FI120147B - Enterokineettinen bentsamidi - Google Patents

Description

X

Enterokineettinen bentaamidi

Keksintö koskee uutta bentsamidijohdannaista ja sen farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuoloja, farrria-5 seuttisia koostumuksia, jotka sisältävät mainittua uutta yhdistettä, menetelmiä mainittujen yhdisteiden ja koostumusten valmistamiseksi, ja niiden käyttöä lääkkeenä, erityisesti hoidettaessa tiloja, joihin liittyy suoliston, erityisesti paksusuolen heikentynyt motiliteetti.

10 Julkaisussamme EP-0 389 037-A, julkaistu 26. syys kuuta 1990, kuvataan N-(3-hydroksi~4-piperidinyyli)(dihyd-robentsofuraani- tai dihydro-2H~bentsopyraani)karboksami-dijohdannaiset ruoansulatuskanavan motiliteettia stimuloivia ominaisuuksia omaavana. Julkaisussamme EP-0 445 862-A, 15 julkaistu 11. syyskuuta 1991, kuvataan N-(4-piperidinyyli) (dihydrobentsofuraani- tai dihydro-2H-bentsopyraani)-karboksamidijohdannaiset myös ruoansulatuskanavan motiliteettia stimuloivia ominaisuuksia omaavina.

Tämän patenttihakemuksen kohdeyhdiste eroaa näistä 20 siten, että sillä on ylivoimaiset enterokineettiset.

Keksintö koskee kaavan I mukaista yhdistettä /—^ ? y~i CH3-0-(CH2)3—n HN-C—<( .1 25 ^

Cl ja sen farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuoloja,.

Kaavan I mukaisen yhdisteen kemiallinen nimi on 4-amino-5-kloori-2,3-dihydro-N- [1- (3-metoksipropyyli) -4-30 piperidinyyli]-7-bentsöfuraanikarboksamidi.

Tässä edellä mainittujen farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditiosuolojen on tarkoitettu käsittävän terapeuttisesti aktiiviset ei-toksiset happoadditiosuolamuo-dot, joita kaavan I mukaiset yhdisteet pystyvät muodosta-35 maan. Viimeksi mainitut voidaan saada mukavasti käsittele- o Δ mällä emäsrauotoa sopivalla hapolla. Sopivat hapot käsittävät esimerkiksi epäorgaanisia happoja, kuten vetyhalogeni-dihappoja, esimerkiksi suola- ja bromivetyhapon; rikki-; typpi-; fosfori- ja vastaavat hapot; ja orgaanisia happoja 5 kuten esimerkiksi etikka-, propaani-, hydroksietikka-, maito-, palorypäle-, oksaali-, maloni-, meripihka- (ts. butaanidikarboksyylihappo), maleiini-, fumaari-, omena-, viini-, sitruuna-, metaanisulfoni-, etaanisulfoni-, bent-seenisulfoni-, p-tolueenisulfoni-, syklamiini-, salisyy-10 li-, p-aminosalisyyli-, pamoiini- ja vastaavat hapot. Käsite additiosuola tässä edellä käytettäessä käsittää myös solvaatit, joita kaavan I mukaiset yhdisteet samoin kuin niiden suolat pystyvät muodostamaan. Sellaisia solvaatteja ovat esimerkiksi hydraatit, alkoholaatit ja vastaavat. 15 Kääntäen voidaan suolamuoto muuttaa vapaaksi emäsmuodoksi käsittelemällä alkalilla. Tämän jälkeen, käsite "kaavan I mukaiset yhdisteet" tarkoittaa kaavan I mukaista yhdistettä samoin kuin sen farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoad-ditiosuoloja, ellei muuta mainita.

20 Kiinnostavia kaavan I mukaisia yhdisteitä ovat hap- poadditiosuolat, jotka on muodostettu käsittelemällä kaavan I mukaisen yhdisteen emäsrauotoa vetyhalohenidihapoilla tai butaanidiharboksyylihapolla.

Edullisia kaavan I mukaisia yhdisteitä ovat 4-ami-25 no-5-kioori-2,3-dihydro-N- [1- (3-metoksipropyyli) -4-piperi-dinyyli]-7-bentsofuraanikarboksamidi monohydrokloridi ja 4-amino-5-kloori-2,3-dihydro-N- [1- (3-metoksipropyyli) -4-piperidinyyli] -7-bentsofuraani-karboksamidi-butaanidioaat-ti (1;1) .

30 Kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa me nettelytavoilla, jotka kuvataan julkaisuissa EP-0 389 037-A ja EP-0 445 862-A. Tässä alla esitetään joukko valmis-tusvaihtoehtoja.

Reaktiotuotteet voidaan eristää seuraavissa valmis-35 tuksissa reaktioseoksesta ja vaadittaessa puhdistaa edel- 3 leen alalla yleisesti tunnetuilla menettelytavoilla, kuten esimerkiksi uuttamalla, tislaamalla, kiteyttämällä, tri-turoimalla ja kromatografiällä.

Kaavan I mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa 5 N--alkyloimalla kaavan II mukaista välituotetta kaavan III mukaisella alkylointireagenssilla, jossa W on sopiva poistuva ryhmä, kuten halogeeni, esimerkiksi kloori; tai sul-fonyylioksi-poistuva ryhmä, esimerkiksi metaanisulfonyyli-oksi (mesylaatti) tai p--tolueenisulfonyylioksi {tosylaat-10 ti) , reaktioinertissä liuottimessa kuten dipolaarisessa aproottisessa liuottimessa, esimerkiksi dimetyyliformami-dissa, sopivan emäksen kuten esimerkiksi trietyyiiamiinin läsnä ollessa. Voidaan myös lisätä sopivaa katalysaattoria kuten kaliumjodidia reaktionopeuden lisäämiseksi.

„ iQ

CH3-0-<CH2)3-W + HN \ NH2 ® NCi (ffl) (Π) 2 0

Kaavan I mukainen yhdiste voidaan myi s valmistaa kaavan IV mukaisen karboksyylihapon tai sen reaktiivisen välituotteen ja kaavan V mukaisen aminiin N-asylointireak-tiolla. Mainittu N-asylointireaktio voidaan suorittaa se-25 koittamalla kahta reagoivaa yhdistettä reaktioinertissä liuottimessa, kuten klooratussa hiilivedyssä, esimerkiksi kloroformissa, tai aromaattisessa .hiilivedyssä, esimerkiksi tolueenissa.

30 0 f ύ CH3-Q‘(CHa)3—NHg + HO—C·——^ \~~~NHa *” ® ci (V) (TV) 4

Edellä mainitut välituotteet ovat alalla tunnettuja, tai niiden valmistus kuvataan julkaisuissa ΞΡ-0 389 037-A ja ΞΡ-0 445 862-A.

Kaavan I mukaisilla yhdisteillä on erinomaiset suo-5 liston motiliteettia stimuloivat ominaisuudet. Erityisesti keksinnön kaavan I mukaisilla yhdisteillä nähdään merkittäviä motiliteettia lisääviä vaikutuksia ohut- ja paksusuolella. Ts. keksinnön kaavan I mukaisilla yhdisteillä on enterokineettisiä ominaisuuksia. Näitä ominaisuuksia tuke-10 vat tässä alla kuvatut farmakologiset esimerkit. Keksinnön kaavan I mukaiset yhdisteet lisäävät ei-adrenergistä ei-kolinergistä (NANC) kiihotusta ja ulostepellettien työntöä paksusuolen läpi. Lisäksi ne nopeuttavat mahan tyhjenemistä ja ohutsuolen sopistusaktiivisuutta, ja niillä on hel-15 pottava vaikutus kolinergisiin hermoihin. Mainituilta yhdisteiltä puuttuvat myös 5-HT2- tai 5-HT3-reseptorianta-gonistiset ominaisuudet. Lisäksi keksinnön mukaisilla yhdisteillä nähdään myös in vivo -aktiivisuutta, mistä saadaan todisteita "Paksusuolen motiliteetin telemetrinen 20 mittaus tajuissaan olevilla koirilla" -testissä.

Käyttökelpoisten enterokinetiikkaa lisäävien omi-naisuuksiensa valossa kohdeyhdisteet voidaan formuloida antotarkoituksista riippuen eri muotoihin.

Keksinnön mukaisten farmaseuttisten koostumusten 25 valmistamiseksi tehokas määrä erityistä yhdistettä, emäs-tai happoadditiosuolamuodossa, aktiivisena valmistusaineena yhdistetään intiimiksi seokseksi farmaseuttisesti hyväksyttävän väliaineen kanssa, joka väliaine voi olla suuressa joukossa erilaisia muotoja antoon halutusta valmis-30 teestä riippuen. Nämä farmaseuttiset koostumukset ovat ha-lutusti yksikköannosmuodossa, joka soveltuu edullisesti, oraalisesti, rektaalisesti tai parenteraalisella injektiolla antoon. Esimerkiksi oraalisessa annostelumuodossa olevia koostumuksia valmistettavissa voidaan käyttää mitä 35 tahansa tavallisista farmaseuttiista väliaineista, kuten 5 esimerkiksi vettä, glykoleja, öljyjä, alkoholeja ja vastaavia oraalisten nestevalmisteiden kuten suspensioiden, siirappien, eliksiirien ja liuosten tapauksessa; tai kiinteitä väliaineita kuten tärkkelyksiä, sokereita, kaolii-5 nia, voiteluaineita, sideaineita, hajoamista edistäviä aineita ja vastaavia jauheiden, pillerien, kapselien ja tablettien tapauksessa. Annon helppoudesta johtuen tabletit ja kapselit edustavat edullisinta oraalista annostelu-yksikkömuotoa, missä tapauksessa käytetään ilmeisesti 10 kiinteitä farmaseuttisia väliaineita. Parenteraalisia koostumuksia varten väliaine käsittää tavallisesti steriiliä vettä, ainakin suureksi osaksi, vaikka voidaan sisällyttää muita valmistusaineita, esimerkiksi liukoisuuden auttamiseksi. Voidaan esimerkiksi valmistaa injisoitavia 15 liuoksia, joissa väliaine käsittää suolaliuosta ja/tai glukoosiliuosta. Voidaan myös valmistaa injisoitavia suspensioita, missä tapauksessa voidaan käyttää sopivia nestemäisiä väliaineita, suspendoirnisaineita ja vastaavia. Ihon kautta tapahtuvaan antoon sopivissa koostumuksissa 20 väliaine sisältää mahdollisesti tunketumista lisäävää ainetta ja/tai sopivaakostutusainetta, mahdollisesti yhdistettynä minkä tahansa luonteisten sopivien lisäaineiden kanssa, joita on vähäiset osuudet, jotka lisäaineet eivät aiheuta merkittävää haitallista vaikutusta iholle. Maini-25 tut lisäaineet voivat helpottaa iholle antoa ja/tai voivat olla avuksi haluttujen koostumusten valmistamiseksi. Näitä koostumuksia voidaan antaa eri tavoilla, esimerkiksi iho-laastarina, paikallisesti käytettävänä valmisteena (a spot-on) tai salvana.

30 On erityisen edullista formuloida edellä mainitut farmaseuttiset koostumukset annon helppouden ja annostelun tasaisuuden vuoksi annosteluyksikkömuotoon. Annosteluyk-sikkömuoto tässä olevissa selityksessä ja patenttivaatimuksissa tarkoittaa fysikaalisesti erillisiä yksiköitä, 35 jotka soveltuvat yksikköannoksiksi, kunkin yksikön sisäl- 6 taessa ennalta määrätyn määrän aktiivista valmistusainetta, jonka lasketaan tuottavan halutun terapeuttisen vaikutuksen vaaditun farmaseuttisen väliaineen yhteydessä. Esimerkkejä sellaisista anno s t e1uyks i kkömuodo i s t a ovat table-5 tit (mukaan lukien uurretut tai päällystetyt tabletit), kapselit, pilletit, jauhepaketit, vohvelikeksit, inj isottavat liuokset tai suspensiot, teelusikalliset, ruokalusikalliset ja vastaavat, ja niiden erotetut monikerrat.

Suoliston motiliteettia stimuloivan kykynsä ja eri-10 tyisesti paksusuolen motiliteettia lisäävän kykynsä valossa kohdeyhdisteet ovat käyttökelpoisia suoliston kuljetuksen normalisoimisessa tai parantamisessa kohteilla, jotka kärsivät oireista, jotka liittyvät häiriintyneeseen moti-liteettiin, esimerkiksi ohut- ja paksusuolen vähentynee-15 seen peristaltiikkaan yksinään tai yhdistelmänä mahan hidastuneen tyhjenemisen kanssa. Keksinnön mukaisten yhdisteiden käyttökelpoisuuden valossa keksinnössä aikaansaadaan tapa hoitaa lämminverisiä eläimiä, mukaan lukien ihmisiä, jotka kärsivät suoliston motiliteein häiriöistä, 20 kuten esimerkiksi ummetuksesta, tukkeumaa muistuttavasta tilasta, suolen velttoudesta, leikkauksen jälkeisestä suolen velttoudesta, epävakaan suolen oireyhtymästä (IBS), ja lääkken indusoimasta hidastuneesta läpikulusta. Erityisesti aikaansaadaan menetelmä paksusuolen motiliteettihäi-25 rioiden hoitamiseksi. Kohdeyhdisteitä voidaan myös käyttää helpottamaan paksusuolen puhdistumista tai helpottamaan putken asennusta ja/tai sisäelinten tähystystä. Mainitussa menetelmässä lämminverisille eläimille, mukaan lukien ihmisille, annetaan systeemisesti tehokas (ohut- ja paksu)-30 suolta stimuloiva määrä kaavan I mukaista yhdistettä. Täten aikaansaadaan kaavan I mukaisen yhdisteen käyttö lääkkeenä, ja erityisesti kaavan I mukaisen yhdisteen käyttö valmistettaessa lääkettä, joka on tarkoitettu hoitamaan tiloja, joihin liittyy ohut- ja paksusuolen häiriintynyt 35 motiliteetti tai läpikulku.

7

Yleensä odotetaan, että terapeuttisesti tehokas määrä olisi noin 0,001 - 10 mg/kg kehonpainoa, edullisesti noin 0,02 - 5 mg/kg kehonpainoa. Hoitomenetelmään voi myös sisältyä aktiivisen valmistusaineen anto hoito-ohjelmalla, 5 jossa annetaan kaksi tai neljä kertaa päivässä.

Kokeellinen osa

Esimerkki 1

Trikloorimetääniin (135 ml) suspendoitiin 4-amino-5 -kloori -2,3 - di hydro - 7 - bent so f uraanikarboksyyl ihappoa 10 (0,05 mol) (jonka valmistus kuvataan julkaisussa EP- 0 389 037-A) , ja jäähdytettiin noin 5 °C: seen. Lisättiin tipoittaan N,N-dietyylieta.aniamiinia (0,05 mol) lämpötilassa alle 10 °C. Lisättiin tipoittain etyyliklooriformi-aattia (0,05 mol), ja reaktioseosta sekoitettiin 40 minuu-15 tin ajan pitäen lämpötilan alle 10 °C:ssa. Tulokseksi saatu seos lisättiin tipoittain 20 minuutin aikana liuokseen, jossa oli 1- (3-metoksipropyyli) -4-piperidiiniamiinia.

(0,05 mol) trikloorimetäänissä (35 ml). Jäähdytyshaude poistettiin, ja reaktioseosta sekoitettiin 150 minuutin 20 ajan. Mainittu seos pestiin vedellä (50 ml). Sakka suodatettiin pois lasisuodattimellä, ja pestiin vedellä ja CHClj:11a. Suodos erotettiin kerroksikseen. Erotettu orgaaninen kerros pestiin vedellä (50 ml) + 50-prosenttisella NaOH-liuoksella (1 ml), kuivattiin, suodatettiin, ja liuo-25 tin poistettiin haihduttamalla. Jäännöstä sekoitettiin 2-propanolissa (100 ml). Tämän seoksen pH säädettiin H.Cl/2-propanolilla (7,2 ml; 5,29 N) happamaan pH-arvoon. Seosta sekoitettiin 16 tuntia huoneenlämpötilassa, ja tulokseksi saatu sakka suodatettiin pois, pestiin 2-propa-30 nolilla (15 ml) , ja kuivattiin (tyhjö; 50 °C) , jolloin saatiin 12,6 g (62 %j 4-amino-5-kloori-2,3-dihydro-N-[ΙΟ -metoksipropyyli) -4-piperidinyyli] -7-bentsofuraanikar-boksamidi-monohydrokloridia (yhdiste 1).

8

Esimerkki 2

Seosta, jossa oli 4-amino-5-kloori-2,3-dihydro-N-(4-piperidinyyli)-7-bentsofuraanikarboksamidia(0,01 mol), l-kloori-3-metoksipropaania (0,012 mol), N,N-dietyylietaa-5 niamiinia (2,1 ml) ja KI:tä (katalyyttinen määrä) N,N-di-metyyliformamidissa (75 ml), sekoitettiin yön yli 50 °C:ssa. Reaktioseos jäähdytettiin. Liuotin haihdutettiin. Jäännös puhdistettiin pyiväskromatografiällä silika-geelillä (eluentti: CHC13/ (CH3OH/NH3) 97/3). Kerättiin puh-10 taat fraktiot, ja liuotin haihdutettiin. Jäännös liuotettiin 2-propanoliin ja muutettiin hydrokloridisuolaksi HCl/2-propanolilla (1:1). Sakka suodatettiin pois, ja kuivattiin (tyhjö; 80 °C) , jolloin saatiin 1,40 g (35 %) 4-amino-5-kloori-2,3-dihydro-N- [1- (3 -metoksipropyyli) -4-15 piperidinyyli] -7-bentsofuraanikarboksamidi -monohydroklori-dia (yhdiste 1).

Esimerkki 3

Reaktio N2-virran alla. 4-amino-5-kloori-2,3-dihyd-ro-7-bentsofuraanikarboksyylihappoa (0,18 mol) liuotettiin 20 tetrahydrofuraaniin (360 ml) , ja tätä liuosta sekoitettiin ja jäähdytettiin noin 3 °C:seen. Lisättiin yhtenä eränä 1,1'-karbonyylibis-lH-imidatsolia (0,18 mol), ja jäähdytys lopetettiin. Seosta sekoitettiin 75 min (muuttui homogeeniseksi 30 minuutin jälkeen). Lisättiin tipoittain liuos, 25 jossa oli 1- (3-metoksipropyyli)-4-piperidiiniamiinia (0,18 mol) tetrahydrofuraanissa (90 ml) (eksoterminen lämpötilan kohoaminen 23 °C:sta 27 °C:seen). Reaktioseosta sekoitettiin 24 tuntia. Lisättiin vielä 1,1'-karbonyyli-bis-lH-imidatsolia (0,0125 moll, ja reaktioseosta sekoi-30 tettiin 75 minuutin ajan. Lisättiin vielä 1-(3-metoksipro-pyyli)-4-piperidiiniamiinia (0,0125 mol) (10 ml:ssa THF:ää). Tulokseksi saatua reaktioseosta sekoitettiin 3 tuntia huoneenlämpötilassa, sitten 2,5 tuntia palautus-jäähdytyslämpötilassa. Sitten seosta sekoitettiin 13 tun-35 tia antaen sen jäähtyä huoneenlämpötilaan. Liuotin haihdu- 9 tettiin. Jäännöstä sekoitettiin 8 tunnin ajan vedessä (360 ml) ja sakka suodatettiin pois, pestiin vedellä, sitten kuivattiin (tyhjö; 30 °Cj , jolloin saatiin 62,9 g (95 %)4-amino-5-kloori-2,3-dihydro-N-[1-(3-metoksipropyy-5 li)-4-piperidinyyli]-7-bentsofuraanikarboksamidi-monohyd- raattia; sp. 90,7 °C (yhdiste 2).

Esimerkki 4

Yhdistettä 2 (5 g, 0,0129 mol) liuotettiin lämpi mään etanoliin (25 ml) . Lisättiin liuos, jossa oli ( + )-10 (S)-maitohappoa. (1,45 g, 0,0135 mol) etanolissa (10 ml).

Jatkuvasti sekoitettaessa kiteytyminen alkoi 23 °C:ssa. Seosta sekoitettiin 24 tuntia. Sakka suodatettiin pois, pestiin etanolilla (2 ml), sitten kuivattiin (tyhjö; 55 °C; 72 tuntia), jolloin saatiin 3,7 g (62 %) 4-amino-5-15 kloori-2,3-dihydro-N- [1- (3-metoksipropyyli) -4-piperidinyy- li]-7-bentsofuraanikarboksamidi·(+)-(S)-2-hydroksipro-paanihapposuolaa (1:1); sp. 170,4 °C (yhdiste 3).

Yhdistettä 2 (5 g, 0,0129 mol) liuotettiin lämpimään seokseen, jossa oli etanolia (35 ml) ja vettä 20 (3,5 ml). Lisättiin fosforihappoa (0,929 ml), ja saatiin lähes välittömästi tulokseksi kiteytyminen. Seosta sekoitettiin 24 tuntia 23 °C:ssa. Sakka suodatettiin pois, pestiin etanolilla (2 ml) , sitten kuivattiin (tyhjö; 55 °C; 72 tuntia), jolloin saatiin 5,87 g (97,7 %) 4-amino-5-25 kloori-2,3-dihydro-N-[1-(3-metoksipropyyli)-4-piperidinyy- li]-7-bentsofuraanikarboksamidi·fosforihapposuolaa (1:1); sp. 259,6 °C (yhdiste 4).

Yhdistettä 2 (5 g, 0,0129 mol) liuotettiin lämpimään seokseen, jossa oli etanolia (35 ml) ja vettä 30 (3,5 ml). Lisättiin 48-prosenttista bromivetyhappoliuosta (1,52 ml), ja saatiin lähes välittömästi tulokseksi kiteytyminen. Seosta sekoitettiin 24 tuntia 13 °C:ssa. Sakka suodatettiin pois, pestiin etanolilla. (2 ml) , sitten kuivattiin (tyhjö; 55 °C; 72 tuntia), jolloin saatiin 5,4 g 35 (93,2 %) 4-amino-5-kloori-2,3-dihydro-N-[1-(3-metoksipro- 10 pyyli) -4-piperidinyyli] - 7 -bent sof uraani karboksamidi hydro-bromidia (1:1); sp. 280,1 °C (yhdiste 5).

Yhdistettä 2 (5 g, 0,0129 mol) liuotettiin lämpö- rnään etanoliin (25 ml) . Lisättiin liuos, jossa oli rrteri-5 pihkahappoa (1,6 g) seoksessa, jossa oli etanolia (10 ml) ja vettä (3,5 ml) . Raaputettiin, jolloin saatiin tulokseksi kiteytyminen. Seosta sekoitettiin 24 tuntia 23 °C:saa. Sakka suodatettiin pois, pestiin etanolilla (2 ml), sitten kuivattiin (tyhjö; 55 °C; 72 tuntia), jolloin saatiin 10 5,7 g (91 %) 4-amino-5-kloori-2,3-dihydro-N-[1-(3-metoksi- propyy 1 i) -4-piperidinyyli] -7-bentsofuraanikarboksamidi ·bu-taanidioaattia (1:1); sp. 197,2 °C (yhdiste 6).

Esimerkki 5

Yhdistettä 2 (5 g, 0,0129 mol) liuotettiin etano- 15 liin (35 ml). Lisättiin vettä (3,5 ml). Lisättiin tipoit-tain rikkihappoa (0,75 ml). Seosta sekoitettiin 24 tuntia noin 22 °C:ssa. Sakka suodatettiin pois, pestiin etanolilla (2 ml), sitten kuivattiin (tyhjö; 55 - 60 °C; 72 tuntia) , jolloin saatiin 6,1 g (101 %) 4-amino-5-kloori-2, 3 -20 dihydro-N- [1- (3-metoksipropyyli) -4-piperidinyyli] - 7-bent-· sofuraanikarboksamidi·sulfaattia (1:1); sp. 267,5 °C (yhdiste 7) .

Yhdistettä 2 (5 g, 0,0129 mol) liuotettiin etano liin (35 ml). Lisättiin (3,5 ml) vettä. Lisättiin tipoit-25 tain metaanisulfonihappoa (0,88 ml). Seosta sekoitettiin, sitten kuivattiin (tyhjö; 55 - 60 °C; 72 tuntia), jolloin saatiin 6 g (100 %) 4-amino-5-kloori-2,3-dihydro-N-[1-(3-me t oks ipropyyl i) -4-piperidinyyli] - 7-bent sof uraanikarboksamidi ·metaanisulfonihapposuolaa (1:1); sp. 286 °C (yhdiste 3 0 8).

Yhdistettä 2 (5 g, 0,0129 mol) liuotettiin metyy- liisobutyyliketoniin (35 ml) 60 - 65 °C:ssa. Lisättiin tipoittain etikkahappoa (0,8 ml) (lämpötila kohosi 75 °C:seen). Saatiin lähes välittömästi tulokseksi saostu-35 mistä. Seoksen annettiin jäähtyä huoneenlämpötilaan. Seos- 11 ta sekoitettiin 20 tuntia. Sakka suodatettiin pois, pestiin etanolilla (2 ml) , sitten kuivattiin (tyhjö; 55 - 60 °C; 72 tuntia), jolloin saatiin 5,5 g (99 %) 4-amino-5-kloori-2,3-dihydro-N- [1- (3-metoksipropyyli) -4-piperidinyy-5 li] “7-bentsofuraanikar.boksamidi etikkahapposuolaa (1:1); sp. 156,1 °C (yhdiste 9).

Farmakologiset esimerkit

Esimerkki 6

Ei-adrenergisten ei-kolinergisten hermojen stimu-10 lointi aikaansaa relaksaation, jota seuraa supistuminen. Relaksaatiota välittää välittäjäaine, joka on erilaista kuin noradrenaliini, typpioksidi tai ATP. Supistusta välittää välittäjäaine, joka on erilaista kuin asetyylikoliini.

15 Kumpaakin sukupuolta edustavia Dunkin-Hartley-mar- suja (350 - 600 g, paastoamattornia) tapettiin niskan nyr-jäytyksellä, minkä jälkeen kaula katkaistiin. Nouseva paksusuoli poistettiin, ja putki huhdottiin pesemällä toistuvia kertoja De Jalon-liuoksella. Kun suolilieve oli lei-20 kattu varovasti, nouseva paksusuoli jaettiin 4 segmentiksi, joiden pituus oli 3 cm. Kukin segmentti asennettiin pystysuoraan elinhauteeseen, joka sisälsi 100 ml De Jalon -liuosta. Elinhaudetta pidettiin 37 °C:ssa, ja sen läpi ohjattiin kaasuseosta, jossa oli 95 % happea ja 5 % hiili-25 dioksidia. Liuokseen lisättiin fentolamiinia (10~6 M), pro-panololia (3 x 10'7 M) ja atropiinia (3 x 10"7 M) a-, β- ja muskariinireseptorien salpaamiseksi. Supistukset mitattiin isometrisesti. Preparaattia venytettiin toistuvia kertoja, kunnes saavutettiin perusjännitys 40 mN, ja annettiin sta-30 biloitua 45 - 60 minuutin ajan. Elinhauteeseen lisättiin histamiinia (3 x 10~5 M) maksimaalisen supistuksen saavuttamiseksi. Lisättiin seinämän läpi kulkeva jännitys koko paksusuolisuikaleen pituudelle kahden platinaelektrodin avulla, anodin ollessa kierrettynä paksusuolen putkimaisen 35 rakenteen läpi; katodin ollessa haudeliuoksessa. Prepa- 12 raatti viritettiin suorakulmaisen aallot omaavilla pulsseilla (9 V, 1 ms/pulssi) 10 s ajan joka 5. minuutti eri taajuuksilla. Sähköinen stimulointi antoi tulokseksi relaksaation (= PÄÄLLÄ-vaste) , jota seurasi välittömästi 5 supistuminen (= POIS-vaste). Aluksi preparaatit stimuloitiin kolmesti taajuudella 0,4 Hz maksimaalista pienemmän relaksaation saavuttamiseksi, mitä seurasi kolme stimulointia taajuudella 1,5 Hz, jotta saataisiin maksimaalista pienempi supistuminen. Sitten haudekylpyyn lisättiin tes-10 tiyhdistettä, ja toistettiin jälleen kolmesti molemmat stimuloinnit (0,4 Hz ja 1,5 Hz).

Konsentraaticlla 3 x 10~7 M testiyhdiste indusoi POIS-vasteen, joka oli 100 % alkuarvosta.

Esimerkki 7 15 Kumpaakin sukupuolta edustavia Dunkin-Hartley-mar- suja (350 g tai yli, paastoamattornia) tapettiin niskan nyrjäytyksellä, minkä jälkeen kaula katkaistiin. Nouseva paksusuoli katkaistiin kohdalla noin 5 cm peräaukosta, leikattiin ja sidottiin pituudella noin 40 cm, ja vapau-20 tettiin kiinnittyneestä kudoksesta. Kun paksusuolessa oli ainakin 10 pellettiä, kudos siirrettiin lasiastiaan, joka sisälsi 200 ml Krebs-Henseleit-liuosta, läpi ohjattiin kaasuseosta, jossa oli 95 % happea ja 5 % hiilidioksidia, ja pidettiin 37 °C:ssa. Liuos sisälsi joko puhdasta liuo-25 tinta tai testiyhdistettä. Ulos työnnetyt pelletit laskettiin ja poistettiin liuoksesta joka 5. minuutti maksimi-ajanjakson 60 minuuuttia aikana.

Pakusuolesta esiin työnnettyjen pellettien kumulatiivinen kokonaislukumäärä kusasakin pisteessä ilmaistiin 3 0 prosenttiosuutena, koko paksusuolessa kokeen alussa läsnä olevien pellettien lukumäärästä. Tehtiin aika/vaste-käyrät piirtämällä paksusolesta esiin työnnettyjen pellettien kumulatiivinen prosenttiosuus ajan funktiona.

Keksinnön mukaisen yhdisteen konsentraatiolla 35 3 x 10'9 M 80 % pellettien alkumäärästä työnnettiin ulos 10 minuutin sisällä.

13

Esimerkki 8

Marsun sykkyräsuolen koaksiaalinen stimulointi

Kumpaakin sukupuolta olevia Dunkin Hartley -marsuja (kehonpaino noin 500 g) tapettiin niskan nyrjäytyksellä, 5 jota seurasi pään katkaisu. Sykkyräsuoli poistettiin ja puhdistettiin lämmitetyllä ja hapetetulla Krebs-Henseleit-liuoksella. Marsun ei-terminaalisia, ehjiä sykkyräsuoli-segmenttejä, joiden pituus oli 4,5 cm, ripustettiin pystysuoraan esikuormituksella 1 g 100 ml:aan Krebs-Hense-10 leit-liuosta (37,5 °C) , läpi ohjattiin kaastiseosta, jossa oli 95 % 02:ta ja 5 % C02:ta. Lisättiin seinämän läpi kulkeva jännitys koko sykkyräsuolisegmentin pituudelle kahden platinaelektrodin avulla, anodin ollessa kierrettynä syk-kyräsuolen putkimaisen rakenteen läpi, katodin ollessa 15 haudeliuoksessa. Preparaattia jännitettiin yhdellä ainoilla suorakaiteenmuotoisilla ärsykkeillä [1 ms; 0,1 Hz; maksimaalista alhaisempi vaste (jirran johtaessa 80 %:iin maksimaalisesta vasteesta)] ohjelmoitavasta stimulointi-laitteesta. Supistukset mätettiin isometrisestä. 30 minuu-20 tin stabilointiajanjakson aikana suikaleet venytettiin toistuvia kertoja jännitteeseen 2 g, jotta saataisiin tasapainotilan jännitys 1 g. Ennen sähköiden stimuloinnin aloittamista saatiin kumulatiivinen annos/vaste-käyrä ase-tyylikoliinilie. Sähköinen stimulointi aloitettiin maksi-25 maalista pienemmällä virralla nykäysvasteiden maksimaalisen amplitudin määrittämiseksi. Kun nämä vasteet olivat stabiileja, annettiin maksimaalista pienempi stimulointi, jotta saavutettaisiin 80 % maksimaalisista vasteista, kunnes nykäysvasteet olivat vakioita ainakin 15 minuutin 30 ajan, minkä jälkeen haudenesteeseen lisättiin testiyhdis-teen yksi ainoa annos. Nykäysvasteen amplitudia 5 minuuttia testiyhdisteen annon j älkeen verrataan amplitudiin ennen testiyhdisteen antoa. Keksinnön mukaisella yhdisteellä nähtiin nykäysvasteen amplitudin yli 5-prosenttinen 35 kasvu konsentraatiolla 3 · 10'9 M.

Claims (12)

1. Kaavan (I) mukainen yhdiste O Ö CH3-0{CH2)3-~N V-HN-C-^ V-NHg ® S----Γ-·./ 5 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä happoadditiosuoia,

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tuntie ttu siitä, että yhdiste on 4-amino-5-kloori-2,3-dihyd-ro-N-[1-(3-metoksipropyyli)-4-piperidinyyli]-7-bentsofuraa-nikarboksamidi monohydrokloridia,

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tun nettu siitä, että yhdiste on 4-amino-5-kloori-2,3-dihyd-ro-N-[1-(3-metoksipropyyli)-4-piperidinyyli]-7-bentsofuraa-nikarboksamidi butaanidioaattia (1:1).

4. Farmaseuttinen koostumus, tunnettu siitä, 15 että se sisältää farmaseuttisesti hyväksyttävää väliainetta ja terapeuttisesti tehokkaan määrän minkä tahansa patenttivaatimuksista 1-3 mukaista yhdistettä.

5. Menetelmä patenttivaatimuksen 4 mukaisen farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi, tunnettu sii- 20 tä, että terapeuttisesti tehokas määrä minkä tahansa patenttivaatimuksista 1-3 mukaista yhdistettä sekoitetaan perusteellisesti farmaseuttisesti hyväksyttävän väliaineen kanssa.

6. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 1-3 mukai- 25 nen yhdiste käytettäväksi lääkeaineena.

7. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 1-3 mukaisen yhdisteen käyttö valmistettaessa valmistetta, joka on tarkoitettu ruoansulatuskanavan motiliteetin häiriöiden hoitoon.

8. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 1 - 3 mukai sen yhdisteen käyttö valmistettaessa valmistetta, joka on tarkoitettu käytettäväksi ummetuslääkkeenä.

9. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 1-3 mukaisen yhdisteen käyttö valmistettaessa valmistetta, joka on tarkoitettu ärtyvän paksusuolisairauden hoitoon.

10. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 1-3 mu-5 kaisen yhdisteen käyttö valmistettaessa valmistetta, joka on tarkoitettu suolen velttouden hoitamiseen,

11. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 1 - 3 mukaisen yhdisteen käyttö valmistettaessa valmistetta, joka on tarkoitettu (paksu)suolen läpikuljetuksen nopeuttami- 10 seen.

12. Menetelmä patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a.) kaavan (II) mukaista välituotetta N-alkyloidaan kaavan (III) mukaisella alkylointireagenssilla, jossa W on 15 sopiva poistuva ryhmä kuten halogeeni, esimerkiksi kloori, tai sulfonyylioksipoistuva ryhmä, reaktioinertissä liuotti-inessa sopivan emäksen läsnä ollessa; f) ö^) CH3-CKCH2)3-W + MN^ V-NH-C"^ V-NHa ' ® Cl m (Π) b) kaavan (V) mukaista amiinia N-asyloidaan kaavan 20 IV mukaisella karboksyylihapolla j? tv CH3-a(CH2)3-N NHj HO— q —NH? -"" © \ a (V) (IV) ja haluttaessa muutetaan kaavan (I) mukainen yhdiste terapeuttisesti aktiiviseksi, ei-toksiseksi happoadditiosuolak-si, tai kääntäen, muutetaan happoadditiosuola vapaaseen 25 emäsmuotoon alkalilla.