ES3040474T3 - Device for optical read-out "a la carte" of a removable solid support for detecting and/or quantifying analytes in a sample - Google Patents

Device for optical read-out "a la carte" of a removable solid support for detecting and/or quantifying analytes in a sample

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ES3040474T3
ES3040474T3 ES18782435T ES18782435T ES3040474T3 ES 3040474 T3 ES3040474 T3 ES 3040474T3 ES 18782435 T ES18782435 T ES 18782435T ES 18782435 T ES18782435 T ES 18782435T ES 3040474 T3 ES3040474 T3 ES 3040474T3
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Thomas Glouden
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Abstract

Un medio de diagnóstico inmunocromatográfico (1) para la detección y/o cuantificación de una pluralidad de analitos presentes en una muestra esencialmente líquida (E) que comprende: - al menos una mezcla de reacción (2) que contiene moléculas de reconocimiento biológico y/o ligandos competitivos marcados con al menos una molécula de visualización detectable por fluorescencia, estando dicha mezcla de reacción presente en un recipiente separado de dicho sistema de recuperación (3); y - al menos un sistema de recuperación (3) en forma de soporte sólido al cual se fijan ligandos competitivos y/o moléculas de reconocimiento biológico en posiciones de recuperación (4 y 5) que son distintas y conocidas y que están dispuestas de acuerdo con una disposición bidimensional en forma de matriz definida según un sistema de coordenadas, de manera que se identifiquen, por la ubicación de dichas posiciones de recuperación (4 y 5) en dicho soporte, los analitos presentes en dicha muestra (E). (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Medio de diagnóstico para la detección y/o la cuantificación de una pluralidad de analitos presentes en una muestra
Sector técnico
La presente invención se refiere a un medio de diagnóstico inmunocromatográfico para la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de una pluralidad de analitos presentes en una muestra esencialmente líquida, que comprende:
- como mínimo, una mezcla de reacción que contiene moléculas biológicas de reconocimiento y/o ligandos competidores marcados, como mínimo, con una molécula de visualización; y
- como mínimo, un sistema de recuperación en forma de un soporte sólido al que se encuentran fijados ligandos competidores y/o moléculas biológicas de reconocimiento en ubicaciones de recuperación distintas y conocidas, de manera que se identifican, mediante la localización de dichas ubicaciones de recuperación en dicho soporte, dichos analitos presentes en dicha muestra.
Antecedentes tecnológicos
En la actualidad, el interés por medios de diagnóstico que permitan la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de analitos presentes en una muestra está aumentando, y esto particularmente en el sector de los productos alimenticios, así como en el sector médico. Por ejemplo, se describen medios de diagnóstico de tipo ELISA que comprenden enzimas en O’Connoret al.2015 y Knechtet al.2004 y se describen medios de diagnóstico con una detección basada en nanopartículas de oro en los documentos de Patente US2012/0184462 y WO2017/075649.
En efecto, es necesario enfrentarse continuamente a la aparición de nuevos problemas de salud pública contra los cuales deben elaborarse soluciones rápidas y eficaces de diagnóstico con vistas a proporcionar un tratamiento apropiado. Por ejemplo, cada año a nivel mundial, aproximadamente 60.000 intoxicaciones en seres humanos están asociadas a toxinas producidas por algas (incluyendo las cianotoxinas de agua dulce), con una mortalidad total de aproximadamente el 1,5 %. Las biotoxinas marinas (denominadas también ficotoxinas) son producidas por ciertas especies de fitoplancton y son propensas a acumularse en diversas especies marinas, por ejemplo en los peces, cangrejos o bivalvos filtradores (moluscos) tales como los mejillones, las ostras, las vieiras y las almejas. Si una persona consume cantidades importantes de moluscos contaminados, puede ser víctima de una intoxicación grave. Por lo tanto, resulta crucial disponer de medios de diagnóstico rápidos y eficaces para detectar estas biotoxinas marinas, por ejemplo mediante un análisis de sangre o de orina.
Medios de diagnóstico tales como los definidos anteriormente pueden utilizarse también para la detección y la cuantificación de virus responsables de patologías muy diversas. Tales medios de diagnóstico permitirán: (1) aportar la prueba del origen viral de los signos clínicos observados y diagnosticar el virus causante (por ejemplo, hepatitis o herpes) y realizar un seguimiento de la evolución biológica de la infección (por ejemplo, mediante la cuantificación del virus en sangre: VIH, VHB, VHC); (2) realizar un seguimiento de una evolución biológica de la infección (por ejemplo, VIH o hepatitis B); (3) permitir una decisión terapéutica y evaluar la eficacia de los tratamientos antivirales (por ejemplo, para el tratamiento de una infección por citomegalovirus mediante ganciclovir); (4) prevenir la transmisión de infecciones virales en el momento de la donación de sangre, de órganos y de tejidos; (5) estimar el estado inmunitario (por ejemplo, en el caso de la rubeola); (6) estudiar marcadores séricos en la población (por ejemplo, durante estudios de prevalencia o estudios epidemiológicos). De manera general, el diagnóstico médico tiene como objetivo una extensión máxima de los parámetros que van a detectarse para dirigir mejor el tratamiento y el tipo de atención que debe proporcionarse al paciente, lo cual limita concretamente los efectos secundarios con frecuencia poco conocidos.
Por otro lado, en el sector alimentario, y más particularmente en la industria láctea, la vigilancia y el control de los productos imponen la realización de pruebas lo más aguas arriba posible de su fabricación. De manera ideal, estas pruebas deben realizarse en el lugar de producción de las materias primas o en el lugar de su transformación. Estas pruebas de detección, denominadas también pruebas de“screening’,están particularmente diseñadas para detectar la presencia y la cantidad de ciertos analitos, entre ellos contaminantes químicos (por ejemplo, restos de antibióticos y toxinas), proteínas (por ejemplo, alérgenos) o patógenos (por ejemplo, virus, parásitos o bacterias). La multiplicación de las normas sanitarias y el deseo de una mejor trazabilidad de los productos alimenticios imponen una multiplicación de los analitos que van a someterse a prueba, así como conocer de la manera más precisa posible sus clases (identificaciones de las familias, clases y del compuesto distinto) y sus cantidades con respecto a los límites máximos permitidos en cada matriz. Por otro lado, dado que la leche procede de numerosos lugares muy variados a nivel mundial, resulta difícil determinar con precisión los contaminantes que pueden encontrarse en la leche en función del lugar de producción, debido a lo diferentes que son las prácticas de un lugar del planeta a otro. En efecto, no siempre se conoce el origen de los alimentos, así como las prácticas locales de producción asociadas, lo cual obliga a realizar la detección en un amplio espectro de compuestos, lo más grande posible que cubra todo lo que puede encontrarse en la muestra que va a analizarse.
En particular, el sector agroalimentario está interesado en un medio de diagnóstico que permita prever en una única operación el análisis de compuestos pertenecientes a clases diferentes que pueden tener propiedades fisicoquímicas diferentes fundamentalmente, dentro de una misma familia de analitos o no, y presentes simultáneamente en una muestra dada. Por ejemplo, el tipo y el número de antibióticos que pueden administrarse a los animales pueden variar según si se trata de una aplicación terapéutica o profiláctica, según la especie animal, el germen a combatir, las prácticas veterinarias, la legislación en vigor, los medios disponibles o incluso las regiones geográficas. En el caso de determinados tratamientos particulares, puede utilizarse una mezcla de medicamentos. Como norma general, el facultativo utiliza, solos o en combinación, productos antibióticos elegidos entre todos los compuestos disponibles en el mercado según su apreciación de la mejor eficacia.
Las principales clases de compuestos antibacterianos y de antibióticos son: las penicilinas y cefalosporinas, las tetraciclinas, las sulfamidas, los aminoglicósidos y aminociclitoles, los macrólidos, los cloranfenicoles u otros péptidos, ionóforos, nitrofuranos, quinolonas, carbadox, etc., agrupando, cada una de estas clases, un conjunto muy amplio de compuestos diferentes químicamente.
La presencia de tales moléculas en los productos lácteos puede tener un gran impacto negativo sobre la rentabilidad del procedimiento industrial que implica una fermentación (queso, yogur, ...) a partir de leche fresca.
Además, la utilización, algunas veces intensa, de antibióticos en medicina veterinaria y en producción agrícola puede ser el origen de la aparición de cepas bacterianas que se vuelven resistentes a los antibióticos. Para proteger la salud humana y legislar en la materia, numerosos países han establecido límites máximos autorizados (MRL,máximum residue limits)para los restos de antibióticos en los alimentos. Estos MRL fijan el límite entre una muestra positiva y una muestra negativa, es decir, entre una muestra rechazada y una muestra aceptada.
Es importante que los métodos de detección que recurren a un medio de diagnóstico (1) puedan cubrir la detección simultánea de un máximo de compuestos, por lo tanto, las pruebas de detección deben ser, de manera preferente y lógica, pruebas de múltiples analitos, (2) permitan conocer las clases a las que pertenecen los compuestos encontrados en una muestra positiva para poder orientar directamente hacia el método de confirmación adecuado, y (3) no puedan dar resultados de tipo “falso negativo”, ya que estos escaparán entonces al análisis y no se confirmarán con posterioridad.
Estado de la técnica anterior
Se conoce un medio de diagnóstico tal como se indicó anteriormente. En efecto, el documento de Patente anterior EP1712914 da a conocer un medio de diagnóstico inmunocromatográfico para la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de una pluralidad de analitos presentes en una muestra esencialmente líquida, que comprende:
- como mínimo, una mezcla de reacción que contiene moléculas biológicas de reconocimiento y/o ligandos competidores marcados, como mínimo, con una molécula de visualización; y
- como mínimo, un sistema de recuperación en forma de un soporte sólido al que se encuentran fijados ligandos competidores y/o moléculas biológicas de reconocimiento en ubicaciones de recuperación distintas y conocidas, de manera que se identifican, mediante la localización de dichas ubicaciones de recuperación en dicho soporte, dichos analitos presentes en dicha muestra.
Más precisamente, este documento anterior proporciona un medio de diagnóstico que permite detectar simultáneamente un conjunto de compuestos que pueden pertenecer, como mínimo, a dos clases distintas de analitos, y caracterizar la clase a la que pertenece realmente un compuesto detectado, y esto demostrando la compatibilidad técnica y práctica de reunir en un único procedimiento, como mínimo, dos mecanismos de detección sin que el funcionamiento de uno de ellos pueda interferir con el funcionamiento del otro. Además, un medio de diagnóstico según el documento de Patente EP1712914 demuestra la viabilidad técnica de una valoración de múltiples analitos que puede realizarse rápidamente, por ejemplo en menos de 10 minutos, y en una única etapa de análisis partiendo de una única muestra.
En la práctica, el procedimiento de empleo del medio de diagnóstico según el documento de Patente EP1712914 está caracterizado por las siguientes etapas:
- poner en contacto una mezcla de reacción predeterminada con una muestra que va a caracterizarse para obtener una solución que se incuba a 50 °C durante 3 minutos;
- sumergir el sistema de recuperación definido anteriormente en la solución obtenida e incubar durante 3 minutos;
- interpretar de manera cuantitativa y cualitativa el resultado en el sistema de recuperación por medio de un dispositivo de lectura óptica.
Según este documento anterior, el posicionamiento de los elementos de recuperación (de los ligandos competidores) es lo que permitirá identificar el tipo de contaminación. Por ejemplo, según el ejemplo del documento de Patente EP1712914 que corresponde a la valoración simultánea de las tetraciclinas, p-lactamas y sulfamidas, cada elemento de recuperación está dispuesto en forma de una línea de captura, estando cada una de ellas dispuesta sucesivamente una detrás de otra haciendo referencia al sentido de migración del líquido (correspondiente a una mezcla de reacción puesta en contacto con una muestra). Según una modalidad preferente de este medio de diagnóstico, las zonas de captura que comprenden los elementos de recuperación de las p-lactamas, de las tetraciclinas y de la sulfadimetoxina están dispuestas respectivamente en un primer, un segundo y un tercer nivel haciendo referencia al sentido de migración del líquido.
La interpretación de los resultados según un medio de diagnóstico de este tipo debe realizarse de manera inversa y se basa en el principio de competencia que aprovecha el reconocimiento de los compuestos buscados con respecto a un ligando competidor y/o una molécula biológica de reconocimiento. Pueden presentarse varios casos cuando los elementos de recuperación fijados en el sistema de recuperación son los ligandos competidores:
- o bien el compuesto buscado está presente en la muestra y entonces va a unirse a las moléculas biológicas de reconocimiento presentes en una mezcla de reacción que, por consiguiente, ya no estarán libres para unirse a las moléculas competidoras fijadas al sistema de recuperación. El resultado será entonces positivo y presentará una marca que está ausente;
- o bien el compuesto buscado está ausente de la muestra, estando por lo tanto las moléculas biológicas de reconocimiento presentes en una mezcla de reacción libres para unirse a las moléculas competidoras fijadas al sistema de recuperación. El resultado será entonces negativo y presentará una marca que está presente.
Desafortunadamente, un medio de diagnóstico según el documento de Patente EP1712914 solo permite la detección y/o la cuantificación de un número limitado de analitos presentes en una muestra y, por lo tanto, no puede considerarse que es realmente un medio de diagnóstico de múltiples analitos. Más precisamente, el medio de diagnóstico según el documento de Patente EP1712914 permite detectar únicamente compuestos pertenecientes a tres clases distintas de antibióticos, a saber las p-lactamas, las tetraciclinas y las sulfamidas.
Por consiguiente, aunque las p-lactamas, las tetraciclinas y las sulfamidas constituyen realmente clases de analitos que puede considerarse que son diferentes, este documento anterior únicamente permite detectar antibióticos. De este modo, decididamente un medio de diagnóstico según este documento anterior no permite detectar y/o cuantificar analitos, tales como compuestos antibacterianos, toxinas, hormonas, patógenos, adulterantes o incluso alérgenos.
En efecto, los sectores afectados tales como el sector agroalimentario y el sector médico requieren un análisis lo más completo posible y que pueda identificar preferentemente un máximo de compuestos. Resulta más práctico y más económico realizar una única prueba múltiple a partir de una única muestra en lugar de tener que realizar una prueba particular para cada compuesto o únicamente para un pequeño grupo de compuestos, a saber 2 o 3 compuestos como máximo, tal como es el caso con un medio de diagnóstico según el documento de Patente anterior EP1712914.
Tal como se describió anteriormente, este documento anterior comprende un sistema de recuperación que presenta zonas de captura (elementos de recuperación fijados) en forma de líneas dispuestas unas detrás de otras y en perpendicular al sentido de migración del líquido, se encuentra una incompatibilidad técnica cuando el experto en la materia intenta disponer un número más alto de zonas de captura simultáneamente en el sistema de recuperación y esto a causa de (1) el tamaño restringido de la zona de prueba, (2) la cantidad más importante de reactivos que debe depositarse sobre las líneas sucesivas (favoreciendo el ruido de fondo y reactividades cruzadas más importantes) y (3) una falta de precisión durante la interpretación de los resultados con un análisis visual o instrumental que es largo y complejo. Por lo tanto, se vuelve difícil, incluso imposible, delimitar las diferentes zonas de captura unas de otras y, por lo tanto, distinguir los diferentes analitos unos de otros.
La publicación de Taranova (Taranovaet al.,2013) intenta solucionar las deficiencias del documento de Patente EP1712914 combinando la inmunocromatografía y la tecnología de “micromatriz”. En efecto, con vistas a aumentar el número de analitos que pueden detectarse/cuantificarse en una única prueba, el documento de Taranova propone disponer las ubicaciones de recuperación en el soporte sólido según una disposición de matriz bidimensional. De esta manera, el soporte sólido del medio de diagnóstico inmunocromatográfico según Taranova presenta una micromatriz compuesta por 32 antígenos (ligandos competidores) fijados en forma de puntos (ubicaciones de recuperación). Desafortunadamente, un medio de diagnóstico según este documento anterior únicamente permite la detección y la cuantificación de cuatro analitos, a saber la anfetamina, la benzoilecgonina, la metanfetamina y la morfina, que se reconoce que son drogas. En efecto, según Taranovaet al.,se prevén ocho ubicaciones de recuperación en forma de puntos en el soporte sólido para la detección y la cuantificación de un único analito. Precisamente, para la detección y/o la cuantificación de un analito dado, se fijan ocho puntos que comprenden antígenos (ligandos competidores) específicos para este analito en el soporte sólido, estando los ocho puntos que permiten identificar el analito dado dispuestos según el eje perpendicular al sentido de migración del líquido. Por consiguiente, según este documento anterior, no se trata de 32 antígenos diferentes que permiten detectar 32 analitos diferentes que se fijan en el soporte sólido, sino únicamente de cuatro antígenos diferentes reproducidos ocho veces que son específicos de cuatro analitos diferentes. De este modo, la identificación de los analitos solo se realiza según una única dimensión, siendo idénticas las ocho ubicaciones de recuperación dispuestas según el eje perpendicular al sentido de migración, a saber que comprenden antígenos específicos para un único analito. Según este documento anterior, la disposición de las ubicaciones de recuperación en forma de puntos se realiza según filas de puntos, correspondiendo cada fila a un analito dado, y no según una disposición real de matriz bidimensional.
De este modo, los medios de diagnóstico inmunocromatográficos del estado de la técnica encuentran en este momento un límite importante a la eficacia que está caracterizada por la ausencia de una prueba realmente de múltiples analitos que sea rápida y práctica, y que permita una detección y/o una cuantificación de analitos que sea:
- específica, es decir, que logre distinguir analitos de clases diferentes, y
- universal, es decir, que sea aplicable para la mayor parte de las sustancias útiles para analizar en los sectores agroalimentario y del diagnóstico médico, tales como los restos de medicamentos (por ejemplo, los antibióticos y los compuestos antibacterianos), las toxinas, las hormonas, los patógenos, los adulterantes o incluso los alérgenos.
Objetivo de la invención
La presente invención tiene por objetivo aliviar los inconvenientes dele estado de la técnica proporcionando un medio de diagnóstico más rápido, más práctico, más económico, más eficaz y que permita una detección y/o una cuantificación de analitos que sea:
- específica, es decir, que logre distinguir analitos de clases diferentes, y
- universal, es decir, que sea aplicable para la mayor parte de las sustancias útiles para analizar en los sectores agroalimentario y del diagnóstico médico, tales como los restos de medicamentos (por ejemplo, los antibióticos y los compuestos antibacterianos), las toxinas, las hormonas, los patógenos, los adulterantes o incluso los alérgenos,
realizándose la detección y/o la cuantificación en una única etapa y en menos de 15 minutos.
Más particularmente, un medio de diagnóstico según la presente invención permite la detección y/o la cuantificación de, como mínimo, 5 clases diferentes de analitos, preferentemente de, como mínimo, 10 clases diferentes de analitos, preferentemente de, como mínimo, 15 clases diferentes de analitos presentes en una muestra, siendo las clases de analitos restos de medicamentos (por ejemplo, antibióticos o compuestos antibacterianos), toxinas, hormonas, patógenos, adulterantes o incluso alérgenos, y esto en menos de 15 minutos y en una única etapa. Para resolver este problema, según la presente invención se prevé un medio de diagnóstico inmunocromatográfico para la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de una pluralidad de analitos presentes en una muestra esencialmente líquida, que comprende: - como mínimo, una mezcla de reacción que contiene moléculas biológicas de reconocimiento y/o ligandos competidores marcados, como mínimo, con una molécula de visualización; y
- como mínimo, un sistema de recuperación en forma de un soporte sólido al que se encuentran fijados ligandos competidores y/o moléculas biológicas de reconocimiento en ubicaciones de recuperación distintas y conocidas que están dispuestas según una disposición de matriz bidimensional, de manera que se identifican, mediante la localización de dichas ubicaciones de recuperación en dicho soporte, dichos analitos presentes en dicha muestra,
estando dicho medio de diagnóstico caracterizado por que,
a) dicha disposición de matriz bidimensional se define según un sistema de coordenadas que presenta una primera coordenada X y una segunda coordenada Y, de tal manera que cada ubicación de recuperación fijada en dicho soporte sólido permite la identificación de un analito distinto y con, para una misma coordenada X, varias ubicaciones de recuperación que comprenden, cada una, moléculas biológicas de reconocimiento o ligandos competidores diferentes, dispuestos según coordenadas Y diferentes y, con, para una misma coordenada Y, varias ubicaciones de recuperación que comprenden, cada una, moléculas biológicas de reconocimiento o ligandos competidores diferentes, dispuestos según coordenadas X diferentes;
b) para la detección y/o la cuantificación de un analito dado, está presente un par de diagnóstico constituido por un ligando competidor y por una molécula biológica de reconocimiento, de tal manera que dicha molécula biológica de reconocimiento se encuentra en dicha mezcla de reacción y dicho ligando competidor está fijado, como mínimo, en una ubicación de recuperación, o a la inversa;
c) dicha, como mínimo, una molécula de visualización es una molécula que puede detectarse por fluorescencia;
d) dicha mezcla de reacción está presente en un recipiente, siendo dicho recipiente distinto y estando separado de dicho sistema de recuperación, centrándose la interacción de la mezcla de reacción con la muestra que va a analizarse en dicho recipiente distinto de dicho sistema de recuperación de tal manera que dicha muestra interacciona completamente con la mezcla de reacción antes de que el líquido así obtenido, formado por la mezcla de reacción y por la muestra, entre en contacto con el soporte sólido y, por lo tanto, con las ubicaciones de recuperación, y
e) dicho sistema de recuperación comprende, como mínimo, 5 ubicaciones de recuperación distintas destinadas a la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de, como mínimo, 5 analitos distintos presentes en una muestra, y, como mínimo, una ubicación de recuperación destinada a un control y/o un calibrador.
Mediante el término “analito” se entiende, en el sentido de la presente invención, un compuesto que constituye un interés para detectarse y/o cuantificarse para proporcionar un diagnóstico, particularmente en los sectores agroalimentario y médico.
Mediante los términos “clase de analitos” se entiende, en el sentido de la presente invención, una agrupación de varios analitos que presentan propiedades biológicas y químicas similares. A modo de ejemplo, los restos de medicamentos pueden separarse en diferentes clases tales como las penicilinas, las cefalosporinas, las tetraciclinas, las sulfamidas, los aminoglicósidos, los aminociclitoles, los macrólidos, las quinolonas, los ionóforos, los carbadox, los nitrofuranos y los fenicoles. Particularmente, las penicilinas son antibióticos que tienen un modo de acción común (propiedad biológica) y que presentan una estructura química similar (propiedad química).
Mediante los términos “detección y/o cuantificación respectiva” se entiende, en el sentido de la presente invención, una detección y/o una cuantificación de todos los analitos de interés utilizando un único medio de diagnóstico según la presente invención.
Mediante los términos “detección y/o cuantificación simultánea” se entiende, en el sentido de la presente invención, una detección y/o una cuantificación de todos los analitos de interés después de un lapso de tiempo idéntico.
Mediante los términos “detección y/o cuantificación específica” se entiende, en el sentido de la presente invención, una detección y/o una cuantificación de todos los analitos de interés de manera distinta, de tal manera que puede identificarse con precisión el analito que se detecta y/o cuantifica.
Mediante los términos “par de diagnóstico” se entiende, en el sentido de la presente invención, dos moléculas complementarias destinadas a la detección y/o la cuantificación de un analito dado, siendo dichas dos moléculas una molécula de reconocimiento biológica y un ligando competidor. La detección y/o la cuantificación del analito dado se basa en el principio de competencia según dos situaciones posibles:
- o bien la molécula biológica de reconocimiento se encuentra en la mezcla de reacción y el ligando competidor complementario está fijado en el soporte sólido;
- o bien el ligando competidor se encuentra en la mezcla de reacción y la molécula biológica de reconocimiento complementaria está fijada en el soporte sólido.
Mediante los términos “moléculas biológicas de reconocimiento” se entiende, en el sentido de la presente invención, una molécula natural o sintética que puede unirse específicamente a un analito de interés.
Mediante los términos “ligandos competidores” se entiende, en el sentido de la presente invención, una molécula que puede unirse específicamente a las moléculas biológicas de reconocimiento y que, por lo tanto, va a competir conunanalito de interés por la unión a las moléculas biológicas de reconocimiento.
Mediante los términos “ubicación de recuperación” se entiende, en el sentido de la presente invención,unaubicación en la que van a fijarse moléculas biológicas de reconocimiento o ligandos competidores. En el caso en el que se fijan moléculas biológicas de reconocimiento en una ubicación de recuperación, el analito de interés (si está presente) o el ligando competidor (si el analito de interés está ausente) va a unirse de manera específica, a capturarse y, por lo tanto, a dejar de migrar. En el caso en el que se fijan ligandos competidores en una ubicación de recuperación, las moléculas biológicas de reconocimiento específicas de un analito de interés van a unirse de manera específica, a recuperarse y, por lo tanto, a dejar de migrar, y esto si el analito de interés está ausente.
El procedimiento empleado para la detección y/o la cuantificación es el siguiente:
- poner en contacto la mezcla de reacción con la muestra para obtener un líquido;
- incubar a una temperatura de 30 °C durante 3 minutos;
- sumergir el extremo del sistema de recuperación que se encuentra aguas arriba en el sentido de migración en el líquido (que comprende la muestra y la mezcla de reacción);
- incubar durante 10 minutos a 30 °C; e
- interpretar de manera cualitativa y/o cuantitativa el resultado en el sistema de recuperación por medio de un dispositivo de lectura óptica.
El sentido de migración del líquido según la presente invención está definido según dicho sistema de coordenadas que define la disposición de matriz de las ubicaciones de recuperación fijadas en el sistema de recuperación según la presente invención y, por consiguiente, se realiza según una coordenadaXy una coordenadaY.
La detección y/o la cuantificación según la presente invención se basa en el principio de competencia que aprovecha el reconocimiento de los analitos buscados con respecto a un ligando competidor y/o una molécula biológica de reconocimiento.
Pueden presentarse varios casos según si los ligandos competidores o las moléculas biológicas de reconocimiento están fijados en las ubicaciones de recuperación:
1) En el caso en el que los elementos de recuperación son los ligandos competidores,
- o bien el compuesto buscado está presente en la muestra y entonces va a unirse a las moléculas biológicas de reconocimiento presentes en una mezcla de reacción que, por consiguiente, ya no estarán libres para unirse a las moléculas competidoras fijadas al sistema de recuperación. El resultado será entonces positivo y presentará una marca que está ausente;
- o bien el compuesto buscado está ausente de la muestra, estando por lo tanto las moléculas biológicas de reconocimiento presentes en una mezcla de reacción libres para unirse a las moléculas competidoras fijadas al sistema de recuperación. El resultado será entonces negativo y presentará una marca que está presente.
2) En el caso en el que los elementos de recuperación son las moléculas biológicas de reconocimiento, - o bien el compuesto buscado está presente en la muestra y entonces va a competir con los ligandos competidores presentes en una mezcla de reacción para unirse a las moléculas biológicas de reconocimiento fijadas al sistema de recuperación. El resultado será entonces positivo y presentará una marca que está ausente o es débil;
- o bien el compuesto buscado está ausente de la muestra, siendo entonces los ligandos competidores los únicos que se unen a las moléculas biológicas de reconocimiento fijadas al sistema de recuperación. El resultado será entonces negativo y presentará una marca que está presente.
En el contexto de la presente invención, se ha demostrado de manera sorprendente que un medio de diagnóstico inmunocromatográfico que comprende las características (a), (b) (c) y (d) tal como se indicaron anteriormente hace que el medio de diagnóstico según la presente invención sea más eficaz y a la vez es más específico y más universal. Precisamente, permite detectar y/o cuantificar, como mínimo, 5 clases diferentes de analitos, preferentemente, como mínimo, 10 clases diferentes de analitos, preferentemente, como mínimo, 15 clases diferentes de analitos presentes en una muestra, siendo las clases de analitos restos de medicamentos (por ejemplo, antibióticos o compuestos antibacterianos), toxinas, hormonas, patógenos, adulterantes o incluso alérgenos, y esto en menos de 15 minutos y en una única etapa. Por consiguiente, un medio de diagnóstico según la presente invención es más práctico, más económico y más eficaz que los medios de diagnóstico conocidos actualmente que se limitan a la detección y/o cuantificación de menos de cinco clases diferentes de analitos.
Precisamente, se ha observado de manera sorprendente que la colocación de la mezcla de reacción en un recipiente separado del soporte sólido aportaba varias ventajas.
En primer lugar, dado que la interacción de la mezcla de reacción con la muestra que va a analizarse se centra en recipiente separado, se optimiza el control de la interacción de la mezcla de reacción con la muestra. De este modo, se garantiza que la muestra interacciona completamente con la mezcla de reacción antes de que el líquido así obtenido (formado por la mezcla de reacción y por la muestra) entre en contacto con el soporte sólido y, por lo tanto, las ubicaciones de recuperación. Por consiguiente, la separación de la mezcla de reacción en un recipiente separado del soporte sólido permite evitar la obtención de falsos negativos. En efecto, en el caso en el que la mezcla de reacción está fijada en el soporte sólido aguas arriba de los elementos de recuperación con respecto al sentido de migración tal como sucede en el documento de Taranovaet al.,la muestra esencialmente líquida se pone directamente en contacto con la mezcla de reacción fijada en el soporte sólido, lo cual va a conllevar la migración inmediata del líquido por capilaridad. Entonces hay un alto riesgo de que la muestra se encuentre con las ubicaciones de recuperación antes de que se complete la interacción con la mezcla de reacción, conllevando un resultado erróneo, es decir que el analito está realmente presente en la muestra pero no se detecta.
En segundo lugar, la separación de la mezcla de reacción en un recipiente permite tener un mejor control de la cantidad de muestra que se analiza. En efecto, con un medio de diagnóstico según la presente invención, es posible depositar un volumen de muestra definido y preciso en el recipiente y asegurarse de que la totalidad de este volumen de muestra va a analizarse, y esto a diferencia del medio de diagnóstico dado a conocer por Taranovaet al.En efecto, con un medio de diagnóstico de este tipo, es decir en el que la mezcla de reacción está presente en el soporte sólido aguas arriba de los elementos de recuperación con respecto al sentido de migración del líquido, la muestra se pone directamente en contacto con el soporte sólido que se sumerge en la muestra, migrando el líquido obtenido (formado por la muestra y por la mezcla de reacción) instantáneamente por capilaridad. De esta manera, es imposible definir con precisión el volumen de líquido que va a migrar sobre el soporte sólido, lo cual hace que sea muy difícil, incluso imposible, determinar el volumen de muestra que se analiza realmente. Esta característica distintiva del medio de diagnóstico según la presente invención permite reducir las desviaciones estándar y obtener de este modo una reproductibilidad mejorada con respecto a los medios de diagnóstico del estado de la técnica. La determinación precisa del volumen de muestra que se analiza permite también definir de manera más adecuada la composición de la mezcla de reacción y, sobre todo, de la cantidad de los diferentes elementos que la componen. Por consiguiente, la detección o la cuantificación de un analito dado es significativa y fiable incluso en una única repetición, y esto a diferencia del documento de Taranova. En efecto, según este documento anterior, y tal como se mencionó anteriormente, deben preverse ocho ubicaciones de recuperación en el soporte sólido para la detección y la cuantificación de un único analito. Por lo tanto, para la detección y/o la cuantificación fiable de un mismo número de analitos, por ejemplo cuatro analitos, un soporte sólido según la presente invención debe comprender 4 ubicaciones de recuperación, mientras que un soporte sólido según Taranovaet al.debe comprender 32 ubicaciones de recuperación. Por consiguiente, para una misma superficie de soporte sólido, el medio de diagnóstico según la presente invención permite detectar y/o cuantificar 32 analitos diferentes.
En tercer lugar, la separación de la mezcla de reacción en un recipiente permite aumentar el número de constituyentes de la mezcla de reacción. En efecto, tal como se describió anteriormente, para la detección y/o la cuantificación de un analito dado, está presente un par de diagnóstico constituido por un ligando competidor y por una molécula biológica de reconocimiento, de tal manera que la molécula biológica de reconocimiento se encuentra en la mezcla de reacción y el ligando competidor está fijado, como mínimo, en una ubicación de recuperación, o a la inversa. Por lo tanto, la mezcla de reacción contiene una molécula de reconocimiento o un ligando competidor por cada analito. Por consiguiente, para detectar y/o cuantificar un gran número de analitos diferentes, deberá añadirse un mayor número de moléculas de reconocimiento o de ligandos competidores diferentes en la mezcla de reacción. Con los medios de diagnóstico del estado de la técnica, tal como se da a conocer por Taranovaet al.,el número de constituyentes de la mezcla de reacción está limitado por la superficie disponible en el soporte sólido.
Además, según la presente invención, la disposición de matriz bidimensional se define según un sistema de coordenadas que presenta una primera coordenadaXy una segunda coordenadaY,de tal manera que cada ubicación de recuperación fijada en dicho soporte sólido permite la identificación de un analito distinto. Esta característica también mejora significativamente la eficacia del medio de diagnóstico según la presente invención proporcionando un medio de diagnóstico que permite detectar y/o cuantificar un número más alto de analitos distintos para una superficie de soporte idéntica, por ejemplo mejorar ocho veces la eficacia con respecto al medio de diagnóstico según Taranovaet al.
De este modo, según la presente invención, para una misma coordenadaX,se disponen varias ubicaciones de recuperación, comprendiendo, cada una, moléculas biológicas de reconocimiento o ligandos competidores diferentes, según coordenadasYdiferentes, permitiendo de este modo detectar y/o cuantificar, para una misma coordenadaX,varios analitos diferentes. A la inversa, para una misma coordenadaY,se disponen varias ubicaciones de recuperación, comprendiendo, cada una, moléculas biológicas de reconocimiento o ligandos competidores diferentes, según coordenadasXdiferentes, permitiendo de este modo detectar y/o cuantificar varios analitos diferentes.
Por otro lado, se ha observado de manera sorprendente que la utilización de una molécula de visualización que puede detectarse mediante fluorescencia permite mejorar el límite de detección de la señal y, por lo tanto, reducir el riesgo de falsos negativos aumentando la sensibilidad de la detección y/o de la cuantificación. Por consiguiente, dado que el umbral de detección es más bajo, las ubicaciones de recuperación pueden ser más pequeñas, lo cual permite obtener un soporte sólido que comprende más ubicaciones de recuperación para una superficie idéntica. Por otro lado, dado que la detección de la señal mediante fluorescencia es más sensible, debe fijarse una cantidad más baja de ligandos competidores y/o de moléculas biológicas de reconocimiento a las ubicaciones de recuperación, lo cual proporciona una ventaja económica no despreciable, pero también un ruido de fondo reducido y un riesgo de reacciones cruzadas entre los mecanismos de detección y/o cuantificación reducido.
Como conclusión, un medio de diagnóstico según la presente invención proporciona un efecto técnico superior con respecto a los medios de diagnóstico actuales y más particularmente con respecto al medio de diagnóstico según el documento de Taranovaet al.
De este modo, la presente invención demuestra la compatibilidad técnica y práctica de reunir en un único medio de detección un alto número (como mínimo, 5, preferentemente, como mínimo, 10, preferentemente, como mínimo, 15) de mecanismos de detección y/o de cuantificación. Por otro lado se ha destacado, en el contexto de la presente invención, una viabilidad técnica de una valoración de múltiples analitos que puede realizarse rápidamente, en menos de 15 minutos, preferentemente en 13 minutos, y en una única etapa de análisis con la ayuda de una única muestra. En efecto, el medio de diagnóstico según la presente invención no requiere ni lavados ni la realización de una etapa distinta de marcado de las moléculas de reconocimiento y/o de los ligandos competidores, como mínimo, con una molécula de visualización, dado que, según la presente invención, la mezcla de reacción comprende moléculas de reconocimiento y/o ligandos competidores acoplados a, como mínimo, una molécula de visualización. Preferentemente, dichas ubicaciones de recuperación fijadas en dicho sistema de recuperación de dicho medio de diagnóstico según la presente invención están dispuestas según una disposición de matriz bidimensional en forma de puntos que presentan, cada uno, un diámetro comprendido entre 20 |o.m y 2 mm, preferentemente comprendido entre 100 |o.m y 500 |o.m, preferentemente entre 250 |o.m y 400 |o.m.
Se ha demostrado que ubicaciones de recuperación en forma de puntos que presentan, cada uno, un diámetro comprendido entre 20 |o.m y 2 mm, preferentemente comprendido entre 100 ^m y 500 |o.m, preferentemente entre 250 |j.m y 400 |o.m, permitían fijar, como mínimo, 5, preferentemente, como mínimo, 10, preferentemente, como mínimo, 15 ubicaciones de recuperación en una única repetición, por duplicado o por triplicado para la detección y/o la cuantificación de, como mínimo, 5, preferentemente, como mínimo, 10, preferentemente, como mínimo, 15 analitos diferentes, así como, como mínimo, una ubicación de recuperación depositada en una única repetición, por duplicado o por triplicado destinada al control del umbral de detección que permite validar la prueba y/o a la calibración para la detección y/o la cuantificación, y esto en un sistema de recuperación que tiene un tamaño razonable, para la realización de la detección y/o la cuantificación de dichos, como mínimo, 15 analitos mediante un dispositivo de lectura óptica.
Ventajosamente, las ubicaciones de recuperación fijadas en dicho sistema de recuperación de dicho medio de diagnóstico según la presente invención están dispuestas según una disposición de matriz bidimensional en forma de puntos, estando dichos puntos presentes a una densidad comprendida entre 62.500 y 6,25 puntos por cm2, preferentemente comprendida entre 2.500 y 100 puntos por cm2, preferentemente comprendida entre 400 y 150 puntos por cm2.
Preferentemente, la disposición de matriz de todas las ubicaciones de recuperación es inferior o igual a 3 cm2, preferentemente inferior o igual a 2 cm2, preferentemente inferior o igual a 1 cm2.
Ventajosamente, la primera coordenadaXse define en un eje longitudinal de una longitud de dicho sistema de recuperación y la segunda coordenadaYse define en un eje longitudinal de una anchura de dicho sistema de recuperación.
Resulta razonable prever una distancia de separación mínima entre dos puntos que está comprendida entre 20 |o.m y 2 mm, preferentemente entre 100 |o.m y 500 |j.m, preferentemente entre 250 |j.m y 400 |o.m, según coordenadasXeY.
El sistema de recuperación según la presente invención comprende, como mínimo, 5, preferentemente, como mínimo, 10, preferentemente, como mínimo, 15 ubicaciones de recuperación distintas destinadas a la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de, como mínimo, 5, preferentemente, como mínimo, 10, preferentemente, como mínimo, 15 analitos distintos presentes en una muestra, y, como mínimo, una ubicación de recuperación destinada a un control y/o un calibrador.
Preferentemente, dicho control y/o dicho calibrador se obtiene a partir de un par de ligando competidor/molécula de reconocimiento independiente, cuya naturaleza intrínseca (o sintética) hace que la molécula de control no esté nunca presente en la muestra (por ejemplo, un anticuerpo específico de una proteína de otra especie animal diferente de aquella de la que procede la muestra) o una proteína portadora (por ejemplo, la albúmina sérica bovina) modificada químicamente con un marcador sintético (por ejemplo, una biotina o un marcador de poli-histidinas o c-myc).
En una realización particularmente ventajosa del medio de diagnóstico según la presente invención, cada una de dichas ubicaciones de recuperación está dispuesta en dicho sistema de recuperación por duplicado, preferentemente por triplicado. La realización de duplicados o de triplicados permite mejorar adicionalmente las estadísticas y la precisión de los resultados obtenidos.
Preferentemente, la disposición de matriz de las ubicaciones de recuperación a las que están fijados los ligandos competidores o las moléculas de reconocimiento se determina por el sentido de migración del líquido, de tal manera que una ubicación de recuperación a la que están fijados los ligandos competidores o las moléculas biológicas de reconocimiento destinados a la detección y/o la cuantificación de un primer analito dado está localizada aguas arriba de una ubicación de recuperación a la que están fijados los ligandos competidores o las moléculas biológicas de reconocimiento destinados a la detección y/o la cuantificación de un segundo analito dado, y esto con respecto al sentido de migración del líquido. Una disposición de matriz de este tipo permite además reducir el riesgo de reacciones cruzadas entre los diferentes mecanismos de detección y/o de cuantificación de los analitos de interés.
Ventajosamente, dicho sistema de recuperación en forma de un soporte sólido comprende una membrana o un conjunto de membranas. Preferentemente, la membrana es una membrana de nitrocelulosa.
Ventajosamente, dicho recipiente es un recipiente de vidrio o de plástico.
Ventajosamente, dichas moléculas biológicas de reconocimiento son anticuerpos, preferentemente anticuerpos primarios, ya sea monoclonales o policlonales, purificados o no purificados, y/o aptámeros y/o GEPI y/o receptores biológicos.
Ventajosamente, dichos ligandos competidores son análogos de los analitos buscados y/o moléculas que pueden fijarse específicamente a dichas moléculas biológicas de reconocimiento.
En una realización particularmente ventajosa del medio de diagnóstico según la presente invención, dichos ligandos competidores se eligen entre el grupo constituido por medicamentos de tipo antibióticos, hormonas, toxinas tales como aflatoxina, virus de tipo virus del Dengue, bacterias de tipoL. monocytogenes,metales pesados, adulterantes, alérgenos y sus mezclas.
Preferentemente, dicha, como mínimo, una molécula de visualización está fusionada a dichas moléculas biológicas de reconocimiento y/o a dichos ligandos competidores mediante un acoplamiento químico y/o genético.
Mediante los términos “acoplamiento químico y/o genético” se entiende, en el sentido de la presente invención, una unión de la molécula de reconocimiento y/o del ligando competidor a la molécula de visualización mediante una modificación química y/o genética de la molécula biológica de reconocimiento y/o del ligando competidor, no estando estos ya, por consiguiente, en su estado natural sino en forma modificada o en forma de complejos.
Se ha demostrado que un acoplamiento químico y/o genético de este tipo de la molécula de visualización a las moléculas biológicas de reconocimiento y/o a los ligandos competidores presentes en la mezcla de reacción permite mejorar adicionalmente la compatibilidad técnica y práctica de reunir en un único medio de detección y/o de cuantificación un alto número (como mínimo, 5, preferentemente, como mínimo, 10, preferentemente, como mínimo, 15) de mecanismos de detección y/o de cuantificación sin que el funcionamiento de uno de ellos pueda interferir con el funcionamiento de uno de los otros mecanismos. En efecto, una mezcla de reacción según la presente invención que presenta un acoplamiento de este tipo ofrece la ventaja de reducir, incluso eliminar, el riesgo de inespecificidad y de reacciones cruzadas entre las diferentes moléculas biológicas de reconocimiento y/o los diferentes ligandos competidores presentes en la mezcla de reacción y, por tanto, el riesgo de observar falsos positivos y/o falsos negativos, pero también de reducir considerablemente el marcado residual (ruido de fondo) observado en el sistema de recuperación cuando no está presente un acoplamiento de este tipo y de obtener de este modo un mejor contraste entre el marcado de los elementos de recuperación y del soporte sólido no fijado (y de obtener de este modo un mejor umbral de detección).
Por el contrario, el documento de Patente anterior EP1712914 recomienda que no tenga lugar ningún marcado por modificación química con el fin de conservar al máximo las funcionalidades de los receptores y anticuerpos utilizados y que, por consiguiente, las moléculas biológicas de reconocimiento se aprovechen en su estado más natural posible. Por ejemplo, una molécula biológica de reconocimiento tal como un receptor se marca con la ayuda de un anticuerpo, a su vez reconocido por una proteína A (que reconoce todos los tipos de anticuerpo de manera general) que está conjugada a oro coloidal. Por lo tanto, según este documento anterior, es la proteína A, y no la molécula biológica de reconocimiento, la que está acoplada al oro coloidal (la molécula de visualización).
Ventajosamente, dicho acoplamiento químico y/o genético se realiza mediante, como mínimo, una fuerza electrostática, como mínimo, un enlace peptídico, como mínimo, un gen indicador o una combinación de los mismos.
En una realización particular, dicha, como mínimo, una molécula de visualización se elige entre el grupo constituido por el isotiocianato de fluoresceína (FITC), la ficoeritrina (PE), la rodamina B y sus mezclas. Preferentemente, dichos analitos se seleccionan entre el grupo constituido por restos de medicamentos, toxinas, virus, bacterias, hormonas, metales pesados, adulterantes, alérgenos y sus mezclas. Entre los restos de medicamentos, se encuentran concretamente los antibióticos y los compuestos antibacterianos. También pueden detectarse moléculas químicas no deseadas, adulterantes, tras una contaminación pasiva por transferencia del recipiente (por ejemplo, a partir de un envase de plástico).
En una realización particularmente ventajosa, dichos analitos son restos de medicamentos y se eligen entre el grupo constituido por las penicilinas, las cefalosporinas, las tetraciclinas, las sulfamidas, los aminoglicósidos, los aminociclitoles, los macrólidos, las quinolonas, los ionóforos, los carbadox, los nitrofuranos, los fenicoles y sus mezclas.
Ventajosamente, dicha muestra se obtiene a partir de leche, miel, carne, huevos, sangre completa, suero, orina u otros líquidos biológicos.
Mediante los términos “líquidos biológicos” se entiende, en el sentido de la presente invención, cualquier líquido orgánico o líquido corporal producido por un organismo vivo.
Preferentemente, dicha muestra se obtiene a partir de leche. Se ha observado que la detección de los analitos es más sensible cuando la muestra analizada se obtiene a partir de leche, y esto porque los componentes de la leche saturan la membrana de nitrocelulosa y reducen de este modo el ruido de fondo. Particularmente, según la presente invención, la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de una pluralidad de analitos presentes en una muestra se realiza por medio de un dispositivo de lectura óptica.
Otras realizaciones del medio de diagnóstico según la presente invención se indican en las reivindicaciones adjuntas.
La presente invención se refiere también a un procedimiento para la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de una pluralidad de analitos presentes en una muestra esencialmente líquida, que comprende las siguientes etapas:
- poner en contacto una mezcla de reacción de un medio de diagnóstico según la presente invención con la muestra para obtener un líquido;
- incubar a una temperatura comprendida entre 0 y 70 °C, preferentemente entre 10 y 60 °C, preferentemente entre 20 y 50 °C, preferentemente entre 20 y 40 °C, preferentemente entre 25 y 35 °C, preferentemente de 30 °C, durante una duración inferior o igual a 15 minutos, preferentemente inferior o igual a 10 minutos, preferentemente inferior o igual a 5 minutos, preferentemente inferior o igual a 3 minutos, preferentemente igual a 3 minutos;
- sumergir un extremo de un sistema de recuperación de un medio de diagnóstico según la presente invención en el líquido;
- incubar a una temperatura comprendida entre 0 y 70 °C, preferentemente entre 10 y 60 °C, preferentemente entre 20 y 50 °C, preferentemente entre 20 y 40 °C, preferentemente entre 25 y 35 °C, preferentemente de 30 °C, durante una duración inferior o igual a 15 minutos, preferentemente inferior o igual a 10 minutos, preferentemente igual a 10 minutos; e
- interpretar de manera cualitativa y/o cuantitativa el resultado en el sistema de recuperación por medio de un dispositivo óptico.
El procedimiento según la presente invención se basa en las tecnologías de microfluidos y de la inmunocromatografía.
La presente invención tiene por objeto también un conjunto de diagnóstico para la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de analitos presentes en una muestra, que comprende un medio de diagnóstico según la presente invención y comprende, además, un dispositivo de lectura óptica de un soporte sólido amovible, que comprende:
- una ubicación para recibir dicho soporte sólido;
- una unidad óptica para analizar dicho soporte sólido y que comprende:
o una primera fuente luminosa para emitir según una intensidad de emisión y en un primer intervalo de longitud de onda un primer haz luminoso hacia dicha ubicación;
o un sistema de obtención de imágenes que comprende un detector óptico para proporcionar una imagen de una zona de visualización, comprendiendo dicha zona de visualización, como mínimo, una porción de dicha ubicación;
o un filtro para filtrar un intervalo de longitud de onda definido y posicionado entre la ubicación y dicho sistema de obtención de imágenes;
- medios de comunicaciones para obtener una información relativa a un soporte sólido;
- medios de selección para:
o seleccionar, a partir de una lista de analitos predefinidos correspondientes a dichas ubicaciones de recuperación fijadas en el soporte sólido, una selección de analitos que van a detectarse y/o a cuantificarse para dicha muestra a partir de un mismo soporte sólido;
- medios de tratamiento de imagen de dicha imagen para:
o determinar, a partir de la información relativa a dicho soporte sólido que va a leerse, un número finito de subconjuntos de dicha imagen, correspondiendo cada subconjunto a un analito;
o proporcionar datos relativos a intensidades luminosas procedentes de dichos subconjuntos;
- medios de determinación para:
o calcular, para cada subconjunto correspondiente a un analito seleccionado entre dicha selección de analitos, una intensidad de subconjunto;
o determinar, basándose en dicha intensidad de subconjunto, información de analitos de dicha muestra para cada subconjunto correspondiente a un analito seleccionado entre dicha selección de analitos;
- medios de transmisión configurados para transmitir dicha información de analitos de dicha muestra analizada para cada subconjunto correspondiente a un analito seleccionado entre dicha selección de analitos.
Un dispositivo de este tipo según la presente invención permite la lectura de las zonas que van a someterse a prueba, en particular con una medición instantánea de la fluorescencia o de manera preferente con una medición de la luz reflejada de las zonas que van a someterse a prueba. Con el fin de permitir una selección de los analitos que van a someterse a prueba correspondientes a zonas de interés en una tira, un dispositivo de este tipo propone, gracias al acceso a un método que contiene información relativa a una tira, una selección a partir de una lista de analitos que van a someterse a prueba. En efecto, resulta interesante realizar una selección de los analitos que van a someterse a prueba antes de obtener los resultados con el fin de seleccionar correctamente como diana los analitos de los que es necesario conocer los resultados de una prueba, con el fin de no exponer a un usuario a una cantidad demasiado grande de resultados. Dar acceso a una cantidad demasiado grande de resultados a un usuario que no los necesita necesariamente le expone al riesgo de una pérdida de objetividad con respecto a su intención de análisis inicial. De este modo, un dispositivo de este tipo de la presente invención, gracias a medios de selección, permite una elección de los analitos que van a someterse a prueba por parte del usuario antes de realizar la lectura de la tira. Los medios de selección, en comunicación con los medios de tratamiento de imagen, permiten a los medios de tratamiento de imagen una determinación únicamente de la información de los analitos seleccionados.
Una ventaja de utilizar el lector óptico de la presente invención para realizar un diagnóstico referente a una selección de analitos de interés es que no necesita ni una primera selección de diferentes tipos de tiras que van a someterse a prueba, ni la puesta en contacto de cada una de estas tiras con el producto que va a someterse a prueba y después el posicionamiento en el lector óptico. Todo esto permite evitar una manipulación importante de las tiras que van a someterse a prueba, costosa en cuanto al tiempo y la gestión de las reservas. Esto permite también un análisis más simple, más rápido y más dirigido de los analitos que van a someterse a prueba, disponiendo únicamente de los resultados seleccionados al final de la lectura de la tira por el lector óptico de la presente invención.
Ventajosamente, la selección de analitos es una selección de varios analitos.
Preferentemente, el dispositivo óptico comprende además:
- medios que permiten leerunperfil de selección; y
dichos medios de selección están configurados para realizar dicha selección de analitos basándose en dicho perfil de selección.
De manera ventajosa, cada subconjunto de dicho número finito de subconjuntos de dicha imagen determinado por los medios de tratamiento de imagen corresponde a dicha selección de analitos, preferentemente a cada analito seleccionado.
Preferentemente, dichos medios de tratamiento de imagen están configurados para determinar además dicho número finito de subconjuntos de dicha imagen a partir de dicho perfil de selección.
Ventajosamente, dicha primera fuente luminosa está configurada para emitir directamente dicho primer haz luminoso directamente hacia dicha ubicación, de manera preferente directamente hacia dichas ubicaciones de recuperación fijadas en el soporte sólido.
Preferentemente, dicho soporte sólido comprende ubicaciones de recuperación en forma de puntos que presentan, cada uno,undiámetro comprendido entre 20 ^m y 2 mm, preferentemente comprendido entre 100 pmi y 500 pmi, preferentemente entre 250 pmi y 400 pmi.
La presente invención se refiere también a un conjunto de diagnóstico para la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de analitos presentes en una muestra, que comprende un medio de diagnóstico según la presente invención y comprende, además, un dispositivo de lectura óptica de un soporte sólido amovible, que comprende:
- una ubicación para recibir dicho soporte sólido;
- una unidad óptica para analizar dicho soporte sólido y que comprende:
o una primera fuente luminosa para emitir según una intensidad de emisión y en un primer intervalo de longitud de ondaunprimer haz luminoso hacia dicha ubicación;
o un sensor de intensidad luminosa para medir la intensidad de emisión emitida por dicha primera fuente luminosa;
o un medio de realimentación para modular dicha intensidad de emisión de dicha primera fuente luminosa en función de la intensidad de emisión medida por dicho sensor de intensidad luminosa de manera que dicha primera fuente luminosa emite una intensidad objetivo;
o un sistema de obtención de imágenes que comprende un detector óptico para proporcionar una imagen de una zona de visualización, comprendiendo dicha zona de visualización, como mínimo, una porción de dicha ubicación;
o un filtro para filtrar un intervalo de longitud de onda definido y posicionado entre la ubicación y dicho sistema de obtención de imágenes;
- medios de tratamiento de imagen de dicha imagen para:
o determinar un número finito de subconjuntos de dicha imagen,
o proporcionar datos relativos a intensidades luminosas procedentes de dichos subconjuntos;
- medios de determinación para:
o calcular, para cada subconjunto, una intensidad de subconjunto, y
- medios de transmisión para transmitir una información relativa a dicha intensidad de subconjunto para cada subconjunto.
Un dispositivo óptico de este tipo según la presente invención permite la lectura de las zonas que van a someterse a prueba, en particular con una medición instantánea de la fluorescencia o de manera preferente con una medición de la luz reflejada de las zonas que van a someterse a prueba. Cuando se utiliza una técnica de fluorescencia o una técnica de luz reflejada para leer las zonas que van a someterse a prueba (o puntos), un medio de realimentación permite garantizar una intensidad luminosa de excitación siempre igual, lo cual permite una medición instantánea de la fluorescencia o de la reflexión fiable, independientemente de la temperatura, la fuente de energía utilizada o incluso la duración de utilización y el envejecimiento de la fuente luminosa. La utilización del medio de realimentación permite garantizar una fuente de energía luminosa que tiene una intensidad constante en el tiempo y predefinida. Una fuente de energía luminosa que tiene una intensidad predefinida permite concretamente garantizar resultados cuantitativos fiables. El medio de realimentación es preferentemente un medio de realimentación electrónico. Por ejemplo, el sensor de intensidad luminosa es un fotodiodo.
La presente invención tiene también por objeto un conjunto de diagnóstico para la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de analitos presentes en una muestra, que comprende un medio de diagnóstico según la presente invención y comprende, además, un dispositivo de lectura óptica de un soporte sólido amovible, que comprende:
- una ubicación para recibir dicho soporte sólido;
- una unidad óptica para analizar dicho soporte sólido y que comprende:
o una primera fuente luminosa para emitir según una intensidad de emisión y en un primer intervalo de longitud de onda un primer haz luminoso hacia dicha ubicación;
o un sistema de obtención de imágenes que comprende un detector óptico bidimensional para proporcionar una imagen bidimensional de una zona de visualización, comprendiendo dicha zona de visualización, como mínimo, una porción de dicha ubicación;
o un filtro para filtrar un intervalo de longitud de onda definido y posicionado entre la ubicación y dicho sistema de obtención de imágenes;
- medios de tratamiento de imagen de dicha imagen bidimensional para:
o detectar zonas de referencia de dicha imagen bidimensional,
o determinar un número finito de subconjuntos de dicha imagen bidimensional,
o posicionar en dicha imagen bidimensional cada subconjunto en una posición predeterminada con respecto a dichas zonas de referencia,
o proporcionar datos relativos a intensidades luminosas procedentes de dichos subconjuntos;
- medios de determinación para:
o calcular, para cada subconjunto, una intensidad de subconjunto, y
- medios de transmisión configurados para transmitir dicha intensidad de subconjunto para cada subconjunto.
Un dispositivo óptico de este tipo según la presente invención permite la lectura simultánea de un gran número de puntos gracias a un detector óptico bidimensional y a medios de tratamiento de imagen y de determinación que permiten leer información de analitos para cada uno de los puntos. La imagen bidimensional comprende subconjuntos, porciones, regiones de interés, zonas de interés o incluso partes de imágenes. Preferentemente, los subconjuntos de una imagen bidimensional comprenden una pluralidad de píxeles. Preferentemente, cada subconjunto comprende, como mínimo, 20 píxeles, preferentemente más de 50 píxeles y de manera aún más preferente más de 200 píxeles.
La ventaja de un dispositivo de este tipo según la presente invención es poder realizar un diagnóstico mediante una lectura de fluorescencia de manera continua evitando al máximo el ruido de fondo generado por la fuente luminosa.
Otra ventaja de un dispositivo de lectura óptica de este tipo de la presente invención es permitir la lectura óptica de un gran número de regiones de interés presentes en una única tira. En el caso de un dispositivo óptico de este tipo de la presente invención, la lectura de un gran número de regiones de interés no necesita prever ubicaciones para varias tiras. El empleo de varias tiras en un mismo lector óptico para una lectura simultánea de varias tiras con el fin de cubrir un gran número de regiones de interés con un mismo sensor óptico es una fuente de mala colocación y de desplazamiento de las regiones de interés de una medición a otra, y esto para cada una de las tiras introducidas en el lector óptico.
La presente invención se refiere también a un conjunto de diagnóstico para la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de analitos presentes en una muestra, que comprende un medio de diagnóstico según la presente invención y que comprende, además, un dispositivo de lectura óptica de un soporte sólido amovible, que comprende:
- una ubicación para recibir dicho soporte sólido;
- un dispositivo de identificación para identificar un soporte sólido que va a leerse;
- medios de comunicación para acceder a una base de datos de métodos relativos a dicho soporte sólido que va a leerse para obtener una información relativa a un soporte sólido;
- una unidad óptica, para analizar dicho soporte sólido basándose en parámetros de análisis comprendidos en dicha información relativa a un soporte sólido y que comprende:
o una primera fuente luminosa para emitir según una intensidad de emisión y en un primer intervalo de longitud de onda un primer haz luminoso hacia dicha ubicación;
o un sistema de obtención de imágenes que comprende un detector óptico para proporcionar una imagen de una zona de visualización, comprendiendo dicha zona de visualización, como mínimo, una porción de dicha ubicación;
o un filtro para filtrar un intervalo de longitud de onda definido y posicionado entre la ubicación y dicho sistema de obtención de imágenes;
- medios de tratamiento de imagen de dicha imagen para:
o leer en la información relativa a dicho soporte sólido que va a leerse, una información relativa a un número finito de subconjuntos de dicha imagen;
o proporcionar datos relativos a intensidades luminosas procedentes de dichos subconjuntos;
- medios de determinación para:
o calcular, para cada subconjunto, una intensidad de subconjunto, y
o determinar, basándose en dicha intensidad de subconjunto y basándose en la información relativa a dicho soporte sólido que va a leerse, información de analito para cada subconjunto;
- medios de transmisión configurados para transmitir dicha información de analito para cada subconjunto. El dispositivo de lectura óptica según la presente invención permite una lectura óptica de una tira para el análisis de una muestra con una elección de método de lectura automatizada. El método de lectura comprende preferentemente datos relativos a: una versión de método, un número de lote, una fecha límite de utilización de un lote, el tipo de fuente luminosa utilizada, el tipo de zona de interés (línea o punto), método para análisis cualitativo (binario) o cuantitativo, parámetros de adquisición de imagen (tiempo de exposición, ganancia, ...), las posiciones con respecto a puntos de referencia (por ejemplo, según coordenadas cartesianas), un número de zonas de interés, un número de repeticiones por analito, la organización en matriz de las zonas de interés en el soporte sólido móvil, las dimensiones de las zonas de interés (por ejemplo, un radio), una dimensión relativa a una zona alrededor de una zona de interés que debe considerarse para tener en cuenta el fondo, parámetros de calibración del tipo interpolación de datos o que permiten un análisis cuantitativo de una muestra y finalmente la designación de las zonas de interés en función del analito que permiten detectar y/o cuantificar.
Otras realizaciones del conjunto de diagnóstico según la presente invención se indican en las reivindicaciones adjuntas.
La presente invención tiene también por objeto una utilización de un medio de diagnóstico según la presente invención para la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de analitos presentes en una muestra, de, como mínimo, 5, preferentemente de, como mínimo, 10, preferentemente de, como mínimo, 15 analitos diferentes.
La presente invención tiene también por objeto una utilización de un conjunto de diagnóstico según la presente invención, para la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de analitos presentes en una muestra, de, como mínimo, 5, preferentemente de, como mínimo, 10, preferentemente de, como mínimo, 15 analitos diferentes.
Otras formas de utilizaciones del medio de diagnóstico y del conjunto de diagnóstico según la presente invención se indican en las reivindicaciones adjuntas.
Otras características, detalles y ventajas de la presente invención se desprenderán de la descripción facilitada a continuación, a título no limitativo y haciendo referencia a los dibujos adjuntos.
Descripción de las figuras
La figura 1a es una vista esquemática de un medio de diagnóstico según el documento de Patente anterior EP1712914.
La figura 1b es una vista esquemática de un medio de diagnóstico según el documento de Taranovaet al.La figura 2 es una vista esquemática de un medio de diagnóstico según la presente invención.
La figura 3 es una vista esquemática que ilustra en detalle un sistema de recuperación según la presente invención.
En las figuras, los elementos idénticos o análogos portan las mismas referencias.
La figura 1a representa un medio de diagnóstico 1 según el documento de Patente anterior EP1712914 e ilustra el posicionamiento de los elementos de recuperación 41, 42, 43 y 5 en un sistema de recuperación 3 en forma de un soporte sólido de nitrocelulosa en el caso de la valoración simultánea de p-lactamas 41, de tetraciclinas 42 y de sulfadimetoxina 43, estando prevista también una zona de control fija 5, con respecto a un sentido de migración M. Según este documento anterior, la mezcla de reacción 2 está prevista en un recipiente distinto con el que se pone en contacto una muestra E que va a someterse a prueba.
La figura 1b representa un medio de diagnóstico 1 según el documento de Taranovaet al.e ilustra el posicionamiento de los elementos de recuperación 41a, 41b, 41c, 41d, 41e, 4 f 41g, 41 h, 42a, 42b, 42c, 42d, 42c, 4 f 42g, 42h, 43a, 43b, 43c, 43d, 43e, 43f, 43g, 43h, 44a, 44b, 44c, 44d, 44e, 44f, 44g, 44h, en un sistema de recuperación 3 en forma de un soporte sólido de nitrocelulosa en el caso de la valoración simultánea de anfetaminas (41a, 41b, 41c, 41d, 41e, 41f, 41g, 41h), de benzoilecgomina (42a, 42b, 42c, 42d, 42c, 4 f 42g, 42h ), de metanfetaminas (43a, 43b, 43c, 43d, 43c, 43f, 43g, 43h) y de morfina (44a, 44b, 44c, 44d, 44e, 44f, 44g, 44h). Los elementos de recuperación 4 están fijados en forma de puntos según una disposición de matriz bidimensional. Según Taranovaet al.,la mezcla de reacción 2 está presente en dicho sistema de recuperación 3, en una forma liofilizada, aguas arriba de dichos elementos de recuperación 4 fijados en dicho sistema de recuperación 3 con respecto a un sentido de migración M de un líquido que comprende la muestra E que va a someterse a prueba en la mezcla de reacción 2. Según este documento anterior, los elementos de recuperación dispuestos en una misma fila, a saber que tienen la misma coordenada Y, son específicos para el mismo analito.
La figura 2 representa un medio de diagnóstico 1 según la presente invención e ilustra el posicionamiento de los elementos de recuperación 4 y 5 en un sistema de recuperación 3 en forma de un soporte sólido con respecto a un sentido de migración M, estando los elementos de recuperación 4 y 5 fijados en forma de puntos según una disposición de matriz bidimensional. Según la presente invención, la mezcla de reacción 2 está prevista en un recipiente distinto con el que se pone en contacto una muestra E que va a someterse a prueba para obtener un líquido, antes de sumergir el sistema de recuperación 3 en el líquido obtenido.
La figura 3 ilustra en detalle el sistema de recuperación 3 según la presente invención en el que las ubicaciones de recuperación 4 y 5 están dispuestas según una disposición de matriz bidimensional en forma de puntos que tienen un diámetro definido, estando cada uno de los puntos separados una distancia mínima. La disposición de matriz bidimensional se define según un sistema de coordenadas (X; Y) que presenta una primera coordenada X definida en un eje longitudinal (Al) de una longitud (L) de dicho sistema de recuperación 3 y una segunda coordenada Y definida en un eje longitudinal (AI) de una anchura (I) de dicho sistema de recuperación 3. Según una realización preferente, el sistema de recuperación 3 comprende, como mínimo, 12 ubicaciones de recuperación distintas (41 - 412) destinadas a la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de, como mínimo, 12 analitos de clases distintas presentes en una muestra E y, como mínimo, tres ubicaciones de recuperación 5 destinadas a un control del umbral de detección o que sirven como calibrador. Además, cada una de las ubicaciones de recuperación (41- 412 y 51 - 53) está dispuesta por duplicado (41a; 41b - 412a; 412b).
Evidentemente, la presente invención no se limita de ninguna manera a las realizaciones descritas anteriormente y pueden aportarse muchas modificaciones a las mismas sin salir del contexto de las reivindicaciones adjuntas.
Realizaciones según la invención - Ejemplos
Ejemplo 1: ejemplo de composición de un tampón para la mezcla de reacción y ejemplo de un procedimiento de preparación de la mezcla de reacción
Tabla 1:
A este tampón se le añaden las moléculas de reconocimiento y/o los ligandos competidores. Tras la incubación de la mezcla durante una noche a 4 °C, se liofiliza. Durante la realización del ensayo, se añadirán 250 pl de muestra que va a someterse a prueba a la mezcla de reacción así obtenida.
Ejemplo 2: ejemplo de acoplamiento de las moléculas de reconocimiento al fluoróforo rodamina B
Los receptores “Beta” y “Tetra” y los oligonucleótidos de ADN se obtienen según el procedimiento descrito en la Patente EP1712914A1.
Se purifican los anticuerpos monoclonales en una columna de proteína A o proteína G en función de la especie y del isotipo. A continuación, se almacenan los anticuerpos a -20 °C en tampón de fosfato 10 mM, NaCl 140 mM, pH 7,4.
La rodamina B utilizada presenta un residuo ésteres N-hidroxisuccinimidílicos (NHS) que tiene la particularidad de reaccionar con los grupos amina de las proteínas de pH básico.
Se someten las moléculas de reconocimiento (anticuerpos y/o receptores) a diálisis durante una noche en un tampón de carbonato 50 mM, pH 8,5.
Se disuelve el fluoróforo en DMF a 5 mg/ml.
Se ponen frente a frente la molécula de reconocimiento y el fluoróforo (la molécula de visualización) en una razón molar de aproximadamente 1/4 durante una hora protegidos de la luz.
Finalmente, se detiene la reacción química durante la diálisis de complejo con un tampón de fosfato 10 mM, pH 7,4.
Pueden realizarse otros tipos de uniones químicas, con fluorocromos que presentan un grupo maleimida o carboxilo.
Pueden utilizarse otros tipos de fluoróforos, tales como FITC, Alexa, DyLight, ...
El acoplamiento de las moléculas de reconocimiento también puede realizarse con nanopartículas colorimétricas (nanopartículas de oro, látex, carbono, ...), tanto mediante acoplamiento covalente como mediante adsorción electrostática.
Ejemplo 3: ejemplo de composición de la mezcla de reacción y ejemplo de elementos de recuperación fijados en el sistema de recuperación
Tabla 2:
Ejemplo 4: ejemplo de realización del ensayo y resultados obtenidos
Se pone una muestra de leche en contacto con la mezcla de reacción (que comprende el tampón y las moléculas de reconocimiento y/o los ligandos competidores en forma liofilizada) durante 3 minutos a 30 °C. A continuación, se sumerge el extremo aguas arriba en el sentido de migración del sistema de recuperación en la solución (que comprende la muestra y la mezcla de reacción). Después de una incubación de 10 minutos a 30 °C, se realiza la lectura de los resultados con la ayuda de un dispositivo óptico.
Los resultados se presentan en la tabla 3.
Tabla 3:

Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. Medio de diagnóstico inmunocromatográfico (1) para la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de una pluralidad de analitos presentes en una muestra (E) esencialmente líquida, que comprende:
- como mínimo, una mezcla de reacción (2) que contiene moléculas biológicas de reconocimiento y/o ligandos competidores marcados, como mínimo, con una molécula de visualización; y
- como mínimo, un sistema de recuperación (3) en forma de un soporte sólido al que se encuentran fijados ligandos competidores y/o moléculas biológicas de reconocimiento en ubicaciones de recuperación (4 y 5) distintas y conocidas que están dispuestas según una disposición de matriz bidimensional, de manera que se identifican, mediante la localización de dichas ubicaciones de recuperación (4 y 5) en dicho soporte, dichos analitos presentes en dicha muestra (E),
estando dicho medio de diagnóstico (1)caracterizado por que,
a) dicha disposición de matriz bidimensional se define según un sistema de coordenadas que presenta una primera coordenada (X) y una segunda coordenada (Y), de tal manera que cada ubicación de recuperación fijada en dicho soporte sólido permite la identificación de un analito distinto y con, para una misma coordenada X, varias ubicaciones de recuperación que comprenden, cada una, moléculas biológicas de reconocimiento o ligandos competidores diferentes, dispuestos según coordenadas Y diferentes y, con, para una misma coordenada Y, varias ubicaciones de recuperación que comprenden, cada una, moléculas biológicas de reconocimiento o ligandos competidores diferentes, dispuestos según coordenadas X diferentes;
b) para la detección y/o la cuantificación de un analito dado, está presente un par de diagnóstico constituido por un ligando competidor y por una molécula biológica de reconocimiento, de tal manera que dicha molécula biológica de reconocimiento se encuentra en dicha mezcla de reacción (2) y dicho ligando competidor está fijado, como mínimo, en una ubicación de recuperación (4), o a la inversa;
c) dicha, como mínimo, una molécula de visualización es una molécula que puede detectarse por fluorescencia;
d) dicha mezcla de reacción (2) está presente en un recipiente, siendo dicho recipiente distinto y estando separado de dicho sistema de recuperación (3), centrándose la interacción de la mezcla de reacción (2) con la muestra que va a analizarse (E) en dicho recipiente distinto de dicho sistema de recuperación (3) de tal manera que dicha muestra (E) interacciona completamente con la mezcla de reacción (2) antes de que el líquido así obtenido, formado por la mezcla de reacción y por la muestra, entre en contacto con el soporte sólido y, por lo tanto, con las ubicaciones de recuperación, y
e) dicho sistema de recuperación (3) comprende, como mínimo, 5 ubicaciones de recuperación (4) distintas destinadas a la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de, como mínimo, 5 analitos distintos presentes en una muestra, y, como mínimo, una ubicación de recuperación destinada a un control y/o un calibrador.
2. Medio de diagnóstico (1), según la reivindicación 1,caracterizado por quedichas ubicaciones de recuperación (4 y 5) están dispuestas según una disposición de matriz bidimensional en forma de puntos que presentan, cada uno, un diámetro comprendido entre 20 pm y 2 mm, preferentemente comprendido entre 100 y 500 pm, preferentemente entre 250 y 400 pm.
3. Medio de diagnóstico (1), según la reivindicación 1 o 2,caracterizado por quedicho sistema de recuperación (3) comprende, como mínimo, 10, preferentemente, como mínimo, 15 ubicaciones de recuperación (4) distintas destinadas a la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de, como mínimo, 10, preferentemente de, como mínimo, 15 analitos distintos presentes en una muestra, y, como mínimo, una ubicación de recuperación destinada a un control y/o un calibrador.
4. Medio de diagnóstico (1), según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3,caracterizado por quedicho sistema de recuperación (3) está en forma de un soporte sólido que comprende una membrana o un conjunto de membranas.
5. Medio de diagnóstico (1), según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por que dicha, como mínimo, una molécula de visualización está fusionada a dichas moléculas biológicas de reconocimiento y/o a dichos ligandos competidores mediante un acoplamiento químico y/o genético.
6. Medio de diagnóstico (1), según la reivindicación 5, caracterizado por que dicho acoplamiento químico y/o genético se realiza mediante, como mínimo, una fuerza electrostática, como mínimo, un enlace peptídico, como mínimo, un gen indicador o una combinación de los mismos.
7. Medio de diagnóstico (1), según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6,caracterizado por quedichos analitos se seleccionan entre el grupo constituido por restos de medicamentos, toxinas, virus, bacterias, hormonas, metales pesados, adulterantes, alérgenos y sus mezclas.
8. Medio de diagnóstico (1), según la reivindicación 7,caracterizado por quedichos analitos son restos de medicamentos y se eligen entre el grupo constituido por penicilinas, cefalosporinas, tetraciclinas, sulfamidas, aminoglicósidos, aminociclitoles, macrólidos, quinolonas, ionóforos, carbadox, nitrofuranos, fenicoles y sus mezclas.
9. Procedimiento para la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de una pluralidad de analitos presentes en una muestra (E) esencialmente líquida, que comprende las siguientes etapas: - poner en contacto una mezcla de reacción de un medio de diagnóstico, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, con la muestra (E) para obtener un líquido;
- incubar a una temperatura comprendida entre 0 y 70 °C, durante una duración inferior o igual a 15 minutos; - sumergir un extremo de un sistema de recuperación de un medio de diagnóstico, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el líquido;
- incubar a una temperatura comprendida entre 0 y 70 °C, durante una duración inferior o igual a 15 minutos; e
- interpretar de manera cualitativa y/o cuantitativa el resultado en el sistema de recuperación por medio de un dispositivo óptico.
10. Conjunto de diagnóstico para la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de analitos presentes en una muestra (E), que comprende un medio de diagnóstico (1), según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8,caracterizado por quecomprende, además, un dispositivo de lectura óptica de un soporte sólido (3) amovible, que comprende:
- una ubicación para recibir dicho soporte sólido (3);
- una unidad óptica para analizar dicho soporte sólido (3) y que comprende:
o una primera fuente luminosa para emitir según una intensidad de emisión y en un primer intervalo de longitud de onda un primer haz luminoso hacia dicha ubicación;
o un sistema de obtención de imágenes que comprende un detector óptico para proporcionar una imagen de una zona de visualización, comprendiendo dicha zona de visualización, como mínimo, una porción de dicha ubicación;
o un filtro para filtrar un intervalo de longitud de onda definido y posicionado entre la ubicación y dicho sistema de obtención de imágenes;
- medios de comunicaciones para obtener una información relativa a un soporte sólido (3);
- medios de selección para:
o seleccionar, a partir de una lista de analitos predefinidos correspondientes a dichas ubicaciones de recuperación fijadas en el soporte sólido (3), una selección de analitos que van a detectarse y/o a cuantificarse para dicha muestra a partir de un mismo soporte sólido (3);
- medios de tratamiento de imagen de dicha imagen para:
o determinar, a partir de la información relativa a dicho soporte sólido (3) que va a leerse, un número finito de subconjuntos de dicha imagen, correspondiendo cada subconjunto a un analito;
o proporcionar datos relativos a intensidades luminosas procedentes de dichos subconjuntos;
- medios de determinación para:
o calcular, para cada subconjunto correspondiente a un analito seleccionado entre dicha selección de analitos, una intensidad de subconjunto;
o determinar, basándose en dicha intensidad de subconjunto, información de analitos de dicha muestra para cada subconjunto correspondiente a un analito seleccionado entre dicha selección de analitos;
- medios de transmisión configurados para transmitir dicha información de analitos de dicha muestra analizada para cada subconjunto correspondiente a un analito seleccionado entre dicha selección de analitos.
11. Conjunto de diagnóstico, según la reivindicación 10,caracterizado por queel dispositivo óptico comprende además:
- medios que permiten leer un perfil de selección;
ypor que, dichos medios de selección están configurados para realizar dicha selección de analitos basándose en dicho perfil de selección.
12. Conjunto de diagnóstico para la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de analitos presentes en una muestra (E), que comprende un medio de diagnóstico (1), según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8,caracterizado por quecomprende, además, un dispositivo de lectura óptica de un soporte sólido amovible, que comprende:
- una ubicación para recibir dicho soporte sólido (3);
- una unidad óptica para analizar dicho soporte sólido (3) y que comprende:
o una primera fuente luminosa para emitir según una intensidad de emisión y en un primer intervalo de longitud de onda un primer haz luminoso hacia dicha ubicación;
o un sensor de intensidad luminosa para medir la intensidad de emisión emitida por dicha primera fuente luminosa;
o un medio de realimentación para modular dicha intensidad de emisión de dicha primera fuente luminosa en función de la intensidad de emisión medida por dicho sensor de intensidad luminosa de manera que dicha primera fuente luminosa emite una intensidad objetivo;
o un sistema de obtención de imágenes que comprende un detector óptico para proporcionar una imagen de una zona de visualización, comprendiendo dicha zona de visualización, como mínimo, una porción de dicha ubicación;
o un filtro para filtrar un intervalo de longitud de onda definido y posicionado entre la ubicación y dicho sistema de obtención de imágenes;
- medios de tratamiento de imagen de dicha imagen para:
o determinar un número finito de subconjuntos de dicha imagen,
o proporcionar datos relativos a intensidades luminosas procedentes de dichos subconjuntos;
- medios de determinación para:
o calcular, para cada subconjunto, una intensidad de subconjunto, y
- medios de transmisión para transmitir una información relativa a dicha intensidad de subconjunto para cada subconjunto.
13. Utilización de un medio de diagnóstico (1), según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, para la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de, como mínimo, 5 analitos presentes en una muestra (E), preferentemente de, como mínimo, 10, preferentemente de, como mínimo, 15 analitos pertenecientes a clases distintas, que forman parte de familias de analitos diferentes o no.
14. Utilización de un conjunto de diagnóstico, según cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, para la detección y/o la cuantificación respectiva, simultánea y específica de clases de, como mínimo, 5 analitos presentes en una muestra (E), preferentemente de, como mínimo, 10, preferentemente de, como mínimo, 15 analitos pertenecientes a clases distintas, que forman parte de familias de analitos diferentes o no.
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