FI101226B - Menetelmä lääkeaineena käyttökelpoisten 2-£2-(karbonyyli)pyrrolidin-4- yylitio|-6-(1-hydroksietyyli)-1-metyylikarbapen-2-eemi-3-karboksyyliha ppojohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

101226

Menetelmä lääkeaineena käyttökelpoisten 2-[2-(karbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio] -6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyy likarbapen-2-eemi-3-karboksyyli-happojohdannisten valmistamiseksi 5 Förfarande för framställning av som läkemedel användbara 2-[2-(karbonyl)pyrrolidin-4-yltio]-6-(l-hydroxietyl)-l-metylkarbapen- 2-em-3- karboxylsyraderivat 10

Esillä oleva keksintö liittyy joukkoon uusia 1-metyylikarbapeneemin johdannaisia, joilla on erinomainen antibioottinen vaikutus ja ovat huomattavan stabiileja m vivo. Esillä olevalla keksinnöllä saadaan myös aikaan menetelmiä ja koostumuksia käyttämällä näitä johdannaisia infektioiden hoitoon ja ennaltaehkäisyyn, kuten myös 15 menetelmiä niiden valmistamiseen.

Karbapeneemiyhdisteet ovat hyvin tunnettu yhdistejoukko liittyen penisilliineihin, joita on käytetty tai joita on ehdotettu käytettäväksi antibiootteina. Niillä on yhteinen perusrakenne, joka voidaan esittää kaavalla (A): 20 ‘I- (A) :': Tähän kaavaan olemme merkinneet niiden asemien numerojärjestelmän, jotka ovat merkittäviä karbapeneemiyhdisteissä, käyttämällä alalla yleisesti käytettyä numeroin-30 tijärjestelmää ja jota käytetään esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden nimeämiseksi. Niiden suositusten mukaisesti, jotka on saatu International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC), Commission on Nomenclature of Organic 2 101226

Chemistry, tässä viitatut yhdisteet on nimetty puolisystemaattisesti käyttämällä edellä olevaa karbapeneemirakennetta perusnimenä.

Ne karbapeneemiantibiootit, joilla ei ole substituenttia 1-asemassa, ovat mahdollisesti 5 hyvin käyttökelpoinen joukko yhdisteitä, joilla on tavanomaisesta poikkeava mahdollinen bakteerinvastainen vaikutus. Ne ovat kuitenkin valitettavasti kemiallisesti epästabiileja ja lisäksi ovat herkkiä dehydropeptidaasi I:lle in vivo. Dehydropep-tidaasi I on entsyymi, joka hydrolysoi β-laktaamirenkaan karbapeneemiantibiooteissa ja jota esiintyy nisäkkään kudoksessa, esimerkiksi munuaiskuoressa. Se on vastuussa 10 usean muuten arvokkaan β-laktaamiantibiootin ulkoisesta aineenvaihdunnasta eläimissä, mukaanlukien ihmiset, siten vähentäen suuresti niiden arvoa. Näistä haitoista huolimatta näistä karbapeneemiantibiooteista on lisääntyvää käyttöä bakteeri-infektioiden hoidossa. Tyypillinen ja yleinen tämän tyyppinen antibiootti on tiena-mysiini, jolla on kvaava (B): 15 0H /-nh/ H y yf 20 ή H (B) y—n—\ .

o xoo 25 Antibiootin in vivo aineenvaihdunta voidaan osoittaa itse yhdisteen pienellä määrällä (päinvastoin kuin sen aineenvaihduntatuotteiden) virtsassa ja tienamysiinille tämä on Λ osoitettu [H. Kropp et ai., Antimicrob. Agents, Chemother., 22, 62 (1982); ja S.R.

Norrby et ai., ibid.. 23, 300 (1983)].

30 Vaikka on havaittu, että karbapeneemiyhdisteillä, joilla on substituentti 1-asemassa (tavallisesti 1-metyyliryhmä), ei ole herkkyyttä dehydropeptidaasi I:lle in vivo, monilla tämän tyyppisillä yhdisteillä, jotka tähän päivään asti on löydetty, ei ole 3 101226 riittävää vaikutusta. On siksi hyvin toivottavaa löytää karbapeneemiantibiootti, jolla on sekä tienamysiinin hyvä vaikutus että hyvä vastustuskyky dehydropeptidaasi I:tä vastaan in vivo.

5 Tällä hetkellä tunnetaan monia karbapeneemiyhdisteitä. Joitakin on kuvattu esimerkiksi Euroopan patenttijulkaisuissa nrot 126587, 182213 ja 333175. EP 182213 ja EP 333175 esittävät yhdisteitä, jossa tiopyrolidinyyliryhmä ja sen rengashiiliatomisubs-tituentti ovat kytkeytyneet alkyleeniryhmällä ja siten ne eroavat esillä olevan keksinnön yhdisteistä siinä, että niissä ei ole kytkeyttävää karbonyyliryhmää. EP-julkaisus-10 sa 126587 esitetyt yhdisteet toisaalta ovat karboksyylisiä tiopyrolidinyyli-B-laktaa-miyhdisteitä ja luullaan siten edustavan lähintä tekniikan tasoa esillä olevan keksinnön mukaisille yhdisteille. Edelleen suomalaisissa patenttijulkaisuissa 96863 sekä 91258 ja Euroopan patenttijulkaisussa 443883 on esitetty 1-metyylikarbapeneemijoh-dannaisia, jotka muistuttvat keksinnön mukaisia yhdisteitä rakenteeltaan. Esillä 15 olevalla yhdisteellä on kuitenkin osoitettu olevan merkittävästi parempi vaikutus kuin tekniikan tason yhdisteillä, mikä käy ilmi myös taulukosta 1 sivulla 56.

Siten tämän keksinnön kohteena on saada aikaan joukko uusia 1-metyylikarbapenee-miyhdisteitä ja menetelmiä niiden valmistamiseksi.

20 "-r Lisäkohteena on saada aikaan sellaisia yhdisteitä, joilla on antibioottivaikutusta.

• «

Vielä eräänä tämän keksinnön kohteena on saada aikaan sellaisia yhdisteitä, joilla on käyttökelpoinen antibioottinen vaikutus ja hyvä vastustuskyky dehydropeptidaasi I:tä 25 vastaan in vivo.

• Muut kohteet ja edut selviävät sitä mukaa kuin selitys etenee.

Siten esillä oleva keksinnön mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisten yhdisteiden 30 valmistamiseksi on seuraava: 4 101226

Menetelmä lääkeaineena käyttökelpoisen kaavan (I) mukaisen 2-[2-(karbonyyli)pyrro-lidin-4-yylitio] -6-( 1 -hydroksietyy li)-1 -metyy likarbapen-2-eemi-3-karboksyy li-happojohdannisten valmistamiseksi: 5

CeoA

c 10 /—N-v O XOOH (I) 15 jossa: R1 on: vetyatomi, tai 20 substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, ja A on kaavan (AI), (A2), (A3), (A4), (A5) tai (A7) mukainen ryhmä: 25 5 101226

_ H

\ JCH,)„ j «Ό 1» OV'O/' 1—1 ' \2 (Al) *m (A2) R'l

^(CH^)/ H H

-N N R>2 I I

(A3) XH

(A4) NH

R'·

-O

(aj>4 <V^ (A7) 6 101226 jossa: on: 5 vetyatomi, substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, substituoitu alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia ja joka on substituoitu ainakin 10 yhdellä substituentilla, joka on valittu seuraavasta ryhmästä: hydroksiryhmät, karboksiryhmät, 15 halogeeniatomit, ja kaavan -CO.NRaR^ mukaiset ryhmät, 20 jossa Ra ja R*5 ovat samoja tai erilaisia ja kumpikin on vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia; tai kaavan -C( = NH)R^ mukainen ryhmä, jossa R^ on vetyatomi tai substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia; 25 R^ on vetyatomi, « · substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, 30 substituoitu alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia ja joka on substituoitu hydroksi-ryhmällä, hydroksiryhmä, karboksiryhmä tai karbamoyyliryhmä; 7 101226 R4 on vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia; R8 on: 5 vetyatomi, tai substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, R9 on: 10 vetyatomi, substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia tai 15 kaavan-C(=NH)R10 mukainen ryhmä, jossa R10 on vetyatomi tai substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia; R11 on vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia; 20 w. R12 on: vetyatomi tai kaavan -C(=NH)R13 mukainen ryhmä, 25 jossa R13 on vetyatomi tai substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia; R17 ja R18 ovat samoja tai erilaisia ja kumpikin on: substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia; Z on imidatsolyyli-, triatsolyyli- tai tetratsolyyliryhmä; 30 8 101226 d on O tai 1; i on 2; 5 g, 1 ja m ovat samanlaisia tai erilaisia ja kukin on 1 tai 2; ja n on 2 tai 3; β on 2; 10 SILLÄ EDELLYTYKSELLÄ, ETTÄ kun A on kaavan (AI) mukainen ryhmä: R2, R3 ja R4 eivät kaikki ole vetyatomeja, kun R1 on vetyatomi; ja 15 R!,R3jaR4 eivät kaikki ole vetyatomeja, kun R2 on alkyyliryhmä; ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, joka menetelmä käsittää seuraavat vaiheet: 20 annetaan kaavan (II) mukaisen yhdisteen:

OH

CH, 25 /\ CH { -f (Π) /—N-\ 0 COOR24 [jossa R24 on karboksia-suojaava ryhmä ja R28 on alkaanisulfonyylioksiryhmä, atyylisulfonyylioksiryhmä, dialkyylifosforyylioksiryhmä, diaryylifosforyylioksiryh- 30 9 101226 mä tai kaavan -S(-*0)R27 mukainen ryhmä, jossa R27 on alkyyliiyhmä, haloalkyy-liryhmä, asetamidoalkyyliryhmä, asetamidoalkenyyliryhmä, aryyliryhmä tai aromaattinen heterosyklinen ryhmä] reagoida kaavan (UI) mukaisen yhdisteen kanssa:

5 HS

£ 3-COA*

10 | (HD

R26 (jossa R26 on mikä vain ryhmistä tai atomeista, joita edustaa R1 tai mikä vain ryhmä tai atomi, jossa mikä vain aktiivinen ryhmä on suojattu ja A’ on mikä vain ryhmistä 15 tai atomeista, joita edustaa A tai mikä vain sellainen ryhmä tai atomi, jossa mikä vain aktiivinen ryhmä on suojattu) ja tarvittaessa poistamalla mikä vain suojaava ryhmä.

20 Sivulla 8 esitetyn rajoituslauseen ensimmäisessä kohdassa kuvattu yhdiste on esitetty . patenttijulkaisussa JP 04-36282 ja toisessa kohdassa kuvattu yhdiste patenttijulkaisus sa EP-A-0126587.

Keksinnöllä saadaan myös aikaan menetelmä mikrobi-, yleensä bakteeri-infektioiden 25 hoitoon ja ennaltaehkäisyyn eläimessä, esimerkiksi nisäkkäässä, kuten ihmisessä, , joka käsittää sen, että annetaan mainituille eläimille tehokas määrä antibioottia, jossa antibiootti on valittu ryhmästä, johon kuuluu kaavan (I) mukaiset yhdisteet ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ja esterit.

30 Keksinnön mukaiset menetelmät näiden yhdisteiden valmistamiseksi kuvataan yksityiskohtaisemmin myöhemmin.

10 101226

Esillä olevan keksinnön yhdisteissä, joissa R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R12, R13, R14, R15, R16, R17 ja R18 on alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, tämä voi olla suora tai haarautunut ketjuryhmä, jossa on 1-6, edullisesti 1-4, hiiliatomia, ja esimerkkejä ovat metyyli-, etyyli-, propyyli-, isopropyyli-, butyyli-, 5 isobutyyli-, sek-butyyli-, t-butyyli-, pentyyli-, isopentyyli-, neopentyyli-, 2-metyylibutyyli-, 1-etyylipropyyli-, 4-metyylipentyyli-, 3-metyylipentyyli-, 2-me-tyylipentyyli-, 1-metyylipentyyli-, 3,3-dimetyylibutyyli-, 2,2-dimetyylibutyyli-, 1,1-dimetyylibutyyli-, 1,2-dimetyylibutyyli-, 1,3-dimetyylibutyyli, 2,3-dimetyyli-butyyli-, 2-etyylibutyyli-, heksyyli-ja isoheksyyliryhmät. Näistä pidämme edullisi-10 na niitä alkyyliryhmiä, joissa on 1-4 hiiliatomia, edullisesti metyyli-, etyyli-, propyyli-, isopropyyli-, butyyli-, isobutyyli- ja t-butyyliryhmiä ja kaikkein edullisimpina metyyliryhmää.

Kun R1, R2, R3, R4, R6, R7, R8, R9, R10, R12, R13, R16, R17 tai R18 on substituoi-15 tu alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, tämä voi olla suora tai haarautunut ketjuryhmä, edullisesti suora ketjuryhmä, jossa on 1-6, edullisesti 1-4 hiiliatomia ja esimerkkejä ovat metyyli-, etyyli-, propyyli-, isopropyyli-, butyyli-, isobutyyli-, sek-butyyli-, t-butyyli-, pentyyli-, isopentyyli-, neopentyyli-, heksyyli- ja isoheksyyliryhmät. Näistä pidämme edullisina niitä alkyyliryhmiä, joissa on 1-3 20 hiiliatomia, edullisesti metyyli-, etyyli-ja propyyliryhmiä ja kaikkein edullisimpina metyyli- ja etyyliryhmiä. Subsituentit voidaan valita sopivista substituenteista (a), (b), (c) ja (d), jotka on määritelty edellä ja joista on esimerkkejä seuraavassa. Substi-tuenttien lukumäärää ei erityisemmin rajoiteta, paitsi mahdollisesti substituoitavien paikkojen lukumäärällä ja mahdollisesti steerisillä tekijöillä. Yleensä 1-3 substituent-25 tia on kuitenkin edullista, yhden substituentin ollessa normaalisti edullisin.

·* Kun R1, R2, R8 tai R12 on alkenyyliryhmä, jossa on 2-6 hiiliatomia, tämä voi olla suora tai haarautunut ketjuryhmä, jossa on 2-6, edullisesti 3 tai 4, hiiliatomia ja esimerkkejä ovat vinyyli-, allyyli-, 2-metyyliallyyli-, 1-propenyyli-, isopropenyy-30 li-, 1-butenyyli-, 2-butenyyli-, 3-butenyyli-, 1-pentenyyli-, 2-pentenyyli-, 3-pen-tenyyli-, 4-pentenyyli-, 1-heksenyyli-, 2-heksenyyli-, 3-heksenyyli-, 4-heksenyyli ja 5-heksenyyliryhmät, joista vinyyli-, allyyli-, 2-metyyliallyyli-, 1-propenyyli-, isopropenyyli- ja butenyyliryhmiä pidetään edullisina, allyyli- ja 2-metyyliallyyli- ryhmiä kaikkein edullisimpina.

u 101226

Kun R1, R2, R8 tai R12 on alkynyyliryhmä, jossa on 2-6 hiiliatomia, tämä voi olla 5 suora tai haarautunut ketjuryhmä, jossa on 2-6, edullisesti 3 tai 4, hiiliatomia ja esimerkkejä ovat etynyyli-, propargyyli(2-propynyyli)-, 1-propynyyli-, 1-butynyy-li-, 2-butynyyli-, 3-butynyyli-, 2-metyyli-2-propynyyli-, 1-pentynyyli-, 2-pentynyyli-, 3-pentynyyli- ja 4-pentynyyliryhmät, joista propynyyli- ja butynyyliryh-miä pidetään edullisina, propargyyli- ja 2-metyyli-2-propynyyliryhmiä kaikkein 10 edullisimpina.

Kun R6, R10, R13, R16 tai substituentti (c) on sykloalkyyliryhmä, tässä voi olla 3-7 rengashiiliatomia ja esimerkkejä ovat syklopropyyli-, syklobutyyli-, syklopentyyli-, sykloheksyyli- ja sykloheptyyliryhmät, joista syklopropyyli-, syklobutyyli- ja syklo-15 pentyyliryhmiä pidetään edullisina, syklopropyylityhmää kaikkein edullisimpana.

Kun R3, R4, R7, substituentti (a), substituentti (b), substituentti (c) tai substituentti (d) on halogeeniatomi, tämä voi olla fluori-, kloori-, bromi- tai jodiatomi, edullisemmin fluori-, kloori- tai bromiatomi ja kaikkein edullisimmin fluori- tai klooriato- 20 mi.

Kun Ra tai Rb on alkyyliryhmä, tämä voi olla suora tai haaratunut ketjualkyyli-ryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia ja esimerkkejä ovat metyyli-, etyyli-, propyyli-, isopropyyli-, butyyli-, isobutyyli-, sek-butyyli-ja t-butyyliryhmät. Näistä pidämme 25 edullisina niitä alkyyliryhmiä, joissa on 1 tai 2 hiiliatomia, kaikkein edullisempana , metyyliryhmää. Kuitenkin Ra ja Rb edullisesti molemmat ovat vetyatomeja. Edullisia ·’ kaavojen -CO.NRaRb, -OCO.NRaRb ja -NRaRb mukaisia ryhmiä ovat amino-, metyyliamino-, etyyliamino-, propyyliamino-, butyyliamino-, dimetyyliamino-, dietyyliamino-, metyylietyyliamino-, metyylibutyyliamino-, karbamoyyli-, 30 metyylikarbamoyyli-, etyylikarbamoyyli-, propyylikarbamoyyli-, butyylikarba-moyyli-, dimetyylikarbamoyyli-, dietyylikarbamoyyli-, metyylietyylikarbamoyyli-, metyylibutyylikarbamoyyli-, karbamoyylioksi-, metyylikarboamoyylioksi-, etyyli- 12 101226 karbamoyylioksi-, propyylikarbamoyylioksi-, butyylikarbamoyylioksi-, dimetyyli-karbamoyylioksi-, dietyylikarbamoyylioksi-, metyylietyylikarbamoyylioksi- ja metyylibutyylikarbamoyylioksiryhmät, joista amino-, karbamoyyli-ja karbamoyyliok-siryhmiä pidetään edullisina.

5

Kun R8 ja R9 yhdessä on kaavan -(CH2)s-W-(CH2)t- mukainen ryhmä, W on yksinkertainen hiili-hiili-sidos, happiatomi, rikkiatomi tai kaavan >NR22 mukainen ryhmä, jossa R22 on vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia ja s ja t ovat riippumattomasti toisistaan 1, 2 tai 3. Tässä tapauksessa R8 ja R9 yhdessä 10 typpiatomin kanssa, johon ne ovat kiinnittyneet, muodostavat typpeä sisältävän hete- __ rosyklisen ryhmän. Edullisesti, kun W on yksinkertainen hiili-hiilisidos, (s+t) on kokonaisluku 3-6, edullisemmin 3-5 ja kaikkein edullisimmin 4 tai 5. Kun W on happiatomi, rikkiatomi tai kaavan >NR22 mukainen ryhmä, (s+t) on edullisesti kokonaisluku 2-5, edullisemmin 2-4 ja kaikkein edullisimmin 3 tai 4. Näissä edul-15 lisissä rajoissa s ja t ovat edullisesti kumpikin 1 tai 2. Esimerkkejä sellaisista kaavan -(CH2)s-W-(CH2)t- mukaisista ryhmistä ovat: -(CH2)4-; -(CH2)5-; 20 -(CH2-0-(CH2)2-; -(CH2)2-0-(CH2)2-; -(CH2)-S-(CH2)2-; -(CH2)2-S-(CH2)2-; -(CH2)-NH-(CH2)r; 25 -(CH2)2-NH-(CH2)2-; , -(CH2)-NMe-(CH2)2-; ja -(CH2)2-NMe-(CH2)2-; missä Me on metyyliryhmä.

Kun R17 ja R18 yhdessä on kaavan -(CH2)q-Y-(CH2)r- mukainen ryhmä, Y on yksinkertainen hiili-hiili-sidos, happiatomi, rikkiatomi tai kaavan >NR23 mukainen 30 13 101226 ryhmä, jossa R23 on vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia ja g ja r ovat riippumattomasti toisistaan 1, 2 tai 3. Tässä tapauksessa R17 ja R18 yhdessä typpiatomin kanssa, johon ne ovat kiinnittyneet, muodostavat typpeä sisältävän hete-rosyklisen ryhmän. Edullisesti, kun Y on yksinkertainen hiili-hiili-sidos, (g+r) on 5 kokonaisluku 3-6, edullisemmin 3-5 ja kaikkein edullisimmin 4 tai 5. Kun Y on happiatomi, rikkiatomi tai kaavan >NR23 mukainen ryhmä, (g+r) on edullisesti kokonaisluku 2-5, edullisemmin 2-4 ja kaikkein edullisimmin 3 tai 4. Näissä edullisissa rajoissa g ja r ovat edullisesti kumpikin 1 tai 2. Esimerkkejä sellaisista kaavan -(CH2)q-Y-(CH2)r- mukaisista ryhmistä ovat: 10 -(CH2)4-; -(CH2)5-; -(CH2)-0-(CH2)2-; -(CH2)2-0-(CH2)2-; 15 -(CH2)-S-(CH2)2-; -(CH2)2-S-(CH2)2-; -(CH2)-NH-(CH2)2-; -(CH2)2-NH-(CH2)2-; -(CH2)-NMe-(CH2)2-; ja 20 -(CH2)2-NMe-(CH2)2-; jossa Me on metyyliryhmä.

Kun substituentti (a), substituentti (b), substituentti (c) tai substituentti (d) on 25 alkoksiryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, tämä voi samoin olla suora tai haarautunut , ketjuryhmä, jossa on 1-6, edullisesti 1-4, hiiliatomia ja esimerkkejä ovat metoksi-, » * etoksi-, propoksi-, isopropoksi-, butoksi-, isobutoksi-, sek-butoksi-, t-butoksi-, pentyylioksi-, isopentyylioksi-, neopentyylioksi-, 2-metyylibutoksi-, 1-etyylipro-poksi-, 4-metyylipentyylioksi-, 3-metyylipentyylioksi-, 2-metyylipentyylioksi-, 1-30 metyylipentyylioksi-, 3,3-dimetyylibutoksi-, 2,2-dimetyylibutoksi-, 1,1-dimetyyli- butoksi-, 1,2-dimetyylibutoksi-, 1,3-dimetyylibutoksi-, 2,3-dimetyylibutoksi-, 2- « etyylibutoksi-, heksyylioksi ja isoheksyylioksiryhmät. Näistä pidämme edullisina 14 101226 niitä alkoksiryhmiä, joissa on 1-3 hiiliatomia, edullisesti metoksi-, etoksi- propoksi-isopropoksi- butoksi-, isobutoksi- ja t-butoksiaryhmiä, edullisempina metoksi-, etoksi- ja propoksiryhmiä ja kaikkein edullisimpina metoksiryhmää.

5 Kun substituentti (b) on alkanoyyliryhmä, tällä on 1-6 hiiliatomia, edullisesti 1-4 hiiliatomia ja esimerkkejä ovat formyyli-, asetyyli-, propionyyli-, butyryyli-, isobutyryyli-, pivaloyyli-, valeryyli-, isovaleryyli- ja heksanoyyliryhmät, joista asetyyli- ja propionyyliryhmät ovat edullisempia, asetyyliryhmän ollessa kaikkein edullisin.

10

Kun substituentti (b) on alkanyyliaminoryhmä, tällä on 1-6 hiiliatomia, edullisesti 1-4 hiiliatomia ja esimerkkejä ovat formyyliamino-, asetyyliamino-, propionyyliamino-, butyryyliamino-, isobutyryyliamino-, pivaloyyliamino-, valeryyliami-no-, isovale-ryyliamino- ja heksanoyyliaminoryhmät, joista asetyyliamino- ja propionyyliamino-15 ryhmät ovat edullisempia, asetyyliaminoryhmän ollessa kaikkein edullisin.

Kun substituentti (b) on alkanoyylioksiryhmä, tällä on 1-6 hiiliatomia, edullisesti 1-4 hiiliatomia ja esimerkkejä ovat formyylioksi-, asetyylioksi-, propionyylioksi-, butyryylioksi-, isobutyryylioksi-, pivaloyylioksi-, valeryylioksi-, isovaleryylioksi-20 ja heksanoyylioksiryhmät, joista asetyylioksi-ja propionyylioksiryhmät ovat edullisempia, asetyylioksiryhmän ollessa kaikkein edullisin.

Kun substituentti (b) on alkyylitioryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, tämä voi samoin olla suora tai haarautunut ketjuryhmä, jossa on 1-6, edullisesti 1-4, hiiliatomia ja 25 esimerkkejä ovat metyylitio-, etyylitio-, propyylitio-, isopropyylitio-, butyylitio-, isobutyylitio-, sek-butyylitio-, t-butyylitio-, pentyylitio-, isopentyylitio-, neopen-• tyylitio-, 2-metyylibutyylitio-, 1-etyylipropyylitio-, 4-metyylipentyylitio-, 3- metyylipentyylitio-, 2-metyylipentyylitio-, 1-metyylipentyylitio-, 3,3-dimetyylibu-tyylitio-, 2,2-dimetyylibutyylitio-, 1,1-dimetyylibutyylitio-, 1,2-dimetyylibutyyli-30 tio-, 1,3-dimetyylibutyylitio-, 2,3-dimetyylibutyylitio-, 2-etyylibutyylitio-, heksyy-litio- ja isoheksyylitioryhnät. Näistä pidämme edullisina niitä alkyylitioryhmiä, joissa on 1-4, edullisemmin 1-3, hiiliatomia, edullisesti metyylitio-, etyylitio-, propyyli- 15 101226 tio-, isopropyylitio-, butyylitio-, isobutyylitio- ja t-butyylitioiyhmät, edullisemmin metyylitio-, etyylitio- ja propyylitioryhmiät ja kaikkein edullisimmin metyylitioryh-mä.

5 Kun substituentti (b) on alkyylisulfinyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, tämä voi samoin olla suora tai haarautunut ketjuryhmä, jossa on 1-6, edullisesti 1-4, hiiliatomia ja esimerkkejä ovat metyylisulfinyyli-, etyylisulfinyyli-, propyylisulfinyyli-, isopropyylisulfinyyli-, butyylisulfinyyli-, isobutyylisulfmyyli-, sek-butyylisul-finyyli-, t-butyylisulfinyyli-, pentyylisulfinyyli-, isopentyylisulfinyyli-, neopentyy-10 lisulfinyyli-, 2-metyylibutyylisulfinyyli-, 1-etyylipropyylisulfinyyli-, 4-metyyli-pentyylisulfinyyli-, 3-metyylipentyylisulfinyyli-, 2-metyylipentyylisulfinyyli-, 1-metyylipentyylisulfinyyli-, 3,3-dimetyylibutyylisulfmyyli-, 2,2-dimetyylibutyylisul-finyyli-, 1,1-dimetyylibytyylisulfmyyli-, 1,2-dimetyylibutyy lisulfinyyli-, 1,3-dime-tyylibutyylisulfinyyli-, 2,3-dimetyylibutyylisulfinyyli-, 2-etyylibutyylisulfinyy li-, 15 heksyylisulfinyyli- ja isoheksyylisulfinyyliryhmät. Näistä pidämme edullisina niitä alkyylisulfinyyliryhmiä, joissa on 1-4, edullisemmin 1-3, hiiliatomia, edullisesti metyylisulfinyyli-, etyylisulfinyyli-, propyylisulfinyyli-, isopropyylisulfinyyli-, butyylisulfinyyli-, isobutyylisulfmyyli- ja t-butyylisulfinyyliryhmiä, edullisimpina metyylisulfinyyli-, etyylisulfinyyli-ja propyylisulfinyyliryhmiä ja kaikkein edullisim-20 pana metyylisulfinyyliryhmää.

Kun substituentti (b) on alkyylsulfonyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, tämä voi samoin olla suora tai haarautunut ketjuryhmä, jossa on 1-6, edullisesti 1-4, hiiliatomia ja esimerkkejä ovat metyylisulfonyyli-, etyylisulfonyyli-, propyylisulfonyyli-, 25 isopropyylisulfonyyli-, butyylisulfonyyli-, isobutyylisulfonyyli-, sek-butyylisul- fonyyli-, t-butyylisulfonyyli-, pentyylisulfonyyli-, isopentyylisulfonyyli-, neopen-tyylisulfonyyli-, 2-metyylibutyylisulfonyyli-, 1-etyylipropyylisulfonyyli-, 4-metyylipentyylisulfonyyli-,3-metoksipentyylisulfonyyli-,2-metyylipentyylisulfonyy-li-, 1-metyylipentyylisulfonyyli-, 3,3-dimetyylibutyylisulfonyyli-, 2,2-dimetyyli-30 butyylisulfonyyli-, 1,1-dimetyylibutyylisulfonyyli-, 1,2-dimetyylibutyylisulfonyyli-, 1,3-dimetyylibutyylisulfonyyli-, 2,3-dimetyylibutyylisulfonyyli-, 2-etyylibutyylisul-fonyyli-, heksyylisulfonyyli- ja isoheksyylisulfonyyliryhmät. Näistä pidämme 16 101226 edullisina niitä alkyylisulfonyyliryhmiä, joissa on 1-4, edullisemmin 1-3, hiiliatomia, edullisina metyylisulfonyyli-, etyylisulfonyyli-, propyylisulfonyyli-, isopropyy-lisulfonyyli, butyylisulfonyyli-, isobutyylisulfonyyli- ja t-butyylisulfonyyliryhmiä, edullisempina metyylisulfonyyli-, etyylisulfonyyli- ja propyylisulfonyyliryhmiä ja 5 kaikkein edullisimpana metyylisulfonyyliryhmää.

Kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä on karboksiryhmä karbapeneemin 3-asemassa ja yhdisteet voivat myös sisältää yhden tai useamman lisäkarboksiryhmän riippuen ryhmien R3, R4 ja R7, substituentin (a), substituentin (b) ja substituentin (d) merki-10 tyksestä. Sellaiset karboksiryhmät voivat tietenkin muodostaa suoloja ja estereitä ja sellaiset suolat ja esterit muodostavat myös osan tätä keksintöä. Näiden suolojen ja estereiden laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellyksellä että kun niitä käytetään terapeuttisesti, ne ovat farmaseuttisesti hyväksyttäviä. Kun ne on tarkoitettu ei-terapeuttisiin käyttöihin, esimerkiksi väliaineiksi muiden ja mahdollisesti aktiivisim-13 pien yhdisteiden valmistukseen, tämäkään rajoitus ei päde. Estereiden tapauksessa on yleensä edullinen esterijäännös, joka kykenee hydrolyysiin nisäkkään kehossa, mikä on hyvin tunnettua alalla. Mitä vain esterijäännöstä voidaan kuitenkin käyttää sillä edellytyksellä, että kuten selitettiin edellä, jos yhdiste on tarkoitettu terapeuttiseen käyttöön, se on farmaseuttisesti hyväksyttävä. Esimerkkejä sopivista esteriryhmistä 20 ovat: C i-C20-alkyy liry hmät, edullisemmin Cj-Cg-alkyyliryhmät, kuten ne, joista on esimerkkejä ryhmän R1 jne. yhteydessä ja korkeammat alkyyliryhmät, kuten alalla hyvin tunnetaan, sellaiset kuin heptyyli-, oktyyli-, nonyyli-, dekyyli-, dodekyyli-, 25 tridekyyli-, pentadekyyli-, oktadekyyli-, nonadekyyli- ja ikosyyliryhmät, mutta . kaikkein edullisimmin metyyli-, etyyli- ja t-butyyliryhmät; C3C7-sykloalkyyliryhmät, esimerkiksi, kuten on kuvattu tässä ryhmän R6 jne. yhteydessä; aralkyyliryhmät, joissa alkyyliosa on C1-C3-alkyyliryhmä ja aryyliosa on C6-Cj4 karboksyylinen aromaattinen ryhnä, joka voi olla substituoitu tai substituoimaton ja, 30 17 101226 jos se on substituoitu, sillä on ainakin yksi substituentti, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluu substituentit (e), jotka on määritelty ja joista on esimerkkejä myöhemmin, vaikka substituoimattomia ryhmiä pidetään edullisina, esimerkkejä sellaisista aralkyyliryhmistä ovat bentsyyli-, fenetyyli-, 1-fenyylietyyli-, 3-fenyylipropyyli-, 5 2-fenyylipropyyli-, 1-naftyylimetyyli-, 2-nafityylimetyyli-, 2-(l-naftyyli)etyyli-, 2-(2-naftyyli)etyyli-, bentshydryyli- (s.o. difenyylimetyyli), trifenyylimetyyli-, bis(o-nitrofenyylijmetyyli-, 9-antryylimetyyli-, 2,4,6-trimetyylibentsyyli-, 4-bromi-bentsyyli-, 2-nitrobentsyyli-, 4-nitrobentsyyli-, 3-nitrobentsyyli-4-metoksibentsyyli-ja piperonyyliryhmät; 10 alkenyyliryhmät, kuten ne, jotka on määritelty ja joista on esimerkkejä ryhmän R1 jne. yhteydessä, mutta jotka voivat olla substituoituja tai substituoimattomia ja jos ne ovat substituoituja, niillä on ainakin yksi substituentti valittu ryhmästä, johon kuuluu substituentit (a), jotka on määritelty edellä; esimerkkejä substituoimattomista 15 ryhmistä on annettu edellä ryhmän R1 jne. yhteydessä ja edullisia ryhmiä ovat allyyli-, 2-klooriallyyli- ja 2-metyyliallyyliryhmät; halogenisoidut Cj-C6-, edullisesti CrC4, alkyyliryhmät, joissa alkyyliosa on, kuten on määritelty ja joista on esimerkkejä edellä alkyyliryhmien yhteydessä ja jotka 20 voivat olla ryhnä R1 jne., ja halogeeniatomi on kloori, fluori, bromi tai jodi, kuten w 2,2,2-trikloorietyyli-, 2-haloetyyli- (esim. kloorietyyli-, 2-fluorietyyli-, 2-bro- mietyyli- tai 2-jodietyyli-) 2,2-dibromietyyli- ja 2,2,2-tribromietyyliryhmä; substituoidut alkyyliryhmät, missä alkyyliosa on määritelty ja siitä on esimerkkejä 25 alkyyliryhmän yhteydessä, joka voi olla ryhmä R1 jne., ja silyyliryhmällä on jopa 3 substituenttia, jotka on valittu ryhmästä, johon kuuluu Cj-Cg-alkyyliryhmät ja • fenyyliryhmät, jotka ovat substituoimattomia tai joilla on ainakin yksi substituentti, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluu substituentit (e), jotka on määritelty ja joista on esimerkkejä myöhemmin, esimerkiksi 2-trimetyylisilyyletyyliryhmä; 30 18 101226 fenyyliryhmät, joissa fenyyliryhmä on substituoimaton tai substituoitu, edullisesti ainakin yhdellä Cj-C4-alkyyli- tai asyyliaminoryhmällä, esimerkiksi fenyyli-, tolyyli-ja bentsamidofenyyliryhmillä; 5 fenasyyliryhmät, jotka voivat olla substituoimattomia tai joilla on ainakin yksi substituentti, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluu substituentit (e), jotka on määritelty ja joista on esimerkkejä myöhemmin, esimerkiksi itse fenasyyliryhmä tai E-bromifenasyyliryhmä; 10 sykliset ja asykliset terpenyyliryhmät esimerkiksi geranyyli-, neryyli-, linalyyli-, __ fytyyli-, mentyyli- (erityisesti m- ja E-mentyyli), tujyyli-, kaiyyli-, pinanyyli-, bomyyli-, notkaryyli-, norpinanyyli-, norbomyyli-, mentenyyli-, kamfenyyli-ja norbomenyyliryhmät; 15 alkoksimetyyliryhmät, joissa alkoksiosa on Cj-Cg, edullisesti Cj-C4, ja voi itse olla substituoitu yksittäisellä substituoimattomalla alkoksiryhmällä, kuten metoksime-tyyli-, etoksimetyyli-, propoksimetyyli-, isopropoksimetyyli-, butoksimetyyli- ja metoksietoksimetyy liryhmällä; 20 alifaattiset asyylioksialkyyliryhmät, joissa asyyliryhmä on edullisesti alkanoyyliryhmä ja on edullisemmin C2-C6-alkanoyyliryhmä ja alkyyliosa on C2-C6-, edullisesti C2- — C4-, alkyyliryhmä, kuten asetoksimetyyli-, propionyylioksimetyyli-, butyryylioksi-metyyli-, isobutyryylioksimetyyli-, pivaloyylioksimetyyli-, 1-pivaloyylioksietyyli-, 1-asetoksietyyli-, 1-isobutyryylioksietyyli-, 1-pivaloyylioksipropyyli-, 2-metyyli-l- 25 pivaloyylioksipropyyli-, 2-pivaloyylioksipropyyli-, 1-isobutyryylioksietyyli-, 1-isobutyryylioksipropyyli-, 1-asetoksiproyyli-, l-asetoksi-2-metyylipropyyli-, 1- * • propionyylioksietyyli-, 1-propionyylioksipropyyli-, 1-asetoksipropyyli- ja 1- butyiyylioksietyyliryhmät; 30 sykloalkyylisubstituoidut alifaattiset asyylioksialkyyliryhmät, joissa asyyliryhmä on edullisesti alkanoyyliryhmä ja edullisemmin C2-Cg-alkanoyyliryhmä, sykloalkyy-lisubstituentti on C3-C7 ja alkyyliosa on Cj-Cg-alkyyliryhmä, edullisesti CrC4- 19 101226 alkyyliryhmä, kuten (sykloheksyyliasetoksi)metyyli-, l-(sykloheksyyliasetoksi)etyy-li-, 1 -(sykloheksyyliasetoksi)propyyli-, 2-metyyli-1 -(sykloheksyyliasetoksi)propyy-li-, (syklopentyyliasetoksi)metyyli-, l-(syklopentyyliasetoksi)etyyli-, (l-(syklopen-tyyliasetoksi)propyyli- ja 2-metyyli-l-(syklopentyyliasetoksi)propyyliryhmät; 5 alkoksikarbonyylioksialkyyliryhmät,erityisestil-(alkoksikarbonyylioksi)etyyliryhmät, joissa alkoksiosa on Cj-Cjq, edullisesti CrC6 ja edullisemmin Cj-C4 ja alkyyliosa on CrC6, edullisesti CrC4, kuten 1-metoksikarbonyylioksietyyli-, 1-etoksikar-bonyylioksietyyli-, 1 -propoksikarbonyylioksietyyli-, 1 -isopropoksikarbonyyliok- 10 sietyyli-, 1-butoksikarbonyylioksietyyli-, 1-isobutoksikarbonyylioksietyyli-, 1-sek-butoksikarbonyy lioksietyy li-, 1 -t-butoksikarbonyy lioksietyy li-, 1 -(1 -etyy lipropoksi-karbonyylioksi)etyyli- ja l-(l,l-dipropyylikarbonyylioksi)etyyliryhmät, ja muut alkoksikarbonyylialkyyliryhmät, joissa sekä alkoksi- että alkyyliryhmät ovat Cj-C6, edullisesti Cj-C4, kuten 2-metyyli-l-(isopropoksikarbonyylioksi)propyyli-, 2-15 (isopropoksikarbonyylioksi)propyyli-, isopropoksikarbonyylioksimetyyli-, 1-butoksi- karbonyylioksimetyyli-, metoksikarbonyylioksimetyyli- ja etoksikarbonyylioksime-tyyliryhmät; sykloalkyylikarbonyylioksialkyyli- ja sykloalkyylioksikarbonyylioksialkyyliryhmät, 20 joissa sykloalkyyliryhmä on C3-C10, edullisesti C3-C7, on mono- tai polysyklinen ja ^ on valinnaisesti substituoitu ainakin yhdellä (ja edullisesti ainoastaan yhdellä) CpC4- alkyyliryhmällä (esim. valittu niistä alkyyliryhmistä, joista on esimerkkejä edellä) ja alkyyliryhmä on CrC6-, edullisemmin CrC4, alkyyliryhmä (esim. valittu niistä alkyyliryhmistä, joista on esimerkkejä edellä) ja kaikkein edullisimmin metyyli, 25 etyyli tai propyyli, esimerkiksi 1-metyylisykloheksyylikarbonyylioksimetyyli-, 1- . metyylisykloheksyylioksikarbonyylioksimetyyli-syklopentyylioksikarbonyylioksime- tyyli-, syklopentyylikarbonyylioksimetyyli-, 1-sykloheksyylioksikarbonyylioksietyy-li-, 1 -sykloheksyylikarbonyylioksietyyli-, 1 -syklopentyylioksikarbonyylioksietyyli-, 1 -syklopentyylikarbonyylioksietyyli-, 1 -sykloheptyylioksikarbonyylioksietyyli-, 1 -30 sykloheptyylikarbonyylioksietyyli-, 1-metyylisyklopentyylikarbonyylioksimetyyli-, 1-metyylisyklopentyylioksikarbonyylioksimetyyli-, 2-metyy li-l-(l-metyylisyk- loheksyylikarbonyylioksi)propyyli-, 1 -(1 -metyylisykloheksyylikarbonyylioksi)pro- 20 101226 pyyli-, 2-( 1 -metyylisykloheksyylikarbonyylioksi)propyyli-, 1 -(sykloheksyylikar- bonyylioksi)propyyli-, 2-(sykloheksyylikarbonyylioksi)propyy-li-, 2-metyy li-1 -(1 -metyy lisy klopentyy liikarbony y lioksi)propyy li- ,1-(1 -metyy 1 isyklo-pentyylikarbonyylioksi)propyyli-, 2-( 1 -metyy lisyklopentyylikarbonyylioksi)propyy-5 li-, l-(syklopentyylioksikarbonyylioksi)propyyli-, 2-(syklopentyylikarbonyylioksi)p-ropyyli-, 1 -(1 -metyy lisyklopentyylikarbonyy lioksi)etyy li-, 1 -(1 -metyy lisyklopen- tyylikarbonyylioksi)propyyli-, adamantyylioksikarbonyylioksimetyyli-, adamantyy-likarbonyylioksimetyyli-, 1-adamantyylioksikarbonyylioksietyyli- ja 1-adamantyyli-karbonyylioksietyyliryhmät; 10 sykloalkyylialkoksikarbonyylioksialkyyliryhmät, joiden alkoksiosassa on yksittäinen sykloalkyylisubstituentti, yksinäisen sykloalkyylisubstituentin ollessa C3-Cj0, edullisesti C3-C7, ja mono- tai polysyIkinen, esimerkiksi syklopropyylimetoksikar-bonyylioksimetyyli-, syklobutyylimetoksikarbonyylioksimetyyli-, syklopentyy-15 limetoksikarbonyylioksimetyyli-, sykloheksyylimetoksikarbonyylioksimetyyli-, 1-(syklopropyylimetoksikarbonyylioksi)etyyli-, l-(syklobutyylimetoksikarbonyyliok-si)etyyli-, l-(syklopentyylimetoksikarbonyylioksi)etyyli- ja l-(sykloheksyylimetok-sikarbonyylioksi)etyyliryhmät; 20 terpenyylikarbonyylioksialkyyli-ja terpenyylioksikarbonyylioksialkyyliryhmät, joissa terpenyyliryhmä on, kuten on esitetty esimerkkejä edellä, ja edullisesti syklinen — terpenyyliryhmä, esimerkiksi l-(mentyylioksikarbonyylioksi)etyyli-, l-(mentyylikar-bonyylioksijetyyli-, mentyylioksikarbonyylioksimetyyli-, mentyylikarbonyylioksi-metyyli-, l-(3-pinanyylioksikarbonyylioksi)etyyli-, l-(3-pinanyylikarbonyylioksi)e-25 tyyli-, 3-pinanyylioksikarbonyylioksimetyyli- ja 3-pinanyylikarbonyylioksimetyyli-ryhmät; 5-alkyyli tai 5-fenyyli [joka voi olla substituoitu ainakin yhdellä substituentilla, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluu substituentit (e)] (2-okso-l,3-dioksolen-4-yyli)al-30 kyyliryhmät, joissa jokainen alkyyliryhmä (joka voi olla sama tai erilainen) on Cr C6, edullisesti Cj-C4, esimerkiksi (5-metyyli-2-okso-l,3-dioksolen-4-yyli)metyyli-, (5-fenyyli-2-okso-l ,3-dioksolen-4-yyli)metyyli-(5-isopropyyli-2-okso-l ,3-dioksolen- 21 101226 4-yyli)metyyli-, (5-t-butyyli-2-okso-l,3-dioksolen-4-yyli)metyyli- ja l-(5-metyyli-2-okso-1,3-dioksolen-4-yyli)etyyliryhmät; ja muita ryhmiä, erityisesti ryhmiä, joita voidaan helposti poistaa in vivo, kuten 5 ftalidyyli-, indanyyli- ja 2-okso-4,5,6,7-tetrahydro-l,3-bentsodioksolen-4-yyliryh-miä.

Edellä olevista ryhmistä pidämme erityisen edullisina niitä ryhmiä, joita voidaan poistaa helposti in vivo ia kaikkein edullisimpina alifaattisia asyylioksialkyyliryhmiä, 10 alkoksikarbonyylioksialkyyliryhmiä, sykloalkyylikarbonyylioksialkyyliryhmiä, ftalidyyliryhmiä ja (5-substituoituja 2-okso-l,3-dioksolen-4-yyli)metyyliryhmiä.

Karboksiryhmien tapauksessa, joita ovat ryhmät R3, R4, R7, substituentti (a), substituentti (b) ja substituentti (d), edullisia esteriryhmiä ovat alkyyliryhmät, esim. 15 karboksiryhmän korvaa alkoksikarbonyyliryhmä, kuten metoksikarbonyyli-, etoksi-karbonyyli- tai propoksikarbonyyliryhmä.

Substituentit (e), joihin viitataan edellä, ovat: 20 Ci-C4-alkyyliryhmiä, kuten ne, joista on esimerkkejä edellä ryhmien Ra ja Rb . . yhteydessä;

Cj-C4-alkoksiryhmiä, kuten metoksi-, etoksi-, propoksi-, isopropoksi-, butoksi-, isobutoksi-, sek-butoksi- ja t-butoksiryhmät; 25 . Cj-C4-haloalkyyliryhmiä, joissa alkyyliosa on kuten on esimerkkejä edellä ryhmien

Ra ja Rb yhteydessä ja halogeeniatomi on kuten on esimerkkejä edellä ryhmän R3 jne. yhteydessä, kuten kloorimetyyli-, fluorimetyyli-, bromimetyyli-, jodimetyyli-, 2-kloorietyyli-, 2-fluorietyyli-, 2-bromietyyli-, 2-jodietyyli-, trifluorimetyyli-, 30 2,2,2-trifluorietyyli-, 2,2,2-trikloorietyyli-, 3-fluoripropyyli-ja 4-klooributyyliryh-mät; 22 101226

Cj-C3-alkyleenidioksiryhmiä, kuten metyleenidioksi-, etyleenidioksi-, propyleeni-dioksi- ja trimetyleenidioksiryhmät; halogeeniatomit, kuten ne, joista on esimerkkejä edellä ryhmän R3 jne. yhteydessä; 5 syanoryhmät ja nitroryhmät.

Siten esillä olevan keksinnön edullisia yhdisteitä ovat ne kaavan (Ia) mukaiset yhdisteet: 10

COA

OH CH3 /

A A^AX

15 h3c^ ^p ^ J-N-1 COOR5 fla) 20 missä R1 ja A on määritelty kuten edellä ja R5 on vetyatomi tai esteriryhmä, — edullisesti esteriryhmä, joka kykenee hydrolyysiin in vivo ja edullisemmin alifaatti-nen asyylioksialkyyliryhmä, alkoksikarbonyylioksialkyyliryhmä, sykloalkyylikar-bonyylioksialkyyliryhmä, ftalidyyliryhmä tai (5-substituoitu 2-okso-l ,3-dioksolen-4-25 yyli)metyyliryhmä;

Erityisesti pidämme edullisena, että ryhmä R5 olisi vetyatomi, (5-substituoitu 2-okso- l,3-dioksolen-4-yyli)metyyliryhmä, 1-metyylisykloheksyylikarbonyylioksime-tyyliryhmä, 1-isopropoksikarbonyylioksietyyliryhmä tai 1-sykloheksyylikarbonyy-30 lioksietyyliryhmä.

23 101226

Esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet voivat myös muodostaa suoloja emästen kanssa. Esimerkkejä sellaisista suoloista ovat: alkalimetallisuolat, kuten natrium-, kalium- tai litiumsuolat; maa-alkalimetallisuolat, kuten barium- tai kalsiumsuolat; muun metallin suolat, kuten magnesium- tai alumiinisuolat; orgaaniset emäksiset 5 suolat, kuten trietyyliamiini-, di-isopropyyliamiini-, sykloheksyyliamiini- tai disykloheksyyliamiinisuolat; ja emäksisen aminohapon suolat, kuten lysiinin tai arginiinin. Myös, kun esillä olevan keksinnön mukainen yhdiste sisältää emäsryhmän molekyylissään, se voi muodostaa happoadditiosuoloja. Esimerkkejä sellaisista happoadditiosuoloista ovat: mineraalihappojen suolat, erityisesti halogeenivetyhapot 10 (kuten fluorivetyhappo, bromivety happo, jodivetyhappo tai kloorivety happo), typpihappo, hiilihappo, rikkihappo tai fosforihappo; alempien alkyylisulfonihap-pojen suolat, kuten metallinsulfonihappo, trifluorimetaanisulfonihappo tai etaanisul-fonihappo; aryylisulfonihappojen suolat, kuten bentseenisulfonihappo tai p-tolu-eenisulfonihappo; orgaanisten karboksyylihappojen suolat, kuten etikkahappo, 15 fumaarihappo, viinihappo, oksaalihappo, maleiinihappo, omenahappo, sukkiinihappo, bentsoehappo, mantelihappo, askorbiinihappo, maitohappo, glukonihappo tai sitruunahappo ja aminohappojen suolat, kuten glutamiiinihappo tai aspartiinihappo.

Edullisiä ryhmiä ja atomeja, joita ryhmä R1 voi olla, ovat: vetyatomi; alkyyliryhmät, 20 joissa on 1-3 hiiliatomia (kuten metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmät); substituoidut . alkyyliryhmät, joissa on 1-3 hiiliatomia, joissa substituentti on valittu ryhmästä, johon kuuluu substituentit (a’), jokta on määritelty myöhemmin; alkenyyliryhmät, joissa on 3 tai 4 hiiliatomia (kuten allyyliryhmä); alkynyyliryhmät, joissa on 3 tai 4 hiiliatomia (kuten propargyyliryhmä); ja formimidoyyli- ja asetimidoyyliryhmät.

25 . Substituentit (a’) on valittu ryhmästä, johon kuuluu hydroksiryhmät, karboksiryhmät, ' karbamoyyliryhmät, karbamoyylioksiryhmät, syanoryhmät, halogeeniatomit (kuten fluoriatomit), alkoksiryhmät, joissa on 1-3 hiiliatomia (kuten metoksiryhmät tai etok-siryhmät), aminoryhmät ja mono-ja dialkyyliaminoryhmät, jossa alkyyliryhmässä tai 30 jokaisessa alkyyliryhmässä on 1-3 hiiliatomia (kuten metyyliaminoryhmät tai dimetyyliaminoryhmät).

24 101226

Kaavojen (I) ja (Ia) mukaisissa yhdisteissä ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävissä suoloissa ja estereissä, missä A on kaavan (AI) mukainen ryhmä, pidämme edullisena, että n olisi 2 tai 3.

5 Myös tässä tapauksessa ryhmä R2 on edullisesti: vetyatomi; alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä; 10 substituoitu alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, joissa substituentti on valittu ryhmästä, johon kuuluu substituentit (b’), jotka määritellään myöhemmin, kuten substituoitu metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä; 15 alkenyyliryhmä, jossa on 3 tai 4 hiiliatomia (kuten allyyliryhmä); alkynyyliryhmä, jossa on 3 tai 4 hiiliatomia (kuten propargyyliryhmä); tai kaavan -C(=NH)R6 mukainen ryhmä, 20 jossa R6 on — « vetyatomi, 25 substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyli- tai etyyli-, ryhmä, substituoitu alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia ja joka on substituoitu ainakin yhdellä substituentilla, joka on valittu rytinästä, johon kuuluu halogeeniatomit, 30 alkoksiryhmät, joissa on 1-3 hiiliatomia ja sykloalkyyliryhmät, joissa on 3-6 hiiliatomia, kuten kloorimetyyliryhmä, metoksimetyyliryhmä tai syklopropyylimetyyliryhmä tai 25 101226 sykloalkyyliryhmä, jossa on 3-6 rengashiiliatomia, kuten syklopropyyliryhmä. Substituentit (b’), kuten edelä mainittiin, ovat: 5 hydroksiryhmiä; karboksiryhmiä; karbamoyy liryhmiä; 10 karbamoyylioksiryhmiä; syanoryhmiä; 15 sulfamoyy liryhmiä; ureidoryhmiä; sulforyhmiä; 20 alkoksiryhmiä, joissa on 1-3 hiiliatomia, kuten metoksiryhmä; alkoksikarbonyyliryhmiä, joissa on 2-4 hiiliatomia, kuten metoksikarbonyyliryhmä; 25 alkanoyyliryhmiä, joissa on 2-4 hiiliatomia, kuten asetyyliryhmä; alkanoyyliaminoryhmiä, joissa on 2-4 hiiliatomia, kuten asetamidoryhmä; alkanoyylioksiryhmiä, joissa on 2-4 hiiliatomia, kuten asetoksiryhmä; aminoryhmiä; 30 26 101226 mono- ja dialkyyliaminoryhmiä, jossa alkyyliryhmässä tai jokaisessa sellaisessa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyliamino- ja dimetyyliaminoryhmät; alkyylitioryhmiä, joissa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyylitioryhmä; 5 alkyylisulfinyyliryhmiä, joissa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyylisulfinyyliryhmä; alkyylisulfonyyliryhmiä, joissa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyylisulfonyyliryhmä; 10 mono- ja dialkyylikarbamoyyliiyhmiä, jossa alkyyliosassa tai jokaisessa sellaisessa on 2-3 hiiliatomia, kuten metyylikarbamoyyli- ja dimetyylikarbamoyyliryhmät; ja mono- ja dialkyylikarbamoyylioksiryhmiä, joiden alkyyliosassa tai jokaisessa sellaisessa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyylikarbamoyylioksi- ja dimetyylikarba-15 moyylioksiryhmiä.

Lisäksi, kun A on kaavan (AI) mukainen ryhmä, R3 ja R4, jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, on vetyatomi, alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia (kuten metyyli- tai etyyliryhmä), hydroksiryhmä, karboksiryhmä, karbamoyyliryhmä tai 20 substituoitu alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia ja joka on substituoitu ainakin yhdellä substituentilla, joka on valittu ryhmästä, johon kuuluu hydroksiryhmät, t alkoksiryhmät, joissa on 1-3 hiiliatomia, aminoryhmät, karbamoyyliryhmät ja halogeeniatomit (kuten hydroksimetyyli-, metoksimetyyli-, aminometyyli-, karbamo-yylimetyyli- ja fluorimetyyliryhmät).

25 .. Edullisempia kaavojen (I) ja (Ia) mukaisia yhdisteitä ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja ja estereitä, joissa A on kaavan (AI) mukainen ryhmä, ovat ne, joissa: 30 n on 2; 27 101226 R1 on vetyatomi, metyyliryhmä, fluorimetyyliryhmä, formimidoyyliryhmä tai asetimidoyyliryhmä; R2 on vetyatomi, 2-hydroksietyyliryhmä, 2-karbamoyylietyyliryhmä, 2-fluorimetyy-5 liryhmä, formimidoyyliryhmä tai asetimidoyyliryhmä; ja R3 ja R4 ovat samanlaisia tai erilaisia ja kumpikin on vetyatomi, metyyliryhmä, karbamoyyliryhmä, syanoryhmä, karboksiryhmä, hydroksimetyyliryhmä, fluorimetyyliryhmä tai aminometyy 1 iryhmä.

10

Vaihtoehtoinen edullinen kaavojen (I) ja (Ia) mukaisten yhdisteiden ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen ja estereiden joukko, jossa A on kaavan (AI) mukainen ryhmä, ovat ne, joissa: 15 n on 3; R1 on vetyatomi, metyyliryhmä, fluorimetyyliryhmä, formimidoyyliryhmä tai asetimidoyyliryhmä; 20 R2 on vetyatomi, metyyliryhmä, formimidoyyliryhmä, asetimidoyyliryhmä, karboksi-metyyliryhmä, karbamoyylimetyyliryhmä, 2-hydroksietyyliryhmä tai 2-fluorietyyli-ryhmä; ja R3 ja R4 ovat samanlaisia tai erilaisia ja kumpikin on vetyatomi, metyyliryhmä, 25 hydroksiryhmä, aminoryhmä, syanoryhmä, karboksiryhmä, karbamoyyliryhmä, karbamoyylioksiryhmä, hydroksimetyyliryhmä, fluorimetyyliryhmä tai aminome-tyyliryhmä.

Kaikkein edullisin kaavojen (I) ja (Ia) mukaisten yhdisteiden ja niiden farmaseutti-30 sesti hyväksyttävien suolojen ja estereiden joukko, joissa A on kaavan (AI) mukainen ryhmä, ovat ne, joissa: 28 101226 n on 2; R1 on vetyatomi, metyyliryhmä, formimidoyyliryhmä tai asetimidoyyliryhmä; 5 R2 on vetyatomi, 2-hydroksietyyliryhmä, karboksimetyyliryhmä, formimidoyyliryhmä tai asetimidoyyliryhmä; R3 on vetyatomi; ja 10 R4 on metyyliryhmä, karbamoyyliryhmä, syanoryhmä, hydroksimetyyliiyhmä, _ fluorimetyyliryhmä tai aminometyyliryhmä.

Vaihtoehtoinen kaikkein edullisin kaavojen (I) ja (Ia) mukaisten yhdisteiden ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen estereiden joukko, jossa A on kavan (AI) 15 mukainen ryhmät, ovat ne, joissa: n on 3; R1 on vetyatomi, metyyliryhmä, formimidoyyliryhmä tai asetimidoyyliryhmä; 20 R2 on formimidoyyliryhmä, asetimidoyyliryhmä, karboksimetyyliryhmä, 2-hydrok-sietyyliryhmä tai 2-fluorietyyliryhmä; ja R3 ja R4 ovat samanlaisia tai erilaisia ja kumpikin on vetyatomi, hydroksiryhmä, 25 aminoryhmä tai syanoryhmä.

·' Kun A kaavan (I) tai (Ia) mukaisessa yhdisteessä ja niiden farmaseuttisesti hyväk syttävissä suoloissa ja estereissä on kaavan (A2) mukainen ryhmä, d on 0 tai 1 ja m on 0, 1 tai 2, pidämme edullisena, että R7 olisi: vetyatomi; 30 29 101226 karboksiryhmä; karmaboyy liryhmä; 5 alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä; tai substituoitu alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, jossa substituentti on valittu ryhmästä, johon kuuluu hydroksiryhmät, alkoksiryhmät, joissa on 1-3 hiiliatomia (kuten metoksi- tai etoksiryhmät), karbamoyyliryhmät ja syanoryhmät, kuten 10 substituoitu metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä.

Kun A on kaavan (A2) mukainen ryhmä, pidämme myös edullisena, että R8 olisi: vetyatomi; 15 alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä; substituoitu alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten substituoitu metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä, jossa substituentti on valittu ryhmästä, johon kuuluu 20 hydroksiryhmät, alkoksiryhmät, joissa on 1-3 hiiliatomia (kuten metoksi- tai etoksi-. ryhmät), karbamoyyliiyhmät, karbamoyylioksiryhmät, karboksiryhmät, syanoryhmät, aminoryhmät ja halogeeniatomit (kuten fluori- ja klooriatomit); alkenyyliryhmä, jossa on 3 tai 4 hiiliatomia (kuten allyyliryhmä); tai 25 alkynyyliryhmä, jossa on 3 tai 4 hiiliatomia (kuten propargyyliryhmä).

Sellaisessa tapauksessa R9 on edullisesti: 30 vetyatomi; alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä; 30 101226 substituoitu alkyyliryhraä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten substituoitu metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä, jossa substituentti on valittu ryhmästä, johon kuuluu hydroksiryhmät, alkoksiryhmät, joissa on 1-3 hiiliatomia (kuten metoksi- tai etoksi-ryhmät), karbamoyyliryhmät, karbamoyylioksiryhmät, karboksiryhmät, syanoryhmät, 5 aminoryhmät ja halogeeniatomit (kuten fluori- ja klooriatomit); tai kaavan -C(=NH)R10 mukainen ryhmä, jossa R10 on: vetyatomi; 10 alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä; substituoitu alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten substituoitu metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä, jossa substituentti on valittu ryhmästä, johon kuuluu 15 alkoksiryhmät, joissa on 1-3 hiiliatomia (kuten metoksi- ja etoksiryhmät) ja halogeeniatomit (kuten fluori- ja klooriatomit); sykloalkyyliryhmä, jossa on 3-6 hiiliatomia, kuten syklopropyyliryhmä tai syklobu-tyyliryhmä; tai 20 . alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyli- tai etyyliryhmä, joka on — substituoitu yksittäisellä sykloalkyyliryhmällä, jossa on 3-6 hiiliatomia, kuten syklopropyylimetyyliryhmä, syklopropyylietyyliryhmä tai syklobutyylimetyyli-ryhmä.

25

Vaihtoehtoisesti ryhmät R8 ja R9 voivat yhdessä olla kaavan -(CH2)s-W-(CH2)t-mukainen ryhmä, jossa W on yksinkertainen hiili-hiili-sidos, happiatomi, rikkiatomi tai kaavan >NR22 mukainen ryhmä, jossa R22 on vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia (kuten metyyli- tai etyyliryhmä), s on 1, 2 tai 3 ja t on 2.

30 31 101226

Erityisen edullinen esillä olevan keksinnön mukaisen yhdisteen joukko, jossa A on kaavan (A2) mukainen ryhmä, ovat ne kaavojen (I) tai (Ia) mukaiset yhdisteet ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ja esterit, joissa: 5 d on 0 tai 1; m on 0, 1 tai 2; R1 on vetyatomi, metyyliryhmä, fluorimetyyliryhmä, formimidoyyliryhmä tai 10 asetimidoyyliryhmä; R7 on vetyatomi, alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia (kuten metyyliryhmä tai etyyliryhmä), hydroksiryhmä, aminoryhmä, syanoryhmä, halogeeniatomi (kuten fluoriatomi tai klooriatomi), karboksiryhmä, karbamoyyliryhmä tai hydroksime-15 tyyliryhmä; R8 on vetyatomi, alkyyliryhmä jossa on 1-3 hiiliatomia (kuten metyyliryhmä tai etyyliryhmä),fluorimetyyliryhmä,karbamoyylimetyyliryhmä,karboksimetyyliryhmä, alkenyyliryhmä, jossa on 3 tai 4 hiiliatomia (kuten allyyliryhmä), alkynyyliryhmä, 20 jossa on 3 tai 4 hiiliatomia (kuten propargyyliryhmä), 2-haloetyyliryhmä (kuten 2-. fluorietyyliryhmä), 2-hydroksietyyliryhmä, 2-alkoksietyyliryhmä, jossa alkoksiosas- sa on 1-3 hiiliatomia (kuten 2-metoksietyyliryhmä) tai 2-aminoetyyliryhmä; R9 on vetyatomi, alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia (kuten metyyliryhmä tai 25 etyyliryhmä), fluorimetyyliryhmä, karbamoyylimetyyliryhmä, karboksimetyyliryh-mä, formimidoyyliryhmä, asetimidoyyliryhmä, 2-haloetyyliryhmä (kuten 2-fluo-rietyyliryhmä), 2-hydroksietyyliryhmä, 2-alkoksietyyliryhmä, jossa alkoksiosassa on 1-3 hiiliatomia (kuten 2-metoksietyyliryhmä) tai 2-aminoetyyliryhmä; R8 ja R9 yhdessä ovat seuraavien kaavojen mukainen ryhmä 30 tai 32 101226 -(CH2)4-; -(CH2)5-; -(CH2)20(CH2)2-; -(CH2)2S(CH2)2-; 5 -(CH2)2NH(CH2)2- tai -(CH2)2NCH3(CH2)2-.

Kaikkein edullisin esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden joukko, jossa A on kaavan (A2) mukainen ryhmä, ovat ne kaavojen (19 ja (Ia) mukaiset yhdisteet ja 10 niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ja esterit, joissa: __ d on 0; m on 1 tai 2; 15 R1 on vetyatomi, metyyliryhmä, fluorimetyyliryhmä, formimidoyyliryhmä tai asetimidoyyliryhmä; R7 on vetyatomi; 20 R8 on vetyatomi, alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia (kuten metyyliryhmä tai -etyyliryhmä), karbamoyylimetyyliryhmä, karboksimetyyliryhmä, 2-fluorietyyliryhmä tai 2-hydroksietyyliryhmä; ja 25 R9 on vetyatomi, alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia (kuten metyyliryhmä tai etyyliryhmä), formimidoyyliryhmä, asetimidoyyliryhmä tai 2-fluorietyyliryhmä.

Niiden esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden tapauksessa, joissa A on kaavan (A3) mukainen ryhmä, £ on 0, 1 tai 2. R7 on edullisesti vetyatomi tai 30 alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä.

33 101226 R11 on edullisesti vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä.

R12 on myös edullisesti: 5 vetyatomi; alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä; 10 substituoitu alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten substituoitu metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä, jossa substituentti on valittu ryhmästä, johon kuuluu hydroksiryhmät, alkoksiryhmät, joissa on 1-3 hiiliatomia (kuten metoksi- tai etoksi-ryhmät), karbamoyyliryhmät, karbamoyylioksiryhmät, karboksiryhmät, syanoryhmät, aminoryhmät ja halogeeniatomit (kuten fluori- ja klooriatomit); 15 alkenyyliryhmä, jossa on 3 tai 4 hiiliatomia (kuten allyyliryhmä); alkynyyliryhmä, jossa on 3 tai 4 hiiliatomia (kuten propargyyliryhmä) tai; 20 kaavan -C(=NH)R13 mukainen ryhmä, jossa R13 on: vetyatomi; alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä; 25 substituoitu alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten substituoitu metyyli-, ' etyyli- tai propyyliryhmä, jossa substituentti on valittu ryhmästä, johon kuuluu alkoksiryhmät, joissa on 1-3 hiiliatomia (kuten metoksi- tai etoksiryhmät) ja halogeeniatomit (kuten fluori- ja klooriatomit); sykloalkyyliryhmä, jossa on 3-6 hiiliatomia, kuten syklopropyyliryhmä tai syklobu-tyyliryhmä; tai 30 34 101226 alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyli- tai etyyliiyhmä, joka on substituoitu yksittäisellä sykloalkyyliryhmällä, jossa on 3-6 hiiliatomia, kuten syklopropyylimetyyliryhmä, syklopropyylietyyliryhmä tai syklobutyylimetyyli-ryhmä.

5

Erityisen edullinen esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden joukko, jossa A on kaavan (A3) mukainen ryhmä, ovat ne kaavojen (I) ja (Ia) mukaiset yhdisteet ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ja esterit, joissa: 10 £ on 0, 1 tai 2; _ R1 on vetyatomi, metyyliryhmä, fluorimetyyliryhmä, formimidoyyliryhmä tai asetimidoyy liryhmä; 15 R7 on vetyatomi; R11 on vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyliryhmä tai etyyliryhmä; ja 20 R12 on vetyatomi, alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia (kuten metyyliryhmä tai etyyliryhmä), fluorimetyyliryhmä, karbamoyylimetyyliryhmä, karboksimetyyliryhmä, alkenyyliryhmä, jossa on 3 tai 4 hiiliatomia (kuten allyyliryhmä), alkynyyliryhmä, jossa on 3 tai 4 hiiliatomia (kuten propargyyliryhmä), formimidoyyliryhmä, asetimi-doyyliryhmä, 2-haloetyyliryhmä (kuten 2-fluorietyyliryhmä), 2-hydroksietyyliryhmä, 25 2-alkoksietyyliryhmä, jossa alkoksiosassa on 1-3 hiiliatomia (kuten 2-metoksietyyli- ryhmä) tai 2-aminoetyyliryhmä.

Kaikkein edullisin esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden joukko, joissa A on kaavan (A3) mukainen ryhmä, ovat ne kaavojen (I) ja (Ia) mukaiset yhdisteet ja 30 niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ja esterit, joissa; £ on 1 tai 2; „ 101226 R1 on vetyatomi, metyyliryhmä, fluorimetyyliryhmä, formimidoyyliryhmä tai asetimidoyyliryhmä; R7 on vetyatomi; 5 R11 on vetyatomi tai metyyliryhmä; ja R12 on vetyatomi, alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia (kuten metyyliryhmä tai etyyliryhmä),fluorimetyyliryhmä,karbamoyylimetyyliryhmä.karboksimetyyliryhmä, 10 formimidoyyliryhmä, asetimidoyyliryhmä, 2-fluorietyyliryhmä tai 2-hydroksietyyli-ryhmä.

Niiden esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden tapauksessa, joissa A on kaavan (A4) mukainen ryhmä, f on 1 tai 2, R14 ja R15, jotka voivat olla samanlaisia 15 tai erilaisia, kumpikin on edullisesti vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä.

Lisäksi pidämme edullisena, että R16 olisi: 20 vetyatomi; alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä; substituoitu alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten substituoitu metyyli-, 25 etyyli- tai propyyliryhmä, jossa substituentti on valittu ryhmästä, johon kuuluu alkoksiryhmät, joissa on 1-3 hiiliatomia (kuten metoksi- tai etoksiryhmät) ja halo-* geeniatomit (kuten fluori- ja klooriatomit); sykloalkyyliryhmä, jossa on 3-6 hiiliatomia, kuten syklopropyyliryhmä tai syklobu-30 tyyliryhmä; tai 36 101226 alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyli- tai etyyliryhmä, joka on substituoitu yksittäisellä sykloalkyyliryhmällä, jossa on 3-6 hiiliatomia, kuten syklopropyylimetyyliryhmä, syklopropyylietyyliryhmä tai syklobutyylimetyyli-ryhmä.

5

Esillä olevan keksinnön yhdisteiden erityisen edullinen joukko, jossa A on kaavan (A4) mukainen ryhmä, ovat ne kaavojen (I) tai (Ia) mukaisen yhdisteet, joissa: i on 1 tai 2; ja 10 R1, R14, R15 ja R16 on itsenäisesti valittu ryhmästä, johon kuuluu vetyatomit ja alkyyliryhmät, joissa on 1-3 hiiliatomia (kuten metyyliryhmä tai etyyliryhmä, erityisesti metyyliryhmä).

15 Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden kaikkein edullisin joukko, jossa A on kaavan (A4) mukainen ryhmä, ovat ne kaavojen (I) ja (Ia) mukaiset yhdisteet ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ja esterit, joissa: i on 1; ja 20 R1, R14, R15 ja R16 on itsenäisesti valittu ryhmästä, johon kuuluu vetyatomit ja -metyyliryhmät.

Esillä olevan keksinnön niiden yhdisteiden tapauksessa, joissa A on kaavan (A5) 25 mukainen ryhmä, p on 1, 2 tai 3, edullisesti 2. R17 ja R18, jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, kumpikin on edullisesti: vetyatomi; 30 alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä; 37 101226 substituoitu alkyyliiyhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten substituoitu metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä, jossa substituentti on valittu ryhnästä, johon kuuluu vetyatomit, alkoksiryhmät, joissa on 1-3 hiiliatomia (kuten metoksi- tai etoksiryhmät) ja halogeeniatomit (kuten fluori- ja klooriatomit).

5

Vaihtoehtoisesti R17 ja R18 voivat yhdessä edullisesti olla kaavan -(CH2)q-Y-(CH2)r- mukainen ryhmä, jossa Y on yksinkertainen hiili-hiili-sidos, happiatomi tai kaavan >NR23 mukainen ryhnä, jossa R23 on vetyatomi tai alkyyliryh-mä, jossa on 1-3 hiiliatomia (kuten metyyli- tai etyyliryhmä), ja q ja r on kumpikin 10 2 tai 3.

Esillä olevan keksinnön mukaisen yhdisteiden erityisen edullinen joukko, jossa A on kaavan (A5) mukainen ryhnä, ovat ne kaavojen (I) ja (Ia) mukaiset yhdisteet ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ja esterit, joissa: 15 p on 2; R1 on vetyatomi, metyyliiyhmä, fluorimetyyliryhmä, formimidoyyliryhmä tai asetimidoyyliryhmä; 20 . . R17 ja R18 ovat samanlaisia tai erilaisia ja kumpikin on vetyatomi, alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia (kuten metyyliryhmä tai etyyliryhmä), 2-haloetyyliryhmä (kuten 2-fluorietyyliryhmä) tai 2-hydroksietyyliryhmä; 25 tai • » R17 ja R18 yhdessä ovat seuraavien kaavojen mukainen ryhmä -(ch2)4-, 30 -(CH2)5-, -(CH2)20(CH2)2-, -(CH2)2S(CH2)2-, 38 101226 -(CH2)2NH(CH2)2- tai -(CH2)2NCH3(CH2)2-.

Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden kaikkein edullisin joukko, jossa A on 5 kaavan (A5) mukainen rytinä, ova ne kaavojen (I) ja (Ia) mukaiset yhdisteet ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ja esterit, joissa: E on 2; 10 R1 on vetyatomi, metyyliryhmä, fluorimetyyliryhmä, formimidoyyliryhmä tai asetimidoyyliryhmä; ja R17 ja R18 ovat samanlaisia tai erilaisia ja kumpikin on vetyatomi tai metyyliryhmä.

15 Niiden esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden tapauksessa, jossa A on kaavan (A7) mukainen ryhnä, g on 0, 1 tai 2 ja edullisesti 1 tai 2.

Näissä yhdisteissä Z on edullisesti 1-imidatsolyyliryhmä, 1,2,4-triatsol-l-yyliryhmä tai 1,2,3-triatsol-1 -yyliryhmä.

20 . Esillä olevan keksinnön yhdisteiden erityisen edullinen joukko, jossa A on kaavan (A7) mukainen ryhnä, ovat ne kaavojen (I) tai (Ia) mukaiset yhdisteet, joissa: g on 0, 1 tai 2; 25 R1 on vetyatomi tai metyyliryhmä; ja

Zon 1-imidatsolyyliryhmä, 1,2,4-triatsol-l-yyliryhmä tai 1,2,3-triatsol-l-yyliryhmä.

30 Esillä olevan keksinnön yhdisteiden kaikkein edullisin joukko, jossa A on kaavan (A7) mukainen ryhmä, ovat ne kaavojen (I) ja (Ia) mukaiset yhdisteet ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ja esterit, joissa: 39 101226 g on 1 tai 2; R1 on vetyatomi tai metyyliryhmä; ja 5 Z on 1-imidatsolyyliryhmä, 1,2,4-triatsol-l-yyliryhmä tai 1,2,3-triatsol-l-yyliryhmä.

Kaikista yhdisteistä, mukaanlukien edullisemmat ja kaikkein edullisimmat yhdisteet, joihin viitataan edellä, pidämme edullisina niitä yhdisteitä, joissa R5 on vetyatomi eli kaavan (I) mukaisia yhdisteitä.

10

Esillä olevan keksinnön mukaisilla yhdisteillä on välttämättäkin useita asymmetrisiä hiiliatomeja molekyyleissään ja voivat siten muodostaa optisia isomeerejä. Vaikka näitä kaikkia esitetään yhdellä ainoalla molekyylikaavalla, esillä olevaan keksintöön kuuluu sekä yksittäiset, eristetyt isomeerit että seokset, mukaanlukien niiden rase-15 maatit. Kun käytetään stereospesifisiä synteesitekniikoita tai optisesti aktiivisia yhdisteitä käytetään lähtöaineina, yksittäiset isomeerit voidaan valmistaa suoraan; toisaalta jos valmistetaan isomeerien seos, yksittäiset isomeerit voidaan saadan tavanomaisilla erotustekniikoilla.

20 Isomeereistä pidämme edullisina niitä, joissa hiiliatomit ovat samoissa konfigu-roinneissa kuin tienamysiinissä eli: R-konfiguroinnoissa asemassa 1, (5S,6S-konfigu-roinnissa asemissa 5 ja 6) ja R-konfiguroinnissa sivuketjun hydroksi-substituoidussa «-asemassa 6.

25 Erityisiä esimerkkejä esillä olevan keksinnön yhdisteistä ovat ne kaavan (I) mukaiset yhdisteet, joissa eri substituenttiryhmät on määritelty, kuten taulukoissa 1-8. Taulukoissa käytetään seuraavia lyhenteitä:

Ac asetyyli 30 Acim asetimidoyyli

Ali allyyli 40 101226

Azp perhydroatsepinyyli (= homopiperatsinyyli)

Azt atsetidinyyli

Car karbamoyyli 5 Et etyyli

Foim formimidoyyli

Imaz imidatsolidinyyli

Imid imidatsolyyli

Me metyyli 10 Mec metoksikarbonyyli

Mor morfoliino

Pip piperidyyli

Piz piperatsinyyli

Prg propargyyli (= 2-propynyyli) 15 Pyrd pyrrolidinyyli

Sam sulfamoyyli

Thz perhydro-l,4-tiatsin-4-yyli (= tiomorfoliino)

Ur ureido 20

• I

41 101226

Kaikkein edullisimmat esillä olevan keksinnön mukaiset erityiset yhdisteet ovat yhdisteet n:ot: 1-1. 2-[2-(l-homopiperatsinyylikarbonyyli)-l-metyyli-pyrrolidin-4-yylitio]-6-(l-5 hydroksietyyli)-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 1 -2. 2-[2-(4-karboksimetyylihomopiperatsin-1 -yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]- 6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyy!ihappo; 10 1-7. 2- {2- [4-(2-hydroksietyyli)homopiperatsin-1 -yyli-karbonyyli]pyrrolidin-4- yylitio}-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 1-11. 2-[2-(4-asetimidoyylihomopiperatsin-l-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-(1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyy lihappo; 15 1-12. 2-[2-(4-formimidoyylihomopiperatsin-l-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-(1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 1 -57. 2-[2-(4-formimidoyylihomopiperatsin-l-yylikarbonyyli)-l-metyylipyrrolidin-4-20 yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)- 1-metyyli 1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylihappo; 1-60. 2-[l-metyyli-2-(piperatsin-l-yylikarbonyyli)pynOlidin-4-yylitio]-6-(l -hydroksietyyli)- 1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 25 1-65. 2-{2-[4-(2-hydroksietyyli)piperatsin-l-yylikarbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6- (1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyy lihappo; 1-66. 2-[2-(3-metyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-(l-hydrok-sietyyli-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 30 1-74. 2-[2-(4-formimidoyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-(l-hydroksietyyli)-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 42 101226 1-75. 2-[2-(4-asetimidoyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-(l-hydroksietyy li)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 1 -76. 2-[2-(4-formimidoyylipiperatsin-1 -yylikarbonyyli)-1 -metyylipyrrolidin-4-5 yylitio] -6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 1-77. 2-[2-(4-asetimidoyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli)-l-metyylipyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 10 1-78. 2-[2-(4-formimidoyyli-3-metyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4- _ yylitio]-6( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 1-79. 2-[2-(4-asetimidoyyli-3-metyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yy litio] -6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 15 1-102. 2-[2-(2-metyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-(l- hydroksietyyli)-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 1-103. 2-[2-(4-formimidoyy li-2-metyylipiperatsin- l-yylikarbonyyli)pyrrolidin- 20 4-yy litio] -6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; » 1-104. 2-[2-(4-asetimidoyyli-2-metyy lipiperatsin-1 -yylikarbonyyli)pyrrolidin- 4-yylitio]-6-(l-hydroksietyyli)-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 25 1-111. 2-[2-(3-hydroksimetyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4- yy litio] -6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 1-168. 2-[ 1 -formimidoyyli-2-4-formimidoyylipiperatsin-1 -yylikarbonyyli)pyr- rolidin-4-yy litio]-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihap-30 po; 43 101226 2-1. 2-[2-(3-asetimidoyyliaminopyrrolidin-1 -yylikarbonyyli)pyiTolidin-4-yylitio] -6-(1-hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2-2. 2- [2-(3-formimidoy y liaminopyrrolidin-1 -yylikarbonyy li)pyrrolidin-4-yylitio] -6- 5 (1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2-9. 2-[2-(3-aminopyrrolidin-l-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-(l-hydrok-sietyyli)-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 10 2-19. 2-[2-(4-asetimidoyyliaminopiperidin-1 -yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yy litio] -6- (1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2-37. 2-[2-(3-aminopyrrolidin-l-yylikarbonyyli)-1 -metyylipyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3 -karboksyy lihappo; 15 2-3 8. 2- [2-(3-asetimidoyy liaminopyrrolidin-1 -yylikarbonyy li)-1 -metyylipyrrolidin-4- yylitio] -6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2-39. 2-[2-(3-formimidoyyliaminopyrrolidin-1 -yylikarbonyyli)-1 -metyylipyrrolidin-20 4-yy litio)-6-( 1 -hydroksetyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2-67. 2-[2-(4-asetimidoyyliaminopiperidin-1 -yylikarbonyyli)-1 -metyylipyrrolidin-4-yy litio] -6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3 -karboksyylihappo; 25 3-2. 2-[2-(l-formimidoyylipynOlidin-3-yylikarbamoyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-(l- hydroksietyy li)-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyy lihappo; 5-1. 2-[2-(3-dimetyyliamino-l,2,5,6-tetrahydropyratsin-l-yylikarbonyyli)pyrroli-din-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyy lihappo. 30 44 101226

Esillä olevan keksinnön yhdisteet voidaan valmistaa erilaisilla menetelmillä, joiden yleiset tekniikat ovat tunnettuja alalla tämän tyyppisten yhdisteiden valmistamiseksi.

Ne voidaan esimerkiksi valmistaa antamalla kaavan (II) mukaisen yhdisteen: °H CH, A A/1 CH{ - 10 (Π) _ V—N \ 0 COOR24 [jossa R24 on karboksia suojaava ryhmä, josta annetaan esimerkkejä seuraavassa ja 15 R28 on alkaanisulfonyylioksiryhmä, aryylisulfonyylioksiiyhmä, dialkyylifosforyyliok- siryhmä, diaryylifosforyylioksiryhmä (joista on esimerkkejä jäljempänä ryhmän R25 yhteydessä) tai kaavan -S(-0)R27 mukainen ryhmä, jossa R27 on alkyyliryhmä, halo-alkyyliryhmä, asetamidoalkyyliryhmä, asetamidoalkenyyliryhmä, aryyliryhmä tai aromaattinen heterosyklinen ryhmä), reagoida kaavan (III) mukaisen yhdisteen 20 kanssa: 25 C y—C0A’ ·: I m R26 30 (jossa R26 on jokin niistä ryhmistä tai atomeista, joita R1 tarkoittaa tai mikä vain sellainen ryhmä tai atomi, jossa mikä vain aktiivinen ryhmä on suojattu ja A’ on jokin niistä ryhmistä tai atomeista, joita A tarkoittaa tai mikä vain sellainen ryhmä 45 101226 tai atomi, jossa mikä vain aktiivinen ryhmä on suojattu) ja sitten tarvittaessa poistamalla mikä vain suojaryhmä.

Edellä olevissa kaavoissa R24 on karboksia suojaava ryhmä. Esimerkkejä sellaisista 5 ryhmistä ovat: alkyyliryhmät, kuten metyyli-, etyyli- ja t-butyyliryhmät; aralkyyli-ryhmät, kuten bentsyyli-, bentshydryyli- (difenyylimetyyli)-, 4-nitrobentsyyli- ja 2-nitrobentsyyliryhmät; alkenyyliryhmät, kuten allyyli-, 2-klooriallyyli-ja 2-metyylial-lyyliryhmät; halogenisoidut alkyyliryhmät, kuten 2,2,2-trikloorimetyyli-, 2,2-dibromietyyli- ja 2,2,2-tribromietyyliryhmät; ja 2-trimetyylisilyylietyyliryhmä.

10 A’ ja R26 tarkoittavat samaa kuin A ja R1, ja jos A’ tai R26 vaatii suojaryhmän, ryhmiin A’ tai R26 kuuluu sellainen suojaryhmä. Esimerkkejä sellaisista suojaryh-mistä ovat: normaali hydroksia, iminoa, aminoa ja karboksia suojaava ryhmä; ja esimerkkejä ovat: p-nitrobentsyylioksikarbonyyli- ja p-nitrobentsyyliryhmät. Monet 15 sellaiset ryhmät alan ammattihenkilö kuitenkin tuntee hyvin ja mikä vain ryhmä, joka kykenee suojaamaan tämän tyyppisissä yhdisteissä olevaa aktiivista ryhmää, voidaan yhtä hyvin käyttää tässä.

R27 on: 20 _ alkyyliryhmä, jossa on edullisesti 1-4 hiiliatomia, kuten metyyli-, etyyli-, propyyli- tai isopropyyliryhmä; halogenisoitu alkyyliryhmä, jossa on edullisesti 1-4 hiiliatomia, kuten trifluorimetyyli-, kloorimetyyli-, fluorietyyli-, kloorietyyli-, fluoripro-pyyli-, difluorimetyyli-, difluorietyyli-, dikloorietyyli-, trifluorimetyyli- tai 25 trifluorietyyliryhmä; asetamidoalkyyliryhmä, kuten 2-asetamidoetyyliryhmä; asetamidoalkenyyliryhmä, kuten 2-asetamidovinyyliryhmä; 30 aryyliryhmä, kuten valinnaisesti substituoitu fenyyli- tai naftyyliryhmä, jossa voi valinnaisesti olla 1-3 seuraavista substituenteista, jotka voivat olla samoja tai 46 101226 erilaisia: fluori-, kloori- ja bromiatomeja, metyyli-, etyyli-, propyyli-, isopropyyli-, metoksi-, etoksi-, propoksi-, isopropoksi-, metoksikarbonyyli-, etoksikarbonyyli-, t-butoksikarbonyyli-, karbamoyyli-, mono- ja dialkyylikarbamoyyli (jossa on esimerkkejä alkyyliiyhmistä esimerkiksi metyyli-, etyyli- ja propyyliryhmät), nitro-, 5 hydroksi- ja syanoryhmät; tai aromaattinen heterosyklinen ryhmä, kuten valinnaisesti substituoitu pyridyyli- tai pyrimidyyliryhmä, jossa voi olla valinnaisesti 1-3 seuraavista substituenteista, jotka voivat olla samoja tai erilaisia: fluori-, kloori- ja bromiatomit, metyyli-, etyyli-, 10 propyyli- ja isopropyyliryhmät.

Yksityiskohtaisemmin esillä olevan keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa kuten on kuvattu seuraavissa reaktiokaavioissa A ja B: 15 1 l Λ 101226 47

Reaktiokaavio A; ?H 9Η3 9H ch3 CH{\-Vaihe Al ^ Cllf', ^^^OR25 0 N C00RM \oOR* (V) 9H ch3

Vaihe A2 JL 1 —7 V

HS. CH’^n_TS S^°A' + ^—Van) \oor« R“ ^N^XOA1 R26 CH3

Vaihe A3 CH3/| ^'n'^TTOA

J~N-k Rl O COOR5 1 (la) 48 101226

Reaktiokaavio B:

OH ru O HS

chA-AJ-*” V-V

jT \ + ^N^COA- Vaihe B1 , θ' COOR24 R26 (VH) (m) 9H ch3

CH

3 I I N LOA' Vaihe B2 /“N-\ R26 **

0 COOR24 R

(VI) 9H ch3

ch=\^s'^X0A

Q) ^COOR5 Rl (la) 49 101226

Edellä olevissa kaavoissa A’, R1, R5, R24, R26 ja R27 on määritelty kuten edellä ja R25 on määritelty seuraavassa.

R25 on sulfonyyli- tai fosforyyliryhmä, esimerkiksi: alkaanisulfonyyliryhmä, kuten 5 metaanisulfonyy li-, trifluorimetaanisulfonyyli-, etaanisulfonyy li-, propaanisulfonyy li-, isopropaanisulfonyyli- tai butaanisulfonyyliryhmä; aryylisulfonyyliryhmä, kuten fenyylisulfonyyli-, totlyylisulfonyyli- tai naftyylisulfonyyliryhmä; dialkyylifosforyyli-ryhmä, kuten dimetyylifosforyyli-, dietyylifosforyyli-, dipropyylifosforyyli-, di-isopropyylifosforyyli-, dibutyylifosforyyli- tai dipentyylifosforyyliryhmä; tai diaryyli-10 fosforyyliryhmä, kuten difenyylifosforyyli- tai ditolyylifosforyyliryhmä.

Reaktiokaavion A vaiheessa AI kaavan (V) mukainen yhdiste valmistetaan antamalla kaavan (IV) mukaisen yhdisteen reagoida alkaanisulfonyylihapon anhydridin, aryylisulfonyylihapon anhydridin kanssa, dialkyylifosforyylihalidin tai diaryyli-15 fosforyylihalin kanssa emäksen läsnäollessa kaavan (V) mukaisen yhdisteen saamiseksi.

Esimerkkejä reagensseistä, joita voidaan käyttää tässä vaiheessa, ovat: alkaanisul-fonyylihappoanhydridit, kuten metaanisulfonyylihappoanhydridi, trifluorimetaanisul-20 fonihappoanhydridi tai etaanisulfonyylihappoanhydridi; vedettömät aryylisulfonyyli-happoanhydridit, kuten vedetön bentseenisulfonyylihappoanhydridi tai p-tolueenisul-fonyylihappoanhydridi, dialkyylifosforyylihalidit, kuten dimetyylifosforyylikloridi tai dietyylifosforyylikloridi; ja diaryylifosforyylikloridit, kuten difenyylifosforyyli-kloridi tai difenyylifosforyylibromidi. Näistä pidämme erityisen edullisena p-25 tolueenisulfonihappoanhydridiä tai difenyylifosforyylikloridia.

Reaktio suoritetaan normaalisti ja edullisesti liuottimen läsnäollessa. Käytettävän liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sillä ei ole mitään haitallista vaikutusta reaktioon tai siihen liittyviin reagensseihin ja että se kykenee 30 liuottamaan reagenssit ainakin jossain määrin. Esimerkkejä sopivista liuottimista ovat: halogenisoidut hiilivedyt, varsinkin halogenisoidut alifaattiset hiilivedyt, kuten metyleenikloridi, 1,2-dikoorietaani tai kloroformi; nitriilit, kuten asetnitriili; ja 50 101226 amidit, varsinkin rasvahappoamidit, kutenN,N-dimetyyliformamiditaiN,N-dimetyy-liasetamidi.

Tähän reaktioon käytetyn emäksen laatua ei myöskään erityisesti rajoiteta, sillä 5 edellytyksellä että sillä ei ole haitallista vaikutusta molekyylin muihin osiin, varsinkin β-laktaamirenkaaseen. Esimerkkejä edullisista emäksistä ovat: orgaaniset emäkset, varsinkin tertiääriset amiinit, kuten trietyyliamiini, di-isopropyylietyyliamiini tai 4-dimetyyliaminopyridiini.

10 Reaktio voi tapahtua laajalla lämpötila-alueella ja täsmällinen reaktion lämpötila ei ole kriittinen keksinnölle. Yleensä pidämme sopivana suorittaa reaktio suhteellisen alhaisessa lämpötilassa sivureaktioiden kontrolloimiseksi, esimerkiksi lämpötilassa -20 °C - noin 40 °C. Reaktioon vaaditu aika voi myös vaihdella laajasti riippuen monista tekijöistä, joista huomattakoon reaktiolämpötila ja käytettävien reagenssien 15 ja liuottimen laatu. Sillä edellytyksellä, että reaktio kuitenkin suoritetaan edellä olevissa edullisissa olosuhteissa 10 minuuttia -5 tuntia yleensä kuitenkin riittää.

Siten saatu reaktioseos voidaan käsitellä reaktiokaavion vaiheessa A2 kaavan (III) 20 mukaisella yhdisteellä emäksen läsnäollessa ja ilman mitään kaavan (V) mukaisen yhdisteen välissä tapahtuvaa eristystä tai puhdistamista. Tähän vaiheeseen käytetyn emäksen laatua ei erityisemmin rajoiteta ja edullisia esimerkkejä ovat: orgaaniset emäkset, erityisesti tertiääriset amiinit, kuten trietyyliamiini tai di-isopropyylietyyliamiini; ja epäorgaaniset emäkset, kuten kaliumkarbonaatti tai natriumkarbonaatti. 25

Reaktio voi tapahtua laajalla lämpötila-alueella ja täsmällinen reaktiolämpötila ei ole kriittinen keksinnölle. Yleensä pidämme sopivana suorittaa reaktio lämpötilassa -20 °C - huoneen lämpötila. Reaktioon vaadittu aika voi myös vaihdella laajasti riippuen monista tekijöistä, joista huomattakoon reaktiolämpötila ja käytettyjen reagens-30 sien ja liuottimen laatu. Sillä edellytyksellä, että reaktio kuitenkin suoritetaan edellä olevissa edullisissa olosuhteissa 30 minuuttia - 108 tuntia yleensä riittää.

51 101226

Reaktion mentyä loppuun kaavan (VI) mukainen haluttu yhdiste voidaan saada reaktioseoksesta tavanomaisin menetelmin. Esimerkki sellaisesta tekniikasta on: väkevöidään reaktioseos tislaamalla liuotin pois edullisesti alennetussa paineessa; lisätään veteen sekoittumaton orgaaninen liuotin jäännökseen; pestään orgaaninen 5 faasi vedellä; ja lopuksi tislataan orgaaninen liuotin pois. Haluttaessa näin saatu haluttu yhdiste voidaan edelleen puhdistaa tavanomaisesti, esimerkiksi jälleenkiteyttä-mällä, jälleensaostamalla tai erilaisilla kromatografiatekniikoilla, joista huomattakoon kolonnikromatografia tai preparatiivinen ohutkerroskromatografia. Vaihtoehtoisesti saatu reaktioseos voidaan haluttaessa tässä vaiheessa myös käyttää lähtöaineena sen 10 jälkeisessä vaiheessa ilman kaavan (VI) mukaisen yhdisteen eristämistä.

Vaiheessa A3, tarvittaessa, vaiheessa A2 saatu kaavan (VI) mukainen yhdiste voidaan muuttaa vapaaksi karboksyylihapon johdannaiseksi eliminoimalla ryhmän R24 mukainen karboksia suojaava ryhmä tavanomaisella tavalla. Reaktio, jota 15 käytetään ryhmän R24 mukaisen suojaryhmän poistamiseen riippuu tietenkin suoja-ryhmän laadusta, mutta mitä vain reaktiota, joka alalla on tunnettu tämän tyyppisten yhdisteiden suojaryhmien poistamiseksi, voidaan yhtä hyvin käyttää tässä.

Esimerkiksi, kun kaavan (VI) mukaisessa yhdisteessä oleva R24 -substituentti on 20 suojaryhmä, joka kykenee poistamaan pelkistyksellä, esimerkiksi halogenisoitu alkyyli-, aralkyyli- tai bentshydryyliryhmä, reaktio voidaan edullisesti suorittaa saattamalla kaavan (VI) mukainen yhdiste kosketukseen pelkistysreagenssin kanssa. Edullisia esimerkkejä pelkistysreagensseistä, joita voidaan käyttää tähän reaktioon, ovat sinkki ja etikkahappo. kun karboksia suojaava ryhmä on esimerkiksi halo-25 genisoitu alkyyliryhmä (kuten 2,2-dibromietyyli- tai 2,2,2-trikloorietyyliryhmä); ja vety, kun se on esimerkiksi aralkyyliryhmä (kuten bentsyyli, 4-nitrobentsyyliryhmä tai bentshydryyliryhmä), ja katalysaattori käytettäväksi katalyyttiseen pelkistykseen, kuten palladium-puuhiili tai alkalimetaalisulfidi, kuten natriumsulfidi tai kaliumsulfi-di. Tämä reaktio suoritetaan edullisesti ja normaalisti liuottimen läsnäollessa. 30 Käytettävän liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sillä ei ole haitallista vaikutusta reaktioon tai siihen sisältyviin reagensseihin ja että se kykenee liuottamaan reagenssit ainakin jossain määrin. Esimerkkejä sopivista 52 101226 liuottimista ovat: alkoholit, kuten metanoli tai etanoli; eetterit, kuten tetrahydrofu-raani tai dioksaani; alifaattiset hapot, kuten etikkahappo; ja veden seoksen yhden tai useamman näiden orgaanisten liuottimien kanssa.

5 Reaktio voi tapahtua laajalla lämpötila-alueella ja täsmällinen reaktion lämpötila ei ole kriittinen keksinnölle. Yleensä pidämme sopivana suorittaa reaktio lämpötilassa 0 °C - noin huoneen lämpötila. Reaktioon vaadittu aika voi myös vaihdella laajasti riippuen monista tekijöistä, joista huomattakoon reaktiolämpötila ja käytettyjen reagenssien ja liuottimen laatu. Sillä edellytyksellä, että reaktio kuitenkin suoritetaan 10 edellä olevissa edullisissa olosuhteissa 5 minuuttia - 12 tuntia tavallisesti riittää. _

Reaktion mentyä loppuun haluttu yhdiste voidaan ottaa talteen reaktioseoksesta tavanomaisin keinoin. Esimerkki yhdestä sellaisesta tekniikasta on: suodatetaan pois liukenemattomat aineet, joita on kerääntynyt reaktioseokseen ja tislataan liuotin pois 15 suodoksesta.

Siten saatua yhdistettä voidaan tarvittaessa edelleen puhdistaa tavanomaisin keinoin, esimerkiksi jälleenkiteyttämällä tai erilaisilla kromatografiatekniikoilla, joista huomattakoon kolonnikormatografia tai preparatiivinen ohutkerroskromatografia.

20

Tarvittaessa karboksiryhmä, josta suoja on poistettu, kuten edellä on kuvattu, voidaan muuttaa esteriryhmäksi, joka kykenee hydrolyysiin in vivo ja esteriyhdiste voidaan puhdistaa farmakologisesti hyväksyttävänä suolana tavanomaisin keinoin.

25 Kun A’ tai R26 sisältää hydroksi-, imino-, amino- tai karboksia suojaavan ryhmän (esimerkiksi p-nitrobentsyylioksikarbonyyliryhmän tai p-nitrobentsyyliryh-män), suojaryhmä voidaan poistaa samaan aikaan kuin edellä mainittu karboksia suojaavan ryhmän poistaminen (kun R24 on p-nitrobentsyy 1 iryhmä).

30 Vaihtoehtoisesti kaavan (Ia) mukaiset yhdisteet voidaan myös valmistaa reaktiokaa-violla B, kuten edellä on esitetty.

53 101226

Kaavan (VII) mukainen yhdiste, jota käytetään lähtöaineena tässä reaktiokaaviossa, on esitetty esimerkiksi japanilaisessa patenttijulkaisussa Kokai nro Sho 62-30781.

Tämän reaktiokaavion vaiheessa B1 kaavan (VI) mukainen yhdiste valmistetaan 5 antamalla kaavan (VII) mukaisen yhdisteen reagoida kaavan (III) mukaisen merkap-taanin kanssa emäksen läsnäollessa.

Reaktio suoritetaan normaalisti ja edullisesti liuottimen läsnäollessa. Käytettävän liuottimen laatua ei erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sillä ei ole 10 haitallista vaikutusta reaktioon tai siihen sisältyviin reagensseihin ja että se kykenee liuottamaan reagenssit ainakin jossain määrin. Esimerkkejä sopivista liuottimista ovat: esterit, kuten etyyliasetaatti; eetterit, kuten tetrahydrofuraani; nitriilit, kuten asetnitriili; amidit, varsinkin rasvahappoamidit, kuten N,N-dimetyyliformamidi; sulfoksidit, kuten dimetyylisulfoksidi; vesi; ja kahden tai useamman näiden liuottimi-15 en seokset. Reaktioon käytettävän emäksen laatua ei myöskään erityisemmin rajoiteta, sillä edellytyksellä että sillä ei ole haitallista vaikutusta molekyylin muihin osiin, varsinkin β-laktaamirenkaaseen. Esimerkkejä sellaisista emäksistä ovat: orgaaniset emäkset, varsinkin tertiääriset amiinit, kuten di-isopropyylietyyliamiini, trietyy-liamiini, N-metyylipiperidiini tai 4-dimetyyliaminopyridiini; ja epäorgaaniset 20 emäkset, varsinkin alkalimetallikarbonaatit ja vetykarbonaatit, kuten kaliumkarbonaatti tai natrium vety karbonaatti.

Reaktio voi tapahtua laajalla lämpötila-alueella ja reaktion täsmällinen lämpötila ei ole kriittinen keksinnölle. Yleensä pidämme sopivana suorittaa reaktio suhteellisen 25 alhaisessa lämpötilassa sivureaktioiden vähentämiseksi, esimerkiksi lämpötilassa -20 °C - 40 °C. Reaktioon vaadittu aika voi myös vaihdella laajasti riippuen monista tekijöistä, joista huomattakoon reaktiolämpötila ja käytettyjen reagenssien ja liuottimen laatu. Sillä edellytyksellä, että reaktio kuitenkin suoritetaan edellä olevissa edullisissa olosuhteissa 15 minuttia - 25 tuntia tavallisesti riittää.

Reaktion mentyä loppuun reaktion haluttu kaavan (VI) mukainen yhdiste voidaan ottaa talteen reaktioseoksesta tavanomaisin keinoin.

30 54 101226

Kaavan (Ia) mukaiset yhdisteet voidaan sitten valmistaa tästä kaavan (VI) mukaisesta yhdisteestä poistamalla suojaryhmät, joita voi olla läsnä ryhmissä, joita A’ ja R26 edustavat, kuten on kuvattu reaktiokaaviossa A, jos sellaisia on, ja poistamalla mahdolliset muut suojaryhmät tai tarvittaessa muuttamalla karboksiryhmä, josta suoja 5 on poistettu, esteriryhmäksi, joka kykenee hydrolyysiin in vivo.

Edellä kuvatulla tavalla valmistetut kaavan (Ia) mukaiset yhdisteet voidaan muuttaa farmakologisesti hyväksyttäviksi suoloiksi käyttämällä menetelmiä ja tekniikoita, jotka ovat hyvin tunnettuja β-laktaamiantibioottialalla.

10

Kaavan (Ula) mukainen merkaptaani, jota käytetään lähtöaineena molemmissa edellä olevissa reaktiokaavioissa, voidaan valmistaa seuraamalla menetelmää, joka on kuvattu japanilaisessa patenttihakemuksessa Kokai nro Hei 2-28180 ja nro Hei 2-3687 ja japanilaisessa patenttihakemuksessa nro Hei 3-27059 ja nro Hei 3-131545. 15

Esillä olevan keksinnön mukaisilla yhdisteillä on erinomainen bakteerinvastainen vaikutus hyvin suurelle joukolle bakteereita, ja niillä on kyky inhiboida β-laktamaasin vaikutusta päinvastoin kuin useimmat tienamysiinityyppiset yhdisteet, joilla on taipumus läpikäydä aineenvaihduntaa nisäkkään kehossa. Lisäksi esillä olevan keksinnön 20 mukaisilla johdannaisilla on erinomainen stabiilisuus dehydropeptidaasi I:tä vastaan, jonka myös tiedetään katalysoivan tienamysiinityyppisten yhdisteiden inaktivointia. Esillä olevan keksinnön mukaisilla johdannaisilla oli vahva bakteerinvastainen vaikutus laajaa joukkoa tautia aiheuttavia bakteereita vastaan, joihin kuuluvat gram-positiiviset bakteerit, kuten Staphylococcus aureus ja Bacillus subtilis. Gram-negatii-25 viset bakteerit, kuten Escherichia coli, Shigella -lajit, Streptococcus pneumoniae, . Proteus -lajit, Serratia -lajit, Enterobacter -lajit, Klebsiella -lajit ja Pseudomonas -lajit ja anaerobiset bakteerit, kuten Bacteroides fragilis.

Bakteerinvastainen vaikutus määritettiin agarilevyliuotusmenetelmällä ja esillä olevan 30 keksinnön mukaisten yhdisteiden inhiboivat minimikonsentraatiot erilaisia tavallisia tautia aiheuttavia bakteereita vastaan määritettiin. Keksinnön mukaiset yhdisteet tunnistetaan viittaamalla yhteen seuraavista esimerkeistä, jotka kuvaavat niiden 55 101226 valmistusta. Kaikki esimerkkien 1,4, 5, 6, 11, 15, 23, 37, 42, 43, 44, 45, 50, 54, 55 ja 61 mukaisten yhdisteiden havaittiin olevan aktiivisempia kuin imipeneemi seuraa-via kantoja vastaan: Escherichia coli NIHJ, Klebsiella pneumoniae 846 ja Pseudomonas aeruginosa 1001. Yhdisteillä oli myös yleisesti ottaen erinomainen vaikutus 5 Staphylococcus aureus 209P vastaan samalla tavalla kuin imipeneemillä.

MIC-tiedot mitattiin aktiivisuuksien määrittämiseksi kantoja Staphylococcus Aeureus, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae ja Pseudomonas aeruginosa vastaan. Oheisesta tulukosta näkee, että esillä olevan keksinnön yhdisteet ovat aktiivisempia 10 Escherichia colv.zl, Klebsiella pneumoniae:a ja Pseudomonas aeruginosa.a vastaan kuin imipeneemi ja niillä on yleisesti ottaen hyvä aktiivisuus Staphylococcus Aeu-reus:ta vastaan. Esillä olevan keksinnön yhdisteet ovat yllättävän paljon tehokkaampia suhteessa tekniikan tason yhdisteisiin.

15 56 101226

Taulukko 1

Mikro-organismi A B C D

Esim. nro I <0,01 <0,31 <0,01 0,1 5 4 <0,01 <0,01 <0,01 0,1 5 <0,01 <0,01 <0,01 0,2 6 <0,01 <0,01 <0,01 0,4 II <0,01 <0,01 <0,01 0,4 15 <0,01 <0,01 <0,01 0,1 10 23 <0,01 <0,01 <0,01 0,1 _ 37 0,02 0,02 0,02 0,2 42 0,05 0,02 0,02 0,1 43. <0,01 <0,01 <0,01 0,1 44 <0,01 <0,01 <0,01 0,4 15 45 <0,01 <0,01 <0,01 0,4 50 0,05 0,02 0,02 0,2 54 0,05 <0,01 <0,01 0,4 55 0,02 <0,01 <0,01 0,4 61 <0,01 <0,01 <0,01 0,4 20 Imipeneemi <0,01 0,05 0,01 3,1

Taulukossa 1 mikro-organismi A: Staphylococcus aureus 209P

B: Escherichia coli NURJ

C: Klebsiella pneumoniae 846 25 D: Pseudomonas aeruginosa 1001 : Nämä tulokset osoittavat, että esillä olevan keksinnön mukaisella yhdisteellä on vaikutuksia, jotka yleensä ovat parempia kuin imipeneemin; lisäksi niillä on päinvastoin kuin imipeneemillä, vastustuskykyä dehydropeptidaasi I:tä ja B-laktamaasia 30 vastaan.

57 101226

Esillä olevan keskinnön mukaiset karbapeneemi-3-karboksyylihapon johdannaiset ovat siksi käyttökelpoisia terapeuttisina aineina näiden tautia aiheuttavien bakteereiden aiheuttamien tartuntojen hoitoon ja ennaltaehkäisyyn. Yhdisteet voidaan annostella missä vain tavanomaisessa muodossa tähän tarkoitukseen ja täsmällinen käytetty 5 formulointi riippuu käsiteltävästä sairaudesta, potilaan iästä, kunnosta ja muista tekijöistä, jotka hyvin tunnetaan alalla. Suun kautta tapahtuvaa annostelua varten yhdisteet voidaan esimerkiksi formuloida tableteiksi, kapseleiksi, rakeiksi, pulvereiksi tai siirapeiksi; ja ruoansulatuskanavan ulkopuolista annostelua varten ne voidaan formuloida suoneen annettavaksi injektioksi tai lihakseen annattavaksi injektioksi.

10 Annos vaihtelee laajasti riippuen potilaan iästä ja ruumiinpainosta, oireista ja kunnosta, kuten vaihtelee myös annostelun muoto ja annostelukerrat ja annostelurutiini; aikuista ihmispotilasta varten suositellaan kuitenkin 100 mg - 300 mg:n päivittäistä annosta ja se voidaan annostella yhtenä annoksena tai useina annoksina.

15 Seuraavissa esimerkeissä ja valmistusesimerkeissä, jos ei muuta ilmoiteta, ydinmag-neettiset resonanssispektromittaukset deuteriumoksidissa suoritettiin käyttämällä tetrametyylisilaania ulkoisena standardina ja ne, jotka suoritettiin muissa liuottimissa käyttämällä tetrametyylisilaania sisäisenä standardina. Lisäksi hiukkakoon mittauksissa käytetyt seulamitat ovat Tylein standardin mukaisia.

20 ESIMERKKI 1 (lR,5S,6S)-[(2S,4S)-2-(4-Asetimidoyylipiperatsm-l-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4- yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyylil-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihap- 25 po OH CH3 ö Lhs h II ^^ 3o CH3ATYsTa \ y~i\—^ —n h ^—/ il

O COOH H NH

58 101226 1(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikar-bonyyliasetimidoyyli)piperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyIi]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eemi-3-kaboksyIaatti 5 127 μί difenyylifosforyylikloridia ja 108 μ( di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 210 mg 4-nitrobent-syyli-(lR,5R,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-kaboksylaattia 2,6 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 10 samassa lämpötilassa 1 tunnin ajan. Tämän jälkeen liuos, joka sisälsi 450 mg (2S,4S)- __ 4-merkapto-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)piperatsin-l-yylikar-bonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli(pyrrolidinitrifluorimetaanisulfonaattia (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 1) 2,4 mlrssa kuivaa asetnitriiliä ja 274 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin samanikaisesti pisara kerrallaan 15 seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja seoksen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Sitten reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja konsentraatti laimennettiin etyyliasetaatilla. Laimennettu liuos pestiin vuorostaan vedellä ja natriumkloridin vesiliuoksella, jonka jälkeen se kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin sitten haihduttamalla alennetussa 20 paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 100 ml:n silikageeli 60 (Merck Art No. 9385) läpi käyttämällä etyyliasetaatin, metyleeniklori-din ja metanolin välistä 10:5:2 tilavuusseosta eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 120 mg otsikkoyhdistettä amorfisen kiinteän aineen muodossa.

25

Infrapuna-absorptiospektri (KBR), umax cm'1: 1772, 1709, 1663, 1607, 1562, 1521, 1495, 1431, 1405, 1346, 1291, 1261, 1210.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 30 1,27 & 1,28 (yhdessä 3H, kaksi dublettia, J = 7,33 & 6,84 Hz); 1,37 (3H, dubletti, J = 5,86 Hz); * 1,60 (1H, leveä singletti); 59 101226 1,86-2,08 (1H, multipletti); 2,26 & 2,31 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 2,60-2,78 (1H, multipletti); 3,25-4,28 (15H, multipletti); 5 4,65-4,80 (1H, multipletti); 5,04-5,52 (6H, multipletti); 7,41-7,67 (6H, multipletti); 8,17-8,24 (6H, multipletti).

10 1(b) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Asetimidoyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli)pyrro- lidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karbok-syylibappo 114 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikar-15 bonyyliasetimidoyyli)piperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy- li)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 6 ml:ssa tetrahydrofuraanin ja veden välisessä 2:1 tilavuusseoksessa ja hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämmössä 2 tuntia 300 mg:n 10 % p/p palla-20 dium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen katalyytti suodatettiin ja suodos pestiin 'w' dietyylieetterillä. Tuloksena saatu liuos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin käänteisfaasikolonnikromatografialla 5 ml:n Cosmo Sil 75Cjg-PREP (Nacalai Tesquen tuotteen tavaramerkki) läpi käyttämällä 20 % t/t vesipitoista metanolia eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, 25 yhdistettiin, väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 13 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 300.

30

Infrapuna-absorptiospektri (KBr): v>max cm'1: : 1753, 1603, 1447, 1385, 1284, 1251.

60 101226

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä natriumtetra-deuteroitua trimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,22 (3H, dubletti, J = 6,84 Hz); 1,30 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 5 1,58-1,68 (1H, multipletti); 2,36 (3H, singletti); 2,66-2,78 (1H, multipletti); 3,02-3,18 (2H, multipletti); 3,34-3,45 (2H, multipletti); 10 3,65-3,93 (9H, multipletti); 4,10 (1 H, tripletti, J = 8,06 Hz); 4,19-4,30 (2H, multipletti).

ESIMERKKI 2 15 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Asetimidoyylihomopiperatsm-l-yylikarbonyyli)pyrroli- din-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eemi-3-karbok- syylihappo 20

OH £HJ „ O

CH) il \ X v Y

J-N-\ '“N H NH

O COOH h 25 2(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[4-(N-4-nitrobentsyyIioksikar-bonyyliasetimidoyyli)homopiperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksi-karbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-hydroksietyyliJ-l-metyyli-l-karbapen-2-30 eemi-3-karboksylaatti 61 101226 82 μί difenyylifosforyylikloridia ja 70 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 136 mg 4-nitrobentsyyli-(1 R,5 S,6S)-6- [(1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyy li-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksy-laattia 1,7 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa 5 lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen liuos, joka sisälsi 296 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[4-(N-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)homopiperatsin-l-yy likarbonyyli)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin trifluorimetaanisul- fonaattia (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 2) 1,5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 170 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin samanaikaisesti pisara 10 kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja siten saatu seos sekoitettiin samassa lämpötilassa 3 tuntia. Sitten reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös työstettiin ja puhdistettiin samalla tavalla kuin on kuvattu esimerkissä 1(a), jolloin saatiin 148 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

15 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1773, 1709, 1657, 1607, 1561, 1521, 1496, 1429, 1405, 1346, 1305, 1278, 1210.

Ydinmagneettinen reasonanssispektri (CDCi3, 270 MHz), 6 ppm: 1.27 (3H, dubletti, J = 7,33 Hz); 20 1,37 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1.42- 2,20 (4H, multipletti); 1.28 & 2,39 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 2,60-2,79 (1H, multipletti); 3,25-4,35 (15H, multipletti); 25 4,62-4,85 (1H, multipletti); .. 5,05-5,52 (6H, multipletti); 7.42- 7,67 (6H, multipletti); 8,15-8,24 (6H, multipletti).

30 101226 2(b) (lR,5S,6S)-2 [(2S,4S)-2-(4-Asetimidoyylihomopiperatsin-1 -yylikarbonyy- li)pyrrolidin-4-yyIitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo 5 144 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[4-(N-nitrobentsyylioksikarbonyy- liasetmidoyyli)homopiperatsin-l -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)pyrrolidin-4-yy litio] -6- [(1R)-1 -hy droksietyy li] -1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3 -kaboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 7,5 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 2:1 tilavuusseosta ja hydrattiin kuplitta-10 maila vetyä liuoksen läpi huoneen lämmässä 1,5 tunnin ajan 375 mg:n 10 % p/p __ palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samalla menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 24 mg otsikko-yhdistettä pulverin muodossa.

15 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) ληΐ3χ nm: 298.

Inrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1754, 1597, 1450, 1383, 1288, 1259.

20

Ydinmagneettinen reasonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitua natriumtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,22 (3H, dubletti, J = 6,84 Hz); 1.30 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 25 1,38-1,63 (1H, multipletti); .. 1,85-2,04 (2H, multipletti); 2.31 & 2,36 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 2,67-2,82 (1H, multipletti); 3,03-3,18 (2H, multipletti); 30 3,34-3,47 (2H, multipletti); 3,64-3,96 (9H, multipletti); 4,09 (1H, tripletti, J = 8,06 Hz); 63 101226 4,19-4,30 (2H, muletipletti).

ESIMERKKI 3 5 (1 R,5S,6S)-2- [(2S,4S)-2- [(3S)-4-Asetimidoyyli-3-metyylipiperatsin-l-yylikarbonyy- li]pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo 10

OH iH3 u o H, CH

? I·-" s ** 1 οηΛ-ΓΥ \ n\ /n'v/CH)

i-l—l W h ^ T

COOH H NH

15 3(a) 4-Nitrobentsyyli-l-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-4-(N-4-nitrobentsyylioksi-karbonyyliasetimidoyyli)-3-metyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyy-20 lioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksy laatii « 85 μ£ difenyylifosforyylikloridia ja 72 μ( di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 140 mg 4-nitrobentsyyli-25 (lR,5R,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksy-.. laattia 1,8 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 290 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3S)-4-(N-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)-3-metyylipiperatsin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin trifluorimetaanisulfonaattia (valmistettu kuten 30 on kuvattu valmistuesimerkissä 3) 1,6 ml:ssa asetnitriiliä ja 182 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin samanaikaisesti pisara keraallaan seokseen samalla jäähdyttäen * jäällä ja siten saadun seoksen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän 101226 64 jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 1(a), jolloin saatiin 118 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

3(bXlR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-4-Asetimidoyyli-3-metyyUpiperatsm-l-yylikar-5 bonyy li] py rrolidin-4-yy litio] -6-[(lR)-l -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2- eemi-3-karboksyylihappo 85 mg 4-nitrobentsyyli-( 1 R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-4-(N-nitrobentsyylioksikar-bonyyliasetimidoyyli)-3-metyylipiperatsin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksi-10 karbonyy li)pyrrolidin-4-yy litio]-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2- eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 4,1 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 2:1 tilavuusseosta ja hydrattiin kuplitta-malla vetyä liuoksen läpi huoneen lämpötilassa 2 tuntia 210 mg:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin 15 samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 14 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 299.

20

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1755, 1642, 1607, 1448, 1385, 1283, 1249.

Ydinmagneettinen resonanssispektri /270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitua 25 natriumtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä satndardina), δ ppm: 1,20-1,35 (9H, multipletti); 1,51-1,72 (1 H, multipletti); 2,34 (3H, leveä singletti); 2,66-2,86 (1H, multipletti); 30 3,02-3,20 (2H, multipletti); 3,25-3,47 (2H, multipletti); 3,48-4,38 (11H, multipletti).

101226 65 ESIMERKKI 4 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Formimidoyylipiperatsin-I-yylikarbonyyIi)pyrrolidin- 4-yy litio] -6- [(1R)-1 -hy droksietyy li]-l-metyyli-l-karbapen-2-eem i-3-karboksyyli-5 happo

H ?H ίΗ>Η O

10 h L" s H Ϊ CH’ —rY"/v8

J—N-1 '—N H '-' T

o/ ncooh h nh 15 4(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyli-formimidoyyli)piperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyr-rolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-20 karboksylaatti « 98 μ( difenyylifosforyylikloridia ja 84 μ£ di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 162 mg 4-nitrobentsyyli-(1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hy droksietyy li]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksy-25 laattia 2 ml.ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitetti samassa lämpötilassa tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 337 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[4-(N-4- nitrobentsyy lioksikarbonyy liformimidoyy li)piperatsin-1 -yylikarbonyyli] -1 -(4-nitro-bentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin trifluorimetaanisulfonaattia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja seoksen 30 annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Sitten reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 1 (a), jolloin saatiin 110 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

101226 66

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1774, 1709, 1660, 1604, 1520, 1345.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 5 1,26 & 1,28 (yhdessä 3H, kaksi dublettia, J = 7,3 Hz); 1,36 (3H, dubletti, J = 6,4 Hz); 1,80-2,10 (1H, multipletti); 2,60-2,80 (1H, multipletti); 3,25-4,30 (15H, multipletti); 10 4,70-4,85 (1H, multipletti); 5.15- 5,53 (6H, multipletti); 7,40-7,70 (6H, multipletti); 8.15- 8,26 (6H, multipletti); 8,48 & 8,53 (yhdessä 1H, kaksi singlettiä).

15 4(bXlR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Forminiidoyylipiperatsin-l-yylikarbonyyU)pyrro- lidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbpen-2-eemi-3-karbok- syylihappo 20 98 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Formimidoyylipiperatsin-l- yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2- « eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 5 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 2:1 tilavuusseosta ja hydrattiin kuplitta-malla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa 2 tuntia 250 mg:n 10 % p/p palladium-25 puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlai-. sella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 12 mg otsikkoyh- i distettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 30 299.

101226

SI

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1756, 1711, 1647, 1589, 1448, 1383, 1248.

Ydinmagneettinen resonanssispsektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitua 5 natriumtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,21 (3H. dubletti, J = 7,3 Hz); 1,30 (3H, dubletti, J = 6,4 Hz); 1,63-1,74 (1H, multipletti); 2,70-2,82 (1H, multipletti); 10 2,70-2,82 (1H, multipletti); 3,06-3,26 (2H, multipletti); 3,34-3,46 (2H, multipletti); 3,55-3,90 (9H, multipletti); 4,14-4,31 (3H, multipletti); 15 7,92 (1H, singletti).

ESIMERKKI 5 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Formimidoyylihoinopiperatsin-l-yylikarbonyyIi)pyrro-20 lidin-4-yy litio] -6- [(1R)-1 -hy droksietyy li] -1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karbok- syylihappo 25 OH CH, q H-.J H H .....H ^ y_M _I \-\J H ^ ' ||

S\ NH

O COOH h 30 101226 68 5(a) 4-NitrobentsyyIi-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikar-bonyyUformimidoyyli)homopiperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksi-karbonyy li)pyrrolidin-4-yy litio] -6- [(1R)-1 -hyd roksietyy li] -1 -metyyli-1 -karbapen- 2-eemi-3-karboksylaatti 5 90 μί difenyylifosforyylikloridia ja 77 μ£ di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 150 mg 4-nitrobentsyyli-l-(1 R,5 S,6S)-6- [(1R)-1 -hydroksietyy li] -1 -metyy li-2-okso-1 -karbapenaami-3 -karboksy-laattia 1,9 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa 10 lämpötilassa tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 316 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyyli)homopiperatsin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyylipyrrolidinintrifluorimetaanisulfonaattia[valmistettukuten on kuvattu valmistusesimerkissä 5(1)] 1,7 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 195 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen 15 samalla jäähdyttäen jäällä ja seoksen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 105 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

20 Infrapuna-absorptiospektri (JBr), umax cm'1: 1773,1709,1657,1601,1521,1346,1209,1161.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1,22-1,38 (6H, multipletti); 25 1,80-2,18 (3H, multipletti; . 2,60-2,81 (1H, multipletti); : 3,22-4,30 (15H, multipletti); 4,60-4,72 (1H, multipletti); 5,10-5,53 (6H, multipletti); 30 7,39-7,68 (6H, multipletti); 8,14-8,25 (6H, multipletti); 8,32-8,57 (1H, multipletti).

101226 69 5(b) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Formimidoyylihomopiperatsin-l-yylikarbonyy-li)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-inetyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo 5 89 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyy- liformimidoyyli)homopiperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 4,5 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 2:1 tilavuusseosta ja hydrattiin kuplittamal-10 la vetyä liuoksen läpi huoneen lämpötilassa 2 tuntia 230 mg:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 13 mg otsikkoyh-distettä pulverin muodossa.

15 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) λιη3χ nm: 298.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1754, 1706, 1638, 1588, 1383.

20 ^ . . Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, DO, käyttämällä tetradeuteroitua natriumtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 1,30 (3H, dubletti, J = 6,4 Hz); 25 1,45-1,62 (1H, multipletti); 1,90-2,02 (2H, multipletti); *- 2,67-2,83 (1H, multipletti); 3,03-3,20 (2H, multipletti); 3,30-3,47 (2H, multipletti); 30 3,60-3,97 (9H, multipletti); 4,02-4,16 (1H, multipletti); 4,20-4,31 (2H, multipletti); 101226 70 7,84, 7,93 & 7,96 (yhdessä 1H, kolme singlettiä).

ESIMERKKI 6 5 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-4-Formimidoyyli-3-metyylipiperatsin-l-yyIikar-bonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyIihappo 10

OH CH3 λ H

H'J H H JL,>‘Hs H II y—\ςΧΗ}

CHf'-Tr' N M

n_j^ '—N H

15 θ' COOH h NH

6(a)4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-4-(N-4-nitrobentsyylioksikar-20 bonyyIiformimidoyyli)-3-metyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyIi)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 83 μί difenyylifosforyylikloridia ja 17 μ( di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara 25 kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 138 mg 4-nitrobentsyyli-(1 R,5S,6S)-6-[(lR)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksy-laattia 1,7 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 290 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3S)-4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyyli)-3-metyylipiperatsin-l-30 yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin trifluorimetaanisul-fonaattia (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 6) 1,5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 179 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara 101226 71 kerrallaan tuloksena saatuun liuokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja siten saadun seoksen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menettelyllä kuin on kuvattu esimerkissä 1(a), jolloin saatiin 108 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

5 6(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-4-Forminiidoyyli-3-metyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyIi]-l-metyyIi-l-karba-pen-2-eemi-3-kaboksyyIihappo 10 87 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-4-(N-4-nitrobentsyylioksikar- bonyyliformimidoyyli)-3-metyylipiperatsin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentyylioksi-karbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio} -6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 4,5 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 2:1 tilavuusseosta ja hydrattiin kuplitta-15 maila vetyä liuoksen läpi huoneen lämpötilassa 2 tuntia 220 mg:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Raktioseos työstettiin sitten ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 16 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

20 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: _ 299.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1754, 1705, 1645, 1591, 1447, 1386, 1258.

25

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitua ' natriumtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standradina), δ ppm: 1,17-1,43 (9H, multipletti); 1,52-1,73 (1H, multipletti); 30 2,66-2,87 (1H, multipletti); 3,01-3,26 (2H, multipletti); 3,33-3,48 (2H, multipletti); 101226 72 3,48-4,43 (11 H, multipletti); 7,84 & 7,95 (yhdessä 1H, kaksi singlettiä).

ESIMERKKI 7 5 (lR,5S,6S)-2-](2S,4S)-2-(2-Metyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eenii-3-karboksyyliha-pon hydrokloridi 10 OH CHj 0 CH,

HSU?i^s JUA/K cKi/ntYT λ N\ /N_H

15 An—^ '—N H — HC/

O COOH H

20 7(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-}(2S,4S)-2-[2-metyyli-4-(4-nitrobeiitsyylioksi- karbonyyli)-l-piperatsinyyIikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrro- — lidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eeini-3-karbok- sylaatti 25 0,67 ml difenyylifosforyylikloridia ja 0,56 ml di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä seokseen, joka sisälsi 1,05 g 4-nitrobent- ♦ syyli-( 1 R,5 S,6S)-6- [(1R)-1 -hydroksetyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksylaattia 10 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 1,98 g (2S,4S)-4-merkapto-2-[2-30 metyyli-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobent-syylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 7) 10 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 0,56 ml di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten 101226 73 samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen lämpötilassa 2-10 °C ja siten saatua seosta sekoitettiin 90 minuutin ajan samalla jäähdyttäen jäällä; sitten sen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla. Laimennettu liuos 5 pestiin vuorostaan vedellä ja natriumkloridin vesiliuoksella. Sitten etyyliasetaattiliuos kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin poistettiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 250 ml:n silikageelin 60 (Merck Art n:o 9385) läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja me-tanolin välistä 95:5 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 2,58 g otsikkoyhdistettä 10 amorfisen kiinteän aineen muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1775, 1708, 1655, 1606, 1522, 1434, 1346.

15 Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1,28 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,36 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,06-1,47 (3H, multipletti); 1,66-2,06 (1H, multipletti); 20 2,47-5,15 (17H, multipletti); . 5,20-5,52 (6H, multipletti); 7,43-7,52 (4H, multipletti); 7,65 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,23 (4H, kaksi dublettia, J = 8,29 Hz); 25 8,17-8,25 (2H, multipletti).

: 7(b) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(2-Metyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli)pyrrolidin-4- yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyliha-pon hydrokloridi 2,48 g 4-nitrobentsyyli-( 1 R,5 S,6S)-2- {(2S,4S)-2-[2-metyyli-4-(4-nitrobentsyylioksi-karbonyyli)-1 -piperatsinyy likarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4- 30 101226 74 yylitio}-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 30 ml:aan tetrahydrofu-raanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta ja sitten 2,9 ml IN vesipitoista kloorivety-happoa lisättiin ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa 5 2,5 tuntia 2,5 g:n 10 % p/p palladium kivihiilen läsnäollessa. Katalyytti suodatettiin pois ja suodos pestiin dietyylieetterillä. Tuloksena saatu vesiliuos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin käänteisfaasikolonnikromatogra-fialla 125 ml:n Cosmo Sil 75C18-PREP (yhtiön Nacalai Tesque tuotteen tavaramerkki) läpi käyttämällä vettä eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, 10 yhdistettiin, väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin __ saatiin 440 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1760, 1655, 1593, 1447, 1384, 1287.

15

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitua natriumtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,28 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 20 1,34-1,51 (3H, multipletti); 1,92-2,07 (1H, multipletti); — 2,99-3,55 (9H, multipletti); 3,69-4,65 (6H, multipletti); 4,72-4,95 (1H, multipletti).

25

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 296.

(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(3-Metyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli]pyrrolidin-4- yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyliha- 5 pon hydrokloridi ESIMERKKI 8 101226 75 OH £HJ O CHj ίο ”χΗ X r\

en/'—fY /N H

J—N-\ '“N H HC/

O COOH H

15 8(a) 4-Nitrobentsyyli-( 1 R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2- [3-metyyli-4-(4-nitrobentsyylioksi- karbonyyli)-l-piperatsinyylikarbon>ryli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrro-Hdin-4-yyIitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karbok-sylaatti 20 0,60 ml difenyylifosforyylikloridia ja 0,51 ml di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 0,96 g 4-nitrobent-syyli-( 1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksylaattia 10 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 40 minuuttia. Liuos, joka sisälsi 1,55 g (2S,4S)-4-merkapto-2- 25 [3-metyyli-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylijpyrrolidiiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmis-*" tusesimerkissä 8) 20 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 0,46 ml di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen lämpötilassa 2-7 °C ja seoksen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos 30 väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla. Laimennettu liuos pestiin vuorostaan vedellä ja natriumkloridin vesiliuoksella, jonka jälkeen se kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja liuotin poistettiin 101226 76 tislaamalla alennetussa apineessa. Tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikroma-tografialla 250 ml:n silikageelin 60 (Merck n:o 9385) läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 95:5 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 1,98 g otsikkoyhdis-tettä amorfisen kiinteän aineen muodossa.

5

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), x>max cm’1: 1775, 1706, 1659, 1607, 1522, 1430, 1406, 1346.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 10 1,16-1,38 (6H, multipletti); 1,36 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1.80- 2,07 (1H, multipletti); 1.80- 2,07 (1H, multipletti); 2,63-4,81 (17H, multipletti); 15 5,09-5,52 (6H, multipletti); 7,27-7,52 (4H, multipletti); 7,65 (2H, dubletti, J = 8,30 Hz); 8,22 (4H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,16-8,25 (2H, multipletti).

20 8(b) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(3-Metyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli]pyrrolidin-4- -yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyliha-pon hydrokloridi 25 1,97 g 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[3-metyyli-4-(4-nitrobentsyylioksi- karbonyy li)-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-: yylitio} -6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 40 ml:aan tetrahydrofu-raanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta ja sitten lisättiin 2,3 ml IN vesipitoista 30 kloorivetyhappoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa 2 tuntia 2,0 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Katalyytti suodatettiin pois ja suodos pestiin dietyylieetterillä. Sitten se väkevöitiin haihduttamalla alennetus- 101226 77 sa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin käänteisfaasikolonnikroma-tografialla 100 ml:n Cosmo Sil 75Cj8-PREP (yhtiön Nacalai Tesque tuotteen tavaramerkki) läpi käyttämällä vettä eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyh-distettä, yhdistettiin, väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, 5 jolloin saatiin 320 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), Omax cm'1: 1760, 1660, 1594, 1453, 1386, 1263.

10 Ydinmagneettinen resosnanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitua natriiimtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 7,33 Hz); 1,28 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,36-1,40 (3H, multipletti); 15 1,97-2,07 (1H, multipletti); 3,01-3,67 (9H, multipletti); 3,77-4,53 (6H, multipletti); 4,72-4,95 (1H, multipletti).

20 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 296.

a (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(2S)-2-Metyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli)pyrrolidin-4- yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyliha- 5 pon kloorivety ESIMERKKI 9 101226 78 a,f„ H fJ.H H 9 H.., £*’ 10 /\j s JL. /—\ CH —Γ|Γ \ Λ^ν n-h ν.ΛΛ„ N\ HC/

O COOH H

15 9(a) 4-NitrobentsyyIi-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(2S)-2-metyyli-4-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 20 57 μί difenyylifosforyylikloridia ja 48 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 89 mg 4-nitrobentsyyli-(1 R>5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksy-laattia 1,0 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa 25 lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 168 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-• [(2S)-2-metyyli-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4- : · nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmis- tusesimerkissä 9) 0,5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 48 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä. Seosta 30 sekoitettiin sitten samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistet- 101226 79 tiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 7(a), jolloin saatiin 205 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

9(b) (1 R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2- [(2S)-2-Metyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli] pyrroli-5 din-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karbok-syylihapon hydrokloridi 205 mg 4-nitrobentsyyli-( 1 R,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(2S)-2-metyyli-4-(4-nitrobentsyy-1 ioksikarbonyy li)-1 -piperatsinyylikarbonyy li]-1 -(4-nitrobentsyy lioksikarbonyy li)pyr-10 rolidin-4-yylitio]-6-[( 1R)- 1-hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karbok-sylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 3 mitään tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta, jonka jälkeen 240 μί IN vesipitoista kloorivety happoa lisättiin ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa 2 tuntia 250 mgtn 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnä-15 ollessa. Reaktioseos työstettiin sitten ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 7(b), jolloin saatiin 30 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 20 296.

infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm"1: 1759, 1653, 1591, 1447, 1384, 1287.

25 Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitua natriumtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: • 1,21 (3H, dubletti, J = 6,83 Hz); 1,28 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,35 & 1,50 (yhdessä 3H, kaksi dublettia, J = 6,83 Hz); 30 1,88-2,11 (1H, multipletti); 2.97- 2,11 (1H, multipletti); 2.97- 3,60 (8H, multipletti); 101226 80 3,47 (1H, dublettien dubletti, J = 6,35 & 2,93 Hz); 3,63-3,90 (2H, multipletti); 4,03-4,13 (1H, multipletti); 4,20-4,29 (2H, multipletti); 5 4,33-4,98 (2H, multipletti).

ESIMERKKI 10 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-](2R)-2-Metyyli-l-piperatsinyylikarbonyylilpyrrolidin-4-10 yyIitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyylil-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyliha-pon hydrokloridi 15 H ?H |H,h 9 9H3 / 15 h"Xh ¥ s ^ JL .....

CH3/Ns—N-H

J—N-^ N H / HC/ O COOH h 20 10(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(2R)-2-metyyli-4-(4-nitrobent- — syylioksikarbonyyli)-2-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 25 37 μί difenyylifosforyylikloridia ja 31 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara • kerrallaan liuokseen, joka sisälsi 58 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l- hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksylaattia 1,0 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin 30 ajan. Liuos, joka sisälsi 109 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[(2R)-2-metyyli-4-(4-nitrobent- syylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 10) 0,5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 31 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten 101226 81 samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen lämpötilassa 5-10 °C ja siten saatua seosta sekoitettiin 30 minuuttia samalla jäähdyttäen jäällä, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 7(a), jolloin saatiin 132 mg 5 otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

10(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(2R)-2-Metyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli]pyr-roIidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihapon hydrokloridi _ 10 132 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-}(2S,4S)-2-[(2R)-2-metyyli-4-(4-nitrobentsyy-Iioksikarbonyyli-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyr-rolidin-4-yy Iitio} -6-[(l R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karbok-sylaattia [valmistettu kuten kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 3 ml:aan tetrahyd-15 rofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta, jonka jälkeen 160 μΐ IN vesipitoista kloorivetyhappoa lisättiin ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa 2 tuntia 150 mg:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 7(b), jolloin saatiin 23 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

20 w Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 296.

(lR£S,6S)-2- {(2S,4S)-2- [(3S)-3-Metyy li-1 -piperatsinyy likarbonyy li] py rrolidin-4- yylitio}-6-l(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eeini-4-karboksyyliha- 5 pon hydrokloridi ESIMERKKI 11 101226 82 OH CH3 o Hx H'"J H H 1 ..." H Ϊ

10 N“H

CH3 1 Γ f \ / Ή \_/ J—N-\ '“N H - HC/ O COOH h 15 11(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-metyyli-4-(4-nitrobent- syy lioksikarbonyy li)-1 -piperatsinyy likarbonyyli] -1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy- li)pyrrolidin-4-yylitio)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 20 50 μί difenyylifosforyylikloridia ja 43 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 80 mg 4-nitrobentsyyli-(1 R,5S,6S)-6-[(1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksy-laattia 1,0 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 50 minuuttia. Liuos, joka sisälsi 130 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3S)-3- 25 metyyli-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 11) 1,5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 39 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan liuokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 2 tuntia, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistet- 30 tiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 8(b), jolloin saatiin 170 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

11(b) (1 R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2-[(3S)-3-Metyy li-1 -piperatsinyy likarbonyy li] py r- rolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eemi-3- kaboksyylihapon hydrokloridi 101226 83 5 170 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-metyyli-4-(4-nitrobentsyy- lioksikarbonyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyr-rolidin-4-yy litio} -6- [(1R)-1 -hydroksietyy li]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karbok-sylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin tetrahydro-furaaninja veden 1:1 väliseen tilavuusseokseen, jonka jälkeen 0,19 ml IN vesipitoista 10 kloorivetyhappoa lisättiin ja seosta hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi 170 mg:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 8(b), jolloin saatiin 25,0 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

15 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 296.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), Xmax cm'1: 1761, 1660, 1594, 1453, 1385, 1262.

20

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitua natriumtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,20 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,28 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 25 1,36-1,40 (3H, multipletti); 1,99-2,07 (1H, multipletti); • 3,04-3,63 (9H, multipletti); 3,76-4,50 (6H, multipletti); 4,72-4,93 (1H, multipletti).

30 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-3-Metyyli-l-piperatsinyylikarbonyyIi]pyrrolidin-4- yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metytyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyliha- 5 pon hydrokloridi ESIMERKKI 12 101226 84 OH CH, o H CH, 10

CH,/ NYY Y /-H

/J—N-^ '“N H N-' hc,

O COOH H

15 12(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-3-metyyli-4-(4-nitrobent-syylioksikarbonyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 20 55 μί difenyylifosforyylikloridia ja 47 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara — kerrallaan liuokseen, joka sisälsi 87 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-l -karbapenaami-3-karboksylaattia 1,0 ml :ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin 25 ajan. Liuos, joka sisälsi 145 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3R)-3-metyyli-4-(4-nitrobent-. syylioksikarbonyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy- ·* li)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 12) 2,0 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 42 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja seosta sekoitettiin samassa 30 lämpötilassa yhden tunnin ajan, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanalaisella 101226 85 menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 8(a), jolloin saatiin 175 mg otsikkoyhdistet-tä amorfisen kiinteän aineen muodossa.

12(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-3-Metyyli-l-piperatsinyyIikarbonyyli]pyr-5 rolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eemi3-karbok-syylihapon hydrokloridi 175 mg 4-nitrobentsyyli-(l R,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-3-metyyli-4-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-10 pyrrolidini-4-yylitio} -6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3- karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 35 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta, jonka jälkeen lisättiin 0,20 ml IN vesipitoista kloorivetyhappoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa 2 tuntia 175 mg:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnä-15 ollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 8(b), jolloin saatiin 28,0 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 20 296.

ESIMERKKI 13 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(trans-2,5-Dimetyyli-l-piperatsinyylikarbonyyIi)pyrroli-25 din-4-yy litio]-6- [(1R)- l-hydroksietyyli]-l-metyyli- l-karbapen-2-eemi-3-karbok- syylihapon hydrokloridi

4"»i> » S

CH3 —γ |p /C N N_H

J—y-!1 V_M' 'H N-( HCl O NCOOH h 'tHj 86 101226 13(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[trans-2,5-dimetyyli-4-(4-nitro-bentsyylioksikarbonyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)pyrrolidin-4-yyIitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyIi]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 5 150 μί difenyylifosforyylikloridia ja 127 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 248 mg (1R,5S,6S)- 6-[(l R)-1 -hydroksietyyli]-l -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksyylihappoa 3 mkssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilas-10 sa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 533 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[trans-2,5- _ dimetyyli-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitro-bentsyy lioksikarbonyy li)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkis-sä 13) 2,5 mkssa kuivaa asetnitriiliä ja 132 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen lämpötilassa 0-5 °C ja seosta sekoi-15 tettiin kaksi tuntia samalla jäähdyttäen jäällä, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli jääkaapissa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 7(a), jolloin saatiin 281 mg otsikkoyhdistet-tä pulverin muodossa.

20 13(b) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[trans-2,5-Dimetyyli-l-piperatsinyylikarbonyy- li)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihapon hydrokloridi 281 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[trans-2,5-dimetyyli-4-(4-nitro-25 bentsyylioksikarbonyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyyli)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy- , li)pyrrolidin-4-yylitio} -6-[( 1R)-1 -hydroksi etyyli] -1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3- ·' karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 6 mkssa tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta, jonka jälkeen 328 μί IN vesipitoista kloorivetyhappoa lisättiin ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi 30 huoneen lämpötilassa 2 tuntia 0,3 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa.

Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin 101226 87 on kuvattu esimerkissä 7(b), jolloin saatiin 29 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 5 296,5.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), omax cm"1: 1762, 1656, 1592, 1455, 1386, 1139.

10 Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitua natriumtrimetyylisilyylpropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,20 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,28 (3H, dubletti, J - 6,35 Hz); lm35 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 15 1,41 & 1,46 (yhdessä 3H, kaksi dublettia, J = 6,84 Hz); 1,92-2,08 (1H, multipletti); 2,96-3,65 (6H, multipletti); 3,47 (1H, sublettien dubletti, J = 6,35 & 2,93 Hz); 3,76-3,90 (3H, multipletti); 20 4,00-4,15 (1H, multipletti); 4,20-4,41 (3H, multipletti); 4,75-4,88 (1H, multipletti).

* (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(cis-3,5-Dimetyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli)pyrrolidin- 4-yy litio] -6- [(1 R)-l -hydroksietyy!i]-l -metyyli-l -karbapen-2-eemi-3-karboksyyliha- 5 pon hydrokloridi ESIMERKKI 14 101226 88 OH CH3 0 CH3 Π"4 f s JL"“ s ** II /-(

CHTT /N“H

I_I V_J H N-/ HC/ 10 J—N-\ \ \ O COOH h ch3 14(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(cis-3,5-dimetyyIi-1 -piperatsinyy-likarbonyyIi)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-15 hydroksietyy li] -1 -metyyli-l-karbapen-2-ecmi-3-karboksyIaatti 92 μί difenyylifosforyylikloridia ja 78 μ( di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 152 mg 4-nitrobetnsyyli- (lR,5S,6S)-6-[(lR)-1 -hydroksietyyli]-l -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksy- 20 laattia 2 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen 176 μί di-isopropyylietyyliamiinia ja liuos, joka sisälsi 230 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-(cis-3.5-dimetyyli-1 -piperatsinvvli- karbonyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 14) 1,8 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin samanikaisesti 25 pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja seosta sekoitettiin samassa . lämpötilassa 5 tuntia, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli jääkaapissa. Reak- * *' tioseos vapautettiin sitten liuottimesta haihduttamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös sekoitettiin natriumvetykarbonaatin vesiliuokseen ja uutettiin sitten etyyliasetaatilla. Uute kuivattiin vedettömän magneisumsulfaatin avulla ja 30 liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 8(a), jolloin saatiin 224 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

89 101226 14(b) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(cis-3,5-Dimetyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli)pyr-rolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihapon hydrokloridi 5 Kaikki 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(cis-3,5-dimetyyli-1 -piperatsinyyli-karbonyyli]-l -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[( 1R)-1 -hydrok-sietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaatista, valmistettu kuten onkuvattu vaiheessa (a) edellä, liuotettiin 4 mlraan tetrahydrofuraanin ja veden välisessä 1:1 tilavuusseosta, jonka jälkeen 261 μί IN vesipitoista kloorivetyhappoa lisättiin ja seos 10 hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa 2 tuntia 0,2 g:n 10 % p/p palladium kivihiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 8(b), jolloin saatiin 27 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

15 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 296,5.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1761, 1661, 1599, 1459, 1386, 1268.

20

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitua natriumtrimetyylisilyylpropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,20 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,28 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 25 1,35-1,39 (6H, multipletti); ; 1,96-2,06 (1H, multipletti); 2,72-3,53 (9H, multipletti); 3,75-4,29 (5H, multipletti); 4,53-4,94 (1H, multipletti).

30 ESIMERKKI 15 101226 90 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-l-homopiperatsinyylikarbonyy-li]pym>lidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-5 karboksyylihapon hydrokloridi OH ξΗ3 u O ^

10 HJTh h L··1sJkAO

CHj jj_X oh q Έ0ΟΗ 'h HC/ 15 15(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-4’-nitrobentsyyIioksikar-bonyylioksietyyli)-l-homopiperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyIi)pyrroIidin-4-yyIitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 20 460 μ£ difenyylifosforyylikloridia ja 390 μ( di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 761 mg 4-nitrobent-syyli-( 1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1-hydroksietyyli]-1-metyyli-2-okso-1-karbapenaami-3-kar-boksylaattia 10 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 25 samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen 780 μl di-isopropyylietyyliamiinia ja liuos, joka sisälsi 2,2 g (2S,4S)-4-merkapto-2-{4-([2.(4-nitrobentsyylioksi-“ karbonyyli)oksietyyli]-l-homopiperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyyluoksikar- bonyyli)pyrrolidinin trifluorimetaanisulfonaattia (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 15) 5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin samanaikaisesti pisara 30 kerrallaan seokseeen samalla jäähdyttäen jäällä ja seosta sekoitettiin yön yli samassa lämpötilassa. Liuotin poistettiin sitten tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena ’ saatu jäännös sekoitettiin natriumvetykarbonaatin vesiliuokseen. Sitten seos uutettiin 101226 91 etyyliasetaatilla. Uute kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonni-kromatografialla 50 g:n silikageelin (yhtiön Merck tuote 230-400 seulamitta) läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 9:1 tilavuusseosta eluenttina. Ne 5 fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 857 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1768, 1750, 1710, 1649, 1522, 1347, 1260.

10

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 1,27 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 1,36 (3H, dubletti, J = 6m0 Hz); 1,80-2,05 (3H, multipletti); 15 2,40-3,00 (7H, multipletti); 3,23-3,78 (7H, multipletti); 4,00-4,29 (5H, multipletti); 4,61-4,77 (1H, multipletti) 5,03-5,53 (6H, multipletti); 20 7,42-7,67 (6H, multipletti); 8,16-8,25 (6H, multipletti).

15(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-l-homopiperatsinyylikar-bonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-25 eemi-3-karboksyylihapon hydrokloridi 350 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-4’.nitrobentsyylioksikar-bonyylioksietyyli)-1 -homopiperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)pyrrolidin-4-yylitio} -6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3 -30 karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 20 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 3:2 tilavuusseosta, jonka jälkeen lisättiin 0,33 ml IN vesipitoista kloorivetyhappoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen 101226 92 läpi huoneen lämpötilassa 2 tuntia 0,5 g :n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa.

Tämän jälkeen katalyytti suodatettiin pois ja suodos uutettiin dietyylieetterillä. Jäljelle jäävä vesikerros väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin Lobar kolonnikromatografialla (yhtiön Merck tuote, LiChroprep 5 RP-8, koko B) käyttämällä vettä eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikko- yhdistettä, yhdistettiin, väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoi-tiin, jolloin saatiin 105 mg otsikkoyhdistettä värittömän pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 10 1759, 1652, 1595, 1460, 1378, 1286.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitus natriumtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standradina), 6 ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 15 1,28 (3H, dubletti, J = 6,4 Hz); 1,96-2,10 (1H, multipletti); 2,25-2,34 (2H, multipletti); 3,00-3,15 (1H, multipletti); 3,33-3,54 (6H, multipletti); 20 3,66-3,84 (7H, multipletti); 3,91-3,96 (2H, multipletti); — 4,04-4,13 (1H, multipletti); 4,20-4,29 (2H, multipletti); 4,81-4,91 (1H, multipletti).

25 • · ESIMERKKI 16 101226 93 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Karbamoyylimetyyli-l-homopiperatsinyylikarbonyy-li)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-5 karboksyylihapon hydrokloridi

0H m O

H öJL-‘hs L I

10 CH3^—^Xy' _^N^CONH2 COOH Nh HC/ 15 16(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-karbamoyylimetyyli-l-homopi- peratsinyylikarbonyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yyIitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 2,45 ml difenyylifosforyylikloridia ja 2,05 ml di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin 20 pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 3,98 g 4-nitrobent-syy li-( 1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksylaattia 40 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen 1,85 ml di-isopropyylietyyliamiinia ja liuos, joka sisälsi 4,88 g (2S,4S)-4-merkapto-2-(4-nitrobentsyylioksikar-25 bonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 16) 30 ml:ssa .. kuivaa asetnitriiliä lisättiin samanikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyt täen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Sitten reaktioseos laimennettiin 130 ml:lla asetnitriiliä ja 200 ml:lla vettä, jonka jälkeen lisättiin 1,85 g natriumvetykarbonaattia. Siten saatu seos puhdistettiin kään-30 teisfaasikolonnikromatografialla 500 g:n Cosmo Sil 75C18-PREP (yhtiön Nacalai Tesquel tuotten tavaramerkki) läpi käyttämällä 50 % t/t vesipitoista asetnitriiliä 101226 94 eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 6,05 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 5 1772, 1708, 1521, 1346.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), δ ppm: 1,14-1,20 (6H, multipletti); 10 1,59-1,75 (3H, multipletti); 2,30-3,02 (6H, multipletti); 3,13-3,38 (2H, multipletti); 3,42-3,70 (5H, multipletti); 3,75-4,00 (2H, multipletti); 15 4,10-4,28 (2H, multipletti); 4,68-4,83 (1H, multipletti); 5,05-5,49 (6H, multipletti); 7,08-7,22 (2H, multipletti); 7,54-7,74 (4H, multipletti); 20 8,20-8,25 (4H, multipletti).

16(b) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Karbamoyylimetyyli-l-homopiperatsinyylikar-bonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihapon hydrokloridi 25 200 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-karbamoyylimetyyli-l-homo-‘ piperatsinyylikarbonyyli)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6- [(1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 20 mkaan tetrahydrofuraanin ja 30 veden välistä 1:1 tilavuusseosta, jonka jälkeen seokseen lisättiin 0,18 ml IN vesipitoista kloorivetyhappoa, joka sitten hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen : lämpötilassa 2 tuntia 0,3 g:n 10 % p/p palladium -puuhiilen läsnäollessa. Katalyytti 101226 95 suodatettiin sitten pois ja suodos uutettiin dietyylieetterillä. Vesikerros väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonni-kromatografialla Lobar kolonnin (Merck yhtiön tuote, LiChroprep RP-8, koko B) läpi käyttämällä vettä eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin, 5 väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 30 mg otsikkoyhdistettä värittömän pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 297.

10 ESIMERKKI 17 (1 R,5S,6S)-2- [(2S,4S)-2-(4-Asetimidoyy lipiperatsin-1 -yy likarbonyy li)py rrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyliha-15 pon hydrokloridi

rr OH CHj O

H» f s L I

20 CH3 \ Y /VC* J—N-\ '—N H N' Il HC/

O COOH h NH

17(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(N-4-nitrobentsyyIioksikar-25 bonyyIiasetimidoyyli)piperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikar- .. bonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyIi)-l-metyyli-l-karbapen-2- eemi-3-karboksylaatti 1,45 ml difenyylifosforyylikloridia ja 1,22 ml di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin 30 pisara kerrallaan samalla jäädhyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 2,43 g 4-nitrobent- syyli-( 1 R,5S,6S)-[(1 R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karbok-sylaattia 25 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa 101226 96 lämpötilassa 30 minuuttia. Liuos, joka sisälsi 3,99 g (2S,4S)-4-merkapto-2-[4-(N-4-mtrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyylijpiperatsin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobent-syylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 17) 15 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 1,22 ml di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten 5 samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja seosta sekoitettiin yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla. Laimennettu liuos pestiin vuorostaan natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella. Etyyliasetaattikerros kuivattiin sitten vedettömän natriumsulfaatin avulla ja 10 liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kolonnikro-matografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja asetnitriilin välistä 6:4 tilavuusseosta eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 5,17 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

15 Tämän yhdisteen spektritiedot ovat identtiset sen yhdisteen tietojen kanssa, joka on valmistettu kuten on kuvattu esimerkissä 1(a).

17(b) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Asetimidoyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli)pyr-rolidin-4-yy Iti o] -6- [(1R)-1 -hy d roksietyy li] -1 -metyyIi-l-karbapen-2-eemi-3-karbok-20 syylihappo 5,10 g 4-nitrobentsyyli-( 1 R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyy-liasetimidoyyli)piperatsin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrro-lidin-4-yy Itiö} -6-[(1R)-1 -hydroksietyyli]-l -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksy-25 laattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 100 mkaan .. tetrahydrofuraanin ja veden välistä 6:4 tilavuusseosta ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa 2,5 tuntia 5,0 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Katalyytti suodatettiin pois ja suodos pestiin dietyylieetterillä ja väkevöitiin sitten haihduttamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös puhdistettiin 30 käänteisfaasikromatografialla 250 ml:n Cosmo Sil 75C18-PREP (yhtiön Nacalai Tesque tuotteen tavaramerkki) läpi käyttämällä vettä, 5 % t/t vesipitoista asetnitriiliä ja 7 % t/t vesipitoista asenitriiliä mainitussa järjestyksessä eluenttina. Ne fraktiot, 101226 97 jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin, väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 940 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Tämän yhdisteen spektritiedot ovat identtiset sen yhdisteen tietojen kanssa, joka 5 valmistettiin esimerkissä 1(b) kuvatulla tavalla.

17(c) (1 R,5S,6S)-2- [(2S,4S)-2-(4-AsetimidoyyIipiperatsin-l-yyIikarbonyyli)pyr-rolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyH]-l-metyyli-l-karbapen-2-eeini-3-karboksyylihapon kloorivety 10 200 mg (R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-asetimidoyylipiperatsin-1 -yylikarbonyyli)pyrroli-din-4-yy litio] -6- [(1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyyli-happoa [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (b) edellä], jonka jälkeen lisättiin 0,43 ml IN vesipitoista kloorivetyhappoa. Tuloksena saatu seos työstettiin ja puhdistettiin 15 käänteisfaasikromatografialla 30 ml:n Cosmo Sil 75Cj8-PREP (yhtiön Nacalai Tesque tuotteen tavaramerkki) läpi käyttämällä vettä eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 149 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

20 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm*1: 1756, 1656, 1620, 1450, 1382, 1252.

»

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 297.

25 .. Ydinmagneettinen resonanssispektri (D20, 270 MhZ), δ ppm: : 1,21 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 1,29 (3H, dubletti, J = 6,4 Hz); 1,97-2,07 (1H, multipletti); 30 2,35 & 2,36 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 3,02-3,14 (1H, multipletti); ; 3,31-3,43 (1H, multipletti); 101226 98 3,45-3,53 (2H, multipletti); 3,68-3,88 (9H, multipletti); 4,03-4,12 (1H, multipletti); 4,20-4,30 (2H, multipletti); 5 4,82-4,90 (1H, multipletti).

ESIMERKKI 18 (lR,5S,6S)-2-}(2S,4S)-2-[(3S)-3-Aminopyrrolidin-l-yylikarbonyyli]pyrroIidin-4-10 yylitio}-6- [(1 R)-l -hydroksietyy li] -1-metyy li-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyy liha- _ pon hydrokloridi 15

OH ?h3 O

H"'I 9 ö L·"" s I /--v H

Π-Λ W'H

o COOH H

20 18(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-(4-nitrobentsyyIioksikar-bonyyli)aminopyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyr-25 rolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-3-karbapen-2-eemi-3- .. karboksylaatti 453 μί difenyylifosforyylikloridia ja 381 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 760 mg 4-nitrobent-30 syyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-kar- boksylaattia 6 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 1,26 g (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3S)- 101226 99 3 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)aminopyrrolidin-1 -yylikarbonyyli] -1 -(4-nitrobent-syylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 18) 5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 364 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja seosta 5 sekoitettiin samassa lämpötilassa 3 tuntia. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös laimennettiin 70 ml etyyliasetaatilla. Laimennettu liuos pestiin sitten vuorostaan vedellä natriumvetykarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella mainitussa jäijestyksessä. Pesty orgaaninen liuos kuivattiin sitten vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa 10 paineessa. Tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä metanolin ja etyyliasetaatin välistä 4:96 välistä tilavuusseosta eluent-tina, jolloin saatiin 1,01 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 15 3377, 1774, 1713, 1648, 1607, 1521, 1346, 852, 736.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), δ ppm: 1,15-1,18 (6H, multipletti); 20 1,70-2,20 (2H, multipletti); _ 2,77-2,85 (1H, multipletti); ; 3,12-4,27 (14H, multipletti); 4,49-4,64 (1H, multipletti); 5,05-5,49 (7H, multipletti); 25 7,48-7,82 (6H, multipletti); 8,17-8,25 (6H, multipletti).

Λ « t- 18(b) (lR,5S,6S)-2-}(2S,4S)-2-[(3S)-3-Ammopyrrolidin-l-yylikarbonyyli]pyrro- lidin-4-yyIitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eemi-3-karbok- syylihapon hydrokloridi 101226 loo 5 1,0 g 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-(4-nitrobentsyylioksikar- bonyyli)aminopyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrro-lidin-4-yy Itiö} -6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksy-laattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 30 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 2:1 tilavuusseosta, jonka jälkeen lisättiin 10 1,0 ml 2N vesipitoista kloorivetyhappoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi _ huoneen lämpötilassa 2 tuntia 1,5 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Katalyytti suodatettiin pois ja suodos pestiin dietyylieetterillä. Pesty vesiliuos väkevöi-tiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin käänteisfaasikroma-tografialla 19 ml:n Cosmo Sil 75C18-PREP (yhtiön Nacalai Tesque tuotteen tavara-15 merkki) läpi käyttämällä vettä eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistet-tä, yhdistettiin, väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 169 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 20 3397, 1758, 1653, 1587, 1465, 1386.

t

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D2, käyttämällä tetradeuteroitua natriumtrimetyylisilyylpropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 25 1,29 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,97-2,19 (1H, multipletti); t * 2,21-2,29 (1H, multipletti); 2,36-2,60 (1H, multipletti); 3,02-3,14 (1H, multipletti); 30 3,32-3,43 (1H, multipletti); 3,45-3,53 (2H, multipletti); 3,57-3,90 (5H, multipletti); 101226 101 3,98-4,17 (2H, multipletti); 4,20-4,29 (2H, multipletti); 4,63-4,82 (1H, multipletti).

5 ESIMERKKI 19 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-Pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyIiha-pon hydrokloridi 10

O COOH h H

19(a) 4-Nitrobentsyyli-( 1 R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2-[(3S)-1 -(4-nitrobentsyylioksikar-20 bonyyli)pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyr-roIidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyliJ-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 253 μί difenyylifosforyylikloridia ja 212 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin 25 pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 420 mg 4-nitrobent- syyli-( 1 R,5S,6S)-6-[(1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyy li-2-okso-1 -karbapen-3 -karboksy-laattia 4,2 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 913 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3 S)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-1 -(4-30 nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesi-merkissä 19) 5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 404 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja 101226 102 seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 7 tuntia ja annettiin sitten seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen 101 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin ja seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Reaktioseos työstettiin sitten ja puhdistettiin samanlaisella menetelmää kuin on kuvattu esimerkissä 18(a), 5 jolloin saatiin 504 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 3385, 1775, 1709, 1607, 1522, 1346, 853, 737.

10 Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), δ ppm: 1.15- 1,18 (6H, multipletti); 1,69-2,07 (3H, multipletti); 2,60-2,80 (1H, multipletti); 15 3,10-3,70 (9H, multipletti); 3,80-4,35 (6H, multipletti); 5.15- 5,48 (6H, multipletti); 7,57-7,73 (6H, multipletti); 8,21-8,33 (6H, multipletti).

20 19(bX 1 R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2- [(3S)-Py rrolidin-3-yy liaminokarbonyyli] py rrolidin- 4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyliha-pon hydrokioridi 25 475 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-l-(4-nitrobentsyylioksikarb- nyyli)pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli[-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin- 4-yylitio} -6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 15 ml:aan tetrahydrofu-raanin ja veden välistä 2:1 tilavuusseosta, jonka jälkeen lisättiin 0,45 ml IN vesipi-30 toista kloori vety happoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi 1 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 18(b), jolloin saatiin 46 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

101226 103

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm"1: 5 3367, 1760, 1683, 1558, 1390, 1281.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitua natriumtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 7,33 Hz); 10 1,28 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 2.04- 2,24 (2H, multipletti); 2,33-2,46 (1H, multipletti); 2,88-3,00 (1H, multipletti); 3,31-3,56 (6H, multipletti); 15 3,59-3,67 (1H, multipletti); 3,77-3,84 (1H, multipletti); 4.04- 4,13 (1H, multipletti); 4,20-4,29 (2H, multipletti); 4,47-4,56 (2H, multipletti).

20 ESIMERKKI 20 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-Pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio} -6-[(lR)-l -hydroksietyy li] -1 -metyyli-1 -karbapen-2-eem i-3-karboksyy liha-25 pon hydrokloridi °« CH, Ά4 h öJL-hs h 1 h 30 I \ / h Λ 1 HC/

/“N-k H —N

O COOH H H

101226 104 20(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)pyrrolidm-3-yyIiaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyr-rolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 5

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 19(a), mutta käyttämällä 1,06 g (2S,4S)-4-merkapto-2- [(3R)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-3 -yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä(valmistettikuten on kuvattu valmistusesimerkissä 20) (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3S)-l-(4-nitrobentsyy-10 lioksikarbonyyli)pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy- li)pyrrolidinin sijasta, saatiin 540 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

20(b) (1 R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2- [(3R)-Pyrrolidin-3-yy liaminkarbonyy li] pyrroli- din-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karbok-15 syylihapon hydrokloridi 500 mg 4-nitrobentsyyli-( 1 R,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-1 -(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrro-lidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksy-20 laattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 20 ml:aan . . tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta, jonka jälkeen lisättiin 0,47 ml IN vesipitoista kloori vety happoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi 1 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Sitten reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 18(b), jolloin saatiin 43 25 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

i «

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 297.

30 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-Dimetyyliaminopyrrolidin-l-yylikarbonyyli]pyrro- lidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karbok- 5 syylihapon hydrokloridi ESIMERKKI 21 101226 105 OH CH3 q 10 CH> '~ΤΎ YVvV' HC,

J— N-V '—N H

o * COOH H CHj 15 21 (a) 4-Nitrobentsyy li-( 1 R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2- [(3S)-3-dimetyy liaminopy rroli- din-l-yyIikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrroIidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eeini-3-karboksylaatti 880 μΐ difenyylifosforyylikloridia ja 740 μ( di-isopropyylietyyliamiinia samalla jäällä 20 jäähdyttäen lisättiin pisara kerrallaan liuokseen, joka sisälsi 1,46 g 4-nitrobentsyyli-(1 R,5S,6S)-6-[(l R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-l -karbapenaami-3-karboksy-laattia 12 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 0,5 tuntia. Liuos, joka sisälsi 1,70 g (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3S)-3-dimetyyliaminopyrrolidin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrro-25 lidinin trifluorisulfonaattia (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 21) 8 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 700 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten • » : samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 2,5 tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 18(a), jolloin 30 saatiin 1,65 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

101226 106

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1773, 1711, 1650, 1607, 1522, 1346, 854, 738.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), 5 δ ppm: 1,15 (3H, dubletti, J = 3,42 Hz); 1,18 (3H, dubletti, J = 3,90 Hz); 2,09 (2H, dubletti, J = 8,3 Hz); 2,17 (1H, singletti); 10 2,70-3,93 (17H, multipletti); 3,95-4,08 (1H, multipletti); 4,11-4,20 (1H, multipletti); 4,23-4,29 (1H, multipletti); 4,55-4,66 (1H, multipletti); 15 5,06-5,75 (4H, multipletti); 7,53-7,74 (4H, multipletti); 8,21-8,25 (4H, multipletti).

21(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-Dimetyyliaminopyrrolidin-l-yylikar-20 bonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2- eemi-3-karboksyylihapon hydrokloridi 306 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-dimetyyliaminopyrrolidin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio} -6-[( 1R)-1 -25 hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 12 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä : 2:1 tilavuusseosta, jonka jälkeen lisättiin 0,38 ml IN vesipitoista kloorivetyhappoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa 2 tuntia 600 mg:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Reaktioseos työstettiin sitten ja puhdistet-30 tiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 18(b), jolloin saatiin 19 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

101226 107

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 3385, 1764, 1656, 1553, 1466, 1375.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitua 5 natriumtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,22 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,28 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1.95- 2,10 (1H, multipletti); 2.15- 2,35 (3H, multipletti); 10 2,5-2,7 (1H, multipletti); 2.96- 2,97 (6H, multipletti); 3,00-3,15 (1H, multipletti); 3,37-3,43 (1H, multipletti); 3,46-3,52 /2H, multipletti); 15 3,56-3,70 (2H, multipletti); 3,73-4,11 (6H, multipletti); 4.15- 4,30 (2H, multipletti).

ESIMERKKI 22 20 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-MetyyIiaminopyrrolidin-l-yylikarbonyyli]pyrroli-din-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-I-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karbok-syylihapon hydrokloridi 25 „ OH CH, o nj H H I H I ,-- CBj/y-pY V CH, M-K \, HC'

O COOH h H

30 101226 108 22(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-N-metyyli-N-(4-nitro-bentsyylioksikarbonyyli)aminopyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobeiitsyyliok-sikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapcn- 2-eemi-3-karboksylaatti 5

Suorittamalla sama menettely kuin on kuvattu esimerkissä 18(a), mutta käyttämällä 820 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3S)-3-N-metyyli-N-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)aminopyrrolidin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 22) (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3S)-3-10 (4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)aminopyrrolidin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyy- __ lioksikarbonyyli)pyrrolidinin sijasta, saatiin 630 mg otsikkoyhdistettä.

22(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-Metyyliaminopyrrolidin-l-yylikarbonyy-li]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-15 karboksyylihapon hydrokloridi 580 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-N-metyyli-N-(4-nitrobent-syylioksikarbonyyli)aminopyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-1-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)pyrrolidin-4-yylitio} -6- [(1R)-1 -hydroksietyyli] -1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-20 3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 12 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta, jonka jälkeen lisättiin 0,55 ml IN vesipitoista kloorivetyhappoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa 2 tuntia 700 mg:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä 25 kuin on kuvattu esimerkissä 18(b), jolloin saatiin 53 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 297.

30 (lR,5S,6S)-l-{(2S,4S)-2-[(3S)-Asetimidoyyliaminopyrrolidin-l-yyIikarbonyyli]pyr- rolidin-4-yyltio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-nietyyli-l-karbapen-2-eeini-3-karbok- 5 syylihappo ESIMERKKI 23 101226 109

OH 9Hi u O

Ά')\ΐ ? v / \ H yCH3 ~T T V_/-H '^Si^Srn

/-N-\ H

O COOH H

15 23(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-(N-4-nitrobentsyylioksi- karbonyyliasetimidoyyIiamino)pyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyyliok-sikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen- 2-eemi-3-karboksylaatti 20 231 μι difenyylifosforyylikloridia ja 194 μί di-isopropyylietyyliamiinia sameilla jäällä w jäähdyttäen lisättiin pisara kerrallaan liuokseen, joka sisälsi 384 mg 4-nitrobentsyyli- • ♦ (1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksy-laattia 6 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 45 minuuttia. Liuos, joka sisälsi 652 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3S)-3-25 (N-4-nitrobentsyy lioksikarbonyyliasetimidoyy liamino)py rrolidin-1 -yy likarbonyy li] -1 - (4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmis- • · - tusesimerkissä 23) 4 ml:ssa asetnitriiliä ja 185 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen ja seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 3 tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetus-30 sa paineessa. Tuloksena saatu jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla ja laimennettu liuos pestiin vedellä ja natriumkloridin vesiliuoksella. Etyyliasetaattiliuos kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja liuostin poistettiin tislaamalla alennetussa 101226 110 paineessa. Tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä metyleenikloridin, etyyliasetaatin ja metanolin välistä 9:9:1 tilavuus-seosta eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin ja väkevöi-tiin, jolloin saatiin 510 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

5

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1774, 1709, 1654, 1607, 1551, 1521, 1441, 1404, 1346.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi + D20, 270 10 MHz), δ ppm: _ 1.15 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1.16 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,60-2,28 (2H, multipletti); 2,10 (3H, singletti); 15 2,69-2,93 (1H, multipletti); 3,10-4,72 (14H, multipletti); 5,04-5,51 (6H, multipletti); 7,46-7,76 (6H, multipletti); 8,14-8,28 (6H, multipletti).

20 23(b) (lR,5S,6S)-l-{(2S,4S)-2-[(3S)-Asetimidoyyliaiiiinopyrrolidin-l-yylikar-bonyyli]pyrrolidin-4-yyIitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo 25 500 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-(N-4-nitrobentsyylioksi- karbonyyliasetimidoyyliamino)pyrrolidin-1 -yylikarbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio} -6-: [(1R)-1 -hydroksietyyli] -1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3 -karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 16 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen 30 lämpötilassa 2 tuntia 400 mg:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Sitten katalyytti suodatettiin pois ja suodos pestiin dietyylieetterillä. Vesikerros väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja konsentraatti puhdistettiin käänteisfaasikolon- 101226 111 nikromatografialla 20 ml:n Cosmo Sil 75C18-PREP (yhtiön Nacalai Tesque tuotteen tavaramerkki) läpi käyttämällä 6 % t/t vesipitoista asetnitriiliä eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin, väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofrlisoitiin, jolloin saatiin 136 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

5

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) nm: 298.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm"1: 10 1756, 1632, 1590, 1451, 1386, 1283, 1259.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitua natriumtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1.22 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 15 1,30 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,57-1,71 (1H, multipletti); 1,97-2,51 (2H, multipletti); 2.23 & 2,25 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 2,64-2,81 (1H, multipletti); 20 3,05 (1H, kaksi dublettia, J = 12,21 & 3,91 Hz); 3,18 (1H, kaksi dublettia, J = 12,21 & 5,86 Hz); 3,43 (1H, kaksi dublettia, J = 6,35 & 2,24 Hz); 3,32-4,06 (7H, multipletti); 4,22 (1H, kaksi dublettia, J = 9,28 & 2,44 Hz); 25 4,18-4,43 (2H, multipletti).

• (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-Formimidoyyliaminopyrrolidin-l-yylikarbonyy- li]pyrrolidm-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-inetyyli-l-karbapen-2-eeiiii-3- 5 karboksyylihappo ESIMERKKI 24 101226 112 h 9“ i% o 1Λ “"4 H H H I! J—, cn{ T 7%X V c'

-V H ^v, NH

O COOH H H

15 24(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-(N-4-nitrobentsyylioksi-karbonyyliformimidoyyliamino)pyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-((lR)-l-hydroksietyyli)-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 20 250 μ( difenyylifosforyylikloridia ja 210 μ£ di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 417 mg 4-nitrobent-syyli-( 1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-kar-boksylaattia 8 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa 25 lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 659 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3S)-3-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyyliamino)pyrrolidin-l-yyli-: karbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 24) 7 ml .ssa kuivaa asetnitriiliä ja 210 μ( di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla 30 jäähdyttäen jäällä ja seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan ja annettiin sitten seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos 101226 113 työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 23(a), jolloin saatiin 593 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 5 1772, 1707, 1655, 1605, 1521, 1444, 1346, 1210, 1135, 1111.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3 + D20, 270 MHz), δ ppm: 1,25 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,36 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 10 1,75-2,80 (4H, multipletti); 3,22-4,32 (12H, multipletti); 4,40-4,65 (1H, multipletti); 5,12-5,55 (6H, multipletti); 7,38-7,69 (6H, multipletti); 15 8,06-8,31 (6H, multipletti); 8,42 (1H, singletti).

24(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-Formimidoyyliaminopyrrolidin-l-yylikar-bonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-20 eemi-3-karboksyylihappo e 570 mg 4-nitrobentsyyli-( 1 R,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-(N-4-nitrobentsyylioksi-karbonyyliformimidoyyliamino)pyrrolidin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksi-karbonyyli)pyrrolidin-4-yy litio} -6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-25 eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 20 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi 450 mg:n 10 % p/p palladium kivihiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin esimerkissä 23(b), jolloin saatiin 125 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) ληΐ3χ nm: 300.

30 101226 114

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm"1: 1755, 1634, 1592, 1455, 1388, 1286, 1260, 1182, 1148.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä natriumtetra-5 deuteroitua trimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,22 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,30 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,58-1,75 (1H, multipletti); 1,98-2,53 (2H, multipletti); 10 2,64-2,86 (1H, multipletti); 3,07 (1H, kaksi dublettia, J = 12,21 & 3,91 Hz); 3,21 (1H, kaksi dublettia, J = 12,21 & 5,86 Hz); 3,32-4,12 (8H, multipletti); 4,17-4,53 (3H, multipletti); 15 7,80, 7,82, 7,95 & 7,96 (yhdessä 1H, neljä singlettiä).

ESIMERKKI 25 (lR,5S,6S)-2-}(2S,4S)-2-[(3S)-l-FormimidoyyIipyrrolidin-3-yyliammokarbonyy-20 li] py rrolidin-4-yy litio} -6- [ (1R)- 1-hydroksietyy li] -1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3- karboksyylihappo 25 H?H iHjh 0 "A? ?JU- ς μ 1 h

CHj if XTXT

0J-N—\C00H \

H

30 101226 115 25(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-l-(N-4-nitrobentsyylioksi-karbonyyliformimidoyyIi)pyrrolidin-3-yyIiaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyy-IioksikarbonyyIi)pyrroIidin-4-yyIitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 5 225 μί difenyylifosforyylikloridia ja 189 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 374 mg 4-nitrobent-syyli-( 1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-l -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-kar-boksylaattia 5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa 10 lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 620 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3S)-l-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyyli)pyrrolidin-3-yyliaminokar-bonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 25) 5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 189 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen 15 jäällä ja seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 23(a), jolloin saatiin 250 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

20 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1774, 1710, 1605, 1520, 1450, 1346, 1220, 1157, 1108.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3 + D20, 270 MhZ), δ ppm: 1,27 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 25 1,36 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 2,01-2,38 (2H, multipletti); * 3,23-4,62 (14H, multipletti); 5.10- 5,36 (6H, multipletti); 5,37-5,52 (1H, multipletti); 30 7,42-7,68 (6H, multipletti); 8.11- 8,28 (6H, multipletti); 8,63 (1H, singletti).

101226 116 25(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-l-Formimidoyylipyrrolidin-3-yyliaminokar-bonyyIi]pyrrolidin-4-yyIitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo 5 205 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-l-(N-4-nitrobentsyylioksi- karbonyyliformimidoyyli)pynOlidin-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksi-karbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-ee-mi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 12 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta ja seos hydrattiin 10 kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa 2 tuntia 160 mg:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 23(b), jolloin saatiin 50 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

15 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 299.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1754, 1710, 1657, 1586, 1449, 1427, 1386, 1285, 1262, 1182, 1146.

20

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä natriumtetra-deuteroitua trimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä satandardina), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,30 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 25 1,75-3,04 (5H, multipletti); 3,31-4,95 (12H, multipletti); 8,01 & 8,03 (yhdessä 1H, kaksi singlettiä).

(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-l-Asetimidoyylipyrrolidin-3-yyliaminokarbonyy- li]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3- 5 kaboksyylihappo ESIMERKKI 26 101226 117

„ ψ ίΗι h O

tt\l H ¥ju···' s P I H

10 οηΛ-ΓΥ J~N—\ N\ H n nh

O COOK H J

ch3 15 26(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-l-(N-4-nitrobentsyylioksi- karbonyyliasetimidoyyli)pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyyllok-sikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen- 2-eemi-3-karboksylaatti 20 Suorittamalla saman menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 23(a), mutta käyttämällä -- 422 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l- karbapenaami-3-karboksylaattia ja 717 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3S)-1 -(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmis-25 tusesimerkissä 26), saatiin 535 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

" · 26(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-l-Asetimidoyylipyrrolidin-3-yyliaiiiinokar- bonyyli]pyrroIidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 23(b), mutta käyttämällä 523 mg 4-nitrobentsyy li-( 1 R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-3 ’ 2-[(3 S)-1 -(N-4-nitrobentsyy- 30 101226 118 lioksikarbonyy liasetimidoyyli)pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-1-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyy li)pyrrolidin-4-yy litio} -6- [(1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen- 2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä], saatiin 128 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

5

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) λΓη3χ nm: 299.

ESIMERKKI 27 10 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-l-FormimidoyylipyrroIidin-3-yyliainmokarbonyy- li]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3- karboksyylihappo . - oh ς«3Η o 5 ΠνΓη s kv Ϊ ,/* —ry

J-N-\ ^ H /V-N NH

O COOH H J

H

20 27(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-l-(N-4-mtrobentsyylioksi- karbonyyliformimidoyyli)pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyy- — lioksikarbonyyH)pyrrolidin-4-yyIitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l- karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 25 Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 23(a), mutta käyttämällä . 464 mg 4-nitrobentsyyli-( lR,5S,6S)-6-[(l R)-l-hydroksietyyli]-1-metyyli-2-okso-l- • karbapenaami-3-karboksylaattia ja 788 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3R)-l-(N-4- nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyyli)pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmis-30 tusesimerkissä 27), saatiin 548 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

27(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-l-Formimidoyylipyrrolidin-3-yyIiaminokar- bonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-inetyyli-l-karbapen-2- eemi-3-kaboksyylihappo 101226 119 5 Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 23(b), mutta käyttämällä 530mg4-nitrobentsyyli-( lR,5S,6S)-2-[(2S,4^-2-[(3R)-1 -(N-4-nitrobentsyylioksikar-bonyyliformimidoyyli)pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi- 3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä], saatiin 133 mg 10 otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 300.

15 ESIMERKKI 28 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[N-Metyyli-N-((3S)-3-pyrrolidinyyli)karbamoyyli]pyrroli-din-4-yylitio}-6-|(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-kaboksyy-lihapon hydrokloridi 20 H. ?H Τ’ H 9 N» »JL.-hs h I en, 25 γ>ς^ hci -k Ns h Y-n

o COOH H H

30 101226 120 28(a) 4-Nitrobentsyyli-(l R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2- {N-metyyli-N-[(3S)- l-(nitrobent-syylioksikarbonyyIi)pyrroHdin-3-yyliJkarbamoyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyy li)py rrolidin-4-yylitio}-6-[(l R)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 5

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 19(b), mutta käyttämällä 1,09 g (2S,4S)-4-merkapto-2-{(N-metyyli-N-[(3S)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)pyrrolidin-3-yyli]karbamoyyli} -1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3S)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin- 3-yy-10 liaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin sijasta, saatiin 550 _ mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

28(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[N-Metyyli-N-((3S)-3-pyrrolidinyyli)karbamoyy-li]pyirolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyliJ-l-metyyH-l-karbapen-2-eeini-3-15 kaboksyylihapon hydrokloridi 500 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-(N-metyyli-N-[(3S)-l-(4-nitrobentsyylioksi-karbonyyli)pyrrolidin-3-yyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}- 6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia[ valmistettu 20 kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 20 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta, jonka jälkeen lisättiin 0,45 ml IN vesipitoista kloori vety happoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi samassa lämpötilassa 2 tuntia 700 mg:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reak-tioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu 25 esimerkissä 18(b), jolloin saatiin 30 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 297.

30 ESIMERKKI 29 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[N-Metyyli-N-((3S)-l-foriniinidoyylipyrrolidin-3-yyli)kar- bamoyyIi]-pyrrolidin-4-yylitio}-6-((lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2- 5 eemi-3-karboksyylihappo 101226 121 OH CH3 0 N? S - t* 1 CH3

/—N-^ N H° \—N NH

O COOH h y

H

15 29(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-(N-metyyli-N-[(3S)-l-(N-4-nit- robentsyyliokasikarbonyyliformimidoyyli)pyrrolidin-3-yyli]karbamoyyli}pyrro-lidin-4-yylitio} -6-[(lR)-l-hydroksietyyli] -1 -m etyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karbok-sylaatti 20

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 23(a), mutta käyttämällä 400 mg 4-nitrobentsyyli-( 1R, 5 S,6S)-6- [(1R)-1 -hydroksietyyli] -1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-kaboksylaattia ja 679 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-(N-metyyli-N-[(3S)-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyyli)pyrrolidin-3-yyli]karbamoyyli} -1 -(4-25 nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmis-tusesimerkissä 29), saatiin 420 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

122 101226 29(b) (1 R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2-[N-Metyyli-N-((3S)-1 -formimidoyylipyrrolidin-3-yyIi)karbamoyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylibappo 5 Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 23(b), mutta käyttämällä 410 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-{N-metyyli-N-[(3S)-l-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyyli)pyrrolidin-3-yyli]karbamoyyli}pyrrolidin- 4-yylitio} -6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä], saatiin 104 mg otsikkoyhdistettä 10 pulverin muodossa. _

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 299.

15 ESIMERKKI 30 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(3-Karbamoyyli-l-piperatsmyylikarbonyyli)pyrroIidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyliha-pon hydrokloridi 20 OH CH3 O CONH2 h s JL p ϊ /—ζ cn{^—KY /n”*h 25 N-'—N H HC/ O COOH h 30(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[3-karbamoyyli-4-(4-nitrobent-syylioksikarbonyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-30 li)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 101226 123 0,78 ml difenyylifosforyylikloridia ja 0,65 ml di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 1,23 g 4-nitrobent-syyli-( 1 R,5 S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksylaattia 20 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 5 samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 2,11 g (2S,4S)-4-merkap-to-2-[3-karbamoyyli-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmis-tusesimerkissä 30) 20 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 0,59 ml di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja seosta sekoitettiin 10 samassa lämpötilassa jäällä jäähdyttäen 90 minuuttia ja sekoitettiin sitten huoneen lämpötilassa 90 minuuttia. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 7(a), jolloin saatiin 2,38 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

15 30(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-(3-Karbamoyyli-l-piperatsinyyIikarbonyyli)pyr- rolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihapon hydrokloridi 2,33 g 4-nitrobentsyyli-( 1R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2-[3-karbamoyyli-4-(4-nitrobentsyy-20 lioksikarbonyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyr- - . rolidin-4-yylitio}-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karbok- sylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 24 ml:ssa tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta, jonka jälkeen lisättiin 2,7 ml IN vesipitoista kloorivetyhappoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi 25 huoneen lämpötilassa 2 tuntia 2,33 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen seos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 7(b), jolloin saatiin 160 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm"1: 30 1759, 1698, 1662, 1450, 1383, 1266.

101226 124

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä natriumtetra-deuteroitua trimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,28 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 5 2,04-2,10 (1H, multipletti); 3,01-5,08 (16H, multipletti).

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 297.

10 ESIMERKKI 31 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Fluorietyyli)-l-homopiperatsinyyIikarbonyyli]pyrro-lidin-4-yyIitio}-6-((lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karbok-15 syylihapon hydrokloridi OH CH, 0 20 “Sly ? X x-f 0^N \00H \H HC' 25 31(a) 4-NitrobetnsyyIi-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-fluorietyyIi)-l-homopi- peratsinyylikarbonyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyIi)pyrrolidin-4-yylitio}-6-" [(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 1,37 ml difenyylifosforyylikloridia ja 1,15 ml di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin 30 pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 2,23 g 4-nitrobent- syyli-l-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia 23 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 101226 125 samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 3,99 g (2S,4S)-4-merkap-to-2-[4-(2-fluorietyyli)-l-homopiperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyylijpyrrolidinin trifluorimetaanisulfonaattia (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 31) 57 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 3,40 ml di-isopropyylietyy-5 liamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 15(a), jolloin saatiin 2,96 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

10

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), i>max cm*1: 1773, 1710, 1647, 1522, 1346, 1206.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 15 1,25-1,40 (6H, multipletti); 1,73-2,02 (3H, multipletti); 2,45-3,05 (7H, multipletti); 3,24-3,88 (8H, multipletti); 4,01-4,78 (6H, multipletti); 20 5,03-5,54 (4H, multipletti); 7,42-7,67 (4H, multipletti); 8,17-8,25 (4H, multipletti).

31(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Fluorietyyli-l-homopiperatsinyylikarbonyy-25 li]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eemi-3- karboksyylihapon hydrokloridi 500 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-fluorietyyli)-1 -homo-piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio} -6-30 [(1R)-1 -hydroksietyyli]-l -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (2) edellä] liuotettiin 12 ml:ssa tetrahydrofuraanin ja * veden välistä 1:1 tilavuusseosta, jonka jälkeen lisättiin 0,62 ml IN vesipitoista 101226 126 kloorivetyhappoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa 2 tuntia 500 mg:n 10 % p/p palladium kivihiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reak-tioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 15(b), jolloin saatiin 96 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

5

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1763, 1653, 1460, 1384, 1284.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) nm: 10 297.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (D20, 270 MhZ), δ ppm: 1,22 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 1,28 (3H, dubletti, J = 6,4 Hz); 15 2,00-2,12 (1H, multipletti); 2,22-2,38 (2H, multipletti); 3,02-3,16 (1H, multipletti); 3,36-4,16 (15H, multipletti); 4,20-4,30 (2H, multipletti); 20 4,76-4,98 (3H, multipletti).

ESIMERKKI 32 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-(Imidatsol-l-yyli)-pyrn>Udin-l-yylikarboiiyylilpyr-25 rolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3- . karboksyylihapon hydrokloridi

OH £H3 „ O

30 CH3 J ^—2-N^N

</ COOH XH H

101226 127 32(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-3-(imidatsol-l-yyli)pyrroli-din-l-yyIikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyIi)pyrroIidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 5 970 μ( difenyylifosforyylikloridia ja 810 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisältää 1,60 g 4-nitrobent-syyli-( 1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksylaattia 16 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 30 minuuttia samoissa olosuhteissa. Liuos, joka sisälsi 1,9 g (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3S)-10 3-(imidatsol-1 -yyli)pyrrolidin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 32) 22 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 770 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen ja seosta sekoitettiin kaksi tuntia samalla jäällä jäähdyttäen ja annettiin sitten seistä yön yli lämpötilassa 4 °C. Tämän jälkeen reaktioseos 15 laimennettiin yhtä suurella määrällä vettä ja sekoitettiin 800 mg natriumvetykarbonaa-tin kanssa. Siten saatu seos puhdistettiin käänteisfaasikromatografialla 300 g:n Cosmo Sil 75Clg-PREP (yhtiön Nacalai Tesque tuotteen tavaramerkki) läpi käyttämällä asetnitriilin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, 20 jolloin saatiin 2,31 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm"1: 1773, 1709, 1656, 1521, 1346.

25 Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCt^, 270 MHz), δ ppm: . 1,25-1,39 (6H, multipletti); ' 2,00-2,80 (4H, multipletti); 3,25-4,96 (13H, multipletti); 5,05-5,53 (4H, multipletti); 30 6,82-8,29 (11 H, multipletti).

32(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-(Imidatsol-l-yyli)pyrrolidin-l-yyIikar- bonyy li] py rrolidin-4-yylitio}-6-[(l R)-l-hydroksietyyli]-1-metyyli-l-karbapen-2- eemi-3-karboksyylihapon hydrokloridi 101226 128 5 200 mg 4-nitrobentsyyli-( 1 R,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-(imidatsol-1 -yyli)pyrro]i- din-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy li)pyrrolidin-4-yy litio} -6- [(1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin seokseen, joka sisälsi 15 ml tetrahydrofu-raania ja 10 ml vettä ja liuosta sekoitettiin voimakkaasti 1,7 tuntia lämpötilassa 28-30 10 °C vetyatmosföärissä ja 0,3 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tuloksena saatu vesiliuos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin käänteisfaasikromatografialla 20 ml:n Cosmo Sil 75C18-PREP (yhtiön Nacalai Tesque tuotteen tavaramerkki) läpi käyttämällä vettä eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 17 mg otsikko- 15 yhdistettä värittömän pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 297.

20 ESIMERKKI 33 * (1 R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2- [(3S)-3-( 1,2,4-T riatsol-1 -yy li)py rrolid in-1 -yy Iikarbonyy- li]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihapon hydrokloridi 25 oh h o h »e/ ch3x n—γ j \ r- Λ /

m-i '—N ^ N N N

30 <f COOH H H W

101226 129 33(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-(l,2,4-triatsol-l-yyli)pyr-rolidin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiii-4-yyltio}-6-|(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 5 290 μΐ difenyylifosforyylikloridia ja 250 μί di-isoproyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 486 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[( 1 R)-l -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksy-laattia 5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta seokoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 690 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-10 [(3S)-3-( 1,2,4-triatsol-1 -yyli)pyrrolidin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikar- bonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 33) 4 ml.ssa kuivaa asetnitriiliä ja 230 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen ja seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 4 tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin 15 on kuvattu esimerkissä 18(a), jolloin saatiin 744 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 3401, 1772, 1709, 1655, 1607, 1522, 1346, 854, 738.

20 _ Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), δ ppm: 1.14- 1,20 (6H, multipletti); 1.50- 1,70 (1H, multipletti); 25 2,30-2,50 (1H, multipletti); , 2,70-2,95 (1H, multipletti); • 3,10-4,30 (14H, multipletti); 4.51- 4,70 (1H, multipletti); 5,05-5,49 (5H, multipletti); 30 7,48-7,74 (4H, multipletti); 8.15- 8,27 (4H, multipletti); 8.52- 8,63 (1H, multipletti).

33(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-(l,2,4-TriatsoI-l-yyli)pyrrolidin-l-yylikar- bonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyIi]-l-metyyli-l-karbapen-2- eemi-3-karboksyylihapon hydrokloridi 101226 130 5 528 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-(l,2,4-triatsol-l-yyli)pyr- rolidin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 10 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta, jonka jälkeen lisättiin 0,63 ml IN vesipitoista 10 kloorivetyhappoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa 2 tuntia 1 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 18(b), jolloin saatiin 85 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

15 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) λιη&χ nm: 297.

ESIMERKKI 34 20 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-3-Aminopyrrolidin-l-yylikarbonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyIi]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyliha-pon hydrokloridi 25 h?h S% o /--N-\ '—N * H '-/-Nh2 O COOH ή HC/ 30 101226 131 34(a) 4-Nitrobentsyyli-( 1 R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2-[(3R)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)aminopyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyr-rolidin-4-yylitio}-6-I(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 5

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 18(a), mutta käyttämällä 950 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3R)-3-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-aminopyrrolidin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 34) (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3S)-10 (3-4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)aminopyrrolidin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobent- syylioksikarbonyyli)pyrrolidinin sijasta, saatiin 760 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

34(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-3-Aminopyrrolidm-l-yylikarbonyyli]pyrro-15 lidin-4-yylitio}-6-[ (1R)-1 -hydroksietyyli]-l -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karbok- syylihapon hydrokloridi 730 mg 4-nitrobentsyyli-( 1 R,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-3-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)aminopyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-ni trobentsyylioksikarbonyyli)pyrro-20 lidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksy-w laattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 20 ml:ssa tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta, jonka jälkeen lisättiin 0,75 ml IN vesipitoista kloorivetyhappoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa kaksi tuntia 1,0 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läs-25 näollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin j a puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 18(b), jolloin saatiin 120 mg otsikkoyhdistettä * pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) λιη3χ nm: 30 297.

101226 132 ESIMERKKI 35 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-3-Asetimidoyylipyrrolidin-l-yyIikarbonyyli]pyrroli-din-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karbok-5 syylihappo

a?H ?Hjh O

X? H L."HS H | 10 ch/\-^Y ch,

J—N-^ '—N H '-/-NH—C=NH

O COOH h έ 15 35(a) 4-NitrobentsyyIi-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-3-(N-4-nitrobentsyyIioksi-karbonyyliasetimidoyyliamino)pyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyyliok-sikarbonyyli)pyrroIidin-4-yylitio}-6-((lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen- 2-eemi-3-karboksylaatti 20

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 23(a), mutta käyttämällä 92 mg 4-nitrobentsyyli-( 1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksylaattia ja 156 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3R)-3-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyliamino)pyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-25 nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmis-tusesimerkissä 35), saatiin 125 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

35(b) (1 R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2-[ (3R)-3-Asetimidoyy lipy rrolidin-1 -yy likarbonyy- U]pyrrolidm-4-yyIitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eemi-3- karboksyylihappo 101226 133 5 Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 23(b), mutta käyttämällä 120mg4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-3-(N-4-nitrobentsyylioksikar-bonyyliasetimidoyyliamino)pyrrolidin-1 -yylikarbonyyli]-l -(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)pyrrolidin-4-yylitio} -6- [(1R)-1 -hydroksietyyli] -1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi- 3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä], saatiin 31 mg 10 otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 299.

15 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1755, 1631, 1590, 1452, 1386, 1284, 1260.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä natriumtetra-deuteroitua trimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 20 1,22 (3H, dubletti, J = 7,33 Hz); 1,30 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,57-1,73 (1H, multipletti); 2,06-2,46 (2H, multipletti); 2,24 (3H, singletti); 25 2,64-2,84 (1H, multipletti); 3,00-3,25 (2H, multipletti); 3,33-3,90 (7H, multipletti); 3,95-4,09 (1H, multipletti); 4,17-4,42 (3H, multipletti).

30 101226 134 ESIMERKKI 36 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-3-Formimidoyy]iaminopyrrolidin-l-yylikarbonyy-li]pyrroIidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eeini-3-5 karboksyylihappo OH CH3 0 a-J h e L··· , s I .

10 —fY” y

J_N-!l '—N H '-i-NH-C=NH

CT COOH H ή 15 36(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-3-(N-4-nitrobentsyyIioksi-karbonyyliformimidoyyliamino)pyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 20

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 23(a), mutta käyttämällä — 120 mg 4-nitrobentsyyli-( lR,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksylaattia ja 192 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3R)-3-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyyliamino)pyrrolidin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-25 nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyiTolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmis-tusesimerkissä 36), saatiin 172 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

36(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-3-Formimodyyliaminopyrrolidin-l-yylikar- bonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2- eemi-3-karboksyylihappo 101226 135 5 Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 23(b), mutta käyttämällä 165 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6^-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-3-(N-4-nitrobentsyylioksi-karbonyyliformimidoyyliamino)pyrrolidin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksi-karbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä], saatiin 38 10 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) λιη3χ nm: 300.

15 ESIMERKKI 37 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(3-Hydroksimetyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli)pyrrolidin- 4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli'l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyliha-pon hydrokloridi 20

OH 9h3„ O /—OH

Η'"Λ H H !..... H jf ,-f

CH3^-^y N-H

J—N-\ H HC / 25 O COOH h 37 (a) 4-Nitrobentsyy li-( 1 R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2- [3-(4-nitrobentsyy lioksikar- bonyylioksimetyyli)-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-l-piperatsinyylikarbonyy-30 li]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyIi)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyy-li]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 101226 136 46 μί difenyylifosforyylikloridia ja 38 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 73 mg 4-nitrobentsyyli-(1 R,5S,6S)-6-[(l R). 1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-l -karbapenaami-3-karboksy-laattia 1,0 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa 5 lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 157 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[3-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylioksimetyyli)-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 37) 1,0 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 35 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti seokseen samalla jäähdyttäen 10 jäällä samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön _ yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 7(a), jolloin saatiin 147 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

15 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1758, 1706, 1660, 1608, 1522, 1432, 1347, 1268.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCT3, 270 MHz), δ ppm: 1,27 (3H, dubletti, J = 7,33 Hz); 20 1,37 (3H, dubletti, J = 5,86 Hz); 2,53-3,02 (2H, multipletti); 3,10-3,78 (7H, multipletti); 3,81-4,37 (8H, multipletti); 4,47-4,85 (3H, multipletti); 25 5,09-5,52 (8H, multipletti); 7,47 (6H, dubletti, J = 8,30 Hz); 7,65 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,15-8,23 (8H, multipletti).

30 37(b) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(3-Hydroksimetyyli-l-piperatsinyylikarbonyy- li)pyrrolidin-4-yyIitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3- v karboksyylihapon kloorivety 101226 137 5 140 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[3-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy- lioksimetyyli)-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-l -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vai- heessa (a) edellä] liuotettiin 2 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta, 10 jonka jälkeen lisättiin 0,13 ml IN vesipitoista kloorivety happoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa 2 tuntia 140 mg:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 7(b), jolloin saatiin 20 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

15

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) λΓΠ3χ nm: 297.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), Dmax cm'1: 20 1759, 1660, 1594, 1451, 1387, 1266.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä natriumtetra-deuteroitua trimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 25 1,28 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,97-2,08 (1H, multipletti); 3,01 -3,15 (1 H, multipletti); 3.19- 3,41 (3H, multipletti); 3,44-3,68 (4H, multipletti); 30 3,48 (1H, kaksi dublettia, J = 6,35 & 2,93 Hz); 3,73-4,15 (5H, multipletti); 4.20- 4,29 (2H, multipletti); 101226 138 4,42-4,60 (1H, multipletti); 4,75-4,96 (1H, multipletti).

ESIMERKKI 38 5 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(3-Karboksi-l-piperatsinyylikarbonyyli)pyrrolidin-4- yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihap- po 10

it 9H iHjH o COOH

X? X. 1 /—C

ch{ γγ \ r<'^ N“H

J—N-1 —N H ^^

15 COOH H

38(a) 4-Nitrobentyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[3-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-20 Ii)-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyliJ-l-(4-nitrobent- syylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l- — karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 55 μ£ difenyylifosforyylikloridia ja 46 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara 25 kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 88 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l-karba-penaami-3-karboksylaattia 1,5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 184 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[3-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-4-(4-nitrobentsyyliok-30 sikarbonyy li)-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrroli-diniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 38) 1,5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 42 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara 101226 139 kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja seoksen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 7(a), jolloin saatiin 160 mg otsik-koyhdistettä pulverin muodossa.

5 38(b) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(3-Karboksi-l-piperatsinyylikarbonyyli)pyrroli-din-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karbok-syylihappo ___ 10 160 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[3-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy- li)-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyy li)pyrrolidin-4-yy litio} -6- [(1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen- 2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 3 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta ja seos hydrattiin 15 kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa kaksi tuntia 160 mg:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 7(b), jolloin saatiin 35 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

20 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: _ 297.

ESIMERKKI 39 25 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-l-Asetimidoyylipyrrolidin-3-yyliaminokarbonyy- li)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo „<?H 9% o 30 ch= ΗιγΤ>Ον'·/ι

y~N-\ Nv H HV-N^NH

O COOH h J

CH3 101226 140 39(a) 4-Nitrobentsyyli-( 1 R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2- [(3R)-1 -(N-4-nitrobentsyy lioksi-karbonyyliasetimidoyyIi)pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyyliok-sikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen- 2- eemi-3-karboksylaatti 5

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 23(a), mutta käyttämällä 300 mg 4-nitrobentsyyli-( 1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-l -metyyli-2-okso~ 1 -karbapenaami-3-karboksylaattia ja 150 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3R)-l-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-10 nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmis-tusesimerkissä 39), saatiin 206 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

39(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3R)-l-Asetimidoyylipyrrolidin-3-yyliaminokar-bonyy li] py rrolidin-4-yy Iitio}-6- [(1 R)-l -hydroksietyy li] -1 -metyyli-1 -karbapen-2-15 eemi-3-karboksyyIihappo

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 23(a), mutta käyttämällä 198mg4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-l-(N-4-nitrobentsyylioksikar-bonyyliasetimidoyyli)pynolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikar-20 bonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi- 3- karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä], saatiin 48 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 25 298.

101226 ESIMERKKI 40 141 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[N-(2-AsetiinidoyyliaminoetyyIi)karbamoyyli]pyrroIidin- 4-yy litio} -6-((lR)-1 -hy d roksietyy li] -1 -metyyli-1 -karbapen-2-eem i-3-karboksyyli-5 happo

OH CH3 o H

,0 ^ XH,

CH> -TY Y

J—N-\ '—N H H NH

O COOH h 15 40(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{2-N-[2-(N-4-nitrobentsyyIioksikarbonyy- liasetimidoyyli)aminoetyyli]karbamoyyli-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrro-lidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karbok-sylaatti 20 105 μ £ difenyylifosforyylikloridiaja 88 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara . kerrallaan samallä jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 170 mg 4-nitrobentsyyli- (lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksy-laattia 2 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 290 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-{N-25 4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)aminoetyyli]karbamoyyli}-l-(4-nit-robentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimer-’ kissä 40) 10 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 92 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen ja seoksen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlai-30 sella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 1 (a), jolloin saatiin 270 mg otsikkoyh-distettä pulverin muodossa.

40(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[N-(2-Asetimidoyyliaminoetyyli)karbamoyyli]- pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyIi]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3- karboksyylihappo 101226 142 5 265 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{N-(2-Asetimidoyyliaminoetyyli)karbamoyy- li]pyrrolidin-4-yylitio} -6-[( 1R)-1 -hydroksetyyli]-1 -metyyli 1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappoa [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 15 mlraan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 2:1 tilavuusseosta ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa kaksi tuntia 270 mg:n 10 % p/p 10 palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämänjälkeenreaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 60 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 15 299.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (D20, 270 MHz), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 1,30 (3H, dubletti, J = 6,6 Hz); 20 1,68-1,70 (1H, multipletti); 2,23 (3H, singletti); 2,60-2,73 (1H, multipletti); 2,89 (1H, dublettien dubletti, J = 11,2 & 4,0 Hz); 3,32-3,66 (7H, multipletti); 25 3,69-3,80 (1H, multipletti); 3,85 (1H, dublettien dubletti, J = 9,2 & 5,3 Hz); 4,18-4,32 (2H, multipletti).

ESIMERKKI 41 101226 143 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[N-(2-Forinimidoyyliaminoetyyll)karbamoyyli]pyrroIldiii- 4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyli-5 happo OH CH3 0 h

H H ! n H I I

ίο “!/π(ΤΧΓ'^ν

J—N-^ '—N H H NH

O COOH h 41(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{2-N-[2-(4-nitroben(syylioksikarbonyylifor-15 mimidoyyli)aminoetyyli]karbamoyyIi-l-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyli)pyrroli-din-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksy-laatti 53 μί difenyylifosforyylikloridia ja 44 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara 20 kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 90 mg 4-nitrobentsyyli-(1R, 5 S,6S)-6- [(1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksy-laattia 1 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 150 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-{N-[2-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyyli)aminoetyyli]karbamoyyli}-l-(4-25 nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmis-tusesimerkissä 41) 10 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 50 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen ja seoksen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 1(a), jolloin saatiin 155 mg 30 otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

101226 144 41(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[N-(2-Formiiiiidoyyliaiiiinoetyylikarbamoyyli]-pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-inetyyli-l-karbapeii-2-eemi-3-karboksyylihappo 5 150 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{N-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformi- midoyyli)aminoetyyli]karbamoyyli-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio }-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 10 ml:aan tetrahyd-rofuraanin ja veden välistä 2:1 tilavuusseosta ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen 10 läpi huoneen lämpötilassa kaksi tuntia 150 mg:n 10 % p/p palladium-puuhiilen _ läsnäollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 20 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

15 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) λιη3χ nm: 299.

Ydinmagneettinen resonanssispsektri (270 Hz, D20, käyttämällä natriumtetradeuteroi-tua trimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 20 1,21 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 1,30 (3H, dubletti, J = 6,4 Hz); 1.70- 1,84 (1H, multipletti); 2,60-2,76 (1H, multipletti); 2,89-2,97 (1H, multipletti); 25 3,32-3,62 (7H, multipletti); 3.70- 3,81 (1H, multipletti); 3,85-3,92 (1H, multipletti); 4,19-4,29 (2H, multipletti); 7,84 & 7,85 (1H, kaksi singlettiä).

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1755,1717,1660,1590,1388.

30 ESIMERKKI 42 101226 145 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(3-Dimetyyliamino-l,2,5,6-tetrahydropyratsin-l-yylikar-bonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-5 eemi-3-karboksyylihappo CH3 OH ?Hj 0 t!j io NL? ?JLACH> ch{ N—Y γ Υτγ

J—N-\ N\ H

O COOH h 15 42(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(3-dimetyyIiamino-l,2,5,6-tetra-hydropyratsin-l-yylikarbonyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yy litio] -6- [ (1R)-1 -hy d roksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 20 126 μί difenyylifosforyylikloridia ja 106 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 208 mg 4-nitrobent-syyli-( 1 R,5 S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksylaattia 2,6 ml.ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 445 g (2S,4S)-4-merkap-25 to-2-(3-dimetyyliamino-1,2,5,6-tetrahydropyratsin-1 -yylikarbonyyli)-1 -(4-nitrobentsyy- lioksikarbonyyli)pyrrolidinin trifluorimetaanisulfonaattia (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 42) 2,4 ml:ssa kuivaa asenitriiliä ja 271 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen ja seoksen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistet-30 tiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 1(a), jolloin saatiin 98 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

101226 146

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1771, 1709, 1659, 1608, 1522, 1495, 1441, 1405, 1346, 1277, 1209.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3 + heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 5 270 MHz), δ ppm: 1,28 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,34 (3H, dubletti, J = 6,34 Hz); 1,85-2,08 (1H, multipletti); 2,71-2,86 (1H, multipletti); 10 3,08-4,85 (20H, multipletti); 5,05-5,53 (4H, multipletti); 7,42-7,58 (2H, multipletti); 7,66 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,16-8,26 (4H, multipletti).

15 42(b) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(3-Dimetyyliamino-l,2,5,6-tetrahydropyratsin-l-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karba-pen-2-eemi-3-karboksyylihappo 20 95 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(3-dimetyyliamino-l,2,5,6-tetrahyd- ropyratsin-1 -yylikarbonyyli)-1 -(4-nitrobentsyy lioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 5 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 2:1 tilavuusseosta ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen 25 lämpötilassa kaksi tuntia 250 mg:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 1(b), jolloin saatiin 8 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 30 299.

101226 147

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm"1: 1751, 1659, 1598, 1455, 1391, 1346, 1247.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä natriumtetra-5 deuteroitua trimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,22 (3H, dubletti, J = 7,33 Hz); 1,30 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,60-1,83 (1H, multipletti); 2,68-2,92 (1H, multipletti); 10 3,03-4,43 (20H, multipletti).

ESIMERKKI 43 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Asetiimdoyyliaminopiperidiii-l-yylikarboiiyyIi)pyrroli-15 din-4-yylitio)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karbok-syylihappo 20 „ OH h 9 e h B I /—\ CH3

CH3 Γ T \ rH \ / 1 %H

N-\ N\ H

O COOH H

25

Suorittamalla samanlainen menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 1, mutta käyttämällä 181 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3-karboksylaattia ja 300 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy liasetimidoyyli)aminopiperidin-1 -yy likarbonyy li] -1 -(4-nit-30 robentsyylioksikarbonyyli)pym)Iidmiä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimer-kissä 43), saatiin 21 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

101226 148

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 299.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä natriumtetra-5 deuteroitua trimetyylisilyylpropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 1,30 (3H, dubletti, J = 6,4 Hz); 1,46-1,70 (3H, multipletti); 2,02-2,18 (2H, multipletti); 10 2,22 (3H, singletti); 2,69-2,83 (1H, multipletti); 2,90-3,04 (1H, multipletti); 3,78-3,99 (3H, multipletti); 4,12-4,44 (4H, multipletti).

15 ESIMERKKI 44 (1 R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Asetimidoyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli)-l-metyyli-pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eemi-3-20 karboksyylihappo „ 9h>h 0 Λ =J* CH3/N-/Y ^

\ J H \_/ NH

25 >—N-\ ' N

O COOH CH3

Suorittamalla sama menettely kuin on kuvattu esimerkissä 1, mutta käyttämällä 181 mg 4-nitrobentsyyli-( 1R, 5 S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyy li]-1 -metyyli-2-okso-1 -karba-30 penaami-3-karboksylaattia ja 220 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[4-(N-4-nitrobentsyyliok- sikarbonyyliasetimidoyyli)piperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-metyylipyrrolidiniä( valmis- 101226 149 tettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 44), saatiin 20 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 5 299.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä natriumtetra-deuteroitua trimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 10 1,30 (3H, dubletti, J = 6,4 Hz); 1,66 (1H, kaksinkertainen dublettien dubletti, J = 13,7, 8,8 & 5,4 Hz); 2,29 (3H, singletti); 2,35 (3H, singletti); 2,75-2,88 (2H, multipletti); 15 3,10 (1H, kaksi dublettia, J = 12,2 & 1,4 Hz); 3,31-3,43 (2H, multipletti); 3,52 (1H, tripletti, J = 8,3 Hz); 3,60-4,00 (9H, multipletti); 4,18-4,30 (2H, multipletti).

20

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1754, 1608, 1594, 1448, 1384, 1285.

101226 ESIMERKKI 45 150 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-3-Aminopyrrolidin-1 -yy likarbonyy li] -1 -metyy lipy r-rolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eeini-3-5 karboksyylihapon hydrokloridi OH CHj H 8 (H II ___,

10 Γ„/\ iA A;(A A,/ \ H

ch3 γ T \ a nv y, hc/

)— N-1 '—N 'H

O COOH CHj 15 45(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-(4-nitrobentsyylioksikar- bonyyli)aminopyrroIidin-l-yylikarbonyyli]-l-metyylipyrroIidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 18(a), mutta käyttämällä 20 1,05 g (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3S)-3-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)aminopyrroli- din-1 -yylikarbonyyli]-1 -metyylipyrrolidiniä (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3S)-3-(4-nitro-bentsyylioksikarbonyyli)aminopyrrolidin-1 -yylikarbonyyli] -1 -(4-nitrobentsyy lioksikar-bonyyli)pyrrolidinin sijasta, saatiin 1,20 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

25 45(b) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-3-Aminopyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l- metyylipyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihapon hydrokloridi 1,0 g 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-{(3S)-3-(4-nitrobentsyylioksikar-30 bonyyli)aminopyrrolidin-1 -yylikarbonyyli]-1 -metyylipyrrolidin-4-yylitio} -6-[( 1R)-1 - hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on ; kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 30 mlraan tetrahydrofiiraanin ja veden välistä 101226 151 2:1 tilavuusseosta, jonka jälkeen lisättiin 1,04 ml IN vesipitoista kloorivetyhappoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa kaksi tuntia 1,5 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 18(b), jolloin 5 saatiin 175 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 297.

__ 10 Infirapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 3390, 1760, 1655, 1599, 1467, 1374.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä natriumtetra-deuteroitua trimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 15 1,21 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1.29- (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,95-2,30 (1H, multipletti); 2.30- 2,70 (2H, multipletti); 2,96 (3H, dubletti, J = 2,93 Hz); 20 3,15-3,27 (1H, multipletti); 3,27-3,40 (1H, multipletti); 3,46-3,49 (1H, multipletti); 3,50-4,35 (10H, multipletti); 4,45-4,65 (1H, multipletti).

25 101226 ESIMERKKI 46 152 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-Formimidoyyllainmopyrrolidiii-l-yylikarbonyyli]-l-metyylipym>Iidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-inetyyIi-l-karbapen-2-5 eemi-3-karboksyylihappo OH CH, 0 H 9 ! H μ 1[ J—

10 cH3/>“"rV"Svf^^ X

i_i—Il W h n^-'"nh-ch=nh o COOH CHj 15 46(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-(N-4-nitrobentsyylioksi- karbonyyliformimidoyyliamino)pyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l-metyylipyrrolidin- 4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksy laatii

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 23(a), mutta käyttämällä 20 124 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l- karbapenaami-3-karboksylaattia ja 190 mg (2S,4S)-4-merkapto-[(3S)-3-(N-4-nitro- — bentsyy lioksikarbonyyliformimidoyy liamino)pyrrolidin-1 -yy likarbonyyli]-1 -metyyli-pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 46), saatiin 178 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

25 46(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-Formimidoyyliaminopyrrolidin-l-yylikar-bonyyli]-l-metyylipyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo 30 Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 23(b), mutta käyttämällä 170 mg 4-nitrobentsyyli-( 1 R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2-[(3S)-(N-4-nitrobentsyyliok- 1 sikarbonyy liformimidoyyliamino)pyrrolidin-1 -yylikarbonyyli] -1 -metyy lipyrrolidin-4- 101226 153 yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmsitettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä], saatiin 35 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

5 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 298.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 3255, 1755, 1634, 1595, 1455, 1386.

10

Ydinmagneettinen resonanssispektri (400 MHz, D20, käyttämällä natriumtetra-deuteroitua trimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J - 7,32 Hz); 1,31 (3H, dubletti, J = 6,60 Hz); 15 1,60-1,75 (1H, multipletti); 2,30 (3H, dubletti, J = 5,86 Hz); 2.05- 2,50 (2H, multipletti); 2,75-2,95 (2H, multipletti); 3.05- 3,15 (1H, multipletti); 20 3,30-3,50 (3H, multipletti); 3,50-3,95 (4H, multipletti); 3,96-4,05 (1H, multipletti); 4,20 (1H, kaksi dublettia, J = 2m57 & 9,17 Hz); 4,26 (1H, kvartetti, J = 6,40 Hz); 25 4,30-4,47 (1H, multipletti); 7,80, 7,81 & 7,94 (yhdessä 1H, kolme singlettiä).

101226 ESIMERKKI 47 154 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(Imidatsol-l-yyli)piperidin-l-yylikarbonyyli]pyrroIidin- 4-yy litio} -6- [ (1R)-1 -hy droksietyy li]- 1-metyy li-l -karbpen-2-eemi-3-karboksyyli-5 hapon hydrokloridi

OH £H3 O

“sly ?JL·· * ju X \ /v 10 cH3^--py / N\_/N HC/ —\ n\

O COOH H

15 47(a) 4-Nitrobentsyyli-( 1 R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2- [4-(imidatsol- 1-yy li)piperidin-l - yylikarbonyy li] -1 -(4-nitrobentsyy lioksikarbonyy li)py rrolid in-4-yy litio} -6- [(1R)-1 -hy droksietyyli]-1-metyyli-1-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 560 μί difenyylifosforyylikloridia ja 470 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin 20 pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 910 mg 4-nitroben-tyyli-( 1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-kar-boksylaattia 10 mlrssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 30 minuuttia samoissa olosuhteissa. Liuos, joka sisälsi 1140 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[4-(imidatsoli-1 -yyli)piperidin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-25 li)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 47) 10 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 435 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen ja seosta sekoitettiin kaksi tuntia samalla jäähdyttäen jäällä, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli lämpötilassa 4 °C. Tämän jälkeen reaktios laimennettiin yhtä suurella määrällä vettä ja sekoitettiin 800 mg:lla natrium-30 vetykarbonaattia. Siten saatu seos puhdistettiin käänteisfaasikromatografialla 200 ml:n Cosmo Sil 75Cjg-PREP (yhtiän Nacalai Tesque tuotteen tavaramerkki) läpi käyttä-1 mällä asetnitriilin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta eluenttina. Ne fraktiot, jotka 101226 155 sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin ja väkevöitiin, jolloin saatiin 1,40 g otsikkoyh-distettä pulverin muodossa.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 5 270 MHz), δ ppm: 1,12-1,20 (6H, multipletti); 1,58-1,90 (3H, multipletti); 1,91-2,06 (2H, multipletti); 2,62-2,79 (1H, multipletti); _ 10 2,80-2,97 (1H, multipletti); 3,06-3,37 (4H, multipletti); 3,55-3,70 (1H, multipletti); 3,94-4,56 (5H, multipletti); 4,74-4,97 (1H, multipletti); 15 5,04-5,49 (5H, multipletti); 6,81-8,28 (11H, multipletti).

47(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(Imidatsol-l-yyli)piperidin-l-yylikarbonyy-li]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-inetyyli-l-karbapeii-2-eeiiii-3-20 karboksyylihapon hydrokloridi 200 mg 4-nitrobentsyyli-( 1 R,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(imidatsol-1 -yyli)piperidin-1 -yyli-karbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on 25 kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin seokseen, joka sisälsi 15 ml tetrahydrofuraania .. ja 10 ml vettä ja liuosta sekoitettiin voimakkaasti lämpötilassa 28-30 °C 1,7 tuntia vedyn atmosfäärissä ja 0,3 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodos pestiin kolme kertaa, joka kerta 20 mkssa dietyylieetteriä. Tuloksena saatu vesiliuos väkevöitiin haihduttamalla alennetus-30 sa paineessa. Konsentraatti puhdistettiin käänteisfaasikromatografialla 20 ml:n Cosmo Sil 75Cjg-PREP (yhtiön Nacalai Tesque tuotteen tavaramerkki) läpi käyttämällä vettä 101226 156 eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 18 mg otsikkoyhdistettä värittömän pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 5 297.

ESIMERKKI 48 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(33-Dimetyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli)pyrrolidin-4-10 yylitio] -6- ((1R)-1 -hy d roksietyy li] - 1-metyy li-1-karbapen-2-eemi-3-karboksyy liha- _ pon hydrokloridi 15 R ?H ϊ**3 H 0 Äif s P I 3 CH3'N—kV N-H HC/ —N-1 '—N H ^^ O COOH h 20 48(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[3,3-dimetyyIi-4-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-I-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 25 67 μί difenyylifosforyylikloridia ja 56 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 100 mg 4-nitrobentsyyli-(1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karbok-sylaattia 1,5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa 30 lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 200 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[3,3-dimetyyli-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmis- 101226 157 tusesimerkissä 48) 1,5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 56 μι di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen ja seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella 5 menetelmällä kuin on kuvattu esimerkissä 7(a), jolloin saatiin 205 mg otsikkoyhdistet-tä pulverin muodossa.

48(b) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(3j3-Dimetyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli)pyrroli-din-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karbok-10 syylihapon kloorivety 205 mg 4-nitrobentsyyli-( 1 R,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[3,3-dimetyyli-4-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyr-rolidin-4-yylitio} -6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karbok-15 sylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 5 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta, jonka jälkeen lisättiin 0,23 ml IN vesipitoista kloorivetyhappoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa kaksi tuntia 200 mg:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetel-20 mällä kuin on kuvattu esimerkissä 7(b), jolloin saatiin 35 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 296.

25 ESIMERKKI 49 101226 158 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(l-Homopiperatsinyylikarbonyyli)-l-metyylipyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyIi-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyliha-5 pon hydroldoridi 49(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbo-nyyli)-l-homopiperatsinyyIikarbonyyli]-l-metyylipyrrolidln-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hy droksietyy li] -1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksy laatii 10 0,89 ml difenyylifosforyylikloridia ja 0,75 ml di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin samanaikaisesti pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 1,4g4-nitrobentsyyli-( 1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karba-penaami-3-karboksylaattia 14 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta 15 sekoitettiin samassa lämpötilassa 40 minuuttia. Liuos, joka sisälsi 2,68 g (2S,4S)-4-merkapto-1 -metyyli-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-1 -homopiperatsinyylikar-bonyyli]pyrrolidinin trifluorimetaanisulfonaattia (valmistetti kuten on kuvattu valmis-tusesimerkissä 49) 14 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 1,64 ml di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen ja tuloksena saatua seosta 20 sekoitettiin samassa lämpötilassa 5 tuntia, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla. Laimennettu liuos pestiin sitten natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella fosfaattipuskuriliuoksella (pH 6,86), vedellä ja natriumkloridin vesiliuoksella, tässä järjestyksessä, jonka jälkeen se kuivat-25 tiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin sitten tislaamalla .. alennetussa paineessa kolonnikromatografialla silikageelin (Merck Art n:o 7734) läpi käyttämällä gradienttieluointimenetelmää etyyliasetaatin ja metanolin 85:15 - 80:20 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 1,7 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

30 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1769, 1702, 1642, 1521, 1346.

101226 159

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1,27 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,35 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,40-2,05 (6H, multipletti); 5 2,32-2,85 (3H, multipletti); 3,15-4,05 (13H, multipletti); 4.20- 4,37 (2H, multipletti); 5.20- 5,52 (4H, multipletti); 7,47-7,53 (2H, multipletti); 10 7,67 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,23 (4H, dubletti, J = 8,79 Hz).

49(b)(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(l-Homopiperatsinyylikarbonyyli)-l-metyylipyrro-lidin-4-yy litio] -6- [(1R)-1 -hydroksietyy li] -1 -metyyli- l-karbapen-2-eemi-3-karbok-15 syylihapon hydrokloridi

Liuos, joka sisälsi 1,3 g 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[4-(4-nitrobent-syy lioksikarbonyyli)-1 -homopiperatsinyylikarbonyyli]-1 -metyylipyrrolidin-4-yylitio]-6-[(1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu 20 kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] 20 ml:ssa tetrahydrofuraanin ja veden välistä — 1:1 tilavuusseosta, sekoitettiin 2,6 ml:ssa IN vesipitoista kloorivetyhappoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa kaksi tuntia 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Sitten katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodos pestiin dietyylieetterillä. Vesiliuos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, 25 jonka jälkeen jäännös puhdistettiin käänteisfaasikromatografialla Lobar kolonnin (Merck, LiChroprep RP-8, koko B) läpi käyttämällä vettä eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, kerättiin, väkevöitiin ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 260 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

30 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1759, 1650, 1598, 1458, 1389.

101226 160

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) λιη2χ nm: 287,6.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitua 5 natriumtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,29 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,99-2,32 (3H, multipletti); 2,97 (3H, singletti); 10 3,18-4,05 (13H, multipletti); 4,12-4,35 (3H, multipletti); 4,66-4,82 (1H, multipletti).

ESIMERKKI 50 15 (lR,5S,6S)-2-|(2S,4S)-2-(4-Karboksimetyyli-l-homopiperatsinyylikarbonyyIi)pyr- rolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3- karboksyylihappo 20 50(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikar- bonyylimetyyIi)-l-homopiperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-((lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksy laatii 25 0,37 ml difenyylifosforyylikloridia ja 0,31 ml di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin .. pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 580 mg 4-nitrobent- syyli-( 1 R,5S,6S)--6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksylaattia 10 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. 0,99 ml di-isopropyylietyyliaminiinia ja 30 liuos, joka sisälsi 1,43 g (2S,4S)-4-merkapto-3-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylime-tyyli)-l -homopiperaysinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin bis(trifluorimetaanisulfonaatti)a (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 101226 161 50) 10 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös sekoitettiin natriumvetykarbonaatin vesiliuoksen kanssa. Sitten 5 se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös ajettiin kolonnikromato-grafialla Lobar kolonnin (Merck, LiChroprep Si60, koko B) läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 1:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 1,1 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

10

Infrapuna-absorptiospektri (KBr)m umax cm'1: 1771, 1709, 1647, 1606, 1521, 1346.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, CDCf3), δ ppm: 15 1,28 (3H, dubletti, J = 6,84 Hz); 1,37 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,74-2,04 (4H, multipletti); 2,62-2,96 (6H, multipletti); 3,27 (1H, kaksi dublettia, J = 6,83 & 2,44 Hz); 20 3,34-3,79 (9H, multipletti); 4,19-42,7 (2H, multipletti); 4,66-4,77 (1H, multipletti); 5,06-5,52 (6H, multipletti); 7,45-7,52 (4H, multipletti); 25 7,65 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,23 (6H, J - 8,79 Hz).

101226 162 50(b) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Karboksimetyyli-l-homopiperatsinyylikar-bonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo 5 Liuos, joka sisälsi 0,5 g 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2*[(2S,4S)-2-[4-(4-nitrobent-syylioksikarbonyylimetyyli)-1 -homopiperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksi-karbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(l R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] 15 ml:ssa tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta, sekoitettiin 10 0,26 ml:lla IN vesipitoisen kloorivetyhapon kanssa ja seos hydrattiin kuplittamalla _____ vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa 90 minuuttia 0,5 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Katalyytti poistettiin sitten suodattamalla ja suodos pestiin dietyyli-eetterillä. Pesty vesiliuos väkevöitiin sitten haihduttamalla alennetussa paineessa ja konsentraatti puhdistettiin käänteisfaasikolonnikormatografialla Lobar kolonnin 15 (Merck, LiChroprep RP-8, koko B) läpi käyttämällä 1 % t/t vesipitoista metanolia eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, kerättiin, väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 170 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

20 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), t>max cm'1: 1754, 1638, 1460, 1374.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) ληΐ3χ nm: 296,6.

25 .. Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitus natriumtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,22 (3H, dubletti, J = 7,33 Hz); 1,30 (3H, dubletti, J = 6,34 Hz); 30 1,93-2,10 (1H, multipletti); 2,13-2,42 (2H, multipletti); : 2,95-3,17 (1H, multipletti); 101226 163 3,27-3,98 (13H, multipletti); 3,99-4,15 (2H, multipletti); 4,18-4,35 (2H, multipletti); 4,43-4,65 (1H, multipletti).

5 ESIMERKKI 51 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Metyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli)-l-metyylipyrroli-din-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karbok-10 syylihapon hydrokloridi 51(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-metyyli-l-piperatsinyyIikar-bonyyli)-l-metyyIipyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 15 540 μ£ difenyylifosforyylikloridia ja 470 μ£ di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 920 mg 4-nitrobent-syy li-( 1 R,5 S,6S)-6- [(1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-kar-boksylaattia 10 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 20 samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. 1400 μί di-isopropyylietyyliamiinia ja liuos, joka sisälsi 1350 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-(4-metyyli-1 -piperatsinyylikarbonyyli)-1 -metyylipyrrolidinin bis(trifluorimetaanisulfonaatti)a (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 51) 5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta 25 sekoitettiin samassa lämpötilassa kaksi tuntia, jonka jälkeen sen annettiin siestä yön .. yli jääkaapissa. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin kromatografialla Lobar kolonnin (Merck, LiChroprep RP-8, koko B) läpi. Kolonni eluoitiin peräkkäin 65 til.%:sella vesipitoisella metanolilla ja 70 til.%:sella vesipitoisella metanolilla. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, 30 yhdistettiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 730 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

u 164

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 1,27 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 1,37 (3H, dubletti, J = 6,3 Hz); 1,83-1,93 (1H, multipletti); 5 2,30 (3H, singletti); 2,35 (3H, singletti); 2,35-2,48 (4H, multipletti); 2,57-2,73 (2H, multipletti); 3,13-3,36 (4H, multipletti); 10 3,55-3,95 (5H, multipletti); 4,21-4,28 (2H, multipletti); 5,25 (1H, dubletti, J = 14,2 Hz); 5,48 (1H, dubletti, J = 14,2 Hz); 7,66 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 15 8,23 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz).

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm-1: 1769, 1706, 1639, 1606, 1521, 1450, 1346, 1208, 1137.

20 51(b) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Metyyli-l-piperatsinyylikarbonyyIi)-l-metyyli- pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihapon hydrokloridi

Liuos, joka sisälsi 720 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-metyyli-l-25 piperatsinyylikarbonyyli)-1 -metyyli-pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(l R)-1 -hydroksietyyli]-1 - metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] 60 ml:ssa tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta sekoitettiin 1,2 ml:lla IN vesipitoista kloorivetyhappoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa kaksi tuntia 800 mg:n 10 % p/p palladium-puuhiilen 30 läsnäollessa. Katalyytti poistettiin sitten suodattamalla ja suodos pestiin dietyylieette-rillä. Vesiliuos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jäännös alitistettiin kolonnikromatografialle käyttämällä Lobar kolonnia (Merck, LiChroprep RP-8, koko 101226 165 B) ja kolonni eluoitiin 3 til.%:sella vesipitoisella metanolilla. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin ja väkevöitiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 326 mg otsikkoyhdistettä värittömän pulverin muodossa.

5 Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitua natriumtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 6,8 Hz); 1,29 (3H, dubletti, J = 6,3 Hz); 1,97-2,07 (1H, multipletti); 10 1,97-2,07 (1H, multipletti); 2.96 (3H, singletti); 2.97 (3H, singletti); 3,18-3,50 (8H, multipletti); 3,67-3,84 (5H, multipletti); 15 4,17-4,30 (3H, multipletti); 4,70-4,77 (1H, multipletti).

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1754, 1658, 1600, 1456, 1385, 1261.

20

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Ämax nm (): 297 (8660).

ESIMERKKI 52 101226 166 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-l-piperatsinyyIikarbonyyIi]-l-metyylipyirolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-5 eemi-3-karboksyylihapon hydrokloridi 52(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-hydroksietyyli)-l-piperat-sinyylikarbonyyli]-l-metyylipyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyliJ-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 10 _ 600 μΐ difenyylifosforyylikloridia ja 510 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 1000 mg 4-nitro-bentsyyli-( 1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksylaattia 10 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 15 samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. 1800 μί di-isopropyylietyyliamiinia ja liuos, joka sisälsi 1680 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[4-(2-hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikar-bonyyli]-l-metyylipyrrolidinin bis(trifluorimetaanisulfonaatti)a (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 52) 5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua 20 seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa kaksi tuntia, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli jääkaapissa. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa — ja jäännös ajettiin kolonnikromatografialla Lobar kolonnin (Merck, LiChroprep RP-8, koko B) läpi. Kolonni eluoitiin ensin 55 til.%:sella t/t vesipitoisella metanolilla ja sitten 60 %:sella t/t vesipitoisella metnaolilla. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyh-25 distettä, kerättiin, väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, . jolloin saatiin 710 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 1,27 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 30 1,36 (3H, dubletti, J = 5,9 Hz); 1,83-1,93 (1H, multipletti); » 2,34 (3H, singletti); 101226 167 2,40-2,76 (8H, multipletti); 3,10-3,38 (4H, multipletti); 3,55-4,04 (7H, multipletti); 4,18-4,31 (2H, multipletti); 5 5,24 (1H, dubletti, J = 13,8 Hz); 5,48 (1H, dubletti, J = 13,8 Hz); 7,66 (2H, dubletti, J = 8,6 Hz); 8,22 (2H, dubletti, J = 8,6 Hz).

10 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1756, 1651, 1596, 1464, 1390, 1373, 1286, 1261.

52(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyliJ-l-metyylipyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-15 eemi-3-karboksyylihapon hydrokloridi

Liuos, joka sisälsi 700 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)--2-[4-(2-hydrok-sietyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyy li] -1 -metyy lipyrrolidin-4-yylitio} -6-[( 1R)-1 -hydrok-sietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu 20 vaiheessa (a) edellä] 60 ml:ssa tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta sekoitettiin 1,15 ml:ssa IN vesipitoista kloori vety happoa ja seos hydrattiin kuplitta-malla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa kaksi tuntia, 1000 mg:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodos uutettiin dietyylieetterillä. Jäljellejäänytvesikerros väkevöitiin haihduttamalla 25 alennetussa paineessa ja jäännös ajettiin kolonnikromatografialla Lobar kolonnin (Merck, LiChroprep RP-8-, koko B) läpi. Kolonni eluoitiin 1,5 %:sella t/t vesipitoi- • · sella metanolilla ja ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin, väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 300 mg otsikkoyhdistettä värittömän pulverin muodossa.

30 101226 168

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitua natriumtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 1,29 (3H, dubletti, J = 6,3 Hz); 5 1,98-2,07 (1H, multipletti)·, 2,95 (3H, singletti); 3,17-3,45 (9H, multipletti); 3,45-3,52 (1H, multipletti); 3,64-3,86 (5H, multipletti); 10 3,86-3,95 (2H, multipletti); _ 4,13-4,30 (3H, multipletti); 4,68-4,77 (1H, multipletti).

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 15 1757, 1658, 1596, 1450, 1391, 1374, 1260.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20, Xmax nm (): 297 (9252).

20 ESIMERKKI 53 (1 R,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Karbamoyylioksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyy-li]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihapon hydrokloridi 25 53(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-]4-(2-karbamoyylioksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyIi)pyrrolidin-4-yylitio}- 6- [(1R)-1 -hy droksietyy li] -1 -metyy li-1-karbapen-2-eemi-3-karboksy laatti 30 91 μί difenyylifosforyylikloridia ja 77 μ( di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäällä jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi 152 mg 4-nitrobentsyyli-* (1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hy droksietyy li]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksy- 101226 169 laattia 2,0 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. 176 μί di-isopropyylietyyliamiinia ja liuos, joka sisälsi 318 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-[4-(2-karbomoyylioksietyyli)-l-piperat-sinyylikarbonyyli]-l -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pynOlidinin trifluorimetaanisul-5 fonaattia (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 53) 2,0 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa kaksi tuntia, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli jääkaapissa. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös sekoitettiin natriumvetykarbonaatin 10 vesiliuoksen kanssa. Sitten seos uutettiin etyyliasetaatilla ja uute kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin sitten uutteesta tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kromatografialla Lobar kolonnin (Merck, LiChroprep Si60, koko B) läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 5:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 99 mg otsikkoyhdistettä pulverin 15 muodossa.

Inffapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1773, 1711, 1650, 1521, 1345.

20 Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi), δ ppm: 1.15 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1.16 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,51-1,72 (1 H, multipletti); 25 2,10-2,57 (6H. multipletti); 2,72-2,93 (1H, multipletti); 3,06-4,30 (13H, multipletti); 4,76 & 4,85 (yhdessä 1H, kaksi triplettiä, J = 14,16 Hz); 6,46 (2H, leveä singletti); 30 7,55 & 7,65 (2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 7,72 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,22 & 8,23 (4H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

101226 170 53(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-KarbamoyyIioksietyyli)-l-piperatsinyylikar-bonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyIi]-l-metyyli-l-karbapeii-2-eemi-3-karboksyylihapon hydrokloridi 5 1,0 g 4-nitrobentsyyli-((lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-karbamoyylioksietyyli)-l- piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-[(1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 60 ml:aan tetrahydrofuräänin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen 10 lämpötilassa kolme tuntia 1,1 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodos uutettiin dietyylieetterillä. Jäljelle jäänyt vesikerros väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös ajettiin kolonnikromatografialla Lobar kolonnin (Merck, LiChroprep RP-8-, koko B) läpi. Kolonni eluoitiin 20 %:sella t/t vesipitoisella metanolilla. Ne fraktiot, 15 jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin ja pH-arvo säädettiin arvoon 4 lisäämällä IN vesipitoista kloorivetyhappoa. Sitten liuos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja konsentraatti lyofilisoitiin, jolloin saatiin 327 mg otsikkoyhdistettä värittömän pulverin muodossa.

20 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm"1: . . 1728, 1654, 1597, 1392.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xinay nm (): 297 (9706).

25

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitua natriumtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 1,29 (3H, dubletti, J = 6,3 Hz); 30 1,95-2,06 (1 H, multipletti); 3,01-3,25 (7H, multipletti); 3,31-3,43 (1H, multipletti); 101226 171 3,46-3,52 (2H, multipletti); 3,72-3,90 (5H, multipletti); 4,02-4,11 (1H, multipletti); 4,21-4,30 (2H, multipletti); 5 4,32-4,36 (2H, multipletti); 4,82-4,89 (1H, multipletti).

ESIMERKKI 54 10 (lR4>S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-HydroksietyyIi)-l-piperatsinyylikarbonyyli]pyrToli- din-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyIi]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karbok-syylihapon hydrokloridi 54(a)(i) 4-NitrobentsyyIi-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[4-(2-hydroksietyyli)-l-15 piperatsmyylikarbonyyli]-l-(4-iiitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrroUdiii-4-yylitio]- 6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 90 μί difenyylifosforyylikloridia ja 76 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 148 mg 4-nitrobentsyyli-20 (1 R,5 S,6S)-6- [(1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksy- w. laattia 1,9 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa • t lämpötilassa yhden tunnin ajan. 257 μί di-isopropyylietyyliamiinia ja 361 mg (2S ,4S)-2- [4-(2-hydroksietyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyyliJ-4-merkapto-1 -(4-nitrobent-syylioksikarbonyyli)pyrrolidinin bis(trifluorimetaanisulfonaatti)a (valmistettukuten on 25 kuvattu valmistusesimerkissä 54) lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa : lämpötilassa 6 tuntia, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli jääkaapissa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin samanlaisella tavalla kuin on kuvattu esimerkissä 49(b). Siten saatu raakatuote puhdistettiin kromatografialla Lobar kolonnin (Merck, LiChro-30 prep Si60) läpi käyttämällä asetnitriilin ja metanolin välistä 5:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 220 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

101226 172

Ultraviolettiabsorptiospektri (MeOH) Xmax nm: 268, 315.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), omax cm'1: 5 1772, 1710, 1652, 1606, 1521, 1489, 1440, 1405, 1345, 1280, 1207.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1,27 & 1,28 (3H, kaksi dublettia, J = 7,33 Hz); 1,37 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 10 1,82-2,00 (1H, multipletti); _ 2,33-2,78 (8H, multipletti); 3,25-3,29 (1H, multipletti); 3,32-3,82 (9H, multipletti); 4,00-4,30 (3H, multipletti); 15 4,69 & 4,74 (1H, kaksi triplettiä, J = 7,81 Hz); 5,05-5,52 (5H, multipletti); 7,44 & 7,51 (2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 7,64 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,23 (4H, dubletti, J = 8,79 Hz).

20 . . 54(a)(i’) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-|4-(2-hydroksietyyIi)-l- piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitorbentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiii-4-yylitio]- 6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 25 1,82 ml difenyylifosforyylikloridia ja 1,54 ml di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 3,0 g 4-nitrobent- • · ‘ syyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-1 -hydroksietyyli]-l -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3- karboksylaattia 18 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. 1,54 ml di-isopropyylietyyliamiinia ja liuos, 30 joka sisälsi 3,63g (2S,4S)-2-[4-(2-hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-4- merkapto-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniälisättiinsittensamanaikaisesti pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 101226 173 samassa lämpötilassa kolme tuntia, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli jääkaapissa. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin samanlaisella tavalla kuin on kuvattu esimerkissä 49(b). Sitten saatu raakatuote puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 2:1 tilavuusseosta 5 eluenttina, jolloin saatiin 3,4 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa. Tuotteen infrapuna-absorptiospektri ja ydinmagneettinen resonanssispektri olivat identtiset edellä kuvatun vaiheen 54(i) yhdisteen kanssa.

54(a)(ii) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-HydroksietyyIi)-l-piperatsinyylikar-w 10 bonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2- eemi-3-karboksyylihapon kloorivety 1,38 g 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[4-(2-hydroksietyyli)-l-piperat-sinyy likarbonyy li] -1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6- [(1R)-1 -15 hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa 54(a)(i) tai vaiheessa 54(a)(i’) edellä] liuotettiin 40 ml:aan tetrahyd-rofuräänin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa kaksi tuntia 1,2 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodos uutettiin dietyyli-20 eetterillä. Jäljelle jääneen vesikerroksen pH säädettiin arvoon 4 lisäämällä IN vesipi- 7 , . toista kloorivetyhappoa ja sitten liuos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa painees- • < sa. Tuloksena saatu jäännös ajettiin kolonnikromatografialla Lobar kolonnin (Merkc, LiChroprep RP-8-, koko B) läpi ja kolonni eluoitiin 38 %:sella t/t vesipitoisella me-tanolilla. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin, väkevöitiin 25 haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 314 mg otsikko-yhdistettä värittömän pulverin muodossa.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä natriumtetra-deuteroitua trimetyylisilyylpropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 30 1,21 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 1,28 (3H, dubletti, J = 6,4 Hz); 1,97-2,07 (1H, multipletti); 101226 174 3,02-3,13 (1H, multipletti); 3,32-3,70 (10H, multipletti); 3,70-4,00 (6H, multipletti); 4,00-4,16 (1H, multipletti); 5 4,18-4,29 (2H, multipletti); 4,86-4,92 (1H, multipletti).

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20 Xmax nm ( ): 297 (8124).

10

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm-1: 1757, 1659, 1595, 1393, 1376, 1277.

54(b)(i) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-[4-(2-4’-nitrobentsyylioksikar-15 bonyylietyyli)-l -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyr- rolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 6,38 g difenyylifosforyylikloridia ja 5,37 ml di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin 20 pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 10,63 g 4-nitrobent- syyli-(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-2-okso-l-karbapenaami-3- ~ karboksylaattia 75 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. 16,26 ml di-isopropyylietyyliamiinia ja liuosta, joka sisälsi 32,5 g (2S,4S)-4-merkapto-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-25 li)oksietyyli]-1 -piperatsinyylikarbonyyli} -1 -(4-nitrobentsyy lioksikarbonyy li)pyrrolidi- nin bis(trifluorimetaanisulfonaatti)a 65 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin sitten samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan, jonka jälkeen sen annettiin seistä huoneen lämpötilassa samalla jäähdyttäen jäällä. Tämän jälkeen 30 liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös sekoitet tiin natriumvetykarbonaatin vesiliuoksen kanssa; sitten se uutettiin etyyliasetaatilla.

1 Uute kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja liuotin poistettiin tislaamalla 101226 175 alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 18:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 19,75 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

5 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), cm'1: 1769, 1751, 1710, 1653, 1607, 1521, 1443, 1347.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1.27 & 1,28 (3H, kaksi dublettia, J = 7,33 Hz); 10 1,37 (3H, dubletti, J - 6,35 Hz); 1,78-1,98 (1H, multipletti); 2.31- 2,80 (7H, multipletti); 3.27 (1H, kaksi dublettia, J = 6,83 & 2,44 Hz); 3.31- 3,76 (8H, multipletti); 15 4,01-4,33 (5H, multipletti); 4,68 & 4,74 (1H, kaksi triplettiä, J = 7,81 Hz); 5,04-5,52 (6H, multipletti); 7,44 & 7,51 (2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 7,55 & 7,65 (4H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 20 8,17 & 8,25 (6H, multipletti).

54(b)(i’) 4-NitrobentsyyIi-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-[4-(2-4’-nitrobentsyylioksikar-bonyylioksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hyroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-25 karboksylaatti • * 675 μί difenyylifosforyylikloridia ja 567 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 1,12 g 4-nitrobent-syyli-( 1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-kar-30 boksylaattia 10 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 2,30 g (2S,4S)-4-merkap-: to-2- {4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-1 -piperatsinyylikarbonyyli} -1 - 101226 176 (4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä 5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin sitten pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella tavalla kuin on kuvattu vaiheessa 54(b)(i) 5 edellä, jolloin saatiiin 2,70 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa. Siten saadun yhdisteen infrapuna-absorptiosepktri ja ydinmagneettinen resonanssispektri olivat identtiset edellä kuvatussa vaiheessa 54(b)(i) valmistetun yhdisteen kanssa.

54(b)(”) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-[4-(2-4’-nitrobentsyylioksikar-10 bonyylioksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy- _ li)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti

Liuos, joka sisälsi 28,3 mg4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-fenyylisulfinyyli-6-[(lR)-15 l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia 1 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin pisara kerrallaan liuokseen, joka sisälsi 112 mg (2S,4S)-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy li)oksietyy li] -1 -piperatsinyy likarbonyy li} -4-merkapto-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä 0,5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden 20 tunnin ajan. Tämän jälkeen reaktioseos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikagee- ~ Iin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 20:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 14 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa. Siten saadun yhdisteen infrapuna-absorptiospektri ja ydinmagneettinen resonanssispektri olivat identtiset edel-25 lä kuvatun vaiheen 54(b)(i) yhdisteen kanssa.

• · 101226 177 54(b)(i”’) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-[4-(2-4’-nitrobentsyylioksi-karbonyylioksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eem ί-3-karboksylaatti 5

Liuos, joka sisälsi 50 mg 4-nitrobentsyyli-(l]L5S,6S)-2-(4-kloorifenyyli)sulfinyy-li-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattiajal 9,4mg di-isopropyylietyyliamiinia 0,5 ml.ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin pisara kerrallaan liuokseen, joka sisälsi 93 mg (2S,4S)-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)ok-10 sietyyli]-l-piperatsinyylikarbonyyli}-4-merkapto-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy- li)pyrrolidiniä 0,5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen reaktioseos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös työstettiin samanlaisella tavalla kuin on kuvattu vaiheessa 54(a)(i), jolloin saatiin 13 15 mg 4-nitrobentsyyli-( 1 R,5 S,6S)-2- {(2S,4S)-[4-(2-4’ -nitrobentsyylioksikarbonyyliok- sietyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio} -6- [(1R)-1 -hydroksietyyli] -1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3 -karboksy laattia pulverin muodossa. Siten saadun yhdisteen infrapuna-absorptiospektri ja ydinmagneet-tinen resonanssispektri olivat identtiset edellä kuvatun vaiheen 54(b)(i) yhdisteen 20 kanssa.

54(b)(ii) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikar-bonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihapon hydrokloridi 25 .. 0,962 g 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-[4-(2-4’-nitrobentsyylioksikar- * bonyylioksietyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyr- rolidin-4-yylitio}-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksy-laattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheissa 54(b)(i) - 54(b)(i’”) edellä] liuotettiin 30 30 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta, johon oli lisätty 1,2 ml IN vesipitoista kloorivetyhappoa ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi : 1 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen katalyytti poistettiin 101226 178 suodattamalla ja suodon uutettiin etyyliasetaatilla. Vesikerros väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös ajettiin kolonnikromatografialla Lobar kolonnin (Merck, LiChroprep RP-8, koko B) läpi käyttämällä 3 %:sta t/t vesipitoista metanolia eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, 5 yhdistettiin, väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 181 mg otsikkoyhdistettä värittömän pulverin muodossa.

Siten saadun yhdisteen infrapuna-absorptiospektri ja ydinmagneettinen resonanssi spektri olivat identtiset edellä kuvatun vaiheen 54(a)(ii) yhdisteen kanssa.

10 ESIMERKKI 55 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(l-Piperatsinyylikarbonyyli)-l-metyyIipyrrolidin-4- yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karbksyyIihapon 15 hydrokloridi 55(a) 4-N itrobentsyy li-( 1 R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2- [4-(4-nitrobentsyy lioksikar- bonyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-metyylipyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-20 hydroksietyyIi]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 7,0 g difenyylifosforyylikloridia ja 3,4 g di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 8,6 g 4-nitrobentsyyli-(1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksy-25 laattia 120 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa .. lämpötilassa yhden tunnin ajan. 6,7 g di-isopropyylietyyliamiinia ja liuos, joka sisälsi 13,8 g (2S,4S-4-merkapto-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-l-piperatsinyylikar-bonyylij-l-metyylipyrrolidinin trifluorimetaanisulfonaattia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saadun seoksen 30 annettiin seistä yön yli samalla jäähdyttäen jäällä. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella tavalla kuin on kuvattu esimerkissä 49(a), jolloin : saatiin 7,0 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

101226 179

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), omav cm'1: 1771, 1706, 1647, 1521, 1436, 1346.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 5 1,27 (3H, dubletti, J = 6,84 Hz); 1.37 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,79-1,95 (1H, multipletti); 2.37 (3H, singletti); 2,60-2,81 (2H, multipletti); w 10 3,10-3,92 (13H, multipletti); 3,97-4,33 (3H, multipletti); 5,21-5,52 (4H, multipletti); 7,53 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,66 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 15 8,22 & 8,24 (4H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

55(b) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(l-Piperatsinyylikarbonyyli)-l-metyylipyiTolidiii-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyliJ-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyliha-pon hydrokloridi 20 0,22 g 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li) 1 -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -metyylipyrrolidin-4-yylitio]-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin tetrahydrofuraanin ja veden välisessä 1:1 tilavuusseoksessa ja 25 seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi kaksi tuntia 0,22 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa. Tämän jälkeen katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodos pestiin dietyylieetterillä. Jäljelle jäänyt vesikerros väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös sekoitettiin 0,35 ml:aan IN vesipitoista kloorivetyhappoa. Seos puhdistettiin käänteisfaasikolonnikromatografialla Lobar 30 kolonnin (Merck, LiChroprep RP-8, koko B) läpi käyttämällä 2 %:sta t/t vesipitoista metanolia eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin, 101226 180 väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 98 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), Uj^cm*1: 5 1759, 1657, 1600, 1451, 1383, 1266.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 296,6.

10 Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä natriumtetra-deuteroitua trimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), 6 ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,29 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,91-2,19 (1H, multipletti); 15 2,96 (3H, singletti); 3,15-3,43 (6H, multipletti); 3,48 (1H, kaksi dublettia, J = 6,11 & 2,69 Hz); 3,66-3,82 (4H, multipletti); 3,89-3,93 (2H, multipletti); 20 4,13-4,31 (3H, multipletti); 4,64-4,83 (1 H, multipletti).

« ESIMERKKI 56 181 101226 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Karboksimetyyli-l-piperatsinyyIikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-l-[(lR)-l-lhydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyli-5 happo 56(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(4-nitrobentsyyIioksikar-bonyylimetyyli)-l-piperatsinyyIikarbonyyIi]pyrroIidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyy li] -1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 10 290 μΐ difenyylifosforyylikloridia ja 245 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 500 mg 4-nitrobent-syy li-( 1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-kar-boksylaattia 5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa 15 lämpötilassa yhden tunnin ajan. 520 μί di-isopropyylietyyliamiinia ja liuos, joka sisälsi 1,57 g (2S,4S)-4-merkapto-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylimetyyli)-l-piperatsinyy likarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin bis(trifluori-metaanisulfonaatti)a (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 56) 5 ml.ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla 20 jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saadun seoksen annettiin seistä yön yli samassa lämpötilassa. Tämän jälkeen liuotin poistettiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös ajettiin kolonnikromatografialla Lobar kolonnin (Merck, LiChroprep Si60, koko B) läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 5:1 tilavuusseosta eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin ja 25 väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 706 mg otsikkoyhdis-.. tettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), t>max cm'1: 1772, 1710, 1654, 1521, 1346.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 1,27 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 30 101226 182 1,37 (3H, dubletti, J = 5,9 Hz); 1,85-2,06 (2H, multipletti); 2,53-2,77 (5G, multipletti); 3,25-3,76 (10H, multipletti); 5 4,03-4,28 (3H, multipletti); 4,67-4,79 (1H, multipletti); 5,06-5,52 (6H, multipletti); 7,43-7,66 (6H, multipletti); 8,20 & 8,25 (6H, multipletti).

10 56(b) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Karboksimetyyli-l-piperatsinyylikarbonyy-li)pyrrolidin-4-yylitio]-l-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo 15 200 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy- limetyy li)-1 -piperatsinyy likarbonyyliJpyrrolidin-4-yy Itiö } -6- [(1R)-1 -hydroksietyy li]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 20 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta ja seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi 0,3 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen 20 länsäollessa. Tämän jälkeen katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodos uutettiin 30 ml:ssa eetteriä. Jäljelle jäänyt vesikerros erotettiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös ajettiin kolonnikromatografialla Lobar kolonnin (Merck, LiChroprep RP-8, koko B) läpi käyttämällä vettä eluenttina. Ne . fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin, väkevöitiin haihduttamalla 25 alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 20 mg otsikkoyhdistettä värittö-män pulverin muodossa.

Infrapima-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1755, 1639, 1603, 1386.

30

Ultraviolettiabsorptiospektri (H2) Xmax nm (): 1 297 (7753).

ID 1226 183

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20 δ ppm: 1,02 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 1,10 (3H, dubletti, J = 6,3 Hz); 1,72-1,82 (1H, multipletti); 5 2,77-2,88 (1H, multipletti); 2,95-3,10 (4H, multipletti); 3,10-3,32 (3H, multipletti); 3,39 (2H, singletti); 3,44-3,75 (6H, multipletti); 10 3,79-3,88 (1H, multipletti); 4,01-4,10 (2H, multipletti).

ESIMERKKI 57 15 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]pyrroli-din-4-yylitio}-6[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyy-lihapon hydrokloridi 57(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-[(2Rm4S)-[4-(2-4’-nitrobentsyylioksikar-20 bonyylioksietyyli)l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 109 μ f difenyylifosforyylikloridia ja 92 μ l di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara 25 kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 181 mg 4-nitrobentsyyli-(1 R,5S,6S)-6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-karboksy-laattia 2 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samssa lämpötilassa 50 minuuttia. 87,1 μί di-isopropyylietyyliamiinia ja liuos, joka sisälsi 308 mg (2S ,4S)-4-merkapto-2- {4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylu)oksietyyli]-1 -30 piperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä (valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 57) 1 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 101226 184 samassa lämpötilassa 5 tuntia. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 5:1 tilavuusseosta eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin ja väkevöitiin haihduttamalla 5 alennetussa paineessa, jolloin saatiin 277 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), cm-1: 1771, 1750, 1710, 1650, 1607, 1522, 1443, 1347.

10 Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: - 1,28 (3H, dubletti, J = 6,84 Hz); 1,36 (3H, dubletti, J = 6,34 Hz); 3,31-3,96 (8H, multipletti); 4.01- 4,33 (5H, multipletti); 15 4,77-4,90 (1H, multipletti); 5.02- 5,55 (6H, multipletti); 7,41-7,66 (4H, multipletti); 8,19-8,25 (4H, multipletti).

20 57(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyy- li]pyrrolidin-4-yyIitio}-5-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihapon hydrokloridi 240 mg 4-nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-4’-nitrobentsyylioksikar-25 bonyylioksietyy li)-1 -piperatsinyy likarbonyy li]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy li)pyr- . rolidin-4-yylitio} -6- [(1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karbok- ·· sylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin 8 mkaan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta ja sekoitettiin 0,3 mkaan IN vesipitoisen kloorivetyhappoa. Sitten seos hydrattiin kuplittamalla vetyä sen läpi 30 huoneen lämpötilassa kaksi tuntia 0,3 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa.

Tämän jälkeen katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodos uutettiin dietyylieetterillä.

Jäljelle jäänyt vesikerros väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Tuloksena 183 101226 saatu jäännös ajettiin kolonnikromatografialla Lobar kolonnin (Merck, LiChroprep RP-8, koko A) läpi käyttämällä 3 %:sta t/t vesipitoista metanolia eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin, väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 35 mg otsikkoyhdistettä värittö-5 män pulverin muodossa.

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) λ,,^ nm: 297.

10 ESIMERKKI 58 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-l-piperatslnyylikarbonyyIi]pyrroli-din-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karbok-syylihapon hydrokloridi 15 58(a) 4-Nitrobentsyyli-(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-4’-nitrobentsyylioksikar-bonyylioksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyIi]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksylaatti 20 164 μί difenyylifosforyylikloridia ja 138 μί di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 272 mg 4-nitrobent-syyli-( 1 R,5S,6S)-6-[( 1 R)-l-hydroksietyyli]-1 -metyyli-2-okso-1 -karbapenaami-3-kar-boksylaattia 3 mlrssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa 25 lämpötilassa yhden tunnin ajan. 131 μί di-isopropyylietyyliamiinia ja liuos, joka sisälsi 463 mg (2S,4S)-4-merkapto-2-{4-[2-(4-nitrobentysylioksikarbonyyli)oksietyy-• · li]-1 -piperatsinyy likarbonyy li} -1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy li)pyrrolidiniä2ml: ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 1,5 30 tuntia. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 9:1 tilavuusseosta eluenttina. Ne fraktiot, jotka 101226 186 sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 490 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm"1: 5 1770, 1751, 1711, 1654, 1606, 1522, 1496, 1444, 1404, 1347, 1263, 1208.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 1,27 (3H, dubletti, J = 7,33 Hz); 1,36 (3H, dubletti, J = 5,86 Hz); 10 1,82-2,05 (1H, multipletti); _ 2.25- 3,10 (7H, multipletti); 3.25- 3,85 (9H, multipletti); 4.05- 4,86 (6H, multipletti); 5.05- 5,51 (6H, multipletti); 15 7,43-7,67 (6H, multipletti); 8,18-8,25 (6H, multipletti).

58(b) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyy-li] py rrolidin-4-yy litio}-6- [(1R)-1 -hy droksietyy li] -1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-20 karboksyylihapon hydrokloridi 191 mg 4-nitrobentsyyli-( 1R,5S,6S)-2- {(2S,4S)-2-[4-(2-4’-nitrobentsyy lioksikar-bonyy 1 i)oksietyyli] -1 -piperatsinyy likarbonyyli] -1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)pyrrolidin-4-yylitio} -6-[( 1R)-1 -hydroksietyyli]-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-25 karboksylaattia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (a) edellä] liuotettiin

8 ml:aan tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta ja seos hydrattiin ·· kuplittamalla vetyä sen läpi huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan 218 μί:η IN

vesipitoiseen kloorivetyhappoon ja 0,3 g:n 10 % p/p palladium-puuhiilen läsnäollessa.

Tämän jälkeen katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodos uutettiin dietyylieetterillä.

30 Jäljelle jäänyt vesikerros väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös ajettiin kolonnikromatografialle Lobar kolonnin (Merck, LiChroprep RP-8, koko A) läpi käyttämällä 3 %:sta t/t vesipitoista metanolia eluenttina. Ne 101226 187 fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin, väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 26 mg otsikkoyhdistettä värittömän pulverin muodossa.

5 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) nm: 297.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm"1: 1758, 1659, 1595, 1451, 1385, 1261, 1181, 1145.

10

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä tetradeuteroitua natriumtrimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,20 (3H, dubletti, J = 7,33 Hz); 1,28 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 15 2,13-2,22 (1H, multipletti); 2,91-3,03 (1H, multipletti); 3,25-3,63 (9H, multipletti); 3,75-4,11 (8H, multipletti); 4,21-4,30 (2H, multipletti); 20 4,83-4,93 (1H, multipletti).

ESIMERKIT 59-65 ja 82-88

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu esimerkissä 1 tai esimerkissä 49 25 saatiin seuraavat yhdisteet käyttämällä merkaptaania, joka on esitetty vastaavissa . valmistusesimerkeissä 59-65 ja 82-88.

(lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(2S)-4-AsetimidoyyIi-2-metyylipiperatsin-l-yylikarbonyy- li)pynOlidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3- 5 karboksyylihappo 188 101226 ESIMERKKI 59

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 300.

10 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), cm'1: 1755, 1629, 1591, 1448, 1384, 1281.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä natriumtetra-deuteroitua trimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 15 1,21-1,36 (6H, multipletti); 1,30 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 1,58-1,75 (1H, multipletti); 2,35 & 2,39 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 2,63-2,85 (1H, multipletti); 20 3,06 (1H, kaksi dublettia, J = 12,21 & 3,42 Hz); 3,18 (1H, kaksi dublettia, J = 12,21 & 5,86 Hz); 3,26-3,62 (4H, multipletti); 3,65-4,67 (9H, multipletti).

25 ESIMERKKI 60 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(2S)-4-F ormimidoyy li-2-metyy lipiperatsin-1 -yy likar-bonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo 30

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) nm: 296.

101226 189

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1755, 1711, 1641, 1592, 1452, 1384.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä natriumtetra-5 deuteroitua trimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,22 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 1,58 (3H, dubletti, J = 6,3 Hz); 1.24 & 1,35 (yhdessä 3H, kaksi dublettia, J = 6,8 Hz); 1,62-1,77 (1H, multipletti); w 10 2,68-2,89 (1H, multipletti); 3,06-4,50 (15H, multipletti); 7,93, 7,96, 8,03 & 8,19 (yhdessä 1H, neljä singlettiä).

ESIMERKKI 61 15 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-l-Metyyli-2-[(3S)-3-asetimidoyyliaminopyrrolldiii-l-yyIikar- bonyyli]pyrrolidin-4-yylitio}-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2- eemi-3-karboksyylihappo 20 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 301.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm'1: 1756, 1682, 1632, 1593, 1453, 1385.

25

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä natriumtetra-·· deuteroitua trimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 7,32 Hz); 1,30 (3H, dubletti, J = 6,35 Hz); 30 1,60-1,75 (1H, multipletti); 2.24 (3H, dubletti, J = 2,93 Hz); 2,28 (3H, dubletti, J = 4,88 Hz); ^.226 190 2,70-2,90 (2H, multipletti); 3,05-3,15 (1H, multipletti); 3,25-3,50 (3H, multipletti); 3,50-4,05 (7H, multipletti); 5 4,15-4,40 (3H, multipletti).

ESIMERKKI 62 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(3-Asetimidoyyliaminopiperidin-l-yylikarbonyyli)pyrToli-10 din-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karbok- _ syylihappo

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) λπ13χ nm: 300.

15 ESIMERKKI 63 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-l-MetyyIi-2-(4-asetimidoyyliaminopiperidiii-l-yylikarbonyy-U)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-20 karboksyylihappo

Ultraviolettiabsorptiospektri (H2) Xmax nm: 300.

25 ESIMERKKI 64 (lR£S,6S)-[(2S,4S)-l-Metyyli-2-(4-formimidoyylipiperatsin-l -yylikarbonyy li)py r-rolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo 30

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) Xmax nm: 300.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), umax cm"1: 1754, 1707, 1651, 1595, 1450, 1385, 1285.

191 101226

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä natriumtetra-5 deuteroitua trimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,21 (3H, dubletti, J = 7,3 Hz); 1,30 (3H, dubletti, J = 6,4 Hz); 1,68 (1H, kaksinkertainen dublettien dubletti, J = 13,7, 8,8 & 5,4 Hz); 2,34 (3H, singletti); 10 2,78-2,95 (2H, multipletti); 3,14 (1H, kaksi dublettia, J = 12,2 & 1,4 Hz); 3,30-3,45 (2H, multipletti); 3,53-3,95 (10H, multipletti); 4,18-4,30 (2H, multipletti); 15 7,92 (1H, singletti).

ESIMERKKI 65 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-l-Metyyli-2-[(2S)-4-asetimidoyyli-2-metyylipiperatsin-l-20 yylikarbonyyli]pyrroIidin-4-yylitio}-6-[(lR9-l-hydroksietyyli-l-metyyli-l-karba-pen-2-eemi-3-karboksyylihappo

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20) λπΐ3χ nm: 299.

25 (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-[(3S)-3-(N-Metyyli-N-asetimidoyyliaminopyrrolidin-l- yylikarbonyyli]pyrrolidin-4-yyIitio}-6-[( 1R)-1 -hydroksietyy li] -1 -metyy likarbapen- 5 2-eemi-3-karboksyylihappo ESIMERKKI 82 192 101226

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), λ max nm: 300.

10 ESIMERKKI 83 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(2-HydroksimetyyIipiperatsin-l-yylikarbonyyli)pyiTolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyliha-pon hydrokloridi 15

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), λιη8χ nm: 297.

ESIMERKKI 84 20 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-Asetimidoyyli-2-hydroksimetyylipiperatsin-l-yylikar- v « bonyyli)pyrroIidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2- eemi-3-karboksyyIihappo 25 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 301.

ESIMERKKI 85 193 101226 (lR^S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(5-Hydroksihomopiperatsin-l-yylikarbonyyli)pyrroIidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyIi]-l-metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyyliha-5 pon hydrokloridi

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 296.

10 ESIMERKKI 86 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-(4-FormimidoyyIi-6-hydroksihoinopiperatsin-l-yylikar- bonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-3-metyyli-l-karbapen-2- eemi-3-karboksyylihappo 15

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 300.

ESIMERKKI 87 20 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-l-Asetimidoyyli-2-(4-asetimidoyyliaminopiperidin-l-yylikarbonyy Ii)py rrolidin-4-yy litio] -6-[(lR)-1 - hydro ksietyy li] -1 -metyyli- 1-karba-pen-2-eemi-3-karboksyylihappo 25 Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Imax nm: 300.

(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-l-Metyyli-2-(4-formimidoyylihomopiperatsin-l-yylikar- bonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-[(lR)-l-hydroksietyyli]-l-metyyli-l-karbapen-2- 5 eemi-3-karboksyylihappo 194 101226 ESIMERKKI 88

Ultraviolettiabsorptiospektri (H20), Xmax nm: 300.

10 VALMISTUSESIMERKKI 1 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)piperat- sin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinmtrifluorime- taanisulfonaatti 15 1 (i) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-(4-t-butoksikarbonyylipiperatsin-l -yy likarbonyy li)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 1,78 g Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 4,46 g (2S,4S)-20 4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-2-pyrrolidinin karbok- syylihappoa 45 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Reaktioseos jäähdytettiin sitten jäällä ja liuos, joka sisälsi 2,05 g 1-t-butoksikarbonyylipiperatsiinia 45 mlrssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin seokseen, jonka annettiin sitten seistä yön yli huoneen lämpötilassa.

25 Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja . konsentraatti laimennettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattiliuos pestiin vedellä ja natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin sitten vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja 30 sykloheksaanin välistä 3:2 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 5,4 g otsikkoyhdis-tettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm-1: 1699, 1658, 1609, 1585, 1512, 1456, 1377, 1366, 1344, 1286, 1237, 1205.

195 101226

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 5 1,47 (9H, singletti); 1,73-1,87 (1H, multipletti); 2.40- 2,52 (1H, multipletti); 2.40- 2,52 (1H, multipletti); 3,03-3,17 (1H, multipletti); 10 3,25-4,09 (10H, multipletti); 3,73 (2H, singletti); 3,79 & 3,80 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 4,57 & 4,61 (yhdessä 1H, kaksi triplettiä, J = 8,30 Hz); 5,01-5,32 (2H, multipletti); 15 6,85 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,23 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,41 & 7,47 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 8,18 & 8,22 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

20 1 (ii) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-(l-piperatsinyylikarbonyyli)-l-(4- nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin hydrokloridi 27 ml 4N kloorivedyn etyyliasetaattisliuosta lisättiin liuokseen, joka sisälsi 5,2 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-(4-t-butoksikarbonyylipiperatsin-l-yylikarbonyy-25 li)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] 27 ml:ssa etyyliasetaattia ja tuloksena saatua seosta kuumennettin * - palautuksessa kaksi tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin kuivaksi haihdutta malla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu konsentraatti trituroitiin dietyylieetteril-lä. Siten saatu pulveri kerättiin suodattamalla ja kuivattiin, jolloin saatiin 4,2 g 30 otsikkoyhdistettä.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1708, 1662, 1609, 1585, 1512, 1434, 1404, 1346, 1319, 1301, 1246, 1209.

196 101226

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitus dimetyylisulfoksidi 5 + D20, 270 MHz), δ ppm: 1,53-1,68 (1H, multipletti); 2,58-2,75 (1H, multipletti); 2,90-3,94 (11H, multipletti); 3,71 & 3,74 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 10 3,78 (2H, singletti); 4,70 & 4,80 (yhdessä 1H, kaksi triplettiä, J = 8,06 Hz); 5,03-5,23 (2H, multipletti); 6,89 (2H, dubletti, J = 8,30 Hz); 7,27 (2H, dubletti, J = 8,30 Hz); 15 7,51 & 7,60 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 8,23 & 8,25 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

l(iii) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyy-liasetimidoyyli)piperatsin-l-yylikarbonyyIi]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-20 li)pyrrolidini 11 ml metyleenikloridia, jota seurasi 452 mg N-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)aseta-midiini, lisättiin liuokseen, joka sisälsi 1,1 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-(l-piperatsinyylikarbonyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-pyrrolidinilnydrokloridia 25 [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (ii) edellä] 22 ml:ssa metanolia samalla kuumentaen liuosta palautuksessa. Tuloksena saatu seos kuumennettiin sitten palau-* * tuksessa vielä 4 tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 20:1 tilavuusseosta 30 eluenttina, jolloin saatiin 466 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1709, 1662, 1608, 1570, 1520, 1430, 1405, 1346, 1291, 1254.

197 101226

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 5 1,73-1,94 (1H, multipletti); 2,30 & 2,40 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 2,38-2,52 (1H, multipletti); 3,03-3,18 (1H, multipletti); 3,11-4,05 (10H, multipletti); w 10 3,73 (2H, singletti); 3,79 & 3,80 (yhdessä 1H, kaksi singlettiä); 4,52-4,63 (1H, multipletti); 4,98-5,35 (4H, multipletti); 6,85 (2H, dubletti, J = 8,30 Hz); 15 7,23 (2H, dubletti, J = 8,30 Hz); 7,40-7,63 (4H, multipletti); 8,16-8,25 (4H, multipletti).

1 (iv) (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyy liasetimidoyy-20 li)piperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin triiluorimetaanisulfonaatti 3,2 ml trifluorietikkahappoa ja 103 μ( trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin liuokseen, joka sisälsi 430 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[4-(N-4-nitrobentsyy-25 lioksikarbonyyliasetimidoyy li)piperatsin-1 -yy likarbonyy li]-1 -(4-nitrobentsyy lioksikar- bonyylu)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (iii) edellä] 636 ^£:ssa * · anisolia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin yhden tunnin ajan samalla jäähdyttäen jäällä. Tämän jälkeen reaktioseos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin toistuvasti dietyylieetterillä dekantoimalla, jolloin saatiin 30 450 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm"1: 1782, 1705, 1634, 1610, 1522, 1441, 1406, 1348, 1277, 1249, 1224.

198 101226

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi + D20, 270 5 MHz), δ ppm: 1,52-1,78 (1H, multipletti); 2,57-4,08 (15H, multipletti); 4,65-4,84 (1H, multipletti); 5,04-5,28 (4H, multipletti); 10 7,49-7,69 (4H, multipletti); 8,20-8,28 (4H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 2 15 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)homopi-peratsin-1 -yy likarbonyy li] -1 -(4-nitrobentsyy lioksikarbonyy li)py rrolidinin trif-luorimetaanisulfonaatti 2(i) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyy litio)-2-( 1 -homopiperatsinyy likarbonyy li)-1 -(4-20 nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin hydrokloridi 1,95 g Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 4,5 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -(4-nitrobenstyylioksikarbonyyli)-2-pyrTolidinin karbok- syylihappoa 45 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 25 huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 2,0 g homopiperatsiinia 10 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin sitten reaktioseokseen ja siten saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kaksi tuntia ja lämpötilassa 35 °C 30 minuuttia. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu konsentraatti laimennettiin etyyliasetaatilla. Laimennettu liuos pestiin 30 vedellä ja natriumkloridin vesiliuoksella. Sitten etyyliasetaattiliuos kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Konsentraatti liuotettiin 44 ml:ssa etyyliasetaattia ja siten saatua liuosta sekoitettiin 2,5 ml:ssa vetykloridin 4N liuoksella etyyliasetaatissa; 101226 199 sitten seos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Jäännös trituroitiin dietyylieetterillä ja tuloksena saatu pulveri kerättiin suodattamalla ja sitten kuivattiin, jolloin saatiin 4,6 g otsikkoyhdistettä.

5 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1706, 1656, 1609, 1585, 1512, 1431, 1405, 1346, 1320, 1301, 1246, 1210.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi + D20,270 MHz), δ ppm: w 10 1,54-1,72 (1H, multipletti); 1,86-2,14 (2H, multipletti); 2,60-2,72 (1H, multipletti); 2,94-3,96 (11 H, multipletti); 3,72 & 3,96 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 15 3,79 (2H, singletti); 4,62-4,82 (1H, multipletti); 5,05-5,26 (2H, multipletti); 6,87 (2H, dubletti, J = 8,30 Hz); 7,27 (2H, dubletti, J = 8,30 Hz); 20 7,52 & 7,60 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); , 8,22 & 8,25 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

t 2(H) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyy-liasetimidoyyli)homopiperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikar-25 bonyyli)pyrrolidiini • 25 ml metyleenikloridia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 2,5 g (2S,4S)-4-(4-metoksi- bentsyylitio)-2-( 1 -homopiperatsinyylikarbonyyl)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)pyrrolidinin hydrokloridia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] 25 30 ml:ssa metanolia, jota kuumennettiin palautuksessa ja sitten lisättiin 904 mg N-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)asetamidiinia tuloksena saatuun seokseen. Reaktioseos kuumennettiin palautuksessa vielä 5 tuntia, jonka jälkeen se työstettiin ja puhdistettiin 101226 200 samanlaisella menetelmällä leilin on kuvattu valmistusesimerkissä l(iii), jolloin saatiin 415 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm-1: 5 1753, 1708, 1657, 1608, 1564, 1520, 1429, 1404, 1346, 1319, 1301, 1274, 1250, 1229.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1,70-2,60 (7H, multipletti); 10 3,02-3,17 (1H, multipletti); 3,22-4,60 (11H, multipletti); 3,716 & 3,723 (yhdessä 2H, kaksi singlettiä); 3,781 & 3,786 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 4,93-5,44 (4H, multipletti); 15 6,83 & 6,85 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 7,22 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,41-7,58 (4H, multipletti); 8,16-8,26 (4H, multipletti).

20 2(iii) (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyy- li)homopipertasin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrroIidi- — nin trifluorimetaanisulfonaatti 2,1 ml trifluorietikkahappoa ja 87 μΐ trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin liuokseen, 25 jokasisälsi 285 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikar- .. bonyyliasetimidoyyli)homopiperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikar- bonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (ii) edellä] 414 μί^ϊζ anisolia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin yhden tunnin ajan samalla jäällä jäähdyttäen. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin samanlaisella menetelmällä kuin on 30 kuvattu valmistusesimerkissä l(iv), jolloin saatiin 296 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1781, 1701, 1632, 1523, 1495, 1437, 1406, 1348, 1279, 1258, 1225, 1213.

201 101226

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi + D20, 270 5 MHz), δ ppm: 1.55- 4,12 (18H, multipletti); 4.56- 4,83 (1H, multipletti); 5,03-5,31 (4H, multipletti); 7,48-7,68 (4H, multipletti); W 10 8,17-8,27 (4H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 3 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)-3-15 metyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidi-nin trifluorimetaanisulfonaatti 3(i) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-3-metyylipiperatsin-l-yylikar-bonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin hydrokloridi 20

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 2(i), mutta käyttämällä 4,5 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 1,78 g Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia ja 1,4 g (2S)-2-metyylipiperatsiinia, saatiin 5,3 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

25 3(ii) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-4-(N-4-nitrobentsyylioksikar-bonyyliasetimidoyyli)-3-metyylipiperatsin-l-yylikarbonyyIi]-l-(4-nitrobentsyyIiok-slkarbonyyli)pyrrolidiini 30 2,26 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-3-metyylipiperatsin-l-yylikar- bonyyli[-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin hydrokloridia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] sekoitettiin 1,14 g N-(4-nitrobentsyylioksi- 202 101226 karbonyyli)asetamidiinin ja 45 ml:n asetnitriilin kanssa ja seos kuumennettiin palautuksessa 16 tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 1 (ii), jolloin saatiin 922 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

5 3(iil) (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliaset-imidoyyIi)-3-metyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)pyrrolidinin trifluorimetaanisulfonaatti 10 Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 2(iii), mutta _ käyttämällä 458 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-4-(N-4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyliasetimidoyyli)-3-metyylipiperatsin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobent-syylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (ii) edellä], saatiin 475 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

15

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm*1: 1782, 1704, 1623, 1523, 1441, 1407, 1348, 1280, 1252, 1225.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi + D20, 270 20 MHz), δ ppm: 1,09-1,28 (3H, multipletti); 1,53-1,78 (1H, multipletti); 2,22-2,42 (1H, multipletti); 2,87-3,46 (10H, multipletti); 25 3,90-4,31 (3H, multipletti); .. 4,63-4,90 (1H, multipletti); 5,02-5,28 (4H, multipletti); 7,46-7,70 (4H, multipletti); 8,19-8,28 (4H, multipletti).

30 101226 203 VALMISTUSESIMERKKI 4 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyyli)piperat- sin-l-yyIikarbonyyIi)-l-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyIi)pyrrolidiiin 5 4(i) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyIi-fonnimidoyyIi)piperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-{4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyr-rolidiini w 10 Liuos, joka sisälsi 5,51 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-(l-piperatsinyylikar- bonyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin hydrokloridia [valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä l(iii)] ja 2,45 g N-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)foramidinia 10 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä sekoitettiin kaksi tuntia vesihauteessa, joka pidettiin lämpötilassa 50 °C. Tämän jälkeen reaktioseos vapautettiin epäpuh-15 tauksista suodattamalla ja suodos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja asetnitriilin välistä 6:4 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 5,48 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

20 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm"1: 1716, 1652, 1598, 1516, 1346, 1162, 1007.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1,75-1,95 (1H, multipletti); 25 2,35- 2,53 (1 H, multipletti); . 3,05-3,19 (1H, multipletti); 3,73 (2H, singletti); 3,79 (3H, singletti); 3,30-4,13 (9H, multipletti); 30 4,53-4,66 (1H, multipletti); 5,15 & 4,66 (2H, AB-kvartetti, J = 13,7 Hz); 5,29 (2H, singletti); 101226 204 6,85 (2H, dubletti, J = 8,3 Hz); 7.23 (2H, dubletti, J = 8,3 Hz); 7,46 (2H, dubletti, J = 8,3 Hz); 7,58 (2H, dubletti, J = 8,23 Hz); 5 8,21 (2H, dubletti, J = 8,3 Hz); 8.23 (2H, dubletti, J = 8,23 Hz); 8,52 (1H, singletti).

4(ii) (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(N-4-nitrobentsyyIioksikarbonyyliformiimdoyy-10 li)piperatsin-l -yylikarbonyyli)-1 -(4-nitrobentsyy lioksikarbonyyli)py rrolidiini 15 ml trifluorietikkahappoa ja 460 μ£ trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin liuokseen, joka sisälsi 2,50 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[4-(N-4-nitrobentsyyliok-sikarbonyy liformimidoyyli)piperatsin-1 -yy likarbonyy li]-1-(4-nitrobentsyy lioksikar-15 bonyyli)pyrrolidiiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] 3 ml:ssa anisolia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin yhden tunnin ajan samalla jäähdyttäen jäällä. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös pestiin dietyylieetterillä, jolloin saatiin 2,55 g (2S,4S)-4-merkapto-2-[4-(N-4-nitro-bentsyylioksikarbonyyliformimidoyy li)piperatsin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyy-20 lioksikarbonyyli)pyrrolidinin trifluorimetaanisulfonaattia pulverin muodossa. Koko tämä tuote liuotettiin seokseen, joka sisälsi etyyliasetaattia ja vettä ja liuotin tehtiin alkaaliseksi lisäämällä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta. Etyyliasetaattikerros erotettiin ja pestiin vedellä ja natriumkloridin vesiliuoksella tässä järjestyksessä. Liuos kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla ja sitten liuotin poistettiin tislaamalla 25 alennetussa paineessa, jolloin saatiin 2,0 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

« « ‘ Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1709, 1660, 1603, 1521, 1440, 1346.

30 Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 1,89 (1H, dubletti, J = 8,8 Hz); 1,85-2,02 (1H, multipletti); 101226 205 2.63- 2,83 (1H, multipletti); 3,22-4,17 (11H, multipletti); 4,71 (1H, tripletti, J = 8,3 Hz); 5.19 & 5,22 (yhdessä 2H, AB-kvartetti, J = 13,7 Hz); 5 5,27 (2H, singletti); 7,50 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 7,57 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 8.20 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 8,22 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 10 8,54 (1H, singletti).

VALMISTUSESIMERKKI 5 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(N-4-nitrobentsyyIioksikarbonyyliformimidoyyli)homo-15 piperatsin-1-yylikarbonyy li]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 4, mutta käyttämällä 2,10 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-(l-homopiperatsinyylikar-bonyyli)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin kloorivetyä [valmistettu kuten 20 on kuvattu valmistuesimerkissä 2(i)] ja 0,93 g N-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)for-. . mamidiinia, saatiin 2,38 g otsikkoyhdisteen trifluorimetaanisulfonaattia. Suola käsiteltiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 4(ii), jolloin saatiin 1,90 g otsikkoyhdistettä.

25 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm-1: . 1709, 1679, 1653, 1600, 1519, 1345, 1159.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), i ppm: 1,80-1,92 (2H, multipletti); 30 2,00-2,15 (1H, multipletti); 2.63- 2,80 (1H, multipletti); 3,18-4,35 (11H, multipletti); 101226 206 4,55-4,67 (1H, multipletti); 5.10- 5,30 (4H, multipletti); 7,40-7,60 (4H, multipletti); 8,15-8,26 (4H, multipletti); 5 8,42-8,56 (1H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 6 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyylifonnimidoyyli)-3-10 metyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidi- nin trifluorimetaanisulfonaatti

Suorittamalla samanlainen menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimekissä 4, mutta käyttämällä 1,13 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-3-metyylipiperatsin-l-15 yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pynOlidinin kloorivetyä ja 491 mg N-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)formamidiinia, saatiin 1,0 g otsikkoyhdistettä.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm’1: 1785, 1688, 1608, 1523, 1444, 1408, 1349, 1248, 1223.

20 . Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi + D20, 270 MHz), 6 ppm: 1.10- 1,28 (3H, multipletti); 1,60-1,78 (1H, multipletti); 25 2,65-3,45 (8H, multipletti); . 3,88-4,30 (3H, multipletti); 3,65-3,89 (1H, multipletti); 5,36 (2H, singletti); 7,49-7,70 (4H, multipletti); 30 8,20-8,28 (4H, multipletti); 8,89 (1H, singletti).

101226 207 VALMISTUSESIMERKKI 7 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[2-metyyIi-4-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyli)piperatsin-l- yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 5 7(i) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-(4-t-butoksikarbonyyIi-2-metyylipiper-atsin-l-yylikarbonyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrroIidiini 3,41 ml trietyyliamiinia ja 3,03 ml pivaloyylikloridia lisättiin pisara kerrallaan 10 liuokseen, joka sisälsi 9,99 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyli)-2-pyrrolidiinikarboksyylihappoa 100 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samssa lämpötilassa 20 minuuttia. Liuos, joka sisälsi 5,38 g l-t-butoksikarbonyyli-3-metyylipiperatsiinia 50 ml:ssa kuivaa tetrahydrofurania lisättiin sitten pisara kerrallaan seokseen ja seosta 15 sekoitettiin samassa lämpötilassa 30 minuuttia ja sitten huoneen lämpötilassa kaksi tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla. Laimennettu liuos pestiin vuorostaan oksaalihapon IN vesiliuoksella, vedellä ja natriumkloridin vesiliuoksella. Etyyliasetaatti-liuos kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja liuotin poistettiin tislaamalla 20 alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä gradienttieluointimenetelmää etyyliasetaatin ja sykloheksaanin 1:1 - 3:2 tilavuusseosten kanssa eluenttina, jolloin saatiin 8,56 mg otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.

25 Inffapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1701, 1655, 1609, 1523, 1513, 1426, 1405, 1345, 1251, 1168.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDc£3, 270 MHz), δ ppm: 0,97-1,43 (3H, multipletti); 30 1,47 (9H, singletti); 1.46- 1,89 (3H, multipletti); 2.47- 2,50 (1H, multipletti); 208 101226 2,71-3,67 (4H, multipletti); 3,73 (2H, singletti); 3,79 & 3,80 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 3,76-3,80 (5H, multipletti); 5 5,02-5,29 (2H, multipletti); 6,85 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,23 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,41 & 7,46 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 8,17 & 8,23 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

10 7(ii) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-(2-metyyIipiperatsin-l-yylikarbonyyli)- 2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 31,6 ml kloorivedyn 4N liuosta etyyliasetaatissa lisättiin pisara kerrallaan liuokseen, 15 joka sisälsi 9,55 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-(4-t-butoksikarbonyyli-2- metyy lipiperatsin-1 -yylikarbonyyli)-1 -(4-nitrobentsyy lioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] 31,6 ml:ssa etyyliasetaattia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 90 minuuttia. Tämän jälkeen reaktioseos laimennettiin etyyliasetaatilla, jonka jälkeen se neutralisoitiin lisäämällä 20 natriumvetykarbonaatin vesiliuos. Etyyliasetaattikerros erotettiin, pestiin natriumklori-din vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä gradienttieluointimenetelmää etyyliasetaatin ja metanolin 4:1 - 7:3 tilavuusseoksia eluenttina, jolloin saatiin 7,0 g 25 otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.

• Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm’1: 1709, 1648, 1513, 1432, 1404, 1345, 1249.

30 209 101226

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1,10-1,46 (3H, multipletti); 1,70-1,87 (1H, multipletti); 2,18-3,15 (8H, multipletti); 5 3,30-3,58 (2H, multipletti); 3,73 (2H, singletti); 3,79 & 3,80 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 3,67-4,64 (3H, multipletti); 4,97-5,34 (2H, multipletti); 10 6,85 (2H, dubletti, J = 8,30 Hz); 7,23 (2H, dubletti, J = 8,30 Hz); 7,42 & 7,47 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,30 Hz); 8,18 & 8,23 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,30 Hz).

15 7(iii) (2S,4S)-3-(4-MetoksibentsyyIitio)-2-[2-metyyli-4-(4-nitrobentsyy lioksikar- bonyy li)piperatsin-1 -yyIikarbonyyli]-l-(4-nirobentsyylioksikarbonyyli)pyrToIidiini 0,51 g 4-dimetyyliaminopyridiiniä lisättiin pisara kerrallaan huoneen lämpötilassa liuokseen, joka sisälsi (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-(2-metyylipiperatsin-l- 20 yylikarbonyyli)-2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (ii) edellä] 25 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja sitten liuos, joka sisälsi 0,90 g 4-nitrobentsyylikloroformaattia 15 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin pisara kerrallaan tuloksena saatuun seokseen samalla jäähdyttäen jäällä. Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia, jonka jälkeen se väkevöitiin haihdutta- 25 maila alennetussa paineessa ja jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla. Laimennettu .. liuos pestiin vedellä ja natriumkloridin vesiliuoksella tässä jäijestyksessä, jonka « • jälkeen se kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikro-matografialla silkageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja heksaanin välistä 7:3 30 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 2,28 g otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.

» 210 101226

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1708, 1656, 1608, 1521, 1433, 1346, 1252.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 5 1,02-1,36 (3H, multipletti); 1,59-1,80 (3H, multipletti); 2,30-2,58 (1H, multipletti); 2.61- 3,59 (5H, multipletti); 3,73 (2H, singletti); 10 3,78 & 3,79 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); „ 3.62- 4,92 (4H, multipletti); 4,97-5,30 (4H, multipletti); 6,85 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,23 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 15 7,41-7,52 (4H, multipletti); 8,17 & 8,23 (yhdessä 4H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

7(iv) (2S,4S)-4-Merkapto-2-[2-metyyli-4-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyli)pipe-ratsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 20 23 ml trifluorietikkahappoa, jota seurasi 0,57 ml trifluorimetaansulfonihappo, lisättiin pisara kerrallaan liuokseen, joka sisälsi 2,26 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[2-metyyli-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)piperatsin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobent-syylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (iii) edellä] 25 3,48 ml:ssa anisolia ja tuloksena saatu seos työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 4(ii), jolloin saatiin 1,88 g otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.

i

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 30 1707, 1654, 1607, 1521, 1433, 1346.

101226 211

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1,05-1,40 (3H, multipletti); 1,59 (1 H, singletti); 1,85-2,00 (2H, multipletti); 5 2,71-3,73 (6H, multipletti); 3,78-5,08 (5H, multipletti); 5,15-5,31 (4H, multipletti); 7,40-7,52 (4H, multipletti); 8,17-8,25 (4H, multipletti).

10 VALMISTUSESIMERKKI 8 (25.45) -4-Merkapto-2-[3-metyyli-4-(4-nitrobentsyy lioksikarbonyy Ii)piperatsin-1-yy lika rbonyy li] -1 -(4-nitrobentsyy lioksikarbonyy li)py rrolidiini 15 8(i) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[3-metyyli-4-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)piperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrroIidii-ni 20 Suorittamalla samanlainen menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä l(i), mutta käyttämällä 3,06 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksi-karbonyyli)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 1,34 g Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia ja 2,30 g 2-metyyli-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)piperatsiinia, saatiin 4,07 g otsikkoyhdistettä.

25 8(ii) (2S,4S)-4-Merkapto-2- [3-metyy li-4-(4-nitrobentsyy lioksikarbonyy li)pipe- ratsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyli)pyrrolidiini 20 ml trifluorietikkahappoa ja sen jälkeen 0,50 ml trilfuorimetaanisulfonihappoa 30 lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 2,0 g (25.45) -4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[3-metyyli-4-(4-bentsyyloksikarbonyyli)piperatsin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on 212 101226 kuvattu vaiheessa (i) edellä] 3,08 ml:ssa anisolia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 50 minuuttia. Tämän jälkeen reaktioseos työstettiin samanlaisella menetelmällä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 4(ii), jolloin saatiin 1,55 g otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.

5

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1705, 1657, 1607, 1521, 1429, 1405, 1346.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 10 1.16-1,36 (3H, multipletti); — 1,63-2,40 (3H, multipletti); 2,66-3,66 (6H, multipletti); 3,71-4,78 (5H, multipletti); 5,06-5,30 (4H, multipletti); 15 7,39-7,53 (4H, multipletti); 8,17-8,25 (4H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 9 20 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(2S)-2-metyyli-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)piperat-sin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 7, mutta käyttämällä 13,2 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-25 bonyyli)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 4,0 ml pivaloyylikloridia, 4,5 ml trietyy-. . liamiinia ja 6,5 g (3S)-l-t-butoksikarbonyyli-3-metyylipiperatsiinia, saatiin 1,9 g otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.

»

Infrapuna-absorptiospektri (KBr). vmax cm'1: 30 1706, 1653, 1607, 1521, 1434, 1406, 1346.

101226 213

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1,19-1,30 (1H, multipletti); 1,62 (1H, singletti); 1,85-3,59 (6H, multipletti); 5 2,68-3,59 (6H, multipletti); 3,78-4,77 (5H, multipletti); 5,08-5,31 (4H, multipletti); 7,42-7,52 (4H, multipletti); 8,17-8,25 (4H, multipletti).

w 10 VALMISTUSESIMERKKI 10 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(2R)-2-metyyli-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)piperat- sin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 15

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 7, mutta käyttämällä 1,3 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 0,40 ml pivaloyylikloridia, 0,45 ml trietyyliamii-nia ja 0,65 g (3R)-l-t-butoksikarbonyyli-3-metyylipiperatsiinia, saatiin 0,17 g 20 otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm*1: 1708, 1655, 1607, 1521, 1432, 1435.

25 VALMISTUSESIMERKKI 11 . . (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-3-metyyli-4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pipe- ratsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 30 Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 8, mutta käyttämällä 4,5 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 1,95 g Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia ja 3,34 214 101226 g (2S)-2-metyyli-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)piperatsiinia, saatiin 4,32 g otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 5 1705, 1657, 1607, 1522, 1429, 1405, 1346.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1,16-1,36 (3H, multipletti); 1,62 (1H, singletti); 10 1,70-2,04 (2H, multipletti); — 2,69-2,86 (2H, multipletti); 4,23-4,74 (3H, multipletti); 5,02-5,33 (4H, multipletti); 7,40-7,53 (4H, multipletti); 15 8,17-8,26 (4H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 12 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3R)-3-metyyli-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)piperat-20 sin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 8, mutta käyttämällä 0,23 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 0,10 g N.N’-karbonyylidi-imidatsolia ja 25 0,17 g (2R)-2-metyyli-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)piperatsiniinia, saatiin 0,21 g otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.

7 $

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1708, 1652, 1607, 1523, 1427, 1346.

30 215 101226 VALMISTUESIMERKKI 13 (25.45) -2-[trans-2,5-Dimetyyli-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)piperatsin-l-yylikarbonyyli]4-merkapto-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrTolidiini 5

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 8, mutta käyttämällä 1,79 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 0,54 nl pivaloyylikloridia, 0,61 ml trietyyliamiinia ja 1,29 g trans-2.5-dimetvvli-l-(4-nitrobentsvvlioksikar-_ 10 bonyyli)piperatsiinia, saatiin 577 mg otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.

Infirapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1707, 1653, 1608, 1522, 1425, 1347.

15 Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), 6 ppm: 0,87-1,39 (6H, multipletti); 1,61 (1H, singletti); 1,68-2,04 (1H, multipletti); 2,60-2,88 (1H, multipletti); 20 2,95-3,59 (5H, multipletti); 4,07-4,95 (5H, multipletti); 4,97-5,36 (4H, multipletti); 7,40-7,53 (4H, multipletti); 8,16-8,25 (4H, multipletti).

25 VALMISTUSESIMERKKI 14 (25.45) -2-[cis-3,5-Dimetyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli)-4-merkapto-l-(4-nitro-bentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 8, mutta käyttämällä 3,3 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy- 30 216 101226 li)2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 1,4 gN,N’-karbonyylidi-imidatsoliaja 1,0 g cis- 2,6-dimetyylipiperatsiinia, saatiin 1,56 g otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.

5 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmaxcm'1: 1709, 1651, 1608, 1522, 1439, 1405, 1346.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1,05-1,29 (6H, multipletti); 10 1,85-1,96 (2H, multipletti); _ 2,12-3,72 (9H, multipletti); 4,04-4,17 (1H, multipletti); 4,40-4,74 (2H, multipletti); 5,03-5,36 (2H, multipletti); 15 7,40-7,52 (2H, multipletti); 8,17-8,23 (2H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 15 20 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-[2-(4-nitrobeiitsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-homopi- peratsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin trifluori- — » metaanisulfonaatti

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 8, mutta 25 käyttämällä 5,0 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy- li)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 2,2 g Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia ja 6,81 g . N-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]homopiperatsiiniii)is(trifluoriasetaat- ti)a, saatiin 6,50 g otsikkoyhdistettä.

30 101226 217

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), δ ppm: 1,60-1,83 (1H, multipletti); 1.94- 2,25 (2H, multipletti); 5 2,65-2,90 (1H, multipletti); 3,00-4,85 (18H, multipletti); 5,02-5,40 (4H, multipletti); 7,49-7,71 (4H, multipletti); 8,18-8,30 (4H, multipletti).

_ 10 VALMISTUSESIMERKKI 16 (2S,4S)-4-Merkapto-2-(4-karbamoyyIimetyyIi-l-hoinopiperatsmyylikarbonyyli)-l- (4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 15

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 8, mutta käyttämällä 5,69 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 2,48 g Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia ja 5,89 g N-karbamoyylimetyylihomopiperatsiinin bis(trifluoriasetaatti)a, saatiin 20 4,88 g otsikkoyhdistettä.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1707, 1680, 1647, 1520, 1432, 1404, 1344.

25 Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi + D20, 270 . . MHz), δ ppm: -*ι 1,75-2,15 (3H, multipletti); 2,55-2,92 (4H, multipletti); 2.95- 3,07 (1H, multipletti); 30 3,20-3,60 (6H, multipletti); 3,70-3,85 (1H, multipletti); * 3,93-4,18 (2H, multipletti); 218 101226 4,60-4,71 (1H, multipletti); 5,03-5,42 (2H, multipletti); 7,42-7,52 (2H, multipletti); 8,18-8,25 (2H, mutlipletti).

5 VALMISTUSESEMERKKI 17 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)piperat- sin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyli)pyrrolidiini 10 17(i) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-(l-piperatsinyylikarbonyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin hydroldoridi 3,57 g Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 8,93 g (2S,4S)-15 4-(4-metoksibentsyyiitio)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-2-pyrrolidinin karbok- syylihappoa 89 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Siten saatu reaktioseos lisättiin sitten liuokseen, joka sisälsi 5,17 g kuivaa piperatsiinia 178 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä samalla jäähdyttäen jäällä ja seosta sekoitettiin 4 tuntia samoissa olosuhteissa, jonka jälkeen se 20 väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös liuotettiin 500 mkssa etyyliasetaattia ja liuos pestiin neljä kertaa, joka kerta 300 ml:lla vettä ja sitten kerran 300 ml:11a natriumkloridin vesiliuosta. Etyyliasetaattikerros erotettiin ja kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla, jonka jälkeen lisättiin 6 ml kloorivedyn 4N liuosta pisara kerrallaan seokseen samalla sekoittaen ja sitten lisättiin 500 ml 25 dietyylieetteriä. Siten saatu pulveri kerättiin suodattamalla ja kuivattiin, jolloin saatiin 11,49 g otsikkoyhdistettä.

» « Tämän tuotteen spektritiedot ovat täysin identtiset valmistusesimerkissä l(ii) kuvatun yhdisteen kanssa.

30 101226 219 17(ii) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)pyrrolidiini

Suspensio, joka sisälsi 5,0 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-(l-piperatsinyylikar-5 bonyyli)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] ja 2,35 g N-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)asetamidiinia 73 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä sekoitettiin vesihauteessa, joka pidettiin lämpötilassa 48 °C kolme tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos vapautettiin epäpuhtauksista suodattamalla ja suodos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös ^ 10 puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja asetnitriilin välistä 6:4 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 5,41 g otsikkoyhdis-tettä pulverin muodossa.

Tämän tuotteen spektritiedot ovat täysin identtiset valmistusesimerkissä l(iii) kuvatun 15 yhdisteen kanssa.

17(iii) (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyy-li)piperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 20 25 ml trifluorietikkahappoa ja 1000 μί trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin liuok seen, joka sisälsi 4,90 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[4-(N-4-nitrobentsyyliok-sikarbonyyli)pyrrolidinia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (ii) edellä] 4,9 ml:ssa anisolia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin yhden tunnin ajan samalla jäähdyttäen jäällä, jonka jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa.

25 Tuloksena saatu jäännös pestiin dietyylieetterillä pulverin tuottamiseksi. Tämä pulveri liuotettiin etyyliasetaatin ja veden seokseen ja tuloksena saatu liuos tehtiin alkaaliseksi lisäämällä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta. Etyyliasetaattikerros erotettiin, pestiin vedellä ja natriumkloridin vesiliuoksella tässä järjestyksessä ja kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin 30 saatiin 4,0 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

101226 220

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm 1709, 1660, 1607, 1570, 1520, 1431, 1346, 1210. 1198, 1162.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 5 1,90 (1H, dubletti, J = 8,8 Hz); 1,85-2,01 (1H, multipletti); 2,25 & 2,30 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 2,65-2,81 (1H, multipletti); 3,21-3,38 (1H, multipletti); 10 3,40-4,00 (8H, multipletti); 4,03-4,19 (2H, multipletti); 4,65 & 4,70 (yhdessä 1H, kaksi triplettiä, J = 7,8 Hz); 5,02-5,35 (4H, multipletti); 7,41-7,60 (4H, multipletti); 15 8,16-8,26 (4H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 18 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-3-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyli)aminopyrrolidin-l-20 yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 18(i) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-3-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)aminopyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyIi)pyrrolidii-ni 25

Liuos, joka sisälsi 1,43 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1-(4-nitrobentsyylioksi-, ·: karbonyyli)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa laimennettiin 10 ml :11a kuivaa tetrahyd- rofuraania, jäähdytettiin lämpötilaan 0 °C. 356 g trietyyliamiinia, jota seurasi 405 g pivaloyylikloridia lisättiin jäähtyneeseen liuokseen ja tuloksena saatua seosta sekoitet-30 tiin samassa lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän jälkeen seos, joka sisälsi 1,5 (3S)-3-(4- nitrobentsyylioksikarbonyyli)aminopyridiiniä, 830 mg di-isopropyylietyyliamiinia ja • 7 ml kuivaa asetnitriiliä, lisättiin liuokseen ja sitten lämpötilan annettiin nousta.

221 101226

Reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2,5 tuntia, jonka jälkeen se suodatettiin ja suodos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla ja laimennettu liuos pestiin natriumvety-karbonaatin vesiliuoksella ja natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella tässä jäijes-5 tyksessä. Liuos kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin kolonnikromato-grafialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin, metyleenikloridin ja asetnitriilin välistä 4:4:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 1,47 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

_ 10

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1716, 1625, 1609, 1519, 1346, 737.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 15 270 MHz), δ ppm: 1,54-1,65 (1H, multipletti); 1,72-1,86 (1H, multipletti); 2,57-2,69 (1H, multipletti); 2,99-3,13 (1H, multipletti); 20 3,72 (3H, dubletti, J = 5,37 Hz); 3.15- 41,5 (12H, multipletti); 4,36-4,58 (1H, multipletti); 5,00-5,23 (4H, multipletti); 6,87 (1H, dubletti, J = 8,3 Hz); 25 7,26 (1H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,46-7,62 (4H, multipletti); *: 7,70-7,80 (1H, multipletti); 8.15- 8,25 (4H, multipletti).

30 101226 222 18(ii) (2S,4S)-4-merkapto-2- [(3S)-3-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)aminopyr-rolidin-l-yyIikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyli)pyrroIidiini 12 ml trifluorietikkahappoa ja 0,38 ml trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin liuok-5 seen, joka sisälsi 1,47 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-3-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyli)aminopyrrolidin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] 2,3 ml:ssa anisolia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kaksi tuntia. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin hek-10 saanilla anisolin poistamiseksi ja sitten lisättiin dietyylieetteri. Seos jäähdytettiin sitten — lämpötilaan -78 °C ja kiinteytynyt tuote murrettiin ja erotettiin dekantoimalla. Toistamalla tämä menetelmä monta kertaa saatiin pulveria ja öljymäisiä aineita, jotka liuotettiin 100 ml:aan etyyliasetaattia, jolloin saatiin liuos. Tuloksena saatu liuos pestiin natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja pesuvedet uutettiin 30 ml:lla etyy-15 liasetaattia. Pesuvedet yhdistettiin etyyliasetaattiliuokseen ja yhdistetty orgaaninen faasi pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin sitten tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 1,26 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

20 Infrapuna-absorptiospeltri (KBr), vmax cm"1: 1710, 1522, 1347, 854, 738.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), δ ppm: 25 1,60-2,20 (2H, multipletti); . 2,62-2,75 (1H, multipletti); « ·* 3,08-4,13 (11H, multipletti); 4,37-4,59 (1H, multipletti); 5,02-5,26 (4H, multipletti); 30 7,47-7,81 (4H, multipletti); 8,16-8,26 (4H, multipletti).

223 101226 VALMISTUSESIMERKKI 19 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin-3- yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrroIidiini 5 19(i) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-l-(t-butoksikarbonyyli)pyrroIi-din-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyIi)pyrroIidiiiii 3,05 g Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 7,99 g (2S,4S)-w 10 4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-2-pyrrolidinin karbok- syylihappoa 80 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kaksi tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos jäähdytettiin lämpötilaan 0 °C, jonka jälkeen lisättiin liuos, joka sisälsi 3,34 g (3S)-3-amino-l-t-butoksi-karbonyylipyrrolidiniä 30 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja seosta sekoitettiin samassa 15 lämpötilassa 20 minuuttia; sitten sitä sekoitettiin huoneen lämpötilassa vielä 1,4 tuntia ja lämpötilassa 32 °C 45 minuuttia. Sitten reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja konsentraatti laimennettiin 200 ml:lla etyyliasetaattia. Tuloksena saatu etyyliasetaattiliuos pestiin kaksi kertaa vedellä ja sitten kerran natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella. Sitten liuos kuivattiin vedettömän 20 magnesiumsulfaatin avulla, jonka jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös jälleenkiteytettiin dietyylieetteristä, jolloin saatiin 9,11 g otsikko-yhdistettä pulverin muodossa.

19(ii) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-pyrrolidin-3-yyliaminokar-25 bonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidin hydrokloridi . Seos, joka sisälsi 1,00 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-l-(t-butoksikar- bonyyli)pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrro-lidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] ja 10 ml etyyliasetaattia 30 kuumennettiin liuoksen muodostamiseksi. Sitten lisättiin 2,5 ml kloorivedyn 4N liuosta etyyliasetaatissa tähän liuokseen ja tuloksena saatua seosta kuumennettiin palautuksessa 30 minuuttia. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa « 224 101226 paineessa ja sitten, hapon poistamiseksi, lisättiin etyyliasetaattia jäännökseen ja liuotin poistettiin jälleen tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös trituroitiin dietyylieetteril-lä ja pestiin dekantoimalla, jolloin saatiin 630 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

5 19(iii) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyyloksikarbonyyli)pyr-rolidiini 10 230 mg di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin suspensioon, joka sisälsi 1,0 g (2S,4S)-4- (4-metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobent-syylioksikarbonyylijpyrrolidinin hydrokloridia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (ii) edellä] ja 240 mg 4-dimetyyliaminopyridiiniä 10 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatu seos jäähdytettiin lämpötilaan 0 °C. Liuos, joka sisälsi 430 mg 4-15 nitrobentsyylikloroformaattia 4 mlrssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin sitten seokseen.

Sitten seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kolme tuntia, jonka jälkeen liuos, joka sisälsi 117 mg 4-nitrobentsyylikloroformaattia 2 mlrssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin ja seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen reaktioseos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös laimennettiin 50 20 mlrlla metyleenikloridia. Laimennettu liuos pestiin natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella. Vesipitoiset pesuvedet uutettiin metyleenikloridilla. Orgaaninen uute ja metyleenikloridiliuos yhdistettiin ja kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä metyleenikloridin 25 ja asetnitriilin välistä 4:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 862 g otsikkoyhdis-, tettä pulverin muodossa.

•

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm 1709, 1521, 1345, 1109, 854, 738.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 1,80-1,98 (1H, multipletti); 30 101226 225 2,05-2,25 (1H, multipletti); 2,30-2,50 (1H, multipletti); 3,10-3,20 (1H, multipletti); 3,40-3,55 (2H, multipletti); 5 3,79 (3H, singletti); 3.20- 3,90 (8H, multipletti); 4.20- 4,30 (1H, multipletti); 4,42-4,48 (1H, multipletti); 5,13-5,26 (4H, multipletti); 10 6,82-6,87 (2H, multipletti); 7.19- 7,26 (2H, multipletti); 7,45-7,53 (4H, multipletti); 8.19- 8,24 (4H, multipletti).

15 19(iv) (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrroli- din-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 6,5 ml trifluorietikkahappoa ja 0,21 ml trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin suspensioon, joka sisälsi 835 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-l-(4-nitrobent-20 syylioksikarbonyyli)pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (iii) edellä] 1,3 ml:ssa anisolia samalla jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös pestiin ensin heksaanilla anisolin 25 poistamiseksi ja sitten sekoitettiin dietyylieetterin kanssa. Seos jäähdytettiin lämpöti- , laan -78 °C ja kiinteytynyt tuote murrettiin ja erotettiin dekantoimalla. Toistamalla tämä menetelmä monta kertaa saatiin 940 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

101226 226

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax c/m'1: 1702, 1523, 1347, 856, 739.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi + D20, 270 5 MHz), δ ppm: 1.55- 2,15 (2H, multipletti); 2.55- 2,65 (1H, multipletti); 3.05- 3,61 (7H, multipletti); 3,87-4,02 (1H, multipletti); 10 4,10-4,26 (2H, multipletti); _ 5.06- 5,20 (4H, multipletti); 7.55- 7,65 (4H, multipletti); 8,18-8,25 (4H, multipletti).

15 VALMISTUSESIMERKKI20 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3R)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyIi)pyrrolidin-3- yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 20 Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 19, mutta käyttämällä 6,4 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 2,40 g Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia ja 2,7 (3R)-3-amino-l-t-butoksikarbonyylipyrrolidiniä, saatiin 750 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

25 , Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: i 1705, 1522, 1347, 855, 735.

111 VALMISTUSESIMERKKI 21 101226 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-3-dimetyyliaminopyrrolidm-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyirolidinin trifluorimetaanisulfonaatti 5 21(i) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-3-dimetyyIiaminopyrrolidin-l-yyIikarbonyyli-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrroIidiini

Liuos, joka sisälsi 924 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -(4-nitrobentsyyliok-w 10 sikarbonyyli)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa 10 ml:ssa tetrahydrofuraania jäähdy tettiin lämpötilaan -20 °C ja 209 mg trietyyliamiinia lisättiin, jota seurasi 250 mg pivaloyylikloridia. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 5 minuuttia ja sitten seos, joka sisälsi 651 mg (3S)-l-dimetyyliaminopyrrolidinin trifluoriasetaattia, 560 ml di-isopropyylietyyliamiinia ja 7 ml kuivaa asetnitriiliä lisät-15 tiin seokseen. Reaktioseoksen lämpötilan annettiin nousta vähitellen ja seosta sekoitettiin lämpötilassa 0 °C yhden tunnin ajan. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla ja liuos pestiin natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella tässä järjestyksessä. Orgaaninen liuos kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin 20 avulla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä asetnitriilin ja metanolin välistä 3:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 884 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

25 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmaxcrn‘1: 1710, 1654, 1512, 1345, 1109, 857, 738.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), δ ppm: 30 1,49-3,31 (15H, multipletti); 3,35-3,57 (2H, multipletti); 3,71-4,00 (6H, multipletti); 101226 228 4,44-4,56 (1H, multipletti); 5,00-5,21 (2H, multipletti); 6,88 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,27 (2H, dubletti, J = 8,31 Hz); 5 7,51-7,61 (2H, multipletti); 8,19-8,26 (2H, multipletti).

21 (ii) (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-3-dimetyyliaminopy rrolidin-1-yy likarbonyy-li]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylipyrrolidinin trifluorimetaanisulfonaatti 10 8,5 ml trifluorietikkahappoa ja 0,28 ml trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 845 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[(3 S)-3 -dimetyy liaminopyrrolidin-1 -yy likarbonyy li-1 -(4-nitrobentsyy lioksikarbonyy-li)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] 1,7 ml:ssa anisolia 15 ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös pestiin ensin heksaanilla anisolin poistamiseksi ja sekoitettiin sitten dietyylieetterin kanssa. Seos jäähdytettiin lämpötilaan -78 °C ja kiinteä tuote murrettiin ja erotettiin dekantoimalla. Toistamalla tämä menettely monta kertaa saatiin 1,14 g otsikkoyhdis-20 tettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1705, 1656, 1523, 1348, 857.

25 Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi + D20, 270 MHz), δ ppm: 1,70-4,10 (18H, multipletti); 4,47-4,66 (1H, multipletti); 5,04-5,27 (2H, multipletti); 30 7,51-7,65 (2H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 22 229 ίο vm (25.45) -4-Merkapto-2-[(3S)-3-(N-metyyIi-N-[4-nitrobentsyylioksikarbonyyli]a-minopyrrolidin-l-yylikarbonyyli)-l-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyIi)pyrrolidiini 5

Suorittamalla sama menettely kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 18, mutta käyttämällä (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-2-pyrrolidinnin karboksyylihappoa, 343 mg pivaloyylikloridia ja 1,27 g (3S)-3-[N-metyyliN-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)amino]pyrrolidinintrifluoriasetaattia^aatiin w 10 1,21 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm*1: 1709, 1651, 1522, 1346, 856, 737.

15 VALMISTUSESIMERKKI 23 (25.45) -4-Merkapto-2-[(3S)-3-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyliami-no)pyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 20 23(i) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-|(3S)-3-aminopyrrolidin-l-yylikar- bonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 4 2,92 g Ν,Ν-karbonyylidi-imidatsolia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 6,70 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-2-pyrrolidinin karbok-25 syylihappoa 50 mlrssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 1,55 g (3S)-3-amino-pyrrolidiniä 10 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin sitten seokseen samalla jäähdyttäen jäällä ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen reaktioseos vapautettiin liuottimesta tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös 30 pestiin vedellä ja natriumkloridin vesipitoisella liuoksella tässä järjestyksessä, jonka jälkeen se kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikro- 101226 230 matografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 1:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 4,10 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 5 1708, 1651, 1609, 1512, 1440, 1404, 1346, 1248, 1174.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadueteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), δ ppm: 1,40-2,04 (3H, multipletti); 10 2,57-2,77 (1H, multipletti); 2,90-3,93 (10H, multipletti); 3,72 & 3,93 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 3,78 (2H, singletti); 4,33-4,58 (1H, multipletti); 15 4,99-5,26 (2H, multipletti); 6,88 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,27 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,48-7,67 (2H, multipletti); 8,14-8,29 (2H, multipletti).

20 23(H) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-3-aminopyrrolidin-l-yylikar-bonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin hydrokloridi 4,37 ml kloorivedyn 4N liuosta etyyliasetaatissa lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä 25 liuokseen, joka sisälsi 3,00 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-3-aminopyrro-lidin-1 -yy likarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu ” kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] 30 ml:ssa etyyliasetaattia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän jälkeen se laimennettiin etyyliasetaatilla ja pulveri, joka saostui, kerättiin suodattamalla ja kuivattiin, jolloin 30 saatiin 3,20 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

101226 231

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1707, 1656, 1609, 1585, 1512, 1440, 1405, 1346, 1249, 1175.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), 5 δ ppm: 1,49-1,78 (1H, multipletti); 1,88-2,33 (2H, multipletti); 2,59-2,75 (1H, multipletti); 2,96-3,12 (1H, multipletti); 10 3,12-3,97 (7H, multipletti); 3,72 & 3,74 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 3,78 & 3,79 (yhdessä 2H, kaksi singlettiä); 4,36-4,61 (1H, multipletti); 5,00-5,28 (2H, multipletti); 15 6,88 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,20-7,31 (2H, multipletti); 7,46-7,65 (2H, multipletti); 8,19-8,28 (2H, multipletti); 8,30-8,60 (3H, multipletti).

20 23(iii) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-3-(N-4-nitrobentsyylioksikar-bonyy liasetimidoyy Iiamino)pyrroIidin-l -yylikarbonyy li] -1 -(4-nitrobentsyy lioksi-karbonyyIi)pyrrolidiini 25 Suspensio, joka sisälsi 1,00 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-3-aminopyr-rolidin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pynOlidinin hydroklo- ridia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (ii) edellä] ja 0,47 g N-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyli)asetamidiinia 20 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä sekoitettiin lämpötilassa 53 °C kaksi tuntia. Sitten reaktioseos vapautettiin epäpuhtauksista suodattamalla ja 30 suodos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa. Konsentraatti puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä metyleenikloridin, etyyliasetaatin 101226 232 ja metanolin välistä 45:45:5 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 0,89 g otsikkoyh-distettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 5 1709, 1643, 1619, 1609, 1557, 1521, 1441, 1402, 1346, 1247, 1226, 1199, 1175.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi + D20, 270 MHz), δ ppm: 1.49- 2,25 (3H, multipletti); 10 2,09 & 2,10 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); _ 2.50- 2,74 (1H, multipletti); 3.00- 3,92 (7H, multipletti); 4,71 & 3,73 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 3,77 (2H, singletti); 15 4,15-4,63 (2H, multipletti); 5.00- 5,31 (4H, multipletti); 6.87 (1H, dubletti, J = 8,79 Hz); 6.88 (1H, dubletti, J = 8,30 Hz); 7,25 (1H, dubletti, J = 8,30 Hz); 20 7,27 (1H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,43-7,70 (4H, multipletti); — 8,13-8,29 (4H, multipletti).

23(iv) (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-3-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimi-25 doyyliamino)pyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyr-rolidiini 4,56 ml trifluorietikkahappoa ja 208 μ( trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 0,87 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-30 [(3S)-2-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyliamino)pyrrolidin-l-yylikar-bonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (iii) edellä] 1,29 ml:ssa anisolia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin 101226 233 samoissa olosuhteissa 1,5 tuntia. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös pestiin dietyylieetterillä ja kuivattiin in vacuo, jolloin saatiin 1,10 g otsikkoyhdisteen trifluorimetaanisulfonaattia pulverin muodossa. Koko tämä suola liuotettiin etyyliasetaatin ja veden seoksessa ja liuos 5 tehtiin alkaliseksi lisäämällä natriumhydroksidin IN vesiliuosta. Etyyliasetaattikerros erotettiin, pestiin vedellä ja natriumkloridin vesiliuoksella tässä järjestyksessä ja kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 662 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

w 10 Infrapuna-absorptiospektri, Vj^ cm'1: 1708, 1650, 1607, 1553, 1520, 1440, 1404, 1346, 1217, 1170.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi + D20, 270 MhZ); δ ppm: 15 1,59-2,28 (2H, multipletti); 2,10 & 2,11 (yhdessä 1H, multipletti); 2,60-2,83 (1H, multipletti); 3,08-4,64 (10H, multipletti); 5,01-5,42 (4H, multipletti); 20 7,45-7,73 (4H, multipletti); 8,14-8,31 (4H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 24 25 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-3-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyy-Iiamino)pyrrolidin-l-yyIikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidii-ni

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkeissä 23(iii) ja 23(iv), 30 mutta käyttämällä 1,00 g (2S,4S)-4-(metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-3-aminopyrroli-din-1 -yy likarbonyy li]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin hydrokloridia 101226 234 [valmistettu kuten on kuvattu valmistusesimerkissä 23(ii)] ja 410 mg N-(4-nitrobent-syylioksikarbonyylijforamidiinia, saatiin 670 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri, vmax cm'1: 5 1707, 1645, 1604, 1520, 1441, 1404, 1346, 1188, 1111.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3 + D20, 270 MHz), δ ppm: 1,71-2,32 (1H, multipletti); 2,60-2,84 (1H, multipletti); 10 3,19-4,18 (8H, multipletti); _ 4,36-4,57 (1H, multipletti); 4,93-5,40 (4H, multipletti); 7,40-7,61 (4H, multipletti); 8,12-8,30 (4H, multipletti); 15 8,42 (1H, singletti).

VALMISTUSESIMERKKI 25 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-l-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformiinidoyy-20 li)pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidii-ni

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkeissä 23(iii) ja 23(iv), mutta käyttämällä 1,20 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobent-25 syylioksikarbonyyli)-2-[(3S)-pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]pyrrolidinin hydro-kloridia ja 490 mg N-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)formamidiinia, saatiin 750 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), ,27 max cm*1: 30 1721, 1678, 1664, 1602, 1520, 1449, 1439, 1403, 1346, 1234, 1222.

101226 235

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3 + D20, 270 MHz), δ ppm: 1,87-2,83 (4H, multipletti); 3,24-4,08 (7H, multipletti); 4,20-4,63 (2H, multipletti); 5 5,14-5,38 (4H, multipletti); 7,45-7,60 (4H, multipletti); 8,15-8,29 (4H, multipletti); 8,60 (1H, singletti).

w 10 VALMISTUSESIMERKKI26 (2$,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-l-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)pyr- rolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyIi)pyrrolidiini 15 Suorittamalla sama menettely kuin on kuvattu valmistusesimerkeissä 23(iii) ja 23(iv), muttakäyttämällä 1,08 g(2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)-2-[(3S)-pyrrolidin-3-yyIiaminokarbonyyIi)pyrroIidinin kloorivetyä ja 440 mg N-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)asetamidiinia, saatiin 608 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

20

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1701, 1655, 1609, 1555.

VALMISTUSESIMERKKI 27 25 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3R)-l-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyy- li)pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidii- ni 30 Suorittamalla sama menettely kuin on kuvattu valmistusesimerkeissä 23(iii) ja 23(iv), mutta käyttämällä 1,3 8 g (2S ,4S)-4-(4-metoksibentsyy 1 itiö)-1 -(4-nitrobentsyy lioksikar- 101226 236 bonyyli)-2-[(3R)-pyrrolidin-3-yyliaminokarbonyyli)formamidiinia, saatiin 795 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm"1: 5 1710, 1650, 1587, 1518, 1442, 1346, 1170.

VALMISTUSESIMERKKI 28 (25.45) -4-Merkapto-2-{N-metyyIi-N[(3S)-l-(N-4-iiitrobentsyylioksikarbonyyIi)pyr- 10 roIidin-3-yyli]karbamoyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini —

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 19, mutta käyttämällä 8,0 g (S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 3,05 g Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia ja 3,37 15 g (3S)-3-metyyliamino-l-t-butoksikarbonyylipyrrolidiniä, saatiin 504 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm"1: 1704, 1522, 1346, 854, 736.

20 VALMISTUESIMERKKI 29 (25.45) -4-Merkapto-2-{N-metyyli-N[(3S)-l-(N-4-nitrobentsyyIioksikarbonyylifor-mimidoyyli)pyrrolidin-3-yyli]karbamoyyli}-l-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyli)pyr- 25 rolidiini

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkeissä 23(iii) ja 23(iv), mutta käyttämällä 1,00 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)-2-(N-metyyli-N-[(3S)-pyrrolidin-3-yyli]karbamoyyli]pyrrolidiniAiydroklori-30 dia ja 405 mg N-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)foramidiinia, saatiin 620 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

101226 237

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm"1: 1707, 1648, 1514, 1404, 1347, 1173.

VALMISTUESIMERKKI 30 5 (2S,4S)-2-[3-Karbamoyyli-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-l-piperatsinyylikar- bonyyli]-4-merkapto-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 8, mutta .__. 10 käyttämällä 2,18 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -(4-nitrobentsyylioksikar- bonyyli)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 0,79 g Ν,Ν-karbonyylidi-imidatsolia ja 1,81 g 2-karbamoyyli-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)piperatsiinia, saatiin 2,13 g otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.

15 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm"1: 1706, 1607, 1521, 1432, 1405, 1346.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz); δ ppm: 1,71-2,04 (3H, multipletti); 20 2,42-3,46 (5H, multipletti); 3,90-4,93 (6H, multipletti); 5,02-5,36 (4H, multipletti); 5,45-6,77 (2H, multipletti); 7,42-7,54 (4H, multipletti); 25 8,14-8,26 (4H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 31 238 101226 (2S,4S)-4-Merkapto-2- [ 4-(2-fluorietyy li)-1 -homopiperatsinyy likarbonyy li] -1-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyIi)pyrroIidinin trifluorimetaanisulfonaatti 5

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 8, mutta käyttämällä 3,5 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)-2-pyrrolidinin karboksyy 1 ihappoa, 1,53 g Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia ja 5,83 g N-(2-fluorimetyyli)homopiperatsiinin bis(trifluoriasetaatti)a, saatiin 4,0 g otsikkoyh-10 distettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1784, 1698, 1662, 1524, 1441, 1348, 1286, 1225, 1170, 1030.

15 Ydinmagnettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), 6 ppm: 1,62-1,83 (1H, multipletti); 1,96-2,25 (2H, multipletti); 2,65-2,90 (1H, multipletti); 2,95-4,20 (14H, multipletti); 20 4,60-4,95 (2H, multipletti); 5,00-5,30 (2H, multipletti); 7,50-7,70 (2H, multipletti); 8,19-8,26 (2H, multipletti).

25 VALMISTUSESIMERKKI 32 239 101226 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-3-(imidatsol-l-yyli)pyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l-(4- nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 5 32(i) (2S,4S)-4-(4-MetoksibentsyyIitio)-2-[(3S)-3-(imidatsol-l-yyli)pyrrolidin-l-yy Iikarbonyy li] -1 -(4-nitroben tsyy lioksikarbonyy li)py rrolidiini 1,09 g Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 2,5 g (2S,4S)-4-w 10 (4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-2-pyrrolidinin karbok- syylihappoa 25 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuttia. Liuos, joka sisälsi 850 mg (3S)-3-(imidatsol-l-yylijpyrrolidiniä 5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin sitten ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa kaksi tuntia ja sitten lämpötilassa 40 °C vielä neljä tuntia.

15 Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin käänteisfaasikolonnikromatografialla 200 ml:n Cosmo Sil 75Cjg-PREP (yhtiön Nacalai Tesque tuotteen tavaramerkki) läpi käyttämällä asetnitriilin ja veden välistä 50:50 - 55:45 tilavuusseosta eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa 20 paineessa, jolloin saatiin 2,54 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1708, 1656, 1609, 1512, 1438, 1404, 1345, 1246, 1173, 1110.

25 Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1,88-2,05 (1H, multipletti); 2,15-2,31 (1H, multipletti); 2,36-2,57 (2H, multipletti); 3,02-3,18 (1H, multipletti); 30 3,31-3,40 (1H, multipletti); 3,49-3,63 (1H, multipletti); 3,73 & 3,74 (yhdessä 2H, kaksi singlettiä); 101226 240 3,78 & 3,79 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 3,80-4,08 (3H, multipletti); 4,26-4,48 (2H, multipletti); 4,71-4,89 (1H, multipletti); 5 5,00-5,34 (2H, multipletti); 6,76-7,60 (9H, multipletti); 8.15- 8,27 (2H, multipletti).

32(ii) (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-3-(imidatsol-l-yyIi)pyrrolidin-l-yyIikar-10 bonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiiiii - 585 μ£ trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 2,5 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2- [(3S)-(imidatsol-1 -yyli)pyrroli-din-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu 15 kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] seoksessa, joka sisälsi 5 ml anisolia ja 15 ml trifluorietikkahappoa ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan ja sitten lämpötilassa 35 °C vielä 30 minuuttia. Tämän jälkeen seos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös pestiin neljä kertaa dietyy 1 ieetteri 1 lä, jolloin saatiin väritön pulveri. Tämä pulveri suspendoi-20 tiin etyyliasetaatilla ja suspensio tehtiin alkaliseksi lisäämällä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta. Etyyliasetaattikerros erotettiin ja pestiin natriumkloridin vesiliuoksella, jonka jälkeen se kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin sitten tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 1,9 g otsikkoyhdistettä värittömän pulverin muodossa.

25

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1706, 1655, 1521, 1440, 1405, 1346.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3 + D20, 270 MHz), δ ppm: 30 1,90-2,09 (1H, multipletti); 2.15- 2,37 (1H, multipletti); 2,42-2,83 (2H, multipletti); 101226 241 3,20-3,35 (1H, multipletti); 3,41-4,93 (8H, multipletti); 5,02-5,37 (2H, multipletti); 6.79-8,26 (7H, multipletti).

5 VALMISTUSESIMERKKI 33 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-3-(l,2,4-triatsol-l-yyli)pyrroIidin-l-yyli-l(4-nitrobent-syy Iioksikarbonyy li] py rrolidiini W 10 33(i) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-3-(l,2,4-traistol-l-yyli)pyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 18(a), mutta 15 käyttämällä 768 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 218 mg pivaolyylikloridia ja 238 mg (3S)- 3-(l,2,4-triatsol-l-yyli)pyrrolidinintrifluoriasetaattia, saatiin 803 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

20 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1709, 1656, 1521, 1346, 857, 738.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), δ ppm: 25 1,40-1,70 (1 H, multipletti); 2,18-2,75 (2H, multipletti); 3.00- 3,15 (1H, multipletti); 3,15-4,10 (13H, multipletti); 5.00- 5,24 (3H, multipletti); 30 6,85-6,90 (2H, multipletti); 7,24-7,29 (2H, multipletti); 7,45-7,61 (2H, multipletti); 101226 242 8,14-8,25 (2H, multipletti); 8.50- 8,62 (1H, multipletti).

33(ii) (2S,4S).4.Merkapto-2-[(3S)-3-(l,2,4-triatsol-l-yyli)pyrrolidin-l-yyli-l-(4-5 nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 18(b), mutta käyttämällä kaikki (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-3-(l,2,4-triatsol-l-yyli)pyrrolidin-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidini 10 [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä], saatiin 803 mg otsikkoyhdistettä — pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1706, 1652, 1522, 1346, 857, 739.

15

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), δ ppm: 1,56-1,78 (1H, multipletti); 2,20-2,55 (2H, multipletti); 20 2,61-2,82 (1H, multipletti); 3,09-4,09 (9H, multipletti); 4,41-4,64 (1H, multipletti); 5,01-5,26 (3H, multipletti); 7,47-7,65 (2H, multipletti); 25 8,14-8,26 (2H, multipletti); 8.51- 8,62 (1H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 34 243 101226 (25.45) -4-Merkapto-2-[(3R)-3-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)aniinopyrrolidiii-l-yyIikarbonyyIi]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyIi)pyrrolidiini 5

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 18, mutta käyttämällä 1,29 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 365 mg pivaoyylikloridia ja 1,14 mg (3R)-3-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)aminopyrrolidinin trifluoriasetaattia, saatiin w 10 1,09 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1707, 1653, 1523, 1347, 855.

15 VALMISTUSESIMERKKI 35 (25.45) -4-Merkapto-2-[(3R)-3-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyliami-no)pyrroIidin-l-yyIikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 20 Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 23, mutta käyttämällä 3,00 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 0,70 g (3R)-3-aminopym>lidiniä, saatiin 1,31 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

25 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1706, 1651, 1552, 1441, 1345, 1171,

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi + D20, 270 MHz), δ ppm: 30 1,56-2,25 (2H, multipletti); 2,09 & 2,11 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); - 2,62-2,83 (1H, multipletti); 101226 244 3,04-4,09 (8H, multipletti); 4,14-4,62 (2H, multipletti); 4,98-5,37 (4H, multipletti); 7,43-7,70 (4H, multipletti); 5 8,15-8,30 (4H, Multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 36 (25.45) -4-Merkapto-2-[(3R)-3-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyy- 10 liamino)pyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylloksikarbonyyli)pyrrolidii- ... ni

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkeissä 23(iii) ja 23(iv), mutta käyttämällä 0,75 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[(3R)-3-aminopyrroli-15 din-1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin hydrokloridia ja 0,31 gN-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)formamidia, saatiin 0,51 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 20 1706, 1644, 1521, 1405, 1345, 1186.

VALMISTUSESIMERKKI 37 (25.45) -4-Merkapto-2-[3-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylioksimetyyli)-4-(4-nitro- 25 bentsyy lioksika rbonyy li)-1 -piperatsinyy likarbonyy li] -1 -(4-nitrobentsyy lioksikar- bonyyli)pyrrolidiini 37(i) (2S,4S)-2-(3-Hydroksimetyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli)-4-(4-metoksi-bentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 30

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 8, mutta • käyttämällä 10,0 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyy lioksikar- 101226 245 bonyyli)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 4,4 gN.N’-karbonyylidi-imidatsolia ja 4,0 g 2-hydroksimetyylipiperatsiinia, saatiin 6,9 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

37(ii) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[3-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyliok-5 simetyyli)-4-(nitrobentsyylioksikarbonyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitro-bentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 7(iii), mutta käyttämällä 3,5 g (2S,4S)-2-(3-hydroksimetyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli)-4-(4-10 metoksibentsyy litio)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy li)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä], 4,2 g 4-nitrobentsyylikloroformaattia ja 2,4 g 4-dimetyyliaminopyridiiniä, saatiin 4,9 g otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.

37(iii) (2S,4S)-4-Merkapto-2-[3-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylioksimetyyli)-4-15 (4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyli)pyrrolidiini

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 4(b), mutta käyttämällä 0,23 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[3-(4-nitrobentsyylioksikar-20 bonyylioksimetyyli)-4-(nitrobentsyylioksikarbonyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4- nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (ii) edellä], 0,28 ml anisolia, 2,3 ml trifluorietikkahappoa ja 45 μί trifluorimetaanisul-fonihappoa, saatiin 190 mg otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.

25 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm"1: 1707, 1608, 1521, 1430, 1406, 1345.

•

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1,68 (1H, singletti); 30 1,86-1,99 (1H, multipletti); 2,62-2,69 (1H, multipletti); 2,93 (1H, dublettien dubletti, J = 13,67 & 3,91 Hz); 10122c 246 3.10- 3,63 (4H, multipletti); 3,91-4,75 (8H, multipletti); 5.11- 5,30 (6H, multipletti); 7,47 (6H, dubletti, J = 8,30 Hz); 5 8,14-8,26 (6H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 38 (25.45) -4-Merkapto-2-[3-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-4-(4-iiitrobentsyylioksi- 10 karbonyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrro- _ lidiini

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 8, mutta käyttämällä 0,47 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-15 bonyyli)2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 0,20 Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia ja 0,70 g 2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)asetamidiinia, saatiin 0,45 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 20 1720, 1665, 1520, 1437, 1345, 1234.

• · ? VALMISTUSESIMERKKI 40 (25.45) -4-Merkapto-2-{N-[2-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)a-25 minoetyyli]karbamoyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyIi)pyrrolidiini « i • Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 17, mutta käyttämällä 850 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 450 mg etyleenidiamiinia ja 430 mg N-(4-30 nitrobentsyylioksikarbonyyli)aseamidiinia, saatiin 295 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

101226 247

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm"1: 1705, 1665, 1568, 1517, 1346, 1225.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf 3 + D20, 270 MHz), δ ppm: 5 2,23 (3H, singletti); 2,1-2,4 (1H, leveä); 2,5-2,8 (1H, leveä); 3,3-3,65 (6H, multipletti); 3,95-4,45 (2H, multipletti); w 10 5,15-5,30 (4H, multipletti); 7,45-7,60 (4H, multipletti); 8,17-8,27 (4H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 41 15 (2S,4S)-4-Merkapto-2-{N-[2-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyliformimidoyyli)a- minoetyyli]karbamoyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 17, mutta 20 käyttämällä 850 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 450 mg etyleenidiamiinia ja 400 mg N-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)formamidiinia, saatiin 280 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

25 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1705, 1665, 1568, 1517, 1346, 1225.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 2,11-2,30 (1H, multipletti); 30 2,55-2,80 (1H, multipletti); 3,30-3,48 (3H, multipletti); 3,52-3,75 (3H, multipletti); 101226 248 3,93-4,06 (1H, multipletti); 4,18-4,32 (1H, multipletti); 5,13-5,36 (4H, multipletti); 7,43-7,60 (4H, multipletti); 5 8,15-8,27 (4H, multipletti); 8,47 & 8,97 (1H, kaksi singlettiä).

VALMISTUSESIMERKKI 42 10 (2S,4S)-4-Merkapto-2-(3-dimetyyIiamino-l,2,5,6-tetrahydropyratsin-l-yyIikar- bonyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin trifiuorimetaanisul-fonaatti 42(i) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-(3-dimetyyliamino-l,2,5,6-tetrahydro-15 pyratsin-l-yylikarbonyyIi)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä l(i), mutta käyttämällä 446 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 178 mg N.N’-karbonyylidi-imidatsolia, 20 289 mg 3-dimetyyliamino-l,2,5,6-tetrahydropyratsiinin bis(trifluoriasetaatti)a ja 289 μΐ di-isopropyylietyyliamiinia, saatiin 460 mg otsikkoyhdistettä pulverin « muodossa.

42(ii) (2S,4S)-4-Merkapto-2-(3-dimetyyliamino-l,2,5,6-tetrahydropyratsin-l-25 yylikarbonyyli)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin trifluorime- taanisulfonaatti

• I

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä l(iv), mutta käyttämällä kaikki (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-(3-dimetyyliamino-l ,2,5,6-30 tetrahydropyratsin-1 -yylikarbonyyli)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidini [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä], saatiin 451 mg otsikkoyhdistettä : viskoottisen öljyn muodossa.

101226 249

Inffapuna-absorptiospektri (nestekalvo), vmax cm'1: 1705, 1670, 1610, 1525, 1445, 1409, 1348, 1287, 1228.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi + D20, 270 5 MHz), δ ppm: 1,58-1,78 (1H, multipletti); 2,71-2,86 (1H, multipletti); 2,88-3,86 (12H, multipletti); 3,90-4,10 (1H, multipletti); _ 10 4,48-4,68 (2H, multipletti); 4,75-4,92 (1H, multipletti); 5,02-5,23 (2H, multipletti); 7,52 & 7,63 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 8,21 & 8,23 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

15 VALMISTUSESIMERKKI 43 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)aminopi- peridin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 20

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 1, mutta käyttämällä 446 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 220 mg 4-t-butoksikarbonyyliaminopi-peridiiniäja 119 mg N-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)asetamidiinia, saatiin 307 mg 25 otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

• « • Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1781, 1703, 1633, 1610, 1345.

30 Ydinmagneettinen resonanssispsektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1,40-2,15 (7H, multipletti); : 2,21 & 2,32 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); . JQ-t226 250 2.65- 2,80 (1H, multipletti); 3.10- 3,50 (3H, multipletti); 3.65- 4,75 (6H, multipletti); 5,23 (4H, singletti); 5 7,48-7,60 (4H, multipletti); 8,18-8,26 (4H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 44 10 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)piperat-sin-1 -yy likarbonyy li] -1 -m etyy lipy rroli diini

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 1, mutta käyttämällä 282 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1-metyyli-2-pyrrolidinin 15 karboksyylihappoa, 203 mg 1-t-butoksikarbonyylipiperatsiinia ja 258 mg N-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)asetamidiinia, saatiin 225 mg otsikkoyhdistettä vis-koottisen öljyn muodossa.

Otsikkoyhdiste valmistettiin myös asyloimalla l-[N-4-nitrobentsyylioksikarbonyy-20 liasetimidoyyli)piperatsiiniaft-(4-metoksibentsyylitio)-1 -metyylipyrrolidiini-2-karbok- syylihapolla ja sitten poistamalla tuotteen suoja.

Infrapuna-absorptiospektri (nestekalvo), vmax cm*1: 1780, 1705, 1635, 1610, 1346.

25

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi + D20, 270 • MHz), δ ppm: 1,77-1,90 (1H, singletti); 2,14 (3H, singletti); 30 2,82 (3H, singletti); 2,95-3,05 (1H, multipletti); 3.10- 3,28 (3H, multipletti); 251 101226 3,45-3,80 (8H, multipletti); 4,60 (1H, dublettien dubletti, J = 9,3 & 8,3 Hz); 5,28 (2H, singletti); 7,66 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 5 8,25 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz).

VALMISTUSESIMERKKI 45 10 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-3-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)aminopyrrolidin-1 - yylikarbonyylij-l-metyylipyrrolidiini

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 18, mutta käyttämällä 1,03 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-metyyli-2-pyrrolidinin 15 karboksyylihappoa, 463 mg pivaloyylikloridia ja 1,45 g (3S)-3-(4-nitrobentsyyliok-sikarbonyyli)aminopyrrolidinin trifluoriasetaattia, saatiin 1,07 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm"1': 20 1703, 1655, 1522, 1347, 854, 737.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), δ ppm: 1,65-3,85 (15H, multipletti); 25 3,85-4,20 (2H, multipletti); 5,19 (2H, singletti); ί 7,62 (2H, dubletti, J = 8,30 Hz); 7,70-7,90 (1H, multipletti); 8,20-8,30 (2H, multipletti).

30 VALMISTUSESIMERKKI 46 252 101226 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-3-(N-4-nitrobentsyyiioksikarbonyylifonnimidoyy- liamino)pyrrolidin-l-yyIikarbonyy]i]-l-metyyIipyrrolidiini 5 46(i) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[(3S)-3-aminopyrrolidin-l-yyIikar-bonyyIi]-l-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyIi)-l-metyylipyrrolidinin hydrokloridi

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkeissä 23(i) ja 23(ii), 10 mutta käyttämällä 2,55 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-metyyli-2-pyrrolidinin _ karboksyylihappoa ja 0,94 g (3S)-3-aminopyrrolidiniä, saatiin 2,91 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

46(ii) (2S,4S)-4-Merkapto-2-((3S)-3-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformi-15 midoyyIi)pyrrolidin-l-yylikarbonyyli]-l-metyylipyrrolidiini

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkeissä 23(iii) ja 23(iv), muttakäyttämälläN-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)formamidiiniaN-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyylijasetamidiinin sijasta, jota käytettiin valmistusesimerkissä 23(iii), 20 saatiin 1,02 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (nestekalvo), vmax cm'1: 1705, 1650, 1510, 1440, 1345, 1173.

25 Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), δ ppm: i 1,60-4,60 (19H, multipletti); 5,10-5,30 (2H, multipletti); 7,55-7,75 (2H, multipletti); 30 8,25-8,28 (2H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 47 253 101226 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(imidatsol-l-yyli)piperidin-l-yylikarbonyyli]-l-(4- nitrobentsyylioksikarbonyyIi)pyrrolidiini 5 47(i) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[4-(imidatsol-l-yyIi)piperidin-l- yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyIi)pyrrolidiini 660 mg Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 1,52 mg w 10 (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa 15 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Liuos, joka sisälsi 538 mg 4-(imidatsol-l-yylijpiperidiiniä 5 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin sitten liuokseen ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuttia ja sitten lämpötilassa 40 °C vielä 15 7 tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla. Tuloksena saatu liuos pestiin natriumvetykar-bonaatin vesiliuoksella, vedellä ja natriumkloridin vesiliuoksella tässä järjestyksessä. Sitten orgaaninen liuos kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Jäännös puhdistettiin käänteisfaasikolon-20 nikromatografialla 200 ml:n Cosmo Sil 75C18-PREP (yhtiön Nacalai Tesque tuotteen — tavaramerkki) läpi käyttämällä gradienttieluointimenetelmää asetnitriilin ja veden 50:50-55:45 tilavuusseoksia eluenttina. Ne fraktiot, jotka sisälsivät otsikkoyhdistettä, yhdistettiin ja väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 1,45 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

25

Infrapuna-absorptiospektri (nestekalvo), vmax cm*1: i 1709, 1655, 1609, 1512, 1345, 1246, 1110.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 30 1.70-1,95 (2H, multipletti); 2,05-2,23 (3H, multipletti); 2,40-2,55 (1H, multipletti); 254 101226 2,60-2,85 (1H, multipletti); 3,03-3,43 (3H, multipletti); 3,73 (3H, singletti); 3,77-4,25 (5H, multipletti); 5 4,59-4,84 (2H, multipletti); 5,02-5,35 (2H, multipletti); 6,85 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 6,96 (1H, singletti); 7,07 & 7,09 (yhdessä 1H, kaksi singlettiä); 10 7,23 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 7,47 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 7,56 (1H, singletti); 8,23 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz).

15 47(ii) (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(imidatsol-l-yyli)piperidin-l-yylikarbonyyli]-l- (4-nitrobentsylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 350 μί trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 1,44 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[4-(imidatsol-l-yyli)piperidin-20 1 -yylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] seoksessa, joka sisälsi 1,5 ml anisolia ja 7,5 ml trif-luorietikkahappoa ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan ja sitten lämpötilassa 35 °C vielä 30 minuuttia. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin neljä kertaa 25 dietyylieetterillä, jolloin saatiin väritön pulveri. Kaikki tämä pulveri suspendoitiin etyyliasetaatiin ja suspensio tehtiin alkaaliseksi lisäämällä natriumvetykarbonaatin : vesiliuosta ja kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 1,15 g otsikkoyhdistettä värittömän pulverin muodossa.

30 255 101226

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi, 270 MHz), δ ppm: 1,55-1,85 (3H, multipletti); 2,00-2,11 (2H, multipletti); 5 2,63-2,89 (2H, multipletti); 3,05-3,30 (4H, multipletti); 3.92- 4,15 (2H, multipletti); 4,25-4,59 (2H, multipletti); 4,71-4,92 (1H, multipletti); 10 5,03-5,27 (2H, multipletti); 6.92- 8,28 (7H, multipletti).

Infrapuna-absorptiospektri (nestekalvo), vmax cm'1: 1705, 1652, 1523, 1442, 1347, 1268, 1170, 1035.

15 VALMISTUSESIMERKKI 48 (2S,4S)-2-[3,3-Dimetyyli-4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-l-piperatsinyylikar- bonyyli]-4-merkapto-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 20

Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 38, mutta * käyttämällä 0,35 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa, 0,15 g Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia ja 0,13 g 2,2-dimetyylipiperatsiinia, saatiin 250 mg otsikkoyhdistettä amorfisena 25 kiinteänä aineena.

: Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1707, 1652, 1607, 1521, 1431, 1347.

30 VALMISTUSESIMERKKI 49 256 101226 (2S,4S)-4-Merkapto-l-inetyyli-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyIi)-l-hoinopipe-ratsinyy likarbonyyli] pyrrolidinin trifluorimetaanisulfonaatti 5 49(i) (2S,4S)-2-Karbamoyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-metyylipyrrolidiini 10,86 ml dimetyylisulfaattia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 30 g (2S,4S)-2-karba-moyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidinin hydrokloridia seoksessa, joka sisälsi 10 36 ml 20 % p/t natriumhydoksidin vesiliuosta ja 470 ml dioksaania ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin lämpötilassa 22-23 °C yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös uutettiin 2 litralla etyyliasetaattia. Uute pestiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Sitten liuos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, kunnes kiteitä 15 ilmestyi ja sitten lisättiin 400 ml di-isopropyylieetteriä seokseen ja kiteet, jotka saostuivat, kerättiin suodattamalla, jolloin saatiin 23 g otsikkoyhdistettä kiteinä, joiden sulamispiste oli 113-114 °C.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 20 1636, 1609, 1512.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (60 MHz, CDCf3), δ ppm: 1,58-3,36 (6H, multipletti); 2,35 (3 H, singletti); 25 3,68 (2H, singletti); 3,78 (3H, singletti); : 5,95 (1H, leveä singletti); 6,84 & 7,23 (4H, A2B2, J = 9,0 Hz); 7,20 (1H, leveä singletti).

30 257 101226 49(ii) (2S,4S)-2-Karboksi-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-metyylipyrrolidiini 15,16 g (2S,4S)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -metyylipyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] liuotettiin 170 ml :aan 2N vesipi-5 toista kloori vety happoa j a liuosta sekoitettiin hauteessa, j ota pidettiin lämpötilassa 110 °C 3,5 tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan ja sen pH säädettiin arvoon 8,5 lisäämällä natriumkarbonaattia. Sitten seos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jonka jälkeen sen annettiin seistä jääkaapissa kiteiden saostamiseksi. Saostuneet kiteet kerättiin suodattamalla ja pestiin pienellä määrällä 10 kylmää vettä. Sitten ne kuivattiin, jolloin saatiin 10,4 g otsikkoyhdistettä. Emäliuos väkevöitiin sitten haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös ajettiin kolonnikro-matografialla CHP20P (75-150 μ, Mitsubishi Industries, Ltd.) läpi käyttämällä 50 % p/p vesipitoista metanolia eluenttina, jolloin saatiin vielä 3,7 g otsikkoyhdistettä kiteinä, joiden sulamispiste oli 185-187 °C.

15

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm*1: 1641, 1623, 1512, 1373, 1311, 1253.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20), δ ppm: 20 1,83-1,93 (1H, multipletti); 2,59-2,75 (1H, multipletti); • 2,72 (3H, singletti); 3,16-3,23 (1H, multipletti); 3,03-3,43 (2H, multipletti); 25 3,62 (2H, singletti); 3,64 (3H, singletti); j 3,74 (1H, dublettien dubletti, J = 9,53 & 6,96 Hz); 4,80 (2H, dubletti, J = 8,60 Hz); 7,15 (2H, dubletti, J = 8,60 Hz).

30 258 «* C ' r c iL ii.zo 49(iii) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-l-metyyli-2-[4-(4-nitrobentsyylioksi-karbonyyli)-l-homopiperatsinyyIikarbonyyli]pyrrolidiini

Suspensio, joka sisälsi 1,8 g (2S,4S)-2-karboksi-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-metyyli-5 pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (ii) edellä] ja 1,26 g Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia 18 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä sekoitettiin lämpötilassa 35 °C 25 minuuttia. Liuos, joka sisälsi 3,7 g l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)homopiperat-siinin trifluoriasetaattia 20 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 2,0 ml Ν,Ν’-di-isopropyy-lietyyliamiinia lisättiin sitten samanaikaisesti pisara kerrallaan sameilla jäähdyttäen 10 jäällä reaktioseokseen ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 8 tuntia, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla. Liuos pestiin natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella, fosfaattipuskuri-liuoksella (pH 6,86), vedellä ja natriumkloridin vesiliuoksella tässä jäijestyksessä.

15 Sitten etyyliasetaattikerros kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla ja liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin (Merck Art 9385) läpi käyttämällä asetnitriilin ja veden välistä 95:5 tilavuusseosta, jolloin saatiin 2,5 g otsikkoyhdistettä.

20 Infrapuna-absorptiospektri (nestekalvo), vmax cm'1: 1701, 1646, 1513, 1426, 1346, 1246.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 1,66-1,95 (4H, multipletti); 25 2,26 & 2,29 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 2,42-2,63 (2H, multipletti); i 3,07-3,23 (3H, multipletti); 3,44-3,82 (7H, multipletti); 3,70 (2H, singletti): 30 3,79 (3H, singletti); 5,15-5,30 (2H, multipletti); 6,83 (2H, dubletti, J = 8,30 Hz); 101226 259 7,21 (2H, dubletti, J = 8,30 Hz); 7,49 & 7,50 (yhdessä 2H, kaksi dublettia,, 8,30 Hz).

49(iv) (2S,4S)-3’4-Merkapto-l-metyyli-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-l-5 homopiperatsinyylikarbonyylijpyrrolidinin trifluorimetaanisulfonaatti 25 ml trifluorietikkahappoa ja 0,83 ml trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 2,5 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -metyyli-2-[4-(4-nitrobentsyy lioksikarbonyy li)-1 -homopipe-w 10 ratsinyylikarbonyylijpyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (iii) edellä] 5,2 ml:ssa ani solia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 50 minuuttia. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös dekantoitiin vuorostaan heksaanilla ja dietyylieetterillä, jolloin saatiin 2,7 g otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.

15

Infrapuna-absorptiospektri (nestekalvo), vmax cm'1: 1688, 1650, 1522, 1483, 1434, 1349.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi), 20 δ ppm: 1,58-1,92 (2H, multipletti); * 2,67-3,08 (3H, multipletti); 3,28-3,82 (13H, multipletti); 4,20-4,85 (2H, multipletti); 25 5,16-5,28 (2H, multipletti); 7,53-7,67 (2H, multipletti); 8,24 (2H, dubletti, J = 8,31 Hz).

VALMISTUSESIMERKKI 50 260 101226 (2S,4S)-4-(4-Merkapto)-2-[4(4-nitrobentsyylioksikarbonyylimetyyli)-l-homopipe-ratsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin bis(tri-5 fluorimetaanisulfonaatti) 50(1) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylime-tyyM)-l-homopiperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrroli-diini 10 3,5 g Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 8,0 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyy litio)-1 -(4-mtrobentsyy lioksikarbonyyli)-2-pyrrolidiniharboksyy lihap-poa 80 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Liuos, joka sisälsi 14,0 g l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-15 limetyyli)homopiperatsiinin bis(trifluoriasetaatti)a 80 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja 14,1 ml di-isopropyylietyyliamiinia lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä seokseen ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia ja sitten lämpötilassa 30 °C vielä 1,5 tuntia, jonka jälkeen sen annettiin seistä yön yli huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa 20 ja tuloksena saatu jäännös laimennettiin etyyliasetaatilla. Laimennettu liuos pestiin vedellä ja natriumkloridin vesiliuoksella tässä järjestyksessä ja sitten se kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silika-geelin (Merck Art 9385) läpi käyttämällä etyyliasetaattia eluenttina, jolloin saatiin 25 7,6 g otsikkoyhdistettä amorfisena kiinteänä aineena.

• · -1 Inffapuna-absorptiospektri (nestekalvo), vmax cm'1: 1748, 1709, 1650, 1608, 1520, 1429, 1404, 1346.

30 Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 1,71-2,03 (3H, multipletti); 2,42-3,17 (6H, multipletti); 101226 261 3,32-4,08 (8H, multipletti); 3,73 (2H, multipletti); 3,80 & 3,82 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 4,49-4,63 (1H, multipletti); 5 5,02-5,35 (4H, multipletti); 6,85 (2H, dubletti, J = 8,30 Hz); 7,23 (2H, dubletti, J = 8,30 Hz); 7,43-7,52 (4H, multipletti); 8,15-8,25 (4H, multipletti).

w 10 50(ii) (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylimetyyli)-l-homopiperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyIi)pyrrolidinin bis(trifluorimetaanisulfonaatti) 15 15 ml trifluorietikkahappoa ja 0,36 ml trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 1,47 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylimetyyli)-l-homopiperatsinyylikarbonyyli]-1-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] 2,2 ml:ssa anisolia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 20 yhden tunnin ajan. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja w tuloksena saatu jäännös pestiin toistuvasti dietyylieetterillä ja kuivattiin in vacuo.

jolloin saatiin 1,8 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 25 1757, 1700, 1608, 1523, 1441, 1408, 1348.

: Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi), δ ppm: 1,61-1,80 (1H, multipletti); 30 2,00-2,28 (2H, multipletti); 2,65-2,86 (1H, multipletti); .· 3,08-4,24 (13H, multipletti); 101226 262 4,31-4,48 (2H, multipletti); 5,02-5,37 (2H, multipletti); 5,42 (2H, singletti); 7,52 & 7,62 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, 8,79 Hz); 5 8,23 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,27 (2H, dubletti, J = 8,30 ).

VALMISTUSESIMERKKI 51 10 (2S,4S)-4-Merkapto-2-(4-metyyli-l-piperatsinyyIikarbonyyli)-l-metyylipyrrolidi-nin difluorimetaanisulfonaatti 51(i) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-)4-metyyli-l-piperatsinyylikarbonyy-li)-l-metyylipyrrolidiini 15 700 mg Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia lisättiin suspensioon, joka sisälsi 1,0 g (2S,4S)- 2-karboksi-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-metyylipyrrolidiniä 15 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin lämpötilassa 40 °C 30 minuuttia. Tämän jälkeen reaktioseos jäähdytettiin jäällä ja 440 μί N-metyylipiperatsiinia 20 lisättiin seokseen. Sitten lämpötilan annettiin nousta huoneen lämpötilaan 30 minuutin ajan. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin käänteisfaasikolonnikromatografialla käyttämällä LiChroprep RP-8 (tavaramerkki) paikallaanpysyvänä faasina ja 70 % t/t vesipitoista metanolia eluenttina, jolloin saatiin 1060 mg otsikkoyhdistettä öljyn muodossa.

25

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 1,77-1,85 (1H, multipletti); 2,30 (3H, singletti); 2,32 (3H, multipletti); 30 2,35-2,56 (5H, multipletti); 3,05-3,17 (3H, multipletti); 3,70 (2H, singletti); 101226 263 3.80 (3H, singletti); 3,53-3,95 (5H, multipletti); 6,84 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 7,21 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz).

5

Infrapuna-absorptiospektri (nestekalvo), vmax cm"1: 1635, 1611, 1511, 1445, 1292, 1248, 1033, 833.

51(ii) (2S,4S)-4-Merkapto-2-(4-metyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli)-l-inetyyli-w 10 pyrrolidinin bis(trifluorimetaanisulfonaatti) 10 ml trifluorietikkahappoa, jota seurasi 510 litraa trifluorimetaanisulfonihappoa, lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 1050 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-metyylipyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) 15 edellä] 3 ml:ssa anisolia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös trituroitiin dietyylieetterillä aikaansaamaan kiinteytymistä. Kiinteä aine pestiin dietyylieetterillä viisi kertaa ja kuivattiin, jolloin saatiin 1350 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

20

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz; heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi), δ ppm: 1,74-1,86 (1H, multipletti); 2.81 (3H, singletti); 25 2,84 (3H, singletti); 2,94-3,20 (4H, multipletti); 3,28-3,87 (12H, multipletti).

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm"1: 30 1665, 1480, 1272, 1240, 1226, 1163, 1030, 640.

VALMISTUSESIMERKKI 52 264 101226 (2S,4S)-2-[4-(2-HydroksietyyIi)-l-piperatsinyylikarbonyyli)-4-merkapto-l-inetyyli-pyrrolidinin bis(trifluorimetaanisulfonaatti) 5 52(i) (2S,4S)-2-[4-(2-HydroksietyyIi)-l-piperatsmyylikarbonyyli]-4-(4-metoksi-bentsyylitio)-l-metyylipyrrolidiini 800 mg N.N’-karbonyylidi-imidatsolia lisättiin suspensioon, joka sisälsi 1,13 g 10 (2S,4S)-2-karboksi-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-metyylipyrrolidiniä 20 mlrssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin lämpötilassa 40 °C 30 minuuttia. Tämän jälkeen reaktioseos jäähdytettiin jäällä ja 600 mg N-hydroksietyylipiperatsiinia lisättiin seokseen. Lämpötilan annettiin nousta huoneen lämpötilaan 30 minuutin ajan.

Sitten reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös 15 puhdistettiin käänteisfaasikolonnikromatografialla käyttämällä LiChroprep RP-8 (tavaramerkki) paikallaanpysyvänä faasina ja 70 % t/t vesipitoista metanolia eluentti-na, jolloin saatiin 1160 mg otsikkoyhdistettä värittömänä öljynä.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCfj, 270 MHz), 6 ppm: 20 1,76-1,87 (1H, multipletti); 2,32 (3H, singletti); 2,43-2,58 (9H, multipletti); 3,06-3,18 (3H, multipletti); 3,64 (2H, tripletti, J = 5,4 Hz); 25 3,70 (2H, singletti); 3,80 (3H, singletti); 3,52-4,08 (4H, multipletti); 6,84 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 7,21 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz).

Infrapuna-absorptiospektri (nestekalvo), vmax cm'1: 1637, 1611, 1511, 1461, 1444, 1247, 1034, 834.

30 101226 265 52(ii) (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(2-hydroksietyyli)-l-piperatsinyyIikarbonyyIi]-l-metyylipytToIidinin bis(trifluorimetaanisulfonaatti) 10 ml trifluorietikkahappoa ja 520 μΐ trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin samalla 5 jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 1150 mg (2S,4S)-2-[4-(2-hydroksietyyli)-l-piperalsinyylikarbonyyli)-4-(4-metoksibentsyylitio)-l -metyylipyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] 3 ml.ssa anisolia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 1680 mg otsikkoyh-_ 10 distettä öljyn muodossa.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, käyttämällä natriumtetradeuteroitua trimetyylisilyylipropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,99-2,09 (1H, multipletti); 15 2,98 (3H, singletti); 3,11-3,40 (8H, multipletti); 3,60-3,85 (3H, multipletti); 3,90-3,99 (6H, multipletti).

20 VALMISTUSESIMERKKI53 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(2-karbamoyyIioksietyy li)-l -piperatsinyy likarbonyy li] -1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyIi)pyrrolidinin trifluorimetaanisulfonaatti 25 53(i) (2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-l-piperatsinyyIikarbonyyli]-4-(4-metoksi- bentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrroIidiini 10,9 g Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 25,0 g (2S,4S)- 4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-2-(pyrrolidinin karbok-30 syylihappoa 200 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 10,9 g l-(2-hydroksietyy-li)piperatsiinia 50 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä lisättiin reaktioseokseen ja tuloksena 101226 266 saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 45 minuttia. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, jonka jälkeen se laimennettiin 800 ml:lla etyyliasetaattia. Laimennettu liuos pestiin vuorostaan vedellä (200 ml, kolme kertaa) ja natriumkloridin vesiliuoksella (150 ml, kerran). Tuloksena saatu 5 etyyliasetaattiliuos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa 100 ml:n tilavuu teen ja kiteet, jotka saostuivat, kerättiin suodattamalla, jolloin saatiin 28,6 g otsikko-yhdistettä värittöminä kiteinä, joiden sulamispiste oli 140-141 °C.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm"1: 10 1710, 1653, 1670, 1512, 1439, 1404, 1344.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1,48-1,85 (2H, multipletti); 2,32-2,64 (6H, multipletti); 15 2,59 (2H, tripletti, J = 5,37 Hz); 3,03-3,16 (1H, multipletti); 3,30-3,71 (5H, multipletti); 3,65 (2H, tripletti, J = 5,37 Hz); 3,73 (2H, singletti); 20 3,79 & 3,80 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 3,82-4,07 (1H, multipletti); 4,56 & 4,61 (yhdessä 1H, kaksi triplettiä, J = 8,30 Hz); 5,02-5,31 (2H, multipletti); 6,85 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 25 7,23 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,43 & 7,47 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 8,18 & 8,23 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

101226 267 53(ii) (2S,4S)-2- [4-(2-Karbamoyy lioksietyy li)-1 -piperatsinyy Iikarbonyy li] -4-(4- metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 1,43 ml triklooriasetyyli-isosyanaattia lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, 5 joka sisälsi 5,59 mg (2S,4S)-2-[4-(2-hydroksietyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-4-(4-metoksibentsyy litio)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] 50 mlrssa kuivaa metyleenikloridia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös liuotettiin w 10 120 ml:aan metanolia. Tätä liuosta sekoitettiin sitten huoneen lämpötilassa 4,5 tuntia 35 g silikageelin (Merck, silikageeli 60, 230-400 seulamitta) länsäollessa. Silikageeli poistettiin suodattamalla ja suodos vapautettiin liuottimesta. Jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 8:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 5,76 g otsikkoyhdistettä värittömä-15 nä pulverina.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm*1: 3353, 1711, 1652, 1608, 1513, 1344, 1242.

20 Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi), δ ppm: ' 1.38-1,57 (1H, multipletti); 2,14-2,70 (7H, multipletti); 2,98-4,08 (9H, multipletti); 25 3,72 & 3,74 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 3,77 (2H, singletti); l 4,66 & 4,77 (yhdessä 1H, kaksi triplettiä, J = 7,81 Hz); 5,02-5,25 (2H, multipletti); 6,45 (2H, leveä singletti); 30 6,88 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,26 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); ,·. 7,52 & 7,60 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 101226 268 8,20 & 8,24 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz), 53(iii) (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(2-karbamoyylioksietyyli)-l-piperatsinyylikar-bonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin trifluorimetaanisul-5 fonaatti 2,67 ml trifluorietikkahappoa ja 122 μ( trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 417 mg (2S,4S)-4-(3-metoksibentsyylitio)-2-[4-(2-karbamoyylioksietyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikar-10 bonyylijpyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (ii) edellä] 753 μΐ'-ssa _ anisolia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yhden tunnin ajan.

Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös pestiin toistuvasti dietyylieetterillä dekantoimalla. Sen jälkeen kun jäännös oli kuivattu in vacuo, saatiin 325 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

15

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1707, 1608, 1524, 1438, 1347, 1280, 1169, 1030.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi 20 + D20), δ ppm: 1,60-1,84 (1H, multipletti); 2,65-2,90 (1H, multipletti); 2,85-4,60 (14H, multipletti); 4,63-5,30 (4H, multipletti); 25 7,52 & 7,64 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 8,23 & 8,24 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

VALMISTUSESIMERKKI 54 269 101226 (2S,4S)-2-[4-(2-HydroksietyyIi)-l-piperatsinyylikarbonyyIi]-4-merkapto-l-(4- nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 5 54(a)(i) trans-4-Metoksisulfonyylioksi-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyIi)-L-proliini 12,20 ml tretyyliamiinia ja 6,81 ml metaanisulfonyylikloridia lisättiin samalla w 10 jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 12,41 g trans-4-hvdroksi-1 -(4-nitrobent- syylioksikarbonyyli)-L-proliinia 100 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 40 minuuttia. Tämän jälkeen reak-tioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös sekoitettiin 350 ml:aan etyyliasetaattia ja 50 ml:aan IN vesipitoista kloorivetyhappoa. Sitten 15 seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2,5 tuntia, jonka jälkeen orgaaninen kerros erotettiin ja pestiin kolme kertaa natriumkloridin vesiliuoksella; sitten se kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 12,57 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

20 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1834, 1753, 1713, 1524, 1346, 1173.

# ·

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 2,31-2,88 (2H, multipletti); 25 3,08 (3H, singletti); 3,76-4,07 (2H, multipletti); 4,58 (1H, tripletti, J = 7,81 Hz); 5,05-5,41 (3H, multipletti); 7,46 & 7,52 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 30 7,50 (1H, leveä singletti); 8,19 & 8,22 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

» 101226 270 54(a)(ii) (2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-4-metaani-sulfonyylioksi-l-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyli)pyrroIidiini 1,11 g l-(2-hydroksietyyli)piperatsiinia, 1,29 ml dietyylisyanofosfonaattia ja 5 1,18 ml trietyyliamiinia lisättiin tässä jäijestyksessä samalla jäähdyttäen jäällä liuok seen, joka sisälsi 3,00 g trans-4-metaanisulfonwlioksi-1 -(4-nitrobentsvvlioksikar-bonyyli)-L-proliinia [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa 54(a)(i) edellä] 35 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa 10 paineessa ja jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 5:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 2,60 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm*1: 15 1712,1652,1523,1345,1171.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 2,23-2,80 (9H, multipletti); 3,06 & 3,07 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 20 3,44-4,06 (8H, multipletti); 4,81-4,95 (1H, multipletti); 5,04-5,41 (3H, multipletti); 7,46 & 7,51 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 8,21 & 8,22 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

25 54(a)(ii’) (2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-4-me-taanisulfonyylioksi-1 -(4-nitrobentsyy lioksikarbonyy li)pyrrolidiini 584 mg Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 1.16 g trans-4-30 metaanisulfonyylioksi-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-L-proliinia 10 ml :ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin lämpötilassa 40 °C yhden tunnin ajan. 586 mg l-(2-hydroksietyyli)piperatsiinia lisättiin sitten seokseen samalla 101226 271 jäähdyttäen jäällä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 15 minuuttia. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin samanlaisella tavalla kuin on kuvattu vaiheessa 54(a)(ii), jolloin saatiin 930 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa. Tuotteen infrapuna-absorptiospektri ja 5 ydinmagneettinen resonanssispektri olivat identtiset edellä kuvatussa vaiheessa 54(a)(ii) saadun yhdisteen kanssa.

54(a)(ii") (2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-4-me-taanisulfonyylioksi-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini w 10 0,21 ml trietyyliamiinia, jota seurasi 0,19 ml pivaloyylikloridia, lisättiin pisara kerrallaan lämpötilassa -20 °C liuokseen, joka sisälsi 0,5 g trans-4-metaanisulfonvv-lioksi-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-L-proliinia 5 ml:ssa kuivaa tetrahydrofu-raania ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 5 minuuttia. Liuos, 15 joka sisälsi l-(2-hydroksietyyli)piperatsiinia 3 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania lisättiin sitten ja reaktioseosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 30 minuuttia, jonka jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Tuloksena saatu jäännös työstettiin ja puhdistettiin samanlaisella tavalla kuin on kuvattu vaiheessa 54(a)(ii), jolloin saatiin 0,42 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa. Tuotteen infrapuna-20 absorptiospektri ja ydinmagneettinen resonanssispektri olivat identtiset edellä kuvatussa vaiheessa 54(a)(ii) saadun tuotteen kanssa.

54(a)(iii) (2S,4S)-4-Asetyylitio-2-[4-(2-hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikar-bonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 25 685 mg kaliumtioasetaattia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 2,0 g (2S,4S)-2-[4-(2-• · hydroksietyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-4-metaanisulfonyylioksi-1 -(4-nitrobent- syylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheissa 54(a)(ii), 54(a)(ii’) ja 54(a)(ii") edellä] 20 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta 30 sekoitettiin lämpötilassa 80 °C 5 tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa, j äännös laimennettiin 200 ml :11a etyyliasetaattia ja laimennettu liuos pestiin natriumkloridin vesiliuoksella; sitten se kuivattiin vedettö- 1Ό1226 272 män magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välisiä tilavuusseoksia, joka vaihteli välillä 9:1 - 4:1 eluentti-na, jolloin saatiin 1,35 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

5

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 3437, 1710, 1652, 1522, 1345, 1113.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 10 1,82-1,98 (1H, multipletti); 2,34 (3H, singletti); 2,31-2,88 (8H, multipletti); 3,40-4,21 (9H, multipletti); 4,65-4,78 (1H, multipletti); 15 5,03-5,36 (2H, multipletti); 7,45 & 7,51 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 8,17-8,24 (2H, multipletti).

54(a)(iv) (2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-4-merkap-20 to-l-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyli)pyrrolidiini

Natriummetoksidiliuos (valmistettu lisäämällä 56 mg metallista natriumia 2,4 ml:aan metanolia) lisättiin liuokseen, joka sisälsi 1,06 g (2S,4S)-4-asetyylitio-2-[4-(2-hydroksietyyli)-l-piperatsinyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [val-25 mistettu kuten on kuvattu vaiheessa 54(a)(iii) edellä] 10 ml:ssa metanolia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin lämpötilassa 15 °C 30 minuuttia. Sitten lisättiin 610 μί " natriumkloridin IN liuosta etyyliasetaatissa seokseen samassa lämpötilassa, jonka jälkeen seosta sekoitettiin 10 minuuttia. Sitten reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi 30 käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 4:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 710 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm*1: 3430, 2944, 1700, 1647, 1521, 1439, 1350.

273 101226

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 5 1,81-1,98 (2H, multipletti); 2,28-2,84 (8H, multipletti); 3,20-3,82 (8H, multipletti); 4,04-4,20 (1H, multipletti); 4,60-4,77 (1H, multipletti); 10 5,01-5,38 (2H, multipletti); 7,45 & 7,51 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 8,15-8,25 (2H, multipletti).

54(a)(iv’) (2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-4-mer-15 kapto-1 -(4-nitrobentsyy lioksikarbonyyli)py rrolidiini 40 ml 10 % t/t kloorivedyn metanoliliuosta lisättiin liuokseen, joka sisälsi 1,0 g (2S,4S)-4-asetyylitio-2-[4-(2-hydroksietyyli)-1 -piperatsinyyli]-1 -(4-nitrobentsyyliok-sikarbonyyli)pyrrolidiniä 10 ml:ssa 1,4-dioksaania ja tuloksena saatua seosta sekoi-20 tettiin lämpötilassa 50 °C yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös sekoitettiin 40 ml:lla tetrahydrofuraania ja 2 ml:lla natriumhiilivedyn kyllästettyä vesiliuosta; sitten se kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi samanlaisella tavalla kuin on 25 kuvattu vaiheessa 54(a)(iv) edellä, jolloin saatiin 712 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa. Tuotteen infrapuna-absorptiospektri ja ydinmagneettinen resonanssispektri ·· olivat identtiset edellä kuvatussa vaiheessa 54(a)(iv) saadun tuotteen kanssa.

274 101226 54(b)(i) (2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyliJ-4-merkap-to-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrroIidinin bis(trifluorimetaanisuIfonaat- ti) 5 2,8 ml trifluorietikkahappoa ja 91 μ l trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 288 mg (2S,4S)-2-[4-(2-hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-li)pyrrolidiniä 580 μί-.ssa. anisolia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alenne-10 tussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös pestiin dietyylieetterillä dekantoimalla ja kuivattiin in vacuo, jolloin saatiin 380 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm"1: 1795, 1705, 1666, 1609, 1525, 1442, 1408, 1348, 1281, 1226, 1169.

15

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20), δ ppm: 1,54-1,63 (1H, multipletti); 2,61-2,72 (1H, multipletti); 2,90-4,46 (14H, multipletti); 20 4,64-4,96 (2H, multipletti); 5.08 (2H, singletti); 7,42 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8.08 & 8,10 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz).

25 54(b)(ii) (2S,4S)-2-[4-(2-Hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-4-merkap- to-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini

Liuos, joka sisälsi 266 mg (2S,4S)-2-[4-(2-hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikarbonyy-li]-4-merkapto-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin bis(trifluorimetaa-30 nisulfonaatti)a [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa 54(b)(i) edellä] seoksessa, joka sisälsi 5 ml tetrahydrofuraania ja 0,2 ml vettä, neutralisoitiin lisäämällä 76 mg natriumvetykarbonaattia, jonka jälkeen se kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin « 101226 275 avulla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 4:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 188 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa. Tuotteen infrapuna-absorptispektri ja ydin-5 magneettinen resonanssispektri olivat identtiset edellä kuvatusta vaiheesta 54(a)(iV) saadun tuotteen kanssa.

VALMISTUSESIMERKKI 55 w 10 (2S,4S)-4-Merkapto-2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-l-piperatsinyyIikarbonyy- li)-l-metyylipyrrolidinin trifluorimetaanisulfonaatti 55(i) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli)-l-metyylipyrroIidiini 15 16,6 g N,N ’ -karbonyylidi-imidatsolia lisättiin suspensioon, joka sisälsi 24 g (2S,4S)- 2-karboksi-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-metyylipyrrolidiniä 200 ml:ssa kuivaa asetnit-riiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin lämpötilassa 35 °C 40 minuuttia. Liuos, joka sisälsi 14,7 g kuivaa piperatsiinia lisättiin sitten pisara kerrallaan seokseen 20 lämpötilassa 30-35 °C, jonka jälkeen seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 ^ minuuttia. Liuos, joka sisälsi 36,8 g 4-nitrobentsyylioksikarbonyylikloridia 100 ml:ssa asetnitriiliä lisättiin sitten samalla jäähdyttäen jäällä reaktioseokseen ja siten saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen seos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja jäännös sekoitettiin natriumklori-25 din vesiliuoksella ja 10 %:lla natriumkarbonaatin vesiliuoksella. Tuloksena saatu seos uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 9:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 30 27,7 g otsikkoyhdistettä.

Infrapuna-absorptiospektri (nestekalvo), vmax cm'1: 1706, 1648, 1513, 1435, 1347, 1248, 1232.

276 101226

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 5 1,74-1,89 (1H, multipletti); 2,32 (3H, multipletti); 2,40-2,62 (2H, multipletti); 2,99-3,21 (3H, multipletti); 3,31-4,20 (8H, multipletti); 10 3,70 (2H, singletti); 3,80 (3H, singletti); 5,24 (2H, singletti); 6,84 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,20 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 15 7,52 (2H, dubletti, J = 8,79 Fz); 8,23 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz).

55(ii) (2S,4S)-4-Merkapto-2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli-l-piperatsinyyli-karbonyyli)-l-metyylipyrrolidinin trifluorimetaanisulfonaatti 20 130 ml trifluorietikkahappoa ja 4,6 ml trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin pisara kerrallaan liuokseen, joka sisälsi 13,8 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli-l-piperatsinyylikarbonyyli)-l-metyylipyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] 28,3 ml:ssa anisolia ja tuloksena 25 saatua seosta sekoitettiin 30 minuuttia samalla jäähdyttäen jäällä. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu · jäännös pestiin heksaanilla ja eetterillä tässä järjestyksessä dekantoimalla, jolloin saatiin 13,9 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

30 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1695, 1643, 1518, 1446, 1345, 1251.

101226 τη

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi), δ ppm: 1,74-1,89 (1Η, multipletti); 2,81 & 2,82 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 5 2,92-3,08 (1H, multipletti); 3,17 (1H, singletti); 3,31-3,80 (12H, multipletti); 4,58-4,72 (1H, multipletti); 5,26 (2H, singletti); w 10 7,65 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,24 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz).

VALMISTUSESIMERKKI 56 15 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyylimetyyli)-l-piperatsinyyli-karbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidinin bis(trifluorime-taanisulfonaatti) 8,0 ml trifluorietikkahappoa ja 160 μί trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin samalla 20 jäähdyttäen jäällä suspensioon, joka sisälsi 1120 mg (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyyli-tio)-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylimetyyli)-l-piperatsinyylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä 1,75 ml:ssa anisolia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös pestiin toistuvasti 25 dietyylieetterillä dekantoimalla ja kuivattiin in vacuo, jolloin saatiin 1,58 g otsikkoyh-distettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1756, 1704, 1667, 1523, 1441, 1348.

30 101226 278

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi), δ ppm: 1,60-1,76 (1H, multipletti); 2,70-2,85 (1H, multipletti); 5 3,08-3,42 (9H, multipletti); 3,65-3,83 (3H, multipletti); 3,94 & 4,05 (yhdessä 1H, kaksi dublettien dublettia, J = 9,8 & 6,8 Hz); 4,72 & 4,81 (1H, kaksi triplettiä, J = 8,1 Hz); 5,05-5,26 (2H, multipletti); 10 5,42 & 5,43 (2H, kaksi singlettiä); _ 7,52, 7,64, 7,69 & 7,70 (yhdessä 4H, neljä dublettia, J = 8,8 Hz); 8,23, 8,24 & 8,28 (yhdessä 4H, kolme dublettia, J = 8,8 Hz).

VALMISTUSESIMERKKI 57 15 (2S,4S)-4-Merkapto-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperat- sinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyli)pyrrolidiini 57(i) (2R,4R)-4-Hydroksi-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-20 piperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini * 3,34 ml dietyylisyanofosfaattia ja 8,92 ml trietyyliamiinia lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä suspensioon, joka sisälsi 6,2 g cis-4-hvdroksi-1 -(4-nitrobentsvvlioksikar-bonyyli)-D-proliinia ja 8,41 g l-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksi)etyyli]pipe-25 ratsiinin dihydrokloridia 62 ml:ssa kuivaa dimetyyliformamidia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän jälkeen reaktioseos laimennettiin 250 ml:lla etyyliasetaattia ja laimennettu liuos pestiin vedellä ja kuivattiin sitten vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Seos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 30 silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 4:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 7,84 g otsikkoyhdistettä öljynä.

Infrapuna-absorptiospektri (nestekalvo), vmay cm'1: 1748, 1710, 1658, 1624, 1608, 1522, 1439, 1403, 1347, 1262.

279 101226

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 5 1,98-2,80 (9H, multipletti); 3,37-3,90 (6H, multipletti); 4,22-4,46 (3H, multipletti); 4,60-5,60 (5H, multipletti); 7,42-7,57 (4H, multipletti); w 10 8,17-8,26 (4H, multipletti).

57(ii) (2R,4S)-4-Asetyylitio-2-{4-[2-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyli)oksietyyli]-1 -piperatsinyy likarbonyyli}-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy li)py rrolidiini 15 Liuos, joka sisälsi 0,73 g dietyyliatsodikarboksylaattia 2 ml:ssa tetrahydrofuraania lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 2,1 g (2R,4R)-4-hydroksi-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperat-sinyylikarbonyyli} -1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] ja 1,1 g trifenyylifosfiinia 14 ml:ssa tetrahydrofu-20 raania ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 10 minuuttia. Liuos, joka sisälsi 0,32 g merkaptoetikkahappoa 2 ml:ssa tetrahydrofuraania lisättiin sitten pisara kerrallaan seokseen ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi 25 käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 20:1 tilavuusseosta eluenttia, jolloin saatiin l,2g(2R,4S)-4-asetyylitio-2-{4-[2-(4-ni trobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-1 -piperatsinyylikarbonyyli}-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniävärittömän pulverin muodossa.

30 Infrapuna-absorptiospektri (nestekalvo), vmax cm'1: 1748, 1709, 1654, 1607, 1522, 1439, 1404, 1347, 1263, 1122.

101226 280

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 2,15-2,80 (8H, multipletti); 2,34 (3H, singletti); 3,35-3,76 (5H, multipletti); 5 3,91-4,40 (4H, multipletti); 4,68-4,81 (1H, multipletti); 5,03-5,35 (4H, multipletti); 7,26-7,57 (4H, multipletti); 8,19-8,26 (4H, multipletti).

10 57(iii) (2R,4S)-4-Merkapto-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 40 ml 10 % t/t kloorivedyn metanoliliuosta lisättiin liuokseen, joka sisälsi 1,0 g 15 (2R,4S)-4-asetyy litio-2- {4-[2-Ä4-nitrobentsyylioksikarbonyy li)oksietyyli]-1 -piperat- sinyylikarbonyyli} -1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (ii) edellä] 10 ml:ssa 1,4-dioksaania ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin lämpötilassa 50 °C yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöi-tiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja konsentraatti laimennettiin 100 ml :11a 20 etyyliasetaattia. Laimennettu liuos neutralisoitiin natriumhiilivedyn kyllästetyllä vesiliuoksella ja pestiin vuorostaan 30 ml:lla vettä ja 30 ml:lla natriumkloridin " vesiliuosta. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 20:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 566 mg 25 otsikkoyhdistettä värittömän pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiosepktri (nestekalvo), vmax cm'1: 1748, 1709, 1653, 1607, 1521, 1439, 1404, 1346, 1263.

30 Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1,74 (1H, dubletti, J = 7,32 Hz); 2,07-2,86 (8H, multipletti); 281 101226 3,39-3,80 (6H, multipletti); 4,04-4,46 (3H, multipletti); 4,75-4,85 (1H, multipletti); 5,03-5,35 (4H, multipletti); 5 7,42-7,58 (4H, multipletti); 8,17-8,26 (4H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 58 w 10 (2R,4R)-l-Merkapto-2-{4-[2-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperat- sinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 58(i) (2R,4S)-4-F ormyylioksi-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyy- li]-l-piperatsinyylikarbonyyIi}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyIi)pyrrolidiini 15

Liuos, joka sisälsi 1,31 g dietyyliatsodikarboksylaattia 5 ml:ssa tetrahydrofuraania lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 3,0 g (2R,4R)-4-hydroksi-2- {4- [2-(4-nitrobentsyy lioksikarbonyy li)oksietyy li] -1 -piperat-sinyylikarbonyyli}-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten 20 on kuvattu valmistusesimerkissä 57(i)] ja 1,97 g trifenyylifosfiinia 25 ml.ssa tetrahydrofuraania ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 10 minuuttia.

283 μί muurahaishappoa lisättiin sitten pisara kerrallaan seokseen ja seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 5 minuuttia ja huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu 25 jäännös puhdistettiin kolonnikromatorgafialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 20:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 1,42 g otsikkoyhdistettä värittömän pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 30 1749, 1720, 1654, 1606, 1522, 1439, 1405, 1347, 1262.

282 101226

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 2,20-2,95 (8H, multipletti); 3,35-3,95 (6H, multipletti); 4,15-4,55 (2H, multipletti); 5 4,79 & 4,85 (yhdessä 1H, kaksi triplettiä, J = 7,81 Hz); 5,05-5,37 (4H, multipletti); 5.43- 5,50 (1H, multipletti); 7.44- 7,57 (4H, multipletti); 8,02 (1H, singletti); 10 8,19-8,26 (4H, multipletti).

58(ii) (2R,4S)-4-Hydroksi-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperatsinyyIikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyIi)pyrrolidiini 15 28 ml 10 % t/t kloorivedyn metanoliliuosta lisättiin pisara kerrallaan liuokseen, joka sisälsi 1,42 g (2R,4S)-4-formyylioksi-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)ok-sietyyli]-l-piperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] 14 ml:ssa 1,4-dioksaania ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän 20 jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös sekoitettiin veden kanssa. Siten saatu vesiseos tehtiin alkaaliseksi lisäämällä natrium-vetykarbonaatin kyllästettyä vesiliuosta ja sitten seos uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja jäännös puhdistettiin 25 kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 9:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 1,33 g otsikkoyhdistettä värittömän ·* pulverin muodossa.

Inffapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm*1: 30 1750, 1709, 1648, 1608, 1522, 1439, 1406, 1347, 1263.

101226 283

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, CDC£3 + D20), δ ppm: 2,04-2,80 (8H, multipletti); 3,38-3,82 (6H, multipletti); 4,24-4,38 (2H, multipletti); 5 4,50-4,64 (1H, multipletti); 4,70-4,90 (1H, multipletti); 5.30- 5,34 (4H, multipletti); 7,43-7,57 (4H, multipletti); 8,17-8,25 (4H, multipletti).

_ 10 58(iii) (2R,4R)-4-Asetyylitio-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioks!karbonyyli)oksietyyli]-l-piperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini

Liuos, joka sisälsi 421 g dietyyliatsodikarboksylaattia 1,2 ml:ssa tetrahydrofuraania 15 lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 1,21 g (2R,4S)-4-hydroksi-2- {4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyl)oksietyyli]-1 -piperatsinyy-likarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniäja634mgtrifenyylifosfii-nia 8 ml.ssa tetrahydrofuraania ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 10 minuuttia. 17 μι merkaptoetikkahappoa lisättiin sitten pisara kerral-20 laan seokseen ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 57(H) reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin, jolloin saatiin 1,04 g otsikkoyhdistettä värittömän pulverin muodossa.

25 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1750, 1712, 1656, 1607, 1522, 1496, 1438, 1404, 1347, 1263, 1207.

»

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 1,82-1,93 (1H, multipletti); 30 2,34 (3H, singletti); 2.30- 2,82 (7H, multipletti); « 3,36-3,72 (5H, multipletti); 101226 284 3,90-4,16 (2H, multipletti); 4,24-4,31 (1H, multipletti); 4,67 & 4,74 (yhdessä 1H, kaksi triplettiä, J = 7,81 Hz); 5.03- 5,35 (4H, multipletti); 5 7,43-7,57 (4H, multipletti); 8,17-8,25 (4H, multipletti).

58(iv) (2R,4R)-l-Merkapto-2-{4-[2-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyli)oksietyyIi]-1 -piperatsinyy likarbonyy li} -1 -(4-nitrobentsyy lioksikarbonyy li)py rrolidiini 10 40 ml 10 % t/t kloorivedyn metanoliliuosta lisättiin liuokseen, joka sisälsi 1,0 g (2R,4R)-4-asetyylitio-2-}4-[2(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperat-sinyylikarbonyyli} -1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (iii) edellä] 10 ml:ssa 1,4-dioksaania ja tuloksena saatua seosta 15 sekoitettiin lämpötilassa 50-52 °C yhden tunnin ajan. Suorittamalla sama menetelmä kuin on kuvattu valmistusesimerkissä 57(iii) reaktioseos työstettiin ja puhdistettiin, jolloin saatiin 648 mg otsikkoyhdistettä värittömän pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm*1: 20 1749, 1710, 1653, 1607, 1522, 1496, 1439, 1404, 1346, 1263, 1206.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 1,82-1,96 (2H, multipletti); 2,30-2,91 (7H, multipletti); 25 3,18-3,78 (6H, multipletti); 4,05-4,46 (3H, multipletti); 4,63 & 4,68 (yhdessä 1H, kaksi triplettiä, J = 7,81 Hz); 5.03- 5,33 (4H, multipletti); 7,43-7,57 (4H, multipletti); 30 8,17-8,26 (4H, multipletti).

VALMISTUSESBMERKIT 59-88 285 101226

Valmistusesimerkeissä 59 ja 88 esitetyt merkaptaanit valmistettiin samanlaisella tavalla kuin on kuvattu valmistusesimerkeissä 1,49 ja 66, mutta käyttämällä (2S,4S)-5 4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-2-pyrrolidinin karbok- syylihappoa, (2S,4S)-2-karboksi-4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -metyylipyrrolidiniä ja (25.45) -l-(t-butoksikarbonyyli)~4-(4-metoksibentsyylitio)-2-pyrrolidinilaarbonksyyli-happoa lähtöaineina.

w 10 VALMISTUSESIMERKKI59 (25.45) -4-Merkapto-2-[(2S)-4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetiniidoyyli)-2-metyyIipiperatsin-l-yylikarbonyyIi-l-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyyli)pym)lidiini 15 Infrapuna-absorptiospektri (nestekalvo), vmax cm'1: 1709, 1656, 1606, 1569, 1520, 1430, 1346, 1252.

Ydinmagnettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1.12- 1,38 (3H, multipletti); 20 1,75-2,10 (2H, multipletti); 2.12- 2,38 (3H, multipletti); 2,55-3,93 (8H, multipletti); 4,01-4,89 (4H, multipletti); 5,04-5,30 (4H, multipletti); 25 7,42-7,59 (4H, multipletti); 8,17-8,23 (4H, multipletti).

* VALMISTUSESIMERKKI 60 286 101226 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(2S)-4-(N-4-nitrobentsyyIioksikarbonyyIifonniinidoyyIi)-2-metyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidi-5 nin trifluorimetaanisulfonaatti

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi + D20), δ ppm: 1,10-1,40 (3H, multipletti); 10 1,62-1,78 (1H, multipletti); 2,60-3,40 (8H, multipletti); 3,91-4,08 (2H, multipletti); 4,58-4,81 (1H, multipletti); 5,06-5,27 (2H, multipletti); 15 5,36 (2H, singletti); 7,53-7,70 (4H, multipletti); 8,19-8,28 (4H, multipletti); 8,89 (1H, singletti).

20 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1785, 1695, 1609, 1523, 1442, 1349, 1283, 1246, 1031.

< VALMISTUSESIMERKKI 61 25 (2S,4S)-4-Merkapto-l-metyyli-2-[(3S)-3-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyIiasetimi-doyyliamino)pyrrolidin-l-yylikarbonyyli]pyrrolidiini

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1522, 1348, 858, 740.

30 101226 287

Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, D20, käyttämällä natriumtetra-deuteroitus trimetyylisilyylpropionaattia sisäisenä standardina), δ ppm: 1,70-2,00 (3H, multipletti); 2,00-2,25 (3H, multipletti); 5 2,30-3,95 (13H, multipletti); 3,95-4,07 (1H, multipletti); 4,30-4,50 (1H, multipletti); 7,62 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,23 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz).

w 10 VALMISTUSESIMERKKI 62 (25.45) -4-Merkapto-2-[3-(N-4-nitrobeiitsyylioksikarbonyyliasetimidoyyliamino)pi-peridin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 15

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm11: 1705, 1650, 1600, 1550, 1520, 1440, 1340, 1205.

VALMISTUSESIMERKKI 63 20 (25.45) -4-Merkapto-l-metyyIi-2-[4-(N-4-nitrobentsyyIioksikarbonyyliasetimidoyy-liamino)piperidin-l-yylikarbonyyli]pyrrolidiini

Infrapima-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 25 1710, 1520, 1345, 1210.

· VALMISTUSESIMERKKI 64 288 101226 (25.45) -4-Merkapto-l-metyyli>2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliforniiniido-yyli)piperatsin-l-yylikarbonyyli]pyrrolidinin bis(trifluorimetaanisulfonaatti) 5

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi + D20, 270 MHz), δ ppm: 1,79-1,91 (1H, multipletti); 2,83 (3H, singletti); 10 2,96-3,07 (1H, multipletti); 3,10-3,28 (4H, multipletti); 3,47-3,85 (7H, multipletti); 4,61 (1H, tripletti, J = 9,4 Hz); 5,36 (2H, singletti); 15 7,68 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 8,26 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 8,89 (1H, singletti).

VALMISTUSESIMERKKI 65 20 (25.45) -4-Merkapto-2-[(2S)-4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)-2-metyylipiperatsinl-yylikarbonyylij-l-metyylipyrrolidiini VALMISTUSESIMERKKI 66 25 (25.45) -4-Merkapto-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)piperatsin-l-yylikar-bonyyli]-l-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)pyrrolidiini (25.45) -l-(t-Butoksikarbonyyli)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-[4-(4-nitrobentsyyliok-30 sikarbonyyli)piperatsin-l-yylikarbonyyli]pyrrolidiniä valmistettiin (2S,4S)-l-(t- butoksikarbonyyli)-4-(4-metoksibentsyylitio)pyrrolidin-2-karboksyylihaposta, N,N’- « • karbonyylidi-imidatsolista ja 4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)piperatsiinista. Tätä 101226 289 yhdistettä käsiteltiin sitten kloorivedyn IN liuoksella etyyliasetaatissa ja sitten tuote altistettiin samanlaisille reaktioille kuin ne, jotka on kuvattu valmistusesimerkeissä 1 ja 17(iii), jolloin saatiin otsikkoyhdistettä, jonka sulamispiste oli 181,5 °C.

5 Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1,93 (1H, dubletti, J = 9,2 Hz); 1,90-2,02 (1H, multipletti); 2,33 (3H, singletti); 2,61-2,72 (1H, multipletti); w 10 3,08-3,88 (9H, multipletti); 4,03 (2H, kaksi dublettia, J = 10,6 & 7,3 Hz); 4,89 (1H, tripletti, J = 7,3 Hz); 5,06-5,31 (4H, multipletti); 7,43-7,52 (4H, multipletti); 15 8,12-8,26 (4H, multipletti).

VALMISTUSESIMERKKI 67 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)piperatsin-l-yylikar-20 bonyyli]-l-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyyli)pyrrolidinin tri-fluorimetaanisulfonaatti

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1783, 1693, 1660, 1608, 1523, 1465, 1441, 1349, 1256, 1228.

25

Ydinmagneettinen resonanssispektri (heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi + D20, 270 MHz), δ ppm: 1,67-1,79 (1H, multipletti); 2,82-2,92 (1H, multipletti); 30 3,02-3,10 (1H, multipletti); 3,40-3,80 (10H, multipletti); * 4,62 (1H, tripletti, J = 8,30 Hz); 101226 290 5.26 (2H, singletti); 5,36 (2H, singletti); 7,65 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,68 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 5 8,25 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8.26 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,89 (1H, singletti).

VALMISTUSESIMERKKI 68 10 (25.45) -4-Merkapto-l-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetiinidoyyli)-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)piperatsin-l-yyIikarbonyyli]pyrrolidimi

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 15 1782, 1705, 1635, 1522, 1440, 1348, 1280, 1250, 1225.

VALMISTUSESIMERKKI 69 (25.45) -4-Merkapto-l-(N-4-nitrobentsyyIioksikarbonyyliasetimidoyyli)-2-[4-(N-4-20 nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyyli)piperatsin-l-yylikarbonyyli)pyrrolidii- ni VALMISTUSESIMERKKI 70 25 (2S,4S)-4-Merkapto-l-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyylt)-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformiinidoyyli)piperatsin-l-yylikarbonyyli]pyrrolidii-ni VALMISTUSESIMERKKI 71 30 (25.45) -4-Merkapto-l-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyIiformimidoyyli)-2-[4-(N-4-nitrobentsyyIioksikarbonyyIiasetimidoyyli)piperatsin-l-yylikarbonyyli)pyrrolidiini VALMISTUSESIMERKKI 72 291 101226 (25.45) -4-Merkapto-l-(N-4-nitrobeiitsyylioksikarbonyyliasetiinidoyyli)-2-[(3S)-3-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyliamino)pyrrolidin-l-yylikarbonyy- 5 li]pyrrolidiini

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm*1: 1710, 1645, 1522, 1445, 1347.

W 10 VALMISTUSESIMERKKI 73 (25.45) -4-Merkapto-l-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)-2-{(3S)-3-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyylifonnimidoyyliainmo)pyrrolidin-l-yylikarbonyy-lijpyrrolidiini 15 VALMISTUSESIMERKKI 74 (25.45) -4-Merkapto-l-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)-2-[(3S)-3-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliamino)pyrrolidin-l-yylikarbonyyli]pyrrolidiini 20

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 1708, 1646, 1525, 1442, 1348.

VALMISTUSESIMERKKI 75 25 (25.45) -4-Merkapto-l-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyyli)-2-[(3S)-3-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyliamino)pyrroIidin-l-yylikarbonyy-li]pyrrolidiini 30 VALMISTUSESIMERKKI 76 292 101226 (25.45) -4-Merkapto-l-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyIiforininiidoyyli)-2-[(3S)-3-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyyliamino)pyrrolidin-l-yylikarbonyy- 5 li]pyrrolidiini VALMISTUSESIMERKKI 77 (25.45) -4-Merkapto-l-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyyli)-2-[(3S)-3- 10 (N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliamino)pyrrolidin-l-yylikarbonyyli]pyrrolidiini ^ VALMISTUSESIMERKKI 78 (25.45) -4-Merkapto-l-(N-4-nitrobentsyyIioksikarbonyyliasetimidoyyli)-2-[4-(4- 15 nitrobentsyy lioksikarbonyy Ii)homopiperatsin-l-yy likarbonyy li] py rrolidiini VALMISTUSESIMERKKI 79 (25.45) -4-Merkapto-l-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyli)-2-(N-4- 20 nitrobentsyy lioksikarbonyylifonnimidoyy Ii)homopiperatsin-1 -yy likarbonyy li] py r- rolidiini — VALMISTUSESIMERKKI 80 25 (2S,4S)-4-Merkapto-l -(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyyli)-2-[4-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)homopiperatsin-l-yyIikarbonyyli]pyrroIidiini VALMISTUSESIMERKKI 81 30 (2S,4S)-4-Merkapto-l -(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformimidoyyli)-2-|4-(N-4- nitrobentsyylioksikarbonyyliforaiimidoyyli)homopiperatsin-l-yylikarbonyyli]pyr-rolidiini VALMISTUSESIMERKKI 82 293 101226 (25.45) -4-Merkapto-2-{(3S)-3-[N-metyyli-N-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyy-liasetimidoyyli)amino]pyrrolidin-l-yylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikar- 5 bonyyIi)pyrrolidiini VALMISTUSESIMERKKI 83 (25.45) -4-Merkapto-2-[2-(4-nitrobentsyyIioksikarbonyylioksimetyyli)-4-(4-nitro-10 bentsyylioksikarbonyyIi)piperatsin-l-yylikarbonyyIi]-l-(4-nitrobentsyylioksikar- bonyyli)pyrrolidiini VALMISTUSESIMERKKI 84 15 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyIi)-2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylioksimetyyli)piperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitro-bentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini VALMISTUSESIMERKKI 85 20 (25.45) -4-Merkapto-2-[4-(4-nitrobeiitsyylioksikarbonyyli)-6-(4-nitrobentsyylioksi- * karbonyyIioksi)homopiperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitrobentsyylioksikar- bonyyli)pyrrolidiini 25 VALMISTUSESIMERKKI 86 (25.45) -4-Merkapto-2-[4-(N-4-nitrobentsyyIioksikarbonyyliformimidoyyli)-6-(4-nitrobentsyylioksikarbonyylioksi)homopiperatsin-l-yylikarbonyyli]-l-(4-nitro-bentsyylioksikarbonyyli)pyrroIidiini 30 VALMISTUSESIMERKKI 87 294 101226 (25.45) -4-Merkapto-l-(N-4-iiitrobentsyylioksikarbonyyIiasetiiiiidoyyli)-2-I4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliasetimidoyyliamino)piperidin-l-yyIikarbonyyli]pyr- 5 rolidiini VALMISTUSESIMERKKI 88 (25.45) -4-Merkapto-l-metyyli-2-[4-(N-4-nitrobentsyylioksikarbonyyliformiinido-10 yyli)homopiperatsin-l-yylikarbonyyli]pyrrolidiini VALMISTUSESIMERKKI 89 (25.45) -4-{Metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-2-pyrrolidinin 15 karboksyyiihappo 89(i) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-2-pyrrolidinin karboksyyiihappo

Liuos, joka sisälsi 4,0 g (2S,4S)-2-karbamoyyli-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-pyrroli-20 dinin kloorivetyä liuotettuna 40 inkaan 2N vesipitoista kloorivetyhappoa, sekoitettiin öljyhauteessa , joka pidettiin lämpötilassa 95-100 °C 1,5 tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan ja sen pH säädettiin arvoon 4-6 lisäämällä noin 40 ml natriumhydroksidin 2N vesiliuosta samalla sekoittaen. Kiteet, jotka saostuivat, kerättiin suodattamalla, pestiin vedellä ja kuivattiin ilmalla, jolloin 25 saatiin 3,25 g otsikkoyhdistettä, jonka sulamispiste oli 198-200 °C.

:* . Ydinmagneettinen resonanssispektri (270 MHz, heksadeuteroitu dimetyylisulfoksidi), δ ppm: 1,69 (1H, triplettien dubletti, J = 13,2 & 8,3 Hz); 30 2,44 (1H, triplettien dubletti, J = 13,2 & 6,8 Hz); 2,90 (1H, dublettien dubletti, J = 11,2 & 7,8 Hz); ; 3,15-3,60 (4H, multipletti); 101226 295 3,66 (1H, tripletti, J = 8,3 Hz); 3.73 /3H, singletti); 3.74 (2H, singletti); 6,88 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 5 7,25 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz).

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm"1: 1610, 1576, 1511, 1445, 1376, 1243.

10 89(ii) (2S,4S)-4-(4-Metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-2- pyrrolidinin karboksyylihappo

Suspensio, joka sisälsi 1,87 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa (i) edellä] 80 ml.ssa 15 tetrahydrofuraanin ja veden välistä 1:1 tilavuusseosta, muutettiin homogeeniseksi liuokseksi lisäämällä 7 ml natriumkloridin IN vesiliuosta. Liuos jäähdytettiin jäällä ja sekoitettiin ja vähitellen lisättiin samanaikaisesti pisara kerrallaan liuos, joka sisälsi 1510 mg 4-nitrobentsyylioksikarbonyylikloridia 10 ml:ssa tetrahydrofuraania ja 7 ml:ssa natriumhydroksidin IN vesiliuosta. Tuloksena saatua seosta sekoitettiin 20 samassa lämpötilassa 10 minuttia. Tämän jälkeen reaktioseos vapautettiin tetrahydro-furaanista tislaamalla alennetussa paineessa ja sen pH säädettiin arvoon 2-3 lisäämällä IN vesipitoista kloorivetyhappoa. Kiteet, jotka saostuivat, kerättiin suodattamalla, pestiin hyvin vedellä kuivattiin ilmalla. Kiteet pestiin vielä pienellä määrällä dietyyli-eetteriä ja kuivattiin, jolloin saatiin 2,42 g otsikkoyhdistettä, jonka sulamispiste oli 25 96-98 °C.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 3000, 1746, 1673, 1511, 1341, 1178.

30 Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 2,03-2,18 (1H, multipletti); 2,52-2,68 (1H, multipletti); 101226 296 3,08-3,22 (1H, multipletti); 3,27-3,42 (1H, multipletti); 3,72 (2H, singletti); 3,77-3,98 (1H, multipletti); 5 4,38 (1H, tripletti, J = 7,3 Hz); 5.03- 5,35 (2H, multipletti); 6,85 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 7,22 (2H, dubletti, J = 8,8 Hz); 7,42 & 7,48 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,3 Hz); 10 8,16 & 8,22 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,3 Hz); _ 5.4- 6,6 (1H, leveä dubletti).

VALMISTUSESIMERKKI 90 15 (2S,4S)-4-Merkapto-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperat-sinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 90(a)(i) (2S,4S)-2-{4-[2-(4-Nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperat-sinyylikarbonyyli}-4-(4-metoksibentsyylitio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-20 li)pyrrolidiini

Liuos, joka sisälsi 5,86 g 4-dimetyyliaminopyridiiniä ja 10,35 g g-nitrobentsyyli-kloroformaattia 40 ml:ssa kuivaa metyleenikloridia lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 22,35 g (2S,4S)-2-[4-(2-hydroksietyyli)-l-piperatsinyylikar-25 bonyyli]-4-(4-metoksibentsyylitio)-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniäl 60 ml:ssa kuivaa metyleenikloridia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Sitten reaktioseos laimennettiin 300 ml:lla etyyliasetaattia ja laimennettu liuos pestiin vuorostaan vedellä (100 ml kerran), natriumve-tykarbonaatin vesiliuoksella (100 ml kerran) ja natriumkloridin vesiliuoksella (100 ml 30 kerran). Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyy- 101226 297 liasetaattia eluenttina, jolloin saatiin 26,35 g otsikkoyhdistettä värittömän pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 5 1748, 1710, 1655, 1608, 1521, 1346, 1251.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 1,72-1,84 (1H, multipletti); 2,26-2,73 (6H, multipletti); w 10 2,97-3,16 (1H, multipletti); 3,29-4,10 (7H, multipletti); 3,72 (2H, singletti); 3,79 & 3,80 (yhdessä 3H, kaksi singlettiä); 4,24-4,31 (2H, multipletti); 15 4,53-4,63 (1H, multipletti); 5,00-5,35 (4H, multipletti); 6,85 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,23 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,41-7,57 (4H, multipletti); 20 8,16-8,25 (4H, multipletti).

90(a)(ii) (2S,4S)-4-Merkapto-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)ok- sietyyll]-l-piperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidi-nin bis(trifluorimetaanisulfonaatti) 25 135,7 mg trifluorietikkahappoa ja 6,18 ml trifluorimetaanisulfonihappoa lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 26,00 g (2S,4S)-2- {4-[2-(4-nitrobent-syylioksikarbonyyli)oksietyyli]-1 -piperatsinyylikarbonyy li} -4-(4-metoksibentsyy litio)-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrn)lidiniä 38,3 ml:ssa anisolia ja tuloksena saatua 30 seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 1,5 tuntia. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös pestiin toistuvasti 298 101226 dietyylieetterillä dekantoimalla ja kuivattiin in vacuo, jolloin saatiin 32,5 g otsikkoyh-distettä pulverin muodossa.

90(a)(iii) (2S,4S)-4-Merkapto-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyy-5 li]-l-piperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 20 ml 5 % t/t natriumvetykarbonaatin vesiliuosta lisättiin 862 mg:aan (2S,4S)-4-merkapto-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperatsinyylikar-bonyyli} -1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidininbis(trifluorimetaanisulfonaat-10 ti)a ja seos uutettiin 50 ml:lla etyyliasetaattia. Uute pestiin vedellä ja kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin välistä 20:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 514 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

15

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 3530, 1748, 1710, 1653, 1521, 1347.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 20 1,83 (1H, multipletti); 2,44-2,79 (7H, multipletti); 3,22-3,64 (6H, multipletti); 4,06-4,17 (1H, multipletti); 4,26-4,36 (2H, multipletti); 25 4,60-4,71 (1H, multipletti); 5,02-5,33 (4H, multipletti); 7,42-7,58 (4H, multipletti); 8,17-8,26 (4H, multipletti).

30 299 101226 90(b)(1) (2S,4R)-4-Hydroksi-2-}4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-l-piperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 25,7 ml dietyylisyanofosfaattia ja 68,7 ml trietyyliamiinia lisättiin pisara kerrallaan 5 samalla jäähdyttäen jäällä suspensioon, joka sisälsi 47,8 g trans-4-hvdroksi-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-L-proliinia ja 64,8 g l[2-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)etyyli]piperatsiinin dihydrokloridia 400 ml:ssa kuivaa dimetyyliformamidia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 30 minuuttia. Tämän jälkeen reaktioseos laimennettiin 1,5 litralla etyyliasetaattia ja laimennettu liuos 10 pestiin vedellä ja kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 87,6 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm'1: 15 1749, 1709, 1650, 1522, 1499, 1347, 1263.

Ydinmagneettinen resonanssispekrei (CDCf3, 270 MHz), δ ppm: 1,63 (1H, singletti); 1,92-2,38 (8H, multipletti); 20 3,41-3,83 (6H, multipletti); 4,24-4,32 (2H, multipletti); 4,55-4,60 (1H, multipletti); 4,79-4,90 (1H, multipletti); 5,03-5,35 (4H, multipletti); 25 7,44-7,57 (4H, multipletti); 8,17-8,25 (4H, multipletti).

♦ 90(b)(i’) (2S,4R)-4-Hydroksi-2-}4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyy-li]-l-piperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 608 μ( klooritrimetyylisilaania ja 670 μΐ trietyyliamiinia lisättiin samalla jäähdyt täen jäällä liuokseen, joka sisälsi 620 mg trans-4-hvdroksi-1 -('4-nitrobentsvvlioksi- 30 101226 300 karbonyyli)-L-proliinia 20 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös sekoitettiin natriumklori-din vesiliuoksen kanssa. Sitten seos uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumklo-5 ridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 648 mg trans-1 -(4-nit-robentsyylioksikarbonyyli)-4-trimetyylisilyylioksi-L-proliinia pulverin muodossa.

Kaikki tämä liuotettiin 14 ml:aan kuivaa asetnitriiliä ja sitten lisättiin 330 mg N.N’-karbonyylidi-imidatsolia. Siten saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden 10 tunnin ajan. Tämän jälkeen liuos, joka sisälsi 630 mg l-[2-(4-nitrobentsyylioksikar-bonyyli)oksietyyli]piperatsiinia 2 ml:ssa kuivaa asetnitriiliä, lisättiin reaktioseokseen ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa ja sitten lämpötilassa 40 °C vielä yhden tunnin ajan. Sitten reaktioseos sekoitettiin 14 ml:aan IN vesipitoista kloorivetyhappoa ja sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan.

15 Tämän jälkeen seos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja konsentraatti tehtiin lievästi alkaaliseksi lisäämällä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta; sitten se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin vedellä ja kuvattiin vedettömän magnesium-sulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä 20 etyyliasetaatin ja metanolin välistä 9:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 589 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa. Siten saadun yhdisteen infrapuna-absorptiospekt- — ri ja ydinmagneettinen resonanssispektri olivat identtiset edellä vaiheessa 90(b)(i) saadun yhdisteen kanssa.

25 90(b)(i") (2S,4R)-4-Hydroksi-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)ok- sietyy li] -1 -piperatsinyylikarbonyy li} -1 -(4-nitrobentsyy lioksikarbonyy li)py rrolidii- • * · ' m 343 mg Ν,Ν’-karbonyylidi-imidatsolia lisättiin liuokseen, joka sisälsi 674 mg trans-30 1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)-4-trimetyylisilyylioksi-L-prolimia 14 ml :ssa kuivaa asetnitriiliä ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Liuos, joka sisälsi 275 mg l-(2-hydroksietyyli)piperatsiinia 1 mhssa kuivaa 101226 301 asetnitriiliä lisättiin sitten seokseen ja seosta sekoitettiin yön yli huoneen lämpötilassa. Tämän jälkeen seos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja konsentraatti sekoitettiin natriumkloridin vesiliuoksen kanssa. Sitten seos uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin vedellä ja kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Sitten liuotin 5 poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 574 mg (2S,4R)-2-[4-(2-hydroksietyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-4-trimetyylisilyylioksi-1 -(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyli)pyrrolidiniä öljyn muodossa. Koko siten saatu yhdiste liuotettiin 5,7 ml:aan metyleenikloridia ja 170 mg 4-dimetyyliaminopyridiiniä ja 300 mg 4-nitro-bentsyylikloroformaattia lisättiin liuokseen samalla jäähdyttäen jäällä. Tuloksena w 10 saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan ja sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. 15 ml IN vesipitoista kloorivetyhappoa lisättiin jäännökseen ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Sitten reaktioseos tehtiin lievästi alkaaliseksi lisäämällä natriumvetykarbonaatin vesiliuosta, jonka jälkeen se uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin vedellä ja kuivat-15 tiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa. Suorittamalla menetelmä, joka on kuvattu vaiheessa 90(b)(i’) edellä, jäännös puhdistettiin, jolloin saatiin 348 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa. Siten saadun yhdisteen inffapuna-absorptiospektri ja ydinmagneettinen re-sonanssispektri olivat identtiset edellä vaiheessa 90(b)(i) saadun yhdisteen kanssa.

20 - 90(b)(ii) (2S,4S)-4-Asetyylitio-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyy- » «

Ii]-l-piperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini

Liuos, joka sisälsi 36,5 g dietyyliatsodikarboksylaattia 100 ml:ssa tetrahydrofuraania 25 lisättiin pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 105 g (2S,4R)-4-hydroksi-2- {4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-1 -piperatsinyy-1 likarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheissa 90(b)(i), 90(b)(i’) ja 90(b)(i") edellä] ja 55 g trifenyylifosfiinia 700 ml:ssa tetrahydrofuraania ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa 30 10 minuuttia. Liuos, joka sisälsi 15,9 g merkaptoetikkahappoa 100 ml.ssa tetrahydro furaania lisättiin sitten pisara kerrallaan seokseen ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla 302 101226 alennetussa paineessa ja konsentraatti liuotettiin 1,5 litralla etyyliasetaattia. Tuloksena saatu liuos pestiin sitten vedellä natriumkloridin vesiliuoksella tässä järjestyksessä, jonka jälkeen se kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja sitten jäännös sekoitettiin 400 ml.lla di-isopropyy-5 lieetteriä. Di-isopropyylieetteriin liukenevat aineet uutettiin ja poistettiin. Samat uuttotoimenpiteet toistettiin neljä kertaa ja sitten tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla 3 kg:n silikageelin läpi käyttämällä gradienttieluointi-menetelmään etyyliasetaatin ja metanolin 1:0 - 20:1 tilavuusseoksilla eluenttina, jolloin saatiin 88,4 g otsikkoyhdistettä värittömän pulverin muodossa.

10

Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm*1: 1749, 1711, 1655, 1522, 1347, 1262, 1110.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 15 1,82-1,93 (1H, multipletti); 2,34 (3H, singletti); 2,35-2,82 (7H, multipletti); 3,37-3,70 (5H, multipletti); 3,91-4,05 (1H, multipletti); 20 4,07-4,17 (1H, multipletti); 4,23 & 4,36 (yhdessä 2H, multipletti); 4,64-4,77 (1H, multipletti); 5,02-5,35 (4H, multipletti); 7,43-7,57 (4H, multipletti); 25 8,18-8,26 (4H, multipletti).

' 90(c)(i) (2S,4R)-4-Metaanisulfonyylioksi-2- {4-[2-(4-nitrobentsyylioksikar- bonyy li)oksietyy li] -1 -piperatsinyy likarbonyy li} -1 -(4-nitrobentsyy lioksikarbonyy-li)pyrrolidiini 89 μί trietyyliamiinia ja 50 μί metaanisulfonyylikloridia lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 321 mg (2S,4R)-4-hydroksi-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksi- 30 101226 303 karbonyy li)oksietyyli]-1 -piperatsinyylikarbonyyli} -1 -(4-nitrobentsyy lioksikarbonyy-li)pyrrolidiniä 3,2 mlrssa kuivaa tetrahydrofuraania ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin lämpötilassa 0-5 °C 30 minuuttia ja sitten huoneen lämpötilassa vielä yhden tunnin ajan. Tämän jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa pai-5 neessa ja tuloksena saatua jäännös sekoitettiin natriumvetykarbonaatin vesiliuokseen; sitten seos uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 345 g otsikkoyhdistettä pulverin muodossa.

.__. 10 Infrapuna-absorptiospektri (KBr), vmax cm*1: 1751, 1710, 1654, 1607, 1523, 1436, 1406.

Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3, 270 MHz), δ ppm: 2,22-3,01 (8H, multipletti); 15 3,06 (3H, singletti); 3,40-4,03 (2H, multipletti); 4,25-4,47 (2H, multipletti); 4,84 & 4,89 (yhdessä 1H, kaksi triplettiä, J = 7,33 Hz); 5,04-5,37 (5H, multipletti); 20 7,46 & 7,50 (yhdessä 2H, kaksi dublettia, J = 8,79 Hz); 7,56 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 8,19-8,26 (4H, multipletti).

90(c)(ii) (2S,4S)-4-Asetyylitio-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyy-25 li]-l-piperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini : 51 μ( trietikkahappoa lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä suspensioon, joka sisälsi 26 mg natriumhydridiä (55 % t/t disperisiona mineraaliöljyssä) 1,4 ml:ssa kuivaa N,N’-dimetyyliformamidia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 30 30 minuuttia. Liuos, joka sisälsi 340 mg (2S,4R)-4-metaanisulfonyylioksi-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-1-piperatsinyylikarbonyyli}-1-(4-nitrobentsyy-lioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa 90(c)(i) edellä] 304 101226 2 ml:ssa kuivaa Ν,Ν’-dirnetyyliformamidia lisättiin sitten seokseen ja seosta sekoitettiin lämpötilassa 80-90 °C neljä tuntia. Tämän jälkeen reaktioseoksen lämpötilan annettiin laskea huoneen lämpötilaan, jonka jälkeen seos kaadettiin natriumkloridin vesiliuokseen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uute pestiin vedellä ja kuivattiin vedettö-5 män magnesiumsulfaatin avulla. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös työstettiin ja puhdistettiin edellä kuvatun 90(b)(i) menetelmän mukaisesti, jolloin saatiin 166 mg otsikkoyhdistettä pulverin muodossa. Siten saadun yhdisteen infrapuna-absorptiospektri ja ydinmagneettinen resonanssi spektri olivat identtiset edellä vaiheessa 90(b)(ii) valmistetun yhdisteen kanssa.

10 90(c)(ii*) (2S,4S)-4-Asetyylitio-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyIi)oksietyy-li]-l-piperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini

Liuos, joka sisälsi 1,10 g p-nitrobentsyylikloroformaattia 10 ml:ssa metyleeniklori-15 dia lisättiin samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi (2S,4S)-4-asetyylitio-2-[4-(2-hydroksietyyli)-1 -piperatsinyylikarbonyyli]-1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyy-lijpyrrolidiniä ja 0,62 g 4-dimetyyliaminopyridiiniä 15 ml:ssa metyleenikloridia ja tuloksena saatua seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa kaksi tuntia. Tämän jälkeen reaktioseos laimennettiin 100 ml :11a etyyliasetaattia ja laimennettu liuos pestiin 20 vuorostaan 100 ml:lla natriumvetykarbonaatin vesiliuosta, 100 ml.lla vettä ja 100 ml:lla natriumkloridin vesiliuosta. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi käyttämällä gradienttieluointimenetelmää sekä käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin 30:1 - 25:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 1,86 g otsikkoyhdistettä pulverin 25 muodossa. Siten saadun yhdisteen infrapuna-absorptiospektri ja ydinmagneettinen resonanssispektri olivat identtiset edellä vaiheessa 90(b)(ii) saadun yhdisteen kanssa.

« 90(c)(iii) (2S,4S)-4-Merkapto-2-{4-[2-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)oksietyy-li]-l-piperatsinyylikarbonyyli}-l-(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiini 30 600 ml 10 % t/t kloorivedyn metanoliliuosta lisättiin liuokseen, joka sisälsi 101226 305 140 g (2S,4S)-4-asetyylitio-2-{4-[2-(4-nitroebntsyylioksikarbonyyli)oksietyyli]-1 -piperatsinyylikarbonyyli} -1 -(4-nitrobentsyylioksikarbonyyli)pyrrolidiniä [valmistettu kuten on kuvattu vaiheessa 90(b)(ii) tai 90(c)(ii) edellä] 150 ml:ssa 1,4-dioksaania ja tuloksena saatua seosta skoitettiin lämpötilassa 50 °C yhden tunnin ajan. Tämän 5 jälkeen reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alennetussa paineessa ja konsentraatti laimennettiin 1500 ml:lla etyyliasetaattia. Laimennettu liuos neutralisoitiin natriumve-tykarbonaatin vesiliuoksella ja pestiin vuorostaan 300 ml:lla vettä ja 300 ml:lla natriumkloridin vesiliuosta. Liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa ja tuloksena saatu jäännös puhdistettiin kolonnikromatografialla silikageelin läpi w 10 käyttämällä gradienttieluointimenetelmää käyttämällä etyyliasetaatin ja metanolin 30:1 - 20:1 tilavuusseosta eluenttina, jolloin saatiin 96,44 g otsikkoyhdistettä värittömän pulverin muodossa.

Siten saadun yhdisteen infrapuna-absorptiospektri ja ydinmagneettinen resonan-15 sispektri olivat identtiset edellä vaiheessa 90(a)(iii) saadun yhdisteen kanssa.

VALMISTUSESIMERKKI 91 (2S,4S)-l-(t-Butoksikarbonyyli)-4-(4-metoksibentsyylitio)-2-pyrrolidininkarbok-20 syylihappo

Liuos, joka sisälsi 0,95 g di-t-butyylidikarbonaattia 4 mlrssa tetrahydrofuraania ja 4,4 ml:ssa natriumhydroksidin IN vesiliuosta lisättiin samanaikaisesti pisara kerrallaan samalla jäähdyttäen jäällä liuokseen, joka sisälsi 0,97 g (2S,4S)-4-(4-metoksibentsyy-25 litio)-2-pyrrolidinin karboksyylihappoa 18 ml:ssa tetrahydrofuraania ja 3,6 ml:ssa natriumhydroksidin IN vesiliuosta. Seosta sekoitettiin sitten huoneen lämpötilassa • yhden tunnin ajan, jonka jälkeen tetrahydrofuraani poistettiin haihduttamalla alenne tussa paineessa ja jäännös tehtiin happamaksi pH-arvoon 2-3 lisäämällä IN vesipitoista kloorivetyhapooa. Etyyliasetaattiliuos pestiin vedellä ja natriumkloridin vesiliuok-30 sella, jonka jälkeen se kuivattiin vedettömän magnesiumsulfaatin avulla. Sitten liuotin poistettiin tislaamalla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 1,33 g otsikkoyhdistettä.

101226 306

Infrapuna-absorptiospektri (nestekalvo), vmax cm'1: 1808, 1732, 1626, 1586, 1552, 1509, 1482, 1436, 1367, 1325, 1315, 1299, 1286, 1246, 1221.

5 Ydinmagneettinen resonanssispektri (CDC£3 + D20, 270 MHz), δ ppm: 1,45 (9H, singletti); 1,88-2,61 (3H, singletti); 3,03-3,34 (2H, multipletti); 3,64-3,95 (1H, multipletti); 10 3,72 (2H, singletti); _ 3,80 (3H, singletti); 4,15-4,35 (1H, singletti); 6,85 (2H, dubletti, J = 8,79 Hz); 7,23 (2H, dubletti, J = 8,79).

15 Λ ·

Claims (24)

101226 307

1. Menetelmä lääkeaineena käyttökelpoisen kaavan (I) mukaisen 2-[2-(karbonyyli)pyr-rolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyy likarbapen-2-eemi-3 -karboksyylihappo-5 johdannaisen valmistamiseksi: C COA / K H3C' - ^R> J-N-L ς? ^COOH (!) 15 jossa: R1 on: 20 vetyatomi, tai substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, ja 25 A on kaavan (AI), (A2), (A3), (A4), (A5) tai (A7) mukainen ryhmä: 101226 308 H VO/'1 O .. --td-' -<T . (AI) (A2) R“ ^(CH^)/ H H -N--N-R12 X)( —' (A3) H (A4) NH Rl* • | -O· cck^r (A5) * (A7) 309 101226 jossa: on: 5 vetyatomi, substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, substituoitu alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia ja joka on substituoitu ainakin 10 yhdellä substituentilla, joka on valittu seuraavasta ryhmästä: hydroksiryhmät, karboksiryhmät, 15 halogeeniatomit, ja kaavan -CO.NRaR^ mukaiset ryhmät, 20 jossa Ra ja R^ ovat samoja tai erilaisia ja kumpikin on vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-4 hiiliatomia; tai kaavan -C(=NH)R^ mukainen ryhmä, jossa R^ on vetyatomi tai substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia; 25 "j R on vetyatomi, • · substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, 30 substituoitu alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia ja joka on substituoitu hydroksi-ryhmällä, hydroksiryhmä, karboksiryhmä tai karbamoyyliryhmä; 310 101226 R4 on vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia; R8 on: 5 vetyatomi, tai substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1 -6 hiiliatomia, R9 on: 10 vetyatomi, substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia tai 15 kaavan -C(=NH)R10 mukainen ryhmä, jossa R10 on vetyatomi tai substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia; R11 on vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia; 20 R12 on: Z on imidatsolyyli-, triatsolyyli- tai tetratsolyyliryhmä; 30 101226 311 d on O tai 1; 1 on 2; 5 g, 1 ja m ovat samanlaisia tai erilaisia ja kukin on 1 tai 2; ja n on 2 tai 3; 2 on 2; 10 SILLÄ EDELLYTYKSELLÄ, ETTÄ kun A on kaavan (AI) mukainen ryhmä: R2, R3 ja R4 eivät kaikki ole vetyatomeja, kun R1 on vetyatomi; ja 15 R1, R3 ja R4 eivät kaikki ole vetyatomeja, kun R2 on alkyyliryhmä; ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että menetelmä käsittää seuraavat vaiheet: 20 annetaan kaavan (II) mukaisen yhdisteen: OH CHj 25 /\ chj ]-p (H) /—N-\

30. COOR24 101226 312 [jossa R24 on karboksia-suojaava ryhmä ja R28 on alkaanisulfonyylioksiryhmä, aryylisulfonyylioksiryhmä, dialkyylifosforyylioksiryhmä, diaryylifosforyylioksiryh-mä tai kaavan -S(—>0)R27 mukainen ryhmä, jossa R27 on alkyyliryhmä, haloalkyy-liryhmä, asetamidoalkyyliryhmä, asetamidoalkenyyliryhmä, aryyliryhmä tai aromaatti-5 nen heterosyklinen ryhmä] reagoida kaavan (III) mukaisen yhdisteen kanssa: “V

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että R1 on vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 25 1-3 hiiliatomia.

3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että A on kaavan (AI) mukainen ryhmä.

4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdis teen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että R2 on: 101226 313 vetyatomi; alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia; 5 substituoitu alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, jossa substituentti on valittu seuraavista: hydroksiryhmät, karboksiryhmät, karbamoyyliryhmät; tai kaavan -C(=NH)R^ mukainen ryhmä, w 10 jossa on vetyatomi tai substituoimaton alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia,

5. Jonkin patenttivaatimuksen 1-4 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että A on kaavan (AI) mukainen ryhmä, R on vetyatomi, alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, hydroksiryhmä, karboksi- 15 ryhmä, karbamoyyliryhmä tai substituoitu alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia ja joka on substituoitu hydroksiryhmällä, ja R^ on vetyatomi; tai alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen 20 valmistamiseksi, tunnettu siitä, että A on kaavan (AI) mukainen ryhmä; n on 2; 25 •. R^ on vetyatomi tai metyyliryhmä; 2 R on vetyatomi, 2-hydroksietyyliryhmä, 2-karbamoyylietyyliryhmä, karboksime-tyyliryhmä, karbamoyylimetyyliryhmä, 2-fluorietyyliryhmä, formimidoyyliryhmä 30 tai asetimidoyyliryhmä; 314 101226 R3 on vetyatomi, metyyliryhmä, karbamoyyliryhmä, karboksiryhmä tai hydroksime-tyyliryhmä; ja R4 on vetyatomi tai metyyliryhmä. 5

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että A on kaavan (AI) mukainen ryhmä; 10 n on 3; Rl on vetyatomi tai metyyliryhmä;

8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen 25 valmistamiseksi, tunnettu siitä, että «« ; A on kaavan (AI) mukainen ryhmä; n on 2; < 30 R1 on vetyatomi tai metyyliryhmä; 101226 315 R2 on vetyatomi, 2-hydroksietyyliryhmä, karboksimetyyliryhmä, formimidoyyliryhmä tai asetimidoyyliryhmä; R3 on vetyatomi; ja 5 R4 on metyyliryhmä.

9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että 10 A on kaavan (AI) mukainen ryhmä; n on 3;

10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen 25 valmistamiseksi, tunnettu siitä, että 4 « « A on kaavan (A2) mukainen ryhmä.

10. J-COA' m R» 15 (jossa R on mikä vain ryhmistä tai atomeista, joita edustaa R tai mikä vain ryhmä tai atomi, jossa mikä vain aktiivinen ryhmä on suojattu ja A’ on mikä vain ryhmistä tai atomeista, joita edustaa A tai mikä vain sellainen ryhmä tai atomi, jossa mikä vain aktiivinen ryhmä on suojattu) ja 20 tarvittaessa poistamalla mikä vain suojaava ryhmä.

11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen 30 valmistamiseksi, tunnettu siitä, että A on kaavan (A2) mukainen ryhmä ja R8 on vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia. 316 101226

12. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että A on kaavan (A2) mukainen ryhmä ja R9 on vetyatomi, alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia tai kaavan -C(=NH)R10 mukainen ryhmä, jossa R10 on vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia. 5

13. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että A on kaavan (A2) mukainen ryhmä; 10 d on 0 tai 1; m on 1 tai 2;

14. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että 25. on kaavan (A2) mukainen ryhmä; d on O; m on 1 tai 2: R1 on vetyatomi tai metyyliryhmä; 30 101226 317 R8 on vetyatomi tai alkyyliiyhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia; ja R9 on vetyatomi, alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, formimidoyyliryhmä tai asetimidoyyliryhmä. 5

15. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että A on kaavan (A3) mukainen ryhmä ja R11 on vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, kuten metyyli-, etyyli- tai propyyliryhmä. w 10

15 R1 on vetyatomi tai metyyliryhmä; o R on vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia ja R9 on vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia, formimidoyyliryhmä tai 20 asetimidoyyliryhmä.

15 R1 on vetyatomi tai metyyliryhmä; R2 on formimidoyyliryhmä, asetimidoyyliryhmä, karboksimetyyliryhmä, 2-hydroksietyyliryhmä tai 2-fluorietyyliryhmä; ja

15 R2 on vetyatomi, metyyliryhmä, formimidoyyliryhmä, asetimidoyyliryhmä, karboksi-metyy liryhmä, karbamoyy limetyy liryhmä, 2-hydroksietyyliryhmätai 2-fluorietyyliryh- mä; R3 on vetyatomi, metyyliryhmä, hydroksiryhmä, karboksiryhmä, karbamoyyliryhmä 20 tai hydroksimetyyliryhmä; ja R4 on vetyatomi tai metyyliryhmä.

16. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että A on kaavan (A3) mukainen ryhmä ja R12 on vetyatomi tai kaavan -C(=NH)R13 mukainen ryhmä, jossa R13 on 15 vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia.

17. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen 20 valmistamiseksi, tunnettu siitä, että A on kaavan (A3) mukainen ryhmä; 1 on 1 tai 2; 25 R1 on vetyatomi tai metyyliryhmä; R11 on vetyatomi tai alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia; ja 30 R12 on vetyatomi, formimidoyyliryhmä tai asetimidoyyliryhmä. 101226 318

18. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että A on kaavan (A4) mukainen ryhmä; 5 i on 2; ja R1 on vetyatomi tai metyyliryhmä.

19. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen 17 valmistamiseksi, tunnettu siitä, että A on kaavan (A5) mukainen ryhmä ja R ja R18 kumpikin on alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia.

20. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen 15 valmistamiseksi, tunnettu siitä, että A on kaavan (A5) mukainen ryhmä, p on 1 17 1R 2; ja R on vetyatomi tai metyyliryhmä, ja R ja R ovat samanlaisia tai erilaisia ja kumpikin on alkyyliryhmä, jossa on 1-3 hiiliatomia.

20 R3 on vetyatomi tai hydroksiryhmä; ja R4 on vetyatomi.

21. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen 20 valmistamiseksi, tunnettu siitä, että A on kaavan (A7) mukainen ryhmä ja Z on 1-imidatsolyyliryhmä, 1,2,4-triatsol-l-yyliryhmä tai 1,2,3-triatsol-l-yyliryhmä.

22. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että 25 A on kaavan (A7) mukainen ryhmä; £ on 1 tai 2;

30 R1 on vetyatomi tai metyyliryhmä; ja Z on 1-imidatsolyyliryhmä, 1,2,4-triatsol-l-yyliryhmä tai 1,2,3-triatsol-l-yyliryhmä. 319 101226

23. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että hiiliatomilla renkaan 1-asemassa on R-konfiguraatio, hiiliatomeilla renkaan 5- ja 6-asemissa on S-konfiguraatio ja hydrok-sietyylisubstituentin α-hiilellä renkaan 6-asemassa on R-konfiguraation. 5

24. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan seuraavat kaavan (I) mukaiset yhdisteet: 2-[2-( 1 -homopiperatsinyylikarbonyyli)-l-metyylipyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydrok-w 10 sietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2- [2-(4-karboksimetyylihomopiperatsin-1 -yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 15 2- {2-[4-(2-hydroksietyyli)homopiperatsin-1 -yy likarbonyy li]pyrrolidin-4-yy litio} -6-( 1 - hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2-[2-(4-asetimidoyylihomopiperatsin-1-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-(l-hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 20 2-[2-(4-formimidoyylihomopiperatsin-1 -yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2-[2-(4-formimidoyylihomopiperatsin-1 -yylikarbonyyli)-1 -metyy lipyrrolidin-4-yy litio] -25 6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; ': 2-[l -metyyli-2-(piperatsin-1 -yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)- 1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 30 2- {2- [4-(2-hydroksietyyli)piperatsin-1 -yylikarbonyyli]pyrrolidin-4-yy litio} -6-( 1 - hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 320 101226 2-[2-(3-metyylipiperatsin-1 -yylikarbonyyli)pyrrolidm-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3 -karboksyy lihappo; 2-[2-(4-formimidoyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-(l-hydrok-5 sietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2-[2-(4-asetimidoyylipiperatsin-1-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1-hydroksietyyli)- 1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 10 2-[2-(4-formimidoyylipiperatsin-l -yylikarbonyyli)-1 -metyylipyrrolidin-4-yy litio]-6-( 1 - _ hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3 -karboksyy lihappo; 2-[2-(4-asetimidoyylipiperatsin-1 -yylikarbonyyli)-1 -metyylipyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 15 2-[2-(4-formimidoyyli-3-metyylipiperatsin-1 -yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2-[2-(4-asetimidoyyli-3-metyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-(l-20 hydroksietyyli )-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2-[2-(2-metyylipiperatsin-1 -yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 25 2-[2-(4-formimidoyyli-2-metyylipiperatsin-l-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-(l -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2-[2-(4-asetimidoyyli-2-metyylipiperatsin-1 -yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2-[2-(3-hydroksimetyylipiperatsin-1 -yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydrok sietyyli)- 1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 30 321 101226 2-[ 1 -formimidoyyli-2-(4-formimidoyylipiperatsin-1 -yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2 - eemi- 3 -karboksyylihappo; 2-[2-(3-asetimidoyyliaminopyrrolidin-1 -yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -5 hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2-t2-(3-formimidoyyliaminopyrrolidin-1 -yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; ^ 10 2-[2-(3-aminopyrrolidin-1 -yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio] -6-( 1 -hydroksietyyli)-1 - metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2-[2-(4-asetimidoyyliaminopiperidin-l-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-(l-hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 15 2-[2-(3-aminopyrrolidin-1 -yylikaibonyyli)-1 -metyylipyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)- 1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2-[2-(3-asetimidoyyliaminopyrrolidin-l-yylikarbonyyli)-l-metyylipyrrolidin-4-yyhtio]-20 6-(1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2-[2-(3-formimidoyyliaminopyrrolidin-l-yylikarbonyyli)-l-metyylipyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 25 2-[2-(4-asetimidoyyliaminopiperidin-1 -yylikarbonyyli)-1 -metyylipyrrolidin-4-yylitio] -•. 6-(1 -hydroksietyyli)-1 -metyyli-l-karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2-[2-( 1 -formimidoyylipyrrolidin-3-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4-yylitio]-6-( 1 -hydroksietyyli)- 1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 2-[2-(3-dimetyyliamino-l,2,5,6-tetrahydropyratsin-l-yylikarbonyyli)pyrrolidin-4- yylitio]-6-(l -hydroksietyyli)-1 -metyyli-1 -karbapen-2-eemi-3-karboksyylihappo; 30 101226 322 ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ja esterit. 101226 323