FI60710B - Analogifoerfarande foer framstaellning av 9-(2-acyloxietoximetyl)purinfoereningar anvaendbara saosom antivirala medel - Google Patents

Description

G35r71 ΓβΊ m^UULUTUSjULKAISU *n9irx ^HSTa l*J (11) UTLÄGCN I NCSSKRIFT Oli f 1 0 •g® C (45) Fi Lev. i.r.i ryinr; tty 10 03 1932 ^ ^ (51) Kv.ik.3/incci.3 C 07 D 473/16, 473/18 SUOMI—FINLAND (21) P*t«flttlh»k*mus — Pattfltanseknlnf 770655 (22) HtkwnltpDvl —AmBkningidag 01.03.77 ' ' (23) Alkuptlvi—GUtlghutsdsg Ol.O3.77 (41) Tullut |ulklMkil — Bllvlt offmtllf 02.09.77

Patentti- ja rekisterihallitus .... .... „ ,, , ,, ,, „ , _ ^ ^ , (44) NlhUvikstptnon ja kuuLJulkalain pvm. —

Patent- och registerstyrelsen ’ Ansdktn utlagd och utl.skrifttn publteitrad 30.11.8l (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus — Befird prioriwt 01.03.76

Englanti-England(GB) 7988/76, 27.08.76 usa(us) 718105 (71) The Wellcome Foundation Limited, l83_193 Euston Road, London N.W.l,

Englanti-England(GB) (72) Howard John Schaeffer, Richmond, Virginia, USA(US) (7*0 Oy Kolster Ab (5I+) Analogiamenetelmä virusten vastaisina aineina käytettävien 9-(2-asyy-lioksietoksimetyyli )puriiniyhdisteiden valmistamiseksi - Analogiför-farande för framställning av 9-(2-acyloxietoximetyl)purinföreningar användbara s&som antivirala medel

Keksinnön kohteena on analogiamenetelmä virusten vastaisina aineina käytettävien kaavan I mukaisten 9-(2-asyylioksietoksimetyy-li)puriiniyhdisteiden valmistamiseksi,

R

rV> CH9.0.CHo.CHo0C,R2 2 2 2 n o . 1 2 jossa R on hydroksi- tai aminoryhmä, R on vety tai suoraketjuinen tai haaroittunut alkyyliryhmä, jossa on 2-6 hiiliatomia, tai niiden suolojen valmistamiseksi.

2 60710

Erityisesti tämä keksintö koskee guaniinin ja 2,6-diamino-puriinin 9-(2-hydroksietoksimetyyli)-johdannaisten estereitä, ja näiden yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja.

Nyt on havaittu, että keksinnön mukaisesti valmistetuilla yhdisteillä on viruksia tuhoava vaikutus, vaikutuksen kohdistuessa erilaisiin DNA*- ja RNA-sukuisiin viruksiin in vitro ja DNA-viruk-siin in vivo. Yhdisteillä on erityisen tehokas vaikutus herpes-, vaccinia- ja rhino-viruksiin; herpes-virusten joukkoon kuuluvat nisäkkäiden simplex-, Zoster- ja varicella-virukset, jotka aiheuttavat sellaisia tauteja kuten esimerkiksi herpetic keratitis-tautia kaniineilla ja herpetic encephalitis-tautia hiirillä.

Edullisia kaavan (I) mukaisia yhdisteitä ovat ne, joissa R

2 on· hydroksi, tai niiden suola, R :n ollessa alkyyliryhmä edullisimpia ovat ne yhdisteet, joiden alkyyliryhmässä on 2-4 hiiliatomia.

Edullisimpia yhdisteitä ovat 9-(2-formyylioksietoksimetyyli)-guaniini, 9-(2-propionoyylioksietoksimetyyli)guaniini, 9-/2-(2,2-dimetyylipropionoyylioksi )etoksimetyyli!7guaniini ja 2-amino-9 - ( 2-formyylioksietoksimetyyli)adeniini, erityisesti koska niillä on erittäin tehokas Herpes-viruksia tuhoava vaikutus.

Terapeuttiseen käyttöön erityisen sopivia suoloja ovat farmaseuttisesti hyväksyttävien orgaanisten happojen kuten maitohapon, etikkahapon, maleiinihapon tai p-tolueenisulfonihapon suolat, samoin kuin farmaseuttisesti hyväksyttävien epäorgaanisten happojen kuten suolahapon tai rikkihapon suolat. Kun R on hydroksi, voidaan käyttää farmaseuttisesti hyväksyttäviä alkalimetallisuoloja, edullisimmin natriumsuolaa, Voidaan valmistaa myös muita suoloja ja muuttaa nämä sitten suoraan hoitotarkoituksiin sopiviksi suoloiksi.

Tämän keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että a) yhdisteen, jonka kaava II on R1 rV> h2n^

Q

annetaan reagoida yhdisteen kanssa, jonka kaava III on 60710

A.CH,.O.CH,.CH,.OC.R2 III

2 2 2 || 0 12 - · joissa R ja R merkitsevät samaa kuin edellä, A on orgaanisen tai epäorgaanisen hapon reaktiivinen jäännös ja Q on vetyatomi tai alkalimetalli; tai b) vedyn annetaan reagoida katalysaattorin läsnäollessa kaavan IV mukaisen yhdisteen kanssa

rJ

Il / IV

Ns N I

CHo.0.CHo.CHo.0C.R 2 2 2 || 0 1 1 . .... 2

jossa R0 on joko R , joka on määritelty edellä, tai atsidi ja R

on määritelty edellä; tai c) alkoholi, jonka kaava V on R1 I / v h2n | CH2 .o.ch2.ch2.oh jossa R on määritelty edellä, esteröidään antamalla sen reagoida asylointiaineen kanssa, d) suojaryhmät poistetaan kaavan I mukaisesta yhdisteestä, 1 .

jossa 2-ammoryhmä tai R -substituenttι tai molemmat ovat suojattuja; ja minkä tahansa edellä mainitun reaktion tuotteen ollessa emäs , tuote muutetaan valinnaisesti happoadditiosuolakseen tai alkali-metallisuolakseen, tai tuotteen ollessa kaavan I mukaisen yhdisteen suola, mainittu suola muutetaan valinnaisesti emäsmuodokseen tai muuksi suolakseen.

Menetelmävaihtoehdossa a) ryhmä A voi olla halogeeniatomi * 60710 tai sulfonaattiryhmä, ja Q on edullisesti natrium, Edullisesti puriini, jossa on halutut 2- ja 6-substituentit, kondensoidaan asyylillä suojatun 2-halogeenimetoksietanolin, tai asyyliliä suojatun asyylioksimetoksietanolin, esim. 2-propionyylioksietoksimetyyli-kloridin tai butyryylioksietoksimetyyliasetaatin kanssa vahvasti polaarisessa liuottimessa, kuten dimetyyliformamidissa (DMF) emäksen, esim. natriumhydridin läsnäollessa, Reaktio suoritetaan edullisesti huoneen lämpötilassa pitkähkön ajan kuluessa, so. kohtuullisten saantojen saavuttaminen voi edellyttää useiden tuntien tai jopa päivien pituisia reaktioaikoja.

Kaavan IV mukaisen yhdisteen konversio menetelmän b) mukai- sesti voidaan suorittaa usein tavoin, esim. RQ:n ollessa atsidiryhma se voidaan muuttaa aminoryhmäksi pelkistämällä sopivaa katalyyttiä, kuten esim. palladiumia käyttäen.

Nämä ovat löydettävissä julkaisusta "Heterocyclic compounds -Fused Pyrimidines Part II Purines, kirj, D.J, Brown (1971), julkaisija Wiley-Interscience".

Menetelmässä c) kaavan V mukaisen alkoholin annetaan reagoida sopivan asylointiaineen, kuten esim. karboksyylihapon, alifaattisen tai aromaattisen anhydridin, alifaattisen tai aromaattisen asyyli-haloidin, karbonihappo-karboksyylihapposeka-anhydridin tai karboksyy-lihappoesterin kanssa. Kaavan V mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa menetelmin, joita on kuvattu saksalaisessa hakemusjulkaisussa 2 539 963.

Menetelmässä d) 2-asemassa oleva aminoryhmä tai 6-asemassa oleva substituentti tai molemmat voivat olla suojatut reversiibelisti suojaryhmällä, esim. trialkyylisilyyliryhmällä, aktivoidulla asyyli- ryhmällä, tai bentsyylioksikarbonyyliryhmällä, mutta nämä kaksi vii- . . . . . 1 meksi mainittua ryhmätyyppxä voivat suojata R :n vain sen ollessa aminoryhmä. Kun sekä 2-asemassa olevat aminoryhmät että 6-asemassa olevat substituentit ovat suojatut trialkyylisilyyliryhmällä, sellainen yhdiste voi olla tuote, joka on saatu kondensoimalla trialkyyli-silyloitua puriinia ja esteriä tai diesteriä samalla tavalla kuin menetelmässä a). Sellaiset suojaryhmät ovat hyvin labiileja ja voidaan Doistaa solvatoimalla ammoniakin alkoholi- tai vesiliuoksessa tai alkoholyysiä käyttäen,

Toinen tai molemmat puriinin renkaan 2- ja 6-asemat voidaan i ..

5 60710 suojata aktivoidulla asyyliryhmällä kuten trihalogeeniasyyliryhmäl-lä, esim. triklooriasetyylillä, joka yhdessä aminoryhmän kanssa, jota se suojaa, muodostaa triklooriasetamidoryhmän. Puriinirenkaan 6-asema on suojattu vain kun siinä on substituenttina aminoryhmä. Sellaiset ryhmät voidaan lohkaista pois pelkistämällä; jos suojaava ryhmä on bentsyylioksikarbonyyliryhmä, tämäkin voidaan poistaa pelkistyslohkaisua käyttäen.

Menetelmät a) - d) perustuvat kaikki välituotteisiin, joita voidaan valmistaa yksinkertaisesti substituoiduista puriineista. Sellaisia puriineja valmistetaan alalla tunnetuilla menetelmillä, joita on kuvattu kirjallisuudessa ja käsikirjoissa, kuten esim. julkaisussa "Heterocyclic compounds - Fused Pyrimidines Part II Purines, kirj. D.J, Brown (1971), julkaisija Wiley-Interscience".

Millä tahansa menetelmistä a) - d) valmistettu kaavan I mukainen yhdiste voidaan muuttaa transesteröimällä toiseksi kaavan I mukaiseksi yhdisteeksi. Sellainen interkonversio voidaan saada tapahtumaan antamalla kaavan I mukaisen yhdisteen reagoida sopivan karboksyylihapon kanssa, esim. 9-(2-propionyylioksietoksimetyyli)-guaniinin valmistamiseksi yhdisteen on annettava reagoida propioni-hapon kanssa. Eräissä tapauksissa happokin voi toimia happamena katalyyttinä, mutta toisissa tapauksissa tarvitaan lisäksi happokata-lyyttiä, esim. paratolueenisulfonihappoa.

Tässä käytettynä termi "tehokas annosyksikkö" merkitsee edeltäkäsin määriteltyä määrää viruksia tuhoavaa ainetta, joka riittää tehoamaan virusorganismeja vastaan in vivo, Farmaseuttisesti hyväksyttävät kantajat ovat aineita, joita voidaan käyttää lääkkeenanto-tarkoituksiin, ja ne voivat olla kiinteitä, nestemäisiä tai kaasumaisia aineita, jotka ovat muuten neutraaleja ja lääketieteellisesti hyväksyttäviä ja aktiivisten aineiden kanssa sekoittuvia.

Näitä farmaseuttisia seoksia voidaan antaa parenteraalisesti , suun kautta, niitä voidaan käyttää peräpuikon tai pessarin muodossa, niitä voidaan käyttää paikallisesti rasvan, voiteen, aerosolin, jauheen muodossa, tai antaa silmä- tai nenätippoina jne., riippuen siitä, käytetäänkö preparaattia virusten aiheuttamien sisäisten tai ulkoisten infektioiden hoitamiseen.

Sisäisissä infektioissa seoksia annetaan suun kautta tai parenteraalisesti annosmäärin, vapaaksi emäkseksi laskien, noin , , .. i 60710 0,1-250 mg, edullisesti 1-50 mg nisäkkään kehon painon kiloa kohden, ja ihmisille annettaessa niitä käytetään annosyksikkömuodossa, muutamana kertana päivässä annettavan määrän ollessa 1-250 mg annosyksik-köä kohden.

Suun kautta annettavaksi tarkoitetut jauheet tai rakeet voivat sisältää laimennus-, dispergointi- ja/tai pinta-aktiivisia aineita, ja niitä voidaan antaa lääkeryyppynä, vedessä tai siirapin joukossa; kapseleissa, tai pikkupusseissa kuivana tai vedettömänä liuoksena tai suspensiona, jolloin ne voivat sisältää suspendointlaineita; tableteissa, jotka voivat sisältää side- ja luistoaineita; tai vesisuspensiossa tai siirapin joukossa. Haluttaessa tai tarvittaessa ne voivat sisältää makuaineita, suoja-aineita, suspendointi-aineita, paksunnosaineita tai emulgointiaineita. Tabletit tai rakeet ovat suositeltavia, ja ne voivat olla päällystettyjä.

Parenteraalista annostusta varten tai tippoina antamista varten, esim. silmäinfektioiden yhteydessä, yhdisteitä voidaan antaa vesiliuoksena konsentraation ollessa noin 0,1-10 %, edullisesti 0,1-1 %, edullisimmin 0,2 % (paino/tilav,). Liuos voi sisältää antioksidantteja, puskureita jne.

Silmäinfektioiden, tai muiden ulkoisten kudosten, esim. suun ja ihon infektioiden yhteydessä, seoksia aplikoidaan vaihtoehtoisesti lähinnä potilaan kehon infektoituneeseen osaan paikallisena voiteena tai vaahtona. Yhdisteitä voidaan antaa voiteena, esim. vesiliukoisena voiteen perusmassana, tai vaahtona, esim. öljyn kanssa vesi-vaahto-perusmassana konsentraation ollessa noin 0,1-10 %, edullisesti 0,3-3 %, edullisimmin 1 % (paino/tilav,).

Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettujen yhdisteiden viruksia tuhoava vaikutus määritettiin "plaque inhibition"-kokeella. Tämä koe suoritetaan infektoimalla yhtenäinen kerros VERO-soluja sopivalla viruksella, jolloin muodostuu yhtenäinen virusplakki.

Plakin päälle asetetaan kiinteä päällyste, ja tämän keskelle asetetaan suodatinpaperilevy, joka on kyllästetty tutkittavan yhdisteen liuoksella (tavallisesti noin 50 yug tutkittavaa yhdistettä suodatin-paperilevyä kohti). Viljelmiä inkuboidaan 37°C:ssa 96-120 tuntia 5 % hiilidioksidia sisältävässä atmosfäärissä. Sen jälkeen solut kiinnitetään 10-% formaliinilla ja värjätään 0,05-% metyylivioletilla.

Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettujen yhdisteiden ^ 60710 adsorboitumista ruoansulatuskanavasta tutkittiin antamalla rotille suun kautta tutkittavaa yhdistettä vesisuspensiona, joka vastasi 25 mg/kg 9-(2-hydroksietoksimetyyli)guaniinia. Virtsanäytteitä kerättiin 24 tunnin pituiselta ajanjaksolta, ja tutkittavan yhdisteen pitoisuus.virtsasta määritettiin korkeapainenestekromatografisesti. Virtsan sisältämä tutkittavan yhdisteen määrä ilmoitettiin prosentteina alkuperäisestä annoksesta, mikä vastasi 24 tunnissa adsorboitunutta määrää,

Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettujen yhdisteiden edullisuus osoitettiin käyttämällä vertailuyhdisteinä suomalaisesta patenttihakemuksesta 752 465 tunnettuja rakenteellisesti samankaltaisia yhdisteitä. Tulokset edellä mainituista kokeista on esitetty seuraavassa taulukossa.

6071 0

I I

P P ^ (ti o x <o ><; > -μ P ih

IC'HHH

O P 0) CO X :iti 3 Ol 3 3 »ti 3 λ; +-1 P E cti O ++ + + 3 (ti X ++ + + + + +

X 3 CO P

P Ή 3 Ph Ξ

iti co p = C

> A< 3 O

3 Ai :iti P

iti Sh -H G P

> Ή 3 iti > > P Λ O______ X o

3 C LO

p 0) 3 .

in C O O iti · O

Iti ·Η·Η > > 3 CO r- > •H ΪΙ 0) p p 3 CO p CO P -P 3 3 P 3 :3 Iti M (UP ·Η ·Η P P P ·Η 3 P.3 Ai Ai 3 3 P λ;

p 30) CO [Oi—I P 0) CO

•h Ai co cu 3 3 co p 3 > potti a< Ai Ai 3 co Ai

Iti P 3 > ·Η (ti CUP P P C Ό p •| > 3 P 3 3 P p .P 3 > :iti 3 3 3 p 3 >, 3 >, iti O P i—I Ai Ai C CO X p

P P :3 3 O O 3 AC U) O P

CO O :3 Ai Ai Ai P O Ai Ai 3

ti 6 P \ P

> iti P CNCOCDptlO cn -H

Iti CO C P v_»v^r-itiG ^ P

P CO 3 P SfC

iti itiiop ΐΛΟ id o o :iti

X (0 Ai 3 J in (J) cn lo oo c~~ E

[f] 4_>0+J r» r. ri r r r ·

3 PP cooocm t- v- j- oo p 3 E

P P C J- 1— 1— CO CN CM CN 3 P C

3 > Iti CM__CO

I—I i Iti CO

3 TN g CM

CO ·Η iti

P ιΗ I > P

iti >! ^ CO ·Η O >, -H rfl 3

3 ΙΛ p p X X

P cd 3 I >,

P E ·Η I ^ I >, P -H

P CMpvHp tn .H tn p 3 CU E

3 LD P CO ·Η P P CO -H 3 P E E

P Γ~ P Ai P 3 P Ai P I £ P 3

P POP CO >> O >, tn .H (UPcD

E C iti P iti P >1 p >, P CO X 3 cm

3 3333 Itipppp^ iti 3 I

P COhOpbO Ai 3 >, 3 >, O PCO^

P Ai co tn 3 E >i E >1 P

O 3 P >; P E p P p P 3 P P

X E1—I O I—I COOCOO P O O ~ P 3 >>p>, ca< p Ai Eco o Ai >1 p 3 o (¾ o p λ; piti CO Iti P >1 P CO p o P P CO O Ai ·Ρ

το ,P 3 >i 3 Ai 3 P p 3 Ai P Ai P

3 P E P E 3 p Cup p O p iti co

p p o p E co P p 3 p i—i P

P 3 P P CO P CO 3 Λ; P C Ai 3 X CUlti

3 P C 3 Ai CU Ai Ai O >, 3 O P £ -V

Ό co 33000 iti P >-, 3 P CO p iflP

P P PPPPP rP P P W) P Ai O 3 iti

3 Ό Hi CO 3 CU 3 >, 3[s >, O P CO rP S

P X CUP P P P P E 'r-f X P I P

CO >, Ό CO CO CO 3 C P i—I O P cm 03 p p ,p Ai A! Ai > O Ό >i P >, w Tl Λ

3! 3 3 >> O O O 3 P I >, 3 >, I P

X P CO p .Q P PPCUCMPCOEct» r O

>> P P P Ό p p 3 O 3 O p " 3 n* P p P I P μ -n S

p 33 >13PC0 3 PC cm£ op OP OP 3 P λ; P CO X X ·Η 3 :3P CUP ^ P X P p P CP 3 3 P 3 P I I P I P CO I P I CO I P I P P P Ai 3 •i ) 3 E 3 cm cn p cn PPCNp.CNAiCNpCNpEP Ai.* 3 H 0^^^3^ P33w3VjO'—(flw33cu >, >,

P 3 3 113 1 10 3 13 IP 13 13 I Tti ,Ρ .P

P CO E cn cn bO cn W>jcjihOo)(l) σιΜσΐΜΐΝ3 :θ :θ P At bn

Ai--> > s P ... .....

3 r- CN OQ :+ LO CD O' OO tn + H * + + 9 60710

Tulokset osoittavat, että annettaessa tutkittavat yhdisteet koe-eläimille suun kautta yhdisteet 4, 5, 6 ja 7 (esillä olevan hakemuksen mukaiset yhdisteet) adsorboituvat tehokkaammin ruoansulatuskanavasta kuin yhdisteet 1, 2 ja 3 (suomalaisen patenttihakemuksen 752465 mukaiset yhdisteet). Tässä suhteessa esillä olevan keksinnön mukaisilla yhdisteillä on yllättäviä ja arvokkaita ominaisuuksia.

Keksintöä valaistaan tämän jälkeen seuraaviin esimerkkeihin viitaten.

Esimerkki 1

Liuosta, jossa oli 9-(2-hydroksietoksimetyyli)guaniinia (4,73 g), joka oli valmistettu saksalaisessa hakemusjulkaisussa 2 539 963 esitettyjen menetelmien mukaisesti, 97 %:sessa muurahaishapossa (24 ml), sekoitettiin yön ajan huoneen lämpötilassa. Kullanruskea liuos laimennettiin noin 200 ml :11a kuivattua eetteriä ja jäähdytettiin. Muodostunut valkea sakka suodatettiin erilleen, kuivattiin ja kiteytettiin uudelleen kuivasta dimetyyliformamidista, jolloin saatiin 9-(2-formyylioksietoksime-tyyli)guaniinia (3,6 g, sp. 225-227°C).

Esimerkki 2

Liuosta, jossa oli 2-amino-9-(2-hydroksietoksimetyyli)ade-niinia (0,5 g), joka oli valmistettu saksalaisessa hakemus-julkaisussa 2 539 963 esitettyjen menetelmien mukaisesti, 97 %:sessa muurahaishapossa (2,5 ml), sekoitettiin jäähauteessa 3 tuntia, ja sitten yön ajan huoneen lämpötilassa. Lisättiin kuivaa eetteriä (80 ml) ja seos jäähdytettiin. Kiinteä aine poistettiin suodattamalla ja liuotettiin kuumaan asetonitriiliin (125 ml); jäljellä oleva kiinteä aines poistettiin suodattamalla. Suodos pantiin kolonniin, jossa oli silikageeliä (14 g) asetonitriilissä. Kolonni eluoitiin kuivalla asetonilla. Eluaatti haihdutettiin kuiviin ja kiinteä jäännös kiteytettiin uudelleen asetonitriilistä, jolloin saatiin 2-amino-9-(2-formyylioksietoksimetyyli)-adeniinia (93 mg, sp. 2 38-240°C).

Esimerkki 3 9-(2-heksanoyylioksietoksimetyyli)guaniinin valmistus 9-(2-hydroksietoksimetyyli)guaniinia (1,0 g), joka oli valmistettu saksalaisessa hakemusjulkaisussa 2 539 963 esitettyjen menetelmien mukaisesti, liuotettiin kuivaan dimetyyli-formamidiin (70 ml) kuumentamalla vesihauteella, liuos jäähdytet- 10 6071 0 ti.in huoneen lämpötilaan ja lisättiin kuivaa pyridiiniä (10 ml) ja heksaanihappoanhydridiä (9,4 g). Kun seosta oli sekoitettu huoneenlämpötilassa neljä päivää, levykromatograafinen analyysi (silikageeli 10 %:sessa metanoli-kloroformi-seoksessa) osoitti, että reaktio oli tapahtunut täydellisesti.

Keltainen reaktioliuos laimennettiin etyyliasetaatilla 800 ml:ksi ja jäähdytettiin useita päiviä. Saostunut hienojakoinen jauhe suodatettiin erilleen, kuivattiin ja kiteytettiin uudelleen kuivasta asetonitriilistä, jolloin saatiin 400 mg (28 %) valkeita rakeita, sp. 221-223°C.

Esimerkki 4 9-(2-propionoyylioksietoksimetyyli)guaniinin valmistus (A) Seosta, jossa on etyleeniglykolia (31 g), propionihap-poa (18,5 g) ja 7,5 g vahvaa vetyionihartsiä, Bio Rod AG 50 WX-4:ää, 100 ml:ssa tolueenia, kiehutetaan sekoittaen Dean Stark-loukkoa käyttäen kahdeksantoista tuntia.

Tolueeni poistetaan paisuntahaihdutusta käyttäen ja jäljelle jäänyt neste tislataan. Etyleeniglykolin esitislausta seuraa halutun tuotteen, etyleeniglykoli-monopropionaatin tislaus. Puhtauden määrittämiseen käytetään NMR-määritystä. Saanto 70 %.

(B) Kuivaa kloorivetykaasua johdetaan jäähdytettyyn suspensioon (0°C), jossa on edellä valmistettua etyleeniglykolimono-propionaattia (7,1 g) ja paraformaldehydiä (1,8 g) dikloorimetaa-n.issa (50 ml), kunnes kiinteä aine on liuennut ja seos kyllästetty kloorivedyllä. Molekyyliseulalla ja kalsiumkloridilla kuivauksen jälkeen seos suodatetaan ja liuotin poistetaan paisutushaihdutus-ta käyttäen 30°C:ssa.

Jäännökseksi jäänyt öljy, 2-propionyylioksietoksimetyyli-kloridi, käytetään suoraan sellaisenaan. Saanto 60 %.

(C) Natriumhydridin (2,53 g) 57 %:nen mineraaliöljysuspensio pestään kuivalla heksaanilla ja lisätään liuokseen, jossa on guanii-nia (4,53 g) 100 ml:ssa kuivaa dimetyylisulfoksidia ja seosta sekoitetaan 30°C:ssa 23 tuntia.

Lisätään 2-propionoyylioksietoksimetyylikloridia (5,5 g) ja reaktioseosta sekoitetaan 20°C:ssa kahdeksantoista tuntia. Liuos suodatetaan ja liuotin poistetaan paisutushaihdutusta käyttäen vakuumissa. Jäännös jäähdytetään jäähauteessa, liuotetaan veteen ja neutraloidaan etikkahapolla.

Tunnin kuluttua tuote suodatetaan erilleen, pestään vedellä ja kuivataan. Kiteyttämällä uudelleen (3 kertaa) kiehuvasta asetonitriilistä saadaan 9-(2-propionyylioksietoksimetyyli)guaniinia. Saanto 35 %, sp, 223-226°C.

n 60710

Esimerkki 5 9-(2-propionyylioksietoksimetyyli)guaniini

Seosta, jossa oli 9-(2-hydroksietoksimetyyli)guaniin ia (1,0 g) ja kuivaa dimetyyliformamidia (50 ml) lämmitettiin vesihauteella, kunnes suurin osa kiinteästä aineesta oli liuennut. Sen jälkeen seos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan. Lisättiin kuivaa pyridiiniä (19 ml) ja propionihappoanhydridiä (2,9 ml) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön ajan. Lisättiin vielä propionihappoanhydridiä (1,0 ml) ja seosta sekoitettiin edelleen 18 tuntia. Reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla, jäähdytettiin ja muodostunut kiinteä aine suodatettiin erilleen. Tämä kiteytettiin uudelleen dimetyyliformamidista, jolloin saatiin 9- (2-propionyylioksietoksimetyyli) guan iin ia (0,9 g), sp. 223-226°C.

Esimerkki 6 9-/2-(2 ,2-dimetyylipropionyylioksi)etoksimetyyli7guaniini

Seosta, jossa oli 9-(2-hydroksietoksimetyyli)guaniinia (2,46 g), kuivaa pyridiiniä (400 ml) ja pivaliinihappoanhydridiä (6,5 ml) lämmitettiin vesihauteella yhteensä 33 päivää. 11 päivänä lisättiin vielä pyridiiniä (150 ml), ja 27 päivänä lisättiin dimetyyliformamidia (50 ml). Haihtuvat osat poistettiin vakuumissa ja jäännöstä trituroitiin etyyliasetaatin kanssa, Liukenematon kiinteä aine poistettiin suodattamalla ja liuotettiin metanoli-asetoni-seokseen, Lisättiin silikageeliä (3 g) ja liuotin haihdutettiin pois. Jäännös lisättiin kolonniin, jossa oli piigeeliä (180 g) asetonissa. Eluoimalla asetonilla saatiin alkufrak-tiona N,0-diasyloitua ainetta ja sen jälkeen seurasi fraktio, joka sisälsi haluttua monoasyloitua tuotetta. Asetoni haihdutettiin pois tästä jälkimmäisestä fraktiosta, ja jäännös kiteytettiin uudelleen dimetyyliformamidi/asetonitriili/eetteriasetaatti-seoksesta, jolloin saatiin 9-A2-(2,2-dimetyylipropionyylioksi)etoksimetyyli7guaniinia (0,5 g), sp, 245-246°C,

Esimerkki 7 9-(2-butyryylioksietoksimetyyli)guaniinin valmistus

Liuos, jossa oli natriummetylaattia kuivassa metanolissa (10 ml), lisättiin huoneen lämpötilassa metanoliliuokseen, jossa oli 9 — (2 — hydroksietoksimetyyli)guaniinia. Poistamalla liuotin vakuumissa saatiin puriinin natriumsuolaa valkeana jauheena.

Edellä mainittu natriumsuola suspendoitiin liuokseen, jossa oli etyylibutyraattia ja kuivaa DMF:a (20 ml) ja lämmitettiin sekoittaen kiehuvaksi. 3 1/2 vuorokauden kuluttua suurin osa kiinteästä aineesta oli liuennut, jolloin reaktioseos haihdutettiin kuiviin vakuumissa i2 6071 0 ja jäännös liuotettiin 2n etikkahappoon (15 ml). Poistettaessa liuotin vakuumissa saatiin puolikiinteätä massaa, joka muuttui kiinteäksi vedellä (15 ml) ja SD3A:lla (15 ml) suoritetun käsittelyn ja liuottimien vakuumissa suoritetun poistamisen jälkeen. Tämä tuote lietettiin SD3A: hän (25 ml), suodatettiin ja kuivattiin ilmassa, jolloin saatiin 135,2 mg nahanruskeata kiinteätä ainetta, sp. 225-227 , 5°C.

Esimerkki 8 9- /”( 2-formyylioksietoksi )metyyli7 2 ,6-diaminopuriini

Liuos, joka sisälsi 9-/.( 2-formyylioksietoksi )metyyl.£7-2-atsidi-adeniinia (610 mg) kuivassa dimetyyliformamidissa (125 ml) ja jossa oli lisäksi 5-% palladium/hiiltä (palladiumia 120 mg) hydrattiin alkupaineen ollessa 50 p.s.i. 24 tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Hydraustuotetta TLCrllä (silikageeli + asetoni) tutkittaessa havaittiin ainoastaan yksi täplä, joka vastasi 9-LX2-formyylioksietoksi)metyyli/-2,6-diaminopuriinia, eikä lainkaan lähtöainetta.

Liuos suodatettiin seliittikerroksen lävitse, seliittikerros pestiin etyyliasetaatilla, pesuneste ja suodos yhdistettiin ja liuotin haihdutettiin tyhjössä 60°C:n lämpötilassa. Muodostunut keltainen kiinteä aine puhdistettiin pylväskromatografisesti (silikageeli), ja haluttu tuote eluoitiin asetonilla.

Eluaatit haihdutettiin ja jäännös trituroitiin asetonilla, jolloin saatiin 119 mg (22 %) 9-/T2-formyylioksietoksi)metyyli/- 2,6-diaminopuriinia, jonka UV- ja NMR-spektrit vastasivat autenttista rakennetta (sp. 238-240°C),

Esimerkki 9 9-(2-formyylioksietoksimetyyli)guaniini

Kloorivetykaasua johdettiin jäähdytettyyn (0°C) suspensioon, joka sisälsi etyleeniglykolimonoformiaattia (3,6 g; Annalen der Chemie 641 (1961)1) ja paraformaldehydia (1,2 g) kuivassa dikloori-metaanissa (100 ml), kunnes seos tuli kyllästyneeksi, öljyinen suspensio kuivattiin molekyyliseuloilla käyttäen etanolia ja vedetöntä kalsiumkloridia, suodatettiin ja liuotin poistettiin haihduttamalla alipaineessa ( 30°C). Muodostunut raaka 2-(formyylioksi- etoksimetyyli)kloridi (2,5 g) lisättiin liuokseen, joka sisälsi tris-(trimetyylisilyyli)guaniinia (4,8 g) kuivassa tolueenissa (50 ml), ja seosta keitettiin palautusjäähdyttäen typpi-ilmakehässä 24 tuntia. Liuotin poistettiin alipaineessa, jolloin saatiin öljy- Λ g mäistä 9-(2-formyylioksietoksimetyyli)-bis-N , 0 -trimetyylisilyyli)- 60710 13 * guaniinia, jota lisäkäsiteltiin puhdistamatta, Ö1jymäiseen tuotteeseen lisättiin ylimäärä metanolia, ja seosta sekoitettiin yhden tunnin ajan. Metanoli poistettiin haihduttamalla, ja jäännös kiteytettiin uudelleen dimetyyliformamidista ja asetonitriilistä, jolloin saatiin 9-(2-formyylioksietoksimetyyli)guaniinia, sp. 225-227°C.

Esimerkki 10 9-(2-propionyylioksietoksimetyyli)guaniinihydrokloridi

Liuos, joka sisälsi 9-(2-propionyylioksietoksimetyyli)-guaniinia (300 mg) etanolissa (400 ml) säädettiin pH-arvoon 1,0 (määritettynä laajaskaalaisella pH-paperilla) eetteri/kloorivetyhappo-seoksella huoneen lämpötilassa. Liuos laimennettiin 1,9 l:n tilavuuteen kuivalla eetterillä, ja sitä jäähdytettiin yön yli. Tällöin saostuneet rakeet suodatettiin erilleen, pestiin eetterillä ja kuivattiin eksi-kaattorissa alipaineessa kolme vuorokautta. Tuotetta kuivattiin edelleen 3,5 mmHg:n paineessa 2,5 tuntia, jolloin saatiin 9-2-propionyylioksietoksimetyyli)guaniinihydrokloridi (260 mg), sp.

125-131°C. Alkuaineanalyysi ja NMR-spektri (DMS0-dg) vastasivat autenttista rakennetta. Hopeanitraattitestissä saatiin positiivinen tulos halogeenille.

Esimerkki 11 9-(2-propionyylioksietoksimetyyli)guaniinin natriumsuola 9-(2-propionyylioksietoksimetyyli)guaniinia (125 mg) lisättiin sekoittaen jäähdytettyyn 0,01-n natriumhydroksidiin (44,5 ml).

Seos jäädytettiin ja lyofiloitiin, jolloin saatiin 9-(2-propionyylioksietoksimetyyli )guaniinin natriumsuola. Alkuaineanalyysi sekä NMR-ja IR-spektri vastasivat autenttista rakennetta.

Esimerkki 12 9-(2-formyylioksietoksimetyyli)guaniini

Seokseen, joka sisälsi etikkahappo-muurahaishappoanhydridia (1,0 ml) ja p-tolueenisulfonihappoa (0,1 g), lisättiin sekoittaen dioksolaania (1,0 g) (reaktio eksoterminen). Liuoksen annettiin jäähtyä useita minuutteja. Siihen lisättiin kuivaa tolueenia (10 ml) ja guaniinia (1,0 g), ja reaktioseosta lämmitettiin 50°C:ssa 24 tuntia. Tolueeni dekantoitiin erilleen, ja jäännös pestiin perusteellisesti kuivalla tolueenilla (25 ml) ja kiteytettiin uudelleen kahdesti kuivasta dimetyyliformamidista, jolloin saatiin 9—(2— formyylioksietoksimetyyli)guaniinia, sp. 225-227°C.

lu 6071 0

Esimerkki 13 9-(2-propionyylioks ietoksimetyyli)guani ini

Seosta, joka sisälsi guaniinia (4,9 g, 0,03 moolia), ammoniumsulfaattia (3,6 g) ja heksametyylidisilatsaania (225 ml), keitettiin palautusjäähdyttäen typpi-ilmakehässä 20 tuntia. Ylimääräinen heksametyylidisilatsaani poistettiin tislaamalla alipaineessa, öljymäiseen jäännökseen lisättiin kuivaa tolueenia (40 ml), kuivaa trietyyliamiinia (11,6 ml, 0,083 moolia) ja 2-propionyylioksietoksi-metyylikloridia (6,6 g, 0,04 moolia), joka oli liuotettu tolueeniin (40 ml). Seosta keitettiin palautus jäähdyttäen typpi-ilmakehässä 6 tuntia, trietyyliamiinia (5 ml) lisättiin, ja seosta keitettiin edelleen palautusjäähdyttäen 18 tuntia.

Reaktioliuos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan, etanolia (100 ml) lisättiin, ja seosta keitettiin palautusjäähdyttäen sekoittaen 15 minuuttia. Liuottimet poistettiin paisuntahaihdutusmenetelmäl-lä tyhjössä. Muodostunut puolikiinteä jäännös trituroitiin asetonilla (300 ml) ja sen jälkeen etanolilla (150 ml). Asetoni- ja etanoli-pesunesteet yhdistettiin, haihdutettiin tyhjössä kuiviin ja trituroitiin vedellä. Tuote kiteytettiin uudelleen vedestä, jolloin saatiin 9-(2-propionyylioksietoksimetyyli)guaniinia (3,1 g), jonka NMR- ja UV-spektrit vastasivat autenttista tuotetta. Tuotteen saanto oli 37 %. Sp. 22 3-226°C.

Claims (2)

1. 6071 0 Patenttivaatimus Analogiamenetelmä virusten vastaisina aineina käytettävien kaavan I mukaisten 9-(2-asyylioksietoksimetyyli)puriiniyhdisteiden valmistamiseksi, R1 H2N/^N *\ CH0.O.CH0.CH0OC.R 2 2 2 II 0 1 .
2. 2 jossa R on hydroksi- tai aminoryhmä, R on vety tai suoraketjuinen tai haaroittunut alkyyliryhmä, jossa on 2-6 hiiliatomia, tai niiden suolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a) yhdisteen, jonka kaava II on R1 j | \ II Q annetaan reagoida yhdisteen kanssa, jonka kaava III on A.CHo.0.CHo.CHo.0C.R2 III 2 2 2 II o 2 joissa R ja R merkitsevät samaa kuin edellä, A on orgaanisen tai epäorgaanisen hapon reaktiivinen jäännös ja Q on vetyatomi tai alkali-metalli; tai 2 b) vedyn annetaan reagoida katalysaattorin läsnäollessa kaavan IV mukaisen yhdisteen kanssa: 16 6071 0 ί° Ν<|Γ^ \ ιν Ν3^ CH0.0.CH0.CH„.OC.R2 2 2 2 II o jossa R0 on joko R , joka on määritelty edellä, tax atsidi ja R on määritelty edellä; tai c) alkoholi, jonka kaava V on R1 »V\\ Λ JL/ h2n^ CH2.O.CH2.CH2.OH jossa R on määritelty edellä, esteröxdään antamalla sen reagoida asylointiaineen kanssa, d) suojaryhmät Doistetaan kaavan I mukaisesta yhdisteestä, .1 jossa 2-aminoryhmä tax R -substituentti tai molemmat ovat suojattuja; ja minkä tahansa edellä mainitun reaktion tuotteen ollessa kaavan I mukainen emäs, tuote muutetaan valinnaisesti happoadditio-suolakseen tai alkalimetallisuolakseen, tai tuotteen ollessa kaavan I mukaisen yhdisteen suola, mainittu suola muutetaan valinnaisesti emäsmuodokseen tai toiseksi suolaksi. i7 60710 Analogiförfarande för framställning av 9-(2-aeyloxLetoxi-metyl)purinföreningar med formeln I användbara säsom antivirala medel, R M I H2N CH0.0.CH0.CHo0C.R2 2 2 2 II o 1. väri R är en hydroxi- eller aminogrupp, R är väte eller en rakkedjad eller förgrenad alkylgrupp med 2-6 kolatomer, eller salter därav, kännetecknat därav, att man a) omsätter en förening med formeln II R1 rV") rt2 | Q med en förening med formeln III A.CH„.0,CHo.CH0.OC.R2 III 2 2 2 || 0 ? van R och R har ovan angivna betydelse, A är en reaktiv rest av en organisk eller oorganisk syra och Q är en väteatom eller alkali-metall; eller c) omsätter väte i närvaro av en katalysator med en förening med formeln IV