FI112472B

FI112472B - Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten substituoitujen atsaheterosyklikarboksyylihappojen valmistamiseksi

Info

Publication number: FI112472B
Application number: FI961239A
Authority: FI
Inventors: Masami Nakane; Masaya Ikunaka; Yuuji Shishido
Original assignee: Pfizer
Priority date: 1993-09-17
Filing date: 1996-03-15
Publication date: 2003-12-15
Also published as: EP0719253B1; DE69433744T2; EP0719253A1; PT719253E; FI961239A7; FI961239A0; WO1995007886A1; ES2217269T3; CA2171637A1; DK0719253T3; ATE265432T1; DE69433744D1; CA2171637C

Description

Λ Λ Γ\ j ·Ί Ο

I \ L‘-J

Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten substituoitujen atsa-heterosyklikarboksyylihappoj en valmistamiseksi

Tekninen ala 5 Tämä keksintö koskee menetelmää uusien ja käyttö kelpoisten substituoitujen atsaheterosyklikarboksyylihappo-jen valmistamiseksi, jotka ovat kiinnostavia lääketieteellisen kemian ja kemoterapian alalla. Tarkemmin se koskee valmistusmenetelmää, jolla saadaan subsituoitujen atsahete-10 rosyklikarboksyylihappojen uusi sarja, mukaan lukien niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat, jotka ovat erityisesti arvokkaita niiden P-ainetta antagonisoivan ominaisuu-tensa vuoksi. Näin ollen nämä aineet ovat käyttökelpoisia hoidettaessa maha-suolikanavan häiriöitä, keskushermosto-15 häiriöitä, tulehdussairauksia, astmaa, kipua, migreeniä ja oksentelua.

Tunnettu tekniikka P-aine on luonnollisesti esiintyvä undekapeptidi, joka kuuluu peptidien takykiniiniryhmään; ja viimeksi mai-20 nittu nimitys johtuu näiden välittömästä stimuloivasta vaikutuksesta sileälihaskudokseen. Tarkemmin P-aine on far-V ‘ maseuttisesti vaikuttava neuropeptidi, jota nisäkkäät tuot- ; \* tavat (ja joka on alunperin eristetty suolesta) ja jolla on ·/ j ominainen aminohappojärjestys, jota D. F. Veber et ai. ovat T : 25 kuvanneet US-patentissa 4 680 283. P-aineen ja muiden taky- ; : ; kiniinien runsas mukanaolo monien sairauksien patofysiolo- giassa on laajasti osoitettu alalla. Esimerkiksi P-aineen on viime aikoina osoitettu liittyvän kivun tai migreenin t välitykseen kuten myös keskushermostohäiriöihin, kuten tus- 30 kaisuuteen ja skitsofreniaan, hengitys- ja tulehdussairauk-siin, kuten astmaan ja nivelreumaan, vastaavasti, sekä ma-v : hasuolikanavan häiriöihin ja sellaisiin sairauksiin, kuin : _ : haavaiseen paksunsuolentulehdukseen ja Chronin tautiin, ; v. jne.

2 Λ Λ C ! ·'] Ο I I i~

On ilmoitettu, että takykiniiniantagonistit ovat käyttökelpoisia allergisia olosuhteita, immunoregulaatiota, verisuonten laajenemista, keuhkoputkien spasmeja, refleksiä tai sisäelinten neuronaalista kontrollia ja Alzheimertyyp-5 pisen vanhuuden tylsistämistä vastaan ja oksentelun ja auringon polttaman ihon hoidossa.

Viime aikoina on tehty joitakin yrityksiä kehittää takykiniiniantagonisteja, esimerkiksi P-aineen vastaisia, jotta voitaisiin tehokaammin hoitaa edellä lueteltuja häi-10 riöitä ja sairauksia.

Julkaisuissa WO 91/09 844 ja WO 93/0 031 kuvataan hyvin erilaisia atsaheterosyklisiä yhdisteitä, jotka ovat takykiniiniantagonisteja kuten P-aineantagonisteja. Kuitenkaan missään näissä julkaisuissa kuvatuissa atsaheterosyk-15 lisissä yhdisteissä ei ole karboksiryhmää atsaheterosykli-sessä renkaassa.

Näissä olosuhteissa esillä olevat keksijät ovat työskennelleet valmistaakseen yhdisteitä, jotka o\^at käyttökelpoisia P-aineen antagonisteina, ja laajojen tutkimus-20 ten jälkeen he ovat onnistuneet syntetisoimaan sarjan yhdisteitä, jotka kuvataan tässä yksityiskohtaisesti.

Esillä olevan keksinnön tarkoituksena on antaa • käyttöön uusia atsaheterosyklikarboksyylihappoja, joilla on g P-ainetta antagonisoivaa aktiivisuutta. Lisäksi keksinnön 2 5 tarkoituksena on myös antaa käyttöön farmaseuttista koostu-musta, joka käsittää substituoituja atsaheterosyklikarbok-; syylihappoja aktiivisena aineosana, maha-suolikanavan häi riöiden, keskushermostohäiriöiden, allergian, tulehdussai-rauksien, astman, kivun, migreenin tai oksentelun hoitami-.···, 30 seksi nisäkkäissä, erityisesti ihmisillä.

* Keksinnön lyhyt esittely V ' Esillä olevan keksinnön avulla saadaan uusia sub- stituoituja atsaheterosyklikarboksyylihappoj a, joilla on ;v, seuraava kemiallinen kaava (I), sekä niiden farmaseuttises- ,·· 35 ti hyväksyttäviä suoloja, 112472 3 R2 HO,C_L---v N-_ R* tx.

i R* jossa kaavassa 10 Y on etyleeni tai propyleeni; -ZR3 on vety; R1 on fenyyli; R2 on vety tai Ci-6-alkyyli ja on kiinnittynyt siihen hiiliatomiin, joka on NZR3:n typpiatomin vieressä; 15 R4 edustaa kaavan (II) mukaista ryhmää X1 20 Π • · jossa X1 on Ci-5-alkoksi, X2 on vety ja X3 on Ci_6-alkyyli tai ' '·' trifluori-Ci-g-alkoksi .

' * 25 Kaavan I mukaista yhdistettä voidaan käyttää myös farmaseuttisessa koostumuksessa maha-suolikanavan häiriöi-·' den, keskushermostohäiriöiden, allergian, tulehdussairauk sien, astman, kivun, migreenin tai oksentelun hoitamiseksi nisäkkäässä; koostumus käsittää terapeuttisesti tehokkaan 30 määrän kaavan (I) mukaista yhdistettä tai sen farmaseutti- i;i sesti hyväksyttävää suolaa yhdessä farmaseuttisesti hyväk- ' syttävän kantajan kanssa.

I I

Lisäksi esitetään menetelmä maha-suolikanavan häi-riöiden, keskushermostohäiriöiden, allergian, tulehdussai-35 rauksien, astman, kivun, migreenin tai oksentelun hoitamiseksi nisäkkäässä, joka menetelmä käsittää terapeuttisesti 4 A A C) / r,; Q I I L '. i 2- tehokkaan määrän kaavan (I) mukaista yhdistettä tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää suolaa, antamisen mainitulle kohteelle.

Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus 5 Tässä selityksessä termiä "alkyyli" käytetään tässä tarkoittamaan suoria tai haaroittuneita hiilivetyketjuradi-kaaleja, joita ovat, näihin rajoittumatta, metyyli, etyyli, n-propyyli, isopropyyli, n-butyyli, isobutyyli, s-butyyli, t-butyyli ja vastaavat; 10 termiä "alkoksi" käytetään tässä tarkoittamaan -0- alkyyliä, joita ovat, näihin rajoittumatta, metoksi, etok-si, propoksi, isopropoksi, n-butoksi, isobutoksi, s-butok-si, t-butoksi ja vastaavat; termiä "halogeeni" käytetään tässä tarkoittamaan 15 fluoria, klooria, bromia ja jodia.

Y:n edullinen merkitys on CH2CHCH2 (so. piperidii-niyhdisteet) tai CH2CH (so. pyrrolidiiniyhdisteet), joissa substituentti -C02H on vastaavasti 5- tai 4-asemassa.

Edullisia tämän keksinnön mukaisia yksittäisiä yh-20 disteitä ovat seuraavat: .,, (2S*, 3S*, 4S*, 5R*) -4-karboksi-3- [N- (5-isopropyyli-2- • * metoksibentsyyli)amino]-5-metyyli-2-fenyylipyrrolidiini ja : 1 (2S*, 3S*, 5S*)-5-karboksi-3-[N-(2-metoksi-5-trifluo- : rimetoksibentsyyli)amino]-2-fenyylipiperidiini.

: 2 5 Kaavan (I) mukaiset yhdisteet muodostavat happoad- •_J : ditiosuoloja. Farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditio- ; ; ; suoloja ovat ne suolat, jotka on muodostettu hapoista, jot ka muodostavat myrkyttömiä happoadditiosuoloja.

i .

5 112472

Keksinnön mukaisesti kaavan (I) mukaiset yhdisteet valmistetaan hydrolysoimalla yhdiste, jolla on kaava

R* H

5 MeOjC-V^Y^^^4

Rl V

H

10 jossa Y, R1, R2 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä.

Seuraavissa reiteissä 1 ja 2 esitettyjä reaktioita voidaan käyttää valmistettaessa esillä olevia yhdisteitä. Reitti 1 R2 R2

15 I H , I H

HOI^C-V^y N — R H02C N — R4 i hapetus f j I \ 2 0 r3 R3 :V: rv i * Reitti 2 25 l' : R2 R2

.·:·. I H 1 H

' ' Me02c —»f—-V. N — R4 H02C —ly—\ N — R4

R1 . Qn-^-RI

. . I hydrolyysx .

.···. 30 i -> i R3 R3 C.: v i , 110/70

Reitti 1 kulkee alkoholin (IV) hapetuksen kautta. Useita alan ammattimiehelle hyvin tunnettuja olosuhteita voidaan soveltaa hapetukseen. Esimerkiksi voidaan käyttää reagensseja kuten KMnCU, K2Cr04, K2Cr207 tai entsymaattisia 5 olosuhteita ja vastaavia.

Reitti 2 kulkee metyyliesterin (V) hydrolyysin kautta. Useita alan ammattimiehelle hyvin tunnettuja olosuhteita voidaan soveltaa hydrolyysiin. Esimerkiksi voidaan käyttää happamia olosuhteita kuten väkevää kloorivetyhappoa 10 refluksointilämpötilassa, alkaalisia olosuhteita, entsy maattisia olosuhteita ja vastaavia.

7 112//2

Kaavio 1 R2

Rl'"'N*'»' RNOK.C

5 ,u 2 * H -* ( I

K - suojaryhmä Rl . vn .

VI h vm R2 Ri 10 N-suo jaus^ R»0^cJr>^ ^Me R'^C ±~y COHH,

Vn^ Rl Rl

Cbz Cbz

IX X

R2 R2 , 5 RllOHjC -4-—x. N™00 RUOHjC ~V~X, ^

Hoffmannin toisiintuminen { I hydrolyysi ( I

R' -R‘

Cbz Cbz

XI

XII

(A) ΟΓ (B) R2 R2 H

20 ^ RHOHjC —V, N- R4 R”OHJcJr-^vN-R4 ( | hydrogenolyysi ( : ^V^R* -" WAri

: . Cbz H

: .· (C)

XI TT XIV

•25 R2

I H

, RllOHjC-V-^yN-R4 ; . alkylointi ( suojaryhmien poistaminen R-^rstä

-k Vm>ri :-► JY

z :' ; R3

[ , 30 XV

: «χί- -Φ} "γ% 35 X1 OHC halogeeni·^ Ql (A) (B) (C)

Kaavio 2 8

Ί Ί ri / :? O

ί I L \ / ^ 5 _,Rl II 4-MeO-CÄH.CH,0 li-v. R» rt —- pfYt ™ + »* R0^-NSi(Me)2Bu.

XVI xvn xvm HO II—N. R1 . a IU R1 DDQ, CH2a2 ^Γ\—f MeSQ2Cl, LiCl^ —f R N,Si(Me)jBu' VS-luliaiini E Vt,,!*·

XIX XX

15 R2 R2 ÖCOjMe | qq w (i-BuOCO)20 = V^V 2 2) Nai, NlHC03, DMF V R> NaHC03aq. ^N^R1 " Boc 20 ™ ΧΧΠ R* R2

: HOHjC _ 1 HOH.C - Y ""V C°2MC

hydroboraatio ( . I I

M' -». Vn>R1 hydrolyysi t VN^ R,

25 hapetus Bo= A

. XXIII XXIV

: : R2 I „_ COjMe :.·. BnOCOCl (Cbz-G) H0Ihc~^ f O-suojaus

30 ^ IX

: : NaHC03aq. £ 9 112472 Lähtöaine (IV) reitissä 1 voidaan syntetisoida kaavion 1 mukaisesti.

Esillä olevan keksinnön mukainen rengas voidaan syntetisoida kytkemällä olefiini (VI) imiinin (VII) kanssa 5 emäksen läsnä ollessa inertissä liuottimessa samalla tavalla kuin kirjallisuudessa (J. Org. Chem., 53, 1384 (1988)). Edullinen liuotin valitaan joukosta tetrahydro-furaani (THF), dioksaani, dimetoksietaani (DME), tolueeni ja vastaavat. Edullinen emäs valitaan joukosta trietyyli-10 amiini (Et3N), 1,8-diatsabisyklo[5,4,0]undek-7-eeni (DBU ja vastaavat. Edullinen lämpötila on välillä 0 °C - huoneenlämpötila.

Kun (VIII) on N-suojattu BnOCOCl:lla (Cbz-Cl) emäksen kuten NaHC03:n tai Et3N:n läsnä ollessa, (IX):n metok-15 sikarbonyylisivuketju muutetaan amidiksi Me3Al-NH4Cl:llä inertissä liuottimessa kuten CH2Cl2:ssa tai bentseenissä välillä huoneenlämpötila - 100 °C. Hoffmannin toisiin- tuminen (X):ssä käyttäen Pb( Ac)4-t-BuOH: ta antaa (XI):n.

(XI) :n hydrolyysi suoritetaan käyttäen HCl-AcOEt:tä, HC1-20 MeOH:ta, CF3C02H:ta ja vastaavia, jolloin saadaan amiini (XII) . R4:n sivuketju viedään paikalleen pelkistävällä al- ; ; : kyloinnilla aldehydillä (A) tai (B) pelkistimen kuten ; : NaBH3CN:n tai NaBH(Ac)3:n läsnä ollessa tai (tio)asyloin- ·'. · nilla käyttäen (C):tä inertissä liuottimessa kuten metano- 25 lissa (MeOH), CH2Cl2:ssa tai Cl(CH2CH2)Cl:ssa (XIII) hydrogenolysoidaan sitten, jolloin saadaan (XIV). Vietäessä -Z-R3 (XIV):ään R11 poistetaan (XV):sta, jolloin saadaan lähtöaine (IV) reitissä 1. Tyypillisissä (XIII) :n hydrogenolyysiolosuhteissa käytetään H2:ta tai >' 30 HC02NH4:ää katalyyttisen määrän Pd-C:tä tai Pd(0H)2-C:tä ja vastaavaa läsnä ollessa, inertissä liuottimessa kuten MeOH:ssa tai etanolissa (EtOH).

Vietäessä -Z-R3 paikalleen voidaan käyttää elektro-fiiliä kuten halogeeni-Z-R3:ää emäksen kuten Et3N:n, KOBu- 1 1 9 / 7 9 10 1 ‘ ‘ 1 ' t:n läsnä ollessa inertissä liuottimessa kuten CH2Cl2:ssa tai C1(CH2CH2 )C1:ssa välillä huoneenlämpötila - 150 °C.

Suo j aryhmän R11 poistamisen olosuhteet riippuvat suojaryhmän R11 luonteesta. Esimerkiksi kun R11 on bentsyy-5 li, voidaan käyttää katalyyttistä hydrogenolyysiä (H2/Pd-C, H2/Pd(OH)2-C, Raney-Ni ja vastaavaa inertissä liuottimessa kuten metanolissa) tai katalyyttistä siirtohydrogenolyysiä (HC02NH4 tai HC02H katalyyttisen määrän H2/Pd-C:tä, H2/Pd-(0H)2-C:tä ja vastaavaa läsnä ollessa, inertissä liuotti-10 messa kuten metanolissa), ja kun R11 on Si(Me)2Bu-t, (nBu). 4NF, (nBu)4NF-AcOH, HF, AcOH ja vastaavaa inertissä liuottimessa kuten THF:ssä tai MeCN:ssä.

Vaihtoehtoinen reitti kaavan 1 mukaisen (IX):n syn-tetisoimiseksi esitetään kaaviossa 2, jolloin käytetään B-15 laktaamivälituotteita. Lähtöaine (XVIII) syntetisoidaan kytkemällä (XVI) ja (XVII). Tämä kytkentäreaktio suoritetaan emäksen kuten LiNEt2:n, LiNPr-i2:n, LiN(SiMe3 )2:n tai NaN(SiMe3)2:n läsnä ollessa inertissä liuottimessa kuten THF:ssä, DME:ssä tai Et20:ssa välillä -100 °C - huoneenläm-20 pötila. Tässä reaktiossa voidaan tarvittaessa käyttää apu-liuotinta kuten DMPUrta tai HMPArta. β-laktaamista (XVIII) poistetaan suojaus hapettavasti ja (XIX):n hydroksiryhmä substituoidaan Cl-ryhmällä. (XX):n β-laktaamirengas muute-: taan sitten esillä olevan keksinnön mukaiseen renkaaseen.

25 4-metoksibentsyyliryhmän suojaryhmän poistaminen vaiheessa (XVIII) - (XIX) suoritetaan samalla tavalla kuten menetel- » mässä, joka on kuvattu julkaisussa Tetrahedron, 42, 3021 (1982), so. DDQ fosfaattipuskurissa (pH 7). Emäksen kuten 2,6-lutidiinin läsnä ollessa inertissä liuottimessa kuten ! ‘ 30 DMF:ssä, MeS02Cl-LiCl sopii (XIX) :n hydroksiryhmän klooraa- miseksi (XX):ksi, kuten on kuvattu julkaisussa J. Org.

. \ Chem., 36, 3044 (1971). Renkaan uudelleenjärjestelyreak- ··, tion (XX) - (XXI) olosuhteet käsittävät metanolyysin HC1-

MeOHtlla ja käsittelyn NaI-NaHC03:11a inertissä liuottimes-’ 35 sa kuten DMFissä refluksointilämpötilassa. Kun NH-ryhmä Λ '] n / ry Γ) n 1 >·' ‘· i i yhdisteessä (XXI) on suojattu t-butyylikarbamaattina käyttäen (t-Bu0C0)20: ta emäksen kuten NaHC03:n läsnä ollessa inertissä vesipitoisessa liuotinsysteemissä, (XXII):n ek-sometyleeniryhmälle suoritetaan hydroboraatio-hapetus, 5 jolloin saadaan (XXIII). Hydroboraatioreagenssi voidaan valita joukosta BH3-SMe2/ BH3-THF, 9-BBN (9-borabisyklo-[3.3.1]nonaani), teksyyliboraani, disiamyyliboraani, kate-koliboraani ja katalyyttinen (PPh3)3RhCl ja vastaavat, inertissä liuottimessa kuten THFrssä, DME:ssä, Et20:ssa tai 10 diglyymissä välillä 0 °C - huoneenlämpötila. Hapetin voidaan valita joukosta 30-%:inen H202, trietyyliamiini-N-ok-sidi, NaBr03 ja vastaavat.

Yhdiste (XXIII) hydrolysoidaan sitten samalla tavalla kuten vaihe (XI) - (XII), ja (XXIV) suojataan NH-15 ryhmän kohdalla Cbz-Cl:llä samalla tavalla kuten vaiheessa (VIII) - (IX). (XXV) :n OH-ryhmä suojataan R11:lla, jolloin saadaan (IX). Kun ryhmä R11 on t-Bu(Me)2Si-, t-Bu(Me)2SiCl:-ää voidaan käyttää emäksen kuten imidatsolin tai Et3N:n läsnä ollessa inertissä liuottimessa kuten DMFtssä tai 20 CH2Cl2:ssa, ja kun ryhmä R11 on bentsyyli (Bn), BnOC(=NH)-CC13-CF3S03H: ta voidaan käyttää inertissä liuottimessa, eri-; i tyisesti CH2Cl2-sykloheksaanissa (1:2). 1 · * t

Kaavio 3 Ί Ί <';· / '7 ο 12 Μ,-//.: R2 HOHjC NHBoe γ| Suojaryhmän poistaminen | T ape us ^ R-stä ^ 5 Cbz

XXVI

R3 R3

Br2 M^C-4-γΝΗΒ~ hydrolyysl 10 Vn^RI MeOH-H20 (9:1) Rl

Cbz Cbz xxvn xxvra

Ri OM ΟΓ (B) r2

MeOjC Jy—McOjC -ly—N- R< Cbz Cbz

xxrx (Q XXX

20 MeO^Jy-x^-R1 hydrokenolyysi^ / Y alkylointi r y : , Η2ογΗ002ΝηΓ R1 R3-Z~ halogeeni ! · Cbz

, : XXXI

25 *^Ar1 1OaJ1 ouJ,^ V-oY χ°Υ X1 OHC halogeeni Q1 äo (A) m (C>

Toisaalta lähtöaine (V) reitissä 2 voidaan syntetisoida kaavion 3 mukaisesti. Kaaviossa 1 kuvatusta yhdisteestä (XI) poistetaan suojaus samalla tavalla kuin vaiheessa (XV) - (iv) kaaviossa 1, jolloin saadaan alkoholi 35 (XXVI). Alkoholi (XXVI) hapetetaan aldehydiksi (XXVII),

1 1 9 /; 7 O

13 I I /- , / z..

joka sitten altistetaan hapettavalle esteröinnille. PCC, PDC, S03.Py tai (C0C1)2 voidaan käyttää hapettimena iner-tissä liuottimessa kuten CH2Cl2:ssa tai DMSOrssa. Emästä kuten Et3N:ää voidaan tarvittaessa lisätä tähän hapetusre-5 aktioon. Konversiosta aldehydistä (XXVII) esteriksi (XXVIII) käytetään tyydyttävästi Br2 Me0H-H20:ssa (9:1). Boc-ryhmän poistaminen (XXVIII):sta suoritetaan samalla tavalla kuten vaiheessa (XI) - (XII). Sivuketju R4 viedään paikalleen syntyneeseen amiiniin (XXIX) reaktiolla (A):n, 10 (B):n tai (C):n kanssa samalla tavalla kuten vaiheessa (XII) - (XIII). Cbz-ryhmä yhdisteessä (XXX) poistetaan samalla tavalla kuten vaiheessa (XIII) - (XIV). Lopuksi -Z-R3 voidaan viedä (XXXI):een samalla tavalla kuten vaiheessa (XIV) - (XV), jolloin saadaan lähtöaine (V) reitis-15 sä 2.

Siinä tapauksessa, että valmistetaan substituoitu bentsaldehydi (A) kaaviossa 2 ja kaaviossa 3, voidaan käyttää alan ammattimiehen hyvin tuntemia standardimenetelmiä (substituoidun alkoksibentseenin formylaatio) kir-20 jallisuuden mukaan seuraavasti. (1) Duffin reaktio (heksa-metyleenitetramiini/TFA), Synth. Commun., 15, 61 (1985), : : (2) TiCl4/dikloorimetyylimetyylieetteri, J. Org. Chem., 51, • : 4073, (1986), (3) kaksivaiheinen menetelmä, jossa käyte- : tään kloorimetylointia (HC1, HCHO) ja hapetusta 2-nitro- 25 propaanilla ja NaOMeilla), JP-58-501 127 ja (4) J. Am.

Chem. Soc., 2466, (1955). Lisäksi, jotta voitaisiin val mistaa substituoitu bentsaldehydi, voidaan käyttää halo-geenisubstituoidun alkoksibentseenin Pd-katalysoitua kyt-kentäreaktiota, joka on kuvattu seuraavassa kirjallisuu-: 30 dessa: (5) Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 25, 508 (1986), J.

- : K. Stille et ai., (6) J. Org. Chem., 53, 1170 (1988), J.

. K. Stille et ai., Tetrahedron Lett., 4467 (1975), K. Sono- ··, gashira et ai., (8) Synthesis, 627 (1980), N. Hagihara et ai.

Λ 1 / v O

14 I I / . / /-.

Yhdisteet (B) ja (C) kaavioissa 2 ja 3 voidaan syntetisoida samalla tavalla kuten on kuvattu julkaisussa W0 93/09 116.

Yleisen synteesin reaktio monitoroidaan helposti 5 ohutkerroskromatografisesti (TLC). Reaktioaika on yleensä muutamasta minuutista useisiin tunteihin. Yhdisteet voidaan eristää ja puhdistaa tavanomaisin menetelmin kuten uudel-leenkiteytyksellä ja kromatografiällä.

Koska tämän kaavan (I) mukaisissa substituoiduissa 10 atsaheterosyklikarboksyylihapoissa on monta asymmetristä keskusta, ne voivat esiintyä eri stereoisomeerimuodoissa tai konfiguraatioissa. Esillä olevan keksinnön on tarkoitus käsittää kaikki tällaiset muodot piirissään. Esimerkiksi diastereomeeriset seokset voidaan erottaa alan ammattimie-15 hen hyvin tuntemin menetelmin, esim. jakokiteyttämällä ja vastaavilla menetelmillä, kun taas raseemiset seokset voidaan erottaa orgaanisen kemian standardiresoluutiomenetel-millä.

Koska kaikki tämän keksinnön mukaisesti valmistetut 20 substituoidut atsaheterosyklikarboksyylihapot ovat emäksi siä yhdisteitä, ne voivat kaikki muodostaa monia erilaisia * suoloja erilaisten epäorgaanisten ja orgaanisten happojen • /·' kanssa.

; Vaikka tällaisten suolojen tulee olla farmaseutti- ; ; 25 sesti hyväksyttäviä eläimille antoa varten, usein on toi- . vottavaa käytännössä eristää aluksi substituoidut atsahete- rosyklikarboksyylihapot reaktioseoksesta farmaseuttisesti ei-hyväksyttävänä suolana ja sitten yksinkertaisesti muut-,t ; taa vapaaksi emäsyhdisteeksi käsittelemällä emäksisellä t t 3 0 reagenssilla, ja tämän jälkeen muuttaa vapaa emäs far- 'maseuttisesti hyväksyttäväksi happoadditiosuolaksi . Kaavan : I happoadditiosuolat voidaan helposti valmistaa käsittele- ; mällä emäsyhdistettä oleellisesti ekvivalenttimäärällä va- littua mineraali- tai orgaanista happoa vesipitoisessa liu-\ 35 ottimessa tai sopivassa orgaanisessa liuottimessa, kuten 1 1 r; / r7 n

15 ' 1· / Z

metanolissa tai etanolissa. Liuottimen varovaisen haihduttamisen jälkeen saadaan helposti haluttu kiinteä suola.

Hapot, joita käytetään edellä mainittujen kaavan I mukaisten emäksisten yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyt-5 tävien happoadditiosuolojen valmistamiseen, ovat niitä, jotka muodostavat myrkyttömiä happoadditiosuoloja, eli suoloja, so. suoloja, jotka sisältävät farmaseuttisesti hyväksyttäviä anioneja, kuten hydrokloridi, hydrobromidi, hydro-jodidi, nitraatti, sulfaatti tai bisulfaatti, fosfaatti tai 10 happofosfaatti, asetaatti, laktaatti, sitraatti tai hap-positraatti, tartratti tai bitartraatti, sukkinaatti, male-aatti, fumaraatti, glukonaatti, sakkaraatti, bentsoaatti, metaanisulfonaatti, bentseenisulfonaatti, p-tolueenisulfo-naatti ja pamoaatti (so. 1,1’-metyleeni-bis(2-hydroksi-3-15 naftoaatti))-suolat.

Kaavan I mukaiset substituoidut atsaheterosyklikar-boksyylihapot, joissa on myös happamia ryhmiä, voivat muodostaa emässuoloja erilaisten farmaseuttisesti hyväksyttävien kationien kanssa. Esimerkkejä tällaisista suoloista 20 ovat alkalimetalli- tai maa-alkalimetallisuolat ja erityi sesti natrium- ja kaliumsuolat. Nämä suolat valmistetaan ’ kaikki tavanomaisin menetelmin.

* \: Kemialliset emäkset, joita käytetään reagensseina */·; kaavan I mukaisten yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttä- •:·‘: 25 vien emässuolojen valmistamiseksi, ovat niitä, jotka muo- ; dostavat myrkyttömiä suoloja tässä kuvattujen subsituoitu- jen atsaheterosyklikarboksyylihappoj en kanssa. Tällaisia erityisiä myrkyttömiä emässuoloja ovat suolat, jotka on .. . johdettu farmaseuttisesti hyväksyttävistä kationeista, ku- 30 ten natrium, kalium, kalsium ja magnesium jne. Nämä suolat voidaan valmistaa helposti käsittelemällä edellä mainittuja ! : substituoituja atsaheterosyklikarboksyylihappoja vesiliuok- sella, jossa on haluttuja farmaseuttisesti hyväksyttäviä ; kationeja, ja sen jälkeen haihduttamalla syntynyt liuos 35 kuiviin, edullisesti alennetussa paineessa. Vaihtoehtoises-

Λ Λ f; ‘ O

16 I i Z \ / L

ti ne voidaan valmistaa myös sekoittamalla happamien yhdisteiden alempia alkaaniliuoksia ja sopiva alkalimetallial-koksidi yhteen ja sen jälkeen haihduttamalla syntynyt liuos kuiviin samalla tavoin kuin edellä. Kummassakin tapauksessa 5 käytetään edulliseti stökiometrisiä määriä reagensseja, jotta varmistuttaisiin reaktion loppuunmenemisestä ja halutun lopputuotteen mahdollisimman hyvästä saannosta.

Kaavan (I) mukaisilla subsituoiduilla atsahetero-syklikarboksyylihapoilla ilmenee merkittävää P-aineresep-10 toriin sitoutumisaktiivisuutta, ja siten ne ovat arvokkaita hoidettaessa monia erilaisia kliinisiä tiloja nisäkkäillä, joille on luonteenomaista mainitun P-aineaktiivisuuden ylimäärän läsnäolo. Tällaisia tiloja ovat maha-suolikanavan häiriöt, kuten vatsahaava ja paksunsuolentulehdus sekä muut 15 vastaavat ruoansulatuskanavan sairaudet; keskushermostohäi riöt, kuten tuskaisuus ja psykoosi; tulehdussairaudet, kuten nivelreuma ja tulehduksellinen suolisairaus; hengitysteiden sairaudet, kuten astma; oksentelu; auringon polttama iho; virtsan pidätykyvyttömyys; angiogeneesi; ja kipu, mu-20 kaan lukien migreeni. Siten nämä yhdisteet ovat helposti sovellettavissa terapeuttiseen käyttöön P-aineen antagonis-y · teinä säätelemään ja/tai hoitamaan mitä tahansa edellä mai- • \> nittua kliinistä tilaa nisäkkäissä, ihminen mukaan lukien.

: Radioaktiivisesti leimatut kaavan (I) mukaiset sub- ·; = · 25 situoidut atsaheterosyklikarboksyylihapot ovat käyttökel poisia tutkimus- ja diagnostisina työvälineinä aineenvaih-, ;·, dunnan farmakokineettisissä tutkimuksissa ja lääkeaineen sitoutumiskokeissa sekä eläimessä että ihmisessä. Erityisiä sovelluksia tutkimusalalla ovat radioaktiivisten ligandien 30 sitoutumiskokeet, autoradiografiatutkimukset ja in vivo si-toutumiskokeet, kun taas erityisiä sovelluksia diagnosti-: : sella alueella ovat P-aineen reseptoritutkimukset ihmisai- voissa, kuten ylös/alas-säätely sairaustiloissa, sekä in vivo sitoutuminen relevanteissa kudoksissa, tutkittaessa ’ 35 tulehdusta, esim. immuunityyppisessä solussa tai soluissa, Λ Ί r' / 7 Γ· 17 I I /:. · / .·:.

jotka liittyvät suoraan suolen tulehdushäiriöihin, ja vas-taavissaa tapauksissa. Erityisesti subsituoitujen atsahete-rosyklikarboksyylihappojen radioaktiivisesti leimatut muodot ovat tämän keksinnön subsituoitujen atsaheterosyklikar-5 boksyylihappojen tritium- ja 14C-isotooppeja.

Edellä kuvatut kaavan (I) mukaiset subsituoidut at-saheterosyklikarboksyylihapot voidaan antaa nisäkkäälle, esim. ihmiselle joko suun kautta, ruoansulatuskanavan ulkopuolelle tai paikallisesti. Yleensä nämä yhdisteet annetaan 10 tyypillisesti ihmiselle annoksina, jotka vaihtelevat välillä noin 1 mg - 300 mg vuorokaudessa. Vaihteluja luonnollisesti ilmenee, riippuen hoidettavan potilaan painosta ja tilasta sekä erityisen yhdisteen aktiivisuudesta. Kuitenkin annostasoa, joka on välillä noin 0,06 - noin 6 mg/kg ruu-15 miinpainoa kohden vuorokaudessa, käytetään edullisimmin hoidettaessa tulehdussairauksia tai vastaavia ihmisellä. Esillä olevan keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet voidaan antaa sellaisinaan tai yhdistelmänä farmaseuttisesti hyväksyttävien kantajien ja laimentimien kanssa jollakin 20 edellä mainituista kolmesta antotavasta, ja tällainen anto voidaan suorittaa yksittäisenä tai monina annoksina, v : Tarkemmin uudet terapeuttiset aineet voidaan antaa monissa • ’,· eri lääkemuodoissa, so. ne voidaan yhdistää erilaisten : .: farmaseuttisesti hyväksyttävien inerttien kantajien kanssa >· 25 tableteiksi, kapseleiksi, pastilleiksi, suussa liukene- ; viksi tableteiksi, koviksi karamelleiksi, jauheiksi, suih- ·., keiksi, emulsiovoiteiksi, salvoiksi, peräpuikoiksi, hyy telöiksi, geeleiksi, tahnoiksi, huuhtelunesteiksi, voi-.. teiksi, vesisuspensioiksi, injektioliuoksiksi, eliksiireik- 30 si, siirapeiksi ja vastaaviksi. Tällaisia kantajia ovat kiinteät laimentimet tai täyteaineet, steriilit vesipitoi-: ; ; set väliaineet ja erilaiset myrkyttömät orgaaniset liuotti- ;" ; met jne. Lisäksi suun kautta annettavat farmaseuttiset koostumukset voidaan sopivasti makeuttaa ja/tai niihin voi-35 daan lisätä makua. Yleisesti tämän keksinnön mukaisesti η Ί C) ''/ Ο 18 1 1 *· ' ' ί *-· valmistettuja terapeuttisesti vaikuttavia yhdisteitä esiintyy tällaisissa lääkemuodoissa konsentraatiotasoilla, jotka vaihtelevat välillä noin 5,0 % - noin 70 paino-%.

Suun kautta tapahtuvassa annossa voidaan käyttää 5 tabletteja, jotka sisältävät erilaisia täyteaineita, kuten mikrokiteistä selluloosaa, natriumsitraattia, kalsiumkarbo-naattia, dikalsiumfosfaattia ja glysiiniä, yhdessä erilaisten hajottavien aineiden, kuten tärkkelyksen ja edullisesti maissi-, peruna- tai tapiokatärkkelyksen kanssa, alginiini-10 hapon ja tiettyjen silikaattikompleksien kanssa, yhdessä rakeistuksen sideaineiden, kuten polyvinyylipyrrolidonin, sakkaroosin, gelatiinin ja akaasian kanssa. Lisäksi liukas-tusaineet, kuten magnesiumstearaatti, natriumlauryylisulfaatti ja talkki ovat usein hyvin käyttökelpoisia table-15 tointitarkoituksissa. Samantyyppisiä kiinteitä koostumuksia voidaan myös käyttää täyteaineina gelatiinikapseleissa; edullisia aineita tässä yhteydessä ovat laktoosi tai maitosokeri, kuten myös korkean molekyylipainon omaavat polyety-leeniglykolit. Kun halutaan suun kautta annettavia vesisus-20 pensioita ja/tai eliksiirejä, vaikuttava aineosa voidaan yhdistää erilaisten makeutus- tai makuaineiden, värjäävien *.· · tai väriaineiden, ja haluttaessa emulgointi- ja/tai suspen- • dointiaineiden kanssa, kuin myös laimentimien, kuten veden, : \: etanolin, propyleeniglykolin, glyserolin ja näiden erilais- •;· I 25 ten yhdistelmien kanssa.

. Ruoansulatuskanavan ulkopuolelle tapahtuvassa an- . nossa voidaan käyttää liuoksia, joissa on kaavan I mukaista yhdistettä joko seesami- tai maapähkinäöljyssä tai vesipi-,, , toisessa propyleeniglykolissa. Vesiliuokset tulisi pusku- 30 roida sopivasti (edullisesti pH > noin 8) mikäli välttämä-töntä, ja nestemäinen laimennin olisi ensin tehtävä iso-: !tooniseksi. Tällaiset vesipitoiset liuokset ovat sopivia suonensisäisesti annettaviin injektioihin. Öljyliuokset ovat sopivia annettaviksi injektioina niveleen, lihakseen • t i9 112/72 ja ihon alle. Kaikkien näiden liuosten valmistaminen steriileissä olosuhteissa voidaan suorittaa helposti alan amattimiehen hyvin tuntemin farmaseuttisen tekniikan standardimenetelmin. Lisäksi on myös mahdollista antaa kaavan I 5 mukaiset yhdisteet paikallisesti, hoidettaessa ihon tulehdustiloja, ja tämä tapahtuu edullisesti emulsiovoiteilla, hyytelöillä, geeleillä, tahnoilla, voiteilla ja vastaavilla farmaseuttisen standardikäytännön mukaisesti.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden aktiivisuus P-aine-10 antagonisteina määritetään niiden kykynä estää P-aineen sitoutuminen sen reseptorikohdissa naudan häntätumakekudok-sessa tai IM-9-soluissa, käyttäen radioaktiivisia ligande-ja. Tässä kuvattujen subsituoitujen atsaheterosyklikarbok-syylihappojen P-aineantagonistivaikutusta arvioidaan käyt-15 täen standardimenetelmää, jonka on kuvannut M. A. Cascieri et ai., niin kuin se on ilmoitettu julkaisussa Journal of Biological Chemistry, 258, 5158 (1983). Tässä menetelmässä määritetään oleellisesti se yksittäisen yhdisteen konsent-raatio, joka tarvitaan vähentämään 50 %:lla radioaktiivi-20 sesti leimattujen P-aineligandien määrää niiden resepto-risitoutumiskohdissa mainituissa eristetyissä lehmän kudok-: sissa tai IM-9-soluissa, jolloin saadaan kunkin testatun • J yhdisteen ominaiset IC5o-arvot. Tässä testissä joillakin : edullisilla yhdisteillä ilmeni alhaisia IC5o-arvoja, jotka ·:· 25 olivat alle 1 nM reseptorisitoutumisen inhibition suhteen.

; .Joillakin kaavan I mukaisilla yhdisteillä, kun nii-tä testataan tulehduksenvastaisena aineena, ilmenee huomattavaa vaikutusta kapsaisiinillä aiheutetussa plasman ulos-,. , tihkumiskokeessa [kuvannut A. Nagahisa et ai., European 30 Journal of Pharmacology, 217, 191 (1992)] .

Tässä kokeessa tulehduksenvastainen vaikutus määri-: Γ' tetään plasman proteiinin ulostihkumisen prosentuaalisena estona Hartley-urosmarsujen (jotka painoivat 300 - 350 g) virtsajohtimessa vasteena kapsaisiinille, joka annetaan

A A f' / '· O

20 IL:.,/Z

vatsaonteloon nukutetuille eläimille. Kaavan I mukaiset yhdisteet liuotetaan 0,1 % metyyliselluloosa/vesi-seokseen ja annetaan suun kautta yhtä tuntia ennen kapsaisiinille altistusta. Evans Blue -väriainetta (30 mg/kg) annetaan suo-5 nensisäisesti viisi minuuttia ennen kapsaisiinialtistusta. Eläimet tapetaan 10 minuuttia kapsaisiini-injektion jälkeen ja sekä oikea että vasen virtsajohdin poistetaan. Evans Blue -väriaine uutetaan ja määritetään kolorimetrisesti.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden antipsykoottinen 10 vaikutus neuroleptisinä aineina, joilla säädellään erilaisia psykoottisia häiriöitä, määritetään ensisijaisesti tutkimalla niiden kykyä heikentää P-aineella aiheutettua liiallista liikkumista rotissa. Tämä tutkimus suoritetaan siten, että ensin rotille annetaan kontrolliyhdistettä tai 15 sopivaa kaavan I mukaista koeyhdistettä, sitten rottiin in-jisoidaan P-ainetta injektioneulan kautta aivoihin ja tämän jälkeen mitataan niiden yksittäinen liikkumiseen liittyvä vaste mainituille ärsykkeille.

Edellä olevassa kapsaisiinillä aiheutetussa plasman 20 ulostihkumiskokeessa ja antipsykoottisessa kokeessa yhdis teet katsotaan vaikuttaviksi, jos ero vasteissa lääkeai-V · neella käsitellyissä eläimissä ja kontrolliryhmässä, joka l 1 : on saanut ainoastaan kantajaa, on tilastollisesti merkitse- :'',: vä.

: : 25 Esimerkit , , , Esillä olevaa keksintöä valaistaan nyt seuraavilla esimerkeillä. Tulisi kuitenkin ymmärtää, että keksintö ei rajoitu näiden esimerkkien erityisiin yksityiskohtiin. Sulamispisteet määritettiin Yanako mikrosulamispistelait-; 30 teella ja ne ovat korjaamattomat. Infrapuna-absorptiospek- ’ ‘ trit IIR) mitattiin Shimazu infrapunaspektrometrillä (IR- ; 470). Piikkien muodot merkitään seuraavasti: vs, hyvin 21

A A / rf O

/ “ . / '' voimakas; s, voimakas; m, keskivoimakas; w, heikko. Proto-niydinmagneettiresonanssispektrit (NMR) mitattiin CDC13: ssä JEOL NMR-spektrometrillä (JNM-GX270, 270 MHz) ellei toisin ole ilmoitettu, ja piikkien asemat ilmaistaan miljoonas-5 osina (ppm) kentässä alaspäin tetrametyylisilaanista. Piikkien muodot merkitään seuraavasti: s, singletti; d, dubletti; t, tripletti; m, multipletti; br, leveä.

Esimerkki 1 (1) (2R*, 3S*, 4S*, 5S*) -4-bentsyylioksimetyyli-3,5-bis-10 (metoksikarbonyyli)-2-fenyylipyrrolidiini

Sekoitettuun suspensioon, jossa oli glysiinimetyy-liesterihydrokloridia (11,8 g, 94,2 mmol) etanolissa (80 ml), lisättiin trietyyliamiinia (13,1 ml, d 0,726, 94,2 mmol) huoneenlämpötilassa. Tähän heterogeeniseen 15 seokseen lisättiin tipoittain huoneenlämpötilassa liuos, jossa oli bentsaldehydiä (10,0 g, 94,2 mmol) etanolissa (20 ml). Lisäyksen lopussa reaktioseoksen sameus lisääntyi huomattavasti. Kun seosta oli sekoitettu huoneenlämpötilassa kaksi tuntia, liuotin, etanoli, haihdutettiin vakuu-20 missä. Jäännökseen lisättiin puolikyllästettyä natriumklo- ridin vesiliuosta (20 ml) ja seos uutettiin etyyliasetaatilla (80 ml x 1). Etyyliasetaattiliuos pestiin kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 1), kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raa-25 kaa N-bentsylideeniglysiinimetyyliesteriä (15,5 g, 93 %).

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli vastavalmistettua raakaa N-bentsylideeniglysiinimetyyliesteriä (15,5 g, 97,5 mmol), vedetöntä litiumbromidia (11,4 g, 131 mmol) ja 4 A:n mole-kyyliseuloja (aktivoitua jauhetta, Aldrich, 20,0 g) kui-30 vassa tetrahydrofuraanissa (160 ml), lisättiin tipoittain liuos, jossa oli 1,8-diatsabisyklo[5,4,0]undek-7-eeniä (DBU, 16,0 g, 105 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (20,0 ml) samalla jäähdyttäen kuivajää/asetoni-hauteessa typpiatmosfäärin alla. Syntyneeseen oranssinväriseen seok-35 seen lisättiin liuos, jossa oli metyyli-(E)-4-bentsyyliok- Λ s] >. r / Γ ; 22 * ' " ; c sibutenoaattia (15,7 g, 76,1 mmol, kirjallisuudesta tunnettu yhdiste: (a) Villieras, J.; Rambaud, M.; Graff, M.; Tetrahedron Lett., 26, 53 (1985), (b) Villieras, J.; Rambaud, M.; Synthesis 300 (1983) ja (c) Solladi, G.; Frec-5 hou, C.; Hutt.J; Demailly, G.; Bull. Soc. Chim. Fr., 827 (1987) kuivassa tetrahydrofuraanissa (20 ml) tipoittain samalla jäähdyttäen kuivajää/asetoni-hauteessa, jolloin oranssi väri hävisi. Valkoista reaktioseosta sekoitettiin samoissa jäähdytysolosuhteissa tunnin ajan ja sitten huo-10 neenlämpötilassa vielä 30 minuuttia; tällöin reaktioseos muuttui keltaiseksi ja metyyli-(E)-4-bentsyylioksibuteno-aatti kului kokonaan. Reaktioseos jäähdytettiin uudelleen kuivajää/asetoni-hauteessa ja kyllästettyä ammoniumklori-din vesiliuosta (50 ml) lisättiin. Kun celiteä oli lisät-15 ty, seos suodatettiin celitekerroksen läpi ja suodatinkak-ku pestiin etyyliasetaatilla (50 ml x 3). Orgaaninen kerros erotettiin yhdistetyistä suodoksista ja pesunesteistä ja vesikerros uutettiin etyyliasetaatilla (30 ml x 3). Yhdistetty orgaaninen kerros ja etyyliasetaattiuutteet 20 pestiin kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 2), kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin vaaleankeltaista öljyä (31,8 g). Tämä kroma-; tografoitiin silikageelillä (Si02, Merck Kieselgel 60, / ; 250 g). Eluoimalla n-heksaani/etyyliasetaatti-seoksella 25 (7:1 > 5:1) saatiin käytännöllisesti katsoen puhdasta ot sikon mukaista yhdistettä (19,8 g, 68 %) vaaleankeltaisena jäykkäjuoksuisena öljynä; IRmax (filmi): 3350(w), 1735(vs), 1605(w), 1490(m), 1205(s), 1170(s), 750(s), 700(vs) cm'1; 1H-NMR 6: 7,48 - 7,18 (m, 10H), 4,60 (d, J = 8,1 Hz, 1H), : : 30 4,56 (s, 2H), 3,89 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 3,79 (s, 3H), 3,67 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 3,37 (dd, J = 8,1, 5,5 Hz, 1H), 3,20 : (s, 3H), 2,96 (ddt, J = 5,5, 7,7, 4,8 Hz, 1H) ppm.

23 112472 (2) (2R*, 3S*, 4S*, 5S*) -4-bentsyylioksimetyyli-5-hyd-roksimetyyli-3-metoksikarbonyyli-2-fenyylipyrrolidiini

Sekoitettuun jääkylmään liuokseen, jossa oli ( 2R*, 3S*, 4S*, 5S*)-4-bentsyylioksimetyyli-3, 5-bis(metoksikar-5 bonyyli)-2-fenyylipyrrolidiiniä (42,27 g, 0,11 mol) vedettömässä metanolissa (Dojindo, 350 ml), lisättiin natrium-boorihydridiä (12,51 g, 0,33 mol) annoksittain. Sameata reaktioseosta sekoitettiin samalla jäähdyttäen jäällä kaksi tuntia ja sitten huoneenlämpötilassa 4,5 tuntia. Reak-10 tioseos jäähdytettiin uudelleen jäähauteessa ja kloorive-ty/metanoli-reagenssia 10 (Tokyo Kasei) lisättiin, kunnes seos muuttui happamaksi (pH 1 - 2). Tämä konsentroitiin vakuumissa, ja siirappimainen jäännös tehtiin emäksiseksi pH-arvoon noin 10 lisäämällä 10-%:ista natriumhydroksidin 15 vesiliuosta. Seos uutettiin etyyliasetaatilla (80 ml x 5). Yhdistetyt etyyliasetaattiuutteet pestiin kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 1), kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakaa otsikon mukaista yhdistettä jäykkäjuoksuisena vaaleankeltaise-20 na öljynä; IRupsilonmax (filmi): 3330(s), 1730(vs), 1605(w), 1595(w), 1495( s), 1170(s), 750(s), 700(s) cm'1; ^-NMR 6: : 7,45 - 7,16 (m, 10H), 4,58 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,55 (s, ; ; 2H), 3,85 (dd, J = 11,2, 4,6 Hz, 1H), 3,79 (dd, J = 11,2, ;· ; 3,9 Hz, 1H), 3,58 (dd, J = 9,2, 5,3 Hz, 1H), 3,52 (dd, J = 25 9,2, 6,6 Hz, 1H), 3,35 - 3,25 (m, 1H), 3,15 (s, 3H), 3,14 (dd, J = 8,3, 5,7 Hz, 1H), 2,17 (br s, 2H) ppm. Tämä käy- tettiin seuraavassa vaiheessa suolanmuodostukseen ilman eri puhdistusta.

(3) (2R*, 3S*, 4S*, 5S*)-4-bentsyylioksimetyyli-5-hyd-30 roksimetyyli-3-metoksikarbonyyli-2-fenyylipyrrolidiinise- mifumaraatti ; Liuokseen, jossa oli raakaa (2R*, 3S*, 4S*, 5S*)-4-bent- syylioksimetyyli-5-hydroksimetyy1i-3-metoksikarbonyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä (38,0 g, 0,11 mol) etanolissa 35 (120 ml), lisättiin lämmitetty liuos, jossa oli fumaari- Λ Λ O < r? Π / .: / / 24 I i,- .. - happoa (6,21 g, 0,054 mol) etanolissa (60 ml); lisäyksen yhteydessä muodostui heti valkoinen saostuma. Tähän lisättiin etanolia (80 ml) ja dietyylieetteriä (60 ml) ja seos jätettiin seisomaan jääkaappiin 4 °C:ssa yön yli. Valkoi-5 nen kiintoaine otettiin talteen imusuodattamalla, pestiin dietyylieetterillä (x 1) ja sitä kuivattiin vakuumissa lämpötilassa 60 °C kaksi vuorokautta, jolloin saatiin otsikon mukaista semifumaraattia (35,9 g, 81 %) valkoisena jauheena. Yhdistetty suodos ja pesunesteet konsentroitiin 10 vakuumissa, jolloin saatiin keltaista vaahtoa (8,08 g), joka kiteytettiin uudelleen etanoli/dietyylieetteri-seok-sesta, jolloin saatiin toinen annos otsikon mukaista yhdistettä (1,42 g, 3,2 %); otsikon mukaisen yhdisteen kokonaissaannon ollessa 37,3 g (84 %); sp. 154 - 156 °C; IR^ 15 (nujol): 3340(s), 2800 - 2100(br), 1730(vs), 1130(s), 750( s), 675( s) cm'1; ^-NMR δ (DMS0-d6): 7,45 - 7,15 (m, 10H), 6,60 (s, 1H), 4,50 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 4,48 (s, 2H), 3,80 - 3,35 (m, 7H), 3,15 (dd, J = 8,8, 6,2 Hz, 1H), 3,03 (s, 3H), 2,99 (dd, J = 9,0, 5,2 Hz, 1H), 2,60 - 2,38 20 (m, 1H) ppm.

(4) (2R*, 3S*, 4S*, 5S*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-4-bentsyylioksimetyyli-5-hydroksimetyyli-3-metoksikarbonyy-li-2-fenyylipyrrolidiini

Sekoitettuun, jäällä jäähdytettyyn liuokseen, jossa , ; 25 oli (2R*, 3S*, 4S*, 5S*)-4-bentsyylioksimetyyli-5-hydroksime- . tyyli-3-metoksikarbonyyli-2-fenyylipyrrolidiinisemifuma-

‘ I

raattia (12,0 g, 29,0 mmol) 1 M natriumhydroksidin vesiliuoksessa (70,0 ml, 70,0 mmol) ja dimetoksietaanissa (40 ml), lisättiin nopeasti bentsyyliklooriformiaattia 30 (Cbz-Cl, 4,97 ml, d 1,195, 34,8 mmol). Kun heterogeenista valkoista reaktioseosta oli sekoitettu jäähdyttäen samalla jäällä tunnin ajan, lisättiin vettä (40 ml) ja etyyliasetaattia (40 ml) valkoisen kiintoaineen liuottamiseksi ja sitten lisättiin toinen annos Cbz-Cl (1,0 ml, d 1,195, : 35 7,0 mmol) seokseen huoneenlämpötilassa; lisäyksen yhtey- 25 112-' 7 2 dessä seos muuttui neutraaliksi. Kun seosta oli sekoitettu huoneenlämpötilassa 30 minuuttia, reaktio oli melkein mennyt loppuun. Sekoittamista jatkettiin huoneenlämpötilassa yön yli ja sitten kerrokset erotettiin. Vesikerros uutet-5 tiin etyyliasetaatilla (50 ml x 4). Yhdistetty orgaaninen kerros ja etyyliasetaattiuutteet pestiin 0,5 M natriumhyd-roksidin vesiliuoksella (x 2), puolikyllästetyllä natrium-kloridin vesiliuoksella (xl), 0,5 M kloorivedyn vesiliuoksella (xl), kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksel-10 la (x 1), kyllästetyllä natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella (x 1) ja kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 1), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakaa otsikon mukaista yhdistettä (15,9 g, kvant.) melkein värittömänä jäykkäjuoksuisena 15 öljynä; IRmax (filmi): 3420(s), 1738(vs), 1698(vs), 1680 (vs), 1605(w), 1595(w), 1492(s), 1280(s), 1210(s), 1075 (s), 758( s), 699( vs) cm*1; 1H-NMR 6: 7,53 - 7,10 (m, 14H), 6,94 (br s, 1H), 5,30 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 5,02 (br s, 2H), 4,53 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 4,47 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 20 4,13 - 3,90 (m, 3H), 3,62 (dd, J = 9,7, 3,5 Hz, 1H), 3,58 - 3,41 (m, 1H), 3,53 (dd, J = 9,7, 4,6 Hz, 1H), 3,29 (s, : 3H), 2,73 (br s, 1H), 1,61 (br s, OH) ppm. Tämä käytettiin j’ ; seuraavassa vaiheessa suolanmuodostukseen ilman eri puh- distusta.

25 (5) (2R*,3S*,4S*,5S*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-4- bentsyylioksimetyyli-5-(tert-butyylidimetyylisilyyliok-s i)metyy1i-3-metoksikarbonyy1i-2-fenyy1ipyrroiidiini

Sekoitettuun, jäällä jäähdytettyyn liuokseen, jossa oli raakaa (2R*, 3S*, 4S*, 5S*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-4-30 bentsyylioksimetyyli-5-hydroksimetyyli-3-metoksikarbonyy-li-2-fenyylipyrrolidiiniä (15,9 g, noin 29,0 mmol) ja imi-datsolia (Im, 7,90 g, 116 mmol) dimetyyliformamidissa (32,0 ml), lisättiin tert-butyylidimetyylisilyylikloridia (8,74 g, 58,0 mmol) yhtenä annoksena. Jäähdytyshaude pois-.* 35 tettiin heti lisäyksen jälkeen ja sekoittamista jatkettiin 26 Ίιζλ/" huoneenlämpötilassa noin viisi tuntia. Reaktioseos laimennettiin tolueeni/etyyliasetaatti-seoksella (2:1, 300 ml), pestiin vedellä (x 3), kyllästetyllä natriumkloridin vesi-liuoksella (x 2), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vak-5 uumissa, jolloin saatiin väritöntä öljyä (20,5 g). Tämä kromatografoitiin silikageelillä (Merck Kieselgel 60, 200 g). Eluoimalla n-heksaani/etyyliasetaatti-seoksella (50:1 > 20:1 > 15:1) saatiin otsikon mukaista yhdistettä (16,8 g, 96 %) värittömänä jäykkäjuoksuisena öljynä; IRi>max 10 (filmi): 1743(s), 1705(vs), 1495(m), 1100(s), 780(s), 745 (s), 737 (s), 700( s) cm'1; 1H-NMR 6: 7,48 - 7,37 (m, 3H), 7,37 - 7,14 (m, UH), 6,90 (br s, 1H), 5,27 (br d, J = 6,1 Hz, 1H), 5,02 (br s, 2H), 4,51 - 4,41 (m, 1H), 4,47 (s, 2H), 3,97 (dd, J = 10,3, 2,6 Hz, 1H), 3,94 - 3,83 (m, 1H), 15 3,60 (d, J = 3,7 Hz, 2H), 3,54 (dd, J = 11,8, 9,5 Hz, 1H), 3,33 - 3,15 (m, 1H), 3,28 (s, 3H), 0,90 (br s, 9H), 0,05 (br s, 6H) ppm.

(6) (2R*, 3S*, 4S*, 5S*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-4-bentsyylioksimetyyli-5- (tert-butyylidimetyylisilyylioksi ) -20 metyy1i-3-karbamoyy1i-2-fenyy1ipyrrolidiini

Typpiatmosfäärin alla lisättiin 2,0 M trimetyylial-: umiiniliuosta tolueenissa (PhMe) (Aldrich, 150 ml, 300 mmol) sekoitettuun ja jäällä jäähdytettyyn suspensioon, jossa oli ammoniumkloridia (14,9 g, 278 mmol) kuivassa 25 tolueenissa (280 ml). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 30 minuuttia, jolloin syntyi kirkas ja homogeeninen reaktioseos. Tähän lisättiin tipoittain liuos, jossa oli (2R*, 3S*, 4S*, 5S*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-4-bentsyylioksi-metyyli-5-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)metyyli-3-me-30 toksikarbonyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä (16,8 g, 27,8 mmol) ' kuivassa tolueenissa (30 ml). Syntynyttä sameata reaktio- seosta sekoitettiin ja kuumennettiin sisälämpötilassa 50 °C 24 tuntia. Vettä (20 ml) lisättiin varovasti jäällä jäähdytettyyn ja sekoitettuun seokseen. Tähän lisättiin 35 sitten 1,0 M kaliumnatriumtartraattiliuosta (280 ml, Λ Λ f ' ? Γ! Ο 27 \\ILJ L.

280 mmol) ja sekoittamista jatkettiin samoissa jäähdytyso-losuhteissa tunnin ajan. Seos suodatettiin celitekerroksen läpi suodatinkakku pestiin huolellisesti etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros erotettiin yhdistetystä suodoksesta 5 ja etyyliasetaattipesunesteistä ja vesikerros uutettiin etyyliasetaatilla (100 ml x 3). Yhdistetty orgaaninen kerros ja etyyliasetaattiuutteet pestiin kyllästetyllä natri-umkloridin vesiliuoksella (xl), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin vaahto (15,4 g). 10 Tämä kromatografoitiin silikageelillä (Merck Kieselgel 60, 160 g). Eluoimalla n-heksaani/etyyliasetaatti-seoksella (6:1 > 4:1 > 1:1) saatiin puhdasta otsikon mukaista yhdistettä (12,0 g, 73 %) valkoisena lasina; IR,,,, (filmi): 3350-(m), 3200(m), 1699(vs), 1680(vs), 1605(m), 1490(m), 15 1100(s), 780( s), 730(s), 697(s) cm"1; ^-NMR 6: 7,53 - 7,40 (m, 3H), 7,40 - 7,03 (m, 12H), 5,60 (br s, 1H), 5,27 (br d, J = 9,2 Hz, 1H), 5,03 (br s, 2H), 4,48 (br s, 2H), 4,47 (dd, J = 10,3, 8,1 Hz, 1H), 4,27 (br s, 1H), 3,99 (dd, J = 10,3, 2,9 Hz, 1H), 3,88 - 3,76 (m, 1H), 3,70 (dd, J = 10,3 20 3,3 Hz, 1H), 3,60 (dd, J = 10,3, 4,7 Hz, 1H), 3,32 (dd, J = 11,7, 9,2 Hz, 1H), 3,24 - 3,08 (m, 1H), 0,90 (br s, : 9H), 0,05 (br s, 6H) ppm.

(7) (2S*,3S*,4S*,5S*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-4-bentsyylioksimetyyli-3-[N-(tert-butoksikarbonyyli)amino]-25 5-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)metyyli-2-fenyylipyr- rolidiini Lämmitettyyn ja sekoitettuun liuokseen, jossa oli (2R*, 3S*, 4S*, 5S*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-4-bentsyyliok-,, , simetyyli-5-( tert-butyylidimetyylisilyylioksi ) me tyyli-3- * 30 karbamoyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä (12,6 g, 21,3 nunol) tert-butanolissa (200 ml), lisättiin lyijytetra-asetaattia (16,1 g, 36,3 mmol) yhtenä annoksena. Syntynyttä ruskeata seosta sekoitettiin ja refluksoitiin lievästi 45 minuuttia. Seos jäähdytettiin jäällä, neutraloitiin kyllästetyl-35 lä natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja suodatettiin χι λ r> / γ; o 28 I ! / ·. / ,:.

celitekerroksen läpi. Suodatinkakku pestiin metyleeniklo-ridilla. Yhdistetty suodos ja pesunesteet pestiin konsentroitiin vakuumissa. Vesipitoinen jäännös uutettiin mety-leenikloridilla (50 ml x 3). Yhdistetyt metyleenikloridi-5 uutteet pestiin kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (xl), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä (15,5 g, kvant.) vaaleankeltaisena öljynä; IR^ (filmi): 1715(vs), 1700( vs), 1683( vs), 778(s), 738(s), 698(s) cm'1; 1H-NMR 6: 10 5,13 (br d, J = 7,7 Hz, 1H; NCH2Ph), 4,51 (br s, 2H; 0Cff2Ph), 1,25 [s, 9H; NHC02C( CH3 )3] , 0,92 [s, 9H; OSiC- (Cff3)3], 0,10 [br s, 6H; 0SiC( Cff3 )2] ppm. Tämä käytettiin seuraavassa vaiheessa suolanmuodostukseen ilman eri puhdistusta.

15 (8) (2S*, 3S*, 4S*, 5S*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-4- bentsyylioksimetyyli-3-[N-(tert-butoksikarbonyyli)amino]-5-hydroks imetyy1i-2-fenyy1ipyrroiidi ini

Sekoitettuun, jäällä jäähdytettyyn liuokseen, jossa oli( 2S*, 3S*, 4S*, 5S* )-l-bentsyylioksikarbonyyli-4-bentsyyli-20 oksimetyyli-3- [N- (tert-butoksikarbonyyli )amino] -5-( tert-butyylidimetyylisilyylioksi )metyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä • (14,5 g, noin 21,3 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa * : (20 ml), lisättiin tipoittain seos, jossa oli jääetikkaa (1,59 ml, d 1,049, 27,7 mmol) ja 1 M tetra-n-butyyliammo-·; · : 25 niumfluoridiliuosta tetrahydrofuraanissa (Aldrich, 32.0 ml, 32,0 mmol). Kun seosta oli sekoitettu huoneenlämpötilassa kuusi tuntia, lisättiin vielä 1 M tetra-n-butyy-liammoniumfluoridiliuosta tetrahydrofuraanissa (15,0 ml, 15.0 mmol) tipoittain huoneenlämpötilassa. Kun sekoit-30 tamista oli jatkettu kaksi vuorokautta, syntynyt oranssinvärinen seos neutraloitiin kyllästetyllä natriumvetykar-bonaatin vesiliuoksella ja konsentroitiin vakuumissa haud-elämpötilassa 40 °C. Synytnyt jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla (200 ml), pestiin vedellä (x 2), kyllästety- 35 llä natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella (x 1) ja kylläs- -- A A r - .< 7 r( 29 i I / tetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 1), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin tummanpunaista jäykkäjuoksuista öljyä (13,9 g). Tämä kromato-grafoitiin silikageelillä (Merck Kieselgel 60, 130 g).

5 Eluoimalla n-heksaani/etyyliasetaatti-seoksella (20:1 > 10:1 > 5:1 > 4:1 > 2:1) saatiin punainen kiintoaine. Tämä kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaani-seokses-ta; kiteet suodatettiin pois, pestiin etyyliasetaatti/n-heksaani-seoksella (1:4, x 1) ja ne kuivattiin vakuumissa, 10 jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä (9,0 g, 78 %) hiukan purppuranvärisinä kiteinä. Osa siitä kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaani-seoksesta, jolloin saatiin otsikon mukaisen yhdisteen analyyttinen näyte; sp.

126,5 - 129,5 °C (hienoja valkoisia neuloja); IR*** (nujol): 15 3430( s), 3380( s), 1690(vs), 1518(e), 1498(m), 1100(s), 785(m), 770( s), 747(s), 740(s), 715(s), 695(s) cm'1; ^-NMR 6: 7,45 - 7,15 (m, 17H), 6,94 (br s, 1H), 5,22 (br d, J = 8,1 Hz, 1H), 5,02 (br s, 2H), 4,87 (br s, 1H), 4,52 (s, 2H), 4,30 (dd, J = 19,0, 9,0 Hz, 1H), 4,20 - 4,00 (m, 2H), 20 4,03 - 3,90 (m, 1H), 3,68 - 3,50 (m, 2H), 2,10 - 1,85 (m, 1H), 1,37 (br s, 9H) ppm.

(9) (2S*,3S*,4S*,5S*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-4-bentsyylioksimetyyli-3-[N-(tert-butoksikarbonyyli)amino]-5-jodimetyy1i-2-fenyy1ipyrroiidiini 25 Sekoitettuun seokseen, jossa oli (2S*,3S*,4S*,5S*)-1- bentsyylioksikarbonyyli-4-bentsyylioksimetyyli-3- [N- (tert-butoksikarbonyyli )amino]-5-hydroksimetyyli-2-fenyylipyrro-lidiiniä (9,00 g, 16,5 mmol), trifenyylifosfiinia (10,8 g, 41,3 mmol) ja imidatsolia (2,81 g, 41,3 mmol) kuivassa 30 tolueenissa (240 ml), lisättiin jodia (8,38 g, 33,0 mmol) yhtenä annoksena huoneenlämpötilassa. Kun seosta oli se-koitettu ja refluksoitu lievästi tunnin ajan, tummanruskea seos sai jäähtyä huoneenlämpötilaan ja sitten lisättiin kyllästettyä natriumsulfiitin vesiliuosta (70 ml) kunnes 35 jodiylimäärästä johtuva tumma väri oli hävinnyt. Kerrokset 30 112-:72 erotettiin ja orgaaninen kerros pestiin kyllästetyllä nat-riumkloridin vesiliuoksella (x 1), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin tummanpunaista öljyä (22,9 g). Tämä kromatografoitiin silikageelillä 5 (Merck Kieselgel 60, 230 g). Eluoimalla n-heksaani/etyyli-asetaatti-seoksella (30:1 > 10:1 > 6:1) saatiin otsikon mukaista yhdistettä (9,95 g, 92 %) valkoisena kiintoaineena. Osa siitä (105 mg) kiteytettiin uudelleen isopropyyli-eetteristä (IPE), jolloin saatiin otsikon mukaisen yhdis-10 teen analyyttinen näyte valkoisena jauheena (sp. 107,5 - 108.5 °C); IRBax (nujol): 3440(s), 1705(vs), 1500(s), 1165-(s), 780(m), 770(m), 755(m), 740(m), 707(s), 695(s) cm'1; 1H-NMR 6: 7,60 - 7,15 (m, 14H), 7,09 (br s, 2H), 5,19 (br d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,03 (br s, 2H), 4,54 (s, 2H), 4,44 15 (ddd, J = 9,0, 9,0, 9,0 Hz, 1H), 4,15 - 3,97 (m, 1H), 3,97 - 3,75 (m, 2H), 3,71 (dd, J = 9,7, 5,3 Hz, 1H), 3,64 (dd, J = 9,7, 5,3 Hz, 1H), 2,34 - 2,18 (m, 1H), 1,36 (br s, 9H) ppm.

(10) (2S*, 3S*, 4R*, 5R*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-4-20 bentsyylioksimetyyli-3-[N-(tert-butoksikarbonyyli)amino]- 5-metyy1i-2-fenyy1ipyrroiidiini : : Seosta, jossa oli (2S*,3S*,4S*,5S*)-l-bentsyyliok- Γ ; sikarbonyyli-4-bentsyylioksimetyyli-3-[N-( tert-butoksikar- • bonyyli (amino]-5-jodimetyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä 25 (9,85 g, 15,0 mmol), trietyyliamiinia (5,23 ml, d 0,726, 37.5 mmol) ja 10-%:ista Pd-C:tä (1,83 g) etanoli/etyyli- asetaatti-seoksessa (2:1, 210 ml) sekoitettiin heikosti positiivisessa vetypaineessa (ilmapallo) huoneenlämpötilassa viisi tuntia, jolloin saostui valkoista kiinteätä 30 trietyyliammoniumjodidia. Katalyytti ja valkoinen saostuma suodatettiin pois celitekerroksen avulla ja pestiin huolellisesti etyyliasetaatilla ja metyleenikloridilla. Yhdistetty suodos ja pesunesteet pestiin konsentroitiin vakuumissa. Jäännös laimennettiin tolueeni/etyyliasetaatti-seok-: 35 sella (1:1, 200 ml), pestiin kyllästetyllä natriumsulfii- 1 ί ο / ν' ο 31 I I i L·.

tin vesiliuoksella (χ 3) ja kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (xl), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä (7,60 g, 95 %) vaaleankeltaisena kiintoaineena. Tämä käy-5 tettiin seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta. Osa siitä (0,15 g) kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaani-seoksesta, jolloin saatiin otsikon mukaisen yhdisteen analyyttinen näyte (0,11 g, 65 %) hienoina valkoisina neuloina (sp. 143 - 144 °C); IR,,,^ (nujol): 3380(s), 10 1710(e), 1688( s), 1520(s), 1500(w), 770(m), 738(m), 715( s), 698( s) cm'1; 1H-NMR 6: 7,50 - 7,17 (m, 14H), 7,12 - 6,93 (m, 1H), 5,25 (br d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,04 (br s, 2H), 4,49 (br s, 2H), 4,26 (ddd, J - 11,3, 9,0, 9,0 Hz, 1H), 4,16 - 4,00 (m, 1H), 3,95 - 3,77 (m, 1H), 3,55 (br d, 15 J = 4,8 Hz, 2H), 1,97 - 1,80 (m, 1H), 1,63 (br d, J = 4,4 Hz, 3H), 1,40 (br s, 9H) ppm.

(11) (2S*, 3S*, 4S*, 5R*) -3-amino-l-bentsyylioksikar-bonyy 1 i - 4-bent syy 1 ioksimetyy 1 i - 5-metyy 1 i - 2 - f enyy 1 ipyrrol i-diini 20 Sekoitettuun liuokseen, jossa oli (2S*,3S*,4R*,5R*)- l-bentsyylioksikarbonyyli-4-bentsyylioksimetyyli-3-[N-: : ; (tert-butoksikarbonyyli )amino]-5-metyyli-2-fenyylipyrroli- * diiniä (0,60 g, 1,13 mmol) etyyliasetatissa (13,0 ml), : lisättiin väkevää kloorivetyhappoa (8,0 ml) huoneenlämpö- 25 tilassa; lisäyksen yhteydessä havaittiin hiilidioksidin , V kehittymistä. Kun reaktioseosta oli sekoitettu huoneenläm pötilassa 30 minuuttia, se konsentroitiin vakuumissa. Jäännös tehtiin emäksiseksi 10-%:sella natriumhydroksidin vesiliuoksella pH-arvoon 10 - 11 ja seos uutettiin mety-: 30 leenikloridilla. Yhdistetyt metyleenikloridiuutteet pes- ’ ' tiin kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella, kuivat tiin (K2C03) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakaa otsikon mukaista yhdistettä (0,15 g, kvant.) keltaisena jäykkäjuoksuisena öljynä; IRmax (nujol): 3380(w), 35 3330(w), 1698( s), 1495(m), 1110(m), 738(s), 698(s) cm-1; 32 112-:72 ^-NMR δ: 7,60 - 7,15 (m, 9H), 7,02 (br s, 1H), 5,04 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,52 (s, 2H), 3,83 (dq, J = 9,2, 5,9 Hz, 1H), 3,61 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 3,51 (dd, J - 11,0, 8,3 Hz, 1H), 1,86 - 1,67 (m, 1H), 1,60 (d, J = 5,9 Hz, 3H), 1,45 - 5 1,07 (br m, 3H; NH2 + OH) ppm. Tämä käytettiin seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

(12) (2S*, 3S*, 4R*, 5R*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-4- bentsyylioksimetyyli-3- [N- (5-isopropyyli-2-metoksibentsyy-li)amino]-5-metyyli-2-fenyylipyrrolidiini 10 Sekoitettuun liuokseen, jossa oli raakaa (2S*,3S*,4- R*, 5R*)-3-amino-l-bentsyylioksikarbonyyli-4-bentsyylioksi-metyyli-5-metyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä (0,51 g, 1,13 mol) kuivassa metyleenikloridissa (12 ml), lisättiin liuo-s, jossa oli 5-isopropyyli-2-metoksibentsaldehydiä 15 (0,25 g, 1,41 mmol) kuivassa metyleenikloridissa (2 ml) huoneenlämpötilassa. Tähän liuokseen lisättiin natriumtri-asetoksiboorihydridiä (0,36 g, 1,70 mol) annoksittain huoneenlämpötilassa. Lisätty natriumtriasetoksiboorihydridi liukeni asteittain sekoitettaessa huoneenlämpötilassa. 20 Kolmen tunnin kuluttua hiukan samea reaktioseos tehtiin emäksiseksi pH-arvoon 10-11 10-%:sella natriumhydroksi-·’ ’ din vesiliuoksella ja seos erotettiin. Vesikerros uutet- tiin metyleenikloridilla (x 3). Yhdistetty metyleeniklori-:\· diliuos pestiin kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuok- 25 sella (x 1), kuivattiin (K2C03) ja konsentroitiin vakuumis-sa, jolloin saatiin jäykkäjuoksuista öljyä (0,79 g). Tälle suoritettiin silikageelikromatografia (Merck Kieselgel 60, 8,0 g) eluoimalla metyleenikloridi/metanoli-seoksella (300:1), jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä 30 (0,16 g, 24 %) jäykkäjuoksuisena värittömänä öljynä ja öl jyinen seos (0,47 g), jossa oli 5-isopropyyli-2-metoksi-bentsaldehydiä ja otsikon mukaista yhdistettä. Viimeksi mainittu seos kromatografoitiin uudelleen silikageelillä (Merck Kieselgel 60, 7,0 g). Eluoimalla n-heksaani/etyyli-1 35 asetaatti-seoksella ja metyleenikloridi/metanoli-seoksella 33 Λ ^ Γ· Λ >' Ο I i ,·: / /.

(100:1) saatiin lisäannos otsikon mukaista yhdistettä (0,45 g, 67 %); otsikon mukaisen yhdisteen kokonaissaanto ollessa 0,61 g (91 %); IR^ (filmi): 3350(w), 1700(vs), 1610(w), 1497(s), 1250(s), 1110(s), 815(m), 772(m), 735 5 (s), 698(s) cm*1; ^-NMR 6: 7,50 - 7,11 (m, 14H), 7,02 (dd, J = 8,2, 2,2 Hz, 1H), 7,01 (br s, 1H), 6,92 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,20 - 4,93 (m, 3H), 3,95 - 3,78 (m, 1H), 3,78 - 3,49 (m, 4H), 3,63 (s, 3H), 3,33 (dd, J = 10,3, 8,0 Hz), 2,77 (sep, J = 7,0 Hz, 1H), 10 2,11 - 1,95 (m, 1H), 1,58 (br s, 1H; NH), 1,49 (br s, 3H), 1,17 (d, J = 7,0 Hz, 6H) ppm.

(13 ) ( 2S*, 3S*, 4R*, 5R*) -l-bentsyylioksimetyyli-3- [N-(5-isopropyyli-2-metoksibentsyyli)amino] -5-metyyli-2-fe-nyylipyrrolidiini 15 20-%:ista Pd(0H)2/C:tä, (Pearlmanin katalyyttiä,

Aldrich; 0,33 g) lisättiin liuokseen, jossa oli (2S*,3S*,4-R*,5R* )-l-bentsyylioksikarbonyyli-4-bentsyylioksimetyyli-3-[N-( 5-isopropyyli-2-metoksibentsyyli )amino] -5-metyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä (0,61 g, 1,03 mmol) ja ammoniumfor-20 miaattia (0,39 g, 6,18 mmol) metanolissa (20 ml). Seosta sekoitettiin ja refluksoitiin lievästi 30 minuuttia. Kata-; lyytti suodatettiin pois celitekerroksen avulla ja pestiin :' metanolilla. Yhdistetty suodos ja pesunesteet konsentroi- : tiin vakuumissa. Jäännökseen lisättiin 1 M natriumhydrok- 25 sidin vesiliuosta kunnes seos tuli emäksiseksi (pH 10 -11). Tämä uutettiin metyleenikloridilla (x 4). Yhdistetyt metyleenikloridiuutteet pestiin kyllästetyllä natriumklo-ridin vesiliuoksella (x 1), kuivattiin (K2C03) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin vaaleankeltaista 30 öljyä (0,47 g). Tämä kromatografoltiin silikageelillä ‘ (Merck Kieselgel 60, 7,0 g). Eluoimalla metyleenikloridi/ : , metanoli-seoksella (300:1 > 200:1 > 100:1 > 60:1 > 50:1) • , saatiin otsikon mukaista yhdistettä (0,40 g, 85 %) vaale ankeltaisena jäykkäjuoksuisena öljynä; IRnax (filmi): i ’ : 35 3340(w), 1610(m), 1498(e), 1250(s), 1110(s), 810(m), 738(- Λ Λ f I rv ..-) 34 I ! /' ' / / s), 700(s) cm’1; 1H-NMR 6: 7,43 - 7,20 (m, 10H), 7,01 (dd, J = 8,2, 2,2 Hz, 1H), 6,82 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 6,65 (d, J * 8,4 Hz, 1H), 4,56 (s, 2H), 4,20 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 3,67 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,49 (dd, J = 9,3, 6,2 Hz, 1H), 5 3,49 (s, 3H), 3,57 (dd, J = 9,3, 6,4 Hz, 1H), 3,42 (d, J = 13,6 Hz, 1H), 3,13 (dd, J = 5,5, 2,6 Hz, 1H), 3,06 (dq, J = 6,2, 6,2 Hz, 1H), 2,74 (sep, J = 7,0 Hz, 1H), 2,17 -1,85 (m, 3H), 1,42 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 1,16 (d, J = 7,0 Hz, 6H) ppm.

10 (14) (2S*,3S*,4R*,5R*)-l-bentsyylioksimetyyli-3-[N- (5-isopropyyli-2-metoksibentsyyli) amino] -5-metyyli-2-fe-nyylipyrrolidiini

Ylimäärä kloorivety/metanoli-reagenssia 10 (Tokyo Kasei) lisättiin (2S*, 3S*, 4R*, 5R*)-l-bentsyylioksimetyyli-3-15 [N- ( 5-isopropyyli-2-metoksibentsyyli )amino] -5-metyyli-2- fenyylipyrrolidiiniin (0,40 g, 0,87 mmol) kunnes seos tuli happamaksi. Liuotin, metanoli, haihdutettiin vakuumissa ja siirappimainen jäännös kiteytettiin uudelleen etanoli/di-etyylieetteri-seoksesta, jolloin saatiin otsikon mukaista 20 yhdistettä (0,40 g, 87 %) valkoisena jauheena (sp. 129 -133 °C); IR,^ (nujol): 3350(w), 3100 - 2100(br s), 1510(s), : 1255( s), 1087(m), 810(w), 755(m), 700(s) cm'1; XH-NMR δ i‘ ; (DMS0-d6): 7,83 (br s, 2H), 7,62 - 7,40 (m, 3H), 7,40 - 7,33 (m, 4H), 7,37 - 7,25 (m, 1H), 7,25 - 7,12 (m, 2H), : 25 6,89 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,11 (br s, 1H), 4,59 (s, 2H), 3,78 - 3,50 (m, 5H), 3,67 (br s, 2H), 3,45 - 3,30 [m, 3H; päällekkäiset signaalien (6 3,35) kanssa johtuen H20:sta], 3,35 [s, 3H; päällekkäiset signaalien (6 3,35) kanssa johtuen H20:sta], 2,77 (sep, J = 7,0 Hz, 1H), 2,55 -2,48 [m, 30 1H; päällekkäiset signaalien (6 2,50) kanssa johtuen DMS0:sta], 1,64 (br d, J = 5,9 Hz, 3H), 1,14 (d, J = 7,0 : ; : Hz, 6H) ppm.

λ ί n / 7 n 35 I i ^ : · /- (15) (2S*, 3S*, 4R*, 5R*) -3- [N-(tert-butoksikarbonyyli)-amino - 4 -hydr oks ime tyy 1 i - 5 -me tyy 1 i - 2 - f enyy 1 ipyrrol idi ini

Natriumia (1,88 g, 81,9 mmol) lisättiin annoksittain nestemäiseen ammoniakkiin (noin 250 ml) samalla se-5 koittaen ja jäähdyttäen kuivajää/asetoni-hauteessa. Syntyneeseen syvänsiniseen liuokseen lisättiin liuos, jossa oli (2S*, 3S*, 4R*,5R*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-4-bentsyyliok-simetyyli-3-[N-(tert-butoksikarbonyyli )amino] -5-metyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä (5,90 g, 11,1 mmol) kuivassa tetra-10 hydrofuraanissa (50 ml). Kun seosta oli sekoitettu jääh dyttäen samalla kuivajää/asetoni-hauteella kaksi tuntia, poistettiin jäähdytyshaude ja sekoittamista jatkettiin ammoniakin refluksointiolosuhteissa 30 minuuttia, jona aikana sininen väri pysyi. Reaktioseos jäähdytettiin kuiva 15 jää/asetoni-hauteella ja kiinteätä ammoniumkloridia lisättiin, kunnes sininen väri hävisi. Kun liuotin, ammoniakki, oli haihdutettu, valkoinen kiinteä jäännös uutettiin metyleenikloridilla. Yhdistetyt metyleenikloridiuutteet kuivattiin (K2C03) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin 20 saatiin seos (4,45 g), jossa oli otsikon mukaista yhdistettä, (2S*, 3S*, 4R*, 5R*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-4-bent-: , ; syylioksimetyyli-3-[N-(tert-butoksikarbonyyli)amino]-5- metyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä ja 1,2-difenyylietaania .·, : noin suhteessa 1:0,085:0,5; suhde määritettiin ^-NMR-spek- .....; 25 troskopialla: 6 3,01 ppm (dq, J = 8,8, 6,0 Hz, 1H; NCHMe otsikon mukaiselle yhdisteelle); δ 4,49 ppm (s, 0,17H; CH20CHzPh (2S*,3S*,4S*,5R*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-4-bent-syylioksimetyyli-3-[N-(tert-butoksikarbonyyli)amino]-5-metyyli-2-fenyylipyrrolidiinille); δ 2,92 ppm [s, 2H; Ph-30 (CJf2)2Ph]. Liuos, jossa oli tätä raakatuotetta (4,55 g) • kuivassa tetrahydrofuraanissa (30 ml), lisättiin tipoit- ; tain samalla sekoittaen ja jäähdyttäen kuivajää/asetoni- hauteella syvänsiniseen liuokseen, jossa oli natriumia (1,20 g, 52,2 mmol) nestemäisessä ammoniakissa (noin : 35 200 ml). Reaktioseosta sekoitettiin samoissa jäähdytysolo- Α A Γ' ' n n I !<:*; / i 36 suhteissa kaksi tuntia ja sitten ammoniakin refluksointi-olosuhteissa 30 minuuttia. Syvänsininen väri poistettiin lisäämällä kiinteätä ammoniumkloridia jäähdyttäen samalla kuivajää/asetoni-hauteella. Kun liuotin, ammoniakki, oli 5 haihdutettu, kiinteä jäännös uutettiin metyleenikloridil-la. Yhdistetyt metyleenikloridiuutteet kuivattiin (K2C03) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin 7:3-seos (3,84 g), jossa oli otsikon mukaista yhdistettä ja 1,2-difenyylietaania vaalenkeltaisena jäykkäjuoksuisena öljy-10 nä, jolloin suhde myös määritettiin 1H-NMR-spektroskopial-la; otsikon mukaisen yhdisteen nettosaannoksi laskettiin 90 % ottaen huomioon edellä olevat suhteet: IR„ax (filmi): 3390( s), 1700(vs), 1685(vs), 1603(w), 1522(s), 1510(s), 1497 (s), 1170( s), 768(w), 738(w), 698(s) cm-1; "H-NMR 6: 15 otsikon mukainen yhdiste, 7,43 - 7,30 (m, 5H), 4,40 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 4,38 (br d, J = 7,4 Hz, 1H; NffBoc), 4,08 (ddd, J = 7,4, 7,4, 5,5 Hz, 1H), 3,70 - 3,58 (m, 2H), 3,01 (dq, J = 8,8, 6,0 Hz, 1H), 1,76 - 1,64 (m, 1H), 1,35 -1,22 (m, 2H; OH + NH), 1,31 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 1,31 (s, 20 9H) ppm.

(16) (2S*, 3S*, 4R*, 5R*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-3-[N-(tert-butoksikarbonyyli)amino]-4-hydroksimetyyli-5-me-*' : tyyli-2-fenyylipyrrolidiini .· : Bentsyyliklooriformiaattia (Cbz-Cl, 1,57 ml, d 1,1- : 25 95, 11,0 mmol) lisättiin sekoitettuun ja jäällä jäähdytet tyyn liuokseen, jossa oli (2S*, 3S*, 4R*, 5R*)-3-[N-( tert-buto-ksikarbonyyl i) amino-4-hydroks imetyy 1 i - 5-metyy 1 i - 2 - f enyy 1 i-pyrrolidiiniä (3,84 g, noin 10,0 mmol) 2 M natriumhydrok-sidin vesiliuosta (8,0 ml, 16,0 mmol) dimetoksietaani/tet-30 rahydrofuraani-seoksessa (1:1, 14 ml). Kun seosta oli sekoitettu huoneenlämpötilassa 2,5 tuntia, lisättiin huone enlämpötilassa 2 M natriumhydroksidin vesiliuosta (2,0 ml, 4,0 mmol) ja Cbz-Cl (0,29 ml, d 1,195, 2,0 mmol) ja sekoittamista kaksi tuntia. Seos uutettiin etyyliasetaatilla 35 (x 4). Yhdistetyt etyyliasetaattiuutteet pestiin kylläste-

1 1 O / 7 V

37 I li. i X

tyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 1), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin valkoista kiintoainetta (5,75 g). Tämä kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaani-seoksesta, jolloin saatiin puh-5 dasta otsikon mukaista yhdistettä (3,33 g, 76 %). Keltai-senoranssi emäliuos (2,22 g) kromatografoitiin silikagee-lillä (Merck Kieselgel 60, 20 g). Eluoimalla n-heksaani/ etyyliasetaatti-seoksella (10:1 > 5:1) saatiin (2S*,3S*, 4R*, 5R*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-4-[(bentsyylioksikarbo-10 nyylioksi)metyyli]-3-[N-(tert-butoksikarbonyyli)amino]-5- metyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä (0,31 g, 5,4 %) melko puhtaana kiintoaineena, joka kiteytettiin uudelleen etyyli-asetaatti/n-heksaani-seoksesta, jolloin saatiin analyyttinen näyte (2S*,3S*,4R*,5R*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-4-15 [ (bentsyylioksikarbonyylioksi )metyyli] -3- [N-(tert-butoksi karbonyyli )amino]-5-metyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä (0,28 g, 4,9 %); sp. 148,0 - 148,5 °C (valkoisia neuloja); IR^ (nujol): 3400(m), 1763(m), 1735(s), 1690(s), 1510(s), 782(m), 770(m), 740(s), 713(s), 695(s) cm-1; XH-NMR 6: 20 7,44 - 7,13 (m, 13H), 7,03 (br s, 2H), 5,22 (d, J = 8,8

Hz, 1H), 5,15 (s, 2H), 5,04 (br s, 2H), 4,48 - 4,24 (m, : 2H), 4,25 - 4,10 (m, 1H), 3,92 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 3,84 ; (dq, J = 9,8, 6,1 Hz, 1H), 2,00 - 1,83 (m, 1H), 1,63 (d, J = 4,8 Hz, 3H), 1,39 (s, 9H) ppm; eluoimalla edelleen n-25 heksaani/etyyliasetaatti-seoksella saatiin toinne annos otsikon mukaista yhdistettä (0,48 g) melko puhtaana kiintoaineena, joka kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaani-seoksesta, jolloin saatiin puhdasta otsikon mukaista yhdistettä (0,29 g, 6,8 %); otsikon mukaisen yhdis-30 teen kokonaissaanto ollessa 3,62 g (82 %); sp. 153,5 - 154,0 °C (hienoja valkoisia neuloja); IR^ (nujol): 3450-(s), 3400(s), 1690(vs), 1518(s), 1170(s), 772(m), 760(w), 740(m), 710(m), 700(s) cm*1; XH-NMR 6: 7,50 - 7,13 (m, 9H), 7,08 (br s, 1H), 5,15 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,05 (br s, 35 2H), 4,36 (ddd, J = 11,0, 8,4, 8,4 Hz, 1H), 4,01 (br d, 38 11'*' ' ? t 5 *. : 3 = 11,0 Hz, 1H), 3,90 (dq, J = 9,9, 6,0 Hz, 1H), 3,64 (br s, 2H), 1,65 - 1,45 (m, 5H), 1,40 (s, 9H) ppm.

(17) (2S*, 3S*, 4S*, 5R*) -3-amino-l-bentsyylioksikar-bonyy11-4-hydroksimetyy11-5-metyyli-2-fenyy1ipyrrolidi ini 5 Sekoitettuun liuokseen, jossa oli (2S*,3S*,4R*, 5R*)- l-bentsyylioksikarbonyyli-4- (bentsyylioksikarbonyylioksi) -metyyli-3-[N- (tert-butoksikarbonyyli )amino] -5-metyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä (0,80 g, 1,82 mmol) etyyliasetaatissa (15 ml), lisättiin väkevää kloorivetyhappoa (8,0 ml) huo-10 neenlämpötilassa; lisäyksen yhteydessä havaittiin hiilidioksidin kehittymistä. Kun reaktioseosta oli sekoitettu huoneenlämpötilassa 1,5 tuntia, se konsentroitiin vakuumi-ssa, jolloin saatiin siirappimainen jäännös. Tämä tehtiin emäksiseksi pH-arvoon 10 - 11 20-%:sella natriumhydroksi-15 din vesiliuoksella ja seos uutettiin sitten etyyliasetaatilla. Yhdistetyt etyyliasetaattiuutteet pestiin kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 1), kuivattiin (K2C03) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakaa otsikon mukaista yhdistettä (0,61 g, 98 %); IR^, 20 (filmi): 3380(m), 1700(s), 1682(s), 1605(m), 1585(m), 1110(s), 750(m), 700(s) cm·1; ^-NMR 6: 7,52 - 7,13 (m, 9H), : 6,99 (br s, 1H), 5,05 (br s, 3H), 4,92 (d, J = 8,1 Hz, ; 1H), 3,89 (dd, J = 10,4, 2,9 Hz, 1H), 3,76 (dd, J = 10,4, 10,4 Hz, 1H), 3,60 - 3,45 (m, 1H), 3,50 (dd, J = 11,2, 8,1 : 25 Hz, 1H), 2,10 - 1,70 (m, 3H), 1,61 (br d, J = 4,3 Hz, 3H) ppm. Tämä käytettiin seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

(18) (2S*, 3S*, 4R*, 5R*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-4-hydr oks ime tyyli -3- [ N- (5 - i sopropyy 1 i - 2 -metoksibent syy 1 i) - 30 amino]-5-metyyli-2-fenyylipyrrolidiini

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli ( 2S*, 3S*, 4S*, 5R*)-3-amino-l-bentsyylioksikarbonyyli-4-hydroksimetyyli-5-me-tyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä (0,61 g, 1,79 mmol) kuivassa metyleenikloridissa (14 ml), lisättiin liuos, jossa oli 5-35 isopropyyli-2-metoksibentsaldehydiä (0,40 g, 2,24 mmol) 39 ✓j η Γ\ f Γ· Γ)

I I Z : 1 L

kuivassa metyleenikloridissa (2 ml) huoneenlämpötilassa. Tähän liuokseen lisättiin natriumtriasetoksiboorihydridiä (0,57 g, 2,69 mol) annoksittain huoneenlämpötilassa. Lisätty natriumtriasetoksiboorihydridi liukeni asteittain sek-5 oitettaessa huoneenlämpötilassa. Kun reaktioseosta oli sekoitettu huoneenlämpötilassa kolme tuntia, se tehtiin emäksiseksi pH-arvoon 10 - 11 10-%:sella natriumhydrok-sidin vesiliuoksella. Seos erotettiin ja vesikerros uutettiin metyleenikloridilla (x 3). Yhdistetty metyleeniklori-10 diliuos pestiin kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 1), kuivattiin (K2C03) ja konsentroitiin vakuum-issa, jolloin saatiin keltaista öljyä (1,34 g). Tämä krom-atografoitiin silikageelillä (Merck Kieselgel 60, 20 g). Eluoimalla n-heksaani/etyyliasetaatti-seoksella (30:1) 15 sekä metyleenikloridi/metanoli-seoksella (400:1 > 200:1) saatiin otsikon mukaista yhdistettä (0,70 g, 78 %) jäykkä-juoksuisena vaalenkeltaisena öljynä? IR^ax ( filmi ): 3330(s), 1700(e), 1610(m), 1500(s), 1250(s), 1110(s), 1030(s), 815-(s), 770(s), 738(s), 700(s) cm*1; ^-NMR 6: 7,45 - 7,16 (m, 20 9H), 7,05 (dd, J = 8,4, 1,8 Hz, 1H), 7,02 (br s, 1H), 6,88 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,33 - 4,93 Γ : (m, 3H), 3,97 - 3,65 (m, 3H), 3,81 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 3,72 (d, J = 12,1 Hz, 1H), 3,67 (s, 3H), 3,53 - 3,35 (m, 1H), 3,38 (dd, J = 11,5, 7,9 Hz), 2,79 (sep, J = 7,0 Hz, 25 1H), 2,17 - 1,98 (m, 1H), 1,56 (br s, 4H; 1,18 (d, J = 7,0

Hz, 6H) ppm.

(19) (2S*,3S*,4R*,5R*)-4-hydroksimetyyli-3-[N-(5-iso-propyy 1 i - 2 -metoksibentsyy 1 i) amino ] - 5 -metyyl i - 2 - f enyy 1 ipyr-rolidiini 30 20-%:ista Pd(0H)2/C:tä, (Pearlmanin katalyyttiä,

Aldrich; 0,44 g) lisättiin liuokseen, jossa oli (2S*,3S*,4-R*, 5R*)-1 -bentsyylioksikarbonyyli-4-hydroksimetyyli-3-[N-(5-isopropyyli-2-metoksibentsyyli )amino] -5-metyyli-2-feny-ylipyrrolidiiniä (0,70 g, 1,36 mmol) ja ammoniumformiaat-35 tia (0,51 g, 8,16 mmol) metanolissa (20 ml). Seosta sekoi- 40 112-:72 tettiin ja refluksoitiin lievästi 30 minuuttia. Katalyytti suodatettiin pois celitekerroksen avulla ja pestiin metan-olilla. Yhdistetty suodos ja pesunesteet konsentroitiin vakuumissa. Jäännös tehtiin emäksiseksi pH-arvoon 10 1 M 5 natriumhydroksidin vesiliuoksella ja uutettiin etyyliasetaatilla (x 4). Yhdistetyt etyyliasetaattiuutteet kuivattiin (K2C03) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin vaaleankeltaista jäykkäjuoksuista öljyä (0,46 g), joka kiteytyi itsestään seistessään jääkaapissa kaksi vuorokau-10 tta. Tämä kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaa-ni-seoksesta, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä (0,33 g, 63 %) valkoisina kiteinä. Keltainen emäliuos kro-matografoitiin silikageelillä (Merck Kieselgel 60, 2,0 g). Eluoimalla metyleenikloridi/metanoli-seoksella (50:1 > 15 20:1) saatiin lisämäärä otsikon mukaista yhdistettä (0,06 g, 12 %) vaaleankeltaisena jäykkäjuoksuisena öljynä, joka kiteytyi itsestään seistessään huoneenlämpötilassa; otsikon mukaisen yhdisteen kokonaissaanto oli 0,39 g (76 %); sp. 76,0 - 78,0 °C (valkoista jauhetta); IR.^ (nujol): 20 3180(w), 1610(w), 1509(s), 1240(s), 1050(m), 800(m), 750 (m), 696(m) cm·1; 1H-NMR 6: 7,47 - 7,22 (m, 5H), 7,01 (dd, . : J = 8,4, 2,2 Hz, 1H), 6,68 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,65 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 4,50 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 3,78 (dd, J = 10,3, 4,3 Hz, 1H), 3,66 (dd, J = 10,3, 9,4 Hz, 1H), 3,64 25 (s, 3H), 3,61 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 3,47 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 3,39 (dd, J = 9,7, 7,7 Hz, 1H), 2,92 (dq, J = 9,4, 6,0 Hz, 1H), 2,76 (sep, J = 6,8 Hz, 1H), 2,13 (br s, 3H), 1,84 (ddd, J = 9,4, 9,4, 4,3 Hz, 1H), 1,27 (d, J = 6,0 Hz, 3H), 1,16 (d, J = 6,8 Hz, 6H) ppm.

30 (20) (2S*,3S*,4R\5R*)-4-hydroksimetyyli-3-[N-(5-iso- propyyli-2-metoksibentsyyli)amino] -5-metyyli-2-fenyylipyr-rolidiinifumaraatti

Fumaarihappoa (94,6 mg, 0,81 mmol) lisättiin liuokseen, jossa oli (2S*,3S*,4R*,5R*)-4-hydroksimetyyli-3-[N-(5-35 isopropyyli-2-metoksibentsyyli )amino]-5-metyyli-2-fenyyli- η λ ο . ·* 7 Ο 41 1 1 L ‘ " ' Ζ pyrrolidiiniä (0,31 g, 0,81 mmol) etanolissa, jolloin saatiin kirkas liuos, ja liuotin, etanoli, haihdutettiin va-kuumissa. Jäljellä oleva kiintoaine kiteytettiin uudelleen etanoli/etyyliasetaatti-seoksesta; kun seosta oli pidetty 5 jääkaapissa yön yli valkoiset kiteet suodatettiin pois, pestiin dietyylieetteri/etanoli-seoksella (20:1) ja niitä kuivattiin vakuumissa 40 °C:ssa, jolloin saatiin otsikon mukaista fumaraattia (0,34 g, 83 %) valkoisena jauheena (sp. 161,0 - 162,5 °C); IR^, (nujol): 3300(m), 3000 - 2200-10 (br m), 1680(s), 1625(s), 1505(s), 1240(m), 1038(s), 820-(s), 770( s), 750( s), 740(m), 700(s) cm'1; 1H-NMR δ (DMSO-d6): 7,50 - 7,26 (m, 5H), 7,01 (dd, J = 8,4, 1,8 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,47 (s, 2H), 4,45 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 4,10 - 3,30 (m, 7H), 15 3,51 (s, 3H), 3,34 - 3,17 (m, 2H), 3,17 - 3,06 (m, 1H), 2,74 (sep, J = 7,0 Hz, 1H), 1,97 - 1,83 (m, 1H), 1,36 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 1,12 (d, J = 7,0 Hz, 6H) ppm.

(21) ( 2S*, 3S*, 4R*, 5R*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-3-[N-(tert-butoksikarbonyyli)amino]-4-fonnyy1i-5-metyy1i-2-20 fenyylipyrrolidiini

Sekoitettuun ja vedellä jäähdytettyyn liuokseen, ; : jossa oli (2S*, 3S*, 4R*, 5R*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-3-[N- ‘ (tert-butoksikarbonyyli)amino]-4-hydroksimetyyli-5-metyy- li-2-fenyylipyrrolidiiniä (2,60 g, 5,90 mmol) ja trietyy-25 liamiinia (5,70 ml, d 0,726, 40,9 mmol) dimetyylisulfoksi-dissa (kuivattu 4 A:n molekyyliseuloilla, 36 ml), lisättiin rikkitrioksidipyridiini-kompleksia (S03.Py, Wako, 5,42 g, 34,1 mmol) annoksittain. Juuri lisäyksen jälkeen poistettiin vesihaude ja sekoittamista jatkettiin huoneen-' 30 lämpötilassa noin 1,5 tuntia. Reaktioseos kaadettiin seok- : seen, jossa oli jäätä ja vettä (80 ml). Seos uutettiin metyleenikloridilla (30 ml x 3). Yhdistetyt metyleeniklo-ridiuutteet pestiin 10-%:isella sitruunahapon vesiliuoksella (30 ml x 4) kunnes pesuvesi saavutti sitruunahapon 35 happamuus (pH noin 3), vedellä (30 ml x 1), kyllästetyllä Λ Λ ί~> 42 I i / · / natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella (40 ml x 1) ja kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 1), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakaa otsikon mukaista yhdistettä jäykkäjuoksuisena vaa-5 leankeltaisena öljynä; koska saanto oli arvioitu liian suureksi johtuen käytetyn liuottimen kontaminaatiosta, tämä raakatuote muuttui kinteäksi seistessään jääkaapissa; IR^ (filmi): 3400(m, olkapää), 3350(m), 2720(w), 1710(vs), 1690(vs, olkapää), 1605(w), 1585(w), 1520(s), 1500(s), 10 1165(s), 770(m), 730(s), 700(s) cm’1; ^-NMR 6: 9,65 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 7,40 - 7,10 (m, 9H), 7,05 (br s, 1H), 5,27 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,06 (br s, 2H), 4,78 - 4,57 (m, 1H), 4,24 (dq, J = 9,5, 6,1 Hz, 1H), 4,05 (br d, J = 9,2 Hz, 1H), 2,77 - 2,50 (m, 1H), 1,61 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 1,37 15 (s, 9H) ppm. Tämä käytettiin seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

(22 ) ( 2S*, 3S*, 4R*, 5R*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-3-[ N- (tert-butoksikarbonyy 1 i) amino ] -4-metoksikarbonyy 1 i - 5 -metyyli-2-fenyylipyrrolidiini 20 Sekoitettuun, jäällä jäähdytettyyn liuokseen, jossa oli raakaa (2S*, 3S*, 4R*, 5R*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-3-[N-: (tert-butoksikarbonyyli)amino]-4-formyyli-5-metyyli-2-fe- nyylipyrrolidiiniä (3,66 g, 5,90 mmol) ja natriumvetykar-bonaattia (19,8 g, 0,24 mol) metanoli/vesi-seoksessa (9:1 25 tilavuuden mukaan, 30 ml), lisättiin tipoittain 2,0 M bro-miliuosta metanoli/vesi-seoksessa (9:1 tilavuuden mukaan, 30 ml, 60 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpö-tilassa kuusi tuntia, jona aikana väri muuttui syvänpunai-sesta oranssiksi. Kyllästettyä natriumtiosulfaatin (hypo) : 30 vesiliuosta lisättiin tipoittain seokseen jäähdyttäen sa malla jäällä kunnes bromiylimäärästä johtuva oranssi väri oli hävinnyt. Seos suodatettiin celitekerroksen läpi ja suodatinkakku pestiin metyleenikloridilla. Yhdistetty suo-dos ja pesunesteet konsentroitiin vakuumissa. Siirappimai-35 nen jäännös laimennettiin etyyliasetaatti/tolueeni-seok-

*\ Λ C' ' r.’ O

43 I I ' '' sella (2:1, 120 ml), pestiin natriumtiosulfaatin kylläs tetyllä vesiliuoksella (x 2), kyllästetyllä natriumvety-karbonaatin vesiliuoksella (x 1) ja kyllästetyllä natrium-kloridin vesiliuoksella, kuivattiin (MgS04) ja konsentroi-5 tiin vakuumissa, jolloin saatiin valkoista kiintoainetta (2,96 g). Tämä kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaani-seoksesta, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä (2,44 g, 88 % kahdessa vaiheessa (2S*,3S*,4R*, 5R*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-3- [N- (tert-butoksikarbonyy-10 li )amino] -4-hydroksimetyyli-5-metyyli-2-fenyylipyrrolidii- nistä) valkoisena jauheena; sp. 147 - 148 °C; IRmax (nujol): 3310( s), 1728( s), 1701(s, olkapää), 1690(vs), 1537(s), 1535( s), 1280( m), 1165(m), 750(m), 700(s) cm-1; 1H-NMR 6: 7,52 - 7,15 (m, 9H), 7,05 (br s, 1H), 5,28 (br d, J = 8,1 15 Hz, 1H), 5,05 (br s, 2H), 4,60 (ddd, J = 11,7, 8,8, 8,1 Hz, 1H), 4,35 - 4,17 (m, 1H), 4,02 (br d, J = 8,8 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 2,58 (dd, J = 11,7, 9,9 Hz, 1H), 1,62 (br d, J = 5,5 Hz, 3H), 1,39 (s, 9H) ppm.

(23) (2S*, 3S*, 4S*, 5R*) -3-amino-l-bentsyylioksikar-2 0 bonyy 1 i - 4 -metoksikarbonyy 1 i - 5-metyyl i - 2 - f enyyl ipyrroi idi i - ni

Kloorivety/metanoli-reagenssia 10 (Tokyo Kasei, 25 ml) lisättiin (2S*,3S*, 4R*, 5R*)-l-bentsyylioksikarbonyy-: li-3-[N-(tert-butoksikarbonyyli)amino]-4-metoksikarbonyy- ; 25 li-5-metyyli-2-fenyylipyrrolidiiniin (1,25 g, 2,67 mmol) huoneenlämpötilassa. Syntynyttä heterogeenista seosta sekoitettiin ja refluksoitiin; reaktioseos tuli homogeeniseksi sisälämpötilan noustessa ja sitten saostui valkoinen kiintoaine. 15 minuutin kuluttua liuotin, metanoli, haih-« ‘ 30 dutettiin vakuumissa. Kiinteään jäännökseen lisättiin 10-%:ista natriumhydroksidin vesiliuosta kunnes synytnyt seos tuli emäksiseksi (pH 10 - 11). Tämä uutettiin etyyliasetaatilla (x 4). Yhdistetyt etyyliasetaattiuutteet pestiin kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 1), : 35 kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin 44 112-:72 saatiin raakaa otsikon mukaista yhdistettä (0,93 g, 95 %) keltaisena jäykkä juoksuisena öljynä; ( f ilmi): 3395(m), 3320(w), 1730(vs), 1700(vs), 1605(w), 1585(w), 1495(s), 1210( s), 1165( s ), 1105( s ), 1025(s), 745(s), 700(s) cm-1; 5 1H-NMR 6: 7,46 - 7,18 (m, 9H), 7,07 (br s, 1H), 5,08 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,06 (br s, 2H), 4,13 (dq, J = 9,7, 6,1 Hz, 1H), 3,85 (dd, J * 11,0, 8,4 Hz, 1H), 3,75 (s, 3H), 2,51 (dd, J = 11,0, 9,7 Hz, 1H), 1,64 (br d, J = 6,1 Hz, 3H), 1,27 (br s, 2H; Nff2) ppm. Tämä käytettiin seuraavassa 10 vaiheessa suolanmuodostukseen ilman eri puhdistusta.

(24) (2S*, 3S*, 4R*, 5R*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-3-[N-(5-isopropyy1i-2-metoksibentsyy1i)amino]-4-metoksikar-bonyy1i-5-metyy1i-2-fenyy1ipyrroiidiini

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli (2S*, 3S*, 4S*, 5R*)-15 3-amino-l-bentsyylioksikarbonyyli-4-metoksikarbonyyli-5- metyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä (0,93 g, 2,52 mmol) kuivassa metyleenikloridissa (20 ml), lisättiin liuos, jossa oli 5-isopropyyli-2-metoksibentsaldehydiä (0,56 g, 3,15 mmol) kuivassa metyleenikloridissa (5 ml) huoneenlämpötilassa. 20 Tähän lisättiin natriumtriasetoksiboorihydridiä (0,80 g, 3,78 mmol) annoksittain huoneenlämpötilassa. Lisätty nat-; : riumtriasetoksiboorihydridi liukeni asteittain sekoitet taessa huoneenlämpötilassa. Kun reaktioseosta oli sekoitettu huoneenlämpötilassa 1,5 tuntia, se tehtiin emäksi-25 seksi pH-arvoon 10 - 11 lisäämällä 10-%:ista natriumhyd- roksidin vesiliuosta jäähdyttäen samalla jäällä. Kerrokset erotettiin ja vesikerros uutettiin kloroformilla (x 3). Yhdistetty metyleenikloridikerros ja kloroformiuutteet pestiin kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 30 1), kuivattiin (Na2S04/K2C03) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin keltaista jäykkäjuoksuista öljyä (1,69 g). Tämä kromatografoitiin silikageelillä (Merck Kieselgel 60, 20 g). Eluoimalla n-heksaani/etyyliasetaatti-seoksella (30:1) sekä metyleenikloridi/metanoli-seoksella (200:1) : 35 saatiin otsikon mukaista yhdistettä (1,36 g, kvant.) vaa- 1 ΊΟ/ r7 n m j- I i Z · / /., 45 lenkel täisenä jäykkäjuoksuisena öljynä; IR^ax (filmi): 3350(w), 1735( s), 1700(vs), 1487(s), 1290(s), 1250(s), 1030(s), 810(s), 735(s), 700(s) cm'1; ^-NMR 6: 7,50 - 7,15 (m, 10H), 7,03 (dd, J = 8,4, 2,2 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 2,2 5 Hz, 1H), 6,70 (d, J » 8,4 Hz, 1H), 5,15 (br d, J = 7,7 Hz, 1H), 5,03 (br s, 2H), 4,22 - 4,06 (m, 1H), 3,84 - 3,58 (m, 3H), 3,71 (s, 3H), 3,64 (s, 3H), 2,90 - 2,58 (m, 2H), 1,61 (br d, J = 5,5 Hz, 3H), 1,19 (d, J = 7,0 Hz, 6H) ppm.

(25) (2S*, 3S*, 4R*, 5R*) -3- [N- (5-isopropyyli-2-metok- 10 sibentsyyli) amino] -4-metoksikarbonyyli-5-metyyli-2-fenyyl-ipyrrolidiini 20-%:ista Pd(0H)2/C: tä, (Pearlmanin katalyyttiä,

Aldrich; 0,81 g) lisättiin liuokseen, jossa oli (2S*,3S*, 4R*, 5R*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-3- [N— ( 5-isopropyyli-2-15 metoksibentsyyli )amino] -4-metoksikarbonyyli-5-metyyli-2- fenyylipyrrolidiiniä (1,36 g, 2,57 mmol) ja ammoniumfor-miaattia (0,97 g, 15,4 mmol) metanolissa (30 ml). Reak-tioseosta sekoitettiin ja refluksoitiin lievästi 30 minuuttia. Katalyytti suodatettiin pois celitekerroksen avulla 20 ja pestiin metanolilla. Yhdistetty suodos ja pesunesteet konsentroitiin vakuumissa. Siirappimainen jäännös tehtiin emäksiseksi pH-arvoon 10 1 M natriumhydroksidin vesiliuoksella ja uutettiin metyleenikloridilla (x 3). Yhdistetyt ; metyleenikloridiuutteet pestiin kyllästetyllä natriumklor- 25 idin vesiliuoksella, kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin vaaleankeltaista jäykkä juoksuista öljyä (0,94 g). Tämä kromatografoitiin silikagee-lillä (Merck Kieselgel 60, 13,0 g). Eluoimalla n-hek- saani/etyyliasetaatti-seoksella (20:1 > 10:1 > 5:1) sekä 30 metyleenikloridi/metanoli-seoksella (60:1) saatiin otsikon \ ‘ mukaista yhdistettä (0,73 g, 72 %) vaaleankeltaisena jäyk käjuoksuisena öljynä; IRmax (filmi): 3330(w), 1728(s), 1610-(m), 1500( s), 1250( s), 1170(s), 813(s), 765(m), 750(m), 740(m), 700( s) cm-1; XH-NMR 6: 7,42 - 7,21 (m, 5H), 7,02 35 (dd, J = 8,4, 2,2 Hz, 1H), 6,83 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 6,66 46 11 77 7 ? (d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,35 (d, J = 5,8 Hz, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,68 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,56 (dd, J = 5,8, 3,1 Hz, 1H), 3,51 (s, 3H), 3,48 (dq, J = 7,7, 6,2 Hz, 1H), 3,41 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 2,79 (sep, J = 7,0 Hz, 1H), 2,60 5 (deformoitu dd, J = 7,7, 3,1 Hz, 1H), 1,77 (br s, 2H; Nff x 2), 1,44 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 1,19 (d, J = 7,0 Hz, 6H) ppm.

(26) (2S*, 3S*, 4R*, 5R*) -3- [N- (5-isopropyyli-2-metok-s ibentsyy 1 i ) amino ] - 4 -metoks ikarbonyy 1 i - 5 -metyyl i - 2 - f enyy 1 -10 ipyrrolidiinifumaraatti

Fumaarihappoa (58,5 mg, 0,50 mmol) lisättiin liuokseen, jossa oli ( 2S*, 3S*, 4R*, 5R*)-3-[N-( 5-isopropyyli-2-met-oksibentsyyli )amino] -4-metoksikarbonyyli-5-metyyli-2-feny-ylipyrrolidiiniä (0,20 g, 0,50 mmol) etanolissa. Syntynyt-15 tä heterogeenista seosta sonikoitiin täydellisen suolan- muodostuksen mahdollistamiseksi. Näin muodostuneet kiteiset suolat liuotettiin mahdollisimman pienenn etanolimä-ärään refluksoimalla ja kiteytettiin uudelleen liuoksen jäähtyessä huoneenlämpötilaan. Kun seosta oli pidetty jää-20 kaapissa yön yli valkoiset kiteet suodatettiin pois, pestiin dietyylieetteri/etanoli-seoksella (20:1, x 1) ja niitä kuivattiin vakuumissa 40 °C:ssa, jolloin saatiin ; otsikon mukaista fumaraattia (0,20 g, 85 %) valkoisena ·' ; jauheena. Lisämäärä otsikon mukaista yhdistettä (0,02 g, ; 25 8 %) saatiin toisena annoksena kiteyttämällä emäliuos eta- noli/dietyylieetteri-seoksesta; otsikon mukaisen yhdisteen

» I

kokonaissaanto oli 0,24 g (93 %); sp. 169,0 - 171,0 °C (valkoista jauhetta); IRmax (nujol): 3330(s), 3000 - 2100(br s), 1735( s), 1710( s), 1653(m), 1603(m), 1240(s), 1178(s), : 30 818( s), 788(m), 768(s), 743(s), 700(s) cm'1; 1H-NMR δ (DMSO- :: d6): 7,47 - 7,30 (m, 4H), 7,35 - 7,21 (m, 1H), 7,00 (dd, J = 8,4, 2,0 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,59 (s, 2H), 4,29 (d, J = 6,2 Hz, 1H), ; 4,15 - 3,10 (m, 8H), 3,67 (s, 3H), 3,54 (s, 3H), 2,73 47 A Af' ’ r ·", I !/_':/ /.

(sep, J = 7,0 Hz, 1H), 2,60 - 2,50 (m, 1H), 1,30 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 1,12 (d, J = 7,0 Hz, 6H) ppm.

(27) (2S*, 3S*, 4R*, 5R*) -4-karboksi-3- [N- (5-isopropyy-1 i - 2 -met oksi bent syyli) amino ] - 5 -metyy 1 i - 2 - f enyy 1 ipyrrol i -5 diinidihydrokloridi

Liuosta, jossa oli (2S*,3S*,4R*, 5R*)-3-[N-( 5-isopro-pyyli-2-metoksibentsyyli)amino]-4-metoksikarbonyyli-5-me-tyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä (0,39 g, 0,98 mmol) 6 M kloo-rivetyhappoliuoksessa (6,0 ml) sekoitettiin ja refluksoi-10 tiin lievästi 30 minuuttia, jolloin noin 10 minuutin ref-luksoinnin jälkeen alkoi saostua valkoista kiintoainetta. Reaktioseos jäähdytettiin huoneenläpötilaan ja sitten lisättiin etanolia (4,0 ml). Kun seosta oli jäähdytetty jäällä 30 minuuttia, valkoinen kiintoaine suodatettiin 15 pois, pestiin etanolilla (x 2) ja sitä kuivattiin vakuu-missa välillä 40 - 50 °C kaksi vuorokautta, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä (0,43 g, 96 %) valkoisina neuloina.

20 DC

H0’C.

X>/Ph 0146

li 2HCI

I 25

Sp. 159 - 164 °C; IRmax (nujol): 3400(s), 3200(s), 3130(s), 2370( s), 2300(br s), 1735(s), 1710(s), 1585(s), 1510(s), 1260( s ), 1143( s), 1017(s), 830(s), 770(s), 745(s), 702(s) cm"1; 1H-NMR δ (DMS0-d6): 7,90 - 7,73 (m, 2H), 7,60 - 7,45 30 (m, 3H), 7,25 - 7,13 (m, 2H), 6,90 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 5,35 - 5,15 (m, 1H), 4,63 - 4,41 (m, 1H), 4,20 - 4,01 (m, ; 1H), 4,00 - 3,83 (m, 1H), 3,80 - 3,15 (m, 1H), 3,67 (s, 3H), 2,79 (sep, J = 6,8 Hz, 1H), 2,55 - 2,42 (m, 1H), 1,71 (br d, J = 5,9 Hz, 3H), 1,15 (d, J = 6,8 Hz, 6H) ppm.

„α 112' 7 2 48

Esimerkki 2 (1) ( 2S*, 3S*, 4R*, 5R*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-3- [N-(2-metoksi-5-trifluorimetoksibentsyyli) amino] -4-metoksi-karbonyy1i-5-metyyli-2-fenyylipyrrolidiini 5 Sekoitettuun liuokseen, jossa oli (2S*, 3S*, 4S*, 5R*)- 3-amino-l-bentsyylioksikarbonyyli-4-metoksikarbonyyli-5-metyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä (793 mg, 2,15 mol) ja 2-metoksi-5-trifluorimetoksibentsaldehydiä (569 mg, 2,58 mmol) kuivassa metyleenikloridissa (10 ml), lisättiin nat-10 riumtriasetoksiboorihydridiä (639 mg, 3,01 mmol) annoksittain huoneenlämpötilassa. Kun reaktioseosta oli sekoitettu huoneenlämpötilassa kaksi tuntia, se tehtiin emäksiseksi pH-arvoon 10-11 lisäämällä 10-%:ista natriumhydroksidin vesiliuosta jäähdyttäen samalla jäällä. Kerrokset erotet-15 tiin ja vesikerros uutettiin metyleenikloridilla (60 ml x 4). Yhdistetty metyleenikloridiliuos pestiin natriumklori-din vesiliuoksella, kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakaa otsikon mukaista yhdistettä (1,32 g) keltaisena jäykkäjuoksuisena öljynä. Tämä 20 puhdistettiin pylväskromatografiällä silikageelillä (65 g) heksaani/etyyliasetaatti-seoksella (3:1 > 2:1), jolloin saatiin puhdasta otsikon mukaista yhdistettä (1,08 g, 88 %) vaalenkeltaisena jäykkäjuoksuisena öljynä. 1H-NMR 6: 7,42 - 7,17 (m, 10H), 7,08 - 6,99 (m, 2H), 6,78 - 6,70 (m, 25 1H), 5,18 (br d, J = 7,7 Hz, 1H), 5,04 (br s, 2H), 4,20 - 4,07 (m, 1H), 3,80 - 3,60 (m, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,70 (s, 3H), 2,83 - 2,67 (m, 1H), 1,61 (d, J = 5,9 Hz, 3H), 1,50 (br s, 1H) ppm. IRmax (filmi, cm'1): υ 3350, 1732, 1700, 1607, 1493, 1456, 1438, 1404, 1339, 1245, 1222, 1158, 30 1028, 870, 810.

Ί«ι c- > < o

I /.:- / Z

49 (2) (2S*, 3S*, 4S*, 5R*) -3- [N- (2-metoksi-5-trif luorimet-oksibentsyy 1 i)amino] -4-metoksikarbonyy 1 i-5-metyy 1 i-2-fe-nyylipyrrolidiini ja (2S*,3S*,4R*,5R*)-3-[N-(2-metoksi--5-trifluorimetoksibentsyyli)amino]-4-metoksikarbonyyli-5-5 metyyli-2-fenyylipyrrolidiini 20-%:ista Pd(OH)2/C:tä, (Pearlmanin katalyyttiä, 600 mg) lisättiin liuokseen, jossa oli (2S*, 3S*, 4S*, 5R* )-l-bentsyylioksikarbonyyli-3-[N-(2-metoksi-5-trifluorimetoksibentsyyli )amino]-4-metoksikarbonyyli-5-metyyli-2-fenyy-10 lipyrrolidiiniä (1,08 g, 1,89 mmol) ja ammoniumformiaattia (714 mg, 11,3 mmol) metanolissa (25 ml). Reaktioseosta sekoitettiin ja refluksoitiin lievästi 30 minuuttia. Katalyytti suodatettiin pois celitekerroksen avulla ja pestiin metanolilla. Yhdistetty suodos ja pesunesteet konsentroi-15 tiin vakuumissa. Jäännös tehtiin emäksiseksi pH-arvoon 10 1 M natriumhydroksidin vesiliuoksella ja uutettiin mety-leenikloridilla (60 ml x 4). Yhdistetyt metyleenikloridi-uutteet pestiin natriumkloridin vesiliuoksella, kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raaka 20 seos, jossa oli ( 2S*, 3S*, 4R*, 5R* )-3-[N-( 2-metoksi-5-trifluo-rimetoksibentsyyli )amino] -4-metoksikarbonyyli-5-metyyli-2-.' . fenyylipyrrolidiiniä ja ( 2S*, 3S*, 4S*, 5R* )-3- [N-( 2-metoksi-5- trifluorimetoksibentsyyli)amino]-4-metoksikarbonyyli-5-metyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä (794 mg) keltaisena öljynä.

25 Tämä puhdistettiin pyiväskromatografiällä silikageelillä (45 g) heksaani/etyyliasetaatti-seoksella (1:1), jolloin saatiin (2S*,3S*,4R*,5R*)-3-[N-(2-metoksi-5-trifluorimetoksibentsyyli )amino]-4-metoksikarbonyyli-5-metyyli-2-fenyy-lipyrrolidiiniä (222 mg, 27,3 %) vaaleankeltaisena kiinto-30 aineena, joka kiteytettiin uudelleen heksaani/etyyliase-taatti-seoksesta, jolloinsaatiin(2S*,3S*,4R*,5R*)-3-[N-(2-metoksi-5-trif luorimetoksibentsyyli) amino]-4-metoksikarbo-nyyli-5-metyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä (127 mg, ensimmäinen annos) valkoisena kiintoaineena; sp. 81 - 82 °C. ^-NMR 35 6: 7,38 - 7,21 (m, 5H), 7,03 (dd, J = 2,6, 8,8 Hz, 1H), 50 1 Ί r) ' 7 r> I i z - / /.

6,90 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,36 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,65 (d, J = 14,5 Hz, 1H), 3,56 (s, 3H), 3,58 - 3,37 (m, 1H), 3,50 (dd, J = 3,3, 5,9 Hz, 1H), 3,40 (d, J = 14,5 Hz, 1H), 2,55 (dd, J = 3,3, 5 7,7 Hz, 1H), 1,85 (br s, 2H), 1,43 (d, J = 6,2 Hz, 3H) ppm. IR„„ (KBr, cm-1): υ 3450, 1727, 1497, 1459, 1438, 1313, 1263, 1251, 1222, 1164, 1040, 885, 822.

Eluoimalle edelleen metyleenikloridi/metanoli-seok-sella (20:1) saatiin (2S*,3S*,4S*,5R*)-3-[N-(2-metoksi-5-10 trifluorimetoksibentsyyli)amino]-4-metoksikarbonyyli-5- metyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä (342 mg, 41,4 %) keltaisena öljynä. ^-NMR δ: 7,40 - 7,25 (m, 5H), 7,02 (dd, J = 2,8, 8,7 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,69 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,09 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 3,75 - 3,52 (m, 4H), 15 3,71 (s, 3H), 3,67 (s, 3H), 2,60 (t, J = 8,1 Hz, 1H), 1,95 (br s, 2H), 1,30 (d, J = 6,2 Hz, 3H) ppm. IR^ (filmi, cm’1): υ 3340, 1728, 1496, 1456, 1438, 1251, 1225, 1167, 1031, 700.

(3) (2S*, 3S*, 4 S*, 5R*) -4-karboksi-3- [N- (2-metoksi-5-20 trif luorimetoksibentsyyli) amino] -5-metyyli-2-fenyylipyr- rolidiinidihydrokloridi

Liuosta, jossa oli (2S*,3S*,4S*, 5R*)-3-[N-(2-metoksi-Γ ’ ’: 5-trifluorimetoksibentsyyli)amino]-4-metoksikarbonyyli - 5 -

! metyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä (110 mg, 0,25 mmol) 6 M

25 kloorivetyhappoliuoksessa (2 ml) sekoitettiin ja refluk- soitiin lievästi 30 minuuttia. Kun reaktioseos oli jäähtynyt huoneenlämpötilaan alkoi saostua valkoista kiintoainetta. Seos laimennettiin etanolilla (1,5 ml) ja jäähdytettiin jäällä tunnin ajan. Saostunut valkoinen kiintoaine 30 suodatettiin pois, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä (105 mg, 84,1 %) valkoisina neuloina; sp. 155 -159 °C.

51 11/: .-:72 OCF3 »V. ,νίί^ώ ,-Q/Ph °Μβ

5 H -2HCI

1H-NMR 6 (DMSO-d6): 11,27 (br s, 1H), 10,04 (br s, 1H), 7,86 - 7,78 (m, 2H), 7,56 - 7,33 (m, 5H), 7,09 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,28 (br s, 1H), 4,54 (br s, 1H), 4,28 - 4,11 (m, 10 2H), 4,00 - 3,40 (m, 7H), 1,73 (d, J = 6,6 Hz, 3H) ppm. IRmax (KBr, cm'1): υ 3420, 1708, 1585, 1503, 1455, 1257, 1232, 1212, 1173, 1014, 768.

(4) (2S\ 3S*, 4R\ 5R*) -4-karboksl-3- [N- (2-metoksl-5- trifluorimetoksibentsyyll)amino] - 5-metyyli-2-fenyylipyr-15 rolidiinidihydrokloridi

Liuosta, jossa oli (2S*,3S*, 4R*, 5R* )-3-[N-( 2-metoksi-5-trifluorimetoksibentsyyli)amino]-4-metoksikarbonyyli-5-metyyli-2-fenyylipyrrolidiiniä (162 mg, 0,37 mmol) 6 M kloorivetyhappoliuoksessa (2,5 ml) sekoitettiin ja refluk-20 soitiin lievästi 30 minuuttia. Reaktioseos jäähdytettiin . . huoneenlämpötilaan ja liuotin haihdutettiin vakuumissa, . jolloin raaka otsikon mukainen tummanpunaisena amorfisena • ' kiintoaineena. Tämä kiteytettiin uudelleen etanoli/eette- ri-seoksesta, jolloin saatiin puhdasta otsikon mukaista 25 yhdistettä (133 mg, 72,5 %) valkoisena kiintoaineena; sp. 137 - 140 °C.

OCFj

• h fS

30 HCfeQ, .1 \,^ OMe '' N 'Ph

H *2HCI

H-NMR 6 (DMS0-d6): 10,38 (br s, 1H), 7,66 - 7,57 (m, 3H), 35 7,42 - 7,29 (m, 2H), 7,10 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,35 (br s, 52 Λ -i ’ .· I i L· ' ; t .-...

1H), 4,45 (br s, 1H), 4,15 - 3,95 (m, 3H), 3,77 (s, 3H), 3,60 - 3,30 (m, 1H), 1,60 (d, J = 6,2 Hz, 3H) ppm. IR^ (KBr, cm'1): υ 3430, 2950, 1733, 1620, 1577, 1504, 1462, 1259, 1213, 1177, 1159, 1025, 820, 764, 700.

5 Esimerkki 3 (1) 2-(4-metoksibentsyylioksi)metyyli-2-propenoli Seosta, jossa oli p-anisaldehydiä (17,31 g, 0,127 mol), 2-metyleeni-l,3-propaanidiolia (14,00 g, 0,159 mol) ja p-tolueenisulfonihappomonohydraatia (121 mg, 0,64 mmol) 10 kuivassa bentseenissä (100 ml) sekoitettiin ja kuumennettiin refluksointilämpötilassa, ja muodostunut vesi poistettiin atseotrooppisesti teoreettisena määränä käyttäen Dean-Stark -laitetta. Kun 70 ml bentseeniä oli tislattu pois, synytnyt punainen bentseeniliuos, jossa oli 2-(4-15 metoksifenyyli)-5-metyleeni-l,3-dioksaania, jäähdytettiin suola/jää-seoksella, ja liuos, jossa oli di-isobutyylialu-miinihydridiä (DIBAL-H) bentseenissä (1,02 M, 100 ml ja 1,50 M, 67,0 ml; yhteensä 0,203 mol) lisättiin tipoittain typpiatmosfäärin alla; kun 20 ml DIBAL-H:n bentseeniliuos-20 ta oli lisätty, reaktion väri muuttui syvänpunaisesta vaaleankeltaiseen. Kun lisäys oli mennyt loppuun, reaktiose-osta sekoitettiin huoneenlämpötilassa yön yli. Reaktioseos : ; jäähdytettiin jäällä, ja metanolia (23 ml) lisättiin varo vasti. Vettä (12 ml) lisättiin sitten tipoittain, jolloin 25 seos tuli paksuksi ja hyytelömaiseksi ja lopuksi raemai-seksi. Kun sekoittamista oli jatkettu huoneenlämpötilassa tunnin ajan, seos suodatettiin celitekerroksen läpi. Suo-datinkakku pestiin huolellisesti bentseenillä. Yhdistetty suodos ja pesunesteet kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin 30 vakuumissa haudelämpötilassa 65 °C, jolloin saatiin vaale-‘ ankeltaista öljyä (24,88 g). Tämä tislattiin vakuumissa, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä (18,52 g, 70,1 %) värittömänä öljynä; kp. 123 - 147 °C/0,80 - 0,90 mm; IRnax (filmi): 3420(s), 1615(s), 1515(s), 1250(s), 35 1070( s), 1035( s), 918(m), 820(s) cm'1; 1H-NMR 6: 7,26 (d, 119/79 53 I I i~"·! i J = 8,8 Hz, 2H), 6,88 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 5,19 (br s, 1H), 5,14 (br s, 1H), 4,45 (s, 2H), 4,19 (s, 2H), 4,07 (s, 2H), 3,81 (s, 3H), 1,98 (br s, 1H) ppm.

(2) 3-bromi-2- [ (4-metoksibentsyylioksi)metyyli]pro- 5 peeni

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli 2-(4-metoksibentsyylioksi )metyyli-2-propenolia (21,48 g, 103,1 mmol) ja trifenyylifosfiiniä (32,45 g, 123,72 mmol) kuivassa mety-leenikloridissa (200 ml), lisättiin N-bromisukkinimidia 10 (NBS, 20,19 g, 113,41 mmol) annoksittain jäähdyttäen suola/ jää-hauteessa. Reaktioseosta sekoitettiin samoissa jäähdytysolosuhteissa tunnin ajan, jolloin se sekoitetaes-sa tuli sameaksi. Syntyneeseen valkoiseen lietteeseen lisättiin peräkkäin trifenyylifosfiiniä (20,83 g, 79,40 15 mmol) ja N-bromisukkinimidia (12,85 g, 72,18 mmol) ja sekoittamista jatkettiin jäähdyttäen suola/jää-hauteessa vielä 50 minuuttia, mikä johti keltaiseen reaktioseokseen. Metanolia (3,34 ml, d 0,791, 82,5 mmol) lisättiin tipoit-tain reagenssiylimäärän hajottamiseksi. Kun sekoittamista 20 oli jatkettu jäähdyttäen suola/jää-hauteessa vielä 40 minuuttia, seos pestiin kyllästetyllä natriumvetykarbonaatin : vesiliuoksella (40 ml x 2) ja kyllästetyllä natriumklori- din vesiliuoksella (40 ml x 1). Tämä tummanvihreä metylee-nikloridiliuos kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuu-25 missä, jolloin saatiin tummanruskeata kiintoainetta (100 g). Tämä uutettiin täydellisesti jääkylmällä n-hek-saani/dietyylieetteri-seoksella (10:1). Yhdistetyt uutteet suodatettiin lyhyen celitekerroksen läpi ja suodos konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin otsikon mukaista yh-: · 30 distettä (20,59 g, 73,5 %) värittömänä öljynä. Kiinteä ' jäännös uutettiin edelleen n-heksaani/dietyylieetteri-se- oksella (4:1, 100 ml x 5) ja yhdistetyt uutteet suodatettiin lyhyen celitekerroksen läpi. Suodos konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin kiinteä valkoinen jäännös, 35 joka uutettiin jääkylmällä n-heksaani/dietyylieetteri-se-

ΕΛ A A η r: *7 O

54 11/^/ L

oksella. Yhdistetyt n-heksaani-uutteet suodatettiin celi-tekerroksen läpi ja suodos konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin lisämäärä otsikon mukaista yhdistettä (1,84 g, 6,6 %) värittömänä öljynä; kokonaissaanto: 22,43 g, 5 80,1 %. IR^ (filmi): 1653(w), 1613(s), 1510(s), 1250(s), 1090(s), 1035(s), 912(s), 819(s) cm-1; 1H-NMR 6: 7,26 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,89 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 5,35 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 5,34 (s, 1H), 4,46 (s, 2H), 4,12 (s, 2H), 4,04 (s, 2H), 3,81 (s, 3H) ppm. Tämä käytettiin seuraavas-10 sa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

(3) (3S*, 4R*) -l-tert-butyylidimetyylisilyyli-3-[2-( 4-metoksibentsyylioksi ) metyyli - 2 -propenyyli ] - 4- f enyyli - 2 -atsetidinoni

Typpiatmosfäärin alla lisättiin tipoittain 1,5 M 15 litiumdi-isopropyyliamidi/tetrahydrofuraaniliuosta syklo-heksaanissa (Aldrich; 43,9 ml, 65,9 mmol) sekoitettuun liuokseen, jossa oli l-tert-butyylidimetyylisilyyli-4-fe-nyyli-2-atsetidinonia (13,24 g, 50,64 mmol) kuivassa tet-rahydrofuraanissa (230 ml) sisälämpötilassa välillä -78 -20 -73 °C. Kun seosta oli sekoitettu -78 °C:ssa 30 minuuttia, reaktioseos muuttui valkoiseksi lietteeksi. Liuos, jossa : : oli 3-bromi-2-[(4-metoksibentsyylioksi)metyyli]propeeniä * · (14,69 g, 54,18 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (30,0 ml), lisättiin tipoittain sisälämpötilassa välillä 25 -78 - -71 °C. Kun lisäys oli mennyt loppuun, käytetty ti- putussuppilo huuhdeltiin kuivalla tetrahydrofuraanilla (5 ml x 2). Syntynyttä homogeenista reaktioseosta sekoitettiin -78 °C:ssa tunnin ajan ja sitten -10 °C:ssa 50 minuuttia. Reaktio lopetettiin lisäämällä kyllästettyä 30 ammoniumkloridin vesiliuosta (30,0 ml) alle 0 °C:ssa. Seoa liuotettiin etyyliasetaattiin (500 ml). Erotettu etyyli-asetaattiliuos pestiin kyllästetyllä natriumkloridin vesi-liuoksella (100 ml x 2), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin heterogeenistä keltaista 35 öljyä (26,51 g). Tämä laimennettiin sitten dietyylieette- 55 I I L ' / l.

rillä (250 ml), pestiin vedellä (x 2) ja kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (xl), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin homogeenista keltaista öljyä (24,91 g). Tämä flashkromatografoitiin 5 silikageelillä (Merck Kieselgel 60, 250 g). Eluoimalla n-heksaani/etyyliasetaatti-seoksella (40:1 > 30:1 > 20:1 > 10:1) saatiin otsikon mukaista yhdistettä (19,73 g, 86,3 %) jäykkäjuoksuisena vaaleankeltaisena öljynä; IR.., (filmi): 1745(s), 1645(m), 1610(m), 1510(m), 990(olkapää, 10 m), 910(m), 775(m), 745(w), 700(m), 680(m) cm*1; 1H-NMR 6: 7,40 - 7,25 (m, 5H), 7,20 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,85 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 5,05 (s, 1H), 4,84 (s, 1H), 4,35 (s, 2H), 4,20 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 3,86 (s, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,25 (ddd, J = 10,5, 5,1, 2,6 Hz, 1H), 2,70 (dd, J = 15,7, 5,1 15 Hz, 1H), 2,48 (dd, J = 15,7, 10,7 Hz, 1H), 0,92 (s, 9H), 0,21 (s, 3H), -0,21 (s, 3H) ppm.

(4) (3S*,4R*) -l-tert-butyylidimetyylisilyyli-3- (2-hydroks imetyy1i-2-propenyyli)-4-fenyyli-2-atsetidinoni

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli (3S*,4R*)-l-tert-20 butyylidimetyylisilyyli-3- [2-( 4-metoksibentsyylioksi )me-tyyli-2-propenyyli]-4-fenyyli-2-atsetidinonia (18,74 g, 41,5 mmol), pH 7 fosfaattipuskuria (15,0 ml) ja metyleeni-kloridia (250 ml), lisättiin 2,3-dikloori-5,6-disyaani-: 1,4-bentsokinonia (DDQ, 15,1 g, 66,4 mmol) annoksittain 25 huoneenlämpötilassa; lisäyksen yhteydessä reaktioseos muuttui tummanvihreäksi ja sitten saostui sekoitettaessa punaista kiintoainetta. (Lisäyksen yhteydessä havaittiin lievää lämmönkehittymistä). Sekoittamista jatkettiin huoneenlämpötilassa kaksi tuntia, jolloin reaktio monitoroi-30 tiin TLC:llä [Merck Kieselgel 60, n-heksaani/etyyliase-taatti (3:1)]. Kyllästettyä natriumvetykarbonaatin vesi-liuosta (80,0 ml) lisättiin rektion lopettamiseksi, jolloin havaittiin kaasunkehittymistä. Kun celiteä oli lisätty, seos suodatettiin celitekerroksen läpi ja suodatinkak-35 ku pestiin metyleenikloridilla. Yhdistetty suodos ja mety- 56 112-:/2 leenikloridipesunesteet pestiin kyllästetyllä natriumvety-karbonaatin vesiliuoksella (x 2) ja kuivattiin (MgS04). Yhdistetyt vesipitoiset pesunesteet suodatettiin celite-kerroksen läpi ja suodatinkakku pestiin metyleenikloridil-5 la. Yhdistetystä suodoksesta ja pesunesteistä erotettiin metyleenikloridikerros ja vesipitoinen kerros uutettiin metyleenikloridilla (100 ml x 3). Yhdistetty metyleenikloridikerros ja pesunesteet kuivattiin (MgS04). Kuivattu metyleenikloridiliuos kombinoitiin, käsiteltiin aktivoi-10 dulla puuhiilellä ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin oranssinväristä öljyä (22,1 g). Tämä flashkromato-grafoitiin silikageelillä (Merck Kieselgel 60, 200 g).

Eluoimalla n-heksaani/etyyliasetaatti-seoksella (15:1 > 5:1 > 3:1) saatiin otsikon mukaista yhdistettä (11,18 g, 15 81,2 %) jäykkäjuoksuisena vaaleankeltaisena öljynä; IR„„y (filmi): 3420( s), 1750(s), 1733(s), 1718(s), 1705(s), 1650(m), 1040( s), 900(s), 775(s), 700(s) cm’1; ^-NMR 6: 7,43 - 7,25 (m, 5H), 5,04 (br s, 1H), 4,82 (br s, 1H), 4,20 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 4,06 (br s, 2H), 3,26 (ddd, J = 20 8,2, 7,0, 2,2 Hz, 1H), 2,67 (dd, J = 15,2, 7,0 Hz, 1H), 2,54 (dd, J = 15,2, 8,2 Hz, 1H), 2,42 (br s, 1H, OH), 0,92 ; : (s, 9H), 0,21 (s, 3H), -0,19 (s, 3H) ppm.

(5) (3S*, 4R*)-l-tert-butyylidimetyylisilyyli-3-(2-kloorimetyy1i-2-propenyy1i)-4-fenyy1i-2-atsetidinoni ; 25 Sekoitettuun ja jäällä jäähdytettyyn liuokseen, jossa oli (3S*, 4R*)-l-tert-butyylidimetyylisilyyli~3-(2-hydroksimetyyli-2-propenyyli)-4-fenyyli-2-atsetidinonia (13,6 g, 41,0 mmol), 2,6-lutidiinia (15,3 ml, d 0,920, 123 mmol) ja litiumkloridia (vedetöntä, 4,37 g, 103 mmol) 30 dimetyyliformamidissa (103 ml), lisättiin tipoittain me-tyylisulfonyylikloridia (MsCl, 7,93 ml, d 1,480, 103 mmol) typpiatmosfäärin alla. Kun seosta oli sekoitettu jäähdyttäen samalla jäällä viisi tuntia ja 50 minuuttia, lisättiin vettä (40 ml). Sekoittamista jatkettiin huoneenlämpö-35 tilassa vielä 20 minuuttia metyylisulfonyylikloridiylimää- 57 * r ' r ' r, I U. " / ,: .

rän hajottamiseksi. Syntynyt tummanpunainen seos kaadettiin veteen (70 ml). Seos uutettiin dietyylieetterillä (70 ml x 5). Yhdistetyt dietyylieetteriuutteet pestiin vedellä (x 3), kyllästetyllä natriumvetykarbonaatin vesiliu-5 oksella (x 1) ja kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 1), kuivattiin (MgS04), käsiteltiin aktivoidulla puuhiilellä ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin käytännöllisesti puhdasta otsikon mukaista yhdistettä (15,36 g, kvant. ) vaaleankeltaisena öljynä. IR,., (filmi): 10 1735(vs), 1650(w), 1175(s), 825(s), 750(s), 700(s) cm'1; 1H-NMR 6: 7,43 - 7,25 (m, 5H), 5,14 (br s, 1H), 4,87 (br s, 1H), 4,22 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 3,99 (s, 2H), 3,25 (ddd, J = 10,1, 5,1, 2,6 Hz, 1H), 2,78 (dd, J = 16,1, 5,1 Hz, 1H), 2,60 (dd, J = 16,1, 10,1 Hz, 1H), 0,92 (s, 9H), 0,22 15 (s, 3H), -0,20 (s, 3H) ppm. Tämä käytettiin seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

(6) (2R*,3S*)-3-metoksikarbonyyli-5-metyleeni-2-fe-nyylipiperidiini

Homogeenista seosta, jossa oli (3S*,4R*)-l-tert-bu-20 tyylidimetyylisilyyli-3-(2-kloorimetyyli-2-propenyyli)-4- fenyyli-2-atsetidinonia (12,98 g, 33,8 mmol) ja kloorive-: ty/metanoli-reagenssia 10 (Tokyo Kasei, 150 ml) sekoitet tiin ja refluksoitiin tunnin ajan. Seos konsentroitiin : vakuumissa. Siirappimainen tummanoranssinvärinen jäännös : 25 jäähdytettiin jäällä ja tehtiin sitten emäksisiksi kylläs tetyllä natriumkarbonaatin vesiliuoksella (noin 50 ml) pH-arvoon 9-10. Seos uutettiin etyyliasetaatilla (50 ml x 5). Yhdistetyt etyyliasetaattiuutteet kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin keltaista 30 puolikiinteätä ainetta (9,74 g). Tähän lisättiin natrium-jodidia (7,60 g, 50,7 mmol), natriumvetykarbonaattia (8,52 g, 101 mmol) ja dimetyyliformamidia (70 ml) ja syntynyttä seosta sekoitettiin ja kuumennettiin 15 minuutia haudelämpötilassa 160 °C. Kun seos oli saanut jäähtyä huo-35 neenlämpötilaan, lisättiin kyllästettyä natriumvetykarbon- 58 «Ί f' ' 1 ' t'.

I i /. ‘ i .·.

aatin vesiliuosta (70 ml) ja liukenemattomattomat epäorgaaniset aineet suodatettiin pois celiten avulla. Suoda-tinkakku pestiin etyyliasetaatti/tolueeni-seoksella (2:1 x 3). Yhdistetystä suodoksesta ja pesunesteistä erotettiin 5 etyyliasetaatti/tolueeni-kerros ja vesipitoinen kerros uutettiin etyyliasetaatti/tolueeni-seoksella (2:1, 30 ml x 5). Yhdistetty etyyliasetaatti/tolueeni-kerros ja uutteet pestiin vedellä (40 ml x 3) ja kyllästetyllä natriumklori-din vesiliuoksella (40 ml x 1), kuivattiin (Na2S04) ja kon-10 sentroitiin vakuumissa haudelämpötilassa alle 70 °C:ssa, jolloin saatiin käytännöllisesti katsoen puhdasta otsikon mukaista yhdistettä (7,66, yhteensä 98,0 % lähtien (3S*, 4R*)-1-tert-butyylidimetyylisilyyli-3-(2-kloorimetyyli-2-propenyyli)-4-fenyyli-2-atsetidinoniasta oranssinvärisenä 15 öljynä. IR^ (filmi): 3320(w), 1728(s), 1650(w), 1165(s), 900(m), 738(m), 698(s) cm'1; 1H-NMR 6: 7,41 - 7,14 (m, 5H), 4,88 (br s, 1H), 4,75 (br s, 1H), 4,09 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 3,68 (br d, J = 14,0 Hz, 1H), 3,45 (s, 3H), 3,43 (br d, J = 14,0 Hz, 1H), 3,23 - 3,14 (m, 1H), 2,83 - 2,62 (m, 20 1H), 1,78 (br s, 1H, NH) ppm. Tämä käytettiin seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

(7) (2R*, 3S*)-3-metoksikarbonyyli-5-metyleeni-2-fe-nyylipiperidiini . : Sekoitettuun seokseen, jossa oli raakaa (2R*,3S*)-3- ; 25 metoksikarbonyyli-5-metyleeni-2-fenyylipiperidiiniä (8,58 g, 37,1 mmol), natriumvetykarbonaattia (6,23 g, 74,2 mmol) ja vettä (75,0 ml), lisättiin liuos, jossa oli di-tert-butyylidikarbonaattia [(Boc)20, 9,72 g, 44,5 mmol) tetrahydrofuraanissa (5,0 ml); lisäyksen yhteydessä kehit-! 30 tyi voimakkaasti hiilidioksidia. Syntynyttä vaaleankeltai sta seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa kolme tuntia, ja uutettiin sitten etyyliasetaatilla (70 ml x 3). Yhdistetyt etyyliasetaattiuutteet pestiin kyllästetyllä natri-umkloridin vesiliuoksella (xl), kuivattiin (MgS04) ja kon-35 sentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin oranssinväristä Ί -1 r\ / r; r>

I 1 L ‘ ,· / Z

59 öljyä (14,35 g). Tämä flashkromatografoitiin silikageelil-lä (Merck Kieselgel 60, 150 g). Eluoimalla n-heksaani/et-yyliasetaatti-seoksella (50:1 > 20:1) saatiin otsikon mukaista yhdistettä (11,91 g, 96,9 %) suhteellisen epästa-5 hiilinä, melkein värittömänä öljynä; IR„,„. (filmi): 1735(s), 1697( s), 1685( s), 1650(olkapää, m), 1170(s), 895(s), 765(m), 700(s) cm-1; Hl-NMR 6: 7,36 - 7,17 (m, 5H), 4,95 (br s, 1H), 4,89 (br s, 1H), 4,40 - 4,20 (m, 1H), 3,80 - 3,35 (m, 2H), 3,63 (s, 3H), 3,14 - 3,03 (m, 1H), 2,84 - 2,57 10 (m, 2H), 1,42 (br s, 9H) ppm.

(8) (2R*, 3S*, 5S*) - ja (2R*, 3S*, 5R*)-1-tert-butoksikar-bonyy 1 i - 5 -hydroksimetyy 1 i - 3 -me t oks ikarbonyy 1 i - 2 - f enyyl ipi -peridiinin seos

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli raakaa (2R*,3S*)-15 3-metoksikarbonyyli-5-metyleeni-2-fenyylipiperidiiniä (9,90 g, 29,9 mmol) ja (Ph3P)3RhCl:ää (1,38 g, 1,50 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (150 ml), lisättiin tipoittaan huoneenlämpötilassa 1 M katekoliboraaniliuosta tetrahydrofuraanissa (Aldrich, 89,7 ml, 89,7 mmol) typpiatmos-20 fäärin alla. Syntynyttä tummanpunaista reaktioseosta se koitettiin huoneenlämpötilassa 2,5 tuntia. Seos jäähdy-: tettiin jäällä, ja sitten metanolia (150 ml) lisättiin varovasti. 5-%:ista natriumvetykarbonaatin vesiliuosta (60,0 ml) ja 30-%:ista vetyperoksidin vesiliuosta 25 (99,0 ml, 874 mmol) lisättiin peräkkäin ja mustaa reakti oseosta sekoitettiin jäähdyttäen samalla jäällä 1,5 tuntia. Tämä konsentroitiin vakuumissa haudelämpötilassa 40 -50 °C. Vesipitoinen jäännös uutettiin etyyliasetaatilla (70 ml x 5). Yhdistetyt etyyliasetaattiuutteet pestiin 30 jääkylmällä 1,0 M natriumhydroksidin vesiliuoksella (x 4) ja kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 1), kuivattiin (MgS04) ja käsiteltiin aktivoidulla puuhiilellä ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin tummanpunainen siirappi (11,42 g). Tämä flashkromatografoitiin sili-35 kageelillä (Merck Kieselgel 60, 120 g). Eluoimalla n-hek- 60 S) C' f Γ.’ Γ) I I Ζ ', saani/etyyliasetaatti-seoksella (10:1 > 5:1 > 3:1) saatiin seos, jossa oli otsikon mukaisia yhdisteitä (9,17 g, 87,8 %) jäykkäjuoksuisena vaaleankeltaisena öljynä. IR*»» (filmi): 3450(s), 1730(s), 1680(br s), 1290(br s), 1150(br 5 s), 1040(s), 765(w), 738(m), 700(s) cm"1; ^-NMR 6: osit tain, 3,61 (s, 3H, CO2Cff3), 1,53, 1,50 ja 1,48 (kukin s, yhteensä 9H, NC02C4H9-t) ppm.

(9) (2R*,3S*,5S*)- ja (2R*,3S*,5R*)-5-hydroksimetyyli-3-metoksikarbonyy1i-2-fenyy1ipiperidiinin seos 10 Seos, jossa oli (2R*,3S*,5S*)- ja (2R*,3S*, 5R*)-1- tert-butoksikarbonyyli-5-hydroksimetyyli-3-metoksikarbo-nyyli-2-fenyylipiperidiiniä (19,31 g, 55,26 mmol) liuotettiin metanoliin (50 ml), ja kloorivety/metanoli-reagenssia 10 (Tokyo Kasei, 50 ml) lisättiin huoneenlämpötilassa. Kun 15 syntynyttä liuosta oli sekoitettu ja refluksoitu lievästi 1,5 tuntia, lisättiin lisämäärä kloorivety/metanoli-reagenssia 10 (Tokyo Kasei, 100 ml). Sekoittamista jatkettiin refluksointiolosuhteissa tunnin ajan. Kirkkaankeltainen reaktioseos konsentroitiin sitten vakuumissa. Jäännös 20 jäähdytettiin jäällä, ja tehtiin emäksiseksi kyllästetyllä natriumkarbonaatin vesiliuoksella pH-arvoon 9-10. Saostuneet epäorgaaniset aineet suodatettiin pois celiten av-; ulia ja suodatinkakku pestiin metyleenikloridilla. Yhdis tetystä suodoksesta ja pesunesteistä erotettiin metyleeni-25 kloridikerros ja vesipitoinen kerros uutettiin metyleenikloridilla. Yhdistetty metyleenikloridikerros ja uutteet kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin seos, jossa oli otsikon mukaisia yhdisteitä (12,89 g, 93,5 %) tummanpunaisena öljynä. IR,„ (filmi): 30 3320( s), 1720( s), 1605(w), 1497(m), 1195(s), 1170(s), 740(m), 700( s) cm'1; 1H-NMR 6: 7,40 - 7,16 (m, 5H), 4,40 (d, J = 5,1 Hz, 0,33H), 3,90 (d, J = 3,7 Hz, 0,67H), 3,60 (d, J = 6,6 Hz, 0,66H), 3,52 - 3,40 (m, 0,67H), 3,49 (d, J = 4,8 Hz, 1,34H), 3,48 (s, 1H), 3,41 (s, 2H), 3,10 - 2,99 35 (m, 1H), 2,93 (dd, J = 12,6, 4,0 Hz, 0,33H), 2,72 (dd, J = 61 Λ Λ > γ- r, I I L. '. / /.

12,6, 7,7 Hz, 0,33H), 2,53 (dd, J = 12,8, 11,4 Hz, 0,67H), 2,25 - 1,93 (m, 4H), 1,93 - 1,76 (m, 0,33H), 1,65 (ddd, J = 14,3, 14,3, 5,4 Hz, 0,67H) ppm. Tämä käytettiin seu-raavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

5 (10) (2R*, 3S*, 5S*) - ja (2R*, 3S*, 5R*)-5-(tert-butyyli- dimetyy1isilyy1ioksi)metyyli-3-metoksikarbonyy1i-2-fenyy-lipiperidiini

Seos, jossa oli (2R*,3S*,5S*)- ja (2R*,3S*,5R*)-5-hyd-roksimetyyli-3-metoksikarbonyyli-2-f enyylipiperidiiniä 10 (12,89 g, 51,70 mmol) liuotettiin dimetyyliformamidiin (30 ml) ja imidatsolia (8,80 g, 129,3 mmol) ja tert-butyy-lidimetyylisilyylikloridia (9,35 g, 62,0 mmol) lisättiin annoksittain peräkkäin huoneenlämpötilassa; lisättäessä tert-butyylidimetyylisilyylikloridia kehittyi lämpöä. Kun 15 seosta oli sekoitettu huoneenlämpötilassa kolme tuntia, tummankeltainen reaktioseos laimennettiin etyyliasetaat-ti/tolueeni-seoksella (2:1, 300 ml), pestiin vedellä (30 ml x 3) ja kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 1), kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa, 20 jolloin saatiin oranssinväristä öljyä (18,36 g). Tämä flashkromatografoitiin silikageelillä (Merck Kieselgel 60, : 320 g). Eluoimalla metyleenikloridi/metanoli-seoksella i (600:1 > 500:1 > 400:1 > 300:1 > 200:1) saatiin otsikon mukaista (2R*, 3S*, 5S*)-yhdistettä (11,46 g, 61,0 %) vaalean-: 25 keltaisena öljynä. IRmax (filmi): 3320(w), 1725(s), 1605(w), 1495(w), 1250( s), 1165(s), 1105(s), 838(s), 775(m), 698(m) : cm-1; XH-NMR 6: 7,35 - 7,17 (m, 5H), 3,88 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 3,53 - 3,34 (m, 2H), 3,45 (dd, J = 11,5, 5,5 Hz, 1H), 3,42 (s, 3H), 3,13 - 3,01 (m, 1H), 2,54 (dd, J = 13,2, 30 11,5 Hz, 1H), 2,18 - 2,00 (m, 2H), 0,90 (s, 9H), 0,05 (s, 6H) ppm. Eluoimalla edelleen metyleenikloridi/metanoli-seoksella (200:1 > 100:1 > 80:1 > 40:1) saatiin otsikon mukaista (2R*,3S*, 5R*)-yhdistettä (4,86 g, 25,9 %) vaaleankeltaisena öljynä. IRmM (filmi): 3340(w), 1730(s), 1602(w), 35 1495(m), 1250(s), 1195(s), 1110(e), 835(s), 777(s), 700(s) 62 112''. 72 cm'1; "H-NMR δ: 7,38 - 7,17 (m, 5H), 4,46 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 3,60 - 3,40 (m, 2H), 3,50 (s, 3H), 3,06 (ddd, J = 10,3, 5,1, 5,1 Hz, 1H), 2,87 (dd, J = 12,6, 4,0 Hz, 1H), 2,65 (dd, J = 12,6, 8,8 Hz, 1H), 2,13 - 1,95 (m, 1H), 5 1,95 - 1,73 (m, 1H), 1,65 (br s, 2H), 0,87 (s, 9H), 0,03 (s, 3H), 0,031 (s, 3H), 0,027 (s, 3H) ppm.

(11) (2R*, 3S*, 5S*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-5-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)metyyli-3-metoksikarbo-nyy1i-2-fenyy1ipiperidiini 10 Sekoitettuun ja jäällä jäähdytettyyn liuokseen, jossa oli (2R*,3S*, 5S* )-5-(tert-butyylidimetyylisilyyliok-si)metyyli-3-metoksikarbonyyli-2-fenyy1ipiperidiiniä (3,97 g, 47,3 mmol), natriumvetykarbonaattia (3,97 g, 47,3 mmol), vettä (80,0 ml) ja tetrahydrofuraania (10,0 ml), 15 lisättiin liuos, jossa oli bentsyyliklooriformiaattia (Cbz-Cl, 5,92 g, 34,67 mmol) tetrahydrofuraanissa (15,0 ml). Saostunut kumimainen aine dispergoitiin lisäämällä etyyliasetaattia (40,0 ml). Kun syntynyttä maitomaista suspensiota oli sekoitettu samalla jäähdyttäen 20 jäällä 2,5 tuntia, orgaaninen kerros erotettiin seoksesta ja vesipitoinen kerros uutettiin etyyliasetaatilla ; : (40 ml x 4). Yhdistetty orgaaninen kerros ja etyyliase- ·' taattiuutteet pestiin kyllästetyllä natriumkloridin vesi- liuoksella (x 1), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin va-25 kuumissa, jolloin saatiin keltaista öljyä (16,56 g). Tämä flashkromatografoitiin silikageelillä (Merck Kieselgel 60, 200 g). Eluoimalla n-heksaani/etyyliasetaatti-seoksella (60:1 > 30:1 > 20:1 > 10:1) saatiin otsikon mukaista yhdistettä (13,88 g, 88,5 %) vaaleankeltaisena öljynä. IR,^ 30 (filmi): 1735(s), 1700(s), 1498(m), 1290(s), 1253(s), 1100(s), 775( s), 700( s) cm'1; 1H-NMR 6: 7,42 - 7,28 (m, 6H), 7,28 - 7,16 (m, 4H), 5,98 - 5,87 (m, 1H), 5,31 - 5,10 (m, 2H), 3,92 (dm, J = 13,6 Hz, 1H), 3,63 (dd, J - 10,1, 9,7 Hz, 1H), 3,53 (dd, J = 10,1, 7,9 Hz, 1H), 3,09 (ddd, J = 35 11,2, 5,6, 5,6 Hz, 1H), 3,12 - 2,95 (m, 1H), 2,24 - 2,06 63 1 1 Z / / / (m, 1H), 2,06 - 1,93 (m, 1H), 0,87 (s, 9H), 0,02 (s, 6H) ppm.

(12) (2R*, 3S*, 5S*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-5-(ter t-butyy 1 idimetyy 1 i si lyy 1 loksl) metyyl i - 3 -karbamoyy 1 i-2-5 fenyylipiperidiini

Typpiatmosfäärin alla lisättiin 2,0 M trimetyyli-alumiiniliuosta tolueenissa (Aldrich, 140 ml, 280 mmol) sekoitettuun ja jäällä jäähdytettyyn suspensioon, jossa oli ammoniumkloridia (14,9 g, 278 mmol) kuivassa toluee-10 nissa (280 ml). Kun lisäys oli mennyt loppuun, reaktiose-osta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 30 minuuttia, jolloin kiinteä ammoniumkloridi hävisi täysin ja syntyi kirkas, homogeeninen seos. Tähän lisättiin huoneenlämpötilassa tipoittain liuos, jossa oli (2R*, 3S*, 5S* )-l-bentsyyliok-15 sikarbonyyli-5-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)metyyli- 3-metoksikarbonyyli-2-fenyylipiperidiiniä (13,88 g, 27,89 mmol) kuivassa tolueenissa (30,0 ml), jolloin reaktioseos lisäyksen yhteydessä tuli sameaksi. Tätä sekoitettiin ja kuumennettiin haudelämpötilassa 50 °C yön yli (noin 20 20 tuntia). Samea valkoinen reaktioseos jäähdytettiin jäällä ja vettä (80,0 ml, 4,40 mol) lisättiin varovasti, jolloin voimakkaasti kehittyi vetykaasua. Syntynyt valkoinen saos-tuma suodatettiin pois celitekerroksen avulla ja pestiin ’ : etyyliasetaatilla (80 ml x 5). Yhdistetty suodos ja etyy- , 25 liasetaattipesunesteet pestiin kyllästetyllä natriumklori- din vesiliuoksella (x 2), kuivattiin (MgS04) ja konsentroi-tiin vakuumissa, jolloin saatiin jäykkäjuoksuista väritöntä öljyä (13,76 g). Tämä kromatografoitiin silikageelillä (Merck Kieselgel 60, 100 g). Eluoimalla n-heksaani/etyyli-30 asetaatti-seoksella (5:1 > 2:1 > 1:1) saatiin otsikon mu- : kaista yhdistettä (11,10 g, 82,4 %) värittömänä siirap- pina. IRmax (filmi): 3405(s), 3340(s), 3200(s), 3100(w), 3070(m), 3045(m), 1735(m), 1675(br vs), 1610(s), 1498(s), 1160(s), 1100(s), 836( s), 775(s), 737(s) cm'1; 1H-NMR 6: 35 7,42 - 7,18 (m, 10H), 5,83 (d, J * 5,1 Hz, 1H), 5,67 (br j Λ η 7 64 s, 1Η), 5,47 (br s, 1Η), 5,20 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 5,13 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 3,91 (br d, J = 13,9 Hz, 1H), 3,63 (dd, J = 10,0, 6,8 Hz, 1H), 3,53 (dd, J = 10,0, 7,7 Hz, 1H), 3,08 (dd, J = 13,9, 7,7 Hz, 1H), 2,98 (ddd, J = 17,6, 5 5,1, 4,8 Hz, 1H), 2,25 - 1,91 (m, 3H), 0,87 (s, 9H), 0,02 (s, 6H) ppm.

(13) (2S*,3S*, 5S*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-3- (N-tert-butoksikarbonyyli)amino-5- (tert-butyylidimetyylisi-lyy1ioksi)metyyl1-2-fenyylipiperIdiini 10 Seosta, jossa oli (2R*, 3S*, 5S*)-1 -bentsyylioksikar- bonyyli-5-( tert-butyylidimetyylisilyylioksi )metyyli-3-kar-bamoyyli-2-fenyylipiperidiiniä (11,1 g, 23,0 mmol) ja tert-butanolia (200 ml) sekoitettiin ja kuumennettiin hau-delämpötilaan 80 °C. Syntyneseen homogeniseen seokseen 15 lisättiin lyijytetra-asetaattia (17,3 g, 39,1 mmol) yhtenä annoksena siinä lämpötilassa. Lisäyksen yhteydessä reak-tioseos tuli keltaisenruskeaksi ja tätä sekoitettiin ja refluksoitiin 45 minuuttia. Kun reaktioseos oli jäähtynyt huoneenlämpötilaan se neutraloitiin kyllästetyllä natrium-20 vetykarbonaatin vesiliuoksella (noin 200 ml) jäähdyttäen välillä jäällä. Tummanruskea saostuma suodatettiin pois celiten avulla ja pestiin etyyliasetaatilla. Yhdistetty suodos ja etyyliasetaattipesunesteet konsentroitiin vakuu-: missä, jolloin saatiin vesipitoinen jäännös, josta valkoi- .25 nen kiintoaine saostui konsentroinnin aikana. Tämä jäännös uutettiin etyyliasetaatilla (60 ml x 4). Yhdistetyt etyy-liasetaattiuutteet pestiin kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 1), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin jäykkäjuoksuista väritöntää 30 öljyä (14,18 g). Tämä kiteytettiin uudelleen n-heksaanista (noin 30 ml) - etyyliasetaatista (noin 2 ml), jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä (11,42 g, 89,5 %) valkoisena jauheena. Vakuumissa konsentroitu emäliuos (1,02 g) puhdistettiin silikageelillä flashkromatografoimalla 35 [Merck Kieselgel 60, 15,0 g; n-heksaani/etyyliasetaatti- 119 / 7 ? 65 1 1 *- ' ' seos (30:1 > 20:1)], jolloin saaliin lisämäärä otsikon mukaista yhdistettä (0,68 g, 5,3 %); kokonaissaanto: 12,10 g (94,8 %); sp. 119,0 - 119,5 °C (valkoista jauhetta); IR^ (nujol): 3330(s), 1700(s), 1685(s), 1520(s), 5 1248( s ), 1160( s ), 1118(s), 858(s), 840(s), 780(s), 770(s), 763( s), 738(m), 710(s), 698(m) cm'1; 1H-NMR 6: 7,41 - 7,20 (m, 10H), 7,10 (br s, 1H), 5,35 (br d, J = 5,9 Hz, 1H), 5,13 (br s, 0,6H), 5,08 (br s, 0,4H), 5,01 (br s, 0,7H), 4,96 (br s, 0,3H), 4,28 - 4,05 (m, 2H), 3,93 - 3,80 (m, 10 1H), 3,73 - 3,55 (m, 3H), 2,30 - 2,16 (m, 1H), 1,77 - 1,60 (m, 1H), 1,40 (br s, 7,5H), 0,88 (br s, 10,5H), 0,05 (s, 3H), 0,04 (s, 3H) ppm.

(14) (2S*,3S*, 5S*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-3- (H-tert-butoksikarbonyy1i)amino-5-hydroks imetyy1i-2-fenyyli-15 piperidiini

Sekoitettuun ja jäällä jäähdytettyyn liuokseen, jossa oli (2S*,3S*,5S*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-3-(N-tert-butoksikarbonyyli )amino-5-( tert-butyylidimetyylisilyyliok-si)metyyli-2-fenyylipiperidiiniä (12,10 g, 21,81 mmol) ja 20 4 A:n molekyyliseuloja (MS 4 A, aktivoitua jauhetta, Aid- rich, 15,0 g) kuivassa tetrahydrofuraanissa (100 ml), li-sättiin tipoittain 1 M tetra-n-butyyliammoniumfluoridiliu-osta tetrahydrofuraanissa (Aldrich, 26,2 ml, 26,2 mmol).

' t Kun lisäys oli mennyt loppuun, reaktioseosta sekoitettiin 25 huoneenlämpötilassa 1,5 tuntia. Zeoliitti suodatettiin pois celiten avulla ja pestiin tetrahydrofuraanilla. Yhdistettyyn suodokseen ja pesunesteisiin lisättiin vettä (50,0 ml) ja seos neutraloitiin 1,0 M etikkahapon vesiliuoksella (1,0 ml). Liuotin, tetrahydrofuraani, haihdutet-30 tiin vakuumissa ja vesipitoinen jäännös uutettiin metylee-nikloridilla (40 ml x 4). Yhdistetyt metyleenikloridiuut-teet pestiin kyllästetyllä natriumvetykarbonaatin vesiliu-, · , oksella (x 1), vedellä (x 2) ja kyllästetyllä natriumklo- ridin vesiliuoksella (x 1), kuivattiin (MgS04) ja konsent-' 35 roitiin vakuumissa, jolloin saatiin vaaleanoranssinväristä 1 1 ' ·'' 7 Γ 66 1 1 1 kiintoainetta (12,82 g). Tämä flashkromatografoitiin sili-kageelillä (Merck Kieselgel 60, 120 g). Eluoimalla mety-leenikloridi/metanoli-seoksella (200:1 > 150:1) saatiin valkoista kiintoainetta (7,81 g), joka kiteytettiin uudel-5 leen etyyliasetaatti/n-heksaani-seoksesta, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä (7,05 g, 73,4 %) valkoisena jauheena. Keltaisesta emäliuoksesta (0,16 g) saatiin lisämäärä otsikon mukaista yhdistettä (0,08 g, 0,83 %); kokonaissaanto: 7,13 g (74,3 %); sp. 121,0 - 124,0 °C (val-10 koista jauhetta); IRmax (nujol): 3330(s), 1712(s), 1699(s), 1671(s), 1538( s), 1498(w), 1263(s), 1170(s), 1050(s), 738-(m), 699(m) cm'1; 1H-NMR 6: 7,43 - 7,24 (m, 10H), 7,28 - 7,13 (m, 1H), 5,48 (br d, J = 5,5 Hz, 1H), 5,20 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 5,03 (br d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,31 - 4,13 15 (m, 1H), 3,99 (br dd, J = 14,5, 4,1 Hz, 1H), 3,75 - 3,58 (m, 2H), 3,36 (br dd, J = 14,5, 4,6 Hz, 1H), 2,88 - 2,11 (m, 2H), 1,97 - 1,75 (m, 2H), 1,39 (s, 9H) ppm.

(15) (2S*, 3S*, 5S*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-3- (liter t -but oks ikar bonyy li)amino-5-f ormyy 1 i - 2 - f enyy 1 ip iper i -20 diini

Sekoitettuun ja jäällä jäähdytettyyn liuokseen, ;T; jossa oli (2S*, 3S*, 5S* )-l-bentsyylioksikarbonyyli-3-(N-tert- J * · ’; butoksikarbonyyli) amino-5-hydroksimetyyli-2-f enyylipiperi- \ : diiniä (2,50 g, 5,68 mmol) ja trietyyliamiinia (3,55 ml, d 25 0,726, 25,5 mmol) dimetyylisulfoksidissa (25,0 ml), lisät tiin rikkitrioksidipyridiini-kompleksia (4,06 g, 25,5 mmol) annoksittain. Syntynyttä oranssinväristä seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 45 minuuttia ja kaadettiin sitten jääveteen (50 ml). Seos uutettiin metyleeniklori-30 dilla (30 ml x 4). Yhdistetyt metyleenikloridiuutteet pestiin 10-%:isella sitruunahapon vesiliuoksella (x 2), ve-. dellä (xl), kyllästetyllä natriumvetykarbonaatin vesiliu oksella (x 1) ja kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (xl), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumis-35 sa, jolloin saatiin raakaa otsikon mukaista yhdistettä 67 Λ Λ ·') / r.; «'s I I / * / ,-.

(2,80 g, kvant.) vaaleankeltaisena kiintoaineena. Tämä käytettiin seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta. Osa siitä (0,112 g) kiteytettiin uudelleen etyyliasetaat-ti/dietyylieetteri-seoksesta, jolloin saatiin otsikon mu-5 kaisen yhdisteen analyyttinen näyte (0,051 g); sp. 125,0 -127,0 °C (valkoista jauhetta); IR... (nujol): 3300(s), 1720(olkapää, s), 1710(vs), 1698(olkapää, s), 1538(s), 1500(m), 1170( s), 773(m), 738(s), 700(s) cm-1; ^-NMR 6: 9,79 (br s, 0,6H), 9,73 (br s, 0,4H), 7,50 - 7,20 (m, 10 10H), 7,22 (br s, 1H), 5,04 - 4,92 (m, 1H), 5,17 (br d, J = 12,1 Hz, 1H), 5,11 - 4,98 (m, 1H), 4,68 - 4,54 (m, 0,6H), 4,54 - 4,39 (m, 0,4H), 4,30 - 3,95 (m, 2H), 3,60 -3,45 (ra, 0,6H), 3,38 - 3,15 (m, 0,4H), 2,90 - 2,67 (m, 1H), 2,52 - 2,39 (m, 0,6H), 2,34 - 2,21 (m, 0,4H), 1,41 15 (br s, 9H) ppm.

(16) (2S*, 3S*, 5S*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-3- (N-tert-butoksikarbonyyli)amino-5-metoksikarbonyyli-2-fenyy-lipiperidiini

Sekoitettuun ja jäällä jäähdytettyyn liuokseen, 20 jossa oli (2S*,3S*,5S*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-3-(N-tert- butoksikarbonyyli )amino-5-formyyli-2-fenyylipiperidiiniä ; (2,80 g, 5,86 mmol) tetrahydrofuraanissa (3,0 ml) ja meta- ‘ noli/vesi-seoksessa (9:1, 10,0 ml), lisättiin kiinteätä ! natriumvetykarbonaattia (17,2 g, 205,1 mmol). Tähän sus- : 25 pensioon lisättiin tipoittain 2,0 M bromiliuosta metano- li/vesi-seoksessa (9:1, 20,5 ml, 41,0 mmol) jäähdyttäen samalla jäällä. Kun lisäys oli mennyt loppuun, reaktiose-osta sekoitettiin huoneenlämpötilassa viisi tuntia. Oranssinpunainen seos jäähdytettiin jäällä ja kiinteätä natri-30 umtiosulfaattia lisättiin annoksittain samalla sekoittaen * kunnes bromiylimäärästä johtuva punainen väri oli hävin nyt. Epäorgaaniset saostumat suodatettiin pois celiten avulla ja pestiin metyleenikloridilla. Yhdistetty suodos ja metyleenikloridipesunesteet konsentroitiin vakuumissa. 35 Jäännökseen lisättiin vettä ja seos uutettiin etyyliase- i 68 a a e- ' ' n I i i · / taatti/metyleenikloridi-seoksella (4:1). Yhdistetyt etyy-liasetaatti/metyleenikloridi-uutteet (4:1) pestiin kyllästetyllä natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella (x 1) ja kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 1), kui-5 vattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin keltaista kiintoainetta (2,03 g). Tämä flashkromato-grafoitiin silikageelillä (Merck Kieselgel 60, 35 g). Elu-oimalla metyleenikloridi/metanoli-seoksella (30:1) saatiin valkoista kiintoainetta (1,19 g), joka kiteytettiin uudel-10 leen etyyliasetaatti/n-heksaani-seoksesta, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä (1,01 g, kokonaissaanto 36,7 % lähtien (2S*,3S*, 5S*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-3-(N-tert-butoksikarbonyyli) amino- 5 -hydroksimetyy 1 i - 2 - f enyy 1 ipiperi-diinistä kahdessa vaiheessa); sp. 128,0 - 129,0 °C (hieno-15 ja valkoisia neuloja); IR„a, (nujol): 3320(s), 1735(s), 1710(vs), 1700(vs), 1673(vs), 1583(s), 1498(m), 1250(s), 1175( s), 1110(s), 770(m), 738(s), 700(s) cm’1; 1H-NMR 6: 7,50 - 7,10 (m, 10H), 7,18 (br s, 1H), 5,47 (br d, J = 5,9 Hz, 1H), 5,18 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,99 (d, J = 12,5 Hz, 20 1H), 4,56 - 4,33 (m, 1H), 4,36 - 4,05 (m, 1H), 3,69 (s, 3H), 3,65 - 3,40 (m, 1H), 2,99 - 2,86 (m, 1H), 2,42 - 2,25 v ·' (m, 1H), 1,96 - 1,80 (m, 1H), 1,41 (s, 9H) ppm.

(17) (2S*,3S*,5S*)-3-amino-l-bentsyylioksikarbonyy-1i-5-metoksikarbonyy1i-2-fenyy1ipiperidiini ; 25 Suspensiota, jossa oli (2S*,3S*, 5S*)-l-bentsyyliok- sikarbonyyli-3-(N-tert-butoksikarbonyyli)amino-5-metoksi-karbonyyli-2-fenyylipiperidiiniä (1,01 g, 2,16 mmol) kloorivety/metanoli-reagenssissa 10 (20,0 ml) sekoitettiin ja refluksoitiin 10 minuutia; reaktioseos tuli homogeeniseksi 30 ja kehittyi hiilidioksidikaasua. Seos konsentroitiin vakuumissa ja siirappimainen jäännös tehtiin emäksiseksi kyllästetyllä natriumkarbonaatin vesiliuoksella. Seos uutettiin metyleenikloridilla (x 4). Yhdistetyt metyleenik-loridiuutteet kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuu-35 missä, jolloin saatiin raakaa otsikon mukaista yhdistettä 69 112-/2 (0,789 g, kvant. ) vaaleankeltaisena siirappina. IR^ (filmi): 3375(m), 3310(w), 1730(br s), 1700(br s), I603(m), 1585(m), 1497( s), 1122(s), 740(s), 700(s) cm*1; XH-NMR 6: 7,45 - 7,15 (m, 10H), 5,26 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 5,15 (d, 5 J = 12,5 Hz, 1H), 5,01 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,51 (dd, J = 13.9, 2,1 Hz, 1H), 3,65 (s, 3H), 3,56 - 3,43 (m, 1H), 3,54 (dd, J = 13,9, 4,2 Hz, 1H), 2,95 - 2,85 (m, 1H), 2,22 (ddd, J = 14,9, 4,0, 4,0 Hz, 1H), 1,95 (ddd, J = 14,9, 10.9, 6,6 Hz, 1H) ppm.

10 (18) (2S*,3S*, 5S*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-5-me- t oks ikarbonyy 1 i - 3 - [ N - (2 -me t ok s i - 5 -1 r i f 1 uor ime t oks iben t syy-li)amino]-2-fenyylipiperidiini

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli (2S*,3S*,5S*)-3-amino-l-bentsyylioksikarbonyyli-5-metoksikarbonyyli-2-fe-15 nyylipiperidiiniä (0,79 g, 2,16 mmol) ja 2-metoksi-5-tri-fluorimetoksibentsaldehydiä (0,59 g, 2,70 mmol) metyleeni-kloridissa (25,0 ml), lisättiin natriumtriasetoksiboori-hydridiä (0,69 g, 3,24 mmol) annoksittain huoneenlämpötilassa. Sameata reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpöti-20 lassa kolme tuntia; lisätty natriumtriasetoksiboorihydridi liukeni asteittain sekoitettaessa ja reaktioseoksen sameus väheni. Kyllästettyä natriumkarbonaatin vesiliuosta lisät-; ; tiin ja seoksesta erotettiin metyleenikloridikerros. Vesi pitoinen kerros uutettiin metyleenikloridilla. Yhdistetty 25 metyleenikloridiliuos ja uutteet kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin vaaleankeltais-! ta öljyä (1,15 g). Tämä flashkromatografoitiin silikagee- lillä (Merck Kieselgel 60, 32,0 g). Eluoimalla metyleeni-kloridi/metanoli-seoksella (300:1 > 200:1) saatiin otsikon 30 mukaista yhdistettä (1,15 g, 93,1 %) värittömänä siirappi-' na, joka kiteytyi itsestään seistessään jääkaapissa. Tämä kiteytettiin uudelleen isopropyylieetteristä, jolloin saatiin analyyttisesti puhdasta otsikon mukaista yhdistettä (1,058 g, 85,3 %); sp. 93,5 - 95,0 °C (hienoja valkoisia 35 neuloja); IR^ (nujol): 1730(s), 1700(s), 1610(w), 1498(s), 11:?:: r: 70 1220( s), 1147( s), 1110(s), 1080(s), 1055(s), 1028(s), 742-(s), 730(s), 703(s), 695(s) cm'1; 1H-NMR 6: 7,43 - 7,23 (m, 9H), 7,21 (br s, 1H), 7,09 - 7,00 (m, 2H), 6,73 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 5,39 (br d, J - 5,3 Hz, 1H), 5,16 (d, J = 5 12,5 Hz, 1H), 5,02 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,50 (dd, J = 13,7, 1,8 Hz, 1H), 3,79 (d, J = 13,9 Hz, 1H), 3,68 (d, J = 13,9 Hz, 1H), 3,63 (s, 3H), 3,54 (dd, J = 13,7, 5,5 Hz, 1H), 3,28 (ddd, J = 10,2, 5,5, 4,8 Hz, 1H), 2,89 - 2,28 (m, 1H), 2,24 - 2,01 (m, 1H), 1,54 (br s, 1H) ppm.

10 (19) (2S*,3S*, 5S*)-5-metoksikarbonyyli-3-[N-(2-met- oksi-5-trifluorimetoksibentsyyli) amino] -2-fenyylipiperi-diini

Seosta, jossa oli (2S*,3S*,5S*)-l-bentsyylioksikar-bonyyli-5-metoksikarbonyyli-3- [N-( 2-metoksi-5-trif luori-15 metoksibentsyyli)amino]-2-fenyylipiperidiiniä (1,007 g, 1,758 mmol) ja 20-%:ista Pd(0H)2/C: tä, (0,258 g), tetrahyd-rofuraania (5,0 ml) ja metanolia (30,0 ml) sekoitettiin vetyatmosfäärissä (ilmapallo) huoneenlämpötilassa tunnin ajan. Katalyytti suodatettiin pois celiten avulla ja pes-20 tiin tetrahydrofuraanilla. Yhdistetty suodos ja pesunesteet konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin otsikon ; . mukaista yhdistettä (0,789 g, kvant. ) vaaleankeltaisena :*·*: öljynä. IR^ (filmi): 3340(s), 1735(s), 1718(s), 1608(m), I 1250(br s), 1150(br s), I033(s), 810(m), 750(m), 700(m) 25 cm'1; 1H-NMR 6: 7,36 - 7,18 (m, 5H), 7,00 (dd, J = 9,2, 2,2

Hz, 1H), 6,84 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 6,62 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 3,89 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 3,71 (s, 3H), 3,68 (d, J = 14,3 Hz, 1H), 3,51 (ddd, J = 11,9, 3,7, 1,8 Hz, 1H), 3,47 (s, 3H), 3,40 (d, J = 14,3 Hz, 1H), 3,05 (dddd, J = 12,3, 30 11,9, 3,7, 3,7 Hz, 1H), 2,92 - 2,82 (m, 1H), 2,88 (dd, J = : 11,9, 11,9 Hz, 1H), 2,37 (dm, J = 13,6 Hz, 1H), 1,78 (ddd, J = 13,6, 12,3, 2,9 Hz, 1H), 1,68 (br s, 2H, NH x 2) ppm.

1 1 r / S' S’ 71 1 1' ' ' (20 ) ( 2S*, 3S*, 5S*) -5-metoksikarbonyyli-3- [N- (2-met-oksi - 5 - tr 1 f luor imetoksiben t syy 11) amino ] - 2 - £enyy 1 ip iper i -diinidihydrokloridi

Liuokseen, jossa oli (2S*,3S*, 5S*)-5-metoksikarbo-5 nyyli-3-[N-(2-metoksi-5-trifluorimetoksibentsyyli)amino]- 2-fenyylipiperidiiniä (0,856 g, 1,952 mmol) metanolissa (2,0 ml), lisättiin ylimäärä kloorivety/metanoli-reagens-sia 10 (Tokyo Kasei, > 1,60 ml) kunnes seos muuttui tarpeeksi happamaksi (pH < 2); lisäyksen yhteydessä saostui 10 valkoinen kiintoaine. Kun dietyylieetteriä (1,5 ml) oli lisätty, heterogeeninen keltainen seos jätettiin seisomaan jääkaappiin yön yli. Saostunut valkoinen kiintoaine otettiin talteen suodattamalla, pestiin isopropanoli/isopro-pyylieetteri-seoksella (2:1) ja se kuivattiin vakuumissa 15 lämmittäen samalla 50 °C:ssa, jolloin saatiin otsikon mukaista dihydrokloridia (0,933 g, 93,6 %) valkoisena jauheena; sp. 217,8 - 218,3 eC; IR,,,,, (nujol): 3230 - 2150(br s), 1748( s), 1620(w), 1580(m), 1557(m), 1502(s), 1272(s), 1238( s ), 1210( s ), 1173( s), 1152(s), 1130(s), 1030(s),

20 858(m), 810(m), 770(m), 752(m), 700(s), 687(m) cm-1; ^-NMR

δ (DMS0-d6): 7,69 - 7, 58 (m, 2H), 7,57 - 7,42 (m, 3H), V: 7,38 - 7,26 (m, 2H), 7,02 (br d, J - 8,8 Hz, 1H), 4,93 (br '*: s, 1H), 4,10 - 3,80 (m, 1H), 3,87 (br d, J = 12,84 Hz, : 1H), 3,71 (s, 3H), 3,70 (br s, 2H), 3,68 - 3,60 (m, 1H), 25 3,60 - 3,05 (m, 8H), 2,63 (br d, J = 12,8 Hz, 1H), 2,19 (br dd, J = 12,8, 12,8 Hz, 1H) ppm.

(21) (2S*,3S*, 5S*)-5-karboksi-3-[N-(2-metoksi-5-tri-fluorimetoksibentsyyli) amino] -2-fenyylipiperidiinidihydro-kloridi 30 Suspensioon, jossa oli (2S*, 3S*, 5S*)-5-metoksikar- ’ bonyyli-3- [N-( 2-metoksi-5-trifluorimetoksibentsyyli )ami- no]-2-fenyylipiperidiinidihydrokloridia (0,197 g, 0,385 mmol) metanolissa (6,0 ml), lisättiin 6 M kloorivetyhap-poliuosta (8,0 ml) ja seosta sekoitettiin ja refluksoitiin 35 lievästi tunnin ajan; seos tuli homogeeniseksi sitä kumen- 72 Λ Ί ' · ? ·', ! ί.. -. / nettaessa. Kun väkevää kloorivetyhappoa (7,0 ml) oli lisätty, sekoittamista ja refluksointia jatkettiin vielä kaksi tuntia. Seos jäähdytettiin huoneenlämpötilaan ja asetonia lisättiin. Kun seos oli jäähdytetty jäällä, saos-5 tunut valkoinen kiintoaine otettiin talteen suodattamalla, pestiin asetonilla, kuivattiin vakuumissa lämmittäen 60 °C:ssa yön yli, jolloin saatiin otsikon mukaista hydro-kloridia (0,138 g, 71,8 %) valkoisina levyinä.

10 OCFj LNJvp„ ί»*.

ή 2HC1 15

Sp. 207,8 - 211,8 eC; IRmax (nujol): 3270 - 2200(br s), 1760( s), 1745( s), 1580(m), 1550(m), 1500(s), 1253(s), 1238( s), 1210( s), 1180(s), 1157(s), 1125(m), 1026(m), 810(m), 759 (m), 723(m), 700(s), 680(w) cm'1; 1H-NMR 6 (DMSO-20 d6): 7,69 - 7,55 (m, 2H), 7,56 - 7,40 (m, 3H), 7,37 - 7,24 (m, 2H), 7,00 (br d, J = 8,4 Hz, 1H), 4,88 (br s, 1H), : 4,00 - 3,75 (m, 1H), 3,85 (br d, J = 13,9 Hz, 1H), 3,71 ; ,·' (s, 3H), 3,69 - 3,55 (m, 1H), 3,67 (br s, 2H), 3,57 - 3,10 (m, 6H), 2,69 - 2,50 (m, 1H), 2,26 - 2,04 (m, 1H) ppm.

25 (22) (2S*, 3S*, 5S*)-3-amino-l-bentsyylioksikarbonyy- li-5-hydroksimetyyli-2-fenyylipiperidiini ; Suspensiota, jossa oli (2S*,3S*,5S*)-l-bentsyyliok- sikarbonyyli-3- (N-tert-butoksikarbonyyli )amino-5-hydrok-simetyyli-2-fenyylipiperidiiniä (0,60 g, 1,36 mmol) kloo-30 rivety/metanoli-reagenssissa 10 (Tokyo Kasei, 10,0 ml) sekoitettiin ja refluksoitiin 15 minuuttia; reaktioseos tuli homogeeniseksi sitä sekoitettaessa. Seos konsentroitiin sitten vakuumissa. Vaaleankeltainen siirappimainen jäännös tehtiin emäksiseksi kyllästetyllä natriurakarbonaa-35 tin vesiliuoksella. Seos uutettiin metyleenikloridilla.

Λ Ί Ο 9 9 73 I ' ·; '·

Yhdistetyt metyleenikloridiuutteet kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakaa otsikon mukaista yhdistettä (0,500 g, kvant.) punaisena öljynä. IRmax (filmi): 3380(s), 3300(s), 1700(s), 1683(s), 1603(w), 5 1585(w), 1495(m), 1130(m), 1077(m), 1048(m), 740(m), 698(s) cm'1; ^-NMR 6: 7,43 - 7,13 (m, 10H), 5,20 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 5,16 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 5,04 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 4,04 (dd, J = 13,9, 2,0 Hz, 1H), 3,60 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 3,49 (dd, J = 13,9, 4,6 Hz, 1H), 3,54 - 3,33 (m, 10 1H), 2,25 - 2,10 (m, 1H), 1,92 (ddd, J = 13,9, 9,9, 7,3

Hz, 1H), 1,65 (ddd, J = 13,9, 4,8, 4,5 Hz, 1H), 1,65 -1,26 (m, 3H) ppm. Tämä käytettiin seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

(23) (2S*, 3S*, 5S*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-5-hyd-15 roksimetyyli-3- [N- (2-metoksi-5-trif luorimetoksibentsyyli) -amino]-2-fenyylipiperidiini

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli (2S*, 3S*, 5S*)-3-amino-1 -bentsyy 1 ioksikarbonyyli - 5-hydroksimetyyli-2 - f enyy-lipiperidiiniä (0,50 g, 1,36 mmol) ja 2-metoksi-5-trifluo-20 rimetoksibentsaldehydiä (0,37 g, 1,70 mmol) metyleeniklo-ridissa (20,0 ml), lisättiin natriumtriasetoksiboorihydri-diä (0,43 g, 2,04 mmol) annoksittain. Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa kolme tuntia ja tehtiin sitten * emäksiseksi kyllästetyllä natriumkarbonaatin vesiliuoksel- 25 la. Seos uutettiin metyleenikloridilla. Yhdistetyt uutteet kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin punaista öljyä (0,90 g), joka kiteytyi itsestään seistessään jääkaapissa (4 °C). Tämä flashkromatografoi-tiin silikageelillä (Merck Kieselgel 60, 18,0 g). Eluoi-’ 30 maila metyleenikloridi/metanoli-seoksella (300:1 > 200:1 > 100:1) saatiin otsikon mukaista yhdistettä (0,678 g, 91,6 %) värittömänä siirappina. IRmax (filmi): 3450(s), 1698( s), 1682( s), 1670(s), 1498(s), 1230(br s), 1160(br s), 1030( s), 738( s), 700( s) cm-1; ^-NMR 6: 7,44 - 7,21 (m, 35 9H), 7,18 (br s, 1H), 7,04 (br d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,00 74 Λ Ί >' ·: ^ I ί / . / / (br s, 1Η), 6,92 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,40 - 5,27 (m, 1H), 5,17 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 5,05 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,03 (br d, J = 13,9 Hz, 1H), 3,74 (d, J = 13,9 Hz, 1H), 3,70 - 3,41 (m, 4H), 3,62 (s, 3H), 3,23 - 3,11 (m, 1H), 2,20 -5 1,95 (m, 2H), 1,70 - 1,45 (m, 3H) ppm.

(24) (2S\ 3S*, 5S*) -5-hydroksimetyy 1 i-3- [N- (2-metok-si- 5 - tri f luor imetoksibentsyyl i) amino ] - 2 - f enyy lipiper idiini Liuokseen, jossa oli (2S*,3S*, 5S*)-l-bentsyylioksi-karbonyyli-5-hydroksimetyyli-3-[N-(2-metoksi-5-trifluori-10 metoksibentsyyli)amino]-2-fenyylipiperidiiniä (0,545 g, 1,00 mmol) ja ammoniumformiaattia (0,252 g, 4,00 mmol) metanolissa (15,0 ml), lisättiin 20-%:ista Pd(OH)2/C:tä, (0,159 g) yhtenä annoksena. Seosta sekoitettiin ja refluk-soitiin 30 minuuttia. Katalyytti suodatettiin pois celiten 15 avulla ja pestiin metanolilla. Yhdistetty suodos ja pesunesteet konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin siirappimainen jäännös, joka tehtiin emäksiseksi 1 M natriumhyd-roksidin vesiliuoksella. Seos uutettiin metyleenikloridillä ja yhdistetyt metyleenikloridiuutteet kuivattiin 20 (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin vaa leankeltaista öljyä (0,419 g). Tämä flashkromatografoitiin : silikageelillä (Merck Kieselgel 60, 4,0 g). Eluoimalla : metyleenikloridi/metanoli-seoksella (30:1 > 20:1) saatiin i otsikon mukaista yhdistettä (0,380 g, 92,7 %) keltaisena i 25 öljynä. IRmax (filmi): 3320(br s), 1608(m), 1498(s), 1487(s), 1230(br s), 1160(br s), 1030(s), 810(m), 740(m), 700( s) cm'1; 1H-NMR 6: 7,40 - 7,20 (m, 5H), 6,99 (dd, J = 8,8, 2,9 Hz, 1H), 6,85 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 6,63 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 3,86 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 3,64 (d, J = 14,5 30 Hz, 1H), 3,60 - 3,47 (m, 2H), 3,50 (s, 3H), 3,46 - 3,36 (m, 1H), 3,38 (dd, J = 14,5 Hz, 1H), 2,92 - 2,84 (m, 1H), 2,54 (dd, J = 1,5, 11,5 Hz, 1H), 2,28 - 2,10 (m, 1H), 2,12 (dm, J = 12,9 Hz, 1H), 1,69 (br s, 3H, NH x 2 + OH), 1,35 (ddd, J = 12,9, 12,9, 2,8 Hz, 1H) ppm.

75 11/--:79 (25) (2S*, 3S*, 5S*) -5-hydroksimetyyli-3- [N- (2-metok-si-5-trifluorimetoksibentsyyli)amino]-2-fenyylipiperidii-nidihydrokloridi

Liuokseen, jossa oli (2S*, 3S*, 5S*)-5-hydroksimetyy-5 li-3- [N— (2-metoksi-5-trif luorimetoksibentsyyli )amino] -2- fenyylipiperidiiniä (0,455 g, 1,11 mmol) isopropanolissa, lisättiin kloorivety/metanoli-reagenssia 10 (Tokyo Kasei) kunnes seos muuttui happamaksi (pH noin 2). Haihtuvat aineet haihdutettiin vakuumissa. Keltainen siirappimainen 10 jäännös kiteytettiin uudelleen isopropyylieetteristä. Kun seos oli jätetty seisomaan jääkaappiin (4 °C:ssa) yön yli, valkoiset kiteet otettiin talteen suodattamalla, pestiin isopropyylieetterillä ja ne kuivattiin vakuumissa, jolloin saatiin otsikon mukaista hydrokloridia (0,460 g, 86,0 %). 15 Lisämäärä (0,021 g, 3,9 %) otsikon mukaista hydrokloridia saatiin toisena annoksena; kokonaissaanto; 0,481 g (89,9 %); sp. 188,0 - 192,0 °C (valkoista jauhetta); 11^« (nujol): 3450( s), 3250 - 2320(br s), 1580(m), 1555(s), 1502( s), 1260( s), 1213(s), 1030(s), 817(m), 755(s), 700(s) 20 cm'1; 1H-NMR δ (DMS0-d6): 7,75 - 7,62 (m, 2H), 7,58 - 7,41 (m, 3H), 7,40 - 7,30 (m, 2H), 7,03 (d, J = 9,5 Hz, 1H), : 4,89 (br s, 1H), 4,10 - 3,79 (m, 2H), 3,70 (br s, 3H), : 3,57 - 3,10 (m, 9H), 2,97 (br dd, J = 11,6, 11,6 Hz, 1H), 2,60 - 2,40 (m, 1H), 2,35 - 2,17 (m, 1H), 2,00 - 1,78 (m, ; 25 1H) ppm.

(26) (2R*, 3S*, 5R*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-5-(tert-butyylidimetyylisilyylioksi)metyyli-3-metoksikarbo-nyyli-2-fenyylipiperidiini

Sekoitettuun ja jäällä jäähdytettyyn seokseen, jos-30 sa oli (2R*, 3S*, 5R* )-5-( tert-butyylidimetyylisilyylioksi )me-tyyli-3-metoksikarbonyyli-2-fenyylipiperidiiniä (4,86 g, 13,4 mmol), natriumvetykarbonaattia (1,68 g, 20,1 mmol), tetrahydrofuraania (5,0 ml) ja vettä (30,0 ml), lisättiin bentsyyliklooriformiaattia (2,51 g, 14,7 mmol) ja seosta 35 sekoitettiin jäähdyttäen samalla jäällä 30 minuuttia. Seos 76 11" 7:1 uutettiin etyyliasetaatilla (40,0 ml x 3). Yhdistetyt etyyliasetaattiuutteet pestiin kyllästetyllä natriumklori-din vesiliuoksella (xl), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin jäykkäjuoksuista keltais-5 ta öljyä (6,82 g). Tämä flashkromatografoitiin silikagee-lillä (Merck Kieselgel 60, 80,0 g). Eluoimalla n-heksaa-ni/etyyliasetaatti-seoksella (30:1 > 20:1 > 10:1) saatiin otsikon mukaista yhdistettä (6,51 g, 97,9 %) jäykkäjuok-suisena värittömänä öljynä. IR^.. (filmi): 1735(s), 1700(s), 10 1605(w), 1585(w), 1495(m), 1250(s), 1115(e), 775(s), 740(m), 700(s) cm"1; Ή-NMR 6: 7,45 - 7,31 (m, 4H), 7,31 -7,15 (m, 6H), 6,05 (d, J - 5,5 Hz, 0,6H), 5,87 (d, J = 5,5 Hz, 0,4H), 5,32 - 5,10 (5,30, 5,25, 5,21, 5,18 ja 5,13; m, 2H), 4,20 - 4,05 (m, 1H), 3,65 - 3,45 (m, 2,4H), 3,60 (br 15 s, 3H), 3,40 (dd, J = 9,9, 6,6 Hz, 0,6H), 3,08 - 2,91 (m, 1H), 2,63 (dd, J = 11,7, 11,7 Hz, 0,4H), 2,52 (dd, J = 13,6, 11,7 Hz, 0,6H), 2,11 - 1,98 (m, 1H), 1,98 - 1,70 (m, 2H), 0,86 (s, 3,6H), 0,83 (s, 5,4H), 0,026, 0,018 ja 0,008 (kukin s, yhteensä 6H) ppm.

20 (27) (2R*, 3S*, 5R*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-5- (tert-butyyl idime tyyl i si lyyl ioksi) metyyl i - 3 -karbamoyy 1 i - 2 -fenyy1ipiperidiini

Typpiatmosfäärin alla lisättiin tipoittain 2,0 M trimetyylialumiiniliuosta heksaanissa (Aldrich, 66,0 ml, 25 132 mmol) sekoitettuun ja jäällä jäähdytettyyn suspensi oon, jossa oli ammoniumkloridia (7,00 g, 131 mmol) kuivassa tolueenissa (130,0 ml). Kun lisäys oli mennyt loppuun, reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa. Kun vedyn-kehittyminen oli loppunut, seos muuttui hyytelömäiseksi.

30 Kuivaa tolueenia (20,0 ml) lisättiin ja sekoittamista jatkettiin huoneenlämpötilassa 30 minuuttia. Tähän valkoiseen ; lietteeseen lisättiin tipoittain liuos, jossa oli (2R*, 3S*, 5R*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-5-(tert-butyylidimetyy-lisilyylioksi )metyyli-3-metoksikarbonyyli-2-fenyylipiperi-35 diiniä (6,51 g, 13,1 mmol) kuivassa tolueenissa (20,0 ml).

/j /| f-, ' r> o 77

Reaktioseosta sekoitettiin ja kuumennettiin haudelämpöti-lassa 50 °C yön yli (noin 21 tuntia); seos tuli sekoitettaessa homogeeniseksi ja sitten taas sameaksi. Seos jäähdytettiin jäällä ja vettä (40,0 ml) lisättiin varovasti.

5 Syntynyt hyytelömäinen valkoinen seos suodatettiin celite-kerroksen läpi ja suodatinkakku pestiin etyyliasetaatilla (80 ml x 4). Yhdistetty suodos ja etyyliasetaattipesunes-teet pestiin kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 2), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumissa, 10 jolloin saatiin jäykkäjuoksuista väritöntä öljyä (6,56 g), joka kiteytyi itsestään seistessään huoneenlämpötilassa. Kiintoaine kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-hek-saani-seoksesta, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä (4,75 g, 75,2 %). Talteen otettu keltainen emäliuos 15 (1,16 g) puhdistettiin flashkromatografiällä [silikageeli,

Merck Kieselgel 60, 15,0 g; n-heksaani/etyyliasetaatti- seos (8:1 > 5:1 > 1:1)], jolloin saatiin lisämäärä (0,44 g, 7,0 %) otsikon mukaista yhdistettä; kokonais saanto: 5,19 g (82,1 %); sp. 120,0 - 122,5 °C (hienoja 20 värittömiä neuloja); IR^ (nujol): 3390( s), 3180(m), 1673(vs), 1630(olkapää, m), 1500(w), 1162(s), 1100(s), : 838( s), 773(m), 735(m), 695(s) cm-1; 1H-NMR 6: 7,55 - 7,21 :*· ; (m, 10H), 5,91 (d, J = 5,1 Hz, 0,7H), 5,84 (br s, 0,7H), . 5,79 (d, J = 4,8 Hz, 0,3H), 5,42 (br s, 1,3H), 5,34 (d, ; 25 J = 12,5 Hz, 0,3H), 5,24 (d, J = 12,2 Hz, 0,7H), 5,19 (d, J = 12,2 Hz, 0,7H), 5,13 (d, J = 12,5 Hz, 0,3H), 4,24 - 4,04 (m, 1H), 3,57 (dd, J = 9,9, 4,4 Hz, 1,3H), 3,39 (dd, J = 10,3, 6,6 Hz, 0,7H), 3,00 - 2,85 (m, 1H), 2,77 (dd, J = 13,2, 10,6 Hz, 0,3H), 2,53 (dd, J = 13,6, 11,4 Hz, 30 0,7H), 2,10 - 1,70 (m, 3H), 0,87 (s, 3H), 0,83 (t, 6H), 0,03 (s, 2H), 0,01 (s, 4H) ppm.

112-7? 78 (28) (2S*, 3S*, 5R*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-3- (N-ter t -butoksikarbonyy 1 i) amino -5-( t ert -butyy 1 id imetyy 1 isi-lyylioksi)metyyli-2-fenyylipiperidiini

Kiinteätä (2R*, 3S*, 5R*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-5-5 (tert-butyylidimetyylisilyylioksi )metyyli-3-karbamoyyli-2- fenyylipiperidiiniä (5,19 g, 10,8 mmol) liuotettiin tert-butanoliin (100 ml) kuumentamalla haudelämpötilaan 70 °C. Syntyneseen homogeniseen seokseen lisättiin lyijytetra-asetaattia (90 %, 8,10 g, 18,3 mmol) yhtenä annoksena.

10 Punaista reaktioseosta sekoitettiin ja refluksoitiin 45 minuuttia. Tummanruskea seos jäähdytettiin jäällä ja neutraloitiin kyllästetyllä natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella (noin 90 ml). Epäorgaaninen tummanruskea saostuma suodatettiin pois celiten avulla ja pestiin etyyliasetaa-15 tiliä. Yhdistetty suodos ja etyyliasetaattipesunesteet konsentroitiin vakuumissa, ja vesipitoinen jäännös uutettiin etyyliasetaatilla (50,0 ml x 4). Yhdistetyt etyyli-asetaattiuutteet pestiin kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 1), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin 20 vakuumissa, jolloin saatiin raakaa otsikon mukaista yhdistettä (6,35 g, kvant.) jäykkäjuoksuisena vaaleankeltaisena : öljynä. IR„,ax (filmi): 3450(olkapää, m), 3350(s), 1718(vs), j ·; 1700( vs), 1682( vs), 1250(s), 1165(s), 1110(s), 838(s), : 778( s), 700( s) cm-1; 1H-NMR 6: 7,51 - 7,19 (m, 10H), 7,13 25 (br s, 1H), 5,59 - 5,37 (m, 1H), 5,19 ja 5,14 (kumpikin br s, yhteensä 1H), 5,11 - 4,94 (m, 1H), 4,26 - 4,00 (m, 2H), 3,71 - 3,46 (m, 3H), 3,26 - 3,00 (m, 1H), 2,06 - 1,70 (m, 2H), 1,40 (br s, 9H), 0,91 (br s, 9H), 0,05 (br s, 6H) ppm. Tämä käytettiin seuraavassa vaiheessa ilman eri puh-30 distusta.

(29) (2S*, 3S*, 5R*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-3-(N-tert-butoksikarbonyyli)amino-5-hydroksimetyyli-2-fenyyli-piperidiini

Sekoitettuun ja jäällä jäähdytettyyn liuokseen, 35 jossa oli (2S*,3S*, 5R*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-3-(N-tert- 112:/2 79 butoksikarbonyyli )amino-5-( tert-butyylidimetyylisilyyliok-si)metyyli-2-fenyylipiperidiiniä (6,35 g, 10,8 mmol) kuivassa tetrahydrofuraanissa (45,0 ml), lisättiin tipoittain 1 M tetra-n-butyylianunoniumfluoridiliuosta tetrahydrofu-5 raanissa (Aldrich, 13,0 ml, 13,0 mmol). Kun syntynyttä oranssinväristä reaktioseosta oli sekoitettu huoneenlämpö-tilassa tunnin ajan, lisättiin 4 A:n molekyyliseuloja (aktivoitua jauhetta, Aldrich, 8,0 g). Sekoittamista jatkettiin huoneenlämpötilassa vielä tunnin ajan. Zeoliitti suo-10 datettiin pois celiten avulla ja pestiin tetrahydrofuraanilla. Yhdistetty suodos ja tetrahydrofuraanipesunesteet säädettiin neutraaliksi 1,0 M etikkahapon vesiliuoksella ja kyllästetyllä natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella. Seos konsentroitiin vakuumissa ja vesipitoinen jäännös 15 uutettiin metyleenikloridilla (20,0 ml x 4). Yhdistetyt metyleenikloridiuutteet pestiin kyllästetyllä natriumklo-ridin vesiliuoksella (x 1), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin oranssinväristä öljyä (7,47 g). Tämä flashkromatografoitiin silikageelillä 20 (Merck Kieselgel 60, 75,0 g). Eluoimalla metyleeniklori-di/metanoli-seoksella (200:1 > 150:1 > 100:1) saatiin valli ; koista kiintoainetta (4,71 g), joka kiteytettiin uudelleen j' : etyyliasetaatti/n-heksaani-seoksesta, jolloin saatiin ot- ; sikon mukaista yhdistettä [4,11 g, kokonaissaanto 86,5 % : 25 lähtien (2R*, 3S*, 5R*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-5-( tert-but- yylidimetyylisilyylioksi)metyyli-3-karbamoyyli-2-fenyyli-piperidiinistä kahdessa vaiheessa] valkoisena jauheena; * ’ sp. 132,0 - 134,0 °C; IR^, (nujol): 3485(s), 3303(s), 1690- (olkapää, vs), 1675(vs), 1605(w), 1538(vs), 1500(m), 1288-: V 30 (s), 1170( s), 1075( s), 733(s), 700(s) cm'1; ^-NMR 6: 7,48 - 7,20 (m, 10H), 7,16 (br s, 1H), 5,48 (br s, 1H), 5,17 (br s, 0,25H), 5,13 (br s, 0,75H), 5,05 (br s, 0,75H), 5,00 (br s, 0,25H), 4,37 - 4,00 (m, 2H), 3,73 - 3,56 (m, 2H), 3,03 (dd, J = 12,8, 12,8 Hz, 1H), 2,10 - 1,90 (m, 1H), 80 λ λ e ' ·. η I i· / / 2,05 - 1,82 (m, 1Η), 1,68 - 1,47 (m, 2H), 1,40 (br s, 9H) ppm.

(30) (2S*, 3S*, 5 R*) -1 - ben t syy 1 i oks ikarbonyy 1 i - 3 - (N -ter t -butokslkarbonyyli) amino-5-f ormyyl i - 2 - f enyyl ipiper i -5 diini

Sekoitettuun ja jäällä jäähdytettyyn liuokseen, jossa oli (2S*,3S*, 5R*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-3-(N-tert-butoksikarbonyyli) amino- 5 -hydroksimetyy 1 i - 2 - f enyyl ipiper i -diiniä (0,50 g, 1,14 mmol) ja trietyyliamiinia (0,71 ml, d 10 0,726, 5,11 mmol) dimetyylisulfoksidissa (8,0 ml), lisät tiin rikkitrioksidipyridiini-kompleksia (0,81 g, 5,11 mmol) annoksittain. Kun lisäys oli mennyt loppuun, reak-tioseosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa tunnin ajan. Seos kaadettiin jääveteen (10,0 ml) ja se uutettiin mety-15 leenikloridilla (x 5). Yhdistetyt metyleenikloridiuutteet pestiin 10-%:isella sitruunahapon vesiliuoksella (x 3), vedellä (x 1), kyllästetyllä natriumvetykarbonaatin vesi-liuoksella (x 1) ja kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella (x 1), kuivattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuu-20 missä, jolloin saatiin raakaa otsikon mukaista yhdistettä (0,535 g, kvant.) valkoisena kiintoaineena. Tämä käytet-: : : tiin seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta. Osa siitä (0,063 g) kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/di-: etyylieetteri-seoksesta, jolloin saatiin otsikon mukaisen 25 yhdisteen analyyttinen näyte (0,044 g); sp. 124,0 125,0 °C (valkoista jauhetta); IRmax (nujol): 3300(s), 1720(olkapää, s), 1710(vs), 1695(vs), 1675(vs), 1605(w), t 1537( s), 1500(m), 1288(s), 1170(s), 1072(s), 773(m), 736(s), 698(s) cm'1; 1H-NMR 6: 9,79 (s, 0,12H), 9,73 (s, : 30 0,88H), 7,40 - 7,15 (m, UH), 5,50 (br d, J = 5,5 Hz, 0,88H), 5,46 (br d, J = 5,5 Hz, 0,12H), 5,17 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 5,04 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,60 (dm, J = 14,1 Hz, 0,12H), 4,45 (dm, J = 14,1 Hz, 0,88H), 4,32 - 3,90 (m, 1H), 3,21 (dd, J = 13,9, 11,7 Hz, 1H), 2,90 - 2,68 (m, 35 1H), 2,45 (dm, J = 12,7 Hz, 0,12H), 2,27 (dm, J = 12,7 Hz, 81 Λ Ί / 1 Γ· I I/- / ζ O,88Η), 1,80 (ddd, J = 12,7, 12,7, 12,7 Hz, 1Η), 1,41 (br s, 9H) ppm.

(31) (2S*,3S*, 5R*) -l-bentsyylioksikarbonyyli-3- (N-tert-butoksikarbonyyli)amino-5-metoksikarbonyyli-2-fenyy-5 lipiperidiini

Sekoitettuun ja jäällä jäähdytettyyn liuokseen, jossa oli (2S*,3S*, 5R*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-3-(N-tert-butoksikarbonyyli) amino- 5 - f ormyyli - 2 - f enyylipiper idiiniä (0,45 g, 1,03 mmol), natriumvetykarbonaattia (3,35 g, 39,9 10 mmol), tetrahydrofuraania (3,0 ml) ja metanoli/vesi-seosta (9:1, 12,0 ml), lisättiin tipoittain 2,0 M bromin varasto-liuosta metanoli/vesi-seoksessa (9:1, 3,99 ml, 7,98 mmol). Kun syntynyttä oranssinpunaista reaktioseosta oli sekoitettu huoneenlämpötilassa kaksi tuntia ja 35 minuuttia, 15 seos jäähdytettiin jäällä ja kiinteätä natriumtiosulfaat- tia lisättiin sitten hävittämään bromiylimäärästä johtuvan punaisen värin. Epäorgaaniset saostumat suodatettiin pois celiten avulla ja pestiin metyleenikloridilla. Yhdistetty suodos ja metyleenikloridipesunesteet konsentroitiin va-20 kuumissa. Jäännös laimennettiin vedellä ja uutettiin metyleenikloridilla. Yhdistetyt metyleenikloridiuutteet kui-; vattiin (MgS04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saa- J tiin valkoista kiintoainetta (0,52 g). Tämä flashkromato- grafoitiin silikageelillä (Merck Kieselgel 60, 13,0 g).

25 Eluoimalla metyleenikloridi/etyyliasetaatti-seoksella (150:1 > 100:1) saatiin otsikon mukaista yhdistettä i (0,34 g, 70,8 %) valkoisena kiintoaineena. Osa siitä kiteytettiin uudelleen etyyliasetaatti/n-heksaani-seoksesta, jolloin saatiin otsikon mukaisen yhdisteen analyyttisesti 30 puhdas näyte hienoina valkoisina neuloina; sp. 128,0 - 129,0 °C; IR^ (nujol): 3420(s), 3310(m), 1738(vs), ; , 1700(vs), 1672(vs), 1610(w), 1590(w), 1515(m), 1510(vs), 1220( vs), 1170( s), 1153(s), 775(s), 710(s), 700(s) cm'1; : ^-NMR 6: 7,48 - 7,15 (m, 11H), 5,56 - 5,41 (m, 1H), 5,16 V 35 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 5,04 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 4,50 - i 112:7? 82 4,00 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 3,26 (dd, J = 13,6, 12,5 Hz, 1H), 2,80 - 2,70 (m, 1H), 2,30 - 2,15 (m, 1H), 1,89 (ddd, J = 12,7, 12,7, 12,7 Hz, 1H), 1,40 (br s, 9H) ppm.

(32) (2S*, 3S*, 5R*) -3-amino-l-bentsyylioksikarbonyy- 5 11-5-metoksikarbonyy1i-2-fenyy1ipiperidilni

Suspensiota, jossa oli (2S*,3S*, 5R#)-l-bentsyyliok-sikarbonyyli-3-(N-tert-butoksikarbonyyli)amino-5-metoksi-karbonyyli-2-fenyylipiperidiiniä (1,11 g, 2,37 mmol) kloo-rivety/metanoli-reagenssissa 10 (20,0 ml) sekoitettiin ja 10 refluksoitiin 30 minuutia; voimakasta hiilidioksidin ja lämmön kehittymistä esiintyi ja reaktioseos tuli homogeeniseksi. Reaktioseos konsentroitiin sitten vakuumissa, jolloin saatiin kiinteä jäännös, joka tehtiin emäksiseksi kyllästetyllä natriumkarbonaatin vesiliuoksella. Seos uu-15 tettiin metyleenikloridilla ja yhdistetyt metyleeniklori-diuutteet kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin raakaa otsikon mukaista yhdistettä (0,777 g, 89,0 %) jäykkäjuoksuisena vaaleankeltaisena öljynä. IRmax (filmi): 3380(m), 3315(w), 1735(s), 1720(s), 20 1700( s), 1685( s), 1603(m), 1584(m), 1497(s), 1200(s), 765(s), 750(s), 740(s), 700(s) cm'1; ^-NMR 6: 7,58 - 7,16 :Y: (m, 10H), 5,45 - 5,23 (m, 1H), 5,20 - 5,04 (m, 2H), 4,55 - 4,26 (m, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,36 - 3,22 (m, 2H), 2,83 -. 2,65 (m, 1H), 2,20 - 2,02 (m, 1H), 1,97 (ddd, J = 12,5, 25 12,5, 12,5 Hz, 1H), 1,43 (br s, 2H) ppm. Tämä käytettiin seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

(33) (2S*,3S*,5R*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-5-met-oksikarbonyyli-3-[N-(2-metoksi-5-trifluorimetoksibentsyy-li)amino]-2-fenyylipiperidiini 30 Sekoitettuun liuokseen, jossa oli (2S*,3S*,5R*)-3- amino-l-bentsyylioksikarbonyyli-5-metoksikarbonyyli-2-fe-nyylipiperidiiniä (0,84 g, 2,28 mmol) ja 2-metoksi-5-tri-fluorimetoksibentsaldehydiä (0,63 g, 2,85 mmol) metyleeni-kloridissa (18,0 ml), lisättiin natriumtriasetoksiboori-35 hydridiä (0,73 g, 3,42 mmol) annoksittain huoneenlämpöti- 1 1 o / 7 9 83 '' ' ‘ lassa. Kun sameata reaktioseosta oli sekoitettu voimakkaasti huoneenlämpötilassa neljä tuntia, lisättiin kyllästettyä natriumkarbonaatin vesiliuosta (15,0 ml) jotta seos tulisi emäksiseksi (pH 10 - 11). Metyleenikloridikerros 5 erotettiin seoksesta ja vesipitoinen kerros uutettiin me-tyleenikloridilla (x 4). Yhdistetty metyleenikloridiliuos ja uutteet kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumis-sa, jolloin saatiin vaaleankeltaista öljyä (1,49 g). Tämä kromatografoitiin silikageelillä (Merck Kieselgel 60, 10 30,0 g). Eluoimalla metyleenikloridi/metanoli-seoksella (300:1 > 250:1) saatiin otsikon mukaista yhdistettä (1,26 g, 96,2 %) jäykkäjuoksuisena värittömänä öljynä.

IR tmax (filmi): 3450(w), 3330(w), 1740(olkapää, s), 1735(s), 1703(s), 1700(s), 1687(s), 1610(w), 1497(s), 1160(br s), 15 1030( s), 815(m), 765(s), 740(s), 700(s) cm"1; ^-NMR 6: 7,65 - 7,50 (m, 1H), 7,52 - 7,38 (m, 1H), 7,40 - 7,11 (m, 8H), 7,12 - 6,96 (m, 2H), 6,74 (br d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,45 - 5,34 (m, 0,5H), 5,20 - 5,00 (m, 2H), 5,17 - 5,05 (m, 0,5H), 4,49 - 4,33 (m, 0,5H), 4,35 - 4,17 (m, 0,5H), 20 3,90 - 3,53 (m, 2H), 3,69 (br s, 6H), 3,20 (br dd, J « 13,2, 13,2 Hz, 1H), 3,20 - 3,00 (m, 1H), 2,83 - 2,60 (m, : : 1H), 2,26 - 1,99 (m, 2H), 1,52 (br s, 1H) ppm.

(34) (2S*,3S*,5R*)-5-metoksikarbonyyli-3-[N-(2-met-oksi-5-trif luorimetoksibentsyyli ) amino]-2-fenyylipiperi-25 diini

Seosta, jossa oli (2S*,3S*,5R*)-l-bentsyylioksikar-bonyyli - 5 -metoksikarbonyy 1 i-3-[N-(2 -metoksi - 5 - tr i f luor i -metoksibentsyyli)amino]-2-fenyylipiperidiiniä (1,26 g, 2,20 mmol) ja 20-%:ista Pd(0H)2/C:tä, (0,30 g) metanolissa : 30 (20,0 ml) sekoitettiin vetyatmosfäärissä (ilmapallo) huo neenlämpötilassa 5,5 tuntia. Lisämäärä (0,20 g) 20-%:ista :·, Pd(0H)2/C:tä lisättiin ja sekoittamista jatkettiin vetyat mosf äärissä (ilmapallo) tunnin jän. Katalyytti suodatettiin pois celiten avulla ja pestiin metyleenikloridilla.

: : 35 Yhdistetty suodos ja pesunesteet konsentroitiin vakuumis- 84 Λ Λ <"·> f· r- I ί /· / /; sa. Keltainen öljymäinen jäännös laimennettiin metyleenik-loridilla, pestiin kyllästetyllä natriumkarbonaatin vesi-liuoksella (x 1), kuivattiin (Na2S04) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin jäykkäjuoksuista keltasta 5 öljyä (1,00 g). Tämä kromatografoitiin silikageelillä (Merck Kieselgel 60, 10,0 g). Eluoimalla metyleenikloridi-/metanoli-seoksella (250:1 > 50:1) saatiin otsikon mukaista yhdistettä (0,873 g, 90,6 %) jäykkäjuoksuisena keltaisena öljynä. IRBax (filmi): 3320( s), 1735( s), 1720( s), 10 1605(m), 1508( s), 1498(s), 1490(s), 1133(s), 810(m), 762(s), 741(s), 700(m) cm'1; 1H-NMR 6: 7,33 - 7,18 (m, 4H), 7,17 - 7,10 (m, 1H), 7,01 (dd, J = 9,2, 2,6 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 3,94 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 3,77 (ddd, J = 13,6, 1,9, 1,9 Hz, 1H), 15 3,66 (s, 3H), 3,65 (d, J = 13,9 Hz, 1H), 3,39 (d, J = 13,9

Hz, 1H), 3,36 (s, 3H), 2,88 (dd, J = 13,6, 3,7 Hz, 1H), 2,84 - 2,73 (m, 2H), 2,37 - 2,29 (m, 1H), 1,95 (ddd, J = 15,0, 5,5, 3,3 Hz, 1H), 1,68 (br s, 2H) ppra.

(35) (2S*, 3S*, 5R*) -5-metoksikarbonyyli-3- [N- (2-met-20 oksi-5-trifluorimetoksibentsyyli) amino] -2-fenyylipiperi- diinifumaraatti ; Liuokseen, jossa oli (2S*,3S*, 5R*)-5-metoksikarbo- . nyyli-3-[N-(2-metoksi-5-trifluorirnetoksibentsyyli)amino]- 2-fenyylipiperidiiniä (0,194 g, 0,442 mmol) etanolissa 25 (3,0 ml), lisättiin fumaarihappoa (0,103 g, 0,886 mmol) yhtenä annoksena. Lisämäärä etanolia lisättiin samalla refluksoiden, kunnes seos tuli homogeeniseksi. Syntynyt kirkas liuos jätettiin seisomaan huoneenlämpötilassa, jolloin kiteytyminen tapahtui. Kun dietyylieetteriä (0,50 ml) 30 oli lisätty, seos pidettiin jääkaapissa. Saostunut valkoi- I nen kiintoaine otettiin talteen suodattamalla, pestiin dietyylieetterillä (x 1) ja sitä kuivattiin vakuumissa lämmittäen 50 °C:ssa, jolloin saatiin otsikon mukaista fumaraattisuolaa (0,197 g, 80,1 %) värittöminä hienoina 35 neuloina; sp. 176,7 - 176,9 °C; IRmax (nujol): 3200 - 2100 Λ y\ (" ' ’ i'-, I i / .· 85 (br s), 1749(s), 1704(s), 1693(s), 1655(w), 1643(w), 1548(s), 1500(m), 1268(s), 1253(s), 1208(s), 1182(s), 1158( s), 990( s), 750( s), 700( s) cm'1; 1H-NMR 6 (DMSO-d6): 7,40 - 7,16 (m, 5H), 7,15 (dd, J = 8,8, 2,6 Hz, 1H), 6,94 5 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,87 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,58 (s, 2H), 4,07 - 3,97 (m, 1H), 4,00 - 3,25 (m, 8H), 3,56 (s, 3H), 3,44 (s, 3H), 2,91 - 2,80 (m, 1H), 2,79 - 2,71 (m, 1H), 2,66 - 2,54 (m, 1H), 2,01 - 1,87 (m, 1H) ppm.

(36) (2S*, 3S*, 5R*) -5-karboksi-3- [N- (2-metoksi-5-tri-10 fluorimetoksibentsyyli)amino] -2-fenyylipiperidiinidihydro- kloridi

Liuosta, jossa oli (2S*,3S*,5R*)-5-metoksikarbonyy-li-3- [N-( 2-metoksi-5-tri fluorimetoksibentsyyli ) amino] -2-fenyylipiperidiiniä (0,241 g, 0,551 mmol) väkevässä kloo-15 rivetyhapossa (3,0 ml) sekoitettiin ja refluksoitiin 30 minuuttia. Kun reaktioseos oli jäähtynyt huoneenlämpötilaan, tummanoranssinvärinen seos suodatettiin lyhyen celi-tekerroksen läpi mustan saostuman poistamiseksi. Suodos konsentroitiin vakuumissa. Siirappimainen tummanpunainen 20 jäännös liuotettiin asetoniin. Kun isopropyylieetteriä oli lisätty, seosta sonikoitiin kiteytymisen aikaansaamiseksi. Seos jätettiin seisomaan jääkaappiin (4 °C:ssa) yön yli.

* Saostunut kiintoaine otettiin talteen suodattamalla, pes- • tiin dietyylieetterillä ja sitä kuivattiin vakuumissa : 25 50 °C:ssa, jolloin saatiin otsikon mukaista dihydroklori- disuolaa (0,103 g, 37,6 %). Yhdistetty suodos ja dietyyli-eetteripesunesteet konsentroitiin vakuumissa, ja tummanpunainen siirappimainen jäännös kiteytettiin isopropano-li/isopropyylieetteri-seoksesta, jolloin saatiin lisämäärä 30 (0,041 g) otsikon mukaista dihydrokloridisuolaa; kokonais saanto: 0,144 g (52,5 %).

ocf3 35 H02c_ S jT) ^trvPh °Me

A

" 2Ha 86 η η r - - I ii.· / /

Sp. 179,9 - 182,9 °C (värittömiä lyhyitä prismoja); IR... (nujol): 3250 - 2100 (br s), 1758(w), 1720(s), 1502(s), 1255(s) cm·1; ^-NMR δ (DMS0-d6): 7,83 - 7,65 (m, 2H), 7,64 - 7,77 (m, 3H), 7,43 - 7,29 (m, 2H), 7,15 - 6,98 (m, 5 1H), 5,17 - 4,88 (m, 1H), 4,15 - 3,80 (m, 2H), 3,75 - 3,60 (m, 5H), 3,62 - 3,05 (m, 7H), 2,77 - 2,20 (m, 2H) ppm.

( 37) (2S*, 3S*, 5R*) -3-amino-1-bentsyylioksikarbonyy-1i-5-hydroksimetyy1i-2-fenyy1ipiperidiini

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli (2S*, 3S*, 5R*)-1-10 bentsyylioksikarbonyyli-3-(N-tert-butoksikarbonyyli )amino-5-hydroksimetyyli-2-fenyylipiperidiiniä (0,50 g, 1,14 mmol) etyyliasetaatissa (10,0 ml), lisättiin tipoittain väkevää kloorivetyhappoa (5,0 ml) jäähdyttäen välillä jäällä. Kun seosta oli sekoitettu huoneenlämpötilassa 40 15 minuuttia, se konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin keltainen siirappimainen jäännös, joka sitten tehtiin emäksiseksi pH-arvoon 10 1 M natriumhydroksidin vesiliuoksella. Seos uutettiin metyleenikloridilla ja yhdistetyt metyleenikloridiuutteet kuivattiin (K2C03) ja konsentroi-20 tiin vakuumissa, jolloin saatiin raakaa otsikon mukaista yhdistettä (0,405 g, kvant.) vaaleankeltaisena siirappina.

•V‘: IRmax (filmi): 3360(s), 3300(s), 1693(olkapää, vs), ; : 1685(vs), 1603(m), 1585(m), 1497(s), 1263(s), 1150(s), 1070( s), 760( s), 739( s ), 700(s) cm'1; 1H-NMR 6: 5,42 - 5,19 : 25 (m, 1H), 5,16 - 5,00 (m, 2H), 4,35 - 4,14 (m, 1H), 3,70 - 3,53 (m, 2H), 3,38 - 3,25 (m, 1H), 3,04 (dd, J = 13,2, 12,5 Hz, 1H), 2,15 - 1,94 (m, 1H), 1,86 (ddd, J = 13,2, 4,8, 4,2 Hz, 1H), 1,75 - 1,35 (m, 4H) ppm. Tämä käytettiin seuraavassa vaiheessa ilman eri puhdistusta.

30 (38) (2S*,3S*,5R*)-l-bentsyylioksikarbonyyli-5-hyd- roksimetyyli-3- [N- (2-metoksi-5-trif luorimetoksibentsyyli) -amino]-2-fenyylipiperidiini

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli (2S*,3S*, 5R*)-3-amino-1 -bentsyy 1 ioksikarbonyy 1 i - 5 -hydroksimetyy 1 i -2 - f enyy-35 lipiperidiiniä (0,405 g, 1,14 mmol) ja 3-metoksi-5-tri- A A C, r"' ·'"» I I ./ . / Λ 87 fluorimetoksibentsaldehydiä (0,301 g, 1,71 mmol) metylee-nikloridissa (25,0 ml), lisättiin natriumtriasetoksiboori-hydridiä (0,362 g, 1,71 mmol) annoksittain. Sesta sonikoi-tiin lisätyn natriumtriasetoksiboorihydridin liuottamisek-5 si sekoitettiin sitten huoneenlämpötilassa kaksi tuntia ja 40 minuuttia. Tähän lisättiin kyllästettyä natriumkarbonaatin vesiliuosta (12,0 ml) ja metyleenikloridikerros erotettiin. Vesipitoinen kerros uutettiin metyleeniklori-dilla. Yhdistetty metyleenikloridikerros ja uutteet kui-10 vattiin (K2C03) ja konsentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin vaaleankeltaista öljyä (0,72 g). Tämä kromatografoltiin silikageelillä (Merck Kieselgel 60, 14,0 g). Eluoi-malla metyleenikloridi/metanoli-seoksella (300:1 > 200:1 > 100:1) saatiin otsikon mukaista yhdistettä [0,416 g, koko-15 naissaanto 67,0 % lähtien (2S*,3S*,5R*)-l-bentsyylioksikar-bonyyli-3-(N-tert-butoksikarbonyyli )amino-5-hydroksimetyy-li-2-fenyylipiperidiinistä kahdessa vaiheessa] värittömänä siirappina. IRuroax (filmi): 3450(s), 1700(s), 1682(s), 1670( s), 1652(s), 1610(w), 1497(s), 1490(s), 1260(br s),

20 1220(br s), 1152(br s), 1030(s), 738(s), 700(s) cm-1,· 1H-NMR

6: 7,50 - 7,11 (m, 10H), 7,13 - 6,93 (m, 1H), 6,69 (br d, J = 8,4 Hz, 1H), 5,60 - 5,22 (m, 1H), 5,20 - 4,95 (m, 2H), 4,36 - 4,10 (m, 1H), 3,79 (d, J = 13,9 Hz, 1H), 3,65 -:·.: 3,45 (m, 3H), 3,59 (br s, 3H), 3,23 - 2,95 (m, 2H), 2,15 : 25 (br s, 1H), 2,02 - 1,86 (m, 1H), 1,86 - 1,68 (m, 1H), 1,68 - 1,45 (m, 2H) ppm.

(39) (2S*,3S*,5R*)-5-hydroksimetyyli-3-[N-(2-metok-si - 5 - tr i f luor imetoksibent syy 1 i) amino ] - 2 - f enyy 1 ipiper idi ini

Seosta, jossa oli (2S*,3S*,5R*)-l-bentsyylioksikar-30 bonyyli-5-hydroksimetyyli-3-[N-(2-metoksi-5-trifluorimet-oksibentsyyli)amino]-2-fenyylipiperidiiniä (0,416 g, 0,76 mmol), 20-%:ista Pd(0H)2/C: tä, (0,11 g) ja metanolia (10,0 ml) sekoitettiin huoneenlämpötilassa vetyatmosfäärissä (ilmapallo) 90 minuuttia. Lisämäärä 20-%:ista Pd-35 (0H)2/C:tä (0,08 g) lisättiin ja sekoittamista jatkettiin 88 vetyatmosfäärissä (ilmapallo) 45 minuuttia. Katalyytti suodatettiin pois celiten avulla ja pestiin metanolilla. Yhdistetty suodos ja pesunesteet konsentroitiin vakuumis-sa, jolloin saatiin keltainen puolikiinteätä ainetta 5 (0,309 g). Tämä liuotettiin uudelleen metanoliin (3,0 ml) ja seos tehtiin emäksiseksi 1 M natriumhydroksidin vesi-liuoksella. Liuotin, metanoli, haihdutettiin vakuumissa ja vesipitoinen jäännös uutettiin metyleenikloridilla. Yhdistetyt metyleenikloridiuutteet kuivattiin (K2C03) ja kon-10 sentroitiin vakuumissa, jolloin saatiin otsikon mukaista yhdistettä (0,298 g, 95,5 %) keltaisena siirappina. IR.„ (filmi): 3310(s), 3070(br s), 1605(w), 1498(s), 1250(s), 1150( s), 1035( s ), 756( s), 700(m) cm'1; Hi-NMR 6: 7,34 - 7,16 (m, 4H), 7,15 - 7,03 (m, 2H), 6,85 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 15 6,62 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 3,92 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 3,91 - 3,71 (m, 3H), 3,45 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 3,40 (d, J = 11,4 Hz, 1H), 3,35 (s, 3H), 3,11 (ddd, J = 13,6, 4,8, 1,5 Hz, 1H), 2,72 (ddd, J = 2,9, 2,9, 2,6 Hz, 1H), 2,25 - 2,07 (m, 2H), 1,85 (br s, 3H; OH + Nff x 2), 1,75 - 1,65 (m, 1H) 20 ppm.

(40) (2S*, 3S*, 5R*) -5-hydroksimetyyli-3- [N-(2-metok-si-5-trifluorimetoksibentsyyli)amino]-2-fenyylipiperidii-nidifumaraatti : Liuokseen, jossa oli (2S*, 3S*, 5R*)-5-hydroksimetyy- 25 li-3-[N-(2-metoksi-5-trifluorimetoksibentsyyli )amino]-2- fenyylipiperidiiniä (0,298 g, 0,726 mmol) etanolissa (3,0 ml), lisättiin fumaarihappoa (0,169 g, 1,45 mmol) yhtenä annoksena. Lisämäärä etanolia lisättiin samalla ref-luksoiden, kunnes seos tuli homogeeniseksi. Kun syntynyt ' 30 vaaleankeltainen liuos oli saanut jäähtyä huoneeniämpöti- • laan, lisättiin isopropyylieetteriä (2,0 ml). Kun seos oli . jätetty seisomaan jääkaappiin (4 °C:ssa) yön yli, valkoi set kiteet otettiin sitten talteen suodattamalla, pestiin isopropanoli/isopropyylieetteri-seoksella ja niitä kuivat-35 tiin vakuumissa lämmittäen 50 °C:ssa, jolloin saatiin ot- 89 Λ λ r- i .

I ί· / ,: sikon mukaista difumaraattia (0,382 g, 82,1 %) valkoisena j auheena.

ocf3 l»Xn OMt 2C4H404 10 Sp. 162,0 - 165,0 °C; IR,„ax (nujol): 2565(br s), 1719(s), 1705( s), 1641(s), 1630(s), 1561(s), 1502(s), 1280(s), 1250( s), 1162(8), 973( s), 790(m), 751(s), 648(s) era1; XH-NMR δ (DMS0-d6); 7,45 - 7,33 (m, 4H), 7,22 - 7,12 (m, 1H), 7,18 - 7,11 (m, 2H), 6,91 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,54 15 (s, 4H), 4,29 (br s, 1H), 3,88 - 3,13 (m, 13H), 3,56 (s, 3H), 3,06 - 2,96 (m, 1H), 2,90 - 2,83 (m, 1H), 2,07 - 1,95 (m, 1H), 1,93 - 1,80 (m, 1H) ppm.

Claims

112. V 90

1. Menetelmä kaavan I mukaisen yhdisteiden ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamisek-5 si, R* HOjCJps N-R< M* J-Rl 1 10 i R3 jossa kaavassa 15. on etyleeni tai propyleeni; -ZR3 on vety; R1 on fenyyli; R2 on vety tai Ci-6-alkyyli ja on kiinnittynyt siihen hiiliatomiin, joka on NZR3:n typpiatomin vieressä;

20 R4 edustaa kaavan (II) mukaista ryhmää ; ! s! ·' 25 X1 n jossa X1 on Ci-6-alkoksi, X2 on vety ja X3 on Ci-6-alkyyli tai V, trif luori-Ci-e-alkoksi ;

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan V mukainen yhdiste on valmistettu seuraavalla menetelmällä: R* 15 ,, HOHjC-V^V^00 κ „ Yl Rli-suojaryhmän poisto / T hapetus ^ Cbz XXVI

20 R1 R1 ohc-V-^nhb^ hydcolyysi Li* -- Li* " : Cbi Cbz XXVII XXVIII : 25 R. <A> R» : McO^C J, χ, ΝΗ, ----- MctlC H-R^ Li R‘ R» : Cbz Cbz

30 XXIX XXX hydrogenolyysi ; J J I III I - , : ' H2 or HCOiNH4 112·// 92 X5 OH C^V, X» 5 (A)

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jonka kaava on 10 Η0^ N-^0“ * Vv ''-O" ** Γ\ X» tai [ T X* R2^N^ph ^N 9 Ph is ή ή 2 Ia Ib jossa yhdisteessä (Ia) stereokemia on (2S*, 3S*, 4R*, 5R*) tai (2S*, 3S*, 4S*) ja menetelmässä (Ib) stereokemia on (2S*,3S*, 20 5S*j .

3. Q1 ja Q2 ovat kukin H2, happi tai rikki; A on valenssisidos, metyleeni, happi, rikki tai NH; • R5 ja R6 ovat kukin vety tai Ci-6-alkyyli; ja R7 on vety, halogeeni, Ci-6-alkyyli, halogeeni subs-tituoitu C;L-6-alkyyli tai Ci-6-alkoksi, tunnettu _ 35 siitä, että yhdiste, jonka kaava on 11/··; / ? 91 R* H McOjC —N— R< Rl V jossa Y, R1, R2, ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä, hyd rolysoidaan .

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen ‘ * yhdiste, jossa X1 on 2-metoksi.

: 5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, > 25 tunnettu siitä, että valmistetaan (2S*, 3S*,4S*, 5R*) - : 4-karboksi-3-[N-(5-isopropyyli-2-metoksibentsyyli)amino]-5- metyyli-2-fenyylipyrrolidiini tai (2S*, 3S*, 5S*)-5-karboksi- 3- [N-(2-metoksi-5-trifluorimetoksibentsyyli)amino]-2-fenyy-lipiperidiini. 93 112-:/2