NOUVEAU PROCEDE DE FABRICATION DE DERIVES
N-(VINBLASTINOYL-23) D'ACIDES AMINES ET DEPEPTIDES.
<EMI ID=1.1>
D'ACIDES AMINES ET DE PEPTIDES
Les brevets belges n[deg.] 889.136 du 9.6.81 et n[deg.] 895.262 du 7.12.82 se rapportent à de nouveaux dérivés de couplage d'acides aminés ou de peptides avec la vinblastine ou des dérivés de la vinblastine de formule générale suivante :
<EMI ID=2.1>
dans laquelle .
<EMI ID=3.1>
au fragment 'vinblastinoyl-23 par un lien amide, le groupe ester ramifié ou non possédant de 2 à 9 atomes de carbone R2 représente un atome d'hydrogène ou un groupe acyle de 2 à 9
atomes de carbone
R3 représente un groupe méthyle ou un groupe formyle
lorsque
R4 représente un groupe hydroxyle, R5 représente un groupe éthyle
lorsque
R4 représente un groupe éthyle, R5 représente un atome d'hydrogène.
Ces dérivés bis-indoliques étaient obtenus à partir de la vinblastine ou des dérivés de la vinblastine par hydrazynolyse, nitrosation, puis couplage avec l'ester d'acide aminé ou de polypeptide approprié.
La présente invention a pour objet un nouveau procédé' de fabrication permettant d'obtenir ces dérivés par la méthode aux anhydrides mixtes. Cette méthode évite l'usage d'hydrazine anhydre, réactif dangereux et toxique.
Les dérivés de la présente invention sont obtenus par le procédé suivant :
Dans une première étape, la vinblastine Il ou un de ses dérivés est transformée par hydrolyse en acide désacétyl-0-4-vinblastinoique.
<EMI ID=4.1>
pour donner le dérivé VI.
Selon une variante de l'invention, le dérivé IV, soumis à un traitement en milieu acide donne le dérivé V, qui peut à son tour être traité de nouveau par un chloroformiate d'alkyle et ensuite par l'ester d'acide aminé pour donner le dérivé VI.
Dans une troisième étape, le dérivé VI est soumis à une hydrolyse alcaline
<EMI ID=5.1>
l'ester de l'acide aminé peut être hydrolysé et l'on obtient le dérivé VII.
<EMI ID=6.1>
<EMI ID=7.1>
Selon le procédé mentionné ci-dessus, la vinblastine Il ou l'un de ses dérivés est hydrolysée en présence de soude caustique dans un solvant organique selon W.W.Hargrove, Lloydia, 27, 4, 340 (1964) pour donner l'acide désacétyl-0-4, vinblastinoique III. Cet acide est alors transformé en anhydride mixte, de manière classique, par un chloroformiate d'alkyle, de préférence le chloroformiate -d'éthyle, d'isobutyle ou de benzyle, en présence d'une base aminée telle . que la triéthylamine, la N-méthylpipéridine, la N-méthylmorpholine, la N-éthylmorpholine, dans un solvant organique tel que l'acétate d'éthyle, le tétrahydrofurane, la diméthylfdrmamide, le dioxanne. Après 2 heures d'agitation à 0[deg.]C, l'ester d'acideaminé est ajouté et le milieu réactionnel est laissé 24 heures à la température de + 4[deg.]C.
Après extraction de manière classique et purification par chromatographie sur silice, on obtient le dérivé VI. Le dérivé VI est alors hydrolysé en présence de soude ou de potasse dans un solvant organique tel que l'éthanol à 40[deg.]C pendant 2 à 3 heures. Le milieu réactionnel est ensuite dilué à l'eau et extrait par un solvant aprotique non miscible à l'eau. Les phases organiques sont rassemblées et séchées sur sulfate de magnésium et évaporées à sec. Le résidu VII est alors solubilisé dans de l'éthanol absolu, refroidit à -10[deg.]C et le mélange réactionnel est additionné d'éthanol chlorhydrique 6N. Après 24 heures, à la température de + 4[deg.]C, le milieu réactionnel est dilué à l'eau, alcalinisé et extrait au chlorure de méthylène. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium et évaporées à sec.
Le résidu cristallise dans le méthanol pour donner le dérivé 1.
Les exemples suivants illustrent de façon non limitative les caractéristiques de l'invention.
EXEMPLE 1 : Acide désacétyl-0-4-vinblastinoique III.
10 g de sulfate de vinblastine sont mis en suspension dans 200 ml d'éthanol et chauffés à 40[deg.]C. On additionne progressivement 1 1 de soude caustique 1 N et on chauffe à reflux pendant 1 heure. Après refroidissement, on ajoute à la solution 220 g de chlorure de sodium et on extrait par le chlorure de méthylène. Les phases organiques sont réunies et séchées sur sulfate de magnésium et évaporées à sec sous vide. Le résidu est mis en suspension dans 100 ml d'eau. On agite progressivement et sous agitation de l'acide acétique dilué au demi jusqu'à pH 4,5, afin d'obtenir une dissolution complète. La solution est alors filtrée et ajustée à pH 7,1 par addition d'une solution aqueuse de bicarbonate de sodium à 10%. Le précipité est filtré, rincé à l'eau et séché sous vide. On obtient 7,1 g d'acide désacétyl-0-4 vinblastinoique libre. Rdt : 85,5 %
<EMI ID=8.1>
3460, 3050, 2970, 2940, 2890, 2760-2000, 1740, 1610, 1510, 1505, 1460,
1435, 1385, 1335, 1310, 1230, 1145, 1105, 1070, 1040, 1015, 925, 900, 880,
860, 820, 770, 750, 680, 655.
<EMI ID=9.1>
heures d'agitation, on filtre le chlorhydrate de triéthylamine. Le filtrat est dilué par l'acétate d'éthyle et lavé par une solution aqueuse de carbonate de sodium à 2%. La phase organique est évaporée à sec et le résidu est solubilisé dans 3 ml d'acide acétique pur, puis dilué par 10 ml d'eau. La solution ainsi obtenue est extraite par l'éther puis amenée à pH 6,5 par addition d'une solution aqueuse de bicarbonate de sodium à 5%. Le précipité ainsi formé est filtré, rincé à l'eau et séché sous vide. On obtient 650 mg d'acide 0-4-isobutylcarbonate-0-4-désacétyl vinblastinoique. Rdt : 57,5 %.
Fus. : 240[deg.]C. \
<EMI ID=10.1>
3470, 2970, 2880, 2810, 2730, 1740, 1730, 1620, 1505, 1465, 1435, 1400,
1385, 1250, 1185, 1150, 1105, 1005, 825, 780, 745.
EXEMPLE 3 N-(désacétyl-0-4-isobutylcarbonate-0-4-vinblastinoyl-23)- L-tryptophane d'éthyle. :
<EMI ID=11.1>
tryptophanate .d'éthyle et on laisse agiter 24 heures à la température ambiante. On dilue le mélange réactionnel par 500 ml d'acétate d'éthyle. La solution organique est lavée par 250 ml d'eau, puis 3 fois par 250 ml d'une solution aqueuse de bisulfite de sodium à 10%. La phase organique séchée sur sulfate de magnésium est évaporée à sec. Le résidu est purifié par chromatographie sur silice (élution par éther-méthanol 98:2). On obtient de cette façon 3,04 g de produit VI. Rdt : 53,7 %.
<EMI ID=12.1>
3470, 3420, 2970, 2940, 2880, 2860, 1740, 1670, 1615, 1500, 1460, 1430,
1400, 1380, 1350, 1255, 1230, 1150, 1135, 1040, 1015, 980, 930, 900, 745.
Spectre R.M. N. (CDCI , 360 MHz)
<EMI ID=13.1>
(OC02CH2- CH(CH3)2) , 1,09 t (CH3) ; 0,9 - 0,75 m (4CH3).
<EMI ID=14.1>
A une solution de 1 g de 0-isobutylcarbonate-4-désacétylvinblastinoyl-
23-L-tryptophanate d'éthyle dans 20 ml d'éthanol, on ajoute 10 ml de potasse caustique 0,5 N et on chauffe le milieu réactionnel à 40[deg.]C pendant 3 heures. Le milieu est ensuite dilué à l'eau et extrait au chlorure de méthylène. Les phases organiques sont rassemblées, séchées sur sulfate de magnésium et évaporées à sec sous vide. Le résidu est solubilisé dans
40 ml d'éthanol absolu. La solution est additionnée de 40 ml d'éthanol chlorhydrique 6N et agitée pendant 24 heures à la température de + 4[deg.]C.
<EMI ID=15.1>
une solution aqueuse de carbonate de sodium. La solution est ensuite extraite par 3 fois 100 ml de chlorure de méthylène. Les phases organiques sont rassemblées, lavées à l'eau, séchées sur sulfate de magnésium et évaporée à sec. Le résidu cristallise facilement dans le méthanol pour donner 0,72 g de N-vinblastinyol-23-tryptophanate d'éthyle, qui présente les mêmes constantes physiques et spectrales que le produit obtenu par la méthode aux hydrazides.
EXEMPLE 5 : isobutylcarbonate-0-4 de vindésine.
En appliquant la technique décrite dans l'exemple 3, mais en remplaçant l'addition de tryptophanate d'éthyle par l'ammoniac : on obtient à partir de 500 mg d'acide désacétyl-0-4 vinblastinoique, 350 mg d'isobutylcarbonate-0-4 de vindésine.
<EMI ID=16.1>
3470, 3040, 2960, 2930, 2880, 1815, 1730, 1615, 1505, 1460, 1430, 1385,
1355, 1300, 1250, 1230, 1190, 1150, 1130, 1095, 1070, 1040, 1010, 985,
960, 925, 900, 875, 820, 765, 745.
EXEMPLE 6 : Vindésine.
A une solution de 1 g d'isobutylcarbonate-0-4 de vindésine dans 50 ml
<EMI ID=17.1>
chauffe le milieu réactionnel à 50[deg.]C pendant 12 heures. Le milieu est ensuite dilué à l'eau et extrait par le chlorure de méthylène. Les phases organiques sont rassemblées et extraites à nouveau par une solution aqueuse d'acide ascorbique à 10%. Les phases aqueuses acides sont réunies et amenées à pH 6,3 par addition d'une solution saturée de bicarbonate de sodium et ensuite extraites par le chlorure de méthylène. Les phases organiques sont rassemblées, lavées par une solution de bicarbonate de sodium dilué, séchées sur sulfate de magnésium et évaporées à sec. Le résidu est recristallisé dans le méthanol et donne 0,600 g de vindésine qui présente les mêmes constantes physiques et spectrales que la vindésine obtenue par la méthode aux hydrazides.