FI77871B - Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara 3-aminosubstituerade steroidderivat. - Google Patents

Description

! 77871

Uusien, terapeuttisesti käyttökelpoisten 3-aminosubstitu-oitujen steroidijohdannaisten valmistusmenetelmä

Keksintö koskee uusien 3-aminosubstituoitujen ste-5 roidijohdannaisten valmistusmenetelmää sekä niiden suolo ja, jotka muodostuvat lisättäessä kivennäis- tai orgaanisia happoja, jolloin ne ovat yleisen kaavan I mukaisia: “ 15 jossa W on vetyatomi tai hydroksyyliryhmä tai yhdessä X:n kanssa etylideeniryhmä, X on etyyliryhmä tai ryhmittymä CH, tai CH0 /CN /C\

20 7 X0 ''OH

tai yhdessä W;n kanssa etylideeniryhmä, aaltoviivat merkitsevät sitä, että vastaavalla radikaalilla on joko «*<.- tai /^-konfiguraatio, on vetyatomi tai metyyli-ryhmä, R2 on vetyatomi tai 1-5 hiiliatomia käsittävä 25 alkyyliryhmä tai 2-5 hiiliatomia käsittävä hydroksi- alkyyliryhmä ja R^ on vetyatomi, 1-5 hiiliatomia käsittävä alkyyliryhmä tai 2-5 hiiliatomia käsittävä hydrok-sialkyyliryhmä, 2-8 hiiliatomia käsittävä asyyliryhmä tai alkoksikarbonyyliryhmä tai «^-aminohaposta tai 2-3 30 aminohaposta muodostuneesta peptidistä peräisin oleva ryhmä, jolloin: - toisaalta ainakin toinen R2:sta ja Riista ei ole vetyatomi, - toisaalta: 2 77871 i) kun samanaikaisesti R^ on metyyliryhmä, W ja R2 ovat vetyatomeja ja X on CHg /CN) 5 ryhmä, siinä tapauksessa Rg ei voi olla metyyli-, asyy- liryhmä tai aminokarboksyylihaposta peräisin oleva tähde, ii) kun samanaikaisesti R^ on metyyliryhmä, W on vetyatomi, R2 on metyyliryhmä ja X on ryhmä CHg 10 ,C.

7 ^0 siinä tapauksessa Rg ei voi olla metyyli- tai asetyyli-ryhmä, iii) kun samanaikaisesti R^ on metyyliryhmä, 15 R2 ja W ovat vetyatomeita, X on ryhmä CHg , jonka /CVo hydroksyyli on konfiguraatiossa (S) ja aminoryhmä on asemassa 34, siinä tapauksessa Rg ei voi olla metyyli-, 2q asetyyli- eikä glysyyliryhmä, iii) kun W on vetyatomi, X on ryhmä CH-.

/ ^OH

ja aminoryhmä on asemassa 3·^, siinä tapauksessa substi-tuentit R^, R2 ja Rg eivät ole yhtaikaa metyyliryhmiä, 25 iiiii) kun samanaikaisesti Rg ja W ovat vety- atomeja, R^ on metyyliryhmä, X on ryhmä CHg

/ ^0H

jonka hydroksyyli on konfiguraatiossa (R) ja aminoryhmä 30 on asemassa 3«C siinä tapauksessa Rg ei ole etoksikarbo-nyyli-, metyyli- eikä asetyyliryhmä, iiiiii) kun samanaikaisesti R^, R2 ja Rg ovat metyyliryhmiä ja aminoryhmä on asemassa 3, siinä tapauk-sessa W ja X eivät voi yhdessä olla etylideeniryhmä.

35 Yleisessä kaavassa I ja jäljempänä termi 1-5 hii- --· liatomia käsittävä alkyyliryhmä tarkoittaa esimerkiksi 3 77871 metyyli-, etyyli-, isopropyyli-, butyyli-, isobutyyli-tai pentyyliryhmä; termi 2-5 hiiliatomia käsittävä hydroksialkyyliryhmä tarkoittaa esimerkiksi hydroksi-etyyli- tai hydroksipropyyliryhmää; termi 2-8 hiiliato-5 mia käsittävä asyyliryhmä tarkoittaa esimerkiksi ase- tyyli-, propionyyli-, n-butyryyli-, isobutyryyli-, bent-soyyli- tai nikotinoyyliryhmää; 2-8 hiiliatomia käsittävä alkoksikarbonyyliryhmä tarkoittaa esimerkiksi metok-si-, etoksi- tai propoksikarbonyyliryhmää; aminokarbok-10 syylihapoista peräisin olevat tähteet voidaan valita ryhmästä, johon kuuluvat Ala, Vai, Ival, Leu, Ile, Asp, Asn, Glu, Gin, Ser, Thr, Cys, Met, Lys, Arg, Phe, Tyr, Trp, His ja Pro, Nva, Nle, Hyp, Orn, nämä hapot voivat olla D- tai L-muodossa, sekä Sar ja Gly, kaikki edellä 15 mainitut hapot voivat olla N-alkyloituja, kun on 2-3 aminohappoa käsittävästä peptidistä peräisin oleva ryhmä, jotka on valittu ryhmästä, johon kuuluvat yllä mainitut ^aminohapot.

Mainittakoon sopimuksesta, että o4-aminokarbok-20 syylihappojen symbolit tarkoittavat näitä happoja D- tai L-konfiguraatiossa (esimerkiksj, termi Ala tarkoittaa alaniinia D- tai L-muodossa).

Ellei toisin mainita tässä vaatimuksessa käytetty nimistö noudattaa IUPACin nimistöä, jonka säännöst on 25 julkaistu erityisesti Biochem. J. (1972), 126, 773-780.

Suolat, jotka muodostuvat lisättäessä epäorgaanisia tai orgaanisia happoja, voivat olla esimerkiksi suoloja, jotka ovat muodostuneet kloorivetyhapon, bromi-vetyhapon, typpihapon, rikkihapon, fosforihapon, etikka-30 hapon, muurahaishapon, propionihapon, bentsoehapon, ma-leiinihapon, fumaarihapon, meripihkahapon, viinihapon, sitruunahapon, oksaalihapon, glyoksyylihapon, aspara-giinihapon, alkaanisulfonihappojen kuten metaani- tai etaanisulfonihappojen, aryylisulfonihappojen kuten 35 bentseeni- tai paratolueenisulfonihappojen ja aryyli-karboksyylihappojen kanssa.

4 77871

Menetelmän mukaan saatujen tuotteiden joukosta, jota keksintö koskee, voidaan mainita etenkin yllä mainitun kaavan I mukaiset johdannaiset sekä niiden suolat, jotka muodostuvat lisättäessä kivennäis- tai orgaani- 5 siä happoja, jossa mainitussa kaavassa I X on ryhmä CH, .

I 3 ,CH.

/ \

OH

Näiden joukosta voidaan mainita erityisesti johdannaiset, joissa mainitussa kaavassa I X on ryhmä CH-, 10 ^ x ΌΗ ja 1*2 on vetyatomi tai metyyliryhmä, sekä niiden suolat, jotka muodostuvat lisättäessä epäorgaanisia- tai orgaanisia happoja ja aivan erityisesti: ^ - (2S) 2-amino-N-/(20S)-20-hydroksi (5^) pregnan-3oC-yyli/- propanamidi, - (2S) 2-amino-N-/( 20S) -20-hydroksi ( 5oij pregnen-3«C-yyli/-asetamidi, - 2-amino-N-/ ( 20S) -20-hydroksi (5o0 pregnen-3o£-yyli/-N-2q metyyliasetamidi, sekä niiden suolat; muistettakoon myös aivan erityisesti muut kuin edellä mainitut johdannaiset, jotka on kuvattu esimerkeissä.

Valmistusmenetelmä kaavan I mukaisille johdannaisille sekä niiden suoloille, keksintö koskee, tunne-25 taan siitä, että kaavan II mukainen amiini CH.

: * jossa aaltoviivalla, W:llä, X:llä ja Reillä on sama mer-* kitys kuin edellä, saa reagoida 35 “ joko kaavan III mukaisen halogenidin kanssa: 5 77871

Hal-R'2 III

jossa Hal on kloori-, bromi- tai jodiatomi ja R'3 on 2-8 hiiliatomia käsittävä asyyli- tai alkoksikarbo-nyyliryhmä, jolloin saadaan kaavan I mukainen tuote, 5 jossa R2 on vetyatomi, R3 on 2-8 hiiliatomia käsittävä asyyli- tai alkoksikarbonyyliryhmä ja W,X,R^ ja aalto-viiva merkitsevät samaa kuin edellä on jo osoitettu, kaavan I mukainen yhdiste, joka eristetään ja haluttaessa muodostetaan siitä suola, 10 - tai ©^-aminohapon tai 2-3 ©^-aminohappoa käsittävän peptidin kanssa, joiden aminofunktio on suojattu helposti irtoavalla ryhmittymällä joka irtoaa eteenkin happohydrolyysillä, sitten käsitellään niin, että suo-jaava ryhmittymä irtoaa, jolloin saadaan kaavan I mukai-15 nen tuote, jossa R2 on vetyatomi, R^ on ot-aminohapos-ta tai 2-3 »^-aminohappoa käsittävästä peptidistä peräisin oleva ryhmä, ja W, X, R^ ja aaltoviiva tarkoittavat samaa kuin edellä jo on osoitettu, ja joka erotetaan ja haluttaessa muodostetaan siitä suola, 20 - tai C^-C3 alkyylihalogenidin kanssa tai 2-5 hiiliato mia käsittävän hydroksialkyylihalogenidin kanssa, jonka halogeeni on kloori-, bromi- tai jodiatomi, jolloin saadaan kaavan I mukainen tuote, jossa R2 ja R^ ovat ve-tyatomeita tai 1-5 hiiliatomia käsittävä alkyyliryhmä 25 tai 2-5 hiiliatomia käsittävä hydroksialkyyliryhmä ja W, X, R^ ja aaltoviiva tarkoittavat samaa kuin edellä on jo osoitettu, kaavan I mukainen tuote, joka joko erotetaan ja tehdään haluttaessa siitä suola tai tapauksessa, jossa R3 on vetyatomi, annetaan sen reagoida 30 kaavan IV mukaisen halogenidin kanssa:

Hal-R"3 IV

jossa R"3 on 1-5 hiiliatomia käsittävä alkyyliryhmä tai 2-5 hiiliatomia käsittävä hydroksialkyyliryhmä tai 2-8 hiiliatomia käsittävä alkoksikarbonyyliryhmä 35 ja Hai tarkoittaa samaa kuin edellä on jo osoitettu, 6 77871 jolloin saadaan kaavan I mukainen tuote, jossa on Cl-C5 tai 2-5 hiiliatomia käsittävä hydrok- sialkyyliryhmä, on 1-5 hiiliatomia käsittävä alkyyli-ryhmä tai 2-8 hiiliatomia käsittävä asyyli- tai asyyli-5 oksiryhmä ja W, X, ja aaltoviiva merkitsevät samaa kuin edellä on jo osoitettu, tuote eristetään ja haluttaessa tehdään siitä suola, tai vielä tapauksessa, jossa R^ on vetyatomi, annetaan mainitun kaavan I mukaisen tuotteen reagoida «C-aminohapon kanssa tai 2-3 amino-10 haposta muodostuneen peptidin kanssa, jonka aminofunktio on suojattu helposti irtoavalla ryhmällä joka irtoaa etenkin happohydrolyysillä, käsitellään sitten niin, että suojaava ryhmä irtoaa, jolloin saadaan kaavan I mukainen tuote, jossa R2 on 1-5 hiiliatomia käsittävä 15 alkyyliryhmä tai 2-5 hiiliatomia käsittävä hydroksi-alkyyliryhmä, R^ on ^-aminohaposta tai 2-3 ^aminohaposta muodostuneesta peptidistä peräisin oleva ryhmä ja W, X, R^ ja aaltoviiva tarkoittavat samaa kuin edellä on jo osoitettu, tuote eristetään ja haluttaes-20 sa siitä tehdään suola.

Keksinnön parhaissa toteuttamistavoissa edellä kuvattu valmistusmenetelmä on toteutettu tässä jäljempänä kuvatulla tavalla.

1) Kaavan II mukaisen amiinin reaktio kaavan (III) 25 mukaisen halogenidin kanssa suoritetaan happoja sitovan aineen läsnäollessa, erityisesti alkaalihydroksidin, alkaalikarbonaatin (esimerkiksi kaliumkarbonaatin, al-kaalibikarbonaatin, alkaaliasetaatin, maa-alkaalikarbo-naatin, tertiäärisen amiinin (esimerkiksi trialkyyli-30 amiinin tai pyridiinin) tai alkaalialkoholaatin (esim. natriumetylaatin) läsnäollessa.

Reaktio voi tapahtua esimerkiksi inertissä liuottimessa tai suspensiossa kuten dioksaanissa, dimetyyliformamidissa, bentseenissä, tolueenissa tai me-35 tyleenikloridissa. Asyloinnin ollessa kyseessä voidaan 7 77871 myös käyttää vapaata happoa tai sitten hapon muuta funktionaalista johdannaista kuin halogenidiä, kuten esimerkiksi happoanhydridiä.

Kun käytettäen vapaata happoa, on välttämätöntä 5 suorittaa amidointi sellaisella aktivoivalla aineella kuten karbodi-imidillä. Muutkin tekniikat ovat käyttökelpoisia, kuten esim. teoksessa "The Peptides" Voi. 1,

Academic Press, 1979 kuvatut menetelmät.

2) Kaavan II mukaisen amiinin tai kaavan I mukaili) sen tuotteen reaktio, jossa on vetyatomi ja on alkyyliryhmä tai hydroksialkyyliryhmä, aC-aminohapon tai peptidin kanssa, jonka aminofunktio on suojattu helposti irtoavalla suojaavalla ryhmällä, tapahtuu kon-densoivan aineen läsnäollessa. Tässä tapauksessa kon-15 densoivan aineen tarkoitus on aktivoida aminohapon happofunktio.

Kondensoivana aineena voidaan käyttää kaavan

A-N=C=N-B

mukaista karbodi-imidiä, jossa A ja B ovat 1-8 hiili-20 atomia käsittäviä alkyyliryhmiä, jotka ovat mahdollisesti dialkyyliaminoryhmän kantajia tai ovat sykloasyy-liryhmiä.

Voidaan mainita esimerkiksi disykloheksyylikar-bodi-imidi tai l-etyyli-3-(3-dimetyyliaminopropyyli)-25 karbodi-imidi, etenkin, jälkimmäinen.

Voidaan myös käyttää 2-kloori-N-metyylipyridii-nihalogenidia, kuten jodia.

Voidaan myös käyttää alkyylikloroformiaattia kuten esimerkiksi metyyli-, etyyli- tai isobutyyliklo-30 roformiaattia; voidaan myös käyttää alkyylipyrofosfiit- tia, kuten esimerkiksi etyylipyrofosfiittia.

Helposti irtoavana suojaavana ryhmänä voidaan käyttää tapauksesta riippuen esimerkiksi bentsyylioksi-karbonyyliryhmää tai (Z) terbutyylioksikarbonyyliryh-35 mää (BOC). 4 β 77871

Keksintö käsittelee etenkin edellä mainittua menetelmää, jossa suojaava ryhmä on terbutyylioksikarbo-nyyliryhmä.

Yllä mainitun helposti irtoavan suojaavan ryhmän 5 poistamiseksi käytetään mieluiten lohkaisevana aineena happoa, kuten kloorivetyhappoa; käytetään apuna esim.

' kloorivetyhapon alkanoliliuosta tai vedet-ntä kloorivety-happona, joka on sekoitettu nitrometaaniin. Voidaan myös käyttää sellaisia happoja kuten paratolueenisulfonihappoa, 10 muurahaishappoa tai trifluorietikkahappoa. Voidaan myös käyttää vetyä palladiumin läsnäollessa ryhmän suojaajana (Z) esimerkiksi.

3) Kaavan II mukaisen amiinin reaktio alkyyli-tai hydroksialkyylihalogenidin kanssa tehdään samojen 15 happoa sitovien aineiden ja liuottimien läsnäollessa kuin reaktiossa kaavan III mukaisen halogenidin kanssa.

Hydroksialkyyliryhmän hydroksifunktio on edullista suojata helposti irtoavalla suojäävällä ryhmällä, etenkin happohydrolyysillä irtovalla. Tämä suojaava 20 ryhmittymä on mieluiten tetrahydropyranyyliryhmä. Se voidaan lohkaista samoissa olosuhteissa kuin aminohappojen suojääville ryhmille on osoitettu edellä.

4) Kaavan I mukaisen tuotteen reaktio, jossa on vetyatomi, R2 on C^-C5 alkyyliryhmä tai 2-5 hii-25 liatomia käsittävä hydroksialkyyliryhmä ja W, X, R^ ja aaltoviiva merkitsevät samaa kuin edellä on osoitettu, kaavan IV mukaisen halogenidin kanssa tehdään R"3-subs-tituentin luonteen mukaan olosuhteissa, jotka on kuvattu edellä kaavan II mukaisen amiinin ja kaavan III mu-30 kaisen halogenidin tai alkyylihalogenidin välisenä reaktiona.

5) Kaavan I mukaisten N-alkyloitujen tuotteiden valmistuksessa voi tietyissä tapauksissa olla mielenkiintoista toimia erityisellä tavalla: 35 - kaavan (I) mukaisen N-monometyloidun tuotteen valmista- 9 77871 miseksi voidaan valmistaa kaavan (II) mukaisen tuotteen amiinin karbamaatti esimerkiksi alkyyli- ja etenkin etyylihalogeeniformiaatin avulla, sitten pelkistämällä karbamaatti esimerkiksi alumiini-litiumhydridin avulla; 5 - kaavan (I) mukaisen N-aminoetyloidun tuotteen valmis tamiseksi voidaan valmistaa vastaava N-asetyloitu johdannainen ja pelkistää se sitten; - N-dietyloidun johdannaisen valmistamiseksi ei tarvitse kuin toistaa edellinen toimenpide; 0 9f 10 Näissä kolmessa tapauksessa, kun X on ryhmä -C-CH^» on tarpeen valmistaa ketaali 20-asemaan esimerkiksi etyleeniglykolin avulla ja sitten pelkistyksen jälkeen hydrolysoida tämä ketaali esimerkiksi epäorgaanisen hapon avulla.

15 - Kaavan I mukaisen N-mono tai di-isopropyloidun tuotteen valmistamiseksi voidaan antaa kaavan II mukaisen tuotteen reagoida asetonin kanssa pelkistimen, esim. nat-tiumsyanoboorihydridin läsnäollessa.

20 On aivan ilmeistä, että keksinnön mukaisessa menetelmässä aminofunktioiden suojaaminen ei koske tapauksia, joissa nämä aminoryhmät on alkyloitu.

Kaavan I mukaiset johdannaiset lukuunottamatta niitä, joissa on asyyli- tai asyylioksiryhmä, ovat 25 luonteeltaan emäksisiä. Voidaan helposti valmistaa suo loja kaavan I mukaisista johdannaisista antamalla epäorgaanisen tai orgaanisen hapon reagoida juuri stökiömet-risissä suhteissa mainitun kaavan I mukaisen johdannaisen kanssa. Suolat voidaan valmistaa eristämättä vas-30 taavia emäksiä.

Tällä menetelmällä, jota tämä keksintö koskee, valmistetuilla johdannaisilla on hyvin mielenkiintoisia farmakologisia ominaisuuksia; niillä on etenkin huomattavia immunoterapeuttisia ominaisuuksia. Ne kykene-35 vät erityisesti stimuloimaan immunoreaktioita.

10 77871 Näitä ominaisuuksia kuvataan edempänä kokeellisessa osassa.

Nämä ominaisuudet oikeuttavat käyttämään kaavan (I) mukaisia 3-aminosubstituoituja steroidijohdannai-5 siä sekä niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja lääkkeinä.

Keksinnön mukaisten lääkkeiden joukosta muistettakoon etenkin lääkkeet, jotka ovat muodostuneet uusista 3-aminosubstituoiduista steroidi johdannaisista kaavan 10 I mukaisesti, jossa X on ryhmä CH^

' M) H

sekä niiden suoloista, jotka ovat muodostuneet lisättäessä hyväksyttäviä farmaseuttisia happoja.

15 Näiden joukosta muistettakoon etenkin kaavan I

mukaiset yhdisteet, joissa X on ryhmittymä CH^ CH.

/ ''OH

ja R2 on vetyatomi tai metyyliryhmä, sekä niiden suolat, 20 jotka ovat muodostuneet lisättäessä farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoja.

Jälkimmäisten joukosta mainittakoon erityisesti johdannaiset, joiden nimet ovat: - 2-amino-N-£(20S) -20-hydroksi (5o£) pregnan-3*£-yyli7pro- 25 panamidi, - (2S) 2-amino-N-/1(20S)-20-hydroksi (5et) pregnan-3*^-yyli7“ lH-indoli-3-propanamidi, - 2-amino-N-^-/~(20S) -20-hydroksi-19-nor (5oö pregnan-3*C yyli/asetamidi 30 - 2-amino-N-/l20S)-20-hydroksi (5«t) pregnan-3Jcyyli7"N- metyyliasetamidi sekä niiden suolat, jotka ovat muodostuneet lisättäessä farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoja.

Keksinnön mukaisia lääkkeitä käytetään esim.

35 hoidettaessa autoimmuunisairauksia, jotka johtuvat i 11 77871 tiettyjen lymfosyyttien puutteesta, jolloin on kyse jonkun elimen epäspesifisestä sidekudossairaudesta, esimerkiksi reumatoidia artriitista, systeemisestä lupus erythematosuksesta tai jonkun elimen spesifisestä 5 sairaudesta kuten tyreodiitti, pehmphigus tai hemo-lyyttinen anemia.

Keksinnön mukaisia lääkkeitä voidaan käyttää myös lisähoitona antibioottiterapiassa ja syövän kemotera-piassa.

10 Käytetyn johdannaisen, hoidettavan kohteen ja kyseisen sairauden mukaan vaihteleva tavallinen annos voi olla esimerkiksi 10 mg-1 g päivässä suun kautta ihmisellä esimerkin 14 mukaiselle johdannaiselle, jota käytetään lisänä antibioottiterapiassa.

15 Kaavan I mukaisia johdannaisia sekä niiden suo loja, jotka ovat muodostuneet lisättäessä farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoja, voidaan käyttää farmaseuttisten valmisteiden valmistamiseen, joissa vaikuttavana aineena on ainakift yksi mainituista johdannaisista tai 20 ainakin yksi mainituista suoloista.

Kaavan I mukaisia johdannaisia ja niiden suoloja, jotka ovat muodostuneet lisättäessä farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoja, voidaan sekoittaa lääkkeinä farmaseuttisiin valmisteisiin, jotka on tarkoitettu annet-25 tavaksi suun kautta tai parenteraalisesti.

Farmaseuttiset valmisteet voivat olla esimerkiksi kiinteitä tai nesteitä ja farmaseuttisissa muodoissa, joita käytetään yleisesti ihmislääketieteessä, kuten esimerkiksi tabletteina, yksinkertaisina tai ra-30 keina, hyytelöinä, rakeina, suppositoreina, injektoitavina valmisteina; ne valmistetaan tavallisilla menetelmillä. Vaikuttava(t) aine(et) voidaan sekoittaa täyteaineisiin, joita käytetään yleisesti farmaseuttisissa valmisteissa, kuten talkki, arabikumi, laktoosi, tärkke-35 lys, magnesiumstearaatti, kaakaovoi, vettä sisältävät tai ei-vesipitoiset kantajat, eläin- tai kasvikunnasta i2 77871 peräisin olevat rasvat/ parafiinijohdannaiset, glykolit, erilaiset.vaahtoavat, dispergoivat tai emulgoivat aineet, säilöntäaineet.

Kaavan II mukaiset lähtötuotteet, kun niitä ei 5 tunneta, voidaan valmistaa seuraavasti:

Annetaan kaavan V mukaisen tuotteen jossa R^ ja aaltoviiva merkitsevät samaa kuin edellä on jo osoitettu, reagoida ylimäärän kanssa etyylitrifenyy-lifosfoniumbromidia tai kaliumterbutylaattia, jolloin 15 saadaan kaavan VI mukainen tuote: n • jossa R^ ja aaltoviiva merkitsevät samaa kuin edellä jo on osoitettu, joka muutetaan esimerkiksi johtamalla to-sylaattiliuokseen ja käsittelemällä sitten natriumatsi-25 dilla tai suoraan antamalla reagoida difenyyliatsidofos-faatin kanssa etyyliatsodikarboksylaatin ja trifenyyli-fosfiinin läsnäollessa kaavan VII mukaiseksi atsidiksi:

VII

jossa R^ ja aaltoviiva merkitsevät samaa kuin edellä on 35 jo osoitettu ja konfiguraatio asemassa 3 on käänteinen i3 77871 yhdisteille V ja VI, joka pelkistetään esimerkiksi alu-miini-litiumhydridin avulla, jolloin saadaan kaavan IIA mukainen amiini: - 10 jossa R^ ja aaltoviiva merkitsevät samaa kuin jo edellä on osoitettu, joka - joko eristetään, - tai pelkistetään esimerkiksi hydrogenaatiolla katalysaattorin läsnäollessa, joka on pohjaltaan rodiumia,

15 palladiumia tai platinaa, jolloin saadaan kaavan IID

D

mukainen tuote - jossa ja aaltoviiva merkitsevät samaa kuin jo edellä on osoitettu, - tai hydrataan esimerkiksi diboraanin avulla, jolloin 25 saadaan kaavan IIC mukainen tuote: jossa R^ ja aaltoviivat merkitsevät samaa kuin jo on osoitettu, joka joko eristetään tai hapetetaan esim. kromihapon avulla, jolloin saadaan kaavan IID mukainen 35 tuote: 14 77871 CH3 5 H2N ^ jossa ja aaltoviiva merkitsevät samaa kuin jo on osoitettu, - tai suoritetaan cis-dihydroksylaatio esimerkiksi osmiumhapon anhydridin avulla trimetyylioksamiinin läs-10 näollessa sen jälkeen, kun aminoryhmä on suojattu tai ei helposti hydrolysoituvalla ryhmällä kuten trifluori-asetyyliryhmällä, jolloin saadaan kaavan IIE mukainen tuote: qj

R

jossa R on edellä määritelty suojaava ryhmä tai vety-20 atomi, ja R^aaltoviiva merkitsevät samaa kuin jo on osoitettu, joka joko eristetään, kun R on vetyatomi, tai kun R on suojaava ryhmä, suoritetaan mainitun suojaa-van ryhmän.irrottaminen esimerkiksi alkaalihydrolyysil-lä, kun ryhmä on trifluoriasetyyli, sitten eristetään 25 saatu vapaa amiini, tai suoritetaan hapetus esimerkiksi kromihapon avulla, jolloin saadaan kaavan ΙΙρ mukainen tuote: is 778 71 CH3

11F

5 ?

R

jossa R, ja aaltoviiva merkitsevät samaa kuin jo on osoitettu, joka joko eristetään kun R on vetyatomi, tai kun R on suojaava ryhmä, suoritetaan mainitun suo-10 jaavan ryhmän irrottaminen, eristetään sitten saatu vapaa amiini, tai pelkistetään esimerkiksi natriumboori-hydridin avulla, jolloin saadaan kaavan II_ mukainen tuote: 15 fH3 f on & 20 1 jossa R, R^ ja aaltoviivat merkitsevät samaa kuin jo on osoitettu, joka joko eristetään, kun R on vetyatomi, tai kun R on suojaava ryhmä, suoritetaan mainitun suo-jaavan ryhmän irroittaminen, sitten eristetään saatu 25 vapaa amiini.

Kaavan (II) mukaisten tuotteiden valmistusesi-: · merkit kuvataan jäljempänä kokeellisessa osassa.

Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä sitä kuitenkaan rajoittamatta.

ie 77871

Esimerkki 1: (2S) 2-amino-N-/(20S)-20-hydroksi-(5oL)-pregnan-3«<ryyli/propanamidi (kloorihyd-raatti ja emäs)

Vaihe A: 2-/1,1-dimetyylietoksikarbonyyliamino/- 5 N-/ (20S) -20-hydroksi- (5o() pregnan-3otyyli/propanamidi

Liuotetaan 1,92 g (20S) 3e£-amino- (5o{) pregnan- 20-olia ja 2,27 g tertbutyylioksikarbonyyli-L-alaniinia 3 3 (BOC-L-Alaniini) 60 cm :iin kloroformia ja 12 cm pyri-diiniä. Sekoitetaan liuosta 0°C/+5°C inertissä atmosfää-10 rissä ja lisätään 1,14 g l-etyyli-3-(3-dimetyyliamino-propyyli) karbodi-imidin kloorihydraattia. Yhden tunnin ja 15 minuutin kuluttua lisätään uudestaan 1,15 g l-etyyli-3-(3-dimetyyliaminopropyyli)karbodi-imidin kloorihydraattia, sekoitetaan 50 minuuttia 0°C/+5°C, 15 haihdutetaan kuiviin, liuotetaan natriumbikarbonaatin vesiliuokseen, uutetaan etyyliasetaatilla, pestään kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella ja sitten IN kloorivetyhapon vesiliuoksella ja uudestaan kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella, kuivataan, haihdutetaan 20 kuiviin, kiteytetään isopropyylieetteristä, kuivataan ilmassa, pestään isopropyylieetterillä, kuivataan 60°C: ssa alennetussa paineessa ja saadaan haluttu tuote.

Sp. = 171°C.

Vaihe B: (2S) 2-amino-N-/ (20S) -20-hydroksi-(5ol) - 25 pregnan-3o£-yyli/propanamidin kloori- hydraatti ja emäs.

Muunnelma 1: Suspendoidaan inertissä atmosfää- 3 rissä 1,55 g vaiheessa A saatua tuotetta 100 cm :iin nitrometaania, annetaan sekoittua 10 minuutin ajan 30 kloorivetyhapon kanssa, sekoitetaan 20-25°C:ssa 35 minuuttia, poistetaan ylimäärä kloorivetyhappoa, kuivataan ilmassa, pestään etyylieetterillä, kuivataan 50°C: ssa alennetussa paineessa, kiteytetään uudestaan meta-nolista ja saadaan 990 mg haluttua tuotetta. Sp. ^ 220°C.

17 77871

Muunnelma 2: Liuotetaan inertissä atmosfääris- 3 sä 2,7 g vaiheessa A saatua tuotetta 10 cm :iin etano- 3 lia, lisätään 40 cm kloorivetyhappoista etanolia (3,5N), sekoitetaan 8 tuntia, haihdutetaan kuiviin, liuotetaan 5 etyyliasetaattiin, jäähdytetään, kuivataan ilmassa, pestään etyyliasetaatilla, kuivataan 60°C:ssa alennetussa paineessa, kiteytetään uudelleen metanolista ja saadaan 2,2 g haluttua kloorihydraattia. Sp. ^ 220°C.

Emäksen valmistus: 3 10 Liuotetaan 1,74 g kloorihydraattia 100 cm :iin 30 % tetrahydrofuraania vedessä, lisätään 4 cm^ 2N soo- 3 daa, haihdutetaan kuiviin, liuotetaan 100 cm :iin kloroformia, pestään vedellä, kuivataan, haihdutetaan kuiviin, kiteytetään uudelleen etyyliasetaatista ja saadaan 15 1,27 g haluttua emästä. Sp. = 224°C.

Toimimalla yllä kuvatulle tavalle analogisesti valmistettiin alla olevassa taulukossa olevat johdannaiset .

ie 77 8 71 i i i i i “in UOUO Ό Ό Ό g ad °o|a°o§ <p| 0U~ ou§ Jl (xj CM-H-H rH-H-~0-i-l~-.inW IT) -H .—. O -H -p (M +) tN M -H ^ -rH m :gl γ- ρ -h p -h -h 8 3 8 ±i ^ 8 S ^ i fs8tifN8ti“ou

r-j ra iH ftf rH (tf ^ r—I (tf H (Ö O (N

Mu ^ g Mg ^Jtf^rooin ^ /-N , fN/ co co to co 0 5

V / J V. > V. ^ CO

l o 15 ' f

W _ Cti Γ Ä-Ä V

^ ^ u a \—^ · a pi I o I \ g <3 N N CS n I \ -2 —/ a a a a I z-a ' , \ u υ υ υ k ^ \_ I OI | CN I CM | <S * \ SS SIS KEii 5333 ^ ^ \ u-E u-E u-E o-£ —^ _U _S Λ -i _ V-O ia I -H Λ ä

tl i! If s II I I H

v_/ || ^,5 ¥ |l r| ¥· Is, V_«r |.s f ΐ f” fl f pa / il 8 S 8 8 88 a a! -p m m a m_ a a__ : .3 a •d + 3 §

n —* (rt f—( <—I ΓΊ U

g (rt g n 3 e 8 p* ä s__° 5 M oi m <t ir\ Ό r*»

JS

m M____ is 778 71

Huomautus esimerkkiin no. 2: L-glutamiinihapon toinen happofunktio on estetty bentsyyliesterin muodossa; se vapautetaan katalyyttisellä hydrogenaatiolla etikkahapossa palladiumin läsnäolles-5 sa ennen BOCrn lohkaisemista.

Esimerkki 8: N-/ (20S) -20-hydroksi (5®0 pregnan-3*^ryyli/3-pyridiinikarboksiamidi

Liuotetaan inertissä atmosfäärissä 960 mg (20S) 3eicamino (pregnan-2 0-olia ja 813 mg nikotiinihap-3 3 10 poa 30 cm :iin kloroformia ja 6 cm :iin pyridiinia, lisätään 582 mg l-etyyli-3-(3-dimetyyliaminopropyyli)-karbodi-imidin kloorihydraattia. 3 tunnin ja 30 minuutin kuluttua lisätään sekoittaen 291 mg l-etyyli-3-(3-dimetyyliaminopropyyli)karbodi-imidin kloorihydraattia, 15 sekoitetaan 16 tuntia, haihdutetaan kuiviin, liuote- 3 taan 30 cm ;iin vettä, jäähdytetään haihdutetaan kuiviin, pestään vedellä, kuivataan 80°C:ssa alennetussa paineessa, kiteytetään uudestaan metanolistaja saadaan 290 mg haluttua tuotetta. Sp. = 258°C. = 14,5° + 20 1° (c = 1 % pyridiini).

Esimerkki 9: 2-amino-N-/(20S) 17^, 20-dihydroksi (5jtJ preg-nan-3«/5-yyli/asetamidin kloorihydraatti Toimimalla analogisesti esimerkissä 1 kuvatulle (muunnelma 2) menetelmälle käyttämällä lähtöaineena 25 BOC-glysiiniä ja (20S) 3^-amino-Se^c-pregnan-l?^, 20-diolia saadaan haluttu tuote. Sp. - 200°C.

S?D = +4° + 1° (c = 1, 5 % etanoli 95 %) .

(20S) 3 *fcamino-5jc-pregnan-17·^ 20-dioli lähtöaine voidaan valmistaaseuraavasti: 30 Vaihe 1: (Z) (5y0 pregnan-17 (20) eeni-3 e£-oli

Lisätään 59,4 g trifenyylietyylifosfoniumbro-midia liuokseen, jossa on 16,1 g tertiääristä kalium- 3 butylaattia 160 cm :ssä tetrahydrofuraania, sekoitetaan 30 minuuttia, lisätään 23,2 g epiandrosteronia, 35 sekoitetaan 15 tuntia, kaadetaan jääkylmään veteen, uute- 2o 7 7871 taan etyyliasetaatilla, pestään vedellä, kuivataan, tislataan kuiviin, puhdistetaan silikageelikromato-grafialla (eluantti: sykloheksaani-etyyliasetaatti 7-3), kiteytetään metanolista, jäähdytetään, kuivataan il-5 massa, kuivataan ja saadaan 23,1 g haluttua tuotetta. Sp. = 160°C.

Vaihe 2: (Z) 3©{-atsido (5«Q pregnan-17 (20) -eeni Lisätään 1,92 g etyyliatsodikarboksylaattia ja 3,02 g difenyyliatsidofosfaattia liuokseen, jossa 3 10 on 1,66 g yllä olevaa tuotetta 30 cm :ssä bentseeniä 3 ja 5 cm :ssä tetrahydrofuraania, sekoitetaan jäähautees-sa, lisätään 20 minuutin aikana liuos, jossa on 2,88 g 3 trifenyylifosfiinia 30 cm :ssä bentseeniä, sekoitetaan vielä 40 minuuttia 10°C:ssa, pestään 2N kloorivetyhap-15 poliuoksella, sitten vedellä, kuivataan ja tislataan kuiviin, kromatografoidaan silikageelillä (eluantti: heptaani, sitten heptaani-etyylieetteri 1-1) ja saadaan 1,67 g haluttua tuotetta kiteinä. Sp. = 114°C uudelleenkiteyttämisen jälkeen metanolista.

20 Vaihe 3 ; (Z) 5*k-pregnan-17 (20) -eeni-3o£amiini (ja kloorihydraatti) 3

Liuotetaan 290 cm :iin tetrahydrofuraania 14,5 g (Z) 3 o4-atsido (5e(0 pregnan-17 (20)-eeniä sellaisena kuin edellä on saatu, sekoitetaan lämmittä-25 en 25-27°C:ssa, lisätään tunnin aikana 800 mg alumiini-litiumhydridiä, sekoitetaan vielä 1 tunti, poistetaan ylimäärä hydridiä metanolilla, suodatetaan, pestään suodos Seignette-suolan vesiliuoksella sitten kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella, kuivataan, tisla-30 taan kuiviin ja saadaan 13,1 g halutun amiinin kiteitä. Sp. = 90°C.

• 3

Liuotetaan emäs 150 cm :iin etyyliasetaattia • 3 3 ja 30 cm :iin metyleenikloridia, lisätään 27 cm etyyliasetaattia, joka on 1,7 N kloorivetyhapon suhteen, 35 kuivataan ilmassa, pestään etyyliasetaatilla ja kuiva- 2i 77871 taan alennetussa paineessa saadut kiteet ja saadaan 13,2 g halutun tuotteen kloorihydraattikiteitä. Sp. >300°C.

1 % pyridiinissä, 10 % vedessä = 38,5° + 1,5°.

Vaihe 4: N-/ (Z, 5o£) -pregnan-17 (20) -eeni-3°£-yyli/-5 trifluoriasetamidi

Suspendoidaan inertissä atmosfäärissä 16,5 g edellisessä vaiheessa 3 saatua kloorihydraattia 165 cm^: 3 iin metyleenikloridia ja 16,5 cm :iin pyridiiniä, jäähdytetään noin 5°C:een, lisätään 16,5 cm^ trifluorietik-10 kahappoanhydridiä 5 minuutin aikana, sekoitetaan 15 minuuttia huoneen lämmössä, tislataan kuiviin alennetussa paineessa, lisätään 200 cm^ vettä, kuivataan ilmassa, pestään vedellä, kuivataan alennetussa paineessa ja saadaan 18,1 g kiteitä. Sp. = 204°C.

15 Vaihe 5: N-/(20S) 17o6 20-dihydroksi (5«i)pregnan- 3o£-yyli/trifluoriasetamidi.

Liuotetaan inertissä atmosfäärissä 18,1 g edel- 3 lä saatua tuotetta 100 cm :iin metyylietyyliasetonia, lisätään 9 g trimetyyliamiinin N-oksididihydraattia 3 20 sekä liuos, jossa on 360 mg osmiumtetroksidia 71 cm metyylietyyliasetonia, sekoitetaan 2 tuntia pystyjääh- 3 dyttäjän alla, annetaan jäähtyä, lisätään 200 cm 10 % natriumtiosulfaatin vesiliuosta, sekoitetaan 30 minuuttia huoneen lämmössä, dekantoidaan, pestään vedellä, 25 kuivataan magnesiumsulfaatilla, suodatetaan, tislataan kuiviin alennetussa paineessa, puhdistetaan saatu öljy silikageelikromatografiällä (eluantti: bentseeni-etyyli-asetaatti 7-3) ja saadaan 14 g haluttua tuotetta; sp. = 172°C sitten 192°C.

30 Vaihe 6 : (20S) 3e(-amino-5o^-pregnan-17o6 20-dioli

Liuotetaan inertissä atmosfäärissä 4 g edellä 3 3 saatua tuotetta 20 cm :iin metanolia, lisätään 8 cm soodaliuosta, sekoitetaan 1 tunti 30 minuuttia, lisä- 3 tään 50 cm vettä, sekoitetaan 10 minuuttia, kuivataan 35 ilmassa, pestään vedellä, kuivataan alennetussa paineessa 40°C:ssa ja saadaan 3 g haluttua tuotetta. Sp. = 210°C.

22 778 71

Esimerkki 10; 2-amino-N-/(20S)-20-hydroksi-19-nor(5oO - pregnan-3<^-yyli/asetamidin kloorihydraatti Toimimalla analogisesti esimerkissä 1 kuvatulle menetelmälle (muunnelma 1) käyttämällä lähtöaineena 5 BOC-glysiiniä ja (20S) 3ok-amino-19-nor (5o0 pregnan-30-olia saadaan haluttu tuote. Sp. - 270°C härmistyksellä. (j$O +39,5° + 1,5° (c = 1 % metanoli) Lähtöaine (20S) 3*£amino-19-nor{5U.)pregnan-20-oli voidaan valmistaa seuraavasti: 10 Toimimalla samalla tavalla kuin esimerkissä 9 (vaiheet 1,2,3) valmistettaessa (Z) 5«£-pregnan-17 (20)-eeni-3w(ramiinia valmistettiin (Z) 5*£-19-nor-pregnan-17-(20) -eeni-3«4-amiini käyttämällä lähtöaineena 19 nor-epiandrosteronia.

15 Suspendoidaan typen alla 156 mg natriumboro- hydridiä 5 cm3:iin tetrahydrofuraania, lisätään tipoi-tain +5°C:ssa liuosta, jossa on 0,5 cm3 booritrifluori- 3 dieteraattia 2,5 cm :ssä tetrahydrofuraania, sekoitetaan 1 tunti jäähauteessa, lisätään 296 mg (Z) 5*4-19-nor-20 pregnan-17(20)-eeni-3*£-amiinia liuotettuna 3 cm3:iin tetrahydrofuraania, sekoitetaan 1 tunti 30 minuuttia huoneenlämmössä, jäähdytetään jäähauteella, lisätään 3 hitaasti 2 cm 6N soodaa, sekoitetaan 5 minuuttia huoneen lämmössä, dekantoidaan, uutetaan vesifaasi tetra- 25 hydrofuraaniin, pestään orgaaninen faasi vedellä, lisä-3 3 tään 4 cm 5N soodaa, 2 cm hapetettua vettä 110 tilavuutta kohti, sekoitetaan 45 minuuttia, uutetaan etyyliasetaatilla, pestään vedellä, kuivataan ja tislataan kuiviin alennetussa paineessa. Kuiva uute liuotetaan 30 uudestaan 10 cm :iin metanolia, jossa on 5 cm IN kloo-rivetyhappoa, lämmitetään 30 minuuttia 50°C:een vesihauteessa, kaadetaan kyllästettyyn natriumbikarbonaatti-liuokseen, uutetaan metyleenikloridilla, pestään vedellä, kuivataan, haihdutetaan alennetussa paineessa ja saa-35 daan 257 mg halutun tuotteen kiteitä. Sp. ^ 190°C.

23 77871

Esimerkki 11; 2-amino-N-/17*(rhydroksi-20-okso-5«{-pregnan-3oi-yyli/asetamidin kloorihydraatti Toimimalla analogisesti esimerkissä 1 kuvatulle menetelmälle (muunnelma 2) käyttämällä lähtöaineena 5 BOC-glysiiniä ja 3c£-amino-17eL-hydroksi-5«^-pregnan-20-onia saadaan haluttu tuote. Sp. >300°C.

= -50° + 1° (c = 1 % etanoli 95 %) .

Lähtöaine 3o£-amino-17 et-hy dr ok s i - 5«£-r egnan - 2 0 -onia voidaan valmistaa seuraavasti: 10 Hapettamalla esimerkissä 9 vaiheessa 5 saatu tuote perkromaatilla valmistettiin N-(17oi-hydroksi-20-okso-5ot-pregnan-3o£-yyli) trif luoriasetamidia (sp. = 178°C sitten 186°C), jota käsitellään kuten esimerkin 9 vaiheessa 6 on osoitettu, jolloin saadaan 3«/C-amino-17*C-15 hydroksi-5e6-pregnan-20-onia. Sp. = 216°C (vedestä ki- teyttämisen jälkeen).

Esimerkki 12: 2-amino-N-/ (20R) -20-hydroksi-5«4-pregnan-3o/t-yyli/asetamidin kloorihydraatti Toimimalla esimerkissä 1 kuvatulle menetelmälle 20 (muunnelma 1) analogisesti käyttämällä lähtöaineena BOC-glysiiniä ja (20R) 3e£-amino-5o£-pregnan-20-olia saadaan haluttu tuote. Sp. = 210°C sitten 260°C.

= +22° + 1° (c = 0,8 % pyridiini 10 %:na vedessä). Esimerkki 13: N-/ (20S) -20-hydroksi (5«1) -pregnan-3^-yyli/-25 etyylikarbamaatti.

Lisätään tipottain 10 minuutin aikana inertissä atmosfäärissä 5 g (20S) 3o6-amino-5«£-pregnan-20-olia 3 3 liuokseen, jossa on 500 cm metyleenikloridia, 15 cm 3 etyylikloroformiaattia ja 45 cm metyleenikloridia, se-30 koitetaan 30 minuutin ajan lisätään 20 cm'* IN soodaa, sekoitetaan vielä 30 minuuttia, dekantoidaan, uutetaan metyleenikloridilla, pestään vedellä, kuivataan, suodatetaan, haihdutetaan kuiviin alennetussa paineessa, liuotetaan uudelleen etyyliasetaattiin, kuivataan ilmas-

^ O

35 sa ja saadaan 5,7 g haluttua tuotetta. Sp. - 198 C.

24 7 7 8 71 + 25° + 1,5° (c = 1 % metyleenikloridi)

Esimerkki 14: 2-amino-N-/(20S)-20-hydroksi-5ofcrpregnan- 3*t-yyli/~N-metyyliasetamidin kloorihydraatti Pelkistämällä esimerkissä 13 saatu tuote valmis-5 tettiin (20S) 3o£metyyliamino-5,/rpregnan-20-olia sp. = 170°C) Vetterin ja työtovereiden menetelmällä, joka on kuvattu Bull. Soc. (1963) 1324:ssä, sen annettiin reagoida BOC-glysiinin kanssa esimerkissä 1 kuvatun menetelmän mukaisesti (muunnelma 1), jolloin saa-10 tiin haluttu tuote, jonka kloorihydraatti valmistet tiin. Sp. 250°C.

Esimerkki 15: 2(S) 2-amino-N-metyyli-N-/(20S)-20-hydrok-si-5öt-pregnan-3 o£-yyli/propanamidin kloorihydraatti 15 Annetaan (20S) 3 »4-metyyliamino-5*£pregnan-20-olin reagoida BOC-L-alaniinin kanssa esimerkissä 1 (muunnelma 1) kuvatulla tavalla, jolloin saadaan haluttu tuote, jonka kloorihydraatti valmistettiin. F >270°C.

Esimerkki 16: 2(R) 2-amino-N-metyyli-N-/(20S) 20-hydrok-20 si-5«fc-pregnan-3»tyyli/propanamidin kloori hydraatti

Annetaan (20S) 3 oJc-metyyliamino-5«fc-pregnan-20-olin reagoida BOC-L-alaniinin kanssa esimerkissä 1 kuvatun menetelmän mukaisesti (muunnelma 1), jolloin saadaan ha-25 luttu tuote, jonka kloorihydraatti valmistettiin. (Härmistyy noin 260°C:ssa).

Esimerkki 17: (20S) 3o£-etyyliamino-5 4-pregnan-20-oli

Annetaan (20S)-3*£amino-5»£pregnan-20-olin reagoida etyylijodidin kanssa natriumkarbonaatin läsnäollessa, 30 jolloin saadaan halutun tuotteen emäs. Sp. = 129°C uudelleenkiteyttämisen jälkeen etyyliasetaatista.

Kloorihydraatin muodostaminen: kloorihydraatti valmistetaan lisäämällä etyyliasetaatin hydrokloridia jolloin saadaan haluttu tuote. Sp. >270°C.

i 25 778 71

Esimerkki 18; 2-amino-N-etyyli-N-/(20S) 20-hydroksi-5»4 pregnan-3 *4-yyli/asetamidin kloorihyd-raatti

Annetaan esimerkin 17 tuotteen emäksen reagoida 5 BOC-L-glysiinin kanssa esimerkissä 1 (muunnelma 1) ku vatun menetelmän mukaisesti, jolloin saadaan haluttu tuote, jonka kloorihydraatti valmistetaan. Sp. - 230°C. Esimerkki 19: (20S) 3o4-/(2-hydroksietyyli) amino/5e(rpreg-nan-20-oli 10 Suspendoidaan 7 g (20S) 3«&-amino-5*tpregnan-20- 3

Olia ja 7 g natriumkarbonaattia 100 cm vedetöntä diok- 3 saania, lisätään 6,6 cm 2-/2-bromietoksi/tetrahydropy-raania ja pidetään pystyjäähdyttäjän alla 24 tuntia inertissä atmosfäärissä. Jäähdytetään huoneen lämmössä, 15 laimennetaan vedellä, uutetaan eetteriin, kuivataan, tislataan kuiviin alennetussa paineessa, puhdistetaan silikageelikromatografialla (eluantti: kloroformi-metanoli-etikkahappo 85-5-10) ja saadaan 7,7 g keltaista öljyä.

20 Suojaavan ryhmän hydrolyysi 3

Liuotetaan 3 g edellä saatua tuotetta 30 cm :iin 3 etanolia ja 15 cm :iin 2N kloorivetyhappoa, sekoitetaan pystyjäähdyttäjän alla 1 tunti 30 minuuttia, jäähdytetään, kaadetaan 100 cm3:iin natriumbikarbonaatin vesi-25 liuosta, jäähdytetään 15 minuuttia, kuivataan ilmassa, pestään vedellä, kuivataan 40°C:ssa alennetussa paineessa, liuotetaan 350 emaliin 10 % metyleenikloridia meta- 3 nolissa, suodatetaan, konsentroidaan noin 50 cm , lisä- 3 tään 100 cm etyyliasetaattia, konsentroidaan puoleen 3 30 ja kuivataan sakka ilmassa. Liuotetaan se 100 cm :iin 3 metanolia, suodatetaan, konsentroidaan noin 30 cm :iin, lisätään 70 cm3 etyyliasetaattia, konsentroidaan puoleen, kuivataan ilmassa ja 40°C:ssa alennetussa paineessa, jolloin saadaan 1,65 g halutun tuotteen emästä.

35 Sp. = 215°C.

3 26 7 7 8 71

Kloorihydraatin muodostaminen

Liuotetaan 1,5 g edellä saatua emästä 40 cm metanolia, lisätään etyyliasetaattiliuosta, joka on 3 tehty happameksi 1,6N kloorivetyhapolla, lisätään 60 cm 5 etyyliasetaattia, konsentroidaan alennetussa paineessa, kuivataan ilmassa ja 40°C:ssa alennetussa paineessa, jolloin saadaan 1,5 g haluttua tuotetta. Sp. >260°C.

Esimerkki 20: oi-dimetyyliamino-N-/ (20S) 20-hydroksi-5*4-pregnan-3«k-yy.li/asetamidi.

10 Toimimalla kuten esimerkin 1 vaiheessa A käyttä mällä 2,552 g (20S) 3«4-amino-5 «fcpregnan-20-olia ja 3,350 g Ν,Ν-dimetyyliglysiinin kloorihydraattia. Saadaan 4 g raakatuotetta, joka sisältää haluttua johdannaista ja 0,N-disubstituoitua johdannaista. Saippuoimalla soodal-15 la metanolissa saadaan haluttu tuote. Sp. 206°C.

(U/ = +29° + 1° (C = 1 % CHC13) .

Esimerkki 21;

Valmistettiin alla olevan kaavan mukaisia tabletteja: (2S) 2-amino-N-/ (20S) -20-hydroksi-5o£-pregnan-3«l«-yyli/-20 propanamidin kloorihydraattia 20 mg täyteainetta ad. 100 mg (Täyteaineen erittely: laktoosi, tärkkelys, talkki, mag-nesiumstearaatti).

Esimerkki 22: 25 Valmistettiin alla olevan kaavan mukaisia tabletteja: 2-amino-N-/ (20S) -20-hydroksi-5.^-pregnan-3«£-yyli/N-me-tyyliasetamidin kloorihydraattia 15 mg täyteainetta ad. 100 mg (Täyteaineen erittely: laktoosi, tärkkelys, talkki, mag-30 nesiumstearaatti).

Esimerkki 23 ( o< S,20S)- o(. -amino-N-/"20-hydroksi-5 oC - pregnan-3/S -yyliJ>-1H-indoli-3-propaaniamidi. Toimitaan kuten esimerkissä 1 (suoritusmuoto 2) sekoittamalla 6 tuntia 5N-etanolihydrokloridin läsnäollessa, jolloin 35 saadaan otsikkoyhdiste, sp. 140°C. Lähtöaineena käytetään (20S)-3 /5 -amino-5 c* -pregnan-20-olia.

27 7 7 8 71

Farmakologinen tutkimus 1. Anafylaktisen shokin adjuvantti

Periaate:

Kun annetaan eläimelle tuotetta, joka pystyy sti-5 muloimaan immunosysteemin toimintaa, se ilmenee lisääntyneenä shokkivasteena sen antigeenin antamiselle, jolle eläin on herkistynyt.

Koiraspuolisia hiiriä, jotka painavat 30-35 g herkistetään ruiskuttamalla naudan albumiinia jalkapoh- 10 jiin. 8 päivää myöhemmin niille annetaan samaa antigeeniä suonensisäisesti. Tässä pienimmässä herkistymisti-lanteessa kontrollieläimet eivät saa kuolemaan johtavaa shokkia tämän viimeisen annoksen jälkeen.

Tutkittavaa tuotetta injektoidaan eläimen jalka- 1Γ> pohjiin antigeeniin sekoitettuna: jos tämä tuote on adjuvantti, se lisää herkistymistä ja saa aikaan kuolemaan johtavan shokin annettaessa suonensisäisesti.

Toimivana annoksena pidetään annosta, joka aikaansaa kuoleman 50 % tai enemmässä eläimistä.

20 Tulokset: Esimerkin tuote Annos eläintä kohti _mg:na 1 0,5 2 - 1 4 5 25 5 5 6 2 7 1 8 5 9 1 30 10 0,5 13 5 14 0,5 2. Lampaan punasolujen prosenttimuodostuskoe

Periaate: 35 Kun annetaan eläimelle tuotetta, joka kykenee stimuloimaan immunojärjestelmien toimintaa, se ilmenee niiden reaktiokyvyn lisääntymisenä injektoitaessa immunogeenistä tuotetta.

28 7 7 8 71 3 kuukauden ikäisiä koirasrottia herkistettiin vatsaontelon kautta lampaan punasoluilla (päivä 0), 7 päivää myöhemmin (päivä 7) niiden perna poistettiin ja splenosyyttien annettiin olla kosketuksissa lampaan 5 punasolujen kanssa: sen jälkeen laskettiin prosentteina leukosyyttien määrä, joiden ympärille punasolut olivat muodostaneet keräsiä (rosetteja).

Tutkittavaa tuotetta annettiin suun kautta joka päivä päivästä -1 päivään 1.

10 Tuotteen immunostimulanttina annoksena pidetään annosta, joka noin kaksinkertaistaa havaittujen rosent- tien määrän kontrollieläimiin verrattuna.

Tulokset: Esimerkin tuote Annos eläintä kohti __mg/kg_ n c suun kautta 15 1 1 5 2 6 >5 8 5 10 5 20 11 5 14 10 3. Akuutin myrkyllisyyden tutkimus Määritettiin kuolettavat annokset LD erilaisil- o 25 le tutkittaville yhdisteille, kun hiirille oli annettu yhdistettä suun kautta.

LDQ-arvoksi nimitetään annosta, joka ei aiheuta kuolemaa 8 päivän kuluttua.

29 7 7 8 71

Tulokset: Esimerkin tuote LD0 mg/kg 1 200 2 >400 3 >400 5 4 >400 5 >1000 6 >800 7 £400 9 >.600 10 10 >400 11 >1000 12 >400 13 >400 14 >200 15

Farmakologiset vertailukokeet Anafylaktisen shokon koetta käyttämällä verrattiin uusia yhdisteitä esimerkeistä 2, 4, 5, 6, 7, 9, 10 ja 14 20 tunnettuihin funtumiiniin ja N-glysyylifuntumiiniin (C.R. Acad. Sc. Paris t. 260 ja Bull. Soc. Chim. Fr. Paris, 1967, n:o 10).

Esimerkki 2 i 25 p ""'OH, HC1 h-n-ch-co-hn^''v^^3^/

2 I

CH2-CH2OH

30

Esimerkki 4 f Γ ''OH, HC1 35 H2N-CH-CO-HN°' ch2-c6h5 30 77871

Esimerkki 5 ι

- "S—A

H2N-CH-CO-HNv'v° CU'1

H

Esimerkki 6 j ΌΗ, HC1

H

Esimerkki 7 Γ -OH, HC1 ? jcb^ ^C-CH2-NH-CO-CH2-NH2

Esimerkki 9

ri-y%H

HC1 :.: H2N-CH2-CO-Hlf' 3i 77871

Esimerkki 10 ^ y ''ΌΗ, HC1 o \ / Η2Ν-0Η2-00-ΗΝ""

Esimerkki 14 Γ I ÖH, HC1 ch3 \ N* / CO-CH2HN2

Yhdiste A: Η2* funtumiini

Yhdiste B:

-|^O

.CC

H2N-CH2-CO-NH" N-glysyylifuntumiini 32 77871 TULOKSET;

TAULUKKO

ADpa

Esimerkki n:o mg/kg 2 4i k 5 5 5 6 2 7 1 9 1 10 0,5 14-__0,5

Yhdiste A ^5 , _ tehoton

Yhdiste B ____, ,, _ ______ annoksella 2

Tuloksista huomataan, että uusien yhdisteiden immuniteettia stimuloiva aktiviteetti on erinomainen. Funtumiinin tarvittava AD5Q on suurempi kuin uusien yhdisteiden tutkittu maksimiannos: 5 mg/kg ja N-glysyylifuntumiini on täysin tehoton annoksena 2 mg/kg.

Claims (2)

33 77871

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten uusien 3-aminosubstituoitujen steroidijohdannaisten valmistamisek-5 si, joiden yleiskaava on (I) Ri r--f (i) R3 jossa W on vetyatomi tai hydroksyyliryhmä, X on ryhmä CH, tai CH, 1 s · J J ^ CH^ O OH aaltoviivat merkitsevät sitä, että vastaava ryhmä on joko o<y- tai yA-konfiguraatiossa, on vetyatomi tai metyyli-20 ryhmä, R2 on vetyatomi tai 1-5 hiiliatomia käsittävä alkyy-liryhmä tai 2-5 hiiliatomia sisältävä hydroksialkyyliryhmä ja R^ on vetyatomi, 1-5 hiiliatomia käsittävä alkyyliryhmä, 2-5 hiiliatomia käsittävä hydroksialkyyliryhmä tai QC-amino-haposta Ala, Vai, Ival, Leu, Ile, Asp, Asn, Glu, Gin, Ser,

25 Thr, Cys, Met, Lys, Arg, Phe, Tyr, Trp, His tai Pro, Nva, Nle, Hyp, Orn D- tai L-muodossa tai Sar tai Gly peräisin oleva ryhmä, sillä edellytyksellä, että - ainakin toinen substituenteista R2 ja R^ ei ole vetyatomi, - i) kun samanaikaisesti R^ on metyyliryhmä, W ja R2 tar- 30 koittavat vetyatomia ja X on ryhmä CH,, niin R_ ei voi ol- • J 3 0¾. la metyyliryhmä, ^*-0 - ii) kun samanaikaisesti R^ on metyyliryhmä, W on vetyatomi, R2 on metyyliryhmä ja X on ryhmä CH3, niin R3 ei voi olla i 35 metyyliryhmä, 34 7 7 8 71 - iii) kun samanaikaisesti on metyyliryhmä, R2 ja W tarkoittavat vetyatomia, X on ryhmä CH^ , jonka hydrok- ^OH syyli on (S) -konfiguraatiossa, ja aminoryhmä on 3oC,-asemas-5 sa, niin R^ ei voi olla metyyli- eikä glysyyliryhmä, - iiii) kun W on vetyatomi, X on ryhmä CH^ , ja aminoryhmä —"CH .\,u^ OH on 3:X~asemassa, niin substituentit R^, R2 ja Rg eivät yhtaikaa voi tarkoittaa metyyliryhmää, ^ - iiiii) kun samanaikaisesti R2 ja W tarkoittavat vetyato mia, R^ on metyyliryhmä, X on ryhmä CHg t jonka hydroksyy- __-CH . li on (R)-konfiguraatiossa, ja aminoryhmä on 3^-asemassa, 15 niin Rg ei voi olla metyyliryhmä, sekä niiden suolojen valmistamiseksi epäorgaanisten tai orgaanisten happojen kanssa, tunnettu siitä, että a) amiini, jonka kaava on (II) CH3 ·; 25 jossa aaltoviiva, W, X ja R^ tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan aminohapon kanssa, jonka aminoryhmä on suojattu helposti lohkaistavalla ryhmällä, etenkin sellaisella, joka lohkeaa happohydrolyysillä, sitten suojaryhmä 30 poistetaan, jolloin saadaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa R2 on vetyatomi, Rg on o(-aminohaposta peräisin oleva ryhmä ja W, X, R^ ja aaltoviiva tarkoittavat samaa kuin edellä ja joka eristetään ja haluttaessa muutetaan suolaksi, tai b) kaavan (II) mukainen amiini saatetaan reagoimaan 35 C^-C^-alkyyli- tai 2-5 hiiliatomia sisältävän hydroksialkyy- lihalogenidin kanssa, jonka halogeeni on kloori-, bromi- tai 35 7 7 8 71 jodiatomi, jolloin saadaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa R2 ja R3 tarkoittavat vetyatomia tai 1-5 hiiliatomia sisältävää alkyyli- tai 2-5 hiiliatomia sisältävää hydroksialkyy-liryhmää ja W, X, R^ ja aaltoviiva tarkoittavat samaa kuin 5 edellä, ja joka eristetään ja haluttaessa muutetaan suolaksi tai c) siinä tapauksessa, että R^ on vetyatomi, kohdassa b) saatu yhdiste saatetaan reagoimaan halogenidin kanssa, jonka kaava on (IV)

10 Hal-R"3 (IV) jossa R"3 on 1-5 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä tai 2-5 hiiliatomia sisältävä hydroksialkyyliryhmä ja Hai merkitsee samaa kuin edellä, jolloin saadaan kaavan I mukainen yhdiste, 15 jossa R2 on C^-C^-alkyyli- tai 2-5 hiiliatomia sisältävä hydroksialkyyliryhmä, R3 on 1-5 hiiliatomia sisältävä alkyyli-tai 2-5 hiiliatomia sisältävä hydroksialkyyliryhmä ja W, X, R^ ja aaltoviiva tarkoittavat samaa kuin edellä, ja joka eristetään ja haluttaessa muutetaan suolaksi, tai 20 d) siinä tapauksessa, että R3 on vetyatomi, kohdassa b) saatu yhdiste saatetaan reagoimaan o(-aminohapon kanssa, jonka o(-aminoryhmä on suojattu helposti lohkaistavalla, etenkin happohydrolyysillä lohkeavalla ryhmällä, sitten suo-jaryhmä poistetaan, jolloin saadaan kaavan I mukainen yhdis-25 te, jossa R2 on 1-5 hiiliatomia sisältävä alkyyli- tai 2-5 hiiliatomia sisältävä hydroksialkyyliryhmä, R3 on -aminohaposta peräisin oleva ryhmä, ja W, X, R^ ja aaltoviiva merkitsevät samaa kuin edellä, ja joka eristetään ja haluttaessa muutetaan suolaksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että valmistetaan jokin kaavan I mukaisista seuraavista johdannaisista tai niiden suoloista, jotka muodostuvat lisättäessä epäorgaanisia tai orgaanisia happoja: - (2S)-2-amino-N-/J"20S)-20-hydroksi-(δ'Χ)-pregnan-3o(-yyli7- 35 propanamidi, - (2S)-2-amino-N-£720S)-20-hydroksi-(5oO-pregnan-3 o(-yyl£7~ lH-indoli-3-propanamidi, 36 7 7 8 71 - 2-amino-N-Zl20S) -20-hydroksi-19-nor- (5o() -pregnan-39(-yyl£7 asetamidi, - 2-amino-N-/_(20S) -20-hydroksi- (5o(‘) -pregnan-3a(-yyir7-N-metyyliasetamidi. 57 77871