FI71744C - Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara 7 -metoxicefalosporinderivat. - Google Patents

Description

Ι·,Α§*Τ*1 KUULUTUSJULKAISU Ί Λ Π A A

®^8Ί| Β 11 UTLÄGGNIN GSSKRIFT / . /4 4 ®§^4 c (45) ::: ,..-7 ^ ^ ^ (51) Kv.lk.«/lnt.CI.‘ C 07 D 501/57 SUOMI_FINLAND (21) Patenttihakemus — Patentänsökning 78229^ (22) Hakemispäivä— Ansökningsdag on g-7 78 f Fh ' ' (23) Alkupäivä — Giltighetsdag 20 07 78 (41) Tullut julkiseksi — Blivlt offentlig 2^01 79

Patentti- ja rekisterihallitus /^\ Nähtäväksipanon ja kuul.julkalsun pvm. —

Patent- och registerstyrelsen ' ' Ansökan utlagd och utl.skriften publicerad 31 .10.86 (86) Kv. hakemus — Int. ansökan (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus — Begird prioritet 23.07.7/ O2.O2.78, 13.Ο6.78 Japani-Japan(JP) 88/33/77 9869/78, 70^17/78 (71) Toyama Chemical Co., Ltd., 2-5, 3-chome, Nishishinjuku, Shinjuku-ku,

Tokyo, Japani-Japan(JP) (72) Isamu Saikawa, Toyama-shi, Shuntaro Takano, Toyama-shi,

Hiroyuki Imaizumi, Toyama-shi, Isamu Takakura, Toyama-shi,

Hirokazu Ochiai, Toyama-shi, Takashi Yasuda, Toyama-shi,

Hideo Taki, Toyama-shi, Masaru Tai, Toyama-shi,

Yutaka Kodama, Toyama-shi, Japani-Japan(JP) (7^) Oy Koi ster Ab (5*0 Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 7«rmetoksikefalos-poriinijohdannaisten valmistamiseksi - Förfarande för framstälIning av nya terapeutiskt användbara 7^-metoxicefalosporinderivat

Keksintö koskee menetelmää uusien kaavan I mukaisten 70C-metoksikefalosporiinijohdannaisten ja niiden suolojen valmistamiseksi , O P OCH, / N ! /5 N.

A_N N — CONH--CH--CONH --' η X ' B )-i ch2r2 1

0 T

COOH

2 jossa kaavassa R on asetoksiryhmä, tiadiatsolyylitioryhmä, joka voi olla substituoitu C^_^-alkyylillä, tai tetratsolyyliryhmä, joka voi olla substituoitu C1_5~alkyylillä, hydroksi-C^,--alkyy-lillä, amino-C^_^-alkyylillä, karboksi-C^_^-alkyylillä, karbamo-yyli-C1_5-alkyylillä, C^_4-alkanoyyli-C1_5~alkyyIillä, hydroksi-karbamoyyli-C^_^-alkyyIillä, hydroksi-imino-C^_5~alkyyIillä, 2 71744 N,N-di-C^_g-alkyyliamino-C^_g-alkyylillä tai C2_5~alkenyylillä, A on C^_g-alkyyliryhmä ja B on sykloheksadienyyiryhmä, tienyyli-ryhmä, aminotiatsolyyliryhmä, furyyliryhmä tai C-^^alkyyl i-ryhmä, joka voi olla substituoitu halogeenilla, hydroksilla, C^_g-alkoksilla tai C^_^-asyylioksilla.

Näillä uusilla yhdisteillä on laaja antibakteerinen vai-kutusspektri grampositiivisia ja -negatiivisia bakteereja vastaan ja ja niillä on erityisesti erinomainen antibakteerinen vaikutus Pseudomonas aeruginosa-, Klebsiella pneumoniae- ja Proteus-lajeja vastaan, jotka tunnetaan kliinisesti vakavien infektiotautien aiheuttajina. Ne ovat lisäksi stabiileja bakteerien tuottaman Λ-laktamaasin suhteen. Uudet yhdisteet ovat siten hyvin käyttökelpoisia erilaisten infektiosairauksien hoidossa.

FI-patenttihakemuksista 760109 ja 2489/73 tunnetaan kefa-losporiinijohdannaisia, jotka rakenteeltaan muistuttavat kuvattuja kaavan I mukaisia yhdisteitä. Mainituissa tunnetuissa yhdisteissä ei kuitenkaan ole 7~X -metoksiryhmää. Farmakologiset kokeet ovat osoittaneet, että kaavan I mukaiset yhdisteet ovat tehokkaampia kuin esim. FI-hakemuksessa 760109 kuvatut yhdisteet.

On tunnettua, että tavallisilla 7-metoksikefalosporii-neilla on antibakteerinen vaikutus grampositiivisia bakteereja vastaan. Niillä on kuitenkin haittana se, että niillä ei ole tehokasta antibakteerista vaikutusta kliinisesti vakavia infektiotauteja aiheuttavia Pseudomonas aeruginosa-, Klebsiella pneumoniae- ja Proteus-lajeja vastaan, ja se, että ne ovat epästabiileja Λ-laktamaasin suhteen.

Nyt on havaittu, että kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä, joiden kefem-renkaan 3-asemassa on orgaanisella ryhmällä substituoitu oksi- tai tio-metyyliryhmä ja 7 o/-asemassa on metoksiryh-mä ja 7 ^-asemassa oleva aminoryhmä on liittynyt ryhmään:

O

/ t A-N N - CONH-CH-CO-

V B

jossa A ja B tarkoittavat samaa kuin edellä, sekä näiden yhdisteiden suoloilla ei ole edellä mainittuja haittoja.

il 3 71744

Symboli B kaavassa I käsittää myös mainittujen ryhmien ase-maisomeerit (esimerkiksi tienyyliryhmä käsittää 2-tienyylin ja 3-tienyylin).

Symbolin B tarkoittaessa aminotiatsolyyliryhmää, kysymykseen tulevat molemmat tautomeeriset muodot, jotka ovat keskenään tasapainossa seuraavan reaktioyhtälön mukaisesti: N ---,1 HN‘ il !! · > i i

* * - S

c S NH S

NH2

Kaavan (I) mukaisten 7 Λ-metoksikefalosporiinien suolat käsittävät happaman ryhmän ja emäksisen ryhmän muodostamat suolat, jotka tunnetaan hyvin penisilliinin ja kefalosporiinin yhteydessä. Näistä ovat farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat suositeltavia. Happaman ryhmän muodostamat suolat käsittävät alkalimetallien, kuten natriumin, kaliumin ja niiden kaltaisten suolat; maa-alka-limetallien, kuten kalsiumin, magnesiumin ja niiden kaltaisten muodostamat suolat; amitjoniumin suolat; ja typpeä sisältävien orgaanisten emästen, kuten prokaiinin, dibentsyyliamiinin, N-bent-syyli- ’> -fenetyyliamiinin, 1-efenamiinin, N,N-dibentsyylietylee-nidiamiinin, trimetyyliamiinin, tributyyliamiinin, pyridiinin, dimetyylianiliinin, N-metyylipiperidiinin, N-metyylimorfoiiinin, dietyyliamiinin ja disykloheksyyliamiinin muodostamat suolat.

Emäksisen ryhmän muodostamat suolat käsittävät mineraali-happojen, kuten kloorivetyhapon, rikkihapon ja niiden kaltaisten suolat; orgaanisten karboksyylihappojen kuten oksaalihapon, muurahaishapon, trikloorietikkahapon, trifluorietikkahapon ja niiden kaltaisten suolat; ja orgaanisten sulfonihappojen, kuten metaanisulfonihapon, tolueenisulfonihapon, naftaleenisulfonihapon ja niiden kaltaisten muodostamat suolat.

Kaavan (I) mukainen yhdisteryhmä käsittää myös optiset isomeerit ja raseemiset yhdisteet ja kaikki kidemuodot ja hyd-raatit.

Kaavan I mukaisia 7^-metoksikefalosporiinijohdannaisia ja niiden suoloja voidaan valmistaa siten, että 4 71 744 a) yhdiste, jonka kaava on och3 NH--CH-CONH- l........^ s ^ u il] B A---------- N-, - 1-'-CH2R 11 S ' COOR1 jossa R1 on vety tai kefalosporiinikemiassa tavanomainen esterin muodostava ryhmä, B1 on sykloheksadienyyliryhmä, tienyyli-ryhmä, aminotiatsolyyliryhmä, joka voi olla suojattu kefalosporiinikemiassa tavanomaisella suojaryhmällä, furyyliryhmällä tai C1_4-alkyyliryhmä, joka voi olla substituoitu halogeenilla, C3_^-alkoksilla, C^_4-asyylioksilla tai hydroksilla, joka voi olla suojattu kefalosporiinikemiassa tavanomaisella suojaryhmäl-2 la, 3a R tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan kaavan q q \

A-N N-COOH HI

mukaisen yhdisteen reaktiivisen karboksyylijohdannaisen kanssa, jossa kaavassa A tarkoittaa samaa kuin edellä, tai b) yhdiste, jonka kaava on och3 ! „ a

nh21.........- S

! ! 2 IV

N /--CH2R

o ; COOR1 1 2 jossa R ja R tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on o> \

A-N N-CONH-CH-COOH V

B1 5 71744 jossa A ja B1 tarkoittavat samaa kuin edellä, tai sen reaktiivisen karboksyylijohdannaisen kanssa, tai c) yhdiste, jonka kaava on 0 4'° ,·Ί3

A-N N CONH CH CONH ........ , VI

' 1 ' n

B . I N 1 CH-R

O

t

I 1 COOR

12 1 jossa R , R , A ja B tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan metanolin läsnäollessa reagoimaan alkalimetallimetylaatin kanssa, jonka kaava on

m1+_och3 VII

jossa M1 on alkalimetalli, minkä jälkeen reaktiotuote saatetaan reagoimaan halogenointiaineen kanssa, tai d) 7 -metoksikefalosporiinijohdannainen, jonka kaava on O 0 OCH, ! 3 • \ · /S.

A-N N CONH - CH CONH- t ^ B1 J N 1..... CH R7 VI11

o' T

COOR1 7 jossa R on ryhmä, joka on helposti korvattavissa nukleofiilisella, reagoivalla aineella, ja R1, A ja B1 tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on 2 2

R^MZ IX

2 2 jossa M on vety tai alkalimetalli ja R tarkoittaa samaa kuin edellä; minkä jälkeen mahdolliset suojaryhmät poistetaan ja haluttaessa saatu yhdiste muutetaan suolaksi.

Esterin muodostava ryhmä R1 voi olla mikä tahansa penisilliinin ja kefalosporiinin yhteydessä tavallisesti käytetty esterin muodostava ryhmä, joka voidaan poistaa katalyyttisellä pelkistyksellä, kemiallisella pelkistyksellä tai muilla käsittelyillä lie- 6 71744 vissä olosuhteissa tai muu tunnettu esterin muodostava ryhmä, joka voidaan poistaa käsittelemällä vedellä tai alkoholilla, kuten orgaaninen silyyliryhmä, orgaaninen fosforia sisältävä ryhmä, orgaaninen tinaa sisältävä ryhmä tai vastaava.

Esimerkkejä sopivista esterin muodostavista ryhmistä ovat: a) Alkyyliryhmät b) Substituoidut alemmat alkyyliryhmät, joiden substitu-enteista vähintään yksi on kloori, bromi, fluori, nitro, karbo-alkoksi, asyyli, alempi alkoksi, okso, syano, alempi alkyylitio, alempi alkvylisulfinyyli, alempi alkyylisulfonyyli, alempi alkok-sikarbonyyli, 1-indanyyli, 2-indanyyli, furyyli, pyridyyli, 4-imidatsolyyli, ftaalimido, asetidiino, atsiridiino, pyrrolidin-yyli, piperidiino, morfoliino, tiomorfoliino, N-alempi alkyyli-piperatsiino, 2,5-dimetyylipyrrolidinyyli, 1 ,4,5,6-tetrahydro-pyrimidinyyli, 4-metyylipiperidiino, 2,6-dimetyylipiperidiino, alempi alkyyliamino, di-alempi-alkyyli-amino, asyylioksi, asyyli-amino, di-alempi alkyyli-aminokarbonyyli, alempi alkoksikarbon-yyliamino, alempi alkoksikarbonyylioksi, tai alempi alkyyliani-liino tai kloorilla, bromilla, alemmalla alkyylillä tai alemmalla alkoksilla substituoitu alempialkyylianiliino; c) 3-7 hiiliatomia sisältävät sykloalkyyliryhmät, alemmalla alkyylillä substituoidut C3_7-sykloalkyyliryhmät, tai /2,2-di(alempi alkyyli)-1,3-dioksolaani-4-yyli/metyyli-ryhmät; d) Korkeintaan 10 hiiliatomia sisältävät alkenyyliryhmät; e) Korkeintaan 10 hiiliatomia sisältävät alkynyyliryhmät; f) Fenyyliryhmät, substituoidut fenyyliryhmät, joiden substituenteista vähintään yksi on valittu yllä kohdassa (b) esimerkkeinä annetuista substituenteista; tai aryyliryhmät, joita edustaa kaava: x, /" v —- !j x <·.

jossa X on -CH=CH-0-, -CH=CH-S-, -CH2CH2S-, -CH=N-CH=N-, -CH=CH- CH=CH-, -CO-CH=CH-CO-, tai -CO-CO-CH=CH-, tai niiden substituoidut 7 71744 johdannaiset, joiden substituentit on valittu yllä kohdassa (b) esimerkkeinä annetuista, tai aryyliryhmät, joita edustaa kaava: ;' !: y o .

jossa Y on alempi alkyleeniryhmä, kuten -(CI^)·}- ja tai niiden substituoidut johdannaiset, joiden substituentit on valittu yllä kohdassa (b) esimerkkeinä annetuista; g) Aralkyyliryhmät, kuten bentsyyliryhmä tai substituoidut bentsyyliryhmät, joiden substituenteista vähintään yksi on valittu yllä kohdassa (b) esimerkkeinä annetuista; h) Heterosykliset ryhmät, kuten furyyli, kinolyyli, metyylillä substituoitu kinolyyli, fenatsinyyli, 1,3-bentsodiok-solanyyli, 3-(2-metyyli-4-pyrrolinyyli), 3-(4-pyrrolinyyli) ja N-(metyylipyridyyli); tai substituoidut heterosykliset ryhmät, joiden substituenteista vähintään yksi on valittu yllä kohdassa (b) esimerkkeinä annetuista; i) Alisykliset indanyyli- tai ftalidyyliryhmät tai niiden substituoidut johdannaiset, joiden substituentti on metyyli, kloori, bromi tai fluori; alisyklinen tetrahydronaftyyliryhmä tai sen substituoitu johdannainen, jonka substituentti on metyyli, kloori, bromi tai fluori, trityyliryhmä, kolesteryyliryhmä ja bisyklinen /_4,4 , oy-dekyyliryhmä.

Yllä luetellut ryhmät ovat tyypillisiä esimerkkejä, ja voidaan käyttää mitä tahansa US-patenttijulkaisuissa 3 499 909, 3 573 296 ja 3 641 018 ja DE-hakemusjulkaisuissa 2 301 014, 2 253 287 ja 2 337 105 esitettyä ryhmää.

Kun B^" on suojattu aminotiatsolyyliryhmä, tulevat suojaryhminä kysymykseen kaikki ryhmät,joita yleensä voidaan käyttää aminosuoja-ryhminä, kuten helposti poistettavissa olevat ryhmät, esimerkiksi tri-kloorietoksikarbonyyli, trimetoksikarbonyyli, bentsyylioksikarbon- 8 71744 yyli, p-tolueenisulfonyyli, p-nitrobentsyylioksikarbonyyli, o-bromibentsyylioksikarbonyyli, o-nitrofenyvlisulfenyyli, kloori-asetyyli, trifluoriasetyyli, formyyli, tert.-butoksikarbonyyli, p-metoksibentsyylioksikarbonyyli, 3,4-dimetoksibentsyylioksikar-bonyyli, 4- (fenyyliatso)-bentsyylioksikarbonyyli, 4-(4-metoksi-fenyy1 iätso)bentsyylioksikarbonyyli, pyridiini-1-oksidi-2-yyli-metoksikarbonyyli, 2-pyridyylimetoksikarbonyyli, 2-furyylioksi-karbonyyli, di-fenyylimetoksikarbonyyli, 1,1-dimetvylipropoksi-karbonyyli, isopropoksikarbonyyli, 1-syklopropyylietoksikarbon-yyli, ftaloyyli, sukkinyyli, 1-adamantyylioksikarbonyyli, 8-kinol-yylioksikarbonyyli ja niiden kaltaiset; ja muut helposti poistettavat aminosuojaryhmät, esimerkiksi trityyli, 2-nitrofenyylitio, 2,4-dinitrofenyylitio, 2-hydroksibentsylideeni, 2-hydroksi-5-klooribentsylideeni, 2-hydroksibentsylideeni, 2-hydroksi-5-kloo-ribentsylideeni, 2-hydroksi-1-naftyylimetyleeni, 3-hydroksi-4-pyridyylimetyleeni, 1-metoksikarbonyyli-2-propylideeni, 1-etoksi-karbonyyli-2-propylideeni, 3-etoksikarbonyyli-2-butylideeni, 1-asetyyli-2-propylideeni, 1-bentsoyyli-2-propylideeni, 1-/N-(2-me-toksifenyyli)karbamoyyli7-2-propylideeni, 1-/N-(4-metoksifenyyli) karbamoyyli7-2-propylideeni, 2-etoksikarbonyylisykloheksylideeni, 2-etoksikarbonyylisyklopentylideeni, 2-asetyylisykloheksylideeni, 3,3-dimetvyli-5-oksosykloheksylideeni, di- tai trialkyylisilyyni ja niiden kaltaiset.

Nukleofiilisellä, reagoivalla aineella helposti korvatta- 7 vxssa olevat ryhmät R käsittävät halogeenitatomit, kuten kloori, bromi ja niiden kaltaiset; alemmat alkanoyylioksiryhmät, kuten formyylioksi, asetoksi, propionyylioksi, butyryylioksi, pivalo-yylioksi ja niiden kaltaiset; aryylikarboftvylioksirvhmät, kuten bentsoyylioksi, naftoyylioksi ja niiden kaltaiset; aryylitiokar-bonyylioksiryhmät, kuten tiobentsyylioksi, tionaftoyylioksi ja niiden kaltaiset; aryylikarbonyylitioryhmät, kuten bentsoyylitio, 71744 9 naftoyylitio ja niiden kaltaiset; aryylitiokarbonyylitioryhmät, kuten tiobentsoyylitio, tionaftoyylitio ja niiden kaltaiset; kar- bamoyylioksiryhmän; tiokarbamoyylioksiryhmän; pyridiini-N-oksidi- 7 2-yyli-ryhmän; ja pyridatsiini-N-oksidi-6-yyli-ryhmän. Nämä R :n edustamat ryhmät voivat edelleen sisältää substituentteja, kuten esimerkiksi halogeeniatomin, nitroryhmän, alemman alkyyliryhmän, alemman alkoksiryhmän, alemman alkyylitioryhmän, asyyliryhmän tai niiden kaltaisen.

Kaavan (V) mukainen yhdiste voidaan helposti valmistaa saattamalla kaavan H-N-CH-COOH (X)

^ I

B1 mukaisen yhdisteen (B tarkoittaa samaa kuin edellä) alkalimetalli-suola, maa-alkalimetallisuola tai orgaaninen emässuola reagoimaan kaavan (III) mukaisen yhdisteen reaktiivisen karboksyylijohdannaisen kanssa happoa sitovan aineen läsnäollessa inertissä liuotti-messa.

Kaavojen (II) ja(IV) mukaisten yhdisteiden synteesi voidaan suorittaa sinänsä tunnetulla tavalla, esimerkiksi julkaisussa Journal of Synthetic Organic Chemistry, Japan, Voi. 35, 568 -574 (1977) kuvatulla tavalla.

Valmistusmenetelmät (a), (b), (c), ja (d) ovat sinänsä tunnettuja.

Menetelmävaihtoehdot (a) ja (b) voidaan suorittaa lähes samoissa olosuhteissa. Yhdiste (II) tai (IV) liuotetaan tai sus-pendoidaan inerttiin liuottimeen, kuten veteen, asetoniin, tetra-hydrofuraaniin, dioksaaniin, asetonitriiliin, dimetyyliformami-diin, dimetyyliasetamidiin, metanoliin, etanoliin, metoksietano-liin, dietyylieetteriin, di-isopropyylieetteriin, bentseeniin, tolueeniin, metyleenikloridiin, kloroformiin, etyyliasetaattiin tai metyyli-isobutyyliketoniin, tai näiden seokseen. Saatuun liuokseen tai suspensioon lisätään yhdisteen (III) reaktiivinen karboksyyli johdannainen tai yhdiste (V) tai yhdisteen (V) reaktiivinen karboksyylijohdannainen. Seoksen annetaan reagoida emäksen läsnäollessa tai ilman sitä -60°-80°C:ssa, edullisesti -40°-30° C:ssa. Reaktioaika 5 minuutista 5 tuntiin on yleensä riittävä.

71 744 10

Yllä mainitussa reaktiossa käytettävinä emäksinä tulevat kysymykseen epäorgaaniset emäkset, kuten alkalimetallihydroksidit, alkalimetallien vetykarbonaatit, alkalimetallikarbonaatit ja al-kalimetalliasetaatit; tertiääriset amiinit, kuten trimetyyliamii-ni, trietyyliamiini, tributyyliamiini, pyridiini, N-metyylipipe-ridiini, N-metyylimorfOliini, lutidiini, kollidiini ja niiden kaltaiset; ja sekundääriset amiinit, kuten disykloheksyyliamiini, di-etyyliamiini ja niiden kaltaiset.

Kun yhdistettä (V) tai sen suolaa käytetään menetelmä-vaihtoehdossa (b) lähtöaineena, reaktio voidaan suorittaa dehyd-ratoivan ja kondensoivan aineen kuten Ν,Ν'-disykloheksyylikarbodi-imidin, N-sykloheksyyli-N’-morfolinoetyylikarbodi-imidin, N,N'-di-etyylikarbodi-imidin, N,N'-karbonyyli-bis(2-metyyli-imidatsolin), trialkyylifosfiittien, etyylipolyfosfaatin, fosforioksikloridin, fosforitrikloridin, 2-kloori-1,3,2-dioksafosfolaanin, oksatsolyy-likloridin, dimetyylikloroforminiumkloridin tai dimetyylietoksi-forminiumkloridin läsnäollessa.

Menetelmävaihtoehto (c) toteutetaan seuraavalla tavalla: Tunnetulla tavalla (JP-patenttihakemukset Kokai (julkistettu) 70 788/76 ja 113 890/76) saatu kaavan (VI) mukainen kefalosporiini liuotetaan tai suspendoidaan inerttiin liuottimeen, kuten tetra-hydrofuraaniin, dioksaaniin, etyleeniglykolin dimetyylieetteriin, metyleenikloridiin, kloroformiin, dimetyyliformamidiin, dimetyyli-asetamidiin, asetonitriiliin, metanoliin tai niiden kaltaiseen tai niiden seokseen. Saatuun liuokseen tai suspensioon lisätään alkali-metallimetylaatti (VII) yhdessä metanolin kanssa. Saatu seos saatetaan reagoimaan, ja reaktioseoksen annetaan sitten reagoida halo-genointiaineen kanssa. Tässä reaktiossa metanolia käytetään ylimäärin ja käytetty alkalimetallimetylaatin (VII) määrä on 2-6 ekvivalenttia kutakin käytettyä kefalosporiinin (VI) ekvivalenttia kohden. Termi "ylimäärin" tarkoittaa enemmän kuin yhden ekvivalentin määrää kefalosporiinin(VI) ekvivalenttia kohden. Kaikki yllä mainitut reaktiot suoritetaan -120° - -10°C:ssa, mieluimmin -100° - -50° C:ssa. Reaktioaika 5-30 minuuttia on riittävä ja reaktio lopetetaan tekemällä reaktiosysteemi happamaksi.

On yleisesti tunnettua, että tässä menetelmässä käytetty halogenointiaine on positiivisen halogeeniatomin, kuten Cl+, Br+ tai I+, tuottava lähde. Esimerkkejä sellaisista halogenointiaineista 71 744 11 ovat halogeenit, kuten kloori, bromi ja niiden kaltaiset; N-halo-geeni-imidit, kuten N-kloorisukkini-imidi, N-bromisukkini-imidi ja niiden kaltaiset; N-halogeeniamidit, kuten N-klooriasetamidi, N-bromiasetamidi ja niiden kaltaiset; N-halogeenisulfonamidit kuten N-klooribentseenisulfonamidi, N-kloori-p-tolueenisu1fonamidi ja niiden kaltaiset; 1-halogeenibentsotriatsolit; 1-halogeenitri-atsiinit; orgaaninen hypohalogeniitti, kuten tert.-butyylihypoklo-riitti, tert.-butyylihypojodidi ja niiden kaltaiset; halogeeni-hydantoiinit, kuten Ν,Ν-dibromihydantoiini ja sen kaltaiset.

Näistä halogenointiaineista tert.-butyylihypokloriitti on edullinen. Halogenointiainetta käytetään riittävä määrä muodostamaan kaavan (VI) kefalosporiinin kanssa ekvivalenttinen määrä positiivista halogeenia.

Reaktion lopettamiseen soveltuvia happoja ovat sellaiset, jotka lisättyinä kylmään reaktioseokseen eivät aiheuta reaktio-seoksen jähmettymistä tai sen jäätymistä tahmeaksi viskoosiksi seokseksi. Esimerkkejä sopivista hapoista ovat 98 % muurahaishappo, jääetikka, trikloorietikkahappo ja metaanisulfonihappo.

Reaktion päätyttyä ylimääräinen halogenointiaine voidaan poistaa käsittelemällä pelkistävällä aineella, kuten trialkyyli-fosfiitilla, natriumtiosulfaatilla tai niiden kaltaisilla.

Käytettäessä menetelmävaihtoehdossa (d) muuta kaavan (VIII) mukaista yhdistettä, kuin sellaista, jossa R1 on heterosyklinen aromaattinen amiini-N-oksidi-tioryhmä, jolla on tio-ryhmä N-oksidi-ryhmän viereisessä hiiliatomissa, mainittu yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan (IX) mukaisen yhdisteen kanssa inertissä liuotti-messa, kuten vedessä, metanolissa, etanolissa, propanolissa, iso-propanolissa, butanolissa, asetonissa, metyylietyyliketonissa, metyyli-isobutyyliketonissa, tetrahydrofuraanissa, dioksaanissa, asetonitriilissä, etyyliasetaatissa, 2-metoksietanolissa, dimetok-sietaanissa, dimetyyliformamidissa, dimetyylisulfoksidissa, di-metyyliasetamidissa, dikloorietaanissa, kloroformissa, dikloori-metaanissa ja niiden kaltaisissa tai niiden seoksessa.

Yllä mainittu reaktio suoritetaan edullisesti voimakkaasti polaarisessa liuottimessa, kuten vedessä. On edullista pitää reak-tioliuottimen pH välillä 2-10, mieluimmin välillä 4-8« Reaktio saadaan aikaan, kun on lisätty puskuria, kuten natriumfosfaattia pH:n 12 71 744 säätämiseksi haluttuun arvoon. Vaikkakaan reaktio-olosuhteet eivät ole kriittiset, reaktio suoritetaan yleensä 0-100°C:ssa reaktioajan ollessa useasta tunnista useaan kymmeneen tuntiin.

Käytettäessä kaavan (VIII) mukaista yhdistettä, jossa R7 on heterosyklinen aromaattinen amiini-N-oksidi-tio-ryhmä, jonka tio-ryhmä on N-oksidiryhmän vieressä olevassa hiiliatomissa, mainittu yhdiste ja kaavan (IX) mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan em. liuottimessa divalentin kupariyhdisteen läsnäollessa. Tämä menettely on erityisen edullinen, kun kaavan (IX) mukainen yhdiste on alkoholi, kuten metyylialkoholi, etyylialkoholi, propyylialkoholi, isopropyylialkoholi, n-butyylialkoholi, bentsyylialkoholi, etylee-niglykoli tai niiden kaltainen. Tässä tapauksessa reaktio etenee tasaisesti, kun käytetään ylimäärin alkoholia niin, että se toimii liuottimena. Tässä menetelmässä käytetyt divalentit kupariyhdisteet ovat epäorgaanisia tai oraaanisia divalentteja kupariyhdisteitä, kuten kuprikloridi, kupribromidi, kuprifluoridi, kuprinitraatti, kuprisulfaatti, kupriboraatti, kuprifosfaatti, kuprisyanidi, kupri-formaatti, kupriasetaatti, kupripropionaatti, kuprisitraatti, kup-ritartraatti, kupribentsoaatti ja kuprisalisylaatti. Käytettävän divalentin kupariyhdisteen määrä on edullisesti 0,5 moolia tai enemmän yhtä kaavan (VIII) mukaisen yhdisteen moolia kohden. Reak-tiolämpötila on yleensä 0-100°C, vaikkakin se riippuu käytettävän kaavan (VIII) mukaisen yhdisteen tyypeistä, käytettävästä divalen-tista kupariyhdisteestä ja kaavan (IX) mukaisesta yhdisteestä, ja reaktioaika on useasta minuutista useisiin päiviin.

Edellä kuvatuissa valmistusmenetelmissä reaktiivisen kohdan muodostava aminoryhmä voidaan aktivoida orgaanisella silyyliryh-mällä tai orgaanisella fosforia sisältävällä ryhmällä. Kun yhdisteessä karboksyyli-, amino- tai hydroksyyliryhmiä, jotka eivät osallistu reaktioon, nämä ryhmät voidaan suojata suojaryhmillä, joita yleisesti käytetään kefalosporiinien yhteydessä. Reaktion jälkeen tällaiset suojaryhmät voidaan poistaa sinänsä tunnetulla tavalla.

Kaavan I mukaisten 7 oC-metoksikefalosporiinijohdannaisten ja niiden suolojen erottaminen reaktioseoksesta voidaan suorittaa tavanomaisella tavalla.

il 13 71 744

Kaavan (I) mukaiset 7 ^C-metoksikefalosporiinijohdannaiset ja niiden suolat ovat erittäin käyttökelpoisia ihmisten ja eläinten tautien hoidossa grampositiivisten ja gramnegatiivisten bakteerien vastaisen laajan antibakteerisen vaikutusspektrinsä vuoksi, erinomaisen Pseudomonas aeruginosa-, Klebsiella pneumoniae- ja Proteus-lajien vastaisen aktibakteerisen vaikutuksensa vuoksi sekä stabii-lisuutensa vuoksi -laktamaasin suhteen.

Λ

Kaavan I mukaisista Ί-metoksikefalosporiinijohdannaisista ovat edullisia ne, joiden kaava on

0, sP OCH

/ ' ! /S

\ / i \ (Ia) --- B ____N -CH2R"

0 ; 1 COOR

jossa A on C. ..-alkyyli, B on tienyyli, furyyli tai ryhmä N— I | r— HN ~ '· ^ tai sen tautomeeri · j— , C. .-alkyyli tai 1,4- mh2 S , n?·'*'' sykloheksadienyyli ja R1 ja R^ tarkoittavat samaa kuin edellä.

Kaavan (Ia) mukaisista 7 -metoksikef alosporiini johdannaisista edulli-simpia ovat ne, joissa^ B on tienyyli., furyyli tai ryhmä NH?-:' h-'

tai sen tautomeeri Ί , ja etenkin ne, joissa R2 S

on asetoksi, substituoitu 5-(1, .7,3,4-tetratsolwii) tio tai 2 — (1,3,4-tiadiatsolvvli)tio.

Tyypillisten kaavan I mukaisten 7-metoksikefalosporiini-johdannaisten (yhdisteiden (Ib)) antibakteerinen vaikutus on esitetty taulukoissa 1 ja 1'.

0 0 OCH .> * >·** ^

/ S

CH,CH0-N N-CONH-CH-CONH— r' > "^ ^ \ , | j ry '---'' B /J--CH„R^ (Ib) A- ' \ L·

COOH

14 7174 4

Taulukossa 1 annetut arvot edustavat kunkin yhdisteen minimin estokonsentraatiota (MIC mikrog/ml), joka on määritetty julkaisussa "Chemoterapy (Japanin kemoterapiayhdistys) Voi. 16, 98-99 (1968)" kuvatun menetelmän mukaisesti: Testibakteeria sydän-infuusioliemessä (Eiken Kaqaku Co) viljelemällä saatu viljelmä istutettiin sydäninfuusioagarpohjalle (Eiken Kagaku Co). 20 tunnin inkuboinnin jälkeen 37°C:ssa bakteerien kasvu tutkittiin mi-nimiestokonsentraation määrittämiseksi (MIC mikrog/ml). Bakteerin istutusmäärä oli 10^ solua levyä kohden (10^ solua/ml).

(1) Minimiestokonsentraatio (MIC mikrog/ml).

71744 15

Taulukko 1

Yksikkö: mikrog/ml

Yhdiste _ 2 —1 q J

\ (Ib) CS-U70 b X (kontrolli) - ^ ^ ? _

Bakteerit\^^ R2 -S-I^IT

N. ch, cm C OOH

\ 3 έ.

S. aureus F-19 _ (penisillinaasia tuotta- 1,56 3,15 6>25 va bakteeri) S. coli ITTHJ 0,39 £ 0,1 1 0,1 K. -oneiunoniae Y-50 0,39 0,39 6,25 rrot. vul/raria Gil—76 3,13 0,2 0,73 P3. aeruginosa >?00 c

IYC-3445 ' 1 J

Ser. narceocens Y-8 .^200 25 50

Acinetcba.cter r- or caloaceticua" A-6 50 12'5 25 G. freimdil GIT-346 (kefalosporinaasia tuot- -- 200 25 50 tava bakteeri) M. cloacae IID977 >200 25 25

Cltrobaotsr IT—7 25 0,73 1,56 ---" -

Ger. aarcesoana - n 0 7P

IZD620 Jj-i-J u,,o υ,/c

Hiehojolla sno. Y-72 12,5 6,25 25

Ser. narcescatg b-35 100 6,25 100

Po. aeruginosa S-68 ^200 12,5 50 OCH^

Huom.: CS-1170 tarkoittaa iTCCH2oCH2CCKK η-f"0 h ΑΙ ΐί

X-n χ-cmo -mX

0x C00H ^ ^ 2

Taulukko I

(jatkoa) 16 71744 -ϋ IT —IT IT—IT IT -=11 -OCOCHj -3 ir -3 -3 A^it-cn00H2IT(CH5) 2

CH2G0iTH2 CH2CII20H

» I·*» -- I I ·..! — '»...... ........ . II I I I

6.25 3.13 3.13 6.25 <0.1 £ 0.1 <: 0.1 <0.1 ----- 1.56 0.39 0.39 0.73 1.56 0.73 0/39 “ 1 ---- — ------- 4-il £ - ----- 50 12.5 12.5 50 100 25 50 50 25 6.25 6.25 25 100 N) 12.5 25 50 12.5 25 25 3.13 3.13 1.36 3.13 3.13 0.2 0.2 0.2 6.25 1.56 1.56 50 12.5 12.5 50 I 12.5 12.5 11

Taulukko I

(jatkoa) 17 71744 ΪΡ n—ir w AT it — n ii — ii || II U 1Ί II t II m _s-i J -sAK,ti -οΛβλ I b I ! CHgCiigiT (ch^)2 cn=cn2 on0 cii2JCi2 6.25 6.2? 3,13 6.25

40.I 40.I 40.I 40.I

1 1 1 ' 1 - — V * — ..... * ..... ' 1 " 1 1 .< ", 0.78 0.59 0.59 0.78

1.56 0.73 0.7S 0.78 I

50 25 25 12.5 50 25 25 I 50 12.5 12.5 12.5 12.5 25 100 12.5 25 25 100 25 50 6.25 12.5 3-13 3.13 0.39 0.7s 0.2 0.2 12.5 1.56 6.75 I 3.-13 50 ' 12.5 12.3 6.25 25 25 12.5 12.5 71 744

Taulukko 1 (jatkoa) 18 6

ΐΓ~~ ? IT—IT IT — N IT — IT

-3-Κ.τΛ „JI " ~_ϊ 1 1 f -°~^γγγΤ

CH«C=NGH I I I

CE^COCLL· CEpGONlIOH CHj 3.13 6.25 25 3.13 40.1 ^ 0.1 40.1 40·1 0.73 0.39 1.56 0.78 0.78 0.73 Ο.73 3.13 25 25 12.5 12.5 50 50 100 100 12.5 25 1.56 6.25 50 25 ^_200 25 25 50 200 25 6.25 6.25 50 6.25 I ............ - . ~ !!! ............... » 0.2 0.2 0.73 0.78 6.25 6.25 100 I 12.5 25 25 200 50 12.5 25 25 25 71 744

Taulukko 1 (jatkoa) 19 ! s? li—N II—II II—II IT—n ch5 ch2couh2 gh2cii2oii πη^σπ2 5.25 5.25 6.25 3-13 <0.1 40.1 40.1 40.1 0.2 0.2 0.2 0.2 0.78 1.56 1.56 3.13 | 12.5 12.5 12.5 25 100 | 12.5 25 . i — — .- - ------------. ......... i ............

25 25 25 | 25 S. 0.1 S- 0.1 -.4. 0.1 0.1 6.25 12.5 j 25 ! 71744

Taulukko I

(jatkoa) IT-r-

xT

HgiT S

IT — IT IT — IT IT — IT

-sAirIT -CCOCH^ -S-^gJ-CH^

t I

CH^ CHpCOUHp 3.13 3.13 6.25 6.25 j 5 0.1 < 0.1 5 0.1 <6 0.1 0.2 0.78 1.56 3.13 3.13 12.5 12.5 25 25 100 25 12.5 25 25 50

25 I

1.56 I

~0.1 50.1 0.33 c.39 1.56 6.25

25 j J

21 71744 ^_____________Taulukko 1'

Ns"x Yksikkö: mcg/ml '"X Yhdiste (Ib) B CH,- ! C1CH„- \ ! -5—i-2-

\ CS-1170 - N - N ' N - N

Χχ (kontroni) : κ" ! Λ " j f\ 5

\χ I -S ΓΓ -S X

X ; S i CH CH

Bakteerit X^ j _Xy| ___ E. coli NIHJ 0,39 4 0,1 40,1 K1. pneumoniae Y-50 0,39 0,39 0,2

Ser. marcescens W-35 100 25 12,5

Ser. marcescens IID620 3,13 0,78 0,39

Pro. morganii T-216 12,5 6,25 6,25

Aci. calcoaceticus A-6 50 50 50 E. coli TK-3 (Penisillinaasia tuottava bakteeri) 1,56 0,2 0,39 K1. pneumoniae Y-4 (Penisillinaasia tuottava bakteeri) 1,56 1,56 1,56

Klebsiella spp. Y-72 12,5 6,25 6,25

Pro. vulgaris GN-76 (Kefalosporinaasia tuottava bakteeri) 3,13 3,13 1,56

Ser. marcescens W-8 (Kefalosporinaasia tuottava bakteeri) >200 200 50

Ent. cloacae IID977 >200 200 100 E. coli GN-5482 (Kefalosporinaasia tuottava bakteeri) 50 25 12,5

Taulukko 1' (jatkoa) 71744 22 (S) (S) (S) (S) CH-CH- CH CH- CH CH- CH^CH-

_OK_OH_OH_OH

N - N N - N N - N -OCOCH- /1 H »1 tl I», M *5

\ N /\ N

-S Nx -S 'N'' S S

ch3 ch2ch2oh

SV_¥£_SV_SV

S 0,1_£0,1_$0,1__0,2 _g 0,1_0_j_2_0^2_0,2 _6,25_6,25_6,25_50_ _0i_2_0JL2_0_iJ2_1,56 _1,56_3,13__3,13_12,5 _12,5_50_50_50_ g 0,1_0,2 _0,39_0,39 _0,39_0,39_0,78__0,78 _0,39_0,78_1,56_12,5 _1,56_1,56_3,13__3,13 _50_50_100_200_ _50_50__100_200_ _6,25_6,25_12,5_12,5 71744

Taulukko 1' (jatkoa) (S) (R) ch3ch- hoch2- ch3ch- _OH_OH_

N-N N-N N-N

Λ M M II II II

N /\ N /\ N

-S Nx -S N' -S N/ ch3 ch3 ch3 n~C4H9~_^2V_SV_ _$0,1_0,2 _$0,1_ _0_j_2_0,39_0_?_2_ _6,25_25_6,25_ _0,39_1,56_0,78_ _3,13_12,5_3,13_ _25_50_12,5_ _g 0,1_0,78_0,39_ _0,78_0,78_-_ _3,13_6,25_0,78_ _3,13_3,13_6,25_ _12,5_200_100_ _50_50_50_ _3,13_25_=_

Taulukko 1' (jatkoa) 7174 4 24 (S) (S) CH.CH- CH^CH- OCH3 ocho

N - N N - N

I! Il II II

/\ N ,/\ N

-s -s n/ ch3 ch3 C2H5" C2H5_ 50,1 0,2 0,2 50,1 3.13 3,13 0,39 §0,1 12,5 1,56 50 50 5 0,1 5 0,1 0,78 0,39 0,78 1,56 3.13 1,56 25 25 25 25 6,25 6,25 2) Stabiilisuus /6-laktamaasin suhteen.

Stabiilisuus ^-laktamaasin suhteen tutkittiin jodometrisesti 30°C:ssa Perret1 in menetelmällä (Perret, C.J., "Iodometric assay of penicillinase", Nature, 174, 1012-1013 (1954)) paitsi, että käytettiin 0,1 M fosfaattipuskuriliuosta (pH 7,0) 0,2 M fosfaattipuskuri-liuoksen (pH 6,5) asemesta. Kunkin yhdisteen stabiilisuus on esitetty taulukossa 2 suhteellisena hydrolysoitumisasteena olettaen, että Cephaloridinin (CER) stabiilisuus kefalosporinaasiin nähden on 100 ja Penicillin G:n (PC-G) stabiilisuus penisillinaasiin nähden on 100.

Γ7.—!-^ί i 71744 25 j CM O CT £·Λ H O 0,00 , * ' ~ ~ ·~ » I ο ο σ o o c-> I v v/ v ί ------ΐ ^=¾ ΕΛ

Π , ' S

I I H— o rs O tt r~l ? W ! ,_ / g to cn cm j j fe=f ^ j i « -----j- ! j £ C-4 o o tn h C I s j Γ-3 O O «-j 4 H ! /-4 c jO rH rH rH j j /\θ 1* j j CO y --- CJ? ϊ"1 CM H O O O j O !

^ CM CM O C O j O sQ

I ]_____j g 5 ϋ I S JT1 « V j i X/37 2 ω 5 5 -p to

£ X ! O

rd rd i I

Λ · O

x Y Y

(0 4-) j t

>—I fO ί ) J

CM I > j ( -Y 'Zi

CD (C I σ> o I

0 ^ -P I ΓΜ

X -P ! CO W

X to 0 ) CO u d d d I oo I co rH d -p ; I i *z ; 33

d CO CM ! [j >H o CJ

rd -H rd 00 j E-l 1—I -H j 10 Q> Π3 -h to in I C co rd to •H (0 1,01 H 0

Λ (0 S ί 0 W c C

<C C O t to E i 0 -H i

•P H I O £ CP

κλ ,Η h 1 υ h 3 d H H 1 P H (1) p •H O , rd O C 01

to υ ί E υ w rd .H

'd j ' c

O W j W M « a, -H

C: ! H

I o ! ......-P - - ------------J----: to iu ; jj +3 ' i d _ i ! m 10 ! ! 0) •Η ί ·Η . ^ to 1 w !

rd (0 -H C

d I id to in C 1 C3 : rd ; Ή 1 ·Η rd P P C ί N c 0 0 -H j wo

Ο, 0, Η ί ; U

to to H ! Ο Ο Ή , ] ·· rj<

H H tO · H

Π3 Id ' H i £

4-1 Ή ! C O H

a) a> o d ί « X Cu K Eh , j 26 71 744 3) β-laktamaasia estävä annos T-1414:n /¾-laktamaasia estävä annos (IDj-q) on esitetty tau lukossa 3 Perret'in jodometrisellä menetelmällä tutkittuna käyttäen Cefazolinia substraattina.

Taulukko 3.

/-’-laktamaasia estävä annos

Kefalosporinaasia tuottavat bakteerit ID50 (/u<?/raD

E. coli GN-5432 0,82 S. marcescens W-8 0,54 C. freundii GN-346 1,7 4) Infektiolta suojaava vaikutus

Neljän viikon vanhoihin ICR-rotuisiin hiiriin (uros) istutettiin ryhmittäin, kunkin ryhmän käsittäessä 5 hiirtä, vatsakalvon sisäisesti ennalta määrätty määrä patogeenistä bakteeria 5 % musiiniin suspendoituna. Tunnin kuluttua istuttamisesta hiirille annettiin ihonalaisesti testattavaa valmistetta infektiolta suo-jaavan vaikutuksen määrittämiseksi. Saadut tulokset on esitetty taulukossa 4. Taulukon 4 luvut esittävät suojaavan vaikutuksen ED^q-arvoina.

Taulukko 4

Infektiolta suojaava vaikutus

Rotu Infektion MIC (mcg/ml) ED50 (ihonalaisesti) aiheuttava , - .. .> , . , _ (mq/hrin)_____ annos (solua/ — '· --—----- hiiri) Istutettu T-1414 CS-1170 T-1414 CS-1170 bakteeri- määrä (solua/ml) ___ S.marcescens 2,5 x 10® 10® 12,5 200 0,84 15,1 W-35 10ö 6,25 100

Hucm.: CS-1170 on sama kuin taulukossa 1.

T-1414 on sama kuin taulukossa 2.

Seuraavissa taulukoissa 5 ja 6 on kaavan I mukaisten yhdisteiden antibakteerista vaikutusta verrattu FI-patenttihakemuksesta 760 109 tunnettujen yhdisteiden vastaavaan.

ti 21

Taulukko 5 71 744 g Bakteerin määrä 10 solua/ml (yksikkö : mcg/ml)

Yhdiste T-1551 T-1554 T-1555 T-1414 T-1461 T-1688

Bakteeri ^ (vertai- (vertai- (vertai- _ lu)__lu)__lu)____ E. coli NIHJ =0.1 0.39 =0.1 =0.1 =0.1 =0.1 j KL. pneumoniae Y-50 0.39 0.78 0.2 0.39 0.39 0.78

Ser. marcescens IID620 0.78 12.5 0.78 0.78 3.13 0.2

Pro, mirabilis T-lll 1.56 1.56 3.13 1.56 1.56 3.13 M. faecalis B-l 100 200 6.25 1.56 1.56 6.25

Aci. calcoaceticus A-6 50 25 50 12.5 25 12.5 E. coli Tk-3 | (Penisillinaasia tuottava 25 100 50 3.13 0.78 0.39 j bakteeri) j

Kl. pneumoniae Y-4 j (Penisillanaasia tuottava 12.5 50 50 1.56 3.13 3.13 | bakteeri) j -------1

Pro, vulgaris GN 76 i (Kefalosporinaasia tuot- 25 50 50 0.2 0.78 0.78 tava bakteeri) —

Ser. marcescens W-8 j (Kefalosporinaasia tuotta- 200 >200 >200 25 100 50 j va bakteeri) i

Ps. aeruginosa GN 3379 (Penisillanaasia tuotta- 200 100 100 25 200 50 va bakteeri j 78

Taulukko 5 (jatkoa) 71744 T-1689 T-1701 Τ-1658 Τ-1659 Τ-1661 Τ-1487 Τ-1488 Τ-1482 Τ-1462 =0.1 =0.1 =0.1 =0.1 =0.1 =0.1 =0.1 =0.1 =0.1 0.37 0.78 1.56 1.56 0.78 0.39 0.39 0.39 0.39 0.2 0.2 0.78 0.78 0.39 0.2 0.2 0.2 0.78 3.13 3.13 0.78 0.78 3.13 3.13 0.78 0.78 6.25 6.25 6.25 1.56 1.56 12.5 3.13 1.56 1.56 3.13 25 12.5 12.5 12.5 25 12.5 6.25 6.25 12.5 — 0.39 0.2 1.56 1.56 =0.1 3.13 3.13 3.13 6.25 1.56 3.13 1.56 1.56 3.13 3.13 0.78 0.78 3.13 0.78 0.78 0.78 0.39 1.56 0.78 0.39 0.78 0.78 50 50 100 100 50 25 50 25 25 50 50 200 200 100 50 25 50 50

II

71 744 29 Τ-1551

°WQ

'-\ * (D )

C2H5N N-CONH-CHCONH -i—^ η N_N

~' Ji /--n-^\ s-IL Jl (cy\ ° I 2

Lyj COOH I

T ch3

OH

T-1554 °W° /Λ *(D) Q.

C„HcN .N-CONH-CHCONH--1 1 I J-J Jv

fOl 0 I CH OCOCH

COOH

T-1555 °N 0 y~i *(°)

C.H N N-CONH-CHCONH-;-f > N_N

w I /V-v-u

tvJJ COOH

OH

T-1414 0..0 °CH3 *<D> r: C2H5N N-CONH-CHCONH-j-r > N_„

w h f \ cv-U

i COOH 1 CH3 71 744 30 Τ-1461

OCH

0 0 J

^^ *(D) - S

C2H5N^_^N-CONH-CHCONH ~|-j | }==' \ CH.OCOCH.

sy- 0 I 2 3

COOH

T-1688 OCH^j 0. , 0 3

* (D) - .S

CtH.N N-CONH-CHCONH—i-( f

2 5 \_/ I III N —N

h= J--N^\ I, jj s cr I ch.sA n

COOH 2 J

CH„-C=NOH

2 I

CH, T-1689 3 Λ Λ OCH.

°\ /° - 3 y—\ *(d) - s

C9H N N-CONH-CHCONH—-—-f N—N

w l· ^ ^00H CH2COCH3 T-1701 °v //° °CH3 y~\ *(°) -

C.Hj-N N-CONH-CHCONH-j-f > N-N

w μ ,L*LA h » Q i Γ εΗ25-γΝ

COOH I

CH2CH2NH2 71 744 31 Τ-1658

°'\ OCH

X * (D) £ 3 S

C9H N N-CONH-CHCONH —-Y I

2 5 \__/ I I N — N

/ I ^V'ch s-I' «

SN,-,J O I CH2S

COOH j

CH2CONHOH

T-1659

Ov O OCH

*(D) - ,SX

c2h n N-CONH-CHCONH-f-f j i=, ΪΛΑ fa sv ! o' ] ch2s4n>n COOH j

CH2COOH

T-1661 0 0 OCH- *(D) i 3 sx C2H5N N-CONH-CHCONH-j-1 I N ^ v~v L- //—>»-Y Q_j! 1' s'~\ O Y C“2S V"

v~' COOH I

CH2CH2N(CH3) T-1487 0 0 ?CH3 Y * (D) 1

C0HcN N-CONH-CHCONH---YSY

x-y L L1 L r~f!

/—] // ^ CH,sY ,N

sv_| o [ 2 r C00H CH=CH2 32 71 744 Τ-1488 O o 0CH3 *(°) r 3 C0HcN N-CONH-CHCONH--f" Ί .._..

W U M A n S

M* // J n O Lti2b VN/ COOH !

CH2CH2OH

T-1482 n O OCH- A_^ - -3 7 \ *(D) r C0HcN N-CONH-CHCONH—; f f

2 5 V_/ 1 1 J N — M

/=- /-nMMh s a s s _ o I CH2S ^N" COOH j CH2CONH2 T-1462 Λ 0CHo °A-f° *(D)

C-.H..N N-CONH-CHCONH Ί I i N N

2 5 ^ U /M^M |l !| / V cH2s-ks.^

^__ I

COOH

11 3 3

Taulukko 6 71 7 4 4 ^ Bakteerien määrä 10° solua/ml (yksikkö:mcg/ml)

Yhdiste T-1551 T-1711 T-1719 T-1753 T-1770 T.j-1029 T-1818 T-1982

Bakteeri

Kl. pneumoniae Y-50 0.39 0.78 0.2 0.2 0.39 0.39 0.2 =0.1

Ser. marcescens W-35 12.5 50 12.5 6.25 25 25 12.5 6.25

Ser. marcescens IID 620 0.78 0.78 =0.1 =0.1 0.78 1.56 0.39 0.2

Pro, vulgaris GN 3027 =0.1 1.56 0.2 0.2 0.78 0.39 0.39 0.39

Pro, morganii T-216 3.13 25 6.25 1.56 6.25 12.5 6.25 1.56 AI. faecalis B-l 100 6.25 3.13 3.13 6.25 1.56 3.13 0.78 E. coli TK-3 (Penisillinaasia tuot- 25 0.2 =0.1 =0.1 0.2 0.78 0.39 =0.1 tava bakteeri)

Kl. pneuironiae Y-4 (Penisillinaasia tuot- 12.5 6.25 0.78 0.39 1.56 0.78 1.56 0.39 tava bakteeri)

Cit. freundii GN 346 (Kefalosporinaasia tuot- 25 50 25 50 =200 =200 0.78 50 tava bakteeri)

Taulukko 6 (jatkoa) 34 71 744

Tj-1026 T.j-1041 Τχ-1050 Tj-1062 Tj-1063 T.j-1052 T.j-1115 Tj-1053 3.13 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 -0.1 0.2 25 6.25 50 6.25 6.25 6.25 3.13 3.13 1.56 0.39 1.56 0.2 0.2 0.78 =0.1 0.39 6.25 0.78 0.39 0.39 0.78 =0.1 =0.1 =0.1 12.5 3.13 12.5 3.13 3.13 3.13 1.56 12.5 25 3.13 0.39 0.78 0.78 3.13 1.56 1.56 0.2 =0.1 0.39 0.2 0.39 0.39 =0.1 =0.1 12.5 0.78 0.78 0.39 0.78 0.78 0.39 0.78 6.25 25 200 100 200 100 50 50 35 717 4 4 Τ-1551

O O

V< *<D> /S

c9h n n-conh-chconh ——f ] N—N

X J-'vP· L[ ^ [oi S Ί ch2s

COOH I

OH CH3 T-1711 n n OCH_ °v/ *(D)

C0H,N N-CONH-CHCONH -< I N — N

£ Pfx-v3 ^ cooh L3 T-1719 O O OCH-.

>-< * (DL) ^

C~HrN N-CONH-CHCONH ~! f I N N

2 5 s / I I il 1'

/--- /— Νν^>Ηο_|! N

/- O f CH2S

v—- COOH | ch3 T-1753 0CH3 °y~y° mdd - s

C2H5N N-CONH-CHCONH-t-^ N N--N

^ /= \r=N ° | / COOH CH, NH2 3 71 744 36 Τ-1770 o jo och3 y~^( *<d) x

C2H5N N-CONH-CHCONH —1 < | N N

L j i1 N

3 o CH2S

COOH ' CH3 T1-1029

O O OCH

^-f *(D) = /S\ C2H5N N-CONH-CHCONH—i 1 | JJ ^

w L2oh J-"Y'\cb2sAJ

COOH J

CH3 T-1818 O O OCH ^ V-t *(dl) ^ Sx

C~HcN N-CONH-CHCONH—! '( j N N

2 5\_y I ! ' I || |i

I ^ N\^ CH9S—\ ^N

ch2ci ö J 2

COOH

CH3 T1-1026 OCH3 *<d> ,.s^ C8H17^\_/^-CONH-([HCONH TJ I N--f

<S)*CHCH, // N '1' ''CH,S^'v J

f 3 o ! f

0H COOH I

CH3 37 71744 Τ1-1041 och, * (D) £

C H N N-CONH-CHCONH-ή ^ 7 N —N

4 9 ^ / > „ 1—N-v^^· I' N

(S)*CHCH3 Y ch2s-Vn- 0H COOH CH3 T^-1050 O O _0CH3 MD) - .· c0 H .N N-CONH-CHCONH ~j ^ j 1 5 \_^ 1 L_ ^ΓΗ OCOCH-.

(S)*<jMCH3 >^Νγ CH2V 3

OH COOH

T1-1062 och3

MD) £ /SN N —N

Μ>τ·ΐί/0 (S)*CHCH3 J y CH2b n OH COOH !:h2ch2oh

Tj-1063 OCH3 _/ 0 * (D) -5 _ C2%O'c0NH1hc° μΐΧ „ 8*r)

V~ (S)*CHCH3 CH2S NsX

OH COOH

38 71744 Ί^-1052 οο och3 /~< *(D) ; S.

C2H5N N-CONH-CHCONH η-1 | N-N

(R) *1hCH ^Y^CH^S—1[ ? iH 3 0 1 2 γ

COOH I

ch3 T1-1115 O . o 0CHo *(d) ys

C2H5N N-C°NH-CHC°NH —f 1 N--N

h—N Il " (S) *CHOCHO f- ch2S^.n/ ch3 C00H ch3 T1-1053 ° , O OCH-,

* (D) i 3 S

C-H..N N-CONH-CHCONH—I--f I N — N

w I ί· i (S)*CHOCH,ö CH2S“\ ^

I 3 I N

CH3 COOH I

ch3 T-1982 OCH^ V^° MD) Ξ s C2H5N^_N-CONH-CHCONH-j-^ Nj N__^

(S) *CHCH_ Il N\/X CH-S-l! N

I 3 O I 2 0H COOH (Ln 39 71 744

Kaavan I mukaisilla 7^ -metoksikefalosporiineilla on vähäinen myrkyllisyys. Esimerkiksi T-1414:llä LD^Q-arvo oli 5 g/kg tai suurempi (ICR-rotuinen hiiri; suonen sisäisesti).

Kaavan (I) mukaisia 7o<-metoksikefalosporiineja ja niiden suoloja annetaan ihmiselle ja eläimille vapaan hapon tai farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan tai esterin muodossa. Yhdisteistä voidaan muodostaa erilaisia penisilliini- ja kefalosporiini-valmisteiden tavallisia annostusmuotoja, esimerkiksi kapseleita, siirappeja tai ruiskeita ja niitä voidaan antaa suun kautta tai parenteraalisesti.

Keksintöä on kuvattu alla yksityiskohtaisesti esimerkein. Esimerkeissä kaikki prosentit ovat painoprosentteja, ellei toisin mainita.

Esimerkki 1 1) Seokseen, joka sisältää 20 ml vedetöntä kloroformia ja 5 ml vedetöntä tetrahydrofuraania, liuotettiin 0,80 g difenyyli-metyyli 7/* -/D (-) -rA- (4-etyyli-2,3-diokso-1 -piperatsiinikarboksiami-do) - •'i - (2-tienyyli) -asetamido7~3(1 -metyyli-1,2,3,4-tetratso-lyyli) -tiometyyli7-<^'^-kefem-'4-karboksylaattia. Liuos jäähdytettiin -70°C:seen ja säilyttäen lämpötila -70°C:ssa lisättiin siihen 3,5 ml litiummetoksidin metanoliliuosta. (1,425 millimoolia/ml). Saatuun seokseen lisättiin 3 minuutin sekoittamisen jälkeen 0,18 ml tert.-butyylihypokloriittia ja sekoitettiin 15 minuutin ajan samassa lämpötilassa, minkä jälkeen lisättiin 0,29 ml etikkahappoa ja 0,1 ml trietyylifosfiittia tässä järjestyksessä. Sen jälkeen reaktiosysteemin lämpötila kohotettiin huoneen lämpötilaan. Reak-tioseos kaadettiin 25 ml:aan sitraattipuskuriliuosta (pH 7,0). Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä, kuivattiin magnesium-sulfaatilla ja siitä poistettiin liuotin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti (statio-näärinen faasi: silikageeli; eluentti: bentseenin ja etyyliasetaatin 1:1 seos), jolloin saatiin 0,50 g difenyylimetyyli-7/? -/b(-)-tn- (4-etyyli-2,3-diokso-1 -piperatsiinikarboksamido) -<*- (2-tienyyli) -asetamido,7-7<-x -metoksi-3-Z*5- (1 -metyyli-1 ,2,3,4-tetratsolyyli) tio-metyyli/-^-^-kefem-4-karboks.ylaattia, saanto 60,2 %.

IR (KBr) cm"1; Y"C = 0, 1775, 1705, 1675, NMR (CDC13) <i -arvot: 1,09 (3H, t, -CH3), 3,20-365 (6H, m, >CH2 x 3), 3,46 (3H,s, 40 71 744 -CH3), 3,65-4,65 (2H, m, ^CH2), 3,75 (3K, s, -CH3), 4,31 (2H, ABq ^CH2) , 4,97 (1H, s, ^CH) , 5,88 (1H, d, ^CH) , 6,80-7,47 (14H, -CgH5 x 2, f ^CH) , 8,12 (lH,s,^NH), 9,72 (1H, d, >h) . r=\ s w / \

H H

2) 2,0 ml:aan anisolia liuotettiin 0,3 g difenyyli-7 /S-/D (-) -CL-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksanido)-<X-(2-tienyyli)-asetamido7-7 c*--metoksi-3-/5- (1-metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyyli) -tio-metyyli/- &3- kefem -4-karboksylaattia. Liuokseen lisättiin sitä samalla jäähauteella jäähdyttäen 2,0 ml trifluorietikkahanpoa ja seosta sekoitettiin 30 minuuttia samassa lämpötilassa. Reaktion päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännökseen lisättiin 5 ml etyyliasetaattia ja 5 ml vettä ja liuoksen pH säädettiin arvoon 7,0 natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella. Vesi-kerros erotettiin ja siihen sekoitettiin 10 ml tuoretta metyyliase-taattia, minkä jälkeen seoksen pH säädettiin arvoon 2,0 2-n kloori-vetyhapolla. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja siitä poistettiin liuotin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös pestiin dietyylieetterillä ja saatiin 0,20 g valkoista 7 /U>-/D (-)-oi-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiini-karboksamido) -c<- (2-tienyyli) -asetamido7-7°(.-metoksi3-/S- (1-metyyli- 1,2,3,4-tetratsolyyli) tiometyyli/- ^3- kefem — 4-karboksyylihaopoa, saanto 83,3 %.

IR (KBr) cm”1: 1^00 1770, 1705, 1695, 1675 NMR (DMSO-dg) S -arvot: 1,12 (3H, t, -CH3), 3,20-3,70 (6H,m, ^CH2 x 3), 3,46 (3H,s, -CH3) , 3,70-4,35 (4H,m, ^CH2 x 2), 3,95 (3H, s, -CH3) , 5,03 (lH,s, ^CH), 5,80 (1H t d, t^CH) , 6,95-7,30 (2H,m, y-f /=i S I ), 7,40-7,55 (1H, m, S ), 9,70-9,90 (2H,m, ^NH x 2).

Γ

H H

Samalla tavalla saatiin seuraavat yhdisteet: 7,3 -/d (1) -o£- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksamido) -Q(- (2-tienyyli)-asetamidq7-7<*-metoksi-3-/5-(1-karboksimetyyli-l,2,3,4-tetratsolyyli) tiometyyli/-^3-kefem — 4-karboksyylihappo, sp. 160°C (hajoaa).

Il 71 744 41 IR (KBr) cm”1: ) C=0 1770, 1705, 1670 NMR (DMSO-d,) S-arvot: 6 1,09 (3H, t, -CH3) , 3,11-3,72 (6H,m,^:CH2 x 3), 3,41 (3H, s, -CH3) , 3,76-4,60 (4H, m, ^CH2 x 2> » 5,04 <lH' s' ^CH) ' 5,26 (2H, s, CH2) , 5,90 (1H, d,^CH), 6,92-7,26 (2H,xn, \ / H -1 X j| ), 7,39-7,50 (1H, m, ), 9,68-9,79 (2H,m, s ^.NH x 2) 7 fb-/p (-) - - (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksamido) - o- (2-tienyyli) -asetamidq/-7 o6-metoksi-3-asetoksimetyyli- ^ ke-fem-4-karboksyylihappo, sp. 150°-165°C (hajoaa).

IR (KBr) cm-1: C=0 1775, 1720, 1705, 1675 NMR (DNSO-dg) cT -arvot: 1,07 (3H, t, -CH3) , 2,00 (3H,s, -CH3) , 3,19-3,72 (6H,n, >CH2 x 3), 3,42 (3H,s, -CII3), 3,74-4,12 (2H,m, >CH2) , 4,75 (2H, ABq, >CH2) , 5,10 (1H, s, -^CH) , 5,89 (lH,d, ^7CH) , 6,89-7,22 (2H, in, Hx ) , 7,40-7,51 (lH,m, _ ), 9,65 (1H, d, >NH) , X? X?"' 9,81 (1H, s. *>NH) .

Esimerkki 2 15 ml:aan vettä suspendoitiin 1 g esimerkissä 1 saatua 1/3 -/Ö-(-)-c<-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksamido)-°<-(2-tienyyli) -asetamidq7~7c<.-metoksi-3-asetoksimetyyli- Δ^-kef em-4-karbok-syylihappoa ja 0,34 g 5-merkapto-l-karbamoyylinetyyli-l,2,3,4-tet-ratsolia. Suspensioon lisättiin 0,28 g natriumvetykarbonaattia koko ajan sekoittaen. Saadun seoksen annettiin reagoida 55-60°C:ssa 20 tunnin ajan Soimalla säätäen reaktiosysteemin pH välille 6,0-6,3. Reaktion päätyttyä reaktioseokseen lisättiin 20 ml metyyliasetaat-tia ja liuoksen pH säädettiin arvoon 2 lisäämällä tipoittain 2-n kloorivetyhappoa. Metyyliasetaattikerros erotettiin ja vesikerros uutettiin kolme kertaa 15 ml:n määrillä metyyliasetaattia. Orgaaniset kerrokset yhdistettiin, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin 20 ml:aan aseto- 42 71744 nia. Lisättiin saatuun liuokseen tipoittain koko ajan sekoittaen difenyylidiatsometaania, kunnes väri jäi pysyväksi. Liuoksesta poistettiin liuotin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti (stationäärinen faasi: silika-geeli; eluentti: bentseenin ja etyyliasetaatin 1:3 seos), jolloin saatiin difenyylimetyyli-7/3 -/D(-)-(4-etyyli-2,3-diokso-l-pipe-ratsiinikarboksamido) -o(- (2-tienyyli) -asetamidq7-7o<£ -metoksi-3-/5-(1-karbamoyylimetyyli-l,2,3,4-tetratsolyyli)tiometyyli/- A3-kefem- 4-karboksylaattia heikosti keltaisena pulverina. Tähän yhdisteeseen lisättiin sitä jäähauteella jäähdyttäen 3 ml anisolia ja 3 ml tri-fluorietikkahappoa. Seoksen annettiin reagoida 60 minuutin ajan jäähdyttäen sitä jäähauteella. Reaktion päätyttyä reaktioseoksesta poistettiin liuotin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännökseen lisättiin 10 ml etyyliasetaattia ja saostuneet kiteet koottiin suodattamalla saaden 0,32 g 7β-/δ (-)- oC-(4-etyyli-2,3-diokso-l-pipe-ratsiinikarboksamido)-o(.-(2-tienyyli)-asetamidq7-7o^-metoksi-3-/5-(1-karbamoyylimetyyli-1,2,3,4-tetratsolyyli)tiometyyli7~ ^3-kefem- 4-karboksyylihappoa, sp. 145-150°C (hajoaa), saanto 27,6 %.

IR (KBr) cm1:0c=O 1775- 1670-1720 NMR (DMSO-dg) S -arvot: 1,10 (3H,t, -CH3) , 3,20-4,10 (8H, m, ^CH2 x 4), 3,44 (3H,s, CH30-) , 4,32 (2H, ABq, >CH2), 5,10 (2H,s, ^CH2), 5,19 (1H, s,-^CH) , 5,95 (lH,d, ~ CH) , 6,91-7,88 (5H,m,

H vr_-H

A Jl— , -CONH ) , 9,70 (lH,d, >NH), 9,85 (lH,d. >NH) .

HS z

Samalla tavalla saatiin seuraavat yhdisteet: 7/8 -/D (-) -o(- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksamido) -o<-(2-tienyyli)-asetamidq/-70<-metoksi-3—£5-/1-(2-hydroksietyyli)- l,2,3,4-tetratsolyyli7tiometyyli_} - ^3-kefem-4-karboksyylihappo, sp. 125-130°C (hajoaa).

43 71 744 IR (KBr) cm'1: ^ C=0 1770, 1720-1670 NMR (DMSO-dg) (f -arvot: 1,12 (3H, t, -CH3), 3,20-4,50 (14H, m, >CH2 x 7), 3,40 (3H, s, CH20-) , 5,00 (1H, s, ^CH) , 5,85 (1H, d, .^CH), 6,85-

”__/ H

7,60 (3H, m, || j| ), 9,70 (1H, d, ^NH) , H b 9,85, s, Ί fi - ID-(-)-ri -(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboks-amido-o*' - (2-tienyyli) -asetamidq7-7 c?i-metoksi-3-/V5- ( 2-metyyli- 1,2,3,4-tetratsolyyli)tiometyvli7~/V-kefem-4-karboksyylihappo, sp. 165-174°C (hajoaa).

IR (KBr) cm'1: f C=0 1770, 1710, 1670 NMR (DMSO-dg) -arvot: 1,07 (3H, t, -CH3) , 3,20-3,76 (6H, in, >CH2 x 3), 3,41 (3H, s, CH30-), 3,76-4,20 (4H, m, I^CH2 x 2), 4,39 (3H, s, ^rN-CH3) , 5,04 (1H, s, t'-jCH) , 5,90 (1H, d, ;'^CH) , 6,89-7,25 (2H,m,

H ^___________ H

— ' jJ ) 7,35-7,48 (1H, m, J' H ), 9,60-9,77 ' S ' (2H, m, NH x 2).

44 71744 1 β -</Ε> (-) -<<- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksamido) -ο<_ -(2-tienyyli)-asetanidq7-7cv.-metoksi-3-/5-(1,3,4-tiadiatsolyyli)-tionetyylij?- —^-kefem— 4-karboksyylihappo, so. 160-175°C (hajoaa).

IR (KBr) cm"1: ') C=0 1780, 1710, 1675 NMR (DMSO - d,) S-arvot: n 1.09 (3H, t, -CH3) , 3,21-3,75 (6H,m, >CH2 x 3), 3,43 (3H,s, CH30-) , 3,75-4,10 (2H,n, 4,40 (2H, ABq, ^/CH ), 5,14 (lH,s, CH), 5,94 (1H,d, ^;CH), 6,91-7,39 (2H,m,

H —_ H

I ,| _________ N~. N

^ JJ ), 7,40-7,53 (1Η, n, (| j| ,. H ), 9,53 (lH,s. Ij |! H,

\S ^ S

9,65-9,84 (2H,m, UH x 2).

7/¾ (-) -<X,- (4-etyyli-2,3-diokso-l-[ iperatsiinikarboksamido) - '<- (2-tienyyli ) -asetarnidq7~7 \ -metoksi-3-/5- (1-vinyyli-l, 2,3,4-tet-ratsolyyli ) tiometyylij- πλ kefem — 4-karboksyylihappo, so. 150-153°C (hajoaa) .

IR (KBr) cm*1: 0 OO 1770, 1710, .1700, 1665 NMR (DMSO-d,-)3-arvot: 6 1.10 (3H, t, -CH3) , 3,20-3,70 (6H,m, χCII2 x 3), 3,43 (3H,s, -CH3) , 3,80-4,55 (4H,m, '/CH., x 2), 5,10 (lH,s, /CH), 5,46 (lH,d, =CH-), 5,83 (1H,d, =CH-), 5,94 (lH,d, CH), 6,90-7,52 (4U,m,

H H

\________ [( l) ), =CH-) , 9,70 (lH,d, //NH) , 9,86, (1H,S, /NH).

H' S'' ΐβ-fh (-) - (4-etyyli-2,3-diokso-1 -pineratsiinikarboksamido) - c\- (2-tienyyli ) -asetanidq7-7o/-metoksi-3- β 5-/1- (2-hydroksi-inino-propyyli)-1,2,3,4-tetratsolyyli/tiometyyliJ - /Λkefem-4-karboksyylihappo, sp. 165-172°C (hajoaa).

71 744 4 5 m (KEr) cm·*1: 7 0 = O 1775, 1705, 1675 1MR (DI-ISO - dg) 6-arvot: 1,09 (5H, t, -CILj), 1,53 (1.7H, a, -CH^), 1,76 (1.5II, 3, -CIL-), 5,13 - 3,69 (6H, m, 7'OH^ x 3), 3,49 (3H, s, -CI^), 5,77 - 4,20 (4ΓΙ, m, ^0¾ z 2), 5,05 (3H, m, >CH, ^CH2), 3,57 (IH, df $CH), 6,35 - 7,25 (2H, a, H H ..----, 7-( )f 7,40 - 7,44 (HI, n, { J_TJ), 9,60 (Ui, d, 7 ΙΠΙ), 9,65 (UI, 3, /ΙΠΙ) 7β -/D(-)- oi - (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksami-do) - <oL - (2-tienyyli) -asetamidq7-7o<; -metoksi-3-/5- (1-asetyylimetyyli-

O

1,2,3,4-tetratsolyyli) tiometyylij7- -kef em-4-karboksyylihappo, sp. 164-175°C (hajoaa).

IR (EBr) cm”1: 0 c = 0 1775, 1720, 1705, 1675 NMR (JjIISO — dg) (S -arvot: 1,10 (3H, t, 2,27 (3H, 3, -CH^), 3,10 - 3,70 (6H, m, >. 0IIo x 3), 3,43 (3H, 3, -CH^), 3,75 - 4,20 (4II, m, ^ CH2 x 2), 4,40 (2H, s, ^-ch2), 5,00 (1Ή, 3, ^CIl), 5,45 (UI, d, ^CH),

H H

6,95 - 7,32 (2II, m, "j—j ), 7,40 - 7,47 (1H,

__ O

m, Xs3-h )» 9,45 - 9,67 (211, m, > HH x 2)

4 G

71 744 10 -/p(-)-OC-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboks-amido) -0^-(2-tienyyli) -asetamido7-7cxi-metoksi-3- £5-/T-hydroksi-aminokarbonyylimetyyli)-1,2,3,4-tetratsolyvll7tiometvvliJ-/\^-kefem-4-karboksyylihappo, sp. 160-170°C (hajoaa).

IR (KBr) cm-1: V C = 0 1770, 1710, 1700, 1665 NMR (DMSO-dg) $ arvot: 1,11 (3H, t, -CH3), 3,20 - 3,70 (6H, m, ~>ΟΙ2 x 3), 3,40 (3H, s # -CH3), 3,80 - 4,65 (4H, m, '^CH2 x 2), 5,07 (1H, s, -j^CH) , 5,28 (2H, s, >CH2) , 5,90 (1H, d, —.CH) , 6,90 - 7,50 (3H, m, hn__

Ij 0 ), 9,67 (1H, d, ^NH), 9,81 (1H, s,>NH)

H

Esimerkki 3

Liuokseen, joka sisältää 0,27 g natiumvetykarbonaattia 10 mlrssa vettä, liuotettiin 1 g 10~iS> (-)->* - (4-etyyli-2,3 , -di-okso-l-piperatsiinikarboksamido)-od-(2-tienyyli)-asetamido/-7cL -metoksi-3-asetoksimetyyli-Z\?-kefem-4-karboksyylihappoa ja 0,17 g 5-merkapto-l,2,3,4-tetratsolia. Sen jälkeen, kun liuoksen pH oli säädetty arvoon 6,4, liuoksen annettiin reagoida 60°C:ssa 20 tuntia. Reaktioseokseen lisättiin 10 ml metyyli-

H

4 7 71744 asetaattia ja 5 ml etyyliasetaattia. Sen jälkeen, kun seoksen pH oli säädetty arvoon 2,2 2-n kloorivetyhapolla, orgaaninen kerros pestiin kahdella 10 ml:n erällä vettä, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja poistettiin liuotin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografises-ti (stationäärinen faasi:silikageeli; eluenttirbentseenin ja etyyliasetaatin 1:2 seos), jolloin saatiin 0,39 g 7/^-,/0(-)-•X. - (4-etyy li-2,3 , -diokso-l-piperatsiinikarboksamido) - Y - (2-tienyyli) -asetamido/-7 .X-metoksi-3-,/5- (1,2,3,4-tetratsolyyli) -tiometyyli/-Z\3-kefem-4-karboksyylihappoa, sp. 178-183°C (hajoaa), saanto 36,48 %.

IR (KBr) cm"1: ^ C = O 1770, 1690, 1670 NMR (DMSO-dg) & arvot: 1,08 (3H, t, -CH3), 3,18 - 3,70 (6H, m, >CH2 x 3), 3,40 (3H, s, CH30-), 3,70 - 4,10 (4H, m, x 2), 5,07 (1H, s, —CH) , 5,89 (1H, d,

Hv H

5?CH) , 6,87 - 7,20 (2H, m, jj ~jj ), 7,39 - 7,50 (1H, m, li ), 9,65 (1H, d, >NH) , 9,81 (1H, s, J^NH) .

Samalla tavalla saatiin seuraavat yhdisteet: 71744 48

Esimerkki 4

Liuokseen, joka sisältää 0,27 g natriumvetykarbonaattia 10 ml:ssa vettä, liuotettiin 1 g 1/5 -/D {-) -s?( - (4-etyy ii-2,3-di-okso-1 -piperatsiinikarboksamido) - o(- ( 2-tienyyli ) -asetamido_/-7 O('-met-oksi-3-asetoksimetyyli- ^ - kefem —4-karboksyylihappoa ja 0,32 g 1-(2-dimetyyliaminoetyyli)-5-merkapto-l,2,3,4-tetratsoiin natrium-suolaa. Liuoksen annettiin reagoida 60°C:ssa 16 tunnin ajan pitäen pH:ta välillä 6,2-6,5. Reaktioseos puhdistettiin pylväskromatografi-sesti (stationäärinen faasi: 220 g Amberlite XAD; eluoitiin 100 ml: 11a vettä ja sitten 100 ml:lla metanolin 50 % vesiliuosta). Eluaatti haihdutettiin kuiviin saaden 0,32 g natrium ifi -/D (-)-'X- '4-etyyli- 2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksamido)~oC~ (2-tienyyli)-asetanido/-7θ( -metoksi-3-S 5-/1-(2-dimetyyliaminoetyyli )-1,2,3,4-tetratsolyy1\/~ tiometyyli \ --kefem — 4-karboksylaattia valkoisena pulverina, sp. 166°-175°C (hajoaa), saanto: 26,17 %.

IR (KBr) cm-1: vC = O 1760, 1705, 1670, 1610 NMR (DMSO-d,) ύ -arvot:

O

1,10 (3H, t, -CILj), 2,20 (611, m, -CH^ x 2), 2,68 (2H, t, ^CH2), 5,20 - 3,70 (6H, m, > CH2 x 3), 3,40 (3H, s, OH^O»), 3,72 - 4,30 (6H, m, ^ CH2 * 3), 5,05 (1H, 3, >0H), 5,91 (UI, cl, ^CH),

, H H

6,90 - 7,30 (2H, a, jj~7[ ), 7,40 - 7,51 (1H, -Γ1-Π “ 9»75 i211' ra» x 2)

S

Samalla tavalla saatiin seuraavat yhdisteet:

Natrium 7/3 -/D (-) -CX - (4-etyyli-2,3-diokso-l-oineratsiini-karboksamido) y - (2-tienyyli) -asetamidq7-7<X-metoksi-3- 5-/2- (2-dimetyyliaminoetyyli)-1,2,3,4-tetratsolyyli/tiometyyli^ - A 3-kefem- 4-karboksylaatti, sp. 175-183°C (hajoaa).

IR (KBr) cm"1: l) C = O 1760, 1705, 1670, 1615 NMR (DMS0-d6) δ -arvot: 71 744 49 1,11 (3H, ΐ, -GIL,), 2,24 (SH, a, -GHj X 2), 2,33 (2H, t, >CH2), 3,20 - 3,70 (6H, m, T 2¾ x 3), 3,42 (3H, 3, CILjO-), 3,70 - 4,20 (4Π, m, Τ'CH2 x 2), 4,50 (2H, t, >CH2), 3,0 (1H, 2, T OH), 5,92 (11, cl, > OH), 5,90 - 7,50 (2Ξ, n,

H H

>j-Π7 ), 7,57 - 7,48 (HI, m,J[ ί] H ), 9,6 - 9,75 (23, m, >Ι·!Π χ 2)

Natrium 7β-/ΐ) (-) -o< - (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiini-karboksiamido) -a( - (2-tienyyli) -asetamidq/-7GK.-roetoksi-3- ^5-/1- (2-aminoetyyli)-1,2,3,4-tetratsolyyli/tiometyylij- -kefem-4-karboksy- laatti, sp. 180-187°C (hajoaa).

IR (KBr) cm"1: ^0=0 1765, 1705, 1670, 1600 11HR (DI-ISO - dg) S- arvot: l, 10 (3H, t, -CH~), 3,23 - 5,74 (6H, m, x 3), 5,45 (5H, s, -CH^), 5,77 - 4,87 (6H, m, ^CH2 x 5), 4,81 (2H, t, ^0H2), 5,07 (IH, 3, j.CH), 5,45 (1H, d, >CH), 6,95 - 7,25 (2H,

H H

m, \-,/ ), 7,40 - 7,52 (IH, m, _|| II jj ), ip 9,61 - 9,80 (2H, m, ^ HH x 2)

Esimerkki 5 1) Suspensioon, joka sisältää 2,55 g DL-°C-amino-2-furyyli-etikkahappoa 35 ml:ssa metyleenikloridia, ja jota jäähdytetään 50 717 4 4 jäähauteella, lisättiin 4,81 ml trimetyy1ikloorisilaania. Saatuun seokseen lisättiin tipoittain 5,04 ml trietyvliamiinia 10 minuutin aikana 5-10°C:ssa. Reaktion annettiin jatkua 15-20°C:ssa tunnin ajan. Lisättiin reaktioseokseen 15 minuutin aikana 5-10°C:ssa 7,01 g 4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarbonyylikloridin ja trietyyli-amiinin hydrokloridin seosta, mainitun seoksen sisältäessä 58,02 % edellistä. Reaktion annettiin jatkua 10-15°C:ssa tunnin ajan. Lisättiin 20 ml vettä, minkä jälkeen reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa tunnin ajan, sitten 5-7°C:ssa 30 minuutin ajan. Saostuneet kiteet koottiin suodattamalla, pestiin 5 ml :11a metvleeni-kloridia ja 5 ml :11a vettä tässä järjestyksessä ja kuivattiin saaden 4,75 g DL-'< -(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksamido)- 2- furyylietikkahaopoa, sp. 179-181°C (hajoaa), saanto 35,6 %.

IR (KBr) cm"1: ν' G = 0 1735, 1709, 1650 NI-IR (DI-ISO — dg) cS - arvot: 1,09 (3H, t, -CH^), 3,18 - 5,71 (4H, m, > CH2 x 2), 3,78 - 4,09 (2H, m, /CH2), 5,53 (1H, d, ~CE), 6,44 (2Π, m, ·

H H

'n—[7' ), 7,61 (1H, s,| J.H ), 9,69 (IH, d, ^'0' /IH) 2) 15 ml:aan vedetöntä metyleenikloridia suspendoitiin 0,94 a DL-'X-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksamido)-2-furyylietikkahappoa. Suspensioon lisättiin 0,35 ml N-metyylimorfoiiinia samalla jäähdyttäen jäähauteella, jolloin muodostui homogeeninen liuos. -20°C:seen jäähdytettyyn liuokseen lisättiin tipoittain 5 minuutin aikana 0,32 ml etyy1ikloorikarbonaattia liuotettuna 2 ml:aan o vedetöntä metyleenikloridia. Tätä seosta sekoitettiin -15 C:ssa 60 minuutin ajan. Jälleen -20°C:seen jäähdytettyyn seokseen lisättiin tipoittain 10 minuutin aikana 1,50 g difenyylimetyvli 7-amino- 3- /5-(1-netyyli-l,2,3,4-tetratsolyyli)tiometyyli/- ^ -kefem-4-karboksvlaattia liuotettuna 15 ml:aan vedetöntä metyleenikloridia. Seosta sekoitettiin edelleen -10°C:ssa 90 minuutin ajan. Sen jälkeen, li 71744 51 kun reaktioseoksen lämpötila oli kohotettu huoneen lämpötilaan, se kaadettiin 10 ml:aan vettä ja orgaaninen kerros erotettiin ja 10 ml uutta vettä lisättiin siihen, minkä jälkeen sen oH säädettiin arvoon 6,5 natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin 10 mlrlla vettä ja 10 nl:lla kyllästettyä nat-riumkloridiliuosta tässä järjestyksessä ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla alennetussa naineessa, jäännös käsiteltiin dietyylieetterillä saaden 2,0 n valkeata pulveria. Ohutlevykromatografialla (kehite: bentseenin ja etyyliasetaatin 1:3 seos) havaittiin, että tämä koostui kahdesta komponentista (Rf: 0,28 ja 0,24). Valkealle pulverille suoritettiin nylväskro-matografia (stationäärinen faasi: silikageeli; eluentti: bentseenin ja etyyliasetaatin 2:1 seos) ohutlevykromatografiän ylemmän vyöhykkeen komponenttia vastaavan komponentin erottamiseksi alemman vyöhykkeen komponenttia vastaavasta komponentista saaden erotettujen kahden komponentin kokonaismääräksi 1,1 g.

Ylemmän vyöhykkeen komponentti (oletettavasti difenyylimetvy-li 7-/D-o/ - (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksamido)-^-(2-furyyli)-asetamido/-3-/5-(1-metyyli-l,2,3,4-tetratsolyyli)-tio-metyyli/- Z\ - kefem —4-karboksylaatti) , sp. 128-138°C (hajoaa).

IR (KBr) cm"*1: Vc = 0 1800, 1705, 1680 NMR (CDG15) cf-arvot: 1,11 (3H, t, -CEj), 5,30 - 4,30 (10H, m, x 5), 3,76 (3H, s, -CI^), 4,91 (1H, d, ^CH), 5,72 - 5,93 (2H, m, -rCH x 2), 6,25 (2H, m,

H H

), 6,82 (1H, s, $CH), 7,20 -'7*53 (1211, m, -Cgll^ x 2, ^mI)» 9,80^ d» >UH)

Alemman vyöhykkeen komponentti (oletettavasti difenvylimetyyli 7/L- °< - (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsi inikarboksamido)-CK~ (2-fu-tyyli) -asetamido/-3-/5- (1-metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyy li) -tiometyyl \J-^ 3- kefem-4-karboksylaatti), sp. 128-136°C (hajoaa).

52 7 1 7 4 4 XR (KBr) cm V C = 0 1000» 1705» 1600 1-IHR (CDCl^) i-arvot: 1,00 (3Hf t, -CEj), 3,20 - 4,30 (10H* m, >CH2 x 5), 3,86 (3H, B, -CH3), 5,00 (HI, d, >011), 5,61 - 5,98 (2H, n, >CH x 2), 6,31 (2H» n» H':---/ ), 6,G5 (1U, 0,-$>cn), 7,29 (UK, m,

^(T

-c6h5 X 2, Oh ). 7,94 (HI, a, >hh), 9,oa (HI, d, >HII) 3) Seokseen, joka sisältää 14 ml vedetöntä kloroformia ja 3,5 ml vedetöntä tetrahydrofuraania liuotettiin 0,86 g kohdassa (2) saatua ylemmän vyöhykkeen komponenttia. -75°C:seen jäähdytettyyn liuokseen lisättiin 1,97 ml litiummetoksidin metanoliliuosta (1,948 millimoolia/ml) ja saatua seosta sekoitettiin 3 minuuttia -75°C:ssa. Lisättiin 0,20 ml tert.-butyylihypokloriittia, minkä jälkeen seosta sekoitettiin -70° - -65°C:ssa 15 minuuttia. Lisättiin 0,20 ml etikkahappoa ja kohotettiin sen jälkeen reaktiosystee-min lämpötila huoneen lämpöön. Reaktioseoksesta poistettiin liuotin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös liuotettiin seokseen, joka sisälsi 10 ml etyyliasetaattia ja 10 ml vettä. Orgaaninen kerros erotettiin ja siihen lisättiin 10 ml vettä, minkä jälkeen pH säädettiin arvoon 2,5 2-n kloorivetyhapolla. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin kahdella 10 ml:n erällä kyllästettyä natrium-kloridiliuosta, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja poistettiin siitä liuotin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti (stationäärinen faasi: 15 g silikageeliä; eluentti bentseenin ja etyyliasetaatin 2:1 seos) saaden 0,30 g valkeata pulveria.

Näin saatu valkea pulveri liuotettiin 3,0 ml:aan anisolia ja näin saatuun liuokseen lisättiin samalla jäähauteella jäähdyttäen 3,0 g trifluorietikkahappoa. Saatua seosta sekoitettiin 30 minuutin ajan samassa lämpötilassa. Sen jälkeen, kun liuotin oli poistet-

II

53 71 744 tu tislaamalla alennetussa paineessa, jäännökseen lisättiin 5 nl etyyliasetaattia ja 5 ml vettä, minkä jälkeen lisättiin koko ajan sekoittaen kyllästettyä natriumkarbonaatti liuosta niim säätämiseksi arvoon 6,5, jolloin jäännös liukeni. Vesikerros erotettiin ja siihen lisättiin 10 ml metyyliasetaattia, minkä jälkeen sen pH säädettiin arvoon 2,0 2-n kloorivetyhapolla ja orgaaninen kerros erotettiin. Vesikerros uutettiin edelleen 10 ml:lla etyyliasetaattia ia uute yhdistettiin yllä saatuun orgaaniseen faasiin. Yhdistetty orgaaninen faasi pestiin kahdella 10 nl:n erällä kyllästettyä natrium-kloridi liuosta , kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja ooistettiin siitä liuotin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös käsiteltiin dietyy lieetteri llä saaden 0,17 g 7/3 (4-etyy li-2 ? 3-diokso 1 piperatsiinikarboksamido) - lX~ (2-f uryy li ) -asetamidoT'-7^ ~net°ksi 3 /b- (1-metyyli-l, 2,3,4-tetratsolyyli) tiometyyli/7- ^ 3-kefem 4 karb oksyylihappoa valkoisena pulverina, sp. 130-138°C (haj°aa^ ' saanto 70,8 %.

IR (KBr) cm"*1: ^ 0 = 0 1770, 1700, 1670 MI© (DI1S0 - dg) (f-arvot: 1,07 (3H, t, -CH^), 3,28 - 4,01 (8H, m, > ^2 x 4), 3,38 (5H, S, -CH3), 3,88 (3H, s, 4,10 - 4,45 (2H, m, >CH2), 5,03 (1H, s, 5,73 (UI, d, >CH), 6,39 (2Hf ra,

H H

"G-jf ), 7,54 (1H, ba, JTj!H 9'51 ' 9,7° ^ck 0 (2H, m, > MH x 2) 71744 54

Esimerkki 6 1) Suspensioon, joka sisältää 2,5 g D (-) - °(_-amino-l, 4-syklo-heksadienyylietikkahappoa 20 ml:ssa vettä, lisättiin tipoittain jää-hauteella jäähdyttäen 2,3 ml trietyylianiinia, jolloin muodostui liuos. Tähän liuokseen lisättiin 5-10°C:ssa tipoittain 6,3 g 4-etyyli- 2,3-diokso-l-piperatsiinikarbonyylikloridia, (puhtaus 58,02 %) 30 minuutin aikana säätäen samalla pH:ta 2,5 ml :11a trietyyliamiinia alueelle 6,5-8,0. Seosta sekoitettiin 10-15°C:ssa vielä 30 minuuttia. Reaktioseos pestiin 20 ml:lla etyyliasetaattia, siihen lisättiin 30 ml tuoretta etyyliasetaattia, minkä jälkeen seoksen pH säädettiin arvoon 2,2 6-n kloorivetyhapolla. Orgaaninen kerros erotettiin ja vesikerros uutettiin vielä 15 ml :11a etyyliasetaattia. Uute yhdistettiin yllä saatuun orgaaniseen faasiin, pestiin kahdella 20 ml:n erällä vettä ja sitten 20 ml:lla kyllästettyä natriumkloridi-liuosta. Pesty orgaaninen faasi kuivattiin maanesiumsulfaatilla ja siitä haihdutettiin liuotin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 4,2 g D (-)- X-(4-etyyli-2,3-diokso-l-oiperatsiinikarb-oksamido)-1,4-sykloheksadienyylietikkahappoa valkeana pulverina, sp. 104-108°C, saanto 80,0 %.

IR (KBr) cm-1: .) C = O 1705, 1670 NMR (DMSO-dg) 5 -arvot: 1,10 (3H, t, -CH5), 2,61 (4H, m, ^CH2 x 2), 3,18 - 3,69 (4H, m, >CH2 x 2), 3,70 - 4,13 (3H, m, ^CH2, ^CH), 4,56 (13, d, ^CH), 5,60 (2H, m, ^CH x 2), 5,70 (UI, s, ^CH), 9,49 (IH, d, ym) 2) Liuokseen, joka sisältää 2,3 g D(-)-- (4-etyyli-2,3-di- okso-l-piperatsiinikarboksamido)-1,4-sykloheksadienyylietikkahaonoa 20 ml:ssa vedetöntä metyleenikloridia, lisättiin -20°C:ssa 0,79 ml N-metyylimorfoliinia. Saatuun seokseen lisättiin tipoittain 0,75 ml etyylikloorikarbonaattia 5 minuutin aikana -20—15°C:ssa. Sekoitettiin 60 minuutin ajan -20 - -15°C:ssa ja lisättiin sitten seokseen 71744 55 15 minuutin aikana -20°C:ssa 3,0 g difenyylimetyyli 7-amino-3-/5-(1-metyyli-l,2,3,4-tetratsolyyli)tionetyyli/- ^3-kefem-4-karboksylaattia liuotettuna 30 mlraan vedetöntä netyleenikloridia. Seosta sekoitettiin vielä 120 minuuttia -10°C:ssa. Reaktioseos kaadettiin 50 ml:aan vettä ja orgaaninen kerros erotettiin. Orgaaniseen kerrokseen lisättiin 30 ml vettä ja sen pH säädettiin arvoon 7.0 natriumvetykarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella. Sen jälkeen orgaaninen kerros erotettiin, pestiin 30 mlrlla vettä 30 ml:11a nat-riumkloridin kyllästettyä vesiliuosta, tässä järjestyksessä, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, ja haihdutettiin liuotin pois tislaanall3 alennetussa paineessa. Jäännökseen lisättiin 30 ml bentseeniä, ja saostuneet kiteet koottiin suodattamalla saaden 3,9 n difenyylimetyV li 1 β -£D (-)-^- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksanido) -(1,4-sykloheksadienyyli)-asetanidq7_3-/5-(1-metyyli-l,2,3,4-tetra" tsolyyli)tiometyyli/- Δ3- kefem -4-karboksylaattia,sn. 151-155°C; saanto 80,7 %.

IR (KBr) cm"1; 7 C = 0 1770, 1700, 1665 MMR (CDCl^) (Γ · 1»15 (3H, t, -CH^), 2,62 (4H, m, x 2), 3,25 - 5,70 (6H, m, >CH2 x 5), 3,71 (3H, s, 3,70 - 4,35 (4H, m, Z^CH2 x 2), 4,92 -5,28 (2H, m, ->CH x 2), 5,57 (2H, m,->CH x 2), 5.75 - 5,97 (2H, m, ^CH x 2), 6,78 (UI, s, >CH), 7.75 (1IH, m, -CgH^ x 2, > MI), 9,57 (1H, d, >MI) 3) Seokseen, joka sisältää 15 ml vedetöntä kloroformia ja 4 ml vedetöntä tetrahydrofuraania, liuotettiin 0,80 g difenyylimetyyli 7 /3 -/D(-) - o< - (4-etyyli-2,3-diokso-l-niperatsiinikarbokS" amido)- - (l,4-sykloheksadienyyli) -asetamido7-3-/5- (l-netyyli~l »2 , ' tetratsolyyli)tiometyyli/- Δkefem--4-karboksylaattia. Lisättiin^ 1.0 g "molekyyliseulaa 3Λ", minkä jälkeen liuos jäähdytettiin -70 seen. Lisättiin liuokseen 1,8 ml litiummetoksidin netanoliliuosta 71744 5 fi (1,948 millimoolia/ml) ja seosta sekoitettiin 3 minuuttia -70°C:ssa. Sen jälkeen lisättiin kerralla 0,18 ml tert.-butyylihypokloriittia ja seosta sekoitettiin 15 minuuttia -70° -- -65°C:ssa ja sitten lisättiin 0,2 ml etikkahappoa, minkä jälkeen seoksen lämpötila kohotettiin huoneen lämpöön. Kun molekyyliseula oli poistettu suodattamalla, reaktioseoksesta poistettiin liuotin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin lisäämällä siihen 20 ml etyyliasetaattia ja 10 ml vettä, ja liuoksen pH säädettiin arvoon 6,5 natriumvety-karbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella. Orgaaninen kerros erotettiin ja siihen lisättiin 10 ml vettä, minkä jälkeen sen pH säädettiin arvoon 2,5 6-n kloorivetyhanolla. Jälleen erotettiin orgaaninen kerros, pestiin se 10 ml :11a vettä ja 10 ml :11a natriumkloridin kyllästettyä vesiliuosta, tässä järjestyksessä ja poistettiin liuotin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pylväskro-matografisesti (stationäärinen faasi: silikageeli; eluentti: bent-seenin ja etyyliasetaatin 2:1 seos). Sen jälkeen kun eluaatista oli poistettu liuotin tislaamalla alennetussa paineessa, jäännös käsiteltiin dietyylieetterillä saaden 0,5 g difenyylimetyyli 7/3 -/D{-)-Ύ- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksamido)-CY~(1,4-syklo-heksadienyy 1 i) -asetamidq7-7j>( -metoksi-3-/5- (1-netyyli-l ,2,3,4-tetrat-solyyli) tiometyylij7- — kefem—4-karboksylaattia valkoisena pulve rina, saanto 60,3 %.

JR (KBr) cm-1: 0 C = 0 1775, 1710, 1675 1ΠΏ (CDClj) (f-arvot: 1,17 (3H, t, -CH-), 2,75 (4H, m, >CII2 x 2), 3,29 - 3,68 (6H, m, > CH,, x 3), 3,47 (3H, s, -CEU), 3,77 (5H, a, -CH3), 3,80 - 4,89 (4H, m, >CH2 x 2), 4,99 (1H, s, >CII), 5,61 (2H, m, CH x 2), 5,95 (IH, s, $ CH), 6,87 (UH, s,-^CH), 7,28 - 7,45 (11H, m, -C^ x 2, 9,55 (1H, d, > MH) 4) 5 ml:aan anisolia liuotettiin 0,4 g difenyylimetyyli 7 β~/D(-)-oC-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksamido)-p(-(1,4-sykloheksadienyyli)-asetamido7”7o<-metoksi-3-/5-(1-metyyli- 3 57 717 4 4 l, 2,3,4-tetratsolyyli)tiometyyli/-A -kefem-4-karboksylaattia.

Liuokseen lisättiin 5 ml trifluorietikkahappoa jäähdyttäen samalla jäähauteessa ja seosta sekoitettiin 30 minuuttia samassa lämpötilassa. Kun reaktiosecksesta oli poistettu liuotin, jäännökseen lisättiin 10 ml metyvliasetaattia ja 10 ml vettä ja sen pH säädettiin arvoon 6,5 lisäämällä koko ajan sekoittaen natrium-vetykarbonaatin kyllästettyä vesiliuosta. Vesikerros erotettiin ja siihen lisättiin 5 ml metyyliasetaattia, minkä jälkeen sen pH säädettiin arvoon 2,2 6-n kloorivetyhapolla ja seoksen annettiin seistä yön yli jääkaapissa. Saostuneet kiteet koottiin suodattamalla, pestiin kahdesti 5 ml:n erillä vettä, sitten 3 ml:11a metyyliasetaattia ja kuivattiin saaden 0,2 g - /D (-) - ^ - (4 -etyyli-2,3-diokso-1-piperatsiini-karboksamido)-o( -(1,4-syklo-heksadienyyli)-asetamidq/-7°( -metoksi-3-/5-(1-metyyli-1,2,3,4-tetratsolyyli)tiometyylit-4^-kefem-4-karboksyylihappoa, sp. 17 7-178°C (hajoaa), saanto 62,7 %.

IR (KBr) cm~1:Vc = 0 1770, 1710, 1685 NMR (DMSO-d,) rC -arvot: 6 1,10 (3H,t. -CH3), 2,18 (4H, m, >CH2 x 2), 3,34-3,73 (6H, m, >CH2 x 3), 3,41 (3H, s, -CH3), 379-4,37 (4H,m,>CH2 x 2), 3,93 (3H,s, -CH3), 4,97 (1H,d, >CH), 5,06 (1H, s, £CH), 5,61 (2H,m, ^CH x 2), 5,87 (1H,s, >CH), 9,38 (1H,d, >NH), 9,53 (1H,s, >NH).

Esimerkki 7 1) 15 ml:aan vedetöntä metyleenikloridia liuotettiin 2,0 g ^ -(4-etyyli-2,3-diokso-1-piperatsiinikarboksamido)- -(2-tri- kloorietoksikarbonyyliamino-4-tiatsolyyli)etikkahappoa. Liuokseen lisättiin -20°C:ssa 0,43 ml N-metyylimorfoliinia. Saatuun seokseen lisättiin tipoittain 5 minuutin aikana liuos, joka sisälsi 0,41 ml etyylikloorikarbonaattia 2 ml:ssa metyleenikloridia, säilyttäen lämpötila välillä -20°—25°C.Reaktion annettiin edetä 1,5 tuntia 58 71744 samassa lämpötilassa. Reaktioseokseen lisättiin tipoittain -15° --20°C:ssa 15 minuutin aikana liuos, joka sisälsi 2,0 q difenyyii-metyyli 7-amino-3-/5-(1-metyyli-l,2,3,4-tetratsolyyli)tiometyyli/-Δ. - kefem -4 -karboksylaattia 30 ml:ssa vedetöntä metyleenikloridia. Reaktion annettiin tapahtua 2 tuntia -10° - -15°C:ssa. Kun reaktio-seoksen lämpötila oli kohonnut, huoneen lämoöön, reaktioseos kaadettiin 30 ml:aan vettä ja sen pH säädettiin arvoon 6,5 natriumvety-karbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella. Orgaaninen kerros erotettiin ja siihen lisättiin uudestaan 30 ml vettä, minkä jälkeen sen pH säädettiin arvoon 2,0 6-n kloorivetyhapolla. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin 30 ml:lla vettä ja 30 ml:11a natriunkloridin kyllästettyä vesiliuosta, tässä järjestyksessä, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja poistettiin liuotin tislaamalla alennetussa naineessa saaden 3,3 g valkoista vaahtomaista jäännöstä. Ohutlevvkro-matografiällä (kehite: bentseenin ja etyyliasetaatin 1:3 seos) todettiin, että tämä koostui kahdesta komponentista. Valkoisella vaah-tomaisella jäännöksellä suoritettiin pylväskromatografia (statio-näärinen faasi: silikageeli; eluentti: bentseenin ja etyyliasetaatin 3:2 seos) saaden 1,3 g valkoista 166-179°C:ssa sulavaa pulveria (hajoaa), joka vastasi ohutlevykromatografiän ylemmän vyöhykkeen komponenttia, ja 1,4 g valkoista 180-190°C:ssa (hajoaa) sulavaa pulveria, joka vastasi ohutlevykromatografiän alemman vyöhykkeen komponenttia.

Ylemmän vyöhykkeen yhdiste: oletettavasti difenyylimetyyli 7-/D-ot- (2-trikloorietoksikarbonyyliamino-4-tiatsolyyli) - c<L - (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksamido)-asetamidq/-3-/5-(1-metyyli-1,2,3,4-tetratsolyyli) tiometyyli,/- /S. ^-kefem-4-karboksy-laatti.

IR (KBr) cm"1: l) C = O 1780, 1710, 1685 NMR (CDCl^) S -arvot: 1,12 (3H, t, -CII5), 2,90 - 3,87 (QH, m, > CHg x 4), 3,47 (3H, s, >11-0^), 4,12, 4,20 (2H, ABq, > CH2), 4,24, 4,90 (2H, ABq, > CH2), 5,04 (1H, d, >CH), 5,56 (1H, d,->CH), 5,98 (UI, d, d, ^ CH), 6,76 (1H, s, ^ OH), 6,89 (1H, a, > CH), 7,26 (UH, m, -C^ x 2, > 1TH), 8,62 (UI, bs, >1«), 9,70 (UI, d, > Kή) il -59 71744

Alemman vyöhykkeen komponentti: oletettavasti difenyylimetyy-li 7-/L-ex. -(2-trikloorietoksikarbonyyliamino-4-tiatsolyyli)- ex -(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksamido) -asetamidc^-3-,/5- (1-metyyli-1,2,3,4-tetratsolyyli)tiometyyli/- ^ ^-kefem-4-karboksy-laatti.

IK (KBr) cnf1: 7 0 = 0 1730, 1710, 1685 NHR (CDCl^) (f-arvot: 1,05 (5H, t, -CK^), 3,12 - 4,10 (8H, m, >01^ x 4), 3,81 (3H, s, -CHj), 4,16, 4,23 (2H, ABq, >CH2), 4,84 (211, ba, >CII2), 4,97 (UI, d, ^ CH), 3,67 (1H, d, d,->CH), 6,12 (UI, d, -pCTII), 6,75 (1H, a, ^cm), 6,84 (1H, s,^CII), 7,23 (10H, a, “σ6Π5 x 7,90 - 3,30 (211, m, ]>I]H x 2), 9,79 (UI, a, > 1IH) 2) Seokseen, joka sisälsi 15 ml vedetöntä kloroformia ja 5 ml vedetöntä tetrahydrofuraania, liuotettiin 1,2 g kohdassa (1) saatua ylemmän vyöhykkeen komponenttia. Liuokseen lisättiin -75°C:ssa 2,17 ml litiummetoksidin metanoliliuosta (1,948 millimoolia/ml), ja saatua seosta sekoitettiin -75°C:ssa 3 minuuttia. Seokseen lisättiin -75°C:ssa kerralla 0,22 ml tert.-butyylihypokloriittia ja saatua seosta sekoitettiin 15 minuuttia -75°C:ssa. Lisättiin 0,2 ml etikka-happoa liuotettuna 2 ml:aan kloroformia, minkä jälkeen reaktiosys-teemin lämpötila kohotettiin huoneen lämpöön. Reaktioseoksesta poistettiin liuotin alennetussa paineessa ja jäännös liuotettiin lisäämällä siihen 20 ml etyyliasetaattia ja 20 ml vettä ja seoksen pH säädettiin arvoon 6,5 kyllästetyllä natriumvetykarbonaatin vesi-liuoksella. Orgaaninen kerros erotettiin ja siihen lisättiin 20 ml vettä, minkä jälkeen sen pH säädettiin arvoon 2,0 2-n kloorivety-hapolla. Jälleen orgaaninen kerros erotettiin, pestiin 10 ml:11a vettä ja 10 ml:11a kyllästettyä natriumkloridiliuosta, tässä järjestyksessä, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja poistettiin liuotin 60 71744 tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pylväs-kromatografisesti (stationäärinen faasi: silikageeli; eluentti: bentseenin ja etyyliasetaatin 3:2 seos) saaden 0,45 g difenyylinetyy-li 7 ¢) /D- *=<,- (2-trikloorietoksikarbonyyliamino-4-tiatsolyyli) - o(- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksamido) -asetamidoy-7°C-metoksi-

O

3- /5-(1-metyyli-l,2,3,4-tetratsolyyli)tiometyyli/-·^ -kefem- 4- karboksylaattia valkoisena pulverina, sp. 155-177°C (hajoaa), saanto 36,4 %.

IR (KBr) cm"1: \) C = O 1785, 1710, 1685 HMR (CDC13) δ -arvot: 1,10 (3H, t, -CH3) , 3,20-4,30 (10H,m, ^CH2 x 5), 3,41 (3H, s, -CH3), 3,73 (3H,s, -CH3), 4,73, 4,79 (2H, ABq, ~CH2), 4,92 (lH, s, ^CH) , 5,74 (lH,d, £>CH), 6,74 (1H,S,$:CH), 7,04 (lfl,s ^CH) , 7,20 (ΙΐΗ,πι, -CgH5 x 2, > NH) , 8,34 (lH,bs, _>NH) , 9,78 (lH,d, ^NH) .

3) 7 ml:aan 85 % muurahaishappoa liuotettiin 0,4 g kohdassa (2) saatua 0,4 g difenyylimetyyli 7/5 -/b-o(-(2-trikloorietoksikarbo-nyyliamino-4-tiatsolyyli)-o£-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiini-karboksamido) -asetanidq/-7<7(metoksi-3-,/5- (1-metyyli-l, 2,3,4-tetratsolyyli )-tiometyyli/- ^^-kefem-4-karboksylaattia. Liuokseen lisättiin 0,4 g sinkkipölyä jäähdyttäen sitä samalla jäähauteella ja seosta sekoitettiin 3 tuntia samassa lämpötilassa. Liukenemattomat aineet poistettiin suodattamalla ja suodoksesta poistettiin liuotin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin lisäämällä siihen 7 ml metyleenikloridia, 3 ml asetonia ja 10 ml vettä ja liuoksen pH säädettiin 7,0 kyllästetyllä natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin kyllästetyllä natrium-kloridin vesiliuoksella, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja poistettiin siitä liuotin tislaamalla alennetussa paineessa saaden 0,21 g valkoista pulveria. Valkoinen pulveri liuotettiin 2 ml:aan anisolia ja siihen lisättiin 2 ml trifluorietikkahappoa jäähdyttäen liuosta samalla jäähauteella, minkä jälkeen sitä sekoitettiin samassa lämpötilassa 30 minuuttia. Liukenemattomat aineet poistettiin suodattamalla ja suodoksesta poistettiin liuotin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös käsiteltiin 5 ml:11a etyyliasetaattia saaden 0,19 g 7β -/D-o(-(2-amino-4-tiatsolyyli)~oL~(4-etyyli-2,3-diokso-l-niperat-

II

61 71744 siinikarboksamido) -asetamido7-7*>S -metoksi-Z5- (1-metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyyli)tiometyyli/- Δ ^-kefem-4-karboksyylihapon tr if luori-etikkahapposuolaa, sp. 175-190°C (hajoaa), saanto 60,9 %.

IR (KBr) cm-1: C = 0 1765, 1700, 1675 (4) 3 ml:aan asetonia liuotettiin 0,16 g kohdassa (3) saatua 10 -/D- - (2-amino-4-tiatsolyyli) - (4-etyyli-2,3-diokso-l- piperatsiinikarboksamido ) - asetamidq7-l^C -metoksi-3-/5-(1-metyyli- 1,2,3,4-tetratsolyyli)-tiometyyli7~Δ ^-kefem-4-karboksyylihapon trifluorietikkahapposuolaa ja lisättiin 0,0197 g (ekvimolaarinen määrä) pyridiiniä, minkä jälkeen liuoksesta poistettiin liuotin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännökseen lisättiin vettä ja kiteet koottiin suodattamalla, jolloin saatiin 1 β --(2-amino- 4-tiatsolyyli)- /--(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksamido)-asetamido.7-7 <<,-metoksi-3-/5 - (1-metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyyli) tio-metyyli/- -kefem-4-karboksyylihappo.

Esimerkki 8 (1) Suspensioon, joka sisälsi 5,0 g D(-)-alaniinia 50 mlrssa metyleenikloridia, lisättiin 14,9 ml trimetyylikloorisilaania. Seokseen lisättiin tipottain 0~5°C:ssa 15,6 ml trietyyliamiinia. Saadun seoksen lämpötila kohotettiin asteittain ja reaktion annettiin edetä 20°C:ssa 1,5 tuntia. Reaktioseokseen lisättiin sitten 5-10°C:ssa 20 g 4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarbonyylikloridin ja tri-etyyliamiinin seosta (josta seoksesta 58,02 % oli edellistä komponenttia)^ tunnin reagoimisen jälkeen 20°C:ssa reaktioseoksesta poistettiin liuotin tislaamalla. Jäännökseen lisättiin 50 ml vettä ja seoksen pH säädettiin arvoon 7,5 natriumvetykarbonaatilla, seos pestiin 50 ml:11a etyyliasetaattia ja siihen lisättiin 50 ml ase-tonitriiliä, minkä jälkeen sen pH säädettiin arvoon 1,5 2-n kloori-vetyhapolla. Asetonitriilikerros erotettiin ja vesikerros uutettiin vielä kahdesti 50 ml:n asetonitriilierillä. Asetonitriili-kerrokset pestiin natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella ja yhdistettiin sitten. Yhdistetyt asetonitriilikerrokset kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja niistä poistettiin liuotin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös kiteytettiin uudelleen n-butanolista saaden 10,8 D(-)-06-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperat-siinikarboksamido) propionihappoa, sp. 164-168°C, saanto 75 %.

62 -1 . 71744 IR (KBr) cm : V C = 0 1710, 1660 NMR (DMSO-dg)o^ -arvot: 1,11 (3H, t, -CH3), 1,39 (3H, d, -CH3), 3,2-4,1 (6H,m ^CH2 x 3), 4,3 (lH,m, ^CH) , 9,22 (lH,d,SNH).

2) 1,5 g:aan D (-)-oC - (4-etyyli-2, 3-diokso-l-piperat.siini-karboksamido)propionihappoa suspendoituna 15 ml:aan metyleeniklori-dia lisättiin 0,64 ml 1-metyylimorfoliinia, jolloin muodostui liuos. Pitäen liuoksen lämpötilaa -15° - -20°C:ssa siihen lisättiin 0,58 ml etyylikloorikarbonaattia ja annettiin sen reagoida 1,5 tuntia.

Sen jälkeen liuokseen lisättiin 2,88 g difenyylimetyyli 7/^-amino- 3-Z_(l-metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyyli) tiometyyli/- 4\^-kefem-4-kar-boksylaattia ja reaktion annettiin edetä tunnin ajan 115° - 120° C:ssa sitten 1,5 tuntia -10° - 0°C:ssa. Kun liuotin oli poistettu tislaamalla alennetussa paineessa, 30 ml vettä ja 30 ml etyyliasetaattia lisättiin jäännökseen ja seosta sekoitettiin perusteellisesti. Saostuneet valkoiset kiteet koottiin suodattamalla, jolloin saatiin 4,0 g difenyylimetyyli 7 β ~/D (-) - - (4-e tyyli-2,3-diokso- 1-piperatsiinikarboksamido) -propionamidq7'-3-/'( 1-metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyyli)tiometyyli/-Δ3-kefem-4-karboksylaattia, sp. 150-154 C (hajoaa), saanto 93,6 %.

IR (KBr) cm"1: V C = O 1780, 1720, 1680 NMR (CDC13 cP -arvot: 1,08 (3H, t, -CH3), 1,36 (3H, d, -CH3) 3,25 - 4,0 (8H, m, ^>CH2 x 4), 3,8 (3H, s, -CH3), 4,3 (2H, q, >CH2), 4,55 (1H, m, ~>CH) , 4,99 (1H, d,;>CH), 5,8 (1H, m, ^>CH) , 6,85 (1H, s,^>CH), 7,2 - 7,4 (10H, s, -C6H5 x 2) 7,7 (1H, s,^>CH), 9,3 (1H, s,^>NH)

Seokseen, joka sisälsi 20 ml kloroformia ja 6 ml vedetöntä tetrahydrofuraania, liuotettiin 1,26 g difenyylimetyyli 7/3-/0(-)-o£-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksamido)-propionamido/- 3-^Tl-metyyli-1,2,3,4-tetratsolyyli)tiometyyli/- Δ> 3-kefem-4-karbok-sylaattia. Pitäen lämpötilaa -70°C:ssa seokseen lisättiin 2,75 ml litiummetoksidin metanoliliuosta (2,184 millimoolia/ml). Saatua liuosta sekoitettiin 3 minuuttia ja siihen lisättiin 0,31 ml tert.-butyylihypokloriittia ja liuosta sekoitettiin 15 minuuttia samassa lämpötilassa. Lisättiin 0,4 ml etikkahappoa, minkä jälkeen reaktio-systeemin lämpötila kohotettiin huoneen lämpöön. Reaktioseos kaa-

H

63 71 744 dettiin 30 ml:aan sitraattipuskuriliuosta (pH 7,0). Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä ja kuivattiin sitten magnesium-sulfaatilla ja poistettiin siitä liuotin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti (statio-näärinen faasi: silikageeli; eluentti: bentseenin ja etyyliasetaatin 1:3 seos), jolloin saatiin 0,6 g difenyylimetyyli 10-ZP(-)- qC- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksamido)-pro-pionamido7-7o<C"getoksi-3-/5- (1-metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyyli) tio- •s metyyli7-/V-kefem-4-karboksylaattia, saanto 45,8%.

IR (KBr) cm_1:V C = 0 1770, 1700, 1670 NMR (CDC13) (f -arvot: 1,1 (3H, 7, -CH3), 1,5 (3H, d, -CH3), 3,5 (3H, s, -CH3), 3,3 - 4,2 (8H, m,^>CH2 x 4), 3,8 (3H, s, -CH3), 4,35 (2H, q,>CH2), 4,6 (1H, ,m, ^>CH) , 5.03 (1H, s,t>CH), 6,88 (1H, s,^>CH), 7,2 - 7.4 (10H, s, -CgH5 x 2), 8,0 (1H, s,^>NH), 9,25 (1H, d,>NH) (4) 8 ml:aan anisolia liuotettiin 1,2 difenyylimetyyli 7β -/D(-)-oC-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarböksamido)-propionamido/-7 «^-metoksi-3-/5-(1-metyyli-l,2,3,4-tetratsolyyli)-tiometyyli/- /\^-kefem-4-karboksylaattia ja lisättiin liuokseen 5 ml trifluorietikkahappoa jäähauteessa jäähdyttäen. Liuosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 30 minuuttia. Reaktion päätyttyä liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin lisäämällä 30 ml etyyliasetaattia ja 30 ml vettä ja liuoksen pH säädettiin arvoon 7,0 natriumvetykarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella. Vesikerros erotettiin ja siihen lisättiin 30 ml asetonitriiliä, minkä jälkeen sen pH säädettiin arvoon 2,0 2-n kloorivetyhapolla. Asetonitriilikerros erotettiin ja vesikerros uutettiin kahdesti 30 ml:n asetonitriilierillä. Asetonitriili-uutteet pestiin natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella ja yhdistettiin yllä saatuun asetonitriilikerrokseen. Yhdistetty asetonitriilikerros kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja siitä poistettiin liuotin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 0,5 g 7 β-/D (-) - c>C - (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsii- 64 71744 nikarboksamido)-propionamido7-7 ^-metoksi-3-/ΊΓ- (1-metyyli-l,2,3,4-tetratsolyyli)tiometyyli/-Δ -kefem-4-karboksyylihappoa, sp.

165°C (hajoaa, saanto 53,2 %.

IR (KBr) cm”1: V5 C = 0 1770, 1705, 1670, 1650 NMR (DMSO -dg) d’ -arvot: 1,12 (3H, t, -CH3), 1,40 (3H, d, -CH3), 3,44 (3H, s, -CH3), 3,4 - 4,2 (8H, m,^>CH2 x 4), 3,99 (3H, s, -CH3), 4,3 (2H, q,>CH2), 4,5 (1H, m,^>CH), 5,1 (1H, s,3>CH), 9,13 (1H, d, ^>NH) , 9,40 (1H, s ,^> NH)

Samalla tavalla saatiin seuraavat yhdisteet: 1/3 -/pi>-oC- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksamido)-kloorimetyyli)-asetamidoy-? ^-metoksi-3-/5-(1-metyyli-l,2,3,4-tetratsolyyli7tiometyyli-Δ ^-kefem-4-karboksyylihappo, sp.

14 3-146°C (hajoaa).

IR (KBr) cm'1: \? C = 0 1775, 1730 - 1650 NMR (DMSO-dg) (f -arvot: 1,15 (3H, t, -CH3), 3,45 (3H, s, -OCH3) , 3,97 (3H, s, -CH-j) , 3,30 - 4,10 (10H, m/>CH2 x 5), 4,30 (2H, bs,j>CH2), 4,95 (1H, m,-J>CH) , 5,05 (1H, s,^«CH), 9,45 (1H, d, J>NH) , 9,60 (1H, S ,^> NH) 7 /3 -/DL-ov-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboks-amido)-hydroksimetyyli)-asetamidg7~7oC-metoksi-3-/T- (1-metyyli- 1,2,3.4-tetratsolyyli)-tiometvvli/-/v-kefem-4-karboksylaatti, sp. 108-110°C (hajoaa).

IR (KBr) cm'1: V* C = O 1765, 1720-1650

II

71 744 65

Esimerkki 9 (1) 50 ml:aan metyleenikloridia suspendoitiin 2,0 g D-treoniinia ja saatuun suspensioon lisättiin 6,58 ml trimetyylikloorisilaania, minkä jälkeen siihen lisättiin tiputtaen 7,01 ml trietyyliamiinia 0-5°C:ssa. Suspension lämpötilaa nostettiin vähitellen ja reaktio saatettiin tapahtumaan 20°C:ssa 1,5 tunnin aikana, minkä jälkeen reak-tioseokseen lisättiin 5,9 g seosta, jossa oli 4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarbonyylikloridia ja trietyyliamiinihydrokloridia.(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarbonyylikloridin pitoisuus oli 58,55 paino-%). Syntynyt seos saatettiin reagoimaan 20°C:ssa 1 tunnin ajaksi ja tislattiin sitten alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Jäännökseen lisättiin 30 ml vettä ja saadun liuoksen pH asetettiin 7,5:een natriumvetykarbonaatilla, minkä jälkeen liuos pestiin 50 ml:11a etyyliasetaattia ja sitten liuokseen lisättiin 50 ml aseto-nitriiliä. Saadun seoksen pH asetettiin 1,5 reen 2 N kloorivetyhapolla. Seokseen lisättiin natriumkloridia sen kyllästämiseksi ja asetonit-riili-kerros erotettiin sen jälkeen.

Vesipitoista kerrosta uutettiin neljällä 50 mlrn annoksella asetonitriiliä ja nämä neljä asetonitriili-uutekerrosta yhdistettiin edellä mainitun asetonitriili-kerroksen kanssa ja yhdistetty asetoni triili-kerros pestiin kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella, minkä jälkeen asetonitriilikerros kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja tislattiin sitten alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Jäännös kiteytettiin uudelleen n-butanolista antamaan 3,6 g (saalis 75 %) Ώ-oL- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -fi-(S)-hydroksi-voihappoa, jonka sulamispiste oli 164-166°C.

IR (KBr) cm-1: V c=;O1740, 1710, 1670 NMR (CD3SOCD3) ppm-arvot: 1,11 (3H, t, CH3), 1,13 (3H, d, CH3), 3,28-3,75 (4H, m, CH2 x 2), 3,78-4,30 (4H, m, CH2, CH x 2).

(2) 15 ml:aan metyleenikloridia suspendoitiin 1,0 g D-«l-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido)-/3-(S)-hydroksivoihappoa ja siihen lisättiin 0,38 ml 1-metyylimorfoliinia suspension muuttamiseksi liuokseksi. Liuokseen lisättiin 0,35 ml etyylikloorikarbo-naattia -15 - -20°C:ssa ja liuos saatettiin reagoimaan samassa lämpötilassa 1,5 tunniksi. Sen jälkeen reaktioseokseen lisättiin 1,67 g 66 71744 di f enyy lime tyyli-7/9-amino-3-/5- (1-metyyli-l, 2,3,4-tetratsolyyli) tio-metyyli)-43-kefem —4-karboksylaattia ja syntynyt seos saatettiin reagoimaan samassa lämpötilassa 1 tunniksi ja sitten -10 - 0°C:ssa 1,5 tunniksi. Reaktioseos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi ja jäännökseen lisättiin 30 ml vettä ja 30 ml etyyliasetaattia, minkä jälkeen saatua liuosta sekoitettiin. Näin saostetut valkoiset kiteet koottiin suodattamalla antamaan 2,5 g (saalis 95 %) difenyylimetyyli-7/^-/b-«t- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksi-amido) -fi-(S)-hydroksibutyy£iamido.7-3-/5-(1-metyyli-l,2,3,4-tetratso-lyyli)tiometyyli7“4 -kefem—4-karboksylaattia, jonka sulamispiste oli 121-125°C (hajoaa).

IR (KBr) cm-1: ^c=q1785, 1720, 1680 NMR (CD3SOCD3) ppm-arvot: 1,00 (3H, t, CH3), 1,16 (3H, d, CH3), 3,4-4,0 (10H, m, CH2 x 4, CH x 2), 3,85 (3H, s, CH3), 4,25 (2H, g, CH2), 5,10 (1H, d, CH), 5,8 (1H, m, CH), 6,85 (1H, s, CH), 7,2-7,45 (10H, s, C,H x 2), 8,91 (1H, s, NH), 9,26 (1H, s, NH) .

6 5 (3) Seokseen, jossa oli 30 ml kuivattua metyleenikloridia ja 2 ml kuivattua tetrahydrofuraania, liuotettiin 1,0 g difenyylimetyyli-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -fir- (S) -hyd-roksibutyyriamido7-3-/5-(1-metyyli-l,2,3,4-tetratsolyyli)tiometyyli/-A^“kefem—4-karboksylaattia ja syntynyt liuos jäähdytettiin -170°C:seen. Jäähdytettyyn liuokseen lisättiin 3,55 ml (1,66 mm/ml) litiummetoksi-din metanoliliuosta samassa lämpötilassa ja saatua seosta sekoitettiin 3 minuuttia, minkä jälkeen siihen lisättiin 0,18 ml tert.-butyy-lihypokloriittia. Syntynyttä seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 15 minuuttia, minkä jälkeen saatuun liuokseen lisättiin 0,39 ml etik-kahappoa ja liuoksen lämpötila nostettiin huoneen lämpötilaan. Liuos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi ja jäännökseen lisättiin 20 ml etyyliasetaattia ja 20 ml vettä jäännöksen liuottamiseksi, minkä jälkeen syntyneen liuoksen pH asetettiin 6,5reen vesipitoisella natriumbikarbonaattiliuoksella. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja tislattiin sen jälkeen alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti /Wako-pii-happogeeli C-200; eluoitiin bentseenin ja etyyliasetaatin seoksella (1:2 tilavuuden mukaan)/, minkä jälkeen saatiin 0,6 g (saalis 40,8 %) 11 57 71 744 difenyylimetyyli-7/3-/b-od- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksi-amido)-fi- (S) -hydroksibutyyriamido7-7ot-metoksi-3- C$-(1-metyyli-l,2,3,4-tetratsolyyli) tiometyyldJ^-^-kef em—4-karboksylaattia .

IR (KBr) cm-1: V> c=o^-780, 1710, 1670 NMR (CDCl^) ppm-arvot: 1,20 (3H, t, CH^), 1,25 (3H, d, CH^), 3,5 (3H, s, CH3), 3,79 (3H, s, CH3), 3,2-4,0 (8H, m, CH2 x 4), 4,3-4,6 (4H, m, CH2, CH x 2), 5,02 (1H, s, CH), 6,85 (1H, s, NH), 7,2-7,4 (10H, s, C,Hc x 2), 8,52 (1H, s, NH), 9,55 (1H, d, NH). b o (4) 5 ml:aan anisolia liuotettiin 0,5 g difenyylimetyyli-7/S-/b-od- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) (S) -hydrok- sibutyyriamido7-7o(-metoksi-3-/B- (1-metyyli-l, 2,3,4-tetratsolyyli) -tiometyyli7~4 -kefem—4-karboksylaattia ja syntyneeseen liuokseen lisättiin 5 ml trifluorietikkahappo.a jäissä jäähdyttäen, minkä jälkeen saatua liuosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 30 minuuttia. Reaktioseos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi ja jäännökseen lisättiin 10 ml etyyliasetaattia ja 10 ml vettä, minkä jälkeen siihen lisättiin kyllästettyä natriumvetykarbonaattiliuosta sekoittaen sen pH:n asettamiseksi 6,5:een siten jäännöksen liuottaen. Vesipitoinen kerros erotettiin ja siihen lisättiin sitten 10 ml metyy-liasetaattia. Saadun seoksen pH asetettiin 2,0:aan 2 N kloorivety-hapolla. Orgaaninen kerros erotettiin. Vesipitoista kerrosta uutettiin kahdella 10 ml:n annoksella metyyliasetaattia ja nämä kaksi uutetta yhdistettiin edellä mainittuun orgaaniseen kerrokseen ja yhdistetty orgaaninen kerros pestiin kyllästetyllä vesipitoisella natriumklori-di-liuoksella.

Kuivaamisen jälkeen vedettömällä magnesiumsulfaatilla orgaaninen kerros tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi ja jäännöstä käsiteltiin dietyylieetterillä antamaan 0,25 g (saalis 63,3 %) 7/S-/D-«C- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -fi- (S) -hydroksibutyyriamido^-7o£.-metoksi-3-/5- (1-metyyli-l ,2,3,4-tetratso-

O

lyyli) tiometyyli7-4 -kefem—4-karboksyylihappoa, jonka sulamispiste oli 118-120°C (hajoaa).

IR (KBr) cm-1: *>c=o1770, 1705, 1675 NMR (CD3SOCD3) ppm-arvot: 1,10 (3H, t, CH3), 1,15 (3H, d, CH3), 3,40 (3H, s, CH3), 3,93 (3H, s, CH3), 3,5-4,0 (8H, m, CH2 x 4), 4,1-4,4 (4H, m, CH2, CH x 2), 5,03 (1H, s, CH), 9,2 (2H, d, NH x 2).

68 71 744

Samalla tavalla kuin edellä saatiin seuraavat yhdisteet: o 7/3-/D-ot- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -fi~ (S)-hydroksibutyyr iamidq7-7o(-metoksi-3-/2- (1,3,4-tiadiatsolyyli) tio-metyyljJ-A3-kefem-4-karboksyylihappoa, Sp. 108-112°C (hajoaa).

IR (KBr) cm-1: Hc=o1780, 1720,1680 WMR (CD3S0C03 + D20) ppm-arvot: 1,02-1,39 (6H, m, CH3 x 2), 3,50 (3H, s, CH3), 3,3-4,5 (12H, m, CH2 x 5, CH x 2), 5,05 (1H, s, CH), 9,42 (1H, s, CH).

o 7£-/b-ol- (4-n-oktyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -β- (S) --hydroksibutyyriamidq7-7o£-metoksi-3-/5-(l-metyyli-l ,2,3,4-tetrat-solyyli) tiometyyliJ7-Ä3-kefem-4-karboksyylihappoa, sp. 113-115°C (hajoaa).

IR (KBr) cm-1: P>C=C)170, 1660-1720 NMR (CD3COCD3) ppm-arvot: 0,80-1,60 (18H, m, CH2 x 6, CH3 x 2), 3,30-4,50 (12H, m, CH2 x 5, CH x 2), 3,48 (3H, s, CH3), 3,95 (3H, s, CH3), 5,00 (1H, s, CH), 8,37 (1H, s, NH), 9,40 (1H, d, NH).

o Ίβ-fb-cl- (4-n-butyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -β- (S) -hydroksibutyyriamido7-7ei.-metoksi-3-/B- (1-metyyli-l ,2,3,4-tetrat-solyyli) tiometyyli7-A3-kefem -4-karboksyylihaoOoa,sp. 125-133°C (hajoaa) .

IR (KBr) cm-1: |^c=01785, 1710, 1680 NMR (CD3SOCD3) ppm-arvot: 0,80-1,60 (10H, m, CH2 x 2, CH3 x 2), 3,20-4,40 (12H, m, CH2 x 5, CH x 2), 3,41 (3H, s, CH3), 3,94 (3H, s, CH3), 5,08 (1H, s, CH), 9,27 (1H, s, NH), 9,30 (1H, d, NH).

o 7/S-/T)-o(r- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -fl- (R) -hydtoksibutyyr.iaraidQ7-7oi-metoksi-3-/!5- (1-metyyli-l ,2,3,4-tetrat-solyyli) tiometyyli7-43-kefem-4-karboksyvlihapDoa, sp. 144°-150°C (hajoaa). IR (KBr) cm-1: ^c=o1780, 1735-1660 NMR (CD3COCD3:CD3SOCD3 = 4:1 tilavuudesta laskettuna) ppm-arvot: 0,95-1,37 (6H, m, CH3 x 2), 3,30-4,92 (12H, m, CH2 x 5, CH x 2), 3,54 (3H, s, CH3), 4,04 (3H, s, CH3), 5,10 (1H, s, CH), 9,23 (1H, bs, NH), 9,46 (1H, d, NH).

Esimerkki 10 (1) 45 ml:aan metyleenikloridia suspendoitiin 4,5 g D-ct-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido)-β-(S)-hydroksi-voihappoa ja syntyneeseen suspensioon lisättiin 1,60 g N-metyylimorfoliinia suspension muuttamiseksi liuokseksi. Liuos jäähdytettiin -20°C:seen ja siihen lisättiin 1,78 g etyylikloorikarbonaattia, minkä jälkeen saatu liuos saatettiin reagoimaan -13 - -16°C:ssa 1,5 tunniksi. Sen jälkeen reaktioseokseen lisättiin 6,50 g difenyylimetyyli-7^-amino- 69 71 7 4 4 3-asetoksimetyyli-A^-kefem—4-karboksylaattia -30°C:ssa. Reaktio saatettiin tapahtumaan välillä -10° - 15°C 30 minuutin ajan ja välillä -10° - 0°C 30 minuutin ajan, minkä jälkeen reaktioseos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Jäännökseen lisättiin 50 ml etyyliasetaattia, 50 ml metyyliasetaattia ja 40 ml vettä jäännöksen liuottamiseksi. Orgaaninen kerros erotettiin, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja tislattiin sen jälkeen alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Jäännös puhdistettiin pylväs-kromatografisesti /Wako-piihappogeeli C-200; eluoitiin kloroformin ja etanolin seoksella (60:1 tilavuudesta laskettuna)^ antamaan 3,2 g (78,2 %:n saalis) difenyylimetyyli-7/ö-/T)-ot- (4-etyyli-2,3-diokso-piperatsiinikarboksiamido-/3- (S)-hydroksibutyyriamidq7-3-asetoksime-tyyli-Δ -kefem—4-karboksylaattia valkoisena jauheena.

IR (KBr) cm-1:^c=o170, 1705, 1670.

(2) 80 ml:aan metyleenikloridia liuotettiin 8,0 g difenyyli-metyyli-7/3-/D-o6- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -β- __ 3 (S)-hydroksibutyyriamidQ/-3-asetoksimetyyli-2l -kefem—4-karboksylaattia, joka oli saatu edellä kohdassa (1), ja liuokseen lisättiin 26 ml litiummetoksidin metanoliliuosta (litiummetoksidi-pitoisuus 1,51 mm/ml) -70°C:ssa. Seosta sekoitettiin välillä -65° - -70°C 3 minuuttia ja sen jälkeen liuokseen lisättiin 1,60 g tert.-butyylihypokloriittia, minkä jälkeen reaktio saatettiin tapahtumaan samassa lämpötilassa 15 ιηϊηημ^η aikana. Reaktioseokseen lisättiin 3 ml etikkahappoa ja seoksen lämpötila nostettiin vähitellen 0°C:seen, minkä jälkeen seos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Jäännökseen lisättiin 100 ml etyyliasetaattia ja 50 ml vettä jäännöksen liuottamiseksi ja orgaaninen kerros erotettiin, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja tislattiin sitten alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti (Wako-piihappogeeli C-200; eluoitiin etyyliasetaatilla) antamaan 2,65 g (saalis 31,8 %) difenyylimetyyli-7/S-/&-«£.- (4-etyyli-2,3-diokso- 1-piperatsiinikarboksiamido) -/S- (S) hydroksibutyyriamido^-7oi.-metoksi- 3 3-asetoksimetyyli-4 -kefem—4-karboksylaattia valkeana jauheena.

IR (KBr) cm-1: W>C=C)170, 1740, 1710, 1680 (3) 2,65 g:aan edellä kohdassa (2) saatua difenyylimetyyli-7/5-/b-ct- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -/3- (S) -hydrok- 3 sibutyyriamido/-7oC-metoksi-3-asetoksimetyyli-4 -kefem—4-karboksylaattia lisättiin 26 ml anisolia ja 26 ml trifluorietikkahappoa 70 71 744 jäissä jäähdyttäen ja saatu seos saatettiin reagoimaan samassa lämpötilassa 30 minuutiksi, minkä jälkeen reaktioseos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Jäännökseen lisättiin di-etyylieetteriä sen pesemiseksi, jolloin saatiin 2,0 g (saalis 97,6 %) 7A-/D-*- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -/3- (S) - 3 hydroksibutyyriamido,7-7ot-metoksi-3-asetoksimetyyli-4 ~kefem—4-kar- boksyylihappoa valkoisena jauheena, jonka sulamispiste oli 142-145°C (hajoaa).

IR (KBr) cm-1: Ρα=()1780, 1705, 1670 NMR (CD^COCO^:CD^SOCD^ = 4:1 tilavuudesta laskettuna) ppm-arvot: 0,85-1,45 (6H, m, CH3 x 2), 2,03 (3H, s, CH3), 3,15-4,95 (12H, m, CH2 x 5, CH x 2), 3,48 (3H, s, CH3), 5,06 (1H, s, CH), 8,84 (1H, s, NH), 9,34 (1H, d, NK).

Esimerkki 1 T

24 ml:aan nitrometaania liuotettiin 0,71 g 7/3-/D- et- (4-etyyli- 2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido)-β-(S)-hydroksibutyyriamidq7~ 7o6-metoksi-3-asetoksimetyyli-A^-kefem-4-karboksyylihappoa sekä 0,22 g 1-(2-hydroksietyyli)-5-merkapto-lH-tetratsolia ja saatu liuos saatettiin reagoimaan 80°C:ssa 5 tunnin ajaksi, minkä jälkeen reaktioseos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Saatuun jäännökseen lisättiin 20 ml etyyliasetaattia ja 20 ml asetonia jäännöksen liuottamiseksi. Syntyneeseen liuokseen lisättiin sitten dife-nyylidiatsometaania kunnes punertavan violetti väri jäi pysyväksi häipymättä ja saatu seos tislattiin sen jälkeen alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Saatu jäännös puhdistettiin pylväskromato-grafisesti /Wako-piihappogeeli C-200, eluoitiin kloroformin ja etanolin seoksella (20:1 tilavuudesta laskettuna),/ antamaan vaaleankeltainen jauhe. Tähän jauheeseen lisättiin 3,5 ml anisolia ja 3,5 ml trifluorietikkahappoa jäissä jäähdyttäen ja saatu seos saatiin reagoimaan samassa lämpötilassa 30 minuutiksi, minkä jälkeen reaktio-seos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Saatuun jäännökseen lisättiin etyyliasetaattia tämän pesemiseksi, minkä jälkeen saatiin 0,28 g (saalis 34 %) vaaleankeltaista jauhetta, joka oli 7^-/b-o<- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piDeratsiinikarboksiamido) -fl- (S) -hydroksibutyyriamido7-7o(-metoksi-3- ^5-/1- (2-hydroksietyyli) - 1,2,3,4-tetratsolyylvrtiometyyli3*'A3-kefem-4-karboksyylihaoOoa, jonka sulamispiste oli 128-135°C (hajoaa).

, 71 71744 IR (KBr) cm : UC=Q1780, 1710, 1675 NMR (CD^COCD^:CD^SOCO^ = 4:1 tilavuudesta laskettuna) ppm-arvot: 0,9-1,4 (6H, m, CH3 x 2), 3,47 (3H, s, CH3), 3,20-4,60 (16H, m, CH x 7, CH x 2), 5,03 (1H, s, CH), 9,01 (1H, s, NH), 9,31 (1H, d, NH).

Sama menettely kuin edellä toistettiin, paitsi että l-(2-hyd-roksietyyli)-5-merkapto-lH-tetratsoli korvattiin l-metyyli-5-merkapto-ΙΗ-tetratsolilla antamaan Ίβ-/Ό~«ί.~ (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperat-siinikarboksiamido) -β- (S) -hydroksibutyyriamidq7-7o£-metoksi-3-/5- d~ o metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyyli) -tiometyyli/-^ -kefem-4-karboksyylihaopo.

Tämän tuotteen sulamispiste, IR-kirjo ja NMR-kirjo olivat samat kuin esimerkin 9 tuotteella.

Esimerkki 1 2 7 ml:aan vedetöntä metyleenikloridia liuotettiin 0,20 g D-ot-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido)-β-(S)-tert.-butoksi-voihappoa, minkä jälkeen saatuun liuokseen lisättiin 0,10 g oksalyy-likloridia ja 1 pisara dimetyyliformamidia tässä järjestyksessä jäissä jäähdyttäen ja saatu seos saatettiin reagoimaan huoneen lämpötilassa 30 minuutiksi. Reaktioseos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Saatu jäännös liuotettiin 8 mlraan vedetöntä metyleenikloridia ja saatu liuos jäähdytettiin -50°C:seen. Liuokseen lisättiin 0,3 g difenyylimetyyli-7/3-amino-7e<—metoksi-3-/5- 3 (l-metyyli-l, 2,3,4-tetratsolyyli) -tiometyyl3*7-4 -kefem—4-karboksy-laattia ja 0,1 ml dimetyylianiliinia tässä järjestyksessä, minkä jälkeen saatu seos saatettiin reagoimaan -20°C:ssa yli yön. Reaktio-seos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi ja saatu jäännös liuotettiin seokseen, jossa oli 10 ml vettä ja 15 ml etyyliasetaattia, minkä jälkeen etyyliasetaatti-kerros erotettiin, pestiin perusteellisesti vedellä ja tislattiin sitten liuottimen poistamiseksi. Saatu jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti /Wako-piihappogeeli C-200; eluoitiin bentseenin ja etyyliasetaatin seoksella (2:1 tilavuudesta laskettuna)_/ antamaan 0,31 g (saalis 63 %) difenyy-1 ime tyyli-7/4-/b-ct- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -β-(S) -tert. -butoksibutyyriamido/-7o<-metoksi-3-/5- (l-metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyyli)tiometyyli^-Λ -kefem—4-karboksylaattia, jonka sulamispiste oli 109-115°C (hajoaa).

IR (KBr) cm-1:Pc=o1780,1720-1680 NMR (CDC13) ppm-arvot: 1,30 (9H, s, CH3 x 3), 1,03-1,55 (6H, m, CH3 x 2), 3,51 (3H, s, CH3), 3,72 (3H, s, CH3), 3,18-4,68 (12H, m, CH2 x 5, CH x 2), 4,98 (1H, s, CH), 6,76 (1H, s, CH), 7,22 (10H, bs, CcHc x 2), 8,04 (1H, bs, NH) , 9,50 (1H, d, NH) .

O D

72 71 744

Edellä saatu tuote liuotettiin seokseen, jossa oli 2 ml aniso-lia ja 2 ml trifluorietikkahappoa, ja saatu liuos saatettiin reagoimaan huoneen lämpötilassa 30 minuutin ajaksi. Reaktioseos kuivattiin alennetussa paineessa kuiviin, minkä jälkeen lisättiin 10 ml etyyliasetaattia jäännökseen ja saatua seosta sekoitettiin 1 tunti. Näin saostetut kiteet koottiin suodattamalla ja kuivattiin antamaan 0,21 g (saalis 55,7 %) 7/3-/b-o6- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksi-amido) -β- (S) -hydroksibutyyriamido^-7o(.-metoksi-3-/5- (1-metyyli-l ,2,3,4-

O

tetratsolyyli) tiometyyli7~A -kefem-4-karboksyylihappoa . Tämän tuotteen sulamispiste (hajoaa), IR-kirjo ja NMR-kirjo olivat samat kuin esimerkissä 9 saadulla tuotteella.

Esimerkki 1 3

Seokseen, jossa oli 40 ml vedetöntä metyleenikloridia ja 20 ml vedetöntä metanolia, liuotettiin 1 g (4-etyyli-2,3-diokso- 1-piperatsiinikarboksiamido) -/3- (S) -hydroksibutyyriamido7-3-/5- (1- _ 3 metyyli-1,2,3,4-tetratsolyyli) tiometyyliy-A -kefem-4-karboksyylihappoa ja saatu liuos jäähdytettiin -75°C:seen. Liuokseen lisättiin tiputtaen 3,7 ml litiummetoksidi-liuosta metanolissa (se sisälsi 9,2 mm litiummetoksidia) ja liuos saatettiin reagoimaan välillä -75 - -70°C 3 minuutin ajaksi, minkä jälkeen siihen lisättiin 0,22 ml tert.-butyy-lihydrokloridia ja saatu seos saatettiin reagoimaan 15 minuutiksi. Reaktioseokseen lisättiin 0,28 ml muurahaishappoa ja seoksen lämpötila nostettiin huoneen lämpötilaan. Seos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi ja saatuun jäännökseen lisättiin 4 ml vettä, 4 ml kyllästettyä vesipitoista natriumkloridiliuosta ja 20 ml asetonitriiliä jäännöksen liuottamiseksi. Syntyneeseen liuokseen lisättiin tiputtaen 6 N kloorivetyhappoa liuoksen pH:n asettamiseksi l,2:een. Orgaaninen kerros erotettiin ja kuivattiin sitten vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja tislattiin sitten alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Saatuun jäännökseen lisättiin 14 ml asetonia ja syntynyttä seosta sekoitettiin. Näin saostetut kiteet koottiin suodattamalla antamaan 0,71 g 7/5-/b-ot-(4-metyyli-2,3-diokso-l-piperat-siinikarboksiamido) -β- (S) -hydroksibutyyr.iamidoJ7-7o(.-metoksi-3-/5- (1- 3 metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyyli) tiometyyli7~d -kef em-4-karboksyylihapon asetonihapon asetoni-adduktia.

Tämä addukti suspendoitiin 4,3 ml saan 20-%:ista vesipitoista asetonia ja suspensioon lisättiin natriumvetykarbonaattia sen pH:n asettamiseksi 5,0:aan. Suspensioon lisättiin 70 mg aktiivihiiltä ja 73 71 744 seosta sekoitettiin 3-4 minuuttia ja suodatettiin sitten seliitin läpi aktiivihiilen poistamiseksi. Suodoksen pH asetettiin 1,5 reen 6 N kloorivetyhapolla. Suodosta sekoitettiin sitten huoneen lämpötilassa 30 minuuttia ja sitten jäissä jäähdyttäen 3 tuntia, minkä jälkeen näin saostetut kiteet koottiin suodattamalla ja kuivattiin antamaan 0,5 g (saalis 45 %) 7y6-/D-o£- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperat-siinikarboksiamido) -/3- (S) -hydroksibutyyriamido_7-7e£-metoksi-3-/5- (1-metyyli-1,2,3,4-tetratsolyyli) tiometyyli7-4 -kefem-4-karboksyylihappo-dihydraattia, jonka sulamispiste oli 173-175°C (hajoaa).

IR (KBr) cm-1: \f>c=Q1115, 1710, 1675, 1660.

Tuotteen NMR-kirjo oli sama kuin esimerkin 9 tuotteella.

Esimerkki 14 20 ml:aan vedetöntä metyleenikloridia suspendoitiin 1 g 7/3-/D-oL- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -β- (S) -hydroksi-butyyriamido7-3-/5-(1-metyyli-l,2,3,4-tetratsolyyli)tiometyyli7-2r-kefem>-4-karboksyylihappoa ja suspensioon lisättiin 0,8 ml vinyylietyyli-eetteriä ja 42 mg pyridinium-p-tolueenisulfonaattia, ja saatu seos saatettiin reagoimaan palautuksen alaisena 50 minuutin ajaksi antamaan 7/3- jT"D-οί- (4-etyy li-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -/8-(S) -/l- (1-etoksietyyli) -oksi7butyyriamido J -3-/5- (1-metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyyli) -tiometyyli/-Z^-kefem^-karboksyylihapoo. Reaktioseos jäähdytettiin -75°C:seen ja siihen lisättiin 0,5 ml vedetöntä metanolia, minkä jälkeen siihen lisättiin tiputtaen 2,87 ml litiummetoksidi-liuosta metanolissa (joka sisälsi 7,52 mm litiummetoksidia). Syntynyt seos saatettiin reagoimaan välillä -75 - -70°C 3 minuutin ajaksi, minkä jälkeen siihen lisättiin tiputtaen 10 minuutin aikana 3 ml vedetöntä metyleenikloridia, joka sisälsi 0,25 ml tert.-butyylihypo-kloriittia. Saatu seos saatettiin reagoimaan samassa lämpötilassa vielä 5 minuutiksi, minkä jälkeen siihen lisättiin 0,34 ml etikkahap-poa ja syntyneen seoksen lämpötila nostettiin 0°C:seen. Reaktioseok-seen lisättiin 5 ml vettä ja saatua seosta sekoitettiin, minkä jälkeen orgaaninen kerros erotettiin ja tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Saatu jäännös ( 7/3- [d- «(- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -/3-(S)-/1-(1 -etoksietyyli)oksi/ butyyriamido^ -7ot-metoksi-3-/5- (1-metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyyli) tio-metyyli/-4 -kefem-4-karboksyylihappo sisältyi tähän) liuotettiin 15 ml:aan asetonia ja liuokseen lisättiin 30 mg p-tolueenisulfonihappomonohyd-raattia ja liuosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia ja 74 71 7 4 4 annettiin sitten seistä 5°C:ssa yli yön. Näin saostuneet kiteet koottiin suodattamalla ja pestiin sitten vedellä antamaan 0,85 g 7>3-/D-et- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido)-β~ (S)-hydroksi-butyyriamidq7-7o(-metoksi-3-/5- (1-metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyyli) -tiometyyli/-4 -kefem-4-karboksvv1ihapon asetoni-addukti.

Tämä addukti suspendoitiin 5 mlraan 20-%:ista vesipitoista asetonia ja sen pH asetettiin 5,0:aan lisäämällä siihen natriumvetykar-bonaattia, minkä jälkeen siihen lisättiin 85 mg aktiivihiiltä ja saatua seosta sekoitettiin 3-4 minuuttia ja suodatettiin sitten se-liitin läpi aktiivihiilen poistamiseksi. Suodokseen lisättiin 6 N kloorivetyhappoa suodoksen pH:n asettamiseksi 1,5 reen, minkä jälkeen suodosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia ja sitten jäissä jäähdyttäen 3 tuntia. Näin saostuneet kiteet koottiin suodattamalla antamaan 0,66 g (saalis 60 %) 7A/D- o(- (4-etyyli-2,3-diokso- 1-piperatsiinikarboksiamido) -/8- (S) -hydroksibutyyriamido/-7c(.-metoksi- 3-/5- (1-metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyy li) tiometyyli/-4-kef em-4-karboksyyli-happodihydraatti, jonka sulamispiste oli 173-175°C (hajoaa).

IR (KBr) cm-1: L>c=01775, 1710, 1675, 1660.

Tuotteen NMR-kirjo oli sama kuin esimerkin 9 tuotteella.

Esimerkki 15 (1) 50 mlraan vedetöntä metyleenikloridia liuotettiin 2,5 g dif enyy lime tyyli-D-βί.- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksi-amido)-Ά-(S)-hydroksibutyraattia ja liuokseen lisättiin -40°C:ssa booritrifluoridi-dietyylieetteri-kompleksia (BF^-pitoisuus: 47 paino-%) ja 50 ml diatsometaanin dietyylieetteriliuosta (diatsometaani-pitoi-suus: n. 1,4 g) tässä järjestyksessä. Seos saatettiin reagoimaan. Reaktioseoksen lämpötila nostettiin sen jälkeen vähitellen huoneen lämpötilaan ja seokseen lisättiin 20 ml vettä, minkä jälkeen orgaaninen kerros erotettiin, pestiin kyllästetyllä vesipitoisella nat-riumkloridi-liuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja tislattiin sitten alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Saatu jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti /Wako-piihappo-geeli C-200; eluoitiin bentseenin ja etyyliasetaatin seoksella (5:1 tilavuudesta laskettuna)./ antamaan 0,68 g (saalis 26,4 %) difenyyli-metyyli-Dnot- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -/3 - (S) -metoksibutyraattia.

n 75 71 7 4 4 (2) Seokseen, jossa oli 5 ml anisolia ja 5 ml trifluorietikka-happoa, liuotettiin 0,6 g difenyylimetyyli-D-ei-(4-etyyli-2,3-diokso-1-piperatsiinikarboksiamido)-fi-(S)-metoksibutyraattia, jota oli saatu edellä kohdassa (1), ja saatu liuos saatettiin reagoimaan jäissä jäähdyttäen 30 minuutiksi. Reaktioseos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi jäännökseen lisättiin 10 ml dietyylieetteriä ja 10 ml di-isopropyylieetteriä ja syntynyttä seosta sekoitettiin 1 tunti. Näin saostetut kiteet koottiin suodattamalla antamaan 0,37 g (saalis 95,8 %) D-oO-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido)-A- (S)-metoksi-voihappoa, jonka sulamispiste oli 132-133°C.

(3) 3 mlraan vedetöntä metyleenikloridia suspendoitiin 0,18 g D-«t- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -A- (S) -metoksi-voihappoa, joka oli saatu edellä kohdassa (2), ja siihen lisättiin 0,1 g oksalyylikloridia. Suspensioon lisättiin 1 pisara N,N-dimetyy-liformamidia ja suspension lämpötila nostettiin huoneen lämpötilaan, minkä jälkeen suspensio saatettiin reagoimaan 1 tunniksi. Reaktio-seos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi ja saatu jäännös liuotettiin 5 ml:aan vedetöntä metyleenikloridia, minkä jälkeen syntyneeseen liuokseen lisättiin 0,28 g difenyylimetyyli-7/3-amino-7«i-metoksi-3-/5- (1-metyyli-l, 2,3,4-tetratsolyyli) tiometyyli/ 43-kefem—4-karboksylaattia välillä -30 - -40°C ja sitten 0,086 g dimetyylianiliinia. Syntynyt seos saatettiin reagoimaan välillä -20 - -10°C 12 tunnin ajaksi ja tislattiin sitten alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Saatu jäännös liuotettiin seokseen, jossa oli 5 ml vettä ja 10 ml etyyliasetaattia. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin kyllästetyllä vesipitoisella natriumkloridi-liuoksella, ja kuivattiin sitten vedettömällä magnesiumsulfaatilla. Orgaaninen kerros tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi ja saatu jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti /Wako-piihappogeeli C-200; eluoitiin bentseenin ja etyyliasetaatin seoksella (1:1 tilavuudesta laskettuna)_7 antamaan 0,28 g (saalis 57,8 %) difenyylimetyyli-7A-/D-«t- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiini-karboksiamido) -A- (S) -metoksibutyyriamido7-7o6-metoksi-3-/5- (1-metyyli-

O

1,2,3,4-tetratsolyyli)tiometyyldj7-^ -kefem—4-karboksylaattia.

(4) Seokseen, jossa oli 2 ml anisolia ja 2 ml trifluorietikka-happoa, liuotettiin 0,18 g difenyylimetyyli-7/S-/D-o£- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -A- (S) -metoksibutyyriamido/-7o(r 76 7 1 7 4 4 *3 metoksi-3-/5-(1-metyyli-1,2,3,4-tetratsolyyli)tiometyyli/-£ -kefem- 4-karboksylaattia ja liuos saatettiin reagoimaan 30 minuutiksi jäissä jäähdyttäen. Reaktioseos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi ja saatuun jäännökseen lisättiin 1Ό ml etyyliasetaattia, minkä jälkeen seosta sekoitettiin 30 minuuttia. Täten saostetut kiteet koottiin suodattamalla antamaan 0,1 g (saalis 70 %) 7/#-/D-ot- (4-etyyli- 2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido)-β-(S)-metoksibutyyriamido7 7°(^metoksi-3-/5- (1-metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyyli) tiometyyli7-4 -kefem-4-karboksyylihappoa, jonka sulamispiste oli 130-136°C (hajoaa) .

IR (KBr) cm"1: c=o1790, 1720-1680 NHR (CD^COCD^:CD^SOCD^ = 4:1 tilavuudesta laskettuna) ppm-arvot: 1,17 (3H, t, CII^) , 1,23 (3H, d, CH^) , 3,33 (3H, s, CH^) , 3,45 (3H, s, CH3), 3,96 (3H, s, CH3), 3,25-4,60 (12H, m, CH2 x 5, CH x 2), 5,08 (1H, s, CH), 8,97 (1H, s, NH), 9,31 (1H, d, NH).

Samalla tavalla kuin edellä saatiin seuraavat yhdisteet: o 7/3-/b-o(- (4-etyyli-2,3-diokso--l-piperatsiinikarboksiamido) -/*- (S) -etoksibut yyriamidoJ7-7c6-metoksi-3-/5- (1-metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyyli) tiometyyl j/?-43-kef em-4-karboksyylihanOo, sp. 110-119°C (hajoaa) . IR (KBr) cm-1: ^C=Q1780, 1720-1670 NMR (CD3COCD3:CD3SOCD3 = 4:1 tilavuudesta laskettuna) ppm-arvot: 1,10-1,35 (9H, m, CH3 x 3), 3,50 (3H, s, CH3), 3,98 (3H, s, CH3), 3,30-4,70 (14H, m, CH2 x 6, CH x 2), 5,03 (1H, s, CH), 8,95 (1H, s, NH), 9,40 (1H, d, NH).

o 7/3-/b-o(- (4-etyyli-2,3-diokso- 1-piperatsiinikarboksimaido) -/5- (S) -tert. -butoksibutyyriamidq7-7cC-metoksi-3-/5- (1-metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyyli) tiometyyli7-^3-kefem-4-karboksyylihappo, sp. 110-115°C (hajoaa).

IR (KBr) cm_1: \> C=Q 1780, 1730-1680 NMR (CD3COCD3) ppm-arvot: 0,82-1,42 (15H, m, CH3 x 5), 3,50 (3H, s, CH3), 3,94 (3H, s, CH3), 3,22-4,58 (12H, m, CH2 x 5, CH x 2), 5,04 (1H, s, CH), 8,48 (1H, s, NH), 9,40 (1H, d, NH).

Esimerkki 16 (1) 0,5 g:an D-od-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksi-amido)-/3-(S)-hydroksi-voihappoa lisättiin 5 ml muurahaishappoa ja syntynyt seos saatettiin reagoimaan 50°C:ssa 2 tunniksi, minkä jälkeen reaktioseos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Saatuun jäännökseen lisättiin 5 ml etyyliasetaattia ja näin il 7? 71744 saostetut kiteet koottiin suodattamalla antamaan 0,45 g (saalis 82 %) D-ot-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido)-β-(S)-formyyli-oksivoihappoa, jonka sulamispiste oli 170-175°C.

IR (KBr) cm-1: c=o1740-1710, 1660 NMR (CD3SOCD3) ppm-arvot: 1,15 (3H, t, CH3), 1,35 (3H, d, CH3), 3,10-3,72 (4H, m, CH2 x 2), 3,72-4,10 (2H, m, CH2), 4,40-4,70 (1H, m, CH), 5,28-5,64 (1H, m, CH), 8,15 (1H, s, ? 9,41 (1H, d, NH).

C-H, (2) 5 ml:aan vedetöntä metyleenikloridia suspendoitiin 0,3 g D-ct- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -/9- (S) -formyyli-oksivoihappoa ja suspensioon lisättiin 0,14 g oksalyylikloridia jäissä jäähdyttäen, minkä jälkeen siihen lisättiin 1 pisara dimetyy-liformamidia. Suspension lämpötila nostettiin huoneen lämpötilaan ja suspensio saatettiin reagoimaan 30 minuutiksi. Näin saatu reaktio-seos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Saatu jäännös liuotettiin 5 ml:aan vedetöntä metyleenikloridia ja liuos jäähdytettiin -40°C:seen. Liuokseen lisättiin 0,45 g difenyylimetyyli-7A-amino-7eC-metoksi-3-/5- (1-metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyyli) tiometyyli7 3 4 -kefem—4-karboksylaattia, minkä jälkeen siihen lisättiin 0,12 ml Ν,Ν-dimetyylianiliinia. Syntynyt seos saatettiin reagoimaan -20°C:ssa yli yön. Reaktioseos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi ja saatuun jäännökseen lisättiin 10 ml vettä ja 20 ml etyyliasetaattia tämän liuottamiseksi, minkä jälkeen orgaaninen kerros erotettiin, pestiin kyllästetyllä vesipitoisella natriumkloridi-liuoksella ja kuivattiin sitten vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja tislattiin sen jälkeen alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi. Saatu jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti /Wako-piihanpo-geeli C-200; eluoitiin kloroformin ja asetonin seoksella (10:1 tilavuudesta laskien)_7 antamaan 0,5 g (saalis 64 %) difenyylimetyyli-7/S-/b-o£- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -A- (S) -formyylioksibutyyriamido7-7oC-metoksi“3-/5- (1-metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyyli) tiometyyli7-4^~kefem—4-karboksylaattia.

(3) Seokseen, jossa oli 2 ml anisolia ja 2 ml trifluorietikka-happoa, liuotettiin 0,2 g difenyylimetyyli-7/3-/b-ot- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido)-fi~(S)-formyylioksibutyyriamidoj7-7o£-metoksi-3-/*>- (1-metyyli-l,2,3,4-tetratsolyyli) tiometyyli,/-^-kefem—4-karboksylaattia ja syntynyt liuos saatettiin reagoimaan 78 7 1 7 4 4 15 minuutiksi jäissä jäähdyttäen. Reaktioseos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi ja saatuun jäännökseen lisättiin 10 ml etyyliasetaattia, minkä jälkeen syntynyttä seosta sekoitettiin 30 minuuttia. Näin saostetut kiteet koottiin suodattamalla antamaan 0,15 g (saalis 94 %) 7/3-/D-c(- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiini-karboksiamidq7-/3- (S) -formyylioksibutyyriamido.7-7et-metoksi-3-/5- (1-metyyli-l, 2,3,4-tetratsolyyli) tiometyylij7-^ -kefem^-karboksyylihappoa, jonka sulamispiste oli 147-155°C (hajoaa).

IR (KBr) cm-1:p C=Q1780, 1720-1680 NMR (CD3S0C03) ppm-arvot: 0,90-1,35 (6H, m, CH3 x 2), 3,20-3,80 (6H, m, CH2 x 3), 3,40 (3H, s, CH3), 3,80-4,10 (2H, m, CHj), 3,94 (3H, s, CH3), 4,20-4,40 (2H, m, CH2), 4,50-4,90 (1H, m, CH), 5,07 (1H, s, CH), 5,20-5,50(1H, m, CH), 8,20 (1H, s, ° 9,43 (1H, s, NH), 9,54 (1H, d, NH). C_H)'

Samalla tavalla kuin edellä saatiin seuraava yhdiste: o 7/5-/b-o(,- (4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido) -A- (S) -asetoksibutyyriamido7-7o6-metoksi-3-/5- (1-metyyli-l ,2,3,4-tetratsolyyli) tiometyyli7-4^-kefem -4-karvoksyylihar)OO, Sp. 136-142°C (hajoaa). NMR (CD3C0C03:CD3SOCD3 = 4:1 tilavuudesta laskettuna) ppm-arvot: 1,06-1,35 (6H, m, CH3 x 2), 2,01 (3H, s, CH3), 3,45 (3H, s, CH ), 3,98 (3H, s, CH3), 3,35-5,00 (12H, m, CH2 x 5, CH x 2), 5,02 (1H, s, CH), 9,37 (1H, s, NH), 9,45 (1H, d, NH).

Esimerkki ·\η 10 ml:aan 80-%:ista vesipitoista tetrahydrofuraania suspendoi-tiin 0,58 g 7/3-/D-d-amino-$- (S) -hydroksibutyyriamido7-7oi.-metoksi-3-/5- (l-metyyli-l, 2,3,4-tetratsolyyli) tiometyyli.7-4 -kefem-4-karboksyyli-happoa, minkä jälkeen suspensioon lisättiin trietyyliamiinia pH:n asettamiseksi välille 7,0-7,5. Syntyneeseen liuokseen lisättiin 0,48 g 4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsiinikarbonyylikloridin ja trietyyli-amiinihydrokloridin seosta (joka sisälsi 58 paino-% 4-etyy.Li-2,3-diokso-l-piperatsiinikarbonyylikloridia) välillä 3-5°C samalla lisäten trietyyliamiinia pH:n asettamiseksi välille 7,0-7,5. Reaktio annettiin tapahtua samassa lämpötilassa 1 tunnin ajan, minkä jälkeen pH asetettiin 5,5:een 6 N kloorivetyhapolla. Reaktioseos tislattiin alennetussa paineessa liuottimen poistamiseksi ja jäännökseen lisättiin

(I

79 71 7 44 4 ml 20-%:ista vesipitoista asetonia jäännöksen liuottamiseksi, minkä jälkeen liuoksen pH asetettiin 1,5reen 6 N kloorivetyhapolla 3-5°C:ssa. Seosta sekoitettiin sitten 5 tuntia ja näin saostetut kiteet koottiin suodattamalla antamaan 0,54 g (saalis 65,1 %) 7/3-/D-ai-(4-etyyli- 2,3-diokso-l-piperatsiinikarboksiamido)-fi-(S)-hydroksibutyyr iamido? 7oC-metoksi-3-/5- (1-metyyli-l, 2,3,4-tetratsolyyli) tiometyy kefem-4-karboksyylihappo-dihydraattia, jonka sulamispiste oli 173-175°C (hajoaa).

IR (KBr) cm"1: *>C=C)1775, 1710, 1657, 1660.

Tuotteen NMR-kirjo oli sama kuin esimerkin 9 tuotteella.

Claims (2)

1. 80 71744 Patenttivaatimus Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten kaavan I mukaisten 7 \-metoksikefalosporiinijohdannaisten ja niiden suolojen valmistamiseksi, 0 .. 0 °CH / ^ A—N N-CONH-pi-CONH -· --- , S ' J B I i i ΓΗ R2 J N_ ^- CH2R o'' γ COOH 2 ^ossa kaavassa R on asetoksiryhmä, tiadiatsolyylitioryhmä, joka voi olla substituoitu C ^-alkyylillä, tai tetratsolyylitioryhmä, l-~> joka voi olla substituoitu C^_^-alkyylillä»hydroksi-C^_^-alkyylillä, amino-C^_^-alkyylillä, karboksi-C^g-alkyylillä, karbamoyyli-C.^,.-alkyylillä, C^_^-alkanoyyli-C^ ^-alkyylillä, hydroksikarbamoyyli-C^_^-alkyylillä, hydroksi-imino-C^ ^-alkyylillä, N ^-di-C^g-alkyy-liamino-C.^ j--alkyylillä tai C2_,--alkenyylillä, A on C^_g-alkyyliryh-mä ja B on sykloheksadienyyliryhmä, tienyyliryhmä, aminotiatsolyyli-ryhmä, furyyliryhmä tai C^_^-alkyyliryhmä joka voi olla substituoitu halogeenilla, hydroksilla, C^_,.-alkoksilla tai C^^-asyylioksilla, tunnettu siitä, että a) yhdiste, jonka kaava on OCH 3 NH -CH-CONH ............ S χ 2 ! 1 , ! | B N - ----CH R2 11 0' T COOR1 jossa R^ on vety tai kefalosporiinikemiassa tavanomainen esterin muodostava ryhmä, on sykloheksadienyyliryhmä, tienyyliryhmä, aminotiat-solyyliryhmä,joka voi olla suojattu kefalosporiinikemiassa tavanomaisella suojaryhmällä, furyyliryhmä tai C^_^-alkyyliryhmä, joka voi olla substituoitu halogeenilla, C^_g-alkoksilla, C^_^-asyylioksilla tai hydroksilla, joka voi olla suojattu kefalosporiinikemiassa ta- 2 vanomaisella suojaryhmällä, ja R tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan kaavan 11 81 71 744 o o A-N N-COOH \_/ III mukaisen yhdisteen reaktiivisen karboksyylijohdannaisen kanssa, jossa kaavassa A tarkoittaa samaa kuin edellä, tai b) yhdiste, jonka kaava on OCH