RU2178709C2 - Способ получения вещества, обладающего иммуномодулирующей активностью - Google Patents
Способ получения вещества, обладающего иммуномодулирующей активностью Download PDFInfo
- Publication number
- RU2178709C2 RU2178709C2 RU2000104443A RU2000104443A RU2178709C2 RU 2178709 C2 RU2178709 C2 RU 2178709C2 RU 2000104443 A RU2000104443 A RU 2000104443A RU 2000104443 A RU2000104443 A RU 2000104443A RU 2178709 C2 RU2178709 C2 RU 2178709C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- substance
- methanol
- chloroform
- liquid
- ethanol
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине и фармацевтической промышленности. Из Scorzonera hispanica ВСКК-ВР 35 выделяют вещество, обладающее иммуномодулирующей активностью. Клеточную массу экстрагируют водным этанолом. Сгущенный экстракт растворяют в системе хлороформ: метанол: вода - 5: 6: 4 об. ч. Выделяют фракции с веществом и растворяют в системе гексан: метанол - 7: 4 об. ч. Продукт очищают методом жидкость-жидкостной хроматографии и кристаллизацией из этанола. Способ позволяет получить вещество с большим иммуномодулирующим эффектом. 2 табл.
Description
Изобретение относится к области медицины и фармацевтической промышленности, в частности к производству лекарственных препаратов и лечению иммунодефицитных и аутоиммунных заболеваний.
Известен штамм клеток корончато-галловой опухоли растения Scorzonera hispаniсa ВСКК-ВР 35, обладающий биологической активностью (Гамбург К. З. и др. Пат. РФ, 2059718 от 10.05.1996). Недостатком известного способа является ограниченный срок хранения и непостоянство химического состава, отражающееся на показателях биологической активности.
В качестве прототипа выбран иммуномодулятор и адаптоген природного происхождения жидкий экстракт элеутерококка (И. В. Дардымов, Э. И. Хасина. "Элеутерококк", Санкт-Петербург: Наука, 1993, 124 с. ). Его получают экстракцией корней растения элеутерококк колючий водным спиртом с последующим сгущением, отстаиванием и фильтрованием. Недостатками прототипа являются относительно высокая стоимость, недостаточная и нестабильная клиническая эффективность и ограниченные запасы медленно возобновляемого сырья.
Целью изобретения является получение чистого химического вещества из штамма клеток Scorzonera hispаniсa ВСКК-ВР 35, обладающего способностью регулировать реактивность иммунной системы и пригодного для лечения иммунодефицитных и аутоиммунных заболеваний.
Поставленная цель достигается за счет того, что из вышеупомянутого штамма клеток готовится спиртовая вытяжка, из которой путем процессов многоступенчатой экстракции и использования жидкость-жидкостной хроматографии выделяется чистое химическое вещество, обладающее стабильностью, постоянством состава и воспроизводящее биологические свойства штамма клеток Scorzonera hispanica.
Опыты на животных показывают, что внутрибрюшинные инъекции вещества ускоряют заживление ожогов и повышают показатели иммунной реактивности животных, подвергнутых иммуносупрессии.
Способ иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1
Биомассу клеток Scorzonera hispаniсa ВСКК-ВР 35 освобождают от культуральной среды фильтрованием и дважды экстрагируют смесью этанола и воды (1: 1). Полученный экстракт сгущают в вакууме до небольшого объема при температуре <50oС и экстрагируют хлороформом. Дальнейшей обработке подвергаются как хлороформный, так и водный слои. Хлороформный экстракт упаривают досуха и распределяют между метанолом и гексаном, взятым в объемном соотношении 7: 4. Отбирают метанольный слой (фракция 1). Процедуру повторяют трижды. Водный слой тщательно экстрагируют нижней фазой системы растворителей хлороформ-метанол-вода 5: 6: 4 об. ч. (система А) и органическую фазу объединяют с фракцией 1. Объединенные вытяжки упаривают досуха и подвергают очистке методом жидкость-жидкостной хроматографии с использованием системы А. Собирают фракции, содержащие вещество К212. О его наличии судят с помощью тонкослойной хроматографии на пластинках силуфол в системе растворителей хлороформ-метанол 17: 3, проявитель ванилинфосфорная кислота. Фракции, содержащие целевой продукт, объединяют и упаривают. Остаток дважды перекристаллизовывают из этанола. Получают белое кристаллическое вещество, обозначаемое как К212, с т. пл. 177-179oС и [α] -70 (с= 0,72, этанол).
Биомассу клеток Scorzonera hispаniсa ВСКК-ВР 35 освобождают от культуральной среды фильтрованием и дважды экстрагируют смесью этанола и воды (1: 1). Полученный экстракт сгущают в вакууме до небольшого объема при температуре <50oС и экстрагируют хлороформом. Дальнейшей обработке подвергаются как хлороформный, так и водный слои. Хлороформный экстракт упаривают досуха и распределяют между метанолом и гексаном, взятым в объемном соотношении 7: 4. Отбирают метанольный слой (фракция 1). Процедуру повторяют трижды. Водный слой тщательно экстрагируют нижней фазой системы растворителей хлороформ-метанол-вода 5: 6: 4 об. ч. (система А) и органическую фазу объединяют с фракцией 1. Объединенные вытяжки упаривают досуха и подвергают очистке методом жидкость-жидкостной хроматографии с использованием системы А. Собирают фракции, содержащие вещество К212. О его наличии судят с помощью тонкослойной хроматографии на пластинках силуфол в системе растворителей хлороформ-метанол 17: 3, проявитель ванилинфосфорная кислота. Фракции, содержащие целевой продукт, объединяют и упаривают. Остаток дважды перекристаллизовывают из этанола. Получают белое кристаллическое вещество, обозначаемое как К212, с т. пл. 177-179oС и [α]
Пример 2
Биомассу клеток Scorzonera hispаniсa ВСКК-ВР 35 дважды экстрагируют этиловым спиртом в соотношении 1: 1. Экстракт отфильтровывают на воронке Бюхнера через фильтровальную бумагу.
Биомассу клеток Scorzonera hispаniсa ВСКК-ВР 35 дважды экстрагируют этиловым спиртом в соотношении 1: 1. Экстракт отфильтровывают на воронке Бюхнера через фильтровальную бумагу.
Объединенный экстракт упаривают на роторном испарителе в вакууме при температуре <50oC. Сухой остаток растворяют в верхней фазе системы хлороформ-метанол-вода 5: 6: 4 об. ч. (система А) и выливают в делительную воронку с той же системой А. После встряхивания и отстаивания отделяют нижний слой, а верхний дважды экстрагируют нижней фазой системы А. Объединенный нижний слой промывают небольшим количеством верхней фазы системы А и упаривают досуха при температуре <50oC.
Для извлечения целевого вещества К212 используют систему растворителей гексан-метанол в объемном соотношении 7: 4 (система Б). Сухой экстракт растворяют в нижней фазе системы Б и выливают в делительную воронку с этой же системой. После встряхивания и расслаивания верхний слой удаляют, а нижний дважды экстрагируют верхней фазой системы Б. Нижний слой, содержащий целевой продукт, упаривают в вакууме при температуре <50oC.
Выделение чистого вещества К212 производят на противоточном жидкость-жидкостном хроматографе в системе растворителей А, как описано в примере 1
Пример 3.
Пример 3.
Действие вещества К212 на показатели клеточного и гуморального иммунитета изучалось на животных, находящихся в состоянии иммунодепрессии, вызванной классическим иммунодепрессантом азатиоприном. Эксперименты проведены на мышах обоего пола линии F1(CBAxC57B1\ 6) и на мышах-самцах линии СВА, массой 20-22 г.
Терапевтическую дозу вещества К212 в физиологическом растворе вводили внутрибрюшинно. В качестве препарата сравнения использовали жидкий экстракт Eleuterococcus senticosus в дозе 5 мл/кг перорально. В качестве иммунодепрессанта использовали азатиоприн, который вводили перорально в дозе 0,1 мл/мышь в течение 5 дней. Через 1 сутки после последнего введения изучаемых средств взвешивали лимфоидные органы и рассчитывали отношение их массы к массе тела животного в %. Контролем служила группа интактных животных того же возраста и пола, получавших только очищенную воду.
Состояние клеточного иммунитета оценивали в реакции ГЗТ по стандартной методике. Состояние гуморального иммунитета оценивали по количеству антителообразующих клеток, определяемых методом локального гемолиза.
Результаты экспериментов сведены в таблицы 1 и 2.
Таким образом, исследование иммуномодулирующих свойств препарата К212 выявило его эффективность по отношению к реакциям клеточного и гуморального звеньев иммунного ответа. Он способен отменять супрессивное действие азатиоприна на клеточно-опосредованную иммунную реакцию и антителогенез, что выражается в восстановлении иммунных реакций до уровня таковых у контрольных животных. Исследованное вещество по выявленному иммуномодулирующему эффекту превосходит прототип - жидкий экстракт элеутерококка.
Claims (1)
- Способ получения вещества, обладающего иммуномодулирующей активностью из клеток Scorzonera hispanica ВСКК-ВР 35, характеризующийся тем, что осуществляют экстракцию вещества из клеточной биомассы водным раствором этанола, сгущение экстракта, его растворение в системе хлороформ: метанол: вода - 5: 6: 4 об. ч. , выделение фракции, содержащей вещество, упаривание ее, затем растворение в системе гексан: метанол - 7: 4 об. ч. , упариванине образующегося нижнего слоя и очистку методом жидкость - жидкостной хроматографии в системе хлороформ: метанол: вода - 5: 6: 4 об. ч. и перекристаллизацией из этанола.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000104443A RU2178709C2 (ru) | 2000-02-22 | 2000-02-22 | Способ получения вещества, обладающего иммуномодулирующей активностью |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2000104443A RU2178709C2 (ru) | 2000-02-22 | 2000-02-22 | Способ получения вещества, обладающего иммуномодулирующей активностью |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2000104443A RU2000104443A (ru) | 2001-12-10 |
RU2178709C2 true RU2178709C2 (ru) | 2002-01-27 |
Family
ID=20231003
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2000104443A RU2178709C2 (ru) | 2000-02-22 | 2000-02-22 | Способ получения вещества, обладающего иммуномодулирующей активностью |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2178709C2 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103901152A (zh) * | 2014-04-24 | 2014-07-02 | 吉林大学 | 鸦葱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱 |
-
2000
- 2000-02-22 RU RU2000104443A patent/RU2178709C2/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Дардымов И.В. и др. Элеутерококк. - СПб.: Наука, 1993, с.13. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103901152A (zh) * | 2014-04-24 | 2014-07-02 | 吉林大学 | 鸦葱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱 |
CN103901152B (zh) * | 2014-04-24 | 2015-11-11 | 吉林大学 | 鸦葱指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JPS6210240B2 (ru) | ||
US8871492B2 (en) | Anti-dementia substance from Hericium erinaceum and method of extraction | |
KR0134376B1 (ko) | 면역 억제제로서 유용한 4-퀴놀린 카르복실산 유도체 | |
CA1337125C (en) | Process for the preparation of isosilybin-free silibinin and pharmaceutical compositions containing it | |
CZ194892A3 (en) | Process for preparing diacetylrhein | |
JPS6026376B2 (ja) | 抗乾癬活性物質およびその製法 | |
KR100295366B1 (ko) | 항염증활성이있는길경추출물 | |
JP5403844B2 (ja) | AntrodiaCamphorataの菌糸体から得た新規な混合物及び化合物、並びにその使用 | |
RU2178709C2 (ru) | Способ получения вещества, обладающего иммуномодулирующей активностью | |
FI64892B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av en terpenblandning med antipsoriatisk effekt | |
CN102174083B (zh) | 菊科类型环肽,以其为活性成分的免疫抑制药物及其制备方法和应用 | |
US3033877A (en) | Process of preparing same | |
US3864484A (en) | Therapeutic compositions and methods using silymarin comprising poly-hydroxyphenyl chromanones | |
KR100625222B1 (ko) | 신규 짐넴산 유도체, 그 제조 방법, 및 그의 약학적 용도 | |
JP2792010B2 (ja) | フタリド誘導体及びこれを有効成分とする子宮頚癌細胞の殺細胞剤 | |
IE54425B1 (en) | A process for obtaining laxative compounds from senna drug | |
EA008763B1 (ru) | Стандартизованная смесь стероидных сапонинов, способ ее получения и ее применение | |
JP3320879B2 (ja) | 抗ガストリン剤 | |
CN115141250B (zh) | 一种千里光衍生物及其制备方法和用途 | |
RU2276991C1 (ru) | Тонизирующее и актопротекторное средство "серпистен" | |
RU2182174C2 (ru) | Способ выделения авермектиновых комплексов | |
KR100247566B1 (ko) | 애엽 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역억제제 | |
JP2734136B2 (ja) | オクタデセン酸誘導体及びこれを有効成分とする子宮頚癌細胞の殺細胞剤 | |
RU2026074C1 (ru) | Способ получения биологически активного вещества из животного сырья | |
JP2757342B2 (ja) | イソインドリノン誘導体及びこれを有効成分とする子宮頚癌細胞の殺細胞剤並びにその製造方法 |