FI64892C - Foerfarande foer framstaellning av en terpenblandning med antipsoriatisk effekt - Google Patents

Description

IVfcSftr·] [»] {11)KUULUTUSJULKAISU zr / o q n lJ 1 ' utlAggningsskrift 04öy^ C ¢45) Γti-·· ^ ^-3 (51) K».ik.3/Int.ci.3 A 61 K 35/78, C 07 C 13/62 SUOMI—FINLAND (H) Patenttihakemus — Patentans6knln| 7 916l 6 (22) Hakemlspilvl — Anseknlnfadac 22.05.79 (23) Alkupdvl — Glltlfhetsdag 22.05*79 (41) Tullut (ulkbekal — Bllvlt offentllf 25.11.79

Patentti- ia rekisterihallitut ........ , „ . , . ....

_ „_. . . . , (44) NlhUviksIpenon |s kuuLuHutoin pvm. — 31.10.83

Patent* och registerstyrelsen ' Ansttkan uthgd oeh utl.ikrlften publkend J

(32)(33)(31) Pyy^*«y etuoikeus —Bejlrd prlorltet 24.05*78

Espanja-Spanien(ES) 470204 Toteennäytetty-

Styrkt (71) Conrad Limited, The Bank House, Frederick Street, Nassau,

Bahamasaaret-Bahamaöarna(BS) (72) Francisco Ramon Alvarado Salgado, Tegucigalpa,

Blanca Zoila Ney de Alvarado, Tegucigalpa, Honduras(HN),

Antonio Horvath Sumi, Santiago, Chile(CL) (74) Oy Kolster Ab (54) Menetelmä antipsoriaattisesti vaikuttavan terpeeniseoksen valmistamiseksi - Förfarande för framställning av en terpenblandning med anti- psoriatisk effekt Tämä keksintö koskee menetelmää antipsoriaattisesti vaikuttavan luonnonterpeeniseoksen valmistamiseksi uuttamalla erilaisten saniaisten juuria ja lehtiä.

Psoriasis (hilsetystauti) ja parapsoriasis ovat tauteja joiden oireet voivat ilmetä kehon pinnan missä tahansa osassa. Näiden tautien vakavuus riippuu psoriaattisen vaikutuksen laajuudesta iholla sekä syvyydestä ihokerroksissa. Psoriasikseen liittyy myös komplikaatioita, jotka ilmenevät ennen kaikkea nivelten kohdalla ja kudoksissa, kuten maksa- ja munuaiskudoksissa. Tämän seurauksena psoriasis-potilailla voi esiintyä sokeritautia, kihtiä ja jopa munuaisten vajaatoimintaa taudin ollessa pitkälle kehittyneessä vaiheessa, jolloin potilaan tilassa tapahtuu huomattavaa huononemista.

Psoriasis on resessiivisesti periytyvä tauti, mikä selittää taudin esiintymistiheyden jatkuvan kasvun. Maailman Terveysjärjestö on arvioinut psoriasiksen eri kliinisistä muodoista kärsiviä henkilöitä olevan 1% väestöstä.

2 64892

Terapeuttiset yritykset parantaa tämä patologinen sairaus ovat käytännöllisesti katsoen epäonnistuneet. Tietyillä solun kasvua ehkäisevillä lääkeaineilla on ollut jossain määrin vaikutusta mutta ne ovat hyvin myrkyllisiä eikä potilasta voida käsitellä niillä enempää kuin kaksi kertaa niiden myrkyllisyyden takia. Tähän asti on psoriasista ainoastaan pystytty lievittämään ja on pidetty itsestään selvänä, että psoriasista ei voida parantaa.

Nyt on havaittu, että luonnon terpeeneitä, jotka on eristetty seuraavien kasvien Dryopteris crassirhizoma, Polypodium vulgara, Linn, Polypodium leucotomos, Phlebodium decumanum J.Smith, Polypodium decumanum, Cyatea taiwaniana juurista ja lehdistä ja kasvien Polypodium aureum Linn ja Polypodium triseriale juurista, ovat käyttökelpoisia molempia sukupuolia olevien ja kaikenikäisten psoriasis- ja parapsoriasispotilaiden hoidossa. Näihin terpeenei-hin kuuluvat mm. ferneeni ja tämän isomeerit. 152 potilaan ryhmää, joka kärsi psoriasiksesta, hoidettiin suun kautta annetulla päivittäisellä 200 mg annoksella ja tämä aiheutti enemmän kuin 80% tapauksista taudin häviämisen 1-3 kuukaudessa. Sarjassa sokko-testejä ferneeni osoittautui tehokkaaksi verrattuna plaseboon (tehoton lääke), jolla oli sama koko ja muoto. Ferneeni on erityisen käyttökelpoinen kaiken tyyppisissä psoriaattisissa tai parap-soriaattisissa vammoissa, mukaanluettuna tämän taudin märkärakku-lainen (pustular) kämmenpohjamuoto (palmarplantar form.)

Esillä oleva keksintö koskee menetelmää antipsoriaattisesti vaikuttavan terpeeniseoksen valmistamiseksi uuttamalla kasvien Dryopteris crassirhizoma, Polypodium vulgara, Linn, Polypodium leucotomos, Phlebodium decumanum J. Smith, Polypodium decumanum ja Cyathea taiwaniana juuria ja lehtiä ja kasvien Polypodium aureum Linn ja Polypodium triseriale juuria ja menetelmälle on tunnusomaista, että a) juuret leikataan 2-3 cm:n suikaleiksi ja juurisuikaleet ja lehdet saatetaan jatkuvaan kuivausprosessiin pyörivän metalliverkon päällä lämpötilassa enintään 70°C, b) kuivattu materiaali, jonka jäännöskosteuspitoisuus on alle 5%, rakeistetaan levyjauhimessa niin, että saadaan osasia, joiden tiheys on noin 0,36, c) tämä materiaali uutetaan liuottimena, jonka dielektrisyys-vakio on 1,890-9,08.

64892 d) liuotin haihdutetaan e) puolikiinteä jäännös otetaan n-heksaaniin ja n-heksaani/ vesi-seokseen ja annetaan seisoa yli yön erottimessa, ja mahdollinen vesifaasi erotetaan, f) n-heksaaniliuokseen lisätään välillä sekoittaen 10-20%: ista KOH:n etanoliliuosta, jonka tilavuus on kymmenes osa n-hek-saaniliukoisen tilavuudesta, ja annetaan liuoksen seisoa 6 tuntia ja neutraloidaan se pesemällä vedellä, g) liuotin haihdutetaan ja jäännös otetaan kolminkertaiseen tilavuuteen 96%:ista etanolia ja annetaan seisoa kunnes on tapahtunut täydellinen saostuminen, h) saostuma suodatetaan tavanomaisen huokoisuuden omaavalla lasisuodattimella, käyttäen imua ja pestään riittävällä määrällä 96%:ista etanolia, kunnes se on melkein väritön, ja kuivataan tyhjössä KOH:lla tai väkevällä rikkihapolla, i) saostuma liuotetaan n-heksaaniin liuoksen saamiseksi, joka noin 20°C:ssa on 10 paino-%:inen, k) liuos kromatografoidaan SI-60-Geduran-pylväässä (0,063 - 0,2 mm; Merck) tai neutraalisssa A^C^-pylväässä ja eluoidaan n-heksaani11a, _ l) haihdutetaan konsentraatioon noin 10 % ja kiteytetään edullisesti n-heksaanista, huoneen lämpötilassa ja suodatetaan kiteet imulla sekä haihdutetaan emäliuos toisen kidemassan saamiseksi ja m) saadut kiteet uudelleenkiteytetään, edullisesti kuumasta, absoluuttisesta etanolista.

Suoritettujen tutkimusten mukaan ferneeni ei vaikuta hedelmällisyyteen rotissa tai hiirissä eikä sillä ole epämuodostumien syntymistä edistävää vaikutusta rotissa ja hiirissä ("Guidelines for Reproduction Studies for Safety Evaluation of Drugs for Human use" Food and Drug Administration of the United States (1966)).

Ferneeni ei osoita karsinogeenista (syöpää aiheuttavaa) aktiivisuutta rotilla suoritetuissa kokeissa, joissa rotalle 20 viikon ajan suun kautta annettu päivittäinen annos oli 1 mg/kg kehon painoa ja joissa 7 viikon kuluttua tutkittiin rotan virtsarakko. Tämä tutkimusmenetelmä on kuvattu julkaisussa Jull, J.W.

Brit. J. Cancer; 5, 328 (1951) ja käytetty tilastollinen arviointi on kuvattu julkaisussa Arcos and Collaborators, Chemical Induction of Cancer, s. 416, Academic Press Inc. New York (1963).

64892

Ferneenin vaikutusmekanismi liittyy ilmeisesti muutoksiin solumembraanissa, joka säätelee ihosolujen kasvua (Orfanos, C.E. ja Mahrle G. Dermatologic 151, 199-215, 1976).

Ferneenillä ei ole tulehdusta ehkäisevää tai anabolista steroidista vaikutusta. Se on olennaisesti myrkytön aina annoksiin 1 g/kg kehon painoa saakka.

Puhdasta ferneeniä on aikaisemmin eristetty hyvin pieniä määriä laboratoriomittakaavassa (Tetrahedron Letters No 22, 1442 -50; 1963).

Keksinnön mukainen menetelmä mahdollistaa aktiivisten ter-peenien uuttamisen kasvien juurista ja lehdistä teollisin saannoin. Optimaalisen saannon saavuttamiseksi lehdet olisi koottava sen jälkeen kun itiöpesäkkeet jo ovat kehittyneet.

Keksinnön mukaista menetelmää kuvataan seuraavassa lähemmin.

Kuivatus

Juuret leikataan 2-3 cm suikaleiksi, lehdet kuivataan sellaisina kuin ne on koottu. Kuivattaminen tapahtuu jatkuvasti ja materiaali syötetään pyörivälle metalliverkolle, joka on noin 5 m leveä ja 25 m pitkä ja jota liikutetaan kuuman osaston sisällä lämpötilassa enintään 70°C». Sopivasti säätämällä pyörivän metalli-verkon nopeutta, voidaan noin puoli tonnia kosteata materiaalia kuivata tunnissa.

Rakelstus

Kuiva materiaali (jäännöskosteus alle 5%) rakeistetaan levy-jauhimessa, joka on säädetty niin, että saatujen osasten halkaisija on enintään 2 mm (ASTM seula 10) tiheyden ollessa noin 0,36.

Uuttaminen

Uuttaminen suoritetaan liuottimena (dielektrisyys vakio 1 ,890 - 9,08) .

Puhdistaminen 1. Uutteen haihduttamisen jälkeen saatu Ouolikiinteä jäännös otetaan n-heksaaniin tai n-heksaani/vesi-seokseen ja annetaan sen seisoa yli yön erottimessa, minkä jälkeen suolat ja sokerit eliminoidaan mahdollisen vesifaasin mukana.

2. n-heksaaniliuokseen lisätään kymmenesosa sen tilavuudesta 10-20%:ista KOH etanolissa, jolloin välillä sekoitetaan, minkä 5 64892 jälkeen annetaan seisoa 6 tuntia ja n-heksaanifaasi neutraloidaan pesemällä vedellä.

3. Haihduttamisen jälkeen jäännös otetaan kolminkertaiseen tilavuuteen 96%:ista etanolia ja annetaan seisoa kunnes on tapahtunut täydellinen saostuminen, normaalisti 48 tuntia huoneenlämpö-tilassa .

4. Saostuma suodatetaan tavanomaisen huokoisuuden omaavalla lasisuodattimella käyttäen imua, pestään sopivilla määrillä 96%: ista etanolia, kunnes se on melkein väritöntä, ja kuivataan tyhjössä KOHrlla tai konsentroidulla rikkihapolla.

5. Saostuma liuotetaan n-heksaaniin, niin että saadaan 10 painoprosenttinen liuos noin 20°C:ssa.

6. Liuos kromatografoidaan SI-60-Geduran-pylväässä (0,063 -0,2 mm, Merck), jonka dimensio on 5 x 100 tai 10 x 200 cm, riippuen aineen määrästä (500 g - 1 kg) eluoiden n-heksaanilla. Ferneeni elu-oituu ensimmäiseen 1 litran jakeeseen (otetaan kaikenkaikkiaan 2 litr) Voidaan vaihtoehtoisesti käyttää neutraalia A^C^-pylvästä (5 x 100 cm), jolloin eluoitaessa n-heksaanilla uuttuu vain ferneeniä.

7. Haihduttamisen jälkeen konsentraatioon noin 10% annetaan aineen kiteytyä spontaanisti, edullisesti n-heksaanista, huoneen lämpötilassa. Kiteet suodatetaan imun vaikutuksen alaisina ja emäliuok-set haihdutetaan toisen kiteisen massan saamiseksi.

8. Uudelleenkiteytys suoritetaan edullisesti kuumasta absoluuttisesta etanolista.

Seuraava esimerkki valaisee keksintöä

Esimerkki 1

12 kg kuivia lehtiä, jotka oli granuloitu seulassa NolO (2,0 mm) uutettiin 96%:isella etanolilla lämpötilassa 70°C

1,5 tuntia. Uute suodatettiin ja pestiin 10 litralla 96%:ista etanolia suodattimessa. Suodatettu uute haihdutettiin kuivaksi kohtalaisessa tyhjössä (20-30 mmHg).

Jäännös otettiin n-heksaani/vesi (15:10 1)-seokseen ja annettiin seisoa yli yön erottimessa. Vesifaasi eliminoitiin ja heksaanifaasi selkeytettiin 10%:isella KOH-liuoksella etanolissa (5 litraa). Täten selkeytetty heksaanifaasi neutraloitiin pesemällä vedellä ja haihdutettiin kuivaksi.

6 64892 Jäännös liuotettiin 500 ml:aan 96%:ista etanolia samalla lämmittäen ja liuoksen annettiin seisoa 48 tuntia. Se suodatettiin ja kuivattiin (saanto noin 50 g).

Kuiva sakka liuotettiin 1 litraan n-heksaania ja kromatogra-foitiin SI-60-Geduran-pylväässä (100 x 10 cm), eluoitiin n-hek-säänin 1 litran annoksilla.

Ensimmäisen 1 litran jae haihdutettiin ja jäännös kiteytettiin kuumasta heksaanista, bentseenistä tai absoluuttisesta etanolista (saanto 12 g).

Claims (1)

1. 7 64892 Patenttivaatimus Menetelmä antipsoriaattisesti vaikuttavan terpeeniseoksen valmistamiseksi uuttamalla kasvien Dryopteris crassirhizoma, Polypodium vulgara, Linn, Polypodium leucotomos, Phlebodium de-cumanum J. Smith, Polypodium decumanum ja Cyathea taiwanina juuria ja lehtiä ja kasvien Polypodium aureum Linn ja Polypodium triseriale juuria, tunnettu siitä, että a) juuret leikataan 2-3 cm:n suikaleiksi ja juurisuika-leet ja lehdet saatetaan jatkuvaan kuivausprosessiin pyörivän metalliverkon päällä lämpötilassa enintään 70°C, b) kuivattu materiaali, jonka jäännöskosteuspitoisuus on alle 5 %, rakeistetaan levyjauhimessa niin, että saadaan osasia, joiden halkaisija on enintään 2 mm ja joiden tiheys on noin 0,36, c) tämä materiaali uutetaan liuottimena, jonka dielektri-syysvakio on 1,890 - 9,08, d) liuotin haihdutetaan e) puolikiinteä jäännös otetaan n-heksaaniin tai n-heksaani/ vesi-seokseen ja annetaan seisoa yli yön erottimessa, ja mahdollinen vesifaasi erotetaan, f) n-heksaaniliuokseen lisätään välillä sekoittaen 10 -20 %:ista KOH:n etanoliliuosta, jonka tilavuus on kymmenes osa n-heksaaniliuoksen tilavuudesta, ja annetaan liuoksen seisoa 6 tuntia ja neutraloidaan se pesemällä vedellä, g) liuotin haihdutetaan ja jäännös otetaan kolminkertaiseen tilavuuteen 96 %:ista etanolia ja annetaan seisoa kunnes on tapahtunut täydellinen saostuminen, h) saostuma suodatetaan tavanomaisen huokoisuuden omaavalla lasisuodattimella käyttäen imua ja pestään riittävällä määrällä 96 %:ista etanolia, kunnes se on melkein väritön, ja kuivataan tyhjössä KOH:lla tai väkevällä rikkihapolla, i) saostuma liuotetaan n-heksaaniin liuoksen saamiseksi, o joka noin 20 C:ssa on 10 paino-%:inen, k) liuos kromatografoidaan SI-60-Geduran-pylväässä (0,063 - 0,2 mm; Merck) tai neutraalissa A^O^-pylväässä ja eluoidaan n-heksaanilla, 8 64892 l) haihdutetaan konsentraatioon noin 10 % ja kiteytetään, edullisesti n-heksaanista, huoneen lämpötilassa ja suodatetaan kiteet imulla sekä haihdutetaan emäliuos toisen kidemassan saamiseksi, ja m) saadut kiteet uudelleenkitevtetään edullisesti kuumasta, absoluuttisesta etanolista. 9 64892 Förfarande för framställning av terpenblandning med en antipsoriatisk effekt genom att extrahera rötter ooh blad frän växterna Dryopteris crassirhizoma, Polypodium vulgara, Linn, Polypodium leucotomos, Phlebodiuin decumanum J. Smith, Polypodium decumanum och Cyathea taiwaniana och rötter fran växterna Polypodium aureum Linn och Polypodium triseriale, känneteck-n a t därav, att man a) skär rötterna i strimlor av 2 - 3 cm och underkastar rotstrimlorna och bladen en kontinuerlig torkningsprocess över ett roterande metallnät vid en temperatur av högst 70°C, b) granulerar det torkade materialet med en restfuktig-het under 5 % i en skivkvarn sä, att man erhäller partiklar, vars diameter är högst 2 mm och vars täthet är ca 0,36, c) extraherar detta material med ett lösningsmedel med en dielektricitetskonstant av 1,890 - 9,08, d) avdunstar lösningsmedlet, e) upptar den halvfasta resten i n-hexan eller en n-hexan/ vattenblandning och läter stä över natten i en separator, och se-parerar den eventuella vattenfasen, f) tillsätter n-hexanlösningen under omröring emellanät en 10 - 20 %:ig etanollösning av KOH, vars volym är en tionde del av n-hexanlösningens volym, och läter lösningen stä 6 timmar och neutraliserar den genom tvättning med vatten, g) avdunstar lösningsmedlet och upptar resten i en tre-faldig volym av 96 %:ig etanol och läter stä tills en fullständig utfällning har skett, h) filtrerar fällningen med ett glasfilter med konventio-neli porositet under användning av sug och tvättar med en till-räcklig mängd 96 %:ig etanol, tills den nästan är färglös, och torkar i vakuum med KOH eller koncentrerad svavelsyra, i) löser fällningen i n-hexan för erhällande av en lös-ning, som vid ca 20°C är 10 vikt-%;ig# k) kromatograferar lösningen i en SI-60-Geduran-kolonn (0,063 - 0,2 mm; Merck) eller i en neutral AljC^-kolonn och eluerar med n-hexan,