FI81263C - Foerfarande foer maerkning av en maolsoekande biologiskt aktiv molekyl och metalltionein. - Google Patents
Foerfarande foer maerkning av en maolsoekande biologiskt aktiv molekyl och metalltionein. Download PDFInfo
- Publication number
- FI81263C FI81263C FI843930A FI843930A FI81263C FI 81263 C FI81263 C FI 81263C FI 843930 A FI843930 A FI 843930A FI 843930 A FI843930 A FI 843930A FI 81263 C FI81263 C FI 81263C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- metallothionein
- metal
- labeling
- radionuclide
- labeled
- Prior art date
Links
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 53
- 239000002184 metal Substances 0.000 title claims abstract description 52
- 238000002372 labelling Methods 0.000 title claims description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 27
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 claims abstract description 85
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 claims abstract description 85
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 claims abstract description 78
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 18
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 15
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 14
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 7
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- PVPBBTJXIKFICP-UHFFFAOYSA-N (7-aminophenothiazin-3-ylidene)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(=[NH2+])C=C2SC3=CC(N)=CC=C3N=C21 PVPBBTJXIKFICP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 claims 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 9
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 39
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 34
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 26
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 21
- 101000708766 Homo sapiens Structural maintenance of chromosomes protein 3 Proteins 0.000 description 20
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 20
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 19
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 16
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 16
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- -1 antibodies Proteins 0.000 description 15
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 15
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 15
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 15
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 15
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 108010062393 zinc thionein Proteins 0.000 description 10
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 9
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 9
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 9
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 9
- KUUVQVSHGLHAKZ-UHFFFAOYSA-N thionine Chemical compound C=1C=CC=CSC=CC=1 KUUVQVSHGLHAKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 8
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 8
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 8
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 7
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 6
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N nickel Substances [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000013421 nuclear magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 6
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- GKLVYJBZJHMRIY-OUBTZVSYSA-N Technetium-99 Chemical compound [99Tc] GKLVYJBZJHMRIY-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 5
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 5
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 5
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 229940056501 technetium 99m Drugs 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M chloromercury Chemical compound [Hg]Cl RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 4
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 4
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 4
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 4
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 4
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 4
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Substances [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 4
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 4
- 150000000552 thionines Chemical class 0.000 description 4
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 3
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 238000001948 isotopic labelling Methods 0.000 description 3
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 3
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 229910052702 rhenium Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052707 ruthenium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 3
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000006410 Apoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010083590 Apoproteins Proteins 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 241001537210 Perna Species 0.000 description 2
- KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N Ruthenium Chemical compound [Ru] KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000002152 alkylating effect Effects 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 2
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000002059 diagnostic imaging Methods 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- QSHDDOUJBYECFT-AHCXROLUSA-N mercury-197 Chemical compound [197Hg] QSHDDOUJBYECFT-AHCXROLUSA-N 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000005258 radioactive decay Effects 0.000 description 2
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 2
- 238000005932 reductive alkylation reaction Methods 0.000 description 2
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 230000004572 zinc-binding Effects 0.000 description 2
- DSSYKIVIOFKYAU-XCBNKYQSSA-N (R)-camphor Chemical compound C1C[C@@]2(C)C(=O)C[C@@H]1C2(C)C DSSYKIVIOFKYAU-XCBNKYQSSA-N 0.000 description 1
- WBVPZKAANWEHCQ-UHFFFAOYSA-N 1-(2-chloroethyl)pyrrole-2,5-dione Chemical compound ClCCN1C(=O)C=CC1=O WBVPZKAANWEHCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WUAPFZMCVAUBPE-NJFSPNSNSA-N 188Re Chemical compound [188Re] WUAPFZMCVAUBPE-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- JQPFYXFVUKHERX-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-2-cyclohexen-1-one Natural products OC1=CCCCC1=O JQPFYXFVUKHERX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000000662 Anethum graveolens Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N Aspartic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100381981 Caenorhabditis elegans bam-2 gene Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013602 Cardiac Myosins Human genes 0.000 description 1
- 108010051609 Cardiac Myosins Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000723346 Cinnamomum camphora Species 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VVNCNSJFMMFHPL-VKHMYHEASA-N D-penicillamine Chemical compound CC(C)(S)[C@@H](N)C(O)=O VVNCNSJFMMFHPL-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- GYHNNYVSQQEPJS-OIOBTWANSA-N Gallium-67 Chemical compound [67Ga] GYHNNYVSQQEPJS-OIOBTWANSA-N 0.000 description 1
- GYHNNYVSQQEPJS-YPZZEJLDSA-N Gallium-68 Chemical compound [68Ga] GYHNNYVSQQEPJS-YPZZEJLDSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- SSISHJJTAXXQAX-ZETCQYMHSA-N L-ergothioneine Chemical compound C[N+](C)(C)[C@H](C([O-])=O)CC1=CNC(=S)N1 SSISHJJTAXXQAX-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031177 Metallothionein-4 Human genes 0.000 description 1
- 101710094508 Metallothionein-4 Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 102000014415 Muscarinic acetylcholine receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050003473 Muscarinic acetylcholine receptor Proteins 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical class ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UBQYURCVBFRUQT-UHFFFAOYSA-N N-benzoyl-Ferrioxamine B Chemical compound CC(=O)N(O)CCCCCNC(=O)CCC(=O)N(O)CCCCCNC(=O)CCC(=O)N(O)CCCCCN UBQYURCVBFRUQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 description 1
- 241000221961 Neurospora crassa Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 241000283216 Phocidae Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229910052787 antimony Inorganic materials 0.000 description 1
- WATWJIUSRGPENY-OIOBTWANSA-N antimony-119 Chemical compound [119Sb] WATWJIUSRGPENY-OIOBTWANSA-N 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001491 aromatic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 150000001502 aryl halides Chemical class 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- NXVYSVARUKNFNF-UHFFFAOYSA-N bis(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 2,3-dihydroxybutanedioate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)C(O)C(O)C(=O)ON1C(=O)CCC1=O NXVYSVARUKNFNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052797 bismuth Inorganic materials 0.000 description 1
- JCXGWMGPZLAOME-UHFFFAOYSA-N bismuth atom Chemical compound [Bi] JCXGWMGPZLAOME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JCXGWMGPZLAOME-AKLPVKDBSA-N bismuth-212 Chemical compound [212Bi] JCXGWMGPZLAOME-AKLPVKDBSA-N 0.000 description 1
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 1
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 description 1
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000846 camphor Drugs 0.000 description 1
- 229930008380 camphor Natural products 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical group 0.000 description 1
- 230000001713 cholinergic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007374 clinical diagnostic method Methods 0.000 description 1
- XLJKHNWPARRRJB-UHFFFAOYSA-N cobalt(2+) Chemical compound [Co+2] XLJKHNWPARRRJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-AKLPVKDBSA-N copper-67 Chemical compound [67Cu] RYGMFSIKBFXOCR-AKLPVKDBSA-N 0.000 description 1
- OILAIQUEIWYQPH-UHFFFAOYSA-N cyclohexane-1,2-dione Chemical compound O=C1CCCCC1=O OILAIQUEIWYQPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000958 deferoxamine Drugs 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 229940006110 gallium-67 Drugs 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-OUBTZVSYSA-N gold-198 Chemical compound [198Au] PCHJSUWPFVWCPO-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 238000009499 grossing Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000002064 heart cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229910052738 indium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940055742 indium-111 Drugs 0.000 description 1
- APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N indium-111 Chemical compound [111In] APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 1
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 229910052745 lead Inorganic materials 0.000 description 1
- WABPQHHGFIMREM-AHCXROLUSA-N lead-203 Chemical compound [203Pb] WABPQHHGFIMREM-AHCXROLUSA-N 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- CBBVHSHLSCZIHD-UHFFFAOYSA-N mercury silver Chemical compound [Ag].[Hg] CBBVHSHLSCZIHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-NJFSPNSNSA-N mercury-203 Chemical compound [203Hg] QSHDDOUJBYECFT-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 150000001457 metallic cations Chemical class 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229910052762 osmium Inorganic materials 0.000 description 1
- SYQBFIAQOQZEGI-OUBTZVSYSA-N osmium-191 Chemical compound [191Os] SYQBFIAQOQZEGI-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N palladium Substances [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDLHZDBZIXYQEI-OIOBTWANSA-N palladium-103 Chemical compound [103Pd] KDLHZDBZIXYQEI-OIOBTWANSA-N 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229960001639 penicillamine Drugs 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000011363 radioimmunotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- WUAPFZMCVAUBPE-UHFFFAOYSA-N rhenium atom Chemical compound [Re] WUAPFZMCVAUBPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052703 rhodium Inorganic materials 0.000 description 1
- KJTLSVCANCCWHF-AHCXROLUSA-N ruthenium-97 Chemical compound [97Ru] KJTLSVCANCCWHF-AHCXROLUSA-N 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-AKLPVKDBSA-N silver-111 Chemical compound [111Ag] BQCADISMDOOEFD-AKLPVKDBSA-N 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229910052713 technetium Inorganic materials 0.000 description 1
- GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N technetium atom Chemical compound [Tc] GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 150000007970 thio esters Chemical class 0.000 description 1
- ZUZPOSNHFCUOMQ-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-amine Chemical compound NC1CCCS1 ZUZPOSNHFCUOMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007944 thiolates Chemical class 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000003325 tomography Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N tungsten Chemical compound [W] WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010937 tungsten Substances 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical group [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1093—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6887—Antibody-chelate conjugates using chelates for therapeutic purposes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2121/00—Preparations for use in therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2123/00—Preparations for testing in vivo
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/804—Radioisotope, e.g. radioimmunoassay
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/24—Nuclear magnetic resonance, electron spin resonance or other spin effects or mass spectrometry
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
1 81263
Menetelmä kohteeseen hakeutuvan biologisesti aktiivisen molekyylin leimaamiseksi ja metallotioneiini Tämä keksintö koskee kohteeseen hakeutuvan biolo-5 gisesti aktiivisen molekyylin leimaamiseksi ja metallo- tioneiinia ja metallotioneiinifragmenttia. Kohteeseen hakeutuviin biologisesti aktiivisiin molekyyleihin kuuluvat vasta-aineet tai vasta-ainefragmentit tai mitkä tähän·; muut yhdisteet, jotka hakeutuvat selektiivisesti tietty 10 hin nisäkkään elimistön elimiin, kudoksiin tai soluihin.
Radioisotoopilla merkattujen kohteeseen hakeutu vien biologisesti aktiivisten molekyylien (tästedes käytetään lyhennettä BAM), erityisesti vasta-aineiden ja muiden proteiinien, käyttö diagnostisiin ja terapeutti-15 siin tarkoituksiin on hyvin aktiivista. Tällaista radio-isotoopilla merkkaamista käsittelevät Eckelman et ai. [Radiolabeling of Antibodies, Cancer Racearch 40 (198C) 3036-3042] ja Sfakianakis et ai. [Radioimmunodiagnosis and Radioimmunotherapy, J. Nucl. Med. 23 (1982) 840-850]. 20 Laajimmin käytetty keino vasta-aineiden merkkaamiseksi radioisotoopilla on ollut suora jodaus 131I:lla. 125I:lla tai 123I:lla. Näillä radionuklideilla on kuitenkin tie^t;. jä annosteluun ja kuvaamiseen liittyviä heikkouksia. Tir tyt metalliradionuklidit, kuten 99Tcm ja mIn, soveltuvat 25 paremmin skintigrafiseen kuvaamiseen. Tähän asti on kuitenkin ollut vaikeaa liittää näitä metalliradionukli'^.' T suoraan useimpiin BAM:hin, koska radionuklidin ja BAM:n välillä vallitsee riittämätön affiniteetti. Lisäksi sakin tapauksissa, joissa tällainen liittäminen on ollut 30 mahdollista, radionuklidin liittäminen johtaa joskus BAM:n biologisen aktiivisuuden osittaiseen tai täydelliseen menetykseen.
Näistä syistä monet alalla toimivat ovat ehdot? -neet BAM:ien isotooppimerkkausta metalliradionuklidev.
2 81263 kovalenttisen liittämisen kautta käyttämällä metallia ke-latoivaa ainetta. Esimerkiksi Khaw et ai. [Sciende 209 (1980) 295-297] käsittelevät 111In-dietvleenitriarniinipen-taetikkahapolla (DTPA) merkattuja sydämen myosiinin vas- 5 ta-aineita ja merkattujen vasta-aineiden käyttämistä sy-dänlihasinfarktin kuvaamiseen. Krejcarek et ai.[Biochem. Biophys, Res. Commun. 77 (1977) 581-585] kuvaavat DTPA:n käyttöä proteiinien, kuten ihmisen seerumialbumiinin (HSA), merkkaamiseen metalliradionuklideilla. Pritchard 10 et ai. [Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 151 (1976) 297-302] kuvaavat vasta-aineiden konjugoimista erilaisiin aineisiin, joilla on kyky kelatoida luIn:a, kuten transfenii-niin, D-penisillamiiniin ja deferoksamiiniin. Yokoyama et ai. [EP-hakemusjulkaisu 35 765 (1981)] kuvaavat deferoks-15 amiinia bifunktionaalisena kelaatinmuodostajana, joka soveltuu erilaisten BAM:ien, proteiinit (esimerkiksi HSA, urokinaasi, fibrinogeeni), antibiootit (esimerkiksi "bleomysiini", "kanamysiini"), hormonit, sakkaridit ja rasvahapot mukaan luettuina, isotooppimerkkaukseen. Haber 20 et ai. [EP-hakemusjulkaisu 38 546 (1981)] kuvaavat DTPA:a, etyleenidiamiinitetraetikkahappoa (EDTA) ja ety-leenidiamiinia bifunktionaalisina kelaatinmuodostajina, jotka soveltuvat proteiinien, vasta-aineet, antigeenit ja vasta-ainefragmentit mukaan luettuina, isotooppimerkkauk-25 seen. Yokoyama et ai.[US-patenttijulkaisu 4 287 362 (1981) ] kuvaavat 3-karboksi-2-oksopropionialdehydi-bis(N-metyylitiosemikarbatsonia) (OPBMT) ja sen analogeja proteiinien isotooppimerkkaukseen käytettävinä bifunktionaalisina kelatoivina aineina. Sundberg et ai. [US-patentti- 30 julkaisu 3 994 966 (1976)], Meares et ai. [US-patentti-julkaisu 4 043 998)] ja Leung et ai. [Int. J. App. Radiation and Isotopes 29 (1978) 687-692] kuvaavat proteiinien merkkaukseen soveltuvia bifunktionaalisia EDTA:n kanssa analogisia yhdisteitä, kuten 1-(p-bentseenidiatso-
II
3 81263 nium)-EDTA:a ja l-p-aminofenyyli-EDTA:a. Paik et ai. [J. Radioanal. Chem. 57 (1980) 553-564] kuvaavat bifunktio-naallsena kelaatinrauodostajana toimivaa DTPA-johdannaista, jota kutsutaan DTTA-atsomidaatiksi, ja sen käyttöä 5 HSA:n merkkaamiseen mIn:lla.
Kukin edellä kuvatuista bifunktionaalisista kela-toi jista on kuitenkin yleensä suunniteltu koordinoimaan tiettyä metalliradionuklidia. Siksi olisi toivottavaa kehittää kelatoija, jolla on kyky koordinoida erilaisia me-10 tallikationeja ja liittyä BAM:hin siten, että BAMrien biologinen aktiivisuus säilyy.
Lisäksi, nykyiset suonen sisäisesti käytettävät röntgenvarjoaineet perustuvat jodattuihin aromaattisiin yhdisteisiin. Nämä yhdisteet eivät kuitenkaan useasti ole 15 fysiologisesti siedettäviä käyttökelpoisina pitoisuuksi na. Siksi olisi toivottavaa kehittää fysiologisesti soveltuvia vaihtoehtoja tällaisille jodatuille yhdisteille.
Myös nopeasti kehittyvän ydinmagneettiseen resonanssiin perustuvan kuvauksen (NMR-kuvauksen) alalla oli-20 sivat käyttökelpoiset varjoaineet arvokkaita, erityisesti jos niillä olisi kyky konjugoitua BAMrien kanssa. Brasch [Radiology 147 (1983) 781-788] katsauksessaan, joka käsittelee menetelmiä kontrastin parantamiseksi NMR-kuvauk-sessa, mainitsee "ideaalisen" kontrastin parantajan kri-25 teerien joukossa sen, että yhdisteellä tulisi olla voimakas NMR-aktiivisuus pieninä pitoisuuksina ja sen tulisi olla reagoimaton in vivo ja myrkytön diagnostisina annoksina.
Keksintö koskee menetelmää kohteeseen hakeutuvan 30 biologisesti aktiivisen molekyylin leimaamiseksi, joka molekyyli sitoutuu reseptoreihin ja kulkeutuu nisäkkäiden määrättyihin elimiin, kudoksiin tai soluihin. Menetelmää. -le on tunnusomaista, että a) tioneiini tai metallotioneiini tai sen frag- 4 81263 mentti saatetaan reagoimaan merkkiainemetallin suolan tai suolakompleksin kanssa, jolla on riittävän suuri affiniteetti tioneiiniin, metallotioneiiniin tai fragmenttiin sitoutuakseen siihen; ja 5 b) tioneiini tai metallotioneiini konjugoidaan biologisesti aktiiviseen molekyyliin.
Sen lisäksi, että metallotioneiini koordinoi monia erilaisia metalleja, sillä on se etu, että se sitoo jopa kymmenen moolia metallia moolia kohden. Siten metallotio-10 neiini sitoo monia erilaisia merkkiainemetalleja ja antaa mahdollisuuden liittää 1-10 moolia metallia yhtä moolia kohden bifunktionaalista kelatoijaa. Yllättävää on se, ettei metallotioneiinin liittäminen BAM:eihin alenna BAM:ien biologista aktiivisuutta.
15 Menetelmässä käytettävän metallotioneiinin tai sen fragmentin sisältämästä metallista ainakin osa on radio-nuklidia tai ei-radioaktiivista merkkiainemetallia, jolla on riittävä affiniteetti metallotioneiiniin tai sen fragmenttiin sitoutuakseen siihen. Tällainen merkkiainemetal-20 li on edullisesti In, Pb, Te, Ru, Hg, Ag, Au, Pd, Cu, Re, Sb, Bi, Ga, Pt, W, Co, Ni, Rh tai Os.
Keksintö koskee myös metallotioneiinia tai metal-lotioneiinifragmenttia, jolle on tunnusomaista, että ainakin osa metallotioneiinin tai fragmentin sisältämästä 25 metlalista on Tc-99m.
Metallotioneiinit
Metallotioneiineja kuvataan julkaisussa Metallo-thioneins: Proceedings of the First International Meeting of Metallothionein and Other Low Molecular Weight Metal-30 Binding Proteins, Zurich, July 17-22, 1978, toim. Kagi ja Nordberg, Birkhauser Verlag Basel, 1979 (tästedes Kagi ja Nordberg). Tämän julkaisun sivut 46-92 mainitaan tässä viitteenä ja niistä tehdään seuraavassa yhteenveto. Me-
II
5 81263 tallotioneiini keksittiin vuonna 1957; tämä kadmiumia ia sinkkiä sisältävä proteiini eristettiin hevosen munuaisesta. Suurin piirtein sama proteiini löydettiin myöhemmin kaniinista, ihmisestä, apinasta, lehmästä, lampaasta, 5 siasta, koirasta, hamsterista, rotasta, hiirestä ja hylkeestä. Hevosen metallotioneiinia karakterisoitiin seuraavasti: molekyylipaino 6000-7000; suuri metallipitoisuus; suuri kysteiinipitoisuus; ei aromaattisia aminohappo j., · metallitiolaattien (merkaptidien) optiset piirteet; j * 10 kysteinyylitähteiden kiinteä jakautuminen. Kokouksessa (the First International Meeting on Metallithioneins5 , johon edellä viitattiin, sovittiin, että proteiineista, jotka muistuttavat hevosen munuaismetallitioneiinia näistä piirteistä useiden suhteen, voidaan käyttää nimitystä 15 "metallotioneiini" (Kagi ja Nordberg, s. 48), ja juuri : tällä tavalla tätä nimitystä käytetään tässä hakemuksessa.
Metallotioneiinifragmentit ovat luonnollisesti myös käyttökelpoisia tätä keksintöä toteutettaessa samoin kuin funk-tionaalisesti samanlaiset polypeptidit, jotka sisältävät 20 vähintään kuusi aminohappotähdettä.
Yleisesti ilmaistuna metallotioneiinit ovat pienimolekyylisiä proteiineja, joita syntyy in vivo ja jotka kelatoivat voimakkaasti hyvin monia metalli-ioneja. Me-tallotioneiinien fysiologista toimintaa ei tarkoin tunnet-; 25 tu, mutta yleisesti ollaan sitä mieltä, että niiden toimin ta liittyy välttämättömien metallien elimistön sisäisen — tasapainoon ja raskasmetallien myrkkyvaikutuksen poi «t Metallotioneiineja esiintyy kaikissa korkeammissa re ./. ' rankaisissa, selkärangattomissa ja eukarioottisissa ja pro-30 karioottisissa mikro-organismeissa. Monien organismien altistus metalli-ioneille, esimerkiksi Cd-, Iig-, Zn- tai Co·· ioneille, indusoi nopean metallotioneiinien synteesin ie novo, joka tapahtuu apoproteiini tioneiinia vastaava! · -ciRNA; kohonneen tuotannon kautta. Siksi sellaiset molekyyli? e 35 kadystiini, jota tietyt mikro-organismit tuottavat v-:‘ : 6 81263
Cd:n ruiskutukselle, sopivat käytettäviksi tämän keksinnön yhteydessä.
Kaikki nisäkästioneiinit sisältävät 60-61 aminohappotähdettä ja voivat sitoa 7 moolia divalenttista tai 5 jopa 10 moolia monovalenttista metalli-ionia moolia kohden. Tioneiinit eivät sisällä aromaattisia eivätkä histi-diinitähteitä, ja nisäkkäiden tioneiinien aminohappotähteistä 20 on kysteiinejä. Spektroskooppisten tietojen perusteella metallin sitoutuminen tioneiiniin tapahtuu mil-10 tei yksinomaan kysteiinien sulfhydryyliryhmien kautta.
Koska metallotioneiinien sulfhydryyliryhmät ovat sidottuina metalli-ioneihin, ne eivät yleensä ole käytettävissä funktionaalisina ryhminä BAM:eihin sitoutumista varten, mutta käytettävissä on muita ryhmiä, kuten -Nf^, 15 -OH- ja -COOH-ryhmiä, ja metallitioneiinit voidaan siten liittää kovalenttisesti BAM:hin käyttämällä reagensseja ja menetelmiä, joissa käytetään hyväksi näitä ryhmiä jäljempänä tarkemmin kuvattavalla tavalla.
Lukuisten metallotioneiinien täydelliset aminohappo-20 järjestykset on määritetty; ne ilmoitetaan Kagin ja Nordbergin julkaisun sivulla 60, ja valittuja niistä esitetään seuraavassa:
II
7 81263 0
CD
3 3 3
O O O
01 I I
LO <c < o u o co co o
U U H
O O O
3 3 3
Q Q Q
CO CO < c c < -P o o o 3 3 3 3
o o U U U
-G *r h > >
<U O U CJ
,3 O O O
o σ o a
Du <C <C < -h a o u o m 3 3 3 0 3 <c <C co 3 o u u o 3 g o o o 3 -h > O > ή ε o λ Λ 3
3 ro m U O O
3 U U O
Eh ~ V) CO CO
Eh O O O
S O O O
“ CO CO CO
3 3 3 G 3 3 3
Q) U U U
G CO CO CO
G EH EH EH 3
•G o O O U O
•G cn 2 3 3 I
<D U O CJ 3
G W W Q CO
O 3 3 3 0
•-I U U O U
-G 3 3 C 2
0 U O O CO
Ή 3 CO CO O
Ή O O CO CO
3 < <c Eh U
-G O U O O
<D O EH EH Eh CO
2 rH o O U O
CO CO CO u Q O o 2 O <C O O EH u
CN < iH EH EH 2 CO
I < 13 H CO CO
En O Eh O I O (Ö <C
2 w 2 co Eh co GO
O U 2 0 O CO
G 2 G 2 2 (3 0 a)3a)3C3cno
: rHcnauiQOJQOO
H 2 02 G S GQ
g I > I -H | 3 O
3 0 <D O -HO <U I
H< 3 C 3 < 23 8 81263
Yksikirjaimiset symbolit: A = alaniini C = kysteiini D = asparagiinihappo 5 E = glutamiinihappo G = glysiini I = isoleusiini K = lysiini L = leusiini 10 M = metioniini N = asparagiini P = proliini Q = glutamiini R = arginiini 15 S = seriini T = treoniini V = väliini
Muut symbolit:
Ac = asetyyli 20 H = vapaa aminopää ·’ OH = vapaa keboksyylipää : Havaitaan, että kysteiinitähteet ovat jakautuneet ‘ : pitkin ketjua ja ketjussa on joukko -C-X-C- ryhmiä, jois- ·;· 25 sa X on muu aminohappo kuin kysteiini. Taulukossa on
Neurospora crassan metallotioneiini , jonka mole kyy lipai-no on paljon pienempi kuin nisäkkäiden metallotioneiinien. Kuten Kagin ja Nordbergin ulkaisun sivulla 55 kuvataan, suurempimolekyylisiä metallotioneiineja (9500-10 000) on 30 eristetty muista mikro-organismeista. Kaikki nämä metallo-···’ tioneiinit kuuluvat tämän keksinnön piiriin, vaikka nisäk- ·'' käiden metallotioneiinit ovat edullisia. Diagnostisiin ja ·;· terapeuttisiin tarkoituksiin in vivo on erityisen edullis- ta käyttää samasta lajista kuin hoidettava nisäkäs alkui-35 sin olevaa metallotioneiinia.
Tioneiinin metallia sitovia fragmentteja, esimerkiksi
II
9 81263
Yoshidan et ai. /Proc. Natl. Acad. Sei. USA 76, 486-4907 ja Rondon et ai. /Tetrahedron Letters 24, 925-9287 kuvaamia, jotka molemmat julkaisut mainitaan tässä viitteenä, voidaan myös käyttää tämän keksinnön yhteydessä. Yoshidan 5 et ai. syntetisoimilla hiiren tioneiinin fragmenteilla on seuraavat aminohappoketjut, joissa kirjainsymboleilla on sama merkitys kuin edellä olevassa taulukossa 1.
1. H2N-K-C-T-C-C-A-OH 10 2. H2N-A-C-K-D-C-K-C-T-OH
3. H2N-S-C-T-C-T-S-S-C-A-OH i». H2N-C-C-S-K-C-A-Q-C-C-V-OH
5. H2N-C-C-V-K-G-A-A-D-K-C-T-C-A-OH
15 Tioneiinifragmentit, joihin on liitetty metalleja (so metallotioneiinifragmentit), kuten Yoshidan et ai. syntetisoimat, ovat soveltuvia tämän keksinnön yhteydessä käytettäviksi, vaikka täydelliset metallotioneiinit ovat tässä yhteydessä edullisia.
20 Alan asiantuntijoille on luonnollisesti selvää, että polypeptidit, joilla on funktionaalisia yhtäläisyyksiä metallotioneiinin kanssa, samoin kuin metallotioneiinin/-metallotioneiinifragmenttien ja tavanomaisten monomeerien kopolymeerit, jotka valmistetaan tavanomaisin synteesi-25 menetelmin, ovat käyttökelpoisia tämän keksinnön yhtey-dessä, kunhan niillä on edellä esitetyt metallotioneiinin yleiset ominaisuudet.
Merkkiainemetallit Tällä hetkellä tunnetuista diagnostisista ja tera-30 peuttisista radionuklideista ovat seuraavat käyttökel-poisia tämän keksinnön yhteydessä /puoliintumisaika annettu vuorokausina (d) tai tunteina (h)/: ίο 81263
Taulukko II
Diagnostinen radionuklidi_Puoliintumisaika
Rutenium-97 2,9 d
Teknetium-99m 6,0 h 5 Elohopea-197 2,7 d
Gallium-67 77,9 h
Gallium-68 1,1 h
Osmium-191 15 d
Indium-111 2,8 d 10 Indium-113m 1,7 h
Lyijy-203 52 h
Terapeuttinen radionuklidi_Puoliintumisaika
Palladium-103 17,0 d
Hopea-111 7,5 d 15 Antimoni-119 1,6 d
Kulta-198 2,7 d
Kupari-67 2,6 d
Renium-188 17,0 h
Vismutti-212 1,0 h 20
Diagnostiset radionuklidit ovat gamma-emittoijia ja/tai positroniemittoijia, jotka emittoivat energioita 30 keV - 1 MeV ja joiden puoliintumisaika on noin 1 min -8 d. Nämä radionuklidit ovat käyttökelpoisia tavanomais-· 25 ten radioskintigrafisten menetelmien, jotka perustuvat esimerkiksi taso-, yksifotoni- tai positronitomografisiin menetelmiin, yhteydessä. Terapeuttiset radionuklidit emittoivat alfa-, beta-, gamma-konversioelektroni- tai Auger-elektronisäteilyä, joiden energia on 100 eV - 2 MeV 30 ja joilla on kyky tappaa soluja in vivo.
Alan asiantuntijoille on selvää, että kun puhutaan näiden erilaisten radionuklidien diagnostisista ja terapeuttisista käyttötarkoituksista, riippuvat käytettävät annokset monista muuttujista. Kun radionuklideja käytetään .]· 35 kuvaustarkoituksiin, tarvitsee kulloinkin käytettävän an-
II
11 81263 noksen olla vain riittävän suuri diagnostisesta käyttökelpoisten kuvien saamiseksi, yleensä 0,1-20 mmCi/70 painokiloa. Sitä vastoin terapeuttisiin tarkoituksiin voidaan käyttää suurempia annoksia, yleensä 0,1-500 mCi/70 5 painokiloa. Asianmukainen annos riippuu luonnollisesti viime kädessä radionuklidin fysikaalisista ominaisuuksista, kuten puoliintumisajasta, säteilytyypistä ja säteilyn energiasta, sekä radionuklidilla merkatun aineen farmako-kinetiikasta.
10 Varjoaineista, joiden tällä hetkellä tiedetään ole van käyttökelpoisia NMR-kuvauksessa, pidetään kobolttia, nikkeliä, kuparia ja ruteniumia käyttökelpoisina tämän keksinnön mukaiseen käyttöön.
Varjoaineista, joiden tällä hetkellä tiedetään 15 olevan käyttökelpoisia radiografiseen kuvaukseen, pidetään jaksollisen järjestelmän metallisia alkuaineita 72-83 käyttökelpoisina tämän keksinnön mukaiseen käyttöön vismu-tin, lyijyn, elohopean, kullan, platinan, reniumin ja volf-ramin ollessa edullisia.
2Q Metallotioneiinin merkkaus
Yleisesti ottaen on olemassa kaksi menettelyä, joita voidaan käyttää merkatun metallotioneiinin tuottamiseen. Ensimmäinen on tioneiinin suora merkitseminen. Toinen on metallotioneiinin, kuten Zn-metallotioneiinin, vaihtomer-25 kitseminen käyttämällä haluttua merkkiainemetallia.
Ensimmäinen menetelmä, so tioneiinin merkitseminen suoraan merkkiaineella, on samanlainen kuin menetelmä, jota M. Vasak ja J. Kagi kuvaavat julkaisussa Proc. Natl. Acad. Sei. USA 78 (1981) 6709, joka tässä mainitaan viit-30 teenä. Yleisesti ilmaistuna nisäkkään tioneiini liuotetaan pH 2:ssa ja mahdollinen liukenematon materiaali poistetaan suodattamalla. Tähän tioneiiniliuokseen lisätään merkkiai-nemetalli ja mahdollinen haluttu merkkiaineena toimimaton metallikationi. Merkkiaineen ja merkkiaineena toimimatto-35 man metallikationin kokonaispitoisuuden tulisi olla riit- 12 81 263 tävän suuri takaamaan se, että saatavana on vähintään 7 kahdenarvoista tai 10 yhdenarvoista metallikationia tione-iinimolekyyliä kohden tai sopiva kahdenarvoisten ja yhden-arvoisten kationien yhdistelmä metallotioneiinin kaikkien 5 metallia sitovien kohtien täyttämiseksi. Tioneiinin ainutlaatuisten ominaisuuksien ansiosta voidaan valmistaa me-tallotioneiineja, jotka sisältävät useamman kuin yhden me-tallikationin. Siten, koska on mahdollista täyttää tioneiinin kaikki metallia sitovat paikat merkkiainemetallil-10 la, voidaan valmistaa merkattuja metallotioneiineja, joiden merkkiainepitoisuus on hyvin suuri.
Kun merkkiainemetallina käytetään radionuklidia, riippuu lisätyn radionuklidin määrä mielenkiinnon kohteena olevan kliinisen sovellutuksen vaatimasta ominaisaktii-15 visuudesta. Diagnostisiin tarkoituksiin voi radionuklidin ja tioneiinin välinen moolisuhde olla niinkin pieni kuin yksi tai vielä pienempi. Terapeuttisiin tarkoituksiin tämä suhde voi olla suurempi. Ei-radioaktiivisia metallika-tioneja voidaan lisätä riittäviä määriä täyttämään ne me-20 tallia sitovat kohdat, jotka eivät ole radioaktiivisten kationien täyttämiä. Radionuklidien ja mahdollisesti ei-radioaktiivisen metallin lisäyksen jälkeen saadusta liuoksesta poistetaan kaasu huolellisesti hapen poistamiseksi ja liuosta neutraloidaan inertissä atmosfäärissä, kunnes 25 pH on suurempi kuin 7,0. Tämän neutraloinnin aikana tio- neiini taipuu radionuklidin ja ei-radioaktiivisten metalli-kationien ympärille, jolloin muodostuu haluttu radionukli-dilla leimattu metallotioneiini. Leimattu metallot:Loneii-ni voidaan sitten puhdistaa tavanomaisin menetelmin, ku-30 ten dialyysillä, tai ioninvaihtokromatografiällä. Radio-- nuklidilla merkatun metallotioneiihin ei-radioaktiivisen - . metallin pitoisuus voidaan määrittää atomiabsorptimetri- sesti ja radionuklidipitoisuus laskemalla radioaktiivinen hajoaminen. Tämä puhdistettu radionuklidilla leimattu me-35 tallotioneiini voidaan sitten liittää suoraan BAM:iin
II
13 81 263 käyttämällä bifunktionaalisia liittämis- tai silloitus- aineita, joita kuvataan jäljempänä. Koska radionuklidil- la merkatun metallotioneiinin valmistus ja sen liittäminen haluttuihin BAM:eihin vie aikaa, ovat sellaiset radionuk-97 197 5 lidit kuin Ru ja Hg, joiden puoliintumisajat ovat pidempiä kuin 24 h, edullisia tässä suoramerkkausmenetelmäs-sä käytettäviksi.
Toisessa leimausmenetelmässä vaihdetaan metallotioneiinin merkkiaineena toimimattomat metallikationit koko-10 naan tai osittain merkkiainekationiin. Jotta tämä vaihto- reaktio onnistuisi, tulee merkkiainekationilla olla suurempi affiniteetti metallotioneiinin merkaptidiryhmien suhteen kuin ennalta muodostetussa metallotioneiiniasa olevilla merkkiaineena toimimattomilla kationeilla.
15 Kun esimerkiksi käytetään radionuklideja merkkiaine- metallina, on sinkkikationeilla alhaisempi affiniteetti metallotioneiinin merkaptidiryhmien suhteen kuin teknetium-, elohopea- tai hopeakationeilla. Siitä syystä korvautuvat Zn-metallotioneiinin Zn(II)-kationit helposti teknetium- 20 99m, elohopea-197 tai hopea-lll-kationeilla, jolloin saa- 99m 1Q7 lii daan Zn/ Tc-MTh, Zn/ Hg-MTh tai vastaavasti Zn/ Ag- MTh. Siten, koska Zn-MTh on helppo valmistaa Vasakin et ai. (supra) menetelmällä, voidaan Zn-MTh:n tai Zn-MTh-BAM-konjugaatin vaihtoleimaus tehdä sekoittamalla keske-25 nään Zn-MTh tai Zn-MTh-BAM-konjugaatti ja liukoinen, vaihtokelpoinen radionuklidiyhdiste, esimerkiksi ^^c-gluko-heptonaatti, ^^HgClj tai "^^Ag (NH^) 2 * Radionuklidilla leimattu metallotioneiini voidaan vaihtoreaktion jälkeen puhdistaa tavanomaisin menetelmin, kuten dialyysillä, molekyy-30 likokoon perustuvalla erotuksella tai ioninvaihtokromato-grafiällä. Vaihtomerkkauksen saanto voidaan määrittää laskemalla radioaktiivinen hajoaminen, ja se ilmoitetaan me-tallotioneiiniin menneen radioaktiivisuuden prosenttiosuutena kokonaisaktiivisuudesta. Koboltti (II)-, nikkeli-35 (II)-kationit muodostavat metallotioneiineja, joita voidaan käyttää vaihtomerkkausmenetelmässä, jossa käytetään 14 81 263 taulukossa 2 annettuja radionuklideja; sinkki(II)-kationit ovat kuitenkin edullisia ei-radioaktiivisia kationeja tähän vaihtoleimaukseen. Vaihtoleimausmenettely on käyttökelpoinen erityisesti silloin, kun käytetään radionukli-5 deja, joiden puoliintumisaika on lyhyempi kuin 2:4 h, koska tämä vaihtoleimaus voidaan tehdä käyttöpaikalla. Kuten jäljempänä kuvataan, Zn-MTh-BAM-konjugaatin vaihtoleimaus lyhytikäisillä radionuklideilla tekee mahdolliseksi radio-nuklidien lisäämisen molekyyliin välittömästi ennen käyt-10 töä, jolloin vältetään hajoamisen aiheuttama väistämätön radioaktiivisuuden häviäminen.
9 Cim
Edellä mainituista radionuklideista on ^ Te edullisin tämän keksinnön yhteydessä vaihtoleimaukseen käytettäväksi suhteellisen lyhyen puoliintumisaikansa, helpon saa-99 99m 15 tavuutensa Mo/ Tc-generaattoreista ja edullisten fysikaalisten ominaisuuksiensa ansiosta. Radionuklidit ^^Ag,
Au ja Hg ovat edullisimpia joko tioneiinm suoraan merkkaukseen tai vaihtoleimaukseen siksi, että molemmat 97 leimausmenettelyt on helppo toteuttaa. Radionuklideja Ru, 20 ^^Pd ja käytetään mieluiten tioneiinin suoraleimauk- sessa.
Kuten edellä mainittiin, näitä radionuklidilla merkattuja metallotioneiineja voidaan käyttää välituotteina keksinnön mukaisten radionuklidilla merkattujen metallotio- 25 neiini-BAM-konjugaattien valmistukseen jäljempänä yksityis- 9 9 m ;; kohtaisesti kuvattavalla tavalla. Tc-leimatut metallo- tioneiinit tai metallotioneiinifragmentit voivat myös sellaisinaan olla erityisen käyttökelpoisia munuaisten toiminnan kuvaamiseen käytettävinä aineina. Radionuklidilla 30 merkattujen metallotioneiinien jakautumista elimiin käytettäessä 65Zn:a ja 10^Cd:a on kuvattu, mutta kummallakaan näistä radionuklideista ei ole diagnostiseen kuvaamiseen in vivo soveltuvia fysikaalisia ominaisuuksia tai annos teltavuutta . Edellä kuvatulla vaihtoleimausmenettelyllä Q Q m 35 valmistettua Tc/Zn-MTh:a voidaan käyttää in vivo munu-aishäiriöiden tutkimiseen. Kun hiiriin ruiskutetaan laski-
II
is 81263 mon sisäisesti "mTc/Zn-MTh:a poistavat munuaiset välit-9 9 τη tömästi Tc/Zn-MTh:n. 15 min:n kuluttua ruiskutuksesta ^ 9in 75 % Tc-aktiivisuudesta on munuaisissa, virtsarakossa ja virtsassa. Siten munuaisten toimintaa voidaan tutkia 5 hyvin nopeasti in vivo seuraamalla 99mTc/Zn-MTh:n pois-9 9m tumista. Tc/Zn-MTh:n käytöllä on se luontainen etu muiden munuaisten diagnostisointiaineiden, kuten 99rnTcDTPA:n, käyttöön nähden, että metallotioneiini on luonnon kehittämän myrkkyjen poistomekanismin luontainen osa. Ihmises-10 sä munuaiset ovat ratkaisevassa osassa raskasmetallimetal-lotioneiinien metaboliassa.
Menetelmiä, jotka ovat samanlaisia kuin ne, joita kuvattiin metallotioneiinin radionuklidileimauksen yhteydessä, voidaan käyttää ei-radioaktiivisten merkkiaineiden 15 lisäämiseen. Niistä, jotka voisivat olla käyttökelpoisia röntgenvarjoaineina, so Bi, Rh, Hg, Au, Pt, Re ja W, voidaan elohopea ja kulta sisällyttää metallotioneiiniin vaihtoleimauksella tai liittämällä suoraan apoproteiiniin. Muiden alkuaineiden lisääminen saadaan aikaan suoraleimauk-20 sella. Niistä, jotka voisivat olla käyttökelpoisia NMR-kuvaukseen, so Co, Ni, Cu(II) ja Ru, on kupari(II) parhaiten liitettävissä metallotioneiiniin vaihtoleimauksella, kun taas koboltti, nikkeli ja rutenium liitetään suoralei-' mauksella.
25 Kohteeseen hakeutuvat biologisesti aktiiviset mo lekyylit
Termillä kohteeseen hakeutuva biologisesti aktiivinen molekyyli (BAM) tarkoitetaan tässä käytettynä vasta-aineita (erityisesti monoklonaalisia vasta-aineita), vasta-30 aineiden Fab-, Fab'- ja F(ab')2~fragmentteja ja muita molekyylejä, jotka asettuvat tiettyihin elimiin, kudoksiin tai soluihin nisäkkään elimistössä. Esimerkkejä tällaisista muista molekyyleistä ovat hormonit, kuten insuliini, glukakoni, prostaglandiinit, steroidihormonit ja peptidit, 35 sekä muut proteiinit, jotka sitoutuvat spesifisesti tie- ie 81263 tyn tyyppisiin soluihin, kuten luteinisoiva hormoni, joka sitoutuu munasarjojen reseptoreihin. Suuret molekyylit, kuten proteiinit, ovat yleensä edullisia metallctioneii-nin liittämisen kautta tapahtuvaa radionuklidilla leimauk-5 seen, mutta lukuisten pienten molekyylien liittäminen saattaa myös soveltua; esimerkiksi useiden kinuklidinvvlibentsi-laattimolekyylien liittäminen radionuklidilla merkattuun metallotioneiiniin, joka bentsilaatti sitoutuu sydämen ko-linergisiin muskariinireseptoreihin, voisi saada aikaan 10 radionuklidiaineen sydänsolujen toimintakyvyn seuraamiseksi in vivo. Radionuklidilla merkattuihin metallotioneii-neihin liitetyt estrogeeni ja neuropeptidit voisivat samalla tavalla toimia rintakasvainten ja vastaavasti aivokasvainten tutkimisaineina.
15 Yllättävästi on havaittu, että BAM:eja, esimerkiksi monoklonaalisia vasta-aineita Anti-THY 1.1 /L.L. Houston, R.C. Nowinski ja I.D. Bernstein, J. Immunology 125 (1989) 837, joka julkaisu annetaan tässä viitteenä/ ja anti(ihmisen rintasyöpä) B6.2 /D. Colcher et ai., Proc. Natl. Acad.
20 Sei. USA 78 (1981) 3199/, samoin kuin muita voidaan liittää Zn-metallotioneiinin ja vaihtoleimata konjuc:aatti esi-• 9 9 in merkiksi lTc:llä alentamatta oleellisesti BAM:ien immuu-nireaktiivisuutta.
Liittäminen 25 BAMrit voidaan liittää metallotioneiineihin joko : ennen metallotioneiinin radionuklidileimausta tai sen jälkeen. Yleensä on edullista tehdä radionuklidimerkkaus ennen liittämistä, koska radionuklidileimaukseen voidaan käyttää ankarampia olosuhteita kuin liittämiseen. Kuiten-30 kin silloin, kun halutaan tehdä leimaus lyhytikäisellä radionuklidilla, kuten Te:11a, vaihtoleimauksen kautta juuri ennen kliinistä käyttöä, on liittäminen ennen radionuklidileimausta, jota jäljempänä kuvataan,, edullista.
Nisäkkäiden metallotioneiinit sisältävät tyypilli-35 sesti seuraavat aminohappotähteet, jotka sisältävät funktio-
II
I? 81263 naalisia ryhmiä, joiden kautta metallotioneiinit voivat suoraan liittyä BAMrhin: kysteiini, 20 tioliryhmää (-SII); lysiini, 8 aminoryhmää (-Nl^) ? asparagiini/glutamiini-happo, 4 tai 5 karboksyyliryhmää (-COOH); ja seriini/treo-5 niini, 10-14 hydroksyyliryhmää (-OH). Metallotioneiinin kaikki aminohappotähteet eivät ole käytettävissä liittämiseen, koska jotkut niistä osallistuvat erilaisiin toimintoihin metallotioneiinissa. Kysteiinin SH-ryhmät osallistuvat metallien sitomiseen eivätkä yleensä reagoi rea-10 genssien, joiden kohteena tiolit ovat normaaliolosuhteissa, kanssa. Osittain metalloitujen metallotioneiinin tai metallotioneiinifragmenttien käyttö tekee mahdolliseksi metallin sitomiseen käyttämättömien SH-ryhmien reagoinnin. Metallin osittainen poistaminen metallitioneiinista, 15 jotta saataisiin tällaisia SH-ryhmiä suoraa liittämistä varten, voidaan tehdä käsittelemällä voimakkailla kelatoi-villa aineilla kuten EDTA:11a tai DTPA:lla. Lysiini ja arginiini eivät suurelta osalta ole käytettävissä liittämiseen, koska ne osallistuvat elektrostaattisiin sidoksiin 20 metallotioneiineissa esiintyvien voimakkaasti negatiivisten metalliryhmittymien kanssa. Vaikka joitakin (1-3) ly-siiniryhmiä on normaalisti käytettävissä, metallotioneiinin saattaminen alttiiksi liuoksille, joissa ionivahvuus on suuri, johtaa elektrostaattisten sidosten katkeamiseen 25 ja käytettävissä olevien lysiini- ja arginiinitähteiden lisääntymiseen. Metallotioneiinin pinnalla olevat karboksyy- li- ja hydroksyyliryhmät ovat yleensä käytettävissä BAMrhin liittämiseen, ja ne voivat siksi olla edullisimpia ryhmiä liittämistä varten.
30 BAM:ien liittäminen radionuklidimerkittyihin metal- lotioneiineihin, jotka on valmistettu tioneiinin suoralei-mauksella, tai jälkeenpäin seuraavaa radionuklidivaihto-leimausta varten valmistettuihin ei-radioaktiivisella aineella leimattuihin metallotioneiineihin vaatii metallo-35 tioneiinien käytettävissä olevien -SH-, -NHC(=NH)NH2~, ia 81263 -COOH- tai -OH-ryhmien liittämisen BAM:in komplementaarisiin funktionaalisiin ryhmiin. Jos BAM on monoklonaali-nen vasta-aine tai muu glukoproteiini, se sisältää samoja funktionaalisia ryhmiä kuin metallotioneiini, so -SH-, 5 -NH2' -oh-' -COOH- ja -NHC(=NH)NH^-ryhmiä. Kun käytetään pienempimolekyylisiä lääkkeitä tai hormoneja, jotka eivät sisällä tällaisia ryhmiä, voidaan jokin näistä ryhmistä liittää synteettisesti pieneen molekyyliin, niin että liittyminen m<±allotioneiiniin voi tapahtua. Käytettävät mene-10 telmät vaihtelevat lääkkeestä tai hormonista toiseen, kuten alan asiantuntijat tietävät, ja tärkeimpänä huomioon otettavana seikkana on biologisen spesifisyyden ja affiniteetin säilyttäminen. Tällaista synteettistä muuttamista käsitellään yleisesti teoksessa Means ja Feeney, "Chemical 15 Modification of Proteins", Holden-Day Inc., 1971, joka mainitaan tässä viitteenä. Sen jälkeen metallotioneiini ja BAM voidaan liittää toisiinsa suoraan käyttämällä asianmukaisia reagensseia ia menetelmiä. Yleensä proteiinien liittämisessä metallotioneiiniin samoin kuin metallotione-20 iinien tai proteiinien muuttamisessa liittämistä varten vaaditaan lieviä olosuhteita metallotioneiinin 31a BAM:in denaturoitumisen ja biologisen aktiivisuuden menetyksen välttämiseksi. Reaktioseoksen pH:n tulisi olla noin 3-11, edullisesti 5-9, lämpötilan alueella 0-60°C ja sekä BAM:in 2 “6 25 että metallotioneiinin pitoisuuden 10 - 10 M, edulli- -4 : sesti noin 10 M. Edullinen liuotin on yleensä vesi, mut ta vaihtelevia määriä liuottimia, kuten dimetyylisulfoksi-dia, voidaan lisätä polaarittomien liittämisaineiiden liuottamiseksi. Liitettäessä BAM:ja, jotka eivät ole proteiine-30 ja» metallotioneiineihin, pystyy metallotioneiini kestämään jonkin verran ankarampia olosuhteita, ja reaktiot voidaan tehdä orgaanisissa liuottimissa, kuten dimetyyli-sulfoksidissa.
: Elleivät metallotioneiini ja BAM sisällä komplemen- 35 taarisia liittäviä ryhmiä, on joko metallotioneiinin tai il 19 81 263 ΒΔΜ:in tai molempien synteettisen muuntamisen sijasta mahdollista käyttää ristisidoksia muodostavia aineita halutun liittymisen aikaan saamiseen. Silloitusaineen tulisi sisältää kaksi kemiallisesti sopivaa ryhmää X ja Y, jot-5 ka muodostavat kovalenttisia sidoksia metallotioneiinin ja BAM:in funktionaalisten ryhmien kanssa ja joita yhdistää alkyyli- ja/tai aryyliketju, so silloitusaineen kaava on X-C^-Y, jossa Cn on alkyyli tai aryyli. Reaktiivisten ryhmien X ja Y tulee olla kemiallisesti soveltuvia, so ne 10 eivät saa reagoida keskenään polymeerisiä yhdisteitä tuottaen. Koska metallotioneiini ja useimmat BAM:it sisältävät -ΝΗ2~, -SH- ja -OH-ryhmiä, kuuluvat edullisiin reagoiviin ryhmiin X ja Y alkyloivat ja asyloivat ryhmät. Edullisia alkyloivia X- ja Y-ryhmiä ovat halogeenihapot, halo-15 geeniesterit tai halogeeniamidit; aryylihalogenidit; ja maleimidit. Silloitus käyttämällä metallotioneiinin ja BAM:in -NH^-ryhmien pelkistävää alkylointia on myös edullista; sellaiset silloitusaineet kuin gluraraldehydi, jossa X ja Y ovat aldehydiryhmiä ja n = 3, ovat osoittautu-20 neet käyttökelpoisiksi liitettäessä radionuklidileimattuja metallotioneiineja monoklonaalisiin vasta-aineisiin tällaisten -NH2-ryhmien pelkistävän alkyloinnin kautta. Edullisiin :: asyloiviin ryhmiin X ja Y kuuluvat aktivoidut karboksyyli- ryhmät, kuten kloridit ja anhydridit, imidiesterit, tioli-25 esterit ja N-hydroksisukkinimidiesterit. Yleensä amiinien asylointi on edullisempaa kuin hydroksyylien, sillä amidien tiedetään olevan stabiilimpia in vivo kuin esterien.
Edullisiin X- ja Y-ryhmiä sisältäviin yhdisteisiin kovalenttisten sidosten muodostamiseksi -NHC(=NH)NH2~ryh-30 mien kanssa kuuluvat 1,2- ja 1,3-dikarbonyyliyhdisteet, kuten malonidialdehydi, sykloheksaani-1,2-dioni ja kemferi-kinoni. Arginiinitähteiden reaktio näiden reagenssien ; kanssa on reversiibeli ja hyvin selektiivinen.
Käytettäessä silloitukseen metallotioneiinin ja 35 BAM:in karboksyyliryhmiä on edullinen X- ja Y-ryhmä amiini-ryhmä. Kun metallotioneiini tai BAM aktivoidaan vesiliukoi- 20 81 263 sella karbodi-imidillä, kuten l-sykloheksyyli-3-(2-morfo-linyyli-4-etyyli)karbodi-imidillä tai l-etyyli-3-(3-di-metyyliaminopropyyli)karbodi-imidillä, reagoi aktivoitu karboksyyliryhmä silloitusaineen X- ja/tai Y-ryhmänä ole-5 van -Nl^-ryhmän kanssa muodostaen amidisidoksen. Metallo-tioneiinin ja BAM:ien tällaisten karboksyyliryhmien reaktio aminoryhmiä sisältävien silloitusaineiden kanssa on edullinen menetelmä metallitioneiinin liittämiseksi BAMjhin.
Hiilivetyketju, joka erottaa X:n ja Y:n voi yleensä 10 olla joko alkyyli tai aryyli, joka sisältää 1-12 hiiliatomia. Ketjun pituuden valinta vaihtelee liitettävän BAM:in luonteen mukaan. Suurimolekyylisten BAM:ien ollessa kyseessä saattaa pitkähkö ketju olla tarpeen, jotta saadaan aikaan optimaalinen kovalenttisen sidoksen muodostus metallo-15 tioneiiniin sitoutuneen silloitusaineen ja suur:.molekyy-lisen proteiinin funktionaalisten kohderyhmien välillä. Pienimolekyylisten BAM:ien ollessa kyseessä saatetaan tarvita hyvin pitkää hiiliketjua, jotta metallotioneiiniin liitetty BAM pääsisi vuorovaikutukseen solupinnalla ole-20 van reseptorinsa kanssa. Ketjun pituutta voidaan siten vaihdella joko silloitusprosessin optimoimiseksi tai metallo-tioneiini-BAM-konjugaatin biologisen aktiivisuuden säilymisen maksimoimiseksi.
Jotkut kaupallisesti saatavat silloitusaineet ovat 25 edullisia metallotioneiinien liittämiseen monoklonaalisiin vasta-aineisiin. Esimerkkeihin edullisista silloitusaineis-ta kuuluvat glutaraldehydi, N-(2-kloorietyyli)maleimidi, disukkinimidyylitartraatti, sukkinimidyyli(4-p-maleimidi-fenyyli)butyraatti, 2-aminotiolaani ja dimetyyliadipimi-30 daatti.
Tämän keksinnön mukaisia merkkiainetta sisältäviä konjugaatteja käytetään samalla tavalla kuin tunnettuja merkkiainetta sisältäviä BAM:ja. Ne voidaan kylmäkuivata säilytystä ja kuljetusta varten, sekoittaa sitten käyttöä 35 varten normaaliin fysiologiseen suolaliuokseen ja ruiskut-
II
2i 81263 taa laskimoon diagnostista kuvausta tai hoitoa varten, tai ne voidaan valmistaa välittömästi ennen käyttöä vaih-toleimauksella. Niitä voidaan käyttää myös in vitro-tut-kimuksiin ja kliinisiin diagnoosimenetelmiin samalla ta-5 valla kuin tunnettuja merkkiaineita sisältäviä yhdisteitä. Esimerkki 1
Elohopea-203:11a leimatun metallotioneiinin valmistus tioneiinista
Tioneiinia eristettiin kaniinin maksasta M.Vasakin 10 et ai. /Biochemistry 20 (1981) 2852/ menetelmällä. Tämä tioneiini (3-5 mg) liuotettiin 1,0 mitään metallivapaata 0,1 N HC1 ja suodatettiin mahdollisen liukenemattoman aineen poistamiseksi. Saadun tioneiiniliuoksen konsentraatio määritettiin spektrofotometrisesti aallonpituudella 220 nm 15 käyttäen laskuihin absorptiokerrointa 7,9 mg ^ ml/cm Tähän tioneiiniliuokseen (0,5 mg/ml) lisättiin 0,76 mCi 203 2
HgCl„ (ominaisaktiivisuus 8,76 x 10 mCi/mmol). Saa- 1 203 dusta tioneiini/ HgC^-liuoksesta poistettiin kaasut huolellisesti hapen poistamiseksi jäädyttämällä ja sulatta- 20 maila seosta vuorotellen alipaineessa. Argonia suojakaasu- ' 203 na käyttäen tioneiini/ HgC^-liuos neutraloitiin metalli- ; vapaalla 0,5 M tris(hydroksimetyyli)aminometaanipuskurilla 20 8 (Tris) pH-arvoon yli 7,0. Saatu Hg-MT tutkittiin eri molekyylikoot erottavalla HPLC:llä käyttäen geelisuodatus- 25 kolonnia 1-60 (saatavana yhtiöstä Waters Assoc., Inc., / Milford, Mass.) ja eluoiden 0,025 M fosfaattipuskurilla (pH 7,0) nopeudella 2,0 ml/min. Kromatografiän jälkeen oli 203 207 98 % lisätystä Hg-aktiivisuudesta Hg-MT:ssa. Koska metallotioneiinin valmistuksen suhteen ei ole olemassa 30 mitään isotooppivaikutusta, saadaan vertailukelpoisia tu- 197 loksia käyttämällä HgC^ia.
Esimerkki 2 : Zn/^mTc-metallotioneiinin valmistus Zn-metallo- ./ tioneiinin vaihtoleimauksella 35 Zn-metallotioneiini valmistettiin M. Vasakin ja J. Kagin /Proc. Natl. Acad. Sei. USA 78 (1981) 67097 mene- 22 81 263 telmällä käyttäen ei-radioaktiivista ZnS04*7H20 ja di-alysoitiin käyttämällä ’’Spectra Por 6"-dialyysiletkua (2000 MW-jae) (markkinoija Spectrum Medical Instruments,
Inc., Los Angeles, Calif.) 0,01 M fosfaattipuskuria (pH 6,5) c -4 vastaan. 0,5 mg:aan Zn-metallotioneiinia (1,0 ml; 10 M) lisättiin 9,7 mCi ^^c-GLUCOSCAN TM (New England Nuclear Corp.), joka valmistetaan lisäämällä 0,5 ml:aan fysiologista suolaliuosta 48,7 mCi ^mTc-perteknetaattia, joka saadaan ^Mo/^11^ c-radionuklidi-generaattorin hapettimis-10 ta vapaasta eluaatista. Saatua vaihtoseosta ravisteltiin Q Q m ja inkuboitiin 30 min. Vaihtoleimattu Zn/ Tc-metallotio-neiini puhdistettiin molekyylikoot erottavalla HPLCrllä esimerkin 1 mukaisesti. Puhdistuksen jälkeen oli 88 % lisätystä teknetium-99m-aktiivisuudesta Zn/^mTc-MT: ssä.
15 Olettaen, että teknetium-99m on kantaja-aineista vapaata siirtyi vaihtoreaktiossa 16 pmol teknetium-99m:a 0,5 mg:aan Zn-metallotioneiinia.
Esimerkki 3
Zn/^^mAg-metallotioneiinin valmistus Zn-metallo-20 tioneiinin vaihtoleimauksella
Zn-metallotioneiini valmistettiin esimerkin 2 mu-kaisesti ja dialysoitiin /"Spectra/Por 6” (2000 MW-CO)_7 - : 0,01 M fosfaattipuskuria (pH 7.0) vastaan. ^^AgNO^ 0,5 M
HN0^:ssa (New England Nuclear Corp.) (ominaisaktiivisuus 25 1017 mCi/mmol) neutraloitiin pH-arvoon 7,0 lisäämällä 0,5 N NH^OH. 0,5 mg:aan Zn-metallotioneiinia (0,5 ml, 10 ^M) lisättiin 50,uCi "^^Ag (NH~) ΐ. Inkuboitiin 30 min f J ^ -3 ^ ja vaihtoleimattu Zn/ Ag-MT puhdistettiin molekyylikoot erottavalla HPLC:llä esimerkin 1 mukaisesti. Puhdistuksen 30 jälkeen oli 70 % *^mAg (NH^) 2 :na lisätystä hopea-110m-ak-tiivisuudesta Zn/^^mAg-MT: ssa, so 34 mmol hopea-110m:a 011 siirtynyt 0,5 mg:aan Zn-MT. Koska metallotioneiinin valmistuksessa ei esiinny minkäänlaista isotooppivaikutus-ta, saadaan vertailukelpoisia tuloksia, kun * * ^mAg (NH ^) t. korvataan Ag(NH^)2:11a.
23 81 263
Esimerkki 4 Q Q m
Zn, Tc-metallotioneiini(MT)/anti-THY 1,1-konjugaatin valmistus ja tutkiminen Q Q-rvx a. Zn, 1Tc-MT/anti-THY 1,1-konjugaatin valmistus 5 0,01 M fosfaattipuskurissa (pH 7,0) olevaan Zn- -4 metallotioneiiniin (1,0 mg/ml; 10 M) lisättiin glutaral- _ 2 dehydiä (1 mg; lopullinen konsentraatio 10 M). Pidettiin tunti huoneen lämpötilassa ja poistettiin sitten reagoimaton glutaraldehydi dialysoimalla /"Spectra/Por 6" (2000 10 MWC0)J7 6 h 0,01 M fosfaattipuskuria (pH 7,0) vastaan. 0,5 ml:aan tätä glutaraldehydillä käsiteltyä metallotioneiinia -4 (10 M) lisättiin 1 mg monoklonaalista vasta-ainetta (MAb) anti-THY 1,1 0,1 ml:ssa 0,2 M bikarbonaattipuskuria (pH 9,5). Anti-THY 1,1:n ja glutaraldehydillä käsitellyn metallotio-15 neiinin annettiin reagoida 4°C:ssa 18 h ja lisättiin sitten 0,1 ml liuosta, joka sisälsi 0,5 mol/1 tris-puskuria ja 0,1 mol/1 NaBH^. Annettiin reagoida 1 h huoneen lämpötilassa ja Zn-metallotioneiini/anti-THY 1,1-konjugaattia dialysoitiin 24 h /"Spectra/Por 6" (50 000 MWCO)/ 0,01 M 20 fosfaattipuskuria (pH 6,8) vastaan reagoimattoman natrium-boorihydridin ja glutaraldehydillä käsitellyn Zn-metallo-tioneiinin poistamiseksi. 0,1 mg:aan tätä konjugaattia li-
Q Qp% TM
sättiin 3,5 mCi Tc-GLUCOSCAN (New England Nuclear
Corporation) ja seosta inkuboitiin 30 min. Vaihtoleimattu 9 9m
25 Zn, Tc-metallotioneiini/anti-THY 1,1-konjugaatti puhdistettiin HPLCillä käyttäen BuoRad TSK-250-geelisuodatusko-lonnia (markkinoija BioRad Corporation) ja eluoiden 0,1 M
fosfaattipuskurilla (pH 7,0) nopeudella 1,0 ml/min. Puhdis- 99m Q 9m tuksen jälkeen oli 0,53 mCi Te:a Zn, Tc-MT/anti- 30 THY 1,1-konjugaatissa (0,1 mg).
9 9tt\ b. Zn, Tc-MT/anti-THY 1,1-konjugaatin sitoutuminen hiiren SL1- ja SL2-kasvainsoluihin 99 m
Zn, Tc-MT/anti-THY 1,1-konjugaatin reaktiivisuutta antigeeniin nähden tutkittiin käyttämällä solusitoutu-35 miskoetta, jota kuvaavat L.L. Houston, R.C. Nowinski ja 24 81 263 I.D. Bernstein /β. Immunol. 125 (1980) 8377 ja jossa AKR/Jackson- ja AKR/Cumberland-tymosyytit korvataan hiiren SLl- ja SL2-kasvainsoluilla. SLl- (THY 1,1-antigeeni-negatiivinen) ja SL2- (THY-1,1-antigeenipositiivinen) kas-5 vainsoluja /R.C. Nowinski et ai., Virology 81 (1977) 3637 kasvatettiin 37°C:ssa kostutetussa 6 % CC>2 sisältävässä inkubaattorissa Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640-väliaineessa, jota oli täydennetty lisäämällä 20 % hevosen seerumia ja 20 mmol/1 L-glutamiinia. Solujen kasvu-10 nopeus oli sellainen, että SLl-solumäärä lisääntyi noin kolminkertaiseksi vrk:ssa ja SL2-solumäärä noin viisinkertaiseksi. Kokeeseen käytettävät kasvainsolut eristettiin, suspentoitiin takaisin RPMI 1640-väliaineeseen ja laskettiin tavanomaisin menetelmin. Sekä SLl- että SL2- Q Q ΤΊΊ 15 soluja inkuboitiin Zn, Tc-MT/anti-THY l,l:n kanssa 99n (28 nCi konjugaattia; 5 mCi/mg) tai Zn, Tc-MT:n kanssa (482 nCi MT:a; 395 mCi/mg) 30 min, erotettiin sitoutumattomasta MAb:sta sentrifugoimalla, pestiin ja laskettiin ^mTc-aktiivisuus. Noin 55 % ^mTc-merkitystä anti-THY 20 l,l:stä sitoutui antigeenipositiivisiin SL2-soluihin, kun Q Q »k taas vähän tai ei ollenkaan Tc-merkittyä konjugaattia : sitoutui antigeeninegatiivisiin SLl-soluihin. Itse asias- q 9m sa käyrä, joka kuvaa Tc-merkittyä anti-THY 1,, l:ä tutkitun antigeenin pitoisuuden funktiona, ei osoittanut mi- 25 tään merkkejä tasoittumisesta 55 %:n sitoutumistasolla.
9 9m
Konjugoimatonta Tc-merkittyä MT:a sitoutui vähän tai ei ollenkaan sekä SLl- että SL2-kasvainsoluihin. Tästä voidaan päätellä että anti-THY 1,1:n sitoutumiseen antigeeniin ei juurikaan vaikuttanut sen konjugointi MT:een 9 9 m 30 ja että Zn, Yc-MT/-anti-THY 1,1-konjugaatti säilyttää anti-THY l,l:llä havaitun antigeenispesifisyyden. Siten * 9 9 in
Tc-MT:n lisäämisellä on yllättävän pieni vaikutus anti- THY 1,1:n biologiseen spesifisyyteen.
Esimerkki 5 9 9m 35 Zn, Tc-metallotioneiini/anti(ihmisen rintasyöpä)- : B6.2:n valmistus ja tutkiminen
II
25 81263 a. Zn, "mTc-MT/B6.2-konjugaatin valmistus Käytettiin esimerkissä IV, jossa valmistettiin 9 9m
Zn, Tc-metallotioneiini/anti-THY 1.1:a, kuvattua menettelyä käyttäen 0,6 mg Zn-MT (5 x 10 5 M), 1 mg glutaralde-5 hydiä ja 3 mg anti(ihmisen rintasyöpä)B6.2:a. Sen jälkeen kun Zn-MT/B6.2:lie oli tehty lopullinen dialyyli 0,01 M fosfaattipuskuria, joka sisälsi 0,15 mol/1 NaCl, (pH 8,0) vastaan 6 h ja sitten 0,01 M fosfaattipuskuria, joka sisälsi 0,15 mol/1 NaCl, vastaan 18 h ^'Spectra/Por 6" 10 (50 000 WWC0/7, konjugaatti (2 mg) vaihtoleimattiin lisää mällä 150 mCI 99mTc-GLUCOSCAN™ (New England Nuclear Cor- 9 9 m poration) ja sekoittamalla 30 min. Tc-MT-merkitty B6.2 puhdistettiin molekyylikoot erottavalla HPLC:llä käyttäen BioRad TSK-250-geelisuodatuskolonnia ja eluoiden 0,1 M 15 fosfaattipuskurilla (pH 7,0) nopeudella 1,0 ml/min. Puhdistuksen jälkeen oli 30 mCI 99m-Tc-aktiivisuutta Zn, 99m-
Tc-MT/B6.2-konjugaatissa.
9 Om b. Zn, Tc-MT/36.2:n sitoutuminen ihmisen MCF-7-ja A275-kasvainsoluihin ; 20 Vaikutusta, joka MT:n liittämisellä on MAb B6.2:n kykyyn sitoutua antigeeniin, joka on sen kohteena, tutkittiin solusitoutumiskokeella, jossa käytettiin kahta ihmisen kasvainsolulinjaa, joita pidettiin yllä kudosviljel-mässä, so ihmisen rintasyöpä MCF-7:ä /h.D. Soule, J.Vazguerz, 25 A.Long, S.Alberg, ja M.Brennan, J.Natl.Cander Inst., 51 (1973) 1409-14167 ja ihmisen melanooma A375:ä /D.J. Giard, S.A. Aaronson, G.J. Todaro, P.Arnstein, J.H. Kersy, H. Do-sik ja W.P. Parks, J. Natl. Cancer Inst., 51 (1973) 1417^. MCF-7-kasvainsolut sisältävät antigeeniä, johon B6.2 sitou-30 tuu [o. Colcher et ai., Proc. Natl. Acad. Sei. USA (1981) 31997, kun taas A375-solut eivät; ne toimivat vertailunäyt-teinä, joilla seurataan radionuklidileimatun B6.2:n ei-• spesifistä sitoutumista. Kokeessa käytettävät kasvainsolut saadaan seuraavalla menettelyllä. Kolmen tai neljän vrk:n 35 kuluttua siirrostuksesta lisättiin trypsiini/EDTA-reagens- sia (luettelo-nro 610-5300, Gibco Laboratories, Grand Island, 2« 81263
New York) paikallaan kasvualustassa oleville kasvain-yksisolukerroksille. Ravisteltiin 1-2 min, trypsiini/-EDTA-seos poistettiin ja korvattiin uudella erällä samaa seosta. Saatua seosta inkuboitiin 37°C:ssa 5-10 min solu-5 jen täydellisen irtoamisen varmistamiseksi. Solut suspen-toitiin RPMI 1640-väliaineeseen, joka sisälsi 1 % naudan seerumialbumiinia (BSA), ja laskettiin tavanomaisin menetelmin. Tällä tavalla saatuja MCF-7- ja A375-soluja inku- O O m boitiin Zn, Tc-MT/B6.2:n kanssa (0,01665^,uCi konjugaatio tia; 1,63 mCi/mg) 37°C:ssa 2 h BSArlla peitetyissä mikro-sentrifugiputkissa. Inkuboinnin lopussa solut erotettiin sitoutumattomasta MAb:sta sentrifugoimalla, pestiin kolmesti RPMI 1640-väliaineella (+1 % BSA) ja laskettiin 9 9m
Tc-aktiivisuus. Noin 70 % Tc-merkitystä B6.2:sta sitou-15 tui yksittäisiä soluja sisältävässä suspensiossa oleviin antigeenipositiivisiin MCF-7-soluihin, kun taas A375-vertailusoluihin sitoutui alle 5 % ^^c-aktiivisuudesta. Samoin kuin anti(THY 1.1)-MAb:nkin yhteydessä havaittiin, MT:n liittäminen B6.2:een johtaa kompleksiin, jonka anti-20 geenispeisfisyys on yleisesti ottaen säilynyt.
99m c. Zn, Tc-metallotioneiini/B6.2:n farnakokine-·' tilkka in vivo
Radiojodileimatun B6.2:n on osoitettu kohdistuvan ihmisen rintasyöpäloiskasvaimiin hiirillä, joilta puuttuu 25 kateenkorva, in vivo . Colcher, M. Zalutsky, W. Kaplan, D. Kufe, F. Austin ja J. Schlom, Cancer Research 43 (1983) 736?· Sen määrittämiseksi, mikä vaikutus MT:n lxittämi-sellä on B6.2:n kykyyn kohdistua ihmisen rintasyöpään, tut- Q Qrn kittiin Tc-merkittyä MT/B6.2:a hiirillä, joilta puuttuu ·· 30 kateenkorva ja joilla on Clouser- tai A375-kiinteitä kas- T.. vaimia. Clouser-kasvaimia /B.C. Giovanella, J.S. Stehlin, L.J. Williams, S.S. Lee ja R.C. Shepart, CAncer 47 (1978) 22697, jotka ovat B6.2-antigeenipositiivisia, ja A375-kasvaimia /5.J. Giard, S.A. Aaronson, G.J. Torado, P. Arn-35 stein, J.H. Kersy, H.Dosik ja W.P. Parks, J.Natl. Cancer
II
27 81 263
Inst- 51 (1973) 1417/, jotka ovat B6.2-antigeeninegatii-visia, kasvatettiin ihon alla hiiren, jolta puuttuu kateen-korva, selässä. Kuhunkin hiireen (17-25 g), jolla oli Q Q τη 200-600 mg:n kasvain, ruiskutettiin 50 uCi Zn, Tc-5 MT/B6.2:a ja hiiret tapettiin eri aikoina (3-4 hiirtä ker ralla) 48 h:n aikana. Valitut elimet poistettiin, punnittiin ja niistä ^^Tc-aktiivisuus. Se prosenttiosuus grammaa kohden ruiskutetusta Zn, ^^c-MT/ö , 2 : s ta , joka havaittiin antigeenipositiivisessa (Ag + ) Clouser-kasvaimessa ja 10 ei-spesifisessä antigeeni-negatiivisessa (Ag ) A375-vertai- lukasvaimessa, annetaan taulukossa III. Taulukon III tie- 9 5 m tojen perusteella Zn, Tc-MT/B6.2:ssa on säilynyt B6.2:n kyky kohdistua ihmisen rintasyöpään in vivo, erityisesti ajanhetkellä 24 h, jolloin sitoutumista Clouser-kasvaimeen 15 tapahtui noin kolminkertaisesti A375:een nähden. Verrattaessa radiojodileimatun B6.2:n julkaistuihin biojakautu-mistietoihin /Colcher et ai. op. cit. (1983)7 todetaan, että ^mTc-leimattu B6.2 poistuu verestä paljon nopeammin. Voidaan päätellä, että MT:n liittäminen B6.2:een ei hei-20 kennä tämän kykyä kohdistua spesifisesti ihmisen rintasyöpään, mutta nopeuttaa radionuklidimerkityn B6.2:n poistumista verestä.
28 8 1 2 6 3
Taulukko III
Kasvain- 9^Tc-metallotioneiini/B6.2 (% graranaa kahden ruisku-tyyppi tetusta annoksesta)
Elin Aika (tuntia) 5__1_6_24__48
Clouser Kasvain 3,37+0,39 7,7213,38 17,00+4.50 6,1811,01
Veri 33,62+2,83 13,5812^29 7,74+6,04 2,5310,24
Perna 13,9913,36 14,1713,06 34,66114,48 5,6410,49 15,7211,78 14,5310,97 21,9314,74 3,6110,71 10 Munuaiset 18.0710,91 14,2712.42 18,54+2,34 3,5010,59
Lihas 0,9610,14 0,8610,11 2,9212 f00 0,52l0,16
Keuhkot 10,2511,53 4,7610,68 2,11+0,46 1,17i0,14 A375 Kasvain 2,6311,30 1,9811,06 5,4110,47 2,1510,24 15 Veri 31,0513,80 17,1311,06 6,4917,57 6.9510,08
Perna 17,4319,33 9.5814,05 23,53110,43 6,2514,30 15f 4216,08 12,9412,39 16,2815,87 5,7010,72
Munuaiset i7f06l2,44 1 3,5411,52 18f 0112,01 5,9510,75
Lihas 1,6210,92 1,0310,25 2,3112,02 0,4710,66 20 Keuhkot 7,2410,69 6,14+0,32 3,89i1,38 2,6910,12 9 9m d. Kasvainten havaitseminen käyttämällä Zn, : Tc-MT/B6.2:a Q Q m
Sen osoittamiseksi, että Tc-leimattu B6.2 voisi 25 olla käyttökelpoinen rintasyövän havaitsemiseen, ruiskutettiin 200^,uCi Zn, ^mTc-MT/B6.2 :a laskimon sisäisesti hiiriin, joilta puuttuu kateenkorva ja joilla on Clouser-tai A375-kasvain. Kukin eläin kuvattiin käyttäen tavanomaista gammakameraa, jossa oli 5,0 mm:n kollimaattori.
30 Jo kuuden tunnin kuluttua ruiskutuksesta oli näkyvissä
Q Q JM
merkkejä Zn, Tc-MT/B6.2:n spesifisestä kerään.tymisestä Clouser-kasvaimeen (Ag+), kun taas kerääntymistä A375:een ei havaittu. Ainoa muu kuvassa näkyvä elin oli maksa. 24 h:n kuluttua ruiskutuksesta oli Clouser-kasvain selvästi * 99m 35 rajautunut. Kasvaimessa havaittu Tc-määrä vastasi mak-
II
sassa havaittua määrää. Myös virtsarakossa ja munuaisissa 29 81 263 havaittiin aktiivisuutta. Sen sijaan ei ollut havaittavissa 99mTc-leiir.atun B6.2:n näkyvää kerääntymistä A375- Q Q m kasvaimiin. Nämä tulokset osoittavat, että Tc-merkit- ty MT/B6.2 kerääntyy nopeasti ja spesifisesti rintasyöpä- 9 9m 5 kudokseen in vivo ja että ‘Tc-leimattu MAb voi olla käyttökelpoinen ihmisen rintasyövän diagnoosiin ja vaiheen määrittämiseen.
Esimerkki 6
Zn, 99inTc-metallotioneiini/anti (ihmisen rinta-10 syöpä)-B6.2 F(ab’)2:n valmistus ja tutkiminen a. Zn, 99raTc-MT/B6 .2 F(ab')2:n valmistus Liuosta, joka sisälsi 60y.ucf pepsiiniä (Sigma Chemical Company, St. Louis, Missouri) ja 3 mg anti(ihmisen rintasyöpä)_b6.2:a 3 ml:ssa 0,1 M natriumasetaattipuskuria 15 (pH 4,0) inkuboitiin 37°C:ssa yön yli. Syntyneet proteo-lyysifragmentit erotettiin B6.2 F(ab’)2:sta dialysoimalla 4°C:ssa /Spectra/Por 6 (50 000 MWCO/7 0,05 M natriumfos-faattipuskuria vastaan (pH 7,0, sisältää 0,15 mol/1 NaCl).
B6.2 F(ab')2 analysoitiin molekyylikoot erottavalla HPLC:
20 Hä käyttäen BioRad TSK-250-kolonnia ja eluoiden 0,1 M
natriumfosfaattipuskurilla (pH 7,0) nopeudella 1,0 ml/min sekä SDS-polyakryyliamidigeelielektroforeesilla. Kun oli tehty toinen dialyysi, jolla B6.2 F(ab')2 siirrettiin 0,2 M karbonaatti/bikarbonaattipuskuriin (pH 9,5), tehtiin liit-25 täminen Zn-MT:een kuten esimerkissä 5 kuvattiin B6.2:n yhteydessä käyttäen 0,6 mg Zn-MT:a ja 1 mg glutaraldehydiä.
Zn-MT/B6.2 F(ab')2 (1»56 mg) vaihtoleimattiin lisäämällä 9 9m Δ TM
165 mCi Tc-GLUCOSCAN (New England Nuclear Corporation) ja sekoittamalla 30 min. Kun tuote oli puhdistettu molekyy-30 likoot erottavalla HPLC:llä käyttäen BioRad TSK-250-geeli-suodatuskolonnia ja eluoiden 0,1 M fosfaattipuskurilla Q Q jn (pH 7,0) nopeudella 1,0 ml/min, oli Zn, Tc-MT/B6.2 F(ab')2: ssa 17,6 mCi Tc:a.
b. Zn, "mTc-MT/B6.2 F(ab1)2~konjugaatin sitoutuminen -;· 35 Vaikutusta, joka MT:n liittämisellä on B6.2:n F(ab’)2“ dimeerin aktiivisuuteen B6.2:n kohdeantigeenin suhteen, tut- 30 81 263 kittiin käyttämällä esimerkin 5 osassa b kuvattua solusi- Q Ο τη toutumiskoetta. Zn, Tc-MT/B6.2 F(ab')2~konjugaattia (2,29 ng; ominaisaktiivisuus = 11,3 ^uCi/^,ug) inkuboitiin vaihtelevissa pitoisuuksissa MCF-7- (Ag+) ja A375- (Ag ) 9 9rn 5 soluja, ja sitoutuneen Tc-merkityn konjugaatin prosenttiosuus määritettiin. Tulokset osoittavat, että 70-30 % ^mTc-merkitystä konjugaatista sitoutui kohteena toimiviin MCF-7-soluihin, kun taas alle 5 % sitoutui A375-soluihin, jotka eivät ole kohdesoluja. Siten Zn-MT:n liittäminen 10 B6.2:n F(ab’)2~dimeeriin ei vähennä tämän sitoutumista antigeeniin eikä muuta sen antigeenispesifisyyttä.
O O τη c. Zn, Tc-MT/B6.2 F(ab’)2:n farmakokinetiikka in vivo
Colcher et ai /Colcher et ai. op. cit. (1983)/ ovat 15 osoittaneet radiojodileimatun F(ab')2:n kyvyn kerääntyä ihmisen rintasyöpäloiskasvaimiin hiirissä, joilta puuttuu kateenkorva. Käyttäen hiiriä, joilta puuttuu kateenkorva ja joilla on Clouser- ja A375-kasvain, määritettiin Zn, 9 9m 'TC-MT/B6.2 F(ab')2:n spesifisyys ja farmakokinetiikka : 20 in vivo. Kuhunkin hiiren, jolla oli kasvain, ruiskutettiin 48,5^,uCi ^mTc-leimattua F (ab 1 ) 2~konjugaattia (cminaisak-tiivisuus = 6,7^uCi/7ug), ja prosenttiosuus grammaa kohden ruiskutetusta annoksesta määritettiin eri ajankohtina (taulukko IV). Kerääntymissuhde Clouser-kasvaimen ja A375-kas-25 vaimen välillä 24 h:n kuluttua on noin 2:1, mikä osoittaa selvästi B6.2 F(ab')2:n kasvainspesifisyyden säilymisen MT:n liittämisen jälkeen. Tc-leimatun B6.2 F(ab')2:n poistuminen verestä oli suurin piirtein samanlainen kuin 9 9 m 9 9 in
Tc-leimatun muuttamattoman B6.2:n. Siten Tc-leimatun 30 B6.2 F(ab')2:n spesifisyys ja sen nopea poistuminen verestä osoittavat, että KTrllä leimatut B6.2-fragmentit ovat käyttökelpoisia kasvainten paikallistamiseen in vivo samalla tavalla kuin Zn, 9^mTc-MT/muuttamaton B6.2.
31 81263
Taulukko IV
99mTc-metallotioneiini-B6.2-F(ab')2 (% grammaa kohden ruiskutetusta annoksesta) 5 Kasvain Elin Aika (tuntia) _1_4_1_6_26
Clouser Kasvain 3.9810.56 6.4511,36 6,0810,68 4,5410.64 ii k i li ; «
Veri 32,54112,95 27,7113,05 11,4711,27 7,3511,36
Perna 5,7110.53 6.0010,58 6.2010,99 4.8H0.39 10 Tilli»
Maksa 38,2015,011 45,60113,46 36,09110,06 53,722
Munuaiset 7,4511,001 6,7811,59 5,8912,46 2,282
Lihas 2,9112,50 1,8410,20 1,3910,47 2,1811,37
Sydän 10,6613,64 10,38l2 p 26 4,7610,76 2,9910,88 15 3 3 3 3 A375 Kasvain 2,5611,30 3,4611,73 2,9710,54 2,07 2
Veri 30,7015,41 27,6311,73 10,9510,64 5,72
Pe1™ 7,2310.77 7.2210.49 6.2810,79 4,01
20 1 1 1 1 it I
M0153 51 ,53110, 77 46,96118,98 33,45113, 101 9,06
Munuaiset 6,6011,08 8,6013,23 6,5510,321 10,24
Lihas 1,7610,49 2,0010,82 2,2911,88 0,90
Sydän 8,0111,38 9,37i2,27 3,1911,66 4,33 25 n= 3 3 3 1 n=2 2 n=1
Claims (8)
1. Menetelmä kohteeseen hakeutuvan biologiscisti aktiivisen molekyylin leimaamiseksi, joka molekyyli 5 sitoutuu reseptoreihin ja kulkeutuu nisäkkäiden määrättyihin elimiin, kudoksiin tai soluihin, tunnettu siitä, että a) tioneiini tai metallotioneiini tai sen fragmentti saatetaan reagoimaan merkkiainemetallin suolan tai 10 suolakompleksin kanssa, jolla on riittävän suuri affiniteetti tioneiiniin, metallotioneiiniin tai fragmenttiin sitoutuakseen siihen; ja b) tioneiini tai metallotioneiini konjugoidaan biologisesti aktiiviseen molekyyliin.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä että merkkiainemetalli on radio-nuklidi.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että biologisesti aktiivinen mo- 20 lekyyli on vasta-aine tai sen fragmentti.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vasta-aine on monoklonaali-nen vasta-aine.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, 25 tunnettu siitä, että monoklonaalinen vasta-aine on anti-THY 1.1 tai anti(ihmisen rintasyöpä) B 6.2.
6. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että radionuklidi on TC-99m, Ad-111, Au-198 tai Hg-197.
7. Metallitioneiini tai metallotioneiinifrag- mentti, tunnettu siitä, että ainakin osa metallo-tioneiinin tai fragmentin sisältämästä metallista on Tc-99m.
8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen metallotioneiini 35 tai metallotioneiinifragmentti, tunnettu siitä, että se on nisäkäsperäinen. Il 33 81 263
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/539,733 US4732864A (en) | 1983-10-06 | 1983-10-06 | Trace-labeled conjugates of metallothionein and target-seeking biologically active molecules |
| US53973383 | 1983-10-06 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI843930A0 FI843930A0 (fi) | 1984-10-05 |
| FI843930L FI843930L (fi) | 1985-04-07 |
| FI81263B FI81263B (fi) | 1990-06-29 |
| FI81263C true FI81263C (fi) | 1990-10-10 |
Family
ID=24152436
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI843930A FI81263C (fi) | 1983-10-06 | 1984-10-05 | Foerfarande foer maerkning av en maolsoekande biologiskt aktiv molekyl och metalltionein. |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4732864A (fi) |
| EP (1) | EP0137457B1 (fi) |
| JP (2) | JPS60166625A (fi) |
| KR (1) | KR860001151B1 (fi) |
| AT (1) | ATE32730T1 (fi) |
| AU (1) | AU578428B2 (fi) |
| CA (1) | CA1248090A (fi) |
| DE (1) | DE3469536D1 (fi) |
| DK (1) | DK162105C (fi) |
| ES (1) | ES8605105A1 (fi) |
| FI (1) | FI81263C (fi) |
| GR (1) | GR80560B (fi) |
| IE (1) | IE55709B1 (fi) |
| IL (1) | IL73183A (fi) |
| NO (1) | NO166267C (fi) |
| NZ (1) | NZ209788A (fi) |
| ZA (1) | ZA847797B (fi) |
Families Citing this family (86)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4707352A (en) * | 1984-01-30 | 1987-11-17 | Enzo Biochem, Inc. | Method of radioactively labeling diagnostic and therapeutic agents containing a chelating group |
| US4880626A (en) * | 1985-01-18 | 1989-11-14 | Mcmichael John | Immunotherapeutic methods and compositions for the treatment of diseases of viral origin, including acquired immune deficiency syndrome |
| NO167124C (no) * | 1985-04-03 | 1991-10-09 | Du Pont Merck Pharma | Fremgangsmaate for fremstilling av et spormerket konjugat av metallthionein og biologisk aktivt molekyl. |
| US5776093A (en) * | 1985-07-05 | 1998-07-07 | Immunomedics, Inc. | Method for imaging and treating organs and tissues |
| WO1987004351A1 (en) * | 1986-01-16 | 1987-07-30 | The General Hospital Corporation | Method for the diagnosis and treatment of inflammation |
| US5591581A (en) | 1986-04-30 | 1997-01-07 | Igen, Inc. | Electrochemiluminescent rhenium moieties and methods for their use |
| US6165729A (en) * | 1986-04-30 | 2000-12-26 | Hyperion Catalysis International, Inc. | Electrochemiluminescent reaction utilizing amine-derived reductant |
| US6451225B1 (en) | 1986-04-30 | 2002-09-17 | Igen International, Inc. | Electrochemiluminescent reaction utilizing amine-derived reductant |
| US4877599A (en) * | 1986-11-10 | 1989-10-31 | New England Deaconess Hospital Corporation | Detection of vascular disease with labelled antibodies |
| US5672334A (en) * | 1991-01-16 | 1997-09-30 | Access Pharmaceuticals, Inc. | Invivo agents comprising cationic metal chelators with acidic saccharides and glycosaminoglycans |
| JP2538083B2 (ja) * | 1987-11-04 | 1996-09-25 | イゲン，インコーポレーテッド | 電気化学的ルミネッセンス性レニウムモイエティ及びそれらの使用方法 |
| US5202451A (en) * | 1988-02-17 | 1993-04-13 | Neorx Corporation | Anchimeric radiometal chelating compounds |
| USH735H (en) | 1988-03-30 | 1990-02-06 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Lead-203 as a label for radioimaging |
| US5061641A (en) * | 1988-04-01 | 1991-10-29 | Immunomedics, Inc. | Method for radiolabeling proteins |
| US5057301A (en) * | 1988-04-06 | 1991-10-15 | Neorx Corporation | Modified cellular substrates used as linkers for increased cell retention of diagnostic and therapeutic agents |
| US5059541A (en) * | 1988-04-29 | 1991-10-22 | Neorx Corporation | Minimal derivatization of proteins |
| US6702986B1 (en) | 1988-04-29 | 2004-03-09 | Igen International, Inc. | Electrochemiluminescent reaction utilizing amine-derived reductant |
| US5726153A (en) * | 1988-05-02 | 1998-03-10 | New England Deaconess Hospital Corporation | Synthetic peptides for arterial imaging |
| US5972890A (en) * | 1988-05-02 | 1999-10-26 | New England Deaconess Hospital Corporation | Synthetic peptides for arterial imaging |
| US5218128A (en) * | 1988-06-15 | 1993-06-08 | Centocor, Inc. | Bifunctional coupling agents and radionuclide labeled compositions prepared therefrom |
| WO1990006323A2 (en) * | 1988-11-29 | 1990-06-14 | Centocor, Inc. | Chimeric proteins incorporating a metal binding protein |
| US5443816A (en) * | 1990-08-08 | 1995-08-22 | Rhomed Incorporated | Peptide-metal ion pharmaceutical preparation and method |
| ATE172879T1 (de) * | 1989-08-09 | 1998-11-15 | Rhomed Inc | Direkte radioetikettierung von antikörpern und sonstigen proteinen mittels technetium oder rhenium |
| US5078985A (en) * | 1989-08-09 | 1992-01-07 | Rhomed, Incorporated | Radiolabeling antibodies and other proteins with technetium or rhenium by regulated reduction |
| US5985240A (en) * | 1989-08-09 | 1999-11-16 | Rhomed Incorporated | Peptide radiopharmaceutical applications |
| US5700444A (en) * | 1992-02-20 | 1997-12-23 | Rhomed Incorporated | Chemotactic peptide pharmaceutical applications |
| US5759515A (en) * | 1989-08-09 | 1998-06-02 | Rhomed Incorporated | Polyvalent peptide pharmaceutical applications |
| US5747334A (en) * | 1990-02-15 | 1998-05-05 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Random peptide library |
| SG65593A1 (en) * | 1990-02-15 | 1999-06-22 | Dana M Fowlkes | Totally synthetic affinity reagents |
| US5498538A (en) * | 1990-02-15 | 1996-03-12 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Totally synthetic affinity reagents |
| US7238340B1 (en) | 1991-11-27 | 2007-07-03 | Cis Bio International | Monoamine, diamide, thiol-containing metal chelating agents |
| CA2101942C (en) * | 1991-02-08 | 2001-01-30 | Richard T. Dean | Technetium-99m labeled polypeptides for imaging |
| US5645815A (en) | 1991-02-08 | 1997-07-08 | Diatide, Inc. | Radiolabled compounds for thrombus imaging |
| US6019958A (en) * | 1991-02-08 | 2000-02-01 | Diatide, Inc. | Technetium-99m labeled peptides for imaging inflammation |
| US6403771B1 (en) | 1991-02-19 | 2002-06-11 | Actinium Pharmaceuticals, Limited | Method and means for site directed therapy |
| US6391590B1 (en) * | 1991-10-21 | 2002-05-21 | The Regents Of The University Of California | Recombinant streptavidin-metallothionein chimeric protein having biological recognition specificity |
| US5556609A (en) * | 1992-02-20 | 1996-09-17 | Rhomed Incorporated | YIGSR peptide radiopharmaceutical applications |
| US5738838A (en) * | 1992-02-20 | 1998-04-14 | Rhomed Incorporated | IKVAV peptide radiopharmaceutical applications |
| US5643549A (en) * | 1992-02-20 | 1997-07-01 | Rhomed Incorporated | Leukostimulatory agent for in vivo leukocyte tagging |
| US5326856A (en) * | 1992-04-09 | 1994-07-05 | Cytogen Corporation | Bifunctional isothiocyanate derived thiocarbonyls as ligands for metal binding |
| US5338686A (en) * | 1992-04-29 | 1994-08-16 | Hellerstein Marc K | Method for measuring in vivo synthesis of biopolymers |
| CA2100709C (en) * | 1992-07-27 | 2004-03-16 | Maurits W. Geerlings | Method and means for site directed therapy |
| US6203775B1 (en) * | 1993-03-19 | 2001-03-20 | The General Hospital Corporation | Chelating polymers for labeling of proteins |
| CA2163107C (en) * | 1993-05-17 | 2001-04-17 | David Milton Goldenberg | Improved detection and therapy of lesions with biotin/avidin-metal chelating protein conjugates |
| US6120768A (en) * | 1993-05-17 | 2000-09-19 | Immunomedics, Inc. | Dota-biotin derivatives |
| JPH09500140A (ja) * | 1993-07-19 | 1997-01-07 | レゾリューション・ファーマスーティカルズ・インコーポレーテッド | Ｎ▲下３▼ｓ立体配置を有するヒドラジノ型放射性核種キレート形成剤 |
| WO1995004753A1 (en) * | 1993-08-11 | 1995-02-16 | University Of New Mexico | Compositions of fusion proteins containing metallothionein and targeting-protein structural components |
| US5449761A (en) * | 1993-09-28 | 1995-09-12 | Cytogen Corporation | Metal-binding targeted polypeptide constructs |
| US5942210A (en) * | 1994-11-15 | 1999-08-24 | Cytogen Corporation | Methods for lyoprotecting a macromolecule using tricine |
| US5891418A (en) * | 1995-06-07 | 1999-04-06 | Rhomed Incorporated | Peptide-metal ion pharmaceutical constructs and applications |
| US6331285B1 (en) | 1996-06-05 | 2001-12-18 | Palatin Technologies, Inc. | Structurally determined cyclic metallo-constructs and applications |
| US7745142B2 (en) | 1997-09-15 | 2010-06-29 | Molecular Devices Corporation | Molecular modification assays |
| WO2000006243A2 (en) | 1998-07-28 | 2000-02-10 | Innerdyne, Inc. | Absorbable brachytherapy and chemotherapy delivery devices and methods |
| DE69926009D1 (de) * | 1998-10-13 | 2005-08-04 | Univ Georgia Res Found | Stabilisierte bioaktive peptide und methoden zu ihrer identifikation, synthese und verwendung |
| US20030190740A1 (en) * | 1998-10-13 | 2003-10-09 | The University Of Georgia Research Foundation, Inc | Stabilized bioactive peptides and methods of identification, synthesis, and use |
| US7666609B1 (en) * | 1998-12-01 | 2010-02-23 | Shanghai Cp Guojian Pharmaceutical Co. Ltd. | Method and composition for diagnosis of melanocytic lesions |
| AU2591800A (en) * | 1998-12-23 | 2000-07-31 | Bert L. Vallee | Synthetic and therapeutic methods for the alpha and beta domains of metallothionein |
| AU771248B2 (en) * | 1999-01-22 | 2004-03-18 | Martek Biosciences Corporation | Simple method for labeled conjugate production |
| ES2198171B1 (es) * | 2000-09-06 | 2005-04-16 | Provital, S.A. | Composicion cosmetica y/o farmaceutica conteniendo metalotioneina. |
| US7385025B2 (en) | 2000-12-19 | 2008-06-10 | Palatin Technologies, Inc. | Metallopeptide compounds |
| US20020117169A1 (en) | 2001-02-27 | 2002-08-29 | Kurz Daniel R. | Cover and applicator for a portion of a mammalian body |
| EP1395226A4 (en) * | 2001-06-11 | 2005-03-30 | Univ Miami | USE OF RADIOPHARMETHIC COMPLEXES TO IMPROVE TRANSPLANT TOLERANCE |
| DE60331827D1 (de) * | 2002-05-29 | 2010-05-06 | Immunomedics Inc | Zusammensetzungen für die radioimmuntherapie von gehirn-tumoren |
| JP2006502390A (ja) * | 2002-10-11 | 2006-01-19 | センティナ バイオテクノロジー インコーポレイテッド | 胸部癌の検出のための方法 |
| US20050232926A1 (en) * | 2003-06-06 | 2005-10-20 | Oncomax Acquisition Corp. | Antibodies specific for cancer associated antigen SM5-1 and uses thereof |
| CN1279056C (zh) * | 2003-06-06 | 2006-10-11 | 马菁 | 肿瘤相关抗原sm5－1的特异性抗体及其应用 |
| EP1675625B1 (en) | 2003-09-17 | 2013-02-20 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Mechanism-based targeted pancreatic beta cell imaging |
| CA2550900A1 (en) | 2003-12-23 | 2005-07-07 | Mount Sinai Hospital | Methods for detecting markers associated with endometrial disease or phase |
| US7833731B2 (en) | 2004-03-31 | 2010-11-16 | Canon Kabushiki Kaisha | Gold-binding protein and use thereof |
| US20090239215A1 (en) * | 2004-12-16 | 2009-09-24 | Brandeis University | Clonable Tag for Purification and Electron Microscopy Labeling |
| US8765808B2 (en) * | 2005-03-23 | 2014-07-01 | Chs Pharma, Inc. | Treatment or prevention of cancer and precancerous disorders |
| WO2006102439A2 (en) * | 2005-03-23 | 2006-09-28 | Florida Atlantic University | Treatment or prevention of cancer and precancerous disorders |
| US8357720B2 (en) * | 2005-03-23 | 2013-01-22 | Florida Atlantic University | Treatment or prevention of cancer and precancerous disorders |
| WO2007130575A2 (en) * | 2006-05-03 | 2007-11-15 | Florida Atlantic University | Protection against oxidative damage in cells |
| GB0621894D0 (en) * | 2006-11-02 | 2006-12-13 | Iti Scotland Ltd | Magnetic recognition system |
| US20080269065A1 (en) * | 2007-04-30 | 2008-10-30 | Syntrix Biosystems, Inc. | Conformationally Constrained Analytical Probes |
| WO2008141318A1 (en) * | 2007-05-14 | 2008-11-20 | Dr. Susan Love Research Foundation | Device for determining risk of developing breast cancer and method thereof |
| CA2618163A1 (en) | 2008-02-07 | 2009-08-07 | K. W. Michael Siu | Head and neck cancer biomarkers |
| GB0808086D0 (en) * | 2008-05-02 | 2008-06-11 | Iti Scotland Ltd | Magnetic proteins for in vivo imaging |
| WO2009140408A2 (en) | 2008-05-13 | 2009-11-19 | University Of Kansas | Metal abstraction peptide (map) tag and associated methods |
| CN102596258B (zh) | 2009-07-22 | 2015-01-28 | 锕医药股份有限公司 | 用于制备放射性免疫缀合物的方法 |
| US10464987B2 (en) | 2009-10-06 | 2019-11-05 | Abbvie Inc. | Human single-chain T cell receptors |
| WO2012021969A1 (en) | 2010-08-16 | 2012-02-23 | Mount Sinai Hospital | Markers of the male urogenital tract |
| WO2013181461A2 (en) | 2012-06-01 | 2013-12-05 | University Of Kansas | Metal abstraction peptide with superoxide dismutase activity |
| EP3409297A1 (en) | 2017-05-30 | 2018-12-05 | AlfaRim Medial Holding B.V. | The optimal 225actinium--213bismuth generator for alpha-particle radioimmunotherapy |
| US20200230266A1 (en) | 2017-09-20 | 2020-07-23 | Alfarim Medical Holding B.V. | The optimal 225actinium--213bismuth generator for alpha-particle radioimmunotherapy |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS56125317A (en) * | 1980-03-08 | 1981-10-01 | Nippon Mejifuijitsukusu Kk | Stable radioactive diagnosticum with radioactive metallic mark |
| GB2109407B (en) * | 1981-10-27 | 1985-12-18 | Hybritech Inc | Tumour imaging with radiolabelled monoclonal antibodies |
| CA1222691A (en) * | 1981-12-29 | 1987-06-09 | Wilhelmus T. Goedemans | Method of preparing radionuclide-labelled proteins, in particular antibodies or antibody fragments |
| US4472509A (en) * | 1982-06-07 | 1984-09-18 | Gansow Otto A | Metal chelate conjugated monoclonal antibodies |
-
1983
- 1983-10-06 US US06/539,733 patent/US4732864A/en not_active Expired - Lifetime
-
1984
- 1984-09-28 AU AU33629/84A patent/AU578428B2/en not_active Ceased
- 1984-10-04 EP EP84111913A patent/EP0137457B1/en not_active Expired
- 1984-10-04 ZA ZA847797A patent/ZA847797B/xx unknown
- 1984-10-04 AT AT84111913T patent/ATE32730T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-10-04 GR GR80560A patent/GR80560B/el unknown
- 1984-10-04 DE DE8484111913T patent/DE3469536D1/de not_active Expired
- 1984-10-04 CA CA000464746A patent/CA1248090A/en not_active Expired
- 1984-10-05 DK DK480284A patent/DK162105C/da not_active IP Right Cessation
- 1984-10-05 NO NO844017A patent/NO166267C/no unknown
- 1984-10-05 ES ES536547A patent/ES8605105A1/es not_active Expired
- 1984-10-05 IE IE2539/84A patent/IE55709B1/en not_active IP Right Cessation
- 1984-10-05 FI FI843930A patent/FI81263C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-10-05 JP JP59208413A patent/JPS60166625A/ja active Granted
- 1984-10-05 NZ NZ209788A patent/NZ209788A/xx unknown
- 1984-10-05 IL IL73183A patent/IL73183A/xx not_active IP Right Cessation
- 1984-10-06 KR KR1019840006193A patent/KR860001151B1/ko not_active IP Right Cessation
-
1989
- 1989-04-04 JP JP1084174A patent/JPH01294700A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK162105B (da) | 1991-09-16 |
| ES8605105A1 (es) | 1986-02-16 |
| FI81263B (fi) | 1990-06-29 |
| AU3362984A (en) | 1985-04-18 |
| CA1248090A (en) | 1989-01-03 |
| ATE32730T1 (de) | 1988-03-15 |
| JPH01294700A (ja) | 1989-11-28 |
| IE842539L (en) | 1985-04-06 |
| IL73183A0 (en) | 1985-01-31 |
| IE55709B1 (en) | 1990-12-19 |
| ZA847797B (en) | 1986-05-28 |
| US4732864A (en) | 1988-03-22 |
| DK162105C (da) | 1992-02-17 |
| NO166267C (no) | 1991-06-26 |
| JPS60166625A (ja) | 1985-08-29 |
| NO166267B (no) | 1991-03-18 |
| NO844017L (no) | 1985-04-09 |
| FI843930L (fi) | 1985-04-07 |
| DK480284D0 (da) | 1984-10-05 |
| NZ209788A (en) | 1988-10-28 |
| ES536547A0 (es) | 1986-02-16 |
| EP0137457A2 (en) | 1985-04-17 |
| DK480284A (da) | 1985-04-07 |
| GR80560B (en) | 1985-02-06 |
| KR850002961A (ko) | 1985-05-28 |
| DE3469536D1 (en) | 1988-04-07 |
| FI843930A0 (fi) | 1984-10-05 |
| EP0137457A3 (en) | 1985-08-14 |
| EP0137457B1 (en) | 1988-03-02 |
| AU578428B2 (en) | 1988-10-27 |
| IL73183A (en) | 1991-09-16 |
| KR860001151B1 (ko) | 1986-08-18 |
| JPH0470320B2 (fi) | 1992-11-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI81263C (fi) | Foerfarande foer maerkning av en maolsoekande biologiskt aktiv molekyl och metalltionein. | |
| KR100235137B1 (ko) | 모노아민, 다아민, 티올-함유 금속 킬레이트제 | |
| JP3036602B2 (ja) | 撮像用テクネチウム−９９ｍ標識ペプチド | |
| Fritzberg et al. | Specific and stable labeling of antibodies with technetium-99m with a diamide dithiolate chelating agent. | |
| JP3918157B2 (ja) | ソマトスタチン結合性ペプチド−金属キレートコンジュゲート | |
| KR100235136B1 (ko) | 영상화용 테크네튬-99m 표지화 펩티드 | |
| WO1995009013A1 (en) | Metal-binding targeted polypeptide constructs | |
| JPH02184698A (ja) | ペプチド誘導体 | |
| US6312661B1 (en) | Method for the detection and localization of ductal exocrine pancreas tumours | |
| US5310536A (en) | Ligands for improving metal chelate formation kinetics | |
| EP0196669B1 (en) | Improved method of conjugating metallothionein to biologically active molecules | |
| KR100385340B1 (ko) | 금속킬레이트형성펩티드및그의용도 | |
| JP2001523257A (ja) | カルシトニン受容体結合ペプチド | |
| JP5207969B2 (ja) | 巨大環状のキレート化剤によるビオチンジアミノ誘導体およびその複合体 | |
| WO1993009816A1 (en) | Method for diagnosing and treating cancer | |
| EP0700930A1 (en) | Tumor affinity peptide, and radioactive diagnostic agent and radioactive therapeutic agent containing the peptide | |
| EP0493526A1 (en) | Stable therapeutic radionuclide compositions and methods for preparation thereof | |
| WO1997031657A2 (en) | Use of labelled cck-b receptor ligands for the detection and localization of malignant human tumors | |
| Li | Synthesis and characterization of rhodium-105-labeled thiamacrocycles for use to formulate peptide receptor agents | |
| MXPA99009549A (en) | Calcitonin receptor-binding peptides | |
| WO2002098447A1 (en) | Cytotoxic or radioactive conjugates able to bind to oxytocin receptors | |
| CZ279099A3 (cs) | Způsob detekce a lokalizaci lidských maligních tumorů |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: THE DU PONT MERCK PHARMACEUTICAL COMPANY |