FI102724B - Menetelmä bioaktiivisesta aineesta ja lipidistä koostuvan kompleksin v almistamiseksi - Google Patents

Menetelmä bioaktiivisesta aineesta ja lipidistä koostuvan kompleksin v almistamiseksi Download PDF

Info

Publication number
FI102724B
FI102724B FI894161A FI894161A FI102724B FI 102724 B FI102724 B FI 102724B FI 894161 A FI894161 A FI 894161A FI 894161 A FI894161 A FI 894161A FI 102724 B FI102724 B FI 102724B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
lipid
drug
amphotericin
active substance
biologically active
Prior art date
Application number
FI894161A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI102724B1 (fi
FI894161A0 (fi
Inventor
Andrew Stuart Janoff
Robert P Lenk
Lawrence Boni
Pieter R Cullis
John J Kearns
Anthony G Durning
Robert Klimchak
Joel Portnoff
Thomas D Madden
Original Assignee
Liposome Co Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27361805&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=FI102724(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Liposome Co Inc filed Critical Liposome Co Inc
Publication of FI894161A0 publication Critical patent/FI894161A0/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI102724B publication Critical patent/FI102724B/fi
Publication of FI102724B1 publication Critical patent/FI102724B1/fi

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/543—Lipids, e.g. triglycerides; Polyamines, e.g. spermine or spermidine
    • A61K47/544—Phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1617—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
    • G—PHYSICS
    • G03—PHOTOGRAPHY; CINEMATOGRAPHY; ANALOGOUS TECHNIQUES USING WAVES OTHER THAN OPTICAL WAVES; ELECTROGRAPHY; HOLOGRAPHY
    • G03B—APPARATUS OR ARRANGEMENTS FOR TAKING PHOTOGRAPHS OR FOR PROJECTING OR VIEWING THEM; APPARATUS OR ARRANGEMENTS EMPLOYING ANALOGOUS TECHNIQUES USING WAVES OTHER THAN OPTICAL WAVES; ACCESSORIES THEREFOR
    • G03B2227/00—Photographic printing apparatus
    • G03B2227/32—Projection printing apparatus, e.g. enlarging apparatus, copying camera
    • G03B2227/325—Microcapsule copiers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Vehicle Step Arrangements And Article Storage (AREA)
  • Catalysts (AREA)
  • Vehicle Interior And Exterior Ornaments, Soundproofing, And Insulation (AREA)

Description

102724
Menetelmä bioaktiivisesta aineesta ja lipidistä koostuvan kompleksin valmistamiseksi Tämä hakemus on osittainen jatko US-patenttihakemukselle 069 908, jätetty 6. ke-5 säkuuta, 1987, joka puolestaan on osittainen jatko US-patenttihakemukselle 022 157, jätetty 5. maaliskuuta, 1987.
Tämä keksintö kohdistuu menetelmiin tehdä lääkkeeseen liittyviä lipidikomplekseja, joissa on korkea lääkeainepitoisuus suhteessa lipidiin (high drug, lipid complexes eli HDLC). Sellaiset kompleksit ovat yleensä pääkohdittain samanarvoisia tai tehok-10 kaampia kuin sama lääke vapaassa muodossa, silti niillä on alhaisempi toksisuus.
Komplekseja (HDLC), joissa on korkea lääkeainepitoisuus suhteessa lipidiin, voidaan valmistaa pääosiltaan samanlaisilla tekniikoilla kuin tehtäessä liposomeja.
Vielä eräs keksinnön suoritusmuoto, uusi menetelmä HDLCiien muodostamiseksi käyttämättä orgaanisia liuottimia, on esitetty. Lääkkeen kiinnittäminen tai liittämi-15 nen HDLC:ihin suoritetaan etanolin tai vesipitoisen välimuodon kautta.
Keksinnön oleelliset tunnusmerkit on esitetty oheisissa patenttivaatimuksissa.
Useat lääkkeet, jotka ovat hyödyllisiä sairauden hoidossa, osoittavat toksisuuksia potilaassa; sellaisia toksisuuksia voivat olla sydämnyrkytys, kuten antikasvainlääk-keellä doxorubisiini, tai munuaismyrkytys, kuten aminoglykosideillä tai polyeenian-.’· 20 tibiooteilla, kuten amfoterisiini B. Amfoterisiini B on erittäin toksinen antifungaali-: nen polyeeniantibiootti, joka on ainoa luotettava käsiteltäessä hengenvaarallisia sieni-infektioita (Taylor et ai., Am. Rev. Respir. Dis., 1982, 125:610-611). Koska * · amfoterisiini B on hydrofobinen lääke, se on veteen liukenematon ja sitä saadaan kaupallisesti kolloidisena dispersiona desoksikolaatissa, joka on sen suspendoimi- • · · 25 seen käytettävä detergentti ja joka itse on toksinen. Amfoterisiini B metyyliesterin ja • · · *. amfoterisiini B:n on myös osoitettu olevan aktiivinen HTLV-lIl/LAV-virusta vas- φ ..*·* taan, joka on lipidikuoressa oleva retrovirus, ja osoitettu immuunikadossa (AIDS) :***: (Schaffner et ai., Biochem, Pharmacol., 1986, 35:4110-4113). Tässä tutkimuksessa *·. amfoterisiini B:n metyyliesteri-askorbiinihapposuolaa (vesiliukoinen) ja amfoteri- 30 siini B.tä lisättiin erillisiin HTLV-III/LAV:llä infektoituihin soluviljelmiin ja soluista määritettiin viruksen replikaatio. Tulokset osoittivat, että amfoterisiini B:n metyy-liesteri ja amfoterisiini B suojasivat kohdesoluja viruksen sytopaattisia vaikutuksia 2 102724 vastaan, samalla tavoin kuin on osoitettu herpes-virukselle (Stevens et ai., Arch. Virol., 1975, 48:391).
Aikaisemmissa tutkimuksissa lipidejä sisältäviä liposomeja käytettiin alentamaan si-säänsuljetun lääkkeen toksisuutta pyrkimällä lisäämään lipidipitoisuutta formuloin-5 neissa, jotta puskuroitaisiin lääkkeen toksisuutta. Hakijat ovat yllättäen havainneet, että tosiasiassa alhainen lipidiaines vähentää toksisuutta tehokkaimmin. Muodostettaessa keksinnön HDLC:tä MLV-menetelmällä saattaa seurauksena olla HDLC:n ja MLV:n sekoitettu populaatio; nämä valmisteet ovat niitä, joissa käytetään noin 5-25 mooli-% lääkettä (amfoterisiini B), HDLC:n osuuden noustessa, kun lääkkeen moo-10 li-% nousee. Valmisteet, joissa käytetään 25 mooli-% - 50 mooli-% lääkettä, ovat pääkohdittain HDLC:tä, vapaita liposomeista. Vaihtoehtoisesti valmisteet, joissa on 5 mooli-% hydrofobista lääkettä tai vähemmän, ovat pääkohdittain liposomisia, joissa on hieman HDLC:tä. HDLC:n erotus heterogeenisestä populaatiosta, jos välttämätöntä, voidaan suorittaa käyttämällä mitä tahansa tunnettua erotustekniikkaa, 15 esim. tiheysgradienttisentrifugaatiota.
Menetelmät, joita on käytetty muodostamaan näitä HDLC:itä, voivat olla pääkohdittain samat kuin käytettiin muodostamaan liposomeja, mutta tässä keksinnössä käyttämällä korkeita lääke:lipidi-suhteita, muodostuu enemmän HDLC:itä kuin liposomeja, joilla HDLC:illä on odottamattoman suuri toksisuuden väheneminen verrattu-20 na liposomisiin foimulointeihin.
·;·: Tämä keksintö esittää HDLC- (komplekseja, joissa on korkea lääkeainepitoisuus suhteessa lipidiin) systeemejä, jotka koostuvat lipideistä ja bioaktiivisista aineista
.···. lääkkeet mukaan lukien. Sellaisissa HDLCissä voi olla fosfolipidejä, kuten DMPC
• · · ^ ja DMPG, edullisesti 7:3-moolisuhteessa, tai kyllästettyjä fosfolipidejä tai rasva- • · · * ' 25 happofosfolipidejä. Bioaktiivinen aine on edullisesti lääke, kuten antisienilääke, kuten ny Stariini tai amfoterisiini B. Läsnäolevan lääkkeen mooliprosentti on edulli- * * * sesti noin 6-50 mooli-%, edullisemmin 30-50 mooli-%. HDLC:n farmaseuttiset • · · *.· " koostumukset, edullisesti sisältäen lääkkeen, kuten amfoterisiini B:n, tehdään niin, ... että niissä on farmaseuttisesti hyväksyttävät kantajat tai laimennusaineet ja näitä ···· .···. 30 yhdisteitä voidaan antaa ruoansulatuskanavan ulkopuolisesti. Sellaisia yhdisteitä käytetään infektiotautien, kuten homeinfektioiden käsittelyssä antamalla niitä nisäkkäille, kuten ihmisille. Tämän keksinnön HDLC:tä sisältäviin yhdisteisiin kuuluvat ne yhdisteet, jotka ovat pääkohdittain vapaita liposomeista, jotka sulkevat lääkkeen sisäänsä. Olennaisesti lipidiä ei ole yleensä enempää kuin noin 10-painoprosenttia, 35 edullisesti ei enempää kuin noin 5 % ja edullisimmin ei enempää kuin noin 3 %.
3 102724
Esillä olevassa keksinnössä esitetään useita menetelmiä HDLC:n valmistamiseksi; esim. tekniikat, joissa ensin liuotetaan lääke, erityisesti amfoterisiini B liuottimeen, kuten DMSO tai metanoli. Lipidi (edullisesti DMPC:DMPG 7:3-moolisuhteessa) liuotetaan liuottimeen, kuten metyleenikloridi, ja lipidi- ja lääkeliuokset sekoitetaan. 5 Liuottimet voidaan haihduttaa alennetussa paineessa, jolloin saadaan ohut lipidi-lääkekalvo. Kalvo voidaan hydrata vesipitoisessa liuoksessa, kuten suolaliuos, PBS tai glysiinipuskuri, jolloin muodostuu HDLC. Vaihtoehtoisesti vesipitoinen liuos voidaan lisätä liuotinta sisältävään lääke- ja lipidifaasiin ennen liuottimen haihduttamista. Toisena vaihtoehtona saatu kuiva lipidi-lääkekalvo voidaan suspendoida 10 uudestaan liuottimeen, kuten metyleenikloridiin ja haihdutetaan jälleen alennetussa paineessa ennen kalvon hydrausta. Dehydrausmenetelmää voidaan myös käyttää; tässä menetelmässä kuiva lipidi-lääkekalvo dehydrataan, jotta muodostuu hiutale, joka hydrataan vesipitoisella liuoksella.
Vaihtoehtoisessa menetelmässä keksinnön HDLC.n muodostamiseksi lipidipartik-15 kelit (tai liposomit), joissa on bioaktiivista ainetta (lääke, esim. antifungaalinen po-lyeeni, kuten amfoterisiini B), jotka on tehty MLV-menetelmällä ja joissa on noin 6 % - 50 mooli-% amfoterisiini B:tä, muodostetaan ja sitten partikkelit (tai liposomit) altistetaan kuumennussyklille noin 25-60 °C:ssa, edullisesti noin 60 °C. Sellaisessa syklissä muodostuu erittäin järjestäytynyttä ja vähemmän toksista amfoterisiini 20 B/lipidikompleksia.
Keksinnön yhteydessä voidaan käyttää absorbanssispektritekniikkaa lääke-lipidi- . .·. kompleksin toksisuuden määrittämiseksi (esim. antisieni-polyeeni, kuten amfoteri- siini B). Lääkkeen absorbanssispektri on spesifinen kullekin lääkkeelle; lääkkeen . tunnusmerkki voi olla piikki tai piikkien sarja ultravioletilla tai näkyvällä alueella.
25 Amfoterisiini B:n tunnusomainen piikki (näkyy kuvassa 8, liuotettu deoksikolaat- • · · ’;*/ tiin) noin 300:n ja 500 nm:n välillä ja sillä on luonteenomaiset piikit, tyypillisin • · * *·*·* näistä piikeistä on se, joka esiintyy 413 nnr.ssä. Tämän piikin vaimenemista, kun lääke muodostaa lipidin kanssa kompleksin, voidaan käyttää kvantitatiivisesti * · HDLC.n toksisuuden mittana. Ts. toksisuuden aste voidaan mitata absorbanssipiikin : *: *: 30 korkeuden voimakkuutena.
’* : Kuva 1 on graafinen esitys, joka kuvaa akuuttia toksisuutta, joka on mitattu LD50:llä : amfoterisiini B:n mooliprosentin funktiona valmisteessa.
Kuva 2 on differentiaali-skannaus-kalorimetrispektri HDLC-valmisteesta (MLV-me-‘ · : netelmä), jossa on 25 mooliprosenttia amfoterisiini B :tä.
4 102724
Kuva 3 on graafinen esitys HDLC:n (MLV-menetelmä) isopyknisestä gradientista, joka on tehty 50 mooliprosentilla amfoterisiini B:tä. Lipidi (yhtenäinen viiva); amfo-terisiini B (katkoviiva).
Kuva 4 osoittaa graafiset esitykset liposomien ja HDLC:n (MLV-menetelmä) rönt-5 gendifffaktiolle, joissa on 5 ja 50 mooliprosenttia (vastaavasti) amfoterisiini B:tä.
Kuva 5 osoittaa 31P-NMR-spektrin HDLC-valmisteille (MLV-menetelmä), joissa on 25 ja 50 mooliprosenttia amfoterisiini B:tä.
Kuva 6 on absorbanssispektri vapaasta amfoterisiini B:stä, joka on liuotettu deoksi-kolaattiin.
10 Kuva 7 on absorbanssispektri 5 mooli-%:sta amfoterisiini B:tä (a), 25 mooli-%:sta amofoterisiini B:tä (b), 25 mooli-%:sta amfoterisiini B:tä kuumennuksen jälkeen (c) ja 50 mooli-%:sta amfoterisiini B:tä (d), 7:3 DMPC:DMPG:tä.
Kuva 8 on absorbanssispektri 25 mooli-%:sta amfoterisiini B:tä 7:3 DMPC:DMPG:tä sekä ennen (a) että jälkeen (b) kuumennuksen, 10 min 60 °C:ssa.
15 Kuva 9 on DSC-spektri 7:3 DMPC/DMPG:stä, jossa on 25 mooli-% amfoterisiini B:tä sekä ennen (a) että jälkeen (b) kuumennuskierron, verrattuna puhtaan DMPC/-DMPG:n spektriin (c).
Kuva 10 on 31P-NMR-spektri DMPC/DMPG-komplekseista, 7:3- moolisuhteilla ja joissa on 25 mooli-% amfoterisiini B:tä ennen (a) ja jälkeen (b) kuumennuskierron : 20 60 °C:ssa.
• · «
Kuvataan ei-liposomisia korkean lääke-lipidi-suhteen komplekseja (HDLC), joilla *;*/ on ainutlaatuisia ominaisuuksia, ja menetelmiä niiden valmistamiseksi. Näissä # · · *·'·* HDLC:ssä on bioaktiivinen aine, kuten hydrofobinen lääke, jonka tehokkuus, kun HDLC:tä annetaan organismille, voi olla olennaisesti samanarvoinen tai suurempi • · 25 verrattuna lääkkeeseen, joka annetaan joko vapaassa tai liposomisessa muodossa. :T: Sellaisissa HDLC:issä on korkea lääke:lipidi-moolisuhde (suurempi kuin noin 5 mooli-% lääkettä). Tämä keksintö osoittaa yllättäen, että komplekseissa, joissa on . vähemmän lipidiä, kuten HDLC-systeemeissä, on alentunut toksisuus verrattuna li- posomisiin systeemeihin.
: 30 HDLC viittaa lääkkeeseen liittyvään lipidiin partikkelimuodossa, sellaisten partikke- leiden ollessa luonteeltaan ei-liposomisia. Kun valmistamiseen käytetään MLV-me- 5 102724 netelmää, sellaisille HDLC.ille on luonnteenomaista esim.: (1) jäädytys-halkaisu-elektronimikrodiagrammit (Deamer et ai., Biochim. Biophys. Acta, 1970, 219:47-60), jotka osoittavat ei-liposomisia komplekseja; (2) sisätilavuusmittaukset (Deamer et ai., Chem. Phys. Lipidis, 1986, 40:167-188), jotka osoittavat oleellisesti sisäisen 5 nollatilavuuden ja ovat sen tähden ei-liposomisia; (3) differentiaali-skannaus-kalori-metri (DSC) (Chapman, D., teoksessa: Liposome Technology, Gregoriadis, G., toim., 1984, CRC Press, Boca Raton), joka ei osoita lipidikaksoiskerroksen esisiirty-mävaihetta tai pääsiirtymävaihetta; (4) 31P-NMR-spektri (Cullis et ai., 1982 teoksessa: Membrane Fluidity in Biology, Academic Press, Inc., London & N.Y.), joka 10 viittaa suuresti immobilisoidun lipidin ominaispiirteisiin (laaja tasataittoinen); ja (5) röntgendiffraktiotiedot (Shipley et ai., teoksessa: Biomembranes, 1973, Chapman, D. ja Wallach, D., toim., voi 2:1, Academic Press, Inc., London & N.Y:), jotka ilmaisevat geelifaasilipidiä. Näille jäijestelmille on myös luonteenomaista, että lääke liittyy täydellisesti lipidiin, joka on todistettu tiheysgradienttisentrifugaatiolla. Tällä 15 tekniikalla gradienttia sentrifugoidaan korotetulla voimalla (noin 230 000 x g) noin 24 h. Tämä valmistaa, että kaikki komponentit gradientissa saavuttavat tiheys-tasapainoasemansa. Näiden järjestelmien eluaatioprofiilit osoittavat lääke-ja lipidipiik-kien päällekkäisyyttä, joka on merkkinä siitä, että kaikki lääke on liittynyt lipidiin.
Tämän keksinnön eräs pine on lääke:lipidi-suhde, joka muodostaa HDLC:tä, joka , 20 johtaa oleellisesti lääkkeen samanlaiseen tai suurempaan tehokkuuteen, yleensä vähentäen akuuttia toksisuutta mitattuna LD50:llä hiirissä (kuvio 1). Hakijat ovat havainneet, että noin 6-50 mooliprosentilla hydrofobista lääkettä saavutetaan tällaiset : ' vaatimukset, edullisen suhteen ollessa noin 15-50, edullisemmin noin 25-50, kaik- kein edullisimmin noin 25-35 mooliprosenttia hydrofobista lääkettä. Kun lääkkeen : 25 konsentraatio ylittää noin 6 mooliprosenttia ja saavuttaa 25 mooli-%, muodostuu li- :Y: posomien ja HDLC.n sekapopulaatioita. Tällä alueella, kun lääkkeen mooliprosentti lähestyy 25, suurempi prosentti rakenteista on HDLC:tä mieluummin kuin liposome-ja. Lääkekonsentraatiossa noin 5 mooliprosenttia ja vähemmän ja alemmilla lipidira- .·*;·. joilla, asiantuntijoille tunnettu "kriittisenä misellikonsentraationa", läsnä on HDLC/- • · · 30 liposomi-sekapopulaatioita, mutta pääkohdin liposomisia rakenteita.
• · · • · · · .*··. Luonteenomaisia edellä mainituille HDLC:ille ovat erilaiset lääke-lipidi-dispersiot, joita on havaittu tiheyssentrifugaatiossa. Lääke-lipidi-(DMPC:DMPG 7:3-mooli-'·* * suhteessa) kompleksien erotus isopyknisissä sakkaroositiheyspylväissä osoittaa vyö- .·’ hykkeiden muodostumista, joka riippuu lääke: lipidi-suhteesta ja valmistusmenetel- 35 mästä. Systeemeissä, joissa on 5 mooliprosenttia lääkettä, joka on tehty MLV-mene-telmällä, havaitaan kaksi materiaalin päävyöhykettä; yksi liposomien ja yksi, jossa 6 102724 lääke on liittynyt lipidiin (HDLC). Valmisteet, joissa oli 25 ja 50 mooliprosenttia lääkettä, osoittivat yhden ainoan vyöhykkeen, jolloin suurin osa lääkkeestä on liittynyt lipidiin. Yllättäen nämä alhainen lipidimooliprosentin/korkeamman lääkemooli-prosentin järjestelmät olivat vähemmän toksisia. Kuvassa 1 on LD50 (mg/kg) hiirissä 5 lääke-amofoterisiini B:n mooliprosentin funktiona valmisteessa. LD50 kasvaa alueella 5-50 mooliprosenttia lääkettä, sitten putoaa 60 mooliprosentissa. Piirrettynä on myös LDS0 kaupallisesti saatavilla olevalle tämän lääkkeen muodolle; Fungizone, noin 3,5 mg/kg. In vitro punasolujen lysointi (hemolyysi) osoittaa saman toksisuus-ilmiön.
10 Sisätilavuustutkimukset (ympäröity liuos (pm:nä) pmol lipidiä kohti), jotka suoritettiin lääke-lipidi-liittymien MLV-valmisteille lääkkeen vaihtelevilla mooliprosenteil-la, osoittaa 25 mooliprosentin ja suurempien (HDLC) formulointien epätavallisen luonteen; nämä järjestelmät eivät sulje sisäänsä liuennutta ainetta ja eivät sen tähden ole liposomisia. Näiden järjestelmien jäädytyshalkaisuelektronimikrogrammit osoit-15 tavat liposomeja 0 ja 5 mooliprosentissa lääkettä, mutta ei-liposomiset HDLC:t 25 ja 50 mooliprosentissa lääkettä.
Differentiaali-skannaus-kalorimetrikäyrät, jotka tehtiin MLV-valmisteille vaihtelemalla lääkkeen mooliprosenttia, osoittavat saman ilmiön; so. että spektri osoittaa siirtymäpiikkejä, jotka ovat luonteenomaisia häiriintymättömälle kaksikerroksiselle 20 lipiditilalle 5 mooliprosentissa lääkettä, mutta ei siirtymäpiikkiä 25 mooliprosentissa lääkettä 25 mooliprosenttia lääkettä (kuva 2). 25-prosenttisen lääkkeen tapauksessa '. kaikki lipidi on täydellisesti liittynyt lääkkeeseen, so. lipidin asyyliketjut eivät ole . : vapaat yhteistoiminnalliseen siirtymiseen. Tämä tieto vahvistaa tiheyssentrifugaa- tiotiedot, jotka osoittavat kaksoispiikin lipidiin liittyneelle lääkkeelle ja vapaalle li-"iy.m 25 pidille 5 mooliprosentin lääkekonsentraatiossa (kuva 4), mutta yhden ainoan piikin, *; kun lipidi on liittynyt lääkkeeseen 25-50 mooliprosentin lääkekonsentraatioissa *·*·* (kuva 3).
Röntgensädetiedot 5 mooliprosentissa (MLV-menetelmä) osoittavat alhaisessa läm- • · pötilassa geelifaasilipidin, joka siirtyy nestemäiseen kidefaasiin 23 °C:n luonteen- • e 30 omaisessa lämpötilassa. 50 mooliprosentissa lääkettä kuitenkin lipidi on geelifaasis- sa kaikissa lämpötiloissa; ei ole siirtymistä, joka johtuisi siitä, että kaikki lipidi olisi tiukasti liittynyt lääkkeeseen (kuva 4). Samanlaiset tiedot P-NMR-tutkimuksista osoittavat vapaan lipidin signaalin puuttumisen näiltä korkeamman (25 ja 50) mooli- • : prosentin lääkeformuloinneilta (HDLC); matalan kentän olkapää/korkean kentän 7 102724 piikki, joka on luonteenomaista tämän tyypin lipidille, puuttuu (kuva 5), kun se taas on näkyvissä Oja 5 mooliprosentin lääkenäytteissä.
Lipidit, joita voidaan käyttää tehtäessä lipidejä, ovat fosfolipidejä, kuten fosfatidyy-likoliini (PC), fosfatidyylietanoliamiini (PE), fosfatidyyliseriini (PS), fosfatidyyli-5 glyseroli (PG), fosfatidihappo (PA), fosfatidyyli-inositoli (PI), sfmgomyeliini (SMP) ja sen kaltaiset, yksin tai yhdessä. Tyydytettyjä fosfolipidejä, kuten hydroge-noitua soija-PC:tä, voidaan myös käyttää. Fosfolipidit voivat olla synteettisiä tai johdettuja luonnollisista lähteistä, kuten kananmunasta tai soijasta. Vielä eräs lipidi-yhdiste on tyydytetyt rasvahapot, kuten myristiinihappo. Edullisissa suoritusmuo-10 doissa käytetään fosfolipidejä dimyristoyylifosfatidyylikoliinia (DMPC) ja dimyris-toyylifosfatidyyliglyserolia (DMPG) yhdessä minä tahansa moolisuhteena, noin 99:1 - noin 1:99 DMPC:DMPG:tä, edullisesti noin 7:3-moolisuhde. DMPC:tä ja dimyristoyylifosfatidyyliseriiniä (DMPS) voidaan myös käyttää yhdistelmänä. Kuitenkin DMPC:tä voidaan käyttää yksin. Lipidikomplekseissa voi olla myös steroidi-15 komponentti osana lipidifaasia, sellaiset steroidit voivat olla kolestroli, kolestrolin polyetyleeniglykolijohdannaisia (PEG-kolesterolit), koprostanoli, kolestanoli, koles-taani, steroleiden orgaaniset happojohdannaiset, kuten kolesterolihemisukkinaatti (CHS) ja vastaavanlaiset. Tokoferoleiden orgaanisia happojohdannaisia voidaan myös käyttää komplekseja tai liposomeja muodostavina aineina, kuten alfa-toko-20 ferolihemisukkinaatti (THS). Sekä CHS- että THS-sisältäviä komplekseja ja niiden tris-suolamuotoja voidaan yleensä valmistaa millä tahansa tunnetulla menetelmällä, jolla valmistetaan sellaisia liposomeja, joissa on näitä steroleja. Erityisesti ks. Janoff : et al.:n menetelmä, US-patentti no 4 721 614, julkaistu 26. tammikuuta 1988, joka : : on otsikoitu "Steroidal Liposomes" ja Janoff et ai., PCT-julkaisu no 87/02219, jul- ·;**: 25 kaistu 23. huhtikuuta 1987, otsikoitu "Alpha-Tocopherol Based Vesicles", jätetty ♦♦· 24. syyskuuta 1986, jonka tähän liittyvät osat on liitetty tähän viitteeksi vastaavasti.
···* • · ♦ • · · *·*/ Tässä keksinnössä voidaan käyttää hydrofobisia bioaktiivisia aineita, kuten lääkkei- • · · *·'·’ tä. HDLC:t muodostetaan hydrofobisten bioaktiivisten aineiden kanssa, kuten, mut tei näihin rajoittuen, polyeeniantibiootit, esim. amfoterisiini B ja nystatiini.
• · • · · • · · 30 Valmistettaessa HDLC:tä voidaan käyttää myös orgaanisia liuottimia, kuten liposo-* · t mien yleisessä valmistuksessa. Sopivia orgaanisia liuottimia ovat ne, joilla on inter- I · · ’ mediaariset polaarisuudet ja dielektnset ominaisuudet (niillä on polaarinen välimuo- •": to vastakkaisiin sähkövarauksiin, jotka liuottavat lipidejä ja niihin kuuluvat, mutta . ·1; eivät rajoitu, kloroformi, metanoli, dimetyylisulfoksidi (DMSO), metyleenikloridi ja : 35 liuotinseokset, kuten kloroformi:metanoli (70:30) ja bentseeni:metanoli (70:30).
s 102724
Seurauksena, muodostuu liuoksia, joita kuvataan seoksiksi, joissa komponentit ovat jakautuneet yhtenäisesti kaikkialle, ja niissä on lipidejä. Liuottimet valitaan edullisesti niiden biologisen sekoittuvuuden perusteella alhaisen toksisuuden ja ei-helposti syttymisen perusteella. Kun liuotetaan lääkettä, erityisesti amfoterisiini B:tä, DMSO 5 on edullinen, sillä se liukenee parhaiten DMSOihon. DMSO voidaan korvata meta-nolilla, kun samanaikaisesti lisätään liuotintilavuutta. Liuotettaessa lipidiä on edullista käyttää metyleenikloridia johtuen siitä, että sillä on alhainen toksisuus ihmisille.
HDLC-muodostuksen hydrausvaiheessa voidaan käyttää vesipitoisia liuoksia, kuten 10 tislattua vettä (esim. USP-vettä injektioihin), suolaliuosta tai vesipitoisia puskureita. Vesipitoisiin puskureihin, joita voidaan käyttää, mutta niihin ei rajoituta, kuuluvat puskuroidut suolaliuokset, kuten fosfaatilla puskuroitu suolaliuos ("PBS"), tris(hydr-oksimetyyli)-aminometaanihydiOkloridi("tris")-puskurit tai glysiinipuskurit pH:ssa noin 7,0 - 7,5, edullisesti 7,2. HDLC:n muodostumisvaiheessa voidaan suorittaa 15 sonikointi. Sellainen menettelytapa tehdään haudesonikaattorissa noin 15-30 min ajan, 25 °C:ssa, noin 50-60 Hz.
Muodostuneet HDLC:t voidaan lajitella koon mukaan pudottamalla suodattimen läpi Cullis et al.:n menetelmän mukaan, PCT-julkaisu no. 88/00238, julkaistu 16. tammikuuta 1986, jonka tähän liittyvät osat on liitetty tähän viitteeksi. Sellaiset 20 koon mukaan lajittelut sallivat paitikkeleiden homogeenisen populaation muodos-. tumisen koon suhteen. Esim. HDLC:n suodatus voidaan suorittaa monimutkaista tietä tai suoraan kalvosuodattimen läpi, kuten polykarbonaattisuodatin.
·;;; Eräs menetelmä HDLC:n muodostamiseksi on MLV-menetelmä, jossa bioaktiivinen • ♦ ♦ Y * aine (esim. lääke) liuotetaan metanoliin pullossa, johon sitten lisätään lipidi, kuten *.*.* 25 DMPC ja DMPG noin 7:3 moolisuhteessa DMPC:DMPG:tä kloroformissa. Sen jäl keen, kun liuos on haihdutettu rotavaporissa alennetussa paineessa, kuivunut kalvo • · suspendoidaan uudestaan PBS:ään ja sonikoidaan haudesonikaattorissa (noin 25 °C:ssa noin 30 min, noin 50-60 Hz) kirkkaaksi. Moolisuhteissa lääkedipidi noin 6 ja suurempi (noin 60 mooliprosenttiin), valmisteet ovat ei-liposomisia HDLC-ra-30 kenteita, jotka ovat pääosin vapaita liposomeista. HDLC-valmisteiden toksisuudet •; · * riippuvat lääkedipidi-suhteesta, valmisteet, joilla on korkeammat lääkedipidi-suhteet : : : (noin 16-50 mooliprosenttia lääkettä), osoittavat vähemmän akuuttia toksisuutta : ; kuin valmisteet, joilla on alhaisempi lääkedipidi-suhde (noin 6-15 mooliprosenttia lääkettä). Kuten edellä keskusteltiin, valmisteet, joissa on noin 5 mooliprosenttiin 35 lääkettä, ovat pääosittani liposomisia.
9 102724
Toinen menetelmä on modifioitu MLV-menetelmä, jossa edellä tuotettu lääke-lipidi-kalvo kuivataan kelloastiassa alennetussa paineessa lääke-lipidi-hiutaleen tuottamiseksi. Tämä hiutale jauhetaan jauheeksi, joka hydrataan homogeenisesti, kun lisätään vesipitoista liuosta. Tämä menetelmä sisältää lääkkeen liuottamisen or-5 gaaniseen liuottimeen, kuten DMSO.hon tai metanoliin, mitä seuraa sekoittaminen lipidin kanssa (edullisimmin 7:3-moolisuhteessa DMPC:DMPG:tä) metyleeniklori-dissa. Seos kuivataan sitten alennetussa paineessa kalvoksi, joka sitten kuivataan, esimerkiksi kelloastiassa alennetussa paineessa. Saatu kuivattu jauhe hydrataan vesipitoisella suolaliuoksella ja kuumennetaan, jotta tuotetaan lääke-lipidi-suspensio. 10 Kuten edellä selostettiin, HDLC:n, liposomien ja niiden seosten muodostuminen ja samanaikainen toksisuusaste riippuvat lääke-lipidi-suhteesta.
HDLC:n muodostumisessa voidaan käyttää muita menetelmiä. Eräs sellainen menetelmä on SPLV-menetelmä, jossa lääke liuotetaan liuottimeen, kuten DMSO. Lipidi (kuten 7:3-moolisuhteessa DMOC:DMPG) liuottimessa (esim. kloroformi tai mety-15 leenikloridi) kuivataan ohueksi kalvoksi alennetussa paineessa ja lipidiin lisätään orgaanista liuotinta kuten metyleenikloridi. Määräosa lääkettä (esim. amfoterisiini B) liuoksessa lisätään lipidisuspensioon ja saatu seos sonikoidaan kirkkaaksi. Lisätään puskuroitua vesipitoista liuosta (esim. puskuroitu suolaliuos) ja seos laitetaan jälleen alennettuun paineeseen metyleenikloridin poistamiseksi. Saatua tahnaa hyd-20 rataan edelleen PBS:llä ja sonikoidaan kirkkaaksi. Kuten edellä olevassa menetelmässä, saatu valmiste on HDLC tai liposominen riippuen käytetystä lääke-lipidi-' moolisuhteesta. Kun käytettiin näitä valmisteita hiirissä, osoittivat LD no:t alhai- • '·’ sempia toksisuuksia korkeammilla lääke:lipidi-suhteilla.
Vielä eräs menetelmä on modifioitu SPLV-menetelmä, jossa lääke orgaanisessa • · · 25 liuottimessa (esim. DMSO) sekoitetaan lipidin kanssa (esim. DMPC:DMPG), joka • · · • * on liuoksessa ja lisätään puskuroitua vesipitoista liuosta (esim. PBS), ja sen jälkeen haihdutetaan liuotin typessä ja samalla sonikoidaan. Lisätään vielä PBS:ää ja saatu • · · '·[·' liuos suodatetaan, edullisesti 5 mikronin suodattimen läpi, sitten sentrifugoidaan V ; noin 10 000 x g noin 10 min. Supematanttiliuos poistetaan, heitetään pois ja pelletti 30 suspendoidaan vesipitoiseen liuottimeen (PBS). Pestään toisen kerran sentrifugoi- ···· .···. maila, saatu pelletti suspendoidaan uudestaan PBS:ään. Kuten edellä esitetyissä val- • misteissa, valmisteiden akuutit toksisuudet ovat suoraan verrannollisia lääke:lipidi- * suhteeseen; so. mitä suurempi suhde on (noin 60 mooliprosenttiin lääkettä) sitä vä- * .· hemmän valmiste on toksinen.
10 102724
Vielä eräs menetelmä sisältää lääkkeen liuottamisen happamaksi tehtyyn vedettömään etanoliin sonikoimalla. Lipidi (esim. 7:3-moolisuhteessa DMPC:DMPG:tä), joka on liuotettu liuottimeen (esim. bentseeni:metanoli), lyofilisoidaan, sekoitetaan sitten Vortexilla vesipitoiseen liuottimeen (esim. PBS) ja lisätään happamaksi tehtyä 5 alkoholi-lääkeliuosta ja sekoitetaan huoneenlämpötilassa. Sitten valmiste lyofilisoidaan ja hydrataan uudelleen vesipitoisen puskurin kanssa. Vaihtoehtoisesti liuotin voidaan haihduttaa, jolloin jää lipidi-lääke-kalvojoka voidaan hydrata vesipitoisella liuoksella. Jälleen alhaisemmat akuutit toksisuudet yhdistetään valmisteisiin, joissa on korkeammat lääke.lipidi-suhteet. Kun käytetään noin 5 mooliprossentin tai alhai-10 sempaa lääkekonsentraatiota, menetelmä tuottaa enimmäkseen liposomeja, kun verrataan noin 6 mooliprosentin tai korkeamman käyttöön, jolloin muodostuu pääasiassa HDLC:tä. Sentrifugoitaessa valmiste tiheysgradientissa valmistetaan, että kaikki lipidi on liittynyt lääkkeeseen. Valmiste voidaan sitten lyofilisoida, jolloin poistetaan etanoli ja hydrataan uudelleen vesipitoisessa liuoksessa, kuten tislattu vesi.
15 Vielä eräs menetelmä keksinnön HDLC:n muodostamiseksi on käyttää mieluummin homogenisaatiovaihetta kuin sonikaatiota. Esimerkiksi HDLC:t voidaan tehdä SPLV-menetelmän mukaan, jossa lääke (esim. amfoterisiini B) voidaan lisätä sopivaan liuottimeen (kuten DMSO) ja sekoittaa mekaanisella sekoittimella, jotta kaikki lääke liukenee. Jos tarpeellista, liuos voidaan sitten suodattaa, jolloin poistetaan 20 kaikki lääkkeen liukenemattomat partikkelit. 7:3-moolisuhteessa DMPC:DMPG:tä voidaan sitten liuottaa sopivaan liuottimeen (kuten metyleenikloridi) ja sekoittaa li-pidi sitten lääke-DMSO-liuokseen. Seokseen lisätään sitten vesipitoista liuosta, ku-':" ·' ten suolaliuosta, ja orgaaniset liuottimet poistetaan haihduttamalla rotavaporilla noin ·: 35-45 °C:ssa. Liuottimen poiston jälkeen saatu lääke-lipidi-seos laimennetaan vesi- 25 pitoisella liuoksella, kuten suolaliuoksellapa HDLC-suspensio jauhetaan käyttämäl- :y; lä homogenisaattoria. Mikä tahansa homogenisaatiolaite tai kolloidimylly, joka jau- • · haa partikkelit, on hyväksyttävä tähän menetelmään, mutta edullisesti käytetään Gifford Wood-kolloidimyllyä. Partikkeleita jauhetaan, kunnes saavutetaan hyväksyt- • · · l.l' tävä partikkelikoko, esimerkiksi jossa 90 % partikkeleista on alle 10 pm halkaisijal- *. 30 taan, edullisesti noin 4-10 mikronin kokoalueella, tai noin 15-30 min. Partikkeleita voidaan kierrättää myllyn läpi yhden tai useamman kerran riippuen toivotusta koosta :ja homogeenisuudesta. HDLC-partikkeleista voidaan analysoida koon jakautuminen .<!·„ käyttämällä Malvem-partikkelikoon lajittelijaa. Jos tarpeellista, suuremmat ja pie- L. nemmät partikkelit voidaan poistaa millä tahansa tunnetulla partikkelien erottami- 35 seen käytetyllä menetelmällä, kuten suodatus. Sellaisesta menettelytavasta saadaan edullisesti partikkeleita, joiden koko on 0,2-10,0 pm halkaisijaltaan.
π 102724
Muita menetelmiä, jotka ovat tuttuja ammattimiehille liposomien muodostamiseksi, voidaan käyttää toteutettaessa tätä keksintöä; HDLC-keksintö ei rajoitu pelkästään edellä mainittuihin menetelmiin niiden muodostamiseksi.
Tämän keksinnön uudesta menetelmästä saatuja HDLC-valmisteita ja liposomeja 5 voidaan käyttää terapeuttisesti eläimissä (ihminen mukaan lukien) käsiteltäessä lukuisia infektioita tai olotiloja, joihin tarvitaan: (1) toistuvia lääkkeen antamisia; (2) jatkuva lääkkeen antaminen bioaktiivisessa muodossaan; tai (3) alentunut toksisuus, ja samalla pääosin samanlainen tai suurempi vapaan, kyseessä olevan lääkkeen teho. Sellaisiin olotiloihin kuuluvat, mutta eivät rajoitu niihin, sieni-infektiot, sekä paikal-10 linen että systeeminen, kuten sellaiset, joita voidaan käsitellä antifungaalisilla aineilla, kuten nystatiinilla ja amfotei isiini B:llä, ja virustaudit, immuunikato (AIDS) ja herpes. Lisäksi keksinnön valmisteet ovat stabiileja vesipitoisissa liuoksissa.
Keksinnön yhdisteitä voidaan käyttää astman hoitoon annostelemalla sumutteeksi muodostettua vesipitoista liposomi- tai HDLC-suspensiota keuhkoihin. Esimerkiksi 15 liposomit tai HDLC voidaan suspendoida sopivaan liuottimeen, joka voidaan tehdä aerosoliksi pneumaattisella tai ultrasonisella sumun muodostajalla, tai sopivammin koteloidulla sumun muodostajalla, joka toimii kaasupaineella fluorihiilipelletistä. Muut sisäänhengityssysteemit, kuten sellaiset, joissa liposomit tai HDLC annetaan partikkelimuodossa, joko kuivana jauheena tai suspensiona sopivassa kantajasystee-; 20 missä, ovat hyväksyttäviä. Sen jälkeen, kun on muodostettu aerosolia, haihtuu suu- . : rin osa ponneainetta sisältävästä liuottimesta paisuntahaihdutuksessa ja se korvataan . : kosteudella hengitysteissä, mikä johtaa partikkeleiden kerrostumaan.
Seuraavat esimerkit annetaan vain valaisevassa tarkoituksessa eikä rajoittamaan tä- V * män keksinnön alaa.
* · • · · • · · • · 25 Esimerkki 1 * · *.v Amfoterisiini B (10 mg; kokonaislääke 5 mooliprosenttia) lisättiin 100 ml.aan meta- • · · v ; nolia, joka oli 500 ml:n pyöreäpohjaisessa pullossa ja seosta sonikoitiin, kunnes se oli kirkasta. Tämä sonikointivaihe suoritettiin haudesonikaattorissa noin 15 min ajan .···. 25 °C:ssa, noin 50-60 Hz. Lisättiin dimyristoyylifosfatidyylikoliinia (DMPC) (100 '·' 30 mg 1,0 mLssa kloroformia) samoin kuin 42 mg dimyristoyylifosfatidyyliglyserolia : (DMPG) (0,42 mLssa kloroformia). Saatu dispersio kuivattiin haihduttamalla rota- vaporilla 60 °C:ssa alennetussa paineessa, jolloin saatiin ohut kalvo pulloon. Kalvo suspendoitiin uudestaan 4,0 ml:aan PBS:ää, liuos siirrettiin lasiputkeen ja sonikoitiin kirkkaaksi.
,2 102724
Edellä oleva esimerkki toistettiin 16,7, 20, 25, 33, 50 ja 60 mooliprosentilla amfote-risiini B:tä. Akuutin toksisuuden tutkimisien (LD50), jotka mittaavat lääkeannoksen, joka aikaansaa 50 % kuolemia hiirissä, tulokset olivat korkeammat, kun lääkkeen mooliprosenttia lisättiin 50 mooliprosenttiin asti amfoterisiini B:tä.
5 Esimerkki 2
Amfoterisiini B (140 mg; kokonaislääke 5 mooliprosenttia) lisättiin 1,5 ml:aan di-metyylisulfoksidia (DMSO). DMPC (1400 mg) ja 600 mg DMPG:tä liuotettiin 50 ml:aan metyleenikloridia ja kaksi liuosta siirrettiin pulloon. Liuosta sekoitettiin kunnes se oli kirkasta ja kuivattiin sitten rotavaporilla alennetussa paineessa, jolloin 10 muodostui kalvo pulloon, sitten kuivattiin 1-4 päivää kelloastiassa. Sellaisen kuivauksen jälkeen kalvo, joka oli muodostanut kuivia hiutaleita, jauhettiin jauheeksi ja sekoitettiin 100 ml:n tai 50 ml:n kanssa 0,9-prosenttista suolaliuosta, tai 50 ml:n kanssa injektiota varten olevan USP-veden kanssa. Saatua suspensiota kuumennettiin 37 °C:ssa yksi tunti.
15 Edellä oleva esimerkki toistettiin käyttämällä mieluummin metanolia kuin DMSO:ta amfoterisiini B:n suspendoivaksi liuottimeksi ja amfoterisiini B:n 10, 16,7 ja 33 mooliprosenteilla. Käytettiin 1 g ja 2 g kananmunan fosfatidyylikoliinia 7:3 mooli-suhteen DMPC:DMPG:tä sijasta.
Esimerkki 3 : 20 Amfoterisiini B (100 mg; kokonaislääke 5 mooliprosenttia) liuotettiin 2,0 ml:aan DMSO:ta. DMPC (100 mg 1,0 ml:ssa) ja DMPG (42 mg 0,42 mkssa) liuotettiin yh-dessä klorofonniin pullossa ja kloroformi poistettiin rotavaporilla alennetussa pai- • · · .* . neessa. Pulloon lisättiin metyleenikloridia (20 ml), jota seurasi 0,2 ml:n amfote- ’·*** risiini B-kantaliuoksen lisääminen. Tämä suspensio sonikoitiin kirkkaaksi (noin 1 25 min) olosuhteissa kuten selitettiin esimerkissä 1. Lisättiin PBS:ää (0,3 ml), pH 7,2, *.v ja metyleenikloridi poistettiin sitten typpi virtauksessa ja samalla sonikoitiin. Saatu • · · tahna suspendoitiin uudestaan 10,0 mhaan PBSiää ja sentrifugoitiin 10 000 x g 10 min, mitä seurasi haudesonikaatio noin 20 minuutin ajan.
• · · ·
Edellä oleva esimerkki toistettiin käyttämällä 16,7, 20, 25, 33, 50 ja 60 moolipro-30 senttiä amfoterisiini B:tä.
13 102724
Esimerkki 4
Amfoterisiini B (140 mg; kokonaislääke 5 mooliprosenttia) liuotettiin 1,5 inkaan DMSO:ta. Kananmunan fosfatidyylikoliini (EPC) (2,0 mg) liuotettiin 50 g.aan me-tyleenikloridia ja kaksi liuosta sekoitettiin pullossa. Lisättiin PBS:ää (8,0 ml) ja 5 liuotin poistettiin typpivirtauksessa ja samalla sonikoitiin, esimerkin 1 menetelmän mukaan. Lisättiin PBS:ää (200 ml).
Edellä oleva esimerkki toistettiin käyttämällä 10 ja 20 mooliprosenttia amfoterisiini B:tä.
Esimerkki 5 10 Amfoterisiini B (140 mg; kokonaislääke 5 mooliprosenttia) liuotettiin 1,5 inkaan DMSCkta. DMPC (1400 mg) ja 600 mg DMPG:tä liuotettiin 500 mkn pyöreäpohjai-seen pulloon 50 g:n kanssa metyleenikloridia. Kaksi liuosta sekoitettiin pullossa ja lisättiin 10 ml USP-vettä injektiota varten 37 °C:ssa. Liuotin haihdutettiin käyttämällä typpivirtaa ja samalla sonikoitiin esimerkin 1 mukaisen menetelmän mukaan 15 ja sitten lisättiin 50 ml vettä injektiota varten, USP, ja liuos lämmitettiin 37 °C:een 30 min. Edellä oleva esimerkki toistettiin käyttämällä 10 ja 16,7 mooliprosenttia amfoterisiini B:tä ja sitä seurasi liuoksen suodatus 3 mikronin suora läpivirtaus -polykarbonaattisuodattimen, saatavissa Nucleopore'lta, läpi.
Esimerkki 6 20 Amfoterisiini B (140 mg; kokonaislääke 16,7 mooliprosenttia) sekoitettiin 50 inkaan metanoliaja seosta sekoitettiin 15 min liuoksen muodostumiseksi, sitten suodatettiin • · · *·’ * 0,22 mikronin kiertovirtaussuodattimen (sekalaisia selluloosa-ja asetaattinitraatties- • · *.·.· tereitä) läpi, jota saadaan Millexiltä. DMPC (350 mg) ja 150 mg DMPG:tä liuotet tiin yhdessä 50 g:aan metyleenikloridia ja sekoitettiin suodatetun liuoksen kanssa. 25 Liuottimet haihdutettiin typpivirrassa ja samalla sonikoitiin esimerkin 1 menetelmän mukaan. Lisättiin PBS:ää (50 ml). Puolet valmisteesta (25 ml) lyofilisoitiin standar- *. dilyofilisointimenetelmien mukaan.
···· t 11
Esimerkki 7 ' 2,0 mkaan vedetöntä etanolia lisättiin 10 μΐ IN kloorivetyhappoa. Happamaksi teh- ’...· 30 tyyn etanoliin lisättiin amfoterisiini B (20 mg; kokonaislääke 5 mooliprosenttia) ja seos sonikoitiin kirkkaaksi esimerkin 1 olosuhteissa, paitsi että sonikointiaika oli 30 s - 60 s. DMPC (200 mg) ja DMPG (42 mg) pantiin koeputkeen, johon oli lisätty 102724 14 bentseeni: metanoli (70:30)-liuosta ja liuos lyofilisoitiin kuten esimerkissä 8. Kuivattu lipidi sekoitettiin 2,0 ml:aan PBS:ää ja seos hajotettiin vortex-sekoittimella. Lipidin päälle lisättiin amfoterisiini B-liuos (0,2 ml) ja seosta sekoitettiin yön yli. Saadut DMPC:DMPG MLV:t (200 μΐ) pantiin kerroksiksi sakkaroositiheysgradient-5 tiin ja sentrifugoitiin 24 h 22 °C:ssa 230 000 x g. Tulokset näkyvät kuviossa 7; kaikki amfoterisiini B liittyi lipidiin, laaja jakautuminen, jossa gradientin huippu sisälsi suurimman osan lipidistä ja amfoterisiini B:n pääpiikki oli gradientin pohjalla. Vaihtoehtoisesti, saadut DMPC:DMPG MLV:t lyofilisoitiin ja hydrattiin uudestaan tislatun veden kanssa (2,0 ml).
10 Edellä oleva esimerkki toistettiin käyttämällä 7, 9, 16,7, 17, 20, 25, 33, 50 ja 60 mooliprosenttia amfoterisiini B:tä. Lääkkeen mooliprosentin ollessa 16,7 tai enemmän muodostui enimmäkseen HDLC:tä. Sellaisten korkean lääke.lipidi-suhteen valmisteiden tiheyssentrifugaatiogradientit ovat samankaltaisia kuviossa 3 näkyvien kanssa, jossa kaikki lääke ja lipidi ovat yhdessä liittyneet yhdeksi ainoaksi piikiksi.
15 Esimerkki 8 Näytteet, joissa oli 25 mooliprosenttia amfoterisiini B-DMPC:DMPG:tä valmistettiin röntgendiffaktiota, DSC.tä, jäädytyshalkaisuelektronimikroskopiaa ja 3IP-NMR-tutkimuksia varten seuraavasti: 7:3-moolisuhteessa DMPC:DMPG:tä (44 mg koko-naislipidi) ja 20 mg amfoterisiini B:tä (25 mooliprosenttia amfoterisiini B:tä) sus-20 pendoitiin kloroformi:metanoliin (70:30 til/til) ja haihdutettiin alennetussa paineessa 55 °C:ssa ohueksi kalvoksi pullon sivuille. Kalvo hydrattiin 8,0 ml:lla 20 mM He-pesiä, 250 mM NaCl:a, pH 7,2 22 °C:ssa sekoittamalla vortex-sekoittimella lasi-helmien kanssa. Valmistetta sentrifugoitiin 10000 x g 10 min, supematantit dekan-'* * toitiin ja pelletti suspendoitiin uudestaan 1,0 ml:aan Hepes/NaCl-puskuria. Valmis- 25 tetta sonikoitiin sitten haudesonikaattorissa 20 min 25 °C:ssa, 50-60 Hz.
• · · • · · i i i
Edellä oleva menetelmä toistettiin käyttäen 0, 5 ja 50 mooliprosenttia amfoterisiini • · · B:tä.
v.: Esimerkki 9 • · · • · · • · ·
Jotta määritettäisiin amfoterisiini B:tä sisältävien liposomien ja HDLC:n vangitse-30 mistilavuus, käytettiin seuraavaa menetelmää: DMPC (100 mg) ja 42 mg DMPG:tä, molemmat kloroformissa, yhdistettiin 10 mg:n kanssa amfoterisiini B:tä (25 mooli-%), joka oli metanolissa (0,1 mg/ml amfoteri-• : siini B) pullossa. Liuotin poistettiin alennetussa paineessa 37°C:ssa. Lisättiin 15 102724 PBS.ää (3,7 ml), johon oli lisätty 0,3 ml laimeata 3H-inuliini-liuosta tislatussa vedessä, kuivan lipidikalvon päälle ravistellen. Tasainen osa (10,2 ml) tästä liuoksesta laitettiin tuikeseokseen ja siitä laskettiin radioaktiivisuus beta-tuikelaskimessa. Toisesta osasta määritettiin fosfaatti Bartlettin menetelmän mukaan, J. Biol. Chein., 5 1959, 234:466-468. Lipidi-lääkesuspensiota sentrifugoitiin 10000 x g 10 min, super- natantti heitettiin pois ja pelletti suspendoitiin uudestaan PBSiään. Sentrifugaatio-ja pelletin uudelleen suspendointivaiheet tehtiin vielä kaksi kertaa; viimeinen uudelleen suspendoitu kerättiin (100 μΐ) ja laskettiin beta-tuikelaskimessa. Lopullisen pelletin uudelleen suspendoinnin toisesta osasta määritettiin fosfaatti kuten edellä. 10 Vangitun inuliinin prosenttisuus laskettiin jakamalla lopulliset radioaktiiviset lukemat alkulukemilla ja kertomalla 100:11a. Vangittu tilavuus (μΐ vangittua inuliinia/-μιηοΐ lipidiä) laskettiin myös.
Edellä oleva menetelmä toistettiin myös käyttämällä 0, 5 ja 50 mooli-% amfoteri-siini B:tä.
15 Esimerkki 10
Amfoterisiinipaitikkelit valmistettiin kuivaamalla 15,5 mg DMPC:tä ja 6,5 mg DMPG:tä (7:3-moolisuhde) noin 10 mksta kloroformia 100 ml:n pyöreäpohjaisen pullon reunoilla. Amfoterisiini B (10 mg) suspendoitiin 100 inkaan metanolia ja pulloon lisättiin 100,0 ml metanoliliuosta ja lipidikalvo suspendoitiin, jolloin saatiin 20 25 mooli-% amfoterisiini B:tä. Seos kuivattiin sitten rotavaporissa 37 °C:ssa ohueksi ", kalvoksi pullon reunoilla. Kalvo hydrattiin sitten 4,0 mklla 10 mM Hepesiä, 150 mM NaCka (pH 7,2) käyttämällä lasihelmiä ja sonikoitiin 30 min, jolloin saatiin lo- pullinen suspensio. Näyte tästä suspensiosta kuumennettiin sitten 60 °C:een 10 mi- *·' * nuutiksi upottamalla vesihauteeseen. Saatu suspensio luonnehdittiin sitten DSC.llä, • · :.v 25 NMR:llä ja jäädytyshalkaisuelektronimikroskopialla.
Edellä oleva menetelmä toistettiin siten, ettei lämmitetty näytettä. Tätä näytettä pi- • * · dettiin 22 °C:ssa ja luonnehdittiin myös edellä mainituilla tekniikoilla.
• · ·
Esimerkki 11 ···· *···' Esimerkin 10 materiaalit ja menetelmät toistettiin käyttämällä 50 mooli-% amfote- 30 risiini B.tä. Nämä systeemit luonnehdittiin DSC:llä, ESR:llä ja jäädytyshalkaisu-:" : elektronimikroskopialla.
Esimerkki 12 ie 102724 DSC-mittaukset suoritettiin Micro Cal MC-1 Unitila, joka oli Micro Callta, Inc., Amherst, MA. 0,70 ml:n näytetilavuuksia, joissa oli 5-9 mg suspensiota, injektoitiin näytesoluihin ja referenssisoluissa käytettiin sama tilavuus puskuria. Näytteitä kuu-5 mennettiin joko noin 26 °C/h tai 37 °C/h. Saman näytteen rinnakkaiset määritykset, joiden käsittely oli sama, antoivat alku-ja lopetuslämpötilat, jotka olivat toistettavia 0,2 °C:een. Yleensä näytteet, joissa oli amfoterisiini B:tä, kuumennettiin 60 °C:een (ei kuumemmaksi) ja sitten jäähdytettiin 7-4 °C:een vähintään 2 h, jotta varmistettiin näytteen yhdenmukainen menneisyys.
10 Esimerkki 13 NMR-spektrit saatiin 145,7 MHz:ssä Bruker AM360 laajan läpimitan NMR-spekt-rometrillä käyttämällä 8K tietopisteitä tulostukseen, 50000 Hz:n pyyhkäisyleveyttä ja 20 μβ pulssileveyttä, joka vastasi 45 °:n pulssia. Spektrit kerättiin jopa 10 000 pyyhkäisyyn asti.
15 Esimerkki 14 0,1-0,3 μΐ näyte-eristä pantiin Balzerin (Nashua, NH) kuparikantajalevyparin väliin ja kastettiin nopeasti 23 °C:sta nestepropaaniin. Näytteet halkaistiin ja replikoitiin kaksoisreplikaatiolaitteeseen Balzerin jäädytys-halkaisuyksikössä 2 x 10 mbaarin tyhjössä tai enemmässä ja -115 °C:ssa. Replikat irrotettiin 3N:ssa HNC^ssa, jonka ;· 20 jälkeen pestiin porrastetussa natriumhypokloriittiliuosten sarjassa. Nämä puhdistet tiin lopuksi tislatussa vedessä ja kerättiin kuparihiloille, joiden reikäluku oli 300 > Hex (Polysciences, PA). Replikoita tarkasteltiin Philips 300-elektronimikroskoopil- la, 3000 - 22 000 -keltaisilla suurennuksilla.
• · · ···· :/· * Esimerkki 15 • · • · · • * * 25 Absorbanssispektrit (kuten kuvioissa 8 ja 9) tehtiin laimentamalla amfoterisiini B:tä . . Hepes/NaCl-puskurissa 25 μΜ^ΐ litraa amfoterisiini B:tä. Näyte laitettiin • * ·
Beckman-spektrofotometrin näytekyvettiin ja luettiin 300-500 nm:ssä. Näytekyvetti • · * *·* ‘ luettiin puskurinollaa vastaan.
Esimerkki 16 .···. 30 ESR:ää varten leimattiin näytteet sarjalla doksyylin steeristen happojen asemaiso- : meerejä, joissa doksyylireportteriryhmä oli läsnä eri asemissa pitkin rasvahappoket- Π 102724 jua. Leimausta tehostettiin liittämällä koetin sekoittamalla voitexilla ja sonikoimalla etanolipitoisesta liuoksesta, joka kuivattiin ohueksi kalvoksi koeputken reunoille. Kaikki näytteet leimattiin yhteen mooliprosenttiin.
ESR-spektrit tallennettiin IBM Instruments ER100D ESR-spektrometrillä typpikaa-5 suvirtaus-lämpötilasäätelyllä. Ulkoista kalibroitua termi storikoetinta (Omega Engineering, Inc., Stamford, CA) käytettiin valvomaan näytteen lämpötilaa. ESR-spektrit tallennettiin 10 MW:n mikroaaltovoimalla ja 9,11 GHz-mikroaaltofrekvens-sillä kenttäpyyhkäisyn ollessa 100 G ja 100 KHz 0,32 G kenttämodulaatioamplitudi. Järjestysparametri laskettiin maksimaalisesta hyperhienosta hajoamisesta (A max).
10 Esimerkki 17
Amfoterisiini B (337,5 g) lisättiin 3375 inkaan DMSO:ta ja amfoterisiini B:tä (100 mg/ml) sekoitettiin niin, että se liukeni (noin 3 h) käyttäen mekaanista sekoittajaa. Seos siirrettiin ruostumattomaan teräspaineastiaan (5 1 tilavuus) ja suodatettiin 0,22 μηι:η Sartofluor-suodattimen ja polypropyleenikerrossuodattimen läpi (Pall Profile, 15 Pall, Inc., Glen Cove, N.Y.).
40 litran paineastiaan sekoitettiin 50,8 kg metyleenikloridia 225,0 g:n kanssa DMPC:tä ja 99,0 g:n kanssa DMPG:tä 3,5 h, niin että oli tapahtunut täydellinen liu-keneminen. Saatu lipidiliuos siirrettiin 0,2 M 0,22 mikronin Sartofluor teflonsuo-: dattimen läpi ruostumattomaan teräskäsittelytankkiin. 40 l:n paineastia pestiin vielä . 20 55,2 kg:lla metyleenikloridia ja suodatettiin samalla lailla käsittelytankkiin. Käsitte-
’ lytankki asetettiin sekoittamaan Iipidiliuosta pyörivästi 195 ipm ja amfoterisiini B
DMSO-liuos siirrettiin sitten tankkiin. Tankkiin lisättiin sitten natriumkloridiliuosta (16,2 1, 0,9 % USP) 0,22 μιη Millipak 100 -polykarbonaattisuodattimen läpi.
• · · • · · • · · Käyttämällä lämmönvaihdinvälineistöä Saijassa käsittelytankin kanssa kuumeimetun 25 typpivirran annettiin mennä tankin läpi ja liuotin poistettiin yli 12 h:n ajanjaksona.
. . Saatu Iipidi-Iääke-kompleksi laimennettiin natriumkloridilla 0,9% USP (7000 ml), • · < M joka siirrettiin tankkiin Millipak 100 0,22 mikronin suodattimen läpi.
• · · • · ·
Saadut HDLC.t homogenoitiin käyttäen Gifford Wood-kolloidimyllyä ja pyörivää lohkopumppua. HDLC:n annettiin mennä kolloidimyllyn pään läpi 0,012695 mm:n 30 aukkoasetuksilla, 0,7 atm vastapaineella, 3,0 h, jolloin saatiin partikkeleita, jotka olivat vähemmän kuin 20 mikronia. HDLC:n partikkelikoko analysoitiin Malvem-,,, i partikkelilaskulaitteella.
102724
1R
Esimerkki 18
Lipidi (102,6 μιηοΐ yhteensä, 70:30 moolisuhteessa DMPC:DMPG:tä), joka oli liuotettu kloroformiin, pipetoitiin 500 ml:n pyöreäpohjaiseen pulloon. Nystatiini (500 mg) liuotettiin 1,0 l:aan inetanolia (0,5 mg/ml) sonikoimalla Branson-haudesoni-5 kaattorilla. Liuotettu nystatiini (5,0 ml) lisättiin pyöreäpohjaiseen pulloon, jossa oli lipidiä ja sekoitettiin; liuotin poistettiin sitten rotavaporilla 45 °C:ssa 15 min ja saadut valmisteet hydrattiin uudelleen suolaliuoksessa (5,0 ml) pyörivällä sekoittajalla lasihelmien kanssa. Valomikioskooppitarkastelussa liposomit olivat näkyviä.
Edellä ollut toistettiin käyttäen 25, 50, 75 ja 100 mooli -% nystatiima. Jäädytyshal-10 kaisu elektronimikroskooppitarkastelussa näyte, jossa oli 25 mooli-%:a nystatiinia, ei ollut liposomista HDLC:tä.
• · · · • · · • · · * · · • · · • · · • · • · · • · · • · ·»» • · · • · · 1 · ·

Claims (10)

19 102724
1. Menetelmä hydrofobisesta bioaktiivisesta aineesta ja lipidistä koostuvan kompleksin valmistamiseksi, jossa menetelmässä hydrofobisen bioaktiivisen aineen sisältävä liuos sekoitetaan lipidin sisältävän liuoksen kanssa, tunnettu siitä, että se-5 koittaminen suoritetaan seuraavasti: A. (a) liuotetaan lipidi keskimääräisen polaarisuuden omaavaan orgaaniseen liuottimeen; (b) liuotetaan hydrofobinen bioaktiivinen aine biologisesti seostuvaan orgaaniseen liuottimeen; ja 10 (c) yhdistetään (a)-vaiheessa saatu liuos (b)-vaiheen liuoksen kanssa seoksen aikaansaamiseksi, tai B. (a) suspendoidaan hydrofobinen bioaktiivinen aine vesipitoiseen liuokseen; (b) suspendoidaan lipidi vesipitoiseen liuokseen; (c) sekoitetaan (a)- ja (b)-vaiheiden suspensiot keskenään; ja 15 (d) inkuboidaan (c)-vaiheen tuotetta lipidin siirtymälämpötilassa tai sen ylä puolella, ja että lipidi sisältää fosfolipidin tai rasvahapon, että kompleksi ei olennaisesti sisällä liposomeja, ja että hydrofobisen bioaktiivisen aineen konsentraatio kompleksissa on ainakin noin 6 mooliprosenttia.
2. Patenttivaatimuksen IA mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että biologisesti '.: ·' seostuva orgaaninen liuotin on hapotettua liuotinta, edullisesti hapotettua etanolia.
3. Patenttivaatimuksen IA mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että se käsittää • · · · lisäksi liuottimien haihduttamisen (c)-vaiheen seoksesta alennetussa paineessa ja • · · Y vesipitoisen liuoksen lisäämisen seokseen tämän jälkeen. t « · • ·
4. Patenttivaatimuksen IA mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että se käsittää :Y: lisäksi vesipitoisen liuoksen lisäämisen (c)-vaiheen liuokseen, seoksessa olevien :1·1: liuottimien haihduttamisen alennetussa paineessa ja vesipitoisen liuoksen lisäämisen seokseen tämän jälkeen. I I i a : 5. Patenttivaatimuksen IA mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että se käsittää .···. 30 lisäksi (c)-vaiheesta saadun seoksen kuivaamisen. • · 20 102724
6. Patenttivaatimuksen IA mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hydrofobinen bioaktiivinen aine on antifungaalinen aine polyeeni, edullisesti amfoterisiini B tai nystatiini.
7. Patenttivaatimuksen IA mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että aineen kon-5 sentraatio kompleksissa on noin 6 mooliprosenttia - noin 50 mooliprosenttia.
8. Patenttivaatimuksen IA mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lipidi on fosfolipidi, joka sisältää dimyristoyylifosfatidyylikoliinia ja dimyristoyylifosfati-dyyliglyserolia, joiden moolisuhde kompleksissa on edullisesti noin 7:3.
9. Patenttivaatimuksen IA mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hydrofobi-I0 nen bioaktiivinen aine on amfoterisiini B, että lipidi on fosfolipidi, joka sisältää di- myristoyylifosfatidyylikoliinia ja dimyristoyylifosfatidyyliglyserolia, että amfoterisiini B:n konsentraatio kompleksissa on noin 6 - noin 50 mooliprosenttia ja että dimyristoyylifosfatidyylikoliinin ja dimyristoyylifosfatidyyliglyserolin moolisuhde kompleksissa on noin 7:3.
15 Patentkrav
FI894161A 1987-03-05 1989-09-04 Menetelmä bioaktiivisesta aineesta ja lipidistä koostuvan kompleksin valmistamiseksi FI102724B1 (fi)

Applications Claiming Priority (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US2215787A 1987-03-05 1987-03-05
US2215787 1987-03-05
US6990887A 1987-07-06 1987-07-06
US6990887 1987-07-06
US7930987A 1987-07-29 1987-07-29
US7930987 1987-07-29
US8800647 1988-03-03
PCT/US1988/000647 WO1988006443A1 (en) 1987-03-05 1988-03-03 Low toxicity drug-lipid systems

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI894161A0 FI894161A0 (fi) 1989-09-04
FI102724B true FI102724B (fi) 1999-02-15
FI102724B1 FI102724B1 (fi) 1999-02-15

Family

ID=27361805

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI894161A FI102724B1 (fi) 1987-03-05 1989-09-04 Menetelmä bioaktiivisesta aineesta ja lipidistä koostuvan kompleksin valmistamiseksi

Country Status (20)

Country Link
EP (1) EP0282405B2 (fi)
KR (1) KR970002870B1 (fi)
CN (1) CN1044093C (fi)
AT (1) ATE118169T1 (fi)
AU (1) AU622405B2 (fi)
CA (1) CA1338701C (fi)
DE (1) DE3852961T3 (fi)
DK (1) DK176010B1 (fi)
ES (1) ES2070131T5 (fi)
FI (1) FI102724B1 (fi)
GR (1) GR3015916T3 (fi)
HK (1) HK1007495A1 (fi)
IE (1) IE67152B1 (fi)
IL (1) IL85607A (fi)
LU (1) LU88684I2 (fi)
NL (1) NL990004I1 (fi)
NO (4) NO179995C (fi)
NZ (1) NZ223660A (fi)
PT (1) PT86913B (fi)
WO (1) WO1988006443A1 (fi)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5178875A (en) * 1991-01-14 1993-01-12 The Board Of Regents, The University Of Texas System Liposomal-polyene preliposomal powder and method for its preparation
US5830498A (en) * 1987-10-16 1998-11-03 Board Of Regents, The University Of Texas System Liposomal-polyene preliposomal powder and method for its preparation
AU598958B2 (en) 1987-11-12 1990-07-05 Vestar, Inc. Improved amphotericin b liposome preparation
CA2050679C (en) * 1989-03-31 1998-09-22 Francis C. Szoka, Jr. Preparation of liposome and lipid complex compositions
US5188951A (en) * 1990-04-17 1993-02-23 The Liposome Company, Inc. Enzymatic synthesis of soluble phosphatides from phospholipids
DE4108903A1 (de) * 1990-08-06 1992-02-13 Nattermann A & Cie Pharmazeutisches produkt
US5556637A (en) * 1990-08-06 1996-09-17 A. Nattermann & Cie. Gmbh Water containing liposome system
US5534502A (en) * 1990-11-06 1996-07-09 Nippon Shinyaku Co. Ltd. Process for producing fat emulsion
WO1992007571A1 (fr) * 1990-11-06 1992-05-14 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Procede de production d'une emulsion grasse
EP0599977A1 (en) * 1991-08-14 1994-06-08 SEQUUS PHARMACEUTICALS, INC. (a Delaware Corporation) Hiv-treatment method with low-toxicity amphotericin b
JPH08510748A (ja) * 1993-05-21 1996-11-12 ザ リポソーム カンパニー、インコーポレーテッド リポソームが誘発する生理的副作用の低減
US5716526A (en) * 1994-01-14 1998-02-10 The Liposome Company, Inc. Method of separating materials from liposomes or lipid complexes
US5902604A (en) 1995-06-06 1999-05-11 Board Of Regents, The University Of Texas System Submicron liposome suspensions obtained from preliposome lyophilizates
GB2326337A (en) 1997-06-20 1998-12-23 Phares Pharma Holland Homogeneous lipid compositions for drug delivery
US6165997A (en) * 1997-11-20 2000-12-26 Statens Serum Institut Phospholipids having antimicrobial activity with or without the presence of antimicrobials
WO2007067784A2 (en) * 2005-12-08 2007-06-14 Wyeth Liposomal compositions
KR101132626B1 (ko) * 2009-10-12 2012-04-02 주식회사 녹십자 난용성 약물의 전달을 위한 고밀도지단백 나노입자의 제조방법
AU2010359346B2 (en) 2010-08-20 2015-01-29 Dr. Reddy's Laboratories Sa Phospholipid depot
ES2640756T3 (es) 2010-10-22 2017-11-06 Dr. Reddy's Laboratories Sa. Uso de depósitos de fosfolipidos viscosos estables para tratar heridas
RU2678433C2 (ru) 2012-05-10 2019-01-29 Пейнреформ Лтд. Депо-составы гидрофобного активного ингредиента и способы их получения
WO2016205384A1 (en) 2015-06-15 2016-12-22 The University Of Washington Multiple drug lipid nanoparticle composition and related methods for extended drug levels in blood and lymph tissue

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4310506A (en) * 1979-02-22 1982-01-12 California Institute Of Technology Means of preparation and applications of liposomes containing high concentrations of entrapped ionic species
FR2521565B1 (fr) * 1982-02-17 1985-07-05 Dior Sa Parfums Christian Melange pulverulent de constituants lipidiques et de constituants hydrophobes, procede pour le preparer, phases lamellaires lipidiques hydratees et procede de fabrication, compositions pharmaceutiques ou cosmetiques comportant des phases lamellaires lipidiques hydratees
US4604376A (en) * 1982-04-21 1986-08-05 Research Corporation Enteric compounds and complexes
US4436746A (en) * 1982-09-30 1984-03-13 Ciba-Geigy Corporation Thromboxane synthetase inhibitory N-substituted-2-(1-imidazolyl)indoles
US4622219A (en) * 1983-06-17 1986-11-11 Haynes Duncan H Method of inducing local anesthesia using microdroplets of a general anesthetic
IL78930A0 (en) * 1985-07-29 1986-09-30 Abbott Lab Lyophilized emulsion compositions for parenteral administration
IL78929A0 (en) * 1985-07-29 1986-09-30 Abbott Lab Microemulsion compositions for parenteral administration

Also Published As

Publication number Publication date
ES2070131T3 (es) 1995-06-01
NO1998012I1 (no) 1998-03-25
KR970002870B1 (ko) 1997-03-12
DK176010B1 (da) 2005-11-28
ES2070131T5 (es) 1998-10-01
NO944071D0 (no) 1994-10-26
DK98089D0 (da) 1989-03-01
DE3852961D1 (de) 1995-03-23
NO1998013I1 (no) 1998-03-25
NO884391L (no) 1988-11-24
CN1044093C (zh) 1999-07-14
EP0282405A3 (en) 1989-01-04
DE3852961T2 (de) 1995-07-06
EP0282405B1 (en) 1995-02-08
CA1338701C (en) 1996-11-12
DK98089A (da) 1989-03-01
NZ223660A (en) 1990-11-27
EP0282405A2 (en) 1988-09-14
AU622405B2 (en) 1992-04-09
IL85607A0 (en) 1988-08-31
IE67152B1 (en) 1996-03-06
GR3015916T3 (en) 1995-07-31
KR890700341A (ko) 1989-04-24
LU88684I2 (fr) 1996-04-29
NO180147C (no) 1997-02-26
HK1007495A1 (en) 1999-04-16
EP0282405B2 (en) 1998-07-22
NO180147B (no) 1996-11-18
PT86913B (pt) 1993-07-30
WO1988006443A1 (en) 1988-09-07
NO944071L (no) 1988-11-24
DE3852961T3 (de) 1998-12-24
FI102724B1 (fi) 1999-02-15
NO884391D0 (no) 1988-10-04
PT86913A (pt) 1989-03-30
NL990004I1 (nl) 1999-04-01
CN88101864A (zh) 1988-09-28
FI894161A0 (fi) 1989-09-04
ATE118169T1 (de) 1995-02-15
IE880600L (en) 1988-09-05
IL85607A (en) 1992-08-18
AU1799088A (en) 1988-09-26
NO179995B (no) 1996-10-21
NO179995C (no) 1997-01-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI102724B (fi) Menetelmä bioaktiivisesta aineesta ja lipidistä koostuvan kompleksin v almistamiseksi
US6406713B1 (en) Methods of preparing low-toxicity drug-lipid complexes
US5616334A (en) Low toxicity drug-lipid systems
Vemuri et al. Preparation and characterization of liposomes as therapeutic delivery systems: a review
KR100869824B1 (ko) Ｓｎ-38 지질 복합체 및 사용 방법
Guo et al. Novel antifungal drug delivery: stable amphotericin B-cholesteryl sulfate discs
JP2958774B2 (ja) アンホテリシンｂリポソームの改良調整法
US5077057A (en) Preparation of liposome and lipid complex compositions
Niven et al. Nebulization of liposomes. I. Effects of lipid composition
EP0555229B1 (en) Accumulation of amino acids and peptides into liposomes
EP0632719B1 (en) Method of treatment of infected tissues
Darwis et al. Nebulisation of rehydrated freeze-dried beclomethasone dipropionate liposomes
Liang et al. Encapsulation of ATP into liposomes by different methods: optimization of the procedure
DE4216644B4 (de) Liposomen enthaltende Arzneimittel
JPH01501479A (ja) リン脂質組成物
US20060030578A1 (en) Pharmaceutically active lipid based formulation of irinotecan
EP0472639A1 (en) Accumulation of drugs into liposomes by a proton gradient
Arica et al. Characterization, in vitro and in vivo studies on primaquine diphosphate liposomes
JP3850468B2 (ja) エリスロポエチンのリポソーム製剤
US20020119170A1 (en) Low toxicity drug-lipid systems
JP2705175B2 (ja) 低毒性薬剤‐脂質系
EP0555317B1 (en) Phospholipid analogue vesicle with a succinimidyl moiety
HU209647B (en) Process for production of low toxicity composition containing bioactive agent and lipid
Benjakul et al. Novel Freeze-Drying Method for Preparation of α-Mangostin Dry Reconstitute Liposomal Powder

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Owner name: THE LIPOSOME COMPANY, INC.

MA Patent expired