JP2001523257A - カルシトニン受容体結合ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、放射性金属キレート化剤に共有結合するカルシトニン受容体結合試薬に関する。本発明は、適当な同位元素で放射性標識できるカルシトニン受容体結合ペプチド誘導体およびカルシトニンのアナログとして具体化され、放射性診断剤または放射性治療剤として用いられる。また、哺乳動物体内の診断的および治療的なかかる試薬を製造する、放射性標識する、および使用するための方法およびキットが提供される。

Description

【発明の詳細な説明】 カルシトニン受容体結合ペプチド 本発明は、放射性金属イオンを含めた金属イオンと錯体化できるカルシトニン 受容体結合試薬、および哺乳動物体内の造影部位での使用または治療における使 用、特に癌治療における使用のためのかかる試薬の標識の具体例に関する。 発明の背景 多数の研究は、胃癌のごときいくつかの型の癌の長期死亡率動向を低下させる のに過去６０年にわたってなされてきた。しかしながら、同一期間中に、他の癌 についての死亡率動向は、相変わらず安定し、増加した。例えば、肺癌は、世界 中で最高頻度の癌であり、男性および女性間の癌死亡率の主要原因である。乳癌 は、女性の最も一般的な癌であり、女性において癌死亡率の第二の主要原因であ り、卵巣癌死亡率は、何世紀も増加している。また、白血病および非ホジキンリ ンパ腫のごとき小児および成人リンパ性癌は、癌死亡率のかなりの原因であり続 けている。早期診断および有効な治療は、これらの癌の全てにつき依然として目 標である。 何年か前に、部位指向の診断および治療が提唱され、動物体内の特定部位のｉ ｎ ｖｉｖｏターゲッティングを可能とした。一般的に、部位指向の診断または 治療は、診断剤の場合の標識と、または治療剤の場合の細胞傷害剤と結合した、 疾患部位または疾患を引き起こす生物に特異的な抗体のごときターゲッティング 基を使用する。非常に大きな文献の集合は、診断的造影を目的とする抗体または 抗体断片を放射性標識することに関連して存在する。同様に、モノクローナル抗 体または種々の放射性同位元素を使用した多数の部位指向の治療剤は、米国特許 第４,４５４,１０６号；第４,４７２,５０９号；第４,８２８,９９１号；５,２ ４６,６９１号；第５,３５５,３９４号；および第５,６４１,４７１号；ＥＰ４ ２９６２４において；ＥＰ５８５９８６；ＷＯ９０/１５６２５等に記載される ごとき年月にわたって提唱されて来ている。かかる抗体ベースの薬剤は、抗体断 片またはヒト型抗体がターゲッ ティング基として使用される時でさえ、該抗体に対する処置動物の免疫応答に関 連して副作用が生じる。 抗体ベースの部位指向の診断剤および治療剤の利点は、受容体特異的ペプチド または小分子のごとき低分子量を有するターゲッティング基を使用する場合に、 回避することができる。しかしながら、化合物の受容体特異性を保持しつつ、ペ プチドまたは小分子と標識剤または細胞傷害剤とのカップリングは、技術的に困 難であり得る。受容体に特異的結合するための化合物の能力を保存するペプチド および他の小分子の放射性標識法は、共有の米国特許第５,２２５,１８０号；第 ５,４０５,５９７号；第５,４４３,８１５号；第５,５０８,０２０号；第５,５ ５２,５２５号；第５,５６１,２２０号；第５,６２０,６７５号；第５,６４５, ８１５号；第５,６５４,２７２号；第５,７１１,９３１号；第５,７１６,５９６ 号；第５,７２０,９３４号；および第５,７３６,１２２号；放棄された米国特許 出願第０７/９５５,４６６；およびＷＯ９２/１３５７２、ＷＯ９３/１０７４７ 、ＷＯ９３/１７７１９、ＷＯ９３/２１９６２、ＷＯ９３/２３０８５、ＷＯ９ ３/２５２４４、ＷＯ９４/００４８９、ＷＯ９４/０７９１８、およびＷＯ９４/ ２８９４２に開示される。これらの特許および公開で開示された方法は、部位指 向の診断用造影剤の製造に特に適当である。共通に譲渡された米国特許第５,６ ２０,６７５号；第５,７１６,５９６号；ＷＯ９４/００４８９；ＷＯ９５/０３ ３３０；ＷＯ９５/００５５３；ＷＯ９５/３１９２１；およびＷＯ９６/０４３ ０８は、部位指向の放射性治療に用いることができるソマトスタチンペプチドア ナログを開示する。共通に譲渡されたＷＯ９５/３３４９７は、部位指向の放射 性診断または放射性治療について用いることができるソマトスタチンアナログ、 ｇｐIIｂ/IIIａ受容体結合ペプチドおよび白血球結合ペプチドを開示する。共通 に譲渡されたＷＯ９６/３００５５は、部位指向の放射性診断または放射性治療 に用いることができる血管作用性腸管ペプチド(ＶＩＰ)受容体結合ペプチドを開 示する。 腫瘍細胞は、受容体結合試験によって示されるごとく、特定の受容体または受 容体サブタイブをしばしば偶然に発現または過剰発現する。いくつかの型の癌に おいて、腫瘍細胞マーカーは、病気が進行するにつれて変化でき、かくして患者 の予後 を恐らくは反映する。腫瘍細胞が発現する種類の受容体は、腫瘍の病因に特有で あり得、かくして腫瘍用の相対的な特異的マーカーを提供できる。例えば、放射 性標識したソマトスタチンアナログは、神経内分泌系腫瘍、黒色腫、肺癌および ある種の乳癌に特異的結合することが示されてきた。かかるアナログの一つので ある¹¹¹Ｉｎ-ＯＣＴＲＥＯＳＣＡＮは、神経内分泌系腫瘍を造影する用途につい て市販認可を受けた。第二の放射性標識したソマトスタチンアナログ、^99mＴｃ- デプレオチド(Ｄｅｐｒｅｏｔｉｄｅ)は、肺癌造影の用途について第三相臨床試 験を完了した。¹²³Ｉ-血管作用性腸管ペプチドは、結腸および胃の腺癌を標的と して示されてきた。 カルシトニン(ＣＴ)は、上昇した血清中カルシウムレベルに応答して、甲状腺 から分泌される３２個のアミノ酸ペプチドである。カルシトニンは、多数の生物 学的作用を有し、それは標的臓器の細胞表面上に存在する受容体によって媒介さ れる。ＣＴに高親和性の受容体は、骨、腎臓、肺および中枢神経系において同定 された。骨では、ＣＴは破骨細胞による骨吸収を阻害し；腎臓では、ＣＴはカル シウムイオン排泄を増大させ；および中枢神経系では、該ペプチドは無痛覚、胃 酸分泌および食欲阻害を誘導する。少量のＣＴは、毒性効果なくして動物および ヒトに投与され、サケＣＴを臨床的に用いて、パジェット病、悪性腫瘍の高カル シウム血症および骨粗鬆症のごときかかる骨疾患を治療する。静脈内投与したカ ルシトニンは、血液を迅速に清澄にし、主に尿中に排出される。投与したＣＴに ついての主な局在部位は、腎臓、肝臓および長骨の骨端である。 循環ＣＴレベルは、癌、例えば、髄様甲状腺癌、小細胞肺癌、カルシノイド、 乳癌および胃腸癌のいくつかの型または段階についてのマーカーであると考えら る。高親和性ＣＴ受容体は、リンパ様細胞、ヒト肺癌細胞系、ヒト乳癌細胞系お よび初代乳癌組織において同定された。Ｆｉｎｄｌａｙら(１９８１)Ｂｉｏｃｈ ｅｍ．Ｊ．１９６：５１３−５２０は、ＣＴ受容体がある種の胸、肺、卵巣およ びリンパ腫癌細胞系において過剰発現されることを報告している。 いくつかの種(ヒト、サケおよびウナギ)からのＣＴのアミノ酸配列は、以下に 記載される：（ここに、アミノ酸の一文字略語は、Ｚｕｂａｙ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２ｄｅｄ.、１９８８、ＭａｃＭｉｌｌａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ：Ｎｅｗ Ｙ ｏｒｋ、Ｐ.３３に見出すことができ、ここに、ペプチドのアミノ末端部分にお いて２つのシステイン残基間に下線を施したアミノ酸は、ジスルフィド結合を表 す）。種の間にカルボキシル末端のプロリンアミドおよび１および７位のジスル フィド結合したシステイン残基を含めた９つの残基は保存されている。サケおよ びウナギのＣＴは、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで共にヒトＣＴより強 力である。 ＣＴペプチドアナログは開発され、化学的に不安定なジスルフィドが、米国特 許第４,０８６,２２１号に記載されるごとく２-アミノスベリン酸間に形成され た安定な炭素―炭素架橋と置換された。その分子のアミノ末端、中間領域、カル ボキシル部分を欠失するＣＴアナログは、ＣＴ受容体に弱い結合のみを示す。 多くのアミノ酸置換体をＣＴ分子の残基８および２２間に作成して、生物学的 に活性なＣＴアナログを生成する。いずれかの天然形態のＣＴに最小の配列相同 性を有するいくつかのＣＴアナログは、サケＣＴのものと同様の生物学的活性を 有する。(Ｃｂｚ−ＬＨＫＬＱＹ−ＯＭｅのごとき)切形ＣＴペプチド誘導体は実 質的な受容体結合活性も保持する。 腫瘍は異なる受容体を発現または過剰発現できるので、さまざまな放射性診断 剤および放射性治療剤が、癌に対する最適な診断的および治療的様相を与えるた めに必要である。 発明の概要 肺および卵巣腺癌、乳癌およびリンパ腫の細胞表面上のＣＴ受容体は、ｉｎ ｖｉｖｏにてかかる腫瘍を局在、同定および治療するためのマーカーとして開発 できる。本発明者らは、初めて、ＣＴ受容体に高親和性結合する能力および有利 な薬物 動態学を所有するＣＴ誘導ペプチドを含めた小さな合成化合物を開発し、それに よって、腫瘍部位での診断剤および治療剤の局在をｉｎ ｖｉｖｏで有効にでき る。本発明の試薬は、ＣＴ受容体の発現または過剰発現によって特徴付けられた 腫瘍検出、疾患段階付けおよび腫瘍の転移の広がりの評価に有用な、迅速で、費 用効果の優れた、非侵襲性の診断造影法の基礎を提供する。また、本発明の試薬 は、例えば、ＣＴ受容体を発現する腫瘍細胞の局在に続いて手術、放射線治療ま たは化学療法によって、他の治療様相の治療的有効性評価の基礎を提供する。本 発明の試薬は、部位指向の放射性治療用のターゲッティング基としても用いるこ とができる。 本発明は、放射性金属キレート剤に共有結合する、好ましくはＣＴペプチド、 ＣＴ誘導体またはＣＴアナログを含めたＣＴ受容体結合試薬を提供する。本発明 の試薬において使用されるＣＴ受容体結合化合物は、約１０,０００ダルトン未 満の分子量を有する。いくつかの具体例において、本発明の試薬は、該試薬のＣ Ｔ受容体結合部分のペプチド結合の存在または放射性金属のキレート化剤におけ るペプチド結合の存在によってペプチドとして特徴付けられる。本発明の試薬は 、以下の実施例４に記載されたアッセイのごとく標準化されたアッセイにおいて 比較する場合に、該受容体用の放射性ヨウ素化の天然ＣＴの親和性の約１０分の １以上であるＣＴ受容体結合親和性を有する。好ましい具体例において、本発明 の試薬は、該標準化されたアッセイにおいて比較される場合に、該受容体につい ての天然ＣＴまたは天然ＣＴの放射性ヨウ素化された種以上のＣＴ受容体結合親 和性を有する。 本発明の放射性医薬は、部位特異的診断剤または治療剤として使用できる。テ クネチウム-９９ｍ、ヨウ素-１２３およびヨウ素-１３１で標識した場合、本発 明の試薬は、シンチグラム造影剤として使用できる。磁性金属、常磁性金属、超 磁性金属または超常磁性金属で標識した場合、本発明の試薬は、磁気共鳴コント ラスト剤として使用できる。細胞傷害性放射性ヌクレオチドで標識した場合、本 発明の試薬は、部位指向の放射性治療において用いることができる。また、本発 明は、本発明の放射性標識したＣＴ受容体結合化合物および薬理学的に許容され る担体を含む医薬組成物を提供する。本発明のＣＴ受容体結合試薬およびその放 射性具体例の製法も提供される。 また、本発明は、本発明の試薬から、放射性標識したＣＴ受容体結合化合物用 のキットを提供する。本発明のキットは、所定量の本発明の試薬、および所望に より該試薬を放射性標識するのに十分な量の還元剤を含有する密閉バイアルを含 む。 本発明は、本発明の放射性標識したＣＴ受容体結合剤の診断的および治療的使 用法を提供する。一の具体例において、方法は、ｉｎ ｖｉｖｏ造影を得ること によって哺乳動物体内の部位を造影するための標識体における本発明の試薬を使 用するのに提供される。 また、本発明は、動物に本発明の治療的に有効量の放射性標識ＣＴ受容体結合 試薬を投与する工程を含めたＣＴ受容体の発現または過剰発現によって特徴付け られる疾患を軽減する方法を提供する。 本発明の他の態様および利点は、以下に記載された、次の好ましい具体例のよ り詳細な記載において明らかである。 発明の詳細な記載 本発明は、診断用および治療用のＣＴ受容体結合製剤の調製に有用なＣＴ受容 体結合試薬を提供する。本発明の目的について、「ＣＴ受容体結合化合物」なる 用語は、当業者によって認識されたさまざまな細胞型において発現したＣＴ受容 体に特異結合するＣＴ、ＣＴの断片、ＣＴのアナログ、およびＣＴの誘導体を自 然発生するのを達成することを意図する。また、該受容体結合特性を真似て設計 された化合物は、この定義に含まれ、本発明によって達成される。 本発明の目的について、「ＣＴ受容体結合親和性」なる用語は、とりわけ、解 離定数、阻害定数またはＩＣ₅₀値によって結合親和性を測定するこれらの方法を 含めて、当業者に知られたいずれかの方法によって測定されるごとき結合親和性 を意味することを意図する。 「該受容体についての放射性ヨウ素化ＣＴの親和性の少なくとも10分の１のＣ Ｔ受容体結合親和性を有する」なる用語は、ＣＴ受容体直接結合または競合的阻 害アッセイにおいて測定されるごとく、該試薬の解離定数（Ｋ_d）が放射性ヨウ 素化 ＣＴのＫ_dより１０倍以上であること、または該試薬の阻害定数（Ｋ_i）またはＩ Ｃ₅₀が、ＣＴ受容体競合的阻害アッセイにおいて測定されるごとく、放射性ヨウ 素化ＣＴより１０倍以下であることを意味することを意図する。 「該受容体について天然のＣＴまたはＣＴの放射性ヨウ素化種以上のＣＴ受容 体結合親和性を有する」なる用語は、ＣＴ受容体直接結合または競合的阻害アッ セイにおいて測定されるごとく、非標識ＣＴまたは放射性ヨウ素化ＣＴ以上の解 離定数（Ｋ_d）を有する試薬を達成することを意図する。あるいは、この用語は 、ＣＴ受容体競合的阻害アッセイにおいて測定されるごとき天然のＣＴまたは放 射性ヨウ素化ＣＴ以下の阻害定数（Ｋ_i）またはＩＣ₅₀を有することを試薬が達 成するように解釈できる。 本発明に従って、本発明の試薬は、以下に記載のごとき標準化されたアッセイ において比較した場合、該受容体についての放射性ヨウ素化天然ＣＴの親和性よ り少なくとも１０倍大きいＣＴ受容体結合を有する。好ましい具体例において、 本発明の試薬は、該標準化されたアッセイにおいて比較した場合、該受容体につ いて、天然のＣＴまたは天然のＣＴの放射性ヨウ素化種以上に大きいＣＴ受容体 結合親和性を有する。 ＣＴ受容体に関する本発明の放射性医薬の解離定数または結合阻害定数、なら びに¹²⁵Ｉ標識ＣＴ自体の結合とかかる結合の親和性または結合活性は、Ｒｅｃ ｅｐｔｏｒｓ、Ａ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ａｐｐｒｏａｃｈ、Ａ.Ｌｅｖｉ ｔｚｋｉ、Ｔｈｅ Ｂｅｎｉａｍｉｎ/Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ(Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、１９８４)に記載されたもののごとき公 知の方法を用いて決定できる。好ましくは、以下の実施例４に記載されたアッセ イのごとき標準化されたＣＴ受容体結合アッセイを使用して、本発明の試薬のＣ Ｔ受容体結合親和性を測定する。 該ＣＴ受容体結合化合物に加えて、本発明によって供された試薬は、ＣＴ受容 体についての該化合物の結合特異性が実質的に変更されるかかる方法において該 化合物と共有結合する放射性キレート化剤を含む。 いずれの放射性金属キレート化剤もＣＴ受容体結合化合物に共有結合して、本 発 明の試薬を提供できる。例えば、ＣＴ受容体結合化合物、好ましくはペプチドは 、式： Ｃ(ｐｇｐ)^S-(ａａ)-Ｃ(ｐｇｐ)^S ［式中、(ｐｇｐ)^Sは水素またはチオール保護基であって、(ａａ)はチオール基 を含まないいずれかのα-またはβ-アミノ酸である。好ましい具体例において、 該アミノ酸はグリシンである］ を有するキレート化剤に共有結合できる。 他の実施例として、本発明の試薬に有用な放射性金属キレート化剤は、式： Ａ−ＣＺ(Ｂ)-{Ｃ(Ｒ^aＲ^b)}_n-Ｘ ［式中、ＡはＨ、ＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、(ペプチド)-ＮＨＯＣ、(ペプチド)-Ｏ ＯＣ、Ｒ^c ₂ＮＣＯまたはＲ^d；Ｂは、Ｈ、ＳＨまたは-ＮＨＲ^c、-Ｎ(Ｒ^c)-(ペプ チド)またはＲ^d；Ｚは、ＨまたはＲ^d；Ｘは、ＳＨまたは-ＮＨＲ^c、-Ｎ(Ｒ^c)-( ペプチド)またはＲ^d；Ｒ^a、Ｒ^b、Ｒ^cおよびＲ^dは、独立してＨまたは直鎖もしく は分岐鎖または環状低級アルキル；ｎは、０、１または２；Ｒ^cはＣ₁-Ｃ₂アルキ ル、アミノ酸または２ないし約１０個のアミノ酸を含むペプチド；および：(１) ここに、Ｂは、-ＮＨＲ^cまたは-Ｎ(Ｒ^c)-(ペプチド)、ＸはＳＨであって、ｎは １または２；(２)ここに、Ｘは、-ＮＨＲ^cまたは-Ｎ(Ｒ^c)-(ペプチド)、ＢはＳ Ｈであって、ｎは１または２；(３)ここに、ＢはＨまたはＲ^d、ＡはＨＯＯＣ、 Ｈ₂ＮＯＣ、(ペプチド)-ＮＨＯＣまたは(ペプチド)-ＯＯＣ、ＸはＳＨであって 、ｎは０または１；(４)ここに、ＡはＨまたはＲ^d、次いで、ここにＢはＳＨ、 Ｘは-ＮＨＲ^cまたは-Ｎ(Ｒ^c)-(ペプチド)であって、ＸはＳＨ、Ｂは-ＮＨＲ^cま たは-Ｎ(Ｒ^c)-(ペプチド)であって、ｎは１または２；(５)ここに、ＸはＨまた はＲ^d、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、(ペプチド)-ＮＨＯＣまたは(ペプチド)-ＯＯ Ｃであって、ＢはＳＨ；(６)ここに、Ｚはメチル、Ｘはメチル、ＡはＨＯＯＣ、 Ｈ₂ＮＯＣ、(ペプチド)-ＮＨＯＣまたは(ペプチド)-ＯＯＣであり、ＢはＳＨで あって、ｎは０；および(７)ここに、ＢはＳＨ、ＸはＳＨでなくて、ここにＸは ＳＨ、ＢがＳＨでない］ の単一チオール含有基を含む。 この放射性金属キレート化剤の好ましい具体例は、化学式： Ｒ¹-ＣＯ-(アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-Ｚ ［式中、(アミノ酸)¹および(アミノ酸)²は、各々独立して、チオール基を含まな いいずれかの第一α-またはβ-アミノ酸、Ｚはシステイン、ホモシステイン、イ ソシステイン、ペニシラミン、２−メルカプトエチルアミンまたは３-メルカプ トプロリルアミンであるチオール含有基であって、Ｒ¹は低級(Ｃ¹-Ｃ⁴)アルキル 、アミノ酸または２ないし１０個のアミノ酸を含むペプチドである。Ｚがシステ イン、ホモシステイン、イソシステインまたはペニシラミンである場合、該基の カルボニル基は、ヒドロキシル基、ＮＲ³Ｒ⁴基に共有結合し、ここに各Ｒ³およ びＲ⁴は、独立してＨまたは低級(Ｃ¹-Ｃ⁴)アルキル、アミノ酸または２ないし１ ０個のアミノ酸を含むペプチドである］；または Ｙ-(アミノ酸)²-(アミノ酸)¹-ＮＨＲ² ［式中、Ｙはシステイン、ホモシステイン、イソシステイン、ペニシラミン、２ -メルカプトアセテートまたは３-メルカプトプロピオネートであるチオール含有 基であり、(アミノ酸)¹および(アミノ酸)²は、各々独立して、チオール基を含ま ないいずれかの第一α-またはβ-アミノ酸であって、Ｒ²はＨまたは低級(Ｃ¹-Ｃ⁴ )アルキル、アミノ酸または２ないし１０個のアミノ酸を含むペプチドである。 Ｙがシステイン、ホモシステイン、イソシステインまたはペニシラミンである場 合、該基のアミノ基は、-Ｈ、アミノ酸または２ないし１０個のアミノ酸を含む ペプチドに共有結合する］ を有する。 本発明のこの態様の特定の具体例において、この放射性金属キレート化剤の式 は： -(アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-Ａ-ＣＺ(Ｂ)-{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n-Ｘ}、 -Ａ-ＣＺ(Ｂ)-{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n-Ｘ}-(アミノ酸)¹-(アミノ酸)²、 -(第一α,ω-またはβ,ω-ジアミノ酸)-(アミノ酸)¹-Ａ-ＣＺ(Ｂ)-{Ｃ(Ｒ¹ Ｒ²)}_n-Ｘ}、 および -Ａ-ＣＺ(Ｂ)-{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n-Ｘ}-(アミノ酸)¹-(第一α,β-またはα,γ- ジアミノ酸) ［式中、(アミノ酸)¹および(アミノ酸)²は、各々独立して、いずれかの自然発生 の、修飾された、置換または変更されたチオール基を含まないα-またはβ-アミ ノ酸；ＡはＨ、ＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)-ＮＨＯＣ、( アミノ酸またはペプチド)-ＯＯＣまたはＲ⁴；ＢはＨ、ＳＨまたは-ＮＨＲ³、-Ｎ (Ｒ³)-(アミノ酸またはペプチド)またはＲ⁴；ＺはＨまたはＲ⁴；ＸはＳＨまたは -ＮＨＲ³、-Ｎ(Ｒ³)-(アミノ酸またはペプチド)またはＲ⁴；Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およ びＲ⁴は、独立してＨまたは直鎖もしくは分岐鎖または環状低級アルキル；ｎは 、０、１または２のいずれかの整数；(ペプチド)は２ないし約１０個のアミノ酸 のペプチド；および：(１)ここに、Ｂは、-ＮＨＲ³または-Ｎ(Ｒ³)-(アミノ酸ま たはペプチド)、ＸはＳＨであって、ｎは１または２；(２)ここに、Ｘは、-ＮＨ Ｒ³または-Ｎ(Ｒ³)-(アミノ酸またはペプチド)、ＢはＳＨであって、ｎは１また は２；(３)ここに、ＢはＨまたはＲ⁴、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、(アミノ酸ま たはペプチド)-ＮＨＯＣまたは(アミノ酸またはペプチド)-ＯＯＣ、ＸはＳＨで あって、ｎは０または１；(４)ここに、ＡはＨまたはＲ⁴、次いで、ここにＢは ＳＨ、Ｘは-ＮＨＲ³または-Ｎ(Ｒ³)-(アミノ酸またはペプチド)であって、Ｘは ＳＨ、Ｂは-ＮＨＲ³または-Ｎ(Ｒ³)-(アミノ酸またはペプチド)であって、ｎは １または２；(５)ここに、ＸはＨまたはＲ⁴、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、(アミ ノ酸またはペプチド)-ＮＨＯＣまたは(アミノ酸またはペプチド)-ＯＯＣであっ て、ＢはＳＨ；(６)ここに、Ｚはメチル、Ｘはメチル、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯ Ｃ、(アミノ酸またはペプチド)-ＮＨＯＣまたは(アミノ酸またはペプチド)-ＯＯ Ｃであり、ＢはＳＨであって、ｎは０；および(７)ここに、ＢはＳＨ、ＸはＳＨ でなくて、ここにＸはＳＨ、ＢがＳＨでない］ よりなる群から選択される。 本発明のこの態様の特に好ましい具体例は、-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｃｙｓ-、Ｃｙｓ -Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-、Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｃｙｓ-、-(ε-Ｌｙｓ)-Ｇｌｙ-Ｃｙｓ-、(δ -Ｏｒｎ)-Ｇｌｙ-Ｃｙｓ-、-(γ-Ｄａｂ)-Ｇｌｙ-Ｃｙｓ-、-(β-Ｄａｐ)-Ｌｙ ｓ-Ｃｙｓ-および-(β-Ｄａｐ)-Ｇｌｙ-Ｃｙｓ-よりなる群から選択される式を 有する放射性金属キレート化剤を含む。（これらの式において、ε-Ｌｙｓは典 型的なα- アミノ基よりむしろε-アミノ基が、隣接したアミノ酸のカルボキシル基に共有 結合してペプチド結合を形成するリジン残基を表し；δ-Ｏｒｎは典型的なα-ア ミノ基よりむしろδ-アミノ基が、隣接したアミノ酸のカルボキシル基に共有結 合してペプチド結合を形成するオルニチン残基を表し；γ-Ｄａｂはγ-アミノ基 が、隣接したアミノ酸のカルボキシル基に共有結合してペプチド結合を形成する ２,４-ジアミノ酪酸残基を表し；次いで、β-Ｄａｐはβ-アミノ基が、隣接した アミノ酸のカルボキシル基に共有結合してペプチド結合を形成する１,３-ジアミ ノプロピオン酸残基を表すと理解されるであろう） 他の具体例において、本発明の試薬の放射性金属キレート化剤は、 式： ［式中、各Ｒは独立してＨ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅；各(ｐｇｐ)^Sは独立してチオー ル保護基またはＨ；ｍ、ｎおよびｐは独立して２または３；Ａは直鎖または環状 低級アルキル、アリール、複素環、その組合せまたは置換誘導体；およびＸはペ プチドである］ を有するビスアミノ-ビスチオールキレート化剤である。 別法として、本発明のこの具体例におけるビスアミノビスチオールキレート化剤 は、式：［式中、各Ｒは独立してＨ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅；ｍ、ｎおよびｐは独立して２ ま たは３；Ａは直鎖または環状低級アルキル、アリール、複素環、その組合せまた は置換誘導体；ＶはＨまたはＣＯ-ペプチド；Ｒ'はＨまたはペプチド；ＶがＨの 場合、Ｒ'はペプチドであり、Ｒ'がＨの場合、ＶはＣＯ-ペプチドである。本発 明の目的では、これらの構造を有するキレート基は「ＢＡＴ」基という］ を有する。 別法として、本発明の試薬において用いられた放射性金属キレート化剤は、ジ エチレントリアミン五酢酸(ＤＴＰＡ) (ＨＯＯＣＣＨ₂)₂Ｎ(ＣＲ₂)(ＣＲ₂)Ｎ(ＣＨ₂ＣＯＯＨ)(ＣＲ₂)(ＣＲ₂)Ｎ(Ｃ Ｈ₂ＣＯＯＨ)₂ ［式中、各Ｒは独立してＨ、Ｃ₁ないしＣ₄アルキル、またはアリールであって、 一つのＲは二価のリンカーに共有結合し； エチレンジアミン四酢酸(ＥＤＴＡ)： (ＨＯＯＣＣＨ₂)₂Ｎ(ＣＲ₂)(ＣＲ₂)Ｎ(ＣＨ２ＣＯＯＨ) ［式中、各Ｒは独立してＨ、Ｃ₁ないしＣ₄アルキル、またはアリールであって、 一つのＲは二価のリンカーに共有結合する］； １,４,７,１０-テトラアザドデカン四酢酸； ［式中、ｎは２または３である整数であり、ここに各Ｒは独立してＨ、Ｃ₁ない しＣ₄アルキル、またはアリールであって、一つのＲはＣＴ受容体結合化合物お よびデスフェリオキサミンに共有結合する。大部分の放射性金属は、上記の放射 性金属キレート化剤を含む本発明の試薬にキレートできる］ よりなる群から選択される式を有し得る。 また、本発明の試薬は、 (ｉ)式： を有する基、 (ii)式： を有する基、 ［式中、ｎ、ｍおよびｐは、独立して０または１である各整数；各Ｒ'は、独立 してＨ、低級アルキル、Ｃ₂-Ｃ₄ヒドロキシアルキルまたはＣ₂-Ｃ₄アルコキシア ルキル、および各Ｒは独立してＨまたはＲ''、ここにＲ''はチオール基を含まな い置換または非置換低級アルキルまたはフェニル；および一つのＲまたはＲ'は Ｌ、ここにＬはターゲッティング基に金属キレート化剤を結合する二価のリンカ ー基であって、一つのＲ'がＬである場合、ＮＲ'₂はアミンである］ よりなる群から選択される放射性金属キレート化剤を含むことができる。 好ましい具体例において、ＬはＣ₁-Ｃ₆直鎖、分岐鎖または環状アルキル基、 カルボン酸エステル、カルボキシアミド、スルホンアミド、エーテル、チオエー テル、アミン、アルケン、アルキン、１,２-、１,３-または１,４-結合の、所望 により置換されてもよいベンゼン環またはアミノ酸または２ないし約１０個のア ミノ酸のペ プチド、またはその組合せである。 好ましい具体例において、Ｒ''はＣ₁-Ｃ₆直鎖、分岐鎖または環状アルキル基 ；-Ｃ_qＯＣ_r-、-Ｃ_qＮＨＣ_r-または-Ｃ_qＳＣ_r-基、ここにｑおよびｒはｑ＋ｒの 合計が６以下である独立して１ないし５の整数であり；(Ｃ₁-Ｃ₆)アルキル-Ｘ、 ここにＸはヒドロキシル基、置換アミン、グアニジン、アミジン、置換チオール 基またはカルボン酸、エステル、リン酸または硫酸基であり；フェニル基または ハロゲンヒドロキシル、置換アミン、グアニジン、アミジン、置換チオール、エ ーテル、リン酸または硝酸基で置換されたフェニル基；インドール基；１ないし ３個の窒素、酸素またはイオウ原子またはその組合せを含むＣ₁-Ｃ₆複素環基で ある。 本発明に従って、ＣＴ受容体結合試薬の放射性金属キレート化剤は、 式： ［式中、Ｒ¹およびＲ²は各々独立してＨ、低級アルキル、Ｃ₂-Ｃ₄ヒドロキシア ルキル、またはＣ₂-Ｃ₄アルコキシアルキル；Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶は独立し てＨ、チオール基を含まない置換または非置換の低級アルキルまたはフェニル； Ｒ⁷およびＲ⁸は各々独立してＨ、低級アルキル、低級ヒドロキシアルキルまたは 低級アルコキシアルキル；Ｌは二価のリンカー基であって、ＺはＣＴペプチドで ある］ を有し得る。 本発明のさらに好ましい金属キレート化剤は、 式： ［式中、Ｒ¹およびＲ²は各々独立してＨ、低級アルキル、Ｃ₂-Ｃ₄ヒドロキシア ルキル、またはＣ₂-Ｃ₄アルコキシアルキル；Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶は独立し てＨ、チオール基を含まない置換または非置換の低級アルキルまたはフェニル、 およびＲ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵またはＲ⁶のうち一つはＺ-Ｌ-ＨＮ(ＣＨ₂)_n-であり、ここ にＬは二価のリンカー基、Ｚはターゲッティング基、およびｎは１ないし６の整 数；Ｒ⁷およびＲ⁸は各々独立してＨ、低級アルキル、低級ヒドロキシアルキルま たは低級アルコキシアルキル；およびＸは、アミノ基、置換アミノ基または-Ｎ Ｒ¹-Ｙ、ここにＹはアミノ酸、アミノ酸アミド、または２ないし１０個のアミノ 酸を含むペプチドである］ のキレート化剤を含む。 本発明のさらに好ましい金属キレート化剤は、 式： ［式中、Ｒ¹およびＲ²は各々独立してＨ、低級アルキル、低級ヒドロキシアルキ ルまたは低級アルケニルアルキル；Ｒ³およびＲ⁴は独立してＨ、チオール基を含 まない置換または非置換の低級アルキルまたはフェニル；ｎは１ないし６の整数 ；Ｌは二価リンカー基；およびＺはＣＴペプチド基である］ を有するキレート化剤を含む。 さらにより好ましいキレート基は、式： ［式中、Ｌは二価リンカー基およびＺはＣＴペプチド基である］ のキレート化剤を含む。 本発明の最も好ましいキレート基は、以下の式： (アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-システイン-、 (アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-イソシステイン-、 (アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-ホモシステイン-、 (アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-ペニシラミン-、 (アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-２-メルカプトエチルアミン-、 (アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-２-メルカプトブロリルアミン-、 (アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-２-メルカプト-２-メチルプロピルアミン-、 (アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-３-メルカプトプロリルアミン-、 ［式中、(アミノ酸)はチオール基を含まない第一αまたはβアミノ酸であって、 ここに、該キレート化剤は、キレート化剤のカルボキシル末端またはアミノ酸基 のうち一つの側鎖と共有結合を介してターゲッティング基またはリンカー基のい ずれかに結合する］ を有するキレート化剤を含む。 また、最も好ましいキレート化剤は、上記の式のキレート化剤を含み、ここに 、(アミノ酸)¹は、α,ω-またはβ,ω-アミノ酸のいずれかであり、ここに該α- またはβ-アミノ基は、遊離アミンであって、該α,ω-またはβ,ω-アミノ酸は ωアミノ基を介して共有結合する。 他の最も好ましいキレート化剤は、 -システイン-(アミノ酸)-(α,β-またはβ,γ-ジアミノ酸)； -イソシステイン-(アミノ酸)-(α,β-またはβ,γ-ジアミノ酸)； -ホモシステイン-(アミノ酸)-(α,β-またはβ,γ-ジアミノ酸)； -ペニシラミン(アミノ酸)-(α,β-またはβ,γ-ジアミノ酸)； ２-メルカプト酢酸-(アミノ酸)-(α,β-またはβ,γ-ジアミノ酸)； ２-または３-メルカプトプロピオン酸-(アミノ酸)-(α,β-またはβ,γ-ジア ミノ酸)； ２-メルカプト-２-メチルプロピオン酸-(アミノ酸)-(α,β-またはβ,γ-ジア ミノ酸)； ［式中、(アミノ酸)はチオール基を含まない第一α-またはβ-アミノ酸であって 、ここに、キレート化剤は、該キレート化剤のアミノ酸末端またはアミノ酸基の うちの一つの側鎖との共有結合を介してターゲッティング基またはリンカー基の いずれかに結合する］ よりなる群から選択されるものを含む。 特に好ましい金属キレート化剤は、Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｃｙｓ-、Ａｒｇ-Ｇｌｙ- Ｃｙｓ-、-(ε-Ｌｙｓ)-Ｇｌｙ-Ｃｙｓ-、-(δ-Ｏｒｎ)-Ｇｌｙ-Ｃｙｓ-、-(γ- Ｄａｂ)-Ｇｌｙ-Ｃｙｓ-、-(β-Ｄａｐ)-Ｌｙｓ-Ｃｙｓ-および-(β-Ｄａｐ)-Ｇ ｌｙ-Ｃｙｓ-よりなる群から選択される。（これらの式において、アミノ酸表示 は、前記と同一の意味を有する） 上記の式IIIを有する放射性金属キレート化剤の例は、該キレート基が構造： を有するＧｌｙ-Ｇｌｙ-Ｃｙｓ-である。 構造タイプＶIIを有するキレートリガンドは、構造：を有するオキソテクネチウム錯体を形成する。 上記の構造タイプＶを有する放射性金属キレート化剤の例は、構造： のキレート化剤を形成するＬｙｓ-(ω-ペプチド)-Ｇｌｙ-Ｃｙｓ.アミドである 。 構造タイプＩＸを有するキレートリガンドは、構造： を有するオキソテクネチウム錯体を形成する。 上記の構造IIを有する放射性金属キレート化剤を含む本発明の試薬の例は、構 造： のキレート化剤を形成する(ターゲッティング基)-Ｃｙｓ-Ｇｌｙ-α,β-ジアミ ノブロピオンアミドである。 構造タイプＸＩを有する放射性診断剤は、構造： を有するオキソテクネチウム錯体を形成する。 チオール保護基{(ｐｇｐ)^S}に共有結合したチオールを含む本発明によって提 供された放射性金属キレート化剤およびＣＴ受容体結合試薬において、該チオー ル保護基は、同一または異なることができ、限定されるものではないが、 -ＣＨ₂-アリール(アリールは、フェニルまたはアルキルもしくはアルキルオキ シで置換されたフェニルである)； -ＣＨ-(アリール)₂、(アリールは、フェニルまたはアルキルもしくはアルキル オキシ置換されたフェニル)； -Ｃ-(アリール)₃、(アリールは、フェニルまたはアルキルもしくはアルキルオ キシ置換されたフェニル)； -ＣＨ₂-(４-メトキシフェニル)； -ＣＨ-(４-ピリジル)(フェニル)₂； -Ｃ(ＣＨ₃)₃ -９-フェニルフルオレニル； -ＣＨ₂ＮＨＣＯＲ(Ｒは、置換または非置換のアルキルまたはアリール)： -ＣＨ₂-ＮＨＣＯＯＲ(Ｒは、置換または非置換のアルキルまたはアリール)； -ＣＯＮＨＲ(Ｒは、置換または非置換のアルキルまたはアリール)； -ＣＨ₂-Ｓ-ＣＨ₂-フェニルであり得る。 好ましい保護基は、-ＣＨ₂-ＮＨＣＯＲを有し、ここに、Ｒが１および８個の間 の炭素原子を有する低級アルキル、フェニル、または低級アルキル、ヒドロキシ ルアルキル、低級アルコキシ、カルボキシ、または低級アルコキシカルボニル置 換され たフェニルである。最も好ましい保護基は、アセトアミドメチル基である。 本発明の試薬がペプチドであるＣＴ受容体結合化合物を含む場合、該ペプチド は、好ましくは、アミノ酸配列： ［式中、Ｘはシステイン残基、ホモシステイン残基およびホモホモシステイン残 基よりなる群から選択される］ を含む。別法として、該ペプチドは、アミノ酸配列： ［式中、Ｘ¹はアラニン残基、グリシン残基、およびセリン残基よりなる群から 選択され；Ｘ²はシステイン残基、ホモシステイン残基およびホモホモシステイ ン残基よりなる群から選択される］ を含み得る。かかるペプチドは、以下に記載されたアミノ酸配列： および において特に具体化されるもののごとき自然発生のヒトＣＴおよびＣＴペプチド アナログを含む。 本発明の試薬の特に好ましい具体例は、 全ての自然発生のアミノ酸は、標準的略語を用いて略記される(Ｇ.Ｚｕｂａｙ 、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ(２ｄ.ｅｄ.).１９８８(ＭａｃＭｉｌｌｅｎ、Ｐｕ ｂｌｉｓｈｉｎｇ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ)ｐ.３３に見出される)。本発明の目的では 、自然発生のアミノ酸は、親油性(アラニン、イソロイシン、ロイシン、メチオ ニン、フェニルアラニン、チロシン、プロリン、トリプトファンおよびバリンな らびにシステインのＳ-アルキル化誘導体)、親水性(アスパラギン、グルタミン 、トレオニン、セリン)、酸性(グルタミン酸およびアスパルギン酸)、塩基性(ア ルギニン、ヒスチジンおよびリジン)のごとく特徴付けられる。ε-Ｋ、δ-Ｏｒ ｎ、γ-Ｄａｂおよびβ−Ｄａｐは、上記の意味を有する。(ＢＡＴ)は、Ｎ⁶,Ｎ⁹ -ビス(２-メルカプト-２-メチル-プロピル)-６,９-ジアザノナン酸を表し;Ｋ.( ＢＡＴ)およびＬｙｓ.(ＢＡＴ)は、(ＢＡＴ)のアミノ酸側鎖上のε-アミノ基に てアシル化されたアミノ酸リジンを表し；Ｃ(ＢＡＴ)およびＣｙｓ(ＢＡＴ)は、 Ｓ-(Ｎ⁶,Ｎ⁹-ビス(２-メルカプト-２-メチルプロピル)-６,９-ジアザノナン-１- イル)システインを表し;(ＢＡＴ)は、(Ｎ⁶,Ｎ⁹-ビス(２-メルカプト-２-メチル プロピル)-１,４,１０-トリアザデカン;(ＢＡＴ-ＢＭ)は、Ｎ-{２-(Ｎ',Ｎ'-ビ ス(２-マレイミドエチル)アミノエチル}-Ｎ⁹-(ｔ-ブトキシカルボニル)-Ｎ⁶,Ｎ⁹ -ビス(２-メチル-２-トリフェニル-メチルチオプロピル)-６,９-ジアザノナンア ミド；(ＢＡＴ−ＢＳ)は、Ｎ-{２-(Ｎ',Ｎ'-ビス(２-スクシンイミドエチル)ア ミノエチル}-Ｎ⁶,Ｎ⁹-ビス(２-メルカプト-２-メチルプロピル)-６,９-ジアザノ ナンアミド；(ＢＭＨ)は、ビス-マレイミドヘキサン；(ＢＳＨ)は、ビス-スクシ ンイミドヘキサン；(ＢＭＭＥ)はビス-マレイミドメチルエーテル；(ＢＳＥＥ) は、ビス-スクシンイミドエチルエーテル；(ＢＭＥＥ)はビス-マレイミドエチル エーテル；および(ＢＳＭＥ)は、ビス-スクシンイミドメチルエーテルである。 本明細書に用いるごとく、次のアミノ酸およびアミノ酸アナログは、以下の略語 によって表されることを意図する：Ａｃｍは、スルフヒドリル 保護アセトアミドメチル；Ｐｅｎはペニシラミン；Ａｃａは、６-アミノカプロ ン酸；Ｈｌｙはホモリジン；Ａｐｃは、Ｌ-{Ｓ-(３-アミノプロピル)システイン ；Ｆ_Dは、Ｄ-フェニルアラニン；Ｗ_Dは、Ｄ-トリプトファン；Ｙ_Dは、Ｄ-チロシ ン；Ｃｐａは、Ｌ-(４-クロロフェニル)アラニン；Ｔｈｐは、４-アミノ-テトラ ヒドロチオピラン-４-カルボン酸；Ｄ-Ｎａｌは、Ｄ-２-ナフチルアラニン；Ｄ ｇｐは、ジプロピルグリシン；Ｎｌｅはノルロイシン；Ｈｃｙはホモシステイン ；Ｈｈｃは、ホモホモシステイン；Ａｉｂは、アミノイソ酪酸；Ｎａｌは、２- ナフチルアラニン；Ｄ−Ｎａｌは、Ｄ-２-ナフチルアラニン；Ａｉｎは、２-ア ミノインダン-２-カルボン酸；Ａｃｈｘａは、４-アミノ-シクロヘキシルアラニ ン；Ａｍｆは４-アミノメチル-フェニルアラニン；Ａｅｃは、Ｓ-(２-アミノエ チル)システイン；Ａｐｃは、Ｓ-(３-アミノプロピル)システイン；Ａｅｓは、 Ｏ-(２-アミノエチル)セリン；Ａｐｓは、Ｏ-(３-アミノプロピル)セリン；Ａｂ ｕは、２-アミノ酪酸；Ｎｖａは、ノルバリン；およびＡｓｕは、２-アミノスベ リン酸、ここに、Ａｓｕ残基を含むペプチドのアミノ末端アミノ酸は、アミノ末 端アミノ基およびＡｓｕ残基の側鎖のカルボン酸基間のアミド結合を介して環化 する。 本発明により、ＣＴ受容体結合ペプチドは、アミノ酸側鎖に結合した放射性金 属キレート化剤を有する１以上のアミノ酸誘導体を含み得る。好ましくは、放射 性金属キレート化剤は、該ＣＴ受容体結合ペプチドのカルボシル末端にて該ペプ チドに組込まれる。さらに好ましくは、放射性金属キレート化剤は、天然ペプチ ドの１４位に対応するシステインの側鎖イオウ原子で合成のＣＴ受容体結合ペプ チドに組み込まれる。最も好ましくは、該放射性金属キレート化剤は、該配列： を有するＣＴ受容体結合ペプチドのアミノ酸の側鎖に組込まれる。 最も好ましくは、該放射性金属キレート化剤は、配列番号：９の該ペプチドの １３位のシステインの側鎖イオウ原子にてＣＴ受容体結合ペプチドに組込まれる （配列番号：９で太字強調により区別）。 本発明の該試薬のさらなる具体例は、少なくとも２つの合成ＣＴ受容体結合化 合物を含み、各化合物は、放射性金属キレート化剤と共有結合し、多価リンカー は、 各化合物への結合、各キレート化剤への結合およびある化合物および他の化合物 のキレート化剤への結合よりなる群から選択される共有結合を形成する。また、 この具体例のさらなる変更は、本発明に従って生じ得る。本発明のこの具体例に おける用途に適当な多価リンカーは、ＣＴアナログ、ＣＴ受容体結合化合物、Ｃ Ｔペプチドまたは放射性金属キレート化剤に共有結合できる、またはＣＴ受容体 結合化合物および放射性金属キレート化剤に共に結合できる少なくとも２つの同 一官能基を含む。好ましい官能基は、限定なくして、第一アミン、第二アミン、 ヒドロキシル基、カルボン酸基またはチオール反応基を含む。好ましい具体例に おいて、該多価リンカーは、ビス-スクシンイミジルメチルエーテル(ＢＳＭＥ) 、ビス-スクシンイミドエチルエーテル(ＢＳＥＥ)、４-(２,２-ジメチルアセチ ル)安息香酸(ＤＭＢＡ)、Ｎ-{２-(Ｎ',Ｎ'-ビス(２-スクシンイミド-エチル)ア ミノエチル)}-Ｎ⁶,Ｎ⁹-ビス(２-メチル-２-メルカプト-プロピル)-６,９-ジアザ ノナンアミド(ＢＡＴ-ＢＳ)、トリス(スクシンイミジルエチル)アミン(ＴＳＥＡ )、ビス-スクシンイミドヘキサン(ＢＳＨ)、４-(Ｏ-ＣＨ₂ＣＯ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ- Ｃｙｓ.アミド)-２-メチルプロピオフェノン(ＥＴＡＣ)、トリス(アセトアミド エチル)アミン、ビス-アセトアミドメチルエーテル、ビス-アセトアミドエチル エーテル、α,ε-ビス-アセチルリジン、リジンおよび１,８-ビス-アセトアミド -３,６-ジオキサ-オクタン、またはその誘導体を含む。 本発明によって提供されたＣＴ受容体結合化合物は、いずれかの適当な合成法 を用いてｉｎ ｖｉｔｒｏにて化学合成できる。好ましくは、ＣＴペプチドは、 組換え法を用いて本発明により合成できる。より好ましくは、ＣＴペプチド、Ｃ Ｔペプチド誘導体およびＣＴペプチドアナログは、ペプチド合成機を用いて本発 明により一般的に有利に調製できる。本発明のＣＴペプチドは、固相ペプチド合 成法のごとき当業者によく知られた技術を用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏにて化学合 成の間に該ペプチドに放射性金属キレート化剤を共有結合させることによって、 好ましく合成される。このように、放射性金属キレート化剤は、該ペプチドの実 質的にいずれかの位置にて基選択的様式の該ペプチドに組込み、それによって、 ＣＴ受容体についての該ペプチドの親和性および特異性の減少を防止できる。 本発明に従って、ＣＴ受容体結合ペプチドは、保護されたチオール含有アミノ 酸、典型的には、システイン残基を有して調製され、該ペプチドへ組み込まれる 。合成樹脂からの該ペプチドの切断およびアミノ末端残基の環化に続いて、該保 護されたチオール基は、脱保護され、放射性金属キレート化剤およびチオール反 応基を含む置換基で合成される。 上記のごとく、本発明のＣＴ受容体結合試薬は、放射性標識して、放射性診断 剤または放射性治療剤を提供できる。本発明の放射性標識試薬を用いた例示的な 放射性診断の適用は、シンチグラム造影であり、ここに、ＣＴ受容体を担う腫瘍 の局在および程度を決定できる。本明細書において用いられた「シンチグラム造 影剤」なる用語は、放射活性を検出する手段(限定されるものではないが、ガン マ-カメラまたはシンチレーション検出プローブを含む)によって放射性標識試薬 を検出できることを達成することを意味する。本発明の放射性治療の具体例にお いて、ＣＴ受容体結合試薬は、細胞傷害性放射性ヌクレオチドで標識され、動物 、好ましくはヒトにおける疾患または他の軽い病気に有用であり、かかる疾患ま たは他の軽い病気は、ＣＴ受容体の発現または過剰発現によって特徴付けられる 。ＣＴ関連疾患または軽い病気は、限定されるものでないが、乳癌、卵巣癌、肺 癌、リンパ腫、およびかかる腫瘍を含む細胞の細胞表面上にＣＴ受容体の発現を 介するＣＴ受容体結合化合物、ＣＴまたはその誘導体ならびにアナログを結合で きる悪性腫瘍または良性腫瘍の増殖によって特徴付けられる他の疾患を含む。 いずれの放射性金属も本発明の試薬と錯体化して、放射性診断剤または放射性 治療剤を供給できる。例えば、本発明の試薬は、テクネチウム-９９ｍ、ヨウ素- １２５またはヨウ素-１２３で放射性標識して、シンチグラム造影剤を提供でき る。また、本発明は、磁性、常磁性、超磁性または超常磁性の金属原子、イオン または粒子と錯体を形成できるＣＴ受容体結合試薬を提供する。また、本発明の ＣＴ受容体結合試薬は、スカンジウム-４７、銅-６７、ガリウム-７２、イット リウム-９０、スズ-１１７ｍ、ヨウ素-１２５、ヨウ素-１３１、サマリウム-１ ５３、ガドリニウム-１５９、ジスプロシウム-１６５、ホルミウム-１６６、イ ッテルビウム-１７５、ルテチウム-１７７、レニウム-１８６、レニウム-１８８ 、アスタチン-２１１、ビ スマス-２１２およびビスマス-２１３よりなる群から選択される細胞傷害性放射 性同位元素で有利に放射性標識して、放射性治療剤を提供できる。 本発明の該試薬を用いて放射活性テクネチウムまたはレニウムの錯体を形成す る場合、該テクネチウム錯体、好ましくはテクネチウム-９９の過テクネチウム 酸の塩、または過レニウム酸塩の形態におけるレニウムを還元剤の存在下、該試 薬と反応させる。好ましい還元剤は、亜ジチオン酸塩、第一スズおよび第一鉄イ オンであり；最も好ましい還元剤は、塩化第一スズである。別法として、該錯体 は、本発明の試薬とテクネチウムまたはレニウムの予め形成された不安定な錯体 、および転移リガンドとして公知のもう一つの化合物とを反応させることによっ て形成できる。このプロセスは、リガンド交換として公知であり、当業者によく 知られている。不安定な錯体は、例えば、酒石酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩 またはマンニトールのごとき転移リガンドを用いて形成できる。本発明で有用な テクネチウム-９９ｍの過テクネチウム酸塩またはレニウム塩には、ナトリウム 塩またはアンモニウム塩ならびに低級アルキルアンモニウム塩のごときアルカリ 金属塩を含む。 また、本発明は、放射性医薬としての用途の放射性標識試薬を調製するための キットにおいて具体化される。本発明のキットは、所定量のＣＴ受容体結合試薬 、および所望により、放射性金属がテクネチウム-９９ｍ、レニウム-１８６また はレニウム-１８８である場合に、還元剤を含有する密閉バイアルを含む。例え ば、本発明の適当量の試薬は、テクネチウム-９９ｍ、レニウム-１８６またはレ ニウム-１８８で該試薬を標識するのに十分な量で、塩化第一スズのごとき還元 剤を含むバイアルに導入される。また、（例えば、酒石酸塩、クエン酸塩、グル コン酸塩またはマンニトールのごとき）記載の適当量の転移リガンドは、キット に含まれる。また、該キットは、例えば、浸透圧調整用の医薬的に許容される塩 、緩衝剤、保存剤等のごとき慣用的医薬添加物を含む。該キットの成分は、液体 、凍結または乾燥形態であり得る。好ましい具体例において、キット成分は、凍 結乾燥形態で供される。本発明によるテクネチウム-９９ｍ、レニウム-１８６ま たはレニウム-１８８標識の放射性医薬は、以下の実施例に記載のごときバイア ルおよび条件下の反応の適当量のテクネチウム-９９ｍ、レニウム-１８６もしく はレニウム-１８８またはその放 射性ヌクレオチド錯体の添加によって調製できる。 本発明のキットは、診断造影に適した形態で、またはヨウ素-１２３およびヨ ウ素-１３１、好ましくはヨウ素-１２３を含めたヨウ素の放射性元素を用いた治 療剤として具体化できる。この具体例において、該キットは、ヨウ素同位体で放 射性標識できる所定量のＣＴ受容体結合試薬を含む、密閉バイアルを含む。この 具体例での用途に適当なＣＴ受容体結合試薬は、ＣＴ受容体に特異結合するＣＴ 自体、ＣＴ誘導体、ＣＴアナログ、ＣＴミメティクスおよびＣＴペプチドミメテ ィクスを含む。ペプチドおよびペプチドミメッティックＣＴ受容体結合試薬が具 体例において使用される場合、試薬中のチロシン残基は、放射性ヨウ素化できる 。かかるチロシン残基は、該ペプチドまたはペプチドミメティックにおいて自然 発生でき、または該チロシン残基は、ＣＴ受容体に対する試薬の結合を妨害しな い該ペプチドまたはペプチドミメティックの位置で付加できる。シンチグラムお よび治療用途用のテクネチウムおよびレニウム標識試薬について、この具体例の キットに用いられる、投与用量、投与部位および経路、製剤および投与される特 定の放射性活性は、本明細書に記載される。 本発明によって供された造影剤は、腫瘍の造影、特に、ＣＴ受容体を発現また は過剰発現する新生物細胞によって特徴付けられる初代および転移新生物部位を 造影し、特に、通常の方法を用いる検出に対して臨床的に不応性であった初代お よびとりわけ転移胸部、肺および卵巣腫瘍由来細胞のごときにおいて有用である 。本発明によって供された造影試薬は、これらの臓器において疾患を診断するた めの腎臓または骨のごとき臓器を視覚化するために使用できる。 診断目的では、有効な診断の量の本発明の診断剤または放射性診断剤は、好ま しくは、静脈内投与される。放射性診断の具体例において、放射性標識の局在は 、ガンマシンチグラム造影法のごとき慣用的な方法を用いて検出できる。非放射 活性の診断的具体例において、本発明の常磁性金属標識化診断剤の蓄積部位の局 在は、磁気共鳴造影法を用いて達成される。 シンチグラム造影では、本発明によるテクネチウム-９９ｍ標識試薬は、単一 の注射用量で投与される。本発明により供されたテクネチウム-９９ｍ標識試薬 は、 生理食塩水媒体のごとき静脈内注射用のいずれの通常の媒体または血漿媒体にお いて静脈注射できる。一般的に、投与されるべき単位用量は、約０.０１ｍＣｉ ないし約１００ｍＣｉ、好ましくは、１ｍＣｉないし２０ｍＣｉの放射活性を有 する。単位用量にて注射されるべき溶液は、約０.０１ｍｌないし約１０ｍｌで ある。静脈内投与後、ｉｎ ｖｉｖｏ造影は、数分間で行うことができる。しか しながら、造影は、放射性標識試薬が患者に注射された後、所望ならば、何時間 もより長く行なうことができる。大部分の場合、十分量の投与用量は、約０.１ 時間以内に造影されるべき領域を蓄積して、シンチフォト(ｓｃｉｎｔｉｐｈｏ ｔｏ)を撮るのを可能とする。診断目的のためのシンチグラム造影法のいずれの 慣用的な方法も本発明により利用できる。 本発明の目的では、放射性治療は、疼痛軽減ないし腫瘍切除の範囲のいずれか の治療効果または治療されるべき特定の癌に関連した症状の軽減を達成する。本 発明の該試薬は、治療目的に用いられる場合に、有効量の細胞傷害性放射性同位 元素で放射性標識される。この目的では、約１０ｍＣｉないし約２００ｍＣｉの 量の細胞傷害性放射性同位元素は、いずれかの適当な臨床的経路を介して、好ま しくは、静脈内注射によって投与できる。 本発明に従って、有効な放射性診断剤および放射性治療剤は、以下の通り同定 され得る。ＣＴ断片、ＣＴペプチドアナログおよびＣＴ誘導体を含めた、ＣＴ受 容体結合化合物を含む本発明の試薬は、本発明の方法を用いて合成され、放射性 金属キレート化剤を該化合物と共有結合させる。次いで、該試薬は、所望の放射 性金属と同様なキレート特性を有する放射性金属または非放射活性同位元素と錯 体化し、次いで、ＣＴ受容体結合は、放射性ヨウ素化ＣＴを用いて、本明細書で 記載のごとこきｉｎ ｖｉｔｒｏ競合結合アッセイにおいて評価した。この方法 の例として、ＲｅＯを使用して、以下の実施例４に開示のごとく、９９ｍ-テク ネチウム放射性標識シンチグラム造影剤として用いるＣＴ受容体結合ペプチドの 適合性を評価する。 これらの化合物を作成および標識する方法は、以下の実施例においてより十分 に例示され、それは、上記の発明および有利な結果のある態様を示し、例示によ って示されるが、限定されるものではない。 実施例１ ＢＡＴキレート化剤の合成 とりわけＳ-システイン由来のＢＡＴキレート化剤およびε-アミノリジン由来 のＢＡＴキレート化剤を共有された同時係属出願の米国特許第０８/４１４,４２ ４号（ここに出典明示して本明細書の一部とみなす）の方法に従って調製した。 実施例２ 固相ペプチド合成法 固相ペプチド合成法(ＳＰＰＳ)をＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｍｏ ｄｅｌ ４３１Ａ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒを用いて、およびジ シクロヘキシルカルボジイミド／ヒドロキシベンゾトリアゾールまたは２-(１Ｈ -ベンゾトリアゾール-１-イル)１,１,３,３-テトラメチルウロニウムヘキサフル オロホスフェート/ヒドロキシベンゾトリアゾール(ＨＢＴＵ/ＨＯＢＴ)でカップ リングする９-フルオレニルメチルオキシカルボニル(Ｆｍｏｃ)アミノ末端保護 を用いて、およびカルボキシル末端酸用のｐ-ヒドロキシメチルヘノキシメチル- ポリスチレン(ＨＭＰ)樹脂またはＳａｓｒｉｎ^TMもしくはクロロトリチル樹脂ま たはカルボキシル末端アミド用のＲｉｎｋアミド樹脂を用いて０.２５ミリモル( ｍｍｏｌｅ)スケールで行なった。 適当には、Ｆｍｏｃ-Ｃｙｓ(ＢＡＴ)-およびＮα-Ｆｍｏｃ-Ｎε-(ＢＡＴ)Ｌ ｙｓを共有および同時係属出願の米国特許第０８/４１４,４２４号(ここに出典 明示して本明細書の一部とみなす)に記載のごとく合成した。 適当には、２-クロロアセチル、２-ブロモアセチルおよび２-ブロモ-３-フェ ニルプロピオニル基をＳＰＰＳの間にカップリングした最終残基として適当な２ -ハロ酸を用いて、または樹脂に結合したＮ末端遊離アミノ酸ペプチドを２-ハロ 酸/ジイソブロビルカルボジイミド/Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド/ＮＭＰまたは ２-ハロ酸無水物/ジイソプロピルエチルアミン/ＮＭＰのいずれかで処理するこ とによって導入する。 適当には、ＨＰＬＣ-精製した２-ハロアシル化ペプチドは、所望により０.５- １.０ｍＭ ＥＤＴＡまたはアセトニトリルもしくはＴＨＦを含むリン酸塩または 炭酸水素塩緩衝液または希釈水酸化アンモニウムの０.１-１.０ｍｇ/ｍｌの溶液 (ｐＨ８.０)を１-４８時間撹拌することによって環化し、続いて所望により酢酸 で酸性化し、凍結乾燥し、ＨＰＬＣ精製する。 適当には、チオール含有ペプチドをクロロアセチル含有の、チオール保護テク ネチウム-９９ｍ錯体化基と室温にてｐＨ１０で０,５-４時間反応させ、続いて 酢酸で酸性化し、該溶液を蒸発させて対応するペプチド硫化物アダクトを得る。 脱保護および精製は、記載のごとくルーチン的に行なって、キレート化剤ペプチ ドコンジュゲートを得る。 適当には、ＢＳＭＥ、ＢＳＥＥおよびＢＳＨアダクトは、単一チオール含有ペ プチド(所望により０.５ｍＭ ＥＤＴＡまたはＤＭＦもしくはＴＨＦまたはアセ トニトリルを含有する、Ｎ-メチルモルホリンまたはＮ-エチル-モルホリンでｐ Ｈ７に緩衝したＤＭＦ中、またはｐＨ７-８の５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液 中の５ないし５０ｍｇ/ｍｌ)と、アセトニトリルで予め溶解された、各々、０. ５モル当量のＢＭＭＥ(ビス-マレイミドメチルエーテル)、ＢＭＥＥ(ビス-マレ イミドエチルエーテル)またはＢＭＨ(ビス-マレイミドヘキサン)とを室温にて、 約１-１８時間反応させることによって調製する。該溶液を濃縮し、生成物をＨ ＰＬＣによって精製した。 適当には、ＴＳＥＡアダクトは、単一チオール含有ペプチド(所望により０.５ ｍＭ ＥＤＴＡまたはＤＭＦもしくはＴＨＦまたはアセトニトリルを含有する、 Ｎ-メチルモルホリンまたはＮ-エチル-モルホリンでｐＨ７に緩衝したＤＭＦ中 の１０ないし１００ｍｇ/ｍｌのペプチド、またはｐＨ７-８の５０ｍＭリン酸ナ トリウム緩衝液中の５ないし５０ｍｇ/ｍｌペプチドの濃度)と、アセトニトリル またはＤＭＦ中で予め溶解した０.３３モル当量のＴＭＥＡ(トリス(２-マレイミ ドエチル)アミン)とを１モル当量のトリエタノールアミンの有り無しで、室温に て１-１８時間反応させることによって調製する。かかる反応混合物を含有する アダクトを濃縮し、次いで、該アダクトをＨＰＬＣによって精製する。 適当には、(ＢＡＭ)(Ｎ¹,Ｎ⁴-ビス(２-メルカプト-２-メチルプロピル)-１,４ ,１０-トリアザデカン)は、最初に該ペプチドカルボン酸塩をＤＭＦ、ＮＭＰま たは塩化メチレン中のジイソプロピルカルボジイミド、Ｎ-ヒドロキシスクシン イミドまたはＨＢＴＵ/ＨＯＢｔの混合物で活性化し、続いてジイソプロピルエ チルアミンの存在下のカップリングして、該ペプチドにコンジュゲートする。カ ップリングの後、該コンジュゲートを上記のごとく脱保護する。 適当には、(ＢＡＴ)(Ｎ⁶,Ｎ⁹-ビス(２-メルカプト-２-メチルプロピル)-６,９ -ジアザノナン酸)は、ペプチド合成の間、(Ｎα(Ｆｍｏｃ)Ｎε(Ｎ-Ｂｏｃ)-Ｓ, Ｓ'-ビストリチル-ＢＡＴ)リジン(共有および同時係属出願の米国特許第０８/０ ４４,８２５号（ここに出典明示して本明細書の一部とみなす）の実施例２に記 載のごときＮα(Ｆｍｏｃ)-リジンおよびＮε(Ｎ-Ｂｏｃ)-Ｓ,Ｓ'-ビストリエチ ル-ＢＡＴから調製)または(Ｎ(Ｆｍｏｃ)-Ｓ,Ｓ'-ビストリチル-ＢＡＴ)システ イン(共有および同時係属出願の米国特許第０８/４１４,４２４号(ここに出典明 示して本明細書の一部とみなす)の実施例１Ｆに記載のごとき調製)のごとき保護 アミノ酸誘導体としてペプチドに組込まれ、次いで、合成樹脂から完成したペプ チドを切断した後脱保護する。 適当には、ＢＡＴ-ＢＳ(Ｎ-{２-(Ｎ',Ｎ'-ビス(２-スクシンイミドエチル)ア ミノエチル)}-Ｎ⁶,Ｎ⁹-ビス(２-メルカプト-２-メチルチオプロピル)-６,９-ジ アザノナンアミド)アダクトは、単一チオール含有ペプチド(所望により０.５ｍ Ｍ ＥＤＴＡまたはＤＭＦもしくはＴＨＦまたはアセトニトリルを含有する、Ｎ- メチルモルホリンまたはＮ-エチル-モルホリンでｐＨ７に緩衝したＤＭＦ中、ま たは５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液(ｐＨ７-８)中の２ないし５０ｍｇ/ｍｌペ プチドの濃度)をアセトニトリルまたはＴＨＦ中に予め溶解した０.５モル当量の ＢＡＴ-ＢＭ(Ｎ-{２-(Ｎ',Ｎ'-ビス(２-マレイミドエチル)アミノエチル}-Ｎ⁹-( ｔ-ブトキシカルボニル)-Ｎ⁶,Ｎ⁹-ビス(２-メチル-２-トリフェニル-メチルチオ プロピル)-６,９-ジアザノナンアミド)とを室温にて約１-１８時間反応させるこ とによって調製する。次いで、該溶液を蒸発させて、乾燥し、(ＢＡＴ-ＢＳ）- ペプチドコンジュゲートを１０ｍｌのＴＦＡおよび０.２ｍｌのトリエチルシラ ンで１時間処理することによっ て脱保護する。該溶液を濃縮して、生成アダクトをエーテルで沈澱させ、次いで ＨＰＬＣによって精製する。 適当には、ペプチド前駆体を側鎖保護した、Ｎ末端遊離アミンおよびＣ末端遊 離酸とジフェニルホスホリルアジドとの反応によって(アミノ-およびカルボキシ ル末端間を)環化させる。 Ｓａｓｒｉｎ^TM樹脂結合ペプチドは、ジクロロメタン中の１％ ＴＦＡの溶液 を用いて切断して、保護ペプチドを得る。適当には、保護したペプチド前駆体は 、アミノおよびカルボキシル末端間をジフェニルホスホリルアジドを用いて、側 鎖保護された、アミノ末端遊離アミンおよびカルボキシル遊離酸の反応によって 環化する。 ＨＭＰまたはＲｉｎｋアミド樹脂結合生成物をルーチン的に切断し、保護され た環化ペプチドを所望により１００：５：５：２.５：２の比の水、チオアニソ ール、エタンジチオールおよびトリエチルシランまたはトリイソプロピルシラン を含む、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、またはＴＦＡおよび塩化メチレンよりな る溶液を用いて室温にて、０.５-３時間脱保護する。適当には、生成物は、トリ フェノールメタノール/ＴＦＡ中で再びＳ-トリチル化され、Ｎ-Ｂｏｃ基を(Ｂｏ ｃ)₂Ｏを用いて該ペプチドに導入した。 適当には、補欠分子族でさらに修飾するために設計されたペプチドまたはペプ チド様配列内のチオールの官能価をＳ-ｔ-ブチル(混合したｔ-ブチル二硫化物の 生成)またはｐ-メトキシベンジルのごとき化合物を用いて保護した。Ｓ-ｔ-ブチ ル基は、ジチオトレイトールまたはメルカプトエタノールの溶液での処理によっ て除去され、一方、ｐ-メトキシベンジル基は、ｍ-クレゾールのごとき遊離ラジ カルスカベンジャーの存在下、トリフルオロ酢酸中の三フッ化ホウ素エーテル化 合物を用いて除去する。放射性金属結合基を含む補欠分子ペプチドをＮ末端２- ハロアセチル基で終わるＳＰＰＳによって調製する。該補欠分子族は、樹脂から 取り去り、いずれかのチオール基を例えば、トリチル基で保護する。次いで、環 状チオエーテルを調製するための上記と実質的に同一条件の下、ハロアセチル化 配列をチオール含有ペプチドとカップリングする。次いで、残りの保護基の除去 は、本明細書中に記載された方法を用いて達成して、最終生成物を得る。 粗ペプチドは、Ｗａｔｅｒｓ Ｄｅｌｔａ Ｐａｋ Ｃ１８カラムおよびアセト ニトリルで修飾された水中の０.１％トリフルオロ酢酸(ＴＦＡ)を用いる勾配溶 出を用いた予備的高圧液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ)によって精製する。ア セトニトリルを溶出画分から蒸発させ、次いでそれを凍結乾燥する。各生成物の 同定は、速電子衝撃質量分光法(ＦＡＢＭＳ)または電子スプレー分光法(ＥＳＭ Ｓ)によって確認する。 本明細書中に提供される合成のＣＴ受容体結合ペプチド、誘導体およびアナロ グ、ならびにＥＳＭＳまたはＦＡＢＭＳによって同定されるかかる合成の生成物 を以下の表Ｉに示す。 実施例３ テクネチウム-９９ｍで放射性標識するための一般的方法 実施例２のごとく調製された０.１ｍｇのペプチドを０.１ｍｌまたは０.２ｍ ｌの水または０.９％生理食塩水に溶解した。テクネチウム-９９ｍグルセプテー トは、２００ｍＣｉまで含有する０.２５ｍｌのテクネチウム-９９ｍの過テクネ チウム酸ナトリウムで、Ｇｌｕｃｏｓｃａｎバイアル(Ｅ.Ｉ.ＤｕＰｏｎｔ Ｄｅ Ｎｅｍｏｕｒｓ、Ｉｎｃ.、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、ＤＥ)で復元することによ って調製し、室温で１５分間静置した。次いで、２５μｌのテクネチウム-９９ ｍグルセプテートを該ペプチドに添加し、反応は室温にて１５ないし６０分間ま たは１００℃にて１０ないし３０分間続け、次いで０.２μｍのフィルターを通 して濾過した。 該テクネチウム-９９ｍ標識ペプチドの純度は、次の条件を用いて逆相ＨＰＬ Ｃによって測定した：Ｗａｔｅｒｓ Ｄｅｌｔａ Ｐａｋ Ｃ-１８、５μ、３.９ ｍｍ×１５０ｍｍ分析用カラムに各放射性標識化ペプチドを負荷し、該ペプチド は、１ｍｌ/分(Ｄｅｌｔａ-Ｐａｋ)に等しい溶媒の流れで溶出させた。勾配溶出 は、２０-５０％溶媒Ｂ/溶媒Ａ(溶媒Ａは水中の０.１％ ＣＦ₃ＣＯＯＨであって 、溶媒Ｂは９０/１０ ＣＨ₃ＣＮ/Ｈ₂Ｏ中の０.１％ ＣＦ₃ＣＯＯＨ)の勾配を用 いて２０分間、続いて１００％Ｂ/Ａで３分間行った。 放射性成分を積分記録計に連結した直列型放射性金属検出器を用いて検出した 。テクネチウム-９９ｍグルセプテートおよびテクネチウム-９９ｍ過テクネチウ ム酸ナトリウムは、これらの条件下、１および４分の間で溶出させたが、該テク ネチウム-９９ｍ標識ペプチドは、非常に長い時間の後に溶出した。ペプチドは 、２２０ｎｍにて分光光度検出によって検出した。 非放射性レニウム錯体は、本発明の各ペプチド試薬をジメチルホルムアミドま たはアセトニトリル/水において、Ｃｏｔｔｏｎら(１９６６、Ｉｎｏｒｇ.Ｃｈ ｅｍ.５：９-１６)に記載によってごとく調製した約１モル当量のオキソテトラ ブロモレニウム酸テトラブチルアンモニウム(+５)と共に溶解させ、０.５-５日 間撹拌することによって調製した。該レニウム錯体をテクネチウム-９９ｍ標識 ペプチドについての上記のごとき逆相ＨＰＬＣによって単離し、ＦＡＢＭＳまた はＥＳＭＳによっ て特徴付けた。非放射性ペプチドは、直列型分光光度検出器によってペ２２０ｎ ｍにてプチドとして検出された。 例えば、Ｒｅ-１８６またはＲｅ-１８８を用いた放射性レニウム錯体は、テク ネチウム-９９ｍ標識用の同一プロトコルを用いて、または該ペプチドおよび過 レニウム酸塩の溶液に還元剤を添加することによって、もしくは所望によりクエ ン酸塩のごときリガンド転移剤を用い、室温および１００℃の間の温度にて反応 を５および６０分の間インキュベートして適当な過レニウム酸塩から調製する。 ペプチド、テクネチウム-９９ｍ標識ペプチドおよびＲｅＯ-錯体化ペプチドの ＨＰＬＣ精製結果を表IIに示す。 実施例４ 生物学的アッセイ Ａ．結合阻害アッセイ 本発明の範囲のペプチド試薬、またはそのＲｅＯ錯体化の具体例は、以下に詳 述するごとく、ラット脳または胸部腫瘍細胞系からの膜を用いて、および胸部腫 瘍細胞系からの全細胞に対する、ＣＴ受容体への¹²⁵Ｉ-ＣＴの特異結合を阻害す る能力を測定するｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイを用いて試験した。 ラット脳のミクロソーム膜画分およびＴ-４７Ｄ細胞(Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙ ｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ、ＡＴ ＣＣ受入番号.ＨＴＢ-１３３から入手)を使用したアッセイを用いて、Ｆｉｓｈ ｅｒら(１９７７、Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ．ｃａｎｃｅｒ ３５：７７７−７８４)の 方法に従ってＣＴ受容体についての高親和性を有するアナログを同定した。略言 すれば、組織を細かく切り、ホモジナイズした。該膜を数回洗浄し、蛋白質含量 をアッセイし、結合アッセイに用いた。膜蛋白質をテストされるべき試薬の変化 させた濃度の存在および不存在下で、０.１μＣｉの¹²⁵ＩのサケＣＴ(Ａｍｅｒ ｓｈａｍ、Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ、ＯＨ)とインキュベートした。非錯体化および ＲｅＯ錯体化試薬の双方を試験した。該ＣＴ受容体の¹²⁵Ｉ-ＣＴの１００パーセ ント特異結合は、過剰な非標識サケＣＴ(Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ.Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ) の受容体飽和濃度(１μＭ)の存在下で測定した総¹²⁵Ｉ-ＣＴ結合と¹²⁵Ｉ-ＣＴの 非特異的結合間の差と定義した。試験された試薬が５０％まで¹²⁵Ｉ-ＣＴの特異 結合を阻害する濃度は、ＩＣ₅₀と定義した。 試験された各試薬のＣＴ受容体の膜組織標本に対する結合の結果を表IIIに示 す。これらの結果は、本発明の範囲内にあるペプチド試薬およびかかる試薬のＲ ｅＯ錯体が、ＣＴ受容体を発現している腫瘍細胞および脳膜と結合することを示 す。 同様の試験を全Ｔ-４７Ｄ細胞およびＭＣＦ-７細胞(ＡＴＣＣ受入番号ＨＴＢ- ２２)を用いて、本発明の範囲内のさらなるペプチド試薬で行った。該細胞は、 実質的にＦｉｎｄｌａｙら(１９９０、Ｊ.Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ.１３０：３２ １-３２６)の方法によって行なった。略言すれば、細胞を生理食塩水で洗浄し、 ハン クの平衡塩溶液に再懸濁した。１億ないし２億個の細胞を１μＭの非標識サケＣ Ｔの存在および不存在下で、０.１μＣｉの¹²⁵Ｉ-サケＣＴとインキュベートし て、１００％の特異結合値を決定した。細胞は、非錯体および／またはＲｅＯ錯 体形態において、試験されるべき試薬の濃度を変更させることの有無において、 ０.１μＣｉの¹²⁵Ｉ-ＣＴとインキュベートした。ＩＣ₅₀値は、上記のごとく決 定した。試験された各試薬の結果を表ＩＶに示した。 これらの結果は、本発明の範囲内にあるペプチド試薬およびかかるペプチドの ＲｅＯ錯体が全細胞上のＣＴ受容体に特異結合でき、該試薬が２つの異なるＣＴ 受容体を発現している胸部腫瘍細胞系においてＣＴ結合の強力な阻害剤であるこ とを示した。 Ｂ．乳癌細胞系におけるＣＴ受容体発現 全細胞への¹²⁵Ｉ-ＣＴの結合を用いて７つの異なるヒト乳癌細胞系におけるＣ Ｔ受容体密度を評価した。該受容体の飽和を達成するために異なる濃度のＣＴの 存在下、細胞当りの部位密度をＭＣＦ-７細胞について測定した。 次いで、データは、Ｓｃａｔｃｈａｒｄら(１９４９、Ｎ.Ｙ.Ａｃａｄ.Ｓｃｉ .５１：６００-６７２)の方法によって線形化して、受容体密度を概算した。略 言すれば、飽和曲線を線形化し、Ｋ_dを(-１/勾配)として計算し、次いでＢ_maxは 該曲線のＸ軸切片に等かった。他の細胞系（ＡＴＣＣ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍ Ｄから得られた各々）を¹²⁵Ｉ-ＣＴの単一濃度でＭＣＦ-７細胞と比較し、それ によって¹²⁵Ｉ-ＣＴおよびそれらのＣＴ受容体密度を概算した。そのデータを表 Ｖにまとめる。 これらのデータは、アッセイされた乳癌細胞系の８６％(７のうち６)がＣＴ受容 体について陽性であったことを示す。かくして、本発明の試薬の標的受容体は、 試 験された大部分の乳癌細胞系に存在する。最近、本発明の試薬についての標的受 容体が初代乳癌において過剰発現することが判明した(Ｇｉｌｌｅｓｐｉｅら（ １９９７）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ７３、８１２-８１５)。これらの結果は 、本発明のＣＴペプチドがヒトにおける腫瘍の診断および処置について有用な部 位特異的試薬を調製するのに適当であることを示す。 Ｃ．ｉｎ ｖｉｖｏアッセイ 乳癌細胞系を受容体発現についてスクリーニングし、最良の細胞系を免疫欠損 マウスにおいて異種移植用に選択した。これらの腫瘍モデルを用いて、上記のｉ ｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて確認された高親和性ペプチドのｉｎ ｖｉｖｏの 腫瘍ターゲッティング能力を評価した。 ＣＴ受容体を発現している乳癌細胞(Ｔ４７ＤおよびＭＣＦ-７)を免疫欠損マ ウスまたはスプレーグ・ドーリーラットに埋込み、腫瘍を増殖させた。新しい^{99 m} Ｔｃ-ＣＴペプチドを試験するために、腫瘍を持つマウスまたはラットに約６ｍ Ｃｉ/１０ｎｍｏｌペプチドにて約０.０２５ｍＣｉで注射した。該動物を頚部脱 臼させ、ガンマカメラを用いて５分間静止的に像を写す。次いで、^99mＴｃ-ＣＴ ペプチドの生物学的分布を注射用量の標準的アリコートと一緒にガンマカウンタ ーにおいて血液、腫瘍、標的臓器および筋肉を計算することによって測定した。 生物学的分布の時点を選択して、初期相、中間相および後期相の^99mＴｃ-ＣＴア ナログのクリアランスを表した。生物学的分布試験は、至適なシグナル対ノイズ 比が注射後９０分に生じることを示した。選択されたアナログの腫瘍造影の能力 を評価するために、血液および種々の組織における放射活性の比を腫瘍のものと 比較した。９０分後の代表的生物学的分布データを以下の表ＶＩに示す。 上記の開示は、本発明のある特定の具体例を強調し、全ての修飾およびそれに 等しい変更は、添付した特許請求の範囲に記載のごとく、本発明の精神および範 囲内にあると理解されるべきである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ， ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，Ｌ Ｓ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ， ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，Ｅ Ｅ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，Ｍ Ｄ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ， ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，Ｖ Ｎ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 ペアソン，ダニエル・エイ アメリカ合衆国03110ニューハンプシャー 州ベッドフォード、ビールズ・ロード149 番 (72)発明者 リスター−ジェイムズ，ジョン アメリカ合衆国03110ニューハンプシャー 州ベッドフォード、オールド・ストーン・ ウェイ25番

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．約１０,０００ダルトン未満の分子量を有し、放射性金属キレート化剤に共 有結合して試薬を形成し、 該試薬が、カルシトニン受容体に対する放射性ヨウ素化された天然のカルシト ニンの結合親和性以上の該受容体に対する結合親和性を有することを特徴とする 合成の、カルシトニン受容体結合化合物。 ２．約１０,０００ダルトン未満の分子量を有し、放射性金属キレート化剤に共 有結合して試薬を形成し、 該試薬が、カルシトニン受容体についての放射性ヨウ素化された天然のカルシ トニンの結合親和性の約１０分の１以上の該受容体に対する結合親和性を有する ことを特徴とする合成の、カルシトニン受容体結合化合物。 ３．該キレート化剤が、 ａ） Ｃ(ｐｇｐ)^S−(ａａ)-(ｐｇｐ)^S ［式中、(ｐｇｐ)^SはＨまたはチオール保護基であって、(ａａ)はチオール基を 含まないいずれかの第一α-またはβ-アミノ酸である］ ｂ）式： Ａ-ＣＺ(Ｂ)-{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n-Ｘ ［式中、ＡはＨ、ＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)-ＮＨＯＣ、 (アミノ酸またはペプチド)-ＯＯＣまたはＲ⁴； Ｂは、Ｈ、ＳＨ、-ＮＨＲ³、-Ｎ(Ｒ³)-(アミノ酸またはペプチド)、またはＲ⁴ ； Ｘは、Ｈ、ＳＨ、-ＮＨＲ³、-Ｎ(Ｒ³)-(アミノ酸またはペプチド)またはＲ⁴； Ｚは、ＨまたはＲ⁴； Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は、独立してＨまたは直鎖もしくは分岐鎖または環状 アルキル； ｎは、０、１または２； (アミノ酸)は、チオール基を含まないいずれかの第一α-またはβ-アミノ酸； (ペプチド)は、２ないし約１０個のアミノ酸のペプチドであり； および ここに、Ｂは、-ＮＨＲ³または-Ｎ(Ｒ³)-(アミノ酸またはペプチド)、ＸはＳ Ｈであって、ｎは１または２； ここに、Ｘは、-ＮＨＲ³または-Ｎ(Ｒ³)-(アミノ酸またはペプチド)、ＢはＳ Ｈであって、ｎは１または２； ここに、ＢはＨまたはＲ⁴、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、(アミノ酸またはペプ チド)-ＮＨＯＣ、または(アミノ酸またはペプチド)-ＯＯＣ、ＸはＳＨ；および ｎは０または１； ここに、ＡはＨまたはＲ⁴、次いで、ここにＢはＳＨ、Ｘは-ＮＨＲ³または− Ｎ(Ｒ³)-(アミノ酸またはペブチド)であって、ここに、ＸはＳＨ、Ｂは-ＮＨＲ³ または-Ｎ(Ｒ³)-(アミノ酸またはペプチド)であって、ｎは１または２； ここに、ＸはＨまたはＲ⁴、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ)(アミノ酸またはペプチ ド)-ＮＨＯＣ、または(アミノ酸またはペブチド)-ＯＯＣ；およびＢはＳＨ； ここに、Ｚはメチル、Ｘはメチル；ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、(アミノ酸また はペプチド)-ＮＨＯＣ、または(アミノ酸またはペプチド)-ＯＯＣ；ＢはＳＨで あって、ｎは０； ここに、ＢはＳＨ、ＸはＳＨでなくて、ここにＸはＳＨ、ＢがＳＨでなく；お よび、ここに、チオール基は還元体である］ の単一チオール含有基を含むキレート化剤； ｃ） ［式中、各Ｒは独立してＨ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅； 各(ｐｇｐ)^Sは独立してチオール保護基またはＨ； ｍ、ｎおよびｐは独立して２または３； Ａ＝直鎖または環状低級アルキル、アリール、複素環、その組合せ、またはそ の置換誘導体である］； ｄ） ［式中、各Ｒは独立してＨ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅； ｍ、ｎおよびｐは独立して２または３； Ａ＝直鎖または環状低級アルキル、アリール、複素環、その組合せまたはその 置換誘導体； Ｖ＝Ｈまたは-ＣＯ-ペプチド； Ｒ'＝Ｈまたはペプチドであって； ここに、Ｖ＝Ｈの場合、Ｒ'＝ペプチド、およびＲ'＝Ｈの場合、Ｖ＝-ＣＯ-ペ プチドである］； ｅ） ［式中：ｎ、ｍおよびｐは、独立して０または１、 各Ｒ'は、独立してＨ、低級アルキル、ヒドロキシアルキル(Ｃ₂-Ｃ₄)、または アルコキシアルキル(Ｃ₂-Ｃ₄)； 各Ｒは独立してＨまたはＲ''、ここに、Ｒ''はチオール基を含まない置換また は非置換低級アルキルまたはフェニル； 一つのＲまたはＲ'はＬ、ここに、Ｒ'がＬである場合、-ＮＲ'₂はアミンであ って； Ｌは該化合物に該キレート化剤を結合する二価の基である］； ｆ） ［式中：ｎ、ｍおよびｐは、独立して０または１、 各Ｒ'は、独立してＨ、低級アルキル、ヒドロキシアルキル(Ｃ₂-Ｃ₄)、または アルコキシアルキル(Ｃ₂-Ｃ₄)； 各Ｒは独立してＨまたはＲ''、ここに、Ｒ''はチオール基を含まない置換また は非置換低級アルキルまたはフェニル； 一つのＲまたはＲ'はＬ、ここに、Ｒ'がＬである場合、-ＮＲ'₂はアミンであ って； Ｌは該化合物に該キレート化剤を結合する二価の基である］； ｇ） (ＨＯＯＣＣＨ₂)₂Ｎ(ＣＲ₂)(ＣＲ₂)Ｎ(ＣＨ₂ＣＯＯＨ)(ＣＲ₂)(ＣＲ₂)Ｎ( ＣＨ₂ＣＯＯＨ)₂ ［式中、各Ｒは独立してＨ、Ｃ₁ないしＣ₄アルキル、またはアリールであって、 一つのＲは二価のリンカーに共有結合する］； ｈ） (ＨＯＯＣＣＨ₂)₂Ｎ(ＣＲ₂)(ＣＲ₂)Ｎ(ＣＨ₂ＣＯＯＨ) ［式中、各Ｒは独立してＨ、Ｃ₁ないしＣ₄アルキル、またはアリールであって、 一つのＲは二価のリンカーに共有結合する］； ｉ） １,４,７,１０−テトラアザドデカン四酢酸； ｊ） ［式中、ｎは２または３である整数であり、ここに各Ｒは独立してＨ、Ｃ₁ない しＣ₄アルキル、またはアリールであって、一つのＲはカルシトニン受容体結合 化合物に共有結合する］；および ｋ）デスフェリオキサミン よりなる群から選択される請求項１または２記載の試薬。 ４．該キレート化剤が、 -(アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-{Ａ-ＣＺ(Ｂ)-{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n-Ｘ}； -{Ａ-ＣＺ(Ｂ)-{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n-Ｘ}-(アミノ酸)¹-(アミノ酸)²； -(第一α,β-またはβ,γ-ジアミノ酸)-(アミノ酸)¹-{Ａ-ＣＺ(Ｂ)-{Ｃ(Ｒ¹Ｒ² )}_n-Ｘ}；および -{Ａ-ＣＺ(Ｂ)-{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n-Ｘ}-(アミノ酸)¹-(第一α,β-またはα,γ-ジ アミノ酸)； ［式中、(アミノ酸)¹および(アミノ酸)²は、各々独立して、いずれかの自然発生 の、修飾された、置換されたまたは変更されたチオール基を含まないα-または β-アミノ酸である］ よりなる群から選択される請求項３記載の試薬。 ５．該キレート化剤が、 (アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-システイン； (アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-イソシステイン-； (アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-ホモシステイン-； (アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-ペニシラミン-； (アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-２-メルカプトエチルアミン-； (アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-２-メルカプトプロリルアミン-； (アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-２-メルカプト-２-メチルプロピルアミン-；および (アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-３-メルカプトプロピルアミン-； ［式中、該キレート化剤のカルボキシル末端または側鎖は、該化合物に共有結合 する］ よりなる群から選択される請求項４記載の試薬。 ６．(アミノ酸)¹が、遊離α-アミンを有するα,β-ジアミノ酸および遊離β-ア ミ ンを有するβ,γ-ジアミノ酸よりなる群から選択される請求項５記載の試薬。 ７．該キレート化剤が、 -システイン-(アミノ酸)-(α,β-またはβ,γ-ジアミノ酸)； -イソシステイン-(アミノ酸)-(α,β-またはβ,γ-ジアミノ酸)； -ホモシステイン-(アミノ酸)-(α,β-またはβ,γ-ジアミノ酸)； -ペニシラミン-(アミノ酸)-(α,β-またはβ,γ-ジアミノ酸)； ２-メルカプト酢酸-(アミノ酸)-(α,β-またはβ,γ-ジアミノ酸)； ２-または３-メルカプトプロピオン酸-(アミノ酸)-(α,β-またはβ,γ-ジア ミノ酸)；および ２-メルカプト-２-メチルプロピオン酸-(アミノ酸)-(α,β-またはβ,γ-ジア ミノ酸)； ［式中、該キレート化剤のアミノ末端または側鎖は、該化合物に共有結合する］ よりなる群から選択される請求項４記載の試薬。 ８．該キレート化剤が、 -Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｃｙｓ-； -Ａｌａ-Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-； -(ε-Ｌｙｓ)-Ｇｌｙ-Ｃｙｓ-； -(δ-Ｏｒｎ)-Ｇｌｙ-Ｃｙｓ-； -(γ-Ｄａｂ)-Ｇｌｙ-Ｃｙｓ-； -(β-Ｄａｐ)-Ｌｙｓ-Ｃｙｓ-； -(β-Ｄａｐ)-Ｇｌｙ-Ｃｙｓ-；および -Ｃｙｓ(ＢＡＴ) よりなる群から選択される請求項１または２記載の試薬。 ９．該キレート化剤が、式：［式中、Ｒ¹およびＲ²は各々独立してＨ、低級アルキル、ヒドロキシアルキル( Ｃ₂-Ｃ₄)、またはアルコキシアルキル(Ｃ₂-Ｃ₄); Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶は独立してＨ、チオール基を含まない置換または非置 換の低級アルキルまたはフェニル； Ｒ⁷およびＲ⁸は各々独立してＨ、低級アルキル、低級ヒドロキシアルキルまた は低級アルコキシアルキル； Ｌは二価の結合基であって、 Ｚはペプチドである］ を有する請求項３記載の試薬。 １０．該キレート化剤が、式： ［式中、Ｒ¹およびＲ²は各々独立してＨ、低級アルキル、ヒドロキシアルキル( Ｃ₂-Ｃ₄)、またはアルコキシアルキル(Ｃ₂-Ｃ₄)； Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵およびＲ⁶は独立してＨ、チオール基を含まない置換または非置 換の低級アルキルまたはフェニル、およびＲ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵またはＲ⁶のうち一つは Ｚ-Ｌ-(ＣＲ₂)_n-； Ｒ⁷およびＲ⁸は各々独立してＨ、低級アルキル、低級ヒドロキシアルキルまた は 低級アルコキシアルキル； Ｌは二価の結合基； Ｚはペプチド；および Ｘは、-ＮＨ₂、-ＮＲ¹Ｒ²または-ＮＲ¹-Ｙ、ここに、Ｙはアミノ酸、アミノ 酸アミド、または２ないし約２０個のアミノ酸を有するペプチドである］ を有する請求項３記載の試薬。 １１．該キレート化剤が、式： ［式中、Ｒ¹およびＲ²は各々独立してＨ、低級アルキル、ヒドロキシアルキル( Ｃ₂-Ｃ₄)またはアルコキシアルキル(Ｃ₂-Ｃ₄)； Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵、およびＲ⁶は独立してＨ、チオール基を含まない置換または非 置換の低級アルキルまたはフェニル； ｎはｌないし６の整数； Ｌは二価の結合基であって； Ｚはペプチドである］ を有する請求項３記載の試薬。 １２．該キレート化剤が、式： ［式中、Ｌはリンカー基；および Ｚはペプチドである］ を有する請求項３記載の試薬。 １３．該化合物がペプチドである請求項１または２記載の試薬。 １４．該ペプチドが、アミノ酸配列： （配列番号．９）を有して、 該キレート化剤が、該配列のアミノ酸の側鎖で該ペプチドに組込まれる請求項１ ３記載の試薬。 １５．該ペプチドがチオエーテルによって環化されるカルシトニン受容体結合ド メインを含む請求項１３記載の試薬。 １６．該ペプチドが、アミノ酸配列： ［式中、Ｘは、システイン残基、ホモシステイン残基、およびホモホモシステイ ン残基よりなる群から選択される］ を含む請求項１５記載の試薬。 １７．該ペプチドが、アミノ酸配列： ［式中、Ｘ¹は、アラニン残基、グリシン残基、およびセリン残基よりなる群か ら選択され； Ｘ²は、システイン残基、ホモシステイン残基、およびホモホモシステイン残 基よりなる群から選択される］ を含む請求項１５記載の試薬。 １８． よりなる群から選択される式を有する試薬。 １９．式： を有する請求項１８記載の試薬。 ２０．ａ）各化合物が放射性金属キレート化剤に共有結合した少なくとも２つの 合成の、カルシトニン受容体結合化合物；次いで ｂ）各化合物への結合、各キレート化剤への結合、および一つの化合物および 他の化合物のキレート化剤への結合よりなる群から選択される共有結合を形成す る多価リンカー； を含む試薬であって、 該試薬が約１０，０００ダルトン未満の分子量を有し；かつ 該キレート化剤が放射性金属にキレートする場合、該試薬が、該受容体の放射 性ョウ素化の天然のカルシトニンの結合親和性の約１０分の１以上のカルシトニ ン受 容体についての結合親和性を有することを特徴とする該試薬。 ２１．請求項１ないし２０のいずれか１記載の該試薬およびテクネチウム-９９ ｍを含むシンチグラム造影剤。 ２２．請求項１ないし２０のいずれか１記載の該試薬および第一スズイオンを含 む組成物。 ２３．請求項１ないし２０のいずれか１記載の該試薬および細胞傷害性放射性同 位元素を含む放射性治療剤。 ２４．該放射性同位元素が、スカンジウム-４７、銅-６７、ガリウム-７２、イ ットリウム-９０、スズ-１１７ｍ、ヨウ素-１２５、ヨウ素-１３１、サマリウム -１５３、ガドリニウム-１５９、ジスプロシウム-１６５、ホルミウム-１６６、 イッテルビウム-１７５、ルテチウム-１７７、レニウム-１８６、レニウム-１８ ８、アスタチン-２１１、ビスマス-２１２およびビスマス-２１３よりなる群か ら選択される請求項２３記載の薬剤。 ２５．還元剤の存在下、請求項１ないし２０のいずれか１記載の該試薬とテクネ チウム-９９ｍ、レニウム-１８６またはレニウム-１８８とを反応させることに よって形成される錯体。 ２６．該還元剤が、第一スズイオンである請求項２５記載の錯体。 ２７．請求項１ないし２０のいずれか１記載の該試薬を予め還元したテクネチウ ム-９９ｍ錯体のリガンド交換によりテクネチウム-９９ｍで標識することによっ て形成される錯体。 ２８．請求項１ないし２０のいずれか１記載の該試薬を予め還元したレニウム錯 体のリガンド交換によりレニウム-１８６またはレニウム-１８８で標識すること によって形成される錯体。 ２９．放射性医薬製剤調製用キットであって、請求項１ないし２０のいずれか１ 記載の所定量の試薬、および該試薬をテクネチウム-９９ｍ、レニウム-１８６ま たはレニウム-１８８で標識するのに十分な量の還元剤を含む密閉バイアルを含 む該キット。 ３０．放射性医薬製剤調製用キットであって、請求項１ないし２０のいずれか１ 記載の所定量の試薬を含む密閉バイアルを含む該キット。 ３１．還元剤の存在下、該試薬とテクネチウム-９９ｍ、レニウム-１８６または レニウム-１８８とを反応させる工程を含む請求項１ないし２０のいずれか１記 載の該試薬の標識方法。 ３２．該還元剤が、第一スズイオンである請求項３０記載の方法。 ３３．化学的ｉｎ ｖｉｔｒｏ合成による請求項１ないし２０のいずれか１記載 の試薬の製法。 ３４．該合成が固相ペプチド合成である請求項３３記載の方法。 ３５．該キレート化剤が、合成中に該化合物に共有結合する請求項３３または３ ４記載の方法。 ３６．哺乳動物体内の部位を造影するための医薬製造用の請求項１ないし２０の いずれか１記載の試薬の使用。 ３７．カルシトニン受容体の存在によって特徴付けられた疾患を治療するための 医薬製造用の請求項１ないし２０のいずれか１記載の該試薬の使用。