FI85708B - Foerfarande foer framstaellning av nya -laktamantibiotika. - Google Patents

Description

C Ξ 708

Menetelmä uusien β-laktaamiantibioottien valmistamiseksi

Keksintö koskee menetelmää uusien β-laktaamiantibioottien valmistamiseksi. Näitä yhdisteitä käytetään 5 lääkeaineina ja lääkeaineissa, erityisesti antibakteeri- sina, suun kautta vaikuttavina antibiootteina.

On tunnettua, että 7-a-aminoasyylikefalosporiinien eri edustajilla, jotka sisältävät erilaisia substituent-teja molekyylin 3-asemassa, on antibioottinen vaikutus, 10 kuten esimerkiksi kefaleksiinilla [7-(D-a-fenyyliglysyy- liamido)-3-metyyli-3-kefemi-4-karboksyylihapolla], kefa-kloorilla [7-(D-a-fenyyliglysyyliamido)-3-kloori-3-kefe-mi-4-karboksyylihapolla] (vrt. GB patentti 1 174 335; saksalaiset patenttijulkaisut 2 408 698 ja 2 728 578).

15 Edelleen tunnetaan joukko antibioottisesti vaikut tavia a-aminopenisillaanihappoja, esim. ampisilliini (englantilainen patenttijulkaisu 938 321) ja amoksisil-liini (englantilainen patenttijulkaisu 1 339 605).

Keksinnön kohteena on menetelmä yleisen kaavan (I) 20 mukaisten β-laktaamiyhdisteiden valmistamiseksi,

HO H

1 i * « o R - C - C - NH__ A 2 oA-nA\ r5 (I)

• : : 25 H Nr ^ y \ R

COOR4 jossa .*·*. R5 on vety, halogeeni, tai suoraketjuinen, haarautunut tai syklinen, tyydytetty tai tyydyttämätön, korkeintaan 7 I" 30 C-atomia sisältävä alkyyli, R1 on ryhmä :« ·*·

^ N

35 I

H

1.3 7 08 2 jolloin Y on N tai CR9, tai Y-R7 on = 0 tai = N-R7, Z on O, S tai NR10, R7 on vety, suoraketjuinen, haarautunut tai syklinen, 5 tyydytetty, korkeintaan 10 C-atomia sisältävä alkyyli, joka on mahdollisesti substituoitu halogeenilla, tai amino, R8 on vety tai alkyyli, jossa on 1-8 C-atomia, R9 merkitsee samaa kuin R7 ja tämän lisäksi se on halo-10 geeni, C^Cg-alkoksi, Cj-Cg-alkyylitio, mahdollisesti substituoitu aminoryhmä, S02-Cj-C8-alkyyli, -PO(OH)2, S03H tai S02NH2, SH, OH, S-fenyyli, tai 0-£enyyli, guanidino, amidino, -NHNH2 tai NHOH, mahdollisesti substituoitu he-terosyklyyli tai O-heterosyklyyli tai S-heterosyklyyli, 15 R10 merkitsee samaa kuin R6, tai R9 ja R10 merkitsevät yhdessä mahdollisesti hapella tai rikillä katkaistua C2-C4-metyleeniketjua, R2 on vety tai β-laktaamikemiassa tavanomainen aminosuo-jaryhmä, ja 20 R4 on vety tai β-laktaamikemiassa tavanomainen karboksi-suoj aryhmä.

Mahdollisesti substituoitu aryyli on edellä olevassa määritelmässä yhden - kolme kertaa, edullisesti yhden - kaksi kertaa, samalla tavalla tai eri lailla subs-• 25 tituoitu fenyyli, jolloin substituentteina tulevat kysee seen alkyyli, alkyylitio, alkoksi, joissa on kulloinkin 1-4, edullisesti 1-2 C-atomia, halogeeni, edullisesti fluori, kloori, bromi, nitro, 1 syano, hydroksi, amino, trifluorimetyyli, trifluorimetyylitio tai trlfluorimetok-30 si.

Mahdollisesti substituoitu aminoryhmä merkitsee määritelmässä ryhmää, ;·*;; ^ R1 1 *-35 · · I 3 7 O 8 3 jolloin 11 12 R , R ovat samanlaisia tai erilaisia ja merkitsevät vetyä, aryyliä, edullisesti fenyyliä, C^-Ce-alkyyliä, edullisesti Cj-Cg-alkyyliä, 5 C7-C14-aralkyyliä, edullisesti bentsyyliä, tai C2-C10-asyyliä, edullisesti asetyyliä tai bentsoyyliä.

Jos R2 on aminosuojaryhmä, niin silloin se on edullisesti helposti lohkaistava aminosuojaryhmä, kuten 10 esim. tert.-butoksikarbonyyli (Boc), trityyli (Trt), bentsyylioksikarbonyyli (Z), formyyli, klooriasetyyli tai 1-metyy1i-2-etoksikarbonyy1i-vinyyli.

Jos R* on karboksisuojaryhmä, niin silloin se on edullisesti β-laktaamikemiassa tavanomainen suojaryhmä, 15 edullisesti tert.-butyyli, dekyyli, 2,2,2-trikloorietyy-li, bentsyyli, 4-metoksibentsyyli, 4-nitrobentsyyli, tri-tai difenyylimetyyli, asetoksimetyyli, allyyli tai tri-metyylisilyyli.

Käsite heterosyklyyli merkitsee tyydytettyjä ja 20 tyydyttämättömiä heterosyklejä, joissa on 1-4 typpi- ja/tai happiatomia- ja/tai rikkiatomia, edullisesti pyr-rolyyliä, pyrrolidinyyliä, pyratsolyyliä, imidatsolyyliä, pyridyyliä, pyridatsinyyliä, pyrimidyyliä, pyratsinyyliä, kinolyyliä, isokinolyyliä, indolyyliä, kinoksalyyliä, ki-- 25 natsolyyliä, piperidinyyliä, morfolinyyliä, piperatsinyy- liä, tiomorfolinyyliä, furyyliä, tienyyliä, oksatsolyy-liä, tiatsolyyliä, isoksatsolyyliä, tiadiatsolyyliä, tri-atsolyyliä tai tetratsolyyliä.

Jos heterosyklit ovat substituoituja, niin tällöin 30 ne on substituoitu yhden - kolme kertaa, edullisesti yksi - kaksi kertaa samalla tavalla tai eri tavalla alkyy-lillä, alkyylitiolla, alkoksilla, joissa on kulloinkin 1-4, edullisesti 1-2 C-atomia, halogeenilla (edullisesti fluorilla, kloorilla, bromilla), nitrolla, syanolla, hyd-35 roksilla, aminolla, trifluorimetyylillä, trifluorimetok- silla tai trifluorimetyylitiöllä.

4 ι:, o e

Kaavan I mukaiset yhdisteet voivat esiintyä vapaina happoina, estereinä, sisäisinä suoloina tai happamien karboksyyliryhmien myrkyttöminä, farmaseuttisesti hyväksyttävinä suoloina, kuten natrium-, kalium-, magnesium-, 5 kalsium-, aluminium- tai ammoniumsuoloina ja myrkyttöminä substituoituina ammoniumsuoloina, jotka on muodostettu amiinien kanssa, kuten di-, tri-alempi-alkyyliamiinien, porkaiinin, dibentsyyliamiinin. N,N'-dibentsyylietyleeni-diamiinin, N-bentsyyli-p-fenyylietyyliamiinin, N-metyyli- 10 ja N-etyylimorfoliinin, 1-efeeniamiinin, dehydroabietyy-liamiinin, N,N'-bis-dehydroabietetyylietyleenidiamiinin, N-alempialkyylipiperidiinin ja muiden amiinien kanssa, joita voidaan käyttää penisilliinien ja kefalosporiinien suolojen muodostukseen.

15 *:llä merkityn asymmetrisen hiiliatomin läsnäolon johdosta käsittävät uudet, kaavan I mukaiset -laktaamian-tibiootit myös D-, L-, ja D,L-muodot. Edullisena pidetään yleisen kaavan 1 mukaisten, keksinnönmukaisten yhdisteiden D-muotoja.

20 Sekä keksinnönmukaisten yhdisteiden diastereomee- riseoksia että myös D-muotoa ja L-muotoa voidaan käyttää bakteerien aiheuttamien infektiotautien hoitamiseksi.

Yleisen kaavan I mukaisia yhdisteitä saadaan, jos yhdisteiden, joilla on yleinen kaava Ha, • 25

H

;v:. r1 - i* - C00H (IIa)

N

a • 30 H R* jossa R1 merkitsee samaa kuin edellä ja jossa R2 on ami-nosuojaryhmä, annetaan reagoida, sen jälkeen kun karbok-: syyliryhmä on aktivoitu muuttamalla seosanhydridiksi, .....: 35 esimerkiksi pivaloyylikloridilla, kloorimuurahaishappo- I :708 5 etyyli- tai isobutyyliesterillä, sen jälkeen kun on muutettu mesylastiksi metaanisulfonihappokloridin avulla tai sen jälkeen, kun on muutettu aktivoiduksi esteriksi, esimerkiksi 1-hydroksibentstriatsolilla ja disykloheksyyli-5 karbodi-imidillä, yhdisteiden kanssa, joilla on yleinen kaava III,

H

h2n_L/S.

10 (III> COOR4 jossa R5 ja R4 merkitsevät samaa kuin edellä, sitten mah- 15 dollisesti lohkaistaan suojaryhmät ja valmistetaan halutut suolat tai suoloista vapaita happoja.

Kaavan II mukaisten aminohappojen kytkemiseksi kaavan III mukaisiini’-laktaameihin voidaan käyttää lukuisia, kefalosporiini- tai penisilliinikemiasta tunnettuja 20 menetelmiä.

On osoittautunut edulliseksi aktivoida yleisen kaavan II mukaiset aminohapot ja sitten kytkeä yleisen kaavan lii mukaisiin β-laktaameihin, jotka saatettiin liuokseen amiinin kanssa muodostettuina suoloina.

· 25 Erityisen edullisena pidetään sitä, että aktivoin ti kaavan Va ja Vb mukaisiksi anhydrideiksi tapahtuu pi-valiinihappokloridilla tai kaavan IV mukaisilla sulfoni-happojohdannaisi11a.

3o h ho : I T-so2_R13 I '1 R1 -C-C00H -*> R1-C-C-0-S02-R13 I UV) 1

N N

35 H R2 H R2 (Ila) (Va) 6 ί. 3 7 O 8 tai

ru H O O CH

5 · 3 ? I i II I 3 CH3-C-C-Cl R1 -C-C-O-C-C-CH3 1 * 3

(11 a )-— 3-> N CH

H R2 < Vb ) 10 jolloin R1 merkitsee samaa kuin edellä R2 on aminosuojaryhmä, T on ryhmä R13-S02-0 tai halogeeni, ja 13 R on C1-C10-alkyyli, joka on mahdollisesti substituoitu 15 fluorilla, kloorilla, syanolla, fenyylillä, Cj-C*- alkyylillä, Ci-C^-alkyylitiolla, tai mahdollisesti fluorilla, kloorilla, bromilla, syanolla, Cx-C4-al-kyylillä, Cx-C4-alkoksilla, Cx-C4-alkyylitiolla,

Cx-C4 alkyylikarbonyylillä, nitrolla, trifluorime-20 tyylillä substituoitu fenyyli.

Jos R13 on substituoitu, esiintyy edullisesti 1-3 substituenttia, edullisesti edellä mainitut.

Aivan erityisen edullisesti R13 merkitsee metyyli-tai p-tolyyliryhmää.

•25 Kaavan Va mukaisia seosanhydridejä valmistetaan *:· siten, että kaavan II mukaiset hapot ja 1 - 1,4 ekviva- lenttia amiinia liuotetaan liuottimeen ja annetaan rea-.···. goida 1-1,2 ekvivalentin kaavan IV mukaista sulfonihap- pojohdannaisen kanssa.

I'! 30 Liuottimiksi soveltuvat kaikki liuottimet, jotka • * · ovat reaktio-olosuhteissa stabiileja, kuten esim. dietyy-lieetteri, tetrahydrofuraani, asetonitriili, asetoni, me-*: tyleenikloridi, kloroformi tai dimetyyliformamidi.

:.· : Amiiniksi soveltuvat tertiääriset amiinit, kuten 35 esim. trietyyliamiini tai tributyyliamiini, mutta myös • » 7 t: v o 8 steerisesti estyneet sekundääriset amiinit, kuten di-iso-propyyliamiini.

Reaktiot voidaan suorittaa -80°C:een ja huoneenlämpötilan välisessä lämpötilassa, edullisesti 5 -60°C:ssa - 0°C:ssa. Aktivointi suoritetaan edullisesti

Cl-S02-CH3:lla dimetyyliformamidissa -40°C:ssa --60°C:ssa 0,2 - 24 tunnin sisällä, edullisesti 0,5-5 tunnin sisällä.

Kaavan III mukaisten yhdisteiden liuottamiseksi 10 voidaan käyttää kaavan V mukaisten yhdisteiden valmistuksessa mainittuja liuottimia sekä emäksenä tuolloin mainittuja amiineja.

Erityisen edullisesti suoritetaan myös yleisen kaavan II mukaisten happojen aktivointi muuttamalla ak-15 tiiviseksi esteriksi esimerkiksi N-hydroksisukkinimidillä ja disykloheksyylikarbodi-imidillä tai 1-hydroksibents-triatsolilla ja disykloheksyylikarbodi-imidillä.

Liuottimiksi soveltuvat kaikki liuottimet, jotka soveltuvat myös kaavan V mukaisten anhydridien valmistuk-20 seen.

Reaktiot voidaan suorittaa -30°C:een ja +100°C:een välisessä lämpötilassa. Edullisesti aktivoidaan 1-hydroksibentstriatsolilla ja disykloheksyylikarbo-di-imidillä dimetyyliformamidissa huoneenlämpötilassa - 25 2 - 6 tunnin ajan, sitten imusuodatetaan erilleen saostu neesta disykloheksyyliureasta ja annetaan reagoida kaavan III mukaisen yhdisteen kanssa sen amiinisuola-liuoksen muodossa 2-24 tunnin aikana. Kaavan III mukaisten yhdisteiden liuottamiseksi voidaan käyttää kaavan V mukais-30 ten yhdisteiden valmistuksessa mainittuja liuottimia sekä emäksenä siinä mainittuja amiineja.

Amino- ja karboksyylisuojausta sekä karboksyyli-aktivointia käsittelevää kirjallisuutta: M. Bodanszky, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, 1984.

35 E. Gross, J. Meienhofer, The Peptides Voi. 2. Academic Press, 1980.

8 ι:' o s

Kaavan I mukaisten, keksinnönmukaisten yhdisteiden stereokemiallisesti yhtenäisiä D- tai L-muotoja saadaan, kun diastereomeeriseokset erotetaan esimerkiksi käyttäen Merck'in, DuPont'in tai Whatman'in HPLC-pylväitä.

5 Toisaalta saadaan puhdas D- tai L-muoto (edulli sesti D-muoto), jos jo kaavan II mukaisen raseemisen aminohapon vaiheessa suoritetaan kemiallinen rasemaattien lohkaisu, esimerkiksi dehydroabietyyliamiinilla, fenyyli-etyyliamiinilla tai kamferisulfonihapolla, tai suoriteli) taan rasemaattien lohkaisu esimerkiksi N-asetyyli-amino-happojohdannaisten kautta, esim. subtilisiinillä, peni-silliiniasylaasilla tai sianmunuaisen asylaasilla, ja lopuksi kaavan II mukaisten yhdisteiden stereokemiallisesti yhtenäisten D- tai L-muotojen annetaan reagoida ilmoite-15 tulla tavalla.

Yleisen kaavan II mukaiset yhdisteet ovat ainoastaan osittain tunnettuja. Kaavan II mukaiset yhdisteet voidaan syntetisoida kirjallisuudesta tunnettujen menetelmien mukaisesti, kuten kaaviossa 1 esitetään, jolloin 20 kaavan VI mukaiset yhdisteet ovat tärkeimpiä avainyhdis- teitä uusille, kaavan II mukaisille aminohapoille.

9 .. .

ι.; os

Kaavio 1

R^COOR14 VI

Pelkistys DIBAL (Vaihe 1)

R ^-CH2OH VII

5 Hapetus Mn02 (Vaihe 2) R *-CHO Vili

Hydantoii- <NH4>2C03 (Vaihe 3)

nin muo- .. j , NaCN

dostus 10 ψ

H O

KN NH IX

15 Y

O

Hydrolyysi Ba<OH>2, NaOH, LiOH (Vaihe 4) HBr tai H2S04 20 v * R1 - CH - COOH I Ib ^h2 . .·. R :llä on edellä ilmoitettu merkitys, : 14 R on C.-C.-alkyyli.

.‘/'25 1

Esterien pelkistystä alkoholeiksi di-isobutyyli-aluminiumhydridillä (DIBAL) ja natrium-bis(2-metoksietoksi) . aluminiumhydridillä (Red A1) (vaihe 1) on kuvattu kirjalli- • - suudessa: E. Winterfeld, Synthesis 1975, 617; A.E.G. Miller 3Q et ai., J. Org. Chem. 24, 627 (1959).

Primääristen alkoholien hapetus mangaani(IV)-oksidilla tai pyridiniumkromaatilla aldehydeiksi (vaihe 2) on kuvattu kirjallisuudessa: "Methoden der Organischen Chemie, Houben-Weyl, Band 4/1b; .- '35 G. Piancatelli et ai., Synthesis 1982, 245.

10 1 3 708

Uusia, kaavan Hb mukaisia aminohappoja saadaan, kun aldehydien annetaan reagoida natriumsyanidin ja ammo-niumkarbonaatin kanssa kirjallisuudesta tunnettujen menetelmien mukaisesti /E. Ware, Chemical Reviews 46, 403, (1950).7 5 (vaihe 3) ja lopuksi hydrolysoidaan 10 %:sella natronlipeäl-lä, 48 %:sella bromivetyhapolla, bariumhydroksidi- tai litiumhydroksidiliuoksella (vaihe 4).

Seuraavassa kuvataan esimerkkinä joidenkin uusien, yleisen kaavan II mukaisten aminohappojen tai niiden esi- 9 14 10 vaiheiden valmistusta, jolloin R - R merkitsevät samaa kuin edellä on ilmoitettu.

1) Bentstiätsolyyli-glysiinit:

Substituoitujen bentstiatsolyyli-glysiinijohdannaisten synteesissä käytettävä lähtöaine on o-, m- tai p-amino-15 bentsoehappoesteri. Bentstiatsoli-karboksyylihappojohdannai-sia valmistetaan esimerkiksi seuraavan synteesikaavion mukaisesti :

Kaavio 2 le 708 11 COOCjK»

5 Br j/Jääetikka ^SCN

Ψ H ; N—^ COCC j H i 10 / MCS v

Na sS * 9 H j O / \ l'3» COj (1 0%:sta) / \ 100° 15 y/ \ H j — C OOC j H s N—L /)— COCCjHs h7 JL /

20 HS HjN S

R*COX

::: v ::: 25 N —COO C ;H j Λ s' R° 30 Kirjallisuus: J.L. Wood, Substitution and Addition

Reactions of Thiocyanogen, Organic Reactions, Vol. III, 240 (1964); M.T. Bogert et. al., J.Am. Chem. Soc. 47, 3078 (1925); M.T. Bogert, J.am. Chem. Soc. 57, 1529 (1935); ..... J.M. Spraque et al., Thiazoles and Benzothiazoles, '25 Heterocyclic Compounds, Vol. 5, 484 (1957), J. Wiley & Sons. Lähtöaineena substituoitujen bentstiatsolyyli-glysiini-johdannaisten synteesille on myös oC-amino-cC-(p_aminof enyyli) -etikkahappoesteri:

Kaavio 3 12 l 3 708 CH-COOCH, NH-COCH , 5

Br j /Jääetikka KSCN

V

H, N CH-COOCH, 10 v V 1 )- NH-CO-CH,

/NCS

\NaaCO, (10 %:sta)

\ 100°C

H, N CH-COOCH, N—U/)“ CH-COOCH 3 )— NH-COCH, 11 NH-COCH j

HS H>N

R1CCX 6 N HC1

20 y Y

N \\ V CH_C00CH3 N"\\ // CH-COOH

• ·'· ([c/ ^ NH-CO-CH j JLc'' NHj "Y25 r1 " h3n « « i3 to 708 2) Bentsimidatsolyyli-qlysiinit

Substituoitujen bentsimidatsolyyli-glysiinijohdannaisten synteesissä käytettävä lähtöaine on esimerkiksi 3,4-diaminobentsoehappo. Substituoituja bentsimidatsolikar-5 boksyylihappoestereitä valmistetaan esimerkiksi seuraavan synteesikaavion mukaisesti:

Kaavio 4 "rt-s-O"”0*’' r'VCH-‘ 10 X s' A s'

r* N t- N

"v BrCN s\ N. Oder /

R*COX / R *CHO

tai / \r’cooh /

15 X

R tl /=\ HN —Λ Λ- COOR1 4 h2n 2° \ CS>^R,'“'

cr \RlI

C=N-CN / K

HiN / ^ l/ 'X25 S.’-Q-COOR’·

C-NH *N ^ N

^ H j N j*1 3 :.:.·30 Kirjallisuus: P.N. Preston, Chemical Reviews 74, 279 (1974); R. Rastogi et ai., Synthesis 1983, 861; P.N. Preston, : Benzimidazoles and Congeneric Tricyclic Compounds, :**; Heterocyclic Compounds, Vol. 40, I and II, J. Wiley & Sons (1980, 1981 ) .

to 708 14 3) Bentsoksatsolyyli-qlysiinit

Substituoitujen bentsoksatsolyyli-glysiinijohdannaisten synteesiin käytetään lähtöaineena 3-amino-4-hydroksi-bentsoehappo, 3-hydroksi-4-aminobentsoehappoa ja D-ct-amino-5 (3-amino-4-hydroksifenyyli)etikkahappometyyliesteriä. Uusia liittyneitä fenyyliglysiinijohdannaisia ja substituoituja bentsoksatsolikarboksyylihappojohdannaisia valmistaan esimerkiksi seuraavan synteesikaavion mukaisesti:

Kaavio 5 1 0 /—v CH-COOCH j HjN COOCH3 )—' NH-CO-CHj /

H: N , S HO

|R1 -CX

15 ^ 20 CH-COOCH 3 C°CCH 1

O )-' NH-COCH 3 HCJ

, U

R1-C-HN

• 1 . 2.4 - triklooribentseeni p-tolueenisulfonihappo ... . 25

V

• M

:1·'· 0-<\ //1CH-COOCH3 zP™· 30 R R1 ^

Kirjallisuus: J.W. Cornforth, Benzoxazoles and Related Systems, Heterocyclic Compounds, Voi. 5, 418, J. Wiley & Sons (1957); R. Lakham et ai., Advances in Oxazole

* 1 1 S

• _ Chemistry, Advances in Heterocyclic Chemistry, Voi. 17, 99, [ ‘ Academic Press (1974).

· 1 is t· o /08 4 Bentstriatsolyyll- ja bentstiadiatsolyyli-glysiinit

Substituoitujen bentstriatsolyyll- ja bentstiadi-atsolyyliglysiinien synteesiin käytetään 3,4-diamino-bentsoehappoa ja p-aminobentsoehappoetyyliesteriä lähtöai-5 neena. Uusia bentsokondensoituja karboksyylihappoja tai -estereitä valmistetaan esimerkiksi seuraavan synteesikaa-vion mukaisesti:

Kaavio 6 10 HiN-^J^COOCH, HlN_^)_CCCn

O jN

CHjCOGH S2C12 I

R1 °-X

15 * V

COOCH jCl” R1 CCOH

S-N OjN

20 NaNOj HjSO* PtO j/Hj v v

C00CH 3 R' ° C00H

"i:!25 H 2N

: HC1 NaNOj

V

:V:30 R- K_-^VcOCH

I S

"N

: Kirjallisuus: J.B. Carr, J. Heterocyclic Chem.

9, 1 149 (1972).

35 13 708 16

Seuraavia, kaavan III mukaisia kefalosporiinln perusrakenteita käytetään kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistukseen.

(R4 ja R5 merkitsevät samaa kuin edellä on ilmoitettu).

5 Kefalosporllni-perusrakenne (III) Käytettyjä kefalosporiinln perusrakenteita, 7-ami-no-3-metyyli-3-kefemi-4-karboksyylihapon (7-ACCA), 7-ami-no-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihapon (7-ACCA), 7-ami-no-3-metoksi-3-kefemi-4-karboksyylihapon johdannaisia, 10 joita on kuvattu julkaisuissa "J-Med. Chem. 12, 310 (C.W. Ryan et ai., 1969)", US patentissa 3 994 884 ja saksalaisessa patenttijulkaisussa 2 606 196, kuvataan seuraavilla kaavoilla:

H

15 hjnV_>. dii)

Ri C00R* 20 R4 R5 H CH3 : t-butyyli CH^ ·:· 25 H Cl • · · _ cl

H H

• · « 30 trimetyylisilyyli Br H Cl / t-butyyli CH^ *·' t-butyyli CH^ ;··· H (tai bentshydryyli) CH-CI^ ;···. 35 H (tai bentshydryyli) CH=CH-CH3 (cis) •:: 08 17

Aivan erityisen edullisena pidetyt kaavan I mukaiset yhdisteet on esitetty valmistusesimerkeissä ja seu-raavissa taulukoissa:

Kefalosporiinit (taulukko 1, 2).

5 H

2^/\ Λ- CH-CO-NH J.S .

R9 OI

10 Z = NH, 0, S COCR*

Taulukko 1 , c n - R4 R5 R9 H Cl [> 20 H C„3

H?N

H Cl ^C-NH- 25 H2N^ H^N.--- H C~H C-NH- : 30 J HN^*^ : : : CHq___

Na Cl * N- 35 CH3^^ ‘ : CH~,_ H CH_ J ^ N- 40 CH3^-^ CH«—„ H -CH=CH9 N- 45 CH3^"^ 5 1.3 708 18 R4 R5 R9 H Cl f/ λ N )- 10 /-\ H CH3 /Λ_ 15 /—, /Π^' allyyli Cl \ ,N~

Cl -O-0H

25 H -CH=CH2 (T^y H Cl fy 30 .·. 35 H Cl d^CH- '73 ch3^ 40 / \ ··* H Cl HN ^N- * · · 45 H Cl H2N-CH- :3‘ ! CH~ .3.: 50 H CH3 CH30-CH2- 19 ί: Ob R4 R5 R9 5 H Cl f N^_

^ N H

10 H Cl CH3S" 15 H CH3 (^-CH2- 20 H Cl /=\ _W's~ 25

H

» 30 ?·-<0^ε.Η·αο'ΝΗ>-Γ5ι ,

Λ / νη· >*^-R

p * ^ 0 *4 R COOR4 ..: : 35 ;:· Z = S, 0 : —: 40 ; Taulukko 2 45 R4 R5 r9 V*: H Cl CH3 ··: 50 H Cl CH3 20 i 5/08 R4 R5 R9 5 allyyli CH3 CH3

H Cl H

H Cl H„N-

10 Z

H Cl [>- 15 « CH3 20 bentshyd- CH~ f V* ryyli H Cl 25 w* H Cl N N>- 30 H CH=CH2 0 - .*· 35 S H C1 O'

40 i-O

:7: H CH3 kjh ·’·’ HN-^ H Cl ^C-NH- 45 //

H2N

: CH-^^ 50 H C1 ^CH- ch3^ 21 6 5 708 _R*_H*_R9 5 CH3 H CH3 '^CH-

10 J

bentshyd- CH

ryyli 3 15 H Cl HO- H CH3 CH3S~ 20 H Cl CH3-S02- H -CH=CH2 h03S-

H Cl HOoS

25 d

Kaavan I mukaisilla yhdisteillä on laaja antibak-teerinen spektri, joka käsittää gram-positiiviset ja 30 gram-negatiiviset bakteerit, erityisesti stafylokokit, streptokokit, enterokokit ja Haemophilus influenzae'n toksisuuden ollessa samanaikaisesti vähäistä.

Parenteraalisessa tai erityisesti suun kautta tapahtuvassa annostelussa uudet yhdisteet tehoavat erittäin --- 35 hyvin seuraaviin mikro-organismeihin: stafylokokit, kuten esim. Staph, aureus, Staph, epidermis; streptokokit, kuten esim. Streptococcus pyogenes, Streptococcuc faeca-***" lis, enterobakteerit, Escherichia coli, Klebsiella, Sal monella, Shigella, Proteus, esim. Proteus mirabilis.

*.*·* 40 Nämä ominaisuudet mahdollistavat niiden käytön ke- : moterapeuttisina vaikuttavina aineina lääketieteessä ja ____: eläinlääketieteessä.

-· Seuraavassa taulukossa on ilmoitettu pienimmät es tävät konsentraatiot (MHK-arvot, pg/ml) siinä esitetyil- 22 i c /08 le, kaavan I mukaisille, keksinnönmukaisille yhdisteille kefaklooriin verrattuna [M. Gorman et ai., Cefaclor, Chronicles of Drug Discovery, Voi. 2, 49, J. Wileys &

Sons (1983)].

5 Pienimmän estävän konsentraation arvot määritetään agar-laimennustestillä Multipoint-inokulaattoria käyttäen, jolloin tulosten lukeminen ja tulkinta tapahtuvat 18 - 24 tuntia kestäneen, 37°C:ssa tapahtuneen inkuboin-nin jälkeen. Elatusaineena käytetään Isosensitest-agaria.

10

Bakteerit Esimerkit __}, t__n*__il·__jo__22 23 c«f»ciof_ c.coi> t 7__22_ «__»__HS__li__2* — _12i__S__ E col I > m__e_ 2__2__·__J__i__5__?__ C col i N cup» . 6 \ 7 8 4 _ 2_ * * — , E co)i ΐS3/se__>W6 m?6 >326 M2* l>32C_ >1S8_ >W8___ E.ccl; Γ K__126 12 128 >12» 12> j>128 216__li___ t col l C US__4 0.5 2__6 2 I 4 }2__3__ lull <12 2__4 O.S 16__8__2 | 4__4__2__ .

Mcb». 57 us.i___12 4__4__64__16 ; 16 .12__6__

Klcb» 63__1 O.S 1__»__2 : I__2__J__

Urin 1852______J28.___8__8 12»__64 j 64 126__6__

Klcb». 6017____2 0,6 1__16__2 | 2__2__2__

Serf 11» Π001__>126 >I2B >126 >126 >128 l>126 >256 >126__ 20 Sertitli 16002__>128 >126 >128 >128 >126 ?>126 >256 >128__

Frovld, 12012__> I 26 1 12__32 > 1 28 >126 I 128 >256__12__

Prot . roro . 932 >128 >128 ..βϋβ .

Prot .Vu 1 g , 90 2 3__1 28 64 >126__126 >126 126 >216__64__

Prot,vulq, I Cl 7__>126 >126 >128 >126 I >126 ->128 128 >128__

Prot vulq N 6__>128 >128 >128 >128 I >128 '>126 * >12»__

Prot.rcttc· 10007 >128 >12» >128 >126 i >128 *>13S >286 >128 . .·. Prot nir 1231__1 2__4 8 8 I 2 4 4

Staoh. 1716__12e 1 28 128 >1 28 1 26 ] 128 >286 >12»__ _ . 25 S ta ob 131 0, S 0.8_2 _4 _2 1 _1 _,

Staoh. 21022____0,5 0.S 2__4__4__1__2__4

Staoh, 28420__H8 64 >128 >128 -128 l>128 >286 >12»__

Staoh. E 21161__0,06 0.125 64__0,1 8 0.2! 2__16__

Strcot.faac. 22101 16 126 126 >126 64 128 >286 64.

Strept.faac. 113 16 12 64 126 128 64 >256 128 - - - Entarococ. 9290 8 22 12 64 12 6« >286 64

Entarococ. 22156 2 16__12 32 8 64 >286 12 p [Pad·. Γ 41 ~ >128 >126 >128 >128 >12» >128 >256 >128__ 30 bad· wa 1 ter___M28 >128. >12» >128 >128 >128 >286 >128__ ^adai. 2011 >128 >.1.28 >128 >128 >12» >128 >286 >128 y»a». 2451 >128 >126 >128 >12» >128 >128 >256 >12»__ · kr.frob cl. 5605 >12» >128 >128 >128 >128 >128 >256 >12»__ * Er.tcrojj. c 1 ~ S74 4 ΐ 26 32 _ 6 64 64 36 >266 6 :*·*; krhrcrafe. ~ 1 0-2^ 0.j <0-06 1 2 I „0^25ί _0,$1 0,vL 0^2V _ ... 35 Suun kautta vaikuttavien kefalosporiinien pienim män estävän konsentraation arvot.

23

t c 70S

Seuraavassa taulukossa on esitetty esillä olevan hakemuksen esimerkkien 2a ja 4a mukaisten yhdisteiden MHK-arvot (pg/ml) läheisimpään tekniikan tasosta tunnettuun yhdisteeseen nähden gram-positiivisella alueella se-5 kä Haemophilus Influenzae'ta vastaan. Vertailuyhdiste on tunnettu julkaisusta EP 122 158.

10 S ) EP 122 158 /^=\ (D) / \ CH-CO-NH ^ NH2 o/-n J-ch3

15 COOH

Esimerkki 2a 20 /~=~\ (p) ΝΛ /Γ tH-CO-ΝΗη—^ η,*/·® nh> ο^Νγ Cl

"i?: 25 C00H

Esimerkki 4a 30

N "O- SlcO.NH-/X

-U cA"/-,

COOH

i 3 708 24 *

I (ΛΌ VO

£ Öö ο )° s o. o o> ro vo ro S ri o 00 r-, P >«0<Ν

e: _ P

vo k) ~o ^r ^ vo rs o ,· · · Ό .. vo ω C 7'7i m *}- c <5 •y ro vo E . m v> w

·ιΗ4-»'~'οί O U U 3 C P

-S. o o 2p M V 3 S 8· o q &§*§ g « « xi s. s. i ε s E f· 0.0, O* 1> «J o 1) 1) H 2 2 3 b b 50 ra ra r°i JS <n oo ori to co IE X ΪΠ w w vo ^ rs vo vo vo — vo vo <s y, o ö o oo ö ö ö

X ir> VI

S 00 m _ ·· ^ 2 ε .

ra vo <s .soo r—-crs fN ..VO “g O C «

en ^ C 2a C ^ -n 91 M

-H -P ro VO E tS CL °* (Λ .,H :(ö

^H — e"1 ω ei ti o 5 O H

iil·! V V S u y O p M MJ

»-lag3 °* RRR o.0):n3 g0)«« « oo o o <l; § «I II I fiSiS !|| κλ m co cocotj-co5 S ® *-· 00 ———»-— - “ <n p~s ^ • : : Ci X ό^·ό νώ 2 -4- rs ·.· · jg es —' \o —· —< oo o h an -a· <s .:. o - ·*· cl, .*:·. w (Ö O ö -rs SS^oq: s (Ö — ? ^ Γ-! O, £J N3«o Om :;: K X>X« Wrl UM® U® ίΛ V7 is s Si - - g p «Λ a *> 2 H 33S3 St S 2QQ g g

:..' e ϊ2Ηϋ s.'s &§§·& «S

::: tOpsapCLCuoSSo^a

•H raeertro t>« >sfiS2 CC

C (Λ vl tn (λ «Vt CL CL ÖO bO pc IÖ 3030 3b trtinvtvt ' ..... b, υ u υ υ υ o :2:2¾¾ io vi ? S^SS SS »8 8 8 :·": ? äS8S 8¾ «Hl §! ; o >,>>>,>, >n >s 2 222 2 2 . L) ·λ.·5,·§ ·£ -2-5 O. CL O, Cl ε ε • . . j Q«QiQ.O. CXO, O 1) 1) a) 0>&) ί 3333 33 6 £ 5 5 J«

j; co en en en en en tn en en en XX

ί 3 708 25

Esimerkiksi voidaan hoitaa ja/tai ehkäistä edellä mainittujen taudinaiheuttajien tai niiden seosten aiheuttamia paikallisia ja/tai systeemisiä sairauksia. Sairauksina, jotka voidaan estää ja parantaa keksinnön mukaisil-5 la yhdisteillä, mainittakoon esimerkiksi:

Hengitysteiden ja nielun sairaudet:

Korvatulehdus (otiitti)); nielutulehdus (faryn-giitti; keuhkokuume (pneumonia); vatsakalvontulehdus (pe-rltoniitti); munuaisaltaan ja munuaisen tulehdus (pyelo-10 nefriitti); rakkotulehdus (kystiitti); sydämen sisäkalvon tulehdus (endokardiitti); systeemiset infektiot; keuhkoputken tulehdus (bronkiitti); niveltulehdus (artriitti); paikalliset infektiot.

Kaavan (I) mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää 15 farmaseuttisina valmisteina, jotka sisältävät ei-toksis- ten, inerttien, farmaseuttisesti soveltuvien kantaja-aineiden ohella yhtä tai useampaa keksinnönmukaista yhdistettä tai jotka koostuvat yhdestä tai useammasta keksin-nönmukaisesta vaikuttavasta aineesta sekä menetelmä näi-20 den valmisteiden valmistamiseksi.

Valmisteet ovat yksittäisinä osina, esimerkiksi tabletteina, lääkerakeina, kapseleina, pillereinä, peräpuikkoina ja ampulleina, joiden vaikutusainepitoisuus l ‘: vastaa murto-osaa tai moninkertaista osaa kerta-annokses- *:* 25 ta. Annostusyksiköt voivat sisältää esimerkiksi 1, 2, 3 »«« :*♦*; tai 4 kerta-annosta tai 1/2, 1/3 tai 1/4 kerta-annosta.

.**·. Yksi kerta-annos sisältää edullisesti sen määrän vaikut- • · • * * . .·. tavaa ainetta, joka annostellaan yhdellä antokerralla ja, joka tavallisesti vastaa koko päivittäistä annosta, puol-30 ta siitä tai kolmannesta tai neljännestä osaa päivittä!-. . sestä annoksesta.

” Myrkyttömillä, inerteillä, farmaseuttisesti sovel tuvilla kantaja-aineilla tarkoitetaan kaikenlaisia kiin-·:··· teitä, puolikiinteitä tai nestemäisiä laimennusaineita, .***. 35 täyteaineita tai formulointiapuaineita.

Edullisena pidettyinä farmaseuttisina valmisteina mainittakoon tabletit, lääkerakeet, kapselit, pillerit, 26 •. 3 7 O 8 rakeet, peräpuikot, liuokset, suspensiot ja emulsiot, pastat, salvat, geelit, emulsiovoiteet, lotionit, jauheet ja sprayt.

Tabletit, lääkerakeet, kapselit, pillerit ja ra-5 keet voivat sisältää vaikuttavaa ainetta tai vaikuttavia aineita tavanomaisten kantaja-aineiden ohella, kuten (a) täyte- ja sivelyaineiden,esim. tärkkelyksen, maitosokerin, ruokosokerin, glukoosin, mannitolin ja piihapon ohella (b) sideaineiden, esim. karboksimetyyliselluloo-10 san, alginaattien, gelatiinien, polyvinyylipyrrolidonin ohella, (c) kosteutta säilyttävien aineiden, esim. glyse-riinin ohella, (d) hajotusaineiden, esim. agar-agarin, kalsiumkarbonaatin ja natriumkarbonaatin ohella, (e) liukenemista hidastavien aineiden, esim. parafiinin ohella 15 ja (f) imeytymistä kiihdyttävien aineiden, esim. kvarter-nääristen ammoniumyhdisteiden ohella, (g) kostutusainei-den, esim. cetyylialkoholin, glyseriinimonostearaatin ohella, (h) adsorptioaineiden, esim. kaoliinin ja bento-niitin ohella ja (i) 1lukuaineiden, esim. talkin, kal-20 slum- ja magnesiumstearaatin ja kiinteiden polyetyleeni-glykolien tai kohdissa (a) - (i) esitettyjen aineiden seosten ohella.

Tabletit, lääkerakeet, kapselit, pillerit ja ra- ..· S keet voivat olla varustettuja tavanomaisilla, mahdolli- ;:· 25 sesti samennusaineita sisältävillä päällysteillä ja kuo- rilla ja niiden kokoonpano voi myös olla sellainen, että .***. ne luovuttavat vaikuttavan aineen tai vaikuttavat aineet • · · . ainoastaan tai edullisesti jossakin suoliston määrätyssä .‘I·, osassa, mahdollisesti hidastetusti, jolloin lisäainemas- 30 soina voidaan käyttää esim. polymeeriaineita ja vahaa.

. . Vaikuttava aine tai vaikuttavat aineet voivat mah- '· *· dollisesti olla yhden tai useamman edellä ilmoitetun kan- v * taja-aineen kanssa myös mikrokapseloidussa muodossa.

·:··· Peräpuikot voivat sisältää vaikuttavan aineen tai ·*". 35 vaikuttavien aineiden ohella tavanomaisia vesiliukoisia • « tai veteen liukenemattomia kantaja-aineita, esim. poly-etyleeniglykoleja, rasvoja, esim. kaakaorasvaa ja kor- • : Ό8 27 keampia estereitä (esim. C14-alkoholia C16-rasvahapon kanssa) tai näiden aineiden seoksia.

Salvat, pastat, emulsiovoiteet ja geelit voivat sisältää vaikuttavan aineen tai vaikuttavien aineiden 5 ohella tavanomaisia kantaja-aineita, esim. eläin- ja kasvisrasvoja, vahoja, parafiinia, tärkkelystä, traganttia, selluloosajohdannaisia, polyetyleeniglykoleja, silikone-ja, hentoniitteja, piihappoa, talkkia ja tinaoksidia tai näiden aineiden seoksia.

10 Jauheet ja sprayt voivat sisältää vaikuttavan ai neen tai vaikuttavien aineiden ohella tavanomaisia kantaja-aineita, esim. maitosokeria, talkkia, piihappoa, alumiinihydroksidia, kalsiumsilikaattia ja polyamidijauhetta tai näiden aineiden seoksia. Sprayt voivat vielä lisäksi 15 sisältää tavanomaisia ponneaineita, esim. kloorifluorihiilivetyjä.

Liuokset ja emulsiot voivat sisältää vaikuttavan aineen tai vaikuttavien aineiden ohella tavanomaisia kantaja-aineita, kuten liuottimia, liuotinvälittäjiä ja 20 emulgaattoreita, esim. vettä, etyylialkoholia, isopropyy-lialkoholia, etyylikarbonaattia, etyyliasetaattia, bent-syylialkoholia, bentsyylibentsoaattia, propyleeniglyko-lia, 1,4-butyleeniglykolia, dimetyyliformamidia, öljyjä, erityisesti puuvillansiemenöljyä, maapähkinäöljyä, mais-.:.25 slnalkioöljyä, oliiviöljyä, risiiniöljyä ja seesamöljyä, glyseriiniä, glyseriiniformaalia, tetrahydrofurfuryylial-λ. koholla, polyetyleeniglykoleja ja sorbitaanin rasvahappo- estereitä tai näiden aineiden seoksia.

Parenteraalisessa annostelussa liuokset ja emul-30 slot voivat myös olla steriilissä ja veren suhteen isotonisessa muodossa.

Suspensiot voivat sisältää vaikuttavan aineen tai : vaikuttavien aineiden ohella tavanomaisia kanta ja-ainei ta, kuten nestemäisiä laimennusaineita, esim. vettä, ... 35 etyylialkoholia, propyleeniglykolia, suspensoimisaineita, *:* esim., etoksiloituja isostearyylialkoholeja, polyoksiety- leenisorbiitti- ja -sorbitaaniestereitä, mikrokiteistä f.’ 3 708 28 selluloosaa, alumlinlmetahydroksldla, bentoniittia, agar-agar la ja traganttia tai näiden aineiden seoksia.

Mainitut valmistemuodot voivat sisältää myös väriaineita, säilöntäaineita sekä hajua- ja makua parantavia 5 lisäaineita, esim. piparminttuöljyä ja eukalyptusöljyä ja makeutusaineita, esim. sakkariinia.

Terapeuttisesti vaikuttavia yhdisteitä täytyy edellä esitetyissä farmaseuttisissa valmisteissa olla edullisesti konsentraatiossa: noin 0,1 - 99,5 edullisesti 10 noin 0,5 - 95 painoprosenttia kokonaisseoksesta.

Edellä esitetyt farmaseuttiset valmisteet voivat sisältää keksinnönmukaisten yhdisteiden lisäksi myös muita farmaseuttisia vaikuttavia aineita.

Edellä esitettyjen farmaseuttisten valmisteiden 15 valmistus tapahtuu tavanomaisella tavalla tunnettujen menetelmien mukaisesti, esimerkiksi sekoittamalla vaikuttavaan aineeseen tai vaikuttaviin aineisiin kantaja-ainetta tai kantaja-aineita.

Vaikuttavia aineita tai farmaseuttisia valmisteita 20 voidaan annostella paikallisesti, suun kautta, parente- raalisesti, intraperitoneaalisesti ja/tai peräsuolen kautta, edullisesti oraalisesti tia parenteraalisesti, kuten ruiskeena laskimoon tai lihakseen.

. Yleensä sekä lääketieteessä että eläinlääketie- • » · * 25 teessä on osoittautunut edulliseksi antaa keksinnönmu- kaista vaikuttavaa ainetta tai keksinnönmukaisia vaikut-tavia aineita kokonaismäärien ollessa noin 5 - 1000, edullisesti 10 - 200 mg/kg painokilo/vrk, mahdollisesti * · « annosteltuna useampana kerta-annoksena, haluttujen tulos- « · · 30 ten saavuttamiseksi. Yksi kerta-annos sisältää kekslnnön-mukaista vaikuttavaa ainetta tai keksinnönmukaisia vai-V··* kuttavia aineita edullisesti noin 1 noin 250, erityisesti t **: 3-60 mg/kg painokilo. Voi kuitenkin olla tarpeellista poiketa mainituista annostuksista, ja nimittäin riippuen ... 35 hoidon kohteen laadusta ja ruumiinpainosta, sairauden laadusta ja vaikeusasteesta, valmisteen lajista ja lääke-aineen annostelutavasta sekä ajankohdasta tai aikavälis- 29 15 708 tä, jonka aikana lääkkeen anto tapahtuu. Niinpä voi joissakin tapauksissa riittää, että käytetään pienempää määrää vaikuttavaa ainetta, kuin mitä edellä mainittu määrä on, kun taas toisissa tapauksissa täytyy edellä mainittu 5 vaikutusainemäärä ylittää. Vaikuttavien aineiden kulloinkin tarpeellisen optimaalisen annostuksen ja annostelu-tavan voi jokainen lääkäri helposti määrätä asiantuntemuksensa perusteella.

Käytettäessä uusia yhdisteitä rehun lisäaineina 10 voidaan niitä antaa tavanomaisina konsentraatioina ja valmisteina yhdessä rehun tai rehuvalmisteiden tai juomaveden kanssa. Tällöin voidaan gram-negatiivisten tai gram-positiivisten bakteerien aiheuttama infektio estää tai parantaa ja samoin voidaan tällöin saavuttaa kasvun 15 edistyminen ja rehun hyväksikäytön paraneminen.

Uusilla yhdisteillä on voimakkaita antibakteerisia vaikutuksia, joita tutkittiin in vivo ja in vitro, ja ne imeytyvät hyvin suun kautta annosteltuina.

Haluttaessa laajentaa vaikutusspektriä ja parantaa 20 vaikutusta, keksinnönmukaisiin yhdisteisiin voidaan yh distää myös muita antimikrobisesti vaikuttavia aktiivisia yhdisteitä ja laktamaasi - inhibiittoreita, esimerkiksi klavulaanihappoa ja penisilliinejä, jotka ovat erityisen : penisilllnaasiresistenttejä, tai aminoglykosidiantibioot- ‘r 25 teja, kuten esim. gentamysiiniä, sisomysiiniä, kanamysii- niä, amlkasiinia tai tobramysiiniä.

:***: Keksintöä selvennetään seuraavien esimerkkien . avulla.

Esimerkki 1 30 DL-7-(2-aminobentsotiatsol-6-yyliglysyyliamido)- . . 3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo • * · • · • · · ·:·35 h,A *' NH·

COOH

*/'08 30 a) 2-amino-6-hydroksimetyyli-bentsotiatsoli (la) 50 g (0,225 moolia) 2-amino-bentsotiatsoli-karbok-syylihappo-6-etyyliesteriä suspensoidaan 1000 ml:aan THF:ään, jäähdytetään -70°C:een ja tiputetaan hitaasti 5 562,5 ml (0,675 moolia) di-isobutyylialumiinihydridiä (DIBAL, 20 %:sta tolueenissä, 1,2-molaarista) typpiatmos-fäärissä. Reaktioliuosta sekoitetaan yön ajan -70°C:ssa --40°C:ssa ja lopuksi vielä 3 tuntia ilman jäähdytystä. Tämän jälkeen jäähdytetään -70°C:een tiputetaan 61,5 ml 10 vettä siihen (voimakkaasti eksoterminen reaktio) ja annetaan lämmetä huoneenlämpötilassa. Lisätään 305 ml kyllästettyä keittosuolaliuosta ja sekoitetaan 1 tunti 20°C:ssa. Saostunut alumiinihydroksidi imusuodatetaan, pestään THFcllä ja suodos haihdutetaan kuiviin (36 g).

15 Jäännös liuotetaan kiehuvaan etanoliin, suodatetaan erilleen pienestä määrästä liukenematonta ainetta ja suodos haihdutetaan kuiviin.

Saanto: 25,5 g (63 %)

CeH8N2OS (180,2) 20 NMR (DMSO): 6 = 4,5 (d, 2H), 5,13 (t, 1H), 7,18 (d, 1H), 7,3 (d, 1H), 7,4 (s, 2H), 7,59 (s, 1H) ppm.

b) 2-aminobentsotiatsoli-6-karboksialdehydi (Ib) 110,5 g:aa (0,613 moolia) la:ta sekoitetaan 200 ml:ssa THF:ää 319,8 g:n kanssa (3,678 moolia) man- .:.25 gaani (IV)-oksidia 3 päivän ajan huoneenlämpötilassa.

"Reaktioseos suodatetaan, suodatinkakku pestään THF:llä ja suodos haihdutetaan vakuumissa.

**· Saanto 74 g (68 %) *:“* C8H6N2OS (178,1) 30 NMR (DMSO): δ = 7,48 (d, J-7,5 Hz, 1H), 7,8 (d, J-7,5 Hz, 1H), 8.08 (s, 2H), 8,26 (s, 1H), 9,92 (s, 1H) • » ·.*·: ppm.

c) 5-( 2-aminobentsotiatsoli-6-yyli )-2,4-imidatsoli-diinidioni (le) ... 35 22,5 g (0,126 moolia) lb:tä liuotettuna 400 ml:aan *;* metanolia tiputetaan liuokseen, jossa on 50,9 g (0,531 13 708 31 moolia) ammoniumkarbonaattia ja 9,6 g (0,196 moolia) nat-rlumsyanidla 400 ml:ssa vettä ja sekoitetaan 20 tunnin ajan 60°C:ssa. Sen jälkeen kun metanoli on tislattu va-kuumissa tähdeliuos saatetaan happameksi 0°C:ssa 2 N 5 HClrllä pH-arvoon 2, tämän jälkeen pH saatetaan 2 N nat-ronlipeällä takaisin arvoon 4 ja saostunut tuome imusuodatetaan.

Saanto: 20,5 g (65 %) C10H8N4O2S (248,3) 10 Laskettu: C 48,38 H 3,25 N 22,56 S 12,91 Löydetty: C 48,4 H 3,5 N 21,2 S 12,3 NMR (DMSO): δ - 5,17 (s, 1H), 7,17 (q, 1H), 7,35 (d, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 8,4 (s, 1H), 10,6-10,82 (s, 1H) ppm.

15 d) DL-a-amino-a-(2-aminobentsotiatsol-6-yyli)etikka-happo (DL-6-amino-bentsotiatsolyyliglysiini, Id) 20 g:aa (0,081 moolia) lc:tä kuumennetaan 19,4 g:n kanssa (0,81 moolia) litiumhydroksidia 400 ml:ssa vettä sekoittaen 24 tunnin ajan 100°C:ssa. Liuos suodatetaan 20 kuumana, suodatinjäännös pestään edelleen kuumalla vedellä ja suodoksen pH saatetaan jäällä jäähdyttäen kons. HCl:llä arvoon 2. Sekoitetaan 15 minuuttia 0°C:ssa ja liuoksen pH saatetaan saostuneella tuotteella takaisin arvoon 4,5. Sakka imusuodatetaan, pestään vesi/asetonilla 25 ja kuivataan vakuumissa.

Saanto 10,4 g (56 %) C9H,N302S · 1/2 H20 ( 232,3)

Laskettu: C 45,05 H 4,20 N 17,51 S 13,36 ·'· Löydetty: C 45,3 H 4,6 N 15,5 S 13,4 30 NMR (DCOOD): δ - 5,11 (s, 1H), 7,8 (s, 2H) 8,11 (s, 1H) ppm.

15 708 32 e) DL-a-t-butyylioksikarbonyyliamino-α-(2-t-butyyli-oksikarbonyyliamino-bentsotiatsol-6-yyli)etikka-happo (di-Boc-johdannainen) ja DL-a-t-butyylioksi-karbonyyliamino-a-(2-aminobentsotiatsol-6-yyli) 5 etikkahappo (Mono-Boc-johdannainen) (le).

20 g (0,0896 moolia) ld:tä suspensoidaan 100 ml:aan vettä, 130 ml:aan dioksaania ja 140 ml:11a 2 N natronlipeätä saatetaan liuokseen. Lopuksi tiputetaan 78,1 g (0,358 moolia) di-t-butyylikarbonaattia 30 minuu-10 tin sisällä ja sekoitetaan yön ajan. Dioksaani tislataan pois, tähdeliuos laimennetaan H20:lla ja pestään etikka-esteri/petrolieetterillä. Vesipitoinen faasi saatetaan happameksi jäällä jäähdyttäen 2 N HCl:llä pH-arvoon 2 ja uutetaan kaksi kertaa etikkaesteri/THF:llä (1:1). Sen 15 jälkeen kun on pesty keittosuolaliuoksella, kuivattu

Na2S04:llä ja orgaaninen faasi on haihdutettu saadaan mono- ja di-boc-johdannaisen seos.

Saanto: 24,7 g.

Kromatografiointi suoritetaan silikageelillä (Merck, 20 0,04-0,063 mm) käyttäen eluointiaineita seuraavassa jär jestyksessä.

1. 2000 ml CH2C12, 2. 4000 ml CH2Cl2/metanoli (10:0,5) 3. CH2Cl2/metanoli (10:1), 4. CH2Cl2/metanoli (1:1) ..: * Di-Boc-johdannainen (le): „*; 25 Saanto: 8,7 g (26 %) :T.* C19H25N306S (423,5) NMR (DMSO): 6 = 1,37 (s, 9H), 1,52 (s, 9H), 5,12 (d, 1H), - 7,45 (d, 2H), 7,65 (d, J-7,5 Hz, 1H), 7,96 (s, 1H) ppm.

30 Mono-Boc-johdannainen: . . Saanto: 9,2 g (32 %) /.!; CuH17N304s (323,4) : NMR (DMSO): δ = 1,36 (s, 9H), 4,98 (d, 1H), 7,2-7,3 :·*: (q, 2H), 7,48 (s, 2H), 7,54 (s, 1H) ppm.

35 f) DL-7-[2-(t-butyylioksikarbonyyliaraino)-2-(2-t-. . butyy1ioksikarbonyy1iaminobentsotiätsol-6-yy1i)- asetamido]-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo (lf).

; :;.'08 33

Edeltäjähapon aktivointi: 5,1 g (12 mmol) le:tä liuotetaan 40 ml:aan DMF:ää, lisätään 1,69 ml (12 mmol) trietyyliamiinia, -40°C:ssa ruiskutetaan tipottain 1,48 ml (12 mmol) pivaloyyliklori-5 dia ja sekoitetaan 3 tuntia -30°C:ssa - -15°C:ssa. Alumiinikomponentin valmistus: 2,83 g (12 mmol) 7-amino-3-kloori-3-kefemi-4-kar-boksyylihappoa (7-ACCA) suspensoidaan 20 ml:aan THF:ää ja 10 ml:aan vettä ja saatetaan kons. trietyyliamiinilla 10 liuokseen (pH 8,3). Tämän jälkeen lisätään 5 ml DMF:ää faasin saamiseksi.

Kytkentä ja eristäminen: 7-ACCA-liuos ruiskutetaan muodostuneeseen anhydri-diin -40°C:ssa ja sekoitetaan kylmähauteessa. 1 tunnin 15 kuluttua lisätään 10-20 ml H20:ta ja pH saatetaan 10 %:sella trietyyliamiini/THF:llä arvoon 7,3. Edelleen 2 tunnin kuluttua lisätään 200 ml HzO:ta, ja tämän jälkeen lisätään sekoittaen etikkaesteri/THF:ää (2:1) ja 0°C:ssa saatetaan pH arvoon 1,7. Orgaaninen kerros erotetaan, 20 pestään keittosuolaliuoksella, kuivataan, haihdutetaan 30 ml:aan, sekoitetaan petrolieetteriin, saostunut tuote imusuodatetaan ja kuivataan.

Saanto: 6,2 g (81 %), pitoisuus: 66 % HPLC:n mukaan. C26H30ClN5O8S2 (640,1) ; 25 NMR (DMSO): δ - 1,39 (s, 9H), 1,52 (s, 9H), 3,5-4,02 ·! (leveä m, 2H), 5,1-5,24 (dd, 1H), 5,38 (d, 1H), 5,62-5,8 (dd, 1H), 7,42-7,53 (m, 1H), 7,68 (d, 1H), 7,98 (s, 1H) ppm.

g) DL-7-2-(2-aminobentsotiatsol-6-yyliglysyyliamido) *.'* 30 3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo (lg) 8,4 g (13,1 nunol) lf:ää liuotetaan 50 ml:aan mety-leenikloridia, 0°C:ssa lisätään 0,5 ml anisolia ja 50 ml “ trifluorietikkahappoa (TFE) ja sekoitetaan 15 minuutin ajan ilman jäähdytystä. Lopuksi trifluorietikkahappo-me-35 tyleenikloridi-seos tislataan vakuumissa ja öljymäiseen jäännökseen lisätään eetteriä. Trifluoriasetaatti imusuodatetaan, pestään eetterillä ja kuivataan.

34 t:;Q8

Saanto: 6,5 g (89 %) C16H14C1N504S2 · CFjCOOH (553,9) HPLC-pitoisuus: (Hibar 250-4, RP 8, 10 pm, 254 nm, 3 ml/min, eluolntiaine: 1000 ml H20:ta-40 ml 5 asetonitriiliä-lml TFE:tä) retentio: 1,10 (Id, 10,8 %), 3,08 (L-muoto, 46,5 %), 3,82 (D-muoto, 38,5 %).

Esimerkki 2 D-7-(2-aminobentsotiatsol-6-yyliglysyyliamido)-3-10 kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo ja L-muoto A) Kromatografinen erotus 2,3 g lg:tä liuotetaan 50 ml:aan eluointiainetta (1000 ml H20:ta-50 ml asetonitriiliä - 1 ml TFE:tä) ja 4 tippaan TFE:tä, sekoitetaan 20 minuuttia, liukenematon 15 materiaali imusuodatetaan, suodos suodatetaan vielä ker ran käyttäen ruiskua (Millex-GS, 0,22 pm, Millipore) ja 10 ml:n suuruisina annoksina (460 mg) pumpataan hitaasti preparatiiviseen pylvääseen (Hibar 250-25, RP 18, 7 pm, virtaus 15 ml/min.) 10-15 minuutin aikana.

20 D-muoto (piikki II):

Saanto 350 mg trifluoriasetaattia

Yhteensä 4,3 g trifluoriasetaattia liuotetaan 500 ml:aan vettä ja asetetaan pylvääseen, jossa on 25 ml Am-berlite IRA-68:aa (asetaatti-muoto) ja eluoidaan 1,5 lit-. : : 25 ralla vettä (tislattua). Eluaatti haihdutetaan 1000 ml:aan ja imusuodatetaan 0,45 pm Millipore-suodatinta käyttäen ja lyofilisoidaan.

Saanto: 3,0 g (75 %) C16H14C1N504S2 · 3H20 · 0,5 CH3C00H (523,9) .·.*. 30 Laskettu: C 38,97 H 4,23 N 13,36 S 12,24 Cl 6,76 Löydetty: C 38,9 H 4,0 N 13,6 S 12,0 Cl 6,8 HPLC-pitoisuus: 97,4 % Hibar 250-4, RP 8, 10 pm, 254 nm, 3 ml/min, 0,5 mg/ml, eluointiaine: 1000 ml H20:ta-30 ml \ ' CH3COOH:ta).

·:*·: 35 NMR (DCOOD): δ = 3,58 (d, J«18 Hz, 1H), 3,94 (d, : J-18 Hz, 1H), 5,32 (d, J-5 Hz, 1H), 5,75 (s, 1H), 5,94 (d, J-5 Hz, 1H), 7,84 (s, 2H), 8,12 (s, 1H) ppm.

35 * 3 708 L-muoto (piikki I)

Saanto 400 mg trifluoriasetaattia

Yhteensä 2,01 g trifluoriasetaattia liuotetaan 500 ml:aan vettä, asetetaan pylvääseen, jossa on 30 ml 5 Amberlite IRA-68:aa (asetaatti-muoto) ja eluoidaan 1,5 litralla H20:ta (tislattua), eluaatti haihdutetaan 1000 ml:aan ja lyofilisoidaan.

Saanto: 1,08 g 60 %) C16H14C1N504S2 · 3H20 (493,9) 10 Laskettu: C 38,90 H 4,08 N 14,7 Löydetty: C 38,6 H3,7 N 13,3 HPLC-pitoisuus: 94,5 % (Hibar 250-4, RP 8, 10 pm, 254 nm, 1,8 ml/min, eluointiaine: 930 ml H2O:ta-20 ml puskuria pH 7/50 ml asetonitriiliä).

15 NMR (DCOOD): 4 = 3,78 <d. J=17,5 Hz. 1H). 4.03 (d, J=17.5 Hz. 1H). 5,4 (d, J = 5 Hz. 1H>, 5,8 (s. 1H), 5.92 <d, J=5 Hz. 1H).

7,87 (s, 2H), 8,2 (s, 1H). ppm.

20 B) D-fenyyliglysiini D-7-(2-aminobentsotiatsol-6- yyliglysyyliamido)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihapon lähtöaineena a) D-öC-asetamido-oC-fenyylietikkahappo (2a) "Y 25 500 9 (3,31 moolia) D-oC-amino-oC-fenyylietikkahappoa ·;; suspensoidaan 6 litraan vettä, jäähdytetään 10°C:een ja ' lisätään 132 g (3,31 moolia) NaOH:ta, 1000 ml:aan vettä liuotettuna. 15 minuutin kuluttua kirkkaaseen liuokseen YY kaadetaan 0°C:ssa 675 g (6,62 moolia) etikkahappoanhydridiä : : : 30 ja tämän jälkeen 397 g (9,93 moolia) NaOH:ta - 1000 mlraan vettä liuotettuna - nopeasti sekoittaen. Lämpötila kohoaa : tällöin 0°C:sta 30°C:een. Liuosta sekoitetaan vielä 20 minuu- tin ajan jää-keittosuola-hauteessa pH:n ollessa 9-10, tämän jälkeen pH saatetaan kons. suolahapolla (noin 1 litralla) ar-35 voon 1. Sekoitetaan edelleen 10 minuutin ajan, 10°C:een jääh-Y.: dytetty suspensio imusuodatetaan ja pestään 10 litralla vettä.

Tuote kuivataan KOH:lla vakuumissa.

Saanto 553 g (87 %) 36 c :/08

C10H11NO3 (193'2) jp 190 - 191°C

/<x72gg = -218,6° (C = 1, C2H5OH) b) D-oG-asetamido-oC-(4-nitrofenyyli) etikkahappo ja D-«C- 5 asetamido-oC-(3-nitrof enyyli) etikkahappo isomeeriseoksena (2b) 227 g (1,17 moolia) 2a:ta lisätään hitaasti 570 ml:aan kons. rikkihappoa 40-50°C:ssa. Lisäyksen jälkeen sekoitetaan vielä 5 minuutin ajan 40°C:ssa ja tämän jälkeen 10 jäähdytetään 0°C:een. 30-45 minuutin sisällä tiputetaan hitaasti -5°C:ssa - 0°C:ssa 111,5 ml (2,39 moolia) 95 %:sta typpihappoa (d = 1,5). Lopuksi sekoitetaan 30 minuutin ajan -5°C:ssa - -10°C:ssa, reaktioliuos kaadetaan 8 litraan jäätä, saostunut tuote imusuodatetaan ja pestään suurella määrällä 15 vettä.

Saanto: 276,1 g (98 %) C10H10N2O5 (239,2) .-72°0 --589 = -193,9° (C = 1, CoHc0H)

£ D

20 c) D-00-asetamido-oC-(4-aminof enyyli) etikkahappo (2c) 240 g (1,0 moolia) isomeeriseosta 2b liuotetaan 3 litraan 95 %:sta etanolia ja hydrataan 10 g:n palladiumia aktiivihiilen (10 %) pinnalla läsnäollessa 2 tunnin ajan ; I 23°C:ssa ja 10 atmosfäärin paineessa. Saatuun suspensioon -;· 25 lisätään 2,4 litraa vettä, kuumennetaan paluu jäähdy tin ja tämän jälkeen imusuodatetaan piimään lävitse. Yön aikana suo-doksesta saostunut hieno, kiteinen, keltainen massa imusuodatetaan, pestään pienellä määrällä etanoli-vettä (3:1) ja kuivataan.

30 Saanto: 67,2 g : ^1 0^12^2^3 ^ ^ )

.**.·. jp 208CC - 211 C

; ^589 = -186,Γ (C = l , IN HC1 ) NMR (DKS0):rf= 1.8 (s, 3H) ; 5,05 (d, 1H), 6.52 (d. J.8,5 Hz, 2H)· 7>·02 (d. 8=8,5 Hz, 2H) ; 8r 35 ( d, 1H) ppm · 13 708 37 d) D-<-asetamido-<- (4-aminofenyyli)etikkahappo-metyyliesteri (2d) 67,7 g (0,33 moolia) 2c:tä suspensoidaan 400 ml:aan metanolia ja -10°C:ssa - -5°C:ssa sekoittaen lisä-5 tään tipoittain 34,9 ml (0,487 moolia) tionyylikloridia, jolloin muodostuu kirkas, oranssinvärinen liuos. Liuoksen lämpötilan annetaan kohota yön aikana 25°C:een ja tämän jälkeen haihdutetaan vakuumissa kuiviin. Jäännös lisätään 1000 ml:aan etikkaesteriä ja 800 ml:aan 10 %:sta NaHCO^-10 liuosta ja pH saatetaan 2 N natronlipeällä arvoon 7,5.

Etikkaesterifaasi erotetaan, vesipitoinen faasi uutetaan vielä kaksi kertaa etikkaesterillä ja yhdistetyt uutteet pestään keittosuolaliuoksella. Sen jälkeen kun on kuivattu ja haihdutettu liuotin saadaan 48,1 g (67 %).

15 C11H14N2°3 (222’2) (Scj f g g = - 2 2 2 , 2 = (C-l, C2H5OH) NMR (DMS0):/= 1,85 (s, 3H); 3,55 (s, 3H), 5,1 (d, 1H), 5,15 (s, 2H); 6,52 (d, J=9 Hz, 2H), 20 6,97 (d, J = 9 Hz, 2H); 8,45 (d, 1H) ppm.

e) D-ob-asetamido-cC- ( 2-aminobentsotiatsol-6-yyli) -etikkahappo-metyyliesteri (2e) . 47,8 g (0,206 moolia) 2d:tä suspensoidaan 620 ml:aan jääetikkaa ja lisätään 80 g (0,823 moolia) KSCN:ää kiinteänä. 25 ... Sen jälkeen kun on sekoitettu 4 5 minuutin ajan huoneenlämpö- tilassa muodostuu kirkas liuos, joka jäähdytetään 10°C:een ja lisätään tipoittain 11,6 ml (0,226 moolia) bromia - liuotettuna 100 ml:aan jääetikkaa - 15 minuutin sisällä.

Lopuksi sekoitetaan 1 tunnin ajan 10°C:ssa - 15°C:ssa. Muodos-30 tuneesta kidepuurosta tislataan vakuumissa jääetikkaa eril-: leen, jäännös suspensoidaan 1000 ml:aan vettä ja pH saate- taan Na^O-^lla arvoon 6,3. Lopuksi sekoitetaan 2 tuntia ‘ . 70-80°C:ssa, uutetaan useita kertoja etikkaesterillä, yhdis tetyt etikkaesterifaasit pestään keittosuolaliuoksella ja : 35 kuivataan Na2S04:llä.

: : : Saanto 33,8 g (59 %) 38 1.:708 C12H13N3°3S (279>3)

Lascettu:C 51,5 H 4,7 N15,0 S 11,5 Löydetty: C 52,0 H5,5 N14,2 S 11,0 -- 20 0

Ax/ 539 = - 1 26,0° (C = 1, C^OH) 5 NMR (0MS0): S - 2,19 (s, 3H), 3,62 (s, 3H), 5,35 (d, 1H), 7,2 (d, 1H) 7,33 (d, 1H) 7,54 (s, 2H), 7,65 (d, 1H), 8,67 (d, 1H) ppm.

f) D-oC-amino-oC- (2aminobentsotiatsol-6-yyli) etikkahappo- 10 dihydrokloridi (2f) 70 g:aa (0,251 moolia) 2e:tä sekoitetaan 700 ml:ssa 6 N suolahappoa 40 minuutin ajan 40°C:ssa. Tällöin muodostunutta kirkasta liuosta sekoitetaan edelleen 1 1/2 tunnin ajan 110°C:ssa, tämän jälkeen jäähdytetään 0°C:een ja haih-15 dutetaan 200 ml:aan. Muodostuneeseen kidepuuroon lisätään 1000 ml asetonia, sakka imusuodatetaan, pestään asetonilla ja kuivataan P^O^^llä.

Saanto: 34,9 g (47 %)

CgHgN302S 2 HC1 (296,2) 20

Laskettu C36.4 H 3,75 N 14,1 S 10,8 Cl 23,9 Löydetty: C35,5 H 4,1 N 1 3 , 5 S 10 f 9 Cl 23,5 7 5 8 9 = -84 ^4° (C = 1, IN HC1) NMR (°20): = 5·25 <s> 1H)1 7-58 (t, 2 H) , 7,88 (s, 1H) ppm.

::: 25 : : : Haihduttamalla emäliuos ja digeroimalla muodostunut kidepuuro asetonilla voidaan edelleen saada yhtä puhdas tuote. Saanto:20 g (25 %) :Y: ^/539 = "78,7° (C = 1, 1 N HC1) 30 g) D-°C-t-butoksikarbonyyliamino-c£- (2-aminobentsotiatsol- ‘ 6-yyli)-etikkahappo (2g) 20 g:aan (0,0675 moolia) 2f:ää lisätään 310 ml:ssa 10 %:sta litiumhydroksidi-liuosta ja 210 ml:ssa dioksaania 36,3 g (0,166 moolia, 2,45 ekvivalenttia) di-t-butyylidi-”· 35 karbonaattia ja sitten sekoitetaan yön ajan pH 10:ssä.

39 'ν«·/08

Saostunut litiumkarbonaatti imusuodatetaan ja pestään edelleen lämpimällä vedellä (300 ml). Suodos haihdutetaan 150 mlrksi, saatetaan happameksi 2 N HCl:llä pH-arvoon 3,5 ja uutetaan kaksi kertaa etikkaesteri/THF:llä (10:1). Yh-5 distetyt uutteet pestään keittosuolaliuoksella, kuivataan MgS04:llä, liuos haihdutetaan 100 ml:ksi ja lisätään 500 ml n-heksaania. Saostunut tuote imusuodatetaan, pestään n-heksaanilla ja kuivataan vakuumissa KOHrlla.

Saanto 15,9 g 10 C14H17N3°4S * H2° (341.3)

Laskettu: C 49,3 H5,6 N 12,3 $ 9,4 Löydetty: C 48,2 H 5,3 N 11,3 S 10,0 — ^539 = -1 30,9' (C = 1, C H 0 H ) 15 NHR (0MS0): 6 - 1,4 (s, 9H); 5,1 („, 7,25 . 7(34 2H) 7,53 (d, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,98 (s , 2H ) ppm h) D-7-(2-aminobentsotiatsol-6-yyliglysyyliamido)3- 20 kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo (2h) 15,5 g:n (0,0479 moolin) 2g:tä annetaan reagoida 220 ml:ssa DMF:ää vastaavasti kuten esimerkissä 1 f 6,78 ml:n kanssa (0,0479 moolia) trietyyliamiinia ja 5,89 ml:n kanssa • : : (0,0479 moolia) pivaloyylikloridia. Seosanhydridi lisätään 25 15 minuutin sisällä -10°C:ssa tipoittain 7-ACCA:n trietyyli- ammoniumsuola-1 iuokseen, joka on valmistettu sekoittamalla 11,24 g (0,0479 moolia) 7-ACCA:a 110 ml:ssa THF:ää ja 110 ml:ssa H20:ta ja lisäämällä tipoittaen trietyyliamiinia. Seos-Γ. anhydridin lisäyksen aikana pH pidetään vakio-arvossa 7,5 30 lisäämällä samanaikaisesti trietyyliamiinia - liuotettuna vesi/THF:ää (1:1).

•Boc-suojatun kefalosporiinin eristäminen ja suojauksen poisto *·* ' tapahtuvat kuten esimerkissä 1 f.

-:··· Saanto: 13,4 g (51 % raakatuotetta) 35 C16H14C1N504S2 · CF3COOH (553,9) 4„ > '-'08

Sen jälkeen kun raaktuotteelle on suoritettu prepara-tiivinen HPLC-erotus käyttäen Whatman-pylvästä (Magnum M40, 500 x 40, Partisil ODS-3, 50 pm) ja 2 %:sen etikkahapon toimiessa eluointiaineena saadaan 4,3 g.

5 C16H14C1N5°4S2 ' 2 H2° ' 1/3 CH3C00H (495,9)

Lasket- c 4Q 36 H 3^93 N 14,12 S 12,9 Löy- C 40.5 H 3,9 N 12,9 S12,0 detty: NMR (DC00D): 3,53 (d, J=18 Hz, 1H); 3,94 (d, J=18 Hz, 10 1H); 5,32 (d, J = 5 Hz, 1H) ; 5,75 (s, 1H), 5,94 (d, J = 5 Hz, 1H), 7,84 (s, 2H), 8,12 (s, 1H) ppm.

Esimerkki 3 15 DL-7-(2-aminobentsotiatsol-6-yyliglysyyliamido)-3- metyyli-3-kefemi-4-karboksyylihappo rQ-ciKo.»» -,κ

20 1 ΝΗ, J 1 I

Η,ϊΓ' S

COOH

. -50°C:een jäähdytettyyn liuokseen, jossa on 4,0 g •-25 (12'4 mmol) le:tä (Mono-Boc-johdannaista) 30 ml:ssa DMFzää/ 30 mlzssa THFrää ruiskutetaan peräjälkeen 2,16 ml (12,4 mmol) etyylidi-isopropyyliamiinia ja 0,96 ml (12,4 mmol) metaani-; sulfonyylikloridia hitaasti. Sekoitetaan 45 minuuttia -50°C:ssa ja tiputetaan liuos (0°C), jossa on 3,35 g (12,4 mmol) 7-amino-3-metyyli-3-kefemi-4-karboksyylihappo-t-butyyliesteriä ja 2,16 ml (12,4 mmol) etyylidi-isopropyyli-: amiinia 25 mlzssa THF:ää ja 25 mlzssa metyleenikloridia. Se- koitetaan edelleen 15 minuutin ajan -50°C:ssa ja lopuksi vielä ‘ . 45-60 minuuttia ilman jäähdytystä. Tämän jälkeen liuotin tis- ... lataan vakuumissa, jäännös liuotetaan 300 ml:aan etikkaesteriä, ·** pestään 0,1 N suolahapolla, keittosuolaliuoksella, NaHCO^- liuoksella ja vedellä. Sen jälkeen kun on kuivattu ja tislattu liuotin saadaan 3,2 g (45 %) .

15 708 41 1,5 g (2,6 mmol) Boc-suojattua kefalosporiinia liuotetaan 30 ml:aan CH2Cl2:ta, 0°C:ssa lisätään 0,5 ml anisolia ja 30 ml TFE:tä ja sekoitetaan 1 tunti huoneenlämpötilassa. Lopuksi TFE/CH2Cl2~seos tislataan vakuumissa ja 5 öljyiseen jäännökseen lisätään eetteriä. Trifluoriasetaatti imusuodatetaan, pestään eetterillä, kuivataan, lopuksi liuotetaan 200 ml:aan vettä ja pannaan pylvääseen, jossa on Amberlite IRA-68: aa (asetaatti-muodossa). Pestään 200 ml:lla vettä ja eluaatti lyofilisoidaan.

10 Saanto: 764 mg C1l7N5O4S2 (419,5) NMR (DCOOD: δ = 2,16 <d, 3H), 3,2-3,64 (mm, 2H), 5,18- 5,26 (dd, 1H), 5,72-5,85 (m und d, 2H), 7,32 (m, 2H), 8,16 (d, 1H) ppm.

15 Esimerkki 4 D-7-(2-aminobentsotiatsol-6-yyliglysyyliamido)-3-metyyli-3-kefemi-4-karboksyylihappo (4a) ja L-muoto (4b) 400 mg erotetaan käyttäen preparatiivista Zorbax-pylvästä (DuPont 250-21, ODS, 8 pm, 230 nm, eluointiaine: 20 93 % 0,1 % TFE:tä H20:ssa - 7 % metanolia) D- ja L-muodoksi.

L-muoto (piikki):

Eluoinnin jälkeen saadaan ensiksi L-muoto piikkinä I. Saanto 110 mg.

Trifluoriasetaatti liuotetaan 50 ml:aan H20:ta, - 25 pannaan pylvääseen, jossa on Amberlite IRA-68:aa (asetaatti-muodossa) ja eluoidaan 200 ml :11a H20:ta ja lyofilisoidaan. Saanto:55 mg C17H17N5°4S2 (*19.5> NMF (DCOOD): δ = 2,26 (s, 3H), 3,48 <d, J=18 Hz, 1H), ' 30 3,62 (d, J= 18 Hz, 1H), 5,26 (d, J = 5 Hz, 1H), 5.78 (s, 1H), 5,82 (d, J=5 Hz» ·.**: 1H), 7,84 (q, 2 H), 8,18 (s, 1H) ppm.

42 t Ο / O 8 D-muoto (piikki II) :

Eluoimalla edelleen 0,1 % trifluorietikkahappo-metanolilla saadaan D-muoto piikkinä II.

Saanto: 71 mg 5 Trifluoriasetaatti muutetaan käyttämällä apuna

Amberlite IRA-68:aa (asetaatti-muodossa) betaiihiksi.

Saanto 47,3 mg NMR < DCOOD) : δ = 2,19 <s, 3H) , 3,3 id, J=18 Hz, 1H), 3,5 <d, J=18 Hz, 1H), 5,2 <d, J=5 Hz, 1H), 1 0 5,75 (s, 1H), 5,86 (d, J=5 Hz, 1H) 7,84 <s, 2H), 8,16 (s, 1H) ppm.

Esimerkki 5 DL-7-(2-amino-6-metyylibentsotiatsol-4-yyliglysyyli-15 amido)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo ö" c,h-co-sh-^s / \ NHj ^Lnv^“c1

s N OI

20

NH j C00H

. a) 2-amino-6-metyylibentsotiatsolikarboksyylihappo-4- 25 metyyliesteri (5a) 50 g (0,303 moolia) 2-amino-5-metyyli-bentsoehappo-metyyliesteriä liuotetaan 300 ml:aan jääetikkaa ja lisätään 120,6 g (1,24 moolia) kaliumrodanidia - 200 ml:aan jääetikkaa liuotettuna 10°C:ssa tiputetaan 17,42 ml (0,335 moolia) .•.‘2q bromia ja lopuksi sekoitetaan vielä 2 tunnin ajan ilman jäähdytystä. Suspensio kaadetaan sekoittaen 3 litraan jäävettä, saostunut tuote imusuodatetaan, pestään laimennetulla sooda-liuoksella ja vedellä. Suodatinkakku lietetään H20:hon, sekoitetaan yön ajan 100°C:ssa. Jäähdyttämisen jälkeen tuote imu-... 35 suodatetaan, pestään H20:lla ja kuivataan 40°C:ssa vakuumissa. Saanto: 60 g (89 %) 43 13 708 ^10^10^2^2^ (222,2) NMR (DMSO): 6 = 2,35 (s, 3H). 3,8 (s, 3H), 7,5 <s, 1H), 7,71 <s, 1H), 7,81 < s, 2H) ppm .

5 b) 2-amino-4-hydroksimetyyli-6-metyyli-bentsotiatsoli (5b) 30 g (0,135 moolia) 5a:ta pelkistetään vastaavasti kuten esimerkissä la 337,7 ml:lla (0,405 moolilla) DIBAL1 ia (20 %:nen liuos tolueenissä).

10 Saanto: 21,2 g (81 %) C9H10N2OS <1<?4,2) NMR (DMSO): β * 2,35 <s. 3H), 4,72 (d, 1H>. 5,05 (t, 2H), 7,12 (s, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,41 (s, 2H) ppm.

15 c) 2-amino-6-metyyli-bentsotiatsoli-4-karboksi- aldehydi (5c) 67,6 g:aa (0,348 moolia) 5b:tä käsitellään vastaavasti kuten esimerkissä 1b 241 g:11a (2,77 moolilla) mangaani (IV)-oksidia.

20 Saanto: 33,6 g (50 %) C9H8N2OS (192,2) NMF (DMSO): 6 = 2,39 (s, 3H) , 7,45 (s, 1H) , 7,79 : (S, 1H), 8,01 (s, 2H) , 10,6 (s. 1H) ppm.

• 25 d) 5-(2-amino-6-metyylibentsotiatsol-4-yyli)-2,4- imidatsolidiinidioni (5d) 36,2 g:n (0,188 moolin) 5c:tä annetaan reagoida vastaavasti kuten esimerkissä 1c 75,9 g:n (0,791 moolin) kanssa ammoniumkarbonaattia ja 14,3 g:n (0,292 moolin) kanssa 30 natriumsyanidia.

Saanto: 25,5 g (52 %) 44 I :/08 C11H10N4°2S <262'3)

Lasket- C 50.37 H 3,84 N 21,36 S 12,22 LöydettyC 51,2 H5,0 N 21,0 S11.2 5 NMR (DCOOD): δ = 2,28 (s, 3H). 5,87 <s, 1H), 7.43 (s. 1H), 7.48 <s. 1H).

7,64 <s. 2H) ppm.

e) DL-o(.-amino-oC- ( 2-amino-6-metyyli-bentsotiatsol-4-yyli)etikkahappo (5e) IQ 25,5 g:aa (97,2 mmol) 5d:tä kuumennetaan 500 ml:ssa bromivetyhappoa (48 %)24 tunnin ajan paluujäähdyttäen.

Tämän jälkeen reaktioliuos haihdutetaan kuiviin, jäännös liuotetaan H^Oihon, pestään kaksi kertaa etikkaesterillä ja vesipitoinen faasi haihdutetaan kuiviin vakuumissa.

15 Saanto: 38,1 g C10H11N3°2S ’ 2HBr ‘ 2H2° <435.11 feeltu· C 27'60 H 3'94 N 9'65 S 7·36 Br 36>73 Löydetty:C 26,9 H 3.9 N 10,2 S 6,5 Br 40,8 f) DL-oC-t-butyylioksikarbonyyliamino-οζ- (2-amino-6-20 metyyli-bentsotiatsol-4-yyli)-etikkahappo (5f) 34,7 g:aa (0,09 moolia) 5e:tä sekoitetaan vastaavasti kuten esimerkissä le 98,2 g:n (0,45 moolin) kanssa di-t-butyylidikarbonaattia 4 päivää huoneenlämpötilassa. Raakasaanto: 19,8 g (50 %), 6 g metanolista uudelleenkitey-25 tyksen jälkeen.

C15H19N3°4S <337,4) NMR < DMSO): 6 = 1,37 (s, 3H) , 5,57 <d, 1H>, 7,0 (s- 1H), 7,25 (d, 1H), 7,35 (s, 7,52 (s, 2H) ppm.

30 ·:' .-708 45 g) DL-7-(2-amino-6-metyylibentsotiatsol-4-yyliglysyy- liamido)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo (5g) 3,37 g:n (0,01 moolin) 5f:ää annetaan reagoida vastaavasti kuten esimerkissä 1 f. 1,4 ml:n (0,01 moolin) 5 trietyyliamiinia kanssa, 1,23 ml:n (0,01 moolin) piva- loyylikloridia kanssa ja 2,34 g:n (0,01 moolin) 7-ACCA’a kanssa.

Boc-suojatusta kefalosporiinista poistetaan suojaus vastaavasti kuten esimerkissä 1 g. TFE:n poistami-10 seksi ainetta käsitellään Amberlite IRA-68:lla (ase-taatti-muodossa) ja lyofilisoidaan.

Saanto: 830 mg (16 %) C17H16ClN3°4S2 ‘ 3H2° <507.9) NMR (DC00D): 6 = 2.49 (d, 3H). 3.58-4.02 (mm. 2H), 15 5.36 <dd, 1H>, 5,83-5.94 <m, 2H), 7,56 (m, 1H), 7.84 (m. 1H) ppm.

Esimerkki 6 DL-7-(bentsimidatsol-5(6)-yyliglysyyliamido)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo 20 Η'ίΌ- c£co~™ j NH> o^n y^-ci

: 25 C00H

a) 5(6)-hydroksimetyyli-bentsimidatsoli (6a) 40 g:aan (0,227 moolia) bentsimidatsolikarboksyy-lihappo-5(6)-metyyliesteriä lisätään vastaavasti kuten 30 esimerkissä la THF:ssä 1150,3 ml (1,38 moolia) DIBAL’ia (20-% liuos tolueenissa, Schering) 0°C:ssa ja sekoitetaan yön ajan huoneenlämpötilassa.

Saanto: 22,5 g (67 %) C8H8N20 (148.2) 35 W® (DMSO): ό = 4,61 (s, 2H), 5.22 (leveä s, IH>, 7.18 (d, 1H), 7.56 (d. 2H), 8,2 (s, 1H). 12.42 <*, 1H) ppm.

i r/08 46 b) Bentsimidatsoli-5(6)-karboksialdehydi (6b) 42,3 g:aa (0,285 moolia) 6a:ta sekoitetaan 130 ml:ssa THFrää ja 1300 ml:ssa DMF:ää 48 tunnin ajan huoneenlämpötilassa 175 g:n kanssa (2,01 moolia) mangaani-5 (IV)-oksidia, tämän jälkeen imusuodatetaan ruunikivestä erilleen Seitz-suodatinta käyttäen ja suodos haihdutetaan kuiviin. Jäännöstä sekoitetaan petrolieetterissä, imusuodatetaan, pestään petrolieetterillä ja kuivataan vakuu-missa 60°C:ssa.

10 Saanto: 37,3 g (89 %) C8H6N2° NMR (DMS0): δ = 7,78 (d, 2H), 8,22 (s, 1H), 8,52 (s, 1H) , 10,05 < s, 1H) ppm.

c) 5-(bentsimidatsol-5(6)-yyli)-2,4-imidatsolidiini- 15 dioni (6c) 45,8 g (0,313 moolia) 6b:tä sekoitetaan vastaavasti kuten esimerkissä le etanoli/vedessä 23,03 g:n kanssa (0,47 moolia) natriumsyanidia ja 120,3 g:n kanssa (1,25 moolia) ammoniumkarbonaattia 20 tunnin ajan 60°C:ssa.

20 Saanto: 36,4 g (54 %) ^10^8^4^2 (216,2) NMR (DMS0): δ = 5,44 (s, 1H>. 7,53 <d. J = 9 Hz, 1H), 7,83 <s, 1H), 7,88 <d, J=9 Hz, 1H), 8,63 (s, 1H), 9,63 <s, 1H>, 10,93 25 ( s , 1H) ppm .

d) DL-a-amino-a-(bentsimidatsol-5(6)-yylietikkahappo (DL-bentsimidatsol-5(6)-yyliglysiini, (6d) 20 g (0,093 moolia) 6c:tä ja 105,7 g (0,335 moolia, 3,6 ekv.) bariumhydroksidia 1000 ml:ssa vettä sekoi-' : 30 tetaan 24 tunnin ajan 100°C:ssa. Lopuksi suspensio lai mennetaan 500 ml:11a H20:ta, 100°C:ssa johdetaan 2 tunnin ajan C02:ta, saostunut bariumkarbonaatti imusuodatetaan .···. kuumana ja pestään kiehuvalla vedellä. Suodos haihdute- • ^ taan kuiviin.

35 Saanto: 20,1 g (80 %) i 3 708 47 C9H9N3°2 ' 2H2° ' 1/3 B» COo (293.0)

Lasket- J

tu: C 38(26 H 3.10 N 14,34 Ba 15.62 Löydettyrc 40,6 H3,9 N 15,5 Ba 14,7 NMR (DCOOD): 6 = 5,71 (s, 1H), 7,94 (d. 1H), 8,16 5 <d, 1H>. 8,86 (s, 1H) 9,5 (s, 1H) ppm.

e) DL-a-t-butyylioksikarbonyyliamino-a-(1-t-butyyli-oksikarbonyylibentsimidatsol-5(6)-yyli)etikkahappo (6e) 12 g (0,044 moolia) 6d:tä sekoitetaan vastaavasti 10 kuten esimerkissä le) 38,4 g:n (0,176 moolia) kanssa di-t-butyylidikarbonaattia yön ajan huoneenlämpötilassa. Raakatuote liuotetaan 80 ml:aan etikkaesteriä ja sekoitetaan 600 mitään petrolieetteriä.

Saanto: 14,6 g (84 %) 15 C19H25N306 (391,4)

Lasket- c 58,30 H 6,44 N 10,73 Löydet- C 5 6,8 H 6,6 N 9,8 (NaOD) : 6 = 1,24 (s. 9H). 1.4 (s, 9H). 5,05 < s . 1H). 7.2 (d. 1H). 7,65 (s ja 20 d. 2H) . 8,06 (s . 1H) ppm.

f) DL-7-(bentsimidatsol-5(6)-yyliglysyyliamido)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo · trifluoriasetaatti (6f) 2,0 g:n (5,1 mmol) 6e:tä annetaan reagoida vastaa-25 vasti kuten esimerkissä 1£) 0,71 ml:n (5,1 mmol) kanssa trietyyliamlinia, 0,628 ml:n (0,51 mmol) kanssa pivalo-yylikloridia ja 1,32 g:n (5,61 mmol) kanssa 7-ACCA'a.

2,3 g:sta (3,78 mmol) Boc-suojattua kefalosporiinia poistetaan suojaus vastaavasti kuten esimerkissä lg. Trifluo-30 riasetaatti liuotetaan H20:hon, pestään kaksi kertaa etikkaesteri/eetterillä (1:1) ja vesipitoinen faasi lyo-filisoidaan.

Saanto: 1,5 g (76 %) 35 * :708 48 C16H14C1N5°4S ' CF3COOH (521,9) NMR (DCOOD): δ = 3,5-4,03 (mm, 2H), 5,29-5,38 (dd, 1H), 5,88-5,96 (dd ja s, 2H), 7,93-8,0 (t, 1H), 8,16-8,22 < t. , 1H) , 8,3 (s , 1H) , 9,52 (m, 1H> 5 PPm.

Esimerkki 7 D-7-(bentsimidatsol-5(6)-yyllglysyyliamido)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo (7a) ja L-muoto (7b) 700 mg 6f:ää erotetaan käyttäen preparatlivista 10 HPLC-pylvästä (Hibar 250-25, RP-18, 7 pm, 220 nm, eluoin-tlaine: 1000 ml H20:ta - 5 ml asetonitriitillä - 1 ml etlkkahappoa) D- ja L-muodoksi. Kulloinkin 30 mg:n annoksen DL-seosta 6f liuotetaan 2 ml:aan eluointiainesystee-miä, pannaan pylvääseen ja eluointiaine-virtauksen olles-15 sa 10 ml/min erotetaan 2 fraktioksi (piikki I ja piikki il).

a) D-muoto (piikki II):

Saanto: 18 mg

Analyyttinen HPLC: katso L-muoto.

20 Retentio: 8,14.

b) L-muoto (pilkki I)

Saanto: 42 mg

Analyyttinen HPLC: (Hibar 250-4, RP-8, 10 pm, 255 nm, liikkuva faasi: 975 ml Merck-fosfaatti-puskuria pH 7, - 25 25 ml asetonitriiliä, virtaus: 1,5 ral/min.

Retentio: 6,90 NMR (DCOOD): 6 = 3,74 <d, JM8.5 Hz, 1H). 3,98 (d, J = 18,5Hz, 1H). 5,35 (d, J = 5 Hz, 1H>, 5,86 < s ja d. 2H), 7,96 <d, 1H), 30 8-16 <d, 1H), 9,5 (s, 1H) ppm.

Esimerkki 8 DL-7-(bentsimidatsol-5(6)-yyllglysyyliamido)-3-me-tyyli-3-kefemi-4-karboksyylihappo

35 H'nO~ CH-CO-NH

NHj ^

COOH

«: S 708 49 3,5 g (8,9 mmol) 6e:tä ja 1,36 g (8,9 mmol) 1-hyd-roksibentstrlatsolia liuotetaan typpiatmosfäärlssä 15 ml:aan THF:ää. Lisätään 1,84 g (8,9 mmol) N,N' -disyklo-heksyyllkarbodl-lmidlä (DCC:tä), liuotettuna 10 ml:aan 5 THF:ää 10°C:ssa siihen ja sekoitetaan 2 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Sen jälkeen kun on lisätty 2,41 g (8,9 mmol) 7-amino-3-metyyli-3-kefemi-4-karboksyylihappo-t-butyyliesteriä, liuotettuna 10 ml:aan CH2Cl2:ta, sekoitetaan lopuksi jäähdyttämättä yön ajan. Saostunut urea 10 imusuodatetaan, pestään THF:llä ja suodos haihdutetaan kuiviin. Jäännös liuotetaan etikkaesteriin, pestään NaHCOj-liuoksella/vedellä, kuivataan Na2S04:llä ja suodos haihdutetaan kuiviin vakuumissa (saanto:3,7 g). Sen jälkeen kun on kromatografioitu silikageelillä käyttäen pet-15 rolieetteri/etikkaesteriä (3:1) ja petrolieetteri/etikka-esteriä (1:1) saadaan 1,3 g puhdasta tuotetta (23 %).

1,0 g:sta (1,55 mmol) Boc-suojattua kefalosporii-nia poistetaan suojaus vastaavasti kuten esimerkissä 3, TFE poistetaan käyttäen Amberllte IRA-68:aa (asetaatti-20 muodossa) ja liuos lyofilisoidaan.

Saanto: 260 mg (43 %) C17H17N5°4S (387*4) NMR (DC00D) : 6 = 2,18 (s, 3H) , 3,2-3.65 <nun. 2H), 5.18- 5,26 (dd, 1H), 5,78-5,88 (dd, 2H), 7,98 : 25 <d, 1H), 8,18 (t, 1H>, 9,5 (d, 1H) ppm.

Esimerkki 9 DL-7-(2-amino-lH-bentsimidatsol-5(6)-yyliglysyyli-amido)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyy1ihappo 30 CH-CO-NB-^ H,^X' NHl 0^^C1

COOH

. : 35 u / O 8 50 a) 2-amino-5(6)-hydroksimetyylibentsimidatsoli (9a) 132 g (0,745 moolia) metyyli-2-amino-5(6)-bents- imidatsolikarboksilaattia suspendoidaan typpiatmosfääris-sä 2200 ml:aan THF:ää. Lievästi jäähdyttäen (jäähaude) 5 tiputetaan 596 ml (2,08 moolia) natrium-bis-(2-metoksi-etoksi)-alumiinihydridiä (Red-Al, 3,5 molaarinen liuos tolueenissä), liuotettuna 1000 ml:aan THF:ää 25-31°C:ssa 2 tunnin sisällä siihen. Liuosta sekoitetaan lopuksi 1 tunnin ajan ilman jäähdytystä ja kuumennetaan yön ajan 10 paluujäähdyttäen. Ylimäärä Red-Al*ia hajotetaan lisäämällä 160 ml vettä typpivirrassa varovaisesti, sekoitetaan edelleen 1 tunnin ajan, alumiinihydroksidi imusuodate-taan, pestään 2 litralla THF:ää ja suodos haihdutetaan tummaksi öljyksi. Jäännös liuotetaan 500 ml:aan etikkaes-15 teriä ja pestään kolme kertaa kulloinkin 500 ml:11a vettä. Yhdistetyt H20-faasit pestään kolme kertaa kulloinkin 200 ml:11a etikkaesteriä, vesifaasi suodatetaan ja lyofi-lisoidaan.

Saanto: 74 g (61 %) 20 C8H9N30 (163,2) NMF (DMS0): 6 = 4,46 (s 2H), 6,24 <s, 2H), 6,82 <d, 1H), 7,03 (d, 1H), 7,09 < s , 1H) ppm.

b) 2-amino-bentsimidatsol-5(6)-karboksialdehydi (9b) .25 74 g (0,453 moolia) 9a:ta sekoitetaan 2000 ml:ssa jääetikkaa 248,4 g:n kanssa (2,857 moolia, 6,3-kertainen ylimäärä) Mn02:ta 3 päivän ajan huoneenlämpötilassa. Ruu-nikivi imusuodatetaan, suodos suodatetaan vielä kerran silikageelillä ja etikkahappoliuos haihdutetaan. Jäljel-30 lejäävä öljy digeroidaan 1,5 litrassa etikkaesteriä, jol-loin tapahtuu kiteytyminen. Kiteet imusuodatetaan, pestään eetterillä ja kuivataan vakuumissa.

.·. : Saanto: 119,7 g (96 %) ciohiiN3°3 · 3H2° * CHjCOOH (275,3) 35 Laskettu: C 43,6H 6,22 N 15,26 Löydetty: C 44,2H 4,9 N 11,0 ° > O 8 51 c) 5-( 2-amino-lH-bentsimidatsol-5-yyli)-2,4-imidatso-lldiinidioni (9c) 119,7 g:aa (0,435 moolia) 9b:tä sekoitetaan vastaavasti kuten esimerkissä le) 900 ml:ssa etanolia 219 5 g:n kanssa (2,28 moolia) ammoniumkarbonaattia ja 41,4 g:n kanssa (0,845 moolia) natriumsyanidia 900 ml:ssa H20:ta 20 tunnin ajan 60°C:ssa. Sen jälkeen kun etanoli on tislattu pois, suspensio saatetaan happameksi 0°C:ssa, kunnes pH on 2 ja tämän jälkeen saatetaan takaisin pH-arvoon 10 6,0,jolloin muodostuu rasvainen tuote, joka vähitellen tulee kiinteäksi.

Saanto: 57,6 g (58 %) C10H8N502 (231,2)

Laskettu: C 51,94 H 3,92 N 30,28 15 Löydetty: C 51,4 H 4,1 N 29,1 d) DL-a-t-butyylioksikarbonyyliamino-a-(2-t-butyyli-oksikarbonyyli-lH-bentsimidatsol-5-yyli)etikkahappo (9d) 41,2 g (0,178 moolia) 9c:tä sekoitetaan vastaavasti kuten esimerkissä Id) 42,6 g:n kanssa (1,781 moolia) 20 litiumhydroksidia 1000 ml:ssa H20:ta 2 päivän ajan 100°C:ssa. Liuos suodatetaan kuumana, suodoksen pH saatetaan 0°C:ssa arvoon 2 ja vesipitoinen faasi uutetaan etikkaesterillä. Vesipitoinen liuos haihdutetaan kuiviin vakuumissa.

. 25 Saanto: 62,4 g NMH <N»0D, DMSO): 6 ~ 4,12 <s, 1H). 6,71 <d. 1H), 6,97 (d, 1H), 7,01 (s, 1H) PPm · Jäännös saatetaan 25,4 g:lla (0,303 moolia) . 30 NaHC03:a 300 ml:ssa vettä liuokseen ja tiputetaan 66,1 g (0,303 moolia) di-t-butyylidikarbonaattia. Sekoitetaan 2 päivän ajan huoneenlämpötilassa. Dioksaani tislataan pois, tähdeliuos laimennetaan H20:lla ja pestään petroli-eetterillä. Vesipitoisen faasin pH saatetaan jäällä jääh-35 dyttäen 2 N HCl:llä arvoon 2,5 ja uutetaan etikkaesteril- le 708 52 lä. Sen jälkeen kun on pesty keittosuolaliuoksella, kuivattu Na2S04:llä ja haihdutettu orgaaninen faasi saadaan 17,9 g raakatuotetta, joka seostetaan uudelleen THF/pet-rolieetteristä.

5 Saanto: 7,0 g C19H26N4°6 <406,4) NMF (NaOD): δ = 1,42 <s, 9H), 1,46 (s, 9H), 6,98 (d, 1H), 7,28 <d, 2H) ppm.

e) DL-7-(2-amino-lH-bentsimidatsol-5-yyliglysyyliami- 10 do)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo (9e) 4,9 g:n (12,1 mmol) 9d:tä annetaan reagoida vastaavasti kuten esimerkissä lf) 1,69 ml:n kanssa (12,1 mmol) trietyyliamiinia, 1,49 ml:n kanssa (12,1 mmol) pivaloyylikloridia ja 2,98 g:n (12,7 mmol) 15 kanssa 7-ACCA'a.

Saanto: 3,0 g (40 %; THF/petrolieetteri)

Boc-suojattua kefalosporiinia käsitellään vastaavasti kuten esimerkissä lg. 1 g :11a TFE/CH2C12:ta (1:1). Saanto: 2,35 g (91 %) 20 C16H15C1N6°4S ' CF3COOH (536,9) NMR (DCOOD): δ = 3,52-4,0 (mm, 2H), 5,28-5,36 (dd, 1H), 5,70 (d, 1H), 5,84-5,92 (dd, 1H), 7,58-7.66 (m.

2H), 7,76 (d. 1H) ppm.

; · 25 Esimerkki 10 D-7-(2-amlno-lH-bentsimidatsol-5-yyliglysyyliami-do)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo (10a) ja L-muoto (10b) lie:n preparatlivinen HPLC-erotus: 30 Pylväs: Hibar 250-25 (RP-18, 7 pm, 254 nm)

Eluointiaine: 1000 ml H20:ta - 60 ml asetonitriiliä -1 ml TFE:tä.

Syöttö: 2,3 g; kulloinkin 200 mg liuotettuna 2-3 ml:aan eluointiainetta/läpäisykerta.

35 53 13708

Saanto: piikki I (L-muoto): 430 mg piikki II (D-muoto): 220 mg 220 mg piikkiä II liuotetaan 15 ml:aan H20:ta, pannaan pylvääseen, jossa on Amberlite IRA-68:aa (ase-5 taattimuodossa) ja pestään edelleen 200 ml:11a H20:ta. Suodos suodatetaan Millex-GS:n (0,22 pm) kautta ruiskua käyttäen ja lopuksi lyofilisoidaan.

Saanto: 155 mg NMR (DC00D): δ = 3,54 <d, J=18 Hz, 1H), 3,86 <d, J=18 10 Hz, 1H), 5,28 (d, J=5 Hz, 1H), 5,68 <s, 1H), 5,92 (d, J=5 Hz, 1H), 7,58 (d, 1H), 7,66 (d, 1H), 7,76 (s, 1H) ppm.

Esimerkki 11 15 DL-7-(2-amino-lH-bentsimidatsol-5-yyliglysyyliami- do)-3-metyyli-3-kefemi-4-karboksyy1ihappo C.H-C°-NHv/5l 20 /^n 7 NH* O ' CK3

H»N COOH

4,0 g:n (9,84 mmol) 9d:tä annetaan reagoida vastaavasti kuten esimerkissä 3) 1,71 ml:n kanssa 25 (9,84 mmol) etyyli-isopropyyliamiinia, 0,76 ml:n kanssa (9,84 mmol) metaanisulfonyylikloridia ja 2,7 g:n kanssa (9,84 mmol) 7-amino-3-metyyli-3-kefemi-4-karboksyylihap-po-t-butyyliesteriä. Saadaan 3,0 g, joka puhdistetaan k-romatografioimalla silikageelillä (eluointlaine: petroli-;·; 30 eetteri/etikkaesteri 1:1).

Saanto: 0,9 g.

0,8 g Boc-suojattua kefalosporiinia käsitellään vastaavasti kuten esimerkissä 3 TFE:llä ja lopuksi Amberlite IRA-68:lla (asetaatti-muodossa).

- 35 Saanto: 420 mg.

54 t :/08 C17H1®N6°4S 2 1/2 h2° (447.5)

Lasket-C 45,63 H 5,18 N 18,78 S 7,16 tu: LÖytSet- c 45,5 H 5,0 N 16,9 S6.6 ty: NMR (DCOOD): δ = 2,2 <s, 3H), 3,28-3,69 (mm, 2H>, 5 5,21-5,3 (dd, 1H), 5,75 <d, 1H), 5,82-5,89 < dd, 1H) 7,62-7.74 (m, 2H), 7,82 (s, 1H) ppm.

Esimerkki 12 DL-7-(2-trifluorimetyyli-lH-bentsimidatsol-5-yyli-10 glysyyliamido)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo > N/ NH’ C1

15 CF j I

CCOH

a) 2-trifluorimetyyli-lH-bentsimidatsol-5-karboksyy-lihappo (12a) 20 50 g (0,329 moolia) 3,4-diaminobentsoehappoa - liuotettuna 300 ml:aan 4 N HCl:ään kuumennetaan 40,5 g:n kanssa (0,355 moolia) TFE:tä 5 tunnin ajan paluujäähdyttäen. Tämän jälkeen liuos jäähdytetään 0°C:een, saostunut tuote imusuodatetaan, pestään vedellä ja kuivataan vakuu-. 25 missä 40°C:ssa.

Saanto: 59,7 g (73 %) C9H5F3N202 · H20 (248,2)

Laskettu: C 43,56 H 2,84 N 11,28 F 22,98 Löydetty: C 42,6 H 2,8 N 10,9 F 22,0 30 b) 2-trifluorimetyyli-lH-bentsimidatsol-karboksyyli- happo-5-metyyliesteri (12b)

Liuoksen, - jossa on 59,7 g (0,241 moolia) 12a:ta .* : 1000 ml:ssa metanolia, - läpi johdetaan 2 tunnin ajan kloorivetykaasua ja samanaikaisesti keitetään paluujääh-35 dyttäen. Lopuksi metanoli tislataan pois, jäännös liuote- o / O 8 55 taan etikkaesteri/veteen ja pH saatetaan 2 N natronli-peällä arvoon 7. Etikkaesterifaasi erotetaan, vesipitoinen faasi uutetaan kaksi kertaa etikkaesterillä, orgaaninen faasi pestään keittosuolaliuoksella, kuivataan 5 Na2S04:llä ja haihdutetaan.

Saanto 54,2 g (92 %) C10H7N2°2F3 <244,2)

Lasket- c 49 19 h 2,89 N 11,47 F 23,34 tu: Löydettyä H3.1 N 11,3 F 22,4 10 NMR < DMSO) : 6 = 4,9 (s, 3H), 7,82 (d, 1H), 8,0 <dd, 1H), 8,30 (e, 1H) ppm.

c) 2-trifluorimetyyli-5-hydroksimetyyli-lH- bentsimidatsoli (12c) 53,4 g (0,219 moolia) 12b:tä sekoitetaan vastaa-15 vasti kuten esimerkissä la 600 ml:ssa THF:ää 728,9 ml:n kanssa (0,875 moolia) DIBAL'ia (20 %:nen liuos tolueenis-sa) -70°C:ssa yön ajan.

Raakasaanto: 45,4 g C,H7F3N20 (216,2) 20 Laskettu: C 50,0 H 3,26 N 12,96 F 26,37 Löydetty: C 49,7 H 3,7 N 11,7 F 26,0

Sen jälkeen kun on kromatografioitu silikageeli 60:llä (Merck, 0,04 - 0,063 mm) käyttäen eluointiaineena tolueeni/etikkaesteriä (3:1), tolueeni/etikkaesteriä ; 25 (1:1), tolueeni/etikkaesteriä (1:3) ja etikkaesteriä, saadaan 29,3 g (62 %) bentsimidatsolialkoholia.

NMR (DMSO): 6 = 4.64 (β, 2H), 5,32 < leveä *, 1H>, 7,36 < d, 1H), 7,66 <s. 1H), 7,71 <d • .'· 1H) ppm.

-I 30 d) 2-trifluorimetyyli-lH-bentsimidatsoli-5-karboksi-aldehydi (12d) 29,3 g (0,136 moolia) 12c:tä sekoitetaan vastaavasti kuten esimerkissä Ib 1000 ml:ssa THF:ää 48 tunnin ajan huoneenlämpötilassa 71,4 g:n kanssa (0,821 moolia) 35 mangaani-(IV)-oksidia.

56 i;;08

Saanto: 23,8 g (82 %) <214,2) NMR (DMSO): δ = 7.87 <q. 2H>. 8.32 (s. 1H), 10.11 < s . 1H) ppm.

5 e) 5-(2-trifluorimetyyli-lH-bentsimidatsol-5-yyli)- 2,4-imidatsolidiinidioni (12e) 29,2 g:n (0,136 moolia) 12d:tä annetaan reagoida vastaavasti kuten esimerkissä le etanoli/vedessä 55 g:n kanssa (0,573 moolia) ammoniumkarbonaattia ja 10,4 g:n 10 kanssa (0,212 moolia) natriumsyanidia. Sen jälkeen kun etanoli on tislattu pois, liuos saatetaan happameksi 0°C:ssa 2 N HCl:llä, kunnes pH on 2, lopuksi pH saatetaan takaisin arvoon 4,5 ja uutetaan useita kertoja etikkaes-terillä. Yhdistetyt etikkaesterifaasit pestään keittosuo-15 laliuoksella, kuivataan ja haihdutetaan.

Saanto: 31,2 g (80,6 %) C11H7F3N4°2 <284'2) NMR (DMSO): δ = 5,85 (*. 1H). 7.34 <d. 1H), 7.69 (s. 1H). 7.77 <d. 1H), 8.5 (s. 1H).

20 10,83 (s, 1H) ppm.

f) DL-a-amino-a-(2-trifluorimetyyli-lH-bentsimidat- sol-5-yyli)etikkahappo (12f) 35,7 g (0,126 moolia) 12e:tä lohkaistaan vastaavasti kuten esimerkissä 5e. 500 ml:11a bromivetyhappoa 25 (48 %).

Saanto: 18,1 g (42 %) C10H8F3N3°2 ' HBr <340,0) NMR (DC00D): δ = 5.88 (s, 1H), 8,1 <d, 1H), 8,28 (d, lH),8,46(s, 1H) ppm.

'30 g) DL-a-t-butyylioksikarbonyyliamino-o-(2-tri-fluo-rimetyyli-lH-bentsimidatsol-5-yyli)etikkahappo (12g) 23,6 g (0,069 moolia) 12f:ää liuotetaan 150 ml:aan 10-% NaHC03-liuosta ja 150 ml:aan dioksaania, lisätään 48,2 g (0,221 moolia) di-t-butyylidikarbonaattia ja se-35 koitetaan yön ajan huoneenlämpötilassa. Dioksaani tisla- ι 3 7 O 8 57 taan pois, vesipitoinen faasi uutetaan petrolieetterillä ja saatetaan 0°C:ssa happameksi etikkaesterin läsnäollessa 2 N HCl:llä pH-arvoon 2. Etikkaesterifaasi erotetaan, pestään keittosuolaliuoksella, kuivataan Na2S04:llä ja 5 haihdutetaan. Raakatuote liuotetaan eetteriin, suodatetaan liukenemattomasta materiaalista erilleen, sekoitetaan petrolieetteriin ja imusuodatetaan.

Saanto: 10,8 g (43 %) C15H16F3N304 (359,3) 10 Laskettu: C 50,14 H 4,49 N 11,69 F 15,86 Löydetty: C 50,1 H 4,8 N 12,4 F 15,1 h) DL-7-(2-trifluorimetyyli-lH-bentsimidatsol-5-yyliglysyyliamido)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo (12h) 15 4,0 g:n (11,1 mmol) 12g:tä annetaan reagoida vas taavasti kuten esimerkissä lf) 1,56 ml:n kanssa (11,1 mmol) trietyyliamiinia, 1,4 ml:n kanssa (11,1 mmol) pivaloyylikloridia ja 2,92 g:n kanssa (12,4 mmol) 7-ACCA'a.

20 Saanto: 5,1 g (89 %)

Boc-suojatusta kefalosporiinista poistetaan suo jaus vastaavasti kuten esimerkissä lg ja muutetaan be-taiiniksi.

Saanto: 2,0 g (36 %) 25 C17H13C1F3N504S · 1 1/2 H20 ( 502,9)

Laskettu: C 40,61 H 3,20 N 13,93 S 6,37 F 11,34 Löydetty: C 40,2 H 3,6 N 13,6 S 4,8 F 12,2

Esimerkki 13 D-7-(2-trifluorimetyyli-lH-bentsimidatsol-5-30 yyliglysyyliamido)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo (13a) ja L-muoto (13b) • - 12h:n preparatiivinen HPLC-erotus

Pylväs: Hibar 250-25 (RP-18, 7 pm, 254 nm)

Eluointiaine: 2500 ml H20:ta - 250 ml asetonitriiliä -35 2,5 ml TFE:tä

Virtaus: 10 ml/min 58 / 08 L-muoto (piikki I): 1,4 g 12h:ta suspendoidaan 20 ml:aan eluolntlainetta, jolloin jäljelle jää 400 mg liukenematonta ainetta puhtaana L-muotona.

5 NMR (DCOOD): δ = 3,7 Cd, 1H), 3,93 (d, 1H), 5.3 (d, 1H).

5,78 (s ja d. 2H), 7,8 (d, 1H), 8,05 (d , 1H) , 8,23 (s, 1H) ppm.

D-muoto (piikki II):

Suodos suodatetaan Millex-suodattimen läpi ruiskua 10 käyttäen ja pumpataan pylvääseen virtausnopeuden ollessa 0,5 ml/min. Eluaatti lyofilisoidaan.

Saanto: 300 mg NMR (DCOOD): δ = 3,5 <d. J=18,5 Hz, 1H>, 3,85 (d. J=18,5

Hz, 1H), 5.25 (d, J=5 Hz, iH>, 5.78 15 <S’ 1H>' 5'9 (d- J=5 Hz. 1H), 7,78 (d, 1H>, 8.06 Cd. 1H), 8,21 <s. 1H) ppm. Esimerkki 14 DL-7-(2-metyyli-lH-bentsimidatsoi-5-yyliglysyyli-amido)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo 20

H /Tv S

"n ^^h-co-nh^ ^ U / NH, C1 N 0^ |

CH j CGCH

M*: 25 ·:· a) 2-metyyli-lH-bentsimidatsol-5-karboksyylihappo (14a) 100 g (0,657 moolia) 3,4-diaminobentsoehappoa keitetään paluujäähdyttäen vastaavasti kuten esimerkissä 30 12a) 47,3 g:n kanssa (0,788 moolia) jääetikkaa ja 600 ml:n kanssa 4 N HCl:ää.

Saanto: 108,5 g (72 %) C9H8N202 · 3 H20 (230,2)

Laskettu: C 46,59 H 6,13 N 12,17 ···* 35 Löydetty: C 46,7 H 4,0 N 12,2 t 5 708 59 b) 2-metyyli-lH-bentsimidatsolikarboksyylihappo-5-me- tyyliesteri (14b) 46,6 g:n (0,202 moolia) 14a:ta annetaan reagoida vastaavasti kuten esimerkissä 12b) metanolin ja kloorive-5 tykaasun kanssa.

Saanto: 31,2 g (81 %) C10H10N2O2 (190,2)

Laskettu: C 63,18 H 5,30 N 14,73 Löydetty: C 63,1 H 5,3 N 14,6 10 c) 2-metyyli-5-hydroksimetyyli-lH-bentsimidatsoli (14c) 27,8 g (0,146 moolia) 14b:tä käsitellään vastaavasti kuten esimerkissä la) 500 ml:ssa THF:ää 365,4 ml:11a (0,438 moolia) DIBAL'ia (20-% liuos toluee-15 nissa) yön ajan -70°C:ssa. Raakatuotetta sekoitetaan kie huvassa etikkaesterissä ja sen jälkeen kun on jäähdytetty 20°C:een, jäljellejäävä aine imusuodatetaan.

Saanto: 10,2 g (43 %) C9H10N2° <162.2) 20 NMR (DMSO): 6 = 2,51 <s, 3H). 4.55 <s. 2H). 7.06 (d, 1H), 7,38 <s ja d, 2H> ppm.

d) 2-metyyli-lH-bentsimidatsoli-5-karboksialdehydi (14d) 24,4 g (0,15 moolia) 14c:tä sekoitetaan vastaa-: 25 vasti kuten esimerkissä 6b) 400 ml:ssa DMF:ää 84,8 g:n kanssa (0,975 moolia) mangaani-IV-oksidia 3 päivän ajan huoneenlämpötilassa.

Saanto: 13,9 g (58 %) C9HeN20 (160,2) V_ 30 <DMSO) : i . 2,56 (s, 3H) 7 tl (d 1H)_ 7 71 <d, 1H), 8,06 (s , 1H), 10,02 < * » 1H) ppm.

e) DL-o-amino-a-(2-metyyli-lH-bentsimidatsol-5-yyli)-etikkahappo (14e) " 35 22,7 g:n (0,142 moolia) 14d:tä annetaan reagoida vastaavasti kuten esimerkissä le) 57,2 g:n kanssa (0,596 60 ί;7°8 moolia) ammoniumkarbonaattia ja 10,8 g:n kanssa (0,22 moolia) natriumsyanidia etanoli/vedessä 20 tunnin ajan 60°C:ssa.

Sen jälkeen kun etanoli on tislattu, liuos saate-5 taan happameksi 2 N HCl:llä pH-arvoon 2 ja lopuksi saatetaan 2 N natronlipeällä takaisin pH-arvoon 4,5. Kirkas liuos uutetaan kaksi kertaa etikkaesterillä ja vesipitoinen faasi haihdutetaan kuiviin vakuumissa.

Saanto: 49,0 g (sisältää NaCl:ää) 10 Koko materiaali lohkaistaan vastaavasti kuten esi merkissä 3c) 500 ml:11a bromivetyhappoa (48 %).

Saanto: 56,8 g C10HUN3°2 ' 2 HBr O*7»** NMR (DC000): 6 = 5,82 (s. 1H). 7,88 <d, 1H). 8,05 15 (d. 1H), 8,22 (s, 1H) ppm.

f) DL-a-t-butyylioksikarbonyyliamino-a-(1-t-butyyli-oksikarbonyyli-2-metyylibentsimidatsol-5-yyli)etikkahap-po (14f) 63,1 g:n (0,172 moolia) 14e:tä annetaan reagoida 20 vastaavasti kuten esimerkissä 12g. NaHC03-liuoksessa ja dioksaanissa 112,6 g:n kanssa (0,516 moolia) di-t-butyy-lidikarbonaattia.

Saanto: 12,6 g C20^27^3®6 (405,4) : 25 NMR (DMS0): 6 = 13,5 <d. 9H), 1,65 (d. 9H) , 5,22 (q, 1H), 7,36 (m, 1H), 7,65 (m, 1H), 7,96 (d, 1H) ppm.

g) DL-7-(2-metyyli-lH-bentsimidatsol-5-yyliglysyyli-amido)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo (14g) 30 4,2 g:n (10,3 mmol) 14f:ää annetaan reagoida vas taavasti kuten esimerkissä lf) 1,44 ml:n kanssa , . (10,3 mmol) trietyyliamiinia, 1,27 ml:n kanssa (10,3 mmol) pivaloyylikloridia ja 2,65 g:n kanssa *·* ‘ (11,4 mmol) 7-ACCA'a.

•••f 35 Saanto: 4,6 g (72 %) C27H32C1N508S (622,1) k 5 708 61 4,0 g (6,43 mmol) Boc-suojattua kefalosporiinia deasyloidaan vastaavasti kuten esimerkissä lg.

Saanto: 2,9 g (85 %) C17H16C1N504S . CF3COOH (535,9) 5 NHR (DCOOD) : δ = 3,02 <s, 3H), 3,48-4,0 (nun, 2H>.

5,27-5.36 (dd, 1H), 5,82 (s. 1H>, 5,84-5,94 (dd, 1H), 7,86 (d, 1H), 8,02 (d, 1H) 8,16 (s. 1H) ppm.

Esimerkki 15 10 D-7-(2-metyyli-lH-bentsimidatsol-5-yyliglysyyli- amido)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo (15a) ja L-muoto (15b) 14g:n preparatllvlnen HPLC-erotus:

Pylväs: Whatman Partisil-10, 500 x 22 mm, 10 pm (Magnum 15 20 CCS-RP-8), 254 nm

Eluointiaine: 2500 ml H20:ta - 2,5 ml TFE:tä Virtaus: 15 ml/min. (Paperinnopeus 5 mm/min)

Syöttö: 1100 mg 18g:tä 9 ml:ssa eluointiainetta, suoda tettu Millex GS:llä, 0,22 pm.

20 L-muoto (pilkki I):

Saanto: 355 mg (trifluoriasetaatti) NMR (DCOOD): δ = 3,06 (s, 3H). 3,75 (d, JM8 Hz . 1H).

3,98 (d, J=18 Hz. 1H), 5,37 (d. J=5 Hz, . . 1H), 5,84 (s, 1H). 5,88 (d. J=5 Hz.

"V 25 1H), 7,88 (d. J = 9 Hz, 1H), 8,04 (d,

Hz, 1H), 8,18 (s, 1H) ppm.

D-muoto (piikki II):

Saanto: 114 mg (trifluoriasetaatti) NMR (DCOOD): δ = 3,04 (s, 3H>, 3,54 (d, J*18 Hz, 1H), 30 3,87 (d, J=18 Hz, 1H), 5,29 (d, J=5 Hz, 1H>, 5,82 (s, 1H>, 5,94 (d, = 5 Hz. 1H), 7,86 (dd, 1H) , 8,04 1H>, 8,16 (s, 1H> ppm.

Esimerkki 16 35 DL-7-(2,3-dihydro-2-okso-lH-bentsimidatsol-5-yyli- glysyy1iamido)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyy1ihappo i 3 708 62 'N—CH-CO-NH ^

5 " COCH

a) 2,3-dihydro-2-okso-lH-bentsimidatsolikarboksyyli-happo-5-metyyliesteri (16a) 20 g (0,12 moolia) 3,4-diaminobentsoehappometyyli-10 esteriä ja 24,8 g:aa (0,12 moolia) N,Ν' -dikarbmetoksi- S-metyyli-isotioureaa kuumennetaan 180 ml:ssa DMF:ää 4 tunnin ajan paluujäähdyttäen. Lopuksi DMF tislataan pois, jäännöstä sekoitetaan veden kanssa, saostuneet kiteet imusuodatetaan ja pestään vedellä. Sen jälkeen kun aine 15 on kuivattu vakuumissa 40°C:ssa, tuote suspendoidaan asetoniin ja tämän jälkeen imusuodatetaan.

Saanto: 21,9 g (95 %) C9H8N2°3 <192,2) NMF < DMS0) : δ = 3.8 (s. 3H) . 7.01 (d. 1H), 7,48 <s, 1H)* 7,64 (d, 1H), 10,9 (s, 1H), 11,08 (s, 1H) ppm b) 2,3-dihydro-2-okso-5-hydroksimetyyli-lH-bentsimi-datsoli (16b) 24,6 g (0,128 moolia) 16a:ta suspendoidaan THF:ään : 25 ja vastaavasti kuten esimerkissä la) sekoitetaan yön ajan -70°C:ssa 624,8 ml:n kanssa (0,768 moolia) DIBAL'ia (20 %:nen liuos tolueenissa).

Saanto: 16,2 g (77 %)

CqH8N202 (164,2) :V: 30 NMR (DMSO) : δ = 4,48 (s, 2H) , 5,12 ( leveä s, 1H), 6,91 (s. 2H), 6.98 (s. 1H), 10,61 : ( leveä s, 2H) ppm.

c) 2,3-dihydro-2-okso-lH-bentsimidatsol-5-karboksi-aldehydi (16c) ‘-*'•35 25,7 g (0,157 moolia) 16b:tä sekoitetaan vastaa vasti kuten esimerkissä 6b. DMF:ssä 81,7 g:n kanssa 63 ;.:/os (0,939 moolia) mangaani-(IV)-oksidia 2 päivän ajan.

Saanto: 18,5 g (73 %) C8H6N2°2 <162.1) HMR (DMSO): 6 - 7,1 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,41 (s, 5 1H), 7,59 (d. J = 7,5 Hz» 1H), 9,44 (s, 1H), 11,02 (s, 1H) 11,20 (s, 1H) ppm.

d) 5-(2,3-dlhydro-2-okso-lH-bentsimidatsol-5-yyli)- 2,4-imidatsolidiinidioni (16d) 10 10,7 g:n (0,0659 moolia) 16c:tä annetaan reagoida vastaavasti kuten esimerkissä le) metanoli/vedessä 27,8 g:n kanssa (0,289 moolia) ammoniumkarbonaattia ja 5,2 g:n kanssa (0,107 moolia) natriumsyanidia.

Saanto: 10 g (65 %) 15 C10H8N4°3 (232,2> NMR (DMSO): 6 = 5,11 (s, 1H), 6,85 <s, 1H>, 6,9 heikko d, 2H>, 8,36, (s, 1H).

10,68 (s , 3H) ppm.

e) DL-α-(t-butyylioksikarbonyyliamino)-a-(2,3-dihyd- 20 ro-2-okso-lH-bentsimidatsol-5-yyli)etikkahappo (16e) 8,8 g (0,0379 moolia) 16d:tä lohkaistaan vastaavasti kuten esimerkissä 5e) 100 ml:11a bromivetyhappoa (48 %).

Saanto: 10 g (79 %) : 25 C9H9N303 · HBr (336,1) 10 g:n (29,7 mmol) aminohappo-hydrobromidia annetaan reagoida vastaavasti kuten esimerkissä le) 50 ml:ssa 2 N natronlipeätä, 50 ml:ssa H20:ta ja 100 ml:ssa diok-saania 19,4 g:n kanssa (89,1 mmol) di-t-butyylidikarbo-30 naattia.

Saanto: 5,4 g (59 %) V·! C14H17N3°5 <307,3) NMR (DMSO): 6 * 1,4 (s, 9H>, 5.08 (d, 1H), 6.9 (d, 35 1H>* 6'99 <* d, 2H) , 7,5 (d, 1H), 10,67 (d, 2H) ppm.

13 708 64 f) DL-7-(2,3-dihydro-2-okso-lH-bentsimidatsol-5-yyli- glysyyliamido)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo 1,0 g:n (3,25 mmol) 16e:tä annetaan reagoida vastaavasti kuten esimerkissä lf) 0,455 ml:n kanssa 5 (3,25 mmol) trietyyliamiinia, 0,4 ml:n kanssa (3,25 mmol) pivaloyylikloridia ja 0,84 g:n kanssa (3,58 mmol) 7-ACCA'a.

Saanto: 1,2 g (71 %) C21H22C1N5°7S (523,9) 10 1,1 g:aa (2,1 mmol) Boc-suojattua kefalosporiinia sekoitetaan vastaavasti kuten esimerkissä lg) TFE/CH2C12:ssa ja muutetaan Amberlite IRA-68:lla (ase-taatti-muodossa) betaiiniksi.

Saanto: 340 g (35 %) 15 ^16^14^^5^58 2 H2O (459,9) NMR (DCOOD): 6 = 3,52-4,01 (nun, 2H) , 5,25-5,33 <dd.

1H), 5,61 (s, 1H), 5.8-5,9 (dd, 1H), 7,39 < d, 2H) , 7,51 (s, 1H> ppm 20 Esimerkki 17 D-7-(2,3-dihydro-2-okso-lH-bentsimidatsol-5-yyli-glysyyliamido)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo (17a) ja L-muoto (17b) 20f:n preparatlivinen HPLC-erotus * :‘:25 Pylväs: Hibar 250-25, RP-18, 7 pm, 254 nm

Eluointiaine: 925 ml H20:ta - 75 ml asetonitriiliä -1 ml TFE:tä

Syöttö: 310 mg L-muoto (piikki I) "i 30 Saanto: 86 mg (trifluoriasetaatti) NMH (DCOOD): δ = 3,71 (d, J=18 Hz, 1H>, 3,95 (d, J=18

Hz' 1H)' 5,31 (d, 1H), 5,61 (s, 1H), 5'82 1H), 7,38 (s, 2H>, 7,5 (s. 1H) v : PPm· ____: 35 Analyyttinen HPLC: Hibar 250-4, RP-8, 10 pm, 254 nm ί 5 708 65

Eluointiaine: 925 ml H20:ta - 75 ml asetonitriiliä -1 ml TFErtä

Virtaus: 1,5 ml/min, 0,5 mg/ml

Retentio: 4,5 (pitoisuus 98 %) 5 D-muoto (piikki II):

Saanto: 144 mg (trifluoriasetaatti)

Analyyttinen HPLC: vertaa L-muoto!

Retentio: 5,34 (pitoisuus 94,5 %) NMR (DCOOD): 6 = 3,57 (d, 1H), 3,91 (d, 1H), 5,3 10 (leveä s, 1H), 5,63 (leveä s, 1H), 5,92 (leveä s, 1H), 7,41 (s, 2H), 7,55 (d, 1H) ppm.

Esimerkki 18 D-7-(2-aminobentsoksatsol-5-yyliglysyyliamido)-3-15 kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo o-C^-ch-co-nh^^s ».h m‘ 0iQ-ci 20 1

COOH

a) D-a-t-butyylioksikarbonyyliamino-α-(3-amino-4-hyd- roksifenyyli)etikkahappo (18a)

Liuosta, jossa on 29,1 g (93,2 mmol) D-a-butyyli- • · » : 25 oksikarbonyyliamino-a-(3-nitro-4-hydroksifenyyli)etikka-happoa 300 ml:ssa CH3OH:ta hydrataan 2 g:n palladiumia aktiivihiilen pinnalla (10 % Pd) läsnäollessa paineessa 3 tunnin ajan. Hydrausseos suodatetaan ja liuotin poistetaan vakuumissa. Jäännös kromatografioidaan silikageeli-30 pylväällä käyttäen seuraavaa eluointiainesysteemiä: mety-leenikloridi/metanolia (10:1), metyleenikloridi/metano-lia (1:1) ja metanolia.

Saanto: 9,8 g (37 %) ^13^18^2^5 <282,3) 35 NMR (DMSO): 6 = 1,36 (s. 9H), 4,69 <d, 1H), 6,38 <<*. 1H), 6,53-6,58 (f ja d. 2H) PPH* · 66 Π/08 b) D-a-t-butyylioksikarbonyyliamino-α-(2-aminobents-oksatsol-5-yyli)etikkahappo-hydrobromidi (18b) 5.5 g (19,5 mmol) 18a:ta liuotetaan 40 ml:aan me-tanolia, sekoittaen tiputetaan 2,2 g (20,5 mmol) bromi- 5 syania - liuotettuna 20 ml:aan CH30H:ta - huoneenlämpötilassa ja sekoitetaan yön ajan. Reaktioseos haihdutetaan vakuumissa kuiviin. Jäännös liuotetaan THF:ään, suodatetaan, sekoitetaan petrolieetteriin, saostunut tuote imu-suodatetaan ja kuivataan vakuumissa.

10 Saanto: 4,5 g (57 %) C14H17N3°5 ' HBr ' H20 (406,2) NMR (DMS0): 6 = 1,36 <s, 9H). 5,18 <d, 1H), 7,19 <d, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,47 (d, 1H), 7,66 (d, 1H). 8,98 <le-15 veä s , 1H) ppm.

c) D—7-(2-aminobentsoksatsol-5-yyliglysyyliamido)- 3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo (18c) 4.5 g:n (11 mmol) 18b:tä annetaan reagoida vastaavasti kuten esimerkissä lf) 3,1 ml:n kanssa (22 mmol) 20 trietyyliamiinia, 1,35 ml:n kanssa (11 mmol) pivaloyyli-kloridia ja 2,84 g:n kanssa (12,1 mmol) 7-ACCA'a, joka saatetaan liuokseen 30 ml:ssa THF:ää ja 12 ml:ssa H20:ta lisäten 10 %:ista trietyyliamiiniliuosta THF:ssä.

Saanto: 2,2 g (38 %) 25 1,3 g:sta (2,5 mmol) Boc-suojattua kefalosporiinia poistetaan suojaus vastaavasti kuten esimerkissä lg ja muutetaan betaiiniksi käyttäen apuna Amberlite IRA-68:aa. Saanto: 290 mg C16H14C1N5OsS · 2H20 ( 459,9) '·*·' 30 Raakatuote puhdistetaan pereparatiivisella HPLC- pylväällä (Hibar-250-25, RP-18, 7 pm, eluointiaine: 1000 ml H20:ta - 5 ml etikkahappoa).

Saanto: 83 mg (pitoisuus 99 %) NMR (DCOOD): 6 = 3,58 <d. J=18 H*. 1H>, 3.91 (d.

- 35 J=18 Hz. 1H), 5,31 (d, J=5 Hz.

1H), 5,76 (s, 1H), 5,93 <d, J=5 Hz, 1H), 7,76 < d , J = 7,5 Hz, 1H), 7,83-7,88 (· und d, 2H) ppm.

67 ' 0/08

Esimerkki 19 DL-7-(bentstriatsol-5(6)-yyliglysyyliamido) -3-kloori-3-kefemi-4-karboksyy1ihappo 'Nv ΝΗ·

COOH

10 a) 5(6)-hydroksimetyyli-bentstriatsoli (19a) 55,3 g:n (0,312 moolia) bentstriatsoli-karboksyy- li-happo-5(6)-metyyliesteriä annetaan reagoida vastaavasti kuten esimerkissä lg 1300 mlrssa THF:ää 800 ml:n kanssa (0,936 moolia) DIBAL'ia (20-% liuos tolueenissa).

15 Saanto: 37,2 g (80 %) C7H7N30 (149,2) NMR < DMSO) : 6 = 4.71 <s. 2H>. 7,44 <d, 1H), 7.83 (s. 1H), 7,92 (d, 1H) ppm.

b) Bentstriatsoli-5(6)-karboksialdehydi (19b) 20 2,1 g (14,1 mmol) 19a:ta sekoitetaan vastaavasti kuten esimerkissä Ib) 100 ml:ssa THFrää 8,4 g:n kanssa (96,6 mmol) mangaani-(IV)-oksidia 4 päivän ajan huoneenlämpötilassa .

Saanto: 1,4 g (68 %) ··.· 25 C7H5N3° (147,1 ) NMR (DMSO): 6 = 8,0-8,1 (dd, 2H), 8,7 (s. 1H), 10*12 <*. 1H), 12.03 (leveä s, 1H) ppm.

c) 5-(bentstriatsol-5(6)-yyli-2,4-imidatsolidiinidio-\ 30 ni (19c) 30,9 g:n (0,21 moolia) 19b:tä annetaan reagoida vastaavasti kuten esimerkissä le) etanolissa ja vedessä 15,9 g:n kanssa (0,325 moolia) natriumsyanidia ja 84,7 g:n kanssa (0,882 moolia) ammoniumkarbonaattia.

35 Saanto: 30 g (66 %) 68 ί :/08 C9H7N502 (217,2)

Laskettu: C 49,77 H 3,25 N 32,24 Löydetty: C 49,0 H 3,6 N 31,2 d) DL-a-amino-a-(bentstriatsol-5(6)-yyli)etikkahappo 5 (19d) 30 g (0,138 moolia) 19c:tä ja 161,7 g:aa (0,508 moolia) bariumhydroksidia 980 ml:ssa H20:ta keitetään paluu jäähdyttäen 30 tunnin ajan vastaavasti kuten esimerkissä 8d.

10 Saanto: 16,8 g (63 %) c8H8N4°2 <1^2.2) NMR (DC00D): β = 5,76 (s, 1H). 7,86 <dd, 1H), 8,21 (d, 1H), 8,4 <*, 1H) ppm.

e) DL-a-t-butyylioksikarbonyyliamino-a-(bentstriat- 15 sol-5-(6)-yyli)etikkahappo (19e) 12 g (62,5 mmol) 19d:tä sekoitetaan vastaavasti kuten esimerkissä le) 34 g:n kanssa (156 mmol) di-t-bu-tyylidikarbonaattia dioksaanissa ja 2 N natronlipeässä yön ajan. Kiteytys etikkaesteri/eetteri/petrolieetteris-20 tä.

Saanto: 11,9 g (65 %) C13H16N4°4 (292,3) NMR (DMSO): δ = 1,40 (s. 9H). 5,37 <d, 1H), 7,53 • (d, 1H), 7,76 (d, 1H) , 7.94 ( le- 25 veä s, 2H) ppm.

f) DL-7-(bentstriatsol-5(6)-yyliglysyyliamido)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo (19f) 4,0 g:n (13,7 mmol) 19e:tä annetaan reagoida vastaavasti kuten esimerkissä 10) THF:ssä 1,85 g:n kanssa 30 (13,7 mmol) 1-hydroksibentstriatsolia, 2,82 g:n kanssa (13,7 mmol) DCC:tä ja 3,22 g:n kanssa (13,7 mmol) .‘-f 7-ACCA'a, joka on saatettu liuokseen 8,5 ml:lla (34,4 mmol) N,0-bis(trimetyylisilyyli)-asetamidia THF:ssä. Sen jälkeen kun disykloheksyyliurea on imusuoda-35 tettu, suodos haihdutetaan kuiviin ja jäännös liuotetaan 69 l-08 H20:hon pH 7:ssä. Sen jälkeen kun on uutettu etikkaeste-rlllä, vesipitoisen liuoksen pH saatetaan 2 N HCl:llä arvoon 2,5 ja uutetaan kaksi kertaa etikkaesterillä. Orgaaninen faasi pestään neutraaliksi, kuivataan Na2S04:llä ja 5 haihdutetaan. Jäännös seostetaan uudelleen etikkaeste-ri/petrolieetteristä.

Saanto: 3,8 g (55 %) C20H21ClN6O6S (508,9) 0,8 g:sta (1,57 mmol) Boc-suojattua kefalosporii-10 nia poistetaan suojaus vastaavasti kuten esimerkissä lg ja muutetaan betaiiniksi.

Saanto: 250 mg (36 %) C15H13ClN6°4S ' H2° <444.8) NMR (DC00D): δ = 3,46-3,82 (mm. 2H), 5,25-5,32 <dd, ^ 1H), 5,76-5,92 (dd ja s, 2H), 7,87 (d, 1H), 8,22 (d, 1H) 8,92 (s, 1H) ppm.

Esimerkki 20 D-7-(2-aminobentsotiatsol-5-yyli-glysyyliamido)-20 3-kloori-3-kefemi-4-karboksyy1ihappo S'C>- C,H-C°-NH w s .

.k ' nh, Π ] H, N N ci

• 25 COOH

a) DL-a-amino-a-(2-aminobentsotiatsol-5-yyli)etik- kahappo (20a) 23,6 g (0,095 moolia)5-(2-aminobentsotiatsol-5-:: 30 yyli)-2,4-imidatsolidiinidionia lohkaistaan vastaavasti kuten esimerkissä Id) 22,7 g:11a (0,95 moolia) LiOH:ta -1000 ml:aan vettä liuotettuna. -Saanto: 11,3 g (46 %) C9H9N302S · 2 H20 ( 2 59,3) : 35 NMR (DMS0): 6 - 5,71 (s, 1H); 7,96 - 8,1 (dd, 2H); 8,2 (s, 1H) ppm.

70 ^1 0 8 b) DL-a-t-butyylioksikarbonyyliamino-α-(2-aminobents-otiatsol-5-yyli)etikkahappo (20b) 11,3 g (0,0436 moolia) 20a:ta sekoitetaan vastaavasti kuten esimerkissä le) 14,3 g:n kanssa (0,0654 moo-5 lia, 1,5 ekviv.) di-t-butyylidikarbonaattia yön ajan huo neenlämpötilassa. Raakatuote kiteytetään uudelleen THF/petrolieetteristä.

Saanto: 6,5 g (45 %) C14H17N304S · 1/2 H20 ( 332,4) 10 Laskettu: C 50,58 H 5,5 N 12,6 S 9,64 Löydetty: C 50,0 H 5,2 N 11,2 S 9,2 NMR (DMSO): δ = 1,37 (s, 9H), 5.11 (d, 1H); 7,04 (d, 1H); 15 7,36 (d, 1H), 7.59 (s, 2H); 7,63 (s, 1H) ppm.

c) D-7-(2-aminobentstiatsol-5-yyli-glysyyliamido)-3-kloori-3-kefemi-4-karboksyylihappo (20c) 1,0 g (3,09 mmol) 20b:tä aktivoidaan vastaavasti 20 kuten esimerkissä lf) 0,433 ml:11a (3,09 mmol) trietyyli-amiinia ja 0,38 ml:11a (3,09 mmol) pivaloyylikloridia 10 ml:ssa DMF:ää ja lopuksi annetaan reagoida 0,726 g:n kanssa (3,09 mmol) 7-ACCA'a, joka saatetaan edeltäkäsin • liuokseen 7 ml:ssa THF:ää, 3,5 ml:ssa vettä ja 2 ml:ssa 25 DMF:ää trietyyliamlinilla.

Boc-suojattu kefalosporiini deasyloidaan vastaavasti kuten esimerkissä lg.

Saanto: 970 mg (57 %) C16H14C1N504S2 · CF3COOH (553,9) 30 Trifluoriasetaatti liuotetaan eluointiainesystee- miin: 1000 ml:aan vettä - 40 ml:aan asetonitriiliä - 1 ml:aan TFE:tä, lisätään hieman adsorbenttihartsi HP-20 AG:tä (30 - 60 mesh, Diaion - Mitsubishi) ja tiivistetään vakuumissa kidepuuroksi. Jäännös pannaan pylvääseen, joka ... 35 on täytetty HP-20:llä ja eluoidaan edellä mainittua eluointiainesysteemiä käyttäen.

; :: 08 71

Saannot: piikki I (L-muoto): 115 mg piikki I/II : 383 mg

Seosfraktiosta (piikki I/II) saadaan sen jälkeen kun on suoritettu HPLC-kromatografiointi Whatman-pylvääl-5 lä (Magnum 20, 500 x 22, 10 pm, CSS-RP-8) käyttäen 0,1 % TFE:tä/ 1 % asetonitriiliä vedessä eluointiaineena, puhdas D-materiaali (piikki II), joka muutetaan lopuksi Amberlite IRA-68:lla (asetaatti-muodossa) betaiiniksi. Saanto: 48 mg (HPLC-pitoisuus: 94 %) iO C16HuC1N504S2 ‘ 3 H20 ( 493,9) NMR (DCOOD): = 3,57 (d, J=18 Hz, 1H), 3,9 (d, J=18 Hz, 1H); 5,3 (d, J=5 Hz, 1H); 5,73 (s, 1H), 5,91 (d, J=5 Hz, 1H), 7,7 (d, 1H), 7,9 (s, 1H), 8,04 (d, 1H) ppm.

Claims (4)

72 08

1. IV) 1

10 VI N N HR2 H Ula) <Va) 15 tai ru H O O CH • 3 ? I II H I 3

20 CH3-C-C-Cl R1 -c-c-o-c-c-ch3 1 3 (I Ia)--3-> ^ CH 2 H R2 3 (Vb) 25 joissa R1 merkitsee samaa kuin patenttivaatimuksessa 1, R2 on aminosuojaryhmä, T on ryhmä R13-S02-0 tai halogeeni, ja 30 R13 on Cx-C10-alkyyli, joka on mahdollisesti substituoitu fluorilla, kloorilla, syanolla, fenyylillä, C^-C^-alkyy-lillä, Cj-C^-alkyylitiolla, tai mahdollisesti fluorilla, kloorilla, bromilla, syanolla, Ci-C^-alkyylillä, Ci-C^-al-koksilla, C1-C4-alkyylitiolla, C1-C4-alkyylikarbonyylillä, 35 nitrolla, trifluorimetyylillä substituoitu fenyyli. 75 i J / 0 8

1. Menetelmä yleisen kaavan (I) mukaisten β-lak-taamiyhdisteiden valmistamiseksi, 5 HO H 1 i * » c R - C - C - NH__f' ] „>v 1Q COOR4 jossa R5 on vety, halogeeni, tai suoraketjuinen, haarautunut tai syklinen, tyydytetty tai tyydyttämätön, korkeintaan 7 C-atomia sisältävä alkyyli,

15 R1 on ryhmä N 20. jolloin Y on N tai CR9, tai Y-R7 on = 0 tai = N-R7, Z on O, S tai NR10, R7 on vety, suoraketjuinen, haarautunut tai syklinen, : 25 tyydytetty, korkeintaan 10 C-atomia sisältävä alkyyli, joka on mahdollisesti substituoitu halogeenilla, tai amino, R8 on vety tai alkyyli, jossa on 1-8 C-atomia, R9 merkitsee samaa kuin R7 ja tämän lisäksi se on halog-30 eeni, C^Cg-alkoksi, Cj^-Cg-alkyylitio, mahdollisesti substituoitu aminoryhmä, S02-C1-C8-alkyyli, -PO(OH)2, S03H tai S02NH2, SH, OH, S-fenyyli, tai 0-fenyyli, guanidino, amidino, -NHNH2 tai NHOH, mahdollisesti substituoitu he-terosyklyyli tai O-heterosyklyyli tai S-heterosyklyyli,

35 R10 merkitsee samaa kuin R6, tai 73 1 3708 R9 ja R10 merkitsevät yhdessä mahdollisesti hapella tai rikillä katkaistua C2-C4-metyleeniketjua, R2 on vety tai β-laktaamikemiassa tavanomainen aminosuo-jaryhmä, ja

5 R4 on vety tai β-laktaamikemiassa tavanomainen karboksi-suojaryhmä, tunnettu siitä, että yhdisteiden, joilla on yleinen kaava II, H R1 - C* - COOH

10 N (II) /\2 H R jossa R1 merkitsee samaa kuin edellä ja, jossa 15 R2 on aminosuojaryhmä, annetaan reagoida, sen jälkeen kun karboksyyliryhmä on aktivoitu muuttamalla seos-anhydridiksi, mesylaatiksi muuttamisen jälkeen tai aktivoiduksi esteriksi muuttamisen jälkeen, yhdisteiden kanssa, joilla on yleinen kaava 20 (III), H 25 11111 :: coor4 jossa R4 ja R5 merkitsevät samaa kuin edellä, 30 sitten mahdollisesti lohkaistaan suojaryhmät ja valmiste taan haluttuja suoloja tai suoloista vapaita happoja.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että yleisen kaavan (II) mukaiset aminohapot aktivoidaan ja sitten kytketään yleisen kaavan 35 (III) mukaisiin β-laktaameihin, jotka saatetaan liuokseen amiinin kanssa muodostettuina suoloina. · 08 74

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että pivaliinihappokloridilla tai kaavan (IV) mukaisilla sulfonihappojohdannaisilla tapahtuva aktivointi kaavan (V) mukaisiksi anhydrideiksi suo-5 ritetaan seuraavan kaavion mukaisesti: H HO | T-S02_R13 | l| R* -C-COOH ---R1 -C-C-0-S02-R13

4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että reaktiot suoritetaan -80°C:n ja huoneenlämpötilan välisessä lämpötilassa, edullisesti -60°C:ssa - 0°C:ssa. 76 /08