HU226459B1 - Molecule labelling using 2-hydrazinopyridine derivatives - Google Patents

Molecule labelling using 2-hydrazinopyridine derivatives Download PDF

Info

Publication number
HU226459B1
HU226459B1 HU9501275A HU9501275A HU226459B1 HU 226459 B1 HU226459 B1 HU 226459B1 HU 9501275 A HU9501275 A HU 9501275A HU 9501275 A HU9501275 A HU 9501275A HU 226459 B1 HU226459 B1 HU 226459B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
compound
formula
acid addition
mmol
addition salts
Prior art date
Application number
HU9501275A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT72332A (en
Inventor
Michael Jeffrey Abrams
Gary James Bridger
Sreenivasan Padmanabhan
David Aaron Schwartz
Michael Evert Ultee
Original Assignee
Anormed Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Anormed Inc filed Critical Anormed Inc
Publication of HUT72332A publication Critical patent/HUT72332A/hu
Publication of HU226459B1 publication Critical patent/HU226459B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/79—Acids; Esters
    • C07D213/80—Acids; Esters in position 3
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/81—Amides; Imides
    • C07D213/82—Amides; Imides in position 3
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Adhesives Or Adhesive Processes (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

A találmány a molekulajelölés tökéletesítésére, közelebbről olyan új bifunkciós származékokra vonatkozik, amelyek fémionok, különösen technécium és rénium megkötésére képesek és ezáltal biológiailag hasznosítható molekulákat képeznek.
Nagy biológiai fajlagosságuk következtében bizonyos makromolekulák (például monoklonális antitestek és töredékeik) arra használhatók, hogy in vivő specifikus helyekre radioizotópokat juttassanak el képalkotás és/vagy terápia céljából. Metastabil technéciumizotóp, a 99mTc használata a diagnosztikus nukleáris medicinában ismert eljárás és a rénium béta-sugárzó izotópjai, a 186Re, 188Re és 189Re gyógyászatilag alkalmazhatók. A Te makromolekulákhoz való kapcsolására számos eljárást írtak le. Néhány ilyen eljárás szerint a makromolekulában (általában immunoglobulinban) levő diszulfidcsoportokat tiolokká redukálják, majd e csoportokat a redukált Te megkötésére használják fel (lásd például McKenzie és munkatársai, WO 87/04164 számú szabadalmi leírás és Bremmer és munkatársai, EP 0 271 806 számú szabadalmi leírás). Az ilyen típusú közvetlen jelölési eljárásoknak számos potenciális hátránya van. A diszulfid-egységek redukciója fehérje denaturációhoz vezethet és ezáltal a biológiai fajlagosság elvesztése következhet be. Ezenfelül az eljárás csak diszulfidcsoportokat tartalmazó részek jelölésére alkalmas.
A 99mTc a makromolekulákhoz bifunkciós kelátokkal, mint DTPA-val (dietilén-triamin-pentaecetsav) [Lanteigne D. és Hnatowich D. J., Int. J. Appl. Radiat. Isot. 35, 617 (1984)], kelátképző tioszemikarbazonokkal [Arano Y. és munkatársai, J. Nucl. Med. Bioi. 12, 425 (1985)] és diamid-ditiol-ligandumokkal (Fritzberg A., EP 188 2562A számú szabadalmi bejelentés) is összekapcsolható. E módszerek hátrányai közé tartozik a Te nemspecifikus megkötése (fehérjékhez kötődés a kelátcsoporttól eltérő helyeken) és a Tc-jelölés lassú kinetikája.
Az EP 0 384 769 A2 számú szabadalmi leírásban új eljárást írtunk le biológiai molekulák (például monoklonális antitestek, poliklonális humán IgG és ovalbumin) és kisebb molekulák (például peptidek) 2-hidrazino-piridino-csoportokkal történő módosítására, amelyek redukált Tc-mal, például 99mTcv-rnal (glukoheptonát) reagálva stabil immunoreaktív radiokonjugátokat képeznek.
Kimutatták, hogy a radioizotópok vagy farmakonmolekulák szállítása számára módosított biológiai molekulák (például monoklonális antitestek) in vivő metabolízálódnak és a képződött termékek szétoszlanak a testben. A metabolizált termék biológiai eloszlásának szabályozására törekedve a módosított rész kémiai jellemzőit hidrofil vagy hasítható funkciós csoportok bevitele útján megváltoztatták. Paik és munkatársai [J. Nucl. Med. 30, 1693-1701 (1989) és Antibod. Immunoconjug. and Radiopharm. 3, 127-136 (1990)] kimutatták, hogy ha a monoklonális antitest és a radioizotóp (111ln) közé észterfunkcionalitást építenek be, meggyorsul az izotóp eltávozása (clearance) a vérből és csökken a normális szervek, mint izom, vese, máj és lép izotópfelvétele. A normál szervekből történő gyorsabb „clearance” következtében a tumor/normál szervek izotópeloszlási aránya 2-3-szorosára emelkedik. Nem tumoros állatokban a „clearance” hasonló gyorsulását figyelték meg Deshapande és munkatársai [Nucl. Med. Bioi. 16, 587-597 (1989)], Paik és munkatársai [Nucl. Med. Bioi. 16, 475-481 (1989)], Weberés munkatársai [Bioconjugate Chem. 1, 431-437 (1990) és Gustavson és munkatársai, 5 112 953 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás] 111ln-mal vagy 99mTc-rnal jelzett antitesteknél, ahol a radioizotópok észter- vagy diszulfid-funkcióhoz kötődő kelátképzőn át kapcsolódnak az antitestekhez.
Találmányunk tárgyát olyan új bifunkciós molekulák képezik, amelyek hidrofil és/vagy hasítható csoportokkal megszakított hidrazinocsoportokat és reakcióképes csoportokat tartalmaznak; e csoportok segítségével fémionok, mint 99mTc úgy köthetők a makromolekulákhoz, hogy a radioaktív izotóppal jelzett biológiai molekulák eloszlása a testben előnyösen változik meg.
A találmány szerint hidrofil (például savas) és/vagy hasítható csoportokat (például diszulfidok vagy észterek) tartalmazó új bifunkciós hidrazinvegyületeket és konjugátjaikat állítjuk elő. A találmány szerinti vegyületek C46.3 monoklonális antitestek F(ab)' fragmentumával képezett és 99mTc-rnal jelzett konjugátjai in vivő a daganat lokalizációját mutatják ki. Egyes vegyületek jelentősen jobb tumor/vér arányokat mutatnak, összehasonlítva a közvetlen módszerrel jelölt ugyanolyan antitestfragmentumokkal (például Bremmer és munkatársai).
A találmány szerint új (I) általános képletű vegyületeket állítunk elő, melyekben
E alkilidéncsoportot vagy H2 molekulát jelent, és az utóbbi esetben a vegyület savaddíciós só formában van jelen,
J -CO-NH-, -CO-O-, -CO-S- vagy -NH-COcsoportot,
T alkilénláncot jelent, vagy ha J jelentése -CO-NH- csoport, a T szubsztituens egy aminosavmaradék,
Q jelentése diszulfid, észter- vagy tioésztercsoport, és
Z jelentése bróm-acetát-, maleimido- vagy N-hidroxi-szukcinimidil-észter-csoport.
Ha E jelentése alkenilcsoport, úgy az egyenes vagy elágazó láncú, legfeljebb 4 szénatomos rövid szénláncú alkenilcsoport lehet.
Ha az (I) általános képletű vegyület savaddíciós só formájú, a sav célszerűen hidrogén-halogenid, salétromsav, trifluor-ecetsav, tetrafluor-hidrogén-halogenid, salétromsav, trifluor-ecetsav, tetrafluor-bórsav vagy kénsav, de más savak is használhatók, amennyiben nem zavarják a vegyületek alkalmazását.
A találmány szerinti vegyületeket a tapasztalt szerves kémikus könnyen szintetizálja. A molekulák különböző kiinduló anyagokból önmagában ismert módon „rakhatók össze”. Kényelmesen alkalmazható a kísérő rajzokon feltüntetett 1-4. reakcióvázlat valamelyike, vagy kézenfekvő változata. Könnyen belátható, hogy az ilyen típusú molekulákkal a pontos kiinduló anyagok
HU 226 459 Β1 és reakciókörülmények változtatása hasonló eljárásokhoz vezet, amelyek (I) általános képlettel megadható hasonló termékeket eredményeznek. A sajátos (I) általános képletű vegyületek szintézisét részletesen ismertetik az alábbi példák.
A találmány szerinti (II) általános képletű új vegyületeket is előállíthatunk, amelyekben E jelentése a fenti. E vegyületek szintén alkalmazhatók kapcsoló („linker”) molekulákként.
A találmány tárgyát képezik továbbá az (la) általános képletű vegyületek, amelyekben E jelentése a fenti.
A találmány szerinti különösen előnyös vegyületek a 8-24. képletű vegyületek és savaddíciós sóik.
A találmány szerint továbbá konjugátokat is előállítunk, melyek egy makromolekula és egy találmány szerinti vegyület reagáltatásakor képződnek. A makromolekula célszerűen fehérje, mint immunoglobulin, például monoklonális antitest, vagy ennek fragmentuma. A reakciót Abrams és munkatársai [J. Nucl. Med. 31, 2022 (1990)] közleménye szerint hajtjuk végre. Abrams és munkatársai a radioizotópos jelzés technikáját is leírják, és hasonló módon a találmány szerinti konjugátok is felhasználhatók megfelelően jelzett makromolekulák előállításához, amelyek egy találmány szerinti konjugáthoz kötött fématomból, mint 99mTc-ból vagy Re-izotópból állnak.
Az alábbiakban részletesen leírt próbák szerint a 99mTc-jelzett antitestfragmentum-konjugátok tökéletesebbek a találmány szerinti „linker molekulák nélkül nyert jelzett fragmentumoknál, vagy különböző „linker molekulák használata útján kapott jelzett fragmentumoknál a kimutatott radioaktivitás egy vagy több jellemzője tekintetében, különös tekintettel a tumor/vér, tumor/szervek radioaktivitásának arányára, vagy a vérből történő clearance-re. így a találmány magában foglalja a találmány szerinti jelzett makromolekulák képalkotásra és/vagy terápiára történő felhasználását is, az általánosan ismert elveknek megfelelően.
A találmányt tovább ismertetik az alábbi példák, anélkül, hogy a találmány hatókörét korlátoznák.
Kísérleti rész
Az 1H-NMR-spektrumokat 300 MHz-en regisztráljuk „Bruker AM 300” spektrométer segítségével. Minden 1H-NMR-spektrumot - egyéb utalás híján DMSO-d6-ban veszünk fel.
A FAB (Fást Atom Bombardment) tömegspektrális analízist Bacc=8 kV-on működő „VG Analytical ZAB
2-SE” típusú, nagy mágneses térerősségű tömegspektrométerrel hajtjuk végre.
A vegyületek nevét zárójelben Q adjuk meg a különböző példákban, a „Chemical Abstracts Service Registry Index nevezéktanának megfelelően.
6-Hidrazino-nikotinsavat, 6-/BOC-hidrazino/-nikotinsavat és szukcinimidil-6-/BOC-hidrazino/-nikotinátot Abrams és munkatársai szerint [J. Nucl. Med. 31, 2022 (1990)] állítunk elő.
A következő példákban előállított egyes vegyületek szerkezetét a mellékelt rajzok mutatják, ahol a vegyületek száma megegyezik a példa számával.
1. példa
6-/BOC-hidrazino/-nikotinamido-y-tercbutil-/L/-glutaminsav y-terc-Butil-/L/-glutaminsavat (173 g) dioxán (5 ml) és telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldat (5 ml) elegyében oldunk gyors keverés közben, és egy adagban szukcinimidil-6-/BOC-hidrazino/-nikotinátot (300 mg, 1,0 ekv.) adunk hozzá. A keveréket 3 órán át keverjük, majd vízbe (50 ml) öntjük, A pH-t 10 n NaOH-oldattal pH=14-re, majd tömény HCI-oldattal pH=7-re állítjuk be és egyszer etil-acetáttal (40 ml) extraháljuk. A vizes fázis pH-ját tömény HCI-oldattal pH=4-ig csökkentjük, nátrium-kloriddal telítjük és etil-acetáttal extraháljuk (3x4 ml). Az egyesített szerves fázisokat szárítjuk (MgSO4) és csökkentett nyomáson bepároljuk. Fehér, poralakú terméket kapunk (360 mg, 96%).
6-/BOC-hidrazino/-nikotinamido-y-terc-butilglutaminsav szukcinimidil-észter 6-/BOC-hidrazino/-nikotinamido-y-terc-butil-/L/-glutaminsavat (360 g) és N-hidroxi-szukcinimidet (96 g) THF-ban (10 ml) oldunk és argongáz alatt DCC-t (N,Ndiciklohexil-karbodiimid) (170 mg) adunk hozzá 0 °C-on. A keveréket 0 °C-on 2 órán át és éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Eközben fehér, szilárd anyag válik ki, amelyet leszűrünk. A szűrletet csökkentett nyomáson bepárolva fehér hab formájú termék képződik (kvantitatív).
(1) képletű vegyület szintézise
6-Hidrazino-nikotinamido-/L/-glutaminsav-Nhidroxi-szukcinimidil-észter-hidroklorid
6-/BOC-hidrazino/-nikotinamido-y-terc-butil-/L/-glutaminsav-N-hidroxi-szukcinimidil-észtert (150 mg) dioxánban oldunk és keverés közben dioxánban (2 ml) oldott telített vizes HCI-oldatot adunk hozzá. Egy óra múlva a homogén oldatból csapadék válik ki. A keverést további 3 órán át folytatjuk, majd a szilárd anyagot leszűrve, éterrel mosva és megszárítva sárgásfehér kristályos terméket kapunk.
1H-NMR (DMSO-d6) delta 2,10-2,29 (m, 2H), 2,39 (t,
2H, J=6,9 Hz), 2,81 (s, 4H), 4,88 (m, 1H), 6,93 (d,
1H, J=8,8 Hz), 8,63 (m, 2H), 9,04 (d, 1H, J=7,6 Hz, kicserélhető D2O), 9,95 (széles s, 2H, kicserélhető D2O).
Tömegspektrum (FAB); m/e (relatív intenzitás) 380 (60,
M+1), 283 (100), 201 (35), 185 (42), 136 (40).
2. példa
6-/BOC-hidrazino/-nikotinamido-y-tercbutil-/L/-glutamil-y-benzil-/L/-glutaminsav-terc-butilészter
6-/BOC-hidrazino/-nikotinamido-y-terc-butil-/L/-glutaminsavat (200 mg), y^benzil-/L/-glutaminsav-terc-butil-észter-hidrokloridot (151 mg, 1,0 ekv.) és N-hidroxiszukcinimidet (53 mg, 1,0 ekv.) DMF-ban (10 ml) oldunk és keverés közben, argongáz alatt lehűtjük 0 °C-ra. A kapott oldathoz egy adagban trietil-amint (32 ml, 1,1 ekv.), majd DCC-t (94 mg, 1,0 ekv.) adunk, a keveréket 0 °C-on 3 órán át, majd szobahőmérsékleten 4 napon át keverjük, miközben szilárd anyag válik
HU 226 459 Β1 ki. Az oldatot etil-acetáttal (50 ml) hígítjuk, majd a szilárd anyagot leszűrjük. A szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk és az olajos maradékot összerázzuk etil-acetáttal (50 ml) és telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal (30 ml), a szerves réteget elválasztjuk, sóoldattal alaposan mossuk, szárítjuk (MgSO4) és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. Fehér, habos szilárd anyagot kapunk (90%).
6-/BOC-hidrazino/-nikotinamido-y-tercbutil-/L/-glutaminsav-terc-butil-észter
Aktivált szénre leválasztott palládium (Aldrich,
10%) és etil-acetát (5 ml) szuszpenziójához 6-/BOChidrazino/-nikotinamido-y-terc-butil-/L/-glutamil-y-benzil-/L/-giutaminsav-terc-butil-észtert (300 mg) adunk és a keveréket hidrogénatmoszféra alatt 6-8 órán át élénken keverjük (a reakció végét TLC alapján állapítjuk meg). A keveréket leszűrve és csökkentett nyomáson szárazra párolva fehér habot kapunk, amelyet a következő műveletben további tisztítás nélkül használunk.
6-/BOC-hidrazino/-nikotinamido-y-tercbutil-/U-glutamil-y-N-hidroxiszukcinimidil-/L/-glutaminsav-terc-butil-észter A fenti terméket (100 mg) N-hidroxi-szukcinimidet (18,4 mg, 1,0 ekv.) tartalmazó etil-acetátban (10 ml) oldjuk és argongáz alatt keverve lehűtjük 0 °C-ra. Az oldathoz DCC-t (33 mg, 1,0 ekv.) adunk egy adagban és a keveréket szobahőmérsékleten éjszakán át keverve fehér csapadék válik ki. A szilárd anyagot leszűrve és a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra párolva fehér habot kapunk.
(2) képletű vegyület szintézise 6-Hidrazino-nikotinamido-/L/-glutamil-hidroxiszukcinimidil-/L/-glutaminsav-hidroklorid 6-/BOC-hidrazino/-nikotinamido-Y-terc-butil-/L/-glutamil-Y-N-hidroxi-szukcinimidil-/L/-glutaminsav-terc-butil-észter dioxánnal (1 ml) készült oldatához telített dioxános hidrogén-klorid-oldatot adunk. 1 óra múlva a homogén oldatból csapadék válik ki, a keverést további 24 órán át folytatjuk, majd a keveréket csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A visszamaradt sárgásfehér, szilárd anyagot éterrel mossuk (3*), majd bepároljuk és megszárítjuk.
1H-NMR (DMSO-d6/D2O) delta 1,30-2,20 (m, 2H), 2,31 (m, 2H), 2,76 (m, 2H), 2,80 (s, 4H), 4,24 (m, 1H), 4,42 (m, 1H), 6,90 (d, 1H, J=8,8 Hz), 8,17 (dd, 1H, J=8,8, 2,4 Hz), 8,71 (s, 1H).
Tömegspektrum (FAB); m/e relatív intenzitás; 509 (18, M+1).
3. példa
6-/2-Propenil-hidrazon/-nikotinamido-3-propanol
Szukcinimidil-6-/2-propenil-hidrazon/-nikotinát (10 g, 34,4 mmol) DMF-dal (80 ml) készült oldatához DMF-ban (20 ml) oldott 3-amino-propanolt (3,0 ml, 37,9 mmol) adunk cseppenként és a keveréket 16 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A halványsárga olajos maradékot etil-acetátban (50 ml) oldjuk, kevés vízzel mossuk, szárítjuk (Na2SO4) és csökkentett nyomáson bepároljuk. A halványsárga szilárd anyagot etil-acetátból átkristályosítva a várt termékhez jutunk fehér, szilárd anyag formájában (5,6 g, 65%).
N-Hidroxi-szukcinimidil-glutaril-klorid
Benkovic, Lerner WO 88 09380. Alternatív egylombikos eljárás.
Glutársavanhidridet (4,95 g) diklór-metánban (30 ml) oldunk, egy adagban N-hidroxi-szukcinimidet (5,0 g) adunk hozzá és a keveréket szobahőmérsékleten 2,5 órán át keverjük a reakció lezajlásáig (1H-HMR ellenőrzés). E keverékhez kanül segítségével cseppenként oxalil-kloridot adunk (3,0 ekv., diklór-metánnal készült 2 M oldat, Aldrich, 65 ml), miközben erős pezsgés indul meg. A keveréket éjszakán át keverjük, majd csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. További diklór-metánt adunk hozzá és a keveréket ismét bepároljuk. E műveletet addig ismételjük, amíg a maradék bepárláskor kristályosodni kezd. Szárítás után fehér, szilárd terméket kapunk.
(3) képletű vegyület szintézise 6-/2-Propenil-hidrazon/-nikotinamido-3-propanol (200 mg, 0,8 mmol) THF-nal (15 ml) készült oldatához argongáz alatt, 0 °C-on trietil-amint (123 μΙ, 1,1 ekv.), majd N-hidroxi-szukcinimidil-glutaril-kloridot (200 mg, 0,8 mmol) adunk egy adagban és a keveréket éjszakán át keverve szobahőmérsékletre hagyjuk felmelegedni. Csökkentett nyomáson bepárolva olajat kapunk, melyet etil-acetátban újra feloldunk. Jeges fürdőben hűtve a trietil-amin-hidroklorid fehér kristályok formájában kiválik; e csapadékot leszűrjük. A szűrletet bepárlás után oszlopkromatográfiával tisztítjuk. Ehhez rövid szilikagél oszlopot használunk 5% izopropanol/-etil-acetát eluenssel. A várt termék fehér por (80 mg, 22%).
NMR (CDCI3) delta 1,15 (t, 3H, J=7,5 Hz), 1,96 (pentett, 2H, J=6,2 Hz), 2,08 (pentett, 2H, J=7,1 Hz), 2,31-2,40 (dq, 2H, J=7,5; 5,1 Hz), 2,51 (t, 2H, 7,1 Hz), 2,73 (t, 2H, J=7,1 Hz), 2,84 (s, 4H), 3,50 (q, 2H, J=6,4 Hz), 4,24 (t, 2H, J=6,1 Hz), 6,54 /széles t, 1H, kicserélhető D2O, 7,19-7,26 (m, 2H), 7,97-8,01 (dd, 1H, J=8,8; 2,4 Hz), 8,50 (dd, 1H, J=2,4; 0,7 Hz). Tömegspektrum (FAB); m/e (relatív intenzitás) 462 (100, M+1), 432(10), 233(42).
4. példa
3-Hidroxi-propil-[6-/2-propenil-hidrazon/]nikotinát
6-/2-Propenil-hidrazon/-nikotinsav (3,08 g,
15.5 mmol) és kálium-karbonát (5,4 g, 39 mmol) keverékéhez DMF-ban (20 ml) 3-bróm-1-propanolt (2,58 g,
18.6 mmol) adunk. A reakcióelegyet argongáz alatt 70 °C-on 16 órán át keverjük. Az oldatot lehűtjük és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot etil-acetátban (100 ml) oldjuk és vízzel extraháljuk (2*50 ml). A szerves fázist szárítjuk (Na2SO4) és bepároljuk. A kapott pirosas szilárd anyagot oszlopkromatográfiával tisztítjuk [szilikagél; metilén-klorid/metanol (95:5)] és fehér, szilárd anyagot izolálunk (2,3 g, 60%).
HU 226 459 Β1 (4) képletű vegyület szintézise [3-piridinkarbonsav, 6-propilidén-hidrazino-3[/bróm-acetil/-oxi]-propil-észter]
3-Hidroxi-propil-[6-/2-propenil-hidrazon/]-nikotinát (150 mg, 0,6 mmol) és vízmentes nátrium-karbonát (127 mg, 1,20 mmol) száraz metilén-kloriddal (20 ml) készült oldatához argongáz alatt cseppenként, 0-5 °C-on bróm-acetil-bromidot (112 mg, 0,60 mmol) adunk. A reakciókeveréket 0-5 °C-on 1 órán át, majd szobahőmérsékleten 1 órán át keverjük. A szilárd anyagot leszűrjük és metilén-kloridos hígítás (50 ml) után a szűrletet vízzel (25 ml) extraháljuk. A szerves fázist szárítjuk (Na2SO4) és csökkentett nyomáson bepároljuk. Gumiszerű, szilárd anyagot kapunk.
Preparatív TLC [1000 μιτι szilikagél lemez, etil-acetát/hexán (2:1) eluens] útján fehér, szilárd terméket izolálunk (120 mg, 54%).
1H-NMR (CDCI3) delta 1,16 (t, 3H, J=7,5 Hz), 2,15 (m,
2H, J=6,3 Hz), 2,36 (m, 2H, J=7,6 Hz), 3,84 (s, 2H),
4,34 (t, 2H, J=6,2 Hz), 4,41 (t, 2H, J=6,3 Hz), 7,31 (d, 1H, J=10,4 Hz), 7,33 (t, 1H), 8,18 (dd, 1H,
J=2,2; 9,1 Hz), 8,66 (d, J=2,2 Hz).
Tömegspektrum (FAB); m/e (relatív intenzitás); 374 (100, M+1), 372 (100, M+1), 294 (25), 176(52),
121(46).
5. példa
5- /2-tiopiridil/-/L/-cisztein-hidroklorid
E diszulfidot Chong P. C. S. és Hdges R. S. eljárása szerint szintetizáljuk [J. Bioi. Chem. 256, 5064 (1981)].
6- /BOC-hidrazino/-nikotinamido-[S-/2-tiopiridil/]-/L/-cisztein
5- /2-Tiopiridil/-/L/-cisztein-hidroklorid (369 mg, 1,37 mmol), telített vizes NaHCO3-oldat (5 ml) és víz (3 ml) oldatához dioxánban (5 ml) oldott szukcinimidil6-/BOC-hidrazino/-piridin-5-karboxilátot (500 mg, 1,42 mmol) adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 2,5 órán át keverjük. Vizet adunk hozzá és a vizes oldatot etil-acetáttal mossuk a nem reagált észter eltávolítása céljából. A vizes fázist NaCI-dal telítjük és pH=3,7-ig megsavanyítjuk. A vizes oldatot etil-acetáttal extraháljuk (2*25 ml). Az egyesített szerves kivonatokat MgSO4 felett szárítjuk, szűrjük és bepároijuk. 611 mg ragadós fehér agyagot kapunk. A lombikhoz étert adunk és a szilárd anyagot lekaparjuk a faláról. Szűréssel a várt terméket izoláljuk fehér, szilárd anyag formájában (550 mg, 82%).
(5) képletű vegyület szintézise
6- Hidrazino-nikotinamido-S-/2-tiopirídil/-/L/-ciszteinhidroklorid
Hidrogén-klorid-gázt dioxánban oldunk oly módon, hogy vízmentes dioxánba mérsékelt sebességgel, 5 percen át hidrogén-kloridot vezetünk be. A hidrogénklorid/dioxán oldathoz (5 ml) 6-/BOC-hidrazino/-nikotinamido-[S-/2-tio-piridil/]-/L/-ciszteint (50 mg) adunk. A reakciókeveréket szobahőmérsékleten 2 órán át keverjük és fehér csapadék képződik. Az oldószert csökkentett nyomáson lepároljuk és a maradékot nagyvákuumban szárítva 35 mg fehér, amorf anyagot kapunk.
1H-NMR delta: 3,30 (m, 2H), 4,65 (m, 1H), 6,93 (d, 1H, J=8,6 Hz), 7,25 (m, 1H), 7,75 (m, 1H), 8,15 (d, 1H, J=8,6 Hz), 8,45 (d, 1H), 8,70 (s, 1H), 9,05 (d, 1H).
Tömegspektrum (FAB); m/e, 366, 351, 257, 223, 202, 179.
6. példa
5- /2-Tio-5-nitro-piridil/-/L/-cisztein-hidroklorid
4- Nitro-piridin-diszulfidot (1,98 g, 6,34 mmol) adunk
DMF-hez (10 ml) és az oldódás elősegítése céljából a keveréket melegítjük. Az oldatot lehűtjük szobahőmérsékletre és /L7-cisztein-hidroklorid (0,5 g, 3,17 mmol) DMF-dal (6 ml) készült oldatát adjuk hozzá. A reakciókeverék élénk sárga lesz és szobahőmérsékleten 16 órán át keverjük. A képződött kis mennyiségű csapadékot szűréssel eltávolítjuk. A szűrletet bepárolva sűrű, sárgásbarna olaj képződik, melyből diklór-metános kezelés után sárga csapadék lesz. A csapadékot szűréssel izoláljuk. A szilárd anyagot metanolban oldjuk enyhe melegítés közben és a fehér oldhatatlan anyagot szűréssel eltávolítjuk. A szűrletet éterrel kezelve csapadék válik ki. A sárga, szilárd anyagot szűréssel izolálva 240 mg várt terméket kapunk. Az eredeti diklór-metános szűrietből további 120 mg termék keletkezik. A teljes hozam 360 mg (39%).
6- /BOC-hidrazino/-nikotinamido-S-/2-tio-5-nitropiridil/-/L/-cisztein
5- /2-Tio-5-nitro-piridil/-/L/-cisztein-hidrokloridot (220 mg, 0,70 mmol) telített vizes nátrium-hidrogénkarbonát-oldatban oldunk (5 ml), dioxánnal (5 ml) készült szukcinimidil-6-/BOC-hidrazino/-nikotinát (246 g, 0,7 mmol) oldatot adunk hozzá és a reakciókeveréket szobahőmérsékleten 3 órán át keverjük. Vizet (25 ml) adunk hozzá és a vizes oldatot etil-acetáttal mossuk a nem reagált észter eltávolítása céljából. A vizes fázist 1 n HCI-oldattal pH=3,3-ig megsavanyítjuk, majd NaCIdal telítjük. A savas vizes oldatot etil-acetáttal (2*35 ml) extraháljuk. Az egyesített szerves kivonatokat MgSO4 felett szárítva, szűrve és bepárolva 145 mg sárga, szilárd anyagot kapunk, amelyet éterben szuszpendálunk és szűrés útján izolálunk. 35 mg várt terméket kapunk. A szűrletet bepárolva és éter/hexán eleggyel kezelve további 95 mg termékhez jutunk. A teljes kitermelés 125 mg (35%).
(6) képletű vegyület szintézise
6- /Hidrazino-nikotinamido-S-/2-tio-5-nitropiridil/-/L/-cisztein-hidroklorid Hidrogén-klorid-gázt vízmentes dioxánban oldunk oly módon, hogy a vízmentes dioxánba 5 percen át, mérsékelt sebességgel hidrogén-klorid-gázt vezetünk be. A hidrogén-klorid/dioxán oldathoz (5 ml) 6-/BOChidrazino/-nikotinamido-S-/2-tio-5-nitro-piridil/-/L/-ciszteint (50 mg) adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 2 órán át keverve fehér csapadék képződik. Az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítva, majd nagyvákuumban megszárítva 25 mg fehér, amorf szilárd anyagot kapunk.
HU 226 459 Β1 1H-NMR delta: 3,30 (m, 2H), 4,66 (m, 1H), 6,92 (d, 1H,
J=9,0 Hz), 8,01 (d, 1H, J=9,0 Hz), 8,12 (d, 1H,
J=8,9 Hz), 8,48 (dd, 1H, J=8,9; 2,7 Hz), 8,64 (s,
1H), 8,03 (d, 1H, J=8,3 Hz), 9,2 (széles s, 1H). Tömegspektrum (FAB); m/e; 411, 391, 363, 335, 307,
293, 277, 257, 201, 185, 171, 157.
7. példa (7) képletű vegyület szintézise /L/-penicillaminból állítjuk elő az 5. és 6. példában leírt kísérleti eljárásokkal.
1H-NMR (DMSO-d6) delta: 1,41 (s, 3H), 1,43 (s, 3H),
4,75 (m, 1H), 6,92 (d, 1H, J=9,1 Hz), 7,20 (m, 1H),
7,79 (m, 2H), 8,14 (dd, 1H, J=9,8; 2,3 Hz), 8,39 (d,
1H,4,0 Hz), 8,54 (s, 1H).
Tömegspektrum (FAB); m/e (relatív intenzitás) 394 (100, M+1).
8. példa
6-/BOC-hidrazino/-nikotinamido-3-propanol
6-/BOC-hidrazino/-nikotinát (350 mg) DMF-dal (4 ml) készült, 0-5 °C-ra lehűtött oldatához keverés közben DMF-ban (2 ml) oldott 3-amino-1-propanolt (90 mg, 1,2 ekv.) adunk. Az elegyet 0-5 °C-on 1 órán át, majd szobahőmérsékleten 16 órán át keverjük. A reakciókeveréket szárazra párolva fehér, szilárd anyag marad vissza, amelyet etil-acetátban (100 ml) oldunk és az oldatot vízzel (2*25 ml) extraháljuk. A szerves fázist szárítjuk (Na2SO4) és csökkentett nyomáson bepároljuk. Fehér, poralakú terméket kapunk (330 mg, 90%).
6-/BOC-hidrazino/-ni köti na mido-3-propa nőit (296 mg, 1 ekv.) és vízmentes nátrium-karbonátot (212 mg, 2 ekv.) vízmentes metilén-kloridban oldunk és keverés közben, argongáz alatt, 0-5 °C-on, cseppenként bróm-acetil-bromidot (200 mg, 1,1 ekv.) adunk hozzá. Az elegyet 0-5 °C-on 1/2 órán át, majd szobahőmérsékleten 2 órán át keverjük. A szilárd anyagot leszűrjük és a szűrletet metilén-kloriddal (50 ml) hígítva vízzel (25 ml) extraháljuk. A szerves fázist szárítjuk (Na2SO4) és csökkentett nyomáson bepároljuk. A kapott halványsárga szilárd terméket szilikagélen oszlopkromatográfiával tisztítjuk, eluensként metilénklorid/metanol (90:10) elegyet használva. Fehér, szilárd anyag formájában a tiszta bróm-acetilezett termékhez jutunk (267 mg, 62%).
(8) képletű vegyület szintézise [Ecetsav, bróm, 3-[{/6-hidrazino-3piridinil/-karbonil}-amino]-propioésztermonohidrobromid]
Etil-acetátos hidrogén-bromid-oldatot állítunk elő oly módon, hogy etil-acetáton (10 ml) vízmentes hidrogén-bromid-gázt vezetünk be 5 percen át, mérsékelt ütemben.
A fenti bróm-acetátot (90 mg) etil-acetátban (1 ml) oldjuk, HBr/etil-acetátot (2 ml) adunk hozzá és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten keverjük. 5 perc múlva az oldat zavarossá válik és csapadék képződik. A keverést 2,5 órán át folytatjuk. A zavaros keveréket leszűrve, éterrel mosva (3*10 ml) és csökkentett nyomáson megszárítva fehér, szilárd anyagot kapunk (65 mg, 71%). 1H-NMR (DMSO-dg) delta: 1,95 (t, 2H, J=6,2 Hz), 3,35 (t, 2H, J=6,2 Hz), 4,15 (s, 2H), 4,20 (t, 2H,
J=6,2 Hz), 6,95 (d, 1H, J=8,8 Hz), 8,15 (dd, 1H,
J=2,4; 8,8 Hz), 8,65 (d, 1H J=2,4 Hz). Tömegspektrum (FAB); m/e (relatív intenzitás) 333 (33,
M+1), 331 (33, M+1), 136(100).
9. példa
3-Hidroxi-propil-6-/BOC-hidrazino/-nikotinát
6-/BOC-hidrazino/-nikotinsav (3,0 g, 11,86 mmoi), kálium-karbonát (2,2 g, 15,9 mmoi) és DMF (20 ml) keverékéhez 3-bróm-1-propanolt (2,0 g, 14,39 mmoi) adunk. A reakcióelegyet argongáz alatt 70 °C-on 16 órán át keverjük. Az oldatot lehűtjük és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A barna maradékot etilacetátban (100 ml) oldjuk és vízzel extraháljuk (2x50 ml). A szerves fázist szárítjuk (Na2SO4) és csökkentett nyomáson bepárolva halványsárga olajat kapunk. Oszlopkromatográfiával [szilikagél, etil-acetát/hexán (3:1) eluens] izolálva fehér, szilárd terméket kapunk (2,28 g, 60%).
A fenti észter-alkohol (935 mg, 3,0 mmoi) és vízmentes nátrium-karbonát (636 mg, 6,0 mmoi) vízmentes metilén-kloriddal (25 ml) készült oldatához keverés közben, argongáz alatt, 0-5 °C-on cseppenként brómacetil-bromidot (290 μΙ, 3,6 mmoi) adunk. A reakcióelegyet 0-5 °C-on 30 percen át, majd szobahőmérsékleten 1 órán át keverjük. A szilárd anyagot leszűrjük és a szűrletet metilén-kloriddal (50 ml) hígítva vízzel (25 ml) extraháljuk. A szerves fázist szárítva (Na2SO4) és csökkentett nyomáson bepárolva barnássárga ragadós nyersterméket kapunk. Oszlopkromatográfiával [szilikagél; etil-acetát/hexán (2:1)] fehér, szilárd anyag formájában tiszta terméket kapunk (0,36 g, 28%).
(9) képletű vegyület szintézise
Dioxános hidrogén-bromid-oldatot készítünk oly módon, hogy dioxánba (10 ml) mérsékelt sebességgel, 5 percen át vízmentes hidrogén-bromid-gázt vezetünk be. A fenti bróm-acetátot (75 mg) dioxánban (2 ml) oldjuk, HBr/dioxánt (2 ml) adunk hozzá és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 2 percen át keverjük. A zavaros keveréket átszűrjük, éterrel (3*10 ml) mossuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. Fehér, szilárd anyagot kapunk (40 mg, 56%).
1H-NMR (D2O) delta; 2,18 (t, 2H, J=6,0 Hz), 4,01 (s,
2H), 4,39 (t, 2H, J=6,0 Hz), 4,44 (t, 2H, J=6,0 Hz),
6,89 (d, 1H, J=9,0 Hz), 8,13 (dd, 1H, J=2,0; 9,2 Hz),
8,62 (d, 1H, J=2,0 Hz).
Tömegspektrum (FAB); m/e (relatív intenzitás) 334 (100, M+1), 332 (100, M+1), 212 (76), 194 (38), 154 (48), 136(45).
10. példa
3-Hidroxi-propil-[/6-BOC-hidrazino/-nikotinamido]-yt-butil-/L/-glutamát
6-/BOC-hidrazino/-nikotinamido-y-terc-butil-/L/-glutaminsav (1,0 g, 2,29 mmoi) és kálium-karbonát
HU 226 459 Β1 (348 mg, 1,1 ekv.) DMF-dal (5 ml) készült oldatához keverés közben 3-bróm-propanolt (227 μΙ, 1,1 ekv.) adunk és a keveréket éjszakán át 55-60 °C-on melegítjük. Az oldatot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk, a maradékot etil-acetáttal és telített vizes nátrium-karbonát-oldattal összerázzuk. A szerves fázist elválasztva és vízzel alaposan mosva, szárítva (Na2SO4) és csökkentett nyomáson bepárolva habos, fehér, szilárd anyagot kapunk. A várt terméket szilikagélen oszlopkromatográfiával tisztítva (eluens: 90% etilacetát hexánban) fehér, szilárd anyagot kapunk (900 mg, 78%).
A fenti terméket (200 mg, 0,40 mmol) és vízmentes nátrium-karbonátot (84 mg, 2,0 ekv.) diklór-metánban (10 ml) oldjuk és argongáz alatt lehűtjük 0 °C-ra. Cseppenként bróm-acetil-bromidot (40 μΙ, 1,2 ekv.) adunk hozzá és a keveréket éjszakán át szobahőmérsékletre hagyjuk felmelegedni. Etil-acetátot (200 ml) adunk hozzá és az oldatot telített vizes nátrium-karbonát-oldattal mossuk, szárítjuk (Na2SO4) és csökkentett nyomáson bepároljuk. A várt terméket szilikagélen oszlopkromatográfiával tisztítva (eluens: 80% etil-acetát hexánban) színtelen olajat kapunk (40 mg, 16%).
(10) képletű vegyület szintézise
A fentebb leírt bróm-acetátot (40 mg, 0,06 mmol) vízmentes dioxánban oldjuk és jeges fürdőn lehűtjük. Az oldaton mintegy 1 percen át (vagy telítésig) hidrogén-bromid-gázt vezetünk át. Az oldatot 0 °C-on 3 percig állni hagyjuk, majd a termék kicsapása céljából étert adunk hozzá. A fehér, szilárd anyagot a lombikban leülepedni hagyjuk és a felülúszó hidrogén-bromid-oldatot Pasteur-pipettával leszívjuk. A szilárd anyagot ezután éterrel dekantálás útján tízszer mossuk és az éter nyomait éjszakán át, csökkentett nyomáson vákuumban lepároljuk. A termék fehér, szilárd anyag (25 mg, 77%).
1H-NMR (D2O) delta: 2,07 (pentett, 2H, J=6,2 Hz),
2,09-2,31 (m, 2H), 2,38 (t, 2H, J=6,9 Hz), 4,02 (s,
2H), 4,25 (t, 2H, J=6,1 Hz), 4,31 (t, 2H, J=5,9 Hz),
4,53 (m, 1H), 6,96 (d, 1H, J=9,3 Hz), 8,06-8,09 (dd,
IH, J=9,3; 2,1 Hz), 8,41 (d, 1H, J=2,0 Hz). Tömegspektrum (FAB); m/e (relatív intenzitás) 463 (100, M+1), 461 (100, M+1), 383(22), 339 (10), 237 (10).
II. példa
2-Karboetoxi-etil-2-piridil-diszulfidot Carlesson és munkatársai eljárása szerint állítunk elő [Biochem. J. 173, 723-737 (1978)].
(11) képletű vegyület szintézise
6-/2-Propenil-hidrazon/-nikotinamido-3-propanolt (190 mg, 0,8 mmol) és 2-karboxi-etil-2-piridil-diszulfidot (163 mg, 1,0 ekv.) tetrahidrofuránban (THF, 10 ml) oldunk, keverés közben, 0 °C-on diciklohexil-karbodiimidet (157 mg, 1,0 ekv.) adunk hozzá és az elegyet 0-5 °C-on 72 órán át keverjük. A kivált fehér csapadékot leszűrjük és a szűrletet csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot etil-acetátban oldjuk és lehűtjük, miközben diciklohexil-karbamid („DCU”) válik ki. Ezt az eljárást megismételjük, amíg az összes karbamid eltávozik. A várt terméket szilikagélen oszlopkromatográfiával tisztítjuk, eluensként 5% metanol/diklór-metán elegyet használva. Etil-acetát/éter elegyből átkristályosítva fehér, szilárd anyag képződik (85 mg, 25%). 1H-NMR (CDCI3) delta: 1,15 (t, 3H, J=7,5 Hz), 1,95 (pentett, 2H, J=6,0 Hz), 2,36 (dq, 2H, J=5,0;
7,6 Hz), 2,80 (t, 2H, J=7,0 Hz), 3,07 (t, 2H,
J=7,0 Hz), 3,50 (m, 2H), 4,04 (t, J=6,0 Hz), 6,51 (széles triplett, 1H, kicserélhető D2O), 7,07-7,12 (m, 1H), 7,17-7,21 (m, 2H), 7,60-7,72 (m, 2H),
7,95-7,99 (dd, 1H, J=8,8; 2,4 Hz), 8,22 (széles s,
1H, kicserélhető D2O), 8,42-8,45 (m, 1H), 8,55 (d,
1H, J=2,4 Hz).
Tömegspektrum (FAB); m/e (relatív intenzitás) 448 (100, M+1), 176(45).
12. példa
6-/BOC-hidrazino/-nikotinamido-2-etántiol
Szukcinimidil-6-/BOC-hidrazino/-nikotinátot (2,0 g,
5,7 mmol) és trietil-amint (0,8 ml, 5,7 mmol) DMF-ban (20 ml) oldunk és az oldathoz 2-amino-etántiol-hidrokloridot adunk (0,65 g, 5,7 mmol). A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 16 órán át keverjük. Az oldatot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot etil-acetátban (100 ml) oldjuk és vízzel (50 ml) extraháljuk. A szerves fázist szárítva (Na2SO4) és csökkentett nyomáson bepárolva fehér, poralakú terméket kapunk (1,19 g, 67%).
6-/BOC-hidrazino/-nikotinamido-2-etántiol (200 mg) és vízmentes nátrium-karbonát (2 ekv.) vízmentes metilén-kloriddal (20 ml) készült oldatához argongáz alatt, keverés közben, 0-5 °C-on cseppenként bróm-acetilbromidot adunk. A reakcióelegyet 0-5 °C-on 30 percen át, majd szobahőmérsékleten 1 órán át keverjük. A szilárd anyagot leszűrjük, metilén-kloriddal (50 ml) hígítjuk, majd vízzel extraháljuk (25 ml). A szerves fázist szárítva (Na2SO4) és csökkentett nyomáson bepárolva világosbarna, szilárd nyersterméket kapunk. Oszlopkromatográfiával [szilikagél; etil-acetát/hexán (2:1)] tisztítva halványsárga tiszta terméket kapunk (110 mg, 41%).
(12) képletű vegyület szintézise [Ecetsav, bróm, 2-[{/6-hidrazino-3piridinil/-karbonil}-amino]-etil-tioészter, monohidrobromid]
Hidrogén-bromidot etil-acetátban oldunk oly módon, hogy vízmentes hidrogén-bromid-gázt 5 percen át, mérsékelt sebességgel etil-acetátba (10 ml) vezetünk be. A fenti BOC-hidrazino-piridin-származékot (22 mg) etilacetátban (1 ml) oldjuk, HBr/etil-acetátot (2 ml) adunk hozzá és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 1 órán át keverjük. A zavaros reakciókeveréket leszűrve 12 mg fehér, szilárd anyagot kapunk (57%).
1H-NMR (DMSO-d6) delta: 3,15 (t, 2H), 3,45 (m, 2H),
4,45 (s, 2H), 6,95 (d, 1H), 8,15 (d, H), 8,65 (s, 1H). Tömegspektrum (FAB); m/e (relatív intenzitás) 335 (42,
M+1), 333 (42, M+1), 185(100).
HU 226 459 Β1
13. példa
5- /2-Pirídil/-S'-/2-amino/-etil-diszulfid-hidrokloríd Aldrithiolt (8,8 g, 0,04 mól) és jégecetet (1,6 ml) metanolban (40 ml) oldunk és cseppenként metanolban (25 ml) oldott 2-amÍno-etántiol-hidrokloridot (2,3 g, 0,02 mól) adunk hozzá. A világossárga oldatot szobahőmérsékleten 16 órán át keverjük. Az oldatot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot metilén-kloriddal (100 ml) keverve és leszűrve fehér, poralakú terméket kapunk (3,6 g, 80%).
6- /2-Propenil-hidrazon/-N-/2-piridilditioetil/-nikotinamid [(II) általános képletű vegyület] 6-/2-propenil-hidrazon/-nikotinátot (590 mg,
2,0 mmol) és trietil-amint (0,6 ml) DMF-ban (20 ml) oldunk és 2-piridil-ditio-amino-etán-hidrokloridot (444 mg, 2 mmol) adunk hozzá. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 16 órán át keverjük. Az oldatot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot etilacetátban (100 ml) oldjuk és vízzel (2*50 ml) extraháljuk. A szerves fázist szárítva (Na2SO4) és csökkentett nyomáson bepárolva fehér, poralakú terméket kapunk (650 mg, 90%).
1H-NMR (DMSO-dg) delta: 1,02 (t, 3H), 2,25 (q, 2H, 3,05 (t, 2H), 3,55 (m, 2H), 7,05 (d, 1H), 7,25 (m, 1H), 7,45 (t, 1H), 7,85 (m, 2H), 7,95 (d, 1H), 7,55 (m, 3H).
A fenti diszulfid (361 mg, 1,0 mmol) és jégecet (20 pl) DMF-dal (10 ml) készült oldatához cseppenként DMF-ban (2 ml) oldott merkapto-propionsavat (106 mg, 1,0 mmol) adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 16 órán át keverjük. Az oldatot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot metilén-kloriddal (10 ml) triturálva és leszűrve fehér, poralakú terméket kapunk (208 mg, 58%).
(13) képletű vegyület szintézise A fenti savat (108 mg, 0,30 mmol) és N-hidroxiszukcinimidet (35 mg, 0,30 mmol) DMF-ban (5 ml) oldjuk és 0 °C-on diciklohexil-diimidet (472 mg, 2,3 mmol) adunk hozzá. Az elegyet 4 °C-on 16 órán át keverjük. A kivált szilárd anyagot (DCU) leszűrjük és az oldatot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot etil-acetátban (100 ml) oldjuk és telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal (50 ml), sóoldattal (50 ml) és vízzel (50 ml) extraháljuk. A szerves fázist szárítva (Na2SO4) és csökkentett nyomáson bepárolva fehér, szilárd terméket kapunk (1,28 g, 92%).
A fenti BOC-hidrazino-piridil-glutamil-diszulfid (606 mg, 10 mmol) és jégecet (100 μΙ) etanollal (25 ml) készült oldatához cseppenként etanolban (10 ml) oldott 3-merkapto-propionsavat (106 mg, 1,0 mmol) adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 16 órán át keverjük. Az oldatot csökkentett nyomáson szárazra párolva sárga, szilárd anyag képződik. Oszlopkromatográfiával tisztítva [szilikagél; metilén-klorid/metanol (3:2) elegy és ecetsav (az eluátum 4%-a)] tisztítva fehér, szilárd terméket kapunk (302 mg, 50%).
BOC-hidrazino-piridin-diszulfidsav (170 mg,
0,28 mmol) és N-hidroxi-szukcinimid (33 mg, 0,29 mmol) DMF-dal (5 ml) készült oldatához 0 °C-on DCC-t (58,4 mg, 0,28 mmol) adunk. A reakcióelegyet 4 °C-on 16 órán át keverjük. A fehér csapadékot (DCU) leszűrjük és a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot etil-acetáttal (25 ml) trituráljuk és átszűrjük. A szűrletet csökkentett nyomáson bepárolva fehér, poralakú terméket kapunk (75 mg, 38%).
(14) képletű vegyület szintézise
Hidrogén-bromidot etil-acetátban oldunk oly módon, hogy etil-acetátba (10 ml) vízmentes hidrogénbromid-gázt vezetünk be 5 percen át, mérsékelt sebességgel. 6-BOC-hidrazino-glutamil-diszulfidot (30 ml) etil-acetátban (1 ml) oldunk és HBr/etil-acetátot (1 ml) adunk hozzá és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten 20 percen át keverjük. A sűrű szuszpenziót leszűrve és megszárítva fehér, szilárd anyagot kapunk (21 mg, 78%).
1H-NMR (CD3OD) delta: 2,15 (m, 2H), 2,45 (t, 2H),
2,83 (s, 4H), 2,88 (m, 2H), 3,05 (m, 4H), 3,45 (m,
2H), 4,45 (m, 1H), 6,95 (d, 1H), 8,25 (d, 1H), 8,45 (s, 1H).
Tömegspektrum (FAB); m/e (relatív intenzitás) 543 (22,
M+1), 322 /49/, 269 (100), 207 (85).
A biológiai próbák összehasonlíthatósága kedvéért a következő vegyületeket állítjuk elő:
6-/BOC-hidrazino/-3-/N-bróm-acetil/-amino-piridin
3-Amino-6-/BOC-hidrazino/-piridint (1,2 g, 5,4 mmol) és vízmentes nátrium-karbonátot (682 mg, 6,4 mmol) vízmentes acetonitrilben (25 ml) oldunk és keverés közben, argongáz alatt, cseppenként bróm-acetil-kloridot (1,1 g, 6,4 mmol) adunk hozzá 0-5 °C-on. Az elegyet 1/2 órán át 0,5 °C-on és szobahőmérsékleten 3 órán át keverjük.
A reakciókeveréket csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradékot összerázzuk vízzel (50 ml) és etilacetáttal (150 ml). A szerves fázist elkülönítjük, szárítjuk (Na2SO4) és csökkentett nyomáson 25-30 ml térfogatra bepároljuk. A kivált fehér, szilárd anyagot (1,0 g, 54,3%) leszűrjük és megszárítjuk.
1H-NMR (DMSO-d6) delta: 1,39 (s, 9H), 3,99 (s, 2H),
6,45 (d, 1H, J=8,8 Hz), 7,65 (dd, 1H, J=2,4; 8,8 Hz),
8,15 (d, 1H, J=2,4 Hz).
Elemanalízis a C12H17N4BrO3 képlet alapján: számított: C: 41,75 H: 4,96 N: 16,23; Br: 23,15; talált: C:41,87 H: 5,00; N: 16,27; Br: 23,27%.
3-/N-Bróm-acetil/-amino-6-hidrazino-piridinhidrobromid
Dioxános hidrogén-bromid-oldatot állítunk elő oly módon, hogy dioxánon (10 ml) mérsékelt sebességgel, 5 percen át vízmentes hidrogén-bromid-gázt vezetünk át. 6-/BOC-hidrazino/-3-/N-bróm-acetil/-amino-piridint (60 mg) dioxánban (2 ml) oldunk és HBr/dioxánt (2 ml) adunk hozzá, és a reakcióelegyet 30 percen át szobahőmérsékleten keverjük; eközben csapadék képződik. A reakcióelegyet összesen 4 órán át keverve, leszűrve, éterrel (3*25 ml) mosva és csökkentett nyomáson megszárítva fehér, szilárd anyagot kapunk (50 mg, 87,7%). 1H-NMR (D2O) delta: 4,08 (s, 2H), 7,02 (d, 1H,
J=8,8 Hz), 7,85 (dd, 1H, J=4; 8,8 Hz), 8,25 (d, 1H,
J=2,4 Hz).
HU 226 459 Β1
Az EP Ο 384 769 A2 számú európai szabadalmi leírásban közölt szintézis szerint állítunk elő 3-maleimido-6-hidrazino-piridln-hidrokloridot [(16) vegyület].
A találmány szerint további új vegyületeket állítunk elő:
17. példa
3-/Benzil-oxi-acetil-amido/-1 -propanol
3-Amino-1-propanolból (3,0 g, 68,83 mmol), nátrium-hidrogén-karbonátból (14,5 g, 172,6 mmol), vízből (100 ml) és dioxánból (52 ml) álló oldathoz keverés közben, 0,5 °C-on, cseppenként, 4 órán át dioxánban (36 ml) oldott benzil-oxi-acetil-kloridot (19,5 g, 106,0 mmol) adunk. A keveréket etil-acetáttal (3*200 ml) extrahálva és az egyesített szerves fázisokat sóoldattal mosva, szárítva (MgSO4) és csökkentett nyomáson bepárolva a várt termékhez jutunk áttetsző olaj formájában (11,1 g, 72%).
3-/Benzil-oxi-acetil-amído/-1 -propil-/6-BOChidrazinoZ-nikotinát
6-/BOC-hidrazino/-nikotinsav (5,0 g, 19,7 mmol), DMF (25 ml), 3-/benzil-oxi-acetil-amido/-1-propanol (4,4 g, 19,74 mmol) és 4-/dimetil-amino/-piridin (2,48 g, 19,74 mmol) oldatához cseppenként, 0 °C-on DMFban (10 ml) oldott DCC-t (4,48 g, 21,71 mmol) adunk és az elegyet 16 órán át keverjük. Az oldatot etil-acetáttal (250 ml) hígítjuk és a szilárd anyagot leszűrjük. A szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk és az olajos maradékot összerázzuk etil-acetáttal (200 ml) és telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal (30 ml). A szerves réteget elkülönítjük, szárítjuk (MgSO4) és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A terméket oszlopkromatográfiával (szilikagél; etil-acetát) tisztítva fehér, szilárd anyagot kapunk (5,1 g, 56%).
3-Hidroxi-acetil-amido/-1-propil-6-/BOChidrazinoZ-nikotinát
Aktív szénre leválasztott palládium (Aldrich 10%, 1,0 g) és metanol (16 ml) szuszpenziójához 3-benziloxi-acetil-amido/-1-propil-/6-BOC-hidrazino/-nikotinátot (1,6 g, 3,48 mmol) és ammónium-formiátot (1,1 g, 17,44 mmol) adunk. Az elegyet argongáz alatt 16 órán át erőteljesen keverjük. A szuszpenziót celiten átszűrve és csökkentett nyomáson bepárolva fehér habot kapunk (1,0 g, 78%).
3-Metánszulfonil-oxi-acetil-amido/-1-propil-6-BOChidrazinoZ-nikotinát
3-/Hidroxi-acetil-amido/-1-propil-/6-BOC-hidrazino/-nikotinát (1,0 g, 2,17 mmol) és trietil-amin (0,41 ml, 2,98 mmol) diklór-metánnal (20 ml) készült oldatához cseppenként, keverés közben, 0 °C-on diklór-metánban (5 ml) oldott metánszulfonil-kloridot (0,23 ml, 2,98 mmol) adunk és a reakciókeveréket 0 °C-on 2 órán át tovább keverjük, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot etil-acetátban oldva és vízzel mosva, szárítva (MgSO4) és csökkentett nyomáson bepárolva fehér habot kapunk (1,2 g, 98%).
3-/Bróm-acetil-amido/-1-propH-/6-BOChidrazinoZ-nikotinát
3-/Metánszulfonil-oxi-acetil-amido/-1 -propil-/6-BOC-hidrazino/-nikotinát (1,2 g, 2,68 mmol) acetonos (20 ml) oldatához cseppenként acetonban (30 ml) oldott lítium-bromidot (1,7 g, 26,9 mmol) adunk és a keveréket 1,5 órán át visszafolyatás közben forraljuk. A maradékot lehűtjük szobahőmérsékletre, csökkentett nyomáson bepároljuk és a maradékot etil-acetátban (100 ml) oldjuk és vízzel (3*100 ml) mossuk. A szerves réteget elválasztva, szárítva (MgSO4) és csökkentett nyomáson bepárolva, majd a terméket oszlopkromatográfiával (szilikagél; etil-acetát) tisztítva fehér habot kapunk (0,8 g, 69%).
1H-NMR (CDCI3) delta: 1,47 (s, 9H), 2,00 (pentett, 2H,
J=6,2 Hz), 3,43 (q, 2H, J=6,3 Hz), 3,89 (s, 2H), 4,39 (t, 2H, J=5,9 Hz), 6,73 (d, 1H, J=8,8 Hz), 8,15 (dd,
1H, J=2,2 Hz, 8,7 Hz), 8,82 (d, H, J=2,2 Hz).
3-/Bróm-acetil-amido/-1 -propil-/6-hidrazino/-nikotinát monohidrobromid
3-/Bróm-acetil-amido/-1-propil-/6-BOC-hidrazino/-nikotinát ecetsavval (1 ml) készült oldatához argongáz alatt hidrogén-bromidot (Aldrich, 30 tömeg%, ecetsavas oldat, 1 ml) adunk. A reakcióelegyet 3 percen át keverjük és a termék kicsapása céljából azonnal étert (20 ml) adunk hozzá. 1 percen át keverjük, majd az étert dekantáljuk. A terméket ismételten éterrel mossuk (6-10-szer) és az éter végső nyomait csökkentett nyomáson bepárolva eltávolítjuk. Fehér, szilárd anyagot kapunk (18 mg, 37%).
1H-NMR (DMSO-d6) delta: 1,86 (pentett, 2H,
J=6,5 Hz), 3,22 (q, 2H, J=6,5 Hz), 3,83 (s, 2H), 4,25 (t, 2H, J=6,2 Hz), 6,91 (d, 1H, J=8,8 Hz), 8,14 (dd,
1H, J=2,2 Hz, 8,8 Hz), 8,40 (széles t, 1H, kicserélhető D2O), 8,69 (d, 1H, J=8,8 Hz).
Tömegspektrum (FAB); m/e (relatív intenzitás) 333 (100, M+1), 331 (100, M+1), 253 (15), 194 (43), 178 (20).
18. példa
Az 1. példában leírt eljárást használva a-terc-butil-/L/-glutaminsavból /6-BOC-hidrazino/-nikotinamid-aterc-butil-/L/-glutaminsavat állítunk elő. A 10. példa szerinti eljárással a /6-BOC-hidrazino/-nikotinamid-a-tercbutil-/L/-glutaminsavat α-bróm-acetát segítségével a megfelelő glutaminsav „linker molekulává alakítjuk át.
Eljárás a védőcsoportok végső eltávolítására
Bróm-acetát (100 mg, 0,162 mmol) ecetsavval (2 ml) készült oldatához keverés közben hidrogén-bromidot (Aldrich, 30 tömeg%-os oldat ecetsavban, 1,0 ml) adunk. A reakcióelegyet 3 percen át keverjük, majd a termék kicsapása céljából azonnal dietil-étert (20 ml) adunk hozzá. A fehér, szilárd anyagot a lombikban leülepedni hagyjuk és a felülúszó hidrogén-bromid-oldatot Pasteur-pipettával leszívjuk. E műveletet éterrel tízszer megismételjük és az éter visszamaradt nyomait csökkentett nyomáson történő lepárlással és éjszakán át tartó szárítással távolítjuk el vákuumban. A termék fehér, szilárd anyag (50 mg, 57%).
1H-NMR (MeOH-d4) delta: 2,00 (pentett, 2H,
J=6,3 Hz), 2,09-2,33 (m, 2H), 2,52 (t, 2H,
J=7,3 Hz), 3,95 (s, 2H), 4,15 (t, 2H, J=5,1 Hz), 4,22 (t, 2H, J=6,2 Hz), 4,63 (m, 1H), 6,97 (d, 1H,
HU 226 459 Β1
J=8,6 Hz), 8,21 (dd, 1H, J=2,1; 9,2: Hz), 8,47 (d,
1H, J=2,1 Hz).
Tömegspektrum (FAB); m/e (relatív intenzitás) 463 (100, M+1), 461 (100, M+1), 379 (10), 339 (10), 269 (15).
Izotópjelzési eljárás
A találmány szerinti vegyületeket a C46.3 monoklonális antitest F(ab)’ fragmentumának szulfhidrilcsoportjaihoz kötjük (lásd Chemical Modification of Proteins, Means és Feeney, Holdén Day Inc. 1971). Módosítás után a szabad SH-csoportok hiányát Grassetti és Murray módszerével [Arch. Biochem. Biophys. 119, 41-49 (1967)] mutatjuk ki. A F(ab)’ töredékekre eső szabad hidrazinok számát Abrams és munkatársai leírása szerint hidrazon-képződési próba segítségével határozzuk meg [J. Nucl. Med. 31, 2022 (1990)].
A módosított fehérje radioizotóppal történő jelölését ezután Abrams és munkatársai fent idézett közleménye szerint hajtjuk végre; összehasonlításképpen a 99mTc-ot Bremmer eljárásával közvetlenül kötjük a töredékhez a (15) és (16) képletű két „linker hidrazinomolekulát használva.
Biológiai eloszlás egérben
3-4 hónapos, timusz-irtott csupasz egerekben tumorokat indukáltunk, a hátsó oldalukba 10® LS174T colon-karcinoma sejt befecskendezése útján.
A 99mTc-jelzett konjugátokat a szemüreg mögötti sinuson át fecskendezzük az állatokba. Az egerek
5-50 pg fehérjét és 5,55·10®-3·105 Bq aktivitásban 99mTc-ot kaptak 300 pl foszfátpufferes sóoldatban. Az egerenként befecskendezett mennyiséget a fecskendők súly- és radioaktivitás-vesztesége, és az egér által felvett radioaktivitás alapján határozzuk meg.
A boncolás 4, illetve 22 óra múlva történik. A szerveket analitikai mérlegen lemérjük és radioaktivitásukat gamma-számlálóval határozzuk meg. E mérésekből a szervek aktivitás-eloszlását standardmódszerekkel ál10 lapítjuk meg, az egér vértérfogatát 8%-nak véve. A vérből további aliquotokat veszünk 0,5, illetve 2 óra időpontokban a farmakokinetikai vizsgálatokhoz. A gamma-számlálóval kapott minden értéket a radioaktív bomlással korrigáljuk oly módon, hogy a befecskende15 zett dózis visszatartott aliquotjait és a szerveket egyazon időben számláljuk. A végső adatokat csoportonként 5 egér átlagaként adjuk meg (± standard eltérés) az alábbi táblázatban.
Az 1. és 2. táblázat adataiból világosan kitűnik, hogy a hasítható észterfunkciót tartalmazó „linker molekulák (8., 9., 10. és 17. vegyület) jobb tumorcélzó képességgel rendelkeznek a közvetlenül jelzett, vagy a nem hasítható „linker”-ekkel jelzett molekuláknál (15. és 16. vegyület). A tumor/vér arányok szignifikán25 san nagyobbak a tumorban való visszatartás és a vérből történő gyors clearance kombinációjának köszönhetően, amint ezt a % injektált dózis/g szövet értékek mutatják. A diszulfidalapú linkerek (5. és 7. vegyület) a vérből gyorsan eltávozó konjugátokat eredmé30 nyeznek.
1. táblázat 99mTc-rnal linkeren át, illetve közvetlen úton jelzett C46.3 F(ab)’-bal kezelt tumoros egerek szerv/vér arányai a boncolás időpontjában
Linker 5-Fab' MSR=3,1 Linker 7-Fab’ MSR=0,75 Linker 8-Fab' MSR=1,5 Linker 9-Fab' MSR=2,7
Szerv 4h 22 h 4h 22 h 4h 22 h 4h 22 h
Vér (1,00) (1,00) (1,00) (1,00) (1,00) (1,00) (1,00) (1,00)
Tüdő 0,5910,09 1,3710,40 0,5010,08 0,9010,21 1,0110,27 1,610,49 0,7010,04 1,1110,10
Lép 0,3110,04 1,2810,44 0,3410,04 0,9210,20 0,4210,15 1,6110,19 0,3110,05 1,1610,14
Máj 0,63±0,06 2,5010,78 0,6010,08 1,2810,31 0,6910,21 2,4210,57 0,5910,05 1,8610,34
Vese 54,616,3 282158 13,512,3 61,4114,5 116123 316163 55,916,7 121113
Tumor 1,5810,38 4,4111,34 1,1410,52 2,7710,72 3,0110,46 12,811,4 2,031069 10,912,2
Izom 0,3310,18 0,8010,43 0,2010,11 0,3610,08 0,2010,05 0,2410,05 0,1410,02 0,1810,02
Linker 10-Fab' MSR=4,5 Linker 12-Fab’ MSR=0,87 Linker 17-Fab’ MSR=3,0
Szerv 4h 22 h 4h 22 h 4h 22 h
Vér (1,00) (1,00) (1,00) (1,00) (1,00) (1,00)
Tüdő 0,7510,33 1,4710,11 0,5910,07 0,9010,25 0,7710,13 1,8210,45
Lép 0,3710,16 1,8810,44 0,3810,08 1,0910,36 0,5510,07 3,1410,89
Máj 0,7710,21 4,2011,01 0,7410,18 1,911056 0,7610,04 5,0312,51
Vese 54,614,9 254130 23,515,3 128133 10717 5981200
HU 226 459 Β1
1. táblázat (folytatás)
Linker 10-Fab' MSR=4,5 Linker 12-Fab’ MSR=0,87 Linker 17-Fab’ MSR=3,0
Szerv 4h 22 h 4h 22 h 4h 22 h
Tumor 1,9810,43 15,6±6,1 1,5510,86 3,9712,02 2,1210,81 12,812,3
Izom 0,16±0,03 0,35±0,05 0,3810,18 0,6810,18 0,7310,39 2,4211,15
‘Linker 15-Fab’ MSR=0,62 ‘Linker 16-Fab’ MSR=0,95 ‘Direct Labelled Fab’
Szerv 4h 22 h 4h 22 h 4h 22 h
Vér nincs vizsgálva (1,00) nincs vizsgálva (1,00) (1,00) (1,00)
Tüdő 0,5510,21 1,1210,30 0,7010,11 0,8510,09
Lép 0,4210,08 1,5410,38 0,3710,05 0,7110,10
Máj 0,6510,06 2,7110,56 0,7310,05 1,5310,28
Vese 41,5115,2 155146 69,2114,1 114114
Tumor 2,0010,59 5,0911,06 2,3910,55 4,0211,13
Izom 0,2410,14 0,9510,41 0,1710,04 0,2010,20
Megjegyzések:
1. Minden adat 5 egérből származó átlagérték ± standard eltérés.
2. MSR=moláris szubsztitúciós arány, a Fab’ fragmentumonként beépült hidrazinok száma.
3. ‘Nem hasítható linkerek konjugátjaiból és közvetten jelölésből nyert adatok összehasonlítása.
4. >95% 99mTc kötődik egy Fab’ töredékhez a nukleáris medicinában használatos standard vékonyréteg-kromatográfiás elemzések alapján.
2. táblázat 99mTc-mal linkeren át, illetve közvetlenül jelölt C46.3 Fab'-bal kezelt tumoros egerekben a % injektált dózis/g szövet a boncolás időpontjában
Linker 5-Fab' MSR=3,1 Linker 7-Fab’ MSR=0,75 Linker 8-Fab’ MSR=1,5 Linker 9-Fab’ MSR=2,7
Szerv 4h 22 h 4h 22 h 4h 22 h 4h 22 h
Vér 1,2910,13 0,2310,09 3,1110,73 0,8510,10 1,9510,21 0,2910,02 2,1810,20 0,3510,03
Tüdő 0,7610,11 0,3010,06 1,5010,17 0,7510,12 1,9310,38 0,4710,16 1,5310,08 0,3910,06
Lép 0,4010,02 0,2810,09 1,0510,28 0,7610,07 0,8010,19 0,4710,06 0,6610,12 0,4010,07
Máj 0,8110,10 0,5410,07 1,8310,27 1,0610,13 1,3210,24 0,7010,16 1,2810,07 0,6310,08
Vese 70,116,6 62,3111,3 40,614,0 51,016,2 223127 92,1120,0 121112 41,816,7
Tumor 1,9910,71 0,9610,16 3,4311,57 2,3010,48 5,8711,03 3,7210,58 4,4511,71 3,7410,65
Izom 0,4410,29 0,1810,13 0,5810,23 0,3010,03 0,3910,04 0,0710,02 0,3110,06 0,0610,01
Linker 10-Fab' MSR=4,5 Linker 12-Fab’ MSR=0,87 Linker 17-Fab' MSR=3,0
Szerv 4h 22 h 4h 22 h 4h 22 h
Vér 2,6310,26 0,3510,06 1,9210,42 0,5910,11 1,5510,15 0,2410,09
Tüdő 2,1010,89 0,5110,12 1,1110,20 0,5110,07 1,1810,19 0,4010,03
Lép 1,0310,35 0,6410,12 0,7110,11 0,6210,13 0,8610,14 0,6910,10
Mád 2,1410,46 1,4310,20 1,3710,15 1,0910,17 1,1810,17 1,0510,36
Vese 154H 5 87,6111,5 43,414,6 72,9110,0 167123 127114
Tumor 5,3810,83 5,1811,60 2,8311,41 2,1910,62 3,2911,23 2,8810,57
Izom 0,4410,08 0,1210,01 0,7410,37 0,3910,05 1,1710,69 0,5610,27
HU 226 459 Β1
2. táblázat (folytatás)
*Linker 15-Fab’ MSR=0,62 ‘Linker 16-Fab' MSR=0,95 ‘Direct Labelled Fab’
Szerv 4 h 22 h 4h 22 h 4h 22 h
Vér nincs vizsgálva 2,69±0,29 nincs vizsgálva 0,72±0,12 1,65±0,10 0,35±0,04
Tüdő 1,48±0,57 0,79±0,19 1,15±0,18 0,30±0,03
Lép 1,12±0,10 1,10±0,28 0,62±0,08 0,25±0,04
Máj 1,72±0,17 1,91±0,31 1,21±0,10 0,53±0,10
Vese 104±20 117±23 114±23 40,1±5,8
Tumor 5,25±1,00 3,62±0,72 3,97±1,04 1,41±0,41
Izom 0,62±0,28 0,72±0,40 0,28±0,06 0,07±0,01
Megjegyzések:
1. Minden adat 5 egérből származó átlag ± standard eltérés.
2. Moláris szubsztitúciós arány, a Fab’ fragmentumonként beépült hidrazinok száma.
3. *Nem hasítható linkerek konjugátjaiból és közvetlen jelölésből nyert adatok összehasonlítása.
4. >95% 99mTc kötődik meg Fab’ fragmentumonként, a nukleáris medicinában használatos standard vékonyréteg-kromatográfiás elemzések alapján.

Claims (25)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. (I) általános képletű vegyületek, ahol
    E jelentése alkilidéncsoport vagy két hidrogénatom, és ez utóbbi esetben a vegyület savaddíciós só formájában van jelen,
    J jelentése -CO-NH-, -CO-O-, -CO-S- vagy -NH-CO-csoport,
    T jelentése alkilénlánc vagy ha J jelentése -CO-NH-csoport, akkor T jelentése aminosavmaradék, előnyösen HOOC-(CH2)3-csoport,
    Q jelentése -CO-O-, diszulfid- vagy tioésztercsoport, és
    Z jelentése bróm-acetáto-, maleimido- vagy N-hidroxi-szukcinimidil-észter-csoport, vagy piridil-R’ csoport, ahol R’ hidrogénatom vagy nitrocsoport.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyület, ahol E jelentése legfeljebb 4 szénatomos alkilidéncsoport.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek keretébe tartozó (la) általános képletű vegyület, ahol
    E jelentése az 1. igénypontban megadott,
    R jelentése hidrogénatom vagy metilcsoport,
    R’ jelentése hidrogénatom vagy nitrocsoport.
  4. 4. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek keretébe tartozó (19) képletű vegyület és savadd íciós sói.
  5. 5. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek keretébe tartozó (20) képletű vegyület és savaddíciós sói.
  6. 6. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek keretébe tartozó (21) képletű vegyület és sav30 addíciós sói.
  7. 7. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek keretébe tartozó (22) képletű vegyület és savadd íciós sói.
  8. 8. A 3. igénypont szerinti (I) általános képletű ve35 gyületek keretébe tartozó (23) képletű vegyület és savadd íciós sói.
  9. 9. A 3. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek keretébe tartozó (24) képletű vegyület és savadd íciós sói.
    40
  10. 10. A 3. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek keretébe tartozó (25) képletű vegyület és savadd íciós sói.
  11. 11. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek keretébe tartozó (26) képletű vegyület és sav45 addíciós sói.
  12. 12. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek keretébe tartozó (27) képletű vegyület és savadd íciós sói.
  13. 13. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű ve50 gyületek keretébe tartozó (28) képletű vegyület és savaddíciós sói.
  14. 14. A 3. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek keretébe tartozó (29) képletű vegyület és savadd íciós sói.
    55
  15. 15. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek keretébe tartozó (30) képletű vegyület és savaddíciós sói.
  16. 16. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek keretébe tartozó (31) képletű vegyület és sav60 addíciós sói.
    HU 226 459 Β1
  17. 17. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek keretébe tartozó (32) képletű vegyület és savaddíciós sói.
  18. 18. A 3. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek keretébe tartozó (33) képletű vegyület és sav- 5 addíciós sói.
  19. 19. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek keretébe tartozó (34) képletű vegyület és savaddíciós sói.
  20. 20. Az 1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek keretébe tartozó (35) képletű vegyület és savaddíciós sói.
  21. 21. Konjugátum, amely az előző igénypontok bármelyike szerinti vegyület és egy makromolekula reakcióterméke.
  22. 22. A 21. igénypont szerinti konjugátum, ahol a makromolekula egy immunglobulin vagy annak egy fragmense.
  23. 23. Jelzett makromolekula, amely a 21. vagy a 22. igénypont szerinti konjugátumhoz kapcsolódó fématomot tartalmaz.
  24. 24. A 23. igénypont szerinti jelzett makromolekula, ahol a fém Te vagy Re valamely radioizotópja.
  25. 25. (II) általános képletű vegyület, ahol E jelentése az 1. igénypontban megadott.
HU9501275A 1992-11-05 1993-11-03 Molecule labelling using 2-hydrazinopyridine derivatives HU226459B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB929223168A GB9223168D0 (en) 1992-11-05 1992-11-05 Improvements in molecule labelling
PCT/GB1993/002259 WO1994010149A1 (en) 1992-11-05 1993-11-03 Molecule labelling using 2-hydraninopyridine derivatives

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT72332A HUT72332A (en) 1996-04-29
HU226459B1 true HU226459B1 (en) 2008-12-29

Family

ID=10724568

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9501275A HU226459B1 (en) 1992-11-05 1993-11-03 Molecule labelling using 2-hydrazinopyridine derivatives

Country Status (19)

Country Link
US (1) US5679778A (hu)
EP (1) EP0667859B1 (hu)
JP (1) JP3542597B2 (hu)
KR (1) KR100295545B1 (hu)
AT (1) ATE195730T1 (hu)
AU (1) AU676863B2 (hu)
CA (1) CA2148595C (hu)
DE (1) DE69329293T2 (hu)
DK (1) DK0667859T3 (hu)
ES (1) ES2150950T3 (hu)
FI (1) FI113044B (hu)
GB (1) GB9223168D0 (hu)
GR (1) GR3034883T3 (hu)
HK (1) HK1013420A1 (hu)
HU (1) HU226459B1 (hu)
NO (1) NO305364B1 (hu)
NZ (1) NZ257376A (hu)
PT (1) PT667859E (hu)
WO (1) WO1994010149A1 (hu)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5942210A (en) * 1994-11-15 1999-08-24 Cytogen Corporation Methods for lyoprotecting a macromolecule using tricine
US5919934A (en) * 1997-02-19 1999-07-06 The George Washington University Compounds, compositions, and methods for cancer imaging and therapy
ES2398118T3 (es) 1997-04-30 2013-03-13 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Procedimiento de formación de imágenes de muerte celular in vivo
US6403054B1 (en) * 1997-05-28 2002-06-11 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Ternary ligand complexes useful as radiopharmaceuticals
US6844333B1 (en) * 1999-03-26 2005-01-18 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method of treating atherosclerosis
AU2001247697B2 (en) * 2000-03-22 2006-06-22 Solulink, Incorporated Hydrazine-based and carbonyl-based bifunctional crosslinking reagents
US6686461B1 (en) 2000-03-22 2004-02-03 Solulink Bioscience, Inc. Triphosphate oligonucleotide modification reagents and uses thereof
US7102024B1 (en) 2000-08-01 2006-09-05 Schwartz David A Functional biopolymer modification reagents and uses thereof
US6843980B2 (en) 2001-04-03 2005-01-18 Theseus Imaging, Corp. Methods for using annexin for detecting cell death in vivo and treating associated conditions
EP1381839A4 (en) 2001-04-03 2005-10-12 Univ Leland Stanford Junior METHOD FOR THE IMAGE OF CELL DEOD IN VIVO
GB0130845D0 (en) * 2001-12-22 2002-02-06 James Peter Analysis
US7158353B2 (en) * 2003-11-06 2007-01-02 Seagate Technology Llc Magnetoresistive sensor having specular sidewall layers
JP5107716B2 (ja) * 2004-11-05 2012-12-26 ザ・チルドレンズ・ホスピタル・オブ・フィラデルフィア 分子治療用生分解性リンカー
CN103403011A (zh) * 2011-01-31 2013-11-20 Eth苏黎世公司 三官能交联试剂
JP6415979B2 (ja) 2011-06-03 2018-10-31 スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー ヒドラジノ１ｈ−イミダゾキノリン−４−アミン及びこれから調製された複合体
MX347240B (es) 2011-06-03 2017-04-20 3M Innovative Properties Co Ligadores heterobifuncionales con segmentos polietilenglicol y conjugados modificadores de la respuesta inmunitaria elaborados a partir de los mismos.

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4861869A (en) * 1986-05-29 1989-08-29 Mallinckrodt, Inc. Coupling agents for joining radionuclide metal ions with biologically useful proteins
IL93432A (en) * 1989-02-24 1994-02-27 Johnson Mathey Inc Hydrazines and hydrazides, their conjugates with macromolecules, and such conjugates labeled with metallic ions
US5112953A (en) * 1989-12-29 1992-05-12 Neorx Corporation Radiolabeled proteins for diagnostic or therapeutic use

Also Published As

Publication number Publication date
KR100295545B1 (ko) 2001-09-17
ES2150950T3 (es) 2000-12-16
JPH08502744A (ja) 1996-03-26
KR950704256A (ko) 1995-11-17
FI952141A (fi) 1995-05-04
ATE195730T1 (de) 2000-09-15
NZ257376A (en) 1996-02-27
CA2148595A1 (en) 1994-05-11
DK0667859T3 (da) 2000-10-16
HUT72332A (en) 1996-04-29
AU676863B2 (en) 1997-03-27
JP3542597B2 (ja) 2004-07-14
DE69329293T2 (de) 2000-12-28
FI113044B (fi) 2004-02-27
CA2148595C (en) 2002-05-21
FI952141A0 (fi) 1995-05-04
AU5375594A (en) 1994-05-24
PT667859E (pt) 2001-02-28
WO1994010149A1 (en) 1994-05-11
GR3034883T3 (en) 2001-02-28
GB9223168D0 (en) 1992-12-16
NO951751D0 (no) 1995-05-04
HK1013420A1 (en) 1999-08-27
DE69329293D1 (de) 2000-09-28
EP0667859A1 (en) 1995-08-23
NO305364B1 (no) 1999-05-18
EP0667859B1 (en) 2000-08-23
US5679778A (en) 1997-10-21
NO951751L (no) 1995-06-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2683080B2 (ja) トリ‐アザ大環状化合物及びそれらの金属錯体
HU226459B1 (en) Molecule labelling using 2-hydrazinopyridine derivatives
US5202451A (en) Anchimeric radiometal chelating compounds
JPH07103159B2 (ja) 放射性核種金属キレート
JP2011057686A (ja) Ｐｉ−３キナーゼインヒビタープロドラッグ
JP2006523237A5 (hu)
US5218128A (en) Bifunctional coupling agents and radionuclide labeled compositions prepared therefrom
US4963688A (en) Compounds for site-enhanced delivery of radionuclides and uses thereof
JP2024522200A (ja) トリスリンカー結合二量体化標識前駆体およびそれに由来する放射性トレーサー
HU207293B (en) Process for producing compounds for marking proteines
US4963682A (en) Novel radiopharmaceuticals and chelating agents useful in their preparation
KR100860062B1 (ko) 비오틴의 아미노유도체 및 그의 마크로사이클릭킬레이트제와의 결합물
US5247077A (en) Tri-aza macrocycles and processes for their preparation
NO860981L (no) Radiografisk middel.
US5684135A (en) Conjugate compounds containing aza-macro-cycles and processes for their preparation
US5684137A (en) S3 N chelating compounds for the radiolabeling of ligands, anti-ligands or other proteins
EP0724601A1 (en) S 3n chelating compounds for the radiolabeling of ligands, anti-ligands or other proteins

Legal Events

Date Code Title Description
DGB9 Succession in title of applicant

Owner name: ANORMED INC., CA