FI113044B - 2-hydratsinopyridiinijohdannaisia - Google Patents
2-hydratsinopyridiinijohdannaisia Download PDFInfo
- Publication number
- FI113044B FI113044B FI952141A FI952141A FI113044B FI 113044 B FI113044 B FI 113044B FI 952141 A FI952141 A FI 952141A FI 952141 A FI952141 A FI 952141A FI 113044 B FI113044 B FI 113044B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- compound
- formula
- acid addition
- addition salts
- hours
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
- C07D213/79—Acids; Esters
- C07D213/80—Acids; Esters in position 3
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
- C07D213/81—Amides; Imides
- C07D213/82—Amides; Imides in position 3
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
- C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
- C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
- C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
- C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pyridine Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Adhesives Or Adhesive Processes (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
1 113044 2-hydratsinopyridiinijohdannaisia Tämän keksinnön kohteena ovat parannukset molekyylien merkitsemiseksi ja erityisemmin uudet bifunktionaali-5 set hydratsiinijohdannaiset, jotka pystyvät yhdistämään metalli-ioneja, erityisesti teknetiumia ja reniumia biologisesti hyödyllisiin molekyyleihin.
Keksinnön tausta
Johtuen niiden korkeasta biologisesta spesifisyy-10 destä tiettyjä makromolekyylejä (esim. monoklonaalisia vasta-aineita ja niiden fragmentteja) on käytetty kohdistamaan radioisotooppeja spesifisiin in vivo kohtiin kuvaus- ja/tai terapiatarkoituksia varten. Metastabiilin teknetium 99mTc käyttö diagnostisessa nukleaarisessa lääketieteessä on hy-15 vin vakiintunut ja reniumin ^-emittoivia isotooppeja 186Re, Re ja Re voidaan käyttää terapeuttisesti. Monia menetelmiä teknetiumin sitomiseksi makromolekyyleihin on kuvattu. Joissakin näistä menetelmistä käytetään disulfidiryhmi-en pelkistämistä makromolekyylissä (tavallisesti immunoglo-20 buliini) tioleiksi ja tämän jälkeen näitä ryhmiä käytetään pelkistetyn Tc:n sitomiseksi (esim. McKenzie et ai. kan- • tl · ’ ‘ sainvälinen patenttijulkaisu WO-87/04 164 ja Bremmer et ai.
EP-patenttijulkaisussa 0 271 806 A2) . Tämän kaltaisilla ">“· suorilla merkintämenetelmillä on useita mahdollisia haitto- : 25 ja. Disulfidiyksiköiden pelkistäminen voi johtaa proteiinin • denaturoitumiseen ja tästä johtuvaan biologisen spesifisyy-den vähenemiseen. Menetelmää ei myöskään voida käyttää mak- » romolekyylien, joissa ei ole disulfidiryhmiä, merkitsemi- 1 · seen.
» · »
• I
30 Vaihtoehtoisesti 99mTc voidaan sitoa makromolekyy- • » leihin bifunktionaalisten kelaattien, kuten DTPA:n (D Lan-teigne ja D J Hnatowich, Int. J. Appi. Radiat. Isot. 35, 617 (1984) ) , kelatoiviin tiosemikarbatsonien (Y Arano et t>\ j ai. Int. J. Nucl. Med. Biol. 12, 425 (1985)) ja diamididi- » t · 35 tioliligandien (A Fritzberg, EP-patentti j ulkaisu * · *'* 188 256 2A) kautta. Ongelmiin, jotka liittyvät näihin mene- 2 113044 telmiin, kuuluvat huomattava ei-spesifinen teknetiumin sitoutuminen (sitoutuminen proteiinin muihin kohtiin kuin ke-latoivaan ryhmään) ja Tc-merkinnän hidas kinetiikka.
Olemme aikaisemmin kuvanneet EP-patenttijulkaisussa 5 0 384 769 A2 uutta menetelmää biologisten molekyylien modi- fioimiseksi (esim. monoklonaaliset vasta-aineet, polyklo-naalinen ihmisen IgG ja munan albumiini) ja pienempien molekyylien (esim. peptidien) modifioimiseksi 2-hydratsino-pyridinoryhmillä, jotka reagoivat pelkistetyn Te:n, esim. 10 99mTgv:n (glukoheptonaatin) kanssa stabiilien immunoreaktii-visten radiokonjugaattien muodostamiseksi.
On havaittu, että biologiset molekyylit (esim. monoklonaaliset vasta-aineet), jotka on modifioitu sisältämään radioisotooppeja tai lääkemolekyylejä, metabolisoitu-15 vat in vivo ja saadut tuotteet jakautuvat koko kehoon. Yrityksessä kontrolloida metabolisoitujen tuotteiden biologista jakautumista modifioidun osan kemiallisia ominaisuuksia on muutettu lisäämällä hydrofiilisiä tai lohkaistavissa olevia funktionaalisia ryhmiä. Paik et ai. (J. Nucl. Med., 20 30, 1693 - 1701 (1989) ja Antibod. Immunoconjug. ja Radio- pharm. 3, 127 - 136 (1990)) ovat osoittaneet, että funktio- ' » naalisen esteriryhmän asema monoklonaalisen vasta-aineen ja radioisotoopin (li:LIn) välillä kiihdyttää isotooppien pois-‘"i tumista verestä ja vähentää sen talteenottoa tavallisiin : ' : 25 elimiin, kuten lihaksiin, munuaisiin, maksaan ja pernaan.
; Tämä nopeampi poistuminen tavallisista elimistä kasvattaa kasvain/tavallisen elimen suhdetta 2 -3 -kertaiseksi. Samanlaista kasvavaa vapautumista eläimissä, joilla ei ole kasvainta, ovat havainneet Deshapande et ai. (Nucl. Med. V 30 Biol., 16, 587 - 597 (1989)), Paik et ai. (Nucl. Med.
Biol., 16, 475 - 481 (1989)), Weber et ai. (Bioconjugate :.5: Chem. l, 431 - 437 (1990)), ja Gustavson et ai. (US- patentti 5 112 953 (1992)) vasta-aineille, jotka on merkit-,·’ : ty 11:LIn- tai 99raTc-radioisotoopeilla kelatointlaineen kaut- 35 ta, joka on liittynyt esteri- tai disulfidiryhmän kautta.
3 1 13044 Tämän keksinnön kohteena ovat uudet bifunktionaaliset molekyylit, joissa on hydratsinoryhmiä ja reaktiivisia ryhmiä, joiden välissä on hydrofiilisiä ja/tai lohkaistavissa olevia osia, joita voidaan käyttää metalli-ionien, 5 kuten 99mTc:n yhdistämiseen makromolekyyleihin niin, että voidaan edullisesti muuttaa radioaktiivisesti merkittyjen biologisten molekyylien biologista jakautumista.
Keksinnön yhteenveto Tämän keksinnön kohteena ovat uudet bifunktionaali-10 set hydratsiiniyhdisteet, jotka sisältävät hydrofiilisiä (esim. happo) ja/tai lohkaistavissa olevia osia (esim. di-sulfidit ja esterit), kuten myös niiden konjugaatit. Seu-raavassa esitetyt in vivo tulokset osoittavat keksinnön mukaisten yhdisteiden 99mTc:llä merkittyjen konjugaattien mo-15 noklonaalisen vasta-aineen C46.3 F(ab) fragmentin kanssa kyvyn paikallistaa kasvain. Jotkut yhdisteistä ovat osoittaneet selvää kasvain/veriarvojen parannusta verrattuna samaan vasta-ainefragmenttiin, joka on merkitty suoralla menetelmällä (esim. Bremmer et ai.).
20 Tämän keksinnön kohteena ovat uudet yhdisteet, joilla on yleinen kaava " (f-j-T-Q-z :; ennhAn^ <i> I * » : jossa ♦ * ’ » 25 E on alkylideeniryhmä tai H2, missä tapauksessa i yhdiste on happoadditiosuolamuodossa, J valitaan ryhmästä -CO-NH-, -CO-O-, -CO-S- ja t · -NH-CO-, T on alkyleeniketju tai, mikäli J on -CO-NH-, T on 3 0 aminohappo-osan jäännös, ‘O1: Q on disulfidi, esteri tai tioesteri, ja ; Z on bromiasetaatti, maleimido, disulfidi tai N- i t · hydroksisukkinimidyyliesteri.
tl· 4 113044
Kun E on alkylideeni, se voi olla haarautunut tai haarautumaton alempi alkylideeni, jossa on korkeintaan neljä hiiliatomia.
Kuten edellä on spesifioitu, kun kaavan I yhdiste 5 on happoadditiosuolamuodossa, happo on sopivasti vetyhali-dihappo, typpihappo, trifluorietikkahappo, tetrafluoriboo-rihappo tai rikkihappo, mutta muita happoja voidaan myös käyttää edellyttäen, että ne eivät häiritse yhdisteiden käyttöä.
10 Keksinnön mukaisia yhdisteitä voi orgaaniseen kemi aan perehtynyt valmistaa. Molekyylit voidaan järjestää monella eri tavalla monista erilaisista lähtöaineista, jotka sinänsä ovat tunnettuja. Tavallisesti käytetään jotakin seuraavassa liitetyissä kaavioissa 1-4 esitetyistä tai 15 niiden selviä modifiointeja. On yleisesti hyväksyttävää että tämänkaltaisilla molekyyleillä tarkkoja lähtöaineita ja reaktio-olosuhteita voidaan vaihdella antamaan analogisia prosesseja analogisten tuotteiden valmistamiseksi, jotka kuuluvat kaavan I piiriin. Erityisemmin kaavan I spesifis-20 ten yhdisteiden valmistus on esitetty seuraavissa esimerkeissä .
' ' Keksinnön kohteena ovat myös uudet yhdisteet, joil-
la on yleinen kaava II
; ί Λ Q ®
* I f-CCNH-CCHjh-S—S
25 ΕΝΜΓ'Ντ j jossa E on kuten edellä on määritetty. Nämä yhdisteet voi- : : vat olla hyödyllisiä myös sidosmolekyyleinä.
. Keksinnön kohteena on lisäksi konjugaatti, joka on • i · " | 30 muodostunut makromolekyylin reaktiosta keksinnön mukaisen ♦ » I · · yhdisteen kanssa. Sopivasti makromolekyyli on proteiini, kuten immunoglobuliini, esimerkiksi monoklonaalinen vasta- • · aine tai sen fragmentti. Tämä voidaan saavuttaa menetelmällä, joka on analoginen menetelmän kanssa, jota Abrams et 5 113044 ai. ovat kuvanneet julkaisussa J. Nucl. Med. 31, 2022 (1990). Abrams et ai. ovat kuvanneet myös radioaktiivisen merkinnän menetelmää ja analogisella tavalla keksinnön kon-jugaattia voidaan käyttää aikaansaamaan kekseliäs ja hyö-5 dyllinen merkitty makromolekyyli, joka on metalliatomi, kuten 99mTc tai Re:n radioisotooppi, sitoutuneena keksinnön mukaiseen konjugaattiin.
Kuten seuraavassa on kuvattu yksityiskohtaisemmin kokeet 99mTc-rnerkityillä vasta-ainefragmenttikonjugaateilla 10 ovat osoittaneet parannuksia, verrattuna merkittyihin frag-mentteihin, joissa ei käytetä keksinnön mukaista sidosmole-kyyliä tai verrattuna merkittyihin fragmentteihin, joissa käytetään muita sidosmolekyylejä, yhdessä tai useammassa radioaktiivisuussuhteessa, joita on havaittu kasvaimessa 15 verrattuna vereen, kasvaimessa verrattuna elimiin tai poistumiseen verestä.
Keksintöä kuvataan nyt yksityiskohtaisemmin seuraa-vissa esimerkeissä, jotka on tarkoitettu kuvaaviksi eikä rajoittaviksi.
2 0 Koeosa 1H NMR spektrit taltioitiin 300 MHz:n Bruker AM 300 ‘ ’ spektrometrillä. Kaikki ΧΗ NMR spektritiedot taltioitiin ...V DMSO-d6:ssa jollei toisin ilmoiteta.
Nopea atomipommitus massaspektrianalyysi toteutet-: 25 tiin VG Analytical ZAB 2-SE korkean kentän massaspektromet- • rillä, joka toimii Bacc = 8 kV:ssa.
I ‘ s 1
Yhdisteiden nimet on annettu hakasuluissa eri esi- » merkeissä yhdenmukaisesti Chemical Abstracts:in palveluha-kemiston nimistön kanssa.
30 6-hydratsinonikotiinihappo, 6-(BOC-hydratsino) niko- • · tiinihappo ja sukkiini-imidyyli-6-(BOC-hydratsino) nikoti- ’··’ naatti valmistettiin Abrams et ai: in menetelmän mukaisesti • · 113044 6 kuvissa, joissa yhdistenumerot vastaavat esimerkkinumeroi-ta.
Esimerkki 1 6-(BOC-hydratsino)nikotiiniamido-y-t-butyyli-(L)-5 glutamiinihappo
Voimakkaan sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli γ-t-butyyli-(L)-glutamiinihappoa (173 g) seoksessa, jossa oli dioksaania (5 ml) ja kyllästettyä vesipitoista natrium-bikarbonaattiliuosta (5 ml), lisättiin sukkiini-imidyyli-6-10 (BOC-hydratsino)nikotinaattia (300 mg, 1,0 ekv.) yhtenä annoksena. Seosta sekoitettiin kolme tuntia ja kaadettiin sitten veteen (50 ml) . pH säädettiin arvoon 14 10 N
NaOHtlla ja sitten pH-arvoon 7 väkevällä HCl:llä ja uutettiin kerran etyyliasetaatilla (40 ml). Vesipitoisen faasin 15 pH alennettiin sitten arvoon 4 väkevällä HCl:llä, kyllästettiin natriumkloridilla ja uutettiin etyyliasetaatilla (3 x 4 ml). Yhdistetyt orgaaniset faasit kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin alennetussa paineessa antamaan tuote valkoisena jauheena (360 mg, 96 %) .
20 6-(BOC-hydratsino)nikotiiniamido-γ-t-butyyli-(L)- glutamiinihappo N-hydroksisukkiini-imidyyliesteri
Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 6-(BOC-,.,’Γ hydratsino) nikotiiniamido-Y-t-butyyli- (L) -glutamiinihappoa (360 g) ja N-hydroksisukkiini-imidiä (96 g) THFrssä (10 ml) : 25 argonin paineessa, lisättiin DCC (170 mg) 0 °C:ssa. Seosta * - ; sekoitettiin 0 °C:ssa kaksi tuntia, sitten huoneenlämpöti- . lassa yön yli, jona aikana saostui valkoinen kiinteä aine.
Kiinteä aine suodatettiin pois ja suodos haihdutettiin alennetussa paineessa antamaan tuote valkoisena vaahtona 30 (kvantitatiivinen).
> » » » ’K Yhdisteen 1 valmistus • · »,’·· 6-hydratsino-nikotiiniamido- (L) -glutamiinihappo-N- *:·*: hydroksisukkiini-imidyyliesteri hydrokloridi • ‘ . Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 6-(BOC- 35 hydratsino) nikotiiniamido-Y-t-butyyli- (L) -glutamiinihappo-N-hydroksisukkiini-imidyyliesteriä (150 mg) dioksaanissa (2 7 113044 ml) , lisättiin kyllästetty vetykloridiliuos dioksaanissa (2 ml). Yhden tunnin kuluttua muodostui sakka homogeenisesta liuoksesta, sekoittamista jatkettiin kolme lisätuntia, kiinteä aine suodatettiin sitten pois, pestiin eetterillä 5 ja kuivattiin antamaan tuote valkoisena/keltaisena kiteisenä aineena. 1H NMR (DMSO-de) δ 2,10 - 2,29 (m, 2H) , 2,39 (t, 2H, J = 6,9 Hz), 2,81 (s, 4H) , 4,88 (m, 1H) , 6,93 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 8,18 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 8,63 (m, 2H) , 9,04 (d, 1H, J = 7,6 Hz, D20 vaihtuva), 9,95 (br.s, 2H, D20 10 vaihtuva); massaspektri (FAB); m/e (suhteellinen intensiteetti) ; 380 (60, M+l), 283 (100), 201 (35), 185 (42), 136 (40) .
Esimerkki 2 6-(BOC-hydratsino)nikotiiniamido-γ-t-butyyli-(L)- 15 glutamyyli-y-bentsyyli-(L)-glutamiinihappo t-butyyliesteri
Liuos, jossa oli 6-(BOC-hydratsino)nikotiiniamido-γ-t-butyyli-(L)-glutamiinihappoa (200 mg), γ-bentsyyli-(L)-glutamiinihappo t-butyyliesteri hydrokloridia (151 mg, 1,0 ekv.) ja N-hydroksisukkiini-imidiä (53 mg, 1,0 ekv.) 20 DMF:ssä (10 ml), jäähdytettiin 0 °C:seen sekoittaen argonin paineessa. Tähän liuokseen lisättiin trietyyliamiinia (32 ml, 1,1 ekv.), mitä seurasi DCC (94 mg, 1,0 ekv.) yhte-nä annoksena ja seosta sekoitettiin 0 °C:ssa kolme tuntia ja sitten huoneenlämpötilassa neljä päivää, jona aikana sa- • · 2 5 ostui valkoinen kiinteä sakka. Liuos laimennettiin etyyli-
I t I
113044 8 6-(BOC-hydratsino)nikotiiniamino-γ-t-butyyli-(L)-glutamyyli-(L)-glutamiinihappo t-butyyliesteri
Suspensioon, jossa oli palladium/aktiivihiiltä (Aldrich, 10 %) etyyliasetaatissa (5 ml), lisättiin 6-(BOC-5 hydratsino)nikotiiniamido-γ-t-butyyli-(L)-glutamyyli-γ- bentsyyli-(L)-glutamiinihappo t-butyyliesteriä (300 mg) ja seosta sekoitettiin voimakkaasti vedyn ilmakehässä 6-8 tuntia (kunnes reaktio oli täydellinen TLC:n mukaan. Seos suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa 10 antamaan valkoinen vaahto. Tämä käytetiin suoraan seuraa-vassa vaiheessa ilman jatkopuhdistusta.
6-(BOC-hydratsino)nikotiiniamido-γ-t-butyyli-(L)-glutamyyli-y-N-hydroksisukkiini-imidyyli-(L)-glutamiinihappo t-butyyliesteri 15 Edeltävä tuote (100 mg) liuotettiin etyyliasetaat tiin (10 ml) N-hydroksisukkiini-imidin kanssa (18,4 mg, 1,0 ekv.) ja jäähdytettiin 0 °C:seen sekoittaen argonin paineessa. Tähän liuokseen lisättiin DCC (33 mg, 1,0 ekv.) yhtenä annoksena ja seosta sekoitettiin yön yli huoneenläm-20 pötilassa, jona aikana saostui valkoinen kiinteä aine. Kiinteä aine suodatettiin pois ja suodos haihdutettiin kui-* viin alennetussa paineessa antamaan tuote valkoisena vaah- tona.
"ί Yhdisteen 2 valmistus : 25 6-hydratsino-nikotiiniamido-(L)-glutamyyli-γ-Ν- • hydroksisukkiini-imidyyli-(L)-glutamiinihappo hydrokloridi # » * ·
Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 6- (BOC- • · · hydratsino)nikotiiniamido-7-t-butyyli-(L)-glutamiini-γ-Ν-hydroksisukkiini-imidyyli-(L)-glutamiinihappo t-butyyli- • · 30 esteriä (20 mg) dioksaanissa (1 ml), lisättiin kyllästettyä • · • · vetykloridiliuosta dioksaanissa (1 ml). Yhden tunnin kulutat · tua oli muodostunut sakka homogeenisesta liuoksesta, se- koittamista jatkettiin 24 lisätuntia ja seos haihdutettiin . sitten kuiviin alennetussa paineessa. Saatu valkoinen/- !,.* 35 keltainen kiinteä aine pestiin eetterillä (3x) dekantoimal- la, haihdutettiin sitten ja kuivattiin. 1H NMR (DMS0-d6/D20) 9 11ZC44 Ö 1,80 - 2,20 (m, 4Η), 2,31 (m, 2Η), 2,76 (m, 2Η), 2,80 (s, 4Η) , 4,24 (m, 1Η) , 4,42 (m, 1H) , 6,90 (d, 1H, J = 2,8 Hz), 8,17 (dd, 1H, J = 8,8, 2,4 Hz), 8,71 (s, 1H); massaspektri (FAB); m/e suhteellinen intensiteetti; 509 (18, M+l).
5 Esimerkki 3 6 -(2-propenyylihydratsoni)nikotiiniamido-3-propano-li
Liuokseen, jossa oli sukkiini-imidyyli-6-(2-prope-nyylihydratsoni)nikotinaattia (10 g, 34,4 mmol) DMF:ssä (80 10 ml), lisättiin liuos, jossa oli 3-aminopropanolia (3,0 ml, 37,9 mmol) DMF:ssä (20 ml), tipoittain ja seosta sekoitettiin 16 tuntia huoneenlämpötilassa ja väkevöitiin sitten alennetussa paineessa. Vaaleankeltainen öljyjäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (50 ml) ja pestiin minimimäärällä 15 vettä, kuivattiin (Na2S04) ja väkevöitiin alennetussa paineessa vaaleankeltaiseksi kiinteäksi aineeksi, joka toisto-kiteytettiin etyyliasetaatista antamaan haluttu tuote valkoisena kiinteänä aineena (5,6 g, 65 %).
N-hydroksisukkiini-imidyyli glutaryylikloridi 20 Benkovic, Lerner WO-88 09 380; vaihtoehtoinen yksi- reaktori menetelmä seuraa;
Liuokseen, jossa oli glutaarihappoanhydridiä (4,95 g) dikloorimetaanissa (30 ml), lisättiin N-hydroksisukkii-: ni-imidiä (5,0 g) yhtenä annoksena ja seosta sekoitettiin : 25 2,5 tuntia huoneenlämpötilassa kunnes reaktio oli täydelli- • nen (tarkastettiin 1H NMR: 11 ä) . Tähän seokseen lisättiin * » « ·
tipoittain putken avulla oksalyylikloridia (3,0 ekv. , 2 M
* liuos dikloorimetaanissa, Aldrich, 65 ml), jona aikana ··'*' esiintyi voimakasta kuohumista. Seosta sekoitettiin yön yli • · ’.,! 30 ja haihdutettiin sitten kuiviin alennetussa paineessa. Li- sää dikloorimetaania lisättiin ja seos haihdutettiin uudes- • » ·’,·· taan. Tämä menettely toistettiin useita kertoja kunnes *:"i jäännös haihduttamisen yhteydessä muuttui kiteiseksi. Kiinni . teä aine pestiin eetterillä kolme kertaa dekantoimalla ja i t · I.,* 35 kuivattiin antamaan tuote valkoisena kiintenä aineena.
• » • · » » * 113044 10
Yhdisteen 3 valmistus
Liuokseen, jossa oli 6-(2-propenyylihydratsoni)ni-kotiiniamido-3-propanolia (200 mg, 0,8 mmol) THF:ssä (15 ml) argonin paineessa 0 °C:ssa, lisättiin trietyyliamiinia 5 (123 μΐ, 1,1 ekv.), mitä seurasi N-hydroksi-sukkiini-imid- yyliglutaryylikloridi (200 mg, 0,8 mmol) yhtenä annoksena ja seoksen annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan sekoittaen yön yli. Haihduttaminen alennetussa paineessa antoi öljyn, joka liuotettiin uudestaan etyyliasetaattiin ja jähdytet-10 tiin jähauteessa antamaan valkoinen kiteinen trietyyliamii-nihydrokloridin sakka, joka suodatettiin pois. Suodos väke-vöitiin ja puhdistettiin pylväskromatografisesti käyttäen lyhyttä silikageelipylvästä ja 5-%:ista isopropanolia etyyliasetaatissa eluenttina. Haluttu tuote saatiin valkoisena 15 jauheena (80 mg, 22 %) . XH NMR (CDC13) δ 1,15 (t, 3H, J = 7,5 Hz), 1,96 pentetti, 2H, J = 6,2 Hz), 2,08 (pentet- ti, 2H, J = 7,1 Hz), 2,31 - 2,40 (dq, 2H, J = 7,5, 5,1 Hz), 2,51 (t, 2H, 7,1 Hz), 2,73 (t, 2H, J = 7,1 Hz), 2,84 (s, 4H) , 3,50 (q, 2H, J = 6,4 Hz), 4,24 (t, 2H, J = 6,1 Hz), 20 6,54 (br. t, 1H, D20 vaihtuva), 7,19 - 7,26 (m, 2H), 7,97 - 8,01 (dd, 1H, J = 8,8, 2,4 Hz), 8,50 (dd, 1H, J = 2,4, ' ‘ 0,7 Hz); massaspektri (FAB); m/e (suhteellinen intensiteet- ti); 462 (100, M+l) , 432 (10), 233 (42).
t
Esimerkki 4 : ‘,j 25 3-hydroksipropyyli- [6-(2-propenyylihydratsoni) ] niff; kotinaatti i · « ·
Seokseen, jossa oli 6-(2-propenyylihydratsoni) niko-tiinihapoa (3,08 g, 15,5 mmol) ja kaliumkarbonaattia (5,4 g, 39 mmol) DMF:ssä (20 ml), lisättiin 3-bromi-1-propanolia • » 30 (2,58 g, 18,6 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin argonin t · ·;* paineessa 70 °C:ssa 16 tuntia. Liuos jäähdytettiin ja väke- • · :’.j voitiin kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin *;*·; etyyliasetaattiin (100 ml) ja uutettiin vedellä (2 x 50 . ml) . Orgaaninen faasi kuivattiin (Na2S04) ja haihdutettiin • » · ),,* 35 alennetussa paineessa antamaan punertava kiinteä aine. Pyi- • · *···’ väskromatograf iaa (silikageeli; metyleenikloridi/metanoli 113044 11 (95/5)) käytettiin tuotteen eristämiseksi valkoisena kiinteänä aineena (2,3 g, 60 %).
Yhdisteen 4 valmistus [3-pyridiinikarboksyylihappo, 6-propylideenihydrat-5 sino)-3-[(bromiasetyyli)oksi]propyyliesteri]
Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 3-hydrok-sipropyyli-[6-(2-propenyylihydratsoni)]nikotinaattia (150 mg, 0,6 mmol) ja vedetöntä natriumkarbonaattia (127 mg, 1,20 mmol) kuivassa metyleenikloridissa (20 ml) argonin 10 paineessa, lisättiin bromiasetyylibromidia (112 mg, 0,60 mmol) tipoittain 0-5 °C:ssa. Reaktioseosta sekoitettiin 0-5 °C:ssa yksi tunti ja sitten huoneenlämpötilassa yksi tunti. Kiinteä aine suodatettiin pois ja suodos uutettiin vedellä (25 ml) laimentamisen jälkeen metyleenikloridilla 15 (50 ml) . Orgaaninen faasi kuivattiin (Na2S04) ja haihdutet tiin alennetussa paineessa antamaan raaka tuote kumimaisena kiinteänä aineena. Valmistavaa TLC:tä (silikageelilevy 1 000 μιτι, etyyliasetaatti/heksaaneja (2/1) ) käytettiin tuotteen eristämiseksi valkoisena kiinteänä aineena 20 (120 mg, 54 %) . XH NMR (CDC13) δ 1,16 (t, 3H, J = 7,5 Hz), 2,15 (m, 2H, J = 6,3 Hz), 2,36 (m, 2H, J = 7,6 Hz), 3,84 (S, 2H) , 4,34 (t, 2H, J = 6,2 Hz), 4,41 (t, 2H, J = 6,3 ...Y Hz), 7,31 (d, 1H, J = 10,4 Hz), 7,33 (t, 1H) , 8,18 (dd, 1H, J = 2,2, 9,1 Hz), 8,66 (d, J = 2,2 Hz); massaspektri (FAB) ; :*.j 25 m/e (suhteellinen intensiteetti); 374 (100, M+l) , 372 (100, • M+l) , 294 (25), 176 (52), 121 (46).
Esimerkki 5 « · · 5- (2-tiopyridyyli)-(L)-systeiini hydrokloridi
Tämä disulfidi valmistettiin PCS Chong: in ja R S
• · *..! 30 Hodgesin menetelmällä julkaisusta J. Biol. Chem. (1981), t · 256, 5064.
• · 6- (BOC-hydratsino)nikotiiniamido- [S- (2-tiopyridiyy- O’*: li) ]-(L)-systeiini ; Liuokseen, jossa oli S-(2-tiopyridyyli) - (L)-syste- !..* 35 iini hydrokloridia (369 mg, 1,37 mmol) ja kyllästettyä ve- * * sipitoista natriumbikarbonaattiliuosta (5 ml) ja vettä 113044 12 (3 ml), lisättiin liuos, jossa oli sukkiini-imidyyli-6-(BOC-hydratsino)pyridiini-5-karboksylaattia (500 mg, 1,42 mmol) dioksaanissa (5 ml) . Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 2,5 tuntia. Vettä (25 ml) lisättiin reak-5 tioseokseen ja vesipitoinen liuos pestiin etyyliasetaatilla reagoimattoman esterin poistamiseksi. Vesipitoinen faasi kyllästettiin natriumkloridilla ja tehtiin happamaksi pH-arvoon 3,7. Vesipitoinen liuos uutettiin etyyliasetaatilla (2 x 25 ml) . Yhdistetyt orgaaniset uutteet kuivattiin mag-10 nesiumsulfaatilla, suodatettiin ja väkevöitiin antamaan 611 mg tahmeaa valkoista kiinteää ainetta. Eetteriä lisättiin pulloon ja kiinteät aineet kaavittiin sivulta ja eristettiin suodattamalla antamaan haluttu tuote valkoisena kiinteänä aineena (550 mg, 82 %).
15 Yhdisteen 5 valmistus 6-hydratsino-nikotiiniamido-S-(2-tiopyridyyli)-(L)-systeiini hydrokloridi
Liuos, jossa oli kloorivetyä (kaasu) kuivassa dioksaanissa, valmistettiin kuplittamalla kloorivetyä kuivaan 20 dioksaaniin kohtalaisella nopeudella viisi minuuttia. Kloo-rivety/dioksaaniliuokseen (5 ml) lisättiin 6-(BOC-hyd-ratsino)nikotiiniamido-[S-(2-tiopyridiyyli)]-(L)-systeiiniä (50 mg) . Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa kaksi tuntia ja muodostui valkoinen sakka. Liuotin poistet-25 tiin alennetussa paineessa ja kuivattiin tämän jälkeen • · j suurtyhjössä antamaan 35 mg valkoista amorfista kiinteää ainetta. 1H NMR δ 3,30 (m, 2H) , 4,65 (m, 1H) , 6,93 (d, 1H,
III
J = 8,6 Hz), 7,25 (m, 1H), 7,75 (m, 1H), 8,15 (d, 1H, .. . J = 8,6 Hz) , 8,45 (d, 1H) , 8,70 (s, 1H) , 9,05 (d, 1H) ; mas- • * 30 saspektri (FAB) ; m/e; 366, 351, 257, 223, 202, 179.
• · **;·' Esimerkki 6 * · i ’.j S-(2-tio-5-nitropyridyyli) - (L)-systeiini hydroklo- ·:··: ridi . 4-nitropyridiini disulfidia (1,98 g, 6,34 mmol) li- • » · • t · 35 sättiin DMF: ään (10 ml) ja seosta kuumennettiin liukenemi- • » sen helpottamiseksi. Liuos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan 113044 13 ja liuos, jossa oli (L)-systeiini hydrokloridia (0,5 g, 3,17 mmol) DMF:ssä (6 ml) lisättiin. Reaktioseos muuttui kirkkaankeltaiseksi ja sitä sekoitettiin huoneenlämpötilassa 16 tuntia. Muodostui pieniä määriä sakkaa, joka poistet-5 tiin suodattamalla. Suodos väkevöitiin antamaan paksu kellanruskea öljy, jonka käsittely dikloorimetaanilla antoi keltaisen sakan. Sakka eristettiin suodattamalla. Kiinteät aineet liuotettiin metanoliin heikosti kuumentaen ja suodatettiin liukenemattomien kiinteiden aineiden poistamiseksi.
10 Suodosta käsiteltiin eetterillä saostumisen käynnistämiseksi. Keltainen kiinteä aine eristettiin suodattamalla antamaan 240 mg haluttua tuotetta. 120 mg lisää tuotetta saostui alkuperäisestä dikloorimetaanisuodoksesta; kokonaissaanto 360 mg (39 %) .
15 6-(BOC-hydratsino)nikotiiniamido-S-(2-tio-5-nitro- pyridyyli)-(L)-systeiini S- (2-tio-5-nitropyridyyli)-(L) -systeiini hydrokloridia (220 mg, 0,70 mmol) liuotettiin kyllästettyyn vesipitoiseen natriumbikarbonaattiin (5 ml) ja liuos, jossa oli 20 sukkiini-imidyyli-6-(BOC-hydratsino)nikotinaattia (246 g, 0,70 mmol) dioksaanissa (5 ml) lisättiin ja reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa kolme tuntia. Vettä (25 ml) lisättiin ja vesipitoinen liuos pestiin etyyliasetaa-tiliä reagoimattoman esterin poistamiseksi. Vesipitoinen : 25 faasi tehtiin happamaksi pH-arvoon 3,3 IN HCl:llä ja kyl- • lästettiin sitten natriumkloridilla. Hapan vesipitoinen » < I » ;'|‘j liuos uutettiin etyyliasetaatilla (2 x 35 ml) . Yhdistetyt orgaaniset uutteet kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suoda-tettiin ja väkevöitiin antamaan 145 mg keltaista kiinteää • · 30 ainetta, joka suspendoitiin eetteriin ja eristettiin suo- • · '1' dattamalla antamaan 35 mg haluttua tuotetta. Suodos väke- ·,’·· voitiin ja sitä käsiteltiin eetteri/heksaaneilla antamaan '!"! 95 mg lisää haluttua tuotetta; kokonaissaanto 125 mg (35 %) .
• · · • 1 · • · » • » • · · 113044 14
Yhdisteen 6 valmistus 6-hydratsino-nikotiiniamido-S-(2-tio-5-nitropyri-dyyli)-(L)-systeiini hydrokloridi
Liuos, jossa oli kloorivetyä (kaasu) kuivassa diok-5 saanissa, valmistettiin kuplittamalla kloorivetyä kuivaan dioksaaniin kohtalaisella nopeudella viisi minuuttia. Kloo-rivety/dioksaaniliuokseen (5 ml) lisättiin 6-(BOC-hyd-ratsino)nikotiiniamido-S-(2-tio-5-nitropyridyyli)-(L)-sys-teiiniä (50 mg). Reaktioseosta sekoitettiin huoneeniämpöti-10 lassa kaksi tuntia ja muodostui valkoinen sakka. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa ja kuivattiin tämän jälkeen suurtyhjössä antamaan 25 mg valkoista amorfista kiinteää ainetta. ΧΗ NMR δ 3,30 (m, 2H), 4,66 (m, 1H), 6,92 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 8,01 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 8,12 (d, 1H, 15 J = 8,9 Hz), 8,48 (dd, 1H, J - 8,9, 2,7 Hz), 8,64 (s, 1H), 9,03 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 9,2 (br.s, 1H) ; massaspektri (FAB) ; m/e; 411, 391, 363, 335, 307, 293, 277, 257, 201, 185, 171, 157.
Esimerkki 7 20 Yhdisteen 7 valmistus
Valmistettiin (L)-penisilliiniamiinista käyttäen t ’ · samoja koemenetelmiä kuin esimerkeissä 5 ja 6 kuvatut.
1H NMR (DMSO-d6) δ 1,41 (s, 3H) , 1,43 (s, 3H) , 4,75 (m, 1H) , 6,92 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 7,20 (m, 1H) , 7,79 (m, 2H) , 25 8,14 (dd, 1H, J = 9,8, 2,3 Hz), 8,39 (d, 1H, J = 4,0 Hz), i * ! 8,54 (s, 1H) ; massaspektri (FAB); m/e (suhteellinen inten- siteetti) ; 394 (100, M+l) .
• · i
Esimerkki 8 .. . 6-(BOC-hydratsino)nikotiiniamido-3-propanoli *ti| 30 Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli sukkiini- « t imidyyli-6-(BOC-hydratsino) nikotinaattia (350 mg) DMF: ssä : ·,: (4 ml), jäähdytettynä 0-5 °C:seen, lisättiin liuos, jossa ·;··· oli 3-amino-1-propanolia (90 mg, 1,2 ekv.) DMFrssä (2 ml).
, Seosta sekoitettiin 0-5 °C:ssa yksi tunti ja sitten huo-
» I I
• t · , „ jj(" 35 neenlampotilassa 16 tuntia. Reaktioseos väkevöitiin kuiviin • · ’*·' antamaan valkoinen kiinteä jäännös. Jäännös liuotettiin me- 15 113C44 tyyliasetaattiin (100 ml) ja uutettiin vedellä (2 x 25 ml). Orgaaninen faasi kuivattiin (Na2S04) ja haihdutettiin alennetussa paineessa antamaan tuote valkoisena jauheena (330 mg, 90 %).
5 Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 6-(BOC- hydratsino)nikotiiniamido-3-propanolia (296 mg, 1 ekv.) ja vedetöntä natriumkarbonaattia (212 mg, 2 ekv.) kuivassa me-tyleenikloridissa (15 ml) argonin paineessa, lisättiin bro-miasetyylibromidia (200 mg, 1,1 ekv.) tipoittain 0-5 10 °C:ssa. Seosta sekoitettiin 0-5 °C:ssa puoli tuntia ja sitten huoneenlämpötilassa kaksi tuntia. Kiinteä aine suodatettiin pois ja suodos uutettiin vedellä (25 ml) laimentamisen jälkeen metyleenikloridilla (50 ml). Orgaaninen faasi kuivattiin (Na2S04) ja haihdutettiin alennetussa pai-15 neessa antamaan raaka tuote vaaleankeltaisena kiinteänä aineena. Raaka tuote puhdistettiin pylväskromatografisesti silikageelillä käyttäen metyleenikloridi/metanolia (90/10) eluenttina antamaan puhdas bromiasetyloitu tuote valkoisena kiinteänä aineena (267 mg, 62 %).
20 Yhdisteen 8 valmistus [Etikkahappo, bromi-, 3-[[(6-hydratsino-3-pyridi-nyyli)karbonyyli]amino]propyyliesteri monohydrobromiini)] ,, Liuos, jossa oli bromivetyä etyyliasetaatissa, val- ; mistettiin antamalla vedettömän bromivedyn (kaasu) kulkea : : 25 etyyliasetaatin (10 ml) läpi kohtalaisella nopeudella viisi • i ; minuuttia.
Edeltävä bromiasetaatti (90 mg) liuotettiin etyyliasetaattiin (1 ml) ja HBr/etyyliasetaattia (2 ml) lisättiin . ja reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa. Viiden • t *..! 30 minuutin kuluttua liuos muuttui sameaksi ja muodostui sak ka. Sekoittamista jatkettiin 2,5 tuntia. Samea seos suoda-tettiin, pestiin eetterillä (3 x 10 ml) ja kuivattiin alen-·:**! netussa paineessa antamaan valkoinen kiinteä aine (65 mg, / . 71 %) . XH NMR (DMSO-de) δ 1,95 (t, 2H, J = 6,2 Hz), 3,35 35 (t, 2H, J = 6,2 Hz), 4,15 (s, 2H) , 4,20 (t, 2H, J = 6,2
Hz), 6,95 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 8,15 (dd, 1H, J = 2,4, • 113044 16 8,8 Hz), 8,65 (d, 1H, J = 2,4 Hz); massaspektri (FAB); m/e (suhteellinen intensiteetti); 333 (33, M+l) , 331 (33, M+l) , 136 (100).
Esimerkki 9 5 3-hydroksipropyyli-6-(BOC-hydratsino)nikotinaatti
Seokseen, jossa oli 6-(BOC-hydratsino)nikotiinihap-poa (3,0 g, 11,86 mmol) ja kaliumkarbonaattia (2,2 g, 15,9 mmol) DMF:ssä (20 ml), lisättiin 3-bromi-1-propanolia (2,0 g, 14,39 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin argonin painees-10 sa 70 °C:ssa 16 tuntia. Liuos jäähdytettiin ja väkevöitiin kuiviin alennetussa paineessa. Ruskea jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (100 ml) ja uutettiin vedellä (2 x 5 50 ml). Orgaaninen faasi kuivattiin (Na2S04) ja haihdutettiin alennetussa paineessa antamaan vaaleankeltainen öljy. Pyl-15 väskromatografiaa (silikageeli, etyyliasetaatti/heksaani (3/1)) käytettiin tuotteen eristämiseen valkoisena kiinteänä aineena (2,28 g, 60 %).
Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli edeltävää esteri-alkoholia (935 mg, 3,0 mmol) ja vedetöntä natrium-20 karbonaattia (636 mg, 6,0 mmol) kuivassa metyleenikloridis-sa (85 ml) argonin paineessa, lisättiin bromiasetyylibromi-'·’ dia (290 μΐ, 3,6 mmol) tipoittain 0-5 °C:ssa. Reaktio- j* seosta sekoitettiin 0-5 °C:ssa 30 minuuttia ja sitten : huoneenlämpötilassa yksi tunti. Kiinteä aine suodatettiin 25 pois ja suodos uutettiin vedellä (25 ml) laimentamisen jäi- » : keen metyleenikloridilla (50 ml). Orgaaninen faasi kuivat- t > * tiin Na2S04) ja haihdutettiin alennetussa paineessa anta- • * * maan raaka tuote ruskeankeltaisena tahmeana kiinteänä ai- .. . neena. Pyiväskromatografiaa (silikageeli; etyyliasetaat- • » · 30 ti/heksaani (2/1) ) käytettiin puhtaan tuotteen eristämiseen valkoisena kiinteänä aineena (0,36 g, 28 %) .
: Yhdisteen 9 valmistus • · ·;·*· Liuos, jossa oli bromi vetyä dioksaanissa, valmis- . tettiin antamalla vedettömän bromivedyn (kaasu) dioksaanis- ’,,’ 35 sa (10 ml) kulkea liuoksen läpi kohtalaisella nopeudella viisi minuuttia. Edeltävä asetaatti (75 mg) liuotettiin 113044 17 dioksaaniin (2 ml) ja HBr/dioksaania (2 ml) lisättiin ja reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa kaksi minuuttia. Samea seos suodatettiin, pestiin eetterillä (3 x 10 ml) ja kuivattiin alennetussa paineessa antamaan valkoi-5 nen kiinteä aine (40 mg, 56 %) . 1H NMR (D20) δ 2,18 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 4,01 (s, 2H) , 4,39 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 4,44 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 6,89 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 8,13 (dd, 1H, J = 2,0, 9,2 Hz), 8,62 (d, 1H, J = 2,0 Hz); massaspekt- ri (FAB); m/e (suhteellinen intensiteetti); 334 (100, M+l), 10 332 (100, M+l), 212 (76), 194 (38), 154 (48), 136 (45).
Esimerkki 10 3-hydroksipropyyli[(6-BOC-hydratsino)nikotiiniami-do]-γ-t-butyyli-(L)-glutamaatti
Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 6-(BOC-15 hydratsino)nikotiiniamido-Y-t-butyyli-(L)-glutamiinihappoa (1,0 g, 2,29 mmol) ja kaliumkarbonaattia (348 mg, 1,1 ekv.) DMFrssä (5 ml), lisättiin 3-bromipropanolia (227 μΐ, 1,1 ekv.) ja seosta kuumennettiin 55 - 60 °C:ssa yön yli. Liuos haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa ja jäännös ja-20 ettiin etyyliasetaatin ja kyllästetyn vesipitoisen natriumbikarbonaatin kesken. Orgaaninen faasi erotettiin ja pestiin huolellisesti vedellä, kuivattiin (Na2S04) ja haihdu-tettiin alennetussa paineessa antamaan vaahtomainen valkoi-: nen kiinteä aine. Haluttu tuote puhdistettiin pylväskroma- : ; 25 tografisesti silikageelillä käyttäen 90 %:ista etyyliase- • ; taattia heksaanissa eluenttina antaman valkoinen kiinteä .* aine (900 mg, 78 %) .
Edeltävä yhdiste (200 mg, 0,40 mmol) ja vedetön .. . ( natriumkarbonaatti (84 mg, 2,0 ekv.) liuotettiin dikloori- ! 3 0 metaaniin (1 ml) ja jäähdytettiin 0 °C:seen argonin pai- neessa. Bromiasetyylibromidia (40 μΐ, 1,2 ekv.) lisättiin 1 * !t'.| tipoittaan ja seoksen annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan ;·* yön yli. Etyyliasetaattia (20 ml) lisättiin ja liuos pes- / . tiin kyllästetyllä vesipitoisella natriumbikarbonaatilla, 1.' 35 kuivattiin (Na2S04) ja haihdutettiin alennetussa paineessa.
Haluttu tuote puhdistettiin pylväskromatografisesti silika- 113044 18 geelillä käyttäen 80-%:ista etyyliasetaattia heksaanissa eluenttina antamaan väritön öljy (40 mg, 16 %).
Yhdisteen 10 valmistus
Edellä kuvattu bromiasetaatti (40 mg, 0,06 mmol) 5 liuotettiin vedettömään dioksaaniin ja jäähdytettiin jää-hauteessa. Bromivedyn (kaasu) annettiin kulkea liuoksen läpi n. 1 minuutti (tai kunnes kyllästetty). Liuoksen annettiin seistä 0 °C:ssa kolme minuuttia ja sitten lisättiin eetteriä tuotteen saostamiseksi. Valkoisen kiinteän sakan 10 annettiin laskeutua pullon pohjalle ja kirkas vetybromidi-liuos dekantoitiin pois pasteur pipetillä. Sitten kiinteä aine pestiin dekantoimalla eetterillä kymmenen kertaa ja jäljelle jääneet eetterimäärät poistettiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja kuivattiin tyhjössä yön yli. Tuote 15 oli valkoinen kiinteä aine (25 mg, 77 %) . ^ NMR (D2O) δ 2,07 (pentetti, 2H, J = 6,2 Hz), 2,09 - 2,31 (m, 2H), 2,38 (t, 2H, J = 69 Hz), 4,02 (s, 2H) , 4,25 (t, 2H, J = 6,1 Hz), 4,31 (t, 2H, J = 5,9 Hz), 4,53 (m, 1H), 6,96 (d, 1H, J = 9,3 Hz), 8,06 - 8,09 (dd, 1H, J = 9,3, 2,1 Hz), 8,41 20 (d, 1H, J = 2,0 Hz); massaspektri (FAB) ; m/e (suhteellinen intensiteetti); 463 (100, M+l) , 461 (100, M+l) , 383 (22), 339 (10), 237 (10).
: Esimerkki 11 • 2-karboksietyyli-2-pyridyylidisulfidi • : 25 Valmistettiin Carlesson et ai:in menetelmän mukai- * • sesti julkaisusta Biochem. J. (1978), 173, 723 - 737.
Yhdisteen 11 valmistus
Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 6-(2-propenyylihydratsoni) nikotiiniamido-3-propanolia (190 mg, « · [.·! 30 0,8 mmol) ja 2-karboksietyyli-2-pyridyylidisulfidia (163 '1' mg, 1,0 ekv.) THF: ssä (10 ml) 0 °C:ssa, lisättiin disyklo- • · ·.’·· heksyyli-karbodi-imidiä (157 mg, 1,0 ekv.) ja seosta sekoi- tettiin 0-5 °C:ssa 72 tuntia, jona aikana saostui valkoi- ,·, : nen kiinteä aine. Valkoinen kiinteä aine suodatettiin pois 35 ja suodos haihdutettiin alennetussa paineessa. Jäännös liu- » » otettiin etyyliasetaattiin ja jäähdytettiin, mikä antoi li- 113044 19 sää saostunutta disykloheksyyliureaa ("DCU"). Tämä menetelmä toistettiin vielä kerran kunnes kaikki urea oli poistettu. Haluttu tuote puhdistettiin pylväskromatografisesti si-likageelillä käyttäen 5-%:ista metanolia dikloorimetaanissa 5 eluenttina. Toistokiteyttäminen etyyliasetaatti/eetteristä antoi valkoisen kiinteän aineen (85 mg, 25 %). 1H NMR (CDC13) δ 1,15 (t, 3H, J = 7,5 Hz), 1,95 (pentetti, 2H, J = 6,0 Hz), 2,36 (dq, 2H, J = 5,0, 7,6 Hz), 2,80 (t, 2H, J = 7,0 Hz), 3,07 (t, 2H, J = 7,0 Hz), 3,50 (m, 2H) , 4,04 10 (t, 2H, J = 6,0 Hz), 6,51 (leveä tripletti, 1H, D20 vaihtuva), 7,07 - 7,12 (m, 1H), 7,17 - 7,21 (m, 2H), 7,60 - 7,72 (m, 2H), 7,95 - 7,99 (dd, 1H, J = 8,8, 2,4 Hz), 8,22 (leveä s, 1H, D20 vaihtuva), 8,42 - 8,45 (m, 1H) , 8,55 (d, 1H, J = 2,4 Hz); massaspektri (FAB); m/e suhteellinen intensi-15 teetti; 448 (100, M+l), 176 (45).
Esimerkki 12 6 -(BOC-hydratsino)nikotiiniamido-2-etaanitioli
Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli sukkiini-imidyyli-6-(BOC-hydratsino)nikotinaattia (2,0 g, 5,7 mmol) 20 ja trietyyliamiinia (0,8 ml, 5,7 mmol) DMFrssä (20 ml), lisättiin 2-aminoetaanitioli hydrokloridia (0,65 g, 5,7 ' mmol). Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 16 , tuntia. Liuos väkevöitiin kuiviin alennetussa paineessa.
: Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin (100 ml) ja uutettiin : · 25 vedellä (50 ml) . Orgaaninen faasi kuivattiin (Na2S04) ja • haihdutettiin alennetussa paineessa antamaan tuote valkoi- .* ·. sena jauheena (1,19 g, 67 %) .
Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 6-(BOC- j. hydratsino) nikotiiniamido-2-etaanitiolia (200 mg) ja vede- \ ! 30 töntä natriumkarbonaattia (2 ekv.) kuivassa metyleeniklori- dissa (20 ml) argonin paineessa, lisättiin bromiasetyyli-ί/·| bromidia (1,2 ekv.) tipoittain 0-5 °C:ssa. Reaktioseosta ·; ! sekoitettiin 0-5 °C:ssa 30 minuuttia ja sitten huoneen- . lämpötilassa yksi tunti. Kiinteät aineet suodatettiin pois 35 ja suodos uutettiin vedellä (25 ml) laimentamisen jälkeen metyleenikloridilla (50 ml). Orgaaninen faasi kuivattiin 113044 20 (Na2S04) ja haihdutettiin alennetussa paineessa antamaan raaka tuote vaaleanruskeana kiinteänä aineena. Pylväskroma-tografiaa (silikageeli; etyyliasetaatti/heksaani (2/1)) käytettiin puhtaan tuotteen eristämiseen vaaleankeltaisena 5 kiinteänä aineena (110 mg, 41 %).
Yhdisteen 12 valmistus [Etikkahappo, bromi, 2-[[(6-hydratsino-3-pyridinyy-li)karbonyyli]amino]etyylitioesteri, monohydrobromidi]
Liuos, jossa oli bromivetyä etyyliasetaatissa, valio mistettiin antamalla vedettömän bromivedyn kulkea etyyliasetaatin (10 ml) läpi kohtalaisella nopeudella viisi minuuttia. Edeltävä BOC-hydratsinopyridiinijohdannainen (22 mg) liuotettiin etyyliasetaattiin (1 ml) ja HBr/etyyliase-taattia (2 ml) lisättiin ja reaktioseosta sekoitettiin huo-15 neenlämpötilassa yksi tunti. Samea reaktioseos suodatettiin antamaan 12 mg valkoista kiinteää ainetta (57 %) . 1H NMR (DMSO-dg) δ 3,15 (t, 2H) , 3,45 (m, 2H) , 4,45 (s, 2H) , 6,95 (d, 1H), 8,15 (d, H), 8,65 (s, 1H); massaspektri (FAB); m/e (suhteellinen intensiteetti); 335 (42, M+l), 333 (42, M+l) , 20 185 (100) .
Esimerkki 13 ' " S-(2-pyridyyli)-S1 -(2-amino)etyylidisulfidi hydro- ...;* kloridi 't : Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli Aldrich- : 25 tiolia (8,8 g, 0,04 mol) ja jääetikkahappoa (1,6 ml) me- • ; _· tanolissa (40 ml), lisättiin tipoittain 2-aminoetaanitioli hydrokloridia (2,3 g, 0,02 mol) metanolissa (25 ml). Kirkkaankeltaista liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 16 .. . tuntia. Liuos väkevöitiin kuiviin alennetussa paineessa.
30 Jäännös sekoitettiin metyleenikloridin (100 ml) kanssa ja ·’ suodatettiin antamaan tuote valkoisena jauheena (3,6 g, 80 %) .
* · *; * 6-(2-propenyylihydratsoni)-N-(21-pyridyyliditio- . . etyyli)nikotiiniamidi (kaavan II yhdiste) 11 ) · 35 Liuokseen, jossa oli sukkiini-imidyyli-6-(2-prope- nyylihydratsoni)nikotinaattia (590 mg, 2,0 mmol) ja tri- 113044 21 etyyliamiinia (0,6 ml) DMF:ssä (20 ml), lisättiin 2-pyri-dyyliditioaminoetaani hydrokloridia (444 mg, 2 mmol). Reak-tioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 16 tuntia. Liuos väkevöitiin kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös liuotet-5 tiin etyyliasetaattiin (100 ml) ja uutettiin vedellä (2 x 50 ml) . Orgaaninen faasi kuivattiin (Na2S04) ja haihdutettiin alennetussa paineessa antamaan tuote valkoisena jauheena (650 mg, 90 %) . XH NMR (DMSO-d6) δ 1,02 (t, 3H) , 2,25 (q, 2H) , 3,05 (t, 2H) , 3,55 (m, 2H) , 7,05 (d, 1H) , 10 7,25 (m, 1H) , 7,45 (t, 1H) , 7,85 (m, 2H) , 7,95 (d, 1H) , 7,55 (m, 3H).
Liuokseen, jossa oli edeltävää disulfidia (361 mg, 1,00 mmol) ja jääetikkahappoa (20 μΐ) DMF:ssä (10 ml), lisättiin tipoittain merkaptopropionihappoa (106 mg, 1,0 15 mmol) DMF:ssä (2 ml). Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 16 tuntia. Liuos väkevöitiin kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös trituroitiin metyleenikloridissa (10 ml) ja suodatettiin antamaan tuote valkoisena jauheena (208 mg, 58 %).
20 Yhdisteen 13 valmistus
Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli edeltävää happoa (108 mg, 0,30 mmol) ja N-hydroksisukkiini-imidiä (35 mg; 0,30 mmol) DMF: ssä (5 ml), lisättiin DCC (63 mg, 0,31 mmol) 0 °C:ssa. Seosta sekoitettiin 4 °C:ssa 16 tun-; 25 tia. Valkoinen kiinteä aine (DCU) suodatettiin pois ja suo- • i dos väkevöitiin kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös tri- . turoitiin etyyliasetaatissa (25 ml) ja suodatettiin. Suodos väkevöitiin alennetussa paineessa antamaan yhdiste 13 val-koisena jauheena (70 mg, 51 %) . 1H NMR (CDC13) δ 1,15 (t, V;’ 30 3H, J = 7,5 Hz), 2,35 (m, 2H, J = 7,5 Hz), 2,91 (s, 4H) , i « ’’j’ 2,94 (t, 2H, J = 6,7 Hz), 3,03 (m, 2H) , 3,11 (m, 2H) , 3,75 (q, 2H, J = 6,4 Hz), 7,17 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,21 (t, 1H, ·:··· J = 4,7 Hz), 7,98 (dd, 1H, J = 2,4, 8,8 Hz), 8,53 (d, 1H) ; . massaspektri (FAB); m/e (suhteellinen intensiteetti); 454 35 (100, M+l) , 253 (32), 225 (82), 176 (61), 121 (46).
113044 22
Esimerkki 14
Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 6-(BOC-hydratsino)nikotiiniamido-t-butyyli-(L)-glutamiinihappoa (1 g, 2,3 mmol), trietyyliamiinia (0,32 ml, 2,3 mmol) ja S-(2-5 pyridyyli)-S'-(2-aminoetyyli)disulfidia (507 mg, 2,3 mmol) DMF:ssä (10 ml), lisättiin DCC (472 mg, 2,3 mmol) 0 °C:ssa. Seosta sekoitettiin 4 °C:ssa 16 tuntia. Saostunut kiinteä aine (DCU) suodatettiin ja liuos väkevöitiin kuiviin alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin 10 (100 ml) ja uutettiin kyllästetyllä natriumbikarbonaatilla (50 ml), suolaliuoksella (50 ml) ja vedellä (50 ml). Orgaaninen faasi kuivattiin (Na2S04) ja haihdutettiin alennetussa paineessa antamaan tuote valkoisena kiinteänä aineena (1,28 g, 92 %).
15 Liuokseen, jossa oli edeltävää BOC-hydratsinopyri- dyyli-glutamyyli disulfidia (606 mg, 1,0 mmol) ja jääetik-kahappoa (100 μΐ) etanolissa (25 ml) , lisättiin tipoittain 3-merkaptopropionihappoa (106 mg, 1,0 mmol) etanolissa (10 ml). Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 16 tun-20 tia. Liuos väkevöitiin kuiviin alennetussa paineessa keltaiseksi kiinteäksi aineeksi. Pylväskromatografiaa (silika- * * geeli; metyleenikloridi/metanoli (3/2) ja etikkahappoa (4 % eluaatista) ) käytettiin tuotteen eristämiseksi valkoisena kiinteänä aineena (302 mg, 50 %) .
* I
25 Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli BOC-hyd- • ratsinopyridiinidisulfidihappoa (170 mg, 0,28 mmol) ja N- * * ♦ · k:*. hydroksisukkiini-imidiä (33 mg, 0,29 mmol) DMF:ssä (5 ml), lisättiin DCC (58,4 mg, 0,28 mmol) 0 °C:ssa. Reaktioseosta ·· · sekoitettiin 4 °C:ssa 16 tuntia. Valkoinen kiinteä aine • · · • · 30 (DCU) suodatettiin pois ja suodos väkevöitiin kuiviin alen-netussa paineessa. Jännös trituroitiin etyyliasetaatissa • · (25 ml) ja suodatettiin. Suodos väkevöitiin alennetussa •: * *: paineessa antamaan tuote valkoisena jauheena (75 mg, 38 %).
·’ · Yhdisteen 14 valmistus • # · * < » 35 Liuos, jossa oli bromivetyä etyyliasetaatissa, vai- • · mistettiin antamalla vedettömän bromivedyn (kaasu) kulkea 113044 23 etyyliasetaatin (10 ml) läpi kohtalaisella nopeudella viisi minuuttia. 6-BOC-hydratsinoglutamyyli-disulfidi (30 mg) liuotettiin etyyliasetaattiin (1 ml) ja HBr/etyyliase-taattia (1 ml) lisättiin ja reaktioseosta sekoitettiin huo-5 neenlämpötilassa 20 minuuttia. Liete suodatettiin ja kuivattiin antamaan valkoinen kiinteä aine (21 mg, 78 %). 1H NMR (CD3OD) δ 2,15 (m, 2H) , 2,45 (t, 2H) , 2,83 (s, 4H) , 2,88 (m, 2H) , 3,05 (m, 4H) , 3,45 (m, 2H) , 4,45 (m, 1H) , 6,95 (d, 1H) , 8,25 (d, 1H) , 8,45 (s, 1H) ; massaspektri 10 (FAB); m/e (suhteellinen intensiteetti); 543 (22, M+l), 322 (49), 269 (100), 207 (85).
Biologisen koevertailun mahdollistamiseksi valmistettiin seuraavat yhdisteet: 6-(BOC-hydratsino)-3-(N-bromiasetyyli)aminopyridii- 15 ni
Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 3-amino-6-(BOC-hydratsino)pyridiiniä (1,2 g, 5,4 mmol) ja vedetöntä natriumkarbonaattia (682 mg, 6,4 mmol) kuivassa asetonit-rillissä (25 ml) argonin paineessa, lisättiin bromiasetyy-20 likloridia (1,1 g, 6,4 mmol) tipoittain 0-5 °C:ssa. Seosta sekoitettiin 0-5 °C:ssa puoli tuntia ja sitten huo-neenlämpötilassa kolme tuntia.
Reaktioseos väkevöitiin alennetussa paineessa ja ·:·*: jäännös jaettiin veden (50 ml) ja etyyliasetaatin (150 ml) 25 kesken. Orgaaninen faasi erotettiin, kuivattiin (Na2S04) ja • · : ,·. väkevöitiin alennetussa paineessa 25 - 30 ml:ksi. Valkoinen kiinteä aine (1,0 g, 54,3 %) , joka saostui, suodatettiin • * · pois ja kuivattiin. 1H NMR (DMSO-d6) : δ 1,39 (s, 9H) ; 3,99 (S, 2H) ; 6,45 (d, 1H, J = 8,8 Hz); 7,65 (dd, 1H, J=2,4, I ! » 30 8,8 Hz); 8,15 (d, 1H, J = 2,4 Hz).
1 t 'y' Analyysi: laskettu Ci2Hi7N4Br03: lie: C - 41,75; H - 4,96; N -16,23; Br - 23,15. Havaittu: C - 41,87; H - 5,00; N -16,27; Br - 23,27.
» * · > » » 1 · ‘ · 11304^ 24 3-(N-bromiasetyyli)amino-6-hydratsinopyridiini hyd-robromidi (yhdiste 15)
Liuos, jossa oli bromivetyä dioksaanissa, valmistettiin kuplittamalla vedetöntä bromivetyä (kaasu) dioksaa-5 nin (10 ml) läpi kohtalaisella nopeudella viisi minuuttia.
6- (BOC-hydratsino)-3-(N-bromiasetyyli)aminopyridiini (60 mg) liuotettiin dioksaaniin (2 ml) ja HBr/dioksaania (2 ml) lisättiin ja reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 30 minuuttia, jona aikana muodostui sakka. Reaktioseosta 10 sekoitettiin huoneenlämpötilassa kaikkiaan neljä tuntia, suodatettiin sitten, pestiin eetterillä (3 x 25 ml) ja kuivattiin alennetussa paineessa antamaan valkoinen kiinteä aine (50 mg, 87,7 %) . XH NMR (D20) : δ 4,08 (s, 2H) ; 7,02 (d, 1H, J = 8,8 Hz); 7,85 (dd, 1H, J = 2,4, 8,8 Hz); 8,25 15 (d, 1H, J = 2,4 Hz).
Seuraten EP-patenttijulkaisussa nro 0 384 769 A2 kuvattuja valmistusmenetelmiä 3-amino-6-(BOC-hydratsino)-pyridiiniä käytettiin 3-maleimido-6-hydratsinopyridiini hydrokloridin (yhdiste 16) valmistamiseksi.
20 Valmistettiin lisää keksinnön mukaisia uusia yhdis teitä :
Mi»
Esimerkki 17 3- (bentsyylioksiasetyyliamido) -1-propanoli
Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 3-amino-l-;/.j 25 propanolia (3,0 g, 68,83 mmol), natriumbikarbonaattia (14,5 i g, 172,6 mmol), vettä (100 ml) ja dioksaania (52 ml), li- » 1 1 · sättiin liuos, jossa oli bentsyylioksiasetyylikloridia * (19,5 g, 106,0 mmol) dioksaanissa (36 ml) tipoittain 0 -5 °C:ssa neljän tunnin aikana. Seos uutettiin etyyliasetaa- » » ,··' 30 tiliä (3 x 200 ml) ja yhdistetyt orgaaniset faasit pestiin * · ’!1 suolaliuoksella, kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin alen- * · netussa paineessa antamaan tuote kirkkaana öljynä (11,1 g, "1·: 72 %) .
» I | * » 113044 25 3-(bentsyylioksiasetyyliamido)-1-propyyli-(6-BOC-hydratsino)nikotinaatti
Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 6-(BOC-hydratsino)nikotiinihappoa (5,0 g, 19,74 mmol), DMF (25 5 ml), 3-bentsyylioksiasetyyliamido)-1-propanolia (4,4 g, 19,74 mmol) ja 4 -(dimetyyliamino)pyridiiniä (2,48 g, 19,74 mmol), lisättiin liuos, jossa oli DCC (4,48 g, 21,71 mmol) DMF:ssä (10 ml) tipoittain 0 °C:ssa ja seosta sekoitettiin 16 tuntia. Liuos laimennettiin etyyliasetaatilla (250 ml), 10 jäähdytettiin ja kiinteä aine suodatettiin pois. Suodos haihdutettiin kuiviin alennetussa paineessa ja öljymäinen jäännös jaettiin etyyliasetaatin (200 ml) ja kylästetyn natriumbikarbonaattiliuoksen (30 ml) kesken. Orgaaninen kerros erotettiin, kuivattiin (MgSO,i) ja haihdutettiin 15 alennetussa paineessa. Tuote puhdistettiin pylväskromato-grafisesti (silikageeli:etyyliasetaatti) antamaan valkoinen kiinteä aine (5,1 g, 56 %).
3-(hydroksiasetyyliamido)-l-propyyli-6-(BOC-hydrat-sino)nikotinaatti 20 Suspensioon, jossa oli palladium/aktiivihiiltä (Ad- rich 10 %, 1,0 g) metanolissa (16 ml), lisättiin 3-(bents- • yylioksiasetyyliamido)-1-propyyli-(6-BOC-hydratsino)nikoti- » naattia (1,6 g, 3,48 mmol) ja ammoniumformiaattia (1,1 g, 17,44 mmol). Seosta sekoitettiin voimakkaasti argonin pai-it'.j 25 neessa 16 tuntia. Suspensio suodatettiin piidioksidin läpi ί ja haihdutettiin alennetussa paineessa antamaan valkoinen vaahto (1,0 g, 78 %) .
3-(metaanisulfonyylioksiasetyyliamido)-1-propyyli-(6-BOC-hydratsino) nikotinaatti · [..! 30 Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 3-(hydrok- • · siasetyyliamido)-1-propyyli-(6-BOC-hydratsino)nikotinaattia » · ·,*·· (1,0 g, 2,17 mmol) ja trietyyliamiinia (0,41 ml, 2,98 mmol) ’ϊ'*: dikloorimetaanissa (20 ml) , lisättiin liuos, jossa oli me- ,·, ; taanisulfonyylikloridia (0,23 ml, 2,98 mmol) dikloorime- * · · 35 taanissa (5 ml) tipoittain 0 °C:ssa ja reaktioseoksen an- • · nettiin sekoittua 0 °C:ssa kaksi lisätuntia ennen haihdut- 113044 26 tamista alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin ja pestiin vedellä, kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin alennetussa paineessa antamaan valkoinen vaahto (1,2 g, 98 %) .
5 3-(bromiasetyyliamido)-1-propyyli-(6-BOC-hydratsi- no)nikotinaatti
Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 3-(metaa-nisulfonyylioksiasetyyliamido)-1-propyyli-(6-BOC-hydratsi-no)nikotinaattia (1,2 g, 2,68 mmol) asetonissa (20 ml), li-10 sättiin liuos, jossa oli litiumbromidia (1,7 g, 26,9 mmol) asetonissa (30 ml), tipoittain ja reaktioseosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen 1,5 tuntia. Seoksen annettiin jäähtyä huoneenlämpötilaan, minkä jälkeen se haihdutettiin alennetussa paineessa ja jäännös liuotettiin etyyliasetaat-15 tiin (100 ml) ja pestiin vedellä (3 x 100 ml) . Orgaaninen kerros erotettiin, kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin alennetussa paineessa ja tuote puhdistettiin pylväskromato-grafisesti (silikageeli:etyyliasetaatti) antamaan valkoinen vaahto (0,8 g, 69 %) . 1H NMR (CDC13) δ 1,47 (s, 9H) , 2,00 20 (pentetti, 2H, J = 6,2 Hz), 3,43 (q, 2H, J = 6,3 Hz), 3,89 (s, 2H) , 4,39 (t, 2H, J = 5,9 Hz), 6,73 (d, 1H, ! J = 8,8 Hz), 8,15 (dd, 1H, J = 2,2 Hz, 8,7 Hz), 8,82 (d, H, J = 2,2 Hz) .
* 3-(bromiasetyyliamido)-1-propyyli-6-hydratsino)ni- ! ’ : 2 5 kotinaatti monohydrobromidi • : ; Sekoituksenalaiseen liuokseen, jossa oli 3-(bromi- asetyyliamido) -1-propyyli- (6-BOC-hydratsino) nikotinaattia (50 mg) ja etikkahappoa (1 ml) argonin paineessa, lisättiin vetybromidia (Aldrich, 30 paino-%:inen liuos etikkahapossa, 30 1 ml) . Reaktioseosta sekoitettiin kolme minuuttia ja eette- • i riä (20 ml) lisättiin välittömästi tuotteen saostamiseksi.
* * ·,’·· Yhden minuutin sekoittamisen jälkeen eetteri dekantoitiin pois. Tuote pestiin monta kertaa eetterillä (6 - 10 kertaa) ,*! ; ja loppumäärä poistettiin haihduttamalla alennetussa pai- • i · 35 neessa antamaan valkoinen kiinteä aine (18 mg, 37 %) . XH NMR (DMSO-dg) δ 1,86 (pentetti, 2H, J = 6,5 Hz), 3,22 113044 27 (q, 2H, J = 6,5 Hz), 3,83 (s, 2H) , 4,25 (t, 2H, J = 6,2 Hz), 6,91 (d, 1H, J = 8,8 Hz, 8,14 (dd, 1H, J = 2,2 Hz, 8,8 Hz), 8,40 (br.t, 1H, D20 haihtuva), 8,69 (d, 1H, J = 8,8 Hz); massaspektri (FAB); m/e (suhteellinen in- 5 tensiteetti); 333 (100, M+l), 331 (100, M+l), 253 (15), 194 (43) , 178 (20) .
Esimerkki 18 Käyttäen esimerkissä 1 kuvattua menetelmää α-t-butyyli-(L)-glutamiinihappo antoi 6-(BOC-hydratsino)niko-10 tiiniamidi-a-t-butyyli-(L)-glutamiinihapon. Käyttäen esi merkin 10 menetelmää 6-(BOC-hydratsino)nikotiiniamidi-a-t-butyyli-(L)-glutamiinihappo muutettiin γ-bromiasetaatti-j ohdannaisglutamiinihapposidosmolekyyliksi.
Tuotteen lopullinen suojauksenpoisto 15 Sekoituksenalaiseen seokseen, jossa oli bromiase- taattia (100 mg, 0,162 mmol) etikkahapossa (2 ml), lisättiin vetybromidia (Aldrich, 30 paino-%:inen liuos etikkahapossa, 1,0 ml). Reaktioseosta sekoitettiin kolme minuuttia ja dietyylieetteriä (20 ml) lisättiin välittömästi tuotteen 20 saostamiseksi. Valkoisen kiinteän aineen annettiin laskeu tua pullon pohjalle ja kirkas ylin kerros vetybromidiliuos-ta dekantoitiin pois pasteur pipetillä. Tämä menetelmä toistettiin kymmenen kertaa eetterillä ja jäljelle jääneet , Ί määrät eetteriä poistettiin haihduttamalla alennetussa pai- ; ,· 25 neessa ja kuivaten tyhjössä yön yli. Tuote oli valkoinen • *. kiinteä aine (50 mg, 57 %) . 1H NMR (MeOH-d4) δ 2,00 (pen- tetti, 2H, J = 6,3 Hz), 2,09 - 2,33 (m, 2H) , 2,52 (t, 2H, • » · J = 7,3 Hz), 3,95 (S, 2H) , 4,15 (t, 2H, J = 5,1 Hz), 4,22 ... (t, 2H, J = 6,2 Hz) , 4,63 (m, 1H) , 6,97 (d, 1H, * * * '•..f 30 J = 8,6 Hz), 8,21 (dd, 1H, J = 2,1, 9,2 Hz), 8,47 (d, 1H, » · J = 2,1 Hz); massaspektri (FAB) ; m/e (suhteellinen intensi-teetti); 463 (100, M+l), 461 (100, M+l), 379 (10), 339 ·:·*; (10) , 269 (15) .
, Radiomerkintämenetelmä * * i |if· 35 Keksinnön mukaiset yhdisteet sidotaan monoklonaali- > ’··' sen vasta-aineen C46,3 F (ab) fragmentin sulfhydryyliryhmiin 113044 28 käyttäen standardimenetelmiä (katso Chemical Modification of Proteins, Means and Feeney, Holden-Day Inc. 1971) . Vapaiden SH ryhmien puuttuminen modifioinnin jälkeen vahvistettiin Grassettin ja Murrayn kokeella (Arch. Biochem.
5 Biophys. 119, 41 - 49, (1967)). Vapaiden hydratsiinien lu- kumäärä/F(ab) fragmentti määritettiin hydratsonin muodos-tuskokeella, jota Abrams et ai. ovat kuvanneet (J. Nucl. Med. 31, 2022 (1990)).
Modifioitu proteiini merkittiin sitten radioaktii- 10 visella aineella seuraten menetelmää, joka on samanlainen kuin Abrams et ai: in kuvaama (J. Nucl. Med. 31, 2022 (1990)) ja vertailussa käytettiin 99mTc-.n suoraa sitoutumista fragmenttiin käyttäen Bremmerin menetelmää ja käyttäen kahta hydratsinosidosmolekyyliä 15 ja 16.
15 Biologinen jakautumistutkimus hiirissä
Kasvaimia istutettiin 3-4 kuukauden ikäisten ka-teenkorvattomien, karvattomien hiirien kylkeen ihonalaisella injektiolla, jossa oli 106 LS174T paksusuolen karsino-masoluja.
20 99mTc-merkityt f ragmenttikonjugaatit injektoitiin hiirien silmäkuopan taakse. Hiiret saivat 5 - 50 Mg proteiinia ja 150 - 800 MCi 99mTc n. 300 μ1:η tilavuudessa fos-faatti-puskuroitua suolaliuosta. Injektoitava määrä/hiiri * *· · määritettiin sekä painohäviöstä että radioaktiivisuudesta t » : ‘j 25 kutakin injektiota kohti ja hiireen jäävästä radioaktiivi- 1 suudesta.
« · * · e:'. Leikkely tehtiin 4 ja 22 tuntien kohdalla. Elimet punnittiin analyysivaa'alla ja niiden radioaktiivisuus mää-ritettiin gammalaskurilla. Elinten biojakaantuminen määri- • · 30 tettiin näistä määrityksistä käyttäen standardimenetelmiä, * · hiiren veren tilavuus arvioitiin 8-%:iseksi. Lisää ali- » » kvootteja (15 μΐ) verestä otettiin 0,5 ja 2 tunnin kuluttua farmakokineettisiä tutkimuksia varten. Kaikki gammalasku- ,·* : riarvot korjattiin radioaktiiviselle hajoamiselle laskemal- • * » 35 la injektoidun annoksen nettoalikvootit samanaikaisesti * » “* elimien kanssa. Lopulliset tulokset on ilmoitettu viiden 113044 29 hiiren ryhmän keskiarvona, (+/-) standardipoikkeamana seu-raavassa taulukossa.
Taulukoissa 1 ja 2 esitetyistä tuloksista on ilmeistä, että sidosyhdisteet, jotka sisältävät lohkaistavis-5 sa olevan esteriryhmän (yhdisteet 8, 9, 10 ja 17) antoivat parempia tuloksia kasvaimen paikallistamisessa verrattuna sekä suoraan merkintään että merkintään ei-lohkaistavissa oleviin sidosaineisiin (yhdisteet 15 ja 16) . Kasvain/veri-suhteet olivat merkittävästi korkeampia, mikä johtuu niiden 10 retentiosta kasvaimessa ja nopeasta poistumisesta verestä, kuten voidaan nähdä sarakkeesta % injektoitua annosta/g kudosta (taulukko 2). Disulfidiin perustuvat sidosaineet (yhdisteet 5 ja 7) antoivat konjugaatteja, joilla oli nopea poistuminen verestä.
15
Taulukko 1
Elin/verisuhteet leikkelyäjankohtana kasvaimia kantavissa hiirissä, joille on annettu C46,3FAB 99mTc-merkittyinä si-dosaineiden kanssa ja käyttäen suoria menetelmiä
Sidosaine 5 - Fab' Sidosaine 7 - Fab' Sidosaine 8 - Fab’ Sidosaine 9 - Fab' l MSR = 3,1 MSR = 0,75 MSR = 1,5 M5K - 2,7 ' Elin 4 tuntia 22 tuntia 4 tuntia 22 tuntia 4 tuntia 22 tuntia 4 tuntia 22 tuntia ‘; Veri (1,00) (1,00) (1,00) (M*» (1,00) (1,00) (1,00) (1,00) . Keuhkot 0,55*0,09 1,37*0,40 0,50*0/M 0,90*0^1 1,01*1/27 1,60*0,49 0,70*1/04 1,11*1/10 * i Perna (/31*0,04 i,2**0,44 0,34*0,04 0,92*1/20 0,42*0,15 1,61*0,19 (/31*(/0S 1,16*0,14 : · Maksa 0,63*0/16 2^0*0,7* 1/60*1/0* l,2*±C/3l 0,69*0,21 2,42*1/57 1/59*0/8 /»6*1/34 V : Munuai- 232*3* 13^4^3 61,4*14,5 116*23 316*63 35,9*6/7 121*13
Kasvain 1,3 »*0,3» 4,41*1,34 1,14*4/52 2,77*0,72 3/11*0,46 13/1*1,4 2/73*1/69 11/9*2/2 : ' : Lihas (/33+0,11 0,10*4/43 0,20*0,11 0,36*1/0* 1/20*1/05 1/24*0/15 (/14*1/02 0,11*1/02 20 # · f * • · * » • * > t · » * > » > » 113044 30
Sidosaine 10 - Fab' Sidosaine 12 - Fab' Sidosaine 17 - Fab' M» 4,5 MSR * 0^17 _MSR 3,0_
Elin 4 tuntia 22 tuntia 4 tuntia 22 tuntia 4 tuntia 22 tuntia
Veri (1,00) (1,00) (1,00) (1/00)__(1/00)__0/00)
Keuhkot I 0,75*0,33 I 1,4710,11 | 0,5940,07 | 0,90*0,25 | 0,7710,13 | 1^2jtO,45 |[
Perna 0,3740,16 l,M4fl,44 0,3«iP/0» 1,0940,36 C^55i0)07 3,1440^9
Maksa 0,7740,21 4,2041,01 0,7440,1« 1,9140,36 0,7640/04 3,0342^1
Munuaiset 1 54,644,9 I 254430 | 23,345,3 | 121433 | 10747 5914200
Kasvain 1,9140,43 15,^46,1 1,3540^6 3,9742/C 2,12ϋμΐ 1^*±V
Lihas 0,1640,03 0,3540/05 0p«40,l* 0^440/1« 0,734(^39 ^4241,15 *Sidosaine 15 - Fab' *Sidosaine 16 - Fab* *Suoramerkitty Fab1 MSR « 0,62 _MSR « 0,95 __
Elin 4 tuntia 22 tuntia 4 tuntia 22 tuntia 4 tuntia 22 tuntia —— ei tehty ei tehty - 1 " '
Veri (1,00) (1/X>)__(tOO)__(1/00)
Keuhkot 0,3340,21 1,1240,30 0,7040,11 0,1340,09
Perna 0,4240,08 1,5440,3« 0,3740/03 0,7140,10
Maksa 0,6540/½ 2,7140,56 0,7344)40 1,3340,2«
Munuaiset 41^54:15/2 | | 155446 ) 69,2414,1 | 114414 ||
Kasvain 2,0040,59 5,0941,06 2^940,35 4/1241,13
Lihas 0,2440,14 0,9540,41 0,1740/M 0,20*0/20 « i -· ·
Huomautuks e t: 1. kaikki tulokset ovat viiden hiiren keskiarvoja + ’· 5 standardipoikkeama : : ; 2. MSR = molaarinen korvaussuhde, hydratsiinien lu- · kumäärä, jotka ovat liittyneet/FAB-fragmentti .
3. *ei-lohkaistavissa olevien sidosainekonjugaatti- en ja suoramerkinnän tulokset vertailua varten.
10 4. >95 % 99mTc oli sitoutunut FAB:hen analysoituna t* ( standardi ohutkerroskromatografiamenetelmillä, joita käyte- • * » ’· '· tään nukleaarisessa lääketieteessä.
• t * * » > t » 113044 31
Taulukko 2
Prosentuaalinen injektoitu annos/g kudosta leikkelyäjankoh-tana kasvaimia kantavissa hiirissä, joille on annettu C46,3 Fab 99roTc-merkittyinä sidosaineiden kanssa ja käyttäen suo-5 ria menetelmiä
Sidosaine 5 - Fab' Sidosaine 7 - Fab' Sidosaine 8 - Fab* Sidosaine 9 - Fab* MSR - 3,1 MSR - 0,75 MSR - 13 MSR - )7
Elin 9 tuntia 22 tuntia 4 tuntia 22 tuntia 4 tuntia 22 tuntia 4 tuntia 22 tuntia
Veri 1,29*0,13 0,23*0,09 3,11*0,73 0,«5*0,10 1,95*0,21 0,29*1)02 31«*t)20 035*0,03
Keuhkot 0,76*0,11 0,30*1)06 1,50*0,17 0,75*0,12 1,93*038 0,47*0,16 133*1)0« 039*0,06
Perna 0,40*0/32 0,28*0,09 1,05*038 0,76*0,07 0,80*0,19 0,47*1)06 1)66*0,12 0,40*1)07
Maksa 0,11*0,10 034*0,07 1,83*037 1,06*0,13 132*034 0,70*0,16 138*037 0,63*0,08
Munuai- 70)1±6)6 633*1)3 40)6*4,0 51,0*63 223*27 92,1*20,0 121*12 <13*6,7
Kasvain 1,99*0,71 0,96*0,16 3,43*137 230*0,48 5,87*1,03 3,72*0)58 4,45*1,71 3,74*035
Lihas 0,44*039 0,18*0,13 03 8*033 0,30*0,03 0,39*0,04 0,07*0,02 031*036 1)06*0,01 1 Sidosaine 10 - Fab' Sidosaine 12 - Fab' Sidosaine 17 - Fab' _ MSR = <3 MSR = 0,87 htsR 13,0
Elin__ 4 tuntia 22 tuntia 4 tuntia 22 tuntia 4 tuntia 22 tuntia j
Vcrl__233*036 0,35*0,06__1,92*0,42 0,59*0,11 135*0,15 034*0,09
Keuhkot__2,10*0,89 031*0,12 1,11*030 031*0,07 1,18*0,19 0,40*0,03
Perna__1,03*0,35 0,64*0,12 0,71*0,11 0,62*0,13 0,86*0,14 0,69*0,10 I : Maksa__2,14*0,46 1,43*030 1,37*0,13 1,09*0,17 1,18*1)17 1,05*036
Munuai- „ ' j . set____873*113__4)4*4,6 72,9*10,0 167*23 127*14
Kasvaln__538*033__3,11*130 233*1,41 2,19*032 339*133 23«*037 j Llhas °r,Aiar}'! 039*0,05 1,17*039 036*037 1 » * * 32 11304^ *Sidosaine 15 - Fab' 1Sidosaine 16 - Fab' 1Suornmerkitty Fab' MSR m 0^62 MSR m 0,95 -------
Elin 4 tuntia 22 tuntia 4 tuntia I 22 tuntia 4 tuntia 22 tuntia —... -—·>.· - ei cehty ~ ' ei tehty 1 ........ 1 “
Verl yt>9ift29 0,7210,12 l^StC^lO QJ51cy04
Keubkoc ι,αϋΐ^7 0,7910^19 1,1510,1» oponyo
Pernn 1,1210,10 Ι,ΙΟΚ^ί C^&210ft» Οβίω,Μ
Maksa 1,7210,17 l,911tpl 1^110,10 (^5210,10 M“^ual- I0<±20 117123 111123 4q.lt5,>
Kasvain 5,2311,00 3,621q.72 3,9711,04 1,400,4}
Lihas OfKUOflS 0,7210,40 Og»iO£6 0,071^01
Huomautukset: 1. kaikki tulokset ovat viiden hiiren keskiarvoja + 5 standardipoikkeama 2. MSR = molaarinen korvaussuhde, hydratsiinien lukumäärä, jotka ovat liittyneet/FAB-fragmentti.
3. 1ei-lohkaistavissa olevien sidosainekonjugaatti-en ja suoramerkinnän tulokset vertailua varten.
10 4. >95 % 99raTc oli sitoutunut FAB:hen analysoituna standardi ohutkerroskromatografiamenetelmillä, joita käytetään nukleaarisessa lääketieteessä.
» ♦ t · 1 ‘ i » · • t
Claims (25)
113044
1. Yhdiste, jolla on yleinen kaava I 5 j ossa E on alkylideeniryhmä tai H2/ missä tapauksessa yhdiste on happoadditiosuolamuodossa, J valitaan ryhmästä -CO-NH-, -CO-O-, -CO-S- ja
10 -NH-CO-, T on alkyleeniketju tai, mikäli J on -CO-NH-, T on aminohappo-osan jäännös, Q on disulfidi, esteri tai tioesteri, ja Z on bromiasetaatti, maleimido, disulfidi tai N-15 hydroksisukkinimidyyliesteri.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että kun E kaavassa I on alkyl ideeniryhmä, se on haarautunut tai haarautumaton alempi alkylideeniket-ju, jossa on 1 - 4 hiiliatomia.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, jolla • · : on kaava COOH H ; : ja sen happoadditiosuolat. : h 4. Yhdiste, jolla on yleinen kaava Ia 25 jT |~C0-NH-CWCCm-GRk-5-S-P i-R· (h) ; ENNHi 113044 jossa E on kuten patenttivaatimuksessa 1 on määritelty, R on H tai CH3 ja R1 on H tai N02.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen yhdiste, jolla on kaava X) i Λ jVrY" h2nv Λ ; H o N N
5 H tai sen happoadditiosuolat.
6. Patenttivaatimuksen 4 mukainen yhdiste, jolla on kaava li” R I
0 R'L-'S jyOH HiN^ A H O N N H 10 • jossa R on H tai CH3, tai sen happoadditiosuolat. , 7. Patenttivaatimuksen 4 mukainen yhdiste, jolla on kaava : ·: - V HiN H 0 * · : .· h ' 15 tai sen happoadditiosuolat. * ’ r · 1 · · • I π | * • · < · t · ft • » 113044
8. Yhdiste, jolla on kaava COOH O f „ O \ -j&r<rP H COOH ja sen happoadditiosuolat.
9. Yhdiste, jolla on kaava O 0 0° .-A-^A^V/n Y'K-V H Y ) H ja sen happoadditiosuolat.
10. Yhdiste, jolla on kaava O o ..... yvV ja sen happoadditiosuolat.
11. Yhdiste, jolla on kaava : 15 f ;'· 00 ' H N is. I H rh N. J N N tai sen happoadditiosuolat. ’!* 12. Yhdiste, jolla on kaava ....: h o :·'·ί h2n A..J , , t *s f*
20 H ja sen happoadditiosuolat. 113044
13. Yhdiste, jolla on kaava CQOH -XrVr^~v* Γ» sS H ja sen happoadditiosuolat.
14. Yhdiste, jolla on kaava 5 vsXrV-H ja sen happoadditiosuolat.
15. Yhdiste, jolla on kaava O rrV^Y^ H;N A J O N N'
10 H *i ja sen happoadditiosuolat. >· 16. Yhdiste, jolla on kaava . o O H ^ ,, 15 ja sen happoadditiosuolat. * * 17. Yhdiste, jolla on kaava "!Ν'νΆ 0 ! » t , *: h ,,,1 ja sen happoadditiosuolat. 20 37 1 13044
18. Yhdiste, jolla on kaava
0 JL BlNv J H H ja sen happoadditiosuolat.
19. Yhdiste, jolla on kaava O COOH •vQrVnr^Y* H
20. Konjugaatti, tunnettu siitä, että se on 10 muodostunut makromolekyylin reaktiosta minkä tahansa edeltävän patenttivaatimuksen mukaisen yhdisteen kanssa.
21. Patenttivaatimuksen 20 mukainen konjugaatti, tunnettu siitä, että makromolekyyli käsittää immuno-globuliinin tai sen fragmentin.
22. Merkitty makromolekyyli, tunnettu siitä, * : että se sisältää metalliatomin, joka on sitoutunut patent- ·· tivaatimuksen 20 tai 21 mukaiseen konjugaattiin.
23. Patenttivaatimuksen 22 mukainen merkitty mak- ,·, : romolekyyli, tunnettu siitä, että metalli valitaan • * · .' / 20 Te:n ja Re:n radioisotoopeista. « ' · ‘h.’ 24. Yhdiste, jolla on yleinen kaava II • > · * : 7 ^-i) (H) . *' ·. l-coNH-tath -s—s εννιΛν-^ t * · • ·» 25 jossa E on kuten patenttivaatimuksessa 1 on määritelty. * · » · » » ' > · 113044
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB929223168A GB9223168D0 (en) | 1992-11-05 | 1992-11-05 | Improvements in molecule labelling |
| GB9223168 | 1992-11-05 | ||
| GB9302259 | 1993-11-03 | ||
| PCT/GB1993/002259 WO1994010149A1 (en) | 1992-11-05 | 1993-11-03 | Molecule labelling using 2-hydraninopyridine derivatives |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI952141A FI952141A (fi) | 1995-05-04 |
| FI952141A0 FI952141A0 (fi) | 1995-05-04 |
| FI113044B true FI113044B (fi) | 2004-02-27 |
Family
ID=10724568
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI952141A FI113044B (fi) | 1992-11-05 | 1995-05-04 | 2-hydratsinopyridiinijohdannaisia |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5679778A (fi) |
| EP (1) | EP0667859B1 (fi) |
| JP (1) | JP3542597B2 (fi) |
| KR (1) | KR100295545B1 (fi) |
| AT (1) | ATE195730T1 (fi) |
| AU (1) | AU676863B2 (fi) |
| CA (1) | CA2148595C (fi) |
| DE (1) | DE69329293T2 (fi) |
| DK (1) | DK0667859T3 (fi) |
| ES (1) | ES2150950T3 (fi) |
| FI (1) | FI113044B (fi) |
| GB (1) | GB9223168D0 (fi) |
| GR (1) | GR3034883T3 (fi) |
| HK (1) | HK1013420A1 (fi) |
| HU (1) | HU226459B1 (fi) |
| NO (1) | NO305364B1 (fi) |
| NZ (1) | NZ257376A (fi) |
| PT (1) | PT667859E (fi) |
| WO (1) | WO1994010149A1 (fi) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5942210A (en) * | 1994-11-15 | 1999-08-24 | Cytogen Corporation | Methods for lyoprotecting a macromolecule using tricine |
| US5919934A (en) * | 1997-02-19 | 1999-07-06 | The George Washington University | Compounds, compositions, and methods for cancer imaging and therapy |
| HUP0001261A3 (en) | 1997-04-30 | 2001-11-28 | Univ Washington Seattle | Method of imaging cell death in vivo |
| US6403054B1 (en) * | 1997-05-28 | 2002-06-11 | Bristol-Myers Squibb Pharma Company | Ternary ligand complexes useful as radiopharmaceuticals |
| US6844333B1 (en) * | 1999-03-26 | 2005-01-18 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method of treating atherosclerosis |
| CA2723664A1 (en) * | 2000-03-22 | 2001-09-27 | Solulink, Incorporated | Hydrazine-based and carbonyl-based bifunctional crosslinking reagents |
| US6686461B1 (en) | 2000-03-22 | 2004-02-03 | Solulink Bioscience, Inc. | Triphosphate oligonucleotide modification reagents and uses thereof |
| US7102024B1 (en) | 2000-08-01 | 2006-09-05 | Schwartz David A | Functional biopolymer modification reagents and uses thereof |
| WO2002080754A2 (en) | 2001-04-03 | 2002-10-17 | Theseus Imaging Corporation | Methods for using annexin for detecting cell death in vivo and treating associated conditions |
| WO2002082044A2 (en) | 2001-04-03 | 2002-10-17 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Method of imaging cell death in vivo |
| GB0130845D0 (en) * | 2001-12-22 | 2002-02-06 | James Peter | Analysis |
| US7158353B2 (en) * | 2003-11-06 | 2007-01-02 | Seagate Technology Llc | Magnetoresistive sensor having specular sidewall layers |
| JP5107716B2 (ja) * | 2004-11-05 | 2012-12-26 | ザ・チルドレンズ・ホスピタル・オブ・フィラデルフィア | 分子治療用生分解性リンカー |
| EP2942351B1 (en) * | 2011-01-31 | 2016-10-12 | ETH Zurich | Trifunctional crosslinking reagents |
| CN103582496B (zh) | 2011-06-03 | 2016-05-11 | 3M创新有限公司 | 具有聚乙二醇链段的异双官能连接基以及由其制成的免疫应答调节剂缀合物 |
| BR112013031039B1 (pt) | 2011-06-03 | 2020-04-28 | 3M Innovative Properties Co | compostos de hidrazino 1h-imidazoquinolina-4-aminas, conjugados feitos destes compostos, composição e composição farmacêutica compreendendo ditos compostos e conjugados, usos dos mesmos e método de fabricação do conjugado |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4861869A (en) * | 1986-05-29 | 1989-08-29 | Mallinckrodt, Inc. | Coupling agents for joining radionuclide metal ions with biologically useful proteins |
| IL93432A (en) * | 1989-02-24 | 1994-02-27 | Johnson Mathey Inc | Hydrazines and hydrazides, their conjugates with macromolecules, and such conjugates labeled with metallic ions |
| US5112953A (en) * | 1989-12-29 | 1992-05-12 | Neorx Corporation | Radiolabeled proteins for diagnostic or therapeutic use |
-
1992
- 1992-11-05 GB GB929223168A patent/GB9223168D0/en active Pending
-
1993
- 1993-11-03 WO PCT/GB1993/002259 patent/WO1994010149A1/en active IP Right Grant
- 1993-11-03 DK DK93924157T patent/DK0667859T3/da active
- 1993-11-03 AU AU53755/94A patent/AU676863B2/en not_active Expired
- 1993-11-03 CA CA002148595A patent/CA2148595C/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-11-03 KR KR1019950701810A patent/KR100295545B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1993-11-03 US US08/432,204 patent/US5679778A/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-11-03 ES ES93924157T patent/ES2150950T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-11-03 JP JP51085194A patent/JP3542597B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1993-11-03 NZ NZ257376A patent/NZ257376A/en not_active IP Right Cessation
- 1993-11-03 PT PT93924157T patent/PT667859E/pt unknown
- 1993-11-03 DE DE69329293T patent/DE69329293T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-11-03 AT AT93924157T patent/ATE195730T1/de active
- 1993-11-03 HU HU9501275A patent/HU226459B1/hu unknown
- 1993-11-03 EP EP93924157A patent/EP0667859B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-05-04 NO NO951751A patent/NO305364B1/no not_active IP Right Cessation
- 1995-05-04 FI FI952141A patent/FI113044B/fi not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-12-22 HK HK98114895A patent/HK1013420A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-11-22 GR GR20000402572T patent/GR3034883T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK0667859T3 (da) | 2000-10-16 |
| AU676863B2 (en) | 1997-03-27 |
| HK1013420A1 (en) | 1999-08-27 |
| ATE195730T1 (de) | 2000-09-15 |
| NO951751D0 (no) | 1995-05-04 |
| ES2150950T3 (es) | 2000-12-16 |
| CA2148595A1 (en) | 1994-05-11 |
| EP0667859A1 (en) | 1995-08-23 |
| GR3034883T3 (en) | 2001-02-28 |
| FI952141A (fi) | 1995-05-04 |
| AU5375594A (en) | 1994-05-24 |
| JP3542597B2 (ja) | 2004-07-14 |
| WO1994010149A1 (en) | 1994-05-11 |
| PT667859E (pt) | 2001-02-28 |
| US5679778A (en) | 1997-10-21 |
| DE69329293T2 (de) | 2000-12-28 |
| KR100295545B1 (ko) | 2001-09-17 |
| DE69329293D1 (de) | 2000-09-28 |
| CA2148595C (en) | 2002-05-21 |
| GB9223168D0 (en) | 1992-12-16 |
| HUT72332A (en) | 1996-04-29 |
| NO951751L (no) | 1995-06-12 |
| EP0667859B1 (en) | 2000-08-23 |
| JPH08502744A (ja) | 1996-03-26 |
| NZ257376A (en) | 1996-02-27 |
| NO305364B1 (no) | 1999-05-18 |
| FI952141A0 (fi) | 1995-05-04 |
| KR950704256A (ko) | 1995-11-17 |
| HU226459B1 (en) | 2008-12-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI113044B (fi) | 2-hydratsinopyridiinijohdannaisia | |
| US5206370A (en) | Certain pyridyl hydrazines and hydrazides useful for protein labeling | |
| JP2683080B2 (ja) | トリ‐アザ大環状化合物及びそれらの金属錯体 | |
| EP0188256A2 (en) | Metal radionuclide labeled proteins for diagnosis and therapy | |
| AU2253388A (en) | Tetra-aza macrocycles and metal complexes thereof | |
| US5218128A (en) | Bifunctional coupling agents and radionuclide labeled compositions prepared therefrom | |
| JP5705434B2 (ja) | キレート剤 | |
| JP3073997B2 (ja) | タンパク質の標識化 | |
| JPH08504400A (ja) | 放射性薬剤として使用する金属オキシムキレート | |
| Makris et al. | Synthesis, characterization, and biological evaluation of new biotinylated 99mTc/Re‐tricarbonyl complexes | |
| Adelstein | Harvard-MIT research program in short-lived radiopharmaceuticals. Technical progress report, 1991 | |
| NO179585B (no) | Fremgangsmåte ved fremstilling av antistoffkonjugater med makrocykliske bifunksjonelle chelaterte komplekser |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| GB | Transfer or assigment of application |
Owner name: ANORMED INC. |
|
| MA | Patent expired |