, oraalisesti, parenteraalisesti, 20 intraperitoneaalisesti ja/tai rektaalisesti, edullisesti oraalisesti tai parenteraalisesti, kuten suonensisäisesti tai lihaksensisäisesti.

Yleensä on osoittautunut sekä ihmis- että myös eläinlääketieteessä edulliseksi antaa toivottujen tulosten 25 saavuttamiseksi keksinnön mukaista vaikutusainetta tai vaikutusaineita kokonaismäärältään noin 5 - noin 1 000, edullisesti 10-200 mg/kg kehon painoa jokaista 24 tuntia kohti, mahdollisesti useampien yksittäisten lääkkeenanto-jen muodossa. Lääkkeen yksittäisanto sisältää keksinnön 30 mukaista vaikutusainetta tai vaikutusaineita edullisesti määrissä, jotka ovat välillä noin 1 - noin 250, erityisesti 3-60 mg/kg kehon painoa. Saattaa kuitenkin olla myös tarpeen poiketa mainituista annostuksista ja tällöin riippuvuussuhteessa käsiteltävän kohteen lajista ja kehon pai-35 nosta, sairauden lajista ja ankaruudesta, valmisteen lajista ja lääkeaineen antotavasta samoin kuin siitä aikavälistä 29 85025 tai intervallista, jonka sisällä lääkkeenanto tapahtuu. Siten voi joissakin tapauksissa olla riittävää, että tullaan toimeen vähemmällä kuin edellä mainitulla määrällä vaikutusainetta, kun taas toisissa tapauksissa täytyy edel-5 lä mainittu vaikutusainemäärä ylittää. Kulloinkin tarpeellisen optimaalisen annostuksen ja vaikutusaineiden antotavan määrittämisen voi jokainen ammattimies suorittaa helposti ammattitaitonsa avulla.

Kysymyksen ollessa käyttämisestä rehun lisäaineena, 10 voidaan keksinnön mukaisia yhdisteitä antaa tavallisissa konsentraatioissa ja valmisteissa yhdessä rehun tai rehuvalmisteiden kanssa tai juomaveden kanssa. Tämän johdosta voidaan estää, parantaa ja/tai tervehdyttää gram-negatii-visten tai gram-positiivisten bakteerien infektio samoin 15 kuin saavuttaa kasvun edistymistä ja rehun hyötykäytön paranemista.

Uudet yhdisteet osoittautuvat oivallisiksi voimakkaiden antibakteriaalisten vaikutusten johdosta, jotka koestettiin in vivo ja in vitro sekä oraalisen resorboi-20 tuvuuden johdosta.

Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan vaikutus-spektrin laajentamiseksi ja vaikutuksen parannuksen saavuttamiseksi erityisesti -laktamaasia muodostavien bakteerien ollessa kysymyksessä yhdistää muiden antimikro-25 biaalisten aineiden ja laktamaasin inhibiittien, esim. penisilliinien kanssa, jotka ovat erityisesti penisilli-naasia kestäviä ja klavulaanihapon kanssa. Tällainen yhdistelmä olisi esim. yhdistelmä oksasilliinin tai dikloksa-silliinin kanssa.

30 Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan vaikutusspek- trin laajentamiseksi ja vaikutuksen parannuksen saavuttamiseksi yhdistää myös aminoglykosidiantibioottien, kuten esim. gentamysiinin, sisomysiinin, kanamysiinin, amikasii-nin tai tobramysiinin kanssa.

35 Keksintöä valaistaan lähemmin seuraavien esimerk- kien avulla.

30 85025

Esimerkki 1 DL-7-(kinolyyli-6-glysyyliamido)-3-kloori-3-kefee-mi-4-karboksyylihappo

5 N/-Q-iH'C0'NH

w »«. r I- Cl o 1

COOH

a) 6-hydroksimetyyli-kinoliini (1a) 10 59,5 g (0,296 mol) kinoliinikarboksyylihappo-6-etyy- liesteriä hämmennetään yön yli 970 ml:ssa eetteriä -70°C:ssa 750 ml:n (0,9 mol) kanssa di-isobutyylialumiini-hydridiä (DIBAL, 20-%:inen tolueeniliuos, 1,2 molaarinen). Tämän jälkeen annetaan lämpötilan kohota -35°C:seen ja 15 joukkoon lisätään 310 ml keittosuolaliuosta, jolloin lämpötila kohoaa hitaasti 20°C:seen. Seosta hämmennetään kol-metuntia 20°C:ssa, alumiinihydroksidi erotetaan sen jälkeen imusuodattimella ja pestään eetteri/etikkaesteriseok-sella. Orgaaninen faasi pestään 100 ml:11a keittosuolaliuos-20 ta, kuivataan NajSO^n avulla ja haihdutetaan. Raakatuot-teen saanto 40 g.

Kromatografiän jälkeen, jossa käytetään piihappo-geeliä (0,04 - 0,63 mm) ja liuotinjärjestelmää petroli-eetteri/etikkaesteri (3:1, 2 1), petrolieetteri/etikkaes-25 teri (1:1, 4 1) ja petrolieetteri/etikkaesteri (1:3, 7-8 1), saadaan puhdasta tuotetta. Saanto 33 g (70 %).

C10H9N0 (159,2) NMR (DMSO): δ = 4,89 (s, 2H), 5,17 (s, 1H), 7,32 <dd, 1H), 7,62 (dd, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,98-30 8,05 (m, 2H), 8,75 (dd, 1H) ppm.

: - b) Kinoliini-6-aldehydi (1b) 32,6 g (0,205 mol) 1a-tuotetta hämmennetään 1 220 ml:ssa metyleenikloridia 122 g:n (1,4 mol) kanssa mangaa-35 ni(IV)-oksidia kolme päivää, hapetusaine erotetaan 31 85025 imusuodattimella ja suodos haihdutetaan kuiviin. Saanto 26 g (81 %) .

C10H7NO (157,2) NMF (DMSO): 6 - 7,74 (dd, 1H), 8,2 (s, 2H). 8,64 (dd, 5 1H), 8,68 (s , 1H), 9,12 <d, 1H), 10,25 (s , 1H) ppm.

c) 5-(kinolyyli-6)-2,4-imidatsolidiinidioni (1c) 26 g (0,165 mol) 1b-tuotetta lisätään tipoittain 165 ml:aan etanolia liuotettuna liuokseen, joka sisältää 10 12,2 g (0,248 mol) natriumsyanidia ja 63,5 g (0,662 mol) ammoniumkarbonaattia 165 ml:ssa vettä ja seosta hämmennetään 22 tuntia 60°C:ssa. Sen jälkeen kun etanoli on tislattu pois tyhjössä, hapotetaan jäljelle jäänyt liuos 0°C:ssa 2N suolahapolla pH-arvoon 2, sen jälkeen sääde-15 tään 2N natronlipeällä takaisin pH-arvoon 4,5 ja saostunut hydantoiini erotetaan imusuodattimella. Saanto 27 g (76 %) .

Ci2H9N2°2 (213·2) NMR (DMSO): 6 = 5,44 (s, 1H), 7,58 (dd, 1H), 7,75 (dd.

20 1H), 8,0 (s, 1H), 8,1 <d, 1H), 8,45 (dd, 1H), 8,6 (s, 1H), 8,95 (d,lH).

10,85 ( leveä s, 1H) ppm.

d) DL-a-amino-OC-kinolyyli-6-etikkahappo (1d) 25 27 g (0,127 mol) 1c-tuotetta ja 144,2 g (0,457 mol) bariumhydroksidia hämmennetään 1 200 ml:ssa ^0 24 tun tia 100°C:ssa. Tämän jälkeen suspensio laimennetaan 500 ml :11a vettä, siihen johdetaan C02 kahden tunnin ajan 100°C:ssa, bariumkarbonaatti erotetaan imusuodattimella ja 30 pestään sen jälkeen kiehuvalla vedellä. Suodos haihdutetaan kuiviin. Saanto 16,6 g.

Jäännökseen lisätään, sen ollessa kiehuvassa vedessä, voimakkaasti laimennettua rikkihappoa, saostunut tuote erotetaan suodattamalla ja suodos kuivataan jäädyttämällä. 35 Saanto 12,1 g (38 %).

32 85025 C11H10N2°2 * 1/2 H2S04 <251'2)

Laskettu: C 52,58 H 4,41 N 11,4 S 6,38

Saatu: C 51,1 H 4,7 N 10,9 S5,4 NMR (DCOOD): 6 = 5,88 <s, 1H), 8,36 <t. 1H>. 8,48 <d, 5 1H), 8,62 (d, 1H), 8,74 (s, 1H>, 9,4- 9,48 <m, 2H> ppm.

e) DL-CC-t-butyylioksikarbonyyliamino-ofkinolyyli- 6-etikkahappo (1e) 10 16,6 g (0,066 mol) 1d-tuotetta liuotetaan seokseen, jossa on 166 ml 2N natronlipeää, 166 ml H2O ja 338 ml diok-saania, liuokseen lisätään tipoittain 43,2 g (0,198 mol) di-t-butyyli-dikarbonaattia 30 minuutin kuluessa ja seosta hämmennetään 30 tuntia huoneen lämpötilassa. Dioksaani tis-15 lataan pois, jäljellä oleva liuos pestään etikkaesteri/pet-rolieetteriseoksella (1:1) ja vesifaasi hapotetaan samalla jäillä jäähdyttäen 2N HCl:llä pH-arvoon 2. Faasi uutetaan etikkaesterillä, orgaaninen faasi pestään keittosuolaliuoksella, kuivataan Na2SO^:n avulla ja haihdutetaan kuiviin.

20 Saanto 10,2 g (51 %).

C16H18N2°4 (302'3) f) DL-7-(kinolyyli-6-glysyyliamido)-3-kloori-3-ke-feemi-4-karboksyylihappo (1 f)

Esiastehapon aktivointi 25 2,4 g (7,93 mmol) 1e-tuotetta liuotetaan 30 ml:aan DMF, liuokseen lisätään 1,11 ml (7,93 mmol) trietyyliamii-nia, joukkoon suihkutetaan tipoittain -40°C:ssa 0,977 ml (7,93 mmol) pivaloyylikloridia ja seosta hämmennetään kolme tuntia välillä -30 - -15°C.

30 Amiinikomponentin valmistus 1,87 g (7,97 mmol) 7-amino-3-kloori-3-kefeemi-4-karboksyylihappoa (7-ACCA) suspendoidaan seokseen, jossa on 15 ml THF ja 7 ml 1^0 ja saatetaan liukenemaan lisäämällä lä trietyyliamiinia 10-%:ista THF-liuosta. Tämän jälkeen 35 lisätään 2 ml DMF yhtenäisen faasin saamiseksi.

33 85025

Kytkentä ja eristäminen; 7-ACCA-liuos suihkutetaan muodostettuun anhydridiin -40°C:ssa ja seosta hämmennetään sen jälkeen ilman jäähdy-tyskylpyä. Tunnin kuluttua lisätään joukkoon 5-10 ml I^O 5 ja pH säädetään trietyyliamiinin 10-%:isella THF-liuoksella arvoon 7,3. Kun tämän jälkeen on kulunut vielä kaksi tuntia, lisätään joukkoon noin 140 ml H^O, joukkoon lisätään samalla hämmentäen etikkaesteriä ja seos hapotetaan 0°C:ssa pH-arvoon 1,7. Orgaaninen kerros erotetaan, pestään keit-10 tosuolaliuoksella, kuivataan Na2SO^:n avulla ja liuotin tislataan pois tyhjössä.

Jäännös liuotetaan vähäiseen määrään THF ja lisätään hämmentäen petrolieetteriin. Saanto 2,6 g (63 %).

C23H23C1N4°6S <519'0) 15 2,5 g (4,82 nunol) Boc:llä suojattua kefalosporiinia liuotetaan 25 ml:aan metyleenikloridia, liuokseen lisätään 0°C:ssa 0,5 ml anisolia ja 25 ml trifluorietikkahappoa (TFE) ja seosta hämmennetään 15 minuuttia ilman jäähdytystä. Tämän jälkeen liuos haihdutetaan tyhjössä kuiviin ja 20 jäännökseen lisätään eetteriä. Trifluoriasetaatti erotetaan imusuodattimella, pestään eetterillä ja kuivataan tyhjössä. Trifluorietikkahapon poistamiseksi aine liuotetaan 200 ml:aan H2O ja lisätään pylvääseen, joka on täytetty Amberlite IRA-68:lla (asetaattimuoto). Sen jälkeen 25 pestään 150 ml:11a vettä ja koko eluaatti kuivataan jäädyttämällä. Saanto 1,2 g (57 %).

C1QH15C1N404S · H20 (436,9) NMR (DCOOD) : e * 3,45-4,0 (nun, 2H>, 5,28-5,38 <dd, 1H) , 8,84-5,89 <dd, 1H>, 5,98 (d, IH), 8,35 (m, 1H), 8,46 (m, 1H), 8,58 id, 1H), 8,76 (e. 1H). 9,38- 9,48 (ra. 2H) ppm.

34 85025

Esimerkki 2 DL-7-(kinolyyli-6-glysyyliamido)-3-metyyli-3-kefee-mi-4-karboksyylihappo s V- / NH»

O ' I

COOH

3,02 g (10 mmol) 1e-tuotetta ja 1,53 g (10 mmol) 10 1-hydroksibentstriatsolia liuotetaan typpiatmosgäärin alai sena 15 ml:aan THF. 2,06 g (10 mmol) N,N'-disykloheksyyli-karbodi-imidiä (DCC) lisätään liuotettuna 10 ml:aan THF 10°C:ssa. Seosta hämmennetään kaksi tuntia huoneen lämpötilassa, joukkoon lisätään 0°C:ssa 2,7 g (10 mmol) 7-ami-15 no-3-metyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-t-butyyliesteriä liuotettuna 10 ml:aan CH2C12 aktivoidun esterin liuottamiseksi ja sen jälkeen hämmennetään yön yli ilman jäähdytystä. Saostunut karbamidi erotetaan imusuodattimellä, pestään THF:llä ja suodos haihdutetaan kuiviin. Jäännös liuo-20 tetaan etikkaesteriin, pestään NaHCO^-liuoksella ja vedellä, kuivataan Na2S04:n avulla ja suodos haihdutetaan tyhjössä kuiviin. Saanto 1,9 g (34 %).

C28H34N4°6S (554'7) 1,7 g (3,06 mmol) Boc;llä suojattua kefalosporiinia ‘1 25 liuotetaan 30 ml:aan CH2C12, liuokseen lisätään 0°C:ssa 0,5 ml anisolia ja 30 ml TFE ja sitä hämmennetään tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen liuotin tislataan pois tyhjössä ja öljymäinen jäännös hierretään hienoksi eetterin kanssa. Trifluoriasetaatti erotetaan imusuodatti-30 mella, pestään eetterillä, kuivataan, sen jälkeen liuotetaan 200 ml:aan H20 ja lisätään pylvääseen, joka on täytetty Amberlite IRA-68:lla (asetaattimuoto). Sen jälkeen pestään 100 ml:11a vettä ja koko eluaatti kuivataan jäädyttämällä. Saanto 0,8 g (63 %).

35 85025 C19H18N4°4S H2° <416'4> NMR (DCOOD): 6 * 2,17 <d, 3H), 3,18-3,6 <m, 2H), 5,18- 5,27 (dd, 1H), 5,86-6,02 (dd ja s, 2H), 8,34 (m, 1H), 8,47 (d, 1H>, 8,60 (t, 1H), 8,77 <β, 1H), 9,38-9,48 (m, 2H) ppm.

Esimerkki 3 DL-7-(2,3-dimetyylikinoksaliini-6-glysyyliamido)-3- 10 kloori-3-kefeemi-4-karboksyylihappo ?/_O-c.K'C0'NH>-rs'i

Cl

/ o I

15 CH, COOH

a) 2,3-dimetyylikinoksaliini-6-karboksyylihappometyy-liesteri (3a) 55,8 g (0,354 mol) 3,4-diaminobentsoehappometyylies-teriä ja 30,5 g (0,354 mol) diasetyyliä kuumennetaan 20 500 ml:ssa tolueenia kolme tuntia käyttäen palautusjääh dy ttä jää, joka on varustettu vedenerottimella. Tolueeni tislataan pois tyhjössä, jäännös liuotetaan etikkaeste-riin lämmössä lisäämällä aktiivihiiltä, aktiivihiili erotetaan Seitz-suodattimella ja suodos haihdutetaan kuiviin.

25 Saanto 72,6 g (95 %).

Cl 2^12^2®2 (216.2) NMF (DMSO): 8 2.7 <s. 6H). 3.96 <*. 3H), 9,0 (d. 1H).

9,13 (d. 1H). 9.42 (*. 1H> ppm.

30 b) 2,3-dimetyyli-6-hydroksimetyyli-kinoksaliini (3b) 72,6 g (0,336 mol) 3a-tuotetta pelkistetään esimerkin 1a mukaisesti 1 100 ml:ssa THF 672 ml:n kanssa DIBAL (25-%:inen tolueeniliuos) -70°C:ssa kinoksaliinialkoholiksi.

‘ Saanto 56,8 g (90 %) .

36 85025 C11H12N2° (l88>2) NMR (DMSO): $ * 2,6 <*, 6H), 4,67 (d, 2H), 5,45 (t, 1H), 7,62 <dd, 1H), 7,81-7,89 (s ja d. 2H) ppm.

5 c) 2,3-dimetyylikinoksaliini-6-karboksialdehydi (3c) 56,8 g (0,302 mol) 3b-tuotetta hämmennetään esimerkin 1b mukaisesti 1 000 ml:ssa CHjC^ 160 g:n (1,84 mol) kanssa mangaani-(IV)-oksidia neljä päivää huoneen lämpöti- 10 lassa. Raakatuotteen saanto 54 g.

Suorittamalla kromatografia käyttäen piihappogeeliä ja liuotinjärjestelmänä tolueeni/etikkaesteriseosta (1:1), saadaan 36 g (64 %) puhdasta ainetta.

C1lHio^2® (186,2) 15 NMR (DMSO): 6 « 2.75 (*, 6H), 8,13 <d. 1H>, 8,69 (e, 1H), 10,27 < s, 1H) ppm.

d) 5-(2,3-dimetyylikinoksalin-6-yyli)-4-imidatsoli-diinidioni (3d) 20 36 g (0,193 mol) 3c-tuotetta reagoitetaan esimerkin 1c mukaisesti metanoli/etanoli/vesiseoksessa 77,9 g:n (0,813 mol, 4,2 ekv.) kanssa ammoniumkarbonaattia ja 14,7 g:n (0,230 mol, 1,55 ekv.) kanssa natriumsyanidia. Saanto 42,2 g (85 %).

25 C13H12N4°2 <256*3> NMR (DMSO): 6 * 2.66 (s, 6H). 5,48 (s, 1H), 7^72 (dd, 1H), 7,9 (s. 1H>, 8,02 (d, 1H).

8,66 (s, 1H). 10,98 (leveä «, 1H) ppm.

30 e) D-ct-t-butyylioksikarbonyyliamino-Qfc-(2,3-dimetyy-likinoksalin-6-yyli)etikkahappo (3e) -h 39,7 g (0,155 mol) 3d-tuotetta kuumennetaan 37,1 g:n (1,55 mol) kanssa litiumhydroksidia 1 000 ml:ssa vettä 24 35 tuntia 100°C:ssa. Liuos suodatetaan kuumana, suodatusjään-nös pestään sen jälkeen kuumalla vedellä ja suodos 37 85025 hapotetaan 0°C:ssa suolahapolla pH-arvoon 2. Liuos säädetään 2N natronlipeällä takaisin pH-arvoon 4,5 ja haihdutetaan tyhjössä kuiviin. 2,5 g (10,8 mmol) 2,3-dimetyyliki-noksaliini-6-glysiiniä reagoitetaan seoksessa, jossa on 5 10-%:ista NaHCO^-liuosta (50 ml) ja 50 ml dioksaania, 4.7 g:n (21,6 mmol) kanssa di-t-butyylidikarbonaattia ja jatkokäsittely suoritetaan esimerkin 1e mukaisesti. Saanto 1.8 g (50 %, THF/petrolieetteri).

C17H21N3°4 <331'4) 10 NMR <DMSO): 6 * 1,42 (s, 9H), 2,7 <*, 6H), 5,42 <d,lH>.

7,8 (d, 1H), 7,88 <d, 1H>, 7,95-8,02 <s ja d, 2H) ppm· f) DL-7-(2,3-dimetyylikinoksaliini-6-glysyyliamido)- 2 3 15 3-kloori-A /Δ -kefeemi-4-karboksyylihappo (3f) -50°C:seen jäähdytettyyn liuokseen, joka sisältää 2.0 g (6,03 mmol) 3e-tuotetta seoksessa, jossa on 15 ml DMF ja 15 ml THF, pirskotetaan hitaasti peräkkäisesti 1,05 ml (6,03 mmol) etyylidi-isopropyyliamiinia ja 0,467 ml 20 (6,03 mmol) metaanisulfonyylikloridia. Seosta hämmennetään 45 minuuttia -50°C:ssa ja siihen lisätään tipoittain liuos (0°C), joka sisältää 2,54 g (6,33 mmol) 7-amino-3-kloori-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-difenyylimetyyliesteriä ja 1.1 ml (6,33 mmol) etyylidi-isopropyyliamiinia seoksessa, 25 jossa on 12 ml THF ja 12 ml CH2C12. Seosta hämmennetään sen jälkeen 15 minuuttia -50°C:ssa ja tämän jälkeen vielä 45-60 minuuttia ilman jäähdytystä. Tämän jälkeen liuotin tislataan pois tyhjössä, jäännös liuotetaan 300 ml:aan etikkaesteriä, liuos pestään 0,1N suolahapolla, keittosuo-30 laliuoksella, NaHCO^-liuoksella ja vedellä. Kuivauksen ja etikkaesterin poistislauksen jälkeen saadaan 3,5 g (81 %) raakatuotetta, joka liuotetaan 100 ml:aan etikkaesteriä lisäämällä samalla piihappogeeliä ja sen jälkeen haihdutetaan tyhjössä. Jauhe lisätään pylvääseen (100 g piihap-35 pogeeliä, 0,04 - 0,068 mm) ja eluoidaan peräkkäisesti 38 35025 tolueeni/etikkaesteriseoksella (4:1) ja tolueeni/etikka-esteriseoksella (3:1). Saanto 1,7 g (40 %).

1,6 g:sta BOC:llä suojattua kefalosporiinia poistetaan suojaus esimerkin 2 mukaisesti. Trifluoriasetaatti 5 muutetaan Amberlite IRA-68:n (asetaattimuoto) avulla be-taiiniksi. Saanto 0,45 g (42 %).

C19H18C1N504S · 2 H20 (483,9)

Neljän isomeerisen kefalosporiinin erottaminen suoritetaan preparatiivisen HPLC:n avulla (Hibar 250-25, 10 RP-18, 7 ^um) käyttäen eluenttina 0,1-%:ista trifluori- etikkahappo/metanoli(80:20)-seosta.

D-muoto (piikki III): NMR (DCOOD): 6 = 3,16 <d, 6H>, 3,52 <d. IHO, 3,86 <d.

1H). 5,31 (d, 1H), 5,97 <d, 1H), 6,02 15 <*, 1H), 8,4 (s. 1H) 8,56 (d, 1H), 8,71 (s, 1H) ppm.

Esimerkki 4 DL-7-(indolyyli-4-glysyyliamido)-3-kloori-3-kefeemi-20 4-karboksyylihappo

/J3-CH-C0-NH

M NH· hn o 7

25 COOH

a) 5-(indolyyli-4-yyli)-2,4-imidatsolidiinidioni (4a) 7,8 g (53,7 mmol) indoli-4-karboksialdehydiä reagoi-tetaan esimerkin 1c mukaisesti etanolin ja veden seoksessa 30 4,05 g:n (82,7 mmol) kanssa natriumsyanidia ja 14,0 g:n : (146 mmol) kanssa ammoniumkarbonaattia. Saanto 6,4 g (55 %).

C11H9N302 (215,2)

Laskettu: C 61,4 H 4,2 N 19,5 : Saatu: C 60,4 H 4,3 N 19,7 39 85025 b) DL-oC-amino-ot-indolyyli-4-etikkahappo (4b) 68,0 g (0,316 mol) 4a-tuotetta hämmennetään esimerkin 1d mukaisesti 365,5 g:n (1,152 mol) kanssa bariumhydr-oksidia 2 200 ml:ssa I^O 24 tuntia 100°C:ssa. Saanto 40 g 5 (56 %) .

C10H10N2°2 * 2 H2° (226'2)

Laskettu: C 53,10 H 6,24 N 12,39

Saatu: C 53,7 H 5,7 N 12,1 NMR (DMSO): « * 4,6 <s. 1H>, 6,64 <β, 1H), 7,02 (d, 2H>, 10 7,32-7,38 (dd, 2H>, 7,7-8,1 (leveä s, 1H > , 11,33 (s, 1H) ppm.

c) DL-Ofc-t-butyylioksikarbonyyliamino-oC-indolyyli-4-etikkahappo (4c) 15 6,0 g (26,5 mmol) 4b-tuotetta reagoitetaan esimer kin 1e mukaisesti 11,5 g:n (53 mmol) kanssa di-t-butyyli-dikarbonaattia seoksessa, jossa on dioksaania, vettä ja 2N natronlipeää. Saanto 5,2 g (68 %).

C15H18N2°4 <290.3) 20 NMP (DMSO): 6 = 1,37 (s, 9H). 5,5 (d, 1H), 6,54 (s, 1H), 6,98-7,1 (m, 2H), 7,37 (m, 2H), 11,18 (s, 1H> ppm.

d) DL-7-/2-(t-butyylioksikarbonyyliamino)indolyyli-25 4-glysyyliamido7-3-kloori-3-kefeemi-4-karboksyylihappo (4d)

Seokseen, joka sisältää 7,05 g (24,3 mmol) 4c-tuo-tetta seoksessa, jossa on 50 ml THF ja 20 ml DMF, lisätään 3,4 ml (24,3 mmol) trietyyliamiinia ja kaksi tippaa N-me-tyylimorfoliinia ja joukkoon lisätään -30°C:ssa 3,15 ml 30 (24,3 mmol) kloorimuurahaishappo-isobutyyliesteriä. Sen jälkeen kun seosta on pidetty 60 minuuttia välillä -30 --10°C, lisätään siihen ennakolta jäähdytetty trietyyliamii-\ niliuos, joka sisältää 6,55 g (27,9 mmol) 7-ACCA THF/vesi- : : : seoksessa (3:1). Seosta hämmennetään sen jälkeen 90 minuut- : 35 tia ilman jäähdytystä ja pH säädetään arvoon 7,2. Joukkoon lisätään etikkaesterin ja veden seosta ja seos hapotetaan 40 8 5025 0°C:ssa pH-arvoon 2. Etikkaesterifaasi erotetaan, pestään, kuivataan Na2SO^:n avulla, haihdutetaan 40 ml:n tilavuuteen ja sekoitetaan petrolieetteriin. Saostunut tuote erotetaan imusuodattimella ja kuivataan. Saanto 9,8 g (80 %).

5 C22H23C1N4°6S <506.9) NMR (DMS0): 6 * 1.4 (s, 9H) 3.6-4.04 (mm, 2H), 5,18- 5,26 (dd, 2H), 5,72 (d, 1H>, 5,81-5,88 <dd, 1H), 6,64 (s, 1H), 7,04 (m, 2H>, 7,38 (m. 2H), 9,22 <t, 1H), 11,18 <d, 10 1H) ppm.

e) DL-7-(indolyyli-4-glysyyliamido)-3-kloori-3-ke-feemi-4-karboksyylihappo (4e) 10 g (19,7 mmol) 4d-tuotetta hämmennetään 15 minuut-15 tia anisolia lisäämättä 50 ml:n kanssa TFE 10°C:ssa. Tri-fluoriasetaatti eristetään esimerkin 1f mukaisesti betaii-nina. Saanto 4,2 g (48 %).

C17H15C1N4°4S ' 2 h2° (442·9> NMR (DCOOD): 5 = 3,43-3,95 (mm, 2H) , 5,23-5,32 (dd. 1H), 20 5,85-5,94 (dd ja d, 2H>, 7,27 (m, 3H).

7,5 < s , 1H). 7.68 (m. 1H) ppm.

Esimerkki 5 D-7-(indolyyli-4-glysyyliamido)-3-kloori-3-kefeemi-25 4-karboksyylihappo (5a) ja L-muoto (5b)

Diastereomeeriseos 4e erotetaan D- ja L-muodoksi käyttäen preparatiivista Merck-pylvästä (Hibar 250-25, RP-18, 7 yum, eluentti: 0,1-%:inen trifluorietikkahappo/ metanoliseos (85:15), 220 nm).

30 a) D-muoto (piikki II): NMR (DCOOD): 6 = 3,5 (d, J«=18 Hz, 1H) , 3,84 (d, J»18 Hz, 1H), 5,25 (d. J*5Hz, 1H), 5,89 (s, 1H), 5,93 (d, J*5 Hz. 1H), 7,3 (d, 3H), 7.52 35 (*, 1H), 7,68 (t, 1H) ppm.

« 85025 b) L-muoto (piikki I): NMR (DCOOD): δ * 3,72 (d, J*18 Hz, 1H), 3,95 (d, J*18

Hz, 1H>, 5,33 (d, Hz, 1H), 5,88 (d, J = 5 Hz, 1H), 5,91 <s. 1H), 7,3 5 <m, 3H>, 7,52 (s, 1H). 7,68 <m. 1H) ppm.

Esimerkki 6 DL-7-(indolyyli-5-glysyyliamido)-3-kloori-3-kefeemi- 10 4-karboksyylihappo

CH-CO-NH---S

,e COOH

1 5 a) Trans-3-^3- (dimetyyliamino)vinyyli7-4-nitrobent-soehappometyyliesteri (6a)

Liuosta, joka sisältää 86,4 g (0,443 mol) 3-metyyli- 4-nitrobentsoehappometyyliesteriä ja 158,2 g (1,329 mol) 20 N,N-dimetyyliformamididimetyyliasetaalia 500 ml:ssa DMF, kuumennetaan kuusi tuntia 130°C:ssa. Tämän jälkeen tislataan DMF pois suurtyhjössä ja jäännös kuivataan tyhjössä 20°C:ssa. Raakatuotteen saanto 100,3 g (91 %).

C12H14N204 (250,3) 25 NMR (DMSO): δ * 2,96 (·, 6H), 3,96 <*, 3H), 5,8 (d.

J*14 Hz, 1H), 7,1 (d, J*14 Hz. 1H>.

7.57 <dd, 1H). 7,85 <d. J«8,5 Hz, 1H), 8,15 (s, 1H> ppm.

30 b) Indoli-5-karboksyylihappometyyliesteri (6b) 227 g (1,106 mol) 6a-tuotetta (raakatuotetta) hyd-rataan 2 000 ml:ssa tolueenia neljä tuntia käyttäen katalysaattorina 55 g palladiumia aktiivihiilellä (10 % Pd) 10 baarin paineessa vedyn läsnä ollessa. Katalysaattorin erot- 35 tamisen ja tolueeniliuoksen haihdutuksen jälkeen kromato-grafoidaan indolijohdannainen käyttäen piihappogeeliä 42 85025 (2 300 g, 0,04 - 0,063 nun) ja eluointiaineena petrolieette-ri/etikkaesteri(4:1)-seosta ja petrolieetteri/etikkaesteri-(3:1)-seosta. Saanto 58,9 g (30 %).

C10H9N02 (175,2) 5 NMR (CDC13): 6 * 3.94 (s. 3H), 6,62 U, 1H). 7,24 (t, 1H). 7,38 (d, 1H>, 7,9 (d, 1H>, 8,41 (s, 1H). 8,68 (leveä s, 1H) ppm.

c) Indoli-5-metanoli (6c) 10 96 g (0,548 mol) 6b-tuotetta käsitellään esimerkin 1a mukaisesti seoksessa, jossa on 1 800 ml eetteriä ja 1 391 ml (1,67 mol) DIBAL (1,2 molaarinen tolueeniliuos). Kromatografiän jälkeen, jossa käytetään piihappogeeliä ja gradientti-eluoinnissa petrolieetteri/etikkaesteri(3:1)— 15 seosta ja petrolieetteri/etikkaesteri(1:1)-seosta, saadaan 39,3 g (49 %) puhdsta tuotetta.

C9H9N0 (147,2) NMR (CDC13 >: 6 * 3,91 (leveä β. 1H), 4,72 (s, 2H).

6,45 (m, 1H). 7,17 (in. 2H) , 7,37 (d, 20 1H), 7,6 (s, 1H), 9,88 (leveä $, 1H> ppm.

d) Indoli-5-karboksialdehydi (6d) 51,1 g (0,347 mol) 6c-tuotetta hämmennetään esimer-25 kin 1b mukaisesti seoksessa, jossa on 1 900 ml CH2C12 ja 200 ml THF, 190 g:n (2,18 mol) kanssa mangaani-(IV)-oksi-— dia yön yli 20°C:ssa. Saanto 44,3 g (85 %).

C9H7NO (145,2) NMR (CDCI3): 6 * 6,71 (dd. 1H). 7,34 (dd, 1H), 7,5 (d.

30 1H), 7,79 (dd, 1H). 8,2 (d. 1H>. 8.93 (leveä s, 1H), 10,04 (·, 1H) ppm.

e) 5-(indol-5-yyli)-2,4-imidatsolidiinidioni (6e) :: 14,5 g (0,1 mol) 6d-tuotetta hämmennetään esimerkin 35 ie mukaisesti etanolin ja veden seoksessa 7,35 g:n (0,15 mol) kanssa natriumsyanidia ja 38,4 g:n (0,4 mol) kanssa 43 85025 ammoniumkarbonaattia kaksi päivää 60°C:ssa. Saanto 17,3 g (81 %) .

C1lH9N302 (215,2) f) DL-i%-amino-OCrindolyyli-5-etikkahappo (6f) 5 17,3 g (0,08 mol) 6e-tuotetta hämmennetään esimerkin 1d mukaisesti 92,12 g:n (0,292 mol) kanssa bariumhydroksidia 560 ml:ssa vettä 24 tuntia 100°C:ssa. Saanto 12,1 g (67 %) .

C10H10N2°2 ‘ 2 H2° <226'2> 10 Laskettu: C 53,10 H 6,24 N 12,39

Saatu: C 54,8 H 5,0 N 12,4 NMR (NaOD): δ = 4,43 (s, 1H). 6.57 (d, 1H>, 7,22 (d, 1H>, 7,39 (d, 1H > , 7,5 <d, 1H>, 7,65 (s, 1H) ppm.

15 g) DL-«-t-butyylioksikarbonyyliamino-oc-indolyyli- 5-etikkahappo (6g) 14,0 g (0,0736 mol) 6f-tuotetta hämmennetään esimerkin 1e mukaisesti 64,2 g:n (0,294 mol) kanssa di-t-butyyli-20 karbonaattia dioksaanin, veden ja 2N natronlipeän seoksessa 30 tuntia huoneen lämpötilassa. Saanto 13,1 g (73 %).

C15H18N2°4 <290,3) NMR (DMSO): 6 « 1,38 <*, 9H>, 5,1 (d, 1H), 6,41 <*, 1H), 7,1 (dd, 1H), 7,34 (dd. 1H), 7,4 25 (d, 1H), 7.55 (·, 1H), 11,1 <*, 1H), 12.52 ( leveä *, 1H) ppm.

h) DL-7-(indolyyli-5-glysyyliamido)-3-kloori-3-ke-feemi-4-karboksyylihappo (6h) 30 3,5 g (12,1 mmol) 6g-tuotetta reagoitetaan esimer kin 4d mukaisesti seoksessa, jossa on 20 ml THF ja 20 ml DMF, 1,69 ml:n (12,1 mmol) trietyyliamiinia, kahden tipan kanssa N-metyylimorfoliinia, 1,57 ml:n (12,1 mmol) kanssa kloorimuurahaishappo-isobutyyliesteriä ja 2,84 g:n (12,1 35 mmol) kanssa 7-ACCA. Saanto 4,6 g (75 %).

C22H23C1N4°6S (506'9) 44 85025 4 g (7,89 mol) Bocrllä suojattua kefalosporiinia hämmennetään seoksessa, jossa on 40 ml CI^Cl^ 40 ml TFE ja 10 ml tioanisolia, 10 minuuttia 0°C:ssa argonatmosfää-rin alaisena. Trifluorietikkahapon poistaminen ja betaii-5 nin muodostaminen suoritetaan esimerkin 1g mukaisesti. Saanto 1 g (29 %) C17H15C1N404S · 2 H20 (442,9) NMR (DCOOD) : 6 = 3,5-4,02 (nun, 2H), 5,28-5,4 <dd. 1H), 5.65-5,92 (mm, 2H), 7,27 (m. 2H). 7,37 1 0 (m, 2H), 7,68 (m. 1H> ppm.

Esimerkki 7 DL-7-(bentsofuryyli-5-glysyyliamido)-3-kloori-3-ke-f eemi-4-karboksyy1ihappo 15 /=\ k/ " 0jn^'c1

COOH

20 a) 5-hydroksimetyyli-bentsofuraani (7a) 5,8 g (32,9 mmol) heksofuraani-5-karboksyylihappo-metyyliesteriä hämmennetään esimerkin 1g mukaisesti 50 ml:ssa THF 64,5 ml:n (98,6 mmol) kanssa DIBAL (1,53 molaa- 25 rinen) -70°C:ssa yön yli. Saanto 3,9 g (80 %) .

C9He°2 (148,2) NMR (DMSO): 6 * 4,6 (d, 2 H), 5,24 (t, 1H), 6,96 (d, 1H), 7,3 (dd, 1H), 7,58 (d, 1H). 7,62 (s, 1H), 7,99 <d, 1H), ppm.

30 b) Bentsofuraani-5-karboksialdehydi (7b) . 5,3 g (35,8 mmol) 7a-tuotetta hämmennetään esimer kin 1b mukaisesti 360 mlrssa metyleenikloridia 19,7 g:n (227 mmol) kanssa mangaani-(IV)-oksidia kaksi päivää huo-• ; 35 neen lämpötilassa. Saanto: 4,6 g (88 %) .

45 85025 C9H6°2 (146,1) NMR (DMSO): δ * 7,21 (d, 1H>, 7,84 (d, 1H), 7,96 (dd, 1H). 8,22 <d, 1H), 8,32 (*, 1H), 10,12 (s, 1H) ppm.

5 c) DL-ct-amino-0£-(bentsofur-5-yyli) etikkahappo (7c) 19,0 g (0,13 mol) 7b-tuotetta hämmennetään esimerkin 1c mukaisesti etanolin ja veden seoksessa 9,6 g:n (0,195 mol) kanssa natriumsyanidia ja 49,9 g:n (0,52 mol) kanssa 10 ammoniumkarbonaattia 18 tuntia 60°C:ssa. Saanto 21,3 g (76 %) .

C11HgN203 (216,2)

Hydantoiinia käsitellään 10-%:isella natronlipeällä 30 tuntia 100°C:ssa, sen jälkeen se hapotetaan puoliväke-15 väliä suolahapolla samalla jäillä jäähdyttäen pH-arvoon 2 ja tämän jälkeen säädetään takaisin pH-arvoon 4,5 2N natronlipeällä. Saanto 11,3 g (60 %).

C10H9N03 (191,2) NMR (DCOOD): δ * 5,66 (*, 1H), 7,0 (d. 1H), 7,58 (dd.

20 1H), 7,76 (d, 1H), 7.91 (d, 1H), 7,96 (d. 1H) ppm.

d) DL-dC- (t-butyylioksikarbonyyliamino-d(-bentsofur-5-yyli)etikkahappo (7d) 25 6,0 g (0,0314 mol) 7c-tuotetta hämmennetään esimer kin 1e mukaisesti 27,4 g:n (0,126 mol) kanssa di-t-butyy-lidikarbonaattia seoksessa, jossa on 60 ml vettä, 60 ml 2N natronlipeää ja 120 ml dioksaania yön yli. Saanto 6,6 g (73%).

CigHj/NOg (291,3) NMR <DMSO): δ * 1,38 (*, 9H), 5,22 (d, 1H), 7,0 (d. 1H), 7,38 <dd, 1H). 7,59 <d, 1H). 7,71 (s, 1H), 8,04 (d, 2H> ppm.

46 8 5 025 e) DL-7-(bentsofuryyli-5-glysyyliamido)-3-kloori-3-kefeemi-4-karboksyylihappo (7e) 2,0 g (6,86 mmol) 7d-tuotetta reagoitetaan esimerkin 4d mukaisesti THF:n ja DMF:n seoksessa 0,96 ml:n 5 (6,86 mmol) kanssa trietyyliamiinia, kolmen pisaran kanssa N-metyylimorfoliinia, 0,89 ml:n (6,86 mmol) kanssa kloori-muurahaishappoisobutyyliesteriä ja 1,77 g:n (7,55 mmol) kanssa 7-ACCA. Saanto 1,6 g (46 %).

C22H22C1N3°7S (507'9) 10 1,6 g:sta (3,15 mmol) BOC:llä suojattua kefalospo- riinia poistetaan suojaus esimerkin 1g mukaisesti TFE:n (+ 3 tippaa anisolia) avulla ja vapautetaan TFE:stä Amberlite IRA 68:n (asetaattimuoto) avulla. Saanto 0,9 g (65 %) .

15 C17H14C1N305S · 2 H20 (443,9) NMR (DCOOD): 6 = 3.55-4.06 (mm, 2H>, 5.33-5.4 <dd, 1H).

5,75 (*, 1H >, 5,9-6,0 <dd, 1H), 7.01 <t, 1H), 7,61 Cm, 1H), 7,74-7,8 (m, 1H>, 7,92-7,98 (m, 2H) ppm.

20

Esimerkki 8 D-7-(bentsofuryyli-5-glysyyliamido)-3-kloori-3-ke-feemi-4-karboksyylihappo (8a) ja L-muoto (8b) 7e-tuotteen preparatiivinen HPLC-erotus 25 Pylväs: Zorbax DuPont 250 - 21,2 (ODS, 220 nm)

Eluentti: 800 ml H20 - 200 ml asetonitriiliä -.....· 1 ml TFE

Syöttö: 0,7 g, kulloinkin 30-50 mg 2 ml:n näytepol-vekkeessa 20 Virtaus: 12,5 ml/minuutti b) L-muoto (piikki I):

Saanto 185 mg C17H14C1N305S · CF3COOH · H20 (539,9)

Laskettu: C 42,27 H 3,17 S 5,94 F 10,55 35 saatu: C 42,8 H 3,2 S 6,2 F 9,5 47 ö 5 025 NMR (DCOOD): 6 3,73 (d. J«18 Hz, 1H). 3,96 (d. J=18

Hz, 1H>, 5,32 <d. J«5 Hz, 1H), 5,68 (s, 1H), 5,84 (d, J*5 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H). 7,52 <d, J«8.0 Hz, 1H>. 7.68 (d, 5 J=8,0 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H). 7,9 (s, 1H) ppm.

a) D-muoto (piikki II) :

Saanto 165 mg 10 NMR (DCOOD): δ = 3,5 (d, J=18 Hz. 1H>, 3,84 <d, J*18 Hz.

1H), 5,25 (d, J*5 Hz, 1H), 5,65 (s. 1H) 5,9 (d, J=5 Hz, 1H>, 6,92 <*. 1H), 7,5 (d, J»8 Hz, 1H>, 7,68 <d. J=8 Hz, 1H). 7,84 (s, 1H), 7,99 (s, 1H) ppm.

15

Esimerkki 9 DL-7-bentsofuryyli-5-glysyyliamido)-3-metyyli-3-ke-feemi-4-karboksyylihappo 20 0-<w)-=,h-co-nh s k/ NH* J-N^CH,

O T

COOH

25 1 g (3,43 mmol) 7d-tuotetta reagoitetaan esimerkin 3f mukaisesti 16 ml:ssa CH2C12 0,6 ml:n (3,43 mmol) kans-sa etyylidi-isopropyyliamiinia, 0,265 ml:n (3,43 mmol) kanssa metaanisulfonyylikloridia ja 0,927 g:n (3,43 mmol) kanssa 7-amino-3-metyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-t-butyy-30 liesteriä, joka liuotetaan 14 ml:aan CH2C12 samalla kun läsnä on 0,597 ml (3,43 mmol) etyylidi-isopropyyliamiinia. Saanto 1,1 g (59 %) .

C27H33N3°7S (543'6) 1,1 g:sta (2 mmol) Boctllä suojattua kefalosporiinia 35 poistetaan suojaus esimerkin 3f mukaisesti ja vapautetaan TFEtstä Amberlite IRA-68-pylvään (asetaattimuoto) avulla. Saanto 350 mg (42 %).

48 85025 C18H17N3°5S ‘ 2 h2° <411 .4 > NMR (/DCOOD): 6 = 2,2 (d, 3H>, 3,22-3,64 (nan, 2H), 5,18-5,24 (dd. 1H), 5,70 (d, 1H), 5,78-5,88 (dd, 1H) 6,97 (m, 1H), 7,56 5 (d, 1H), 7,69-7,76 (m, 1H), 7,88 <m.

1H>, 7,94 (s, 1H) ppm.

Esimerkki 10 DL-7-(2,1-bentsisotiatsol-6-yyliglysyyliamido)-3-me-tyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappo

r^OcH-c°-NH S

s.·'( NH’ Jn^J-ch,

N O I

COOH

15 a) 2,1-bentsisotiatsolikarboksyylihappo-6-metyylies-teri (10a)

Liuokseen, joka sisältää 60 g (0,298 mol) 2-sulfi-nyyliamino-4-metyylibentsoehappometyyliesteriä 200 mljssa 20 bentseeniä, lisätään huoneen lämpötilassa argonkaasun läsnä ollessa 51,6 g (0,365 mol) N-sulfinyylimetaanisulfon-amidia 50 ml:ssa bentseeniä. Tämän jälkeen lisätään reak-tioseokseen samalla jäillä jäähdyttäen annoksittain 24,9 g (0,315 mol) pyridiiniä liuotettuna 75 ml:aan bentseeniä.

25 Seosta hämmennetään sen jälkeen 10 minuuttia 0°C:ssa ja kuumennetaan tämän jälkeen 45 tuntia palautusjäähdyttäjää käyttäen. Jäähdytyksen jälkeen bentseeni ja pyridiini tislataan pois tyhjössä, jäljelle jäänyt öljy kaadetaan 150 mlraan vettä ja hapotetaan 2N HCl:llä pH-arvoon 4.

30 Tällöin syntyy öljystä ruskeaa kiinteää ainetta, joka uutetaan kloroformilla. Kloroformiuutokset pestään vedellä, kuivataan MgSO^:n avulla ja haihdutetaan kuiviin. Jäljelle jäänyt öljy kiteytyy siihen n-heksaania lisättäessä ruskeankeltaiseksi aineeksi, joka erotetaan imusuodattimella ja 35 pestään n-heksaanilla. Saanto 44,1 g (80 %).

49 85025 C9H7N02S (193,2)

Laskettu: C 55,9 H 3,7 N 7,2 S 16,6

Saatu: C 55,9 H 3,7 N 7,3 S 16,7

Suorittamalla kromatografia käyttäen piihappogee-5 liä ja liuottimena petrolieetteri/etikkaesteri(5:1)-seosta saadaan 32,9 g (60 %) puhdasta tuotetta NMR (CDC13 >: 6 = 3.98 (*. 3H). 7,84 (d, 2H), 8.6 (s, 1H). 9.28 (s. 1H> ppm.

10 b) 6-hydroksimetyyli-2,1-bentsisotiatsoli (10b) 5,8 g (0,03 mol) 10a-tuotetta hämmennetään esimerkin 1a mukaisesti 80 ml:ssa THF 58,8 ml:n (0,09 mol) kanssa DIBAL (1,53 molaarinen tolueeniliuos) välillä -60 - -70°C yön yli. Saanto 4,2 g (85 %).

15 C8H7N0S (165.2).

NMR < DMSO) : 6 - 4.62 (s, 2H>, 5,44 (leveä ·, 1H>, 7,25 (d, 1H), 7.72 (s, 1H), 7,9 (d. 1H). 9.74 (s, 1H) ppm.

20 c) 2,1-bentsisotiatsoli-6-karboksialdehydi (10c) 1,65 g (10 mmol) 10b-tuotetta hämmennetään esimerkin 1b mukaisesti seoksessa, jossa on 100 ml ja 30 ml THF, 5,5 g:n (63,4 mmol) kanssa mangaani-(IV)-oksidia yön yli huoneen lämpötilassa. Saanto 1,45 g (89 %).

25 C8H5NOS (163.2) NMR (DMSO): 6 * 7,66 (dd, 1H), 8,08 (d, 1H), 8,5 (s, 1H), 9,93 <*, 1H), 10,18 (t. 1H) ppm.

d) 5-(2,1-bentsisotiatsol-6-yyli)-2,4-imidatsolidii-30 nidioni (10b) 18,6 g (0,114 mol) 10c-tuotetta hämmennetään esimerkin 1c mukaisesti etanolin, metanolin ja veden seoksessa 8,4 g:n (0,171 mol) kanssa natriumsyanidia ja 43,8 g:n (0,456 mol) kanssa ammoniumkarbonaattia 16 tuntia 60°C:ssa. 35 Saanto 19,8 g (75 %) .

50 85025 C1QH7N302S (233,2)

Laskettu: C 51,49 H 3,02 N 18,01 S 13,74 Saatu: C 50,6 H3,2 N 18,0 S 13,2 NMR (DMSO): 6 * 5,38 (s, 1H>, 7,25 (dd, 1H), 7,80 (s, 5 1H), 7,98 (d, 1H), 8,57 (*, 1H), 9,81 (s , 1H), 10.96 (s, 1H) ppm.

e) DL-a-amino-OC- (2,1 -bentsisotiatsol-6-yyli) etikka-happo (10e) 10 16,5 g (0,071 mol) 10d-tuotetta kuumennetaan esimer kin 3e mukaisesti 17,0 g:n (0,171 mol) kanssa litiumhydrok-sidia 250 ml:ssa vettä 20 tuntia palautusjäähdyttäjää käyttäen. Saanto 12,1 g.

C9HqN202S (208,2; sisältää 12 % LiCl, 4,7 % HC1 ja 8,8 % 15 H20).

Laskettu: C 37,7 H 2,8 N 9,8

Saatu: C 37,7 H 4,2 N 10,4 Cl 14,7 Li 2,0 NMR (DMSO): δ 4,5 <*, 1H), 7,42 (dd. 1H), 7,86 (*, 1H), 7,9 (e, 1H), 9,8 <*. 1H) ppm.

20 f) DL-Ä-t-butyylioksikarbonyyliamino-ö(- (2,1 -bents-isotiatsol-6-yyli)etikkahappo (1 Of) 8,2 g (39,4 mmol) 10e-tuotetta hämmennetään esimerkin 3e mukaisesti 17,2 g:n (78,8 mmol) kanssa di-tert-25 butyylidikarbonaattia ja 6,64 g:n (79 mmol) kanssa natrium-vety karbonaattia seoksessa, jossa on 140 ml vettä ja 140 ml dioksaania, yön yli huoneen lämpötilassa. Saanto 6,8 g (56 %? etikkaesteri/petrolieetteri).

C14H16N204S (308.4) NMR (DMSO): δ * 1,41 (s, 9H), 5,32 (d, 1H>, 7,38 (d, 1H), 7,78-7,85 (s ja d, 2H), 7,94 (d, 1H),9,8 (s, 1H) ppm.

si 85025 g) DL-7-(2,1-bentsisotiatsol-6-yyliglysyyliamido)-3-metyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappo (10 g) 2 g (6,5 mmol) 10f-tuotetta reagoitetaan esimerkin 3f mukaisesti seoksessa, jossa on 32 ml CH2Cl2 ja 2 ml THF, 5 1,13 ml:n (6,5 mmol) kanssa etyyylidi-isopropyyliamiinia, 0,503 ml:n (6,5 mmol) kanssa metaanisulfonyylikloridia ja 1,76 g:n (6,5 mmol) kanssa 7-amino-3-metyyli-3-kefeemi-4-karboksyylihappo-t-butyyliesteriä, joka liuotetaan 32 ml:aan CH2C12 yhdessä 1,13 ml:n (6,5 mmol) kanssa etyylidi-isopro-10 pyyliamiinia. Saanto 3 g (83 %).

C26H32N4°6S2 (560'7) 2,9 g:sta (5,17 mmol) Bocjllä suojattua kefalospo-riinia poistetaan suojaus esimerkin 3f mukaisesti ja muutetaan betaiiniksi Amberlita IRA-68:n (asetaattimuoto) 15 avulla. Saanto 1,3 g (57 %).

C17H16N4°4S2 '2H2° (440-5> NMF (DCOOD): 6 * 2.17 <d. 3H>. 3.21-3.64 (mm. 2H). 5,16- 5,25 (dd. 1H), 5,76-5,86 <dd, 1H), 5,8 (d, 1H>, 7,59 (d, 1H), 8.14-8,20 (q, 20 1H), 8,26 (s, 1H), 9,88 (s, 1H) ppm.

Esimerkki 11 DL-6-(indolyyli-4-glysyyliamido)penisillaanihappo 25 ^VCH-CO-NH^_/ CH> JS -

^ COOH

a) DL-dt-bentsyylioksikarbonyyliamino-OC-indolyyli-4-30 etikkahappo (11a) 10g(44,2 mmol) 4b-tuotetta suspendoidaan 200 ml:aan H20 ja pH säädetään 2N natronlipeällä arvoon 9. Kirkas liuos jäähdytetään 5°C:seen ja siihen lisätään tipoittain 9,8 ml (69 mmol) kloorimuurahaishappo-bentsyyliesteriä 30 minuu-35 tin kuluessa lisäämällä samanaikaisesti 2N natronlipeää (pH 8-10). Kahden tunnin hämmentämisen jälkeen 20°C:ssa 52 8 5025 (pH 9,0) uutetaan kertaalleen eetterillä, vesifaasi hapo-tetaan 2N HClrllä pH-arvoon 2 ja uutetaan etikkaesteril-lä. Keittosuolaliuoksella suoritetun pesun, NajSQ^in avulla suoritetun kuivauksen ja etikkaesterin poistislauksen 5 jälkeen jäännös kiteytetään eetteri/petrolieetteriseokses-ta. Saanto 11,9 g.

C18H15N2°4 (323·3> NMR (DMSO): 6 « 5,07 (s, 2H), 5,56 (d, 1H>. 6,55 (s.

1H), 7,0-7,12 <m, 2H) , 7,34-7,42 (in.

10 7H), 8,03 (d, 1H). 11,24 <$, 1H) ppm.

b) DL-6-/"2-(bentsyylioksikarbonyyliamino) indolyyli- 4-glysyyliamidq7penisillaanihappo (11b) 5 g (15,5 iranol) 11a-tuotetta reagoitetaan esimerkin 15 4d mukaisesti seoksessa, jossa on 50 ml THF ja 25 ml DMF, 2,17 ml:n (15,5 mmol) kanssa trietyyliamiinia, kolmen tipan kanssa N-metyylimorfoliinia, 1,49 ml:n (15,5 mmol) kanssa kloorimuurahaishappoetyyliesteriä ja 3,7 g:n (17,1 mmol) kanssa 6-aminopenisillaanihappoa, joka suspendoidaan 20 seokseen, jossa on 30 ml ^0 ja 50 ml THF ja saatetaan liukenemaan 0,5N natronlipeän avulla. Saanto 5,9 g (73 %).

C26H26N4°6S <522'6)*

Laskettu: C 59,3 H 5,0 N 10,7 S 6,1 Saatu: C 58,9 H 5,4 N 9,6 S5,3 25 c) Natrium-DL-6-(indolyyli-4-glysyyliamido)penisil- lanaatti (11c)

Suspension läpi, joka sisältää 20 g palladiummustaa 200 ml:ssa vettä, saatetaan virtaamaan tunnin ajan vetyä ja joukkoon lisätään tämän jälkeen 5,7 g (10,9 mmol) 1b-tuo-30 tetta, joka sitä ennen muutetaan asetoni/vesiseoksessa 0,1N natronlipeän avulla natriumsuolaksi. Suspensiota huuhdellaan kahden tunnin ajan vedyllä, sen jälkeen katalysaattori erotetaan, pestään vedellä ja suodos haihdutetaan kuiviin. Jäännös liuotetaan veteen, liuoksen pH säädetään 2N 35 HCl:llä arvoon 1,8 ja uutetaan etikkaesterillä. Vesifaasi kuivataan jäädyttämällä, lyofilisaatti suspendoidaan 53 85025 300 ml:aan Cl^C^r jäähdytetään -10°C:seen ja joukkoon lisätään 2,9 ml trietyyliamiinia. Liuos kuivataan Na2SO^:n avulla ja suodosta käsitellään 12 ml:n kanssa natrium-2-etyyli-heksanoaatin 1M liuosta eetteri/metanoliseoksessa.

5 Eetterin lisäyksen jälkeen saostuu sakkaa, joka erotetaan imusuodattimella ja kuivataan tyhjössä. Saanto 0,4 g.

C18H19NNa04S

NMR <DMSO): 6 * 1.56 <dd. 6H> . 3.96 <d. 1H>. 4.81 (d.

1H). 5.46 (dd. 2H>. 6.63 (m. 1H>. 6.97-10 7.08 (m. 2H). 7,31-7.36 (m. 2H). 8.77 (leveä s. 1H) 11.24 (leveä *· 1H)

Dpm.

Claims (5)

54 85025

1 I 16 1 I I 16 R - C* - COOH T-S0o-R ° R -C*-C-0-C0o-R | 2)2

15 N --» N / \ 2 / \ 2 H RZ IVa H RZ II Va 20 CHq 0 I 3 II ch3 - C - C - Cl CHq H 0 CH0 3 il II I 3 tai -> R-C*-C-0-C-C - CH0 I I 3

25 IVb N CHo s \ 2 J H x ΈΓ Vb 30 jossa symbolilla R1 on patenttivaatimuksessa 1 esitetty merkitys, R2 merkitsee aminosuojaryhmää, T merkitsee ryhmää R16-S02-0 tai halogeenia ja R16 merkitsee alkyyliä (C^C^), joka mahdollisesti on 35 substituoitu fluorilla, kloorilla, syanolla, fenyylillä, C^-C^-alkyylillä, (^-C^-alkoksilla tai C^-C^-alkyylitiolla 57 85025 tai mahdollisesti fluorilla, kloorilla, bromilla, syanol-la, Cj-C^-alkyylikarbonyylillä, nitrolla, trifluorimetyy-lillä tai fenyylillä substituoitua fenyyliä.

1. I ' 10 r2 coor4 jossa

15 R5 merkitsee vetyä, halogeenia tai suoraketjuista, haarautunutta tai syklistä, tyydyttynyttä tai tyydyttymätön-tä alkyyliä, jossa on enintään kuusi C-atomia, R1 merkitsee ryhmää, jolla on kaava 20 JOO · jox; J3q 25 ^/Rl0 .. J00(. ' jXi *V* Rn I H : ; 30 joissa R6 ja R7 ovat samanlaisia tai erilaisia ja merkitsevät vetyä, C6-C10-aryyliä, aminoryhmää tai hydroksiryhmää, Y merkitsee happea tai ryhmää -NH, 35. merkitsee happea, rikkiä tai ryhmää -NH, 55 ö5025 R10 A merkitsee ryhmää tai R10 ja R11 ovat samanlaisia tai erilaisia ja merkitsevät 5 vetyä tai alkyyliä, jossa on enintään 12 C-atomia, R2 merkitsee vetyä tai β-laktaamikemiassa tavanomaista aminosuojaryhmää, ja R4 tarkoittaa vetyä tai β-laktaamikemiassa tavanomaista karboksisuoj aryhmää, 10 tunnettu siitä, että yhdisteet, joilla on yleinen kaava (Ha) H i I R - C* - COOH (Ha)

15 N H7 V jossa symbolilla R1 on edellä esitetty merkitys ja jossa R2 merkitsee aminosuojaryhmää, 20 saatetaan karboksyyliryhmän aktivoinnin jälkeen, joka suoritetaan muuttamalla seka-anhydridiksi, mesylaatiksi muuttamisen jälkeen tai aktivoiduksi esteeriksi muuttamisen jälkeen, reagoimaan yhdisteiden kanssa, joilla on yleinen kaava III 25 (III) 30 COOR4 jossa symboleilla R4 ja R5 on edellä esitetty merkitys,

35 Jonka jälkeen suojaryhmät mahdollisesti lohkaistaan ja valmistetaan halutut suolat tai halutuista suoloista vapaat hapot. 56 8 5025

1. Menetelmä yleisen kaavan (I) mukaisten β-lak-taamiyhdisteiden valmistamiseksi, 5 Rl \ H \ CH-CONH--X X NH (I) NH CT T R5

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että aktivoidaan yleisen kaavan (II) mukaiset aminohapot, ja sen jälkeen kytketään ne yleisen kaavan (III) mukaisten β-laktaamien kanssa, jotka 5 on saatettu liuokseen amiinin kanssa muodostettuina suoloina.

3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että aktivointi pivaliinihappo-kloridin (IVb) tai kaavan (IVa) mukaisten sulfonihappo- 10 johdannaisten kanssa kaavojen (Va) ja (Vb) mukaisiksi an-hydrideiksi suoritetaan seuraavan reaktiokaavion mukaan H HO

4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen mene-5 telmä, tunnettu siitä, että reaktio suoritetaan dietyylieetterissä, tetrahydrofuraanissa, asetonitriilis-sä, asetonissa, metyleenikloridissa, kloroformissa tai dimetyyliformamidissa.

5. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukainen mene-10 telmä, tunnettu siitä, että reaktiot suoritetaan lämpötiloissa, jotka ovat välillä -30 - +100°C. 58 85025