FI83325B - Foerfarande foer framstaellning av 7- substituerade 3-(5-cyklopropyl-1,2,4-oxadiazol-3-yl)-5,6-dihydro-5-metyl -6-oxo-4h-imidazo(1,5-a)(1,4) bensodiazepiner. - Google Patents

Description

83325

Menetelmä lääkeaineena käyttökelpoisten 7-substituoitujen 3-(5-syklopropyyli-l,2,4-oksadiatsol-3-yyli)-5,6-dihydro- 5-metyyli-6-okso-4H-imidatso(1,5-a)(1,4)bentsodiatsepii-nien valmistamiseksi Tämä keksintö koskee menetelmää uusien oksadiatsolyyli-imidatsobentsodiatsepiiniyhdisteiden valmistamiseksi.

Uudet yhdisteet ovat käyttökelpoisia psykofarmaseuttisis-sa koostumuksissa, esim. hoidettaessa keskushermostosairauksia, kuten kouristuslääkkeinä ja tuskaa lievittävinä lääkkeinä.

On hyvin tunnettua (Squires, R.F. ja Braestrup, C., Nature (Lontoo) 266 (1977) 732), että tietyt kohdat selkärankaisten keskushermostosysteemissä omaavat suuren spesifisen affiniteetin 1,4- ja 1,5-bentsodiatsepiin.ien sitomiseksi. Näitä kohtia kutsutaan bentsodiatsepiinireseptoreiksi.

Eurooppalainen patenttihakemus nro 109,921 koskee yhdisteitä, joilla on yleinen kaava (I)

R* H

yy-· βΟ

R

jossa R’ on vety, kloori, fluori tai nitro 7- tai 8-asemassa, R1 on vety tai C1_3~alkyyli, R3 on oksadiatsolyyliryhmä, jonka kaava on 2 83325

o n ta* N—O

-4.H\y*·· -O-r" j oissa R" on C1_3-alkyyli, A.....B on ryhmä, jonka kaava on \ /

\ / . C=N

,C_N tal I R'"

/ V

joissa R5 on vety tai metyyli ja R" 1 on vety tai kloori.

Eurooppalaisessa patenttihakemuksessa nro 109,921 esitetään edelleen, että tietyt oksadiatsolyyli-bentsodiatse-piinit ja oksadiatsolyyli-beta-karboliinit omaavat voimakkaamman sitoutumisaffiniteetin bentsodiatsepiiniresepto-reihin kuin vastaavien happojen alkyyliesterit.

Eurooppalainen patenttihakemus nro 150,040 koskee 1,2,4-oksadiatsolyyli-bentsodiatsepiini-yhdisteitä, joilla on kaavat (II) ja (III) N O—.

C-ΜΛ T i jossa R1 on alkyyli, sykloalkyyli, metoksimetyyli, li 3 83325 R3 on H, CH3 ja R4 ja R5 ovat kumpikin H tai halogeeni, rv, (III)

»5 l· T

jossa X on -iH}U' tai -\χ .* joissa R1 on alkyyli, sykloalkyyli, CF3 tai metoksimetyy-li, R4 ja R5 ovat kumpikin H, halogeeni, CF3, ja n on 2 tai 3.

Yhdisteet, jotka esitetään EP-hakemuksen nro 150,040 esimerkeissä 2, 3, 16, 29, 32, 43, 44, 45, 49, 50, 51, 52, 53 ja 56 ovat 5,6-dihydro-6-okso-4H-imidatso(l,5-a)(1,4) -bentsodiatsepiiniyhdisteitä (joilla on edellä esitetty kaava (II), kun taas yhdisteet, jotka sisältyvät esimerkkeihin 1, 8, 9, 17, 18, 23 ja 30, ovat 10,11,12,12a-tetra-hydro-9-okso-9H-imidatso-(1,5-a)atseto(2,1-c)(1,4)bentsodiatsepiiniyhdisteitä (joilla on edellä esitetty kaava (III) ), ja yhdisteet, jotka ovat esimerkeissä 4, 5, 6, 7, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 19, 20, 21, 22, 24, 25, 26, 27, 28, 31, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 46, 48, 54, 55, 57, 58 ja 59 ovat 11,12,13,13a-tetrahydro-9-okso-9H-imidatso-(1,5-a)-pyrrolo(2,1-c)(1,4)bentsodiatsepiiniyhdisteitä (joilla on myös kaava (III) ).

Lopuksi yhdiste, joka on EP-hakemuksen 150,040 esimerkissä 47, on 11,13a-dihydro-9-okso-9H-imidatso(1,5-a)pyrro-lo(2,1-c)(1,4)-bentsodiatsepiiniyhdiste, 4 83325

Yhdisteet, jotka ovat EP-hakemuksen 150,040 esimerkeissä 11, 15, 26 ja 40, ovat kaavan (III) mukaisia yhdisteitä, joissa X on 1,2,4-oksadiatsol-3-yyli-ryhmä ja yhdisteessä, joka on esimerkissä 40, X on 5-syklopropyyli-l,2,4-oksa-diatsol-3-yyli-ryhmä.

EP-hakernus nro 150.040 koskee myös menetelmää kaavojen (II) ja (III) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, jossa menetelmässä kaavan (V) ja vastaavasti kaavan (VI) mukainen yhdiste " Ä"

4 O R O

R

joissa R4, ja R5 ja n tarkoittavat samaa kuin edellä ja Y on poistoryhmä, saatetaan reagoimaan kaavan CN-CH2-C02R mukaisen yhdisteen kanssa, kaavan (II) tai (III) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, joka yhdiste sisältää 3-asemas-sa -C02R-substituentin, ja tämä yhdiste muutetaan useilla vaiheilla halutuksi oksadiatsolijohdannaiseksi.

Tämän keksinnön mukaisesti saadaan uusi ryhmä oksadiatso-lyylibentsodiatsepiiniyhdisteitä, joilla on yleinen kaava (VII) N N-° χΛ,Η X δ CH3 jossa X on Cl, Br tai F, sekä näiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuoloja. Uudet yhdisteet ovat

II

5 83325 käyttökelpoisia hoidettaessa keskushermostohäiriöitä tai -sairauksia, erityisesti ne ovat käyttökelpoisia kouristuksia estävinä ja tuskaa lievittävinä aineina.

Eräiden keksinnön mukaisten perusyhdisteiden sulamispisteet ovat seuraavat: X_Sulamispiste_

Cl 165,1 - 169,2°C

Br 212 - 213°C

F 188,2 - 189,0°C

Keksintö koskee myös menetelmää keksinnön mukaisen yhdisteen valmistamiseksi. Keksinnön mukainen yhdiste voidaan valmistaa siten, että a) yhdiste, jonka kaava (VIII) on

-CN

(VIII) (oT ) —

^ Γ V

x o 3 jossa x tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan NH2OH:n kanssa, kaavan (IX) mukaisen yhdisteen muodostamiseksi

NOH

TV-/ Λ MH (IX'

(of ) J

* f X

jossa X tarkoittaa samaa kuin edellä, ja näin saatu yhdiste saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on 83325

t>~ COCI

kaavan (Vii) mukaisen yhdisteen muodostamiseksi, tai b) yhdiste, jonka kaava (X) on ¥ 0 tM3 * jossa X tarkoittaa samaa kuin edellä Y on poistoryhmä, edullisesti -OP(0)(O-etyyli)2, saatetaan edullisesti aikalisissä olosuhteissa, edullisesti orgaanisen liuottimen läsnäollessa ja edullisesti lämpötilassa -40°C - 30°C, reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on N-0

CN-CHj, \-A

N

kaavan (VII) mukaisen yhdisteen muodostamiseksi.

Esimerkkejä sopivista poistoryhmistä ovat halogeeni, al-kyylitio, esim. metyylitio, aralkyylitio, N-nitrosoalkyy-liamino, alkoksi, merkapto, -0P-(0)(0R)2, jossa R on alem-pialkyyli, tai -OP(O)(NR'R"), jossa R* ja R" tarkoittavat kumpikin alempialkyyliä tai fenyyliä tai ne yhdessä viereisen typpiatomin kanssa muodostavat heterosyklisen ryhmän, kuten morfolinon, pyrrolidinon, piperidinon tai me-tyylipiperatsinon.

Reaktio b) suoritetaan mieluimmin aikalisissä oloissa, ts. emäksen läsnäollessa. Edullisia emäksiä ovat alkali-metalli, esim. kalium tai natrium, alkoksidit tai hydri- 7 83325 dit. Reaktio suoritetaan mieluimmin orgaanisen liuottimen läsnäollessa, joka käytetyissä reaktio-oloissa ei reagoi reagenssien ja reaktiotuotteiden kanssa. Sopivia liuottimia ovat vedettömät liuottimet ja mieluimmin vedettömät, aproottiset liuottimet, kuten dimetyyliformamidi (DMF) tai vastaavat. Reaktiolämpötilan tulisi olla riittävän korkea, jotta reaktio voi tapahtua kohtuullisella nopeudella, ilman viivytystä tai hajoamista, ja tavallisesti sopiva lämpötila on -40°C - noin 30°C.

Kaavan (X) mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa kuten on esitetty US-patenttijulkaisuissa nro 4.352.817 ja nro 4.316.839.

Keksintö koskee myös menetelmää keskushermostosairauksien hoitamiseksi, jossa menetelmässä annostetaan tehokas määrä keksinnön mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää happoadditiosuolaa.

Koska keksinnön mukaisilla yhdisteellä on suuri affiniteetti bentsodiatsepiinireseptoreihin, ovat ne äärimmäisen käyttökelpoisia hoidettaessa keskushermostosairauksia tai -häiriöitä, annostettaessa tehokkaassa määrin tällaisten sairauksien tai häiriöiden lievittämiseksi, parantamiseksi tai eliminoimiseksi. Keksinnön mukaisten yhdisteiden tärkeä keskushermostoaktiivisuus käsittää sekä kouristuksia estävän että tuskaa lievittävän vaikutuksen, johon liittyy alhainen toksisuus, jotka yhdessä muodostavat mitä edullisimman terapauttisen indeksin. Näin ollen keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan annostaa imettäväisille, kuten ihmiselle, joka tarvitsee hoitoa, lievitystä, parannusta tai eliminointia indikaatiossa, joka liittyy keskushermostoon ja bentsodiatsepiinireseptoreihin ja tarvittaessa tällaista psykofarmaseuttista hoitoa, esim. ihmisellä, joka kärsii kouristuksista tai on tuskainen. Keksinnön mukainen yhdiste annostetaan mieluimmin farmaseuttisena 8 83325 koostumuksena, kuten edellä kuvattuna ja mieluimmin päiväannos on 1-200 mg, erityisesti 10-100 mg ja vielä aivan erityisesti 30-70 mg riippuen tarkasta annostustavasta, annostusmuodosta, indikaatiosta, johon annostusta tarvitaan, potilaasta ja potilaan kehon painosta ja lääkärin tai eläinlääkärin taidosta ja kokemuksesta. Tämän keksinnön mukaisen yhdisteen annosten laajemmat rajat ovat 0,1 -300 mg/päivä, annostettaessa lääkkeenä potilaille, esim. ihmisille.

Keksintöä kuvataan edelleen yksityiskohtaisemmin seuraa-villa, ei-rajoittavilla esimerkeillä:

Esimerkki 1 a) 5,6-dihydro-5-metyyli-6-okso-7-kloori-4H-imidatso(1,5- a) (l,4)bentsodiatsepiini-3-karboksamidioksiimi.

Seosta, jossa oli 1,2 g 3-syano-5,6-dihydro-5-metyyli-6-okso-7-kloori-4H-imidatso(1,5-a)(1,4)bentsodiatsepiinia (joka valmistetaan US-patenttijulkaisussa nro 4.316.839 kuvatulla tavalla), 0,45 g hydroksyyliamiini-hydroklori-dia, 20 ml 99 %:ista etanolia ja 2 ml vettä ja 1,2 g kaliumkarbonaattia, keitettiin palautusjäähdyttäen l Ά tuntia. Reaktioseos suodatettiin ja suodos konsentroitiin. Jäännös käsiteltiin 50 ml:11a vettä ja kiteinen aine suodatettiin ja pestiin vedellä. Sul.p. 227,6-228,4°C.

b) 3-(5)-syklopropyyli-l,2,4-oksadiatsol-3-yyli) - 5,6-di-hydro-5-metyyli-6-okso-7-kloori-4H-imidatso(1,5-a)(1,4)-bentsodiatsepiini.

Seosta, jossa oli 580 g 5,6-dihydro-5-metyyli-6-okso-7-kloori-4H-imidatso (1,5-a)(1,4)bentsodiatsepiini-3-kar-boksamidi-oksiimia, valmistettu edellä esitetyllä tavalla ja 0,3 ml syklopropyylikarboksyylihappokloridia, hämmen- li 9 83325 nettiin 15 mlrssa THFrää 2 tuntia 20°C:ssa ja haihdutettiin. Haihdutuksen jälkeen lisättiin 20 ml etikkahappoa ja seosta keitettiin palautusjäähdyttäen 2 ½ tuntia, jonka jälkeen haihdutettiin. Reaktioseoksen annettiin seistä yön yli huoneen lämpötilassa, jonka jälkeen se jäähdytettiin, suodatettiin ja suodos haihdutettiin, jolloin saatiin jäännös öljymäisinä kiteinä.

Jäännös käsiteltiin eetterillä, saatiin otsikossa mainittu yhdiste vaaleina kiteinä, jotka kerättiin suodattamalla. Sul. p. 165-169°C.

Esimerkki 2 a) Formyyliaminometyyli-karboksamidjoksiimi 0,55 moolia juuri vapautettua hydroksyyliamiinia liuotettuna 370 mlraan metanolia, lisättiin 53,6 g:aan (0,638 moolia) N-formyyliamino-asetonitriiliä, joka oli valmistettu julkaisussa Synthesis, Voi 10, sivut 681-682 esitetyllä tavalla. Käytettiin jäähaudetta, jonka avulla lämpötila pysyi alle 20°C lisäyksen aikana. Liuoksen annettiin seistä huoneen lämpötilassa yön yli, jonka jälkeen se haihdutettiin, saatiin otsikossa mainittu yhdiste vaaleina kiteinä. Hajoaa 104-110eC.

b) 3-Formyyliaminometyyli-5-syklopropyyli-l,2,4-oksadiat-soli

Seosta, jossa oli 35 ml etyylisyklopropyyli-karboksylaat-tia, 30 g formyyliaminometyyli-karboksiamidi-oksiimia, 1 g natriumia ja 30 g murskattua molekyyliseulaa (4Ä), keitettiin palautusjäähdyttäen 300 ml:ssa abs.etanolia (EtOH) 8 tuntia, jonka aikana lisättiin vielä 1 g natriumia. Reak-tioseos suodatettiin ja suodos haihdutettiin. Tumma, öljy-mäinen jäännös suspendoitiin 300 ml:aan kloroformia 10 83325 (CHCl3), suodatettiin ja suodos haihdutettiin, jolloin saatiin otsikossa mainittu yhdiste öljynä.

H-NMR (60 MHz, CDCL3) δ (ppm): 1,2 (4 H, m), 2,8 (1 H, m), 4,5 (2 H, d, J=6 HZ), 7,8 (1 H, leveä-NH), 8,2 (1 H, s).

c) 5-syklopropyyli-3-isosyanometyyli-l,2,4-oksadiatsoli Hämmennettyyn liuokseen, jossa oli 5-syklopropyyli-3-for-myyliamino-metyyli-1,2,4-oksadiatsolia (60 mmoolia) ja trietyyliamiinia (176 mmoolia) metyleenikloridissa (CH2Cl2) (100 ml), lisättiin tipoittain POClj^ (60 mmoolia) 0°C:ssa, jonka jälkeen lisättiin natriumkarbonaatti-liuosta (Na2C03) (60 mmoolia) vedessä (50 ml). Seos lämmitettiin huoneen lämpötilaan, jonka jälkeen orgaaninen faasi erotettiin, kuivattiin ja haihdutettiin tyhjössä. Jäännös käsiteltiin eetterillä, dekantoitiin ja liuos haihdutettiin, jolloin saatiin otsikossa mainittu yhdiste öljynä.

Öljy käytettiin edelleen puhdistamattomana.

IR: 2160 cm-1.

» d) 3,4-dihydro-4-metyyli-6-syano-2H-l,4-bentsodiatsepiini-2,5(1H)-dioni 2,3 g 3,4-dihydro-4-metyyli-6-bromo-2H-l,4-bentsodiatse-piini-2,5(1H)-dionia ja 1,26 g kuprosyanidia liuotettiin 5 ml:aan dimetyyliformamidia. Näin muodostunutta seosta kuumennettiin 110°C:ssa 30 minuutin ajan, jonka jälkeen se jäähdytettiin 50°C:seen ja siihen lisättiin 2,4 g natrium-syanidia 6 ml:ssa vettä. Sitten muodostunutta seosta hämmennettiin 10 minuuttia, jonka jälkeen lisättiin 30 ml vettä. Seos uutettiin kaksi kertaa 25 ml:11a etyyliasetaattia. Orgaaninen faasi kuivattiin kalsiumkloridilla.

li 11 83325 ' ·

Suodatettiin, jonka jälkeen orgaaninen liuos haihdutettiin tyhjössä, saatiin 0,78 g otsikossa mainittua yhdistettä.

Sul.p. 261-269eC.

e) 3-(5-syklopropyyli-l,2,4-oksadiatsol-3-yyli)-5,6-dihyd-ro-5-metyyli-6-okso-7-kloori-4H-imidatso(l,5-a)(1,4)bent-sodiatsepiini 3,4-dihydro-4-metyyli-6-kloori-2H-l,4-bentsodiatsepiini- 2,5 (1H) dioni (9,17 mmoolia) liuotettiin kuivaan DMFrään (20 ml) ja siihen lisättiin natriumhydridiä (10 mmoolia). Muodostunut liuos jäähdytettiin typpiatmosfäärissä -20°C:seen, jonka jälkeen lisättiin klooridietyylifosfaat-tia (11 mmoolia).

Reaktioseosta pidettiin typpiatmosfäärissä ja hämmennettiin -20°C:ssa ja siihen lisättiin 5-syklopropyyli-3-iso-syanometyyli-1,2,4-oksadiatsolin (11 mmoolia) ja K-tert.-butylaatin (11 ml) -30eC:nen liuos kuivassa DMFrssä (15 mmoolia).

Muodostuneen reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan, jonka jälkeen se haihdutettiin kuiviin tyhjössä.

Öljymäinen jäännös, joka sisälsi raakatuotteen, puhdistettiin Si02:lla eluointiaineena etyyliasetaatti. Näin saatiin otsikossa mainittu yhdiste valkoisina kiteinä. Sul.p. 165-168,5°C.

83325

Esimerkki 3 3-(5-syklopropyyli-ly 2,4-oksadiatsol-3-yyli)-5,6-dihydro- 5-metyyli-6-okso-7-bromo-4H-imidatso(1,5-a)(1,4)bentsodiat-sepiini 2.5 g 3,4-dihydro-4-metyyli-6-bromo-2H-l,4-bentsodiatse-piini-2,5(1H)-dionia (8,5 mmoolia) liuotettiin kuivaan DMF:3än (30 ml) ja tähän lisättiin 480 mg natriumhydridiä. Muodostunut liuos jäähdytettiin typpiatmosfäärissä -20°C: seen, jonka jälkeen siihen lisättiin klooridietyylifos-faattia (1,6 ml).

Reaktioseos pidettiin typpiatmosfäärissä, samalla hämmentäen -20°C:ssa ja siihen lisättiin 5-syklopropyyli-3-iso syanometyyli-l,2,4-oksadiatsolin (1,64 g) ja K-tert.-buty-laatin -30°C:nen liuos kuivassa DMFrssä (15 ml).

Muodostuneen reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja sitä hämmennettiin 30 minuuttia. Raakatuote muodostui, kun saostettiin lisäämällä 150 ml vettä. Raaka-tuote jaettiin 50 ml:aan etyyliasetaatti/dietyylieetteriä (1:1) ja 100 ml:aan 4 M kloorivetyhappoa. Orgaaninen faasi hylättiin ja tuote saostettiin neutraloimalla vesifaasi 2 M natriumhydroksidilla. Saostunut tuote kiteytettiin etyyliasetaatista. Näin saatiin otsikossa mainittu yhdiste valkoisina kiteinä. Sul.p. 212-213°C.

Esimerkki 4 7-fluori-3-(5-syklopropyyli-l,2,4-oksadiatsol-3-yyli)-5,6-dihydro-5-metyyli-6-okso-4H-imidatso(1,5-a)(1,4-bentso-di-atsepiini.

3,4-dihydro-4-metyyli-6-fluori-2H-l,4-bentsodiatsepiini- 2.5 (1H) dioni (3,5 g, 17 mmoolia) liuotettiin kuivaan 4

II

13 83325 DMF:ään (50 ml) ja tähän lisättiin natriumhydridiä (55 %:sta mineraaliöljyssä, 1,0 g, 22 mmoolia). Muodostunut liuos jäähdytettiin typpiatmosfäärissä -20°C:seen, jonka jälkeen lisättiin klooridietyylifosfaattia (3,2 ml, 22 mmoolia).

Sen jälkeen lisättiin 5-syklopropyyli-3-isosyanometyyli- 1,2,4-oksadiatsolin (3,3 g, 22 mmoolia) ja K-tert.-butok-sidin (2,5 g, 22 mmoolia) -30eC:nen liuos kuivassa DMF:ssä (30 ml). Reaktioseosta hämmennettiin huoneen lämpötilassa 90 mi nuult-ia ja reakt i oseokseen lisättiin etikkahappoa (3 ml) ja haihdutettiin tyhjössä.

Öljymäinen jäännös jaettiin etyyliasetaatin (75 ml) ja veden (75 ml) välillä. Orgaaninen faasi uutettiin 4M Hoi:llä (50+50+20 ml), ja yhdistetyt happamet uutteet neutraloitiin 4 M NaOHrlla. Neutraali seos hämmennettiin 120 minuuttia 0°C:ssa 20 ml:n kanssa etyyliasetaattia.

Saostunut tuote suodatettiin pois ja kuivattiin. Raaka tuote hämmennettiin muutamia minuutteja 5 ml:n kanssa kiehuvaa etyyliasetaattia,sen jälkeen seos jäähdytettiin 5°C:seen ja suodatettiin. Liukenematon aines kuivattiin jolloin saatiin 0,9 g otsikkoyhdistettä vaaleana kiinetänä aineena, sul.p. 188,2-189,0»C.

H-NMR (60 mHz, DMSO-D6): 6 = 8,2 (S, 1H), 7,2-8,0 (m,3H aromaattinen), 5,1-4,2 (degeneroitunut kytkentä, 2H), 3,1 (S, 3H, NME), 2,3 (m,1H)1,1-1,5 (m,4H).

Sovellutusesimerkkej ä

Keksinnön mukaisten yhdisteiden on havaittu omaavan yllättävän edullisen ja erittäin käyttökelpoisen aktiivisuusas-teen klassisessa standarditestissä, jossa määritetään in vivo affiniteetti bentsodiatsepiinireseptoreille, sekä 14 83325 standarditestissä, jolla arvioidaan bentsodiatsepiinire-septoreiden välittämä farmaseuttinen aktiivisuus kouristuksia ja tuskatiloja vastaan.

Seuraava testi suoritettiin keksinnön mukaisilla yhdisteillä sekä tunnetun tekniikan tyyppisillä esimerkeillä: I. 3H-flunitratsepaamin sitoutumisen in vivo estyminen hiiren etuaivomembraaneissa testiyhdisteillä, jotka annostetaan intraperitoneaalisesti

Periaate: Kaksikymmentä minuuttia sen jälkeen, kun 3H-flu-nitratsepaamia (3H-FNM) (200 uCi/kg i.v.) on annettu, 3H-FNM:n spesifinen sitoutuminen aivojen bentsodiatsepiini-reseptoreihin on saavuttanut maksimiarvonsa. Tämä 3H-FNM:n spesifinen sitoutuminen voidaan estää osittain tai täydellisesti annostamalla samanaikaisesti tai aikaisemmin farmakologisesti aktiivisia bentsodiatsepiinejä ja joitakin bentsodiatsepiinin kaltaisia aineita [Chang ja Snyder, Eur.J.Pharmacol. 48, 212-218 (1978)].

Testimenetelmä: Testattavien aineiden suspensiot (2 mg/ml) valmistetaan 5 %:iseen "Duphasol-X":ään (risiiniöljy-ety-leenioksidijohdannainen öljyn ja muiden veteen liukenemattomien aineiden emulgoimiseksi ja liuottamiseksi) sonikoi-malla 10 minuuttia Branson B-15-microtip-ultrasonikointi-laitteella (säätö 7). Kolmen hiiren ryhmät (naaraita, NMR, 18-22 g) injektoidaan intraperitoneaalisesti testiaineella 100 mg/kg. Viidentoista minuutin kuluttua testattavan yhdisteen annostamisesta hiirille annetaan laskimonsisäisesti liuos, jossa on 4 Ci 3H-FNM:ää (70-90 Ci/mooli) 200 l:ssa fysiologista suolaliuosta. Kahdenkymmenen minuutin kuluttua

O

JH-FNM-annostuksesta hiiret tapetaan katkaisemalla kaula, etuaivot poistetaan nopeasti (30 sekunnin kuluessa) ja homogenoidaan 12 ml:aan jääkylmää 25 mM KH2P04:ää, pH 7,1, käyt- 15 83325 täen Ultra-Turrax-homogenisaattoria, joka on varustettu NlO-akselilla. Kaksi l ml:n erää suodatetaan välittömästi Whatman GF/C-lasikuitusuodattimen läpi ja pestään 2x5 ml:11a edellä mainittua puskuria. Radioaktiivisuuspitoisuudet suo-dattimilla määritetään tavanomaisella tuikelaskimella. Yksi käsittelemättömien hiirien ryhmä toimii kontrollina. Yhdestä kolmeen hiirtä injektoidaan 25 mg/kg:lla klonatsepaamia i.p. 30 minuuttia ennen 3H-FNM:ää, näin määritetään ei-spesifisen 3H-FNM:n sitoutumismäärä, jonka tulisi olla välillä 8-15 % 3H kokonaissitoutumisesta.

Kun annokset, jotka ovat 100 mg/kg, estävät yli 50 % 3H-flunitratsepaamin spesifisestä sitoutumisesta, testattavat aineet annostetaan annoksina, jotka ovat 3,16 kertaa alhaisempia kuin annos, joka estää yli 50 % sitoutumisesta.

ED50-arvo testattavalle yhdisteelle on annos, joka estää 3H-FNM:n spesifisen sitoutumisen 50 %:isesti. Spesifinen sitoutuminen on sitoutumisaste kontrollihiirissä miinus sitoutumisaste klonatsepaamilla käsitellyissä hiirissä.

Tulokset: ED^Q-arvo määritetään annos-vastaavuuskäyristä.

Jos annostetaan ainoastaan yksi annos testattavaa ainetta, ED5Q-arvo lasketaan seuraavalla tavalla (edellyttäen, että spesifisen sitoutumisen inhibitio on alueella 25-75 %): ED5q = annettu annos x 1 x 1000 yg/kg £o - 1 cx jossa CQ on spesifinen sitoutuminen kontrolleissa ja Cx on spesifinen sitoutuminen hiirillä, jotka on käsitelty testattavalla aineella.

ie 83325 II. Pentatsolilla indusoidut nykivät kouristukset hiirillä (1·Ρ·)

Periaate: Pentyleenitetratsoli aikaansaa nykiviä (clonic) ja yhtäjaksoisia (tonic) kouristuksia hiirillä annoksilla 60-120 mg/kg s.c. Mekanismi on tuntematon, mutta se näyttää liittyvän GABA-reseptori/bentsodiatsepiini-reseptori/ kloridi-ionofori-kompleksin vaikutuksiin. Pentyleenitet-ratsolin maksimiannoksilla indusoituja kouristuksia ehkäisevät lääkkeet ovat tehokkaita pieniä epilepsiakohtauksia (petit mal-epilepsia) ja tuskatiloja vastaan.

Menetelmä: 150 mg/kg pentyleenitetratsolia liuotettuna 0,9 %:iseen natriumkloridiliuokseen (NaCl) annetaan subkutaa-nisesti 15 ml/kg uros- tai naaras-NMRI-hiirille, joiden paino on 20-25 g, 30 minuuttia intraperitoneaalisesti injektoidun testiyhdisteen jälkeen. Hiirien lukumäärä, jotka saavat kouristuskohtauksia seuraavan 30 minuutin kuluessa, lasketaan. Jokaista testiyhdistettä annostetaan ainakin 3 annostasoa ja käytetään 4 tai 8 hiirtä per annostaso, ja annoksia, jotka ovat sekä yli että alle ED50-arvon.

Tulokset: ED50-arvo lasketaan annoksena g/kg, jolla tau-tikohtaukset ovat estyneet 50 prosentilla eläimistä, käyttäen tietokoneohjelmaa, joka perustuu Litchfieldin ja Wil-coxonin (1949) esittämään menetelmään.

III. Pentatsolilla indusoidut yhtäjaksoiset kouristukset hiirillä i.p.

Periaate: Pentyleenitetratsoli aikaansaa nykiviä (clonic) ja yhtäjaksoisia (tonic) kouristuksia hiirillä annoksilla 60-120 mg/kg s.c. Mekanismi on tuntematon, mutta se näyttää liittyvän GABA-reseptori/bentsodiatsepiini-reseptori/ kloridi-ionofori-kompleksin vaikutuksiin. Pentyleenitet-ratsolin maksimiannoksilla indusoituja kouristuksia ehkäi- ii 17 83325 sevät lääkkeet ovat tehokkaita pieniä epilepsiakohtauksia (petit mal-epilepsia) ja tuskatiloja vastaan.

Menetelmä: 150 mg/kg pentyleenitetratsolia liuotettuna 0,9 %:iseen natriumkloridiliuokseen annetaan subkutaanisesti tilavuuksien ollessa 15 ml/kg uros- tai naaras-NMRI-hii-rille, joiden paino 20-25 g, 30 minuuttia testattavan yhdisteen intraperitoneaalisen injektion jälkeen. Hiirien lukumäärä, jotka saavat kouristuskohtauksia seuraavan 30 minuutin kuluessa, lasketaan. Jokaista testattavaa yhdistettä annostetaan ainakin 3 annostasoa ja käytetään 4 tai 8 hiirtä per annostaso, ja annoksia, jotka ovat alle tai yli ED5Q-arvon.

Tulokset: ED50-arvo lasketaan annoksena ug/kg, jolla tau-tikohtaukset ovat estyneet 50 prosentilla eläimistä, käy-tettäen tietokoneohjelmaa, joka perustuu Litchfieldin ja Wilcoxonin (1949) esittämään menetelmään.

Tulokset, jotka saatiin keksinnön mukaisella testattavalla yhdisteellä ja kaikkien edustavimmilla tunnetuilla yhdisteillä, on esitetty seuraavassa taulukossa.

4 18 83325

Taulukko Γ”Ν\- x R o R Aktiivisuus pentat- solilla indusoituja in vivo kouristuksia vastaan LPJ sitoutuminen ED^q F9/k9 / R4 R5 X ED50 μς/kg nykivä yhtäjaksoinen

RA

ai (oXH ch3 0< 27 40 3

Cl A2 (θΧΗ CH3 O* 15 2 0,2

Br A3 (oXH CH3 JQj 90 20 5

F

B (OXH ch3 1’800 27.000 1.300 C (θ£ H CH3 ^ 200 600 200

Cl - C^X H CH3 Λ 60 90 30

Cl E (οχ -CH2CH2CH2- 960 13.000 1.000

Cl f -ch2ch2ch2- 230 1·600 80

ci M

G CH3 2.200 8.000 2.000

V H

“ 83325 A Keksinnön mukaiset yhdisteet B Julkaisun EP 109, 921 mukainen yhdiste (esim. 3) C Julkaisun EP 109, 921 mukainen yhdiste (s. 3, r. 5) D Julkaisun EP 150, 040 mukainen yhdiste (esim. 29) E Julkaisun EP 150, 040 mukainen yhdiste (esim. 40) F Julkaisun EP 150, 040 mukainen yhdiste (esim. 31) G Julkaisun EP 109, 921 mukainen yhdiste (esim. 1)

Kuten edellä esitetystä taulukosta käy ilmi, yhdisteen farmakologiset ominaisuudet ovat selvästi ylivoimaiset verrattuna tunnettuun yhdisteeseen (D). Näin ollen verrattuna mainittuun tunnettuun yhdisteeseen affiniteetti bentsodi-atsepiinireseptori-sitoutumiseen on noin 2 kertaa suurempi ja aktiivisuus pentatsolilla indusoituja nykiviä ja yhtäjaksoisia kouristuksia vastaan on 2,25 ja vastaavasti 10 kertaa suuremmat.

Taulukosta käy ilmi myös, että yhdisteen A-j^ edellä mainitut ominaisuudet ovat 35, 325 ja vastaavasti 330 kertaa suuremmat kuin tunnetun yhdisteen (E), jossa on sama X-substituentti, vastaavat ominaisuudet.

Yleensä on selvää, että keksinnön mukaiset yhdisteet (yhdisteet (A^Ag) omaavat yllättäen paremmat, farmakologiset ominaisuudet verrattaessa niitä lähellä oleviin, tunnettuihin yhdisteisiin (yhdisteet B-G).

Claims (2)

1. 20 83325 l. Menetelmä lääkeaineena käyttökelpoisten 7-substituoitujen 3-(5-syklopropyyli-l,2,4-oksadiatsol-3-yyli)-5,6-dihydro-5-metyyli-6-okso-4H-imidatso(1,5-a)(1,4)bentsodiatsepiinien valmistamiseksi, joilla on kaava (VII) m y-° ..... X O CHj jossa X on Cl, Br tai F ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditiosuolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä että a) yhdiste, jonka kaava (Vili) on -CM (of1) (VIII) il' XcH3 x O jossa X tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan NH2OH:n kanssa, kaavan (IX) mukaisen yhdisteen muodostamiseksi NOH /-N. \ (IX) (oO x f ^CH * O 3 21 83325 jossa X tarkoittaa samaa kuin edellä, ja näin saatu yhdiste saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on o- COCI kaavan (VII) mukaisen yhdisteen muodostamiseksi, tai b) yhdiste, jonka kaava (X) on d x 0 5 jossa X tarkoittaa samaa kuin edellä Y on poistoryhmä, edullisesti -0P(0)(0-etyyli)2, saatetaan edullisesti aikalisissä olosuhteissa, edullisesti orgaanisen liuottimen läsnäollessa ja edullisesti lämpötilassa -40°C - 30°C, reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on N-O CN-CHj _/ rr kaavan (VII) mukaisen yhdisteen muodostamiseksi.
2. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 3-(5-syklopropyyli-l,2,4-oksadiat-sol-3-yyli)-5,6-dihydro-5-metyyli-6-okso-7-bromi-4H-imidatso-(1,5-a)(1,4)bentsodiatsepiini. 22 83325