FI114861B

FI114861B - 2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani-2,6-dikarboksyylihappoyhdisteitä

Info

Publication number: FI114861B
Application number: FI953837A
Authority: FI
Inventors: David Reed Helton; James Allen Monn; Darryle Darwin Schoepp; Joseph Patrick Tizzano
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1994-08-12
Filing date: 1995-08-14
Publication date: 2005-01-14
Also published as: AP758A; WO1996005175A1; HU223845B1; US5925680A; DE69505318T2; MY115977A; US5925782A; HU9502380D0; PL309972A1; JP2883297B2; CA2156024A1; CZ291270B6; TW438741B; SK281288B6; AU692276B2; CZ207495A3; BG62728B1; CA2156024C; AP9700922A0; EP0696577B1

Description

114861 2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani-2,6-dikarboksyylihappoyhdis-teitä

Nisäkkään keskushermostojärjestelmässä (CNS) her-5 moimpulssien välittymistä säätelee välittäjäaineen, jonka lähettäjäneuroni vapauttaa, ja vastaanottavan neuronin pin-tareseptorin välinen vuorovaikutus aiheuttaen tämän vastaanottavan neuronin ärsytyksen.

L-glutamaatti, joka on yleisin välittäjäaine kes-10 kushermostojärjestelmässä, toimii eksitoivien päähermorato-jen välittäjänä nisäkkäissä ja siihen viitataan eksitoivana aminohappona (EAA). Reseptoreita, jotka reagoivat gluta-maattiin, kutsutaan eksitoiviksi aminohapporeseptoreiksi (EAA reseptoreiksi). Katso Watkins & Evans, Ann. Rev. Phar-15 macol. Toxicol., 21, 165 (1981); Monaghan, Bridges ja Cot- man, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol., 29, 365 (1989); Wat kins, Krogsgaard-Larsen ja Honore, Trans. Pharm. Sci., 11, 25 (1990). Eksitoivat aminohapot ovat fysiologisesti hyvin tärkeitä ja ottavat osaa moniin fysiologisiin prosesseihin, 20 kuten pitkäaikaiseen potentiaatioon (oppiminen ja muisti), synaptisen plastisuuden kehittymiseen, liikkeen kotrol-: '* loimiseen, hengitykseen, sydän-verisuonijärjestelmän sääte- ; , * lyyn, tunnetiloihin ja aistiärsytyksen perseptioon.

-’t Liiallinen tai sopimaton eksitoivien aminohappore- 2 5 septoreiden ärsyttäminen johtaa neuronisoluvaurioon tai • häviöön mekanismin kautta, joka tunnetaan eksitotoksisuu-tena. Tämän prosessin on ehdotettu aiheuttavan neuronirap-peutumista monissa sairauksissa. Tällaisen neuronirappeu-tumisen lääketieteellinen seuraus tekee näiden rappeutta- 30 vien neurologisten prosessien ehkäisemisestä tärkeän terä- * » *;* peuttisen päämäärän. Eksitoivat aminohapporeseptorit luo- ' j ' kitellaan kahteen yleiseen ryhmään. Reseptoreita, jotka ;* : ovat suoraan kytkeytyneet kationikanavien aukkoihin neuro- nien solukalvossa, kutsutaan "ionotroopeiksi". Tämäntyyp- 35 pinen reseptori on jaettu vähintäin kolmeen alaluokkaan.

1 » 2 114861 jotka on määritetty selektiivisten agonistien N-metyyli-D-aspartaatin (NMDA), a-amino-3-hydroksi-5-metyyli-isok-satsoli-4-propionihapon (AMPA) ja kainiinihapon (KA) de-polarisoivan vaikutuksen mukaan. Toinen yleinen resepto-5 riluokka on G-proteiini tai toisiolähetti-sitoutunut "me-tabotrooppinen" eksitoiva aminohapporeseptori. Tämä toinen luokka on kytkeytynyt multippelitoisiolähettijärjestelmiin, mikä johtaa parannettuun fosfoinositidihydrolyysiin, fosfolipaasin D-aktivointiin, kasvuun tai laskuun cAMP 10 muodostuksessa ja muutoksiin ionikanavatoiminnassa. Schoepp ja Conn, Trends in Pharmacol. Sei., 14, 13 (1993). Molempien luokkien reseptorit eivät välitä pelkästään normaaleja synaptisia transmissioita eksitoivia hermoratoja pitkin, vaan osallistuvat myös synaptisten liittymien mo-15 difiointiin kehitysvaiheen aikana ja läpi elämän. Schoepp, Bockaert ja Sladeczek, Trends in Pharmacol. Sei., 11, 508 (1990); McDonald ja Johnson, Brain Research Reviews, 15, 41 (1990).

Metabotrooppiset glutamaattireseptorit kuuluvat 20 glutamaattireseptoreiden hyvin heterogeeniseen perheeseen, jotka reseptorit ovat sitoutuneet multippelitoisiolähetti 1' hermoratoihin. Tavallisesti nämä reseptorit moduloivat glutamaatin esisynaptista vapautumista ja hermosolun jäi- • · kisynaptista herkkyyttä glutamaattiärsytykselle. Metabo- • · · .!1 25 trooppiset glutamaattireseptorit (mGluR) on jaettu farma- • · * ; ; koklogisesti kahteen alaluokkaan. Yksi reseptoreiden ryhmä * i » · on positiivisesti kytketty fosfolipaasiin C, mikä aiheut- ’·' * taa solufosfoinositidien (PI) hydrolysoitumisen. Tätä en simmäistä ryhmää kutsutaan PI-sitoutuneiksi metabotrooppi- * 30 siksi glutamaattireseptoreiksi. Toinen reseptoriryhmä on '•t : negatiivisesti kytkeytynyt adenyylisyklaasiin, mikä estää .«··, syklisen adenosiinimonofosfaatin (cAMP) forskoliini-stimu- loidun kasautumisen. Schoepp ja Conn, Trends Pharmacol.

* »

Sei., 14, 13 (1993). Tämän toisen luokan reseptoreita kut-35 sutaan cAMP-sitoutuneiksi metabotrooppisiksi glutamaatti- 3 114861 reseptoreiksi. cAMP-sitoutuneiden metabotrooppisten gluta-maattireseptoreiden agonistien pitäisi olla hyödyllisiä akuuttien ja kroonisten neurologisten sairauksien ja psyykkisten sairauksien hoidossa.

5 Viime aikoina on löydetty yhdisteitä, jotka vaikut tavat metabotrooppisiin glutamaattireseptoreihin, mutta joilla ei ole mitään vaikutusta ionotrooppisiin glutamaattireseptoreihin . (IS,3R)-1-aminosyklopentaani-1,3-dikar- boksyylihappo (1S,3R-ACPD) on P-I-sitoutuneiden ja cAMP-10 sitoutuneiden metabotrooppisten glutamaattireseptoreiden agonisti. Schoepp, Johnson, True ja Monn, Eur. J. Pharmacol., 207, 351 (1991); Schoepp, Johnson ja Monn, J. Neuro- chem., 58, 1184 (1992). (2S,3S,4S)-2-(karboksisyklopro- pyyli)glysiiniä (L-CCG-I) on äskettäin kuvattu selektiivi-15 senä cAMP-sitoutuneena metabotrooppisena glutamaattiresep-toriagonistina; kuitenkin korkeimpina pitoisuuksina tällä yhdisteellä on aktiivisuutta PI-sitoutuneisiin metabotrooppisiin reseptoreihin. Nakagawa et ai., Eur. J. Pharmacol., 184, 205 (1990); Hayashi et ai., Br. J. Pharmacol., 107, 20 539 (1992); Schoepp et ai., J. Neurochem. , 63, sivut 769 - 772 (1994) .

: *· Tämän keksinnön kohteena ovat yhdisteet, jotka se- • lektiivisesti vaikuttavat negatiivisesti kytkettyihin cAMP- JJ.· sitoutuneisiin metabotrooppisiin glutamaattireseptoreihin.

i * * *; 25 Spesifisemmin, tämän keksinnön kohteena ovat 2-aminobi-

• I

• syklo [3.1.0] heksaani-2,6-dikarboksyylihappoyhdisteet, joil-

» I ► I

la on kaava S i i

j vrA

i m2 30 »* · ’, jossa: X on (CH2) n; 114861 4 R2 on C02R4 ja R3 on vety, tai R2 on vety ja R3 on C02R4 ; R1 ja R4 ovat riippumattomasti vety tai Cx-C4-alkyyli; ja 5 n on 1; tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat. Tämän keksinnön kohteena ovat myös farmaseuttiset valmistemuodot, jotka sisältävät kaavan I yhdistettä yhdessä yhden tai useamman farmaseuttisesti hyväksyttävän kanto-10 aineen, laimentimen tai täyteaineen kanssa.

Keksinnön mukaiset yhdisteet ovat hyödyllisiä menetelmässä, jossa vaikutetaan cAMP-sitoutuneisiin metabo-trooppisiin glutamaattireseptoreihin, kuten myös menetelmissä, joissa hoidetaan neurologisia sairauksia tai psyki-15 atrisia sairauksia, jotka liittyvät eksitoiviin aminohappo-reseptoreihin, jossa menetelmässä annetaan kaavan I yhdistettä. Esimerkkejä neurologisista sairauksista, joita hoidetaan kaavan I yhdisteellä, ovat sydämen ohitusleikkauksen ja kudoksen siirron jälkeinen aivojen vajaatoiminta, aivo-20 jen verettömyys (esim. sydänkohtaus ja sydämen pysähtyminen) ; selkäydinvamma; päävamma; Alzheimerin tauti; Hunting-: '·· tönin Chorea; amyotrofinen lateraali skleroosi, AIDS:ista • ’,· johtuva dementia; lihaskouristukset; migreenityyppiset : ; : päänsäryt; virtsan pidätyskyvyttömyys; kouristukset; synty- 25 mää jän läheinen hapenpuute; hypoglyseeminen hermosoluvau- • · • ·*· rio; lääketoleranssi, vieroitus ja lopettaminen (ts. opiaa- • · · · tit, bentsodiatsepiinit, nikotiini, kokaiini tai etanoli); * * · tupakoinnin lopettaminen; silmävaurio ja verkkokalvon sai-raus; kognitiiviset häiriöt; itsesyntyinen ja lääke-3 0 indusoitu Parkinsonin tauti; pahoinvointi; aivoödeema; I | krooninen kipu; unihäiriöt; Touretten oireyhtymä; lapsen : tarkkaamattomuuden, impulsiivisuuden ja yliaktiivisuuden ! oireyhtymä (attention deficit disorder); ja tardiivinen liikuntahäiriö. Esimerkkejä psykiatrisista sairauksista, 35 joita hoidetaan kaavan I yhdisteellä, ovat skitsofrenia, ahdistus ja vastaavat sairaudet (esim. paniikkihäiriö ja 5 114861 stressiin liittyvät sairaudet), masennus, bipolaariset sairaudet, psykoosi ja pakonomainen mielijohteiden noudattaminen.

Tällä keksinnöllä aikaansaadaan myös yhdisteitä, 5 jotka ovat hyödyllisiä kaavan I yhdisteiden valmistuksessa. Spesifisemmin, tämän keksinnön kohteena ovat 2-(imi-datsoliini-2,4-dioni)bisyklo[3.1.0]heksaani-6-karboksyyli-happoyhdisteet, joilla on kaava

R3a —NH

o*<nAo

H

10 j ossa: X on (CH2) n; n on 1 ; R2a on CC>2R4a ja R3a on vety, tai R2a on vety ja R3a 15 on C02R4a; j a ” R4a on karboksisuojaryhmä, kuten Ci-C6-alkyyli.

Tämän keksinnön kohteena olevia yhdisteitä tai sen *,·,*' farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja voidaan valmistaa ! ' : menetelmällä, jossa : r*: 20 (1) hydrolysoidaan 2-(imidatsoliini-2,4-dioni)bisyklo- [3.1.0] heksaani-6-karboksyylihappoyhdiste, jolla on kaava :x>

N

H

jossa: X on (CH2) n; 6 114861 n on 1 ; R2a on CC>2R4a ja R3a on vety tai R2a on vety ja R3a on C02R4a; ja R4a on karboksisuojaryhmä; 5 (2) saatetaan yhdiste, jolla on kaava 0 jossa X, R2a ja R3a ovat kuten edellä on määritetty, reagoimaan aikaiimetallisyanidin ja ammoniumsuolan kanssa ja saatu välituote hydrolysoidaan kuten edeltävässä kohdas-10 sa (1); tai (3) hydrolysoidaan yhdiste, jolla on kaava :x> nh2 jossa Rla on karboksisuoj aryhmä ja X, R2a ja R3a ovat • ” kuten edellä on määritetty; ja .* 15 (4) valinnaisesti poistetaan karboksisuoj aryhmä; ja /’,* (5) valinnaisesti esteröidään toinen tai molemmat karbok- | syyliryhmät; ja ; : : (6) valinnaisesti erotetaan diastereomeerit ja/tai resoloi- • * · « daan enantiomeerit; ja 20 (7) valinnaisesti valmistetaan kaavan I yhdisteen far- maseuttisesti hyväksyttävä suola.

Tavallisia syklisiä alkyyliryhmiä ovat syklopropyy- 1 · li, syklobutyyli, syklopentyyli, sykloheksyyli ja vastaa-V ·’ vat. Tavallisia Ci-C6-alkyyliryhmiä ovat metyyli, etyyli, 25 n-propyyli, isopropyyli, n-butyyli, isobutyyli, sek-butyy-li, t-butyyli, n-pentyyli, isopentyyli, neopentyyli ja n- ► heksyyli.

t 114861 7

Ilmaisu "stereoisomeerinen yhdiste" edustaa kaavan I yhdisteen optista isomeeriä. Edustavia stereoisomeerisiä yhdisteitä ovat IS,2S,5R,6S-isomeeri, 1R,2R,5S,6R-isomeeri, IS,2R,5R,6S-isomeeri, 1R,2S,5S,6R-isomeeri, 1S,2S,5R,6R- 5 isomeeri, 1R,2R,5S,6S-isomeeri, IS,2R,5R,6R-isomeeri ja 1R,2S,5S,6S-isomeeri.

Ilmaisu "diastereomeerinen yhdiste" edustaa seosta, jossa on kaksi kaavan I yhdisteen ei-päällekkäin asetettavaa stereoisomeeriä. Edustavia diastereomeerisiä yhdisteitä 10 ovat 1SR,2SR,5RS,6SR seos, 1SR,2RS,5RS,6SR seos, 1SR,2SR,-5RS,6RS seos ja 1SR,2RS,5RS,6RS seos. Edullinen diastereomeerinen yhdiste on 1SR,2SR,5RS,6SR seos. Edullinen enan-tiomeeri on 1S,2S,5R,6S.

Termi "karboksisuojaryhmä" tässä käytettynä viittaa 15 yhteen karboksyylihapporyhmän esterijohdannaisista, joita tavallisesti käytetään karboksyyliryhmän suojauksessa samalla kun reaktioita toteutetaan toisissa funktionaalisissa ryhmissä. Karboksyylihapporyhmien suojausta on kuvattu yleisesti julkaisuissa McQmie, Protecting Groups in Organic 20 Chemistry, Plenum Press, NY, 1973; ja Greene ja Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, toinen painos, John ·' '· Wiley & Sons, NY, 1991. Esimerkkejä tällaisista karbok- : .* sisuojaryhmistä ovat metyyli, etyyli, metoksimetyyli, me- V.: tyylitiometyyli, trifenyylimetyyli, bentsyyli, 4-nitro- : · : 25 bentsyyli, 4-metoksibentsyyli, 3,4-dimetoksibentsyyli, 2,4- ; dimetoksibentsyyli, 2,4,6-trimetoksibentsyyli, 2,4,6-tri- metyylibentsyyli, bentshydryyli, t-butyyli, t-amyyli, tri- i tyyli, trimetyylisilyyli, t-butyylidimetyylisilyyli, allyy-li, 1-(trimetyylisilyylimetyyli)-prop-l-en-3-yyli ja vas-30 taavat. Erityisen edullisia karboksisuojaryhmiä ovat (Ci- * ·

Cs)aikyy liryhmät, kuten metyyli ja etyyli. Termi "suojattu V * karboksi" viittaa karboksyylihapporyhmään, jossa on karbok- i(i>: sisuojaryhmä.

,«··_ Termi "vaikuttava" viittaa kaavan I yhdisteeseen, 3 5 joka toimii agonistina eksitoivalle aminohapporeseptorille.

Termi "eksitoiva aminohapporeseptori" viittaa metabotroop- 114861 8 piseen glutamaattireseptoriin, reseptoriin, joka on kytkeytynyt hermosolun viejähaarakkeeseen GTP-sitoutuvien proteiinien kautta. Termi "cAMP-sitoutunut metabotrooppinen glu-tamaattireseptori" viittaa metabotrooppiseen reseptoriin, 5 joka on kytkeytynyt adenylaatti syklaasi aktiivisuuden in-hiboimiseksi.

Termi "neurologinen sairaus" viittaa sekä akuutteihin että kroonisiin hermorappeumasairauksiin, mukaan lukien sydämen ohitusleikkauksen ja kudoksen siirron jälkeinen ai-10 vojen vajaatoiminta, aivojen verettömyys (esim. sydänkohtaus ja sydämen pysähtyminen); selkäydinvamma; päävamma; Alzheimerin tauti; Huntingtonin Chorea; amyotrofinen lateraali skleroosi, AIDS:ista johtuva dementia; syntymäajan läheinen hapenpuute; hypoglyseeminen hermosoluvaurio; silmä-15 vaurio ja verkkokalvon sairaus, kognitiiviset sairaudet, itsesyntyinen ja lääke-indusoitu Parkinsonin tauti. Tämä termi käsittää myös muut neurologiset sairaudet, joita aiheuttaa glutamaattihäiriö, lihaskouristukset, migreenityyppiset päänsäryt; virtsan pidätyskyvyttömyys; lääketolerans-20 si, vieroitus ja lopettaminen (ts. opiaatit, bentsodiatse- piinit, nikotiini, kokaiini tai etanoli); tupakoinnin Ιοί '· pettäminen; pahoinvointi; aivoödeema; krooninen kipu; uni- • ',· häiriöt; louristukset, Touretten oireyhtymä; lapsen tark- » » lii kaarnat tomuuden, impulsiivisuuden ja yliaktii visuuden oi- : ' : 25 reyhtymä (attention deficit disorder); ja tardiivinen lii- • kuntahäiriö.

Termi "psykiatriset sairaudet" viittaa sekä akuutteihin että kroonisiin psykiatrisiin sairauksiin, mukaan t;t lukien skitsofrenia, ahdistus ja vastaavat sairaudet (esim.

* 'il! 30 paniikkihäiriö ja stressiin liittyvät sydän-verisuonisai- raudet) , masennus, bipolaariset sairaudet, psykoosi ja pa- • * * ·’ konomainen mielijohteiden noudattaminen.

: Tämän keksinnön kohteena ovat farmaseuttisesti hy- väksyttävät kaavan I yhdisteiden suolat. Nämä suolat voivat 35 esiintyä yhdessä molekyylin happo- tai emäsosan kanssa ja ne voivat esiintyä happoadditiosuoloina, primaarisina, se- 114861 9 kundaarisina, tertiaarisina tai kvaternaarisina ammonium-suoloina, alkalimetallisuoloina tai maa-alkalimetalli-suoloina. Tavallisesti happoadditiosuolat valmistetaan saattamalla kaavan I yhdiste reagoimaan hapon kanssa. Alka-5 limetallisuolat ja maa-alkalimetallisuolat valmistetaan tavallisesti saattamalla halutun metallisuolan hydroksidimuo-to reagoimaan kaavan I yhdisteen kanssa, jossa R1 ja/ tai R4 on vety.

Happoja, joita tavallisesti käytetään muodostamaan 10 tällaisia suoloja, ovat epäorgaaniset hapot, kuten vetyklo-ridi-, vetybromidi-, vetyjodidi-, rikki- ja fosforihappo, kuten myös orgaaniset hapot, kuten para-tolueenisulfoni-, metaanisulfoni-, oksaali-, para-bromifenyylisulfoni-, kar-boni-, meripihka-, sitruuna-, bentsoe- ja etikkahappo ja 15 vastaavat epäorgaaniset ja orgaaniset hapot. Tällaisia farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja ovat täten sulfaatti, pyrosulfaatti, bisulfaatti, sulfiitti, bisulfiitti, fosfaatti, ammonium, monovetyfosfaatti, divetyfosfaatti, meta-fosfaatti, pyrofosfaatti, kloridi, bromidi, jodidi, ase-20 taatti, propionaatti, dekanoaatti, kaprylaatti, akrylaatti, formiaatti, isobutyraatti, kapraatti, heptanoaatti, pro-· piolaatti, oksalaatti, malonaatti, sukkinaatti, suberaatti, • ’,· sebakaatti, fumaraatti, hippuraatti, maleaatti, butyyni- 1,4-dioaatti, heksyyni-1,6-dioaatti, bentsoaatti, kloori-2 5 bentsoaatti, metyylibentsoaatti, dinitrobentsoaatti, hyd- * ;*; roksibentsoaatti, metoksibentsoaatti, ftalaatti, sulfonaat- . ti, ksyleenisulfonaatti, fenyyliasetaatti, fenyylipropio- naatti, fenyylibutyraatti, sitraatti, laktaatti, a-hydrok-. sibutyraatti, glykolaatti, maleaatti, tartraatti, metaani- ‘1)1 30 sulfonaatti, propaanisulfonaatti, naftaleeni-l-sulfonaatti, ·; naftaleeni-2-sulfonaatti, mandelaatti, magnesium, tetrame- i I * ; tyyli ammonium, kalium, trimetyyliammonium, natrium, metyy- liammonium, kalsium ja vastaavat suolat.

Tämän keksinnön kaavan I yhdisteillä on asymmetri-35 siä hiiliatomeja. Asymmetrisiä keskuksia ovat substituoidut hiiliatomit, jotka sisältävät amino- ja karboksyyliryhmiä, 114861 10 hiiliatomi, johon R2 ja R3 ovat liittyneet ja kaksi renkaat yhdistävää hiiliatomia. Asymmetriset hiilet ovat asemissa 2, 6, 1 ja 5, vastaavasti. Täten tämän keksinnön yhdisteet voivat esiintyä pääosin puhtaina optisina isomeereinä, kah-5 den enantiomeerin seoksena (mukaan lukien raseemiset modifioinnit) ja kahden diastereomeerin seoksena. Kun R2 on CO2R4 ja R1, R3 ja R4 ovat vety, biologisesti aktiivinen ja edullisin stereoisomeeri, määritettynä reseptorin sitoutu-miskokeella, on positiivinen optinen rotaatio (aD) . Tämän 10 edullisimman enantiomeerin kiderakenne ratkaistiin rönt-genanalyysillä, mikä antoi seuraavan stereokemiallisen konfiguraation :

^r^*co2H

nh2 Tämän edullisimman enantiomeerin absoluuttisen ste-15 reokemiallisen konfiguraation on määritetty olevan 1S,2S,-5R,6S. Täten tämä keksintö käsittää kaavan I yhdisteiden stereoisomeerit, joilla on sama edullinen stereokemiallinen h _ konfiguraatio, enantiomeerien, joilla on tämä edullinen • ·' stereokemiallinen konfiguraatio, seokset (mukaan lukien ra- • · t 20 semaatit) ja diastereomeerien, joilla on tämä stereokemial-I linen konfiguraatio, seokset.

·.; Vaikka kaikkien tämän keksinnön kaavan I yhdistei- 1 I · i ; : den uskotaan selektiivisesti vaikuttavan negatiivisesti kytkettyihin cAMP-sidottuihin metabotrooppisiin glutamaat-2 5 tireseptoreihin, tietyt tämän keksinnön yhdisteet ovat < » · edullisia tällaista käyttöä varten. Edullisesti R2 on C02R4, R3 on vety ja R1 ja R4 ovat riippumattomasti vety tai Ci-C4-' ‘ alkyyli .

• t *

Tietyt yhdisteet ovat edullisempia käytettäviksi 30 vaikuttamaan cAMP-sidottuihin metabotrooppisiin glutamaat- ·.·. tireseptoreihin. Edullisimmin R1 ja R4 ovat riippumattomas ti vety tai Ci-C4-alkyyli. Edustavia yhdisteitä tästä edul- 114861 11 lisimpien yhdisteiden ryhmästä ovat 2-aminobisyklo-[3.1.0]heksaani-2,6-dikarboksyylihappo, dimetyyli-2-amino-bisyklo[3.1.0]heksaani-2,6-dikarboksylaatti, dietyyli-2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani-2,6-dikarboksylaatti, dibutyy-5 li-2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani-2,6-dikarboksylaatti ja dipropyyli-2-aminobisykklo[3.1.0]heksaani-2,6-dikarboksy-laatti.

Edullisimmin kaavan (I) yhdiste on (+)-2-aminobisyklo [3 . 1 . 0] heksaani-2 , 6-dikarboksyylihappo tai sen Ci-C4-10 alkyyliesteri tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

Vaikka kaikkien tämän keksinnön kaavan X yhdisteiden uskotaan olevan hyödyllisiä kaavan I yhdisteiden valmistuksessa tietyt yhdisteet ovat edullisia. Edullisesti R2a on C02R4a ja R3a on vety. Edullisemmin R4a on karbok-15 sisuojaryhmä, kuten Ci - C6-aikyyliryhmä, esimerkiksi etyyli-ryhmä .

Tämän keksinnön kaavan I yhdisteet valmistetaan tavallisesti syklopropanoimalla 2-sykloalken-l-oni, kaavan II yhdiste, jossa X on kuten edellä on määritetty edeltäville 20 kaavan I yhdisteille. Kaavan I yhdisteet, joissa R3 on vety ja R2 on C02R4, valmistetaan kuten on esitetty kaaviossa 1.

t 1 1 4861

Kaavio 1 12

O

Vx u X Br _

^_/ + Me2St^XC02R4iH

II

H

HV^\ R4a°^cv<^r^x R °2CvOx " ^Sy~NH>

H B C02EC

° IV

III

t rtis^x H^^j*NH2 }T^^eC02Et COjEC NH2

V VI

i » _ Yleisesti kaavan II yhdiste saatetaan reagoimaan *( ' 5 (suojattu karboksi) metyylidimetyylisulfoniumbromidin kanssa t .* muodostamaan bisyklinen kaavan III yhdiste, jossa R4a on ; karboksisuojaryhmä. Tämä yhdiste muutetaan aminohapoksi ' ' ; Strecker- tai Bucherer-Bergs-reaktiolla, mitä seuraa hydro- : i ; lyysi ja esteröinti kaavan IV yhdisteiksi niiden isomeerien 10 seoksena. Tämä isomeerien seos erotetaan kaavan V ja kaavan VI yhdisteiden valmistamiseksi. Nämä yhdisteet hydrolysoi-daan sitten kaavan I yhdisteiden muodostamiseksi, joissa R2 on CO2R4 ja R1 ja R4 ovat vety.

. ‘ Spesifisemmin 2-sykloalken-l-oni saatetaan reagoi- J 15 maan (suojattu karboksi)metyylidimetyylisulfoniumbromidin kanssa muodostamaan bisyklinen välituote III. Tämä syklo-propanointi toteutetaan edullisesti orgaanisessa liuotti-messa amiiniemäksen läsnä ollessa. Sopivia liuottimia tätä 114861 13 reaktiota varten ovat asetonitriili, dikloorimetaani, bent-seeni, tolueeni ja ksyleeni; edullisesti asetonitriili tai dikloorimetaani. Amiiniemäksiä, jotka ovat sopivia käytettäviksi tässä reaktiossa, ovat ei-nukleofiiliset emäkset, 5 kuten 1,8-diatsabisyklo[5.4.0]undek-7-eeni, pyridiini ja kollidiini. Edullinen amiiniemäs käytettäväksi tässä reaktiossa on 1,8-diatsabisyklo[5.4.0]undek-7-eeni. Edullisesti karboetoksimetyylidimetyylisulfoniumbromidi saatetaan reagoimaan amiiniemäksen kanssa muodostamaan etyyli-10 (dimetyylirikkianylideeni)asetaatti in situ. Saatua seosta käsitellään 2-sykloalken-l-onilla. Esimerkkejä 2-syklo-alken-l-oneista ovat 2-syklopenten-l-oni, 2-sykloheksen-l-oni, 2-syklohepten-l-oni ja 2-syklo-okten-l-oni. Reaktio toteutetaan tavallisesti lämpötilassa n. 25 °C - n. 50 °C, 15 edullisesti lämpötilassa n. 25 °C - 30 °C. Reaktio on täydellinen ajassa n. 18 tuntia - kolme päivää.

Bisyklinen välituote III muutetaan bisykliseksi aminohapoksi Strecker- tai Bucherer-Bergs-reaktiolla, mitä seuraa välituotteiden hydrolyysi. Krauch ja Kunz, Organic 20 Name Reacktions, 76 (1964) (katso niissä olevat viitteet).

Edullisesti bisyklinen ketoni III saatetaan reagoimaan ve-: sipitoisen liuoksen kanssa, jossa on kaliumsyanidia tai • * : natriumsyanidia ja ammoniumkarbonaattia, muodostamaan hy- : : : dantoiini välituotteet. Tämä reaktio toteutetaan tavalli- 25 sesti alkoholipitoisessa liuottimessa, kuten etanolissa tai f metanolissa. Reaktio toteutetaan tavallisesti lämpötilassa n. 25 °C - liuottimen palautusjäähdytyslämpötila, edullisesti n. 50 °C:ssa. Reaktio on tavallisesti täydellinen n.

, 18 tunnin kuluttua. Isomeerinen hydantoiini voidaan eristää ‘O; 30 ja puhdistaa kuten edellä on kuvattu. Edullisesti isomee- risten hydantoiinien seos hydrolysoidaan käyttäen natriumini : hydroksidia ja esteröidään tämän jälkeen eristämättä tai puhdistamatta kaavan V tai kaavan VI yhdisteeksi. Tämä hyd-rolyysi toteutetaan tavallisesti liuottimen palautusjäähdy- 35 tyslämpötilassa n. 15 tunnin - n. 20 tunnin aikana.

114861 14

Hydrolyysituotteet, seos, jossa on isomeerisiä kaavan I yhdisteitä, joissa R1 on vety, esteröidään edullisesti ennen diastereomeerien ja enantiomeerien erottamista.

Kun karboksisuojaryhmä on poistettu hydrolyysin aikana, 5 diesteri valmistetaan tämän jälkeen. Liuosta, jossa on kar-boksyylihappoa tai dikarboksyylihappoa alkoholissa, kuten metanolissa, etanolissa, i-propanolissa tai n-butanolissa, käsitellään tionyylikloridilla ja kuumennetaan palautus-jäähdyttäen. Tavallisesti liuos, jossa on hydrolyysituotet-10 ta, jäähdytetään n. 0 °C: seen ennen tionyylikloridin lisäämistä. Esteröinti on tavallisesti täydellinen n. 48 tunnin kuluttua.

Kaavan V ja kaavan VI yhdisteiden diastereomeeriset tuotteet erotetaan käyttäen standardi menetelmiä. Edullisia 15 erottamismenetelmiä ovat kiteyttäminen ja/tai kromatogra-fia. Kaavan V ja kaavan VI yhdisteet voidaan selektiivisesti kiteyttää muodostamalla happoadditiosuola, kuten oksa-laattisuola. Tämä suola valmistetaan käsittelemällä etyyli-asetaattiliuosta, joka sisältää kaavan V ja kaavan VI yh-20 disteiden seosta, oksaalihapolla ja etanolilla. Lisämäärä etanolia voidaan lisätä yhden diastereomeerin kiteyttämisen : '·· helpottamiseksi. Tämä menetelmä antaa kiteytyneen aineen, j V joka on rikastunut yhden isomeerin suhteen, ja suodoksen : : : (emäliuos), joka on rikastunut toisen isomeerin suhteen.

25 Yhdisteet voidaan edelleen puhdistaa käyttäen kromatografi-| .·. aa, kuten silikageelikromatografiaa.

Kaavan V ja kaavan VI yhdisteet hydrolysoidaan mi- * käli tarpeen ja karboksisuojaryhmä poistetaan kaavan I yh-. disteiden valmistamiseksi, joissa R1 ja R4 ovat vety. Yh- ‘i;; 30 disteet hydrolysoidaan tavallisesti käsittelemällä liuosta, i * jossa on kaavan V tai kaavan VI yhdistettä, orgaanisessa : : : liuottimessa, kuten tetrahydrofuraanissa, vesipitoisella emäksellä, kuten natriumhydroksidilla. Tämä hydrolyysi to-teutetaan tavallisesti huoneenlämpötilassa ja vaatii n. 18 35 tuntia loppuunvi emi seksi. Karboksisuojaryhmät poistetaan 15 114861 käyttäen standardivalmistusmenetelmiä. Katso McOmie ja Greene ja Wuts.

Välituotteiden V ja VI yhdisteiden kunkin diaste-reomeerisen parin enantiomeerit resoloidaan käyttäen stan-5 dardi resoluutiomenetelmiä. Katso Jacques, Collet ja Wilen, Enantiomers, Racemates and Resolutions (1981). Edullinen enantiomeerien resoluutiomenetelmä on diastereomeeristen suolojen muodostaminen raseemisten modifiointien ja optisesti aktiivisten (kiraalisten) resolointiaineiden välillä.

10 Jacques, Collet ja Wilen, luku 5. Kaavojen V ja VI yhdisteet, joissa R4a on karboksisuojaryhmä, voidaan resoloida käyttäen happamia kiraalisia resoluutioaineita. Esimerkkejä sopivista happamista kiraalisista resoluutioaineista ovat (+)-kamferihappo, (+) ja (-)-dibentsoyyliviinihappo, diase- 15 toniketogulonihappo, lasalosidi, (+) ja (-)-mantelihappo,

(+) ja (-)-omenahappo, (+) ja (-)-kiniinihappo, (+) ja (-)-viinihappo, (+)-di-p-toluoyyli-D-viinihappo ja (-)-di-p-toluoyyli-L-viinihappo. Edullisia happamia resoloivia aineita kaavojen V ja VI yhdisteiden, joissa R4a on karbok-20 sisuojaryhmä, resoloimiseksi ovat (+)-di-p-toluoyyli-D-viinihappo ja (-)-di-p-toluoyyli-L-viinihappo. Kaavojen V

i ja VI yhdisteet, joissa R4a on vety, voidaan resoloida • ' ! käyttäen emäksisiä kiraalisia resolointiaineita. Esimerkki : : : emäksisestä kiraalisesta resolointiaineesta on (S)-1- 25 fenyylietyyliamiini.

• t • Vaihtoehtoisesti bisyklinen kaavan III yhdiste voi-daan muuttaa diastereomeeristen hydantoiinien seokseksi ku-ten on esitetty kaaviossa II.

» t I f ! t · • · · » # ·

Kaavio II

16 114861 R4ao,c. /1 VV —

O

III

1 h\ I

H 0 VNH

VII H VIII k

Bisyklinen välituote III, joka on valmistettu kuten edellä on kuvattu, saatetaan reagoimaan liuoksen kanssa, 5 jossa on kaliumsyanidia tai natriumsyanidia ja ammoniumkar-bonaattia, muodostamaan diastereomeerisiä hydantoiini välituotteita, kaavan VII ja kaavan VIII yhdisteitä. Tämä reaktio toteutetaan tavallisesti seoksessa, jossa on vettä ja alkoholia, kuten metanolia tai etanolia. Reaktio toteute-10 taan lämpötilassa n. 55 °C - n. 60 °C ja on tavallisesti täydellinen n. 18 tunnin - n. neljän päivän kuluttua. Dia-j\ stereomeeriset tuotteet erotetaan käyttäen standardi mene- telmiä, kuten kiteyttämistä ja/tai kromatografiaa. Edulli-sesti kaavojen VII ja VIII yhdisteet erotetaan kiteyttämäl-; is iä.

; ; Kaavojen VII ja VIII yhdisteet, joissa R4a on vety, ·;· ’* voidaan resoloida käyttäen emäksisiä kiraalisia resolointi- V ’ aineita. Esimerkki emäksisestä kiraalisesta resolointiai- neesta on (R)-1-fenyylietyyliamiini.

20 Hydantoiini välituote, kaavan VII tai kaavan VIII

: : yhdiste muutetaan kaavan I yhdisteeksi, jossa R1 ja R4 ovat >!·_ vety, hydrolyysillä. Hydantoiini ryhmä ja esteriryhmä hydro- lysoidaan käyttäen vesipitoista emästä, kuten natriumhyd- * · ;* roksidia tai vesipitoista happoa, kuten vetykloridihappoa.

25 Tämä hydrolyysi toteutetaan tavallisesti lämpötilassa n.

100 °C - n. 150 °C. Saatu kaavan I yhdiste puhdistetaan käyttäen ioninvaihtokromatografiaa.

114861 17

Kaavan I yhdisteet, joissa R2 on vety ja R3 on C02R4a, valmistetaan kuten kaaviossa III on esitetty.

Kaavio III

A rc°2R4!>_- \_J ' Me" Se

II

o o

HI IX

5 2-sykloalken-l-oni saatetaan reagoimaan karbok-sisuojatun (dimetyylirikkianylideeni)asetaatin kanssa muodostamaan isomeeriset bisykliset välituotteet III ja IV.

Tämä syklopropanointi toteutetaan orgaanisessa liuottimessa 10 lämpötilassa n. 45 °C - n. 85 °C. Sopivia liuottimia ovat bentseeni, tolueeni, ksyleeni ja asetonitriili. Edullisesti reaktio toteutetaan bentseenissä 50 °C:ssa. Diastereomeeri- * · · set tuotteet erotetaan käyttäen silikageelikromatografiaa.

; Kaavan IX yhdiste muutetaan kaavan I yhdisteeksi käyttäen • ·’ 15 menetelmiä, joita on edellä kuvattu kaavan III yhdisteiden » i t !'. : konversiossa.

V · Kaavan III yhdisteet, joissa X on CH2, voidaan myös valmistaa kuten kaaviossa IV on esitetty.

Kaavio IV

18 114861 (zb -~zdb

0 O

XI XII

' ’

R4aOvC. _,£____. H

^9 - nc^} o

111 XIII

Kaavan XI yhdiste saatetaan reagoimaan (suojattu 5 karboksi)metyylidimetyylisulfoniumbromidin kanssa muodostamaan kaavan XII yhdiste, jossa R4a on karboksisuojaryhmä.

,, Reaktio toteutetaan edullisesti menetelmän mukaisesti, joka ” on analoginen kaavan II yhdisteen syklopropanoinnissa kuva- • · * • ·’ tun menetelmän kanssa. Saatu kaavan XII yhdiste muutetaan ·.·.· 10 sitten kaavan XIII yhdisteeksi kuumentamalla esimerkiksi • V lämpötila-alueella 160 - 500 °C, edullisesti 180 - 300 : : : °C:ssa. Kaavan XII yhdisteen kuumentaminen vapauttaa syklo- pentadieeniä. Menetelmä toteutetaan edullisesti inertissä kaasussa, kuten typessä ja inertin orgaanisen liuottimen,

15 kuten diklooribentseenin läsnä ollessa. Saatu kaavan XIII

* • * » · .*··, yhdiste muutetaan sitten kaavan III yhdisteeksi pelkistä- mällä, esimerkiksi hydraamalla palladium/hiilen läsnä oi- t t » V ’ lessa. Pelkistys toteutetaan edullisesti lämpötila-alueella 0-50 °C. Sopivia liuottimia pelkistämistä varten ovat al-'·, 20 koholit, kuten etanoli, esteri, kuten etyyliasetaatti, aro- V. maattiset hiilivedyt, kuten tolueeni ja amidit, kuten dime- tyyliformamidi.

114861 19

On ymmärrettävä, että käyttämällä optisesti aktiivista kaavan XI yhdistettä lähtöaineena voidaan saada optisesti aktiivinen kaavan III yhdiste.

Kaavan XIII yhdisteiden uskotaan olevan uusia ja ne 5 muodostavat keksinnön lisäkohteen.

Kaavan XI yhdiste (mukaan lukien optisesti aktiiviset muodot) voidaan valmistaa menetelmän mukaisesti, jota Klunder et ai. ovat kuvanneet julkaisussa Tetrahedron Lett., 1986, 27, 2543 ja Takano et ai., julkaisussa Synlett 10 1991, 636.

Kaavan I yhdisteet, joissa R1 ja R4 ovat Ci-C4-al-kyyli, valmistetaan vastaavista yhdisteistä, joissa R1 ja R4 ovat vety. Nämä yhdisteet valmistetaan tavallisesti käyttäen synteettisiä standardi menetelmiä. Tavallisessa 15 esimerkissä kaavan I yhdiste, jossa R1 ja R4 ovat vety, voidaan saattaa reagoimaan Ci-C4-alkyylin kanssa hapon läsnä ollessa antamaan vastaava esteri. Tavallisesti tämä reaktio toteutetaan ylimäärän kanssa alkoholia katalyyttisen määrän väkevää rikkihappoa läsnä ollessa.

2 0 Kaavan I yhdisteet, joissa R1 ja R4 eivät ole sa manlaisia, voidaan valmistaa dihaposta ja jos R1 ja R4 ovat : “ vety, käyttäen synteettisiä orgaanisen kemian standardi πιει netelmiä. Esimerkiksi kemia, joka on kehitetty glutamiini- i ja aspartiinihappojen karboksyyliryhmien selektiiviselle *' : 25 funktionalisoinnille, on käyttökelpoinen. Vaihtoehtoisesti, • valitsemalla kaavan X yhdisteen karboksisuojaryhmä, joka on . ;*. stabiili hydrolyysiolosuhteissa hydantoiiniryhmälle, kar boksyyli ryhmät voidaan selektiivisesti muuntaa.

Tämän keksinnön kaavan I yhdisteet ovat tiettyjen 30 metabotrooppisten eksitoivien aminohapporeseptoreiden ago-*;· nisteja. Spesifisemmin, kaavan I yhdisteet ovat negatiivi- ; : : sesti kytkettyjen cAMP-sitoutuneiden metabotrooppisten glu- tamaattireseptoreiden agonisteja. Täten tämän keksinnön mu-kaiset yhdisteet ovat käyttökelpoisia menetelmässä vaikut-35 taa eksitoivaan aminohapporeseptoriin nisäkkäissä, jossa menetelmässä annetaan nisäkkäälle, joka tarvitsee modu- 114861 20 loivaa eksitoivaa aminohappo neurotransmissiota, farmaseuttisesti vaikuttava määrä kaavan I yhdistettä. Termiä "farmaseuttisesti vaikuttava määrä" käytetään kuvaamaan keksinnön yhdisteen määrää, jolla pystytään vaikuttamaan eksitoi-5 viin aminohapporeseptoreihin. Vaikuttamalla keksinnön yhdiste toimii agonistina. Kun keksinnön yhdiste toimii agonistina, yhdisteen vuorovaikutus EAA reseptorin kanssa jäljittelee reaktiota tämän reseptorin ja sen luonnollisen ligandin (ts. L-glutamaatin) vuorovaikutuksen välillä.

10 Kyseinen annos annettavaa yhdistettä määritetään tietenkin tapaukseen liittyvien erityisten olosuhteiden perusteella, mukaan lukien annettava yhdiste, antoreitti, hoidettava sairaus ja vastaavat. Yhdiste voidaan antaa monia reittejä pitkin, mukaan lukien oraalinen, peräsuolen-15 sisäinen, ihonalainen, laskimonsisäinen tai nenänsisäinen reitti. Vaihtoehtoisesti yhdiste voidaan antaa jatkuvana infuusiona. Tavallinen päivittäinen annos sisältää n. 0,001 mg/kg - n. 100 mg/kg tämän keksinnön mukaista vaikuttavaa yhdistettä. Edullisesti päivittäiset annokset ovat n. 0,05 20 mg/kg - n. 50 mg/kg, edullisemmin n. 0,1 mg/kg - n. 20 mg/kg.

! "** Monien fysiologisten toimintojen on osoitettu ole- • '/· van alttiita liiallisen tai sopimattoman eksitoivan amino- .* : : happo transmission stimuloinnin vaikutuksille. Tämän kek- 25 sinnön kaavan I yhdisteillä uskotaan olevan kyky parantaa • nisäkkäissä monia neurologisia sairauksia, jotka liittyvät • » i > tällaiseen sairaustilaan, mukaan lukien akuutit neurologiset sairaudet, kuten sydämen ohitusleikkauksen ja kudoksen . siirron jälkeinen aivojen vajaatoiminta, aivojen verettö- ';;i 3 0 myys (esim. sydänkohtaus ja sydämen pysähtyminen) ; sel- ';· käydinvamma; päävamma, syntymäajan läheinen hapenpuute ja ; hypoglyseeminen hermovaurio. Kaavan I yhdisteellä uskotaan olevan kyky hoitaa monia kroonisia neurologisia sairauksia, .h kuten Alzheimerin tauti; Huntingtonin Chorea; amyotrofinen ! 35 lateraali skleroosi, AIDS:ista johtuva dementia; silmävau- rio ja verkkokalvosairaus, kognitiiviset sairaudet ja itse 114861 21 aiheutettu tai lääke-indusoitu Parkinsonin tauti. Tämän keksinnön kaavan I yhdisteillä uskotaan olevan myös kyky hoitaa nisäkkäissä monia muita neurologisia sairauksia, jotka liittyvät glutamaattihäiriöön, mukaan lukien lihas-5 kouristukset; kouristukset; migreenityyppiset päänsäryt; virtsan pidätyskyvyttömyys; psykoosit; lääketoleranssi, vieroitus ja lopettaminen (ts. opiaatit, bentsodiatsepii-nit, nikotiini, kokaiini tai etanoli); tupakoinnin lopettaminen; ahdistus ja vastaavat sairaudet (esim. paniikkihäi-10 riö ja stressiin liittyvät häiriöt); pahoinvointi; aivo-ödeema; krooninen kipu; unihäiriöt; Touretten oireyhtymä; lapsen tarkkaamattomuuden, impulsiivisuuden ja yliaktiivi-suuden oireyhtymä (attention deficit disorder); ja tardii-vinen liikuntahäiriö.

15 Tämän keksinnön yhdisteet ovat cAMP-sitoutuneiden metabotrooppisten glutamaattireseptoreiden agonisteja. Nämä yhdisteet ovat negatiivisesti kytkettyjä reseptorin kautta adenyylisyklaasiin, inhiboiden syklisen adenosiinimonofos-faatin muodostumista. Täten tämän keksinnön kaavan I yhdis-20 teillä uskotaan olevan kyky parantaa monia psykiatrisia sairauksia, kuten skitsofreniaa, ahdistusta ja vastaavia ‘ ' sairauksia (esim. paniikkihäiriötä ja stressiin liittyviä : sairauksia), masennusta, bipolaarisia sairauksia, psykoosia ·'/_·’ ja pakonomaista mielijohteiden noudattamista, l ' : 2 5 Toteutettiin kokeita osoittamaan kaavan I yhdistei- * den kyky vaikuttaa eksitoiviin aminohapporeseptoreihin. Yh- , disteiden affiniteetti metabotrooppisia glutamaattiresepto- reita kohtaan osoitettiin korvaamalla selektiivisesti ^ (1S,3R)-1-aminosyklopentaani-l,3-dikarboksyylihappo-herkkä h! 30 [3H]-glutamaattisitoutuminen rotan aivojen solukalvoihin.

[3H] glutamaatin ( [3H] Glu) sitoutuminen toteutettiin rotan :,· · etuaivojen raaoissa kalvoissa, kuten Schoepp ja True ovat kuvanneet. Schoepp ja True, Neuroscience Lett., 145, 100 - h 104 (1992); Wright, McDonald ja Schoepp, J. Neurochem., 63, ♦ 1 35 938 - 945 (1994). Kaavan I yhdisteen pitoisuus, joka inhi boi 50 % sitoutumisesta (IC5o) tai [3H]Glu:n prosentuaalinen 22 114861 korvautuminen 10 μΜ tai 100 μΜ kaavan I yhdisteen pitoisuuksilla on esitetty taulukossa 1.

Taulukko I

I Kaavan I yhdisteiden reseptorisitoutuminen 5 Yhdiste3 nro IC50 (μΜ) 3b 0,32 6C 0,18 7C 160,78 8b 3,2 10 a yhdistenumerot ovat esimerkkiosasta b yhdiste testattu enantiomeerien seoksena c yhdiste testattu puhtaana enantiomeerinä d yhdiste testattu diastereomeerien seoksena

Yhdisteet 3, 6, 7 ja 8 ovat kaikki dikarboksyyli- 15 happoja. Yleisesti on havaittu, että esterijohdannaiset (ne kaavan I yhdisteet, joissa toinen tai molemmat R1:stä ja R4:stä ei ole vety) ovat inaktiivisia reseptorisitoutumis-kokeessa. Kuitenkin uskotaan, että nämä yhdisteet ovat hydrolysoitavissa in vivo vastaavaksi hapoksi ja voidaan täten 20 käyttää esilääkkeinä. On ymmärrettävä, että tämä keksintö mahdollistaa vaikuttavat dikarboksyylihapot, kuten myös : ·· mitkä tahansa esilääkemuodot, jotka pystyvät muodostamaan (·’ aktiivisen hapon in vivo.

; ; : Kaavan I yhdisteet ovat tehokkaita vaikuttamaan » » ;‘ ‘: 25 cAMP-sitoutuneisiin metabotrooppisiin glutamaattiresepto- ; reihin. Edustavien yhdisteiden kyky vähentää forskoliinilla * » » · stimuloitua cAMP-muodostumista testattiin rotan aivotursos- » ► ♦ sa ja rotan aivokuoressa käyttäen menetelmiä, joita Schoepp . ja Johnson ovat kuvanneet. Schoepp ja Johnson, Neurochem.

* · · 30 Int. 22, 277 - 283 (1993) . Näiden kokeiden tulokset on esi-'·;·* tetty taulukossa II.

I I · V * t • t a • v » » 1 1 4861 23

Taulukko II

Forskoliinilla stimuloidun cAMP muodostumisen inhi- bitio EC5o (μΜ) 5 Yhdisteen nro 6 7 rotan aivokuori 0,055 + 0,017 22,0 ± 3,4 rotan aivoturso 0,036 ± 0,015 29,4 ± 3,04

Kaavan I yhdisteiden kyky hoitaa ahdistusta ja vastaavia sairauksia voidaan määrittää käyttäen hyvin tunnet-10 tuja pelosta aiheutuvia säikähtymis- ja plusmuotoisia laby-rinttiahdistusmalleja, joita on kuvattu vastaavasti julkaisuissa Davis Psychopharmacology, 62:1; 1979 ja Lister,

Psychopharmacol, 92:180 - 185; 1987.

Pelosta aiheutuvassa säikähdysmallissa eläimet al-15 tistetaan neutraalille ärsykkeelle, kuten valolle (ehdollinen ärsyke) yhdessä epämiellyttävän ärsykkeen, kuten säi-käytyksen kanssa (ei-ehdollinen ärsyke). Tämän mallin mukaisesti, kun eläimet altistetaan voimakkaalle akustiselle ärsykkeelle, aiheutetaan suurempi säikähdysreaktio kun säi-20 käyttämisärsykettä edeltää valo.

Korotettu plusmuotoinen labyrintimalli perustuu • ''· jyrsijöiden luontaiseen vastenmielisyyteen korkeita ja • ’(ϊ avoimia tiloja kohtaan.

: : : Diatsepam ja buspironihydrokloridi, joiden on klii- 25 nisesti osoitettu olevan rauhoittavia aineita, ovat tehok- » · .* kaita vähentämään pelkoa, joka liittyy valon lähettämiseen pelosta aiheutuvassa säikäyttämismallissa (kasvatettu säi- 5 * ( käyttämisreaktio) ja vähentämään pelkoa avoimia tiloja kohtaan korotetun plus-muotoisen labyrintin mallissa.

‘.(I 30 Urospuoliset Long Evans -rotat (180 - 400 g) tai urospuoliset NIH Swiss -hiiret (18 - 35 g) saatiin Harlan ;(i : Sprague-Dawleystä, Cumberland, IN, USA ja niiden annettiin sopeutua vähintäin kolme päivää ennen koetta. Eläimet pi-1, dettiin 23 ± 2 °C:ssa (suhteellinen kosteus 30 % - 70 %) ja j 35 niille annettiin Purina Certified Rodent Chow -ravintoa ja 24 11 1 vettä ad libitum. Valojakso oli 12 tuntia ja pimeä jakso oli 12 tuntia, niin että pimeä jakso alkoi n. klo 18.00.

Koeyhdisteet liuotettiin puhdistettuun veteen ja neutraloitiin 5 N NaOH:lla pH-arvoon 7-8, jolloin se on 5 käyttökelpoista. Diatsepam (Sigma Chemical Company, St. Louis, MO) suspendoitiin puhdistettuun veteen lisäämällä ti-poittain Tween 80. Kontrollieläimet saivat vastaavaa liuotinta .

Pelosta aiheutuva säikähdys: 10 SL-LAB (San Diego Instruments, San Diego, CA) kam mioita käytettiin altistamista varten ja säikähdysreaktioi-den aiheuttamiseen ja taltioimiseen. Klassista ehdollista-mismenetelmää käytettiin säikähdysreaktion aikaansaamiseksi. Lyhyesti, ensimmäisenä kahtena päivänä rotat pantiin 15 pimeisiin säikäyttämiskammioihin, joihin asennettiin sähkö-ristikot. Viiden minuutin sopeutumisajan jälkeen kukin rotta sai 1 mA sähköshokin (500 ms), jota edelsi viiden sekunnin valojakso (15 wattia), joka pysyi päällä sähköshokin ajan. Kymmenen valo- ja sähköshokkiyhdistelmää annettiin 20 kussakin ehdollistamisjaksossa, rotille annettiin veden ja koeyhdisteen liuosta syöttöletkun avulla ja shokkikoejaksot : * toteutettiin. Kymmenen peräkkäistä akustista säikäyttä- ‘ : misärsykettä (110 db, ei yhdessä valon kanssa) suoritettiin : jakson alussa minimoimaan alkuperäinen ärsyketottumuksen 25 vaikutus. Tätä seurasi 20 vuorottelevaa pelkästään äänen j tai äänen, jota edeltää valo, koetta. Lukuun ottamatta alun ;·, koesarjaa säikäyttämisreaktion amplitudit kummallekin koe-

* I

tyypille (pelkästään ääni/ääni ja valo) keskimääräistettiin . kullekin rotalle läpi koko koejakson. Tulokset on esitetty ;;; 30 pelkästään äänen ja valon ja äänen välisenä erona. Tulokset on esitetty taulukossa III.

114861 25

Taulukko III

Pelosta aiheutuva säikähdys

Koeyhdiste ED50 (mg/kg p.o.) yhdiste 6 0,3 5 yhdiste 7 inaktiivinen* diatsepam 0,4 * korkein testattu annos, 10 mg/kg p.o.

Automatisoitu korotettu plusmallinen labyrintti: Korotettu plusmallinen labyrinttirakennelma perustuu 10 Listerin malliin hiirille (1987). Koko labyrintti oli tehty kirkkaasta plexilasista. Labyrintti koostui kahdesta avoimesta käytävästä (30 x 5 x 0,25 cm) ja kahdesta suljetusta käytävästä (30 x 5 x 15 cm). Kunkin labyrinttikäytävän lattia oli uurrotettu liukkauden estämiseksi. Käytävät lähti-15 vät keskustasolta ja ne olivat 90°:n kulmassa toisiinsa nähden. Labyrintti oli korotettu 45 cm:n korkeuteen lattiasta ja valaistu punaisella valolla. Yksittäiset infra-punavalokennot asennettiin pitkin labyrinttikäytävää seuraamaan suljettu käytävä-, avoin käytävä- ja kuonokosketus 20 aktiivisuutta. Hiiret pantiin yksittäin labyrintin keskus-tasolle ja suljettu käytävä-, avoin käytävä- ja kuonokosketus- (työntäen ainoastaan pään avoimeen käytävään labyrin-.' tin suljetusta käytävästä) lukumäärä laskettiin ja taltioi- ' tiin ja käytettiin mittana käytäviin menoille ja ajalle, : 25 joka käytettiin labyrintin eri osissa viiden minuutin koe- jakson aikana.

. Yhdisteen 6 oraalinen antaminen aiheutti huomatta vaa kasvua avoin käytävä aktiivisuudessa annoksena 1, 3 ja 10 mg/kg. Kuonokosketusmäärät osoittivat huomattavaa kasvua 30 3 mg/kg:n annoksena. Suljettu käytävä aktiivisuusmäärät ei-

» M

vat muuttuneet huomattavasti millään yhdisteen 6 annoksel-: la.

: Kaavan I yhdisteiden kyky suojata lämminverisiä eläimiä huumeen vieroituksen tai lopettamisen vaikutuksil-35 ta, voidaan osoittaa käyttäen auditorista säikäyttämismal- lia. Tässä mallissa eläimille annetaan huumetta (nikotiinia 114861 26 tai diatsepamia) ja sitten annostus lopetetaan. Tämä huumeen antamisen lopettaminen aiheuttaa kasvavan säikähdysre-aktion ääniärsykkeelle. Koeyhdisteitä annetaan sitten eläimille sen määrittämiseksi, pystytäänkö niillä heikentämään 5 kasvanutta säikähdysreaktiota.

Long Evans -rottia (200 - 400 g; Harlan Sprague

Dawley, Columbus, IN) pidettiin yksittäin kontrolloidussa ympäristössä 12 tuntia valo-pimeä-syklissä ja ne saivat vapaasti ravintoa (Purina Rodent Chow) ja vettä. Rotat nuku-10 tettiin isofluranilla ja Alzet-osmoottiset pumput (Alza

Corporation) istutettiin ihonalaisesti.

Koeyhdiste liuotettiin puhdistettuun veteen ja neutraloitiin 5 N NaOHrlla pH-arvoon 7-8, mikäli tarpeen. Diatsepam (Sigma Chemical Company, St. Louis, MO) suspen-15 doitiin liuottimeen, joka koostui 40 %:sta PEG 300, 10 %:sta EtOH, 2 %:sta bentsyylialkoholia, 1 %:sta Tween 80 ja 47 %:sta puhdistettua vettä. Nikotiini (Research Biochemi-cals Inc., Natick, MA) liuotettiin suolaliuokseen. Kontrol-lieläimet saivat vastaavaa liuotinta.

20 Nikotiinivieroitus:

Pumput täytettiin nikotiinin (6 mg/kg/päivä, s.c.), '· diatsepamin (10 mg/kg/päivä, s.c.), koeyhdisteen (0,1, 3, : : 10 mg/kg, s.c.) tai liuottimen kuljettamiseksi. 12 päivää ;Y; pumppujen ihonalaisen istutuksen jälkeen rotat nukutettiin 25 isof luraanilla ja pumput poistettiin. Vieroituksen aikana : .(pumpun poiston jälkeen) auditorinen säikähdysreaktio ; ·, (huippuamplitudi, Vmax) yksittäisille rotille taltioitiin käyttäen San Diego Instruments -säikäyttämiskammioita (San , Diego, CA) . Säikäyttämisjaksot koostuivat viiden minuutin ;; 30 sopeutumisjaksosta taustaäänitasolla 70 ± 2 dbA, mitä välittömästi seurasi 25 ääniärsykettä (120 + 2 dbA melu, ; ; 50 ms:n kesto) 8 sekunnin välein. Huippusäikäyttämisampli- tudit keskimääräistettiin sitten kaikille 25 ärsykekerralle kussakin jaksossa ja kaikki tulokset on esitetty kokonais-35 valtaisena jaksona. Auditorinen säikähdysreaktio arvioitiin 114861 27 päivittäin vieroituspäivinä 1, 2, 3, 4 tai 5. Perus- säikähdysreaktio arvioitiin ennen pumpun poistamista päivänä 12 .

Reaktio ääniärsykkeelle kasvoi huomattavasti ensim-5 mäisinä kolmena päivänä kroonisen nikotiinialtistuksen lopettamisen jälkeen verrattuna kontrollirottiin, jotka saivat vettä. Rotat, joille oli annettu korvausannos nikotiinia annoksena 0,03 mg/kg i.p. tai korkeampana, eivät osoittaneet samaa kasvanutta säikähdysreaktiota kuin eläimet, 10 jotka eivät saaneet korvausnikotiinia. Esikäsittely yhdisteellä 6 aiheutti myös annoksesta riippuvan eston vieroitus-indusoidussa kasvussa säikähdysreaktiossa. Huomattava kasvaneen säikähtymisen heikentyminen oli ilmeinen 3 mg:n/kg annoksella p.o. yhdisteen 6 annosta verrattuna ni-15 kotiinikontrolleihin (ED50 = 0,7 mg/kg, i.p.).

Diatsepam vieroitus:

Reaktio ääniärsykkeelle väheni huomattavasti ensimmäisen neljän päivän aikana kroonisen diatsepam-altistuksen päättymisen jälkeen verrattuna kontrollirottiin, jotka sai-20 vat liuotinta. 3 ja 10 mg:n/kg korvausannokset i.p. diatse-pamia eivät estäneet kasvavaa säikähdysreaktiota ja joissa-i > kin tapauksissa kasvattivat reaktiivisuutta osoittavaa to- • ' ! leranssia. Rotat, jotka saivat 30 mg/kg i.p. diatsepam- : korvausta päivittäin 60 minuutia ennen säikähdysreaktion 25 arviointia, eivät osoittaneet kasvavaa reaktiivisuutta .\ diatsepamin annon päättymisen jälkeen päivinä 1-4, ver- ;·, rattuna diatsepam-kontrolliin. Esikäsittely yhdisteellä 6 esti odotetun säikähdysreaktion kasvun, mikä seurasi diatsepam-altistuksen päättymistä. 0,1 - 0,3 mg:n/kg annokset ;;; 3O p.o. yhdistettä 6 vähensivät huomattavasti aikaansaatua säikähdystä verrattuna kontrollireaktioon (ED50 = 0,1 T: mg/kg, p.o.).

Tämän keksinnön yhdisteet formuloidaan edullisesti ennen antamista. Täten tämän keksinnön toisena kohteena on 35 farmaseuttinen valmistemuoto, joka sisältää kaavan I yhdistettä yhdessä yhden tai useamman farmaseuttisesti hyväksyt- 114861 28 tävän kantoaineen, laimentimen tai täyteaineen kanssa. Nämä farmaseuttiset valmistemuodot valmistetaan tunnettujen menetelmien avulla käyttäen hyvin tunnettuja ja helposti saatavilla olevia aineosia. Tämän keksinnön koostumusten val-5 mistamisessa vaikuttava aineosa sekoitetaan tavallisesti kantoaineen kanssa tai laimennetaan kantoaineella tai suljetaan sisään kantoaineeseen, joka voi olla kapselin, paperin tai muun säiliön muodossa. Kun kantoaine toimii laimen-timena, se voi olla kiinteä, puolikiinteä tai nestemäinen 10 aine, joka toimii apuaineena tai täyteaineena tai väliai neena vaikuttavalle aineosalle. Koostumukset voivat olla tablettien, pillereiden, jauheiden, eliksiirien, suspensioiden, emulsioiden, liuosten, siirappien, aerosolien, voiteiden, jotka sisältävät esimerkiksi aina 10 %:iin asti 15 vaikuttavaa yhdistettä, pehmeiden ja kovien gelatiinikapse-leiden, peräpuikkojen, steriilien injektoitavien liuosten, iholaastareiden, ihonalaisten istutusten ja steriilisti pakattujen jauheiden muodossa.

Joitakin esimerkkejä sopivista kantoaineista, täy-20 teaineista ja laimentimista ovat laktoosi, dekstroosi, sakkaroosi, sorbitoli, mannitoli, tärkkelys, arabikumi, kal-; ·* siumfosfaatti, alginaatit, traganttikumi, gelatiini, kal- : ’ : siumsilikaatti, hienokiteinen selluloosa, polyvinyylipyrro- : : lidoni, selluloosa, vesisiirappi, metyyliselluloosa, metyy- ; 25 li- ja propyylihydroksibentsoaatit, talkki, magnesiumstea- raatti, steariinihappo ja mineraaliöljy. Valmistemuodot : , voivat lisäksi sisältää liukastusaineita, kostuttimia (pin- ta-aktiivisia aineita), emulgointi- ja suspendointlaineita, säilöntäaineita, makeutus- tai makuaineita. Keksinnön koos-30 tumukset voidaan formuloida niin, että aikaansaadaan nopea, pidennetty tai viivytetty vaikuttavan aineosan vapautuminen ;: antamisen jälkeen potilaalle, käyttäen alalla hyvin tunnet- ' : tuja menetelmiä.

J Koostumukset formuloidaan edullisesti yksikköannos- 35 muotoon, kunkin annoksen sisältäessä n. 1 mg - n. 500 mg, edullisemmin n. 5 mg - n. 200 mg vaikuttavaa aineosaa. Ter- 114861 29 mi "yksikköannosmuoto" viittaa fysikaalisesti erilliseen yksikköön, joka sopii yksittäiseksi annokseksi ihmisille tai muille nisäkkäille, jolloin kukin yksikkö sisältää ennalta määritetyn määrän vaikuttavaa ainetta, jonka on las-5 kettu aiheuttavan halutun terapeuttisen vaikutuksen, yhdessä sopivan farmaseuttisen kantoaineen, laimentimen tai täyteaineen kanssa. Seuraavat valmistemuotoesimerkit ovat pelkästään kuvaavia eikä niiden tarkoitus ole rajoittaa keksinnön piiriä millään tavalla.

10 Valmistemuoto 1

Kovat gelatiinikapselit valmistettiin käyttäen seu-raavia aineosia: Määrä (mg/kapseli) 15 2-aminobisyklo[3.1.0]hek- saani-2,6-dikarboksyylihappo 250 tärkkelys, kuivattu 200 magnesiumstearaatti 10 kokonaismäärä 460 mg 20 Edeltävät aineosat sekoitettiin ja täytettiin ko viin gelatiinikapseleihin 460 mg:n määrinä.

i * Valmistemuoto 2 • Tabletti valmistettiin käyttäen seuraavia aineosia: Määrä 25 (mg/tabletti) ; 2-aminobisyklo [3.1.0] hek- saani-2,6-dikarboksyylihappo 250 selluloosa, hienokiteinen 400 piidioksidi 10 / 3 0 steariinihappo 5 kokonaismäärä 665 mg :; Aineosat sekoitettiin ja puristettiin tableteiksi, joista kukin painoi 665 mg.

114861 30

Valmistemuoto 3

Valmistettiin aerosoliliuos, joka sisälsi seuraavat aineosat:

Paino-% 5 2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani- 2.6- dikarboksyylihappo 0,25 etanoli 29,75 ponnekaasu 22 70,00 (klooridifluorimetaani) 10 kokonaismäärä 100,0

Vaikuttava yhdiste sekoitettiin etanolin kanssa ja seos lisättiin osaan ponnekaasua 22, jäähdytettiin -30 °C:seen ja siirrettiin syöttölaitteeseen. Tarvittava määrä lisättiin sitten ruostumattomaan terässäiliöön ja 15 laimennettiin jäljellä olevalla ponnekaasulla. Säiliöön asennettiin sitten venttiili.

Valmistemuoto 4

Tabletit, joista kukin sisälsi 60 mg vaikuttavaa aineosaa, valmistettiin seuraavasti: 20 2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani- 2.6- dikarboksyylihappo 60 mg ; ·· tärkkelys 45 mg : hienokiteinen selluloosa 35 mg :V: polyvinyylipyrrolidoni 4 mg 2 5 natriumkarboksimetyylitärkkelys 4,5 mg ; .magnesiumstearaatti 0,5 mg /:*, talkki 1 mg i i kokonaismäärä 150 mg , Vaikuttavan aineosan, tärkkelyksen ja selluloosan ;; 30 annettiin kulkea nro 45 mesh U.S. -seulan läpi ja sekoitet tiin perusteellisesti. Polyvinyylipyrrolidoniliuos sekoi-. tettiin aikaansaatujen jauheiden kanssa ja annettiin sitten kulkea nro 14 mesh U.S. -seulan läpi. Näin aikaansaadut ra-keet kuivattiin 50 °C:ssa ja niiden annettiin kulkea nro 18 ; 35 mesh U.S. -seulan läpi. Natriumkarboksimetyylitärkkelys, magnesiumstearaatti ja talkki, joiden aikaisemmin oli an- 114861 31 nettu kulkea nro 60 mesh U.S. -seulan läpi, lisättiin sitten rakeisiin, jotka, sekoittamisen jälkeen, puristettiin tablettikoneessa antamaan tabletteja, joista kukin painoi 150 mg.

5 Valmistemuoto 5

Kapselit, joista kukin sisälsi 80 mg vaikuttavaa aineosaa, valmistettiin seuraavasti: 2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani- 2.6- dikarboksyylihappo 80 mg 10 tärkkelys 59 mg hienokiteinen selluloosa 59 mg magnesiumstearaatti 2 mg kokonaismäärä 200 mg

Vaikuttava aineosa, selluloosa, tärkkelys ja magne-15 siumstearaatti sekoitettiin, annettiin kulkea nro 45 mesh:in seulan läpi ja täytettiin koviin gelatiinikapselei-hin 200 mg:n määrinä.

Valmistemuoto 6

Peräpuikot, joista kukin sisälsi 225 mg vaikuttavaa 20 aineosaa, voidaan valmistaa seuraavasti: 2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani- 2.6- dikarboksyylihappo 225 mg tyydyttyneitä rasvahappoglyseridejä 2 000 mg : kokonaismäärä 2225 mg 25 Vaikuttavan aineosan annettiin kulkea nro 60 mesh U.S. -seulan läpi ja suspendoitiin vastasulatettuihin tyydyttyneisiin rasvahappoglyserideihin käyttäen tarvittavaa minimilämpömäärää. Seos kaadettiin sitten peräpuikkomuot-. tiin, jonka nimellispaino oli 2 g, ja annettiin jäähtyä, li; 30 Valmistemuoto 7 y’ Suspensiot, joista kukin sisälsi 50 mg vaikuttavaa : aineosaa/5 ml annosta, valmistettiin seuraavasti: •' ‘'; 2 -aminobisyklo[3.1.0]heksaani- .1. 2,6-dikarboksyylihappo 50 mg . I 35 natriumkarboksimetyyliselluloosa 50 mg siirappi 1,25 ml 114861 32 bentsoehappoliuos 0,10 ml makuaine vaihtelevia määriä väriaine vaihtelevia määriä puhdistettu vesi kokonaismääräksi 5 ml 5 Lääkkeen annettiin kulkea nro 45 mesh U.S. -seulan läpi ja sekoitettiin natriumkarboksimetyyliselluloosan ja siirapin kanssa muodostamaan tasainen tahna. Bentsoehappoliuos, maku- ja väriaine laimennettiin osalla vettä ja lisättiin sekoittaen. Sitten lisättiin riittävästi vettä tar-10 vittavan tilavuuden muodostamiseksi.

Valmistemuoto 8

Laskimonsisäinen valmistemuoto voidaan valmistaa seuraavasti: 2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani-15 2,6-dikarboksyylihappo 100 mg mannitoli 100 mg 5 N natriumhydroksidi 200 μΐ puhdistettu vesi 5 ml:ksi

Seuraavat esimerkit kuvaavat edelleen tämän keksin-20 non yhdisteitä ja niiden valmistusmenetelmiä. Esimerkkien tarkoituksena ei ole rajoittaa keksinnön piiriä millään ta- * · valla eikä niitä tulisi sellaisina pitää. Kaikki kokeet • ' : suoritettiin kuivan typen tai argonin ylipaineessa. Kaikki : ; ; liuottimet ja reagoivat aineet ostettiin kaupallisista läh- 25 teistä ja käytettiin sellaisenaan, jollei toisin ilmoiteta, i Kuiva tetrahydrofuraani (THF) saatiin tislaamalla natriu- , ·: ·. mistä tai natriumbentsofenoniketyylistä ennen käyttöä. Pro- toniydinmagneettiresonanssi (¾ NMR) spektri saatiin GE QE-, 300 -spektrometrillä 300,15 MHz:ssä, Bruker AM-500 -spek- I i · ;;; 30 trometrillä 500 MHz:ssä tai Bruker AC-200P -spektrometrillä ;* 200 MHz:ssä. Vapaa atomipommitus-massaspektroskopia (FABMS) ; : toteutettiin VG ZAB 2SE -laitteistolla. Kenttädesorptio- massaspektroskopia (FDMS) toteutettiin käyttäen joko VG 1 70SE:tä tai Varian MAT 731 -laitteistoa. Optiset rotaatiot 35 määritettiin Perkin-Elmer 241 -polarimetrillä. Kromatogra- finen erottaminen Waters Prep 500 LC:llä toteutettiin tval- 114861 33 lisesti käyttäen liuottimien lineaarigradienttejä, jotka on ilmoitettu tekstissä. Reaktioiden loppuun etenemistä seurattiin tavallisesti käyttäen ohutkerroskromatografiaa (TLC). Ohutkerroskromatografia toteutettiin käyttäen E.

5 Merck Kieselgel 60 F254 -levyjä, 5 cm x 10 cm, 0,25 mm:n paksuus. Täplät havaittiin käyttäen UV:n ja kemiallisen havainnon (levyt upotettiin serium(IV)ammoniummolybdaatti-liuokseen [75 g ammoniummolybdaattia ja 4 g serium(IV)-sulfaattia 500 ml:ssa 10-%:ista vesipitoista rikkihappoa] 10 ja UV:n yhdistelmää ja kuumennettiin sitten kuumalevyllä). Flashkromatografia toteutettiin kuten ovat kuvanneet Still et ai., Still, Kahn ja Mitra julkaisussa J. Org. Chem. 43, 2923 (1978). Hiilen, vedyn ja typen alkuaineanalyysit mää ritettiin Control Equipment Corporation 440 -alkuaine-15 analysoijalla tai suoritettiin Universidad Complutense Analytical Centren toimesta (Facultad de Farmacia, Madrid, Espanja) . Sulamispisteet määritettiin lasikapillaarilla Gal-lenkamp-kuumailmahaude sulamispistelaitteistossa tai Buchi-sulamispistelaitteistossa ja ne ovat korjaamattomia. Numero 20 suluissa yhdisteen jälkeen viittaa yhdisteen numeroon.

Valmistusmenetelmä 1

Karboetoksimetyyli-dimetyylisulfoniumbromidi . ‘ : Liuosta, jossa oli etyylibromiasetaattia (265 g) ja :Y: dimetyylisulfidia (114 g) asetonissa (500 ml), sekoitettiin 2 5 huoneenlämpötilassa. Kolmen päivän kuluttua otsikkoyhdiste , /. eristettiin suodattamalla reaktioseos. Sulamispiste 88 - ··’ 90 °C.

Esimerkki 1 (1SR,5RS,6SR) etyyli-2-oksobisyklo[3.1.0]heksaani-;; 3 0 6-karboksylaatti

Suspensiota, jossa oli karboetoksimetyyli-di-metyylisulfoniumbromidia (45,5 g) tolueenissa (350 ml), kä-siteltiin 1,8-diatsabisyklo [5.4.0] undek-7-eenillä (30,2 g). Saatua seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa. Yhden tun-35 nin kuluttua reaktioseosta käsiteltiin 2-syklopenten-l-onilla (19,57 g). 18 lisätunnin jälkeen reaktioseos lisät- 1 1 4861 34 tiin 1 N vetykloridihappo/natriurakloridiliuokseen. Saatu seos uutettiin dietyylieetterillä. Yhdistetyt eetteriuut-teet kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väke-vöitiin tyhjössä. Jäännös puhdistettiin käyttäen silikagee-5 likromatografiaa eluoiden 10-%:inen etyyliasetaatti/ hek-saani 50-%:inen etyyliasetaatti/heksaani pitoisuusgra- dientilla antamaan 22,81 g otsikkoyhdistettä. Sulamispiste: 36 - 38 °C.

FDMS: m/z = 168 (M+) .

10 Analyyttisesti laskettu C9H12O3: lie: C, 64,27; H, 7,19. Havaittu: C, 64,54; H, 7,11.

Esimerkki 2 (1SR,2RS# 5RS,6SR) dietyyli-2-aminobisyklo[3.1.0] -heksaani-2,6-dikarboksylaatti (1) ja 15 (1SR,2SR,5RS,6SR) dietyyli-2-aminobisyklo[3.1.0]-heksaani- 2,6-dikarboksylaatti (2)

Liuosta, jossa oli yhdistettä, joka oli valmistettu kuten esimerkissä 1 (22,81 g) etanolissa (200 ml), käsiteltiin vesipitoisella liuoksella, jossa oli kaliumsyanidia 20 (9,71 g ja ammoniumkarbonaattia (21,2 g) vedessä (200 ml).

Saatu seos kuumennettiin n. 50 °C:seen. Noin 18 tunnin kuluttua reaktioseoksen annettiin jäähtyä huoneenlämpötilaan • ‘ : ja käsiteltiin natriumhydroksidilla (16,2 g) . Saatu seos ; kuumennettiin palautusjäähdytyslämpötilaan. Noin 18 tunnin 25 kuluttua reaktioseoksen annettiin jäähtyä huoneenlämpöti-: laan ja jäähdytettiin 0 °C:seen. Kylmän seoksen pH säädet- tiin pH-arvoon 1 lisäämällä väkevää vetykloridihappoa. Tämä seos väkevöitiin kuiviin tyhjössä. Jäännös liuotettiin eta-, noliin, jäähdytettiin 0 °C:seen ja käsiteltiin tionyyliklo- ;;; 30 ridilla (80,6 g). Saatua seosta kuumennettiin palautusjääh- ;>* dyttäen. Noin 48 tunnin kuluttua reaktioseos väkevöitiin kuiviin tyhjössä. Jäännöstä käsiteltiin 1 N natriumhydrok-sidilla ja saatu seos uutettiin dietyylieetterillä. Yhdistetyt eetteriuutteet kuivattiin kaliumkarbonaatilla, suoda-; 35 tettiin ja väkevöitiin tyhjössä antamaan 24,6 g otsikkoyh- disteiden seosta.

114861 35

Esimerkki 3 (1SR,2SR,5RS,6SR) dietyyli-2-aminobisyklo[3.1.0] -heksaani-2,6-dikarboksylaatti (2)

Liuosta, jossa oli yhdisteitä, jotka oli valmistet-5 tu kuten esimerkissä 2 on kuvattu (20,71 g) etyyliasetaatissa (200 ml), käsiteltiin liuoksella, jossa oli oksaalihappoa (15,46 g) etanolissa (50 ml). Saatua seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa. Yhden tunnin kuluttua reak-tioseosta käsiteltiin lisämäärällä etanolia (50 ml) . 18 10 tunnin kuluttua seos suodatettiin ja suodos haihdutettiin kuiviin tyhjössä. Jäännöstä käsiteltiin 1 N natriumhydrok-sidilla ja saatu seos uutettiin dietyylieetterillä. Yhdistetyt eetteriuutteet pestiin suolaliuoksella, kuivattiin kaliumkarbonaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä.

15 Jäännös puhdistettiin silikageelikromatografisesti eluoiden metyleenikloridi : 5-%:isella ammoniumhydroksidi/metanolil-la (97 : 3) antamaan 15,11 g otsikkoyhdistettä.

FDMS: m/z = 242 (M+H).

Analyyttisesti laskettu Ci2Hi9N04 : lie: C, 59,74; H, 7,94; N, 20 5,81. Havaittu: C, 59,78; H, 8,13; N, 5,77.

Esimerkki 4 (1SR,2SR,5RS,6SR) 2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani- | * ' 2,6-dikarboksyy1ihappo (3) : : ; Liuosta, jossa oli yhdistettä, joka oli valmistettu 25 kuten esimerkissä 3 on kuvattu (3,1 g) 2 N natriumhydroksi-; dissa (25 ml) ja tetrahydrofuraanissa (25 ml) , sekoitettiin :·, huoneenlämpötilassa. Noin 18 tunnin kuluttua tetrahydrofu- raani poistettiin alennetussa paineessa ja saadun liuoksen , pH säädettiin arvoon 9. Otsikkoyhdiste puhdistettiin käyt- ;; 30 täen ioninvaihtokromatografiaa (Bio-Rad AG1-X8) eluoiden 50-%:isella etikkahappo/vedellä antamaan 2,12 g yhdistettä.

, Sulamispiste: > 250 °C (haj .) .

FDMS: m/s = 186 (M+H) .

1, Analyyttisesti laskettu C8HnN04: lie: C, 51,89; H, 5,99; N, 35 7,56. Havaittu: C, 51,74; H, 6,15; N, 7,45.

114861 36

Esimerkki 5 (1SR,2SR,5RS,6SR) dietyyli-2-aminobisyklo [3.1.0]-heksaani-2,6-dikarboksylaatti (2) hydrokloridisuola

Liuosta, jossa oli yhdistettä, joka oli valmistettu 5 kuten esimerkissä 3 on kuvattu (2,41 g) dietyylieetterissä (75 ml) , sekoitettiin huoneenlämpötilassa samalla kun kaasumaisen vetykloridihapon annettiin kulkea liuoksen pinnan yli kunnes ei havaittu enää suolan muodostusta. Viiden li-säminuutin kuluttua suola poistettiin suodattamalla, pes-10 tiin kylmällä dietyylieetterillä ja kuivattiin tyhjössä 60 °C:ssa n. 18 tuntia antamaan 2,75 g otsikkoyhdistettä. Sulamispiste: 189 - 191 °C.

FDMS: m/z = 242 (M+H).

Analyyttisesti laskettu C12H20CINO4: lie: C, 51,89; H, 7,26; 15 N, 5,04. Havaittu: C, 52,03; H, 7,48; N, 5,06.

Esimerkki 6 (-)-dietyyli-2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani-2,6-dikarboksylaatti (4)

Liuosta, jossa oli yhdisteiden, jotka oli valmis-20 tettu kuten esimerkissä 3 on kuvattu, raseemista seosta (6,56 g) etyyliasetaatissa (100 ml), käsiteltiin liuoksella, jossa oli (+)-di-p-toluoyyli-D-viinihappoa (12,0 g) etyyliasetaatissa (100 ml). Seoksen annettiin seistä yön : yli huoneenlämpötilassa, kiteinen kiinteä aine poistettiin 25 suodattamalla ja kuivattiin antamaan 14,7 g. Lisämäärä ki teistä kiinteää ainetta saatiin jäähdyttämällä suodos 0 °C:seen. Yhdistetyt kiteiset kiinteät aineet liuotettiin kuumaan etyyliasetaattiin, joka sisälsi tarpeeksi 2-, propanolia liuottamisen lopuunviemiseksi. Jäähdyttämisen 30 jälkeen 0 °C:seen kiteinen kiinteä aine eristettiin suodat- ;*’ tamalla antamaan 2,3 g kiinteää ainetta, jolla oli enan- 1 : tiomeerinen ylimäärä > 95 %. Vapaa emäsmuoto saatiin jaka- maila suola vesipitoisen natriumbikarbonaatin ja etyyliase-taatin kesken. Orgaaninen faasi erotettiin, kuivattiin ka-; 35 liumkarbonaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä an- *’ tamaan 0,77 g otsikkoyhdistettä.

114861 37 FDMS: m/z = 242 (M+H).

Optinen rotaatio: 0¾ = -5,15° (c = 1, EtOH).

Analyyttisesti laskettu C12H19NO4 : lie : C, 59,74; H, 7,94; N, 5.81. Havaittu: C, 59,68; H, 8,13; N, 5,58.

5 Esimerkki 7 (+)-dietyyli-2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani-2,6-di-karboksylaatti (5)

Esimerkin 6 emäliuokset yhdistettiin ja väkevöitiin tyhjössä. Happoadditiosuola muutettiin vapaaksi emäkseksi 10 jakamalla se vesipitoisen natriumbikarbonaatin ja etyyliasetaatin kesken. Orgaaninen faasi erotettiin, kuivattiin kaliumkarbonaatilla ja väkevöitiin tyhjössä antamaan 3,7 g öljyä. Tätä öljyä käsiteltiin (-)-di-p-toluoyyli-L-viini -hapolla (7,14 g) etyyliasetaatissa (100 ml). Seoksen annet-15 tiin seistä huoneenlämpötilassa yön yli, kiteet kerättiin suodattamalla ja kuivattiin. Kiteiset kiinteät aineet liuotettiin kuumaan etyyliasetaattiin, jossa oli tarpeeksi 2-propanolia täydellisen liukenemisen aikaansaamiseksi. Jäähdyttämisen jälkeen 0 °C:seen kiteet erotettiin suodattamal-20 la antamaan 2,25 g otsikkoyhdistettä, jolla oli enantiomee-rinen ylimäärä >95 %. Otsikkoyhdisteen vapaa emäsmuoto saatiin tämän jälkeen kuten edellä on kuvattu antaen 0,74 g.

' *': FDMS: m/z = 242 (M+H).

Optinen rotaatio: aD = 1,22° (c = 1, EtOH) .

25 Analyyttisesti laskettu C12H19NO4: lie: C, 59,74; H, 7,94; N, 5.81. Havaittu: C, 59,81; H, 7,88; N, 5,76.

Esimerkki 8 (+)-2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani-2,6-dikarboksyy-lihappo (6) ; 30 Liuosta, jossa oli yhdistettä, joka oli valmistettu kuten esimerkissä 6 on kuvattu (0,69 g), tetrahydrofu- ; ; raanissa (10 ml), käsiteltiin 1 N natriumhydroksidilla (10 ml) ja saatua seosta sekoitettiin voimakkaasti huoneenlämpötilassa. Useiden päivien kuluttua otsikkoyhdiste eris-35 tettiin anioninvaihtokromatografisesti (Bio-Rad AG1-X8) 114861 38 eluoiden 50-%:isella etikkahappo/vedellä antamaan 0,53 g otsikkoyhdistettä.

FDMS: m/z = 186 (M+H).

Optinen rotaatio: aD = 21,32° (c = 1, IN HCl).

5 Analyyttisesti laskettu C8HnN04.l, 25 H20:lle: C, 46,26; H, 6,55; N, 6,74. Havaittu: C, 46,68; H, 6,47; N, 6,49.

Esimerkki 9 (-)-2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani-2,6-dikarboksyy-lihappo (7) 10 Otsikkoyhdiste valmistettiin pääosin kuten esimer kissä 8 on kuvattu, yhdisteestä, jonka valmistusta on kuvattu esimerkissä 7 (0,59 g). Useiden päivien kuluttua ot sikkoyhdiste eristettiin anioninvaihtokromatografisesti (Bio-Rad AG1-X8) eluoiden 50-%:isella etikkahappo/vedellä 15 antamaan 0,45 g otsikkoyhdistettä.

FDMS: m/z = 186 (M+H).

Optinen rotaatio: ceD = -22,72° (c = 1,1 N HCl) .

Analyyttisesti laskettu 08ΗιιΝ04·Η20: lie: C, 47,29; H, 6,45; N, 6,89. Havaittu: C, 47,50; H, 6,62; N, 6,31.

20 Esimerkki 10 (1SR,2SR,5RS,6RS) 2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani- 2,6-dikarboksyylihappo (8) ; Otsikkoyhdiste valmistettiin (1SR,2SR,5RS,6RS) di- ; etyyli-2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani-2,6-dikarboksylaatista . 25 pääosin kuten esimerkeissä 3 ja 4 on kuvattu.

Esimerkki 11 (+)-dietyyli-2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani-2,6-di-karboksylaatti hydrokloridi

Vedettömän HCl-kaasuvirtauksen annettiin kulkea ί » * 30 0 °C:isen liuoksen, jossa oli esimerkin 6 yhdistettä vedet tömässä dietyylieetterissä (75 ml), pinnan yli kunnes val-; koisen sakan muodostuminen päättyi. Saatua suspensiota se- h koitettiin huoneenlämpötilassa kaksi tuntia. Sitten reak- tioseos laimennettiin dietyylieetterillä (100 ml) ja kiin-35 teä aine suodatettiin tyhjössä. Kiinteä aine pestiin Et20:lla (250 ml) ja kuivattiin tyhjössä 70 °C:ssa neljä 114861 39 tuntia antamaan otsikkoyhdiste (2,32 g, 8,4 mmol) 77 %. Sp.

= 138 - 140 °C. FDMS = 242 M+ +1. Analyyttisesti laskettu C12H20NCIO4: lie: C, 51,89; H, 7,26; N, 5,04. Havaittu: C, 51,61; H, 7,32; N, 4,99. [a]D = +35,52° (c = 0,09, H20) .

5 Esimerkki 12 ( + )- [1R-(la,laa,IbS,2b,5a,5aS,6aa)]-1,la,Ib,2,5,-5a,6,6a-oktahydro-6-okso-2,5-metaanisykloprop[a]indeeni-1-karboksyylihappo, etyyliesteri

Lietettä, jossa oli karbetoksimetyylidimetyylisul-10 foniumbromidia (8,46 g, 36,9 mmol) 27 ml:ssa asetonitriiliä ympäristön lämpötilassa typen paineessa, käsiteltiin 1,8-diatsabisyklo[5.4.0]undek-7-eenillä (5,52 ml, 36,9 mmol). Yhden tunnin sekoittamisen jälkeen saatua keltaista seosta käsiteltiin (3aR) -3aa, 4,7,7aa-tetrahydro-4o;, 7a-metano-lH- 15 inden-l-onilla (3,60 g, 24,6 mmol) kiinteänä aineena annoksittain kolmen minuutin aikana. Ruskean reaktioseoksen annettiin sekoittua ympäristön lämpötilassa 15 tuntia. Reak-tioseos tukahdutettiin 5-%:isella HCl-.llä (13 ml), laimennettiin suolaliuoksella (50 ml) ja pestiin metyyli t-20 butyylieetterillä (3 x 50 ml) . Yhdistetyt orgaaniset uutteet kuivattiin (MgS04) , suodatettiin ja väkevöitiin tyh-·· jössä ruskeaksi öljyksi (5,98 g). Raa'an öljyn kromatogra- ; \'· fointi (100 g flash-silikageeliä, 8 : 1 sitten 2 : ! : : 1/heksaani : etyyliasetaatti) antoi 5,0 g (88 %) otsikkoyh- 25 distettä värittömänä öljynä, jonka määritettiin olevan yk-j k. sittäinen diastereomeeri HPLC analyysillä: [aio5 +112° (c lit » 1,39, MeOH) ; Rf 0,55 (heksaani : etyyliasetaatti/2 : 1); IR (CHCI3) 2982 (w) , 2938 (w) , 1720 (s) , 1276 (m) , 1185 (m) , 1048 (w) cm'1; XH NMR (CDCI3) δ 6,18 (dd, 1H, J = 5,6, 2,9 ·;;; 30 Hz), 6,07 (dd, 1H, J = 5,6, 2,9 Hz), 4,14 (q, 2H, J = 7,1

Hz), 3,24 (br s, 1H) , 3,13 (br s, 1H) , 2,86 (dd, 1H, J = :T: 6,9, 4,1 Hz), 2,64 (dd, 1H, J = 6,9, 5,1 Hz), 2,21 - 2,16 (m, 2H) , 1,88 (t, 1H, J = 3,0 Hz), 1,57 ja 1,37 (AB kvar-

tetti, 2H, J = 8,5 Hz), 1,26 (t, 3H, J = 7,1 Hz); 13C NMR

'f 35 (CDCI3) δ 213,31, 170,78, 135,59, 134,16, 61,56, 51,47, 114861 40 51,17, 46,45 (2 hiiltä), 44,20, 39,76, 32,75, 25,76, 14,56.

Anal, laskettu Ci4Hi603 : lie : C, 72,39; H, 6,94. Havaittu: C, 72,63; H, 7,08.

Esimerkki 13 5 (+)-[l(R),5(S,6(R)]-bisyklo[3.1.0]heks-3-en-2-oni- 6-karboksyylihappoetyyliesteri

Liuos, jossa oli esimerkin 12 tuotetta (4,89 g, 21,1 mmol) 14 ml:ssa kuivaa dimetyylisulfoksidia, kuumennettiin palautusjäähdytyslämpötilaan samanaikaisesti se-10 koittaen ja kuplittaen typellä (pinnanalaisesti) vapautuneen syklopentadieenin poistamiseksi 24 tuntia. Reaktioseos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan, laimennettiin metyyli-t-butyylieetterillä (100 ml) ja pestiin vedellä (1 x 50 ml) . Vesipitoinen kerros pestiin metyyli-t-butyylieetterillä (1 15 x 25 ml) ja yhdistetyt orgaaniset uutteet kuivattiin (MgS04) , suodatettiin ja väkevöitiin tyhjössä antamaan vaaleankeltainen kiinteä aine. Raaka syklopentenoni kiteytettiin heksaani-metyyli-t-butyylieetteristä antamaan 1,91 g (55 %) otsikkoyhdistettä: sp. 96 - 98 °C; [o;]d5 +251° (c

20 1,12, MeOH); Rf 0,49 (heksaani : etyyliasetaatti/2 : 1); IR

(KBr) 2997 (w) , 1728 (s) , 1747 (s) , 1696 (s) , 1292 (m) , i ' 1266 (s), 1190 (s), 1177 (s) cm"1; ΧΗ NMR (CDC13) δ 7,61

(dd, 1H, J = 5,6, 2,5 Hz), 5,74 (d, 1H, J = 5,6 Hz), 4,15 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 2,96 - 2,94 (m, 1H) , 2,62 (br t, 1H, J

25 = 3,9 Hz), 2,26 (t, 1H, J = 2,8 Hz), 1,27 (t, 3H, J = 7,1 • :J. Hz); 13C NMR (CDC13) δ 203,56, 168,28, 159,96, 129,99, 61,70, 46,19, 30,39, 29,28, 14,49. Anal. laskettu C9H10O3: lie: C, 65,05; H, 6,07. Havaittu: C, 64,78; H, 6,24.

, Esimerkki 14 1 t » i;; 30 (-)-[l(R),5(S),6(R)]-bisyklo[3.1.0]heksan-2-oni-6- ; karboksyylihappoetyyliesteri . ί : Liuosta, jossa oli esimerkin 13 tuotetta (1,73 g, 10,4 mmol) 35 ml:ssa 95-%:ista etanolia typen paineessa, käsiteltiin 10-%:isella Pd/C:llä (87 mg, 5 paino-%) . Pui- » , ; 35 loon lisättiin vetyä ja sekoittamista jatkettiin vedyn il makehässä (pallon paine) viisi tuntia, jolloin 35 mg 114861 41 (2 paino-%) lisää 10-%:ista Pd/C:tä lisättiin. Seoksen annettiin sekoittua vetypaineessa 50 lisäminuuttia. Pulloon lisättiin typpeä ja katalyytti poistettiin suodattamalla piidioksidin läpi ja pestiin etyyliasetaatilla. Suodos ja 5 pesut väkevöitiin tyhjössä keltaiseksi kiinteäksi aineeksi (1,75 g). Raaka kiinteä aine kiteytettiin heksaani-metyyli-t-butyylieetteristä antamaan 1,38 g (79 %) otsikkoyhdistet-tä: sp. 63 - 65 °C; [α]ο5 -60° (c 1,34, MeOH); Rf 0,49 (hek

saani : etyyliasetaatti/2 : 1) ; IR (KBr) 2987 (w) , 1722 10 (s), 1410 (m), 1193 (s), 1009 (m), 2827 (m) cm'1; XH NMR

(CDCls) δ 4,16 (g, 2H, J = 7,1 Hz), 2,52 (q, 1H, J = 4,9

Hz), 2,29 - 2,22 (m, 2H), 2,17 - 2,00 (m, 4H), 1,28 (t, 3H, J = 7,1 Hz); 13C NMR (CDC13) δ 212,07, 170,80, 61,64, 36,17, 32,30, 29,59, 26,91, 22,87, 14,56. Anal. laskettu 15 C9H12O3: lie: C, 64,27; H, 7,19. Havaittu: C, 64,10; H, 7,31.

Esimerkki 15 (+) [1(R),2(R),5(S),6(R),5’(R)]-2-spiro-51-hydanto- iinibisyklo[3.1.0]heksaani-6-karboksyylihappoetyyliesteri

Seoksen, jossa oli esimerkin 14 tuotetta (1,20 g, 20 7,13 mmol), kaliumsyanidia (511 mg, 7,85 mmol) ja ammonium- karbonaattia (1,37 g, 7,13 mmol) 7,1 ml:ssa 95-%:ista etanolia ja 2,9 mltssa vettä, annettiin sekoittua 36 °C:ssa 10 : tuntia ja huoneenlämpötilassa 13 tuntia. Samea keltainen ! : : reaktioseos jäähdytettiin 0 °C:seen ja laimennettiin 7,8 ·’; 2 5 ml :11a kylmää vettä. 1,5 tunnin sekoittamisen jälkeen val- ; . koinen kiinteä aine kerättiin ja pestiin kylmällä vedellä (2x5 ml). Kiinteä aine kuivattiin tyhjössä antamaan 1,17 1 1 g (69 %) otsikkoyhdistettä yksittäisenä diastereomeerinä . määritettynä HPLC analyysillä: sp. 247 - 249 °C; [or]d5 +23° *;;; 30 (c 1,05, MeOH); IR (KBr) 3504 (m), 3262 (m), 2983 (w) , 2766

(w) , 1771 (m), 1723 (s), 1415 (m), 1182 (w) cm'1: XH NMR

:T: (DMSO-de) δ 10,58 (s, 1H) , 7,93 (s, 1H) , 4,06 (q, 2H, J = :***; 7,1 Hz), 2,08 - 2,01 (m, 1H) , 1,94 - 1,83 (m, 4H) , 1,79 (dd, 1H, J = 13,9, 8,5 Hz), 1,40 - 1,33 (m, 1H) , 1,20 (t, 35 3H, J = 7,1 Hz); 13C NMR (DMSO-ds) δ 178,30, 172,62, 157,01, 69,52, 61,04, 33,86, 30,37, 28,27, 26,49, 20,95, 14,93.

114861 42

Anal, laskettu CuHi4N204 : lie : C, 55,46; H, 5,92; N, 11,76.

Havaittu: C, 55,76; H, 5,95; N, 11,84.

Esimerkki 16 (-)-[1(R),2(R),5(S),6(R)]-2-aminobisyklo[3.1.0]hek-5 saani-2,6-dikarboksyylihappo

Liuoksen, jossa oli esimerkin 15 tuotetta (976 mg, 4,10 mmol) 8,2 ml:ssa 3 N NaOH, annettiin palautusjäähtyä sekoittaen 24 tuntia. Jäähdytyksen jälkeen huoneenlämpötilaan reaktioseos pantiin välittömästi ioninvaihtopylvääseen 10 (valmistettu 50 g:sta Bio-Rad AG 1-X8 asetaattihartsia, joka oli preparoitu pesemällä 50 ml :11a 1 N NaOH, mitä seurasi 50 ml vettä, mitä seurasi reaktioseoksen kaatamisen jälkeen toiset 50 ml 1 N NaOH) eluoiden 1 : l/vesi : etikkaha-polla, keräten 50 ml jakeita. Jakeet 2 ja 3, jotka sisälsi-15 vät tuotetta, yhdistettiin ja väkevöitiin tyhjössä antamaan 770 mg valkoista kiinteää ainetta. Kiinteä aine lietettiin 4 ml:aan vettä ja suodatettiin, pestiin vedellä (1x4 ml). Kiinteä aine kuivattiin tyhjössä 40 °C:ssa antamaan 634 mg (76 %) otsikkoyhdistettä valkoisena jauheena: TR (KBr); 20 3235 (br; s) , 2971 (m), 2016 (br, w) , 1694 (m), 1613 (s), 1509 (m) , 1237 (m) (cm-1) , XH NMR (trifluorietikkahappo-d) δ ; '· 2,76 - 2,74 (m, 1H) , 2,65 - 2,52 (m, 3H) , 2,38 - 2,31 (m, 2H) , 1,96 - 1,88 (m, 1H) ; 13C NMR (trifluorietikkahappo-d) δ 179,43, 175,63, 69,53, 34,92, 31,75, 31,66, 27,63, 23,04.

25 Analyyttinen näyte valmistettiin kiteyttämällä vedestä: sp.

; 277 - 280 °C (haj.); [α] β5 23 ° (c 1,35, IN HCl) .

Esimerkki 17 2-oksobisyklo[3.1.0]heksaani-6-karboksyylihappo

Seosta, jossa oli 60 g etyyli-2-oksobisyklo- 30 [3.1.0] heksaani-6-karboksylaattia ja 300 ml 1 N natriumhyd- ’roksidia, sekoitettiin 25 - 30 °C:ssa. 2,5 tunnin kuluttua ; väkevää vetykloridihappoa lisättiin pH:n säätämiseksi ar- voon 0,8 - 1,2. Saatu liuos uutettiin etyyliasetaatilla.

Uutteet kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja 35 väkevöitiin antamaan 49,1 g (98 %) raakaa ainetta. Toisto- 43 114861 kiteyttäminen 100 mlrsta etyyliasetaattia antoi otsikkoyh-disteen, sp. 123,5 - 128 °C.

FDMS: m/z = 140 (M+)

Anal, laskettu C7H803:lle: C, 60,00; H, 5,75. Havaittu: C, 5 60,14; H, 5,79.

Esimerkki 18 2-oksobisyklo[3.1.0]heksaani-karboksyylihapposuola (S)-1-fenyylietyyliamiinilla

Liuos, jossa oli 14 g esimerkissä 17 valmistettua 10 yhdistettä 140 mlrssa 25-%:ista etanolia etyyliasetaatissa, yhdistettiin (S)-1-fenyylietyyliamiinin (1 ekv.) kanssa.

Yön yli tapahtuneen sekoittamisen jälkeen saostunut suola eristettiin suodattamalla ja kuivattiin antamaan 11,87 g (45,4 %) haluttua suolaa. Suolan konversio osittain reso-15 loiduksi 2-oksobisyklo[3.1.0]heksaani-6-karboksyylihapoksi esimerkin 17 menetelmällä ja analyysi osoitti, että suolan enantiomeerinen ylimäärä oli 68 %. Enantiomeerinen ylimäärä määritettiin konversiolla metyyliesteriksi diatsometaanil-la, mitä seurasi kiralia HPLC Chiralpak AS pylväässä 20 40 °C:ssa eluoiden 10-%:inen isopropanoli/90-%:isella hek- saanilla 1 ml/min. 210 nm:ssä.

Esimerkki 19 ( + )-2-oksobisyklo [3.1.0] heksaani-6-karboksyylihappo : : : Seosta, jossa oli 1,31 g esimerkin 18 tuotetta ja 25 10 ml 1 N vetykloridihappoa, sekoitettiin viisi minuuttia

» I

: ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uutteet kuivattiin natrium- sulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin antamaan 0,61 g * » t otsikkoyhdistettä, sp. 110 - 115 °C. Tuotteen enantiomeerinen ylimäärä määritettiin 68-%:iseksi kiralia HPLC:llä ;;; 30 (esimerkin 18 menetelmä) .

FDMS: m/z = 141 (M+H).

Optinen rotaatio: 0¾ = 49,85° • * 114861 44

Esimerkki 20 (-)-2-spiro-5'-hydantoiinibisyklo[3.1.0]heksaani-6-karboksyy1ihappo

Liuos, jossa oli yhdistettä, joka oli valmistettu 5 kuten esimerkissä 19 on kuvattu (68-%:inen enantiomeerinen ylimäärä, 1 ekv.), kaliumsyanidia (1,25 ekv.) ja ammonium-karbonaattia (2,5 ekv.), yhdistettiin ja sekoitettiin eta-noli/vedessä 25 °C:ssa 40 tuntia. Seos tehtiin happamaksi 6 N vetykloridihapolla, väkevöitiin, laimennettiin vedellä ja 10 suodatettiin antamaan 79 %:n saanto 90 : 10 diastereomeeri-en seosta, sp. 286 - 290 °C. Diastereomeerinen seos toisto-kiteytettiin isopropanoli/vedestä antamaan 48 %:n saanto otsikkoyhdistettä 100-%:isena diasteromeerisenä ja 10 %:isena enantiomeerisenä puhtautena (enantiomeerien suhde 15 määritettiin kiralia HPLC:llä 4,6 x 150 mm Chiracel OD-H pylväs, eluoituna 15-%:inen isopropanoli/85-%:isella hek-saanilla 1 ml/min. 40 °C:ssa 220 nmrssä; diastereomeerinen suhde määritettiin HPLCrllä Zorbax SB-fenyyli -pylväässä 40 °C:ssa eluoiden 90 : 10 puskuri/asetonitriilillä eluoin-20 tinopeudella 2 ml/min. 220 nm:ssä (puskuri = 0,1 M dinatri-umfosfaatti monohydraatti säädettynä pH-arvoon 2,1 fosfori-: >· hapolla) .

; FDMS: m/z 211 (M+H)

Optinen rotaatio: aD = -25,98° ;v. 25 Anal, laskettu C9H10N2O4: lie: C, 51,43; H, 4,79; N, 13,33.

; Havaittu: C, 51,38; H, 4,80; N, 13,26.

» * · SS» »

Esimerkki 21 * f »

Etyyli-2-spiro-51-hydantoiinibisyklo[3.1.0]heksaa-, ni-6-karboksylaatti t 1 · 30 Seosta, jossa oli 5,05 g etyyli-2-oksobisyk- lo [3.1.0] heksaani-6-karboksylaattia, 2,15 g kaliumsyanidia, 5,77 g ammoniumkarbonaattia, 30 ml 2B-3 etanolia ja 12 ml vettä, sekoitettiin 35 °C:ssa kunnes reaktio oli täydellinen HPLCrn mukaan. 15 tunnin kuluttua reaktioseos jäähdy-35 tettiin 0 °C: seen ja 33 ml vettä lisättiin seokseen. Kahden tunnin kuluttua 0 °C:ssa sakka eristettiin suodattamalla ja 114861 45 kuivattiin antamaan 5,23 g (73 %) otsikkoyhdistettä, sp.

217 - 220 °C.

FDMS: m/z = 238,1 (M+)

Anal, laskettu C11H14N2O4: lie: C, 55,46; H, 5,92; N, 11,76.

5 Havaittu: C, 55,74; H, 5,88; N, 11,50.

Esimerkki 22 2-spiro-51-hydantoiinibisyklo[3.1.0]heksaani-6-kar-boksyy1ihappo

Seosta, jossa oli 16,32 g esimerkin 21 tuotetta ja 10 137 ml 2 N NaOH, sekoitettiin 25 °C:ssa. Yhden tunnin ku luttua lisättiin väkevää vetykloridihappoa pH:n säätämiseksi arvoon 1,0. Saatu sakka eristettiin suodattamalla ja kuivattiin antamaan 13,70 g (95 %) otsikkoyhdistettä, sp.

277 - 279 °C.

15 FDMS: m/z = 210,1 (M+)

Anal, laskettu C9H10N2O4: He: C, 51,43; H, 4,79; N, 13,33.

Havaittu: C, 51,70; H, 4,93; N, 13,43.

Esimerkki 23 2-spiro-5'-hydantoiinibisyklo[3.1.0]heksaani-6-kar-20 boksyylihappo, (S)-1-fenyylietyyliamiinisuola

Seosta, jossa oli 1,05 g esimerkin 22 tuotetta ja *' 16,6 ml 1,6 : 1 asetoni : vesiliuosta, sekoitettiin / 25 °C:ssa samalla lisäten 1,53 g R-(+)-1-fenyylietyyli- ; : amiinia. Seosta sekoitettiin kaksi tuntia huoneenlämpöti- f'’; 25 lassa. Kiteet suodatettiin, huuhdeltiin asetonilla ja kui- • vattiin antamaan 0,74 g (45 %) otsikkoyhdistettä, sp. 205 - 212 °C.

Optinen rotaatio: aO = -31,88° (c = 1, metanoli) .

. Esimerkki 24 * '((I 30 (-)-2-spiro-5’-hydantoiinibisyklo[3.1.0]heksaani-6- •; · ’ karboksyy1ihappo f s » : ; : Seosta, jossa oli 0,74 g esimerkin 23 tuotetta ja 10 ml vettä, sekoitettiin 25 °C:ssa, samalla kun pH säädet-tiin arvosta 6,81 arvoon 1,0 käyttäen 1 N HCl. Reaktioseos-; 35 ta sekoitettiin yksi tunti ja tuote kerättiin suodattamalla 46 114861 ja kuivattiin antamaan 0,35 g (75 %) otsikkoyhdistettä, sp.

310 °C (haj.).

FDMS: 210,1 (M+)

Optinen rotaatio: Q!d = -24,22° (c = 1, metanoli) 5 Anal, laskettu C9H10N2O4: lie: C, 51,43; H, 4,80; N, 13,33.

Havaittu: C, 51,67; H, 4,87; N, 13,61.

Esimerkki 25 (+)-2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani-2,6-dikarboksyy- lihappo 10 Liuosta, jossa oli 184 g (-)-2-spiro-5'-hydanto- iinibisyklo [3.1.0]heksaani-6-karboksyylihappoa ja 1 750 ml 3 N NaOH, kuumennettiin palautusjäähdyttäen kunnes reaktio oli täydellinen HPLC:n mukaan. 28 tunnin kulutua liuos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja suodatettiin lasipape-15 rin läpi liukenemattoman aineen poistamiseksi. Liuoksen pH säädettiin arvoon 3,0 käyttäen väkevää HC1. Reaktioseosta sekoitettiin yksi tunti huoneenlämpötilassa ja kaksi tuntia 0 °C:ssa. Saostunut tuote kerättiin suodattamalla, pestiin 170 ml :11a kylmää vettä ja kuivattiin antamaan 152,5 g (86 20 %) otsikkoyhdistettä.

FDMS: m/z = 186,1 (M+l)

Optinen rotaatio: aD = 23,18° (c = 1, IN HCl) < t t 1 * · I 1 » t t ·

Ml( » t * t t » ! ♦

Claims

114861 1. 2-aminobisyklo[3.1.0]heksaani-2,6,-dikarboksyy-lihappoyhdiste, jolla on kaava 5 "xP* R? c°2r1 I nh2 tunnettu siitä, että X on (CH2)n;

10 R2 on C02R4 ja R3 on vety, tai R2 on vety ja R3 on C02R4; R1 ja R4 ovat riippumattomasti vety tai Cx-C4-alkyyli; ja n on 1; 15 tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola, tunnettu sii- '* tä, että sillä on seuraava suhteellinen stereokemiallinen ,* konfiguraatio: NHi 20

·· 3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen stereoisomeerinen yhdiste, tunnettu siitä, että se on (+)-2-amino- bisyklo [3.1.0]heksaani-2,6-dikarboksyylihappo, sen Ci-C4-alkyyliesteri tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. '25

4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen stereoisomeerinen yhdiste, tunnettu siitä, että se on (+)-2-amino- bisyklo[3.1.0]heksaani-2,6-dikarboksyylihappo tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. 114861

5. Stereoisomerisk förening enligt patentkrav 4, kännetecknadav att den är (+)-2-amino-bicyklo-[3.1.0] hexan-2,6-dikarboxylsyra.

5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen stereoisomeerinen yhdiste, tunnettu siitä, että se on (+)-2-amino-bisyklo[3.1.0]heksaani-2,6-dikarboksyylihappo.

6. Farmaseuttinen valmistemuoto, tunnettu 5 siitä, että se sisältää patenttivaatimuksen 1 mukaista yhdistettä yhdessä yhden tai useampien farmaseuttisesti hyväksyttävien kantoaineiden, laimentimien tai täyteaineiden kanssa. 7 . 2-(imidatsoliini-2,4-dioni)bisyklo[3.1.0]heksaa- 10 ni-6-karboksyylihappoyhdiste, jolla on kaava % Λ H tunnettu siitä, että 15 X on (CH2)n; n on 1; R2a on C02R4a ja R3a on vety tai I* R2a on vety ja R3a on C02R4a; ja ' '** R4a on karboksisuojaryhmä, kuten Ci-C6-alkyyli. t ( » ; 20 * * « > > i * * = I » • • ! t · 1 ( ! · 114861 1. 2-aminobicyklo[3.1.0]hexan-2,6,-dikarboxylsyra- förening med formeln [xO , R CO2R1 I nh2 kännetecknad av att X är (CH2)n;

10 R2 är C02R4 och R3 är väte, eller R2 är väte och R3 är C02R4; R1 och R4 är oberoende väte eller C1-C4-alkyl; och n är 1 ; eller ett farmaceutiskt godtagbart salt därav. 15 2. Förening enligt patentkrav 1 eller ett farmaceu- tiskt godtagbart salt därav, kännetecknad av att den har följande relativa stereokemiska konfiguration: I · :.; NH2 20 ;* 3. Stereoisomerisk förening enligt patentkrav 2, *. kännetecknad av att den är ( + ) -2-amino-bicyklo- [3.1.0]hexan-2,6-dikarboxylsyra, dess Ci-C4-alkylester eller t ett farmaceutiskt godtagbart salt därav. ' 25 4. Stereoisomerisk förening enligt patentkrav 3, kännetecknad av att den är ( + )-2-amino-bicyklo-’> [3.1.0] hexan-2,6-dikarboxylsyra, eller ett farmaceutiskt godtagbart salt därav. 114861

6. Farmaceutiskt preparat, kännetecknat 5 av att det omfattar en eller flera av farmaceutiskt godtag- bara bärare, diluenter eller utdrygningsmedel tillsammans med föreningen enligt patentkrav 1.

7 . 2-(imidazolin-2,4-dion)bicyklo[3.1.0]hexan-6- karboxylsyraförening med formeln 10 >Q, οΛκΛ0 X H kännetecknad av att X är (CH2)n; 15 n är 1; R2a är C02R4a och R3a är väte eller R2a är väte och R3a är C02R4a; och , ; R4a är en karboxiskyddsgrupp säsom Ci-C6-alkyl. t > I » ♦ * ’ > · * :· » »