FI114341B - Avidiinin tai streptavidiinin käyttö häiriönpoistoaineena immunologisissa määrityksissä ja määritysmenetelmät, joissa käytetään tätä ainetta - Google Patents
Avidiinin tai streptavidiinin käyttö häiriönpoistoaineena immunologisissa määrityksissä ja määritysmenetelmät, joissa käytetään tätä ainetta Download PDFInfo
- Publication number
- FI114341B FI114341B FI963461A FI963461A FI114341B FI 114341 B FI114341 B FI 114341B FI 963461 A FI963461 A FI 963461A FI 963461 A FI963461 A FI 963461A FI 114341 B FI114341 B FI 114341B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- avidin
- streptavidin
- eller
- biotin
- derivative
- Prior art date
Links
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 title claims description 139
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 title claims description 107
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 33
- 238000003556 assay Methods 0.000 title claims description 30
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 title claims description 25
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 title claims description 23
- 230000001430 anti-depressive effect Effects 0.000 title 1
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 title 1
- 229940005513 antidepressants Drugs 0.000 title 1
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 113
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 64
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 64
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 57
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 49
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 47
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims description 38
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 24
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 claims description 23
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 18
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 17
- 150000001615 biotins Chemical class 0.000 claims description 15
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 15
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 14
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 7
- 238000007826 nucleic acid assay Methods 0.000 claims description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 claims description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 claims description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 2
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 claims description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 claims 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 claims 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 claims 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims 1
- 238000011331 genomic analysis Methods 0.000 claims 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 claims 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 14
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 14
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 12
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 11
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 10
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 8
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 7
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 7
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- -1 2-pyridylthio Chemical group 0.000 description 5
- 241001362551 Samba Species 0.000 description 5
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 4
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 3
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 3
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091022930 Glutamate decarboxylase Proteins 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- FLCQLSRLQIPNLM-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 2-acetylsulfanylacetate Chemical compound CC(=O)SCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O FLCQLSRLQIPNLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZRTJVRDXVSDKPX-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-acetylsulfanylpropanoate Chemical compound CC(=O)SCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZRTJVRDXVSDKPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RBAFCMJBDZWZIV-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-azido-2-hydroxybenzoate Chemical compound OC1=CC(N=[N+]=[N-])=CC=C1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O RBAFCMJBDZWZIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LWAVGNJLLQSNNN-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-azidobenzoate Chemical compound C1=CC(N=[N+]=[N-])=CC=C1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O LWAVGNJLLQSNNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGXDNMNOQDVTRL-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-(4-azido-2-nitroanilino)hexanoate Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC(N=[N+]=[N-])=CC=C1NCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O NGXDNMNOQDVTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HEXATKOCYDZCRX-WJBIIUEVSA-N (3as,4s,6ar)-4-[6-amino-7-[2-(2-aminoethoxy)ethoxy]-5-oxoheptyl]-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-2-one Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)C(N)COCCOCCN)SC[C@@H]21 HEXATKOCYDZCRX-WJBIIUEVSA-N 0.000 description 1
- XKQYCEFPFNDDSJ-UHFFFAOYSA-N 1-[3-[2-[(4-azido-2-hydroxybenzoyl)amino]ethyldisulfanyl]propanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound OC1=CC(N=[N+]=[N-])=CC=C1C(=O)NCCSSCCC(=O)ON1C(=O)C(S(O)(=O)=O)CC1=O XKQYCEFPFNDDSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WPHUUIODWRNJLO-UHFFFAOYSA-N 2-nitrobenzenesulfonyl chloride Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CC=C1S(Cl)(=O)=O WPHUUIODWRNJLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 3-(trimethylsilyl)propane-1-sulfonic acid Chemical compound C[Si](C)(C)CCCS(O)(=O)=O TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUQQBLRVXOUDTN-XOHPMCGNSA-N 3-[dimethyl-[3-[[(4r)-4-[(3r,5s,7r,8r,9s,10s,12s,13r,14s,17r)-3,7,12-trihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pentanoyl]amino]propyl]azaniumyl]-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CC(O)CS([O-])(=O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 GUQQBLRVXOUDTN-XOHPMCGNSA-N 0.000 description 1
- CKRJGDYKYQUNIM-UHFFFAOYSA-N 3-fluoro-2,2-dimethylpropanoic acid Chemical compound FCC(C)(C)C(O)=O CKRJGDYKYQUNIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PQXPAFTXDVNANI-UHFFFAOYSA-N 4-azidobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 PQXPAFTXDVNANI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JXRGUPLJCCDGKG-UHFFFAOYSA-N 4-nitrobenzenesulfonyl chloride Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(S(Cl)(=O)=O)C=C1 JXRGUPLJCCDGKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRLAPUHJWRZEIC-UHFFFAOYSA-N 4-nitrobenzenesulfonyl fluoride Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(S(F)(=O)=O)C=C1 HRLAPUHJWRZEIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- MHZGKXUYDGKKIU-UHFFFAOYSA-N Decylamine Chemical compound CCCCCCCCCCN MHZGKXUYDGKKIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 102000008214 Glutamate decarboxylase Human genes 0.000 description 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- ZSBDPRIWBYHIAF-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-acetamide Natural products CC(=O)NC(C)=O ZSBDPRIWBYHIAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXBIVKDMIUOEKV-UHFFFAOYSA-N N=C1CCCS1.ClC1=NC(Cl)=NC(Cl)=N1 Chemical compound N=C1CCCS1.ClC1=NC(Cl)=NC(Cl)=N1 PXBIVKDMIUOEKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LECVSUDKRHNAST-CAGKOAJJSA-N NCCOCCOCCNC(C(C=C1)=CC=C1N=[N+]=[N-])=O.OC(CCCC[C@@H]([C@H]1N2)SC[C@@H]1NC2=O)=O Chemical compound NCCOCCOCCNC(C(C=C1)=CC=C1N=[N+]=[N-])=O.OC(CCCC[C@@H]([C@H]1N2)SC[C@@H]1NC2=O)=O LECVSUDKRHNAST-CAGKOAJJSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 108700031620 S-acetylthiorphan Proteins 0.000 description 1
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 241000223996 Toxoplasma Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091005646 acetylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000007818 agglutination assay Methods 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- LWISPDYGRSGXME-YDHLFZDLSA-N biotin peg2 amine Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCOCCOCCN)SC[C@@H]21 LWISPDYGRSGXME-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N dihydromaleimide Natural products O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- AJJLGMCBXZSSSA-UHFFFAOYSA-N ethyl 4-(4-azidophenyl)sulfanylbutanimidothioate;hydrochloride Chemical compound Cl.CCSC(=N)CCCSC1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 AJJLGMCBXZSSSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000013198 immunometric assay Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- JZLFUUHOTZKEFU-UHFFFAOYSA-N methyl 4-azidobenzenecarboximidate Chemical compound COC(=N)C1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 JZLFUUHOTZKEFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002715 modification method Methods 0.000 description 1
- APVPOHHVBBYQAV-UHFFFAOYSA-N n-(4-aminophenyl)sulfonyloctadecanamide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)NS(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=C1 APVPOHHVBBYQAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006501 nitrophenyl group Chemical class 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical class [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 1
- 238000000101 transmission high energy electron diffraction Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
- C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D495/04—Ortho-condensed systems
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/962—Prevention or removal of interfering materials or reactants or other treatment to enhance results, e.g. determining or preventing nonspecific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/824—Immunological separation techniques
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/825—Pretreatment for removal of interfering factors from sample
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
- Y10T436/25125—Digestion or removing interfering materials
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
114341
Avidiinin tai streptavidiinin käyttö häiriönpoistoaineena immunologisissa määrityksissä ja määritysmenetelmät, joissa käytetään tätä ainetta - Användning av avidin eller streptavidin som störningshämmande medel i immunanalyser och bestämnings-5 förfaranden väri detta medel används
Keksintö koskee avidiinin tai streptavidiinin tai niiden johdannaisen häiriönpoistoaineena immunologisissa määrityksissä 10 sekä menetelmiä, joilla analysoitava aine osoitetaan käyttäen tätä häiriönpoistoainetta.
Immunologiset määritysmenetelmät ovat saaneet viime vuosina suuren merkityksen. Niillä voidaan osoittaa nopeasti ja tar-15 kasti lääkeaineiden, hormonien, proteiinien ja infektoivien organismien sekä erityisesti spesifisten vasta-aineiden läsnäolo biologisissa näytteissä. Kaikkiin immunologisiin osoitus-menetelmiin kuuluu spesifinen sitoutumisreaktio ensimmäisen spesifisen sidospartnerin, aineen, joka tulee osoittaa (“ana-20 lyytin") sekä toisen sellaisen spesifisen sidospartnerin välillä, joka reagoi spesifisesti analyytin kanssa tai sitoo ‘f: sen. Analyytti ja spesifinen analyytin sitova osapuoli, spe- ; sifisen sidosparin niin sanotut osapuolet, muodostavat tällöin ;· kompleksin antigeenin ja vasta-aineen tai vasta-ainefragmentin 25 välillä. Tällöin kussakin reaktiossa voi reagoida keskenään .useampi kuin yksi analyytti tai sidospartneri. Nämä spesifiset !!! sidosreaktiot ilmaistaan eri tavalla. Spesifisen sidosreaktion * f i ' osanottaja tavallisesti merkitään. Tavanomaisia merkitsemisme- netelmiä ovat radioisotoopit, kromogeenit, fluorogeenit, ent-'·*! 3 0 syymimerkintä tai aineet, jotka puolestaan voivat muodostaa
• I
...· spesifisen sidosparin (esimerkiksi biotiini-streptavidiini) .
Heterogeenisissä immunologisissa määritysmenetelmissä toinen sidospartnereista on sidottu kiinteään faasiin.
’· '' 35 Immunologisten määritysmenetelmien tärkeä ongelma on, että » * mainitun määritysmenetelmän spesifisten sidospartnereiden ja näytteen, näytteeseen sisältyvien lisäaineosien ja mahdolli- 2 114341 sesti kiinteän faasin välillä voi olla vuorovaikutusta, jota ei toivota, ja voi tapahtua epäspesifisiä sidosreaktioita. Tämänlaatuiset vuorovaikutukset saavat aikaan yleensä sen, että taustasignaali lisääntyy ja täten kyseessä olevan kokeen 5 herkkyys ja spesifisyys vähenevät. Sekä epäspesifisten vuorovaikutusten, jotka tapahtuvat merkittyjen sidospartnereiden kanssa, kuten myös koekomponenttien spesifisen sitoutumisen vuoksi näytekomponenttien kanssa voi olla tuloksena vääriä positiivisia mittaustuloksia, se merkitsee, että väärin li-10 sääntyneen mittaussignaalin perusteella saadaan tulokseksi analyytin läsnäolo myös silloin, kun se puuttuu.
Tehtiin erilaisia kokeita näiden epäspesifisten vuorovaikutusten vähentämiseksi immunologisissa määrityksissä. Jo kauan on 15 ollut tunnettua, että erilaiset hiilihydraattikomponentit ja erilaiset proteiinit, proteiiniseokset tai proteiinijakeet samoin kuin niiden hydrolysaatit voivat vähentää epäspesifisiä vuorovaikutuksia koekomponenttien sekä analyyttien välillä immunologisissa määritysmenetelmissä (esimerkiksi Robertson et 20 ai., Journal of Immun. Meth. 26, 1985, 195; EP-A-260903; US-A-4 931 385). Proteiinifraktioiden ja raakahydrolysaattien käytön haittana on, että niihin sisältyvät ainesosat puolestaan : voivat saada aikaan muita häiriöitä kokeessa. Entsymaattisesti · tuotetut hydrolysaatit voivat olla lisäksi sellaisten proteaa- ',25 sien kontaminoimia, joita on käytetty valmistuksessa, eikä , hydrolysaattien laatu ole yleensä yhtenäinen, koska pilkkoutu- < ' » t’j't minen on vaikeasti säädettävissä. Proteaasikontaminantit voi-
« * I
vat tarttua koekomponentteihin, ja ne voivat huonontaa koetoimintoja ja varastoinninkestävyyttä jo vähäisinä määrinä.
.:·* 30 '·*.* Kemiallisesti muunnettujen, erityisesti sukkinyloitujen ja '· ; asetyloitujen proteiinien käyttöä kuvattiin epäspesifisten /··. vuorovaikutusten vähentämiseksi immunologisissa määrityksissä / t (US-A-5 051 356; EP-A-0 525 916). Näillä aineilla ei voida 4 35 kuitenkaan välttää vääriä positiivisia tuloksia, kun tutkitaan · vasta-aineita seerumista.
3 114341 ΕΡ-Α-0 331 068 ja WO 91/06559 kuvaavat polymeroitujen immuno-globuliinien, erityisesti IgG:n, käyttöä spesifisten häiriötekijöiden, kuten reumatekijöiden, vähentämiseksi. Sitä paitsi epäspesifisen, humaani immunoglubuliinin (vasta-ainemonomee-5 rien tai -polymeerien tai niiden fragmenttien) lisääminen kokeisiin, jotka koskevat humaani vasta-aineita, voi johtaa tausta-arvon suurenemiseen. Ihmis- ja eläinperäisen IgG:n saanti on sitä paitsi työlästä ja kallista.
10 Sen tähden keksinnön tehtävänä on antaa käyttöön uusia häi-riönpoistoaineita, jotka paremmin poistavat häiriöitä, joita epäspesifiset vuorovaikutukset aiheuttavat immunologisissa määrityksissä, kuin tekniikan tason perusteella on tunnettua. Epäspesifisillä vuorovaikutuksilla tarkoitetaan kaikkia 15 menetelmän komponenttien välisiä vuorovaikutuksia, jotka voivat johtaa mittaustulosten väärentyrniseen. Häiriönpoisto-aineiden tulisi estää väärät positiiviset analyysitulokset erityisesti vasta-aineiden analyysissä. Sanotaan, että häiriö tulee estää erityisesti, kun avidiinia ja streptavidiinia käy-20 tetään sidospartnerina immunologisessa määrityksessä.
‘,"1 Tämä tehtävä ratkaistiin siten, että häiriönpoistoaineena käy- : tettiin avidiinia tai streptavidiinia tai niiden johdannaisia.
•G Näitä aineita käyttämällä voitiin yllättävällä tavalla saavut- ;v.25 taa määritysten häiriönpoisto, erityisesti määrityksissä, » j , joissa sidospartnerina käytetään avidiinia tai streptavidii- !!! nia.
• < ·
Keksinnön kohteen on sen tähden häiriönpoistoaine epäspesi-30 fisten vuorovaikutusten välttämiseksi määritysmenetelmissä, jotka sisältävät avidiinia tai spreptavidiinia tai niiden jV. johdannaisia, sekä näiden häiriönpoistoaineiden käyttö määri- ,···. tysmenetelmissä. Avidiinia tai streptavidiinia tai niiden • johdannaisia käytetään keksinnön mukaan liukoisessa muodossa.
• · G 35 Niitä ei ole sidottu tai kytketty kiinteään faasiin tai mer- '*”· kitsevään ryhmään, kuten entsyymiin. Keksinnön mukaista häi- riönpoistoainetta käytetään aina kokeeseen tarvittavien mui- 114341 4 den reagenssien lisäksi, eikä mainitusta aineesta tule sellaisen kompleksin komponenttia, joka muodostuu ilmaistavasta analyytistä ja spesifisestä sidospartnerista osoitusreaktion aikana. Keksinnönmukaista häiriönpoistoainetta käytetään 5 edullisesti immunologisissa kokeissa (immunologisissa määritysmenetelmissä) . Mutta sitä voidaan käyttää myös kokeissa, jotka perustuvat muihin vuorovaikutuksiin, esimerkiksi nukle-iinihappokokeissa. Häiriönpoistoainetta käytetään edullisesti kokeissa, joissa koekomponentti on sidottu avidiiniin tai 10 streptavidiiniin, esimerkiksi immuno- tai nukleiinihappoko-keissa se on sidottu avidiinilla tai streptavidiinilla päällystettyyn kiinteään faasiin. Avidiinilla tai streptavidiinilla tarkoitetaan luonnonmukaisesti esiintyviä, puhdistettuja proteiineja tai yhdistelmäavidiinia tai -streptavi-15 diinia. Avidiini- ja streptavidiinijohdannaisella tarkoitetaan muunnettuja avidiini- ja streptavidiinimolekyylejä. Modifikaatio voidaan saada aikaan ensinnäkin siten, että silloitetaan yksittäisiä avidiini- ja streptavidiinimolekyylejä, jotta niin sanottu poly-SA tai homogeeninen, silloittu-20 nut SA muodostuu. SA:lla tarkoitetaan tässä yhteydessä myöhemmin aina avidiinia tai streptavidiinia. SA:n silloittamis-tai polymerointimenetelmät ovat alan ammattimiehelle sinänsä tuttuja menetelmiä. On erityisen sopivaa silloittaa lämpökä- t » sittelyn avulla tai bi- tai polyfunktionaalisten sidosten . * ”! 25 välityksellä. Bi- tai polyfunktionaalisilla yhdisteillä tar- 1 t ? koitetaan molekyylejä, joissa on vähintään kaksi toiminnal- 4 * ; ·* lista ryhmää, jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ja . esimerkiksi tietyt aminohappo- tai hiilihydraattitähteet V : voivat reagoida näiden funktionaalisten ryhmien välityksellä 30 SA:n funktionaalisten ryhmien kanssa. Seuraavassa taulukossa :; 1 esitetään esimerkkejä kytkijöistä, jotka ovat keksinnön ; puitteissa sopivia.
i I
' 35 t 114341 5
Taulukko 1_
Lyhennys__Kemiallinen koostumus_ SPDP N-sukkinimidyyli-3-(2-pyridyylitio)-propio- __naatti_ EADP Etyyli-4-atsidofenyyli-l,4-ditiobutyrimi- __daatti.HCl_ 5 FNPA__4-f luori-3-nitrof enyyliatsidi_ HSAB N-hydroksisukkinimidyyli-4-atsidobentsoaat- __ti_ ΜΑΒΙ__Metyyli-4-atsidobentsoimidaatti. HCl_ MBS m-maleimidobentsoyyli-N-hydroksisukkinimi- __diesteri_ NHS-ASA N-hydriksisukkinimidyyli-4-atsidosalisyyli- happo 10 MHS Maleimidoheksanoyyli-N-hydroksisukkinimi- __diesteri_ PNP-DTP p-nitrofenyyli-2-diatso-3,3,3-trifluoripro- __pionaatti_ SADP N-sukkinimidyyli(4-atsidofenyyli)-1,3'-di- __tiopropionaatti_ SAND Sulfosukkinimidyyli-2-(m-atsido-o-nitro- _bentsamido)etyyli-1,31-ditiopropionaatti_ , SANPAH N-sukkinimidyyli-6-(4'-atsido-2'-nitro- "·":__f enyyliamino) heksanoaatti_ ’.*/ 15 SASD Sulf osukkinimidyyli-2- (p-atsidosalisyy- __liamido) etyyli-1,3 1 -ditiopropionaatti_ SI AB N-sukkinimidyyli-(4-jodiasetyyli)aminobent- : __soaatti_ SMCC Sukkinimidyyli-4-(N-maleinimidoetyyli)syk- __loheksaani-l-karboksilaatti_ SMPB Sukkinimidyyli-4-(p-maleinimidofenyyli)bu- __tyraatti_ 1I DSS__Disukkinimidyylisuberaatti_ 20 DMS__Dimetyylisuberimidaatti_' ’ Trautin rea- 2-iminotiolaani-2,4,6-trikloori-s-triatsii- : genssi__ni_ ';, SAMBA__S1 -asetyyli-merkaptomeripihkahappoanhydridi , SATP__N-sukkinimidyyli-S-asetyylitiopropionaatti 2 5 SATA N-sukkinimidyyli-S-asetyylitioasetaatti_ 114341 6
Toiseksi muunnos voi perustua kytkentään, joka tapahtuu muihin suurimolekyylisiin molekyyleihin, erityisesti proteiineihin, kuten naudanseeruminalbumiiniin (RSA) tai immunoglobu-liiniin, joita usein käytetään vieläpä immunologisen määri-5 tysmenetelmän häiriön poistoon. Niin sanottu heterogeenisesti silloittunut SA muodostuu tämän silloittumisen kautta. Tällöin SA ja (tai) proteiini voi olla puolestaan polymeroitunut tässä kompleksissa. Menetelmät SA:n kytkemiseksi näihin mole-kyyleihin ovat tuttuja alan ammattimiehelle. Kytkentä DSS:n, 10 SAMB:n, SATP:n, MSH:n, SATA:n kanssa on osoittautunut erittäin soveliaaksi. Kompleksi, joka muodostuu RSA:sta ja SA:sta tai poly-SA:sta, soveltuu erityisesti häiriönpoistoaineeksi. Vielä paremmat vaikutukset saavutetaan, kun polymeroitu RSA kytketään SA:han tai poly-SA:han. RSA:n polymerointi tai 15 silloittuminen edellä mainituilla menetelmillä voi johtaa SA:n silloittumiseen. On sopivinta polymeroida lämpökäsittelyn avulla, kuten kuvataan EP-A 0331 127:ssä.
Kolmanneksi SA:n muunnos voi perustua aktiivisten keskusten, 20 se on biotiinia sitovien kohtien, inaktivointiin. Niin sanottu inaktivoitu SA muodostuu tätä kautta. Voidaan inaktivoida yksinkertaisesti siten, että sidoskohdat kyllästetään bio-• : tiinilla tai jollain biotiinin johdannaisella, jonka avidii- ·,;/ ni- tai streptavidiini sitoo. SA:n erittäin suuren affinitee- 25 tin vuoksi biotiiniin biotiinia tuskin vapautuu, mikä johtai-: si mahdollisesti häiriöihin, kun SA:ta käytetään immunologi- ; sissa määritysmenetelmissä. On edullista muuntaa aktiivinen keskus kovalenttisesti. Tällöin voidaan SA:n aktiivisen keskuksen yhdestä tai useammasta aminohappotähteestä muodostaa 30 johdannainen, niin että sitoutuminen biotiiniin heikkenee voimakkaasti ja estetään kokonaan. Menetelmät, joilla biotii-’ nin sidoskohtia voidaan estää SA:ssa, ovat tunnettuja jul- kaisun Gitlin et ai., Biochem. J. 269 (1990), 527 - 530, :perusteella. On edullista muuntaa SA:n aktiivisen keskuksen 35 tyrosiinitähteitä nitrobentseenisulfonyylikloridilla.
*;;; Muu mahdollisuus biotiinia sitovien kohtien inaktivoimi- 114341 7 seksi SAjssa perustuu siihen, että biotiini sidotaan sidos-kohtaan kovalenttisesti. Menetelmät biotiinin sitomiseksi SA:n aktiiviseen keskukseen ovat tuttuja alan ammattimiehelle. Erityisen edulliseksi on osoittautunut uusi menetelmä, 5 jossa biotiini kytketään SA:han uuden, valon avulla aktivoituvan biotiinijohdannaisen avulla. Valon avulla aktivoituvat biotiinijohdannaiset ovat tunnettuja. EP-A-0 155 854:ssä ja EP-A-0 187 323:ssa kuvataan atsidilla substituoituja fenyyle-jä tai nitrofenyylejä, jotka ovat kytketyt biotiiniin amiini-10 pitoisen linkkerin avulla. Biotiinijohdannaisena käytetään edullisesti biotiini-DADOO-AB:tä (biotiini-[8-(4-atsidobent-soyyli)amino-3,6-dioksaoktyyli]amidia. Muita biotiinijohdannaisia kuvataan Boehringer Mannheim Biochemican luettelossa, ja niiden identifiointinumero on 1292633 tai 1292641. Sen 15 jälkeen kun SA:n biotiinisidoskohdat on kyllästetty biotiini-johdannaisilla, käynnistetään valoreaktio ja biotiini kiinnitetään aktiiviseen keskukseen kovalenttisesti. Tässä inakti-voidussa SA:ssa biotiini on aktiivisessa keskuksessa ja lisäksi se on sidottu kovalenttisella sidoksella aktiivisen 20 keskuksen ulkopuolelle. SA-biotiinituote, joka saadaan tällä tavalla, on myös esillä olevan keksinnön kohde.
'"· SA:n aktiivisen keskuksen eräs muu inaktivointimahdollisuus t : perustuu siihen, että sidoskohtia muutetaan geenitekniikan ;· 25 avulla. SA:n aktiivinen keskus voidaan muuntaa tai inaktivoi-.da yksittäisten aminohappotähteiden tai aminohappotähteiden . ,·. lyhyiden osien substituutiolla, deleetiolla tai insertiolla.
Aktiivisen keskuksen yksittäiset aminohapot, esimerkiksi tyrosiinitähteet, voidaan vaihtaa muihin aminohappoihin.
30 Mutta voidaan valmistaa myös SA, josta sidoskohdat puuttuvat osittain tai kokonaan. Alan ammattimies tuntee menetelmät v ' SA:n geeniteknistä muuntamista tai valmistusta varten. Yhdis- telmästreptavidiinia kuvataan esimerkiksi EP-A-0 198 015:ssä.
·, 35 Neljänneksi modifiointi voidaan saada aikaan SA:n fragmen-toinnilla. SA-fragmentteja voidaan tuottaa pilkkomalla ke-miallisesti tai entsymaattisesti tai yhdistelmävalmistuksen δ 114341 avulla. Erityisesti biotiinia sitovat kohdat voivat puuttua tällöin, kuten edellä jo kuvattiin. Fragmentoinnin etuna on tuotteen parempi liukoisuus. Fragmentit, jotka saadaan avi-diinista tai streptavidiinista niitä kemiallisesti tai entsy-5 maattisesti pilkkomalla, käytetään seoksena, johon sisältyy kaikkia tai lähes kaikkia SA:n osia.
Tällä tavalla inaktivoitua tai fragmentoitua SA:ta voidaan käyttää edellä mainittuun SA:n ensimmäiseen tai toiseen modi-10 fiointimenetelmään, se on, inaktivoitu SA voidaan jälleen polymeroida tai se voidaan silloittaa muiden molekyylien, kuten RSA:n tai poly-RSA:n, kanssa. Nämä häiriönpoistoaineet, joilla SA:n muuntamiseksi toteutettiin ainakin kahden mainitun menetelmän yhdistelmä, ovat osoittautuneet erityisen 15 edullisiksi.
Sen jälkeen kun SA:n muunnos on saatu aikaan, voidaan poistaa mahdollisesti jäljelle jäänyt biotiinia sitova aktiivisuus, pintaan kovalenttisesti sidottu biotiini, joka ei ole sidottu 20 avidiinin tai streptavidiinin aktiiviseen keskukseen, tai vapaa biotiini siten, että avidiini- tai streptavidiinijohdannaisia puhdistetaan sopivalla tavalla. Tämä voidaan to-teuttaa esimerkiksi adsorboimalla kiinteään faasiin sidottuun : biotiiniin ja (tai) SA:han.
·;· 25
Keksinnön kohteena ovat sen tähden vielä avidiini- ja strep-, ,·. tavidiinijohdannaiset, jotka jollain edellä kuvatulla mene- telmällä ovat saatavissa modifiointia varten sekä sitä seu-raavaan puhdistukseen, jolla poistetaan jäljelle jäänyt bio-, 30 tiinisidosaktiivisuus, pintaan kovalenttisesti sidottu bio- tiini, joka ei ole avidiinin tai streptavidiinin aktiiviseen ** ’ keskukseen sidottu biotiini, tai vapaa biotiini, ja poisto toteutetaan edullisesti siten, että adsorboidaan kiinteään ,···. faasiin sidottuun biotiiniin ja (tai) SA:han.
Keksinnön kohteena on edelleen keksinnönmukaisen häiriönpois-toaineen valmistusmenetelmä, jossa SA muunnetaan ainakin \ 35 114341 9 yhden menetelmän mukaan kolmesta menetelmästä, jotka on mainittu edellä, ja tämän jälkeen se mahdollisesti puhdistetaan jäljelle jääneen biotiinisidoskapasiteetin, kovalenttisesti pintaan sidotun tai vapaan biotiinin poistamiseksi, kuten 5 edellä kuvattiin.
Avidiinia tai streptavidiinia tai niiden johdannaisia voidaan käyttää häiriön poistoon kaikissa tavallisissa immunologisissa ja nukleiinihappojen määritysmenetelmissä. Ne soveltuvat 10 häiriön poistoon erityisesti immunologisissa tai nukleiinihappojen määritysmenetelmissä, joissa sidekomponenttina käytetään avidiinia tai streptavidiinia. Tällaisia immunologisia määritysmenetelmiä tunnetaan julkaisujen perusteella, joita ovat esimerkiksi Guesdon et ai., J. Histochem. Cy-15 tochem. 27 (1979) 1131 - 1139, sekä Bayer ja Wilchek, Analytical Biochemistry 171 (1988) 1-32. Häiriöitä voivat aiheuttaa esimerkiksi avidiinin tai streptavidiinin vasta-aineet, joita osittain esiintyy ihmisseerumissa. Mutta keksinnönmu-kaisella häiriönpoistoaineella on edullista vaikutusta myös 20 immunologisissa määritysmenetelmissä, joissa ei käytetä avidiinia tai streptavidiinia. Näissä immunologisissa määritysmenetelmissä sellaisen SA:n käyttö, joka on sidottu muuhun molekyyliin, kuten RSArhan tai poly-RSA:han, on osoittautunut ; erityisen edulliseksi muuntamiseen, joka tapahtuu toisen j. 25 edellä kuvatun menetelmän mukaisesti. Keksinnönmukaista häi-.riönpoistoainetta käytetään kokeessa aina muutoin välttämättömien reagenssien lisäksi. Se ei ole identtinen kokeessa !!! mahdollisesti esiintyvien avidiini- ja streptavidiinikom- ponenttien, esimerkiksi SA:lla päällystetyn kiinteäfaasi- tai 30 entsyymi-SA-konjugaatin kanssa. Vastakohtana näille SA-rea- gensseille keksinnönmukaista häiriönpoistoreagenssia ei lii-v · tetä ilmaistavaan kompleksiin, joka muodostuu analysoitavasta . aineesta ja spesifisestä sidospartnerista.
i : - 35 Keksinnön lisäkohteena on menetelmä analysoitavan aineen : määrittämiseksi näytteessä siten, että 114341 10 (1) näyte saatetaan kosketuksiin (a) avidiinin tai streptavidiinin tai niiden johdannaisen kanssa, 5 (b) analysoitavan aineen yhden tai useamman spesifisen sidospartnerin kanssa ja (2) analysoitavan aineen mittana mitataan analysoitavasta aineesta ja spesifisestä sidospartnerista muodostunut komp- 10 leksi.
Analysoitavana aineena voivat toimia kaikki aineet, jotka reagoivat spesifisesti siten, attä muodostuu kompleksi vähintään yhden spesifisen sidospartnerin kanssa, kuten hapteenit, anti-15 geenit, vasta-aineet tai nukleiinihapot. Keksinnön mukainen menetelmä soveltuu vasta-aineiden, erityisesti autovasta-aineiden osoittamiseen.
Näytteinä ovat tavallisesti kehonnesteet, kuten veri, seerumi, 20 sylki tai virtsa.
Spesifisenä sidospartnerina voi olla mikä tahansa biologinen ; : tai kemiallinen sidospartneri, joka voi sitoa analysoitavan aineen spesifisesti ja muodostaa kompleksin sen kanssa. Näihin • ‘. 2 5 kuuluu vasta-aineita, vasta-ainefragmentteja, antigeenejä, . ,·. hapteeneita, hormoneja, avidiini, biotiini, nukleiinihappoja, oligonukleotidejä sekä niiden johdannaisia. Esillä olevassa keksinnössä käytetään analysoitavan aineen sidospartnerina edullisesti vasta-aineita tai antigeenejä tai niiden fragment-·· 30 teja .
Sellaisen kompleksin osoittamiseen, joka muodostuu analysoi-tavasta aineesta ja sidospartnerista, voidaan käyttää kaikkia _· _ alan ammattimiehen tuntemia, tavanomaisia menetelmiä. Voidaan ’ 35 käyttää homogeenisiä menetelmiä, joissa kaikki sidospartnerit * 1 esiintyvät menetelmässä liukoisessa muodossa, esimerkiksi muodostuneen kompleksin saostusmenetelmää turbidimetrisen ja 114341 11 nefelometrisen määrityksen avulla tai immunologista määritysmenetelmää, joka on CEDIA-, EMIT- tai FPIA-periaatteen mukainen. Määritykseen soveltuvat myös heterogeeniset menetelmät, joissa ainakin yksi reagenssi on sidottu kiinteään faasiin.
5 Niiden esimerkkejä ovat agglutinaatiokokeet, joissa sidospa-rin osakas on sidottu esimerkiksi lateksiin, ”sandwich,,-mää-ritykset, ELISA spesifisten vasta-aineiden, kuten HIV:n, HCV:n, rubellan, Toxoplasma oondiin, glutamaattidekarboksi-laasin tai tyreoglobuliinin vasta-aineen, osoittamiseen, RIA 10 tai immunometriset määritysmenetelmät. Paitsi saostusmenetel-missä, kaikissa näissä menetelmissä vähintään yksi spesifisistä sidospartnereista on merkitty. Merkitseminen voi tuottaa esimerkiksi mitattavan signaalin, kuten ra-dioisotooppi, kemiluminoiva, fluoroiva tai elektroluminoiva markkeri tai 15 värjätty partikkeli, kuten metallisoolipartikkeli tai värjätty tai värjäämätön lateksi. Merkitseminen voi tuottaa myös epäsuoran signaalin, esimerkiksi entsyymimerkintä, kuten peroksidaasi, glukoosioksidaasi, β-galaktosidaasi tai alkali-nen fosfataasi.
20
Immunologiset määritykset voidaan toteuttaa myös testisuika-leiden tai biosensoreiden avulla, erityisesti kun sidospart-neri on kytketty SA:n kautta kiinteään faasiin. Myös immuno-; logisista määritysmenetelmistä, jotka toteutetaan plasma- , 25 resonanssiperiaatteen mukaan, voidaan poistaa häiriöt keksin-nönmukaisesti.
; Analysoitavan aineen osoittamiseksi reagenssi kytketään usein kiintään faasiin jonkin spesifisesti sitovan sidosparin, 30 kuten avidiinin tai streptavidiinin (tai biotiinin) kautta.
Tällöin etuna on, että kiinteää faasia voidaan käyttää useam-v : missä osoitusmenetelmissä. Merkintä on mahdollista sitoa myös , spesifisen sidosparin kautta määritysmenetelmän johonkin ’>·, komponenttiin. Entsyymi voidaan kytkeä esimerkiksi avidiiniin '35 tai streptavidiiniin, ja sidospartneri, kuten vasta-aine voi ,..'.Γ olla biotinyloitu. Alan ammattimies tuntee tällaisten osoi- : : tusmenetelmien esimerkkejä. Keksinnönmukainen avidiini- tai 114341 12 streptavidiinijohdannainen soveltuu erityisesti häiriönpois-toon tällaisissa osoitusreaktioissa, jossa käytetään hyväksi reaktiokomponentin suoraa sidontaa avidiini-biotiinin tai streptavidiini-biotiinin kautta.
5
Menetelmä voidaan toteuttaa analysoitavien aineiden osoittamiseksi yhdessä tai useammassa vaiheessa, se on, analysoitavat aineet voidaan inkuboida yksittäisten koekomponenttien kanssa samanaikaisesti tai peräkkäin. Jos käytetään avidiinia 10 tai streptavidiinia tai sen johdannaista, jossa biotiinisi-doskohtia ei aktivoitu, niin menetelmässä, jossa sidoskom-ponentti kytketään avidiini-biotiinin tai streptavidiini-biotiinin kautta, täytyy kiinnittää huomio siihen, että si-doskomponenttien sidos avidiini-biotiinin tai streptavidiini-15 biotiinin kautta on jo suljettu, ennen kuin avidiinia tai streptavidiinia tai tämän johdannaista lisätään, koska muussa tapauksessa inaktivoitumattomat biotiinisidoskohdat sitovat biotinyloituja sidoskomponentteja ja saavat aikaan häiriöitä. Esimerkiksi avidiini- tai streptavidiinikiinteäfaasia käytet-20 täessä täytyy aluksi lisätä analysoitavan aineen biotinyloitu spesifinen sidospartneri, ennen kuin näyte lisätään yhdessä avidiinin ja streptavidiinin tai niiden johdannaisen kanssa. Siinä tapauksessa, että käytetään keksinnönmukaista avidiini-: tai streptavidiinijohdannaista, jossa biotiinisidoskohdat 25 inaktivoitiin, voidaan inkuboida kaikkia koereagensseja sa-, manaikaisesti, koska biotinyloidut reagenssit eivät sitoudu avidiini- tai streptavidiinijohdannaisen kanssa. Tämä inaktivoitu avidiini- tai streptavidiinijohdannainen on täten yleismaailmallisesti käytettävissä kaikissa ajateltavissa 30 koemuunnoksissa ja siten edullinen.
’ Keksinnönmukaisen häiriönpoistoaineen pitoisuus koeseoksessa on 0,0001 - 1 prosenttia (paino/tilavuus), edullisesti 0,01 -1 prosenttia (paino/tilavuus).
Menetelmän yksittäiset reaktiokomponentit analysoitavan ai-neen osoittamiseksi annetaan käyttöön tarkoituksenmukaisesti *, 35 114341 13 koeyhdistelmän tai koevälinepakkauksen muodossa. Keksinnön lisäkohteena on sen tähden koeyhdistelmä menetelmää varten analysoitavan aineen osoittamiseksi näytteessä, joka sisältää avidiinia tai streptavidiinia tai tämän johdannaista sekä 5 analysoitavan aineen vähintään yhtä spesifistä sidospartne-ria. Edelleen voi sisältyä kaikkia muita osoitusmenetelmän toteuttamiseen tarvittavia reagensseja, kuten puskuria, de-tergenttejä, merkintäaineita, merkinnän osoituksen apuaineita, kuten entsyymisubstraattia, kiinteäfaasia jne.. Keksin-10 nonmukainen häiriönpoistoaine ja analysoitavan aineen sidos-partneri tai sidospartnerit voidaan ottaa erillisiin säiliöihin. Siinä tapauksessa, että käytetään keksinnönmukaista häiriönpoistoainetta, häiriönpoistoaine voidaan lisätä myös suoraan analysoitavan aineen sidospartnereihin.
15
Keksintöä valaistaan seuraavin esimerkein.
Esimerkki 1 20 Streptavidiinipolymeerin valmistus
Polymeroitu streptavidiini valmistettiin EP-A-0331 127:n mukaan.
'; Streptavidiinin aktivointi maleimidoheksanoyyli-N-hydrok- , 25 sisukkinimidiesterillä ’ 30 mg streptavidiinia liuotetaan 3 millitrassa liuosta, joka on 30-millimolaarinen kaliumfosfaatin ja 100-millimolaarinen natriumkloridin (pH 7,1) suhteen ja lämmitetään 25 °C:seen. Samalla sekoittaen lisätään 0,15 millitraa maleiini-imidohek-30 sanoyyli-N-hydroksisukkinimidiesteriä (MHS)(Boehringer Mann heim GmbH), joka on DMSO:ssa (10 mg/ml). Yhden tunnin mittai-: sen reaktioajan jälkeen 25 °C:ssa liuos jäähdytetään jäähau- ·, teessä. Tämän jälkeen dialysoidaan muodostunut MSH-streptavi- diini 4 °C:ssa kaksi kertaa yhtä litraa vastaan liuosta, joka 35 on 50-mmolaarinen kaliumfosfaatin ja 100-millimolaarinen , natriumkloridin suhteen (pH 5,0).
i l I
114341 14
Streptavidiinin aktivointi S-asetyylimerkaptomeripihkahappo-anhydridillä 30 mg streptavidiinia liuotetaan 3 millitraan 100-millimolaa-rista kaliumfosfaattia (pH 7,8) ja lämmitetään 25 °C:seen.
5 Samalla sekoittaen lisätään pisaroittain 0,175 millitraa S- asetyylimerkaptomeripihkahappoanhydridiä (SAMBA) DMSO:ssa (10 mg/ml). Kolmen tunnin mittaisen reaktioajan jälkeen 25 °C:ssa muodostunut SAMBA-streptavidiini dialysoidaan 4 °C:ssa kaksi kertaa yhtä litraa vastaan liuosta, joka on 50-millimolaa-10 rinen kaliumfosfaatin ja 2-millimolaarinen EDTA:n (pH 6,5) suhteen.
Streptavidiinin homogeeninen silloittaminen 3 millitraa liuosta, jossa on aktivoitua SAMBA-streptavidii- 15 nia (10 mg/ml), lämmitetään 25 °C:seen ja sekoitetaan 50 μ1ί^3η kanssa 1-molaarista hydroksyyliamiinia (pH 6,5). 30 minuutin kuluttua 25 °C:ssa liuos laimennetaan siten, että lisätään 15 millitraa liuosta, joka on 50-mmolaarinen kalium- fosfaatin ja 100 mmolaarinen natriumkloridin sekä 1-raraolaa- 20 rinen EDTA:n (pH 6,5) suhteen. Streptavidiinin homogeeninen silloittuminen aloitetaan lisäämällä 3 millitraa aktivoitua MHS-streptavidiinia (10 mg/ml). Kahden tunnin mittaisen reak- • tioajan jälkeen 25 °C:ssa, samalla kun sekoitetaan varovai- . ; sesti, reaktio päätetään siten, että lisätään 0,2 millitraa . 25 100-millimolaarista kysteiini-HCl:a. 30 minuutin mittaisen • ·, inkubointiajan jälkeen 25 °C:ssa liuoksen pH-arvo säädetään t · 7,5:ksi lisäämällä 1-molaarista dikaliumvetyfosfaattia. Sen
» I
jälkeen kun on lisätty 0,2 millitraa 500-millimolaarista jo- . * diasetamidia, inkuboidaan lisätunnin ajan 25 °C:ssa. Tämän 30 jälkeen dialysoidaan 4 °C:ssa kaksi kertaa kolmea litraa ,· vastaan liuosta, joka on 50-millimolaarinen kaliumfosfaatin ' *· ja 100 mmolaarinen natriumkloridin (pH 7,5 suhteen). Dialyy- sin jälkeen, joka toteutetaan ultrasuodatuskennossa, konju-. ( gaatti konsentroidaan ja sen jälkeen kun on lisätty sakka- 35 roosia (8 prosenttia), se lyofilisoidaan.
114341 15
Esimerkki 2 Lämpö-RSA-SA:n valmistus Lämpö-RSA-streptavidiini (lämpö-RSA-SA) valmistettiin EP-A-0 331 127:n mukaan 5 RSA:n silloittuminen lämpö-RSA:ksi 1,0 g RSA:ta liuotetaan 100 millitraan 20-mmolaarista kalium-fosfaattipuskuria, pH 7,0, ja sitä pidetään viiden tunnin ajan 70 °C:ssa. Tämän jälkeen se jäähdytetään 20 °C:seen ja 10 dialysoidaan 100-millimolaarista kaliumfosfaattipuskuria, pH 7,8, vastaan.
Lämpö-RSA:n aktivointi SAMBA:11a 68 mg termo-RSA:ta liuotetaan 2 millitraan 0,1-molaarista 15 kaliumfosfaattipuskuria, pH 7,8, ja se sekoitetaan hitaasti 0,38 millitran kanssa SAMBA:ta (10 mg/ml DMSO:ssa). 3,5 tunnin mittaisen reaktioajan jälkeen 25 °C:ssa se dialysoidaan 4 °C:ssa yhtä litraa vastaan 50-millimolaarista kaliumfosfaattipuskuria, pH 6,5.
20 Lämpö-RSA-streptavidiinikonjugaatin valmistus Streptavidiinin heterogeeninen silloitus lämpö-RSA:n kanssa ; noudattaa analogisesti esimerkissä 1 kuvattua homogeenistä silloitusta. 60 mg:n aktivoitua MSH-streptavidiinia (valmis-, 25 tus esimerkin 1 mukaisesti) annetaan reagoida 68 mg:n kanssa SAMBA-lämpö-RSA:ta. Reaktiotuote puhdistetaan geelisuodatuk- » sella (Superose 6, preparatiivista laatua) ja se väkevöidään ultrasuodatuskennossa. Saatu tuote lyofilisoidaan tämän jälkeen .
30 ,· Esimerkki 3 Lämpö-RSA-SA:n tyydyttäminen biotiinilla 60 mg lämpö-RSA-SA:ta, joka on liuotettu 6,0 millitraan 100-mmolaarista kaliumfosfaattipuskuria, pH 7,0, sekoitetaan 2 t 35 mg:n kanssa D-biotiinia, joka on liuotettu 0,5 millitraan 10-millimolaarista kaliumfosfaattipuskuria, pH 7,8, ja sitä sekoitetaan yhden tunnin ajan.
114341 16
Vapaa biotiini erotetaan geelisuodatuksella (Superose 6R). Suurimolekyylipainoinen proteiinijae dialysoidaan 10-mmolaa-rista kaliumfosfaattipuskuria, pH 7,0, vastaan ja se lyofi-lisoidaan, sen jällkeen kun on lisätty 8 prosenttia sakkaroo-5 siä.
Esimerkki 4
Kovalenttisesti muunnetun streptavidiinin valmistus 10 Streptavidiini-avidiinin aktiivisen keskuksen tyrosiinitäh- teistä tehdään johdannaisia p-nitrobentseenisulfonyylifluori-dilla julkaisun mukaan, jonka tekijöitä ovat G. Gitlin, E.A. Bayer, M. Wilchek (Studies on the biotin-binding sites of Avidin and Streptavidin; Biochem. J. (1990), 269, 527 - 530).
15
Yhteen grammaan streptavidiinia lisätään proteiinipitoisuudessa, joka 10 mg/ml, 0,1-molaarista Tris-HCl-puskuria, pH 7,9, strepavidiinialayksikön suhteen 200-kertainen, molaari-nen ylimäärä p-nitrobentseenisulfonyylikloridia (Sigma N-20 2262). Lisäyksen jälkeen sekoitetaan vielä 18 - 20 tunnin ajan 25 °C:ssa. Sitten tuote dialysoidaan >500-kertaista tilavuutta vastaan PBS-puskuria, pH 7,5, kunnes reagoimaton derivatisointireagenssi eroaa (16 - 18 tunnin ajan 4 °C:ssa.
I · : 25 Esimerkki 5
Valon avulla aktivoituvan biotiinin valmistus • * f * ;'*’: Biotiini-[ 8 - (4-atsidobentsoyyli) amino-3,6-dioksaoktyyli]ami- ·, di(biotiini-DADOO-AB) :n valmistus • i * 30 1,5 g (4 mmoolia) biotinoyyli-i,8-diamino-3,6-dioksaoktaania (biotiini-DADOO, Boehringer Mannheim Gmbh) liuotetaan samalla ; sekoittaen 50 millitran kanssa juuri tislattua DMF:ää. Liu- ’·, okseen lisätään peräkkäin 1,04 g (4 mmoolia) N-hydroksisuk- . : *. kin-imidyyli-(4-atsidobentsoaattia) (HSAB, Boehringer Mann- : "*.35 heim GmbH) sekä 0,55 ml (4 mmoolia) trietyyliamiinia ja liuoksen annetaan sekoittua 2 tunnin ajan 20 °C:ssa. Tämän jälkeen liuotin poistetaan pyöröhaiduttajassa öljypumpulla I * 114341 17 aikaansaadussa tyhjössä ja jäljelle jäänyt raakatuote puhdistetaan kromatografiällä, siten että käytetään Kieselgeeliä. Tässä yhteydessä tuote liuotetaan mahdollisimman vähäiseen määrään kloroformi-metanolia (2:1) (tilavuus/tilavuus) läm-5 mittäen samalla kevyesti noin 40 °C:seen ja se siirretään
Kieselgel 60 -pylvään pinnalle (Fa. Merck, BR, Saksa, 4 x 60 cm). Eluoidaan kloroformi-metanolilla (2:1, tilavuus/tilavuus) ja kootaan 50 millitran suuruiset jakeet. Puhtaan tuotteen sisältävät jakeet saadaan selville DC:n avulla (aiemmin 10 kuvattu järjestelmä) ja ne yhdistetään. Liuotin poistetaan pyöröhaihduttajassa ja puolikiinteää jäännöstä haudutetaan noin 50 millitran kanssa di-isopropyylieetteriä. Hienokitei-nen, väritön tuote poistetaan imemällä ja sitä kuivataan yön ajan tyhjökuivauskaapissa (10 - 15 kPa, 40 °C).
15
Saanto: 1,24 g (60 prosenttia teoreetti sesta) DC: Kieselgel 60 Merck) F254, kloro formi -met ano li (2:1, tilavuus:ti-20 lavuus); Rf = 0,71 1H-NMR (100 MHz/d6-DMS0); $(ppm) = 1,20 - 1,65 (m, 6H); 2,07 (tr, 2H); 2,60 - 3,65 (m, 15H); 4,05 - 4,20 (m, 2H); 6,38 (d, br, '2H) , 7,20 (d, 2H) , 7,62 (tr,br, : 25 1H); 7,91 (d, 2H); 8,53 (tr, br, ;· 1H) .
, UV (CH30H) : lambda(maks.) = 267 nm IR(KBr): i) = 2125 cm-1 30 Biotiini-DADOO-AB:n synteesitie esitetään kuviossa 1.
Esimerkki 6 : ;35 Biotiini(valon aktivoima)-streptavidiinin valmistus
Streptavidiinin annetaan reagoida valolla aktivoidun bio-tiinijohdannaisen (esimerkiksi biotiini-DADOO-AB:n) kanssa ja 114341 18 se dialysoidaan vapaan, sitoutumattoman biotiinin erottamiseksi. Valoreaktio käynnistetään säteilyttämällä Hg-höyrylampulla (350 - 700 nm) ja biotiini kiinnitetään kovalenttisesti streptavidiinin sidoskeskukseen.
5
Yhteen grammaan streptavidiinia lisätään proteiinipitoisuutena 20 mg/ml, PBS-puskurissa, pH 7,5, 10-kertainen, molaa-rinen ylimäärä biotiini-DADOOO-AB-reagenssia (3,5 millitraa biotiini-DADOO-AB:n kantaliuosta, jonka pitoisuus on 25 mg/ml 10 DMSO:ssa). Lisäyksen jälkeen sekoitetaan kahden tunnin ajan 25 °C:ssa ja samalla liuos suojataan valolta.
Vapaa, sitoutumaton biotiinijohdannainen erotetaan täydellisesti (niin että se ei ole enää osoitettavissa) dialyysin 15 avulla (20 tuntia, 4 °C) >500-kertaista tilavuutta vastaan PBS-puskuria, pH 7,5, siten että suojataan samalla valolta. Lietettä säteilytetään sitten, niin että liuoksen kerroksen paksuus on < 5 cm, Hg-höyrylampulla (350 - 700 nm) ja samalla sekoittaen 20 minuutin ajan ja tämän jälkeen se dialysoidaan 20 uudelleen >500-kertaista tilavuutta vastaan PBS-puskuria, pH 7,5, (16 - 18 tunnin ajan, 4 °C:ssa).
Esimerkki 7 : : 25 Inaktivoidun streptavidiinin tai lämpö-RSA-SA:n tai niiden ;· johdannaisten ja fragmenttien puhdistus . ·. RSA-biotiiniadsorbenssin valmistus ·. Yhteen grammaan RSA:ta, jonka proteiinipitoisuus on 10 mg/ml 30 PBS-puskurissa, pH 8,5, lisätään 10-kertainen molaarinen ylimäärä D-biotinoyyli-e-aminokapronihappo-N-hydroksisukkin-;; imidiesteriä (Boehringer Mannheim GmbH).
Lisäyksen jälkeen sekoitetaan kahden tunnin ajan ja reaktio ; :35 pysäytetään lisäämällä lysiiniä, niin että sen loppupitoisuus on 10 mmolaarinen. Vapaa sitoutumaton biotiinijohdannainen ;;; erotetaan täydellisesti (ei ole enää osoitettavissa) dialyy- 114341 19 sin avulla (16 - 18 tuntia, 4 °C) >500-kertaista tilavuutta vastaan PBS-puskuria, pH 7,5.
40 g:aan Amino-SpherosiliaR (Boehringer Mannheim GmbH) lisä-5 tään 300 millitraa glutardialdehydiä (10-prosenttista) ja seosta sekoitetaan kahden tunnin ajan pH 3,7:ssä ja 55 °C:ssa seosta samalla pyörittäen. Suspensio pestään tislatulla vedellä, jota käytetään enemmän kuin seitsemän SpherosilRin tilavuutta, ja viidellä SpherosilRin tilavuudella PBS-pusku- 10 ria, pH 8,0. Aktivoidun SpherosilRin annetaan tämän jälkeen reagoida 20 tunnin ajan huoneenlämpötilassa RSA-Bi:n kanssa samalla, kun sitä ravistellaan, ja proteiinitarjonta on tällöin 5 - 10 mg Spherosilin millitraa kohti.
15 Reagoimaton proteiiniliuos erotetaan suodattamalla liuos lasisen imusuodattimen kautta ja adsorbenssimateriaali pestään kymmenellä SpherosilRin tilavuudella 0,9-prosenttista NaCl-liuosta sekä inkuboidaan SpherosilRin viiden tilavuuden kanssa etanoliamiiniliuosta yhden tunnin ajan.
20
Adsorbenssimateriaali pestään sitten viisinkertaisella Sphe-rosilRin tilavuudella 0,9-prosenttista NaCl-liuosta, kolminkertaisella SpherosilR-tilavuudella 1-roolaarista propionihap- : poa sekä riittävästi 30-millimolaarisella NaCl-liuoksella, : : 25 kunnes saavutetaan pH 6,5. Adsorbenssia tasapainotetaan riit tävästi PBS-puskurissa, pH 7,5.
. . Streptavidiini-Spherosil-adsorbenssin valmistus » * * 30 40 grammaan amino-Spherosilia (Boehringer Mannheim GmbH) lisätään 300 millitraa glutardialdehydiä (10-prosenttista) ja lietettä sekoitetaan kahden tunnin ajan pH 3,7:ssä, 55 °C:s-sa. Suspensio pestään suuremmalla kuin seitsemällä Sphe-rosilin tilavuudella tislattua vettä sekä viidellä Sphe- 35 rosilin tilavuudella PBS-puskuria, pH 8,0. Aktivoidun Sphe-rosilin annetaan tämän jälkeen reagoida streptavidiinin ·;; (Boehringer Mannheim GmbH) kanssa 20 tunnin ajan huoneenläm- 114341 20 pötilassa, siten että proteiinimäärä on 5 - 10 mg millitraa kohti Spherosilia.
Reagoimaton proteiiniliuos erotetaan lasityhjösuodattimella 5 ja adsorbenssimateriaali pestään kymmenellä Spherosilin tilavuudella 0,9-prosenttista NaCl-liuosta sekä inkuboidaan viiden tilavuuden kanssa etanoliamiiniliuosta yhden tunnin ajan. Adsorbenssimateriaalia pestään sitten viisinkertaisella Spherosilin tilavuudella 0,9-prosenttista NaCl-liuosta, kolmin-10 kertaisena Spherosilin tilavuudella yksimolaarista propioni- happoa sekä riittävästi 30-mmolaarisella NaCl-liuoksella, kunnes saavutetaan pH 6,5. Adsorbenssia tasapainotetaan riittävästi PBS-puskurissa, pH 7,5.
15 Kromatografiällä, jossa käytetään naudanseeruminalbumiini- biotiini- ja (tai) streptavidiiniadsorbenssia, joka on Sphe-rosil-perustalla, puhdistetaan streptavidiini esimerkkien 3, 4 tai 6 mukaan streptavidiinista, jolla on jäljelle jäänyttä jäännösaktiivisuutta (biotiinisidos), jäljelle jääneestä va-20 paasta biotiinista tai streptavidiinista, jossa on pintaan kovalenttisesti, luoksepäästävästi sidottua biotiinia (vastakohtana sidostaskuun kiinnitetylle biotiinille).
Reaktioerään lisätään kymmentä proteiinimilligrammaa kohti 25 yksi millilitra streptavidiini-Spherosil-adsorbenssia, tasa- painotetaan PBS-puskurissa, pH 7,5, ja sitä sekoitetaan kah-: : den tunnin ajan 25 °C:ssa.
Suspensio siirretään sitten pylvääseen ja pylväsmateriaali 30 pestään PBS-puskurilla, pH 7,5. Tällöin pylvään virtausta seurataan UV-monitorilla siten, että proteiinipitoisuutta ;; seurataan ^eonm: ssä. Pylväs pestään proteiinittomaksi. Pro- teiinipitoinen virtaus kootaan yhdeksi fraktioksi.
i ; 35 Streptavidiini-adsorbenssin proteiinipitoiseen virtaukseen lisätään sitten kymmentä proteiinimilligrammaa kohti yksi millitra naudanseeruminalbumiini-biotiini(RSA-Bi)-Spherosil- 114341 21 adsorbenssia, joka on tasapainotettu PBS-puskurissa, pH 7,5, ja sitä sekoitetaan kahden tunnin ajan huoneenlämpötilassa.
Suspensio siirretään pylvääseen ja sitä pestään PBS-puskuril-5 la, pH 7,5. Tällöin pylvään virtausta seurataan UV-monito-rilla siten, että proteiinipitoisuus mitataan E280:ssa. Pro-teiinipitoinen virtaus sisältää tuotteen, ja se kerätään yhdessä fraktiossa. Tuote (inaktivoitu (poly-)treptavidiini tai lämpö-RSA-SA tai johdannaiset tai fragmentit) väkevöidään 10 proteiinipitoisuuteen, joka on 20 mg/ml, ja dekantoinnin jälkeen ne lyofilisoidaan.
Esimerkki 8 15 GAD-vasta-ainekokeen toteutus biotinyloidun antigeenin ja näytteen suhteen jaksoittaisessa kokeen toimeenpanossa Jokaiseen miktrotiitterilevyn kuoppaan, joka on päällystetty ennalta lämpö-RSA-streptavidiinilla, pipetoidaan 100 julitraa biotinyloitua glutamaattidekarboksilaattia (GAD), joka on 20 eristetty sianaivoista, kutakin annosta varten optimissa pitoisuudessa (1 -3 μg/ml inkubaatiopuskurissa, joka on Boeh-ringer Mannheimin Enzymun-TestR Anti-HIV 1+2) ja sitä inku-boidaan huoneenlämpötilassa 30 minuutin ajan. Tämän jälkeen : levy pestään kolme kertaa kulloinkin 350 ^litralla 50-milli- : : 25 molaarista kaliumfosfaattia, pH 7,0, johon on lisätty 0,1 prosenttia (paino/tilavuus) CHAPSOrta (3-[(3-kolamidopropyy-lidimetyyliammonio]-2-hydroksi-l-propaanisulfonaattia). Hu-, maani seerumi laimennetaan suhteessa 1+25 inkubointipus- , ·, kurissa, joka on peräisin Enzymun-TestR Anti-HIV l+2:sta, 30 johon lisätään kulloinkin ilmoitettu määrä lämpö-RSA-strept- , avidiinia (käsittelemätön tai inaktivoitu) tai streptavi- ; diinimonomeeriä tai streptavidiinipolymeeriä (käsittelemätön tai inaktivoitu). Näitä täten laimennettuja näytteitä inku-, boidaan 100 ^litran tilavuudessa syvennystä kohti, yhden .35 tunnin ajan huoneenlämpötilassa, siten että mikrotiitterile- vyä samalla ravistellaan. Tämän jälkeen näytteet poistetaan ;; imemällä ja levy pestään kolme kertaa kuten edellä. PODrhen 114341 22 kytketty osoitusvasta-aine, joka on peräisin lampaasta ja jolla on sidospesifisyyttä humaani-IgG:tä kohtaan, laimennetaan konjugaattipuskurissa, joka on peräisin Enzymun-TestR Anti-HIV l+2:sta, pitoisuuteen 75 mU/ml ja jokaisessa syven-5 nyksessä inkuboidaan 100 μ1ϊ^33 tätä laimennettua liuosta yhden tunnin ajan huoneenlämpötilassa ja samalla ravistellaan. Neste poistetaan imemällä ja levyjä pestään jälleen kolme kertaa kuten edellä. Väriaine ABTSR laimennetaan pitoisuuteen 1 mg/ml Enzymun-TestR -substraattipuskurissa ja sitä 10 inkuboidaan 100 plitraa syvennystä kohti, huoneenlämpötilassa, ravistelematta. Noin 30 minuutin kuluttua luetaan ekstik-tio mikrotiitterilevyn fotometrissä. Mittausaallonpituus on 405 nm, ja vertailuaallonpituus on 492 nm. Tausta-arvoina ovat kaksi käsittelemätöntä syvennystä, jotka sisältävät vain 15 substraatti-väriaineliuosta. Tausta-arvon antavien molempien syvennysten ekstinktioiden keskiarvo vähennetään kaikista ekstinktioista.
Taulukoissa 2, 3 ja 4 annetaan kulloinkin keskiarvo kaksois-20 määrityksenä määritetyn näytteen kustakin kahdesta ekstinti-oina ilmaistusta syvennyksen mittausarvosta. 1 s t . » a 114341
* Ο ^ Γ" H Oi CO
^ H -K VO ·<# n H
X —-------- 01 3 3 p 3 m
Ul> V O (N 00
•H 3 O 1 f-· VO 'S' H H
rH i—I________ (0 Ή
3 -P
C \ m tyi O m h c - o tn o in^to
0) -H O 1 t~- VO in H H
:0 (0________ -P a xs :3 o\»
«H ^ i—I
«. n O vo m n 3 3 o 1 o t> vo h h C -P________-g ---1 ** m
^ 0) i< S
2 -P w m in £
Ή .jj | q ^ H
5 C «C «. Hm m moon ig, ""j Q) to o 1 γ-- η- vo h h ·£ ω«________, O o i----- d £ P :0 m ® ^ ft Λ m m -h jj H O rrt "λ oi :<d co^f H rt co vo jj m SHo-fcvor·' vo h h q H X :<d 2 k H ^
f O H C
<c ^ £ ° -h
m „ P mm M VO CV rt rH
(¾ g :g o 1 cv r- vo h <n 3 i H g--------g •S fd E, 6 <d c :§ S, 'd oo o O o o oi H .7 ί oo o o o o oi _Λ _5 O ^ H H H rH H r—l j3 :3 W Η________3 -H - -P 0)
k _ -PC
:3 '2 -H -H
:3 - +v S 10 g CM 1 g >· C 3
3 S :3 ID U
•H 12 2 01 01 • · t/1 'H ‘Ί -H 3 •H 1-1 Ό cm vo in in m r» :3 >
3 o rH CO O VO <N Ή· O X
· rH -PC O H CV O m CM f- :3C
• H 4->-rH K v v r - >
• μ C k OOH CM 04 H O Q
ai 'H R 3 < -P X x o ; : :3 « «3 w
’ fH R O C
rH w ft 1 0)
- ,1 :3 _________C
g - -H
i > :3 1 , 3 H
’· :(0 £ ' -P <d m CO) 01 3
-2 -H O 0) H <n on o C
H g1 HO
3 ·Η -H -H P rH
I o kCr-^Cgge+j^ M aiaicaiccc o , m oicuc pppCg . - CM -H 01 -H H -H a> <u a> :3 o O -H>g> 010)0):3 g O Qj -H H -H — -H 01 01 01 jj i v^ c k 3 -H -H :0 :0 :0 -h ·· ' ‘ X :0 0) 3 3 +J -H +J -H ·Η -H g <0
3 -H -P 1 g -3 H -H -H p p k U
; rH k !>1 01 k 01 H 01 g -H -H -H -rH |—| 3 -H :rd 3 O O O 0 3 ;3 :3 :3 <0 g
3:3 S «gftkftkKKK
Eh X H - HL -------- 1,1--- 1 » 24 1 1434 1 tn 3 ?
(O
ι-h σι co i" n o •h o o oo n in +j o h o o en
O O O O H O
C •H
(0 < ft W
'w·' | >1
<λ<> pH O
10 H
rH . - ...... — 3 <
5 W
(0 _ e g 0> g
6 S
rH VO CO 00 VO
•5 -rl O O 00 H
3 +J O H H in «d1 •H ^ -
M O O O O H H
C C
-S
[1 <0 (1) 3
<D
t 0\0 r—I .
0 H
ft------
•H
(0
-P
:<0 co vo o o o C 4-> o o σ> in ^ •f1 en o h n σ σ P ^ 1· 1 <u :i0 o o H o o <u tn * β ·Η o ; 8 g a 5
S
Ό
1 > I
(0 H -H
•,;. 1 -P S g ft w 3
... 0) P
V 1 U -rl 0) μ ·Η rH φ M g rH 10
3 -H O
o μ e μ e : i : jj o) 3 +j o) tn φ in e e , ·; ·. n -h ω Q) o -rl ' ’ · o -r| (D ,¾ >
o Q. -rl rH to -H
e P (0 :0 -H
; u ;o <U 3 (0 -H +J +J
3 -H -P 44 g P -rH -H
hu >1 to μ -h co -—» to
; 3 -H :<0 3 O :i0 O < O
3:<0 S ft 2 K ft U ft
En K .. ----.1 -I----1„ - 1 - - - -----J
25 1 1434 1 <d •P • · I < •e -rt “ * il < .2, o co Hvorvjcri [" C 04 h o m t" σ» _ ·η i o (n m in r- .ϊ aa o o o h o .S ~ J ~ 3 ~ ti C (N · (0 rt o > 5 s » (0 a o rH - 0)------ p _
•P T
in n, A s « '.μ ' ϋ rt •χ O -P ΗΗΓ'ΟΟ Γ" g< C ·· hovho) in .2 ·Η rij O H H LO 'd1 •<5 row - - - -
1-1 ai O O O H H
•H w C
P 10 5 «\° Oi in :0 -2 no a £ o g •H C o 3 •rH (0 w Ό ro------ •H 1 > 0 ro e
-P
a «a1 rt :io σι vo o in m
PC 4J ocmo·^· VO
P -h in o m in r·1 σι in x ^ s ^ k ^ ^
lp :(0 O O H H H
< ® in
W S -H
04 -H i—i · i in , :0 rt c ; ; : & w ro
E E
:ro -h Jq
H H H
— io .·,·, :ro rt------ • · h in ή 1p 1 , . ,·. :iÖ -P Ti 'ä E -p P § :rt C P p
; ; : :ro rt -P P
in h , g rt •H (0 -h o rt rH > g tn o 3 -p
o ,¾ P E G C
: : 4j id c a) rt in e rt p c c ·"'· 1 -h -h 03 « ‘[I c· T? • · 0 -H Ή rt > rtj > o a -P -h h in -h u ·η , , C JJ P (0 :0 1H H Ή
; : V :0 rt rt 2 <0 -H +J g +J
3 -H C -P M E P ·Ρ —- -H
,—i pc ί>ι in p -h in in : a -h 3 :ro 0 o :ro o -h o to :<oc ss a s κ α h α EH KE ....... I l -1 - 114341 26
Esimerkki 9
Anti-HCV-testin häiriönpoisto biotiini(valolla aktivoitu)-SA:11a 5
Kokeen periaate:
Kaksivaiheinen "sandwich"-määritys (kokeen toteutus ja rea-genssit kuten Boehringer Mannheim Enzymun-TestR Anti HIV 1+2:11a) 10 1. vaihe: Biotinyloitu peptidi sekä näyte 2. vaihe: Seinämään sidotun vasta-aineen reaktio anti- humaani -igG-POD-konjugaatin kanssa 15 3. vaihe: Indikaattorireaktio ABTS substraattina Puskuri: a) Inkubointipuskuri, joka on peräisin Enzymun-Test* Anti-HIV 20 1+2:sta ’"· Valmistetaan HCV-peptidi ytimestä, NS4- ja NS5-alueesta +.
•jj inaktivoitu streptavidiini esimerkin 6 ja 7 mukaan ·’· : 25 b) Konjugaattipuskuri Enzymun-TestR Anti-HIV l + 2:sta
Inkubointiajat: • · 1. vaihe: 1 tunti (näyte + inkubointipuskuri) 2. vaihe: 1 tunti (+ konjugaattipuskuri) ’h; 30 3. vaihe: 1 tunti (substraattireaktio ABTS:n kanssa) : Näytteet: 3 negatiivista seeruminäytettä (vertailu 1) , 6 väärää positiivista anti-HCV-negatiivista näytettä ' ; 35 3 positiivista anti-HCV-näytettä (vertailu 2) 114341 27
Tilavuudet: Näyte 20 μΐ, kaikki muut reagenssit kukin 500 μΐ 5 Kokeen toteutus: ES 600:11a, 25 °C:ssa, Enzymun-TestB Anti-HIV 1+2:n koetoteu-tuksen mukaan
Substraatin mittaus: 10 Substraattiliuoksen mittaus 422 nm:ssä ES 600:11a (Boehringer Mannheim GmbH). Ekstinktiot esitetään taulukossa 5.
i 114341 28
Taulukko 5 Näyte Ilman intaktia Inakt. SA:ta Signaalin SA:ta inku- 20 pg/ml in- väheneminen bointipusku- kubointipus- inaktiivisen rissa turissa SA:n lisäyk sen jälkeen
Negat. seeru- 0,036 0,027 * mi 1
Negat. seeru- 0,042 0,035 * mi 2
Negat. seeru- 0,078 0,076 * mi 3 HCV-negat. 0,528 0,125 76% seerumi 1 HCV-negat. 0,467 0,106 77 % seerumi 2 HCV-negat. 0,979 0,161 84 % seerumi 3 HCV-negat. 0,499 0,094 81 % seerumi 4 HCV-negat. 2,049 0,471 77 % seerumi 5 HCV-negat. 0,427 0,065 85 % . ·. seerumi 6 _ HCV-posit. 1,747 1,645 5 % ;; j seerumi 1 ' HCV-posit. 1,161 1,076 7 % : : : seerumi 2 :T: HCV-posit. 1,104 1,026 7 % seerumi 3 5 * Ei mitään tulosta, koska se ei ollut alhaisen mittausignaa-
Iin peruusteella järkevä.
Claims (17)
1. Användning av avidin eller streptavidin eller ett derivat 20 därav som störningshämmande medel för undvikandet av ospecifi- ka växelverkningar i immunanalyser eller nukleinsyraanalyser.
1. Avidiinin tai streptavidiinin tai niiden johdannaisen käyttö häiriönpoistoaineena epäspesifisten vuorovaikutusten 5 välttämiseksi immunologisissa määritysmenetelmissä tai nukle-iinihappomäärityksissä.
2. Användning av avidin eller streptavidin eller ett derivat därav enligt patentkrav 1, kännetecknad av att man som avidin- ; . 25 eller streptavidinderivat använder homogent tvärbundna avidin- . ,·. eller streptavidinmolekyler.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen avidiinin tai streptavidiinin tai niiden johdannaisen käyttö, tunnettu siitä, että avi- 10 diini- tai streptavidiinijohdannaisena käytetään homogeenisesti silloitettuja avidiini- tai streptavidiinimolekyylejä.
3. Användning av avidin eller streptavidin eller ett derivat därav enligt patentkrav 1, kännetecknad av att man som avidin- 30 eller streptavidinderivat använder genom bi- eller polyfunk- tionella föreningar tvärbundna avidin- eller streptavidinmole-kyler. » » • 4. Användning av avidin eller streptavidin eller ett derivat t ’! 35 därav enligt patentkrav 1, kännetecknad av att man som avidin-eller streptavidinderivat använder heterogent tvärbundna avidin- eller streptavidinmolekyler. 114341
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen avidiinin tai streptavidiinin tai niiden johdannaisen käyttö, tunnettu siitä, että 15 avidiini- tai streptavidiinijohdannaisena käytetään bi- tai polyfunktionaalisten yhdisteiden avulla silloitettuja avidiini- tai streptavidiinimolekyylejä.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen avidiinin tai streptavidii-20 nin tai niiden johdannaisen käyttö, tunnettu siitä, että avidiini- tai streptavidiinijohdannaisena käytetään heterogeenisesta silloitettuja avidiini- ja streptavidiinimolekyylejä. t * * * " 3' 5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen avidiinin tai streptavidii- : * * ’:25 nin tai niiden johdannaisen käyttö, tunnettu siitä, että käy- • » : tetään proteiineilla silloitettuja avidiini- tai streptavidii- * i » nimolekyylejä.
5. Användning av avidin eller streptavidin eller ett derivat därav enligt patentkrav 4, kännetecknad av att man använder med protein tvärbundna avidin- eller streptavidinmolekyler.
6. Användning av avidin eller streptavidin eller ett derivat därav enligt patentkrav 5, kännetecknad av att man använder med polymeriserade protein tvärbundna avidin- eller streptavidinmolekyler.
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen avidiinin tai streptavidii-’; 30 nin tai niiden johdannaisen käyttö, tunnettu siitä, että käy-tetään polymeroiduilla proteiineilla silloitettuja avidiini-: ' : ja streptavidiinimolekyylejä. M I .‘ , 7. Patenttivaatimuksen 5 tai 6 mukainen avidiinin tai strep- ' ; 35 tavidiinin tai niiden johdannaisen käyttö, tunnettu siitä, että avidiini- tai streptavidiinimolekyyleinä käytetään homo- 114341 geenisesti silloitettuja avidiini- tai streptavidiinimolekyy-lejä .
7. Användning av avidin eller streptavidin eller ett derivat därav enligt patentkrav 5 eller 6, kännetecknad av att man som avidin- eller streptavidimnolekyler använder homogent tvärbundna avidin- eller streptavidinmolekyler.
8. Användning av avidin eller streptavidin eller ett derivat därav enligt patentkrav 1, kännetecknad av att man som avidin-eller streptavidinderivat använder fragment, som kan bibehalla den störningshämmande verkan i den totala molekylen, eller en blandning av dessa fragment av avidin eller streptavidin. 20
8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen avidiinin tai streptavidii-5 nin tai niiden johdannaisen käyttö, tunnettu siitä, että avidiini- tai streptavidiinijohdannaisena käytetään fragmentteja, jotka voivat säilyttää kokonaisen molekyylin häiriönpoistovai-kutuksen, tai seosta, joka sisältää avidiinin tai streptavi-diinin näitä fragmentteja. 10
9. Användning av avidin eller streptavidin eller ett derivat : därav enligt patentkrav 1-8, kännetecknad av att man som : avidin- eller streptavidinderivat använder inaktiverad avidin eller streptavidin. ;· ; 25 . 10. Användning av avidin eller streptavidin eller ett derivat därav enligt patentkrav 9, kännetecknad av att inaktiveringen av avidin eller streptavidin skedde genom mättning med biotin eller ett biotinderivat. ·;;; 30
9. Patenttivaatimusten 1-8 mukainen avidiinin tai streptavi-diinin tai niiden johdannaisen käyttö, tunnettu siitä, että avidiini- tai streptavidiinijohdannaisena käytetään inaktivoi-tua avidiinia tai streptavidiinia. 15
10. Patenttivaatimuksen 9 mukainen avidiinin tai streptavidii-nin tai niiden johdannaisen käyttö, tunnettu siitä, että avidiinin tai streptavidiinin inaktivointi tapahtui kyllästämällä biotiinilla tai jollain biotiinijohdannaisella. 20
11. Användning av avidin eller streptavidin eller ett derivat därav enligt patentkrav 9, kännetecknad av att inaktiveringen skedde genom kovalent modifiering av det aktiva centrumet i ,' , avidin eller streptavidin. I 35
11. Patenttivaatimuksen 9 mukainen avidiinin tai streptavidii-nin tai niiden johdannaisen käyttö, tunnettu siitä, että inak- ' .· tivointi tapahtui avidiinin tai streptavidiinin aktiivisen keskuksen kovalenttisella modifioinnilla. Γ ': 2 5 f 1
12. Användning av avidin eller streptavidin eller ett derivat därav enligt patentkrav 11, kännetecknad av att det genomförs 114341 för kovalent modifiering en derivatisering av minst en amino-syra i det aktiva centrumet eller en kovalent koppling av biotin till det aktiva centrumet.
12. Patenttivaatimuksen 11 mukainen avidiinin tai streptavi- diinin tai niiden johdannaisen käyttö, tunnettu siitä, että kovalenttista modifiointia varten aktiivisen keskuksen vähin-, tään yhdestä aminohaposta muodostetaan johdannainen tai bio- 30 tiini kytketään kovalenttisesti aktiiviseen keskukseen. J * : 13. Patenttivaatimuksen 12 mukainen avidiinin tai streptavai- diinin tai niiden johdannaisen käyttö, tunnettu siitä, että » » i . biotiini kytketään kovalenttisesti aktiiviseen keskukseen va- ' ) 35 lolla aktivoituvan biotiinin, esimerkiksi biotiini-DADOO-AB:n kautta. 114341
13. Användning av avidin eller streptavidin eller ett derivat därav enligt patentkrav 12, kännetecknad av att den kovalenta kopplingen av biotin till det aktiva centrumet sker genom fotoaktiverbar biotin, exempelvis biotin-DADOO-AB.
14. Användning av avidin eller streptavidin eller ett derivat därav enligt patentkrav 9, kännetecknad av att inaktiveringen av det aktiva centrumet sker genom genteknologiska metoder, säsom substitution, deletion eller insertion av enstaka eller flera aminosyraester. 15
14. Patenttivaatimuksen 9 mukainen avidiinin tai streptavidii-nin tai niiden johdannaisen käyttö, tunnettu siitä, että aktiivinen keskus inaktivoidaan geenitekniikan menetelmillä, kuten yksittäisten tai useampien aminohappotähteiden substi- 5 tuutiolla, deleetiolla tai insertiolla.
15. Användning av avidin eller streptavidin eller ett derivat därav enligt nägot av patentkraven 9-14, kännetecknad av att det inaktiverade avidin eller streptavidin dessutom har renats over biotin och/eller avidin eller streptavidin bundet tili 20 fast fas. ’·’ 16. Användning av ett störningshämmande medel enligt nägot av ; ‘ : patentkraven 1-15 i en immunanalys eller en nukleinsyraanalys, I* i vilken man som en bindningskomponent använder avidin eller 2. streptavidin.
15. Jonkin patenttivaatimuksista 9-14 mukainen avidiinin tai streptavidiinin tai niiden johdannaisen käyttö, tunnettu siitä, että inaktivoitu avidiini tai streptavidiini lisäksi on 10 puhdistettu kiinteään faasiin sidotun biotiinin ja/tai avidiinin tai streptavidiinin kautta.
16. Jonkin patenttivaatimuksista 1-15 mukaisen häiriönpoisto-aineen käyttö immunologisessa määritysmenetelmässä tai nukle- 15 iinihappomäärityksessä, jossa käytetään sidoskomponenttina avidiinia tai streptavidiinia.
17. Menetelmä analysoitavan aineen määrittämiseksi näytteessä, tunnettu siitä, että menetelmä käsittää vaiheet, joissa 20 (1) näyte saatetaan kosketuksiin (a) jonkin patenttivaatimuksista 1-15 mukaisen häiriön-,1 poistoaineen kanssa : :25 (b) analysoitavan aineen yhden tai useamman spesifisen : sidospartnerin kanssa ja (2) analysoitavasta aineesta ja spesifisestä sidospartnerista muodostunut kompleksi mitataan analysoitavan aineen läsnäolon '30 mittana. ’ ' 18. Patenttivaatimuksen 17 mukainen menetelmä analysoitavan : ; aineen määrittämiseksi näytteessä, tunnettu siitä, että vähin- / . tään yksi menetelmän sidoskomponentti kytketään avidiini-bio- ; 35 tiinin tai streptavidiini-biotiinin kautta ja tämä sidoskomponentti kytketään ennen häiriönpoistoaineen lisäystä. 114341
19. Menetelmä analysoitavan aineen määrittämiseksi näytteessä, tunnettu siitä, että menetelmä käsittää vaiheet, joissa (1) näyte saatetaan kosketuksiin 5 (a) jonkin patenttivaatimuksista 1-15 mukaisen häiriön- poistoaineen kanssa (b) analysoitavan aineen yhden tai useamman spesifisen sidospartnerin kanssa ja 10 (2) analysoitavasta aineesta ja spesifisestä sidospartnerista muodostunut kompleksi mitataan analysoitavan aineen läsnäolon mittana, jolloin näyte on kosketuksissa samanaikaisesti (a):n ja (b):n kanssa.
20. Koeyhdistelmä menetelmää varten, jolla analysoitava aine määritetään näytteessä, tunnettu siitä, että mainittu yhdistelmä sisältää (1) jonkin patenttivaatimuksista 1-15 mukaisen avidiini- ja streptavidiinijohdannaisen, jota ei liitetä kompleksiin, joka 20 muodostuu analysoitavasta aineesta ja analysoitavan aineen sidospartnerista, ja (2) analysoitavan aineen ainakin yhden spesifisen sidospart- : : nerin. • ‘'.25 21. Patenttivaatimuksen 20 mukainen koeyhdistelmä, tunnettu . ·. siitä, että se sisältää lisäksi kaikkia muita määritysmenetel- mään tarvittavia reagensseja. i , 22. Menetelmä jonkin patenttivaatimuksista 9-15 mukaisen häi- t i I *;; 30 riönpoistoaineen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että avidii-'··*’ ni tai streptavidiini muunnetaan ja mahdollisesti puhdistetaan •v,> kiinteään faasiin sidotun biotiinin ja/tai avidiinin tai streptavidiinin kautta. » > · '· "> 35 23. Inaktivoitu avidiini tai streptavidiini, tunnettu siitä, - * » 1 I ’ * että se on saatavissa siten, että aktiivinen keskus kylläste tään biotiinilla tai biotiinijohdannaisella tai aktiivinen 114341 keskus muunnetaan kovalenttisesti ja puhdistetaan kiinteään faasiin sidotun biotiinin ja/tai avidiinin tai streptavidiinin kautta.
24. Inaktivoitu avidiini tai streptavidiini, jossa biotiini on sidottu aktiiviseen keskukseen ja lisäksi kovalenttisella sidoksella aktiivisen keskuksen ulkopuolella, tunnettu siitä, että se on saatavissa kyllästämällä avidiinin tai streptavidiinin aktiiviset keskukset valolla aktivoituvalla biotiini-10 johdannaisella ja tämän jälkeen biotiinijohdannainen kytketään kovalenttisesti käynnistämällä valoreaktio.
25. Patenttivaatimuksen 24 mukainen inaktivoitu avidiini tai streptavidiini, tunnettu siitä, että biotiinijohdannaisena 15 käytetään biotiini-DADOO-AB:tä.
17. Förfarande for bestämning av en analyt i ett prov, känne-tecknat av att det omfattar stegen 30 (1) kontaktande av provet med * i (a) ett störningshämmande medel enligt nägot av patent-·'·*: kraven 1-15 I I
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4407423 | 1994-03-05 | ||
| DE4407423A DE4407423A1 (de) | 1994-03-05 | 1994-03-05 | Entstörmittel zum Einsatz bei Immunoassays |
| PCT/EP1995/000690 WO1995023800A1 (de) | 1994-03-05 | 1995-02-25 | Photoaktivierbare biotinderivate und deren einsatz zum entstören von immunoassays |
| EP9500690 | 1995-02-25 | ||
| EP9500776 | 1995-03-03 | ||
| PCT/EP1995/000776 WO1995023801A1 (de) | 1994-03-05 | 1995-03-03 | Entstörmittel zum einsatz bei immunoassays |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI963461A0 FI963461A0 (fi) | 1996-09-04 |
| FI963461A FI963461A (fi) | 1996-09-04 |
| FI114341B true FI114341B (fi) | 2004-09-30 |
Family
ID=25934426
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI963461A FI114341B (fi) | 1994-03-05 | 1996-09-04 | Avidiinin tai streptavidiinin käyttö häiriönpoistoaineena immunologisissa määrityksissä ja määritysmenetelmät, joissa käytetään tätä ainetta |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5863740A (fi) |
| JP (1) | JP3027770B2 (fi) |
| CA (1) | CA2184386C (fi) |
| FI (1) | FI114341B (fi) |
| WO (1) | WO1995023801A1 (fi) |
Families Citing this family (38)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4434093A1 (de) * | 1994-09-23 | 1996-03-28 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zum qualitativen oder/und quantitativen Nachweis einer zu bestimmenden Substanz |
| IL114149A0 (en) * | 1995-06-14 | 1995-10-31 | Yeda Res & Dev | Modified avidin and streptavidin molecules and use thereof |
| FI100276B (fi) * | 1996-02-06 | 1997-10-31 | Orion Yhtymae Oy | Menetelmä analyyttien ei-kilpailevaa määritystä varten |
| DE19724787A1 (de) * | 1997-06-06 | 1998-12-10 | Biotez Berlin Buch Gmbh Bioche | Streptavidin/Avidin beschichtete Oberflächen |
| EP0922958B1 (de) * | 1997-12-11 | 2002-10-02 | Roche Diagnostics GmbH | Entstörung von diagnostischen Verfahren durch Peptide aus D-Aminosäuren |
| US6410692B2 (en) * | 1998-02-02 | 2002-06-25 | Novadx, Inc. | Removal of abundant interfering proteins from a liquid sample using a collapsible affinity matrix |
| EP0957360B1 (de) * | 1998-05-06 | 2002-07-31 | Roche Diagnostics GmbH | Entstörung durch Rheumafaktoren |
| ATE536422T1 (de) * | 1998-08-25 | 2011-12-15 | Univ Washington | Schnelle quantitative analyse von proteinen oder proteinfunktionen in komplexen gemischen |
| US6143507A (en) * | 1998-10-29 | 2000-11-07 | Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. | High throughput compatible assay for receptor-TRAF interactions |
| US6629040B1 (en) | 1999-03-19 | 2003-09-30 | University Of Washington | Isotope distribution encoded tags for protein identification |
| JP2004503780A (ja) | 2000-06-12 | 2004-02-05 | ユニバーシティ オブ ワシントン | リンペプチドの選択的標識および単離ならびにプロテオーム分析への適用 |
| US7223534B2 (en) * | 2002-05-03 | 2007-05-29 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Diffraction-based diagnostic devices |
| US7214530B2 (en) * | 2002-05-03 | 2007-05-08 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Biomolecule diagnostic devices and method for producing biomolecule diagnostic devices |
| US7118855B2 (en) * | 2002-05-03 | 2006-10-10 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Diffraction-based diagnostic devices |
| US7771922B2 (en) * | 2002-05-03 | 2010-08-10 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Biomolecule diagnostic device |
| US7485453B2 (en) * | 2002-05-03 | 2009-02-03 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Diffraction-based diagnostic devices |
| US7223368B2 (en) * | 2002-05-03 | 2007-05-29 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Diffraction-based diagnostic devices |
| US7091049B2 (en) * | 2002-06-26 | 2006-08-15 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Enhanced diffraction-based biosensor devices |
| US7169550B2 (en) * | 2002-09-26 | 2007-01-30 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Diffraction-based diagnostic devices |
| US20050112586A1 (en) * | 2003-11-24 | 2005-05-26 | Roland Janzen | Method and composition for stabilizing liquid reagents |
| US20060114172A1 (en) * | 2004-11-26 | 2006-06-01 | Giotti, Inc. | Method and apparatus for LED based modular display |
| US8669052B2 (en) * | 2008-06-10 | 2014-03-11 | Rapid Pathogen Screening, Inc. | Lateral flow nucleic acid detector |
| US8445293B2 (en) | 2005-02-09 | 2013-05-21 | Rapid Pathogen Screening, Inc. | Method to increase specificity and/or accuracy of lateral flow immunoassays |
| US20130196310A1 (en) | 2008-05-20 | 2013-08-01 | Rapid Pathogen Screening, Inc. | Method and Device for Combined Detection of Viral and Bacterial Infections |
| US8609433B2 (en) | 2009-12-04 | 2013-12-17 | Rapid Pathogen Screening, Inc. | Multiplanar lateral flow assay with sample compressor |
| US8815609B2 (en) | 2008-05-20 | 2014-08-26 | Rapid Pathogen Screening, Inc. | Multiplanar lateral flow assay with diverting zone |
| US9068981B2 (en) | 2009-12-04 | 2015-06-30 | Rapid Pathogen Screening, Inc. | Lateral flow assays with time delayed components |
| US8962260B2 (en) | 2008-05-20 | 2015-02-24 | Rapid Pathogen Screening, Inc. | Method and device for combined detection of viral and bacterial infections |
| US20110086359A1 (en) * | 2008-06-10 | 2011-04-14 | Rapid Pathogen Screening, Inc. | Lateral flow assays |
| WO2013002309A1 (ja) * | 2011-06-29 | 2013-01-03 | 三菱化学メディエンス株式会社 | 非特異反応抑制剤、非特異反応抑制方法及びキット |
| WO2013018836A1 (ja) * | 2011-08-01 | 2013-02-07 | 日本たばこ産業株式会社 | 生物学的試料中の物質を検出する工程において、非特異的結合を抑制する方法、当該方法に使用するための剤 |
| US10808287B2 (en) | 2015-10-23 | 2020-10-20 | Rapid Pathogen Screening, Inc. | Methods and devices for accurate diagnosis of infections |
| CN112703401A (zh) * | 2018-09-25 | 2021-04-23 | 美国西门子医学诊断股份有限公司 | 用于从使用缀合的分子阱的测定除去生物素干扰的方法和组合物 |
| CN112703400A (zh) * | 2018-09-25 | 2021-04-23 | 美国西门子医学诊断股份有限公司 | 用于从使用环糊精阱的测定除去生物素干扰的方法和组合物 |
| CN112129933B (zh) * | 2019-06-25 | 2024-01-05 | 迈克生物股份有限公司 | 一种免疫分析系统中抗生物素干扰的试剂、试剂盒及方法 |
| CN112129955B (zh) * | 2019-06-25 | 2023-04-07 | 迈克生物股份有限公司 | 睾酮检测试剂盒 |
| EP4290235A1 (de) * | 2022-06-10 | 2023-12-13 | Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH | Verfahren zur neutralisation einer biotininterferenz in bindungstesten |
| CN116773793A (zh) * | 2023-03-16 | 2023-09-19 | 中元汇吉生物技术股份有限公司 | 一种链霉亲和素阻断剂和检测试剂盒 |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8314523D0 (en) * | 1983-05-25 | 1983-06-29 | Lowe C R | Diagnostic device |
| EP0155854B1 (en) * | 1984-03-22 | 1990-09-26 | Bresatec Limited | Non-radioactive biological probes |
| WO1986002077A1 (en) * | 1984-10-02 | 1986-04-10 | Meade Harry M | Production of streptavidin-like polypeptides |
| US4839293A (en) * | 1986-02-24 | 1989-06-13 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | DNA encoding streptavidin, streptavidin produced therefrom, fused polypeptides which include amino acid sequences present in streptavidin and uses thereof |
| DE3800644A1 (de) * | 1988-01-12 | 1989-07-20 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zum hochspezifischen nachweis von nukleinsaeuren in loesung |
| US5268306A (en) * | 1988-02-29 | 1993-12-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Preparation of a solid phase matrix containing a bound specific binding pair |
| US4914040A (en) * | 1988-03-03 | 1990-04-03 | Boehringer Mannheim Gmbh | Reagent and method for determination of a polyvalent substance using an immunoaggregate |
| DE3915135A1 (de) * | 1989-05-09 | 1990-11-15 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zum nachweis spezifisch bindefaehiger substanzen in koerperfluessigkeiten |
| US5252466A (en) * | 1989-05-19 | 1993-10-12 | Biotechnology Research And Development Corporation | Fusion proteins having a site for in vivo post-translation modification and methods of making and purifying them |
| US5252743A (en) * | 1989-11-13 | 1993-10-12 | Affymax Technologies N.V. | Spatially-addressable immobilization of anti-ligands on surfaces |
| DE4040669A1 (de) * | 1990-12-19 | 1992-06-25 | Behringwerke Ag | Verwendung von peptidpaaren mit extrem hoher spezifischer affinitaet zueinander im bereich der in vitro diagnostik |
| US5528338A (en) * | 1991-06-17 | 1996-06-18 | Seiko Epson Corporation | Thermal development device |
| US5474796A (en) * | 1991-09-04 | 1995-12-12 | Protogene Laboratories, Inc. | Method and apparatus for conducting an array of chemical reactions on a support surface |
| DE4135543A1 (de) * | 1991-10-28 | 1993-04-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | Rekombinantes core-streptavidin |
| US5260004A (en) * | 1991-12-02 | 1993-11-09 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Process of making Langmuir-Blodgett films having photo-electronic properties |
| US5487975A (en) * | 1993-11-15 | 1996-01-30 | Ventana Medical Systems, Inc. | Biotin/avidin formulation |
-
1995
- 1995-03-03 WO PCT/EP1995/000776 patent/WO1995023801A1/de active IP Right Grant
- 1995-03-03 JP JP7522705A patent/JP3027770B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1995-03-03 CA CA002184386A patent/CA2184386C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-03-03 US US08/700,435 patent/US5863740A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-09-04 FI FI963461A patent/FI114341B/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI963461A0 (fi) | 1996-09-04 |
| CA2184386A1 (en) | 1995-09-08 |
| CA2184386C (en) | 2005-10-18 |
| FI963461A (fi) | 1996-09-04 |
| JP3027770B2 (ja) | 2000-04-04 |
| WO1995023801A1 (de) | 1995-09-08 |
| JPH09510289A (ja) | 1997-10-14 |
| US5863740A (en) | 1999-01-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI114341B (fi) | Avidiinin tai streptavidiinin käyttö häiriönpoistoaineena immunologisissa määrityksissä ja määritysmenetelmät, joissa käytetään tätä ainetta | |
| JP3556228B2 (ja) | 複数の抗原を使用した特異的免疫グロブリンの測定 | |
| KR100252688B1 (ko) | 면역검정법에사용하기위한간섭억제제 | |
| JP3363166B2 (ja) | 相互に対する極めて高い特異的親和性を有するペプチド対をイン・ビトロ診断分野に使用する方法 | |
| EP0648334A4 (en) | IMMUNOASSAY USING DYE-COMPLEXED ENZYME CONJUGATES. | |
| JP5675782B2 (ja) | 標識化プローブ−水溶性担体複合体 | |
| AU748402B2 (en) | Method for isolating a target biological material, capture phase, detecting phase and reagent containing them | |
| US20060057647A1 (en) | Detection and identification of saxiphilins using saxitoxin-biotin conjugates | |
| WO2019020599A1 (en) | MULTIPLE EPITOPE FUSION PROTEIN OF HCV ANTIGEN AND USES THEREOF | |
| JPH02253162A (ja) | 特異的結合能を有する物質と結合したエクオリンを用いる検出法 | |
| US5674677A (en) | Immunoassay technique using histidine tags, metals, and chelating agents | |
| US5840834A (en) | Technique for joining amino acid sequences and novel composition useful in immunoassays | |
| EP0228225A2 (en) | Immunoassay kit and method employing modified solid surface | |
| JPH03255959A (ja) | ポリマー | |
| JP2001511820A (ja) | サイクロスポリン誘導体およびその使用 | |
| KR20110130384A (ko) | 효소가 집적된 미세튜브를 이용한 정량분석법 | |
| JP5559465B2 (ja) | アビジン類結合担体、その製造方法及びその使用方法 | |
| WO2007124593A1 (en) | Branched peptide amplification and uses thereof | |
| JP4437003B2 (ja) | Ｅｖｈ１ドメインまたはｅｖｈ１ドメインを有するタンパク質とｅｖｈ１結合ドメインまたはｅｖｈ１結合ドメインを有するタンパク質との相互作用を調節する化合物をスクリーニングする方法およびその相互作用を検出する方法 | |
| JP3923076B2 (ja) | 特定位にとり込まれたマーカー基およびハプテンを有するオリゴマー担体分子 | |
| JP2001305137A (ja) | 特異的複合体の固定化方法および測定方法 | |
| Rao | Controlled immobilization of biotinylated horseradish peroxidase in the development of novel biosensors and bioreactors | |
| JPH11508036A (ja) | 抗−ｈｉｖ−１または抗−ｈｉｖ−２抗体を検出するための改良されたハプテン−ペプチド結合物 | |
| Ngo et al. | Enzyme Immunoassays Using Tagged Enzyme-Ligand Conjugates | |
| JPH0466870A (ja) | 新規な標識体及びそれを用いた免疫測定法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HC | Name/ company changed in application |
Owner name: ROCHE DIAGNOSTICS INC. |
|
| FG | Patent granted |
Ref document number: 114341 Country of ref document: FI |
|
| MA | Patent expired |