JP2023546076A - 呼吸器感染症を検出するための方法及び器具 - Google Patents

呼吸器感染症を検出するための方法及び器具 Download PDF

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Abstract

イヌ感染性呼吸器病症候群に関連する病原体を、ケンネルコフなどの動物において検出及び診断するための方法及び装置が、本明細書に開示される。上記装置は、２又はそれを超えるアッセイストリップであって、それぞれが固体支持体上に２又はそれを超える別個の反応ゾーンを含み、第１の別個の反応ゾーンが対照分析物捕捉剤を含み、かつ第２の別個の反応ゾーンが標的分析物捕捉試薬を含み、前記標的分析物捕捉試薬が、イヌ感染性呼吸器病症候群（ＣＩＲＤＣ）抗原特異的抗体、ＣＩＲＤＣ抗原、又はそれらの断片である、アッセイストリップを含む側方流動装置であり得る。

Description

関連出願
本出願は、２０２０年１０月８日に出願された仮出願第６３／０８９，５２３号に関する優先権主張書類であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
背景
イヌ感染性呼吸器病症候群（ＣＩＲＤＣ）又はイヌ感染性気管気管支炎（ＩＴＢ）としても知られているケンネルコフは、イヌを冒す上気道感染症である。ＣＩＲＤＣは、世界中でイヌの最も一般的な感染性呼吸器疾患の１つであると考えられており、イヌが犬舎などの高密度集団環境に収容されている場合、大流行する可能性がある。病原体の範囲には、ウイルス及び細菌、例えば、イヌアデノウイルス２型（ＣＡＶ－２）、イヌパラインフルエンザウイルス（ＣＰＩＶ）、イヌコロナウイルス（ＣＣｏＶ）、イヌヘルペスウイルス１型（ＣＨＶ）、及び最も一般的には、細菌Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ（Ｂｂ）が含まれる。ケンネルコフによる感染は、イヌへの上気道及び下気道の上皮に定着するウイルス感染などの二次感染の素因となり、しばしばより重度の、時には致命的な呼吸困難をもたらす。
病原体の範囲には、特定の実験室試験によって検出及び区別されるウイルス及び細菌が含まれる。市販の診断試験がないため、ＣＩＲＤＣに関連する疾患因子の多くは、認識されておらず、報告されていないままである。
ワクチン接種の有病率にもかかわらず、ＣＩＲＤＣは、例えば、動物間の基礎となる感染の急速な伝染、及び結果として生じる二次性のより重度の呼吸器感染症に対する感受性の増加のために、依然として問題である。更に、感染に対する免疫の逓減は、以前にワクチン接種された動物の間でさえ起こる場合があり、ＣＩＲＤＣを引き起こす感染性因子に対する動物の免疫状態を評価する必要性を増幅する。したがって、ＣＩＲＤＣの進行又は伝染を減少させるための処置又は介入に関するガイダンスを提供するために、特に疾患又は感染の初期段階で、ＣＩＲＤＣを検出するための方法及び装置が依然としてかなり必要とされている。
要旨
一部の態様では、本開示は、試料を処理又は分析するための方法であって、試料が、それを必要とする対象からであり、方法が、試料を処理することであって、側方流動装置のうちの１又はそれを超える別個の区画において、イヌ感染性呼吸器病症候群（ＣＩＲＤＣ）を引き起こし得る１又はそれを超える病原体に関連する呼吸症状に関連する１又はそれを超える標的分析物に特異的に結合するように構成された側方流動装置を使用して、側方流動装置が、１又はそれを超える標的分析物に結合すると、１又はそれを超える別個の区画に検出可能なシグナルを生成するように構成される、処理することと、検出可能なシグナルを分析することであって、対象が呼吸症状を有するか、又は呼吸症状に対する免疫を有するかどうかを決定することと、を含む、方法を提供する。方法は、スワブを介して対象から試料を得ることを更に含み得る。試料は、唾液、眼排出物、鼻排出物、中咽頭液、含嗽液去痰剤、口腔液、歯肉溝滲出液、尿、汗、涙、血液、血清、便、胃液、滑液、及び痰からなる群から選択され得る。標的分析物は、１又はそれを超えるタンパク質を含み得る。１又はそれを超えるタンパク質は、ＣＩＲＤＣ病原体によって産生される抗原、ＣＩＲＤＣ病原体によって産生される病原性因子、ＣＩＲＤＣ病原体によって産生される病原性因子の断片、ＣＩＲＤＣ病原体又はその免疫原性断片であり得る。ＣＩＲＤＣ病原体は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス、及びイヌヘパシウイルスからなる群から選択され得る。抗原は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌ呼吸器コロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、及びイヌボカウイルスのうちの１又はそれを超える病原性因子であり得る。病原性因子は、糸状ヘマグルチニン（ｈｅｍａｇｌｕｔｔｉｎｉｎ）タンパク質（ＦＨＡ）、パータクチンタンパク質、分枝鎖脂肪酸タンパク質、ヘマグルチニンタンパク質、融合タンパク質、マトリックスタンパク質、スパイク糖タンパク質三量体タンパク質、膜タンパク質、核タンパク質、エンベロープ小膜ペントラマータンパク質、カプシドタンパク質、ファイバータンパク質、ペントンタンパク質、ヘキソンタンパク質、エンベロープタンパク質、カプシドタンパク質、ヘマグルチニン又はその融合タンパク質、マトリックスタンパク質、Ｈ３タンパク質、Ｎ２タンパク質、Ｎ８タンパク質、糖タンパク質、ＳＨタンパク質、微小管関連タンパク質（ＭＡＰ）、カルバモイルリン酸シンテターゼ（ＣＰＳ）タンパク質、セルロパスミン（Ｃｐ）タンパク質、又はそれらの免疫原性断片を含む群から選択され得る。標的分析物は、１又はそれを超える標的抗体を含み得る。１又はそれを超える標的抗体は、ＣＩＲＤＣ病原体の１又はそれを超える免疫原性成分に対する親和性を有する抗体を含み得る。標的抗体は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌ呼吸器コロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、及びイヌボカウイルスタンパク質のうちの１又はそれを超える病原性因子に対する親和性を有する抗体からなる群から選択され得る。病原性因子は、糸状ヘマグルチニン（ｈｅｍａｇｌｕｔｔｉｎｉｎ）タンパク質（ＦＨＡ）、パータクチンタンパク質、分枝鎖脂肪酸タンパク質、ヘマグルチニンタンパク質、融合タンパク質、マトリックスタンパク質、スパイク糖タンパク質三量体タンパク質、膜タンパク質、核タンパク質、エンベロープ小膜ペントラマータンパク質、カプシドタンパク質、ファイバータンパク質、ペントンタンパク質、ヘキソンタンパク質、エンベロープタンパク質、カプシドタンパク質、ヘマグルチニン若しくはその融合タンパク質、マトリックスタンパク質、Ｈ３タンパク質、Ｎ２タンパク質、Ｎ８タンパク質、糖タンパク質、ＳＨタンパク質、微小管関連タンパク質（ＭＡＰ）、カルバモイルリン酸シンテターゼ（ＣＰＳ）タンパク質、セルロパスミン（Ｃｐ）タンパク質、又はそれらの免疫原性断片を含む群から選択され得る。呼吸症状に対する対象のワクチン接種状態は不明であり得る。対象は、非ヒト動物であり得る。対象は、イヌ（Ｃａｎｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）、ブタ（Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）、ヨーロッパヤマネコ（Ｆｅｌｉｓ ｃａｔｕｓ）、アナウサギ（Ｏｒｙｃｔｏｌａｇｕｓ ｃｕｎｉｃｕｌｕｓ）及びウマ（Ｅｑｕｕｓ ｃａｂａｌｌｕｓ）からなる群から選択される属に属し得る。対象は、イヌであり得る。呼吸症状は、感染性気管気管支炎であり得る。感染性気管気管支炎は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルス感染であり得る。感染性気管気管支炎は、ウイルス感染であり得る。感染性気管気管支炎は、細菌感染であり得る。方法は、呼吸症状に対するワクチンを受けた対象における呼吸症状に対する防御免疫の発症を評価することを含み得る。分析することは、検出可能なシグナルを対照と比較して、試料中の１又はそれを超える標的分析物の存在を決定することを含み得る。比較することは、側方流動装置によって生成された検出可能なシグナルのデジタル画像を分析することを含み得、デジタル画像は、対照を識別するためのコードを含む。分析することは、訓練されたアルゴリズムによって実行され得、デジタル画像は、コンピュータを介して訓練されたアルゴリズムに送信される。方法は、第２の時点で対象から第２の試料を得ることと、呼吸症状に対する免疫の持続時間を評価するために側方流動装置を使用して第２の試料を分析することと、を含み得る。側方流動装置は、１又はそれを超える捕捉剤を含み得る。１又はそれを超える捕捉剤は、呼吸症状に関連する１又はそれを超える抗原を含み得る。１又はそれを超える捕捉剤は、呼吸症状に関連する抗原に結合するように構成された１又はそれを超える抗体を含み得る。
本明細書では、試料を処理又は分析するためのシステムであって、試料が、それを必要とする対象からであり、（ｉ）２又はそれを超えるアッセイストリップであって、それぞれが固体支持体上に２又はそれを超える別個の反応ゾーンを含み、第１の別個の反応ゾーンが対照分析物捕捉剤を含み、かつ第２の別個の反応ゾーンが標的分析物捕捉試薬を含み、標的分析物捕捉試薬が、イヌ感染性呼吸器病症候群（ＣＩＲＤＣ）抗原特異的抗体、ＣＩＲＤＣ抗原、又はそれらの断片である、アッセイストリップと、（ｉｉ）試料投入ポートであって、２又はそれを超えるアッセイストリップが試料投入ポートの周りに配置され、側方流動装置が、対照分析物捕捉剤が対照分析物に結合すると、又は標的分析物捕捉剤が標的分析物に結合すると、検出可能なシグナルを生成するように構成され、検出可能なシグナルが、コンピュータに送られ、コンピュータプログラムによって分析されて、ＣＩＲＤＣ抗原、抗体又はその断片の存在又は非存在を決定する、試料投入ポートと、を含む側方流動装置を含む、システムが開示される。コンピュータは、対象が呼吸症状を有する、呼吸症状を発症するだろう、又は呼吸症状に対する免疫を有する、という尤度を出力し得る。システムは、対照分析物捕捉剤によって結合された対照分析物に結合するように構成された第１のレポーター分子と、標的分析物捕捉剤によって結合された標的分析物に結合するように構成された第２のレポーター分子と、を更に含み得る。第１のレポーター分子及び第２のレポーター分子は、標的分析物又は対照分析物に結合すると、２又はそれを超える別個の反応ゾーンの別個の反応ゾーンで検出可能なシグナルを生成することができるものであり得る。第１のレポーター分子又は第２のレポーター分子は、コロイド金、プロテインＡ、酵素、又は指示薬色素を含み得る。検出可能なシグナルは、蛍光シグナル又は比色変化であり得る。生物学的試料は、唾液、鼻排出物、口腔内分泌物、中咽頭液、含嗽液去痰剤、口腔液、歯肉溝滲出液、尿、汗、涙、血液、血清、便、胃液、滑液、及び痰からなる群から選択され得る。対照分析物捕捉剤は抗体であり得、かつ標的分析物捕捉剤が抗体である。対照分析物捕捉剤は、ＩｇＡであり得る。対照分析物は抗原であり得、かつ標的分析物は抗原であり得る。標的分析物は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパー、イヌインフルエンザ、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスの病原性因子であり得る。病原性因子は、糸状ヘマグルチニン（ｈｅｍａｇｌｕｔｔｉｎｉｎ）タンパク質（ＦＨＡ）、パータクチンタンパク質、分枝鎖脂肪酸タンパク質、ヘマグルチニンタンパク質、融合タンパク質、マトリックスタンパク質、スパイク糖タンパク質三量体タンパク質、膜タンパク質、核タンパク質、エンベロープ小膜五量体タンパク質、カプシドタンパク質、ファイバータンパク質、ペントンタンパク質、ヘキソンタンパク質、エンベロープタンパク質、カプシドタンパク質、ヘマグルチニン又はその融合タンパク質、マトリックスタンパク質、Ｈ３タンパク質、Ｎ２タンパク質、Ｎ８タンパク質、糖タンパク質、ＳＨタンパク質、微小管関連タンパク質（ＭＡＰ）、カルバモイルリン酸シンテターゼ（ＣＰＳ）タンパク質、及びセルロパスミン（Ｃｐ）タンパク質を含む群から選択され得る。標的分析物は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス、イヌヘパシウイルス、又はイヌ（Ｃａｎｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）によって産生される病原性因子の断片であり得る。病原性因子は、イヌ（Ｃａｎｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）動物において、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスによって産生される構造タンパク質、細胞膜タンパク質又は毒素であり得る。対照分析物捕捉剤は抗原であり得、標的分析物捕捉剤は抗原であり得る。対照分析物は抗体であり得、標的分析物は抗体であり得る。対照分析物捕捉剤は、イヌＩｇＡであり得る。対照分析物は、抗ＩｇＡ抗体であり得る。標的分析物は、ＣＩＲＤＣ病原体に対して親和性を有する抗体又はその免疫原性断片からなる群から選択される抗体であり得る。ＣＩＲＤＣ病原体は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスであり得る。標的分析物は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス及びイヌヘパシウイルスからなる群の病原性因子に対して親和性を有する抗体からなる群から選択される抗体であり得る。側方流動装置は、免疫クロマトグラフィーアッセイストリップを含み得る。免疫クロマトグラフィーアッセイストリップは、ニトロセルロース膜を含み得る。免疫クロマトグラフィーアッセイストリップは、第１の別個の反応ゾーンにおいて標識捕捉剤－対照分析物コンジュゲートを形成し、第２の別個の反応ゾーンにおいて標識捕捉剤－標的分析物コンジュゲートを形成するように構成され得る。
本明細書では、１又はそれを超える呼吸症状に関連する１又はそれを超える標的分析物を検出するための装置であって、固体支持体上に固定化された１又はそれを超える標的分析物捕捉試薬を含み、１又はそれを超える標的分析物捕捉試薬が、イヌ感染性呼吸器病症候群（ＣＩＲＤＣ）抗原特異的抗体、ＣＩＲＤＣ抗原、又はそれらの断片であり、１又はそれを超える標的分析物捕捉試薬の各々が、装置の複数の別個の区画のうちの異なる別個の区画にあり、複数の別個の区画が、中央試料投入ポートに流体接続され、かつ装置が、１又はそれを超える標的分析物捕捉剤による１又はそれを超える標的分析物に結合すると、検出可能なシグナルを生成するように構成される、装置が開示される。固体支持体は、免疫クロマトグラフィーアッセイストリップを含み得る。免疫クロマトグラフィーアッセイストリップは、ニトロセルロースを含み得る。複数の標的及び対照分析物の別個の区画は、中央試料投入ポートの周りに輪状に１又はそれを超えるストリップ状に配置され得る。第１の対照分析物捕捉区画及び第１の標的分析物捕捉区画は、第１のストリップ上に配置され得、第２の対照分析物捕捉区画及び第２の標的分析物捕捉区画は、第２のストリップ上に配置され得、第１のストリップ及び第２のストリップは、中央試料投入ポートの周りに配置される。複数の別個の区画は、単一のストリップ内に存在し得、区画は、中央試料投入ポートに対して遠位に配置される。複数の別個の区画は、標的分析物区画が試料投入ポートの遠位のアッセイストリップ上に二次元アレイとして配列されるように配置され得る。複数の別個の区画は、各別個の標的分析物区画が別個の対照分析物区画に隣接して配置されるように配置され得る。複数の別個の区画は、各別個の標的分析物区画が別の標的分析物区画に隣接して配置されるように配置され得る。標的分析物区画は、単一の捕捉試薬を含み得る。標的分析物区画は、捕捉試薬の組み合わせを含み得る。装置は、少なくとも１２個の別個の標的分析物区画を含み得、各標的分析物の存在又は非存在は、異なるＣＩＲＤＣ病原体の存在又は非存在を示す。ＣＩＲＤＣ病原体は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス及びイヌヘパシウイルスからなる群から選択され得る。免疫クロマトグラフィーアッセイストリップは、取り外し可能であり得る。
あるいは、固相上の複数の標的及び対照分析物反応部位は、単一のカートリッジ内の単一のニトロセルロースストリップ上に別個の「ドット」として配置することができる。各ドット位置は、モノクローナル捕捉抗体、抗原分析物、及び標的生物の１つ及びそれらのタンパク質抗原の１つに固有のコロイド金指標を有するコンジュゲート検出器抗体で構成される特異的抗原捕捉反応を表す。例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ生物は、糸状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）、Ｐｅｒｔａｃｔｉｎ（ＰＲＮ）、及びＢｏｒｄｅｔｅｌｌａコロニー形成因子（Ｂｃｆａ）抗原標的を含む３つの特異的標的タンパク質を有することができる。この初めに、目標は、単一の分析装置内の１つより多くの検出部位を配列させることである。この場合、標的タンパク質に対する特異性を有する特異的モノクローナル抗体は、捕捉抗体として機能する別個のドットとしてニトロセルロースストリップに適用される。標的分析物が動物試料中に存在する場合、その抗原は捕捉されて免疫複合体を形成する。次に、コロイド金を用いた検出抗体コンジュゲートを用いて、装置で読み取り可能な反応物を作製する。それぞれ３つの異なるタンパク質分析物を含む１２の病原体をスクリーニングするために、３６個の別個のドットをアレイ状フォーマットに配列することができ、ここでは６×６又は４×９アレイなどの任意の適切な構成を使用することができる（図６）。
本明細書では、装置及び説明書を含むキットが開示される。キットは、対象から試料を得るための器具と、装置の試料投入ポートに装填する前に試料を安定化するための輸送流体と、を含むことができる。キットは、検出可能なシグナルを生成するための緩衝液を含むことができる。緩衝液は、シグナル生成試薬を含むことができる。輸送流体は、プロテアーゼ阻害剤及びエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含むことができる。
参照による組み込み
本明細書で言及されるすべての刊行物、特許、及び特許出願は、あたかも各個々の刊行物、特許、又は特許出願が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲に詳細に記載されている。本発明の特徴及び利点のより良い理解は、本発明の原理が利用される例示的な実施形態を説明する以下の詳細な説明、及び添付の図面を参照することによって得られるであろう。
図１は、ＣＩＲＤＣ感染に対する二相性応答の概略図を示す。
図２は、動物から得られた生体液中の１若しくはそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体又はその１若しくはそれを超える免疫原性成分の存在について及びそれによって感染の存在について試験するために使用することができる免疫クロマトグラフィーアッセイストリップを含む携帯型側方流動装置の概略図を示す。
図３は、動物に感染したときにＣＩＲＤＣ病原体に応答して生成される１又はそれを超える抗体の存在について試験するために使用することができる免疫クロマトグラフィーアッセイストリップを含む携帯型側方流動装置の概略図を示す。装置は、動物からの生体液、及び１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体に対する動物の免疫状態の試験試験を使用する。
図４は、本明細書に開示される装置を使用して、ＣＩＲＤＣ感染を引き起こし得る病原体の多重検出に関与する工程の概略図を示す。
図５は、本明細書に開示される装置の一例の概略図を示す。
図６Ａは、本明細書に開示される装置の一例の概略図を示す。図６Ｂは、本明細書に開示される装置の内部構成要素を示す。
図７は、診断データを保存及び分析することができるアプリケーションデータベースのためのバックエンド構造の一例を示す。
詳細な説明
生物学的試料中のＣＩＲＤＣを引き起こし得る病原体などの標的病原体の存在を検出するための装置、システム、キット及び方法が本明細書に記載される。以下の開示では、ＣＩＲＤＣ病原体は、例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスなどであり得る。装置、システム、キット及び方法は、イヌなどの動物由来の又は動物から得られた試料中の、ＣＩＲＤＣ病原体（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｏｓｅｐｔｉｃａ）などの目的の標的病原体の検出のための迅速試験（例えば、臨床検査又はポイントオブケア検査）に使用することができる。本明細書に開示される装置、システム、キット及び方法は、１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ又はイヌアデノウイルス２型）感染の多重検出を実行することができる。いくつかの態様では、本開示は、イヌなどの動物におけるＣＩＲＤＣ感染の早期検出のための装置、システム、キット及び方法を提供する。ＣＩＲＤＣ又はケンネルコフの早期検出は、他の疾患因子によって引き起こされる二次性呼吸器感染症に対する感受性の増加から動物を保護し得る。場合によっては、二次感染は、イヌアデノウイルス２型（ＣＡＶ－２）、イヌパラインフルエンザウイルス（ＣＰＩＶ）、イヌコロナウイルス（ＣＣｏＶ）、イヌヘルペスウイルス１型（ＣＨＶ）又はＰａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａによって引き起こされる。
いくつかの態様では、本開示は、ＣＩＲＤＣを引き起こし得る薬剤（例えば、イヌニューモウイルス）に対する動物の免疫状態を評価するための装置、システム、キット及び方法を提供する。装置、システム、キット及び方法は、１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）へのワクチンの投与後の動物における１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）に対する防御免疫の発症を評価するために、又は１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体へのワクチンの投与後の動物における１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）に対する免疫の持続時間を評価するために、使用され得る。本明細書に開示される装置、システム、キット及び方法は、１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）感染からの動物（例えば、イヌ）の継続的な保護を確実にするのに役立つ。装置、システム、キット及び方法は、ＣＩＲＤＣ感染を引き起こし得る１又はそれを超える薬剤に対する免疫の逓減を予防又は制限することによって、動物の集団（例えば、イヌ）における１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体感染の急速伝染を減少させることができる。
本開示は、保護抗体のレベルを評価するために、ＣＩＲＤＣ病原体（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ）に対するワクチン状態のマーカーとして役立つ免疫アッセイを提供する。この試験方法の適用はまた、ＣＩＲＤＣ病原体（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｏｓｅｐｔｉｃａ）へのワクチン接種のための最適な用量数及びスケジュールを決定するための有用なデータを提供し得る。本明細書に開示される方法は、ＣＩＲＤＣ病原体（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｏｓｅｐｔｉｃａ）に対するワクチン接種シリーズの各段階での抗体応答の進行に従い得る。抗体力価をモニタリングすることによって、本明細書中に開示される方法は、例えば、ワクチン有効性のために一連の注射が必要であるかどうか、保護的免疫化を維持するために年１回のブースターが必要とされるかどうか、又は代替的に、免疫化がどのくらい長く続くか、かつ／又は最大抗体力価が達成される一連の注射の時点を決定し得る。
別の態様では、本明細書の装置、システム、キット及び方法は、症候性又は急性疾患の動物における呼吸困難のウイルス性及び細菌性の原因因子を区別すること、並びに動物の疾患からの回復を評価することに適用可能であり得る。一態様では、本明細書に記載の方法は、動物（すなわち、イヌ）から生体液（すなわち、鼻スワブ）を得ること、かつ１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を迅速に検出することに関する。別の態様では、本明細書に開示される方法は、動物（すなわち、イヌ）から得られた生体液（すなわち、唾液）中のＣＩＲＤＣ病原体（例えばＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ）に対する１又はそれを超える抗体の迅速な検出を提供する。場合によっては、アッセイは、表面固定化捕捉試薬（すなわち、目的のＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ抗原に対する親和性を有する標識抗体）を含む固体支持体（すなわち、免疫クロマトグラフィーストリップ）上で行われ得る。試料中の抗原又は抗体の存在は、シグナルを生成することによって検出され、その後、手持ち式スキャナを使用して同じ位置で迅速に測定及び分析することができる。
本開示は、動物、特にイヌのＣＩＲＤＣ病原体曝露又は免疫状態を評価するための迅速、高感度、特異的、非浸潤的診断スクリーニングツールとして特に有用である。本開示の手持ち式インビトロ試験方法は、動物の集団及び近接に起因してＣＩＲＤＣのアウトブレイクの可能性がより高い訓練エリア及び収容エリアにおける動物の健康状態の監視に使用することができる。
したがって、本明細書に開示される装置、システム、キット及び方法は、イヌなどの動物間のＣＩＲＤＣ病原体（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）感染の伝染を診断及び評価し、それによって引き起こされる苦痛及び経済的損失を回避することに関連する様々な問題に対処する。得られたデータは、実験室報告を生成するために使用され得るか、又は獣医学疫学者によって使用されて、これまで認識が低く、あまり理解されていなかった、ＣＩＲＤＣをもたらす因子の生態学、有病率、発生率、及び地理的分布における知識のギャップを埋めることができる。
定義
他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語、表記並びに他の技術的及び科学的用語又は用語は、特許請求される主題が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有することが意図される。場合によっては、一般に理解される意味を有する用語は、明確性及び／又は容易な参照のために本明細書で定義され、本明細書にそのような定義を含めることは、当技術分野で一般に理解されるものとの実質的な違いを表すと必ずしも解釈されるべきではない。
本出願を通して、様々な実施形態が範囲形式で提示され得る。範囲形式での説明は、単に便宜及び簡潔さのためのものであり、本開示の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の説明は、すべての可能な部分範囲並びにその範囲内の個々の数値を具体的に開示したと見なされるべきである。
本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかにそうでないことを指示しない限り、複数の言及を含む。例えば、「試料」という用語は、それらの混合物を含む複数の試料を含む。
用語「決定すること」、「測定すること」、「評価すること」、「評価すること」、「アッセイすること」及び「分析すること」は、測定の形態を指すために本明細書では交換可能に使用されることが多い。これらの用語は、要素が存在するか否かを決定すること（例えば、検出）を含む。これらの用語は、定量的、定性的又は定量的及び定性的な決定を含み得る。評価は、相対的又は絶対的であり得る。「存在を検出すること」は、文脈に応じて存在するか否かを決定することに加えて、存在する何かの量を決定することを含むことができる。
「捕捉試薬」、「捕捉剤」及び「捕捉分子」という用語は、本明細書では互換的に使用される。
「標的反応ゾーン」及び「標的分析物捕捉ゾーン」という用語は、本明細書では互換的に使用される。
本明細書で使用される場合、「処置」又は「処置すること」という用語は、レシピエントにおいて有益な又は所望の結果を得るための薬学的又は他の介入レジメンに関して使用される。有益な又は所望の結果には、治療的利益及び／又は予防的利益が含まれるが、これらに限定されない。治療的利益は、臨床徴候又は処置されている基礎障害の根絶又は改善を指し得る。また、対象が依然として基礎障害に罹患している可能性があるにもかかわらず、対象において改善が観察されるように、基礎障害に関連する生理学的症状の１又はそれを超える根絶又は改善によって治療的利益を達成することができる。予防効果は、疾患又は症状の出現を遅延させること、予防すること、又は排除すること、疾患又は症状の発症を遅延させること、又は排除すること、疾患又は症状の進行を遅延させること、停止させること、又は逆転させること、又はそれらの任意の組み合わせを含む。予防的利益のために、特定の疾患を発症するリスクがある対象、又は疾患の１又はそれを超える生理学的症状を報告する対象は、この疾患の診断がなされていなくても、処置を受けることができる。
本明細書で使用されるセクションの見出しは、構成上の目的のためだけであり、記載された主題を限定するものと解釈されるべきではない。
抗原－抗体複合体
本開示は、本明細書に記載の装置、キット及び／又は組成物の１又はそれを超えるものを使用して、動物などの対象からの試料（例えば体液）中の１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体又はその１若しくはそれを超える免疫原性抗原（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ抗原）又は１若しくはそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体に対する抗体の存在又は非存在を検出する方法を含む。いくつかの実施形態では、対象はイヌである。
いくつかの実施形態では、対象は、呼吸症状の１又はそれを超える症状、例えば、重篤又は粘液膿性の鼻、口腔又は眼の分泌、くしゃみ、咳、高体温、吐き気、嘔吐、頻呼吸、呼吸困難、全身性疾患、嗜眠、及び食欲不振を有する。いくつかの実施形態では、対象は、以前にケンネルコフと診断されなかった。いくつかの実施形態では、対象は、以前にケンネルコフと診断された。
本明細書の方法は、家畜から得られた試料中のＣＩＲＤＣ病原体又はその１若しくはそれを超える免疫原性抗原又は１つ若しくは複数のＣＩＲＤＣ病原体に対する抗体の、存在又は非存在を検出するために実施され得る。いくつかの実施形態では、本方法は、イヌ（Ｃａｎｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）、ブタ（Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）、ヨーロッパヤマネコ（Ｆｅｌｉｓ ｃａｔｕｓ）、アナウサギ（Ｏｒｙｃｔｏｌａｇｕｓ ｃｕｎｉｃｕｌｕｓ）及びウマ（Ｅｑｕｕｓ ｃａｂａｌｌｕｓ）動物から得られた試料中のＣＩＲＤＣ病原体又はその１又はそれを超える免疫原性抗原、又はＣＩＲＤＣ病原体に対する抗体の、存在又は非存在を検出する。試料はまた、アカゲザル（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ）（ｒｈｅｓｕｓ ｍｏｎｋｅｙ）、カニクイザル（Ｍ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）、ミナミブタオザル（Ｍ ｎｅｍｅｓｔｒｉｎａ）、ミドリザル（Ｃｈｌｏｒｏｃｅｂｕｓ ａｅｔｈｉｏｐｓ）、ヒヒ（Ｐａｐｉｏ ｓｐｐ．）、コモンリスザル（Ｓａｉｍｉｒｉ ｓｃｉｕｒｅｕｓ）又はヨザル（Ａｏｔｕｓ ｔｒｉｖｉｒｇａｔｕｓ）から得ることもできる。
本明細書の方法は、Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、ｂ．ｐａｒａｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｂ．ｈｉｎｚｉｉ、Ｂ．ａｎｓｏｒｐｉｉ、Ｂ．ａｖｉｕｍ、Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉａｌｉｓ、Ｂ．ｆｌａｂｉｌｉｓ、Ｂ．ｈｏｌｍｅｓｉｉ、Ｂ．ｍｕｒａｌｉｓ、Ｂ．ｐｅｔｒｉｉ、Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｈｉｎｚｉｉ、Ｂ．ｓｐｕｔｉｇｅｎａ、Ｂ．ｔｒｅｍａｔｕｍ、Ｂ．ｔｕｍｂａｅ又はＢ．ｔｕｍｉｃｏｌａ．の存在又は非存在を検出するように修正され得る。いくつかの実施形態では、本方法は、Ｂ．ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの存在又は非存在を検出することを含む。本明細書の方法はまた、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスの存在又は非存在を検出するために使用され得る。
対象の１又はそれを超える体液から選択される試料中に存在する１又はそれを超える抗原を検出する、動物における呼吸器感染症の検出方法を本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、動物の１又はそれを超える体液から選択される試料中に存在する１若しくはそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体又はその１若しくはそれを超える免疫原性抗原（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）を検出する。体液は、唾液、血液（例えば、全血、血清、バフィーコート（すなわち、単核細胞））、尿、糞便、組織、創傷滲出液、膿瘍材料又は粘液であり得る。いくつかの実施形態では、体液は、唾液である。体液は、鼻、口腔及び結膜試料からであり得る。試料は、スワブで収集されてもよく、約０．５ｍＬ、１（ｌ）ｍＬ、１．５（ｌ．５）ｍＬ、２ｍＬ、２．５ｍＬ、又は３ｍＬの培地を有する収集チューブに加えられてもよい。各試料タイプの性能データは、別々に保持されてもよく、又はプールされてもよい。いくつかの実施形態では、体液試料を同じ収集チューブに添加する。いくつかの実施形態では、試料は新鮮な試料である。いくつかの実施形態では、試料を予め凍結したか、又は安定剤を用いて予め保存した。安定剤としては、（１）スクロース、トレハロース、ソルビトール及びマンニトールなどの糖、又は糖の組み合わせ、又はグリセリンなどの糖アルコールを挙げることができ、（２）凍結乾燥、真空遠心分離、言及される糖のいずれかの添加、若しくは糖の任意の組み合わせによる結晶化又はガラス化プロセスなどの糖を含む方法、（３）乾燥乳又は乳誘導体のようなブロッキング溶液は、界面活性剤又は洗剤を除去するか、又はニトロセルロースストリップの湿潤特性に影響を与える膜上のそれらの濃度を低下させることができ、（４）アルブミン又はＢＳＡのようなタンパク質及びＳＤＳ又はＴｗｅｅｎ（登録商標）２０のような界面活性剤は、コンジュゲートの再可溶化を促進してよく、試薬と分析物との間の非特異的結合を低減してよく、（５）尿のような高ｐＨ試料は、捕捉抗体及び検出抗体の感度及び特異性をシフトさせることができる高濃度緩衝塩での前処置を必要とする可能性が高く（例えば、Ｉ．ＯＭボレート緩衝液、ｐＨ９．５）、（６）メタノール、エタノール又はイソプロパノールの使用は、試薬適用の一貫性を改善し、タンパク質溶解度を低下させ、タンパク質の乾燥及び固定を促進することができる。ＣＩＲＤＣの試験対象の試料が可溶性及び不溶性物質を含有する場合、体液の可溶性部分は、当技術分野で公知の任意のプロトコルによって収集され得る。試料の可溶性部分は、一般に、濾過、抽出、遠心分離、又は単純な混合とそれに続く重量沈降を使用することによって収集され得る。例えば、試料は、哺乳動物によって自然に排泄されるか、そうでなければ放出されるか、又は哺乳動物から人工的に得られる体液であり得る。このような人工的な抽出は、哺乳動物を搾乳することによって、又は哺乳動物に注射器を注射し、流体を注射器に引き込むことによって行うことができる。一旦得られると、流体は、必要に応じて分画され得る（例えば、血清を全血から分画し、次いで試料として使用してもよい）。別の例として、試料は、哺乳動物を、例えば哺乳動物の口腔又は鼻腔などを綿球で拭くことによって得られ得る。更に別の例として、組織切片を生検によって得ることができる。
いくつかの実施形態では、唾液及び／又は口腔粘膜漏出液及び歯肉溝滲出液を緩衝液と混合する。試料が膜の全長を移動するときに最適な膜流量を確保するために、バルブピペットを用いて添加を行うことができる。刺激された唾液及びプロテアーゼ阻害剤／ＥＤＴＡ希釈緩衝液を混合して、試料の流れを促進することができる。一実施形態では、試料が膜の全長を移動するときに最適な膜流量を確保するために、バルブピペットによって添加されるように、２滴の緩衝液と混合された４滴の唾液及び／又は口腔粘膜漏出液及び歯肉溝滲出液を添加することができる。２滴（８０～１００μＬ）のプロテアーゼ阻害剤／ＥＤＴＡ希釈緩衝液と混合された４滴（１６０～２００μＬ）の刺激された唾液もまた、試料の流れを促進し得る。
動物から得られた生体液中のＣＩＲＤＣ病原体又はその１若しくは複数の免疫原性抗原（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ抗原）の存在又は非存在を、ＣＩＲＤＣ感染のマーカーとして検出する方法が本明細書で提供される。一実施形態では、本方法の工程は、動物から１又はそれを超える体液の試料を採取することと、試料中のＣＩＲＤＣ抗原又はその一部に親和性を有する少なくとも１つの抗体を含む固体支持体に試料を適用することと、少なくとも１つの標識抗原－抗体コンジュゲートの形成を可能にすることであって、コンジュゲートがシグナルを生成することができる、形成を可能にすることと、シグナルを検出可能なレベルまで生成することを可能にすることと、シグナルを検出することであって、試料中の抗原の存在が、シグナルの存在又は非存在によって決定されることと、を含む。
場合によっては、検出される病原体は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａであり得る。場合によっては、検出される病原体は、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスであり得る。
場合によっては、アッセイにおいてＣＩＲＤＣ感染のマーカーとして使用される抗原は、動物（例えば、イヌ）の病原体によって産生される病原性因子又はその断片であり得る。場合によっては、病原性因子は、病原体によって産生される構造タンパク質、細胞膜タンパク質又は毒素である。場合によっては、ＣＩＲＤＣ感染の検出に使用される抗原は、動物の病原体によって産生される免疫原性タンパク質であり得るが、病原性因子ではない。
場合によっては、検出される抗原は、ｐ６８タンパク質、糸状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）タンパク質、パータクチン（ＰＥＲ）タンパク質、線毛（ＦＩＭ）タンパク質、ボルデテラコロニー形成因子Ａ（Ｂｃｆａ）、気管コロニー形成因子、血清抵抗因子（ＢｒｋＡ）、Ｂｖｇ８タンパク質、Ｏ抗原タンパク質、アデニル酸シクラーゼ－ヘモリシン、皮膚壊死毒素、又はＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの気管細胞毒素であり得る。
場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、マトリックス（Ｍ）、ヘマグルチニン－ノイラミニダーゼタンパク質（ＨＮ）、融合タンパク質（Ｆ）、核タンパク質（ＮＰ）、又はイヌパラインフルエンザウイルスのマトリックスタンパク質（Ｍ）であり得る。場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、イヌ呼吸器コロナウイルスのスパイク糖タンパク質三量体タンパク質（Ｓ）、膜タンパク質（Ｍ）、核タンパク質（Ｎ）、又はエンベロープ（Ｅ）、小膜五量体タンパク質であり得る。場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、イヌアデノウイルス２型のカプシドタンパク質（Ｃ）、ファイバータンパク質、ペントンタンパク質若しくは周辺ヘキソンタンパク質（ＰＨ）、又はヘキソン（Ｈ）であり得る。場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、イヌヘルペスウイルスのエンベロープタンパク質（Ｅ）、主要カプシドタンパク質（Ｃ）、外被／内被タンパク質（Ｔ）であり得る。場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、イヌジステンパーウイルスのヘマグルチニン（Ｈ）、ヌクレオカプシド（Ｎ）、又は融合タンパク質（Ｆ）であり得る。場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、イヌインフルエンザウイルスのマトリックスタンパク質、核タンパク質（ＮＰ）、Ｈ３タンパク質、Ｎ２タンパク質又はＮ８タンパク質であり得る。場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、イヌニューモウイルスの糖タンパク質（Ｇ）、融合タンパク質（Ｆ）、マトリックスタンパク質（Ｍ）又はＳＨタンパク質であり得る。場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉのＭＡＰタンパク質又はＣＰＳタンパク質であり得る。場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、イヌボカウイルスのＣｐタンパク質であり得る。場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、イヌヘパシウイルスのＥ１（Ｅｌ）又はＥ２タンパク質であり得る。
場合によっては、動物（例えば、イヌ）におけるＣＩＲＤＣ感染の検出に使用される抗体は、動物（例えば、イヌ）に感染したときに病原体によって産生される抗原に対して特異的親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、抗体は、病原体によって産生される病原性因子であるタンパク質に対する親和性を示す。一例では、抗体は、動物（例えば、イヌ）に感染すると、病原体によって産生される免疫原性タンパク質に対する親和性を示す。
場合によっては、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ Ｐｅｒｔａｃｔｉｎに対して特異的親和性を有する抗体を感染の検出に使用することができる。１つの例では、アッセイにおけるＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ感染の検出に使用される抗体は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ糸状ヘマグルチニンに対する特異的親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ Ｏ抗原タンパク質に対する特異的親和性を示す抗体をアッセイに使用することができる。
場合によっては、ＣＩＲＤＣ感染の検出に使用される抗体は、イヌパラインフルエンザウイルスのヘマグルチニンタンパク質（ＨＮ）、融合タンパク質（Ｆ）若しくはマトリックスタンパク質（Ｍ）の免疫原性断片又はその免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、ＣＩＲＤＣ感染の検出に使用される抗体は、イヌ呼吸器コロナウイルスのスパイク糖タンパク質三量体タンパク質、膜タンパク質、核タンパク質、又はエンベロープ、小膜五量体タンパク質の免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、ＣＩＲＤＣ感染の検出に使用される抗体は、イヌアデノウイルス２型のカプシドタンパク質、ファイバータンパク質、ペントンタンパク質又はヘキソンタンパク質の免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、ＣＩＲＤＣ感染の検出に使用される抗体は、イヌヘルペスウイルスのエンベロープタンパク質又は主要カプシドタンパク質の免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、ＣＩＲＤＣ感染の検出に使用される抗体は、イヌジステンパーウイルスのヘマグルチニン又は融合タンパク質の免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、ＣＩＲＤＣ感染の検出のために使用される抗体は、イヌインフルエンザウイルスのマトリックスタンパク質、Ｈ３タンパク質、Ｎ２タンパク質又はＮ８タンパク質の免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、ＣＩＲＤＣ感染の検出に使用される抗体は、イヌニューモウイルスの糖タンパク質、融合タンパク質、マトリックスタンパク質又はＳＨタンパク質の免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、ＣＩＲＤＣ感染の検出に使用される抗体は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉのＭＡＰタンパク質又はＣＰＳタンパク質の免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、ＣＩＲＤＣ感染の検出に使用される抗体は、イヌボカウイルスのＣｐタンパク質の免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、ＣＩＲＤＣ感染の検出に使用される抗体は、イヌヘパシウイルスのＥ１（Ｅｌ）又はＥ２タンパク質の免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。
場合によっては、本明細書に記載の方法は、動物に感染したときに病原体によって産生され得る複数の抗原を同時に同定することによる検出の特異性の改善を必要とする。例えば、アッセイは、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの複数の病原性因子又は免疫原性タンパク質の同時検出のための方法を使用し得る。場合によっては、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ糸状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）タンパク質又はその一部、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａパータクチン（ＰＥＲ）タンパク質又はその一部、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ線毛（ＦＩＭ）タンパク質又はその一部、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ気管コロニー形成因子又はその一部、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ血清抵抗因子（ＢｒｋＡ）又はその一部、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ（Ｂｖｇ８）タンパク質又はその一部、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ Ｏ抗原タンパク質又はその一部、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａアデニル酸シクラーゼ－ヘモリシン又はその一部、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ皮膚壊死毒素又はその一部、及びＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ気管細胞毒素又はその一部、から選択されるタンパク質の１又はそれを超える組み合わせを、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ感染の存在を同定するための抗原のサブセットとして使用することができる。
［００４６］場合によっては、１若しくはそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体又はその１若しくはそれを超える免疫原性成分（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ抗原）に対して特異的親和性を有する１又はそれを超える抗体を使用して、動物から得られた試料中の病原体の存在又は非存在を検出することができる。本明細書の開示は、複数のそのような抗原－抗体複合体の形成のための固体支持体を提供する。一実施形態では、固体支持体は、空間的に異なるゾーンを含み、各ゾーンは、ＣＩＲＤＣ病原体によって産生される異なる免疫原性タンパク質又は病原性因子に対する親和性を有する固有の抗体で前処理される。１つの実施形態では、記載される固体支持体は、免疫クロマトグラフィーアッセイストリップである。一実施形態では、アッセイストリップは、第１の抗体で前処理された（コーティングされた）第１のゾーンであって、第１の抗体が、第１のＣＩＲＤＣ病原体の第１のタンパク質又はその免疫原性断片に対して親和性を有する抗体である、第１のゾーンと、第２の抗体で前処理された（コーティングされた）第２のゾーンであって、第２の抗体が、第１のゾーンの第１の抗体とは異なる第２のＣＩＲＤＣ病原体の第２のタンパク質又はその断片に対して親和性を有する抗体である、第２のゾーンと、第３の抗体で前処理された（コーティングされた）第３のゾーンであって、第３の抗体が、第１のゾーンの第１の抗体及び第２のゾーンの第２の抗体とは異なる、第３のＣＩＲＤＣ抗原のタンパク質又はその断片のタンパク質に対して親和性を有する抗体である、第３のゾーンと、を含む。場合によっては、第１、第２、及び第３の病原体は、同じＣＩＲＤＣ病原体であり得る。場合によっては、第１、第２及び第３の病原体は、異なるＣＩＲＤＣ病原体であり得る。
一実施形態では、動物におけるＣＩＲＤＣ感染を１若しくはそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体又はその１若しくはそれを超える免疫原性断片の存在を測定することによって検出する方法は、以下の工程：動物から１又はそれを超える体液の試料を採取することであって、１又はそれを超える薬剤が試料中に存在する、採取することと、試料をカセットユニットに適用することであって、カセットユニットは、複数の免疫クロマトグラフィーアッセイストリップを更に受け入れることができる、適用することと、生物学的試料を複数の免疫クロマトグラフィーアッセイストリップに接触させることと、免疫クロマトグラフィーアッセイストリップに沿って側方流動アッセイを実行することであって、実行することが、アッセイストリップに沿って試料を側方流動させることを含み、アッセイストリップが、ＣＩＲＤＣ病原体によって産生される１又はそれを超える免疫原性タンパク質に対する親和性を有する少なくとも１つの膜結合検出器を含む少なくとも１つの膜結合ゾーンを含む、実行することと、少なくとも１つの標識－抗体コンジュゲートの形成を可能にすることであって、コンジュゲートが、スキャナによって検出され得る免疫クロマトグラフィーアッセイストリップに沿った１又はそれを超える固有の領域においてシグナルを生成することができる、可能にすることと、シグナルを生成することと、シグナルを検出することであって、試料中の作用物質の存在が、アッセイストリップ中の１又はそれを超える空間的に異なるゾーンにおけるシグナルの存在又は非存在によって決定されることと、を含む。
感染又はワクチン接種時に動物においてＣＩＲＤＣ病原体に対する応答として産生される１又はそれを超える抗体を同定することによって、以前にＣＩＲＤＣに罹患している可能性があるか、又は１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体（例えば、イヌ）に対するワクチンを受けている可能性がある動物における以前の又は現在のＣＩＲＤＣ感染を検出するための方法及びシステムであって、抗体が動物の１又はそれを超える体液から選択される試料中に存在する、方法及びシステムが本明細書で提供される。一態様では、本方法はまた、ＣＩＲＤＣを引き起こすことができる１又はそれを超える病原体に対する動物（例えば、イヌ）の免疫状態を評価することを可能にする。本明細書に記載の方法は、以下の工程：以前にＣＩＲＤＣに罹患している可能性があるか、又は１つ若しくは複数のＣＩＲＤＣ病原体に対してワクチン接種されている可能性がある動物から１又はそれを超える体液の試料を採取することと、試料を、試料が由来する動物においてそれに応答して産生され得る少なくとも１つの抗体に対して親和性を有する少なくとも１つの抗原（例えば、ＣＩＲＤＣ病原体又はその免疫原性タンパク質）を含む固体支持体に適用することと、少なくとも１つの標識抗原－抗体コンジュゲートの形成を可能にし、コンジュゲートがシグナルを生成することができる、形成を可能にすることと、シグナルを検出可能なレベルまで生成することを可能にすることと、シグナルを検出することであって、試料中の抗体の存在が、シグナルの存在又は非存在によって決定されることと、を含む。
場合によっては、本明細書に記載の方法は、ＣＩＲＤＣ感染を引き起こし得る１又はそれを超える病原体による同時感染時に動物の免疫系（例えば、イヌ）によって生成され得る複数の抗体を同時に同定することによって、生物学的試料中の以前の又は現在のＣＩＲＤＣ感染の検出の改善された特異性を必要とする。場合によっては、１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体又はその免疫原性断片を使用して、動物から得られた試料中の抗体の１つ又は複数と複合体を形成することができる。場合によっては、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの糸状ヘマグルチニン（ＦＨＡ）タンパク質、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａのパータクチン（ＰＥＲ）タンパク質、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの線毛（ＦＩＭ）タンパク質、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの気管コロニー形成因子、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ血清抵抗因子（ＢｒｋＡ）、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａのＢｖｇ８タンパク質、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａのＯ抗原タンパク質、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａのアデニル酸シクラーゼ－ヘモリシン、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ皮膚壊死毒素及びＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの気管細胞毒素に対する産生抗体の１又はそれを超える組み合わせは、動物（すなわち、イヌ）がＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａに感染した際に産生される、以前の又は現在の感染の存在及びその後の免疫応答を特徴付けるための抗体のサブセットとして使用することができる。
いくつかの実施形態では、動物によって１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体又はその免疫原性断片に対して生成された１又はそれを超える抗体の存在を測定することによって、動物における１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体によって引き起こされる現在又は以前のＣＩＲＤＣ感染を検出する方法は、以下の工程：動物から１又はそれを超える体液の試料を採取することであって、１又はそれを超える薬剤が試料中に存在する、採取することと、試料をカセットユニットに適用することであって、カセットユニットは、複数の免疫クロマトグラフィーアッセイストリップを更に受け入れることができる、適用することと、生物学的試料を複数の免疫クロマトグラフィーアッセイストリップに接触させることと、免疫クロマトグラフィーアッセイストリップに沿って側方流動アッセイを実行することであって、実行することが、アッセイストリップに沿って試料を側方流動させることを含み、アッセイストリップが、１又はそれを超えるＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ因子に対する親和性を有する少なくとも１つの膜結合捕捉剤を含む少なくとも１つの膜結合ゾーンを含む、実行することと、少なくとも１つの標識－抗体コンジュゲートの形成を可能にすることであって、コンジュゲートが、スキャナによって検出され得る免疫クロマトグラフィーアッセイストリップに沿った１又はそれを超える固有の領域においてシグナルを生成することができる、可能にすることと、シグナルを生成することと、シグナルを検出することであって、試料中の作用物質の存在が、アッセイストリップ中の１又はそれを超える空間的に異なるゾーンにおけるシグナルの存在又は非存在によって決定されることと、を含む。
本明細書の開示は、１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体又はその免疫原性断片に対する感染動物によって生成された１又はそれを超える抗体の検出のために固体支持体を使用する方法を提供し、固体支持体は、空間的に異なるゾーンを含み、各ゾーンは、動物からの生物学的試料中に存在し得る異なる抗体に対して親和性を有する固有の抗原（ＣＩＲＤＣ病原体の免疫原性成分）を含む。１つの実施形態では、記載される固体支持体は、免疫クロマトグラフィーアッセイストリップである。一実施形態では、アッセイストリップは、第１の抗原で前処理された第１のゾーンと、第２の抗原で前処理された第２のゾーンであって、第２の抗原が第１のゾーンの第１の抗原とは異なる第２のゾーンと、第３の抗原で前処理された第３のゾーンであって、第３の抗原が第１のゾーンの第１の抗原及び第２のゾーンの第２の抗原とは異なる第３のゾーンと、を含む。場合によっては、第１の抗原は、第２の抗原と同じであり得る。場合によっては、第１の抗原及び第２の抗原は、異なっていてもよい。
別の実施形態では、本方法は１又はそれを超える捕捉剤を、アッセイ基板に結合させることを含む。一例では、本方法は、固体支持体（例えば、ニトロセルロース膜）上の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２３、２４、２５、２６、２８、３０、３１、３２、３４、３６、３９又は４０の空間的に異なる位置（例えば、標的反応ゾーン）に１又はそれを超える捕捉剤（例えば、１又はそれを超えるＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ抗原に特異的な捕捉抗体）を結合させることを含む。一例では、本方法は、固体支持体（例えば、ニトロセルロース膜）上の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２３、２４、２５、２６、２８、３０、３１、３２、３４、３６、３９又は４０の空間的に異なる位置（例えば、標的反応ゾーン）に１又はそれを超える捕捉剤（例えば、１又はそれを超えるＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ抗体に特異的な捕捉抗原）を結合させることを含む。
一例において、本方法は、１又はそれを超える抗種抗体（例えば、イヌ抗ＩｇＡ）を基板（例えば、ニトロセルロースアッセイストリップ）上の異なる位置（例えば、対照ゾーン）に結合させることを含む。一例において、本方法は、１又はそれを超える対照抗体（例えば、内因性鼻タンパク質に対する抗体）を、基板（例えば、ニトロセルロースアッセイストリップ）上の異なる位置（例えば、対照ゾーン）に結合させることを含む。
一例において、本方法は、既知の予め測定された濃度のプローブ－レポーター対（例えば、抗体－ＨＲＰ）をアッセイストリップの基板上の固有の既知の位置（例えば、参照スポット）に結合させることを含む。
一例では、本方法は、１若しくはそれを超える標的ＣＩＲＤＣ病原体又はその免疫原性断片に特異的な１若しくはそれを超えるプローブ－レポーター対（例えば、抗体－酵素対）を基板（例えば、ニトロセルロースアッセイストリップ）上の異なる位置（例えば、コンジュゲートゾーン）に結合させることを含む。一例において、本方法は、１又はそれを超える標的抗体（例えば、感染動物のＣＩＲＤＣ病原体に対して生成された抗体）に特異的な１又はそれを超えるプローブ－レポーター対（例えば、抗原－酵素対）を、基板（例えば、ニトロセルロースアッセイストリップ）上の異なる位置（例えば、コンジュゲートゾーン）に結合させる工程を含む。
本開示の方法は、捕捉剤－標的分析物複合体の形成の検出を提供する。一態様では、試料からの抗原の結合後、捕捉抗体／標的抗原複合体は、任意の適切な方法によって検出される。異なる態様では、試料からの抗体の結合後、捕捉抗原－標的抗体複合体は、任意の適切な方法によって検出される。例えば、標的－分析物－捕捉剤複合体をレポーター－プローブ試薬（例えば、酵素－抗体コンジュゲート）と反応させ、続いて分析物を検出することができる（例えば、基質との反応時に）。
本明細書に開示される方法は、標的分析物捕捉剤（例えば、抗体－抗原）複合体の標的分析物（例えば、感染動物におけるＣＩＲＤＣ抗原に対する抗体）に対して親和性を有する追加のプローブでアッセイ膜を処理することを提供する。いくつかの実施形態では、この追加のプローブは、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ病原体又はその免疫原性断片に対する親和性を有する抗体である。いくつかの実施形態では、標的分析物－捕捉剤複合体は、捕捉剤又は標的分析物に結合し得る酵素コンジュゲートなどの指標試薬が検出可能な反応によって触媒されるときに検出される。必要に応じて、シグナル生成化合物などのレポーター試薬を、検出可能な標的分析物捕捉剤－レポーター試薬複合体の形成を可能にする条件下で標的分析物捕捉剤複合体に適用することができる。必要に応じて、捕捉剤は、標的分析物－捕捉剤－レポーター複合体の形成前にレポーター試薬で標識され得る。
ペプチドを固相上に固定化するための適切な方法としては、イオン性、疎水性、共有結合相互作用などが挙げられる。本開示の装置において使用される抗体は、例えば、抗体を固体支持体に結合させることを共有結合的又は非共有結合的に、直接的又は間接的に含む、当技術分野で公知の任意の方法論によって固体支持体上に固定化され得る。したがって、これらの抗体は、物理的吸着によって（すなわち、化学リンカーの使用なしで）固体支持体に結合され得るが、これらの抗体は、当業者に容易に知られている任意の化学結合（例えば、化学リンカーの使用）法によって固体支持体に固定化され得ることもまた事実である。一態様では、プローブ－レポーター対又は捕捉剤は、ウシ血清アルブミン又はキーホールリンペットヘモシアニンなどのタンパク質担体を使用して基板に接着され得る。
本開示の方法には、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、免疫蛍光アッセイ（ＩＦＡ）、赤血球凝集（ＨＡ）、蛍光偏光イムノアッセイ（ＦＰＩＡ）及びマイクロタイタープレートアッセイ（例えば、マイクロタイタープレートの１又はそれを超えるウェルで行われる任意のアッセイ）を含むが、これらに限定されない競合、直接反応又はサンドイッチ型アッセイに基づく方法が含まれるが、これらに限定されない。例えば、本開示のアッセイは、可逆的フロークロマトグラフィー結合アッセイを含み、これは、例えば、ＳＮＡＰ（登録商標）装置を使用することによって実施され得る。米国特許第５，７２６，０１０号を参照されたい。
他の実施形態では、本開示の方法は、競合アッセイを含む。一実施形態では、本方法は、標的反応ゾーンの１つ又は複数に捕捉分子（例えば、１又はそれを超えるＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ抗原に対する抗体）を固定化することと、固定化された捕捉抗体を試料由来の抗原及び抗原－レポーター対（例えば、抗原－酵素コンジュゲート）と同時に接触させることと、を含む。この実施形態では、標的反応ゾーンで検出される標識の量は、試料中の抗原の量に反比例し得る。
一実施形態では、試料が第１の吸収性フィルタパッド（例えば、試料パッド）に適用されると、試料は、（遠位端で）第２の吸収性フィルタパッドに向かって横方向に流れ、１又はそれを超える標的反応ゾーンにわたって洗浄する。不適切な試料（例えば、ヒト試料）の適用は、標的反応ゾーンに存在する捕捉剤又は試料中に存在する分析物と結合せず、対照ゾーンに存在する抗体とほとんど又は全く結合しないプローブ－レポーター対をもたらす。逆に、分析物が試料中に存在する場合、遊離分析物は、プローブ－レポーター対中のプローブ及び／又は標的反応ゾーンの捕捉剤に結合する。プローブ－レポーター対はまた、対照ゾーンにおいて抗体によって結合され得る。多くの分析物が存在する場合、標的反応ゾーン及び対照ゾーンは、プローブ－レポーター対との高い結合を示し得る。過剰な試料は、アッセイストリップの遠位端で第２の吸収性フィルタパッドに吸い込まれる。
一実施形態では、咳及び鼻排出物を含む呼吸器症状を有する動物からの唾液試料が得られる。試料は、輸送緩衝液を用いて安定化し、アッセイストリップの試料投入領域に添加する。場合によっては、１又はそれを超える第２の抗種抗体を添加することができる（例えば、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）。これらの第２の抗体は、固相捕捉抗体とは異なる種からであり得る。第２の抗体に特異的に結合し、固相抗体に特異的に結合しない第３の抗種抗体を添加する。第３の抗体は、酵素コンジュゲートなどの指標試薬を含み得る。洗浄工程は、各添加の前に実施され得る。発色団又は酵素基質を添加してもよく、発色させてもよい。色反応を停止し、例えば分光光度計を使用して色を定量化することができ、及び／又は色を人間の目によって主観的に評価することができる。
抗体
本開示は、動物（すなわち、イヌ）から得られた試料中に存在する１若しくはそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体又はその１若しくはそれを超える免疫原性断片の全部又は一部に対して惹起され、それらに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片を提供し、抗体及びその抗原結合断片を含む組成物も含む。動物から得られた試料と接触させると、これらの抗体及び抗原結合断片は、抗原（例えば、ＣＩＲＤＣ病原体又はその免疫原性断片）に特異的に結合することができる。一例では、病原体は、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｏｓｅｐｔｉｃａである。例えば、抗体及び抗原結合断片は、試料中に存在するＣＩＲＤＣ抗原に特異的に結合することができるが、ＣＩＲＤＣを引き起こさず、試料中に存在し得る病原体からの任意の抗原には特異的に結合することができない。本開示の抗体は、１若しくはそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体又はその１若しくはそれを超える免疫原性断片を捕捉するためだけに、１若しくはそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体又はその１若しくはそれを超える免疫原性断片を検出するためだけに、又はより好ましくは、１若しくはそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体又はその１若しくはそれを超える免疫原性断片を捕捉及び検出するためだけに、使用されるのに適している。
本開示の抗体は、例えばＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥを含む任意の抗体クラスに属してよく、当業者に公知の様々な技術のいずれかによって調製され得る。（例えば、Ｄｅａｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．８０：２３－３７（１９９８）；Ｄｅａｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３２：３６１－７９（１９９４）；Ｂａｉｌｅｇ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３２：３８１－８８（１９９４）；Ｇｕｌｌｉｃｋ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３２：３８９－９９（１９９４）；ＤｒｅｎｃｋｈａｈｎらＭｅｔｈｏｄｓ Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３７：７－５６（１９９３）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０：２３９－６５（１９９２）；ＷｒｉｇｈｔらＣｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：１２５－６８（１９９２）；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）；及びＭａｋｉｎｇ ａｎｄ Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｈｏｗａｒｄ ａｎｄ Ｋａｓｅｒ，ｅｄｓ．，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（２００６）に記載されており、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。）本開示の抗体は、必要に応じて、ポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、及びそれらの断片であり得ることも理解されるべきである。目的の抗原ペプチドに特異的なモノクローナル抗体は、例えば、目的の抗原ペプチドに対して所望の特異性を有する抗体を生成する細胞株を調製することによって得られ、精製され得る。
動物における抗体の産生を刺激するために使用される免疫原は、特定のタンパク質配列に由来する破壊された生物、合成ペプチド又は組換えタンパク質から精製されたタンパク質であり得る。更に、特定のタンパク質配列を研究して、最も免疫原性であると考えられるタンパク質配列の一部を組換えタンパク質にして免疫原として使用するように、より免疫原性の高いタンパク質配列の任意の部分及びより免疫原性が低いと予測される部分を同定することができる。
本開示の抗体はまた、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）又は抗体の抗原結合断片であり得る。抗体の抗原結合断片は、インタクト抗体の抗原結合部位又は可変領域を含むインタクト抗体の一部であり、この部分は、インタクト抗体のＦｅ領域の定常重鎖ドメインを含まない。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片が挙げられる。動物又は哺乳動物細胞からの産生及び精製に加えて、抗体、抗体断片又は非抗体足場は、ファージディスプレイ、リボソームディスプレイ又は細菌ディスプレイを含む様々なインビトロ技術に基づいて選択することができる。
二次抗体を含む抗体は、例えば、蛍光、化学発光、放射性、酵素、コロイド粒子、放射性同位元素及び生物発光標識を含む、当技術分野で公知の任意の種類の標識で標識され得る。本開示の様々な実施形態では、本開示の１又はそれを超える抗体は、酵素、コロイド粒子、放射性核種又はフルオロフォアで標識される。粒子状標識は、例えば、抗体にコンジュゲートされた着色ラテックス粒子、染料ゾル又は金ゾルであり得る。
固体支持体
１つの態様において、装置は固体支持体（例えば、アッセイストリップ）を含み、本開示の１又はそれを超える抗体が、固体支持体に固定化される。固体支持体は、例えば、側方流動装置の一部として含まれるマイクロタイタープレート又は基板のウェルの内側底面であってもよいが、これに限定されない。例示的なマイクロタイタープレートは、Ｉｍｍｕｌｏｎ ＩＢ ９６ウェルプレート（これは、マサチューセッツ州ミルフォードのＴｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから市販されている）であるが、当業者は、Ｉｍｍｕｌｏｎ ＩＢ ９６ウェルプレートではない多種多様な他のマイクロタイタープレートが、抗体の固定を可能にし、したがって本開示の固体支持体を提供するのに適していることを認識することを理解されたい。
固体支持体は、マイクロタイターウェル、ＳＮＡＰ（登録商標）装置の抗体固定化部分、磁気ビーズ、非磁気ビーズ、カラム、マトリックス、膜、合成又は天然繊維（例えば、ガラス又はセルロース系材料又は熱可塑性ポリマー、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン又はポリエステル）で構成された繊維マット、粒状材料（例えば、ガラス又は様々な熱可塑性ポリマー）で構成された焼結構造、又はニトロセルロース、ナイロン、ポリスルホンなど（一般に本質的に合成）で構成されたキャスト膜フィルムであり得る。膜フィルムは、ガラス繊維とすることができる。これらの基板材料は、フィルム、シート、又はプレートなどの適切な形状で使用されてもよく、又は紙、ガラス、プラスチックフィルム、又は布地などの適切な不活性担体上にコーティング又は接着又は積層されてもよい。ストリップは、小さい再細孔サイズ（５μｍ）及び遅い毛細管流量（例えば、Ｍｅｒｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ ＨＦ １８０又はＨＦ１３５）を有することができる。毛細管流量は、約１８０秒／ｃｍ～１３５（秒／ｃｍ）であり得る。毛細管流量は、約１００秒／ｃｍ～約２００秒／ｃｍであり得る。ストリップ寸法は、幅約１ｃｍ、長さ約５～約７ｃｍであってもよい。
固体支持体基板（例えば、アッセイストリップ）は、本開示の抗体の固定化のための任意の好適な材料であり得ることも理解されるべきである。例えば、固体支持体（例えば、アッセイストリップ）基板は、ビーズ、粒子、チューブ、ウェル、プローブ、ディップスティック、ピペットチップ、スライド、繊維、膜、紙、天然セルロース及び修飾セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、ガラス、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、プラスチック、マグネタイト又は当業者に容易に公知の任意の他の適切な材料であり得る。
一実施形態では、固体支持体は、適切な材料、例えば、均一サイズ（１０×５００ｍｍ）のニトロセルロース膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（商標）ＸＡ３Ｊ０７２１００）を含むことができる。一実施形態では、固体支持体は、膜の一端に配置されたコンジュゲート標識パッド（例えば、試料入力パッド）を含むことができる。吸収パッドは、膜の反対側の端部に配置されてもよく、毛細管作用によって試料、例えば唾液を膜に沿って引き込むのに役立ち得る。一実施形態では、プラスチック裏打ち材は、接着剤層及び膜の支持を提供することができ、組み合わせを個々の試験ストリップ（例えば、５×６０ｍｍ）に切断し、プラスチック製収容カセットに嵌め込むことができる。試料適用ウェルは、試料パッドの真上に流体連通して配置されてもよく、検出窓は、ニトロセルロース膜の上に配置されてもよい。
ニトロセルロース層は、側方流動システムの一部であってもよく、第１の吸収性フィルタパッドがアッセイストリップの近位端で基板に適用され、側方流動システムは、アッセイストリップを横切って一端から他端まで試料を吸い上げることができる。本開示の一実施形態では、第１の吸収性フィルタパッド、例えば試料パッドは、試料を受け取り、試料中の任意の大きな粒子状物質を除去し、試料を保持して、ゆっくりとアッセイに吸い込むことができる。
アッセイストリップは、アッセイストリップの遠位端に位置する第２の吸収性フィルタパッドを更に備える。第２の吸収性フィルタパッドは、アッセイストリップを横切って試料が吸い上げられた後に、試料を吸収及び保持し、試料が反対方向に流れるのを防ぎ、非特異的結合を生じさせることができる。
本開示の一実施形態では、アッセイストリップは、剛性又は半剛性であり得る固体支持体基板を有する。この基板は、ニトロセルロース層から作製されてもよい。しかしながら、層が、ブロッティング材料、毛細管、セルロース、シリカ、ポリスチレン、ラテックス、又はポリマーでコーティングされたガラスを含む、不溶性マトリックスである任意の材料であることは、本開示の範囲内である。
一実施形態では、本開示のアッセイストリップは使い捨てであり、カセットユニットに解放可能に挿入することが更に可能である。一実施形態では、本開示のアッセイストリップは、カセットユニットに取り付けられてもよい。カセットユニットは、分析される試料の数に応じて、１つ又は複数のアッセイストリップを受け入れることができる。
例示的な側方流動装置は、米国特許第５，７２６，０１０号に記載されている側方流動装置であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。一実施形態では、側方流動アッセイを実施するための装置は、メーン州ＷｅｓｔｂｒｏｏｋのＩＤＥＸＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．から市販されているＳＮＡＰ（登録商標）装置であってもよい。しかしながら、当業者は、ＳＮＡＰ（登録商標）装置ではなく、又は米国特許第５，７２６，０１０号に記載されていない多種多様な他の側方流動装置が、その上に抗体を固定化できることを認識するであろうことを理解されたい。したがって、本開示の装置として使用するのに適している。これらの装置は、例えば、コロイド金技術を使用する側方流動装置を含むことができる。
プローブ－レポーター対
一実施形態では、コンジュゲートは、アッセイストリップの基板に結合される。別の実施形態では、第１の吸収性フィルタパッド（例えば、試料パッド）は、プローブ－レポーター対を含むコンジュゲートを更に受容することができ、コンジュゲートは第１の吸収性フィルタパッドに適用される。一例において、コンジュゲートは、プローブ抗体に結合したアッセイレポーターから構成される。しかしながら、アッセイレポーターが、抗原、タンパク質、核酸、細胞、細胞内オルガネラ、及び他の生物学的分子に結合することができる分子を含む、標的分析物に対する親和性を有する任意の分子と会合することができることは、本開示の範囲内である。あるいは、アッセイは、アッセイレポーターが既知量の標的分析物にコンジュゲートされ、標的分析物に対して特異的親和性を有する抗体又は他の化合物を介して捕捉される競合設計として設定され得る。
一実施形態では、プローブ－レポーター対は、アッセイレポーターに結合したプローブの複数の対を含む。一実施形態では、プローブは、試料中に潜在的に存在するＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ抗原であり得る標的分析物に特異的な抗体である。別の実施形態では、プローブは、動物から得られた試料中に存在し得るＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ抗体であり得る標的分析物に特異的な抗原である。別の例では、プローブ－レポーター対は、アッセイレポーターに結合した既知量の標的分析物を含み得る。プローブ－レポーター対は、第１の吸収性フィルタパッド（例えば、試料パッド）内に乾燥させることができる。
一例において、アッセイレポーターは、シグナル生成化合物を含む指標試薬である。指標試薬は、プローブと会合したシグナル生成化合物（標識）を含み、発色剤、触媒、例えば酵素コンジュゲート、蛍光化合物、例えばフルオレセイン及びローダミン、化学発光化合物、例えばジオキセタン、アクリジニウム、フェナントリジニウム、ルテニウム及びルミノール、放射性元素、直接視覚標識、並びに補因子、阻害剤、磁性粒子などを含み得る。酵素コンジュゲートの例としては、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、ベータガラクトシダーゼなどが挙げられる。一実施形態では、アッセイレポーターは、量子ドット（カリフォルニア州ＨａｙｗａｒｄのＱｕａｎｔｕｍ Ｄｏｔ Ｃｏｒｐ．から入手可能なＱＤｏｔｓ（登録商標）、及びニューヨーク州ＴｒｏｙのＥｖｉｄｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから入手可能なＥｖｉＴａｇ（登録商標）Ｑｕａｎｔｕｍ Ｄｏｔｓを含む）としても知られる蛍光半導体ナノ結晶である。特定の標識の選択は重要ではないが、それ自体で又は１又はそれを超える追加の物質と組み合わせてシグナルを生成することができる。更に、本開示の他の代替の実施形態では、コンジュゲートプローブ－レポーター対は、コロイド的に安定化された高感度の小径粒子であり、生物学的リガンドを結合させることができる高い表面積／体積比を有し、プローブ（例えば、抗体又は抗原）に結合してプローブ－レポーター対を形成する標準的なアッセイレポーター（例えば、標識されたコロイド金、ラテックスビーズ、ランタニドドープセラミックナノ粒子）を含み得る。
一実施形態では、アッセイレポーターは、生物学的又は化学的部分の存在又は量、生物学的部分の構造、組成及び立体配座、環境における生物学的又は化学的部分の局在化、生物学的又は化学的部分の相互作用、生物学的又は化学的化合物の構造の変化、及び生物学的又は化学的プロセスの変化を検出することができる。一実施形態では、アッセイレポーターは、量子ドットの粒径及び標的分析物に対する親和性の選択によって所望のエネルギーに調整可能な特徴的なスペクトル発光を有する。一実施形態では、会合の位置及び性質は、アッセイレポーターの発光をモニタリングすることによって検出することができる。
一実施形態では、アッセイレポーターは、広い励起波長範囲を有し、単一の光源を有するシステムにおいてすべてのアッセイレポーターの同時励起を可能にし、経時的な分解又は光退色に耐性である。
１つの実施形態では、１又はそれを超えるプローブ－レポーター試薬は、本明細書中の装置に適用する前に、動物（例えば、イヌ）からの試料と混合される場合がある。別の実施形態では、上記のプローブ－レポーター対又は捕捉剤（例えば、所与の標的イヌヘパシウイルス抗原に特異的な抗体）は、固体支持体又は基板に直接的又は間接的に結合され得る。１つの例において、１又はそれを超えるイヌボカウイルス抗体に特異的な捕捉抗原は、固体支持体に直接的又は間接的に結合され得る。ペプチドを固相上に固定化するための適切な方法としては、イオン性、疎水性、共有結合相互作用などが挙げられる。本開示の装置において使用される抗体は、例えば、抗体を固体支持体に結合させることを共有結合的又は非共有結合的に、直接的又は間接的に含む、当技術分野で公知の任意の方法論によって固体支持体上に固定化され得る。したがって、これらの抗体は、物理的吸着によって（例えば、化学リンカーの使用なしで）固体支持体に結合され得るが、これらの抗体は、当業者に容易に知られている任意の化学結合（例えば、化学リンカーの使用）法によって固体支持体に固定化され得ることもまた事実である。一態様では、プローブ－レポーター対又は捕捉剤は、ウシ血清アルブミン又はキーホールリンペットヘモシアニンなどのタンパク質担体を使用して基板に接着され得る。
アッセイストリップは、アッセイストリップ上の空間的に異なるゾーンに基質結合捕捉剤を含む最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２３、２４、２５、２６、２８、３０、３１、３２、３４、３６、３９又は４０個の標的反応ゾーンを、更に含み得る。一実施形態では、標的反応ゾーンは、アッセイストリップの基板上に適用され、乾燥される。「捕捉剤」又は「捕捉分子」は、目的の「抗原」又は「抗体」に特異的な任意の化合物を指す。「捕捉剤」又は「捕捉分子」は、捕捉抗原又は捕捉抗体であり得る。一実施形態では、標的反応ゾーンは、アッセイストリップに結合した捕捉剤（例えば、抗体）を含んでよく、これは、試料が捕捉ラインを通過するとき、抗原－抗体親和性結合を介して、１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体（例えば、試料中に存在するイヌヘパシウイルス抗原）の１又はそれを超える免疫原性タンパク質を「捕捉する」ことができる。一実施形態では、標的反応ゾーンは、アッセイストリップに結合した捕捉剤（例えば、１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体の１又はそれを超える免疫原性断片）を含むことができ、これは、試料が捕捉ラインを通過するとき、抗原－抗体親和性結合を介して、感染時に（例えば、試料中に存在するイヌヘパシウイルス抗原）１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体に対して動物によって生成された１又はそれを超える抗体を「捕捉する」ことができる。一実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４又は１５個の対照ゾーンが装置内に存在してもよい。別の実施形態では、各対照ゾーンは、異なる捕捉分子を含み得る。別の実施形態では、対照ゾーンの少なくとも２つの捕捉分子は同じである。一実施形態では、アッセイストリップは、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの第１の基質に結合した捕捉の抗原を含む第１の標的反応ゾーンと、第１のゾーンの第１の捕捉の抗原とは異なるＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの第２の基質に結合した捕捉の抗原を有する第２の標的反応ゾーンと、第１のゾーンの第１の抗原及び第２のゾーンの第２の抗原とは異なるＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの第３の基質に結合した捕捉の抗原を有する第３の標的反応ゾーンと、を含み得る。別の実施形態では、アッセイストリップは、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの第１の基質に結合した捕捉抗体を含む第１の標的反応ゾーンと、第１のゾーンの第１の抗体とは異なるＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの第２の基質に結合した捕捉抗体を含む第２の標的反応ゾーンと、第１のゾーンの第１の抗体及び第２のゾーンの第２の抗体とは異なるＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの第３の基質に結合した捕捉抗体を含む第３の標的反応ゾーンと、を含み得る。
一実施形態では、アッセイストリップは、必要に応じて、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第１の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌパラインフルエンザウイルスの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第２の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌコロナウイルスの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第３の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌアデノウイルス２型の１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第４の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌヘルペスウイルスの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第５の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌジステンパーウイルスの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第６の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌインフルエンザウイルスの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第７の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌニューモウイルスの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第８の標的反応ゾーン、必要に応じてＭｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第９の標的反応ゾーン、必要に応じて、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第１０の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌボカウイルスの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第１１の標的反応ゾーン、及び必要に応じて、イヌヘパシウイルスの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第１２の標的反応ゾーンを含み得る。
一実施形態では、アッセイストリップは、必要に応じて、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌパラインフルエンザウイルスの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌコロナウイルスの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌアデノウイルス２型の１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌヘルペスウイルスの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌジステンパーウイルスの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌインフルエンザウイルスの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌニューモウイルスの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じてＭｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じて、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌボカウイルスの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、及び必要に応じて、イヌヘパシウイルスの１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも１つの標的反応ゾーンを含み得る。
別の実施形態では、アッセイストリップは、必要に応じて、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの１又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する１又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む第１の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌパラインフルエンザウイルスの１又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する１又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む第２の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌコロナウイルスの１又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する１又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む第３の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌアデノウイルス２型の１又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する１又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む第４の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌヘルペスウイルスの１又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する１又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む第５の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌジステンパーウイルスの１又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する１又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む第６の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌインフルエンザウイルスの１又はそれを超える免疫原性断片に対して親和性を有する１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗体を含む第７の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌニューモウイルスの１又はそれを超える免疫原性断片に対して親和性を有する１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗体を含む第８の標的反応ゾーン、必要に応じて、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓの１又はそれを超える免疫原性断片に対して親和性を有する１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗体を含む第９の標的反応ゾーン、必要に応じて、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉの１又はそれを超える免疫原性断片に対して親和性を有する１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗体を含む第１０の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌボカウイルスの１又はそれを超える免疫原性断片に対して親和性を有する１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗体を含む第１１の標的反応ゾーン、及び必要に応じて、イヌヘパシウイルスの１又はそれを超える免疫原性断片に対して親和性を有する１又はそれを超える基質に結合した捕捉抗体を含む第１２の標的反応ゾーンを含み得る。
別の実施形態では、アッセイストリップは、必要に応じてＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの１又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する１又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌパラインフルエンザウイルスの１又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する１又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌコロナウイルスの１又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する１又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌアデノウイルス２型の１又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する１又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌヘルペスウイルスの１又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する１又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌジステンパーウイルスの１又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する１又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌインフルエンザウイルスの１又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する１又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌニューモウイルスの１又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する１又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じてＭｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓの１又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する１又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じて、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉの１又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する１又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌボカウイルスの１又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する１又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも１つの標的反応ゾーン、及び必要に応じて、イヌヘパシウイルスの１又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する１又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも１つの標的反応ゾーンを含み得る。
ここで表Ｉに提供されるのは、様々なＣＲＤＩＣ病原体の免疫原性部分の部分リストである。ここに列挙される様々な抗原は、アッセイにおける標的分析物又は捕捉試薬として使用することができる。１又はそれを超えるこれらの免疫原性成分に対する親和性を有する抗体は、アッセイにおいて標的分析物又は捕捉剤として使用され得る。
Figure 2023546076000002
本開示の方法の他の実施形態では、競合アッセイが行われる。一実施形態では、捕捉分子は、既知の濃度の特定の標的分析物（例えば、抗原）であってもよく、試料中に存在する分析物に結合していないレポーター－プローブ対を更に捕捉することができる。したがって、標的反応ゾーンで放出される蛍光は、試料中に存在する分析物の量が増加するにつれて減少するだろう。競合アッセイの一実施形態では、捕捉抗原を標的反応ゾーンに固定化し、試料からの抗原及び抗原－レポーター対（例えば、抗原－酵素コンジュゲート）と同時に接触させる。標的反応ゾーンで検出されるアッセイレポーターの量は、試料中の抗原の量に反比例する。例えば、アッセイストリップは、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの第１の捕捉抗原を含む標的反応ゾーンを含むことができ、捕捉抗原は、試料中に存在する抗原に結合していない抗体－レポーター対（例えば、プローブ－レポーター対）を捕捉することができる。
アッセイストリップは、放射性マーカー；蛍光タグ（例えば、フルオレセイン、ヨウ化プロピジウム、ヘキスト染料、臭化エチジウム、メチルクマリン、又はテキサスレッド）で標識され、かつ特定の標的に向けられたモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体を含むタグとしての蛍光分子；及び蛍光マーカーでタグ化され、標的を可視化するために一次抗体に向けられた二次抗体を含む分析物を検出するために、従来のアッセイレポーターを代替的に使用してもよいことが更に企図される。
本開示の装置はまた、標的反応ゾーンとは異なる位置に固定化された様々な結合試薬を含み得る。例えば、アッセイストリップは、抗体－レポーター試薬若しくは抗原－レポーター試薬の種特異的（例えば、イヌボカウイルス）抗体部分、又は酵素標識プローブ－レポーター試薬の酵素部分を認識する免疫試薬（抗体、抗原又はポリペプチド）が、装置内の試薬の生存率を評価するための陽性対照として含まれ得る対照ゾーンを含む。例えば、陽性対照は、例えばヤギ又はマウスにおいて産生された抗セイヨウワサビペルオキシダーゼ抗体であり得る。一実施形態では、アッセイストリップは、既知濃度の市販の抗種抗体を有する「対照ゾーン」を含む。抗種抗体は、標的分析物が存在するか否かにかかわらず、レポータープローブ対と結合することができ、アッセイが適切に機能しているか否かを示すのに役立ち、試料中の標的分析物に結合したレポータープローブ対の量に比例してよく、アッセイに対して別のレベルの感度を提供する。更に、抗原抗体複合体の抗体部分が由来する種の非免疫メンバーから単離された試薬、例えば抗体は、免疫複合体（例えば、抗原－抗体複合体）形成の特異性を評価するための陰性対照として含めることができる。
本開示の複数の実施形態では、アッセイストリップはまた、アッセイストリップの基板上の、固有の既知の位置にスポットして乾燥した既知の予め測定された濃度のプローブ－レポーター対を含む参照スポットを含む。参照スポットは、円形スポット又は線を含む任意の形状又はサイズであってもよい。参照スポットにおけるプローブ－レポーター対の既知の予め測定された濃度はシグナル読み取り値を生成し、これは対照として機能し、リーダーが対照スポットによって生成されたシグナルの量を検出することを可能にする。参照スポットは更に、機器の較正を提供し、アッセイ試験結果をこの対照と比較することができる。参照スポットの使用は更に、現場での診断アッセイリーダーの自動較正を可能にする。
装置はまた、必要に応じて、固体支持体（例えば、アッセイストリップ）中の反応ゾーンから離れて未結合材料（例えば、動物試料の未反応部分、例えば、鼻抽出物の未反応部分、及び未結合捕捉試薬）を輸送するか、又はそうでなければ除去する（例えば、装置がマイクロタイタープレートを含む場合などには）ことを容易にする液体試薬を含み得る。液体試薬は、洗浄試薬であってよく、未結合物質を反応ゾーンから除去するためだけに役立つか、又は検出試薬を含んでよく、未結合物質の除去及び抗原検出の促進の両方に役立つ。例えば、抗体－ＨＲＰ又は抗原－ＨＲＰ（プローブ－レポーターコンジュゲート）の場合、検出試薬は、固体支持体上の標的反応ゾーンでプローブ－レポーターコンジュゲートと反応すると検出可能なシグナルを生成する基質を含む。あるいは、アッセイレポーターが、放射性、蛍光性又は光吸収性分子であるプローブ－レポーターコンジュゲートの場合、液体試薬は、未結合標識試薬を洗い流すことによって標的反応ゾーンでの複合体形成の検出を容易にする洗浄液として作用し得る。液体試薬は、限られた量の「阻害剤」、例えば検出可能なシグナルの発生を遮断する物質を更に含み得る。限られた量は、大部分又はすべての過剰の未結合物質が標的反応ゾーンから輸送され、その時点で検出可能なシグナルが生成されるまで、シグナル発生を遮断するのに十分な阻害剤の量であると定義される。
動物の試料からＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ抗原を特異的に結合及び単離するように設計されることに加えて、本開示の装置は、必要に応じて、１又はそれを超える他の診断試験を実施できるように設計されてもよい。例えば、固体支持体はまた、１若しくはそれを超える寄生生物、１若しくはそれを超えるウイルス、１若しくはそれを超える真菌、又は１若しくはそれを超える細菌を検出するための試薬を含み得る。１若しくはそれを超える非寄生虫、１若しくはそれを超えるウイルス、１若しくはそれを超える真菌、又は１若しくはそれを超える細菌を検出するための試薬は、例えば、１若しくはそれを超える非寄生虫、１若しくはそれを超えるウイルス、１若しくはそれを超える真菌、又は１若しくはそれを超える細菌に特異的な抗体によって認識される１若しくはそれを超える抗体又は１若しくはそれを超える抗原であり得る。
装置ユニット
装置ユニットは、カセットユニットとすることができる。カセットユニットは、試料の適用及びリーダー内部のアッセイストリップの走査のためにアッセイストリップを保持する。カセットユニットは、使い捨ての１回しか使えない装置であってもよく、又は使用後にアッセイストリップを交換できるように再充填可能であってもよい。いくつかの実施形態では、カセットユニットは、円形であり、ハブを軸方向ピボット点とし、スポーク状の構成でハブから半径方向に延在するアッセイストリップが取り付けられている。いくつかの実施形態では、カセットユニットは、楕円形、長方形、正方形又はアモルファスである。
この実施形態では、スポークは、ハブの中央試料ポートから外側に接続する。カセットユニットの設計は、各アッセイストリップが、各アッセイがハブからカセットユニットの外周に向かって横方向に流れることを可能にするように装着されるようなものである。本開示の一実施形態では、各カセットユニットは、固定的に取り付けられた複数の１回しか使えないアッセイストリップを保持する。カセットユニットは、診断アッセイリーダーから取り外し可能であり、保管又は廃棄されてもよい。本開示の別の実施形態では、カセットユニットは再使用可能であり、処理されたものが除去された後に新しい１回しか使えないアッセイストリップを受け取ることができる。
カセットユニットは、金属、ポリスチレン、ポリカーボネート、又は同様の耐久性のあるプラスチックなどの任意の軽量剛性材料で製造することができる。カセットにアッセイストリップを取り付けるいくつかの方法が提供されてもよい。一実施形態では、適切なサイズの浅いスロットをカセットユニット表面に形成することができ、その中にアッセイストリップを挿入することができる。別の実施形態では、アッセイストリップは、底面上に接着剤裏当てを用いて製造されてもよく、それらをカセットユニットディスク上に貼り付けることができる。
カセットユニットが、アッセイストリップの真下に配置された励起源を提供するリーダーユニットと共に使用される場合、カセットユニットは、少なくともアッセイストリップの真下で、励起エネルギーに対して透明でなければならない。例えば、スロットの下のカセットユニット材料は、透明プラスチックであってもよい。あるいは、カセットユニット本体全体が、透明プラスチックであってもよい。加えて、励起源は、発光を読み取る前にそれをオフにするための制御によってアッセイストリップの上方に配置されてもよい。
一実施形態では、カセットユニットは、試料が採取又は保存されるピペットから試料を受け取るように設計されている。ピペットが試料ポートに嵌合し、水が注入される。試料は、所定の体積が複数のアッセイストリップに選択的に向けられるように、試料分配器による適用時に同時に細分化又は分割される。アッセイストリップは、それぞれ単一の特定の分析物用であってもよく、又は何らかの重複性が使用されてもよい。本開示のこの実施形態では、試料分配器は、試料の一部を各アッセイストリップに分配するためにコーンの外面を下って複数のチャネルで構成されたコーンを備える。分配器は、等量の試料を放射するアッセイストリップの各々に送ることができるか、又は、正当な場合には、不等量の試料を分割して特定のアッセイストリップに向けることができる。
スポーク付きディスク以外のカセットユニット構成を使用してもよい。例えば、いくつかの用途では、並列スロット構成が望ましい場合がある。任意の代替カセットの構成は、それが使用されるリーダーの構成と一致しなければならない。一例では、装置は、標的反応ゾーンのアレイを有する単一のアッセイ基板を含んでよく、各標的反応ゾーンは、１又はそれを超える基質に結合した捕捉分子を含み得る。一構成において、標的反応ゾーンのアレイは、アッセイをよりロバストにするために、基質に結合した捕捉分子として抗原及び抗体の両方を含み得る。一例では、各ゾーンは、捕捉分子の固有の組成物を含み得る。一例では、標的反応ゾーンは、捕捉分子の非固有の組み合わせを含み得る。一例では、装置は、標的反応ゾーンのアレイを有する単一のアッセイ基板を含むことができ、各ゾーンは、少なくとも１つの基板に結合した捕捉抗原を含み、その各々は、１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体による感染時に動物において生成される１又はそれを超える抗体を同定することができる。一例では、装置は、各々が少なくとも１つのＣＩＲＤＣ病原体の少なくとも１又はそれを超える免疫原性成分を同定することができる基板結合捕捉抗体を含む標的反応ゾーンのアレイを含む少なくとも単一のアッセイ基板を含むことができる。
アレイは、ドットの二次元配列として構成されてもよい。一例では、標的反応ゾーンのアレイは、互いに平行に配列された一連のストリップであってもよく、各標的反応ゾーンは、１又はそれを超える基質結合捕捉分子（例えば、１又はそれを超えるＣＩＲＤＣ病原体の１又はそれを超える免疫原性成分を同定することができる抗体）を含む。一構成では、捕捉分子のアレイは、試料投入ゾーンの遠位及び試料を吸収してそれをアッセイ基板の遠位端に向かって引っ張るウィッキングパッドの近位に存在し得る。一構成では、装置は、標的反応ゾーンに到達する前に汚染物質の試料を濾過することができるフィルタパッドを備えることができる。構成は、ドットのアレイ（ゾーン）を含んでよく、各ドットは、ＣＩＲＤＣ抗原（例えばイヌボカウイルス）に応答して動物によって生成される少なくとも１つの抗体に対する親和性を有する少なくとも１つの抗原を含む。フィルタは、セルロース繊維又は織メッシュを含むことができる。フィルタは、セルロース、ガラス、又はプラスチック（ポリエステル、ポリプロピレン、ポリエチレン等）の繊維を薄いマットに圧縮することによって製造することができる。試料は、アッセイストリップへの分配のためにマニホールドトラフ内に流すことができ、又は試料は、滴下器又は他の装置から直接近位パッドに適用することができる。
一例では、基板はニトロセルロース膜ストリップであり得る。一例では、膜ストリップは、幅０．２インチ、幅０．５（ｏ．５）インチ、幅１（Ｉ）インチ、幅２インチ、幅３インチ、幅４インチ、又は幅５インチまでであってもよい。ストリップは、長さ１（Ｉ）インチ、長さ２インチ、長さ３インチ、長さ４インチ、長さ５インチ、又は長さ６インチまでであってもよい。
いくつかの態様では、図５に見られるように、装置５０１は、各々が別個の区画５０４、５０５を含む１又はそれを超えるストリップ５０３を含むことができる。ある別個の区画は、対照分析物結合剤５０４を含むことができる。別の別個の区画は、標的分析物結合剤５０５を含むことができる。装置は、中央試料入力５０２を有することができる。中央試料入力は、フィルタを含むことができる。装置は、コンピュータプログラムに対して装置の標的分析物を識別するためのコード５０６（例えば、ＱＲコード（登録商標））を含むことができる。
アッセイリーダー
一実施形態では、診断アッセイリーダーは手持ち式ユニットである。診断アッセイリーダーは、アッセイを読み取り、結果を記録し、後の検索及び分析のために複数の結果をアーカイブすることができる。一実施形態では、アッセイリーダーは、スロットを介して複数のアッセイストリップを含むカセットユニットを受け入れるように構成されてもよい。
更に別の実施形態では、診断アッセイリーダーは、ポータブルの閉鎖可能な器具ケース構成を含む。一実施形態では、構成は、保護ケース、バッテリストレージ、より大きなバッテリの収容、追加のカセットユニットのためのストレージ、及び追加のアレイストリップのためのストレージを含む１つ又は複数の特徴を含む。
少なくとも１つの実施形態では、診断アッセイリーダーは、パーソナルデータアシスタント又は携帯電話又はタブレットと同様のインターフェースを使用してユーザ入力データ（例えば、位置地点名、緯度、別個のＧＰＳからの経度、気象条件、日時）を受信することができるスクリーンディスプレイ及びメモリを含むことができる。ユーザデータは、タッチスクリーン又はキーパッドを介して入力することができる。
一実施形態では、診断アッセイリーダーは、アッセイストリップから情報を抽出するための励起源及び発光受容体を提供することができ、励起源は、分析に使用される分析レポーターのタイプに基づいて適切な範囲の励起を提供する源である。一実施形態では、励起源は、処理されるアッセイストリップの下方のリーダーケース内に配置された紫外線光源であってもよい。一実施形態では、アッセイリーダーは、所定の波長でストリップ上のコンジュゲートによって放射された蛍光エネルギーを感知し、ストリップの長さに沿って及び幅にわたって強度分布をマッピングするフォトダイオード検出器アレイ発光受容体を含み得る。次いで、強度分布が両方に記憶又は表示される。
一実施形態では、システムは、アッセイストリップを放射状配列を有する円形カセットに適合したリーダーを含む。一実施形態では、ストリップは、検出器アレイの下に配列され、励起源及び発光受容体を活性化することによって読み取りを行うことができる。読み取りが完了すると、カセットユニットは、次のストリップが検出器と配列するまで回転されてよく、そのアッセイストリップが読み取られ得る。
アッセイストリップの読み取り
ユーザがアッセイストリップを読み取る準備ができたら、１つ又は複数のアッセイストリップで満たされたカセットユニットを診断アッセイリーダーのスロットに挿入することができる。別の実施形態では、診断アッセイリーダーは、最初に、内部診断対照として参照スポットから指定されたシグナルを受信し得る。一実施形態では、参照スポットは、内部機器チェックとして、及びアッセイシグナルが比較されるシグナルコンパレータ又は参照として機能するために、各アッセイのアッセイストリップ又はカセットユニットに組み込まれてもよい。一実施形態では、参照スポットは、試験シグナルと相対標準（同じ周囲条件を条件とする）を提供することができる。
一実施形態では、参照スポットが読み取られると、シグナルは電子データ記憶ユニットに記憶され、アッセイストリップ上の対照ゾーン及び標的反応ゾーンからのシグナルと比較され得る。一実施形態では、特定の分析物のアッセイ開発中に、各アッセイ対照ゾーン及び標的反応ゾーンについてシグナル／濃度データを決定し、参照スポットと比較するために電子データ記憶ユニットにプログラムすることができる。一実施形態では、診断アッセイリーダーは、対照ゾーン及び標的反応ゾーンから放出されたシグナルを検出することができ、これらのシグナル読み取り値は、試験試料中の分析物の濃度に正比例し得る。
一態様では、図４に見られるように、前鼻、口腔、又は結膜からの生物学的試料！対象の領域が得られ（４０１）、安定化緩衝液と混合されて試験試料が生成される４０２。次いで、試験試料は、本明細書に記載の装置の試料投入ポートに配置される４０３。次いで、シグナル緩衝液を試料投入ポートに入れ、５～１０分間放置してストリップを飽和させる４０４。次いで、装置の写真がコンピュータプログラムによって受信される４０５。次いで、コンピュータプログラムは、対象が呼吸症状を有するか、呼吸症状に対する免疫を有する尤度を提供する４０６。
本開示の別の実施形態では、データは、輝度又は色の変化として報告されてもよい。一実施形態では、データは、ゲル電気泳動のような技術及び分析を使用して、試験ストリップに沿った水平距離の関数、又はアッセイストリップに沿ったプローブ－レポーターの移動の距離に基づいて収集及び解釈され得る。別の実施形態では、プローブ－レポーター対は、標的分析物に結合したか否かに応じて、ストリップに沿って異なる距離に移動する。２つの線の間のアッセイレポーターシグナルの強度の比率は、試料中の分析物の間接的な尺度となる。
データ分析
一実施形態では、分析物濃度の決定において、機器が標的反応ゾーン、対照ゾーン、及び参照スポットのシグナル強度を比較することを可能にした後、標的分析物が試料中に存在するかどうかをバイナリ用語で示す、バイナリプロファイルとしてアッセイデータを生成することができる。
別の実施形態では、アッセイデータを発光強度プロファイルとして生成することができ、装置は、分析物濃度の決定において、標的反応ゾーン、対照ゾーン、及び参照スポットのシグナル強度を比較することができる。本開示の少なくとも１つの実施形態では、これらの強度に基づいて、直接比などのアルゴリズム、又は試料濃度と逆に変化する勾配決定が、試料中に存在する分析物濃度を決定するために使用される。
一実施形態では、アルゴリズムを使用して、定量的又は半定量的な結果（例えば、１００万分の１又は１０億分の１での読み取りに表示される特定の分析物の検出）を生成することができる。更に、このデータポイントは、ユーザがデータポイントに関連する固有の英数字識別子を入力するように格納されてもよい（位置名、全地球測位システム座標、又は他の固有の識別子など）。電子データ記憶ユニットは、ユーザがスクリーンディスプレイ上でデータを呼び出し、データベースを作成するために有線又は無線接続を介してパーソナルコンピュータにデータをアップロードすることを可能にすることができる。
一実施形態では、いくつかのシグナル比較アルゴリズムが、診断アッセイリーダーの動作中に実行され得る。そのようなアルゴリズムの１つは、カセットに組み込まれた各アッセイについて、試料によって発せられたシグナルと予め適用された対照参照スポットとの間のシグナル比較であり得る。参照スポットは、ストリップ上の固有のアドレス（位置）で発光シグナルを提供することができる。このアドレスは、診断アッセイリーダーにプログラムされ得る。
アッセイストリップの長さを走査する前に、診断アッセイリーダーは、最初に参照スポットに移動して開始シグナルを受け取ることができる。診断アッセイリーダーは、参照スポットから正の閾値シグナル値を受け取ることができる。このシグナルが受信されないか、又は割り当てられた閾値を下回る場合、診断アッセイリーダーは、アッセイストリップの読み取りを続行しなくてもよい。一実施形態では、そのようなエラーモードに入ると、視覚シグナル又は可聴シグナルがオペレータに発せられ、及び／又はリーダーへの１又はそれを超える命令が読み出しディスプレイに表示され得る。同様に、対照シグナルが閾値以上である場合、リーダーは、ユーザがアッセイ手順を継続することを可能にすることができる。
次いで、参照スポットシグナルを、別個のアルゴリズムを使用して１又はそれを超えるアッセイシグナルと比較することができる。この第２のアルゴリズムは、アッセイストリップ上の少なくとも２つの別個の位置からのシグナルレベルを、対照参照スポットシグナルとも比較するために使用され得る。次いで、発光強度プロファイルが生成される。これにより、装置は、試料濃度の決定において標的反応ゾーン、対照ゾーン、及び参照スポットのシグナル強度を比較することができる。
シグナル強度の直接比を使用して、分析物レベルを決定することができる。例えば、陰性試料における１つの標的反応ゾーン：対照ゾーンのシグナル比は、１００：２（＝５０）である。中程度の陽性は、５０：５０（＝ｌ）となるだろう。高い正の値は２：１００（＝０．０２）となるだろう。一実施形態では、２つのゾーンシグナルを合計することもでき、この合計を参照スポットからのシグナルで除算する。これによりシグナルが正規化され、試料間の直接比較を行うことができる。別のアルゴリズムの可能性は、ゾーンを決定する点としての試料及び対照ゾーンピークに基づく勾配決定である。結果として生じる線の傾きは、試料濃度に反比例して変化する。
本開示の少なくとも１つの実施形態では、アッセイデータ（距離ごとのバイナリ又は強度プロファイル）は、分析物濃度の値を決定することができ、即時使用のためにスクリーンディスプレイ上に提示することができる。次いで、強度プロファイル及び濃度値は、キーパッド又はスクリーンディスプレイを介してユーザによって入力された任意の試験試料記述情報と共に、電子データ記憶ユニットの不揮発性メモリに記憶することができる。ディスプレイは、ユーザ装置であり得る。ユーザ装置は、モバイル装置（例えば、スマートフォン、タブレットなど）、コンピュータ（例えば、ラップトップコンピュータ、デスクトップコンピュータなど）、及び／又はウェアラブル装置（例えば、スマートウォッチなど）とすることができる。ユーザ装置は、ローカルエリアネットワーク（ＬＡＮ）、インターネット、イントラネット、エクストラネットなどのワイドエリアネットワーク（ＷＡＮ）、電気通信ネットワーク、データネットワーク、及び／又は任意の他の種類のネットワークなどのネットワークに接続することができるネットワーク装置であってもよい。ユーザ装置は、本明細書に記載の装置のデジタル画像を分析することができるコンピュータプログラムにアクセスするために使用することができる。ユーザ装置は、コンピュータプログラムが装置が比較されるべき対照値を識別することができるコード（例えばＱＲコード（登録商標））を有することができる。ＱＲコード（登録商標）を使用して、装置上の試験情報及び解釈基準を符号化することもできる。コンピュータプログラムは、分析の結果をユーザ装置に中継することができる。コンピュータプログラムは、分析の結果をユーザアカウントに保存することができる。コンピュータプログラムは、複数の分析の複数の結果をユーザアカウントに保存することができる。コンピュータプログラムは、経時的な症状の進行をモニタリングするのを助けるために、経時的な分析の結果を追跡及びグラフ表示することができる。コンピュータプログラムは、スマートフォン用に構成されたアプリケーション（例えば、アプリ）を介してアクセスすることができる。コンピュータプログラムは、デスクトップ又はスマートフォン上のディスプレイのために構成されたウェブサイトを介してアクセスすることができる。
本開示の好ましい実施形態の前述の説明は、例示及び説明の目的で提供されている。網羅的であること、又は本開示を開示された正確な形態に限定することは意図されていない。
以下の実施例は、例示のみを目的として含まれ、本開示の範囲を限定することを意図しない。
実施例Ｉ：動物のＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ免疫状態の評価
スワブを数秒間回転させることによって、イヌから鼻スワブ試料を得る。試料を、プロテアーゼ阻害剤を含有する移動緩衝液に入れる。試料は、アッセイストリップに隣接する試料パッド上の装置に滴下される。次いで、スワブを、約３ｍＬの培地を含む収集チューブに入れる。次いで、試料のアリコート（例えば、５００μｌ～１ｍＬ（５００μ１－ｌｍＬ）））を装置の試料ポートに配置する。アッセイストリップは、図２に示すように、２つの異なる標的反応ゾーンにＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ特異的抗原パータクチン及びＦＨＡを含み、アッセイストリップの基板に結合している。試料は、試料パッドを通り、次いで、コンジュゲート標識、例えばコロイド金とコンジュゲートしたプロテインＡを含有するコンジュゲート標識パッドを通って濾過する。金粒子は、指示薬色素として機能する。コンジュゲート標識は、試料中のＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ特異的抗Ｐｅｒ及び抗ＦＨＡ ＩｇＧ抗体に結合して複合体を形成し、次いで複合体が、膜又は検出ストリップに沿って移動する。Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ抗Ｐｅｒ及び抗ＦＨＡ ＩｇＧ抗体の複合体は、存在する場合、膜上の別個の標的反応ゾーン位置に固定化されたＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ ｐｅｒ及びＦＨＡ抗原に結合する。Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ抗原とのこの金標識プロテインＡ抗体複合体の形成は、検出可能な色の線をもたらし、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ特異的抗体が試料中に存在するという陽性結果を示す。対照ゾーンでの着色線の形成は、適切な試料が添加され、アッセイが機能したことを示す。この試験の時間は、約５～１０分であり、２０分未満である。
結果は、図１に示すように、動物のＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ免疫状態を評価するために使用することができる。例えば、試料試験が陽性であり、試料がＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａワクチンを受けた動物からの場合、陽性結果は、特に動物にＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａの他の適応症又は症状がない場合、その動物から適切な免疫応答が誘発されたことを示すだろう。試料試験が陰性であり、陰性結果は、試料がＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａワクチンを受けた動物からの場合、動物が適切に免疫化されていないことを示すだろう。
実施例２：動物におけるＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ感染の存在の評価
唾液試料は、未知の病因の呼吸器疾患の症状を有するイヌから得られる。抗真菌成分並びに他のタンパク質分解阻害剤を含有する輸送緩衝液を使用して試料を安定化する。次いで、試料をアッセイストリップの試料パッド領域に添加する。アッセイストリップは、図３に示されているように、２つの異なる標的反応ゾーンにおいて、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａパータクチン及びＦＨＡに特異的な抗体を含み、アッセイストリップの基板に結合している。次の工程では、抗Ｐｅｒ－ＨＲＰ及び抗ＦＨＡ－ＨＲＰなどのＨＲＰ結合抗体を添加して、試料中に存在し得る１又はそれを超えるパータクチン抗原及びＦＨＡ抗原に特異的に結合させる。結合した抗体（抗Ｐｅｒ及び抗ＦＨＡ）は、酵素結合抗体にも結合し得る抗原（それぞれＰｅｒ及びＦＨＡ）に結合し、サンドイッチ複合体を形成する。発色団又は酵素基質を添加して、発色させてもよい。一実施形態では、色反応を停止し、例えば分光光度計を使用して色を定量化することができ、及び／又は色を人間の目によって主観的に評価することができる。標的反応ゾーンにおけるシグナルの存在は、動物から得られた生体液の試料中のＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ抗原の存在を示す。対照ゾーンにおけるシグナルの存在は、アッセイが適切に機能しており、イヌ試料が添加されたことを示す。シグナルの存在は、図１に示すように動物における活動性Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ感染を示し得る。
実施例３：イヌ犬舎におけるＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ感染のアウトブレイクの評価
グレイハウンド犬用の訓練センターは、何匹かのイヌが呼吸器不快感の症状を示していることを観察している。原因は不明であり、ケンネルコフの大発生の可能性を迅速に評価する方法が必要である。
センターの各イヌから口腔スワブを入手し、必要に応じて識別情報をマークする。図５に示すように、試料を、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ感染の存在を検出することができる多重アッセイ装置に添加する。装置は、ハブスポーク方式でラジアルカセットユニットに取り付けられた複数のアッセイストリップを含み、各アッセイストリップは数値的に識別される。試料は、試料識別番号に従ってカセットユニット内のアッセイストリップに添加される。各アッセイストリップは、図３に示されているように、２つの異なる標的反応ゾーンにおいて、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａパータクチン及びＦＨＡに特異的な抗体を含み、アッセイストリップの基板に結合している。次の工程では、抗Ｐｅｒ－ＨＲＰ及び抗ＦＨＡ－ＨＲＰなどのＨＲＰ結合抗体を添加して、トレーニングセンターの動物から得られた１又はそれを超える試料に存在し得る１又はそれを超えるパータクチン及びＦＨＡ抗原に特異的に結合させる。標的反応ゾーンで結合した抗体（抗Ｐｅｒ及び抗ＦＨＡ）は、試料の１又はそれを超える抗原（それぞれＰｅｒ及びＦＨＡ）に結合する。抗原はまた、ＨＲＰ結合抗体に結合し、サンドイッチ複合体を形成する。
発色団又は酵素基質を添加して、約５～１０分かけて発色させる。色反応を停止し、スマートフォンを使用して色を定量化し、及び／又は色を人間の目によって主観的に評価する。データを処理し、各アッセイストリップのシグナル強度（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ特異的抗原の存在を示す）に基づいて、数値識別子に対応する動物から得られた生体液の試料中でＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ感染を迅速に診断する。訓練センターのイヌの間でのＢｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ感染の状態を迅速に評価することは、起こり得るケンネルコフのアウトブレイクの拡大を阻止するのに役立つであろう。
実施例４：側方流動試験結果の試験による診断及び分析のための応用の開発。
この例では、独自の側方流動試験の試験を通じて迅速で信頼性の高い診断を提供するために、ＣｏｎｔｒｏｌＰｏｉｎｔアプリケーションが開発される。より多くの試験が実行されるにつれて、大規模なデータ分析を可能にするために、試験結果の適用及び記憶をサポートするデータベースが開発される。
ユーザインターフェース
ユーザがＣｏｎｔｒｏｌＰｏｉｎｔアプリケーションを訪問すると、固有のプロファイルが作成され、それらを特定の診療所に結び付け、すべての将来の試験を必要に応じて呼び出すことができるようにする。ロケーションサービスを可能にするための標準的な連絡先情報及び認可は、長期的なデータ分析及び使用の利便性を支援するために要求される。
所与の試験中、各潜在的診断に固有の色ベースの指標のアレイが捕捉され、ＣｏｎｔｒｏｌＰｏｉｎｔのクラウドベースのデータベースにアップロードされる。受信されると、人工知能を搭載したアルゴリズムが画像を試験し、固有の病原体ごとの結果と共に装置のトレーサビリティ情報を見つける。有効になっている場合、位置及び環境データは、患者、所有者、技術者、獣医、及び診療所情報などのすべての標準的な試験データと共に格納される。分析が完了すると、ユーザは追加の画像をアップロードするか（画質が低い場合）、結果を提供するように促される。すべてのデータは、追加のレビューのためにいつでもエクスポート、電子メールで送信、又はアプリケーションを介してリコールすることができる。
より多くの試験が行われるにつれて、地域データを分析して、場所又は環境条件に結び付けられ、特定の病原体の有病率と相関する傾向を追跡する。この機能は、ＣｏｎｔｒｏｌＰｏｉｎｔの管理者に隔離され、ユーザのセキュリティを保証する。
データベース構造
次に、３つの固有のテーブルからなるＭｙＳＱＬ構造を使用してデータベースが構築される。第１の表は、診療所情報を含むように設計されている。異なる場所にいるより多くのユーザがＣｏｎｔｒｏｌＰｏｉｎｔアプリケーションを使用し始めるにつれて、固有の診療所プロファイルが作成される。そうすることにより、診療所でユーザが受けた試験が追跡され、臨床ベースの分析が可能になる。表２は、初期化時に収集されるように意図された各固有の入力を記載している。
Figure 2023546076000003
次に、ユーザ固有データが第２のＳＱＬテーブル内で追跡される。個体が行った試験は、その固有の同一性にも結び付けられる。記憶されるユーザデータについては、表３を参照されたい。
Figure 2023546076000004
最後に、ＳＱＬテーブルは、実行された各試験の固有の条件及び結果を追跡するように設計される。表４は、実施された各試験について収集されたデータを記載している。
Figure 2023546076000005
Figure 2023546076000006
バックエンド構造
複数の同時ユーザを容易にするために、マルチスレッド化されたＰｙｔｈｏｎベースのバックエンドは、３つの高レベル機能に分割される。図７は、各固有のスレッド間の相互作用を説明する。着信要求及び発信応答は、固有のスレッドによって処理される。各要求は、先入れ先出し方式でサービスされるキューに入る。適切な関数にルーティングされると、処理中に、スレッドは追加の要求に対応するために解放される。要求に対する以前の応答が形成されると、応答がソースに返されることを可能にするフラグが立てられる。
要求タイプに応じて固有の関数が呼び出される。各関数の実行は、追加のスレッド上で行われる。要求とデータベース対話との間の橋渡しとして機能するこのスレッドは、新しいユーザ及び診療所が適切な方法で作成され、既存のユーザがログインすることができ、新しい試験を処理することができ、以前の試験を視覚化することができることを保証するために必要な順序でデータをアップロード又はプルする。これにより、各要求を処理することが可能になり、より多くのユーザがアクティブになるにつれてアプリケーション応答時間を遅くすることなく十分な処理時間を提供する。所与の試験結果を分析するために必要な必要な処理に応じて、遅延を更に回避するために追加のスレッドを作成することができる。データベースからの変更及び読み取りは、最終スレッドで行われる。このスレッドは、複数の機能が同時にアクセスすることによるデータ破損を回避するためにデータベースへのすべての変更を管理する。
フロントエンド構造
ユーザは、視覚的に使いやすいユーザインターフェースを介して、ＣｏｎｔｒｏｌＰｏｉｎｔのアプリケーション機能にアクセスすることができる。ウェブベースのアプリケーションは、情報を収集し、要求を送信し、応答を受信し、バックエンドから提供されたデータを表示するために、ＨＴＭＬ、ＪａｖａＳｃｒｉｐｔ（登録商標）、及びＣＳＳを実装する。図７に示すように、ユーザは、最初にログインするか、又は新しいプロファイルを作成する必要がある。提供されたリストから関連する診療所を見つけることができない場合、新しい診療所プロファイルが作成される。
ログイン認証情報が承認されると、ユーザは、自身及び関連する診療所で行われた以前の試験を閲覧するか、又は追加の試験を実行するオプションを有する。以前の試験データをレビューするとき、日付、品種、又は試験結果によってフィルタリングオプションが利用可能になる。これにより、関心のある試験又は一連の試験に迅速にナビゲートし、必要に応じてデータをエクスポート／送信することが可能になる。あるいは、ユーザは、アプリケーションに示された指示に従って、流体試料が堆積された装置の写真をアップロードし、アプリケーションの分析アルゴリズムからフィードバックを受け取ることによって、新しい試験を実行するオプションを与えられる。有効にすると、位置及び温度設定が自動的に収集され、ユーザの分析を支援するためにユーザに表示される。
ウェブベースのアプリケーションは、インターネットに接続する能力を有する任意の装置と互換性があるが、オフライン機能を可能にする一般的なオペレーティングシステムのために追加のアプリケーションが作成されるべきである。フロントエンド機能には、ＳｗｉｆｔやＡｎｄｒｏｉｄ（登録商標）（Ｊａｖａ（登録商標））などの追加の言語が追加されている。
本発明の好ましい実施形態を本明細書に示し説明してきたが、そのような実施形態が例としてのみ提供されることは当業者には明らかであろう。本発明から逸脱することなく、当業者には多数の変形、変更、及び置換が思い浮かぶであろう。本明細書に記載の本発明の実施形態に対する様々な代替形態が、本発明を実施する際に使用され得ることを理解されたい。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲内の方法及び構造並びにそれらの均等物がそれによって包含されることが意図される。

Claims (71)

  1. 試料を処理又は分析するための方法であって、前記試料が、それを必要とする対象からであり、前記方法が、
    （ａ）前記試料を処理することであって、側方流動装置のうちの１又はそれを超える別個の区画において、イヌ感染性呼吸器病症候群（ＣＩＲＤＣ）を引き起こし得る１又はそれを超える病原体に関連する呼吸症状に関連する１又はそれを超える標的分析物に特異的に結合するように構成された前記側方流動装置を使用して、
    前記側方流動装置が、前記１又はそれを超える標的分析物に結合すると、前記１又はそれを超える別個の区画に検出可能なシグナルを生成するように構成される、処理することと、
    （ｂ）前記検出可能なシグナルを分析することであって、前記対象が前記呼吸症状を有するか、又は前記呼吸症状に対する免疫を有するかどうかを決定することと、を含む、方法。
  2. スワブを介して前記対象から前記試料を得ることを更に含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記試料が、唾液、眼排出物、鼻排出物、中咽頭液、含嗽液去痰剤、口腔液、歯肉溝滲出液、尿、汗、涙、血液、血清、便、胃液、滑液、及び痰からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
  4. 前記標的分析物が、１又はそれを超えるタンパク質を含む、請求項１又は３に記載の方法。
  5. 前記１又はそれを超えるタンパク質が、ＣＩＲＤＣ病原体によって産生される抗原、前記ＣＩＲＤＣ病原体によって産生される病原性因子、前記ＣＩＲＤＣ病原体によって産生される病原性因子の断片、前記ＣＩＲＤＣ病原体又はその免疫原性断片である、請求項４に記載の方法。
  6. 前記ＣＩＲＤＣ病原体が、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス、及びイヌヘパシウイルスからなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
  7. 前記抗原が、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌ呼吸器コロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、及びイヌボカウイルスのうちの１又はそれを超える病原性因子である、請求項４に記載の方法。
  8. 前記病原性因子が、糸状ヘマグルチニン（ｈｅｍａｇｌｕｔｔｉｎｉｎ）タンパク質（ＦＨＡ）、パータクチンタンパク質、分枝鎖脂肪酸タンパク質、ヘマグルチニンタンパク質、融合タンパク質、マトリックスタンパク質、スパイク糖タンパク質三量体タンパク質、膜タンパク質、核タンパク質、エンベロープ小膜ペントラマータンパク質、カプシドタンパク質、ファイバータンパク質、ペントンタンパク質、ヘキソンタンパク質、エンベロープタンパク質、カプシドタンパク質、ヘマグルチニン又はその融合タンパク質、マトリックスタンパク質、Ｈ３タンパク質、Ｎ２タンパク質、Ｎ８タンパク質、糖タンパク質、ＳＨタンパク質、微小管関連タンパク質（ＭＡＰ）、カルバモイルリン酸シンテターゼ（ＣＰＳ）タンパク質、セルロパスミン（Ｃｐ）タンパク質、又はそれらの免疫原性断片を含む群から選択される、請求項７に記載の方法。
  9. 前記標的分析物が、１又はそれを超える標的抗体を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
  10. 前記１又はそれを超える標的抗体が、ＣＩＲＤＣ病原体の１又はそれを超える免疫原性成分に対する親和性を有する抗体を含む、請求項９に記載の方法。
  11. 前記標的抗体が、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌ呼吸器コロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、及びイヌボカウイルスタンパク質のうちの１又はそれを超える病原性因子に対する親和性を有する抗体からなる群から選択される、請求項９又は１０に記載の方法。
  12. 前記病原性因子が、糸状ヘマグルチニン（ｈｅｍａｇｌｕｔｔｉｎｉｎ）タンパク質（ＦＨＡ）、パータクチンタンパク質、分枝鎖脂肪酸タンパク質、ヘマグルチニンタンパク質、融合タンパク質、マトリックスタンパク質、スパイク糖タンパク質三量体タンパク質、膜タンパク質、核タンパク質、エンベロープ小膜ペントラマータンパク質、カプシドタンパク質、ファイバータンパク質、ペントンタンパク質、ヘキソンタンパク質、エンベロープタンパク質、カプシドタンパク質、ヘマグルチニン若しくはその融合タンパク質、マトリックスタンパク質、Ｈ３タンパク質、Ｎ２タンパク質、Ｎ８タンパク質、糖タンパク質、ＳＨタンパク質、微小管関連タンパク質（ＭＡＰ）、カルバモイルリン酸シンテターゼ（ＣＰＳ）タンパク質、セルロパスミン（Ｃｐ）タンパク質、又はそれらの免疫原性断片を含む群から選択される、請求項１１に記載の方法。
  13. 前記呼吸症状に対する前記対象のワクチン接種状態が不明である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
  14. 前記対象が、非ヒト動物である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
  15. 前記対象が、イヌ（Ｃａｎｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）、ブタ（Ｓｕｓ ｓｃｒｏｆａ ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）、ヨーロッパヤマネコ（Ｆｅｌｉｓ ｃａｔｕｓ）、アナウサギ（Ｏｒｙｃｔｏｌａｇｕｓ ｃｕｎｉｃｕｌｕｓ）及びウマ（Ｅｑｕｕｓ ｃａｂａｌｌｕｓ）からなる群から選択される属に属する、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
  16. 前記対象が、イヌである、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
  17. 前記呼吸症状が、感染性気管気管支炎である、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記感染性気管気管支炎が、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルス感染である、請求項１７に記載の方法。
  19. 前記感染性気管気管支炎が、ウイルス感染である、請求項１７に記載の方法。
  20. 前記感染性気管気管支炎が、細菌感染である、請求項１７に記載の方法。
  21. 前記呼吸症状に対するワクチンを受けた前記対象における前記呼吸症状に対する防御免疫の発症を評価することを更に含む、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
  22. 前記分析することが、前記検出可能なシグナルを対照と比較して、前記試料中の前記１又はそれを超える標的分析物の存在を決定することを含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。
  23. 前記比較することは、前記側方流動装置によって生成された前記検出可能なシグナルのデジタル画像を分析することを含み、前記デジタル画像は、前記対照を識別するためのコードを含む、請求項２２に記載の方法。
  24. 前記分析することは、訓練されたアルゴリズムによって実行され、前記デジタル画像は、コンピュータを介して前記訓練されたアルゴリズムに送信される、請求項２３に記載の方法。
  25. 第２の時点で前記対象から第２の試料を得ることと、前記呼吸症状に対する免疫の持続時間を評価するために前記側方流動装置を使用して前記第２の試料を分析することと、を含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の方法。
  26. 前記側方流動装置が、１又はそれを超える捕捉剤を含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の方法。
  27. 前記１又はそれを超える捕捉剤が、前記呼吸症状に関連する１又はそれを超える抗原を含む、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記１又はそれを超える捕捉剤が、前記呼吸症状に関連する抗原に結合するように構成された１又はそれを超える抗体を含む、請求項２６に記載の方法。
  29. 試料を処理又は分析するためのシステムであって、前記試料が、それを必要とする対象からであり、（ｉ）２又はそれを超えるアッセイストリップであって、それぞれが固体支持体上に２又はそれを超える別個の反応ゾーンを含み、第１の別個の反応ゾーンが対照分析物捕捉剤を含み、かつ第２の別個の反応ゾーンが標的分析物捕捉試薬を含み、前記標的分析物捕捉試薬が、イヌ感染性呼吸器病症候群（ＣＩＲＤＣ）抗原特異的抗体、ＣＩＲＤＣ抗原、又はそれらの断片である、アッセイストリップと、（ｉｉ）試料投入ポートであって、前記２又はそれを超えるアッセイストリップが前記試料投入ポートの周りに配置され、前記側方流動装置が、前記対照分析物捕捉剤が対照分析物に結合すると、又は前記標的分析物捕捉剤が標的分析物に結合すると、検出可能なシグナルを生成するように構成され、前記検出可能なシグナルが、前記コンピュータに送られ、コンピュータプログラムによって分析されて、ＣＩＲＤＣ抗原、抗体又はその断片の存在又は非存在を決定する、試料投入ポートと、を含む側方流動装置を含む、システム。
  30. 前記コンピュータが、前記対象が呼吸症状を有する、前記呼吸症状を発症するだろう、又は前記呼吸症状に対する免疫を有する、という尤度を出力する、請求項２９に記載のシステム。
  31. 前記対照分析物捕捉剤によって結合された対照分析物に結合するように構成された第１のレポーター分子と、前記標的分析物捕捉剤によって結合された標的分析物に結合するように構成された第２のレポーター分子と、を更に含む、請求項２９に記載のシステム。
  32. 前記第１のレポーター分子及び前記第２のレポーター分子が、前記標的分析物又は前記対照分析物に結合すると、前記２又はそれを超える別個の反応ゾーンの別個の反応ゾーンで前記検出可能なシグナルを生成することができる、請求項３１に記載のシステム。
  33. 前記第１のレポーター分子又は前記第２のレポーター分子が、コロイド金、プロテインＡ、酵素、又は指示薬色素を含む、請求項３１又は３２に記載のシステム。
  34. 前記検出可能なシグナルが、蛍光シグナル又は比色変化である、請求項２９～３３のいずれか一項に記載のシステム。
  35. 前記生物学的試料が、唾液、鼻排出物、口腔内分泌物、中咽頭液、含嗽液去痰剤、口腔液、歯肉溝滲出液、尿、汗、涙、血液、血清、便、胃液、滑液、及び痰からなる群から選択される、請求項２９に記載のシステム。
  36. 前記対照分析物捕捉剤が抗体であり、かつ前記標的分析物捕捉剤が抗体である、請求項３１～３５のいずれか一項に記載のシステム。
  37. 前記対照分析物捕捉剤が、ＩｇＡである、請求項３６に記載のシステム。
  38. 前記対照分析物が抗原であり、かつ前記標的分析物が抗原である、請求項３６又は３７に記載のシステム。
  39. 前記標的分析物が、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパー、イヌインフルエンザ、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスの病原性因子である、請求項２９に記載のシステム。
  40. 前記病原性因子が、糸状ヘマグルチニン（ｈｅｍａｇｌｕｔｔｉｎｉｎ）タンパク質（ＦＨＡ）、パータクチンタンパク質、分枝鎖脂肪酸タンパク質、ヘマグルチニンタンパク質、融合タンパク質、マトリックスタンパク質、スパイク糖タンパク質三量体タンパク質、膜タンパク質、核タンパク質、エンベロープ小膜五量体タンパク質、カプシドタンパク質、ファイバータンパク質、ペントンタンパク質、ヘキソンタンパク質、エンベロープタンパク質、カプシドタンパク質、ヘマグルチニン又はその融合タンパク質、マトリックスタンパク質、Ｈ３タンパク質、Ｎ２タンパク質、Ｎ８タンパク質、糖タンパク質、ＳＨタンパク質、微小管関連タンパク質（ＭＡＰ）、カルバモイルリン酸シンテターゼ（ＣＰＳ）タンパク質、及びセルロパスミン（Ｃｐ）タンパク質を含む群から選択される、請求項３９に記載のシステム。
  41. 前記標的分析物が、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス、イヌヘパシウイルス、又はイヌ（Ｃａｎｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）によって産生される病原性因子の断片である、請求項２９に記載のシステム。
  42. 前記病原性因子が、イヌ（Ｃａｎｉｓ ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）動物において、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスによって産生される構造タンパク質、細胞膜タンパク質又は毒素である、請求項２９に記載のシステム。
  43. 前記対照分析物捕捉剤が抗原であり、前記標的分析物捕捉剤が抗原である、請求項３１～４２のいずれか一項に記載のシステム。
  44. 前記対照分析物が抗体であり、前記標的分析物が抗体である、請求項４３に記載のシステム。
  45. 前記対照分析物捕捉剤が、イヌＩｇＡである、請求項４４に記載のシステム。
  46. 前記対照分析物が、抗ＩｇＡ抗体である、請求項４３に記載のシステム。
  47. 前記標的分析物が、ＣＩＲＤＣ病原体に対して親和性を有する抗体又はその免疫原性断片からなる群から選択される抗体である、請求項４４に記載のシステム。
  48. 前記ＣＩＲＤＣ病原体が、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスである、請求項４７に記載のシステム。
  49. 前記標的分析物が、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス及びイヌヘパシウイルスからなる群の病原性因子に対して親和性を有する抗体からなる群から選択される抗体である、請求項４２に記載のシステム。
  50. 前記側方流動装置が、免疫クロマトグラフィーアッセイストリップを含む、請求項２９に記載のシステム。
  51. 前記免疫クロマトグラフィーアッセイストリップが、ニトロセルロース膜を含む、請求項５０に記載のシステム。
  52. 前記免疫クロマトグラフィーアッセイストリップが、前記第１の別個の反応ゾーンにおいて標識捕捉剤－対照分析物コンジュゲートを形成し、前記第２の別個の反応ゾーンにおいて標識捕捉剤－標的分析物コンジュゲートを形成するように構成される、請求項５０に記載のシステム。
  53. １又はそれを超える呼吸症状に関連する１又はそれを超える標的分析物を検出するための装置であって、固体支持体上に固定化された１又はそれを超える標的分析物捕捉試薬を含み、
    前記１又はそれを超える標的分析物捕捉試薬が、イヌ感染性呼吸器病症候群（ＣＩＲＤＣ）抗原特異的抗体、ＣＩＲＤＣ抗原、又はそれらの断片であり、
    前記１又はそれを超える標的分析物捕捉試薬の各々が、前記装置の複数の別個の区画のうちの異なる別個の区画にあり、
    前記複数の別個の区画が、中央試料投入ポートに流体接続され、かつ
    前記装置が、前記１又はそれを超える標的分析物捕捉剤による前記１又はそれを超える標的分析物に結合すると、検出可能なシグナルを生成するように構成される、装置。
  54. 前記固体支持体が、免疫クロマトグラフィーアッセイストリップを含む、請求項５３に記載の装置。
  55. 前記免疫クロマトグラフィーアッセイストリップが、ニトロセルロースを含む、請求項５４に記載の装置。
  56. 前記複数の標的及び対照分析物の別個の区画が、前記中央試料投入ポートの周りに輪状に１又はそれを超えるストリップ状に配置される、請求項５３に記載の装置。
  57. 前記第１の対照分析物捕捉区画及び前記第１の標的分析物捕捉区画が、第１のストリップ上に配置され、前記第２の対照分析物捕捉区画及び前記第２の標的分析物捕捉区画が、第２のストリップ上に配置され、前記第１のストリップ及び前記第２のストリップが、前記中央試料投入ポートの周りに配置される、請求項５６に記載の装置。
  58. 前記複数の別個の区画が、単一のストリップ内に存在し、前記区画が、前記中央試料投入ポートに対して遠位に配置される、請求項５３に記載の装置。
  59. 前記複数の別個の区画が、前記標的分析物区画が前記試料投入ポートの遠位の前記アッセイストリップ上に二次元アレイとして配列されるように配置される、請求項５８に記載の装置。
  60. 前記複数の別個の区画が、各別個の標的分析物区画が別個の対照分析物区画に隣接して配置されるように配置される、請求項５３に記載の装置。
  61. 前記複数の別個の区画が、各別個の標的分析物区画が別の標的分析物区画に隣接して配置されるように配置される、請求項５３に記載の装置。
  62. 各標的分析物区画が、単一の捕捉試薬を含む、請求項５３に記載の装置。
  63. 各標的分析物区画が、捕捉試薬の組み合わせを含む、請求項５３に記載の装置。
  64. 少なくとも１２個の別個の標的分析物区画を含み、各標的分析物の存在又は非存在が、異なるＣＩＲＤＣ病原体の存在又は非存在を示す、請求項５３に記載の装置。
  65. 前記ＣＩＲＤＣ病原体が、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス２型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｃｙｎｏｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｅｑｕｉ、イヌボカウイルス及びイヌヘパシウイルスからなる群から選択される、請求項６４に記載の装置。
  66. 前記免疫クロマトグラフィーアッセイストリップが、取り外し可能である、請求項５４に記載の装置。
  67. 請求項５３～６６に記載の装置及び説明書を含むキット。
  68. 対象から試料を得るための器具と、前記装置の前記試料投入ポートに装填する前に試料を安定化させるための輸送流体と、を更に含む、請求項６７に記載のキット。
  69. 前記検出可能なシグナルを生成するための緩衝液を更に含む、請求項６８に記載のキット。
  70. 前記緩衝液が、シグナル生成試薬を含む、請求項６９に記載のキット。
  71. 前記輸送流体が、プロテアーゼ阻害剤及びエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含む、請求項６８に記載のキット。
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