KR100235136B1

KR100235136B1 - 영상화용 테크네튬-99m 표지화 펩티드

Info

Publication number: KR100235136B1
Application number: KR1019960706903A
Authority: KR
Inventors: 티. 딘 리차드; 부트람 스코트; 맥브리드 윌리암; 리스터-제임스 존; 알. 시비텔로 에드가
Original assignee: 패트리샤 에이. 멕다니엘스; 다이아타이드, 인코포레이티드
Priority date: 1994-06-03
Filing date: 1995-06-01
Publication date: 1999-12-15
Also published as: EP0762901A1; DE69534943D1; JPH10501241A; CA2191950A1; AU2778395A; CN1090973C; EP0762901B9; KR970703171A; CN1154072A; US6074627A; WO1995033498A1; CA2191950C; ES2263153T3; DK0762901T3; AU697048B2; US5997844A; DE69534943T2; ATE323511T1; PT762901E; ZA954547B

Abstract

본 발명은 방사성표지된 펩티드 및 상기 펩티드의 제조방법에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은, 펩티드, 상기 펩티드를 제조하기 위한 키드, 상기 펩티드의 아미노산 측쇄를 통하여 특이적 결합 펩티드로 공유결합되는 방사성-결합 부위를 통하여 테크네튬-99m(Tc-99m)으로 표지된 표유 동물 체내의 자리를 영상화시키기 위해 상기 펩티드를 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

[발명의 명칭]

영상화용 테크네튬-99m 표지화 펩티드

[기술분야]

본 발명은 방사선 진단제 및 펩티드, 및 표지화된 방사선 진단제를 제조하기 위한 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 펩티드,이러한 펩티드를 제조하기 위한 방법 및 킷, 및 이러한 펩티드를 사용하여 테크네튬-99m(Tc-99m)과 중성 착물을 형성하는 방사성 표지 결합 부분을 통해 Tc-99m으로 표지화된 표유동물 체내 부위를 영상화시키는 방법에 관한 것이다.

[배경기술]

핵의학의 분야에서, 소량의 내부투여되는 방사능 표지화 트레이서 화합물(이른바 방사선 추적자 또는 방사선 약제)의 분표를 검출함으로써, 특정 병리학적 질환이 정위되거나, 그 정도가 평가된다.

방사선 영상화에서, 방사성 표지는 감마-방사선 방출 방사선 핵종이며, 방사선 추적자는 감미-방사선 검출 카메라를 사용하여 위치한다(이러한 방법은 종종 감마 신티그램 촬영으로서 언급된다). 영상화된 부위는 방사선 추적자가 병리학적 부위에 정위되도록 선택되거나(포지티브 콘트라스트), 대안적으로, 방사선 추적자가 이러한 병리학적 부위에 정위되지 않도록 특이적으로 선택되기 때문에(네가티브 콘트라스트), 검출할 수 있다.

사람에 있어서 최적 방사선 영상화를 위해 많은 인자가 고려되어야 한다. 검출의 효율을 최대화하기 위해, 100 내지 200 keV에서 감마 에너지를 방출하는 방사선 핵종이 바람직하다. 환자에게 흡수되는 방사선량을 최소화시키기 위해서는, 방사선 핵종의 물리적 반감기가 영상화 과정이 허용될 정도로 짧아야 한다. 언제든지 시험을 수행하기 위해, 임상적 부위에서 언제나 이용할 수 있는 방사선 핵종의 공급원이 있는 것이 유리하다.

⁶⁷Ga,^99mTc(Tc-99m),¹¹¹In,¹²³I,¹²⁵I 및¹⁶⁹Yb를 포함하는 다양한 방사선 핵종이 방사선 영상화를 위해 유용한 것으로 공지되어 있다. Tc-99m이 바람직한 방사선 핵종인데, 그 이유는 이것이 약 140 keV에서 감마 방사선을 방출시키고, 6시간의 물리적 반감기를 갖고, 몰리브덴-99/테크테늄-99m 발생기를 사용하여 현장에서 용이하게 이용할 수 있기 때문이다.

방사능 표지화 펩티드를 사용하는 영상화 방법의 감도는, 방사는 펩티드의 특이적 결합이 관심있는 영역 상에 방사능 신호를 집중시키기 때문에, 당분야에 공지된 다른 방사성 약제 보다 훨씬 더 높다. 관심있는 표적에 특이적으로 결합하는 작은 합성 펩티드가 방사선 추적자에 대한 주성분으로서 사용되는 것이 유리할 수 있다. 그 이유는, (1) 이들이 화학적으로 합성될 수 있고(박테리아 또는 포유동물 세포와 같은 생물계에서의 이들의 생성, 또는 단백질의 단편과 같은 생물학적으로 유도되는 성분으로부터의 이들의 단리를 필요로 하는 것과 상반된); (2) 이들이 작아서, 비-표적 결합 방사선 추적자가 체내로부터 신속하게 제거되어, 백그라운드(비-표적) 방사능을 감소시키고 표적의 우수한 규정을 허용하며; (3) 작은 펩티드가 특정 결합 부위에 대한 이들의 친화성을 최적화시키도록 화학적으로 쉽게 조작 될 수 있기 때문이다.

쉽게 합성된 작은 표지화 펩티드 분자는 일상적으로 사용되는 방사성 약제로서 바람직하다. 환자에게 직접 주입되고 병리학적 부위를 이 부위에서의 정위에 의해 영상화시킬 작은 합성 표지화 펩티드가 명백히 요구되고 있다. Tc-99m표지화된 작은 합성 펩티드는 영상화를 위한 방사선 핵종으로서의 Tc-99m의 성질 및 방사선 추적자 분자로서의 특이적으로 결합하는 작은 합성 펩티드의 이용성으로 인해, 감마 신티그램 촬영에 대한 방사선 추적자로서의 분명한 장점을 제공한다.

방사성 표지화 펩티드는 당분야에 보고되어 있다.

에이지(Age)등의 미국 특허 제4,832,940호에는 정위된 T-림프구를 영상화시키기 위한 방사성 표지화 펩티드가 교시되어 있다.

올렉사(Olexa) 등의 1982년 유럽 특허 출원 제823017009호에는 교차결합된 피브린으로부터 단리된 단편 E₁, 교차결합된 피브린으로부터 단리된 단편 E₂, 및 단편 E₁과 E₂사이의 중간 아미노산 서열을 갖는 펩티드로부터 선택된 약제학적으로 허용되는 방사성 표지화 펩티드가 기술되어 있다.

랜비(Ranby) 등의 1988년 출원 PCT/US88/02276호에는 방사성 표지화 화합물을 피브린에 공유결합시키는 것을 포함하여, 동물 체내의 피브린 침착을 검출하기 위한 방법이 기술되어 있다.

해들리(Hadley) 등의 1988년 출원 PCT/US88/03318호에는, (a) 피브린 결합도메인과는 상이한 혈전융해성 단백질의 일부에 선택적으로 결합되는 표지로 표지화된 약화된 혈전융해성 단백질을 환자에게 투여하는 단계, 및 (b) 환자 체내에서의 표지화 혈전융해성 담백질의 분포 패턴을 검출하는 단계를 포함하여, 생체내에서 피브린-혈소판 혈병(clot)을 검출하기 위한 방법이 기술되어 있다.

리이즈(Lees)등의 1989년 출원 PCT/US89/01854호에는 동맥 영상화를 위한 방사성 표지화 펩티드가 기술되어 있다.

소벨(Sobel)의 1989년 출원 PCT/US89/02656호에는 방사성 표지화된 효소적으로 비활성인 조직 플라스미노겐 활성제를 사용하여 동물 체내의 하나 이상의 트롬빈의 위치를 알아내기 위한 방법이 기술되어 있다.

스터틀(Stuttle)의 1990년 출원 PCT/GB90/00933호에는, 생체내에서 RGD결합부위에 결합할 수 있는 서열 아르기닌-글리신-아스파르트산(RGD)를 포함하는 3 내지 10개의 아미노산을 함유하는 방사능 표지화 펩티드가 기술되어 있다.

마라가노(Maraganore)등의 1997년 출원 PCT/US90/04642호에는 (a) 억제제 부분; (b) 링커 부분; 및 (c) 음이온 결합 부위 부분을 포함하는 방사성 표지화 혈전 억제제가 기술되어 있다.

로드웰(Rodwell)등의 1997년 출원 PCT/US91/03116호에는 ＂분자 인식 단위＂와 ＂이펙터 도메인＂의 콘쥬게이트가 기술되어 있다.

투비스(Tubis)등의 문헌[1968, Int. J. Appl. Rad. Isot. 19:835-840]에는 펩티드를 테크네튬-99m으로 표지화시키는 방법이 기술되어 있다.

선더하겐(Sundvehagen)의 문헌[1983, Int. J. Appl. Rad. Isot. 34:1003]에는 폴리펩티드를 테크네튬-99m으로 표지화시키는 방법이 기술되어 있다.

폴리펩티드를 방사성 표지화시키기 위한 킬레이트화제의 사용, 및 팹티드 및 폴리펩티드를 테크네튬-99m으로 표지화시키는 방법은 당분야에 공지되어 있으며, 본원에 참고문헌으로 인용된 공동계류중인 미국 특허 출원 제07/653,012호 및 제07/807,062호에 기술되어 있다.

방사선 영상화를 위해 최적일 지라도, Tc-99m의 화학은 다른 원소의 화학으로서 전체적으로 연구된 것은 아니며, 이러한 이유로, 테크네튬에 의한 방사성 표지화 방법은 많지 않다. Tc-99m은 일반적으로 몰리브덴-99/테크네튬-99m 발생기로부터 Tc-99m 퍼테크네테이트(Tc0₄ ^-: +7 산화상태의 테크네튬)으로서 얻어지는 것이 통상적이다. 그러나, 퍼테크네테이트는 다른 화합물과는 장 결합되지 않는다. 따라서, 펩티드를 방사성 표지화시키기 위해, Tc-99m 퍼테크네케이트는 또다른 형태로 전환되어야 한다. 테크네튬은 수용액 중에서 안정한 이온을 형성하지 않기 때문에, 이것은 분해, 및 불용성 테크네튬 이산화물로, 또는 역으로 퍼테크네테이트로의 Tc-99m의 전환을 방지하기 위한 충분한 운동성 및 열역학적 안정성을 갖는 배위 착물의 형태로 이러한 용액 중에 보유되어야 한다.

Tc-99m의 이러한 배우 착물(+1 내지 +6의 산화상태)은 공지되어 있다. 그러나, 이러한 착물의 대부분은 배위 착물의 기하학적 분자 형태로 인해 방사성 표지화를 위해 적합하지는 않다. 방사성 표지화를 위해, 배위 착물을 테크네튬 이온을 둘러싸는 도우너 기의 전부를 단일 킬레이팅 리간드에 의해 제공하는 킬레이트로서 형성시키는 것이 특히 유리하다. 이에 의해, 킬레이트화된 Tc-99m이 킬레이터와 펩티드 사이의 단일 링커를 통해 펩티드에 공유결합되게 된다.

상기 리간드는 종종, 킬레이트 부분과 결합 부분을 갖는 이작용성 킬레이트 화제를 의미한다. 이러한 화합물은 당분야에 공지되어 있다.

바이른(Byrne)등의 미국 특허 제4,434,151호에는, 영상화시키려는 기관 또는 조직에 정위될 수 있는 말단 아미노 함유 화합물에 방사선 핵종을 커플링시킬 수 있는 호모시스테인 티올아세톤 유도 이작용성 킬레이트화제가 기술되어 있다.

프리츠버그(Fritzberg)등의 미국 특허 제4,444,690호에는, 2,3-비스(메르캅도아세트아미도)프로파노에이트를 기재로 하는 일련의 테크네튬-킬레이트화제가 기술되어 있다.

바이른 등의 미국 특허 제4,571,430호에는, 영상화시키려는 기관 또는 조직에 정위될 수 있는 말단 아미노 함유 화합물에 방사선 핵종을 커플링시킬 수 있는 방사선 핵종을 킬레이트화시키기 위한 신규한 호모시스테인 티올아세톤 이작용성 킬레이트화제가 기술되어 있다.

바이른 등의 미국 특허 제4,575,556호에는, 영상화시키려는 기관 또는 조직에 정위될 수 있는 말단 아미노 함유 화합물에 방사선 핵종을 커플링시킬 수 있는, 방사선 핵종을 킬레이트화시키기 위한 신규한 호모시스테인 티올아세톤 이작용성킬레이트화제가 기술되어 있다.

데이비슨(Davison)등의 미국 특허 제4,673,562호에는, 주로 신장 기능 모니터링제로서 사용되는 비스아미도-비스티오-리간드의 테크네튬 킬레이트 착물 및 이듸 염이 기술되어 있다.

니콜로티(Nicolotti)등의 미국 특허 제4,861,869호에는 항체와 같은 생물학적 분자와의 콘쥬게이트를 형성하는 데에 유용한 이작용성 커플링제가 기술되어 있다.

프리츠버그 등의 미국 특허 제4,965,392호에는 단백질을 표지화시키기 위한 다양한 S-보호된 메르캅토아세틸글리실글리신 기재 킬레이터가 기술되어 있다.

프리츠버그 등의 유럽 특허 제86100360.6호에는 테크네튬 표지화 영상화제를 제조하기 위해 유용한 디티올, 디아미노, 또는 디아미노카르복실산 또는 아민 착물이 기술되어 있다.

디인(Dean)등의 1989년 출원 PCT/US89/02634호에는 단백질 및 펩티드를 방사성 표지화시키기 위한 이작용성 커플링제가 기술되어 있다.

플라나간(Flanagan)등의 유럽 특허 출원 제90306428.5호에는 한 세트의 유기 킬레이트화 분자를 통한 합성 펩티드 단편의 Tc-99m 표지화 방법이 기술되어 있다.

알버트(Albert)등의 유럽 특허 출원 WO91/01144호에는 성장 인자, 호르몬, 인터페론 및 시토카인에 관련되고, 방사선 핵종 킬레이팅기에 공유결합된 특징 인식 펩티드로 이루어진 방사성 표지화된 펩티드를 사용하는 방사선 영상화 방법이 기술되어 있다.

디인의 공동계류중인 미국 특허 출원 제07/653,012호에는 생체내에서 방사선 영상화를 위해 특정 결합 펩티드에 공유결합된 Tc-99m 킬레이팅기를 포함하는 펩티드를 제조하기 위한 시약 및 방법이 기술되어 있으며, 이 출원은 본원에 참고문헌으로 인용되어 있다.

바이두(Baidoo) 및 레버(Lever)의 문헌[1990, Bioconjugate Chem. 1:132-137]에는 양이온 테크네튬 착물을 제공하는 비스아민 비스티올기를 사용하여 생분자를 표지화시키는 방법이 기술되어 있다.

시스테인 또는 메르캅토아세트산과 같은 티올 함유 부분을 간단히 첨가함으로써 펩티드를 방사성 표지화시킬 수 있다. 이러한 방법은 당분야에 공지되어 있다.

쇼샤트(Schchat)등의 미국 특허 제5,061,641호에는, 하나 이상의 ＂펜던트＂ 술피드릴기로 이루어진 단백질의 직접적 방사성 표지화 방법이 기술되어 있다.

디인 등의 공동계류중인 미국 특허 제07/807,062호는, 유리 티올을 함유하는 결합된 기를 통해 펩티드를 방사성 표지화시키는 방법이 기술되어 있으며, 이특허는 본원에 참고문헌으로 인용되어 있다.

괴데만즈(Goedemans)등의 출원 WO89/07456에는 고리형 티올 화합물, 특히 2-이미노티올란 및 유도체를 사용하여 단백질을 방사성 표지화시키는 방법이 기술되어 있다.

토른백(Thornback)등의 EPC출원 제90402206.8호에는 티올 함유 화합물, 특히 2-이미노티올란을 사용하는 방사성 표지화 단백질 또는 펩티드의 제조 및 사용 방법이 기술되어 있다.

스터틀(Stuttle)의 PCT 출원 WO90/15818호에는 RGD 함유 올리고누클레오티드의 Tc-99m표지화 방법이 기술되어 있다.

버언즈(Burns)등의 1985년 유럽 특허 출원 제85104959.3호에는 작은 중성 Tc-99m 뇌 영상화제를 제조하기 위한 비스아민 비스티올 화합물이 기술되어 있다.

쿵(Kung)등의 1986년 유럽 특허 출원 제86105920.2호에는 작은 중성 Tc-99m영상화제를 제조하기 위한 비스아민 비스티올 화합물이 기술되어 있다.

버어그스타인(Bergstein)등의 1988년 유럽 특허 출원 제88102252.9호에는 작은 중성 Tc-99m 뇌 영상화제를 제조하기 위한 비스아민 비스티올 화합물이 기술되어 있다.

브라이슨(Bryson)등의 1988년 문헌[Inorg. Chem. 27 : 2154-2161]에는, 과량의 리간드에 대해 불안정한 테크네튬-99의 중성 착물이 기술되어 있다.

미스라(Misra) 등의 1989년 문헌[Tet. Lett. 30 : 1885-188]에는 방사성 표지를 위한 비스아민 비스티올 화합물이 기술되어 있다.

브라이슨의 1990년 문헌[Inorg. Chem. 29 : 2948-2951]에는 중성 Tc-99m 착물을 형성시킬 수 있는, 2개의 아미드기, 하나의 티올기 및 하나의 치환된 피리딘기를 함유하는 킬레이터가 기술되어 있다.

테일러(Taylor)등의 1990년 문헌[J. Nucl Med. 31 : 885(Abst.)]에는, 뇌 영상화를 위한 중성 Tc-99m 착물이 기술되어 있다.

펩티드를 방사성 표지화시키기 위한 킬레이트화제의 사용, 및 펩티드를 Tc-99m으로 표지화시키기 위한 방법은 당분야에 공지되어 있으며, 공동계류중인 미국 특허 출원 제07/653,012호, 제07/807,062호, 제07/871,282호, 제07/886,752호, 제07/892,981호, 제07/955,466호, 제08/019,864호, 제08/073,577호, 제08/210,822호, 제08/236,402호 및 제08/241,625호에 기술되어 있고, 트롬빈을 영상화시키기 위한 신티그램 촬영 영상화제를 사용하기 위한 방사성 표지화 펩티드는 당분야에 공지되어 있으며, 미국 특허 출원 제07/886,752호, 제07/893,981호 및 제08/044,825호 및 국제 특허 출원 PCT/US92/00757, PCT/US92/10716, PCT/US93/02320, PCT/US93/03687, PCT/US93/04794, PCT/US93/05372, PCT/US93/06029, PCT/US93/09387, PCT/US93/01894, PCT/US94/03878 및 PCT/US94/05895호에 기술되어 있으며, 이들 특허 출원은 각각 본원에 참고 문헌으로 인용되어 있다.

본 발명은 방사능 표지화 펩티드인 신티그램 촬영 영상화제를 제공한다. 본 발명의 방사성 표지화 펩티드는 생체내에서 표적에 특이적으로 결합하고, 방사성 동위원소에 결합하는 방사성 표지 결함 부분에 공유결합되는 펩티드로 이루어진다. 방사성 표지 결합 부분이 펩티드를 포함하는 아미노산 잔기의 곁사슬에 공유결합되는 것이 본 발명의 특징 장점이다.

공유결합의 이러한 방식이 많은 이유로 유리하다. 첫 번째로, 팹티드의 아미노산 성분의 곁사슬에 대한 공유결합은 특이적 결합 팹티드의 특이적 결합 특성을 갖는 공유결합된 방사성 표지 결합 부부분의 간섭을 방지한다. 두 번째로, 상기 배열로, 정의에 의해, 유리 아미노 또는 카르복시 말단으로 이루어지지 않은 고리형 펩티드가 방사성 표지 결합 부분과 함께 사용되어 본원에 기술된 바와 같은 신티그램 촬영 여상화제로서 유용하게 된다. 세 번째로, 성분 아미노산의 곁사슬에 대한 공유결합으로, 본 발명의 각각의 신티그램 촬영 영상화제는 항원성 등의 감소 및 최적 증가 효율을 달성시키도록 더욱 융통성 있게 디자인될 수 있게 된다. 또한, 아미노산 곁사슬에 대한 컨쥬게이션으로, 또한 방사성 표지 결합 부분이 합성 동안 아미노산 컨쥬게이트로서 합성 동안, 또는 완전한 펩티드의 합성이 달성된 후에 펩티드에 첨가되게 된다. 마지막으로, 고리형 펩티드는 엑소프로테아제 분해에 저항성이어서, 생체내에서의 상기 펩티드의 개선된 안정성이 본 발명의 신티그램 촬영 영상화제에 제공되는 것으로 공지되어 있다.

본 발명의 제1양태에서, 포유동물 체내의 부위를 영상화시킬 수 있는 방사성 표지화 펩티드가 제공된다. 펩티드는, 아미노산 서열을 갖는 특이적 결합 펩티드 및 이 펩티드에 공유결합되어 있는 방사성 표지 결합 부분으로 이루어진다. 또한, 방사성 표지 결합 부분은 펩티드를 포함하는 아미노산의 곁사슬에 공유결합된다. 바람직한 구체예에서, 방사성 표지 결합 부분은 아민 또는 티올을 포함하는 곁사슬을 갖는 아미노산의 곁사슬에 공유결합되며, 아미노산으로는 리신 또는 헤모시스테인이 가장 바람직하다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 방사성 표지는 테크네튬-99m이다.

본 발명의 한 양태는 하기 화학식(Ⅰ)을 가지는 방사성 표지 결합 부분이 펩티드의 아미노산의 아미노산 곁사슬을 통해 펩티드에 공유결합되어 있는 특이적 결합 펩티드를 포함하는, 포유동물 체내의 부위를 영상화하기 위한 신티그램 촬영 영상화제를 제조하기 위한 시약을 제공한다 :

C(pgp)^S-(aa)-C(pgp)^S(I)

상기식에서, C(pgp)^S는 보호된 시스테인이고, (aa)는 티올기를 함유하지 않는 일차 α- 또는 β- 아미노산이다.

바람직한 구체예에서, 상기 아미노산은 글리신이다.

그외의 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식(Ⅱ)를 갖는 방사성 표지 결합 부분이 펩티드의 아미노산의 아미노산 곁사슬을 통해 펩티드에 공유결합되어 있는 특이적 결합 펩티드를 포함하는, 포유동물 체내의 부위를 영상화하기 위한 신티그램촬영 영상화제를 제조하기 위한 시양을 제공한다 :

A-CZ(B)-{(C(R¹R²)}_n-X (Ⅱ)

상기식에서,

A는 H, HOOC, H₂NOC, (아미노산 또는 펩티드)-NHOC, (아미노산 또는 펩티드)-OOC 또는 R⁴이고;

B는 H, SH 또는 -NHR³, -N(R³), -(아미노산 또는 펩티드) 또는 R⁴이고;

Z는 H 또는 R⁴이고;

X는 SH 또는 -NHR³, -N(R³)-(아미노산 또는 펩티드) 또는 R⁴이고; R¹, R², R³및 R⁴는 독립적으로 H 또는 직쇄, 측쇄 또는 고리형 저급 알킬이고; n은 0, 1 또는 2이고;

(펩티드)는 2 내지 약 10개의 아미노산으로 이루어진 펩티드이며,

(1) B가 -NHR³또는 -N(R³)-(아미노산 또는 펩티드)인 경우, X는 SH이고, n은 1 또는 2이고; (2) X가 -NHR³또는 -N(R³)-(아미노산 또는 펩티드)인 경우, B는 SH이고, n은 1 또는 2이고; (3) B가 H 또는 R⁴인 경우, A는 HOOC, H₂NOC, (아미노산 또는 펩티드)-NHOC, (아미노산 또는 펩티드)-OOC 이고, X는 SH이고, n은 1 또는 2이고; (4) A가 H 또는 R⁴이고, B가 SH인 경우, X는 -NHR³또는 -N(R³)-(아미노산 또는 펩티드)이고, X가 SH인 경우, B는 -NHR³또는 -N(R³)-(아미노산 또는 펩티드)이고; (5) X가 H 또는 R⁴인 경우, A는 HOOC, H₂NOC (아미노산 또는 펩티드)-NHOC 또는 (아미노산 또는 펩티드)-OOC이고, B는 SH이고; (6) Z가 메틸인 경우, X는 메틸이고, A는 HOOC, H²NOC, (아미노산 또는 펩티드)-NHOC 또는 (아미노산 또는 펩티드)-OOC이고, B는 SH이고, n은 0이고; (7) B가 SH이고, X가 SH인 경우, n은 0이 아니고;

티올 부위는 환원된 형태이고, (아미노산)은 티올기를 함유하지 않는 일차 α- 또는 β-아미노산이다.

본 발명의 상기 양태의 특정 구체예에서, 방사성 표지 결합 부분은 하기 화학식을 갖는다 :

IIa. -(아미노산)¹-(아미노산)²-{A-CZ(B)-{C(R¹R²)}_n-X},

IIb. -{A-CZ(B)-{C(R¹R²)}_n-X}-(아미노산)¹-(아미노산)²,

IIc. -(일차 α, ω- 또는 β,ω-다이미노산)-(아니모산)¹-{A-CZ(B)-{C(R¹R²)}_n-X} 또는

IId. {A-CZ(B)-{C(R¹R²)}_n-X}-(아미노산)¹-(일차 α,β-또는 β,γ-디아미노산)

상기식에서,

(아미노산)¹및 (아미노산)²는 각각 독립적으로 티올기를 함유하지 않는 천연, 개질, 치환 또는 변형된 α- 또는 β-아미노산이고;

B는 H, SH 또는 -NHR³, -N(R³)-(아미노산 또는 펩티드) 또는 R⁴이고;

Z는 H 또는 R⁴이고;

X는 SH 또는 -NHR³, -N(R³)-(아미노산 또는 펩티드) 또는 R⁴이고;

R¹, R², R³및 R⁴는 독립적으로 H 또는 직쇄, 측쇄 또는 고리형 저급 알킬이고;

n은 0, 1 또는 2이고;

(펩티드)는 2 내지 약 10개의 아미노산으로 이루어진 펩티드이며;

(1) B가 -NHR³또는 -N(R³)-(아미노산 또는 펩티드)인 경우, X는 SH이고, n은 1 또는 2이고; (2) X가 -NHR³또는 -N(R³)-(아미노산 또는 펩티드)인 경우, B는 SH이고, n은 1 또는 2이고; (3) B가 H 또는 R⁴인 경우, A는 HOOC, H₂NOC, (아미노산 또는 펩티드)-NHOC 또는 (아미노산 또는 펩티드)-OOC이고, X는 SH이고, n은 1 또는 2이고; (4) A가 H 또는 R⁴이고, B가 SH인 경우, X는 -NHR³또는 -N(R³)-(아미노산 또는 펩티드)이고, X가 SH인 경우, B는 -NHR³또는 -N(R³)-(아미노산 또는 펩티드)이고; (5) X가 H 또는 R⁴인 경우, A는 HOOC, H₂NOC, (아미노산 또는 펩티드)-NHOC 또는 (아미노산 또는 펩티드)-OOC이고, B는 SH이고; (6) Z가 메틸일 경우, X는 메틸이고, A는 HOOC, H₂NOC, (아미노산 또는 펩티드)-NHOC 또는 (아미노산 또는 펩티드)-OOC이고, B는 SH이고, n은 0이고; (7) B가 SH이고, X가 SH인 경우, n은 0이 아니고; 티올기는 환원된 형태이다.

또 다른 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식의 방사성 표지 결합 부분이 펩티드의 아미노산의 아미노산 측쇄를 통해 펩티드에 공유결합되어 있는 특이적 결합 펩티드를 포함하는, 포유동물 체내의 부위를 영상화하기 위한 방사성 표지화 펩티드를 제공한다 :

(본 발명의 경우, 상기 구조를 갖는 방사성 표지 결합 부분은 피콜린산(Pic) 기재 부분으로서 언급될 것이다);

(본 발명의 경우, 상기 구조를 갖는 방사성 표지 결합 부분은 피콜릴아민 (Pica)기재 부분으로서 언급될 것이다)

상기식에서, X는 H 또는 보호기이고; (아미노산)은 임의의 아미노산이고; 방사성 표지 결합 부분은 펩티드에 공유결합되고; 방사성 표지와 방사성 표지 결합 부분의 착물은 전기적으로 중성이다.

바람직한 구체예에서, 아미노산은 글리신이고, X는 아세트아미도메틸 보호기이다. 추가의 바람직한 구체예에서, 펩티드는 아미노산, 가장 바람직하게는 글리신을 통해 방사성 표지 결합 부분에 공유결합되고, 방사성 표지는 테크네튬-99m이다.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 펩티드의 아미노산 곁사슬을 통해 펩티드에 공유결합된 특이적 결합 펩티드 및 비스아미노 비스티올 방사성 표지 결합 부분을 포함하는, 포유동물 체내의 부위를 영상화시키기 위한 방사성 표지화 펩티드가 제공된다. 본 발명의 상기 구체예에서 비스아미노 비스티올 방사성 표지 결합 부분은 하기 화학식으로 구성된 군으로부터 선택되는 화학식을 갖는다;

(상기식에서, 각각의 R는 독립적으로 H, CH₃는 C₂H₅일 수 있고; 각각의(pgp)⁵는 독립적으로 티올 보호기 또는 H일 수 있고; m, n 및 p는 독립적으로 2 또는 3이고; A는 선형 또는 고리형 저급 알킬, 아릴, 헤테로시클릴 또는 이들의 결합물 또는 치환된 유도체이고; X는 펩티드이다);

(상기식에서, 각각의 R는 독립적으로 H, CH₃또는 C₂H₅이고; m, n 및 p는 독립적으로 2 또는 3이고; A는 선형 또는 고리형 저급 알킬, 아릴, 헤테로시클릴 또는 이들의 결합물 또는 치환된 유도체이고; V는 H 또는 CO-펩티드이고 : R'은 H 또는 펩티드이며 : 단, V가 H인 경우, R'은 펩티드이고, R'이 H인 경우, V는 펩티드이다)

본 발명의 경우, 이들 구조를 갖는 방사성 표지 결합 부분은 ＂BAT＂ 부분으로서 언급될 것이다. 바람직한 구체예에서, 펩티드는 아미노산, 가장 바람직하게는 글리신을 통해 방사성 표지 결합 부분에 공유결합되고, 방사성 표지는 테크네튬-99m이다.

본 발명의 상기 언급된 양태의 바람직한 구체예에서, 특이적 결합 화합물은 3 내지 100개의 아미노산으로 이루어진 펩티드이다. 방사성 표지의 가장 바람직한 구체예는 테크네튬-99m이다.

본 발명에 의해 제공되는 특이적 결합 펩티드는 하기 서열을 갖는 펩티드를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다 :

특이적 결합 화합물 또는 방사성 표지 결합 부분이 다가 결합 부분에 공유결합되어 있는 본 발명의 시약이 제조될 수 있다. 본 발명의 다가 결합 부분은 특이적 결합 화합물 또는 방사성 표지 결합 부분에 공유결합될 수 있는 2개 이상의 동일한 링커 작용기로 이루어진다. 바람직한 링커 작용기는 일차 또는 이차 아민, 히드록시기, 카르복실산 기 또는 티올 반응성 기이다. 바람직한 구체예에서, 다가결합 부분은 비스-숙신이미딜메틸에테르(BSME), 4-(2,2-디메틸아세틸)벤조산(DMAB), 트리스(숙신이미딜에틸)아민(TSEA), N-[2-N',N'-비스(2-숙신이미도에틸)아미노에틸)]-N⁶,N⁹-비스(2-메틸-2-메프캅토프로필)-6,9-디아자노난아미드(BAT-BS),비스-(아세트아미도에틸)에테르, 트리스(아세트아미도에틸)아민, 비스-(아세트아미도에틸)에테르, 비스-(아세트아미도메틸)에테르, α,ε-비스아세틸리신, 리신 및 1,8-비스-아세트아미도-3,6-디옥사옥탄으로 이루어진다.

또한, 본 발명은 본 발명의 펩티드와 Tc-99m의 착물, 및 본 발명의 펩티드를 Tc-99m으로 방사성 표지화시키는 방법을 포함한다. 본 발명에 의해 제공되는 방사성 표지화 착물은 본 발명의 펩티드를 환원제의 존재하에 Tc-99m과 반응시킴으로써 제조된다. 바람직한 환원제는 디티오나이트 이온, 제1주석 이온 및 제1철 이온을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 또한, 본 발명의 착물은 본원에서 제공되는 바와 같은 예비환원된 Tc-99m 착물과의 리간드 교환에 의해 본 발명의 펩티드를 Tc-99m으로 표지화시킴으로써 제조된다.

또한, 본 발명은 Tc-99m으로 표지화된 본 발명의 펩티드를 제조하기 위한 킷을 제공한다. 본 발명의 펩티드를 Tc-99m으로 표지화시키기 위한 킷은 예정된 양의 본 발명의 펩티드 및 펩티드를 Tc-99m로 표지화시키에 충분한 양의 환원제를 함유하는 밀봉된 바이알로 이루어진다.

본 발명은 생체외 화학적 합성에 의해 본 발명의 펩티드를 제조하는 방법을 제공한다. 바람직한 구체예에서, 펩티드는 고체상 펩티드 합성에 의해 합성된다.

본 발명은 생체내 감마 신티그램 촬영 영상을 얻음으로써 포유동물 체내의 부위를 영상화시키기 위해 Tc-99m 표지화 펩티드를 사용하는 방법을 제공한다. 이들 방법은 진단적 유효량의 본 발명의 Tc-99m 방사성 표지화 펩티드를 투여하는 단계 및 포유동물 체내 부위에 정위된 Tc-99m에 의해 방출되는 감마 방사선을 검출하는 단계를 포함한다.

본 발명의 바람직한 특정 구체예는 바람직한 특정 구체예의 하기의 상세한 설명 및 특허정구의 범위로부터 명백해질 것이다.

[도면의 간단한 설명]

제1도는 종양에 걸린 랫트에서의^99mTc-p587의 영상을 도시한 것이다.

[발명의 상세한 설명]

본 발명은 방사성 동위원소에 결합된 방사성 표지 결합 부분에 아미노산 곁사슬을 통해 공유결합되는 아미노산 성열을 포함하는, 포유동물 체내의 표적 부위를 영상화시키기 위한 Tc-99m 표지화 펩티드를 제공한다.

Tc-99m에 의한 표지화는, 이 동위원소의 핵 및 방사능 성질이 이 동위원소를 이상적인 신티그램 촬영 영상화제가 되도록 하기 때문에, 본 발명의 장점이다. 상기 동위원소는 140 keV의 단일 광자 에너지 및 약 6시간의 방사능 반감기를 가지며,^99mMo-^99mTc발생기로부터 용이하게 입수할 수 있다. 종래 기술에 공지된 다른 방사선 핵종은 유효 반감기가 훨씬 더 길거나(예를 들어, 반감기가 67.4시간인¹¹¹In), 독성이다(예를 들어,¹²⁵I).

본 발명에 의해 제공되는, 티올 보호기[(pgp)⁵]에 공유결합되는 티올을 함유하는 상기 부분에 공유결합되는 방사성 표지 결합 부분 및 펩티드에서, 티올 보호기는 동일하거나 상이할 수 있으며, 하기 기재된 기일 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다 :

-CH₂-아릴(아릴은 페닐, 또는 알킬 또는 알킬옥시 치환 페닐이다);

-CH-(아릴)₂(아릴은 페닐, 또는 알킬 또는 알킬옥시 치환된 페닐이다);

-C-(아릴)₃(아릴은 페닐, 또는 알킬 또는 알킬옥시 치환된 페닐이다;

-CH₂-(4-메톡시페닐);

-CH-(4-피리딜)(페닐)₂;

-C(CH₃);

-9-페닐플루오레닐;

-CH₂NHCOR (R은 치환되거나 치환되지 않은 알킬 또는 아릴이다);

-CH₂-NHCOOR (R은 치환되거나 치환되지 않은 알킬 또는 아릴이다);

-CONHR (R은 치환되거나 치환되지 않은 알킬 또는 아릴이다); 및

-CH₂-S-CH₂-페닐.

바람직한 보호기는 화학식 -CH₂-NHCOR을 가지며, 여기에서 R은 탄소수 1 및 8개의 저급 알킬, 페닐, 또는 저급 알킬, 히드록실, 저급 알콕시, 카르복시 또는 저급 알콕시카르보닐로 치환된 페닐이다. 가장 바람직한 보호기는 아세트아미도메틸기이다.

본 발명의 각각의 특이적 결합 펩티드 함유 구체예는 아미노산의 서열로 이루어진다. 본 발명에서 사용되는 용어 ＂아미노산＂은 모든 천연 L- 및 D-아미노산 및 다른 아미노산을 포함하도록 의도된다.

본 발명의 펩티드는 생체외에서 화학적으로 합성될 수도 있다. 일반적으로 본 발명의 펩티드는 아미노산 합성기에서 제조하는 것이 유리하다. 본 발명의 펩티드는 당업자들에게 널리 공지된 기술을 사용하여, 생체외에서 화학적으로 합성되는 동안 방사성 표지 결합 부분이 펩티드에 공유결합되도록 합성될 수 있다. 합성 동안 방사성 표지 결합 부분에 공유결합된 상기 펩티드는 특정 공유결합 부위가 결정될 수 있기 때문에 유리하다.

방사성 표지 결합 부분이 표적 특이적 결합 펩티드의 아미노산 곁사슬을 통해 펩티드에 공유결합되는 것은 본 발명의 특정 장점이다. 이것은 특정 아미노산 곁사슬과의 공유결합의 형성에 의해, 또는 펩티드 합성 동안 방사성 표지 결합 부분에 컨쥬게이트되는 아미노산의 혼입을 통해 방사성 표지 결합 부분을 펩티드에 커플링시킴으로써 수행될 수 있다.

앞의 경우에서, 예를 들어, 방사성 표지 결합 부분 CICH₂CO.GIY-GIY-Cys-Lys.아미드(합성 동안에, 특히 시스테인 잔기으 티올기의 트리틸화에 의해 보호됨)는 pH 8-10에서 소마토스태틴 수용체 결합 펩티드 시클로.(N-CH₃).Phe-Tyr-(_d-T게)-Lys-Val-Hcy에 커플링되어, 펩티드 시클로(N-CH₃).Phe-Tyr-(_d-Trp)-Lys-Val-Hcy.(CH₂CO).Gly-Gly-Cys-Lys.아미드를 형성한다(탈보호후). 상기 식에서, 방사성 표지 결합 부분은 호모시스테인의 곁사슬 황 원자에 공유결합되는 것으로 이해될 것이다.

대안적으로, 방사성 표지 결합 부분 BAT(N⁶,N⁹-비스(2-메르캅토-2-메틸프로필)-6,9-디아자노나노산)는 펩티드 합성 동안, 제조된 리신 유도체, Nα(Fmoc)-Nε(N⁹-(t-부톡시카르보닐)-N⁶, N⁹-비스(2-메틸-2-트리페닐메틸티오프로필)-6,9-디아자노나노일)리신을 사용함으로써, 백혈구 결합 펩티드인 포르밀.Met-Leu-Phe-Lys.아미드 내에 혼입된다.

본 발명의 다른 방사성 표지 결합 부분은 펩티드 합성 동안에 표적 특이적 펩티드 내로 도입될 수 있다. 피콜린산 함유 방사성 표지 결합 부분은 리신의 ε-아미노기에 공유결합되어, 예를 들어 펩티드 사슬 내의 임의의 위치에서 혼입될 수 있는 αN(Fmoc)-Lys-εN[Pic-Gly-Cys(보호기)]를 생성시킬 수 있다. 상기 서열은 표적 결합 펩티드 내로의 용이한 혼입 방식을 제공하기 때문에 특히 유리하다.

방사능 테크네튬과 본 발명의 펩티드의 착물을 형성하는데 있어서, 테크네튬 착물, 바람직하게는 Tc-99m 페테크네테이트의 염이 환원제의 존재하에 본 발명의 펩티드와 반응한다. 바람직한 환원제로는 디티오나이트 이온, 제1주석 이온 및 제1철 이온이 있으며; 가장 바람직한 환원제는 제1주석 클로라이드이다. 추가의 바람직한 구체예에서, 환원제는 고체상 환원제이다. 착물 및 상기 착물을 제조하기 위한 수단은 표지화시키려는 예정된 양의 본 발명의 펩티드 및 펩티드를 Tc-99m으로 표지화시키기에 충분한 양의 환원제를 함유하는 바이알을 포함하는 킷 형태로 제공되는 것이 편리하다. 대안적으로, 착물은 본 발명의 펩티드를 테크네튬과 전이 리간드로서 공지된 또 다른 화합물의 사전형성된 불안정한 착물과 반응시킴으로써 생성될 수 있다. 상기 방법은 리간드 교환으로서 공지되어 있으며, 당업자들에게 널리 공지되어 있다. 불안정한 착물은 예를 들어 타르타레이트, 시트레이트, 글루코네이트 또는 만니톨과 같은 상기 전이 리간드를 사용하여 생성될 수 있다. 본 발명에 유용한 Tc-99m 퍼테크네테이트로는 나트륨염과 같은 알칼리 금속염, 또는 암모늄염 또는 저급 알킬 암모늄염이 있다.

본 발명의 바람직한 구체예에서, 테크네튬 표지화 펩티드를 제조하기 위한 킷이 제공된다. 본 발명의 펩티드는 당업자들에게 널리 공지되고 하기에 기술되는 방법 및 수단을 사용하여 화학적으로 합성될 수 있다. 이와 같이 제조된 펩티드는 3 내지 100개의 아미노산 잔기로 이루어지고, 방사성 동위원소에 결합된 방사성 표지 결합 부분에 공유결합된다. 적당량의 펩티드가 펩티드를 Tc-99m으로 표지화시키기 충분한 양으로, 제1주석 클로라이드 또는 고체상 환원제와 같은 환원제를 함유하는 바이알 내에 도입된다. 전술된 바와 같은 적당량의 전이 리간드(예를 들어, 타르타레이트, 시트레이트, 글루코네이트 또는 만니톨)가 또한 포함될 수 있다. 본 발명에 따른 테크네튬 표지화 펩티드는 바이알 내로의 적당량의 Tc-99m 또는 Tc-99m착물의 첨가, 및 하기 실시예 3에 기재된 조건하에서의 반응에 의해 제조될 수 있다.

적당한 양의 방사능을 갖는 본 발명에 의해 제공된 방사능 표지화 펩티드가 제공된다. Tc-99m 방사능 착물을 생성시키는 경우, 방사능을 약 0.01밀리큐리(mCi)/mL 내지 100mCi/mL의 농도로 함유하는 용액 중에서 방사능 착물을 생성시키는 것이 일반적으로 바람직하다.

본 발명에 의해 제공되는 테크네튬 표지화 펩티드는 포유동물 체내 부위를 가시화시키는 데에 사용될 수 있다. 본 발명에 따르면, 테크네튬 표지화 펩티드는 단일 단위 주사량으로 투여된다. 살균 식염 용액 또는 혈장과 같이 당업자에게 공지된 임의의 공통적 담체가 본 발명에 따라 다양한 기관, 종양 등을 진단적으로 영상화시키기 위한 주사용 용액을 제조하기 위해 방사성 표지화 후에 이용될 수 있다. 일반적으로, 투여하려는 단위 용량은 0.01mCi 내지 약 100mCi, 바람직하게는 1mCi 내지 20mCi의 방사능을 갖는다. 단위 용량으로 주사하려는 용액은 약 0.01mL 내지 약 10mL이다. 정맥내 투여 후에, 생체내 기관 또는 종양의 영상화는 수 분에 결쳐 수행될 수 있다. 그러나, 영상화는 바람직한 경우, 방사성 표지화 펩티드가 환자 체내에 주사된 후에, 수 시간 또는 그 이상에 걸쳐 수행될 수 있다. 대부분의 경우에, 충분한 양의 투여량이 약 6분 내에 영상화시키려는 영역에 축적되어, 신티그램 사진이 촬영된다. 임의의 통상적인 진단용 신티그램 촬영 영상화 방법이 본 발명에 따라 사용될 수 있다.

본 발명에 의해 제공되는 테크네튬 표지화 펩티드 및 착물은 수성 식염 매질과 같이 정맥내 주사를 위한 임의의 매질에서 또는 혈장 매질에서 정맥내 투여될 수 있다. 이러한 매질은 또한, 예를 들어 삼투압을 조절하기 위한 약제학적으로 허용되는 염, 완충액, 방부제 등과 같은 통상적인 약제 보조 물질을 함유할 수 있다. 바람직한 매질로는, 규정 식염 및 형장이 있다.

이들 화합물을 제조하고 표지화시키기 위한 방법은 하기 실시예에서 더욱 충분히 예시된다. 이들 실시예는 전술된 방법의 특정한 측면 및 유리한 결과의 특정 양태를 예시한다. 이들 실시예는 예시를 위한 것이지, 제한을 위한 것이 아니다.

[실시예]

[실시예 1]

[고체상 펩티드 합성]

고체상 펩티드 합성(SPPS)을 어플라이드 바이오시스템 모델431A(Applied Biosystem Model 431A)펩티드 합성기를 사용하고, 디시클로헥실카르보디이미드/히드록시벤조트리아졸 또는 2-(1H-벤조-트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우라늄 헥사프루오로포스페이트/히드록시벤조트리아졸(HBTU/HOBT)과 커플링시킨 9-를루오레닐메틸옥시칼보닐(Fmoc)아미노-말단 보호를 이용하고, 카르복실 말단 산에 대한 p-히드록시메틸페녹시-메틸폴리스티렌(HMP)또는 카르복실 말단 아미드에 대한 링크(Rink)아미드 수지를 사용하여, 0.25 밀리몰(millimole)스케일로 수행하였다. 수지 결합 생성물을 100 : 5 : 5 : 2.5 : 2의 비로 제조한 트리플루오로아세트산, 물, 티오아니졸, 에탄디티올 및 트리에틸실란으로 구성된 용액을 사용하여 실온에서 1.5 내지 3시간 동안 통상적으로 분열시켰다.

적절한 경우에, 분열되고 탈보호된 펩티드를 98% 포름산 중에서 과량의 아세트산 무수물로 처리하고, 약 18시간 동안 교반시킨 후, HPLC 정제를 수행하여 αN-포르밀기를 도입시켰다. 적절한 경우에, 수지에 결합된 유리 N-말단 아미노 펩티드를 30분 동안 NMP(N-메틸피롤리디논)중에서 20% v/v아세트산 무수물로 처리하여 n-말단 아세틸기를 도입시켰다. 적절한 경우에, SPPS 동안에 커플링시키려는 최종 잔기로서 적합한 2-할로아세트산을 사용하거나, 수지에 결합된 N-말단 유리 아미노 펩티드를 NMP 중의 2-할로아세트산/디이소프로필카르보디이미드/N-히드록시숙신이미드 또는 NMP 중의 2-할로아세트산 무수물/디이소프로필에틸아민으로 처리하여, 2-클로로아세틸 및 2-브로모아세틸기를 도입시켰다. 적절한 경우에, 1 내지 48시간 동안 0.5 - 1.0 mM EDTA의 존재 또는 부재하에 중탄산염 또는 암모니아 완충액(pH 8) 중의 0.1 - 1.0 mg/mL 용액 중에서 교반시킨 후, 아세트산으로 산성화시키고, 동결건조시키고, HPLC정제하여, HPLC-정제된 2-할로아세틸화된 펩티드를 고리화시켰다. 적절한 경우에, pH가 7인 0.1 mg/mL의 전구체 시스테인 비함유 티올 펩티드를 안정한 황색이 지속될 때까지 0.006 m K₂Fe(CN)₆의 분취량으로 처리하여, Cys-Cys 이황화물 결합 고리화를 수행하였다. 과량의 산화물을 과량의 시스테인으로 환원시키고, 혼합물을 동결건조시키고, HPLC에 의해 정제하였다.

적절한 경우 디이소프로필카르보디이미드 및 N-히드록시숙신이미드를 사용하여 피콜릴아민을 전구체 펩티드에 컨쥬게이트시켜서 ＂Pica＂기를 도입시켰다. 적절한 경우, SPPS 동안에 커플링시키려는 최종 잔기로서 적당한 BAT산을 사용하거나, 수지에 결합된 N-말단 유리 아미노 펩티드를 NMP 중의 BAT 산/디이소프로필카르보디이미드/N-히드록시숙신이미드로 처리하여 BAT 리간드를 도입시켰다. 적절한 경우, 먼저 펩티드 카르복실레이트를 DMF, NMP 또는 CH₂CI₂중의 디이소프로필카르보디이미드/N-히드록시숙신이미드 또는 HBTU/HOBT의 혼합물로 활성화시킨 다음, 디이소프로필에틸아민의 존재하에 커플링시키고; 커플링 후에, 컨쥬게이트를 전술한 바와 같이 탈보호시켜서, [BSM]을 펩티드에 컨쥬게이트시켰다.

적절한 경우, 단일 티올 함유 펩티드(50mM 인산나트륨 완충액 중의 5 내지 50 mg/mL, pH 8)를 약 1 내지 8시간 동안 실온에서 아세토니트릴 중에 미리 용해시킨 0.5 몰당량의 BMME(비스-말레이미도메실에테르)와 반응시킴으로써, BSME부가물은 제조하였다. 용액을 농축시키고, 생성물을 HPLC에 의하여 정제하였다.

적절한 경우에, 단일 티올 함유 펩티드(DMF중의 10 내지 100 mg/mL 농도의 펩티드, 50 mM 인산나트륨(pH 8)/아세토니트릴 또는 THF 중의 5 내지 50 mg/mL펩티드)를 1몰당량의 트리에탄올아민의 존재 또는 부재하에 아세토니트릴 또는 DMF중에 미리 용해시킨 0.33 몰당량의 TMEA(트리스(2-말레이미도에틸)아민; 본원에 참고문헌으로 인용된 미국 특허 출원 제08/044,825호에 기술되어 있는 바와 같음)과 실온에서 약 1 내지 18시간 동안 반응시켜서, TSEA 부가물을 제조하였다. 이러한 부가물을 함유하는 반응 혼합물을 농축시킨 후, HPLC를 사용하여 정제하였다.

적절한 경우에, 단일 티올 함유 펩티드(50 mM 인산나트륨(pH 8)/아세토니트릴 또는 THF 중의 2 내지 50 mg/mL 농도 펩티드를 아세토니트릴 또는 THF중에 미리 용해시킨 0.5 몰당량의 BAT-BM(N-[2-(N',N'-비스(2-말레이미도에틸)아미노에틸)]-N⁹-(t-부톡시카르보닐)-N⁶,N⁹-비스(2-메틸-2-트리페닐메틸티오프로필)-6,9-디아자노난아미드; 본원에 참고문헌으로 인용된 미국 특허 제08/044,825호에 기술되어 있는 바와 같음)과 실온에서 약 1 내지 18시간 동안 반응시켜서, BAT-BS부가물을 제조하였다. 그 후에, 용액을 증발시켜 건조시키고, [BAT-BS]-펩티드 컨쥬게이트를 10mL TFA 및 0.2mL 트리에틸실란으로 1시간 동안 처리하여 탈보호시켰다. 용액을 농축시키고, 생성된 부가물을 에테르로 침전시킨 후, HPLC에 의해 정제하였다.

미정제 펩티드를 워터스 델타 팩 C18(Waters Delta Pak C18)칼럼 및 아세토니트릴로 개질시킨 물 중의 0.1% 트리플루오로아세트산 (TFA)을 사용하는 구배 용리를 사용하여 정제 고압 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 정제하였다. 아세토니트릴을 용리된 분획으로부터 증발시킨 후, 동결건조시켰다. 각각의 생성물의 동일성을 신속한 원자 충격 질량 분광법(FABMS)에 의해 확인하였다.

[실시예 3]

[Tc-99m으로 방사성 표지화시키는 일반적인 방법]

실시예 2에서 제공된 펩티드 0.1mg을 물 0.1mL 또는 칼륨 인산염 완충액(pH = 5 , 6 또는 7.4)50mL 중에 용해시켰다. Tc-99m 클루셉테이트를 200 mCi까지 함유하는 Tc-99m나트륨 퍼테크네이트의 1.0mL으로 글루코산 바이알[이.아이.듀퐁 드 네모우르스, 인코포레이트드(E.I. DuPont de Nemours, Inc.)]를 재구성함으로써 제조하고, 실온에서 15분 동안 방치시켰다. Tc-99m글루셉테이트 25μ1을 펩티드에 첨가되고, 15 내지 30분 동안 실온 또는 100℃에서 반응을 진행시킨 후, 0.2μm필터를 통해 여과시켰다.

Tc-99m 표지화 펩티드 순도를 다음 조건을 사용하여 HPLC에 의해 측정하였다:

워터스 델타퓨어(Waters Drltapure) RP-18, 5μ, 150mm×3.9mm 분석 칼럼은 각각의 방사성 표지화 펩티드로 로딩시키고, 펩티드를 1mL/분과 동일한 용매유속으로 용리시켰다. 구배 용리를 20분에 걸쳐 10% 용매 A(0.1% CF₃COOH/H₂O) 내지 40% 용매 B₅₀(0.1% CF₃COOH/90% CH₃CN/H₂O)로 개시하였다.

방사능 성분을 통합 레코더에 결합돈 인라인 방사분석 검출기에 의해 검출하였다. T_c-99m 글루셉테이트 및 T_c-99m의 나트륨 퍼테크네테이트는 상기 조건하에 1 내지 4분 동안 용리되었으며, 반면에 T_c-99m 표지화 펩티드는 훨씬 더 긴 시간 후에 용리되었다.

하기 표는 본원에 기술된 방법을 사용하여 실시예 2에 따라 제조한 펩티드의 성공적인 T_c-99m 표지화를 예시하는 것이다.

[표 1]

* 위첨자는 하기의 표지화 조건에 대한 것이다

¹= 실온, 10% HPCD 중에서

²= 실온, 50/50 에탄올/물 중에서

³= 100℃, 0.9% NaCl 중에서

HPLC 방법(R_T이후에 위첨자에 의해 표시됨)

워터스-1 칼럼, 10분 내에 100% 용액 A→100% 용액 B

[표 2]

* 하기의 표지화 조건을 적절한 펩티드에 사용하였다 :

1. 펩티드를 인산칼륨 완충액(pH 7.4) 50mM 중에 용해시키고, 실온에서 표지화시켰다.

2. 펩티드를 인산칼륨 완충액(pH 7.4) 50mM 중에 용해시키고, 100℃에서 표지화시켰다.

3. 펩티드를 물 중에 용해시키고, 실온에서 표지화시켰다.

4. 팹티드를 물 중에 용해시키고, 100℃에서 표지화시켰다.

5. 펩티드를 인산칼륨 완충액(pH 6.0) 50mM 중에 용해시키고, 100℃에서 표지화시켰다.

6. 펩티드를 인산칼륨 완충액(pH 5.0) 50mM 중에 용해시키고, 실온에서 표지화시켰다.

[HPLC 방법]

일반적 : 용매 A= 0.1% CF₃COOH/H₂O

용매 B₇₀= 0.1% CF₃COOH/70% CH₃CN/H₂O

용매 B₉₀= 0.1% CF₃COOH/90% CH₃CN/H₂O

용매 유속 = 1mL/분

비닥(Vydak)칼럼 = 비닥 218TP54 RP-18, 가아드 칼럼이 장착된 5μ x 220mm x 4.6mm 분석 칼럼

브라운리(Brownlee)칼럼 = 브라운리 스페리-5 RP-18, 5μ x 220mm x 4.6mm 칼럼

워터스 칼럼 = 워터스 델타-팩 C18, 5μm, 39mm x 150mm

방법 1 : 브라운리 칼럼, 10분 내에 100% A→100% B₇₀

방법 2 : 비닥 칼럼, 10분 내에 100% A→100% B₉₀

방법 3 : 비닥 칼럼, 10분 내에 100% A→100% B₇₀

방법 4 : 브라운리 칼럼, 10분 내에 100% A→100% B₉₀

방법 5 : 워터스 칼럼, 10분 내에 100% A→100% B₉₀

아미노산에 대한 단일분자 약어는 지. 쯔베이(G. Zubay)의 문헌[Biochemistry (2d. ed), 1988(Macmillen Publishing : New York) p.33]에서 찾을 수 있다 : Ac = 아세틸: Pic = 피콜리노일 (피리딘-2-카르보닐)=6-아미노카프로산; Hly = 호모리신; Acm = 아세트아미도메틸이고; pGlu = 피로글루탐산; Mob = 4-메톡시벤질; Pica = 피콜릴아민(2-(아미노케틸)피리딘); Apc = L-(S-(3-아미노프로필)시스테인); F_D= D-페닐알라닌; W_D= D-트립토판; Y_D= D-티로신; Cpa = L-(4-클로로페닐)알라닌; Thp = 4-아미노테트라하이드로티오피란-4-카르복실산; ma = 메르캅토 아세트산; D-Nal = d-2-나프틸알라닌; Dpg = 디프로필글리신; Nle = 노르로이신; BAT = N⁶,N⁹- 비스(2-메르캅토-2-메틸프로필)-6,9-디아자노나노산; BAT 산(보호된)= N⁹-(t-부톡시카르보닐)-N⁶,N⁹-비스(2-메틸-2-트리페닐메틸티오프로필)-6,9-디아자노나노산; BAM = N¹,N⁴-비스(2-메르갑토-2-메틸프로필)-1,4,10-트리아자데칸, BAM(보호된) = N¹-(t-부톡시카르보닐)-N¹,N⁴-비스(2-메틸-2-트리페닐메틸티오프로필)-1,4,10-트리아자데칸, [BAT-BM] = N-[2-(N',N'-비스(2-말레이미도에틸)아미노에틸]-N⁹-(t-부톡시카르보닐)-N⁶,N⁹-비스(2-메틸-2-트리페닐메틸티오프로필)-6,9-디아자노난아미드; [BAT-BS] = N-[2-(N',N'-비스(2-숙신이미도에틸)아미노에틸]-N⁶,N⁹-비스(2-메르캅토-2-메틸프로필)-6,9-디아자노난아미드; [BMME] = 비스-말레이미도메틸에테르; [BSME] = 비스-숙신이미도메틸에테르; [DTPA] = 디에틸렌트리아민펜타아세트산; Amp = 4-아미디노페닐알라닌.

[실시예 3]

과콜레스테롤 토끼 모델에서의 Tc-99m 표지화 화합물 P215를 사용하는 아테롬경화성 플라크의 정위 및 생체내 영상화

암컷 및 수컷으로서, 체중이 2 내지 3kg인 22마리의 뉴질랜드 화이트(NZW) 토끼를 2개의 군으로 나누었다. 토끼의 대조군을 우리에 넣고, 시판용 토끼 사료(Purina)를 섭취시켰다. HC 군에게는 , 생후 7주 내지 28주가 될 때까지 표준 콜레스테롤-풍부 사료(콜레스테롤이 1% w/w 농도가 될 때까지 혼합시킨 토끼 사료)를 섭취시켰다. 모든 동물에게 임의로 물을 제공하였다.

Tc-99m 표지화 P215([BAT].RALVDTLKFVTQAEGAK.아미드)를 실시예 1에서 기술한 바와 같이 제조하였다. 약 250 내지 400μg의 펩티드를 140-160mCi의 Tc-99m으로 표지화시키고, 0.2mL 부피 용량으로 7-8 mCi의 단위 용량(12.5-20.0μg/토끼; 6-7μg/kg)으로 제조하였다. 어른 토끼에게, 느린 환약 주입(0.1mL/분)에 의해 외측 귀 정맥에서 Tc-99m 표지화 펩티드를 정맥내 투여한다. 핀-홀 시준기 (5mm구경) 및 Tc-99m에 대해 설정된 에너지 윈도우와 맞춰지고, 목적하는 시간 동안 500,000 카운트 또는 스캔을 축적하도록 프로그램된 감마 카메라를 사용하여 영상을 수득하였다. 영상호 직전에, 동물을 케타민과 크실라진의 혼합물(5:1, 1 mL/kg 근내 투여)로 마취시켰다.

감마 카메라 영상을 심장의 바로 위에서 40°내지 45°각도로 모아서(좌전방 불투명도[LAO]관찰), 대동맥궁의 윤곽을 관찰하고, 하향 대동맥을 관찰하였다. 영상을 주사후 1시간 및 2시간 후에, 그리고 경우에 따라 때때로 3시간 및 5시간에 후에 수득하였다. 추가의 마취제를 필요에 따라 각각의 영상을 수집하기 전에 주사하였다.

2.5시간 후(2시간 스캔 후), 동물을 나트륨 펜토바르비탈의 정맥내 투여로 희생시켰다. 부검시에 대동맥을 제거하고, 분지 혈관을 대동맥판으로부터 중간-복부 영역까지 절개하였다. 평행 홀 시준기를 사용하여, 대동맥을 또한 생체외에서 영상화시켰다. 그다음, 대동맥을 세로로 개방하고, 수단(Sudan) IV로 염색하여, 아테롬경화성 플라크를 진한 붉은 벽돌색으로 변화시켰다. 지질을 함유하지 않으며 손상되지 않은 대동맥 내피는 상기 조건하에서 정상적이고, 반짝이는 백색- 분홍색으로 남는다.

생체내 및 생체의 Tc-99m P215중에서의 포지티브 상관관계 및 HC-처리된 래빗 대동맥 중의 수단 IV의 침착 패턴은 본 발명의 상기 신티그램 촬영 영상화제가 아테롬경화성 플라크를 영상화시킬 수 있음을 나타낸다.

[실시예 4]

개과동물 모델에서 심부정맥 혈전증을 Tc-99m 표지화 화합물 P357을 사용하여 생체내 영상화시키는 방법

잡종 개(25 내지 35Ib., 밤새 단식시킴)를 케타민과 아세프로자민의 배합물의 근내 투여로 진정시킨후, 나트륨 펜토바르비탈을 정맥내 투여하여 마취시켰다. 각각의 동물에서, 18-게이지 안기오카트(angiocath)를 우대퇴정맥 2/1 말초에 삽입시키고, 8mm다크론-얽힌 스테인레스강 색전화 코일[인디애나, 블루밍톤에 소재하는 쿡 컴퍼니(CooK Co.)]을 대략적으로 중간 대퇴에서 대뇌정맥에 위치시켰다.

카테테르를 제거하고, 봉합된 상처 및 코일의 배치를 X-선에 의해 입증하였다. 그 다음, 동물을 밤새 회복시켰다.

코일 배치후 어느 날, 각각의 동물을 재마취시키고, 정맥내 식염 방울을 각각의 앞다리에 떨어뜨리고, 방광 카테테르를 삽입시켜 요를 모았다. 동물을 저에너지의 다목적 시준기가 장착되고 Tc-99m에 대해 포토피크된 감마 카메라 아래에 바로 눕혔다. 영상은 누클리어 맥(Nuclear Mac)컴퓨터 시스템에서 얻어졌다.

Tc-99m 표지화 P357[(CH₂CO-Y_D.Apc.GDCGGC_AcmGC_AcmGGC-아미드)₂-[BAT-BS]](185-370mBq(5-10mCi) Tc-99m 및 0.2-0.4 mg P357)를 삽입 위치에서 하나의 앞다리 정맥선 내에 주사하였다. 두 번째 정맥선은 혈액을 모으기 위해 유지시켰다. 다리에 대한 전방 영상은 500,000 카운트 또는 20분(어느쪽이 더 짧을 수 있다) 동안, 약 10 내지 20분에, 그리고 약 1, 2, 3 및 4시간 주사 후에 얻어졌다. 최종 영상을 모은 후 각각의 동물을 펜토바르비탈로 깊게 마취시켰다. 2개의 혈액샘플을 헵파린이 첨가된 주사기를 사용하여 심장천자에 모은 후, 심장간 또는 거환 정맥내 주사에 의해 투여되는 포화된 염화칼륨 용액을 안락사 용량으로 투여하였다. 그 후, 혈전을 포함하는 대퇴정맥 및 넓적다리 근육을 조심스럽게 절개하였다. 그 후, 혈전 샘플을 혈관으로부터 절개해내고, 사전 칭량된 시험관 내에 넣었다. 그 다음, 혈전 샘플을 칭량하고, Tc-99m 채널에서 감마 웰 카운터로 계수하였다. 주사량의 공지된 분획을 또한 계수하였다.

새로운 혈전 중량, 안락사 직전에 수득한 혈전 및 혈액 중의 % 주사량(%ID)/g 및 혈전/혈액 및 혈전/근육의 비를 측정하였다. 컴퓨터 저장 영상으로부터 혈전 및 인접 근육에 걸쳐 유도된 관심있는 영역(ROI)에서 측정한 카운트/픽셀의 분석에 의해 혈전/ 백그라운드 비를 결정하였다.

상기 결과를 사용하여, 심부정맥혈전이 생체내에 신속하고 효율적으로 정위 될 수 있음을 증명하였다.

[실시예 5]

Tc-99m 표지화 펩티드의 신티그램 촬영 영상화 및 생체내 분포

상기에서 제공된 바와 같은 Tc-99m 표지화 펩티드 시약의 효능을 입증하기 위해, 뉴질랜드 화이트 토끼를 좌측 대퇴부에서 대장균의 잠재적 균주로 근내 접종시켰다. 24시간 후, 동물을 케타민 및 크실라진의 근내 주사에 의해 진정시킨후, Tc-99m 표지화 펩티드(150μg, 2-10mCi)로 정맥내 주사하였다. 동물을 감마 카메라(LEAP 시준기/ Tc-99m에 대해 포토피크됨)의 시야 영역에 바로 눕히고, 처음 1시간 주사에 걸쳐 영상화시킨 후, 주사 후 다음 3시간에 걸쳐 약 1시간 간격으로 영상화시켰다. 동물들을 영상 획득 사이에서 회복시키고, 필요에 따라 재마취시켰다.

최종 영상의 완결시에, 각각의 동물들을 페노바르비탈의 정맥내 과투여로 희생시키고 절개하여, 혈액 및 감염된 근조직 및 대조군 근조직의 샘플을 수득하였다. 조직 샘플을 칭량하고, 표준량의 주사량과 함께 감마 카운터를 사용하여 계수하고, 조직에 잔류하는 % 주사량(조직 1g당)을 측정하였다. 감염된 근조직 대 비감염된 근조직의 g당 주사량의 %비, 및 감염된 근조직 대 혈액의 g당 주사량의 %비를 각각의 펩티드에 대해 계산하였다. 결과는 하기식을 갖는 본 발명의 Tc-99m 표지화된 시약에 대해 하기 표 3에 기재하였다 :

포르밀MLFK(BAT).아미드

[표 3]

[실시예 6]

랫트에서의 소마토스타틴 수용체(SSTR)발현 종양의 정위 및 생체내 영상화

랫트 종양 세포에 의해 발현된 소마토스타틴 수용체의 생체내 영상화를 본질적으로 바커(Bakker) 등의 문헌[1991, Life Science 49 : 1593-1601]에 기술된 바와 같이 수행하였다.

동결된 획득 종양 브라이(brei)로부터 해동시킨 CA20948 랫트 췌장암 세포를 0.05 내지 01mL/동물의 현탁액으로, 생후 6주된 루이스 랫트의 우측 뒤 넓적다리에 근육내 삽입시켰다. 종양을 약 0.5 내지 2g으로 성장시키고, 수득한 후, 종양 브라이를 사용하여 두 번째의 천연 루이스 랫트에 삽입시켰다. 이러한 방식으로 패시징(passaging)을 반복하여 종양을 지닌 동물의 연속 발달을 발생시켰다. 생체내 연구용으로 사용되는 종양을 지닌 동물은 보통 3번째 내지 5번째 패시지로부터 수득하였으며, 0.2 내지 2g의 종양을 가졌다.

종양에 있어서 방사성 추적자 정위의 특이성을 연구하기 위해, 선택된 동물에 방사성 추적자를 주입하기 30분 전에 SSTR-차단 용량(4mg/kg)의 옥트레오타이드를 피하 투여하였다(이 프로토콜은 바커 등에 의해 제시되었으며,¹¹¹In-[DTPA]옥트레오타이드 종양 흡수율을 40% 까지 저하시킨다).

3번째 내지 5번째-패시지 CA20948 종양 함유 루이스 랫트를 재속박시키고, 척추 끝 정맥을 경유하여 0.2 내지 0.4 mL 중의 3 내지 8μg에 상응하는 0.15 내지 020mCi^99mTc-표지화 펩티드를 정맥내 주사하였다.

선택된 시간에, 동물을 경부 탈구에 의해 희생시키고, 선택된 부검을 수행하였다. 수득한 조직 샘플을 칭량하고, 감마 웰-카운터(gamma well-counter)에서 주량의 분취량과 함께 계수하였다.

선택된 방사성 표지화 펩티드의 90분 생체내 분포 결과를 표 3에 기재하였다. 특히,^99mTc-P587,^99mTc-P617,^99mTc-P726 및^99mTc-P736는 매우 높은 종양 흡수율을 나타내며, 표적(종양) 조직에 있어서의 이들의 높은 특이적 흡수율을 나타내는 종양/혈액 비를 나타낸다.

제1도는 종양을 지닌 랫트에 있어서^99mTc-P587의 영상을 나타낸다. 보다 낮은 다리 부분(화살표)에 있어서의 종양의 높은 흡수율이 명백히 가시화된다.

랫트에서 종양의^99mTc-P587 흡수율은 생체내에서 소마토스타틴 수용체에 결합된 것으로 공지된 소마토스타틴 유사체인 옥트레오타이트로 사전 주사 처리한 것 및 하지 않은 것과 비교하였다. 이들 실험에서^99mTc-P587의 투여 전에 옥트레오타이드의 투여에 의한 수용체-차단은 방사선 표지화 펩티드의 특이적 종양 흡수율을 76%까지 감소시켰다. 이들 결과는 생체내에서^99mTc-P587의 결합이 SSTR-특이적임을 확인시켜주는 것이다.

[표 3]

상기 설명은 본 발명의 특정 구체예를 강조하며, 이에 대한 모든 변경 또는 대안이 첨부된 청구범위에서 기재된 본 발명의 사상 및 범위 내에 있는 것으로 이해되어야 한다.

Claims

고리형 소마토스타틴 수용체 결합 펩티드의 구성 아미노산의 곁사슬에 방사성 표지 결합 부분이 공유결합되어 있는 고리형 소마토스타틴 수용체 결합 펩티드를 포함하는 시약.
제1항에 있어서, 아미노산이 리신 또는 호모시스테인인 시약.
제1항에 있어서, 방사성 결합 표지 부분이 하기 화학식(II)를 갖는 단일 티올을 포함하는 시약 :

II

A-CZ(B)-{C(R¹R²)}_n-X

상기식에서,

A는 H, HOOC, H₂NOC, (아미노산 또는 펩티드)-HNOC, (아미노산 또는 펩티드)-OOC₂또는 R⁴이고;

B는 H, SH, -NHR³, -N(R³)-(아미노산 또는 펩티드) 또는 R⁴이고;

X는 H, SH, -NHR³, -N(R³)-(아미노산 또는 펩티드) 또는 R⁴이고;

Z는 저급 직쇄, 측쇄 또는 고리형 알킬이고;

R¹, R², R³및 R⁴는 독립적으로 H 또는 저급 직쇄, 측쇄 또는 고리형 알킬이고;

n은 0, 1 또는 2이고;

(펩티드)는 2 내지 10개의 아미노산의 펩티드이며;

B가 -NHR³또는 -N(R³)-(아미노산 또는 펩티드)인 경우, X는 SH이고, n은 1 또는 2이고;

X가 -NHR³또는 -N(R³)^-(아미노산 또는 펩티드)인 경우, B는 SH이고, n은 1 또는 2이고;

B가 H 또는 R⁴인 경우, A는 HOOC, H₂NOC, (아미노산 또는 펩티드)-NHOC, (아미노산 또는 펩티드)-OOC이고, X는 SH이고, n은 0 또는 1이고;

A가 H 또는 R⁴이고, B가 SH일 경우, X는 -NHR³또는 -N(R³)-(아미노산 또는 펩티드)이고, X가 SH인 경우, B는 -NHR³또는 -N(R³)-(아미노산 또는 펩티드)이고;

X가 H 또는 R⁴인 경우, A는 HOOC, H₂NOC, (아미노산 또는 펩티드)-NHOC, (아미노산 또는 펩티드)-OOC₂이고, B는 SH이고;

Z가 메틸인 경우, X는 메틸이고, A는 HOOC, H₂NOC, (아미노산 또는 펩티드)-NHOC 또는 (아미노산 또는 펩티드)-OOC이고, B는 SH이고, n은 0이고;

티올은 환원된 형태이고, (아미노산)은 티올기를 함유하지 않는 모든 일차 α- 또는 β-아미노산이다.
제1항에 있어서, 방사성 표지 결합 부분이 하기 화학식으로 구성된 군으로부터 선택되는 시약 :

IIa. -(아미노산)¹-(아미노산)²-{A-CZ(B)-{C(R¹R²)}_n-X};

IIb. -{A-CZ(B)-{C(R¹R²)}_n-X}-(아미노산)¹-(아미노산)²;

IIc. -(1차 α,ω- 또는 β,ω-디아미노산)-(아미산)-{A-CZ(B)-{C(R¹R²)}_n-X} ; 및

IId. -{A-CZ(B)-{C(R¹R²)}_n-X}-(아미노산)¹(1차 α,ω- 또는 β,ω-디아미노산)

상기식에서,

(아미노산)¹및 (아미노산)²는 각각 독립적으로 티올기를 함유하지 않는 천연, 개질, 치환 또는 변형된 α- 또는 β-아미노산이고;

A, B, X, Z, R¹, R²및 n은 제6항에서 정의한 바와 같다.
제1항의 시약과 방사성 표지를 포함하는 신티그램 촬영 영상화제.
제1항의 시약을 환원제의 존재하에 테크네튬-99m과 반응시킴으로써 제조되는 착물.
예정된 양의 제1항의 시약 및 시약을 테크네튬-99m으로 표지화시키기에 충분한 양의 환원제를 포함하는 밀봉된 바이알을 포함하는, 방사성 약제 조성물을 제조하기 위한 킷.
고체상 펩티드 합성에 의해 제1항의 시약을 제조하는 방법.
제1항에 있어서, 하기 화학식으로 구성된 군으로부터 선택되는 화학식을 갖는 시약 :
제8항에 있어서, 방사성 표지가 테크네튬-99m, 인듐-111 및 갈륨-68로 구성된 군으로부터 선택되는 신티그램 촬영 영상화제.
제1항에 있어서, 방사성 표지 결합 부분이 하기 화학식으로 구성된 군으로부터 선택되는 시약 :

(상기식에서, Cp는 보호된 시스테인이고, (aa)는 티올기를 함유하지 않는 일차 α- 또는β-아미노산이다.)

(상기식에서, X는 H 또는 보호기이고, (아미노산)은 티올기를 함유하지 않는 일차 α- 또는 β-아미노산이다.)

(상기식에서, X는 H 또는 보호기이고, (아미노산)은 티올기를 함유하지 않는 일차 α- 또는 β-아미노산이다.)

(상기식에서, 각각의 R⁵는 독립적으로 H, CH₃또는 C₂H₅이고; 각각의(pgp)^S는 독립적으로 티올 보호기 또는 H이고; m,n 및 p는 독립적으로 2 또는 3이고; A는 선형 저급 알킬, 고리형 저급 알킬, 아릴, 헤테로시클릴 또는 이들의 결합물 또는 치환된 유도체이고; X는 아미노산의 곁사슬이다);

(상기식에서, 각각의 R⁵는 독립적으로 H, 탄소수 1 내지 6개의 알킬, 페닐, 또는 저급 알킬 또는 저급 알콕시로 치환된 페닐이고; m, n 및 p 는 독립적으로 1 또는 2이고; A는 선형 저급 알킬, 고리형 저급 알킬, 아릴, 헤테로시클릴 또는 이들의 결합물 또는 치환된 유도체이고; V는 H 또는 -CO-아미노산의 곁사슬이고 : R⁶은 H 또는 아미노산의 곁사슬이며 : 단, V가 H인 경우, R⁶는 아미노산의 곁사슬이고, R⁶가 H인 경우, V는 아미노산의 곁사슬이다).