FI120343B - Menetelmä retrovirusproteaasi-inhibiittoreina käyttökelpoisten sulfonyylialkanoyyliaminohydroksietyyliaminojohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

Menetelmä retrovirusproteaasi-inhibiittoreina käyttökel poisten sulfonyylialkanoyyliaminohydroksietyyliamino johdan naisten valmistamiseksi 5 Keksinnön tausta

Esillä oleva keksintö koskee uusien retroviruspro-teaasi-inhibiittoreina käyttökelpoisten yhdisteiden valmistusta. Tämä keksintö koskee erityisesti sellaisten sul-foniamidia sisältävien hydroksietyyliamiiniproteaasi-10 inhibiittoriyhdisteiden valmistusta, jotka inhiboivat ret-rovirusproteaaseja esim. ihmisen immunokatovirus (HIV) -pro-teaasia.

Asiaan liittyvä tekniikka

Retrovirusten replikaatiosyklin aikana gag- ja gag-15 polgeenituotteet siirtyvät proteiineina. Virusperäisestä koodattu proteaasi (tai proteinaasi) prosessoi sitten nämä proteiinit virusentsyymeiksi ja viruskuoren mukaisiksi rakenteellisiksi proteiineiksi. Tavallisimmin gagprekursori-proteiinit prosessoidaan kuoriproteiineksi ja polprekurso-20 riproteiinit prosessoidaan virusentsyymeiksi, esim. kään-teiskopioijaentsyymiksi ja retrovirusproteaasiksi. On osoitettu, että retrovirusproteaasin prekursoriproteiinien oikein suorittama prosessointi on välttämätön tarttuvien vi-ronien järjestäytymiseksi. Esim. on osoitettu, että HIV:n 25 polgeenin proteaasialueessa tapahtuvat pistemutaatiot estävät gagprekursoriproteiinin prosessointia. On myös osoitettu HIV-proteaasissa olevan asparagiinihappotähteen paikka-suunnatun mutageneesin avulla, että gagprekursoriproteiinin prosessointi estyy. Siten on tehty yrityksiä virusreplikaa-30 tion inhiboimiseksi inhiboimalla retrovirusproteaasien vaikutus .

Retrovirusproteaasin inhibitio voi käsittää siirtymätilan mimetiikan, jolloin retrovirusproteaasi altistetaan mimeettiselle yhdisteelle, joka sitoutuu entsyymiin kil-35 paillen gag- ja gag~polproteiinien kanssa, jolloin ne inhiboivat rakenteellisten proteiinien replikaatiota ja, mikä 2 on vielä tärkeämpää, itse retrovirusproteaasia. Tällä tavalla voidaan tehokkaasti inhiboida retrovirusreplikaatio-proteaaseja.

Useita yhdisteluokkia on ehdotettu erityisesti pro-5 teaasien, esim. Hiv-proteaasin, inhiboimiseksi. Tällaisiin yhdisteisiin kuuluvat hydroksietyyliamiini-isosteerit ja pelkistetyt amidi-isosteerit. Katso esim. julkaisut EP 0 346 847; EP 0 342 541; Roberts et ai, "Rational Design of Peptide-Based Proteinase Inhibitors", Science, 248, 358 10 (1990); ja Erickson et ai, "Design Activity and 2,8 Ä Crys tal Structure of C2 Symmetric Inhibitor Complexed to HIV-1 Protease", Science, 249, 527 (1990).

Useiden mimeettisten yhdisteiden luokkien tiedetään olevan hyödyllisiä proteolyyttisen reniinientsyymin inhi-15 biittoreina. Katso esimerkiksi julkaisut US 4 599 198, GB 2 184 730; 2 209 752; EP O 264 795; GB 2 200 115 ja US SIR H725. Näistä julkaisut GB 2 200 115, GB 2 209 752, EP O 264 795, US SIR H725 ja US 4 599 198 kuvaavat ureaa sisältäviä hydroksietyyliamiinireniini-inhibiittoreita. Julkaisu GB 2 20 200 115 kuvaa myös sulfamoyyliä sisältäviä hydroksietyyli- amiinireniini-inhibiitoreita ja julkaisu EP O 264 795 kuvaa tiettyjä sulfoniamidia sisältäviä hydroksietyyliamiinire-niini-inhibiitoreita. On kuitenkin tunnettua, että vaikkakin sekä reniini- että HIV-proteaasit molemmat luokitellaan 25 aspartyyliproteaaseiksi, yhdisteiden, jotka ovat tehokkaita reniini-inhibiitoreita, ei yleensä voida odottaa olevan tehokkaita proteaasin inhibiittoreita.

Keksinnön lyhyt kuvaus

Esillä oleva keksintö koskee virusta inhiboivien 30 yhdisteiden valmistusta. Erityisemmin esillä oleva keksintö koskee retrovirusproteaasia inhiboivien yhdisteiden valmistusta, menetelmiä tällaisten yhdisteiden valmistamiseksi sekä tällaisissa menetelmissä käyttökelpoisia välituotteita.

35 3

Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus

Keksintö koskee uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten kaavan (I) mukaisten sulfonyylialkanoyyliaminohyd-roksietyyliaminojohdannaisten ja niiden farmaseuttisesti 5 hyväksyttävien suolojen valmistusta.

0 R2

Ui , (I) R ornt ^sE°32“R4

R— S[0]2 γ N N

R1 Ή OH R3 jossa kaavassa R on Ci-g-alkyyli; R1 on Ci-g-alkyyli 10 R2 on fenyylimetyyli; R3 on Ci-g-alkyyli; ja R4 on fenyyli, joka voi olla substituoitu yhdellä tai useammalla substituentilla, jotka on valittu ryhmästä Ci-8-alkoksi, Ci-8~alkanoyyliamino, amino ja hydroksi.

15 Tässä käytettynä termi "alkyyli" tarkoittaa suora- ketjuista tai haaroittunutta alkyyliradikaalia, joka sisältää 1-8 hiiliatomia. Esimerkkejä tällaisista radikaaleista ovat metyyli, etyyli, n-propyyli, isopropyyli, n-butyyli, isobutyyli, sek-butyyli, tert-butyyli, pentyyli, 20 isoamyyli, heksyyli, oktyyli ja vastaavat. Termi "alkoksi" tarkoittaa alkyylieetteriradikaalia, jossa termi alkyyli on määritelty edellä. Esimerkkejä sopivista alkyylieetterira-dik&aleista ovat metoksi, etoksi, n-propoksi, isopropoksi, n-butoksi, isobutoksi, sek-butoksi, tert-butoksi ja vastaa-25 vat.

Seuraavassa kuvataan kaavan I mukaisten yhdisteiden valmistusta. On huomattava, että yleinen menetelmä esitetään liittyen erityisen stereokemian omaavien yhdisteiden valmistukseen, esim. jossa hydroksyyliryhmän absoluuttinen 30 stereokemia on laatua (R) . Tällaiset menetelmät voidaan kuitenkin yleensä soveltaa niihin yhdisteisiin, joissa on päinvastainen konfiguraatio, esim. jossa hydroksyyliryhmän 4 absoluuttinen stereokemia on laatua (S). Lisäksi (R) -stereokemian omaavia yhdisteitä voidaan käyttää (S) — stereokemian omaavien yhdisteiden valmistukseen ja päinvastoin. Esim. (R)-stereokemian omaava yhdiste voidaan muuttaa 5 (S)-stereokemian omaavaksi yhdisteeksi käyttäen hyvin tun nettuja menetelmiä.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa siten että a} amiini, jonka kaava on R3 '/'Vy3101^ h2 OH r3 10 jossa R2, R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan hapon kanssa, jonka kaava on

R—S[0]f \ J

I ^OH R1 jossa R ja R1 tarkoittavat samaa kuin edellä, tai 15 b) sulfonamidi, jolla on kaava

Cj2 2 %

V

OH R3 jossa R2, R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä, kytketään happoon, jolla on kaava

O O

ch3'x^s'^sV''^ ch3 20 saadun yhdisteen tioasetyyliryhmä muutetaan tioliryhmäksi, joka alkyloidaan, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava 5 ch3 oh r3 ja näin saatu yhdiste hapetetaan vastaavaksi sulfoniksi käyttäen sopivia hapettimia, jolloin saadaan halutut seu-raavan kaavan mukaiset yhdisteet rs ^ Ϊ ] \y° CH3 OH R3 5

Menetelmävaihtoehdossa a) amiini saatetaan reagoimaan sul-fonin kanssa, jonka kaava on

0. ,0 R2\ R20O

(CH2),'^A.oh R1 jossa R ja R1 on määritelty edellä ja R21 = R20 = H ja t = 1. 10 Sulfoni valmistetaan seuraavan menetelmän mukaisesti.

Kaavan RSH mukainen merkaptaani saatetaan reagoimaan substituoidun metakrylaatin kanssa, jonka kaava on R'

Michael-addition avulla. Michael-additio suorite-15 taan sopivassa liuottimessa ja sopivan emäksen läsnä ollessa, jolloin muodostuu vastaava tiolijohdannainen, joka esitetään kaavalla 6 R1

RK/| Y

R21 O

jossa R ja R1 tarkoittavat edellä määriteltyjä radikaaleja; R20 ja R21 tarkoittavat vetyä ja R22 tarkoittaa karboksyy-lisuojaryhmää, kuten metyyliä, etyyliä, bentsyyliä, tert-5 butyyliä ja vastaavia. Sopivia liuottimia, joissa Michael-additio voidaan suorittaa, ovat proottiset, ei-proottiset ja dipolaariset aproottiset, orgaaniset liuottimet, esim. alkoholit, kuten esim. metanoli, etanoli, butanoli ja vastaavat, sekä eetterit, esim. tetrahydrofuraani, ja ase-10 tonitriili, N,N-dimetyyliformamidi, dimetyylisulfoksidi ja vastaavat, mukaan lukien niiden seokset. Sopivia emäksiä ovat ryhmän I mukaiset metallialkoksidit, kuten esim. nat-riummetoksidi, natriumetoksidi, natriumbutoksidi ja vastaavat sekä ryhmän I mukaiset metallihydridit, kuten natrium-15 hydridi, mukaan lukien niiden seokset.

Tiolijohdannainen muutetaan vastaavaksi sulfoniksi tai sulfoksidiksi, jonka kaava on R’ R—SfOJxs^^x^^^^OR22 R2° R21 Cl hapettamalla tiolijohdannainen sopivalla hapettimella sopi-20 vassa liuottimessa. Sopivia hapettimia ovat esim. vetyperoksidi, natriummetaperboraatti, oksoni (kaliumperoksimono-sulfaatti), meta-klooriperoksibentsoehappo, perjodihappo ja vastaavat niiden seokset mukaan lukien. Sopivia liuottimia ovat etikkahappo (natriummetaperboraattia varten), ja muita 25 perhappoja varten eetterit, kuten tetrahydrofuraani ja dioksaani, ja asetonitriili, N,N-dimetyyliformamidi ja vastaavat, mukaan lukien niiden seokset.

7

Sulfoni muutetaan sitten vastaavaksi vapaaksi hapoksi, jonka kaava on J\ f " iVt“

R20 R21 O

Erääseen menetelmään liittyy sopivan emäksen, esim. litium-5 hydroksidin, natriumhydroksidin ja vastaavan, käyttö, näiden seokset mukaan lukien, sopivassa liuottimessa, kuten esim. tetrahydrofuraanissa, vedessä, asetonitriilissä, N,N-dimetyyliformamidissa, dimetyylisulfoksidissa, metyleeni-kloridissa ja vastaavassa, mukaan lukien niiden seoksissa. 10 Muut suojauksen poistamiseen käytettävissä olevat menetel- • · O') oo mät riippuvat ryhmän R luonteesta. Esim. kun R on tert-butyyliryhmä, voidaan käyttää vahvaa happoa, kuten kloori-vetyhappoa tai trifluorietikkahappoa. Kun R22 on bentsyyli-ryhmä, se voidaan poistaa hydrogenolyysillä.

15 Vapaa happo kytketään sitten käyttäen alalla hyvin tunnettuja menetelmiä edellä kuvatun aminoalkoholin sul-foniamidijohdannaiseksi tai sen analogiksi. Syntynyt tuote on kaavan I mukainen yhdiste.

Vaihtoehtoisesti {menetelmävaihtoehto b) ) voidaan 20 sulfoniamidi-isosteeri kytkeä kaupallisesti saatavaan happoon

0 O

CH3 tioasetyyliryhmä voidaan poistaa sopivalla emäksellä, kuten hydroksidilla, tai amiinilla, kuten ammoniakilla, ja sitten 25 syntynyt tioli saattaa reagoimaan alkylointiaineen, kuten alkyylihalidin, tosylaatin tai mesylaatin kanssa, jolloin saadaan yhdisteitä, joiden kaava on 8 1 I v° Ξ 1 1 ch3 oh r3

Rikki voidaan sitten hapettaa vastaavaksi sulfonik-si tai sulfoksidiksi käyttäen sopivia hapettimia, kuten edellä on kuvattu, jolloin saadaan halutut seuraavan kaavan 5 mukaiset yhdisteet 0 R2 0

^ V- V

s[o]x nh hr ^ r4 ch3 oh r3

Edellä kuvatut kemialliset reaktiot kuvataan yleensä laajimpina sovellutuksina valmistettaessa tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä. Joskus reaktioita ei voida sovel-10 taa kuvatulla tavalla kullekin kuvatun suojapiirin mukaiselle yhdisteelle. Alan ammattimies tunnistaa helposti ne yhdisteet, joiden kohdalla tämä pätee. Kaikissa tällaisissa tapauksissa voidaan reaktiot joko suorittaa käyttäen tavanomaisia alan ammattimiehen tuntemia muunnelmia esim. sopi-15 vasti suojaamalla häiritseviä ryhmiä käyttämällä vaihtoehtoisia tavanomaisia reagensseja, muuttamalla rutiininomaisesti reaktio-olosuhteita jne., tai voidaan soveltaa muita tässä yhteydessä kuvattuja tai muuten tavanomaisia reaktioita valmistettaessa vastaavia keksinnön mukaisia yhdistei-20 tä. Kaikissa preparatiivisissä menetelmissä ovat kaikki lähtöaineet tunnettuja tai helposti valmistettavissa tunnetuista lähtöaineista.

Ilman muita yksityiskohtia uskotaan, että alan ammattimies voi, käyttäen edellä kuvattua selitystä, käyttää 25 hyväksi esillä olevaa keksintöä sen laajimmassa merkityksessä. Seuraavat edulliset erityiset suoritusmuodot on siksi tulkittava lähinnä kuvaaviksi eikä millään tavalla jäljellä olevaa selitystä rajoittaviksi.

9

Kaikki reagenssit käytettiin sellaisinaan ilman puhdistusta. Kaikki protoni- ja hiili-NMR-spektrit saatiin joko käyttäen Varian VXR-300- tai Varian VXR-400 -ydinmag-neettista resonanssispektrometriä.

5 Esimerkki IA

N-[3-(S)-bentsyylioksikarbonyyliamino-2-(R)-hydrok-s i - 4 - f enyyl ibutyy 1 i ] -N-isoamyyliamiinin valmistus

P

f f “k

Osa A

10 Liuokseen, jossa oli N-bentsyylioksikarbonyyli-L- fenyylialaniinikloorimetyyliketonia {75 g, 0,2 mol) seoksessa, jossa oli 800 ml metanolia ja 800 ml tetrahydrofu-raania, lisättiin natriumboorihydridiä (13,17 g, 0,348 mol, 1,54 ekvivalenttia) 100 minuutin aikana. Liuosta sekoitet-15 tiin huoneenlämpötilassa kaksi tuntia ja väkevöitiin sitten vakuumissa. Jäännös liuotettiin 1 000 ml:aan etyyliasetaattia ja pestiin 1 N kaliumvetysulfaattiliuoksella, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella, kyllästetyllä nat~ riumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesium-20 sulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin vakuumissa öljyksi. Raakatuote liuotettiin 1 000 ml:aan heksaania 60 °C:ssa ja annettiin jääähtyä huoneenlämpötilaan, jolloin muodostui kiteitä, jotka eristettiin suodattamalla ja pestiin suurilla heksaanimäärillä. Tämä kiintoaine kiteytettiin sitten 25 lämpimästä etyyliasetaatista ja heksaanista, jolloin saatiin 32,3 g {43 %) N-bentsyylioksikarbonyyli-3-{S)-amino-1-kloori-4-fenyyli-2-(S)-butanolia, sp. 150 - 151 °C, FAB MS: MLi+ = 340.

10

Osa B

Liuosta, jossa oli kaliumhydroksidia {6,52 g, 0,116 mol, 1,2 ekvivalenttia} 970 ml:ssa absoluuttista etanolia, käsiteltiin N-bentsyylioksikarbonyyli-3-(S)-amino-1-kloori-5 4-fenyyli-2-(S)-butanolilla (32,3 g, 0,097 mol). Tätä liu osta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 15 minuuttia ja väke-voitiin sitten vakuumissa, jolloin satiin valkoinen kiintoaine. Kiintoaine liuotettiin dikloorimetaaniin ja pestiin vedellä, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suo-10 datettiin ja väkevöitiin vakuumissa, jolloin saatiin valkoinen kiintoaine. Kiintoaine kiteytettiin heksaanista ja etyyliasetaatista, jolloin saatiin 22,3 g, 77 %, N-bentsyy-lioksikarbonyyli-3-(S)-amino-1,2-(S)-epoksi-4-fenyylibutääniä, sp. 102 - 103 °C, FAB MS: MH+ = 298.

15 Osa C

Liuosta, jossa oli N-bentsyylioksikarbonyyli-3-(S)-amino-1,2-(S)-epoksi-4-fenyylibutaania (11,54 g, 38,81 mmol) ja isoamyyliamiinia (66,90 g, 0,767 mol, 19,9 ekvivalenttia) 90 ml:ssa isopropyylialkoholia, refluksoitiin 3,1 tun-20 tia. Liuos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja väkevöitiin osittain vakuumissa ja jäljelle jäänyt liuos kaadettiin 200 ml:aan sekoitettua heksaania, jolloin tuote kiteytyi liuoksesta. Tuote eristettiin suodattamalla ja ilmakuivattiin, jolloin saatiin 11,76 g, 79 %, N-[[3-(S)-fenyylimetyylikar-25 bamoyyli]amino-2-(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-[(3-me-tyylibutyyli) amiinia, sp. 118 - 122 °C, FAB MS: MH+ = 385.

Esimerkki IB

N- t [3- (S) -fenyylimetyylikarbamoyyli] amino] -2- (R) -hydroksi-4-fenyyli]-1-[(2-metyylipropyyli) amino-2-(1,1-di-30 metyylietoksyyli)karbonyyli]butaanin valmistus 11

° I 0 I

U i

Liuokseen, jossa oli 7,51 g (20,3 mmol) N~[[3-(S)-fenyylimetyylikarbamoyyli]amino]-2-(R)-hydroksi-4-fenyyli-5 butyyli]-N-(2-metyylipropyyli)amiinia 67 mlrssa vedetöntä tetrahydrofuraania, lisättiin 2,25 g (22,3 mmol) trietyyli-amiinia. Kun seos oli jäähtynyt 0 °C:seen, siihen lisättiin 4,4 g (20,3 mmol) di-tert-butyylidikarbonaattia ja sekoittamista jatkettiin huoneenlämpötilassa 21 tuntia. Haihtuvat 10 aineet poistettiin vakuumissa, etyyliasetaattia lisättiin, sitten pestiin 5-%:isella sitruunahappoliuoksella, kyllästetyllä natriuravetykarbonaattiliuoksella, natriumkloridi-liuoksella, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 9,6 g raakatuotetta. Kromato-15 grafoimalla silikageelillä käyttäen 30-%:ista etyyliase-taatti/heksaaniseosta saatiin 8,2 g puhdasta N-[3-(S)~ fenyylimetyylikarbamoyyli]amino]-2-(R)-hydroksi-4-fenyyli]-1-[(2-metyylipropyyli)amino-2-(1,1-dimetyylietoksyyli)kar-bonyyli]butaania, MS m/e = 477 (M+Li).

2 0 Esimerkki 2 o A- CHa OH \ ^^OMe 12

[IS[1R*(R*), 2S*]]-N-12-hydroksi-3-[(3-metyylibutyy-li) (4“inetoksifenyylisulfonyyli)amino] -1-(fenyylimetyyli) -propyy1i3-2-metyyli-3-(metyylisulfonyyli)propaaniamidin valmistus 5 Osa A

Liuosta, jossa oli esimerkin 1, osan C mukaista aminoalkoholia (1,1515 g, 2,99 mmol) ja trietyyliamiinia (313,5 mg, 3,10 mmol) 15 ml:ssa dikloorimetaania, käsiteltiin 4-metoksibentseenisulfonyylikloridilla (630,6 mg, 3,05 10 mmol) ruiskun kautta. Liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 40 minuuttia ja väkevöitiin sitten vakuumissa. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin ja pestiin 1 N kaliumve-tysulfaattiliuoksella, kyllästetyllä natriumvetykarbonaat-tiliuoksella, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettö-15 mällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 1,5622 g valkoista vaahtoa, Raakatuote puhdistettiin kiteyttämällä uudelleen heksaani/ etyyliasetaat-tiseoksesta, jolloin saatiin 1,1047 g, 67 %, puhdasta tuotetta, sp. 95 - 98 °C. Korkean erotuskyvyn FAB MS

20 C30H38N2O6S: lie laskettu: 555,2529, saatu: 555,2559.

Osa b

Liuosta, jossa oli osan A mukaista tuotetta (970 mg, 1,68 mmol) 30 ml:ssa metanolia, käsiteltiin 70 mg:11a 10-%:ista palladiumia hiilellä -katalyyttiä ja hydrogenoi-25 tiin paineessa 40 psig (275,8 kPa) huoneenlämpötilassa 16 tuntia. Katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodos väkevöitiin vakuumissa, jolloin saatiin kirkas öljy, joka muuttui kiinteäksi seistessään, sp. 81 - 85 °C. FAB MS; MH+ = 421, 764,1 mg, joka käytettiin suoraan seuraavassa 30 vaiheessa.

Osa C

Seos, jossa oli 2-(S)-metyyli-3-metyylisulfonyyli-propionihappoa (194 mg, 1,17 mmol), N-hydroksibentso-triatsolia (276 mg, 1,34 mmol) ja 1-(3-dimetyyliamino-35 propyyli)-3-etyylikarbodi-imidihydrokloridia (EDC) (256 mg, 1,34 mmol), liuotettiin 3,5 ml:aan N,N-dimetyyliformamidia 13 (DMF) ja annettiin reagoida 30 minuutin ajan 0 °C:ssa. Osan B mukaista amiinia (451,1 mg, 1,07 mmol) liuotettuna 1,5 ml:aan N,N-dimetyyliformamidia lisättiin edellä mainittuun seokseen ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 16 tun-5 tia. Liuos kaadettiin sitten 20 ml:aan kyllästettyä natri-umvetykarbonaattiliuosta ja uutettiin neljä kertaa käyttäen etyyliasetaattia. Yhdistetyt etyyliasetaattiuutteet pestiin 5~%:isella sitruunahapon vesiliuoksella, kyllästetyllä nat-riumvetykarbonaattiliuoksella, natriumkloridiliuoksella, 10 kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin kirkas öljy, joka kiteytyi seistessään. Tämä materiaali kiteytettiin uudelleen heksaa-ni/etyyliasetaattiseoksesta, jolloin saatiin 517,6 mg, 85 % puhdasta tuotetta, sp. 12 5 - 129 °C. HRFAB MS; 15 C27H40N2O7S2: He laskettu: 569,2355, saatu: 569,2397.

Esimerkki 3 = Λ.

cf' o h 1 1 I J

ch3 °h V ^ [IS[1R*(R*>,2S*]]-N-I2-hydroksi-3-[{2-metyylipro-pyyli)(fenyylisulfonyyli)amino]-1-(fenyylimetyyli)propyy-2 0 li] -2-metyyli-3-(metyyli sulfonyylijpropaaniamidin valmistus

Osa Λ

Liuosta, jossa oli N-bentsyylioksikarbonyyli-3-(S)-amino-1,2-(S)-epoksi-4-fenyylibutaania (50,0 g, 0,168 mol) ja i s obu tyyli amiini a (246 g, 3,24 mol, 20 ekvivalenttia) 25 650 ml:ssa isopropyylialkoholia, refluksoitiin 1,25 tuntia.

Liuos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan, väkevöitiin vakuu-missa ja kaadettiin 1 l:aan sekoitettua heksaania, jolloin tuote kiteytyi liuoksesta. Tuote eristettiin suodattamalla ja ilmakuivattiin, jolloin saatiin 57,56 g, 92 %, N-[3-(S)- 14 bentsyylioksikarbonyyliamino-2-(R)-hydroksi-4~fenyyli]-N-isobutyyliamiinia, sp. 108,0 - 109,5 °C, MH+ m/z = 371.

Osa B

Osan A mukaista amiinia (936,5 mg, 2,53 mmol) ja 5 trietyyliamiinia (288,5 mg, 2,85 mmol) liuotettiin 20 mlraan dikloorimetaania ja käsiteltiin bentseenisulfonyyli-kloridilla (461 mg, 2,61 mmol). Liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 16 tuntia ja väkevöitiin sitten vakuumis-sa. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin ja tämä liuos 10 pestiin 1 N kaliumvetysulfaattiliuoksella, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin kirkas öljy, 1,234 g. Tämä öljy kiteytettiin eetteri/heksaaniseoksesta, 729,3 mg, 56,5 15 %, sp. 95 - 99 »e, FAB MS; MH+ = 511.

Osa C

Liuosta, jossa oli osan B mukaista fenyylimetyy-li[2-(R)-hydroksi-3-[2-metyylipropyyli](bentseenisulfonyy-li)amino]-1-(S)-(fenyylimetyyli}propyylikarbamaattia (671,1 20 mg, 1,31 mmol) 10 ml:ssa metanolia, hydrogenoitiin 50 mg:11a 10-%:ista palladiumia hiilellä -katalyyttiä paineessa 40 psig (275,8 kPa) huoneenlämpötilassa 15 tuntia. Katalyytti poistettiin suodattamalla piimään läpi ja suodos väkevöitiin, jolloin saatiin valkoinen vaahto, 474,5 mg, 96 2 5 %, FAB MS; ΜΗ-1' = 377, joka käytettiin suoraan seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

Osa D

Seosta, jossa oli 2-(S)-metyyli-3-(metyylisulfo-nyyli)propionihappoa (210,6 mg, 1,17 mmol), N-hydroksi-30 bentsotriatsolia (260,4 mg, 1,70 mmol) ja EDC:tä (259 mg, 1,35 mmol) 3,5 ml:ssa N,N-dimetyyliformamidia, sekoitettiin 30 minuuttia 0 °C:ssa. Osan C mukaista amiinia (474 mg, 1,15 mmol) liuotettuna 2 ml:aan N,N-dimetyyliformamidia lisättiin edellä mainittuun liuokseen ja seosta sekoitettiin 35 huoneenlämpötilassa 16 tuntia ja kaadettiin sitten 100 ml:aan 50-%:isesti kyllästettyä natriumvetykarbonaattiliu- 15 osta. Vesipitoinen liuos uutettiin etyyliasetaatilla. Etyy-liasetaattiliuos pestiin 5-%:isella sitruunahapon vesiliuoksella, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesi-5 umsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin valkoinen vaahto, 560,5 mg, joka kiteytettiin etyyliasetaatti /heksaaniseokses ta, jolloin saatiin 440,3 mg puhdasta tuotetta, sp. 112 - 116,5 °C. HRFAB MS; C25H36N2O6S2: He laskettu: 525,2093, saatu: 525,2077.

10 Esimerkki 4

°-0 : H i I H

ch3 oh \

[1S[1R*(R*)# 2S*33-N-[2-hydroksi-3-[{3-me tyylibutyyli )(fenyylisulfonyyli)amino]-1-(fenyylimetyyli)propyylil-2-metyyli-3-(metyyli sulfonyylijpropaaniamidin valmistus 15 Osa A

Seosta, jossa oli N-[3-(S)-bentsyyliosikarbonyy-liamino-2-(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-[(3-metyylibu~ tyyli) amiinia (esimerkki 1, osa C) (3,89 g, 10,1 mmol) ja trietyyliamiinia (1,02 g, 10,1 mmol) , liuotettiin 25 ml-.aan 20 tetrahydrofuraania (THF) ja käsiteltiin liuoksella, jossa oli di-tert-butyylipyrokarbonaattia (2,21 g, 10,1 mmol} liuotettuna 10 ml:aan tetrahydrofuraania. Liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 1,5 tuntia ja väkevöitiin sitten vakuumissa. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin ja pes-25 tiin 1 N kaliumvetysulfaattiliuoksella, kyllästetyllä nat-riumvetykarbonaattiliuoksella, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin paksu kirkas öljy, 4,66 g, 98,5 %, Rf = 0,23 silikageelillä eluoimalla 5:1 heksaa- 16 ni/etyyliasetaattiseoksella. Tämä materiaali käytettiin suoraan seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

Osa B

Osan A mukaista tuotetta {4,66 g, 10,1 mmol) liuo-5 tettiin 40 ml:aan vedetöntä etanolia ja käsiteltiin 30 mg:11a 15-%:ista palladiumia hiilellä -katalyyttiä. Tätä seosta hydrogenoitiin sitten 18 tuntia huoneenlämpötilassa ja paineessa 40 psig (275,8 kPa). Katalyytti poistettiin suodattamalla piimään läpi ja suodos väkevöitiin, jolloin 10 saatiin öljy, joka käytettiin suoraan seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

Osa C

Seos, jossa oli 2-(S)-metyyli-3-metyylisulfonyyli-propionihappoa (1,39 g, 8,3 mmol), N-hydroksifoentsotri-15 atsolia (1,84 g, 12,0 mmol) ja 1-(3-dimetyyliaminopropyy-li)-3-etyylikarbodi-imidihydrokloridia (EDC) (1,77 g, 9,2 mmol), liuotettiin 10 ml:aan N,N-dimetyyliformamidia (DMF) ja annettiin reagoida 30 minuutin ajan 0 °C:ssa. Osan B mukaista amiinia (2,80 g, 8,0 mmol) liuotettuna 10 ml: aan 20 N,N-dimetyyliformamidia lisättiin edellä mainittuun seokseen ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 24 tuntia. Liuos väkevöitiin vakuumissa ja jäännös liuotettiin käyttäen etyyliasetaattia. Etyyliasetaattiliuos pestiin 5-pro-senttisella sitruunahapon vesiliuoksella, kyllästetyllä nat-25 riumvetykarbonaattiliuoksella, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin kirkas öljy, joka puhdistettiin flashkromatografiällä, jolloin saatiin 3,00 g, 75 %, materiaalia, joka käytettiin suoraan seuraavassa vaiheessa. 30 Osa D

Osan C mukaista tuotetta (3,00 g, 6,02 mmol) käsiteltiin 30 ml:11a 4 N kloorivetyhappoa dioksaanissa huoneenlämpötilassa 24 tuntia. Liuos väkevöitiin vakuumissa ja puolikiinteä jäännös trituroitiin eetterillä ja kuivattiin 35 vakuumissa, jolloin saatiin valkoinen amorfinen kiintoaine, 17 sp. > 250 °C, muuttui keltaiseksi 221 °C:ssa, FAB MS; MH+ = 436.

Osa E

Osan D mukaista tuotetta liuotettiin dikloorimetaa-5 niin ja käsiteltiin kyllästetyllä natriumvetykarbonaatti-liuoksella, jolloin saatiin vapaan amiinin liuos. Orgaaninen faasi kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin vakuumissa, jolloin saatiin (610 mg, 1,75 mmol) . Tämä amiini suspendoitiin 50 ml:aan 10 tetrahydrofuraania ja käsiteltiin peräkkäin trietyyliamii-nilla (1,01 g, 10 mmol) ja bentseenisulfonyylikloridilla (283 mg, 1,75 mmol). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 19,5 tuntia. Kiintoaineet poistettiin suodattamalla ja suodos väkevöitiin ja liuotettiin dikloorimetaaniin. Di-15 kloorimetaaniliuos pestiin 1 N kaliumvetysulfaattiliuoksel-la, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella, natri-umkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin öljy, joka trituroitiin metanolilla, jolloin saatiin valkoi-20 nen kiintoaine, joka eristettiin suodattamalla. Raaka kiintoaine kiteytettiin sitten etyyliasetaatista ja heksaanis-ta, jolloin saatiin 200 mg, 21 %, materiaalia, sp. 112 -115 °C. HRFAB MS; C26H38N2O6S2: lie laskettu: 538,2171, saatu: 538,2180.

25 Esimerkki 5 CH3 OH k 18 [IS[1R*(R*),2S*]]-N-[2-hydroksi-3-(propyyli)(fenyy-lisulfonyyli) amino] -1- (fenyylimetyyli)propyyli] -2-metyyli-3 - (metyylisulfonyyli) propaaniamidin valmistus

Osa A

5 Liuosta, jossa oli N-bentsyylioksikarbonyyli-3-(S)- amino-1,2-(S)-epoksi-4-fenyylibutaania (6,06 g, 20,4 mol) ja n-propyyliamiinia (20,9 g, 0,35 mol) 100 mlrssa isopro-pyylialkoholia, refluksoitiin kolme tuntia. Liuos väkevöi-tiin sitten vakuumissa, jolloin saatiin kiintoaine, joka 10 kiteytettiin heksaanista ja etyyliasetaatista, jolloin saatiin 6,53 g, 90 %, haluttua tuotetta, sp 120 - 123 °C, FAB MS; MH+ = 357.

Osa B

Osan A mukaista amiinia saatettiin reagoimaan bent-15 seenisulfonyylikloridin kanssa esimerkin 3, osan B mukaisella tavalla. Syntynyt yhdiste (1,426 g, 2,87 mmol) liuotettuna 25 ml:aan metanolia hydrogenoitiin 40 mg:11a 10-%:ista palladiumia hiilellä -katalyyttiä paineessa 40 psig (275,8 kPa) huoneenlämpötilassa 16 tuntia. Liuos suo-20 datettiin piimään läpi ja suodos väkevöitiin, jolloin saatiin 1,04 g, 100 %, kirkasta öljyä, joka käytettiin suoraan seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta. HRFAB MS; C19H24N2O3S: Ile laskettu: 363,1742, saatu: 363,1763.

Osa c 25 Seosta, jossa oli 2-(S)-metyyli-3-(metyylisul- fonyyli)propionihappoa (243,7 mg, 1,47 mmol), N-hydroksi~ bentsotriatsolia (332,0 mg, 2,16 mmol) ja EDC:tä (304,8 mg, 1,59 mmol) 2,5 ml:ssa N,N-dimetyyliformamidia, sekoitettiin 30 minuuttia 0 °C:Ssa ja käsiteltiin osan C mukaisella 30 amiinilla (513,3 mg, 1,42 mmol) 1,5 mlrssa N,N-dimetyyliformamidia . Liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 16 tuntia ja kaadettiin sitten 80 ml;aan 50-%risesti kyllästettyä natriumvetykarbonaattiliuosta. Vesipitoinen liuos uutettiin etyyliasetaatilla. Liuos uutettiin etyyliasetaa-35 tiliä ja etyyliasetaattiliuos pestiin 5-%:isella sitruuna-hapon vesiliuoksella, kyllästetyllä natriumvetykarbonaatti- 19 liuoksella, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin valkoinen vaahto, 576,8 mg, joka puhdistettiin kiteyttämällä etyyliasetaatti/heksaaniseoksesta, jol-5 loin saatiin 441,1 mg, 68 % tuotetta, sp. 134 - 136,5 °C. HRFAB MS? C24H34N2O6S2+LX: lie laskettu: 517,2019, saatu: 517,1973.

Esimerkki 6 o p „

0' '0 : H I I 11 J

ch3 oh x 10 [1S[1R*(R*),2S*]]-N-[2-hydroksi-3-(butyyli)(fenyy- lisulfonyyli)amino]-1-(fenyylimetyyli)propyyli]-2-metyyli - 3- (me tyy 1 isul f onyyli) propaani amidin valmistus

Osa A

Saattamalla (1,48 g, 5,0 xnmol) N-bentsyylioksi-15 karbonyyli-3 -(S)-amino™1,2-(S)-epoksi-4-fenyylibutaania ja (7,314 g, 100,0 mmol) n-butyyliamiinia reagoimaan saatiin 1,50 g (80 %) N- [3-(S) -bentsyylioksikarbonyyliamino-2-(R) -hydroksi~4-fenyylibutyyli]-N-butyyliamiinia, sp 125 - 128 °C, FAB MS; MH+ = 371.

20 Osa B

Osan A mukaista amiinia (1,67 g, 4,5 mmol) ja tri-etyyliamiinia (859,4 mg) liuotettiin 60 ml:aan dikloorime-taania ja käsiteltiin bentseenisulfonyylikloridilla (822,3 mg, 4,66 mmol) huoneenlämpötilassa. Kun liuosta oli sekoi-25 tettu 15 minuuttia, se väkevöitiin vakuumissa ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin. Etyyliasetaattiliuos pestiin 1 N kaliumvetysulfaattiliuoksella, kyllästetyllä natriumve-tykarbonaattiliuoksella, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja vä- 20 kevöitiin, jolloin saatiin öljy. Öljy kiteytettiin heksaa-ni/eetteriseoksesta, jolloin saatiin 2,04 g, 89 %, puhdasta tuotetta, sp. 68 - 77 °C, FAB MS; MH+ = 511.

Osa C

5 Liuosta, jossa oli osan B mukaista fenyylimetyy- li [2-(R)-hydroksi-3-[n-butyyli](bentseenisulfonyyli)amino]-1-(S)-(fenyylimetyyli)propyylikarbamaattia (1,86 g, 3,64 mmol) 40 ml:ssa metanolia, hydrogenoitiin 110 mg:11a 10-%:ista palladiumia hiilellä -katalyyttiä paineessa 10 40 psig (275,8 kPa) neljä tuntia. Liuos suodatettiin pii mään läpi ja väkevöitiin vakuumissa, jolloin saatiin kiintoaine, sp. 68 - 88 °C, FAB MS; MH+ = 377, joka käytettiin suoraan seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

Osa D

15 Seosta, jossa oli 2-(S)-metyyli-3-(metyylisulfo- nyyli)propionihappoa (288,4 mg, 1,74 mmol), EDC:tä (369,6 mg, 1,93 mmol) ja N-hydroksibentsotriatsolia (368,1 mg, 2,41 mmol), liuotettiin 3,5 ml:aan N,N-dimetyyliformamidia ja seosta sekoitettiin 30 minuuttia 0 °C:ssa. Tämä liuos 20 käsiteltiin sitten osan C mukaisella amiinilla (621,9 mg, 1,65 mmol) liuotettuna 2 mlraan N,N-dimetyyliformamidia. Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 48 tuntia ja väkevöitiin sitten vakuumissa. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin, pestiin 1 H kaliumvetysulfaattiliuoksella, kyl~ 25 lästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella, natriumklori-diliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin öljy. Raaka-tuote puhdistettiin flashkromatografiällä silikageelillä eluoimalla heksaani/etyyliasetaattiseoksilla, jolloin saa-30 tiin haluttu tuote valkoisena kiintoaineena, 353 mg, 41 %, sp. 99 - 103 °C, HRFAB MS; C25H36N2O6S2: Ile laskettu: 531,2175, saatu: 513,2176.

21

Esimerkki 7 = P „ CH3>/\^n1^n'sy^

θ'Ό ; H i [ I J

CHg OH V ^^OMe [IS[1R*(R*), 2S*J]-N-[2-hydroksi~3-[(2-metyylipro-pyyli) (4-metoksifenyylisulfonyyli)amino] -1- {fenyylimetyy-5 li)propyyli] -2-metyyli-3- (me t yy 1 i sul f onyyli) propaani amidin valmistus

Osa A

Esimerkin 3, osan C mukaista amiinia, N-[3-(S)-bentsyylioksikarbonyyliamino~2-< R)-hydroksi-4-fenyyli]-N-10 isobutyyliamiinia (1,1131 g, 3,00 mmol) ja trietyyliamiinia {324,0 mg, 3,20 mmol) 20 ml-.ssa dikloorimetaania käsiteltiin 4-metoksibentseenisulfonyylikloridilla (715,4 mg, 3,46 mmol). Liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa kuusi tuntia ja väkevöitiin sitten vakuumissa. Jäännös liuotettiin 15 etyyliasetaattiin ja pestiin 1 N kaliumvetysulfaattiliuok-sella, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella, nat-riumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesium-sulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin kirkas öljy. öljy kiteytettiin eetteristä, jolloin saatiin 20 puhdas tuote, valkoinen kiintoaine, 1,273 g, 78 %, sp. 97 -101 °C, FAB MS; MH+ = 541.

Osa 5

Osan A mukaista tuotetta (930 mg, 1,68 mmol) liuotettiin 30 ml:aan metanolia ja hydrogenoitiin paineessa 40 25 psig (275,8 kPa) 70 mg:11a 10-%:ista palladiumia hiilellä -katalyyttiä 17 tuntia. Katalyytti poistettiin suodattamalla piimään läpi ja suodos väkevöitiin vakuumissa, jolloin saatiin 704 mg kirkasta öljyä, joka muuttui kiinteäksi seistessään, sp. 105 - 110 °C. FAB MS; MH* = 407, joka käytet-30 tiin suoraan seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

22

Osa C

Seosta, jossa oli 2-metyyli-3-(metyylisulfonyyli) -propionihappoa (174,9 mg, 1,05 mmol), N-hydroksibentso-triatsolia (230 mg, 1,50 mmol) ja EDC:tä (220,5 mg, 1,15 5 mmol) 2 ml:ssa Ν,Ν-dimetyyliformamidia, sekoitettiin 0,5 tuntia 0 °C:ssa ja käsiteltiin sitten osan B mukaisella amiinilla (401,2 mg, 0,99 mmol) liuotettuna 1 ml:aan N,N-dimetyyliformamidia. Liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 16 tuntia ja kaadettiin sitten 20 ml:aan kyllästettyä 10 natriumvetykarbonaattiliuosta. Vesiliuos uutettiin etyyliasetaatilla ja sitten etyyliasetaattiliuos pestiin 5-%:isella sitruunahapon vesiliuoksella, kyllästetyllä natri-umvetykarbonaattiliuoksella, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja 15 väkevöitiin vakuumissa, jolloin saatiin kirkas öljy, 260 mg, joka puhdistettiin flashkromatografiällä eluoimalla heksaani/etyyliasetaattiseoksilla, jolloin saatiin 52,7 mg, 9,6 %, Sp. 87 - 92 °C, HRFAB MS; C26H38N2O7S2: lie laskettu: 555,2199, saatu: 555,2234.

2 0 Esimerkki 8 1P ^ CH3>r>^N'JY^N'sv^

°'s° i H I 1 II

CH3 oh \ ^^OMb

[IS [1R* (R*),2S*]] -N- [2-hyclroksi-3- [ (butyyli) (4-me-toksifenyylisulfonyyli) amino] -1- (fenyylimetyyli)propyyli] -2-metyyli-3-{metyylisulfonyyli)propaaniamidin valmistus 25 Osa A

Esimerkin 6, osan A mukaista amiinia, (1,52 mg, 4,10 mmol) ja trietyyliamiinia (488 mg, 4,82 mmol) 30 ml:ssa dikloorimetaania käsiteltiin 4-metoksibentseeni-sulfonyylikloridilla (869 mg, 4,20 mmol) huoneenlämpötilas- 23 sa. Liuos haihdutettiin vakuumissa ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin. Etyyliasetaattiliuos pestiin 1 N kalium-vetysulfaattiliuoksella, kyllästetyllä natriumvetykarbo-naattiliuoksella, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin ve-5 dettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöi-tiin, jolloin saatiin valkoinen kiintoaine, joka pestiin eetterillä ja ilmakuivattiin, jolloin saatiin 1,71 g, 77 %, puhdasta tuotetta, sp. 118 - 120 °C, FAB MS; M+LiH = 547.

Osa B

10 Osan A mukaista tuotetta {1,514 g, 2,80 mmol} liuo tettuna 30 ml:aan metanolia hydrogenoitiin paineessa 40 psig {275,8 kPa} 110 mg:11a 10-%:ista palladiumia hiilellä -katalyyttiä 16 tuntia huoneenlämpötilassa. Katalyytti poistettiin suodattamalla piimään läpi ja suodos väkevöi-15 tiin vakuumissa, jolloin saatiin valkoinen kiintoaine, 1,20 g, 100 %, sp. 103 - 108 °C, HRFAB MS; C21H30N2O4S:lie laskettu: 413,2086, saatu: 413,2121, joka käytettiin suoraan seu-raavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

Osa c 20 Seosta, jossa oli 2-(S)-metyyli-3-(metyylisulfo- nyylijpropionihappoa {354,4 mg, 2,13 mmol), N-hydroksi-bentsotriatsolia (473,4 mg, 3,09 mmol) ja EDC:tä {445,3 mg, 2,33 mmol) 1,5 ml:ssa Ν,Ν-dimetyyliformamidia, sekoitettiin 25 minuuttia 0 °C:ssa ja käsiteltiin sitten osan B mukai-25 sella amiinilla (815 mg, 2,00 mmol) liuotettuna 2 ml:aan Ν,Ν-dimetyyliformamidia. Liuosta sekoitettiin huoneenlämpö-tilassa 16 tuntia ja kaadettiin sitten 50 ml:aan kyllästettyä natriumvetykarbonaattiliuosta ja uutettiin sitten etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattiliuos pestiin 5-%:isella sit-30 ruunahapon vesiliuoksella, kyllästetyllä natriumvetykarbo-naattiliuoksella, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöi-tiin vakuumissa, jolloin saatiin 905 mg valkoista vaahtoa. Tuote puhdistettiin flashkromatografiällä silikageelillä 35 eluoimalla etyyliasetaatti/heksaaniseoksilla, jolloin saatiin 711,6 mg, 65 % puhdasta tuotetta, sp. 87 - 92 °C, HRFAB MS, M+Li; C26H38N207S2Li: lie laskettu: 561,2281, saatu: 561,2346.

Esimerkki 9 24 O O^o ch3^s-^v^n'^^n"sV^i 6' "o = H 1 l 1 1 CH3 OH \ ^^OCHs 5 [IS[1R*(R*),2S*]]-N-[2-hydroksi-3-[{propyyli)(4-me“ toksifenyylisulfonyyli)amino]-1-(fenyylimetyyli)propyyli]-2-metyyli-3- {me tyy 1 i sul f onyy 1 i) propaani amidin valmistus

Osa A

Liuosta, jossa oli esimerkin 1, osan C mukaista 10 tuotetta {620 mg, 1,74 mmol) ja trietyyliamiinia {250 mg, 2,47 mmol) 15 ml:ssa dikloorimetaania, käsiteltiin 4-metoksibentseenisulfonyylikloridilla {371 mg, 1,79 mmol) huoneenlämpötilassa 2,33 tuntia. Liuotin poistettiin vakuu-missa ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin ja pestiin 15 sitten 1 N kaliumvetysulfaattiliuoksella, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 1,0622 g valkoista vaahtoa. Raakatuote puhdistettiin flashkromatografiällä silikagee-20 Iillä eluoimalla heksaani/etyyliasetaattiseoksilla, jolloin saatiin 615 mg, 67 % haluttua tuotetta, sp. 88 - 92 °C, HRFAB MS; C28H34N2O6S: lie laskettu: 533,2298, saatu: 533,2329.

Osa B

25 Liuosta, jossa oli osan A mukaista tuotetta (519 mg, 0,98 mmol) 30 ml:ssa metanolia, käsiteltiin 70 mg:lla 10~%:ista palladiumia hiilellä -katalyyttiä ja hydrogenoi-tiin paineessa 40 psig (275,8 kPa) huoneenlämpötilassa 22 tuntia. Katalyytti poistettiin suodattamalla piimään läpi 30 ja suodos väkevöitiin vakuumissa, jolloin saatiin kirkas 25 öljy, joka muuttui kiinteäksi seistessään, sp. 124 127 °C, FAB MS; M+Li+ = 399, 387 mg, 100 %, joka käytettiin suoraan seuraavassa vaiheessa.

Osa C

5 Seos, jossa oli 2-{S)"-metyyli-3-metyylisulf onyyli- propionihappoa (138,5 mg, 0,83 mmol), N-hydroksibentsotri-atsolia (174,6 mg, 1,14 mmol) ja 1-{3-dimetyyliaminopro-pyyli ) -3-etyylikarbodi-imidihydrokloridia (EDC) (171,8 mg, 0,90 mmol) liuotettiin 2,5 ml:aan N,N-dimetyyliformamidia 10 (DMF) ja annettiin reagoida 30 minuutin ajan 0 °C:ssa. Osan B mukaista amiinia (304,9 mg, 0,78 mmol) liuotettuna 1,5 ml:aan N,N-dimetyyliformamidia lisättiin edellä mainittuun seokseen ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 14,5 tuntia. Liuos kaadettiin sitten 20 ml:aan kyllästettyä nat-15 riumvetykarbonaattiliuosta ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattiuutteet pestiin 5-%:isella sitruunahapon vesiliuoksella, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksel-la, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin 20 saatiin valkoinen kiintoaine. Tämä materiaali kiteytettiin uudelleen heksaani/ etyyliasetaattiseoksesta, jolloin saatiin 228 mg, 54 %, puhdasta tuotetta, sp. 115 - 118 °C. HRFAB MS; C27H40N2O7S2: He laskettu: 541,2062, saatu: 541,2064.

25 Esimerkki 10 o Po.

26

[IS[1R*(R*),23*]]-N-[2-hydroksi-3-[(2-metyylipro-pyyli)(4-asetamido)fenyylisulfonyyli)amino]-1-(fenyylime-tyyli)propyyli] -2-metyyli-3~ (metyylisulfonyyli)propaani-amidin valmistus 5 Osa A

Liuosta, jossa oli esimerkin 3, osan A mukaista tuotetta (1,1082 g, 2,99 mmol) ja trietyyliamiinia (713 mg, 3.05 mmol) 20 ml:ssa dikloorimetaania, käsiteltiin N-ase-tyylisulfanyylikloridilla (713,2 mg, 3,05 mmol) huoneenläm- 10 pötilassa 3,67 tuntia. Liuotin poistettiin vakuumissa ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin ja pestiin sitten 1 N kaliumvetysulfaattiliuoksella, kyllästetyllä natriumvety-karbonaattiliuoksella, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöi-15 tiin, jolloin saatiin 1,398 g valkoista kiintoainetta, sp. 155 - 158 °C, FAB MS; M+Li = 574.

Osa B

Liuosta, jossa oli osan A mukaista tuotetta (900 mg, 1,58 mmol) 30 mlrssa metanolia, käsiteltiin 90 mg:lla 20 10~%:ista palladiumia hiilellä -katalyyttiä ja hydrogenoi- tiin paineessa 40 psig (220,6 kPa) huoneenlämpötilassa 15 tuntia. Katalyytti poistettiin suodattamalla piimään läpi ja suodos väkevöitiin vakuumissa, jolloin saatiin valkoinen vaahto, FAB MS; M+H+ = 334, 680 mg, 99 %, joka käytettiin 25 suoraan seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

Osa C

Seos, jossa oli 2-(S)-metyyli-3-metyylisulfonyyli-propionihappoa (159,7 mg, 0,96 mmol), N-hydroksibentso-triatsolia (210,8 mg, 1,38 mmol) ja 1-(3-dimetyyliaminopro-30 pyyli)-3-etyylikarbodi-imidihydrokloridia (EDC) (203,9 mg, 1.06 mmol), liuotettiin 1,5 ml:aan N,N-dimetyyliformamidia (DMF) ja annettiin reagoida 30 minuutin ajan 0 °C;ssa. Osan B mukaista amiinia (401,9 mg, 1,06 mmol) liuotettuna 0,5 ml:aan N,N-dimetyyliformamidia lisättiin edellä mainittuun 35 seokseen ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 16,5 tuntia. Liuos kaadettiin sitten 75 ml:aan kyllästettyä nat- 27 riumvetykarbonaattiliuosta ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattiuutteet pestiin 5-%:isella sitruunahapon vesiliuoksella, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksel-la, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä mag-5 nesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin valkoinen vaahto, 490 mg. Tämä materiaali kiteytettiin heksaani/etyyliasetaattiseoksesta, jolloin saatiin 428 mg, 80 %, puhdasta tuotetta, sp. 123 - 127 °C. HRFAB MS; C27H39N3O7S2: He laskettu: 588,2398, saatu: 588,2395.

10 Esimerkki 11 0 p

°'N° Ξ H 1 F [I J

CH3 OH \ ^^NH2 t IS 11R* (R*), 2S* 3 ] -N- [2-hydroksi-3 - [ (3-metyylibutyy-li) (4-aminofenyylisulfonyyli)amino]-1- (fenyylimetyyli) -propyyli]-2-metyyli-3-(metyylisulfonyyli)propaaniamidin 15 valmistus

Osa A

Liuosta, jossa oli esimerkin 1, osan C mukaista tuotetta (1,1812 g, 3,07 mmol) ja trietyyliamiinia (325,7 mg, 3,22 mmol) 20 mlrssa dikloorimetaania, käsiteltiin 20 4-nitrofoentseenisulfonyylikloridilla (767 mg, 90-%:isesti puhdasta, 3,11 mmol) huoneenlämpötilassa 10 minuuttia. Liuotin poistettiin vakuumissa ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin ja pestiin sitten 1 N kaliumvetysulfaattiliuok-sella, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella, nat-25 riumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesium-sulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 2,3230 g kullanruskeaa kiintoainetta, joka kiteytettiin etyyliasetaatti/petrolieetteriseoksesta, jolloin saatiin 28 870 mg, 50 %, puhdasta tuotetta, sp. 130 - 132 °C, HRFAB MS; M+Li; C29H35N3O7SL1: lie laskettu: 576,2316, saatu: 576,2350.

Osa b 5 Liuosta, jossa oli osan A mukaista tuotetta (574 mg, 1,01 mmol) 40 ml:ssa metanolia (liuos ei ollut kokonaan homogeeninen), käsiteltiin 70 mg:lla 10-%:ista palladiumia hiilellä -katalyyttiä ja hydrogenoitiin paineessa 42 psig (289,6 kPa) huoneenlämpötilassa 15 tuntia. Katalyytti pois-10 tettiin suodattamalla piimään läpi ja suodos väkevöitiin vakuumissa, jolloin saatiin valkoinen kiintoaine, joka kiteytettiin kloroformista, sp. 122 - 127 °C, FAB MS; M+Li+ = 412, 400 mg, 91 %, joka käytettiin suoraan seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

15 Osa C

Seos, jossa oli 2-(S)-metyyli-3-metyylisulfonyyli-propionihappoa (112,3 mg, 0,675 mmol), N-hydroksi-bentsotriatsolia (159,1 mg, 1,04 mmol) ja 1-(3-dimetyyli-aminopropyyli)-3-etyylikarbodi-imidihydrokloridia (EDC) 20 (147,8 mg, 0,77 mmol), liuotettiin 1,0 ml:aan N,N- dimetyyliformamidia (DMF) ja annettiin reagoida 30 minuutin ajan 0 °C:ssa. Osan B mukaista amiinia (261,9 mg, 0,646 mmol) liuotettuna 0,5 ml:aan N,N-dimetyyliformamidia lisättiin edellä mainittuun seokseen ja seosta sekoitettiin huo-25 neenlämpötilassa 16,5 tuntia. Liuos kaadettiin sitten 75 ml:aan kyllästettyä natriumvetykarbonaattiliuosta ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattiuutteet pestiin 5-%:isella sitruunahapon vesiliuoksella, kyllästetyllä natri-umvetykarbonaattiliuoksella, natriumkloridiliuoksella, kui-30 vattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin valkoinen vaahto, 326,3 mg. Tämä materiaali puhdistettiin flashkromatografialla silika-geelillä eluoimalla etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 213,6 mg, 64 %, puhdasta tuotetta valkoisena vaahtona, FAB 35 MS; MH+ ~ 554.

29

Esimerkki 12 Ϊ 1 3A : S | fSTt°CH3 ch3 oh yJ>^ooH3 [1SI1R* (R*) , 2S*] ] -N- t2-hydroksi-3- [ (2-metyylipro-pyyli) (3,4-dimetoksifenyylisulfonyyli)amino] -1-(fenyylime-5 tyyli )propyyli] -2-metyyli-3- (metyylisulfonyyli)propaani-amidin valmistus

Osa A

Liuosta, jossa oli esimerkin 3, osan A mukaista tuotetta {1,5356 g, 4,14 mmol) ja trietyyliamiinia (522 mg, 10 5,17 mmol) 15 ml:ssa dikloorimetaania, käsiteltiin 3,4-di- metoksibentseenisulfonyylikloridilla (1,0087 g, 4,26 mmol) huoneenlämpötilassa 14 tuntia. Liuotin poistettiin vakuu-missa ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin ja pestiin sitten 1 N kaliumvetysulfaattiliuoksella, kyllästetyllä 15 natriumvetykarbonaattiliuoksella, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 2,147 g, 90,5 % valkoista kiintoainetta, sp. 124 - 127 °C, HRFAB MS; M+Li; C3oH38N207S+Li: lie laskettu: 577,2560, saatu: 577,2604.

20 Osa B

Liuosta, jossa oli osan A mukaista karbamiinihappo-tuotetta {513 mg, 0,90 mmol) 30 ml:ssa metanolia, sekoitettiin 20 mg:n kanssa palladiummusta-katalyyttiä ja 10 ml:n kanssa muurahaishappoa 15 tuntia huoneenlämpötilassa. Kata-25 lyytti poistettiin suodattamalla piimään läpi ja suodos väkevöitiin vakuumissa ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin. Etyyliasetaattiliuos pestiin kyllästetyllä natriumve-tykarbonaattiliuoksella, natriumkloridiliuoksella ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja 30 väkevöitiin vakuumissa, jolloin saatiin valkoinen kiintoai- 30 ne, 386 rag, 98 %, sp 123 - 130 °C, FAB MS; M+Li+ = 443, joka käytettiin suoraan seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

Osa c 5 Seos, jossa oli 2- (S) -metyyli-3-metyylisulfon.yyli- propionihappoa (128 mg, 0,77 ramol), N-hydroksibentsotri-atsolia (179,9 mg, 1,17 mmol) ja 1-(3-dimetyyliamino-propyyli)-3-etyylikarbodi-imidihydrokloridia (EDC) (177,3 mg, 0,92 mmol), liuotettiin 1,5 ml:aan N,N-dimetyyliformamidia 10 (DMF) ja annettiin reagoida 30 minuutin ajan 0 °C:ssa. Osan B mukaista amiinia (359 mg, 0,82 mmol) liuotettuna 1 ml:aan N,N-dimetyyliformamidia lisättiin edellä mainittuun seokseen ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 48 tuntia. Liuos kaadettiin sitten 75 ml:aan kyllästettyä natriumvety-15 karbonaattiliuosta ja uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyli-asetaattiuutteet pestiin 5-%:isella sitruunahapon vesiliuoksella, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 20 kirkas öljy, 220 mg. Tämä materiaali kiteytettiin heksaa-ni/etyyliasetaattiseoksesta, jolloin saatiin 178 mg, 40 % puhdasta tuotetta, sp. 130 - 133 °C. HRFAB MS, M+Li+; C27H40N2O8S2L1: lie laskettu: 591,2386, saatu: 591,2396.

Esimerkki 13 25 [IS[1R*(R*)g2S*3]-N-[2-hydroksi-3-[{2-metyylipro- pyyli) (4-hydroksifenyylisulfonyyli)amino] -1-{fenyylimetyy-li)propyyli]»2-metyyli-3-(metyylisulfonyyli)propaaniamidin valmistus

O

H 1 °v '? —N"SV^j 0/λ0 ch3 h oh M®^Aoh 31

Osa Ά

Liuos, jossa oli 0,98 g (1,85 mmol) [2 - (R) -h.yd.rok~ si-3-[[(4-fluorifenyyli)sulfonyyli](2-metyylipropyyli)amino] -1- { S) - ( fenyylimetyyli)propyyli]fenyylimetyyliesteriä 5 3,8 ml:ssa vedetöntä Ν,Ν-dimetyyliformamidia, lisättiin 22 mgraan {7,4 mmol) 80-%:ista natriumhydridiä 2 ml:ssa Ν,Ν-dimetyyliformamidia. Tähän seokseen lisättiin 0,40 g (3,7 mmol) bentsyylialkoholia. Kahden tunnin kuluttua liuos jäähdytettiin 0 °C:seen, vettä lisättiin ja sitten etyyli-10 asetaattia. Orgaaninen kerros pestiin 5-%:isella sitruuna-hapon vesiliuoksella, kyllästetyllä natriumvetykarbonaatti-liuoksella, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 0,90 g raakatuotetta. Tämä kromatografoi-15 tiin emäksisellä alumiinioksidilla käyttäen 3-%:ista meta-noli/metyleenikloridiseosta, jolloin saatiin 0,70 g 2-(R)-hydroksi-3~[(2-metyylipropyyli){4-bentsyylioksifenyyli)sulfonyyli ]amino]-1-(S)-(fenyylimetyyli)propyyliamiinia, syk listä karbamaattia; MS; m/e = 509 (M+H).

2 0 Osa B

Liuokseen, jossa oli 0,65 g (1,28 mmol) osan A mu-kaista syklistä karbamaattia 15 ml:ssa etanolia, lisättiin 2,6 ml (6,4 mmol) 2,5 N natriumhydroksidiliuosta. Tunnin refluksoinnin jälkeen lisättiin 4 ml vettä ja liuosta ref-25 luksoitiin vielä kahdeksan tuntia. Haihtuvat aineet poistettiin, etyyliasetaattia lisättiin, sitten pestiin vedellä, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 550 mg raakaa 2-(R)-hydroksi-3-[(2-metyylipropyyli)(4-bentsyyliok-30 sifenyyli)sulfonyyli]amino]-1-(S)-(fenyylimetyyli}propyyli-amiinia.

Osa c

Liuosta, jossa oli raakaa 2-(R)-hydroksi~3-[(2-metyylipropyyli)(4-bentsyylioksifenyyli)sulfonyyli]amino-1-35 (S)-(fenyylimetyyli)propyyliamiinia 10 mlissa etanolia, hydrogenoitiin 500 mg:n 10-%:ista palladiumia hiilellä 32 -katalyyttiä läsnä ollessa paineessa 50 psig (264,7 kPa) kaksi tuntia. Katalyytti poistettiin suodattamalla ja liuotin poistettiin vakuumissa, jolloin saatiin 330 mg 2-{R)-hydroksi-3-[(2-metyylipropyyli)(4-hydroksifenyyli)sulfonyy-5 li]amino-l-(S)-(fenyylimetyyli)propyyliamiinia, MS; m/e = 393 (M+H).

Osa D

Liuokseen, jossa oli 337 mg (2,03 mmol) 2-(S)~ metyyli-3"(metyylisulfonyyli)propionihappoa ja 423 mg (2,21 10 mmol) N-hydroksibentsotriatsolia 4 ml:ssa vedetöntä M,N-dimetyyliformamidia 0 °C:ssa, lisättiin 423 mg (2,76 mmol) 1-(3-dimetyyliaminopropyyli)-3-etyylikarbodi-imidihydroklo-ridia. Kun seosta oli sekoitettu kaksi tuntia, siihen lisättiin 725 mg (1,84 mmol) osan C mukaista amiinia edeltä 15 ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 17 tuntia. Liuotin poistettiin vakuumissa, etyyliasetaattia lisättiin ja sitten pestiin kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuok-sella, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 939 20 mg raakatuotetta. Kromatografoimalla silikageelillä käyttäen 2 - 5-%:ista metanoli/metyleenikloridiseosta saatiin 533 mg [IS[1R*(R*),2S*]]-N-[2-hydroksi-3-[(2-metyylipropyyli)-(4-hydroksifenyylisulfonyyli)amino]-1-(fenyylimetyyli)pro-pyyli] ~2-metyyli-3- (metyylisulfonyyli)propaaniamidia, MS m/e 25 = 547 (M+Li).

Esimerkki 14

Seuraavia yleisiä menetelmiä voidaan käyttää valmistettaessa lisää keksinnön piiriin kuuluvia yhdisteitä.

Yleinen menetelmä aminoepoksidien valmistamiseksi 3 0 Osa A

Liuokseen, jossa on 0,226 mol N-bentsoyyli-oksikarbonyyli-L-fenyylialaniinikloorimetyyliketonia seoksessa, jossa on 807 ml metanolia ja 807 ml tetrahydrofuraania -2 °C:ssa, lisätään 1,54 ekvivalenttia kiinteää natri-35 umboorihydridiä 100 minuutin aikana. Liuottimet haihdutetaan sitten alennetussa paineessa 40 °C:ssa ja jäännös liu- 33 otetaan etyyliasetaattiin {noin 1 1). Liuos pestään peräkkäin 1 M kaliumvetysulfsattiliuoksella, kyllästetyllä nat-riumvetykarbonaattiliuoksella ja kyllästetyllä natriumklo-ridiliuoksella. Kun se on kuivattu vedettömällä magnesium-5 sulfaatilla ja suodatettu, liuos haihdutetaan alennetussa paineessa. Syntyneeseen öljyyn lisätään heksaania (noin 1 1} ja seos lämmitetään 60 °C:seen samalla sekoittaen. Kun seos on jäähtynyt huoneenlämpötilaan, kiintoaineet otetaan talteen ja pestään 2 1:11a heksaania. Syntynyt kiintoaine 10 kiteytetään uudelleen lämpimästä etyyliasetaatti/heksaa-niseoksesta, jolloin saadaan 32,3 g (43 %) N-bentsyyli- oksikarbonyyli-3-(S)-amino-l-kloori-4-fenyyli-2-(S)-butano-lia, sp. 150 - 151 °C; M+Li+ = 340.

Osa B

15 Liuokseen, jossa on 1,2 ekvivalenttia kaliumhydrok- sidia 968 ml:ssa absoluuttista etanolia huoneenlämpötilassa, lisätään 0,097 mol N-Cbz-3-(S)-amino-l-kloori-4-fenyyli-2-(S)-butanolia. Kun seosta on sekoitettu 15 minuuttia, liuotin haihdutetaan alennetussa paineessa ja 20 kiintoaineet liuotetaan metyleenikloridiin. Kun seos on pesty vedellä, kuivattu magnesiumsulfaatilla, suodatettu ja haihdutettu, saadaan valkoinen kiintoaine. Kiteyttämällä uudelleen lämpimästä etyyliasetaatti/heksaaniseoksesta saadaan N-bentsyylioksikarbonyyli-3-(S)-amino-1,2-(S)-epoksi-25 4-fenyylibutaani.

Vaihtoehtoinen menetelmä aminoepoksidien valmistamiseksi

Vaihe A

Liuos, jossa on fenyylialaniinia (50,0 g, 0,302 30 mol), natriumhydroksidia (24,2 g, 0,605 mol) ja kaliumkarbonaattia (83,6 g, 0,605 mol) vedessä (500 ml), kuumennetaan 97 °C:seen. Bentsyylibromidia (108,5 ml, 0,912 mol) lisätään sitten hitaasti (lisäysaika noin 25 minuuttia). Seosta sekoitetaan sitten 97 °C:ssa 30 minuuttia. Liuos 35 jäähdytetään huoneenlämpötilaan ja uutetaan tolueenilla (2 x 250 ml) . Yhdistetyt orgaaniset kerrokset pestään sit- 34 ten vedellä, natriumkloridiliuoksella, kuivataan magnesium-sulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään, jolloin saadaan öljymäinen tuote. Raakatuote käytetään sitten seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

5 Vaihe B

Edellisestä vaiheesta saatu raaka bentsyloitu tuote liuotetaan tolueeniin (750 ml) ja jäähdytetään -55 °C:n lämpötilaan. 1,5 M DIBAL-H-liuos tolueenissa (443,9 ml, 0,666 mol) lisätään sitten siten, että lämpötila pysyy vä-10 Iillä -55 - -50 °C (lisäysaika noin 1 tunti). Seosta sekoitetaan 20 minuuttia -55 °C:ssa. Reaktio lopetetaan -55 °C:ssa lisäämällä hitaasti metanolia (37 ml). Kylmä liuos kaadetaan sitten kylmään (5 °C) 1,5 N kloorivetyhap-poliuokseen (1,8 1). Saostunut kiintoaine (noin 138 g) suo-15 datetaan pois ja pestään tolueenilla. Kiintoaine suspendoi-daan tolueenin (400 ml) ja veden (100 ml) seokseen. Seos jäähdytetään 5 °C:seen, käsitellään 2,5 N natriumhydroksi-diliuoksella (186 ml) ja sekoitetaan sitten huoneenlämpötilassa, kunnes kiintoaine on liuennut. Tolueenikerros erote-20 taan vesifaasista ja pestään vedellä ja natriumkloridiliuoksella, kuivataan magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja liuos väkevöidään tilavuuteen 75 ml (89 g) . Etyyliasetaattia (25 ml) ja heksaania (25 ml) lisätään jäännökseen, jolloin alkoholituote rupeaa kiteytymään. 30 minuutin kuluttua 25 lisätään vielä 50 ml heksaania kiteytymisen edesauttamiseksi. Kiintoaine suodatetaan pois ja pestään 50 ml:11a heksaania, jolloin saadaan noin 35 g materiaalia. Toinen annos materiaalia voidaan eristää suodattamalla emäliuos uudelleen. Kiintoaineet yhdistetään ja kiteytetään uudelleen 30 etyyliasetaatista (20 ml) ja heksaanista (30 ml), jolloin saadaan kahtena annoksena noin 40 g (40 % L-fenyyliala-niinista) analyyttisesti puhdasta alkoholituotetta. Emäliu-okset yhdistetään ja väkevöidään (34 g) . Jäännös käsitellään etyyliasetaatilla ja heksaanilla, jolloin saadaan vie-35 lä 7 g (noin 7 %:n saanto) hiukan epäpuhdasta kiinteää tuo- 35 tetta. On mahdollista edelleen optimoida talteenotto emä-liuoksesta.

Vaihe C

Liuos, jossa on oksalyylikloridia (8,4 ml, 0,096 5 mol) dikloorimetaanissa (240 ml), jäähdytetään -74 °C:n lämpötilaan. DMSO:n (12,0 ml, 0,155 mol) liuos dikloorimetaanissa (50 ml) lisätään sitten hitaasti siten, että lämpötila pysyy -74 °C:ssa (lisäysaika noin 1,25 tuntia). Seosta sekoitetaan viisi minuuttia ja siihen lisätään alko-10 holin (0,074 mol) liuos 100 ml:ssa dikloorimetaania (lisäysaika noin 20 minuuttia, lämpötila -75 - -68 °C). Liuosta sekoitetaan -78 °C:ssa 35 minuuttia. Trietyyliamiinia (41,2 ml, 0,295 mol) lisätään sitten 10 minuutin aikana (lämpötila -75 - -68 °C) , jolloin ammoniumsuola saostuu.

15 Kylmää seosta sekoitetaan 30 minuuttia ja sitten vettä (225 ml) lisätään. Dikloorimetaanikerros erotetaan vesifaasista ja pestään vedellä ja natriumkloridiliuoksella, kuivataan magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja liuos väkevöidään. Jäännös laimennetaan etyyliasetaatilla ja heksaanilla ja 20 suodatetaan ammoniumsuolan edelleen poistamiseksi. Suodos väkevöidään, jolloin saadaan haluttu aldehydituote. Aldehy-di käytetään seuraavassa vaiheessa ilman puhdistusta.

Kirjallisuudessa on Swern-hapetukselle ilmoitettu korkeampia lämpötiloja kuin -70 °C. Muut Swern-hapetuksen 25 muunnelmat ja vaihtoehdot ovat myös mahdollisia.

Liuos, jossa on raakaa aldehydiä (0,074 mol) ja kloorijodimetaania (7,0 ml, 0,096 mol) tetrahydrofuraanissa (285 ml), jäähdytetään -78 °C:seen. 1,6 M n-butyylilitiumin heksaaniliuosta (25 ml, 0,040 mol) lisätään siten, että 30 lämpötila pysyy -75 °C:ssa (lisäysaika noin 15 minuuttia). Ensimmäisen lisäyksen jälkeen lisätään vielä kloorijodimetaania (1,6 ml, 0,022 mol) sekä n-butyylilitiumia (23 ml, 0,037 mol) pitäen lämpötila -75 °C:ssa. Seosta sekoitetaan 15 minuuttia. Kutakin reagenssia, kloorijodimetaania (0,7 35 ml, 0,010 mol) ja n-butyylilitiumia (5 ml, 0,008 mol) lisätään vielä neljä kertaa 45 minuutin aikana -75 °C:ssa.

36 Jäähdytyshaude poistetaan sitten ja liuos lämmitetään 22 °C:seen 1,5 tunnin aikana. Seos kaadetaan 300 ml:aan kyllästettyä ammoniumkloridiliuosta. Tetrahydrofuraaniliuos erotetaan. Vesifaasi uutetaan etyyliasetaatilla (1 x 300 5 ml) . Yhdistetyt orgaaniset kerrokset pestään natriumklori-diliuoksella, kuivataan magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään, jolloin saadaan ruskea öljy (27,4 g). Tuotetta voidaan käyttää seuraavassa vaiheessa ilman puhdistusta. Haluttu diastereomeeri voidaan puhdistaa kiteyttä-10 mällä uudelleen tätä seuraavassa sulfoniamidin muodostumisvaiheessa. Vaihtoehtoisesti voidaan tuote puhdistaa kroma-tografoimalla.

Yleinen menetelmä l/3-diamino-4-fenyylibutan-2-oli-johdannaisten (aminoalkoholien) valmistamiseksi 15 Seos, jossa on amiinia R3NH2 (20 ekvivalenttia) kuivassa isopropyylialkoholissa (20 ml/mmol muutettavaa epoksidia), refluksoidaan ja käsitellään N-Cbz-aminoepok-sidillä, jonka kaava on R2

CbZ^N^<\ I >o

H

20 kiinteän aineen lisäyssuppilosta 10 - 15 minuutin aikana. Kun lisäys on loppuun suoritettu, liuosta refluksoidaan vielä 15 minuuttia ja reaktion etenemistä seurataan TLCrllä. Reaktioseos väkevöidään vakuumissa, jolloin saadaan öljy ja käsitellään sitten n-heksaanilla sekoittamalla 25 sitä nopeasti, jolloin rengas avattu -materiaali saostuu liuoksesta. Saostuminen on yleensä mennyt loppuun tunnissa ja tuote eristetään sitten suodattamalla Buchner-suppilolla ja ilmakuivataan. Tuote kuivataan edelleen vakuumissa. Tällä menetelmällä saadaan aminoalkoholeja, jotka ovat tar-30 peeksi puhtaita useimpia tarkoitusperiä varten.

37

Taulukossa 1 esitetään edustavia aminoalkoholeja, jotka on valmistettu edellä kuvatun yleisen menetelmän mukaisesti .

5 Taulukko 1 rö

OH

Koe R3 1 i-butyyli 2 CH3 3 1-propyyli 4 -CH2CH(CH3)2 5 1-propyyli 6 Fenyyli 7 Bentsyyli g Sykloheksyylimetyyli g Sykloheksyyli 10 2-naftyylimetyyli 11 n-butyyli 12 n-pentyyli X3 n-heksyylx X4 p-metoksioksibentsyyli X3 2-pyridyylimetyyli 16 4-pyridyylimetyyli n-butoksi -j_g p-fluoribentsyyli 38

Yleinen menetelmä aminoalkoholien ja sulfonyyliha-lidien tai sulfonyylianhydridien reaktiolle: sulfoniamidien valmistus

Liuokseen, jossa on N-[3-(S)-bentsyylioksikarbonyy-5 liamino-2- (R) -hydroksi~4-fenyylibutyyli] -N-isoamyyliamiinia (2,0 g, 5,2 mmol) ja trietyyliamiinia (735 μΐ, 5,5 mmol) dikloorimetaanissa (20 ml), lisätään tipoittain metaanisul-fonyylikloridia (400 μΐ, 5,2 mmol). Reaktioseosta sekoitetaan kaksi tuntia huoneenlämpötilassa, sitten dikloorime-10 taaniliuos väkevöidään noin 5 ml:ksi ja laitetaan silika-geelipylvääseen (100 g) . Pylväs eluoidaan kloroformilla, joka sisältää 1 %:n etanolia ja 1 %:n metanolia.

Vaihtoehtoisesti voidaan N-[3-(S)-bentsyylioksikar-bonyyliamino-2-(R)-hydroksi-4-fenyylibutyyli]-N-isoamyyli-15 amiinin {1,47 g, 3,8 mmol) , trietyyliamiinin (528 μΐ, 3,8 mmol) ja bentseenisulfonyylikloridin (483 μΐ, 3,8 mmol) reaktiosta saada vastaava (fenyylisulfonyyli)aminojohdannainen .

Seuraavassa taulukossa 2 esitetään edustavia sul-20 foniamideja, jotka on valmistettu edellä kuvatun menetelmän mukaisesti.

Taulukko 2 39 ~

n O

I v

Cbz·—XR4 I i3 OH R3

Koe R3 R4 1 isoamyyli p-fluorifenyyli 2 isoamyyli p-nitrofenyyli 3 isoamyyli o-nitrofenyyli 4 isoamyyli S-naftyyli 5 isoamyyli 2-tienyyli 6 isoamyyli bentsyyli 7 isobutyyli p-fluorifenyyli 8 p-fluoribentsyyli fenyyli 9 4-metyylipyridyyli fenyyli 10 sykloheksyylimetyyli fenyyli 11 allyyli fenyyli 12 propyyli fenyyli ] 3 syklopropyylimetyyli fenyyli 14 metyyli fenyyli 15 propargyyli fenyyli 1£ isoamyyli p-kloorifenyyli

Taulukko 2 (jatkoa) 40

Koe R3 R4 17 isoamyyli p-metoksifenyyli 18 isoamyyli ra-nitrofenyyli 19 isoamyyli m-trifluorimetyylifenyyli 20 Isoamyyli o-metoksikarbonyylifenyyli 21 isoamyyli p-asetamidofenyyli 22 isobutyyli fenyyli 23 -CH2Ph -Ph 24 -CH2~^^-F -Ph 25 -CH2 ~o -ph 26 ~CH2~<(0)“0CH3 -Ph 27 -CH2 ~(Öf -Ph 28 -CH2 —<1 -Ph 29 -CH2CH=CH2 “Ph 30 _Ph 31 —^ -Ph 32 -CH2CH2Ph -Ph 33 -CH2CH2CH2CH20H -Ph 34 -CH2CH2N(CH3)2 -Ph 3 5 "CH2CH2-N 'O -Ph N_f 36 -CH3 -Ph 37 -CH2CH2CH2SCH3 -Ph

Taulukko 2 (jatkoa) 41

Koe r4 38 -CH2CH2CH2S(0)2CH3 -Ph 39 -CH2CH2CH(CH3)2 40 -CH2CH2CH(CH3)2 -CH2CH2CH3 41 -CH3CH2CH(CH3)2 -CH3 42 “CH2CH2CH (CH3) 2 43 "CH2CH2CH {CH3) 2 "®~CH3 co2ch3.

44 -CH2CH2CH (CH3) 2 -/rh

45 -CH2CH(CH3)2 -<^-F

46 -CH2CH(CH3)2 -^3)-NHAc 47 -CH2CH(CH3)2 “<5)-ch3 4 8 -CH2CH2CH3 - ^>-OCH3 49 -CH2CH2CH2CH3 -^)-0CH3 5 Yleinen menetelmä suojaryhmien poistamiseksi hydro- genolysoimalla palladiumilla hiilellä Ά. Alkoholiliuotin

Cbz-suojattu peptidijohdannainen liuotetaan me-tanoliin (noin 20 ml/mmol) ja 10-%:ista palladiumia hiilel-10 lä -katalyyttiä lisätään typpiatmosfäärin alla. Reaktioas-tia suljetaan ja huuhdotaan viisi kertaa typellä ja sitten viisi kertaa vedyllä. Paine pidetään arvossa 50 psig (264,7 kPa) 1-16 tuntia ja sitten vety korvataan typellä ja liuos suodatetaan celitekerroksen läpi katalyytin poistamisek-15 si. Liuotin poistetaan vakuumissa, jolloin saadaan vapaa aminojohdannainen, jonka puhtaus on sopiva käytettäväksi suoraan seuraavassa vaiheessa.

42 B. Et ikkahappolluotin

Cbz-suojattu peptidijohdannainen liuotetaan jää-etikkaan {noin 20 ml/rnmol) ja 10-%:ista palladiumia hiilellä -katalyyttiä lisätään typpiatmosfäärin alla. Reaktioas-5 tia suljetaan ja huuhdotaan viisi kertaa typellä ja sitten viisi kertaa vedyllä. Paine pidetään arvossa 40 psig (275,8 kPa) noin kaksi tuntia. Vety korvataan sitten typellä ja liuos suodatetaan celitekerroksen läpi katalyytin poistamiseksi. Suodos väkevöidään ja syntynyt tuote liuotetaan ve-10 det töinään eetteriin ja haihdutetaan kuiviin kolme kertaa. Lopputuote, asetaattisuola, kuivataan vakuumissa, ja se on puhtaudeltaan sopiva seuraavaa reaktiota varten.

Yleinen menetelmä Boc-suojaryhmän poistamiseksi 4 N kloorivetyhapolla dioksaanissa 15 Boc-suojattu aminohappo- tai peptidijohdannainen käsitellään 4 N kloorivetyhappoliuoksella dioksaanissa sekoittamalla samalla huoneenlämpötilassa. Suojaryhmän pois-tamisreaktio on yleensä tapahtunut 15 minuutissa, reaktion etenemistä seurataan ohutkerroskromatografiällä (TLC). Kun 20 reaktio on mennyt loppuun, dioksaaniylimäärä ja kloorivety poistetaan haihduttamalla vakuumissa. Viimeiset dioksaani-ja kloorivetyrippeet poistetaan parhaiten haihduttamalla uudelleen vedettömästä eetteristä tai asetonista. Näin saatu hydrokloridisuola kuivataan huolellisesti vakuumissa ja 25 se sopii jatkoreaktioita varten.

Menetelmiä sulfonyyliyhdisteiden valmistamiseksi

Edellä esimerkeissä 13A, 13B ja 13C kuvatut mene telmät kuvaavat menetelmiä sulfonyylialkanoyyliyhdisteiden valmistamiseksi, jotka voidaan kytkeä edellä valmistettui-30 hin sulfoniamideihin.

43

Esimerkki 14A

O

ch3\ JL

>Ctoh 0 0 CHa 2- (S) -me tyyli-3- (metyylisulfonyyli)propionihapon valmistus 5 Liuokseen, jossa oli 10 g D~(-)-(S)-bentsoyyli-b- merkaptoisovoihappo-t-butyyliesteriä 20 ml:ssa metanolia, kuplitettiin kaasumaista ammoniakkia 0 °C:ssa. Reaktio sai lämmetä huoneenlämpötilaan, sitä sekoitettiin yön yli ja väkevöitiin alennetussa paineessa. Syntynyt kiintoaineen 10 (bentsamidi) ja nesteen seos suodatettiin, jolloin saatiin 5,21 g vaaleaa öljyä, joka jähmettyi. Tämä identifioitiin 2-(S)-metyyli-3-merkaptopropionihappo-t-butyyliesteriksi.

Liuokseen, jossa oli 5,21 g 2-(S)-metyyli-3-mer-kaptopropionihappo-t-butyyliesteriä 75 ml:ssa tolueenia 15 0 °C:ssa, lisättiin 4,50 g 1,8-diatsabisyklo[5.4.0]undek-7- eeniä ja 1,94 ml metyylijodidia. Kun seosta oli sekoitettu 2,5 tuntia huoneenlämpötilassa, haihtuvat aineet poistettiin, etyyliasetaattia lisättiin, pestiin laimealla kloori-vetyhapolla, vedellä, natriumkloridiliuoksella, kuivattiin 20 ja väkevöitiin, jolloin saatiin 2,82 g vaaleaa Öljyä, joka identifioitiin 2- (S)-metyyli-3-(tiometyyli)propionihappo-t-butyyliesteriksi.

Liuokseen, jossa oli 2,82 g 2-(S)-metyyli-3-(tio-metyyli)propionihappo-t-butyyliesteriä 50 ml:ssa etikkahap-25 poa, lisättiin 5,85 g natriumperboraattia ja seosta lämmitettiin 17 tuntia 55 °C:ssa. Reaktioseos kaadettiin veteen, uutettiin metyleenikloridilla, pestiin natriumvetykarbo-naattiliuoksella, kuivattiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 2,68 g 2-(S)-metyyli-3-(metyylisulfonyyli)propioni-30 happo-t-butyyliesteriä valkoisena kiintoaineena.

2,68 g:aan 2-(S)-metyyli-3-(metyylisulfonyyli)propionihappo-t-butyyliesteriä lisättiin 20 ml 4 N kloorivety-happo/dioksaaniseosta ja seosta sekoitetiin 19 tuntia huo- 44 neenlämpötilassa. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 2,18 g raakatuoteta, joka kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/heksaaniseoksesta, jolloin saatiin 1,44 g 2-(S)-metyyli-3-(metyylisulfonyyli)propioni-5 happoa valkoisina kiteinä.

Esimerkki 14B

Osa Ά

Liuos jossa oli metyylimetakrylaattia (7,25 g, 72,5 nunol) ja f enetyylimerkaptaania (10,0 g, 72,5 mmol) 100 10 ml:ssa metanolia, jäähdytettiin jäähauteessa ja käsiteltiin natriummetoksidilla (100 mg, 1,85 mmol). Liuosta sekoitettiin typen alla kolme tuntia ja väkevöitiin vakuumissa, jolloin saatiin öljy, joka liuotettiin eetteriin ja pestiin 1 N kaliumvetysulfaattiliuoksella, kyllästetyllä natrium-15 kloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 16,83 g, 97,5 %, metyyli-2-(R,S)-metyyli-4-tia-6-fenyyliheksano-aattia öljynä. TLC Si02:lla eluoimalla 20:1 heksaa-ni/etyyliasetaattiseoksella (v:v) Rf = 0,41. Vaihtoehtoi-20 sesti voidaan metyylimetakrylaatin sijaan käyttää 3-bromi- 2-metyylipropionaattia.

Osa B

Liuos, jossa oli metyyli-2-(R,S)-metyyli-4-tia-6-fenyyliheksanoaattia (4,00 g, 16,8 mmol) 100 ml:ssa dikloo-25 rimetaania, sekoitettiin huoneenlämpötilassa ja käsiteltiin annoksittain meta-klooriperoksibentsoehapolla (7,38 g, 39,2 mmol) noin 40 minuutin aikana. Liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 16 tuntia ja suodatettiin sitten ja suodos pestiin kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella, 1 N 30 natriumhydroksidiliuoksella, kyllästetyllä natriumkloridi-liuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 4,50 g, 99 %, haluttua sulfonia. Puhdistamaton sulfoni liuotettiin 100 ml:aan tetrahydrofuraania ja käsiteltiin liuoksella, jossa 35 oli litiumhydroksidia (1,04 g, 24,5 mmol) 40 ml;ssa vettä. Liuosta sekoitettiin kaksi minuuttia huoneenlämpötilassa ja 45 väkevöitiin vakuumissa. Jäännös tehtiin sitten happamaksi 1 N kaliumvetysulfaattiliuoksella pH-arvoon 1 ja uutettiin sitten kolme kertaa etyyliasetaatilla. Yhdistetty etyyli-asetaattiliuos pestiin kyllästetyllä natriumkloridiliuok-5 sella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin valkoinen kiintoaine. Kiintoaine liuotettiin kiehuvaan etyyliasetaatti/hek-saaniseokseen ja sai seistä rauhassa, jolloin muodostui valkoisia neuloja, jotka eristettiin suodattamalla ja ilma-10 kuivattiin, jolloin saatiin 3,38 g, 79 %, 2-(R,S)-metyyli- 3-(S-fenetyylisulfonyyli)propionihappoa, sp. 91 - 93 °C.

Osa C

Liuos, jossa oli 2-(R,S)-metyyli-3-(β-fenetyylisul-fonyyli)propionihappoa (166,1 mg, 0,65 mmol), N-hydroksi-15 bentsotriatsolia (HOBT) (146,9 mg, 0,97 mmol) ja l-(3-di-metyyliaminopropyyli)-3-etyylikarbodi-imidihydrokloridia (EDC) (145,8 mg, 0,75 mmol} 4 ml:ssa N,N-dimetyyliformami- dia (DMF), jäähdytettiin 0 °C:seen ja sitä sekoitettiin 30 minuutin ajan 0 °C:ssa. Tämä liuos käsiteltiin sitten halu-20 tulla sulfoniamidi-isosteerillä ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 16 tuntia. Liuos kaadettiin 30 ml:aan 60-% risesti kyllästettyä natriumvetykarbonaattiliuosta. Vesipitoinen liuos dekantoitiin orgaanisesta jäännöksestä. Orgaaninen jäännös liuotettiin dikloorimetaaniin ja pestiin 25 10-%:isella sitruunahapon vesiliuoksella, natriumkloridi-liuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin. Seos voidaan flashkromatogra-foida silikageelillä eluoimalla 1:1 heksaani/ etyyliase-taattiseoksella, jolloin saadaan erotetut diastereomeerit.

3 0 Esimerkki 14C

Osa A

Liuos, jossa oli metyyli-2-(bromimetyyli}akrylaat-tia (26,4 g, 0,148 mol) 100 ml;ssa metanolia, käsiteltiin annoksittain natriummetaanisulfinaatilla (15,1 g, 0,148 mmol) 35 10 minuutin aikana huoneenlämpötilassa. Liuosta sekoitet tiin huoneenlämpötilassa 1,25 tuntia ja se väkevöitiin va- 46 kuumissa. Jäännös liuotettiin veteen ja uutettiin neljä kertaa etyyliasetaatilla. Yhdistetty etyyliasetaattiliuos pestiin kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöi-5 tiin, jolloin saatiin valkoinen kiintoaine, 20,7 g, joka liuotettiin kiehuvaan asetoni/metyyli-tert-butyylieetteriin ja annettiin seistä, jolloin muodostui puhtaita metyyli-2-(metyylisulfonyylimetyyli) ) akrylaattikiteitä 18,0 g, 68 %, sp. 65 - 68 °C.

10 Osa B

Liuos, jossa oli metyyli-2-(metyylisulfonyylimetyy-li)}akrylaattia (970 mg, 5,44 mmol} 15 ml:ssa tetrahydrofu-raania, käsiteltiin liuoksella, jossa oli litiumhydroksidia (270 mg, 6,4 mmol) 7 ml:ssa vettä. Liuosta sekoitettiin 15 viisi minuuttia huoneenlämpötilassa ja tehtiin sitten happamaksi 1 ISI kaliumvetysulfaattiliuoksella pH-arvoon 1 ja uutettiin sitten kolme kertaa etyyliasetaatilla. Yhdistetty etyyliasetaattiliuos kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 793 20 mg, 89 %, 2-(metyylisulfonyylimetyyli))akryylihappoa, sp.

147 - 149 °C.

Osa C

Liuos, jossa oli 2-(metyylisulfonyylimetyyli))akryylihappoa (700 mg, 4,26 mmol) 20 ml: ssa metanolia, lai-25 tettiin Fisher-Porter-pulloon yhdessä 10-%:isen palladiumia hiilellä -katalyytin kanssa typpiatmosfäärin alla. Reaktio-astia suljettiin ja huuhdottiin viisi kertaa typellä ja sitten viisi kertaa vedyllä. Painetta pidettiin arvossa 50 psig (264,7 kPa) 16 tuntia ja sitten vety korvattiin typel-30 lä ja liuos suodatettiin celitekerroksen läpi katalyytin poistamiseksi ja suodos väkevöitiin vakuumissa, jolloin saatiin 682 mg, 96 %, 2-(R,S)-metyyli-3-metyylisulfonyyli-propionihappoa.

Osa D

35 Liuos, jossa oli 2~~ (R, S)-metyyli~3-(metyylisulfo- nyyli)propionihappoa (263,5 mg, 1,586 mmol), N-hydroksi- 47 bentsotriatsolia (HOBT) (322,2 mg, 2,13 mmol} ja 1-(3-dimetyyliaminopropyyli) -3-etyylikarbodi-imidihydrokloridia (EDC) (339,1 mg, 1,74 mmol) 4 ml:ssa N,N-dimetyyliforma-midia (DMF), jäähdytettiin 0 °C:seen ja sitä sekoitettiin 5 30 minuutin ajan 0 °C:ssa. Tämä liuos käsiteltiin sitten halutulla sulfoniamidilla ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 16 tuntia. Liuos kaadettiin 60 ml:aan 60-pro-senttisesti kyllästettyä natriumvetykarbonaattiliuosta. Vesipitoinen liuos dekantoitiin orgaanisesta jäännöksestä. 10 Orgaaninen jäännös liuotettiin dikloorimetaaniin ja pestiin 10- %:isella sitruunahapon vesiliuoksella, natriumkloridi-liuoksella, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin haluttu tuote.

Esimerkki 14D

15 Sulfoni-inhibiittoreiden valmistus L-(+)-S-asetyy- 11- β-merkaptovoihaposta

Osa A

Pyörökolviin laitetaan haluttua sulfoniamidi-isosteeriä (2,575 mmol), esim. esimerkin 3, osan C mukainen 20 amiini voidaan kytkeä L~(+)-S-asetyyli-S-merkaptovoihappoon 1-(3-dimetyyliaminopropyyli)-3-etyylikarbodi-imidihydroklo-ridin (EDC) (339,1 mg, 1,74 mmol) läsnä ollessa 10 mlrssa metyleenikloridia ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 16 tuntia. Liuos väkevöidään vakuumissa ja jäännös liuote-25 taan etyyliasetaattiin, pestään 1 N kaliumvetysulfaattiliu-oksella, kyllästetyllä natriumvetykarbonaattiliuoksella, natriumkloridiliuoksella, kuivataan vedettömällä magnesium-sulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään, jolloin saadaan öljy, joka voidaan puhdistaa radiaalikromatografiällä sili-30 kageelillä eluoimalla etyyliasetaatilla, jolloin saadaan puhdas tuote.

Osa B

Liuos, jossa on osan A mukaista tuotetta (0,85 mmol) 10 ml:ssa metanolia, käsitellään vedettömällä ammoni™ 35 akilla noin minuutin aikana 0 °C:ssa. Liuosta sekoitetaan siinä lämpötilassa 16 tuntia ja väkevöidään vakuumissa, jolloin saadaan haluttu tuote, joka voidaan käyttää suoraan seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

Osa C

48

Liuos, jossa on osan B mukaista tuotetta (0,841 5 mmol) 10 ml:ssa kuivaa tolueenia typen alla, käsitellään nopeasti peräkkäin 1,8-diatsabisyklo[5.4.03undek-7-eenillä, (DBU), (128,1 mg, 0,841 mmol) ja jodimetaanilla (119,0 mg, 0,841 mmol). Kun reaktioseos on ollut 30 minuuttia huoneenlämpötilassa, se laimennetaan etyyliasetaatilla, pestään 1 10 N kaliumvetysulfaattiliuoksella, kyllästetyllä natriumvety-karbonaattiliuoksella ja natriumkloridiliuoksella. Kun liuos on kuivattu vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettu ja väkevöity vakuumissa, saadaan haluttu tuote, joka voidaan käyttää suoraan seuraavassa vaiheessa.

15 Osa D

Liuosta, jossa on osan C mukaista tuotetta (0,73 mmol) ja natriumperboraattia (500 mg, 3,25 mmol) 30 ml:ssa etikkahappoa, lämmitettiin 16 tuntia 55 °C:ssa. Reaktioseos väkevöidään vakuumissa ja jäännös liuotetaan etyyliasetaat-20 tiin, pestään vedellä, kyllästetyllä natriumvetykarbonaat-tiliuoksella, kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella, kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään, jolloin saadaan haluttu tuote.

Taulukossa 3 esitetään edustavia sulfoneja, jotka 25 on valmistettu edellä kuvatun yleisen menetelmän mukaisesti .

49

Taulukko 3 0 rX^Aoh °'*o 5h3

Koe 1 CH3 - 2 PhCH2CH2“ 3 Ph-

Yleinen menetelmä sulfonyyliyhdisteiden kytkemiseksi sulfoniamideihin 5 Seos, jossa on sulfonyylialkanoyyliyhdistettä (noin 1 mmol), N-hydroksibentsotriatsolia (1,5 mmol) ja 1- (3 -dimetyyliaminopropyyli)-3-etyylikarbodi-imidihydrokloridia (EDC) (1,2 mmol), liuotetaan sopivaan liuottimeen, kuten Ν,Ν-dimetyyliformamidiin, ja annetaan reagoida noin 30 mi-10 nuutin ajan 0 °C:ssa. Sulfoniamidia (1,05 mmol) liuotetaan Ν,Ν-dimetyyliformamidiin, lisätään edellä mainittuun seokseen ja seosta sekoltaan huoneenlämpötilassa aikana, joka on riittävä, jotta reaktio tapahtuisi. Liuos kaadetaan sitten kyllästettyyn natriumvetykarbonaattilluokseen ja uute-15 taan esim. etyyliasetaatilla. Uutteet pestään, kuivataan, suodatetaan ja väkevöidään. Syntynyt materiaali kiteytetään sitten sopivasta liuottimesta tai liuotinseoksesta, kuten heksaanista ja etyyliasetaatista, jolloin saadaan tuote.

Seuraavassa taulukossa esitetään edustavia yhdis-20 teitä, jotka on valmistettu näiden yleisten menetelmien mukaisesti .

50 (oi

o o R1 OH

Koe R1 1 -CH3 2 -CH2CH3 3 -CH(CH3)2 4 ~C{CH3)3

Esimerkki 15 Käyttämällä hyväksi esimerkeissä 1-14 esitettyjä 5 yleisiä ja erityisiä menetelmiä voitaisiin valmistaa taulukoiden 4-8 mukaisia yhdisteitä.

51

Taulukko 4 η o £ J I ] ch3 h oh r3

Koe R3 K4 1 CH3 n-butyyli 2 i-butyyli CH3 3 i-butyyli n-butyyli 4 i-butyyli sek-butyyli 5 i-propyyli n-butyyli 6 i-propyyli n-butyyli 7 C5H5 n-butyyli 3 -CH2 n-butyyli 9 CF3 10 -CH2 -Q fenyyli 11 —O CH3 12 i-butyyli n-propyyli 13 i-butyyli -CH2CH(CH3)2 /m““\ 14 R) -CH (CH3 ) —CH3

Taulukko 4 (jatkoa) 52

Koe r3 r4 15 ~CH2—(r~~^ i-propyyli 16 -CH2—-CH2CH2CH (CH3) 2 17 i-Butyl -CH2CH3 18 i-Butyl -CB(CH3)2

19 i-Butyl -O

20 1-Butyl -O

21 -CH2 -o -(CH2)2CH(CH3)2 22 (CR2)2CH(CH3)2 ~CH{CH3)2 23 i-butyyll -CH(CH3)2 24 i-butyyli -C(CH3)3 25 n-butyyli -C(CH3)3 26 -CH2 -Tg3g) -ch3 27 -CH2"1Q)0) -C6H5 28 -(CH2)2CH(CH3)2 -C(CH3)3

Taulukko 4 (jatkoa) 53

Koe R3 r4 29 -(CH2)2CH(CH3)2 sek-butyyli 30 -CH2C6H5 etyyli 31 -CH2C6H5 fenyyli 32 -(CH2)2C6H5 -CH3 33 -{CH2)2C6H5 fenyyli 34 n-butyyli etyyli 35 n-pentyyll etyyli 36 n-heksyyli etyyli 37 -CH2 -O etyyli 38 "CH2C(CH3)3 -CH3 39 -CH2C (CH3) 3 V=/ /~~\ 40 -CH2CH2-N O -CH3 \_(

Taulukko 4 (j atkoa) 54

Koe R3 R4 41 -CH2C6H5OCH3ipara) -CH3 42 "CH2 -o -CH3 43 ™CH2“^/N ~CH3 44 -(CH2)2CiCH3)3 etyyli 45 -(CH2)2C(CH3)3 n-propyyli 4 6 - (CH2) 40H -CH3 47 -(CH2)4OH fenyyli 48 "CH2"€^“F “CH3 49 -ΟΗ,-©Ν fenyyli 50 -CH2CH(CH3)2 etyyli 55

Taulukko 5 . A .

W*\e/'^A νΛ^ > \ =, H OH |JL^

Koe r1 1 CH2SO2CH3 2 m)-CH(0H)CH3 3 (R,S)CH2SOCH3 4 CH2SO2NH2 5 CH2SCH3 6 CH2CH(CH3)2 7 CH2CH2C(0)NH2 8 {S)“CH(OH)CH3

g -CH2C^CH

56

Taulukko 6 ch*\ /ΟττΎ^ΐ

H oh L IL

CHa Y R

Koe R R2 1 -OCH3 n-Bu 2 -OCH3 sykloheksyylimetyyli 3 -NHAc fl-Bu 4 -ΝΉ2 β-Bu 5 -OCH3 C6H5CH2 6 -NHAc C6H5CH2 7 -NH2 C5H5CH2 8 -NHAc sykloheksyylimetyyli 9 ~C(CH3)3 n-Bu 10 -NH2 sykloheksyylimetyyli 11 -C(CB3}3 C6H5CH2 12 -OCH3 2-naftyylimetyyli 13 -NHAc 2-naftyylimetyyli 14 -NH2 2-naftyylimetyyli 15 -C(CH3)3 2-naftyylimetyyli 16 -OCH3 p-F(C5H4)CH2 17 -ΝΉ2 p-F(C5H4)CH2 18 -NHAc p-F{C6H4)CH2 19 ~C(CH3)3 p-F(C5H4)CH2 20 -CF3 C6H5CH2 2! -C02CH3 CgH5CH2 22 "f WH2 23 Cl c6hSch2 57

Taulukko 7 (¾ —-«'A· % Ξ 4 | ch3 oh r3

Koe r3 r4 3· -CH2CH(CH3)2 -C(CH3)2 2 -CH2CH2CH(CH3)2 - 3 -CH2CH2CH(CH3)2 - 4 -CH2CH2CH(CH3)2 ^

5 -CH2CH2CH(CH3)2 “O

58

Taulukko 8 ä R j?. jj 1 \^° h = lii O Me OH f! 1 ^NH;

Koe R

1 CH3- 2 CH3CH2- 3 CH3CH2CH2- 4 PhCH2CH2~ 5 PhCH2~ 6 Ph- 7 (CH3)2CH- 8 HOCH2CH2-

O

II

9 C6HsCH20 - CCH2

O

il i o H2NOCHz - 1 1 O- 1 2 CH2=CH-CH2- 59

Esimerkki 16

Esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet ovat tehokkaita HIV-proteaasi-inhibittoreita. Käyttämällä hyväksi seuraavassa esitettyä entsyymikoetta esimerkeissä kuvatut 5 yhdisteet inhiboivat HIV-entsyymiä. Esillä olevan keksinnön mukaiset edulliset yhdisteet ja niiden lasketut ICso-arvot {inhiboiva konsentraatio 50 %, so. konsentraatio, jossa in-hibiittoriyhdiste vähentää entsyymiaktiivisuutta 50 %:lla) esitetään taulukossa 16. Entsyymimenetelmä esitetään jäl-10 jempänä. Substraatti on 2-aminobentsoyyli-Ile-Nle-Phe(p-NO2)-Gln-ArgKDEL. Positiivinen kontrolli on MVT-101 (Miller, M. et ai., Science, 246, 1149 (1989). Koeolosuhteet ovat seuraavat.

Koepuskuri: 20 mM natriumfosfaatti, pH 6,4 15 20 %:inen glyseroli

1 mM EDTA 1 mM DTT 0,1 % CHAPS

Edellä kuvattu substraatti liuotetaan dimetyyli-20 sulfoksidiin ja laimennetaan 10-kertaisesti koepuskuriin. Lopullinen substraattikonsentraatio kokeessa on 80 μΜ.

Hiv-proteaasi laimennetaan koepuskurissa lopulliseen entsyymikonsentraatioon 12,3 nanoM perustuen molekyy-lipainoon 10 780.

25 Lopullinen dimetyylisulfoksidikonsentraatio on 14 % ja lopullinen glyserolikonsentraatio on 18 %. Testiyhdiste liuotetaan dimetyylisulfoksidiin ja laimennetaan dimetyyli-sulfoksidilla 10-kertaisesti testikonsentraatioon verrattuna; 10 μΐ entsyymivalmistetta lisätään, materiaalit sekoi-30 tetaan ja seosta inkuboidaan ympäristön lämpötilassa 15 minuuttia. Entsyymireaktio käynnistetään lisäämällä 40 μΐ substraattia. Fluoresenssin lisäys rekisteröidään neljänä aikapisteenä (0, 8, 16 ja 24 minuuttia) ympäristön lämpötilassa. Kukin koe suoritetaan kahdessa astiassa.

Taulukko 9 60

Esimerkki nro IC5 o(nanomol.) 2 3,2 3 3,2 4 3 5 13 6 8,8 7 1,9 8 3,1 9 4,1 10 2,2 11 7,8 12 38

Esimerkki 17 5 Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden te hokkuus määritettiin CEM-solukokeella.

Akuutisti infektoituneiden solujen HlV~inhibitiokoe on automatisoitu tetratsoliumpohjainen kolorimetrinen koe, jonka oleellisesti ovat kuvanneet Pauwles et ai., J. Virol. 10 Methods, 20, 309 - 321 (1988) . Kokeet suoretettiin 96 kuopan kudosviljelmälevyillä. CEM-soluja, CD4+-solulinjaa, kasvatettiin RPMI-1640-alustassa (Gibco), jossa lisäksi oli 10 % vasikansikiön seerumia, ja ne käsiteltiin sitten poly-breenillä (2 pg/ml). Kuhunkin kudosviljelmälevyn kuoppaan 15 laitettiin 80 μΐ alustaa, jossa oli 1 x 104 solua. Kuhunkin kuoppaan lisättiin 100 μΐ testiyhdistettä liuotettuna kudosvil jelmäalustaan (tai alustaa ilman testiyhdistettä kontrollina) lopullisen halutun konsentraation saavuttamiseksi, ja soluja inkuboitiin 37 °C:ssa tunnin ajan. Jäähdy-20 tetty HIV-1-viljelmä laimennettiin viljelmäväliaineella konsentraatioon 5 x 104 TCID50 ml kohti (TCID50 = virusan-nos, joka tartuttaa 50 % kudosviljelmässä olevista soluista), ja 20 μΐ virusnäytettä (joka sisältää 1 000 TCID50 vi- 61 rusta) lisättiin testiyhdistettä sisältäviin kuoppiin ja pelkästään väliainetta sisältäviin kuoppiin (infektoituja kontrollisoluja). Useat kuopat saivat viljelmäväliainetta ilman virusta (infektoitumattomia kontrollisoluja). Samoin 5 määritettiin testiyhdisteiden sisäinen myrkyllisyys lisäämällä väliainetta ilman virusta useisiin testiyhdistettä sisältäviin kuoppiin. Yhteenvetona kudosviljelmälevyt sisälsivät seuraavat kokeet.

Soluja Lääkeaine Viirus 1. + 2.4· + — 3, 4· — 4· 4.4- 4· + 10 Kokeissa 2 ja 4 testiyhdisteiden lopulliset kon- sentraatiot olivat 1, 10, 100 ja 500 pg/ml. Joko atsidoty-midiiniä (AZT) tai dideoksiinosiinia (ddl) käytettiin positiivisena lääkekontrollina. Testiyhdisteet liuotettiin di-metyylisulfoksidiin ja laimennettiin kudosviljelmäväliai-15 neella niin, ettei lopullinen dimetyylisulfoksidikonsent-raatio missään tapauksessa ollut yli 1,5 %. Dimetyylisulf-oksidia lisättiin kaikkiin kontrollikuoppiin sopivana kon-sentraationa.

Viruksen lisäyksen jälkeen soluja inkuboitiin seit-20 semän vuorokautta 37 °C:ssa kostutetussa, 5 % hiilidioksidia sisältävässä atmosfäärissä. Testiyhdisteet voitiin haluttaessa lisätä vuorokausina 0, 2 ja 5. Vuorokautena 7 infektion jälkeen solut kussakin kuopassa suspendoitiin uudelleen ja 100 μ1:η näyte kustakin solususpensiosta pois-25 tettiin testiä varten. 20 μΐ 5 mg/1 3-(4,5-dimetyyli-tiatsol-2-yyli)-2,5-difenyylitetratsoliumbromidia (MTT) lisättiin kuhunkin 100 μ1:η solususpensioon, ja soluja inkuboitiin neljä tuntia 27 °C:ssa, 5 % hiilidioksidia sisältä- 62 vässä ympäristössä. Tämän inkuboinnin aikana elävät solut pelkistävät MTT;n metabolisesti, jolloin syntyy värillinen formazantuote. Kuhunkin näytteeseen lisättiin 100 μΐ 10-%:ista natriumdodekyylisulfaattia 0,01 N kloorivetyhapossa 5 solujen hajottamiseksi, ja näytteitä inkuboitiin yön yli. Absorbanssi 590 nm:ssä määritettiin kullekin näytteelle käyttäen Molecular Devices -mikrolevylukijaa. Kussakin kuoppaerässä absorbanssilukuja verrataan arvioituun virus-kontrolli-infektioon, infektoitumattomaan kontrollisoluvas-10 teeseen sekä testiyhdisteeseen sytotoksisuuden ja viruksen-vastaisen tehokkuuden avulla.

Taulukko 10

Esimerkki nro lC5o{nM) ECsCMnM) TD50 (nM) 2 3,2 12 90 000 3 3,2 10 213 000 4 3 12 >1 000,000 5 13 25 438 000 6 8,8 29 133,000 7 1,9 2 >1 000 000 8 3,1 9 >1 000 000 9 4,1 16 >1 000 000 10 22 223 860 000 11 7,8 45 170 000 12 38 87 77 000 15 Käyttämällä hyväksi edellä esimerkeissä esitettyjä menetelmiä sekä yleistä selitystä ajatellaan, että jäljempänä mainittuja yhdisteitä voitaisiin valmistaa, ja että tällaisilla yhdisteillä olisi HIV-proteaasi-inhibittoreina 20 oleellisesti samanlaisia vaikutuksia kuin esimerkeissä esitetyillä yhdisteillä.

Esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet ovat tehokkaita virustenvastaisia aineita ja erityisesti tehokkaita retrovirusproteaasi-inhibiittoreita, kuten edellä on 63 osoitettu. Esillä olevat yhdisteet ovat siten tehokkaita Hiv-proteaasi-inhibiittoreita. Ajatellaan, että esillä olevat yhdisteet myös inhiboivat muita retroviruksia, kuten muita lentiviruksia, tietyissä muissa HIV-kannoissa, esim.

5 HIV-2, ihmisen T-solu-leukemiavirus, respiratorinen synki-taalinen virus, apinan immunokatovirus, kissan leukemiavi-rus, kissan immunokatovirus, hepadnavirus, sytomegalovirus ja pikornavirus. Esillä olevat yhdisteet ovat siten tehokkaita koidettaessa ja/tai ennalta ehkäistäessä retrovi-10 rusinfektioita.

Esillä olevan keksinnön mukaisilla yhdisteillä voi olla yksi tai useampia asymmetrisiä hiiliatomeja ja ne voivat siten esiintyä optisina isomeereinä sekä niiden rasee-misina tai ei-raseemisina seoksina. Optiset isomeerit voi-15 daan saada erottamalla raseemiset seokset tavanomaisin menetelmin esim. muodostamalla diastereomeerisiä suoloja käsittelemällä ne optisesti aktiivisella hapolla tai emäksellä. Esimerkkejä sopivista hapoista ovat viinihappo, diase-tyyliviinihappo, dibentsoyyliviinihappo, ditoluyyliviini-20 happo ja kamferisulfonihappo, ja sitten diastereomeerien seos erotetaan kiteyttämällä, minkä jälkeen optisesti vapaat emäkset vapautetaan näistä suoloista. Erilainen menetelmä optisten isomeerien erottamiseksi on sellaisen kiraa-lisen kromatografiakolonnin käyttö, joka on valittu maksi-25 moimaan enantiomeerien erottamista. Vielä toinen mahdollinen menetelmä liittyy kovalenttisten diastereomeeristen molekyylien synteesiin saattamalla kaavan I mukaiset yhdisteet reagoimaan optisesti puhtaan hapon kanssa aktivoidussa muodossa tai optisesti puhtaan isosyanaatin kanssa. Synte-30 tisoidut diastereomeerit voidaan erottaa tavanomaisin menetelmin, kuten kromatografoimalla, tislaamalla, kiteyttämällä tai sublimoimalla, ja sitten ne hydrolysoidaan, jolloin saadaan enantiomeerisesti puhdas yhdiste. Kaavan I mukaisia optisesti puhtaita yhdisteitä voidaan myös saada käyttämäl-35 lä optisesti puhtaita lähtöaineita. Nämä isomeerit voivat 64 olla vapaan hapon, vapaan emäksen, esterin tai suolan muodossa.

Esillä olevan keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää suolojen muodossa, jotka on johdettu epäorgaanisis-5 ta tai orgaanisista hapoista. Näihin suoloihin kuuluvat, näihin rajoittumatta, seuraavat: asetaatti, adipaatti, al-ginaatti, sitraatti, asparaginaatti, bentsoaatti, bentsee-nisulfonaatti, bisulfaatti, butyraatti, kamferaatti, kamfe-risulfonaatti, diglukonaatti, syklopentaanipropionaatti, 10 dodekyylisulfaatti, etaanisulfonaatti, glukoheptanoaatti, glyserofosfaatti, hemisulfaatti, heptanoaatti, heksanoaat-ti, fumaraatti, hydrokloridi, hydrobromidi, hydrojodidi, 2-hydroksietaanisulfonaatti, laktaatti, maleaatti, metaani-sulfonaatti, nikotinaatti, 2-naftaleenisulfonaatti, oksa-15 laatti, palmoaatti, pektinaatti, persulfaatti, 3-fenyyli-propionaatti, pikraatti, pivalaatti, propionaatti, sukki-naatti, tartraatti, tiosyanaatti, tosylaatti, mesylaatti ja undekanoaatti. Myös voidaan emäksiset typpipitoiset ryhmät kvaternarisoida aineilla, kuten alemmilla alkyylihalideil-20 la, kuten metyyli-, etyyli-, propyyli- ja butyylikloridillä, bromideilla ja jodideilla; dialkyylisulfaateilla, kuten dimetyyli-, dietyyli-, dibutyyli- ja diamyylisulfaateilla, pitkäketjuisilla halideilla, kuten dekyyli-, lauryyli-, my-ristyyli- ja stearyylikloridilla, -bromidill ja -joclidilla, 25 aralkyylihalideilla, kuten bentsyyli- ja fenetyylibromidil-la ja muilla. Tällöin saadaan veteen tai öljyyn liukenevia tai dispergoitavissa olevia tuotteita.

Esimerkkejä hapoista, joita voidaan käyttää muodostettaessa farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuolo-30 ja, ovat sellaiset epäorgaaniset hapot, kuten kloorivety-happo, rikkihappo ja fosforihappo, sellaiset orgaaniset hapot, kuten oksaalihappo, maleiinihappo, meripihkahappo ja sitruunahappo. Muita esimerkkejä ovat suolat alkalimetalli-en tai maa-alkalimetallien kanssa, kuten natriumin, ka-35 1iumin, kalsiumin tai magnesiumin tai orgaanisten emästen kanssa.

65

Potilaalle yhtenä tai jaettuina annoksina annettu päivittäinen kokonaisannos voi olla esim. 0,001 - 10 mg/kg ruumiinpainoa ja yleisemmin 0,01 - 1 mg/kg. Annosyksikkö-koostumukset voivat sisältää sellaisia määriä osittaisan-5 noksia, että muodostuu päivittäinen annos.

Aktiivisen aineosan määrä, joka voidaan kombinoida kantaja-aineiden kanssa, jotta muodostuisi yksittäinen an-nosmuoto, riippuu hoidettavasta potilaasta ja erityisestä antotavasta.

10 Hoidettaessa sairaustilaa esillä olevan keksinnön mukaisilla yhdisteillä ja/tai koostumuksilla annostusohjel-ma valitaan erilaisten tekijöiden, kuten potilaan tyypin, iän, painon, sukupuolen, ruokavalion ja sairaustilan, taudin vakavuuden, antotavan, farmakologisten näkökohtien, ku-15 ten erityisen käytettävän yhdisteen aktiivisuuden, tehokkuuden, farmakokineettisen ja toksikologisen profiilin, mukaan, käytetäänkö lääkeannostussysteemiä ja annetaanko lääke osana lääkekombinaatiota. Siten varsinaisesti käytetty annostusohjelma voi vaihdella laajasti ja se voi siten poi-20 ketä edellä esitetystä edullisesta annostusohjelmasta.

Esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet voidaan antaa suun kautta, ruuansulatuskanavan ulkopuolella, inha-laatiosuihkulla, peräsuolen kautta tai paikallisesti an-nosyksikkökoostumuksissa, jotka sisältävät tavanomaisia ei-25 myrkyllisiä farmaseuttisesti hyväksyttäviä kantaja-aineita, apuaineita ja liuottimia halutulla tavalla. Paikallinen anto voi myös käsittää transdermaalisen annon, kuten trans-dermaaliset laastarit tai ionihoitovälineet. Termi ruuansulatuskanavan ulkopuolinen tässä yhteydessä käytettynä kä-30 sittää ihonalaiset injektiot, suonensisäiset, lihaksensisäiset ja rintalastansisäiset injektiot.

Injektoitavat valmisteet, kuten esim. steriilit injektoitavat vesi- tai öljypohjaiset suspensiot, voidaan formuloida alalla tunnetulla tavalla käyttäen sopivia dis-35 pergointi- tai suspendointiaineita. Steriili injektoitava valmiste voi myös olla steriili injektoitava liuos tai sus 66 pensio ei-myrkyllisessä, ruuansulatuskanavan ulkopuolella hyväksyttävissä olevassa laimentimessa tai liuottimessa, esim. liuoksena 1,3-butaanidiolissa. Hyväksyttävissä olevia laimentimia tai liuottimia, joita voidaan käyttää, ovat ve-5 si, Ringerin liuos ja isotoninen natriumkloridiliuos. Lisäksi käytetään tavanomaisesti steriilejä rasvaöljyjä liuotin- ja suspendointiaineina. Tätä tarkoitusta varten voidaan käyttää mitä tahansa rasvaöljyseosta mukaan lukien mono- ja diglyseridejä. Lisäksi voidaan injektoitavien liuos-10 ten valmistamisessa käyttää rasvahappoja, kuten öljyhappoa.

Lääkeaineen peräsuoleen tapahtuvaa antoa varten peräpuikot voidaan valmistaa sekoittamalla lääkeaine sopivan ei-ärsyttävän täyteaineen, kuten kaakaovoin ja polyety-leeniglykolien, kanssa, jotka ovat kiinteitä tavallisessa 15 lämpötilassa, mutta nesteytyvät peräsuolen lämpötilassa ja siksi sulavat peräsuolessa ja vapauttavat lääkkeen.

Kiinteät annosmuodot suun kautta tapahtuvaa antoa varten voivat käsittää kapselit, tabletit, pillerit ja gra-nulaatit. Tällaisissa kiinteissä annosmuodoissa vaikuttava 20 yhdiste voidaan sekoittaa vähintään yhden inertin laimenti-men, kuten sakkaroosin, laktoosin tai tärkkelyksen, kanssa. Tällaiset annosmuodot voivat myös käsittää tavallisen käytännön mukaisesti lisäaineita inerttien laimentimien lisäksi, esim. voitelevia aineita, kuten magnesiumstearaattia. 25 Kapseleiden, tablettien ja pillereiden tapauksessa annos-muodot voivat myös käsittää puskurlaineita. Tabletteihin ja pillereihin voidaan lisäksi valmistaa suolessa hajoava kuori.

Nestemäiset annosmuodot suun kautta tapahtuvaa antoa varten voivat käsittää farmaseuttisesti hyväksyttävät 30 emulsiot, liuokset, suspensiot, siirapit ja eliksiirit, jotka sisältävät alalla yleensä käytettäviä inerttejä laimentimia, kuten vettä. Tällaiset koostumukset voivat myös käsittää apuaineita, kuten kostutusaineita, emulgointi- ja suspendointiaineita ja makeutus-, maku- ja hajuaineita.

35 Vaikka keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan antaa ainoina vaikuttavina aineina, niitä voidaan myös käyttää 67 kombinaatiossa yhden tai useamman immunomodulaattorin, vi~ ruksenvastaisen aineen ja muun tulehduksemme tai sen aineen kanssa. Esim. keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan antaa kombinaatiossa AZT:n, DDI:n, DDC:n tai N-butyyli-1-5 deoksinojirimysiinin kanssa ennalta ehkäistäessä tai hoidettaessa AIDS:ia. Annettaessa kombinaationa voidaan terapeuttiset aineet formuloida erillisinä koostumuksina, jotka annetaan samanaikaisesti tai eriaikaisesti, tai terapeuttiset aineet voidaan antaa yhtenä ainoana koostumuksena.

10 Edellä sanottu on lähinnä keksintöä kuvaavaa eikä tarkoitettu keksintöä tai esitettyjä yhdisteitä rajoittavaksi. Alan ammattimiehelle ilmaisiä muunnelmia ja muutoksia on tarkoitettu kuuluviksi keksinnön piiriin ja luonteeseen, siten kun se on kuvattu seuraavissa patenttivaatimuk-15 sissa.

Edellä olevan selityksen perusteella alan ammattimies voi helposti todeta keksinnön oleelliset tunnuspiirteet, ja poikkeamatta sen hengestä ja piiristä, suorittaa erailaisia keksinnön muutoksia ja muunnelmia sovittaakseen 20 sitä erilaisiin käytäntöihin ja olosuhteisiin.

Claims (11)

1. Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten kaavan (I) mukaisten sulfonyylialkanoyyliamino-5 hydroksietyyliaminojohdannaisten ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, O R2 ^S[0]2~R4 R—S[0]r R1 H OH R3 jossa kaavassa R on Ci-8-alkyyli ;

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R on metyyli.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R1 on alkyyli, jossa on 1 - noin 4 hiiliatomia.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen 20 yhdiste, jossa R ja R1 tarkoittavat metyyliä.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R4 on fenyyli, p-metoksifenyyli tai p-aminofenyyli.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R3 on alkyyli, jossa on noin 2 - noin 5 hiiliatomia.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 10 tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R3 on i-amyyli ja R4 on fenyyli.

8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R3 on i-butyyli ja R4 on fenyyli.

9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R3 on n-butyyli ja R4 on fenyyli.

10. Jonkin patenttivaatimuksen 1-9 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mu- 20 kainen yhdiste, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola, jossa hydroksiryhmän stereokemiallinen konfiguraatio on (R) .

10 R1 on Ca-8-alkyyli; R2 on fenyylimetyyli; R3 on Ci-s-alkyyli; ja R4 on fenyyli, joka voi olla substituoitu yhdellä tai useammalla substituent il la, jotka on valittu ryhmästä Ci-g-al-15 koksi, Ci-8-alkanoyyliamino, amino ja hydroksi, tunnettu siitä, että a) amiini, jonka kaava on Rs H 2 OH R3 jossa R2, R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan 20 reagoimaan hapon kanssa, jonka kaava on r—S|Ojf f? TN» R1 jossa R ja R1 tarkoittavat samaa kuin edellä, tai b) sulfonamidi, jolla on kaava f2 % OH R3 jossa R2, R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä, kytketään happoon, jolla on kaava o o CHa 5 saadun yhdisteen tioasetyyliryhmä muutetaan tioliryhmäksi, joka alkyloidaan, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava ö R2 0 0 -..^Αγ-Χ, ch3 oh r3 ja näin saatu yhdiste hapetetaan vastaavaksi sulfoniksi käyttäen sopivia hapettimia, jolloin saadaan halutut seulo raavan kaavan mukaiset yhdisteet o R2 S[OJ2 NH N·^ ch3 oh r3

11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 25 [IS[1R*(R*),2S*]]-N-[2-hydroksi-3-[(2-metyyliprop- yyli)(fenyylisulfonyyli)amino]-1-(fenyylimetyyli)propyyli]-2 -me tyyli-3-(me tyy 1 i s u 1 f onyy 1 i) pr opaan i ami di ,* [IS[1R*{R*},2S*]]-N-[2-hydroksi-3-[(3-metyyli-butyyli) (fenyylisulfonyyli)amino]-1-(fenyylimetyyli)-propyyli]-30 2-metyyli-3~(metyylisulfonyyli)propaaniamidi; [1S[1R*(R*),2S*]]-N-[2-hydroks i-3-[(propyyli)-fenyylisulfonyyli) amino] -1-(fenyylimetyyli)propyyli]-2-metyy-1i-3-(metyy1i sulfonyy 1i)propaaniamidi; [IS[1R*(R*),2S* ]]-N-[2-hydroksi-3-(butyyli)-(fenyy-35 lisulfonyyli)amino]-1-(fenyylimetyyli)propyyli]-2-metyyli- 3-(metyylisulfonyyli}propaaniamidi; [IS[1R*(R*),2S*]]-N~[2-hydroksi-3-[(2-metyyliprop-yyli) (4-metoksifenyylisulfonyyli) amino]-1-(fenyylimetyyli)-propyy1i]-2-metyyli-3-(metyy1isulfonyyli)propaaniamidi; [IS[1R* (R*),2S*]]-N-[2-hydroksi~3-[(butyyli) (4-me-5 toksifenyylisulfonyyli)amino]-1-(fenyylimetyyli)propyyli]-2-metyyli-3-(metyylisulfonyyli)propaaniamidi; [IS[1R*(R*),2S*]]-N-[2-hydroksi-3-[(propyyli)-(4-metoksifenyylisulfonyyli)amino]-1-(fenyylimetyyli)-propyyli]-2-me tyyli-3 -(metyylisulfonyyli)propaaniamidi; 10 [IS[1R*(R*),2S*]]-N-[2-hydroksi-3~[(2-metyyliprop- yyli)(4-asetamido)fenyylisulfonyyli)amino]-1-(fenyylimetyy-li)propyyli]-2-metyyli-3-(metyylisulfonyyli)propaaniamidi; [IS[1R*(R*),2S*]]-N-[2-hydroksi-3-[(3-metyylibut-yyli)(4-aminofenyylisulfonyyli)amino]-1-(fenyylimetyyli)- 15 propyyli]-2-metyyli-3-(metyylisulfonyyli)propaaniamidi: [IS[1R*(R*),2S*3]-N-[2-hydroksi-3-[(2-metyyliprop-yyli)(3,4-dimetoksifenyylisulfonyyli) amino]-1-(fenyylimetyyli) propyy1i]-2-metyy1i-3- (metyylisulfonyyli)propaaniamidi tai 20 [IS[lR*(R*),2S*]]-N-[2-hydroks i-3-[(3-metyyli- foutyyli)(4-metoksifenyylisulfonyyli)amino]-1-(fenyylimetyyli ) propyyli]-2-metyyli-3-(metyylisulfonyyli)propaaniamidi .