BE1025616B1 - Moyen de diagnostic pour la détection et/ou la quantification d’une pluralité d’analytes présents dans un échantillon - Google Patents

Moyen de diagnostic pour la détection et/ou la quantification d’une pluralité d’analytes présents dans un échantillon Download PDF

Info

Publication number
BE1025616B1
BE1025616B1 BE2017/5709A BE201705709A BE1025616B1 BE 1025616 B1 BE1025616 B1 BE 1025616B1 BE 2017/5709 A BE2017/5709 A BE 2017/5709A BE 201705709 A BE201705709 A BE 201705709A BE 1025616 B1 BE1025616 B1 BE 1025616B1
Authority
BE
Belgium
Prior art keywords
analytes
sample
solid support
recovery
diagnostic means
Prior art date
Application number
BE2017/5709A
Other languages
English (en)
Other versions
BE1025616A1 (fr
Inventor
Vincent Chabottaux
Thomas Glouden
Benoit Granier
Original Assignee
Unisensor
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to BE2017/5709A priority Critical patent/BE1025616B1/fr
Application filed by Unisensor filed Critical Unisensor
Priority to PCT/EP2018/076993 priority patent/WO2019068806A1/fr
Priority to MX2020003793A priority patent/MX2020003793A/es
Priority to AU2018346295A priority patent/AU2018346295A1/en
Priority to BR112020006581-1A priority patent/BR112020006581A2/pt
Priority to US16/652,800 priority patent/US20200256797A1/en
Priority to PCT/EP2018/076987 priority patent/WO2019068804A1/fr
Priority to RU2020112945A priority patent/RU2799444C2/ru
Priority to PCT/EP2018/076983 priority patent/WO2019068802A1/fr
Priority to EP18782435.4A priority patent/EP3692367A1/fr
Priority to CA3078150A priority patent/CA3078150A1/fr
Priority to CN201880064404.3A priority patent/CN111512157A/zh
Priority to JP2020519697A priority patent/JP7361026B2/ja
Publication of BE1025616A1 publication Critical patent/BE1025616A1/fr
Application granted granted Critical
Publication of BE1025616B1 publication Critical patent/BE1025616B1/fr
Priority to US18/461,044 priority patent/US20240077422A1/en

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G01N33/54386—Analytical elements
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/94—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving narcotics or drugs or pharmaceuticals, neurotransmitters or associated receptors
    • G01N33/9446—Antibacterials

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

Moyen de diagnostic (1) pour la détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique d’une pluralité d’analytes présents dans un échantillon (E) comprenant au moins un mélange réactionnel (2) et au moins un système récupérateur (3), ledit au moins un système récupérateur (3) étant sous la forme d’un support auquel se trouvent fixés en des emplacements de récupération (4 et 5) distincts et connus dans l’espace, des ligands compétiteurs et/ou des molécules biologiques de reconnaissance, ledit système récupérateur (3) comprenant des emplacements de récupération (4 et 5) qui sont disposés selon un arrangement matriciel en deux dimensions qui est défini selon un système de coordonnées connues et spécifiques desdits ligands compétiteurs et/ou desdites molécules biologiques de reconnaissance fixés audits emplacements de récupération (4 et 5) dudit système récupérateur (3).

Description

BREVET D'INVENTION BELGE
SPF Economie, PME, Classes Moyennes & Energie Numéro de publication : 1025616 Numéro de dépôt : BE2017/5709
Office de la Propriété intellectuelle Classification Internationale : G01N 33/543 G01N 33/558 G01N 33/94 Date de délivrance : 08/05/2019
Le Ministre de l'Economie,
Vu la Convention de Paris du 20 mars 1883 pour la Protection de la propriété industrielle ;
Vu la loi du 28 mars 1984 sur les brevets d'invention, l'article 22, pour les demandes de brevet introduites avant le 22 septembre 2014 ;
Vu le Titre 1er “Brevets d’invention” du Livre XI du Code de droit économique, l'article XI.24, pour les demandes de brevet introduites à partir du 22 septembre 2014 ;
Vu l'arrêté royal du 2 décembre 1986 relatif à la demande, à la délivrance et au maintien en vigueur des brevets d'invention, l'article 28 ;
Vu la demande de brevet d'invention reçue par l'Office de la Propriété intellectuelle en date du 04/10/2017.
Considérant que pour les demandes de brevet tombant dans le champ d'application du Titre 1er, du Livre XI du Code de Droit économique (ci-après CDE), conformément à l'article XI. 19, §4, alinéa 2, du CDE, si la demande de brevet a fait l'objet d'un rapport de recherche mentionnant un défaut d'unité d'invention au sens du §1er de l'article XI. 19 précité et dans le cas où le demandeur n'effectue ni une limitation de sa demande ni un dépôt d'une demande divisionnaire conformément aux résultats du rapport de recherche, le brevet délivré sera limité aux revendications pour lesquelles le rapport de recherche a été établi.
Arrête :
Article premier. - Il est délivré à
UNISENSOR, Route de Bonsgnée 145, 4120 NEUPRE Belgique;
représenté par
GEVERS PATENTS, Holidaystraat 5, 1831, DIEGEM;
un brevet d'invention belge d'une durée de 20 ans, sous réserve du paiement des taxes annuelles visées à l’article XI.48, §1 du Code de droit économique, pour : Moyen de diagnostic pour la détection et/ou la quantification d’une pluralité d’analytes présents dans un échantillon.
INVENTEUR(S) :
CHABOTTAUX Vincent, Rue Jean Bosly 19, 4020, WANDRE;
GLOUDEN Thomas, Vieille Voie de Tongres 224, 4000, LIEGE;
GRANIER Benoit, Route de Bonsgnée 145, 4120, NEUPRE;
PRIORITE(S) :
DIVISION :
divisé de la demande de base :
date de dépôt de la demande de base :
Article 2. - Ce brevet est délivré sans examen préalable de la brevetabilité de l'invention, sans garantie du mérite de l'invention ou de l'exactitude de la description de celle-ci et aux risques et périls du (des) demandeur(s).
Bruxelles, le 08/05/2019,
Par délégation spéciale :
BE2017/5709
Moyen de diagnostic pour ia détection et/ou (a quantification d’uns pluralité d’anaiytes présents dans un échantillon
Domaine technique
La présente invention se rapporte à un moyen de diagnostic pour la détection et/ou ia quantification respective, simultanée et spécifique d’une pluralité d’anaiytes présents dans un éch antüion comprenant au moins un mélange réactionnel et au moins un système récupérateur, ledit au moins un système récupérateur étant sous la forme d’un support solide auquel se trouvent fixés er: des emplacements de récupération distincts et connus dans 'espace, des ligands compétiteurs et/ou des molécules biologiques de reconnaissance, de manière à identifier par la localisation desdite emplacements de récupération sur ledit support, îesdlts analytes présents dans
Arrière-plan technologique
De nos jours, l'intérêt pour des moyens de diagnostic permettant ia détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique d’anaiytes présents dans un échantillon est grandissant, et ce particulièrement dans le domaine des produits alimentaires de même que dans le domaine médical.
En effet, nous devons continuellement faire face à l’émergence de nouveaux problèmes de santé publique contre lesquels des solutions rapides et efficaces de diagnostic doivent être élaborées en vue de fournir un traitement, approprié, Par exemple, chaque année à travers le monde, environ 60 Ö00- intoxications humaines sont liées aux toxines produites par des algues (y compris les cyanotoxines d’eau douce-, avec une mortahté totale d'approximativement il,5 %. Les biotoxines marines (également appelées phycotoxines) sont produites par certaines espèces de phytopiancton et sont susceptibles de. s'accumuler dans diverses espèces marines, par exemple dans les poissons, crabes ou bivalves fiitreurs (coquillages) tels que moules, huîtres, coquilles Saint-Jacques et palourdes. Si l’homme consomme des quantités importantes de
B E2017/5709 coquillages contaminés, il peut être victime d'une grave intoxication. Il est donc crucial de posséder des moyens de diagnostic rapides et efficaces pour détecter ces biotoxines marines, par exemple via une analyse du sang ou des urines,
Des moyens de diagnostic tels que définis plus haut peuvent également être utilisés pour la détection et la quantification de virus responsables de pathologies très diverses. De tels moyens de diagnostic permettraient : (1) d’apporter la preuve de l'origine virale des signes cliniques observés et diagnostiquer le virus en cause (par exemple des hépatites ou l'herpès) et de suivre l'évolution biologique de l'infection (par exemple via la quantification du virus dans le sang : VIH, VHB, VHC) ; (2) de suivre une évolution biologique de l'infection (par exempte le VIH ou l’hépatite B) ; (3) de permettre une décision thérapeutique et juger de l'efficacité des traitements antiviraux (par exempte pour le traitement d'une infection à cytomégalovirus par du ganciclovir) ; (4) de prévenir la transmission d’infections virales à l’occasion du don de sang, d'organes et de tissus ; (5) d'apprécier l'état immunitaire (par exemple dans le cas de la rubéole) ; (6) d'étudier les marqueurs sériques en population (par exemple lors d'enquêtes de prévalence ou d’études épidémiologiques). De manière générale, te diagnostic médical vise une étendue maximale des paramètres à détecter pour mieux cibler le traitement et te type de soin à fournir au patient ce qui limite notamment ies effets secondaires souvent mal connus.
Par ailleurs, dans te domaine alimentaire et plus particulièrement dans l’industrie du lait, la surveillance et te contrôle des produits imposent d'effectuer des tests te plus en amont possible de leur fabrication. Idéalement ces tests doivent être réalisés sur le lieu de production des matières premières ou sur leur lieu de leur transformation. Ces tests de dépistages, également appelés tests de « screening » sont particulièrement conçus pour détecter la présence et la quantité de certains analytes dont des contaminants chimiques (par exempte des résidus antibiotiques et des toxines), des protéines (par exempte des allergènes) ou des pathogènes (par exemple des virus, des parasites ou des bactéries). La multiplication des normes sanitaires et la volonté d'une meilleure traçabilité des produits alimentaires imposent une multiplication des analytes à tester ainsi que de connaître le plus précisément possible leurs classes (identifications des familles, classes et du composé distinct) et leurs quantités par rapport
B E2017/5709 aux limites maximales autorisées dans chaque matrices. Par ailleurs, le lait provenant de nombreux endroits très variés à travers le monde, ii est difficile de déterminer précisément les contaminants pouvant être retrouvés dans le lait en fonction du lieu de production, tant les pratiques sont différentes d'un endroit de ia planète à l'autre. En effet, i'origine des denrées alimentaires ainsi que les pratiques locales de production associées ne sont pas toujours connues, ce qui oblige à détecter en large spectre de composés, le plus large possible couvrant tout ce qui peut se trouver dans l'échantillon à analyser.
En particulier, le secteur agroalimentaire est intéressé par un moyen de diagnostic permettant d’envisager en une seule opération l’analyse de composés appartenant à des classes différentes pouvant avoir des propriétés physico-chimiques fondamentalement différentes, au sein d'une même familie d'analytes ou non, et présents simultanément dans un échantillon donné. Par exemple, le type et le nombre d'antibiotiques qui peut être administré à des animaux peut varier selon qu'il s'agit d’une application thérapeutique ou prophylactique, selon l'espèce animale, le germe à combattre, les pratiques vétérinaires, la législation en vigueur, Ses moyens disponibles ou encore les régions géographiques. Dans le cas de certains traitements particuliers, un mélange de médicament peut être utilisé. En règle générale, le praticien utilise seul ou en combinaison ties produits antibiotiques choisis parmi tous les composés commercialement disponibles selon son appréciation de la meilleure efficacité.
Les principales classes d’antibactériens et d’antibiotiques sont ; les pénicillines et céphalosporines, les tetracyclines, les sulfamides, les aminoglycosides et aminocyclitols, les macrolides, les chloramphénicols ou autres peptides, ionophores, nitrofurannes, quinolones, carbadox, etc., chacune de ces classes regroupant un ensemble très vaste de composés chimiquement différents.
La présence de telles molécules dans les produits laitiers peut avoir un impact négatif majeur sur la rentabilité du procédé industriel Impliquant une fermentation (fromage, yoghourt,...) à partir du lait frais.
De plus, l’utilisation, parfois intensive, d'antibiotiques en médecine vétérinaire et en production agricole pourrait être à i'origine de l'émergence de souches bactériennes devenues résistantes aux antibiotiques. Pour préserver ia santé humaine et
B E2017/5709 légiférer en la matière, de nombreux pays ont établi des limites maximales autorisées (MRI) pour les résidus antibiotiques dans les denrées alimentaires. Ces MRL fixent la limite entre un échantillon positif et un échantillon négatif, c'est-à-dire entre un échantillon refusé et un échantillon accepté.
Il est important que les méthodes de dépistage faisant appel à un moyen de diagnostic (1) puissent couvrir ia détection simultanée d'un maximum de composés, les tests de dépistage devant donc préférentiellement et logiquement être des tests multi-anaiytes, (2) permettent de connaître les classes auxquelles appartiennent les composés retrouvés dans un échantillon positif de manière à pouvoir orienter directement, vers ia méthode de confirmation adéquate, et (3) ne puisse pas donner de résultats de type « faux négatif » car ceux-ci échapperont dès lors à l'analyse et ne seront pas confirmés ultérieurement.
Etat de la technique
Un moyen de diagnostic tel qu'indiqué au début est connu. En effet, le document antérieur EP17.1.29:l4 divulgue un moyen de diagnostic pour la détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique d'une pluralité d’analytes présents dans un échantillon comprenant au moins un mélange réactionnel et au moins un système récupérateur, ledit au moins un système récupérateur étant sous la forme d'un support solide auquel se trouvent fixés en des emplacements de récupération distincts et connus dans l'espace, des ligands compétiteurs et/ou des molécules biologiques de reconnaissance, de manière à identifier par la localisation desdits emplacements de récupération sur ledit support, lesdlfs analyt.es présents dans ledit échantillon.
Plus précisément, ce document antérieur fournit un moyen de diagnostic permettant de détecter simultanément un ensemble de composés pouvant appartenir à au moins deux classes distinctes o'àn<fiytes et de caractériser la classe à laquelle appartient effectivement un compose détecté, et ce en démontrant la compatibilité technique et pratique de réunir en un seul et même procédé au moins deux mécanismes de détection sans que le fonctionnement de l'un d'entre eux ne puisse interférer avec le fonctionnement de l'autre. En outre, un moyen de diagnostic selon le
B E2017/5709 document EP1712914 démontre la faisabilité technique d'un dosage multi-analytes qui peut s'opérer rapidement, par exempte en moins de 10 minutes, et en une seule et même étape d'analyse au départ d'un seul et même échantillon.
Pratiquement, te procédé de mise en œuvre du moyen de diagnostic selon le document EP1712914 est caractérisé par les étapes suivantes :
- m=se en contact d'un mélange réactionnel prédéterminé avec un échantillon à caractériser pour obtenir une solution oui est incubée à 50“C pendant 3 minutes ;
- trempage du système récupérateur défini plus haut dans la solution obtenue et incubation pendant 3 minutes ;
- interprétation quantitative et qualitative du résultat sur le système récupérateur au moyen d'un dispositif de lecture optique.
Selon ce document antérieur, c'est le positionnement des éléments récupérateurs (des ligands compétiteurs} qui permettra d'identifier le type de contamination. Par exemple, selon exempte du document EP1712914 qui correspond au dosage simultané des tetracyclines, ß-lactames et sulfamides, chaque élément récupérateur est disposé sous la forme d’une ligne de capture, chacune d'entre elles étant disposée successivement l'une derrière l'autre en se référant au sens de migration du liquide (correspondant à un mélange réactionnel mis en contact avec un échantillon). Selon une modalité préférée de ce moyen de diagnostic, les zones de captures comprenant les éléments récupérateurs des ß-lactames, des tetracyclines et des suiphadiméthoxine sont disposées respectivement à un premier, à un deuxième et à un troisième niveau en se référant au sens de migration du liquide.
L'interprétation des résultats selon un tel moyen de diagnostic doit se faire de manière inverse et est basé sur le principe de compétition qui exploite la reconnaissance des composés recherchés vis-à-vis d'un ligand compétiteur et/ou d'une molécule biologique de reconnaissance. Plusieurs cas peuvent se présenter quand les éléments récupérateurs fixés sur le système de récupération sont tes ligands compétiteurs :
soit, te composé recherché est présent dans l'échantillon et va alors se lier aux molécules biologiques de reconnaissance présentes dans un mélange réactionnel qui ne seront par conséquent plus libres de se lier
B E2017/5709 aux molécules compétitrices fixées au système récupérateur. Le résultat sera alors positif et présentera un marquage qui est absent ;
soit le composé recherché est absent de l’échantillon, les molécules biologiques de reconnaissance présentes dans un mélange réactionnel étant donc libres de se lier aux molécules œmpétitrices fixées au système récupérateur. Le résultat sera alors négatif et présentera un marquage qui est présent.
Malheureusement, les moyens de diagnostic actuels et notamment Se moyen de diagnostic selon le document EP1712914 ne permettent la détection et/ou la quantification que d’un nombre limite d'analytes présents dans un échantillon et ne peuvent donc pas être considérés comme étant réellement des moyens de diagnostic multî-analytes. Plus précisément, le moyen de diagnostic selon le document EP1712914 permet de détecter des composés appartenant â trois classes distinctes d’antibiotiques uniquement, à savoir les ß-iactames, les tetracyclines et les sulfamides, Par conséquent, même si ies ß-iactames, les tetracyclines et ies sulfamides appartiennent effectivement à des classes d'analytes pouvant être considérées comme étant différentes, ces classes sont toutefois reprises dans une seule et même fam-lle d'analytes, à savoir les antibiotiques. Ainsi, un moyen de diagnostic selon ce document antérieur ne permet, certainement nas de détecter et/ou de quantifier différentes classes d’analytes appartenant ä des families d'analytes aux propriétés physico-chimiques fondamentalement, différentes comme par exemple ies résidus médicamenteux (par exemple les antibiotiques ou ies antibactériens}, les toxines, les hormones, les pathogènes, les adultérants ou encore les allergènes.
En effet, les secteurs concernés tels que le secteur agroalimentaire et te secteur médical sont demandeurs d'une analyse la plus complète possible et. qui puisse de préférence identifier un maximum de composés, il est plus pratique et plus économique de réaliser un seul test multiple à partir d'un seul échantillon plutôt que de devoir réaliser un test particulier pour chaque composé ou pour un petit groupe seulement de composés, à savoir 2 ou 3 composés maximum appartenant à des classes distinctes mais faisant partie d'une seule famille d’analytes (par exempte ies antibiotiques) tel que c'est le cas avec un moyen de diagnostic selon te document
B E2017/5709 antérieur EP1712914, Ainsi, les moyens de diagnostic de l’état de la technique rencontrent à ce stade une limite importante à l'efficacité qui est caractérisée par l'absence de tests réellement multi-analytes qui permettraient de détecter en une seule opération et en moins de 15 minutes par exemple, l’ensemble des composés d'un nombre élevé de classes d'analytes appartenant à au moins deux familles d'analytes différentes.
But de l’invention
L'invention a pour but de pallier les inconvénients de l'état de la technique en procurant un moyen de diagnostic plus rapide, plus pratique, plus économique, plus efficace et optimisé par rapport aux moyens de diagnostic actuels, et ce en permettant la détection et/ou ia quantification non seulement d'un nombre plus élevé de classes d’analytes appartenant à une famille d'analytes (par exemple les antibiotiques), mais également d'un nombre plus élevé de classes d'analytes appartenant à plusieurs familles d'analytes (par exemple les résidus médicamenteux, les toxines, tes adultérants ou encore tes métaux lourds), Plus particulièrement, un moyen de diagnostic selon l'invention permet la détection et/ou la quantification d'au moins 5 classes différentes d’analytes, de préférence d’au moins 10 classes différentes d'analytes, de préférence d'au moins 15 classes différentes d'analytes présents dans un échantillon et appartenant à au moins deux familles d'analytes distinctes, et ce en moins de 15 minutes et en une seule étape.
Par les termes « famille d'analytes », on entend au sens de la présente invention des analytes qui présentent des propriétés physico-chimiques similaires. Ainsi, deux families d'analytes distinctes possèdent des propriétés physico-chimiques fondamentalement différentes. Parmi les familles d'analytes, on peut compter tes résidus médicamenteux (par exemple les antibiotiques ou tes antibactériens), tes toxines, les hormones, tes pathogènes, les adultérants ou encore les allergènes.
Par les termes « classe d'analytes », on entend au sens de la présente invention une classification plus restrictive par rapport aux termes « famille d'analytes ». En effet, une famille d'analytes peut être divisée en plusieurs classes d'analytes définies
B E2017/5709 selon que les analytes présentent des caractéristiques communes, Parmi les classes d'anaiytes faisant partie de la famille des résidus médicamenteux, on retrouve par exemple les pénicillines, les céphalosporines, les tetracyclines, les sulfamides, tes aminoglycosides, les aminocyclitols, les macrolides, les quinolones, les ionophores, les carbadox, les nitrofurannes et les phénlcols.
Pour résoudre ce problème, il est prévu suivant l'invention, un moyen de diagnostic tel qu’indiqué au début, caractérisé en ce que ledit système récupérateur comprend des emplacements de récupération qui sont disposés selon un arrangement matriciel en deux dimensions qui est défini selon un système de coordonnées connues et 10 spécifiques desdits ligands compétiteurs et/ou desdites molécules biologiques de reconnaissance fixés audits emplacements de récupération dudit système récupérateur,
En effet, il a été démontré de manière surprenante qu'un moyen de diagnostic qui comprend un système de récupération présentant des emplacements de récupération qui sont disposés selon un arrangement matriciel en deux dimensions qui 15 est défini selon un système de coordonnées connues et spécifiques permet de détecter et/ou de quantifier au moins 5 classes différentes d'anaiytes, de préférence au moins 10 classes différentes d’anaiytes, de préférence au moins 15 classes différentes d'anaiytes présents dans un échantillon et appartenant à au moins deux familles d’anaiytes distinctes, et ce en moins de 15 minutes. Un moyen de diagnostic selon l'invention est 20 par conséquent plus pratique, plus économique et plus efficace que tes moyens de diagnostic connus actuellement qui se limitent généralement à moins de cinq classes différentes d'anaiytes, typiquement seulement à deux ou trois classes différentes d'anaiytes, ces classes appartenant à une même famille d'anaiytes (par exempte les antibiotiques).
Plus précisément, avec un moyen de diagnostic selon le document antérieur EP17Â29.14 c'est-à-dire qui comprend un système récupérateur présentant des zones de capture (éléments récupérateurs fixés) sous la forms de lignes disposées tes unes derrières les autres et perpendiculairement au sens de migration du liquide, une incompatibilité technique est rencontrée lorsque l'homme de métier tente de disposer 30 un nombre plus élevé (par exempte plus de cinq) zones de capture simultanément sur te système récupérateur, et ce notamment à cause de te taille restreinte de te zone de
B E2017/5709 tests, ia quantité plus kn go ria rite de réactifs à déposer sur les lignes successives (favorisant un bruit de fond et des inter-réactivités plus importantes} et d'un manque de précision lors de l'interprétation des résultats avec une analyse visuelle ou instrumentale qui est longue et complexe et qu'il devient donc difficile voire impossible de délimiter les 5 différentes zones de capture les unes des autres et donc de distinguer les différentes classes d'anaiytes les unes des autres. Par conséquent, un te! moyen de diagnostic autorise la détection de maximum quatre analytes de classes différentes (la cinq-dème zone de capture étant réservée au contrôle de positlvité/validité du test).
Le moyen de diagnostic selon l'invention présente quant à lui, et 10 contrairement au document antérieur F.P1.712914, un système récupérateur comprenant des emplacements de récupération avec des zones de capture miniaturisées et qui sont disposés selon un arrangement matriciel en deux dimensions qui est défini selon un système de coordonnées connues et spécifiques. Un tel arrangement matriciel (en deux dimensions qui est défini selon un système de coordonnées connues et spécifiques) 15 permet ainsi à l’homme de métier de disposer un nombre pins élevé de zones de captures (les éléments de récupération à savoir les i-gands compétiteurs et/ou les molécules biologiques de reconnaissance) sous la forme de points selon un système de coordonnées en deux dimensions (X; '7). Par exemple, pour une même coordonnée X, plusieurs points de capture peuvent être disposés selon des coordonnées Y différentes 20 permettant, ainsi de détecter et/ou de quantifier, pour une même coordonnée .7, plusieurs analytes de classes différentes, ces différentes classes d'anaiytes pouvant, appartenir à des familles distinctes d'anaiytes.
Par conséquent, un moyen de diagnostic selon l'invention fournit un effet technique supérieur par rapport aux moyens de diagnostic actuels et plus 25 particulièrement par rapport au moyen de diagnostic selon le document. EPI712.91.4 avec lequel, pour une même coordonnée X, une seule classe d'analyte peut être détectée et/ou quantifiée dès lors que la zone de capture est disposée selon une ligne perpendiculairement su sens de migration du liquide.
Ainsi, la présente invention démontre la compatibilité technique et 30 pratique de réunir en un seul et même moyen de détection un nombre élevé (au moins 5, de préférence au moins 10, de préférence au moins 15} de mécanismes de détection
B E2017/5709 et/ou de quantification sans que te fonctionnement de Lun d'entre eux ne puisse
Interférer avec le fonctionnement d'un des autres mécanismes. Il a par ailleurs été mis en avant, dans le cadre de la présente invention, une faisabilité technique d'un dosage multî-analytes qui peut s'opérer rapidement, par exempte en moins de 15 minutes, et en une seule et même étape d’analyse à l'aide d’un seul et même échantillon.
De préférence, lesdits emplacements de récupération fixés sur ledit système récupérateur dudit moyen de diagnostic selon l'invention sont disposés selon un arrangement matriciel en deux dimensions sous la forme de points présentant chacun un diamètre compris entre 20 μm et 2 mm, de préférence compris entre 100 μm et 500 μm, 10 préferentiellement entre 250 μm et 400 μm.
Il a été démontré que des emplacements de récupération sous forme de points présentant chacun un diamètre compris entre 20 μm et 2 mm, de préférence compris entre 100 μm et 500 μm, préférentiellement entre 250 μm et 400 μm, permettaient de fixer au moires 5,. de préférence au moins 10, préférentiellement au 15 moins 15 emplacements de récupération en simpiteat,. en duplicat ou en triplicat pour la détection et/ou la quantification d'au moins 5, de préférence au moins 10, préférentiellement au moins 15 analytes de classes différentes, appartenant ou non a des familles d'analytes distinctes, ainsi qu'au moins un emplacement de récupération déposé en simplicat, en dupficat ou en triplicat destiné au contrôle du seuil de détection 20 permettant de valider le test et/ou à la calibration pour la détection et/ou la quantification, et ce sur un système récupérateur ayant une taille raisonnable, pour ia réalisation de la détection et/ou ia quantification desdits au moins 15 classes d'analytes par un dispositif de lecture optique.
Avantageusement, tes emplacements de récupération fixés sur ledit 25 système récupérateur dudit moyen de diagnostic selon l'invention sont disposés selon un arrangement matriciel en deux dimensions sour la ‘o* n< de points, lesdits points étant présents à une densité comprise entre 62500 et 6,25 points par cm2, de préférence comprise entre 2500 et 100 points par cm?, préférentiellement comprise entre 400 et 150 points par cm.
Avantageusement, ledit système de coordonnées définissant l'arrangement matriciel desdits emplacements de récupération fixés sur ledit système
B E2017/5709 récupérateur selon l'invention présente une première coordonnée X définie sur un axe longitudinal d'une longueur dudit système récupérateur et une deuxième coordonnées X définie sur un axe longitudinal d’une largeur dudit système récupérateur.
Comme expliqué plus haut,, de la sorte, pour une même coordonnée X, plusieurs points de capture sont disposés selon des coordonnées F différentes permettant ainsi de détecter et/ou de quantifier, pour une même coordonnée X, plusieurs analytes de classes différentes appartenant ou non à des familles distinctes d'analytes. inversement, pour une même coordonnée X, plusieurs points de capture sont disposés selon des coordonnées X différentes, permettant ainsi de détecter et/ou de 10 quantifier plusieurs analytes de classes différentes appartenant ou non à des familles distinctes d'analytes.
Il est raisonnable de prévoir une distance d'espacement minimal entre deux points qui est comprise entre 20 μm et 2 mm, de préférence entre 100 μm et 500 μm, préférentiellement entre 250 μm et 400 μm, selon des coordonnées X et X.
Dans une forme de réalisation particulière, ledit système récupérateur selon l'invention comprend au moins 5, de préférence au moins 10, préférentiellement, au moins 15 emplacements de récupération distincts destinés ia détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique d'au moins 5, de préférence au moins 10, préférentiellement au moins 15 analytes de classes distinctes présents dans un 20 échantillon et. appartenant ou non à des familles d’analytes différentes, et au moins un emplacement de récupération destiné à un contrôle et/ou un caiibrateur.
De préférence, ledit contrôle et/ou ledit cahurateur est obtenu à partir d’un couple ligand compétiteur/molécule de reconnaissance indépendant, dont la nature intrinsèque (ou synthétique) fait que ia molécule contrôle n’est jamais présente dans 25 l'échantillon (par exemple un anticorps spécifique d'une protéine d'une autre espèce animale differ erste de celle dont provient l'échantillon) ou une protéine porteuse (par exemple la sérurnalbumine bovine) modifiée chimiquement avec un marqueur synthétique (par exemple une biot.ine ou un marqueur poly-histidines ou c-myc).
Dans une forme de réalisation particulièrement avantageuse du moyen de diagnostic selon i'-nvention, chacun desdits emplacements de récupération est disposé sur ledit système récupérateur en duplicat, de préférence en triplicat. La
B E2017/5709 réalisation de dupHcats ou de triplîcats permet de réduire voir ia variabilité de l’analyse liés au dispositif de détection et/ou de quantification des résultats et donc d'améliorer les statistiques et la précision des résultats obtenus,
Avantageusement, ledit système récupérateur sous la forme d’un support solide comprend une membrane ou un ensemble de membranes. De préférence, la membrane est une membrane de nitrocellulose.
Dans une forme de réalisation particulière, ledit mélange réactionnel contient des molécules biologiques de reconnaissance et/ou des ligands compétiteurs capables chacun de reconnaître, respectivement, simultanément et spécifiquement la présence d’un analyte déterminé dans ledit échantillon, lesdites molécules biologiques de reconnaissance et/ou lesdits ligands compétiteurs étant marqués directement et/ou indirectement avec au moins une molécule de visualisation,
De plus, dans une forme de réalisation particulière, pour la détection et/ou la quantification d'un analyte donné, ledit mélange réactionnel contient au moins une molécule biologique de reconnaissance et au moins un ligand compétiteur se trouve fixé sur ledit système récupérateur, ou inversement.
La détection et/ou ia quantification selon l'invention est basée sur le principe de compétition qui exploite la reconnaissance des composés recherchés vis-à-vis d’un ligand compétiteur et/ou d'une molécule biologique de reconnaissance.
Plusieurs cas peuvent se présenter selon que les éléments récupérateurs fixés sur le système de récupération sont, les ligands compétiteurs ou les molécules biologiques de reconnaissance :
1) Dans le cas où les éléments récupérateurs sont les ligands compétiteurs, soit le composé recherché est présent dans l'échantillon et va alors se lier aux molécules biologiques de reconnaissance presentes dans un mélange réactionnel qui ne seront par conséquent plus libres de se lier aux molécules compètitrices fixées au système récupérateur, t.e résultat sera alors positif et présentera un marquage qui est absent ;
soit le composé recherché est absent de l’échantillon, les molécules biologiques de reconnaissance présentes dans un mélange réactionnel étant donc libres de se lier aux molécules compètitrices fixées au
B E2017/5709 système récupérateur. Le résultat sera alors négatif et présentera un marquage qui est présent.
2) Dans le cas où les éléments récupérateurs sont tes molécules biologiques de reconnaissance, soit te composé recherché est présent dans l'échantillon et va alors entrer en compétition avec les ligands compétiteurs présents dans un mélange réactionnel pour se lier aux molécules biologiques de reconnaissance fixées au système récupérateur. Le résultat sera alors positif et présentera un marquage qui est absent ou faible ;
soit le composé recherché est absent de l’échantillon, tes ligands compétiteurs étant alors les seuls se lier aux molécules biologiques de reconnaissance fixées au système récupérateur. Le résultat sera alors négatif et présentera un marquage qui est présent.
De préférence, ledit mélange réactionnel est présent dans un contenant, ledit contenant étant distinct dudit système récupérateur. Avantageusement, ledit contenant est un contenant en verre ou en plastique. Dans ce cas, le procédé mis en œuvre pour te détection et/ou la quantification est le suivant :
· mise en comacl du mélange réactionnel avec un échantillon à caractériser pour obtenir une solution qui peut être incubée à 30°C pendant 3 minutes ;
- trempage de l’extrémité du système récupérateur qui se trouve en amont du sens de migration dans la solution obtenue et incubation de celle-ci pendant 10 minutes à 30C ;
- interprétation qualitative et/ou quantitative du résultat sur le système récupérateur au moyen d'un dispositif de lecture optique.
Le sens de migration du liquide selon l’invention est défini selon ledit système de coordonnées définissant l'arrangement matriciel des emplacements de récupération fixes su- le système récupérateur selon l’invention et se fait par conséquent selon une coordonnée X et une coordonnée Y.
Dans une forme de réalisation particulièrement avantageuse du moyen de diagnostic selon l’invention, ledit mélange réactionnel est présent sur ledit système récupérateur, sous une forme lyophilisée, en amont desdits éléments de récupération
B E2017/5709 fixés sur ledit système récupérateur par rapport à un sens de migration d'un liquide. Dans ce cas, le procédé mise en œuvre pour la détection et/ou la quantification est ie suivant :
- trempage de la partie du système récupérateur comprenant le mélange réactionnel sous une forme lyophilisée dans un échantillon à analyser et incubation pendant 13 minutes ;
- interprétation quantitative et qualitative du résultat sur ie système récupérateur au moyen d’un dispositif de lecture optique.
Le sens de migration du liquide selon l'invention est défini selon ledit système de coordonnées définissant l'arrangement matriciel des emplacements de récupération fixés sur le système récupérateur selon l'invention et se fait par conséquent selon une coordonnée X et une coordonnée Y.
Avantageusement, lesdites molécules biologiques de reconnaissance sont des anticorps, de préférence des anticorps primaires, soit monoclonaux ou polyclonaux, purifiés ou non purifiés, et/ou des aptamères et/ou des GEPIs et/ou tout autre élément chimique ou biologique, naturel ou synthétique, capable de reconnaître un anaiyte et/ou des récepteurs biologiques.
Avantageusement, lesdits ligands compétiteurs sont des analogues des analytes recherchés et/ou des molécules capables de fixer spécifiquement lesdites molécules biologiques de reconnaissance.
Dans une forme de réalisation particulièrement avantageuse du moyen de diagnostic selon l’invention, lesdits ligands compétiteurs sont choisis dans le groupe constitute de substances médicamenteuses de type antibiotiques, d'hormones, de toxines telle que l'Aflatoxme, de virus de type vires de Dengue, de bactéries de type L monocytogenes, de métaux lourds, (t'adultérants, d'allergènes, et de leurs mélanges.
De plus, dans une forme de réalisation particulière, ladite au moins une molécule de visualisation est détectable en visible et/ou en fluorescence.
De préférence, ladite au moins une molécule de visualisation est fusionnée auxdites molécules biologiques de reconnaissance et/ou auxdits ligands compétiteurs via un couplage chimique et/ou génétique.
Far les termes « couplage chimique et/ou génétique », il est entendu au sens de la présente invention, une basson de la molécule de reconnaissance et/ou du
B E2017/5709 ligand compétiteur à ia molécule de visualisation via une modification chimique et/ou génétique de la molécule biologique de reconnaissance et/ou du ligand compétiteur, ceux-ci n’étant par conséquent plus dans leur état naturel mais sous forme modifiée ou sous forme de complexes.
Il a été démontré qu'un tel couplage chimique et/ou génétique de la molécule de visualisation aux molécules biologiques de reconnaissance et/ou aux ligands compétiteurs présents dans le mélange réactionnel permet d'améliorer encore la compatibilité technique et pratique de réunir en un seul et même moyen de détection et/ou de quantification un nombre élevé (au moins 5, de préférence au moins 10, préférentiellement au moins 15) de mécanismes de détection et/ou de quantification sans que le fonctionnement de i'un d’entre eux ne puisse interférer avec le fonctionnement d'un des autres mécanismes. En effet, un mélange réactionnel selon l'invention qui présente un tel couplage offre l'avantage de diminuer voir d'éliminer le risque d'aspérJflcité et d’inter-réactions entre les différentes molécules biologiques de reconnaissance et/ou les différents ligands compétiteurs présents dans le mélange réactionnel, et ainsi le usque d'observer des faux positifs et/ou des faux négatifs, mais également de diminuer considérablement le marquage résiduel (bruit de fond) observé sur le système récupérateur quand un tel couplage n'est pas présent et d’obtenir ainsi un meilleur contraste entre le marquage des éléments récupérateurs et du support solide non fixé (et d’obtenir ainsi un meilleur seuil de détection).
Le document antérieur EP1712914 préconise, au contraire, qu'aucun marquage par modification chimique n'ait lieu afin de préserver au maximum les fonctionnalités des récepteurs et anticorps utilisés, et que par conséquent, les molécules biologiques de reconnaissance sont exploitées dans leur état le plus naturel possible. Par exemple, une molécule biologique de reconnaissance comme un récepteur est marqué à l'aide d’un anticorps eux-mêmes reconnus par une protéine-A (reconnaissant tous les types d'anticorps de manière générale) qui est conjuguée à de l’or colloïdal. Selon ce document antérieur, c'est donc la protéine-A, et non la molécule biologique de reconnaissance, qui est couplée à l'or colloïdal (la molécule de visualisation).
Par ailleurs, il a été mis en évidence qu'un tel couplage selon l'invention est en parue responsable de l'effet surprenant de pourvoir détecter et/ou quantifier un
B E2017/5709 nombre élevé (au moins 5, de préférence au moins 10, préférentiellement au moins 15) d'analytes de classes distinctes et pouvant appartenir ou non à des families d'analytes différentes, et ce en une seule étape et en moins de 15 minutes, préférentiellement en 13 minutes. En effet, te moyen de diagnostic selon l'invention ne requiert ni de lavages ni la réalisation d'une étape distincte de marquage des molécules de reconnaissance et/ou des ligands compétiteurs avec au moins une molécule de visualisation étant donné que, selon l'invention, le mélange réactionnel comprend des molécules de reconnaissance et/ou des ligands compétiteurs couplés à au moins une molécule de visualisation.
Avantageusement, ledit couplage chimique et/ou génétique est réalisé via au moins une force électrostatique,, au moins un lien peptidique, au moins un gêne rapporteur, ou une combinaison de ceux-ci.
Dans une forme de réalisation particulière, ladite au moins une molécule de visualisation est choisie dans le groupe constitué de l'or colloïdal, les billes colorées, de préférence les billes de latex colorées, i’isothiocyanate de fluorescéine (FITC), la phycoérythrine (PE), la rhodamine δ, les chrornogèriCj et de leurs mélanges.
De préférence, lesdits analytes appartiennent à des classes d'analytes différentes faisant, partie de familles d'analytes distinctes, lesdit.es familles comprenant tes résidus médicamenteux, les toxines, les virus, tes bactéries, les hormones, tes métaux lourds, tes adultérants ou tes allergènes. Parmi les résidus médicamenteux, on retrouve notamment les antibiotiques et les antibactériens. Des molécules chimiques indésirables peuvent également être détectées suite à une contamination passive par transfert du contenant (par exemple depuis un emballage en plastique).
Dans une forme de réalisation particulièrement avantageuse, tesdits analytes appartiennent à la famille des résidus médicamenteux et sont choisis dans le groupe constitué des pénicillines, des céphalosporines, des tétracyclines, des sulfamides, des aminoglycosides, des aminocyciitois, des macrolides, des quinolones, des ionophores, des carbadox, des nitrofurannes, des phémcols, et de leurs mélanges.
Avantageusement, ledit échantillon est essentieltement hquide et est obtenu à partir de ia;t, de m-el, de viande, d'œufs, de sang complet, de sérum, d’urine, ou d'autres liquides biologiques.
B E2017/5709
Particulièrement, selon l’invention, la détection et/ou la quantification respective, simuitanée et spécifique d’une pluralité d'anaiytes présents dans un échantillon est réalisée au moyen d’un dispositif de lecture optique,
D'autres formes de réalisation du moyen de diagnostic suivant 5 l’invention sont indiquées dans les revendications annexées.
L'invention a aussi pour objet un système récupérateur pour un moyen de diagnostic selon l'invention pour la détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique d'anaiytes présents dans un échantillon, sous la forme d'un support auquel se trouvent fixés en des emplacements de récupération distincts et 10 connus dans l'espace, des ligands compétiteurs et/ou des molécules biologiques de reconnaissance, de manière à identifier par la localisation desdits emplacements de récupération sur ledit support, la présence desdits analytes présents dans ledit échantillon,, lesdits emplacements de récupération étant disposés selon un arrangement matriciel en deux dimensions qui est. défini selon un système de coordonnées connues et 15 spécifiques desdits ligands compétiteurs et/ou desdites molécules biologiques de reconnaissance fixés audits emplacements de récupération dudit système récupérateur.
D'autres formes de réalisation du système récupérateur suivant l'invention sont indiquées dans les revendications annexées, l'invention a aussi pour objet un mélange réactionnel pour un moyen de 20 diagnostic selon l'invention comprenant des molécules biologiques de reconnaissance et/ou des ligands compétiteurs capables chacun de reconnaître, respectivement, simultanément et spécifiquement un analyte déterminé présent dans ledit échantillon, iesdit.es molécules biologiques de reconnaissance et/ou lesdits ligands compétiteurs étant marqués directement et/ou indirectement avec au moins une molécuie de 25 visualisation, ladite molécule de visualisation étant fusionnée auxdites molécules biologiques de reconnaissance et/ou auxdits ligands compétiteurs via un couplage chimique et/ou génétique.
D'autres formes de réalisation du mélange réactionnel suivant l'invention sont indiquées dans les revendications annexées.
L'invention a aussi pour objet un ensemble de diagnostic pour la détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique d’anaiytes présents
B E2017/5709 dans un échantillon comprenant un moyen de diagnostic selon l'invention et un dispositif de lecture optique d'un support solide amovible comprenant :
un emplacement pour recevoir ledit support solide ;
une unité optique pour analyser ledit support solide et comprenant :
o une première source lumineuse pour émettre selon une intensité d'émission et dans une première plage de longueur d'onde un premier faisceau lumineux vers ledit emplacement ;
o un capteur d'intensité lumineuse pour mesurer l'intensité d'émission émise par ladite première source lumineuse ;
o un moyen de rétrocontrôle pour moduler ladite intensité d'émission de ladite première source lumineuse en fonction de l'intensité d’émission mesurée par ledit capteur d'intensité lumineuse de sorte que ladite première source lumineuse émette une intensité cible ;
o un système d'imagerie comprenant un détecteur optique pour fournir une image d'une zone de visualisation, ladite zone de visualisation comprenant au moins une portion dudit emplacement ;
o un filtre pour filtrer une plage de longueur d'onde définie, et positionné entre l'emplacement et ledit système d’imagerie ;
des moyens de traitement d'image de ladite image pour :
o déterminer un nombre fini de sous-ensembles de ladite image, o fournir des données relatives à des intensités lumineuses issues desdits sous-ensembles ;
des moyens de détermination pour :
o calculer, pour cheque sous-ensemble, une intensité de sous-ensemble, et des moyens de transmission pour transmettre une information relative à ladite intensité de sous-ensemble pour chaque sous-ensemble.
Un tel dispositif optique selon l'invention permet la lecture des zones à tester, en particulier avec une mesure instantanée de fluorescence ou de façon préférée 30 avec une mesure de la lumière réfléchie des zones à tester. Lorsqu'une technique de fluorescence ou une technique en lumière réfléchie est utilises pour lire les zones à
B E2017/5709 tester (ou points), un moyen de rétrocontrôle permet de garantir une intensité lumineuse d’excitation toujours égale, ce qui permet une mesure instantanée de fluorescence ou de réflexion fiable, quelle que soit la température, la source d'énergie utilisée ou encore la durée d’utilisation et le vieillissement de ia source lumineuse. L'utilisation du moyen de rétrocontrôle permet de garantir une source d'énergie lumineuse ayant une intensité constante dans le temps et prédéfinie. Une source d'énergie lumineuse ayant une intensité prédéfinie permet notamment de garantir des résultats quantitatifs fiables. Le moyen de rétrocontrôle est de préférence un moyen de rétrocontrôle électronique. Par exemple le capteur d'intensité lumineuse 10 est une photodiode.
L'invention a aussi pour objet un ensemble de diagnostic pour la détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique d’analytes présents dans un échantillon comprenant un moyen de diagnostic selon l'invention un dispositif de lecture optique d'un support solide amovible comprenant :
un emplacement pour recevoir ledit support solide ;
une unité optique pour analyser ledit support solide et comprenant :
o une première source lumineuse pour émettre selon une intensité d’émission et dans une première plage de longueur d'onde un premier faisceau lumineux vers ledit emplacement ;
··.:· un système d'imagerie comprenant un détecteur optique à deux dimensions pour fournir une image à deux dimensions d’une zone de visualisation, ladite zone de visualisation comprenant au moins une portion dudit emplacement ;
o un filtre pour filtrer une plage de longueur d'onde définie, et positionné entre l’emplacement et ledit système d'imagerie ;
des moyens de traitement d'image de ladite image à deux dimensions pour :
o détecter des zones de références de iadite image à deux dimensions, o déterminer un nombre fini de sous-ensembles de ladite image à deux dimensions,
BE2017/5709 o positionner dans ladite image à deux dimensions chaque sousensemble à une position prédéterminée par rapport auxdites zones de référence, o fournir des données relatives à des intensités lumineuses issues desdits sous-ensembles ;
des moyens de détermination pour :
o calculer, pour chaque sous-ensemble, une intensité de sous-ensemble, et des moyens de transmission configurés pour transmettre ladite intensité de sous-ensembie pour chaque sous-ensemble,
Un tel dispositif optique selon l'invention permet la lecture simultanée d'un grand nombre de dots grâce à un détecteur optique à deux dimensions et à des moyens de traitement d'image et de détermination permettant de lire des informations d'anaiytes pour chacun des dots. L'Image à deux dimensions comprend des sousensembles, des portions, des régions d'intérêt, des zones d'intérêt ou encore des parties d'images Préfèrenlieüemerrt, les sous-ensembles d'une image à deux dimensions comprennent une pluralité de pixels. De préférence, chaque sous-ensemble comprend au moins 20 pixels, de préférence plus de 50 pixels et de manière encore plus préférée pies de 200 pixels.
L'avantage d'un tel dispositif selon l'invention est de pouvoir réaliser un diagnostic par une lecture de fluorescence en continu en s'affranchissant un maximum du bruit de fond engendré par la source lumineuse.
Un autre avantage d'un tel dispositif de lecture optique de l'invention est de permettre la lecture optique d'un grand nombre de régions d’intérêt présents sur une seule et meme tigette. Dans le cas d'un tel dispositif optique de l'invention, la lecture d’un grand nombre de regions d'intérêt ne nécessite pas de prévoir des emplacements pour plusieurs tigettes. L'emploi de plusieurs tîgettes dans un même lecteur optique pour une lecture simultanée de plusieurs tigettes afin de couvrir un grand nombre de régions d'intérêt avec un même capteur optique étant source de mauvais placement et de décalage des régions d'intérêt d'une mesure à une autre et ce pour chacune des tigettes introduites dans le lecteur optique.
B E2017/5709
L’invention a également pour objet un ensemble de diagnostic pour la détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique d'anaiytes présents dans un échantillon comprenant un moyen de diagnostic selon l'invention et un dispositif de lecture optique d'un support solide amovible comprenant :
un emplacement pour recevoir ledit support solide ;
une unité optique pour analyser ledit support solide et comprenant :
o une première source lumineuse pour émettre selon une intensité d'émission et dans une première plage de longueur d'onde un premier faisceau lumineux vers ledit emplacement ;
o un système d'imagerie comprenant un détecteur optique pour fournir une image d'une zone de visualisation, ladite zone de visualisation comorenant au moins une portion dudit emplacement ;
o un filtre pour filtrer une plage de longueur d'onde définie, et positionné entre l'emplacement et ledit système d'imagerie ;
des moyens de communications pour obtenir une information relative à un support solide ;
des moyens de sélection pour :
o sélectionner à partir d’une liste d’anaiytes prédéfinis, une sélection d'anaiytes à détecter et/ou à quantifier ;
des moyens de traitement d’image de ladite image pour :
o déterminer, à partir de l'information relative audit support solide à lire, un nombre fini de sous-ensembles de ladite image, chaque sousensembie correspondant à un analyte ;
o fournir des données relatives à des intensités lumineuses issues desdits sous-ensembles;
des moyens -de détermination pour :
o calruier, pour chaque sous-ensemble correspondant à un analyte sélectionné dans ladite sélection d’anaiytes une intensité de sousensemble ;
B E2017/5709 o déterminer sur la base de ladite intensité de sous-ensemble des informations d'analyte pour chaque sous-ensemble correspondant à un analyte sélectionné dans ladite sélection d'analytes ;
des moyens de transmission configurés pour transmettre ladite information d'analyte pour chaque sous-ensemble correspondant à un analyte sélectionné dans ladite sélection d'analytes.
Un tel dispositif selon l’invention permet la lecture des zones à tester, en particulier avec une mesure instantanée de fluorescence ou de façon préférée avec une mesure de ia lumière réfléchie des zones à tester. Afin de permettre une sélection des analytes à tester correspondant à des zones d'intérêts sur une tigette, un tel dispositif propose grâce a l'accès à une méthode contenant des Informations relatives à une tigette. une selection â partir d’une liste d’analytes à tester. Il est en effet intéressant d'effectuer une sélection des analytes à tester avant d’en obtenir les résultats afin de bien cibler les analytes dont il est. nécessaire de connaître les résultats d'un test afin de ne pas exposer un utilisateur à une trop grande quantité de résultats. Donner accès à une uop grande quantité de résultats à un utilisateur n’en ayant pas nécessairement le besoin l'expose au risque d'une perte d'objectivité par rapport à son intention d’analyse initiale. Ainsi, un tel disposûif de l'invention, grâce à des moyens de sélection, permet un choix des analytes â tester par l'utilisateur avant d’effectuer la lecture de la tigette. Les moyens de sélect-οπ, en communication avec les moyens de traitement d'image permettent aux moyens de traitement d’image, une détermination des informations des analytes sélectionnés uniquement.
Un avantage d’utiliser le lecteur optique de l'invention pour réaliser un diagnostic concernant une sélection d'analytes d’intérêt est qu'il ne nécessite ni une première sélection de différents types de bandelettes à tester, ni la mise en contact de chacune de ces bandelettes avec te produit à tester puis leur positionnement dans le lecteur optique. Tout cela permet d'éviter une manipulation importante des bandelettes à tester, coûteuse en temps et en gestion des stocks. Cela permet également une analyse plus simple, plus rapide et plus ciblée des analytes à tester, en disposant uniquement des résultats sélectionnés à l'issue de la lecture de la bandelette par te lecteur optique de l'invention.
B E2017/5709
L’invention porte également sur un ensemble de diagnostic pour la détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique d'analytes présents dans un échantillon comprenant un moyen de diagnostic selon l’invention et un dispositif de lecture optique d'un support solide amovible comprenant :
un emplacement pour recevoir ledit support solide ;
un dispositif d'identification pour identifier un support solide à lire ;
des moyens de communication pour accéder à une base de données de méthodes relatives audit support solide à lire pour obtenir une information relative à un support solide ;
une unité optique, pour analyser ledit support solide sur la base de paramètres d’analyse compris dans ladite information relative à un support solide et comprenant :
o une première source lumineuse pour émettre selon une intensité d'émission et dans une première plage de longueur d’onde un premier faisceau lumineux vers ledit emplacement ;
o un système d'imagerie comprenant un détecteur optique pour fournir une image d'une zone de visualisation, ladite zone de visualisation comprenant au moins une portion dudit emplacement ;
o un filtre pour filtrer une plage de longueur d’onde définie, et positionné entre l’emplacement et ledit système d'imagerie ;
des moyens de traitement d'image de ladite image pour :
•o lire l'information relative audit support solide à lire, une information relative <ï un nombre fini de sous-ensembles de ladite image ;
o fournir des données relatives à des intensités lumineuses issues desdits sous-ensembles ;
des moyens de détermination pour :
o calculer, pour chaque sous-ensemble, une intensité de sous-ensemble, et o déterminer sur la base de ladite intensité de sous-ensemble et sur la base de l’information relative audit support solide è lire, des informations d'analyte pour chaque sous-ensemble ;
B E2017/5709 des moyens de transmission configurés pour transmettre ladite information d'analyte pour chaque sous-ensemble.
Le dispositif de lecture optique selon l'invention permet une lecture optique d'une tigette pour l'analyse d'un échantillon avec un choix de méthode de lecture automatisé. La méthode de lecture comprenant de préférence des données relatives a : une version de méthode, un numéro de lot, une date limite d'utilisation d'un lot, le type de source lumineuse utilisée, le type de zone d'intérêt (ligne ou point), méthode pour analyse quantitative (binaire) ou quantitative, des paramètres d'acquisition d'image (temps d'exposition, gain,...), les positions par rapport à des points de référence (par exemple selon des coordonnées cartésiennes), un nombre de zones d'intérêt, un nombre de replica par analyte, l'organisation matricielle des zones d'intérêt sur le support solide mobile, la dimensions des zones d’intérêt (par exemple, un rayon), une dimension relative à une zone autour d’une zone d'intérêt à considérer pour la prise en compte du background, des paramètres de calibration du type interpolation de données ou permettant une analyse quantitative d'un échantillon et enfin la désignation des zones d'intérêt en fonction de l'analyte qu'elles permettent de détecter et/ou de quantifier.
D’autres formes de réalisation de l'ensemble de diagnostic suivant l’invention sont inôiquées dans ies revendications annexées.
L'invention a aussi pour objet une utilisation d'un moyen de diagnostic selon l'invention pour la détection et, a quantification respective, simultanée et spécifique d'analytes présents dans un ecnanttîlon, de préférence d'au moins 5, de préférence d'au moins .10, préfêrentiellemeni d'au moins 15 analytes appartenant à des classes distinctes, faisant partie de familles d'analytes différentes ou non.
L'invention a aussi pour obiet une utilisation d’un système récupérateur selon l'invention pour la détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique d'analytes présents dans un échantillon, de préférence d’au moins 5, de préférence d'au moins 10, préférentiellement d'au moins 15 analytes appartenant à des classes distinctes, faisant partie de familles d'analytes différentes ou non.
L'invention a aussi pour objet une utilisation d'un mélange réactionnel selon l'invention pour la détection et/ou la quantification respective, simultanée et
B E2017/5709 spécifique d'analytes présents dans un échantillon, de préférence d’au moins 5, de préférence d’au moins 10, préférentiellement d’au moins 15 analytes appartenant à des classes distinctes, faisant partie de familles d’analytes différentes ou non.
L'invention a aussi pour objet une utilisation d’un ensemble de diagnostic selon l'invention, pour la détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique d'analytes présents dans un échantillon, de préférence d'au moins 5, de préférence d'au moins 10, préférentiellement d'au moins 15 analytes appartenant à des classes distinctes, faisant partie de familles d'analytes différentes ou non.
D'autres formes d’utilisations du moyen de diagnostic, du système récupérateur, du mélange réactionnel et de l'ensemble de diagnostic suivant l’invention sont indiquées dans les revendications annexées.
D'autres caractéristiques, détails et avantages de l'invention ressortiront de ia description donnée ci-après, à titre non limitatif ef en faisant référence aux dessins annexés.
Description des figures
La figure 1 est une vue schématique d’un moyen de diagnostic selon le document antérieur EP1712914.
La figure 2.a est une vue schématique d'un moyen de diagnostic selon l'invention.
La figure 2b est une vue schématique d'un autre moyen de diagnostic selon l’invention
La figure 3 est une vue schématique illustrant en détail un système récupérateur selon l’invention.
Sur les figures, les éléments identiques ou analogues portent les mêmes références.
La figure 1 représente un moyen de diagnostic 1 selon le document antérieur EP1712914 et illustre le positionnement des éléments récupérateurs 41} 42, 43 et 5 sur un système récupérateur 3 sous la forme d'un support solide de nitrocellulose
B E2017/5709 dans le cas du dosage simultané de β-lactames 41; de tetracyclines 42 et de sulphadiméthoxlne 43, une zone de contrôle fixe S étant également prévue, par rapport à un sens de migration M. Selon ce document antérieur, le mélange réactionnel 2 est prévu dans un récipient distinct avec lequel un échantillon E à tester est mis en contact.
La figure 2a représente un moyen de diagnostic 1 selon l'invention et illustre 1e positionnement des éléments récupérateurs 4 et 5 sur un système récupérateur 3 sous la forme d'un support solide par rapport à un sens de migration M, les éléments récupérateurs 4 et 5 étant fixés sous la forme de points selon un arrangement matriciel en deux dimensions, Selon ce premier mode de réalisation de l'invention, le mélange réactionnel 2 est prévu dans un récipient distinct avec lequel un échantillon E à tester est mis en contact pour obtenir une solution, avant de tremper te système récupérateur 3 dans la solution obtenue.
La figure 2b représente un autre moyen de diagnostic 1 selon l’invention et illustre 1e positionnement des éléments récupérateurs 4 et 5 sur un système récupérateur 3 sous la forme d'un support solide par rapport à un sens de migration M, es éléments récupérateurs 4 et 5 étant fixés sous la forme de points selon un arrangement matriciel en deux dimensions. Selon ce second mode de réalisation de l'invention, te mélange réactionnel 2 est présent sur ledit système récupérateur 3, sous une forme lyophilisée., en amont desdifs éléments de récupération 4 et 5 fixés sur ledit système récupérateur 3 par rapport à un sec,s de migration M d'un liquide obtenu suite au dépôt d'un échantillon E à tester sur te mélange réactionnel 2.
La figure 3 illustre en détail le système récupérateur 3 selon l'invention sur lequel les emplacements de récupération 4 et 5 sont disposés selon un arrangement matriciel en deux dimensions sous la forme de points ayant un diamètre défini, chacun des points étant sépares par une distance minimate. L'arrangement matriciel en deux dimérisions est défini selon un système de coordonnées (X; Y} qui présente une première coordonnée X définie sur un axe longitudinal (AJ d'une longueur (L) dudit système récupérateur 3 et une deuxième coordonnées Y définie sur un axe longitudinal (AJ- d’une largeur (I) dudit système récupérateur 3. Selon un mode de réalisation préféré, le système récupérateur 3 comprend au moins 12 emplacements de récupération distincts (4i - 412j destinés la détection et/ou la quantification respective, simultanée et
B E2017/5709 spécifique d'au moins 12 analytes de classes distinctes, faisant partie d'au moins 3 families d'analytes différentes, présents dans un échantillon E et au moins trois emplacements de récupération 5 destinés à un contrôle du seuil de détection ou servant de calibrateur. En outre, chacun des emplacements de récupération (4X - 4i2 et 5r5j) est disposé en duplicat (4^, ;4ιΒ~412Λ ;412B).
H est bien entendu que la présente invention n'est en aucune façon limitée aux formes de réalisations décrites ci-dessus et que bien des modifications peuvent y être apportées sans sortir du cadre des revendications annexées.
Modes de réalisation selon rinventson - Exemples
Exempte i : Exemple de composition d'un tampon pour le mélange réactionnel et é>3lfo.Pfo.d'un. procédé, de. préparation Ju,mé|ange..réaçtignnel
Tableau 1 :
lyophilisé. lors de te réalisation de l'essai, 250 pl d'échantillon â tester seront ajoutés au mélange reacfionnei ainsi obtenu.
Exemple 2 : Exempte de cooptes;·;· des molécules de reconnaissance au...flppiophgrg rhodamine 8
Les récepteurs « Beta » et « Tetra » et tes oligonucléotides ADN sont obtenus suivant le procédé décrit dans EP1712914A1.
B E2017/5709
Les anticorps monoclonaux sont purifiés sur colonne de protéine-A ou protélne-G en fonction de l'espèce et de l'isotype. Les anticorps sont ensuite stockés à
-20°C dans du tampon phosphate WmM MaCS 140mM pH7,4.
La rhodamine B utilisée possède un résidu N5 hydroxysucdnimldyl(NHS)-esters qui a h particularité de réagir avec les groupements amines des protéines à pH basique.
Les molécules de reconnaissance (anticorps,, et/ou récepteurs) sont dialysés une nuit dans un tampon carbonate SOmM pH 8,5.
Le fluorophore est dissout dans du DMP à du 5mg/mL
La molécule de reconnaissance et le fluorophore (ia molécule de visualisation) sont mis en présence dans un rapport molaire d'environ 1/4 pendant une heure à l'abri de la lumière.
Enfin,, la réaction chimique est stoppée lors de la dialyse de complexe avec un tampon phosphate lümM phi 7,4.
D'autres types de liaison chimiques peuvent être réalisées, avec des fluorochromes possédant un groupement maièirnide ou camoxyle.
D'autres types de fluorophores peuvent être utilisés, tels que ie FITC, Alexa, DyLight,...
Le couplage des molécules de reconnaissance peut aussi être réalisé 20 avec des nanoparticules coiorimêtriques (nanoparticules d'or, latex, carbone...), aussi bien par couplage covalent que par adsorption électrostatique.
Exempt le de î'DO^k mélange réactionnel et. exem i'élé .s récupérateurs fixés sur le système récupérateur
BE2017/5709
2S
Canaux Molécules du mélange teactisnnel Ligands fixés sur le système récupérateur Liasse Famille Analytes détectés
CTL1 Anticorps 1 contrôle Antigène 1 contrôle contrôle contrôle /
DETA Récepteur beta ßlactames ßlactames antibiotiques 27
CEFA Anticorps monoclonal anticefalexin« cefalexins ßlactames antibiotiques 2
TETRA Récepteur tetra oligonucléotides ADN tetracyclines antibiotiques 10
SD IFA Anticorps anti- suifonarnides sulfonamides sulfonamides antibiotiques 20
SÖX Anticorps anti« sulfadoxme sulfadoxine sulfonamides antibiotiques 1
QUIDO Anticorps antifluoroquinolones fluoroquinolones fluoroquinolones ant:bacïériens 20
CAP Anticorps anti» chloramphenicol chloramphenicol phenicoles antibiotiques 1
MELA Anticorps anti- méiamine mélamine melamine adulterant 4
AFLA Anticorps anti·· «flatoxineMl afiatoxineMl mycotoxines toxines 2
co.?: Anticorps 2 contrôle Antigene 2 contrôle contrôle contrôle /
COLI Anticorps anti- colistine Colistine polymyxines antibiotiques 1
Anticorps antinéomycine néomycine aminoglycosides antibiotiques 2
GED1 Anticorps anti- gentamicine gentamicine aminoglycosides antibiotiques 2
STR Anticorps antistreptomycine streptomycine aminoglycosides antibiotiques 2
TYLO Anticorps antitylosine tylosine macrolides antibiotiques 2
UfcäCO Anticorps anti- iincosam-des üncosamldes sulfonamides antibiotiques 3
SPiRA Anticorps antispyramicine spyramic'me macrolides antibiotiques 2
ERY Anticorps antiérythromycine érythromycine macrolides anubk'Aiques 3
CTÜ Anticorps 3 contrôle Antigene 3 contrôle contrôle contrôle /
TOTAL 304 analytes détectés et discriminés via 17 canaux
B E2017/5709
Exempte 4 : Exemple de rgajisatiorj de Cessai gt résultats obtenus
Un échantillon de lait est mis en contact avec le mélange réactionnel (comprenant le tampon et les molécules de reconnaissance et/ou les ligands compétiteurs sous forme lyophilisée) durant 3 minutes à 3ô’C. Ensuite, l'extrémité en amont du sens de migration du système récupérateur est plongée dans la solution (comprenant l'échantillon et le mélange réactionnel). Après une incubation de 10 minutes à 30°C, la lecture des résultats est réalisée à l'aide d'un dispositif optique.
Les résultats sont repris dans le tableau 3,
Tableau 3 :
B E2017/5709
Canaux Concantrations ciblée par te test Concentration (ppb ; pg/kg) Signai (unité arbitraire) Interprétation instrumentale
BETA ........ >4 2 1,04 négatif
4 0,68 positif
ŒFÂ >2 1 1,09 négatif
2 0,64 positif
TETRA >50 30 1,10 négatif
50 0,71 positif
SULFA >100 50 1,08 négatif
100 0,71 positif
SDX >100 50 1,08 négatif
100 0,69 positif
QUIMQ >20 10 1,29 négatif
20 0,69 positif
CAP >0,3 0,2 1,01 négatif
0,3 0,84 positif
MLLA >15 10 1,11 négatif
15 0,86 positif
ÄRA >0,3 0,1 1,05 négatif
0,3 0,93 positif
COU >25 20 1,14 négatif
25 0,72 positif
NEU >1200 900 1,04 négatif
1200 0,69 positif
GEM >80 60 1,03 négatif
80 0,68 positif
STR >200 150 i.os négatif
200 0,68 positif
TYLO >40 30 1,14 négatif
40 0,80 positif
LISMCO >80 60 1,08 négatif
80 0,66 positif
SRI RA >50 30 1,05 négatif
50 0,79 positif
ERY >20 10 1,23 négatif
20 0,73 positif
B E2017/5709

Claims (28)

  1. REVENDICATIONS
    1. Moyen de diagnostic (1) pour la détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique d'une pluralité d'analytes présents dans un échantillon (E) comprenant au moins un mélange réactionnel (2) et au moins un système récupérateur (3), ledit au moins un système récupérateur étant sous la forme d'un support solide auquel se trouvent fixés en des emplacements de récupération (4 et 5) distincts et connus dans l'espace, des ligands compétiteurs et/ou des molécules biologiques de reconnaissance, de manière à Identifier par ia localisation desdits emplacements de récupération (4 et 5) sur ledit support, lesdlts analytes présents dans ledit échantillon (E), ledit moyen de diagnostic (1) étant caractérisé en ce que ledit système récupérateur (3) comprend des emplacements de récupération (4 et 5) qui sont disposés selon un arrangement matriciel en deux dimensions qui est défini selon un système de coordonnées connues et spécifiques desdits ligands compétiteurs et/ou desdites molécules biologiques de reconnaissance fixés audits emplacements de récupération (4 et 5) dudit système récupérateur (3).
  2. 2. Moyen de diagnostic (1) selon la revendication 1, caractérisé en ce que iesdits emplacements de récupération (4 et 5) sont disposés selon un arrangement matriciel en deux dimensions sous la forme de points présentant chacun un diamètre compris entre 20 μm à 2 mm, de préférence compris entre 100 à 500 μm, préférentiellement entre 250 et 400 μm.
  3. 3. Moyen de diagnostic (1) selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que ledit système de coordonnées présente une première coordonnée (X) définie sur un axe longitudinal (AJ d'une longueur (L) dudit système récupérateur et une deuxième coordonnées (Y) définie sur un axe longitudinal (AJ d'une largeur (I) dudit système récupérateur (3).
  4. 4. Moyen de diagnostic (1) selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que ledit système récupérateur (3) comprend au moins 5, de préférence au moins 10, préférentiellement au moins 15 emplacements de récupération (4) distincts destinés à la détection et/ou la quantification respective, simultanée et
    B E2017/5709 spécifique d'au moins 5, de préférence au moins 10, préférentiellement au moins 15 analytes de classes distinctes présents dans un échantillon et appartenant ou non à des familles d'anaiytes différentes, et au moins un emplacement de récupération destiné à un contrôle et/ou un calibrateur.
  5. 5. Moyen de diagnostic (1) selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que ledit système récupérateur (3) est sous la forme d’un support solide comprend une membrane ou un ensemble de membranes.
  6. 6. Moyen de diagnostic (1) selon l’une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en que ledit mélange réactionnel (2) contient des molécules biologiques de reconnaissance et/ou des ligands compétiteurs capables chacun de reconnaître, respectivement, simultanément et spécifiquement la présence d'une pluralité d'anaiytes déterminés dans ledit échantillon (E), lesdites molécules biologiques de reconnaissance et/ou lesdits ligands compétiteurs étant marqués directement et/ou indirectement avec au moins une molécule de visualisation.
  7. 7. Moyen de diagnostic (1) selon la revendication 6, caractérisé en ce que, pour la détection et/ou la quantification d'un analyte donné, ledit mélange réactionnel (2) contient au moins une molécule biologique de reconnaissance et au moins un ligand compétiteur se trouve fixé sur ledit système récupérateur (3), ou inversement.
  8. 8. Moyen de diagnostic (1) selon la revendication 6 ou 7, caractérisé en ce que ledit mélange réactionnel (2- est présent dans un contenant, ledit contenant étant distinct dudit système récupérateur (3).
  9. 9. Moyen de diagnostic {1} selon la revendication 6 ou 7, caractérisé en ce que ledit mélange réactionnel (2) est présent sur ledit système récupérateur (3), sous une forme lyophilisée, en amont desdits éléments de récupération (4 et 51 fixés sur ledit système récupérateur {3) par rapport à un sens de migration (Μ) d'un liquide.
  10. 10. Moyen de diagnostic (1) selon l’une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que lesdites molécules biologiques de reconnaissance sont des anticorps, de préférence des anticorps primaires, soit monoclonaux ou polyclonaux, purifiés ou non purifiés, et/ou des aptamères et/ou des GEPIs et/ou tout autre élément
    B E2017/5709 chimique ou biologique, naturel ou synthétique, capable de reconnaître un analyte et/ou des récepteurs biologiques.
  11. 11. Moyen de diagnostic (1) selon l'une quelconque des revendications
    1 à 10, caractérisé en ce que lesdits ligands compétiteurs sont des analogues des analytes 5 recherchés et/ou des molécules capables de fixer spécifiquement Iesdites molécules biologiques de reconnaissance.
  12. 12. Moyen de diagnostic (1) selon l'une quelconque des revendications
    6 à 11, caractérisé en ce que ladite au moins une molécule de visualisation est détectable en visible et/ou en fluorescence.
    10
  13. 13. Moyen de diagnostic (1) selon l’une quelconque des revendications
    6 â .1.2, caractérisé en que ladite au moins une molécule de visualisation est fusionnée auxdiîes molécules biologiques de reconnaissance et/ou auxdits ligands compétiteurs via un couplage chimique et/ou génétique.
  14. 14. Moyen de diagnostic (1) selon la revendication 13, caractérisé en
  15. 15 que ledit couplage chimique et/ou génétique est réalisé via au moins une force électrostatique, au moins un lien peptidique, au moins un gène rapporteur, ou une comisinaison de ceux-ci.
    15. Moyen de diagnostic (1) selon l'une quelconque des revendications
    6 à 14, caractérisé en ce que ladite au moins une molécule de visualisation est choisie
    20 dans i.e groupe constitué de l'or colloïdal, les billes colorées, de préférence les billes de latex colorées, l'isothsocyanate de fluorescéine (FÎTC), la phycoérythrine (PE), la rhodamine δ, les chromogènes et de leurs mélanges.
    Moyen de diagnostic (1} selon l'une quelconque des revendications
    1 à 15, caractérisé en ce que lesdits analytes appartiennent à des classes d'analytes
    25 différentes faisant partie de familles d'analytes distinctes, Iesdites familles comprenant les résidus médicamenteux, les toxines, les virus, les bactéries, les hormones, les métaux lourds, les adultérants ou les allergènes.
  16. 1 7. Moyen de diagnostic (1) selon la revendication 15, caractérisé en ce que lesdits analytes appartiennent à ia famille des résidus médicamenteux et sont choisis
    30 dans le groupe constitué des pénicillines, des céphalosporines, des tetracyclines, des
    B E2017/5709 sulfamides, des aminoglycosides, des aminocyclitols, des macrolides, des quinolones, des ionophores, des carbadox, des nitrofurannes, des phénicois, et de leurs mélanges.
  17. 18. Moyen de diagnostic (1) selon l'une quelconque des revendications 1 à 17, caractérisé en ce que ledit échantillon (E) est essentiellement liquide et est obtenu à partir de lait, de miel, de viande, d'œufs, de sang complet, de sérum, d'urine, ou d'autres liquides biologiques.
  18. 19. Moyen de diagnostic (1) selon l'une quelconque des revendications
    1 à 18, pour la détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique d'une pluralité d'analytes présents dans un échantillon (E), ladite détection et/ou ladite quantification étant caractérisée ers ce qu'elle est réalisée au moyen d'un dispositif de lecture optique.
  19. 20. Système récupérateur (3) pour un moyen de diagnostic (1) selon l’une quelconque des revendications 1 à 19 pour la détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique d’analytes présents dans un échantillon (E), sous la forme d’un support auquel se trouvent fixés en des emplacements de récupération (4 et 5) distincts et connus dans l'espace, des ligands compétiteurs et/ou des molécules biologiques de reconnaissance, de manière à identifier par la localisation desdits emplacements de récupération (4 et 5) sur ledit support, la présence desdits analytes présents dans ledit échantillon (El. ledit système récupérateur (31 étant caractérisé en ce que lesdits emplacements de récupération (4 et 5) sont disposés selon un arrangement matriciel en deux dimensions qui est défini selon un système de coordonnées connues et spécifiques desdits Manos compétiteurs et/ou desdites molécules biologiques de reconnaissance fixés audits emplacements de récupération (4 et 5) dudit système récupérateur (31.
  20. 21. Mélange réactionnel (2) pour un moyen de diagnostic (1) selon l'une quelconque des revendications 6 à 19, comprenant des molécules biologiques de reconnaissance et/ou des ligands compétiteurs capables chacun de reconnaître, respectivement, simultanément et spécifiquement un analyte déterminé présent dans ledit échantillon (E), iesdites molécules biologiques de reconnaissance et/ou lesdits ligands compétiteurs étant marqués directement et/ou indirectement avec au moins une molécule de visualisation, ledit marquage étant caractérisé en ce que ladite molécule de
    B E2017/5709 visualisation est fusionnée auxdites molécules biologiques de reconnaissance et/ou auxdits ligands compétiteurs via un couplage chimique et/ou génétique.
  21. 22. Ensemble de diagnostic pour la détection et/ou ia quantification respective, simultanée et spécifique d'analytes présents dans un échantillon (E) comprenant un moyen de diagnostic (1) selon l'une quelconque des revendications 1 à 19, caractérisé en ce qu'il comprend en outre un dispositif de lecture optique d'un support solide amovible comprenant :
    un emplacement pour recevoir ledit support solide (3) ;
    une unité optique pour analyser ledit support solide (3) et comprenant :
    o une première source lumineuse pour émettre selon une intensité d'émission et dans une première plage de longueur d'onde un premier faisceau lumineux vers ledit emplacement ;
    o un capteur d'intensité lumineuse pour mesurer l'intensité d'émission émise par ladite première source lumineuse ;
    o un moyen de rétrocontrôle pour moduler ladite intensité d'émission de ladite première source lumineuse en fonction de l'intensité d'émission mesurée par ledit capteur d'intensité lumineuse de sorte que ladite première source lumineuse émette une intensité cible ;
    o un système d'imagerie comprenant un détecteur optique pour fournir une image d'une zone de visualisation, ladite zone de visualisation comprenant au moins une portion dudit emplacement ;
    o un filtre pour filtrer une plage de longueur d’onde définie, et positionné entre l'emplacement et ledit système d'imagerie ;
    des moyens de traitement d'image de ladite image pour :
    o déterminer un nombre fini de sous-ensembles de ladite image, o fournir des données relatives à des intensités lumineuses issues desdits sous-ensembles ;
    des moyens de détermination pour :
    o calculer, pour chaque sous-ensemble, une intensité de sous-ensemble,
    B E2017/5709 des moyens de transmission pour transmettre une information relative à ladite intensité de sous-ensemble pour chaque sous-ensemble.
  22. 23. Ensemble de diagnostic pour la détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique d'analytes présents dans un échantillon (E) 5 comprenant urt moyen de diagnostic (1) selon l’une quelconque des revendications 1 à 19, caractérisé en ce qu’il comprend en outre un dispositif de lecture optique d’un support solide (3) amovible comprenant :
    un emplacement pour recevoir ledit support solide (3) ;
    une unité optique pour analyser ledit support solide (3) et comprenant :
    10 o une première source lumineuse (3) pour émettre selon une intensité d’émission et dans une première plage de longueur d'onde un premier faisceau lumineux vers ledit emplacement ;
    o un système d’imagerie comprenant un détecteur optique à deux dimensions pour fournir une image à deux dimensions d'une zone de 15 visualisation, ladite zone de visualisation comprenant au moins une portion dudit emplacement ;
    o un filtre pour filtrer une plage de longueur d'onde définie, et positionné entre l'emplacement et ledit système d'imagerie ;
    des moyens de traitement d'image de ladite image à deux dimensions pour : c· détecter des zones de références de ladite image à deux dimensions, o déterminer un nombre fini de sous-ensembles de ladite image à deux dimensions, ö pGÎ sitionner dans ladite image à deux dimensions chaque sousensemble à une position prédéterminée par rapport auxdites zones de référence, o fournir des données relatives à des intensités lumineuses issues desdits sous-ensembles ;
    des moyens de détermination pour :
    o calculer, pour chaque sous-ensemble, une intensité de sous-ensemble, et
    B E2017/5709 des moyens de transmission configurés pour transmettre ladite intensité de sous-ensemble pour chaque sous-ensemble.
  23. 24. Ensemble de diagnostic pour la détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique d'analytes présents dans un échantillon (E) comprenant un moyen de diagnostic (1} selon l'une quelconque des revendications 1 à 19, caractérisé en ce qu'il comprend en outre un dispositif de lecture optique d’un support solide (3) amovible comprenant :
    un emplacement pour recevoir ledit support solide (3) ;
    une unité optique pour analyser ledit support solide (3) et comprenant :
    o une première source lumineuse pour émettre selon une intensité d'émission et dans une première plage de longueur d'onde un premier faisceau lumineux vers ledit emplacement ;
    o un système d'imagerie comprenant un détecteur optique pour fournir une image d'une zone de visualisation, ladite zone de visualisation comprenant au moins une portion dudit emplacement ;
    o un filtre pour filtrer une plage de longueur d'onde définie, et positionné entre l'emplacement et ledit système d'imagerie ;
    des moyens de communications pour obtenir une information relative à un support solide (3) ;
    des moyens de sélection pour :
    o sélectionner à partir d'une liste d’analytes prédéfinis, une sélection d'analytes à détecter et/ou à quantifier ;
    des moyens de traitement d'image de ladite image pour :
    o déterminer, à partir de l'information relative audit support solide (3) à lire, un nombre fini de sous-ensembles de iadite image, chaque sousensemble correspondant à un andyto ;
    o fournir des données relatives à des intensités lumineuses issues desdits sous-ensembles;
    des moyens de détermination pour :
    B E2017/5709 o calculer, pour chaque sous-ensemble correspondant à un analyte sélectionné dans ladite sélection d'anaiytes une intensité de sousensemble ;
    o déterminer sur la base de ladite intensité de sous-ensemble des
    5 informations d'analyte pour chaque sous-ensemble correspondant à un analyte sélectionné dans ladite sélection d'anaiytes ;
    des moyens de transmission configurés pour transmettre ladite information d'analyte pour chaque sous-ensemble correspondant à un analyte sélectionné dans ladite sélection d'anaiytes.
    10 25. Ensemble de diagnostic pour la détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique d'anaiytes présents dans un échantillon (El comprenant un moyen de diagnostic (1) selon l'une quelconque des revendications 1 à 19, caractérisé en ce qu'il comprend en outre„un dispositif de lecture optique d'un support solide (3) amovible comprenant :
    15 - un emplacement pour recevoir ledit support solide (3) ;
    un dispositif d'identification pour identifier un support solide (3) à lire ;
    des moyens de communication pour accéder à une base de données de méthodes relatives audit support solide (3) à lire pour obtenir une information relative à un supporte solide (3) :
    20 - une unité optique, pour analyser ledit support solide (3) sur la base de paramètres d'analyse compris dans ladite information relative à un support solide (3} et comprenant :
    o une première source lumineuse pour émettre selon une intensité d'émission et dans une première plage de longueur d'onde un premier
  24. 25 faisceau lumineux vers ledit emplacement ;
    o un système d'imagerie comprenant un détecteur optique pour fournir une image d'une zone de visualisation, ladite zone de visualisation comprenant au moins une portion dudit, emplacement ;
    o un filtre pour filtrer une plage de longueur d'onde définie, et
    30 positionné entre l'emplacement et ledit système d'imagerie ;
    des moyens de traitement d’image de ladite image pour :
    B E2017/5709 o Hre dans l'information relative audit support solide (3) à lire, une information relative à un nombre fini de sous-ensembies de ladite image ;
    o fournir des données relatives à des intensités lumineuses issues desdits sous-ensembles ;
    des moyens de détermination pour :
    o calculer, pour chaque sous-ensemble, une intensité de sous-ensemble, et o déterminer sur ia base de ladite intensité de sous-ensemble et sur la base de l'informat-on relative audit support solide (3) à lire, des informations d'analyce pour chaque sous-ensemble ;
    des moyens de transmission configurés pour transmettre ladite information d’anaîyte pour chaque sous-ensemble.
  25. 26. Utilisation d'un moyen de diagnostic (1) selon l'une quelconque des revendications 1 à 19 pour la détection et/ou la quantification respective, simutenêe et spécifique d'analytes présents dans un échantillon (E), de préférence d’au moins 5, de préférence d'au moins 10, préférentiellement d’au moins 15 analytes appartenant à des classes distinctes, taisant partie de familles d'analytes différentes ou non.
  26. 27. Utilisation d'un système récupérateur (3) selon la revendication 2.0 pour ia détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique d'analytes présents dans un échantillon (E), de préférence d'au moins 5, de préférence d'au moins 20, préférentiellement d'au moins 15 analytes appartenant à des classes distinctes, faisant partie de familles d'analytes différentes ou non.
  27. 28. Utilisation d’un mélange réactionnel (2) selon la revendication 21 pour la détection et/ou ia quantification respective, simultanée et spécifique d'analytes présents dans un échantillon (E}, de préférence d'au moins 5, de préférence d'au moires 10, préférentiellement d'au moins 15 analytes appartenant à des classes distinctes, faisant partie de families d’analytes différentes ou non.
  28. 29. Utilisation d'un ensemble de diagnostic selon l'une quelconque des revendications 22 à 25, pour ia détection et/ou la quantification respective, simultanée et spécifique de classes d'analytes présents dans un échantillon (E). de préférence d’au
    B E2017/5709 moins 5, de préférence d'au moins 10, préférentiellement d'au moins 15 analytes appartenant à des classes distinctes, faisant partie de familles d'analytes différentes ou non.
BE2017/5709A 2017-10-04 2017-10-04 Moyen de diagnostic pour la détection et/ou la quantification d’une pluralité d’analytes présents dans un échantillon BE1025616B1 (fr)

Priority Applications (14)

Application Number Priority Date Filing Date Title
BE2017/5709A BE1025616B1 (fr) 2017-10-04 2017-10-04 Moyen de diagnostic pour la détection et/ou la quantification d’une pluralité d’analytes présents dans un échantillon
PCT/EP2018/076983 WO2019068802A1 (fr) 2017-10-04 2018-10-04 Dispositif de lecture optique à intensité de lumière contrôlée d'un support solide amovible pour la détection et/ou la quantification d'analytes présents dans un échantillon
AU2018346295A AU2018346295A1 (en) 2017-10-04 2018-10-04 Diagnostic means for the detection and/or quantification of a plurality of analytes present in a sample
BR112020006581-1A BR112020006581A2 (pt) 2017-10-04 2018-10-04 meio de diagnóstico para detectar e/ou quantificar uma pluralidade de analitos presentes em uma amostra
US16/652,800 US20200256797A1 (en) 2017-10-04 2018-10-04 Diagnostic means for the detection and/or quantification of a plurality of analytes present in a sample
PCT/EP2018/076987 WO2019068804A1 (fr) 2017-10-04 2018-10-04 Dispositif de lecture optique à la carte d'un support solide amovible pour la détection et/ou la quantification d'analytes présents dans un échantillon
PCT/EP2018/076993 WO2019068806A1 (fr) 2017-10-04 2018-10-04 Moyen de diagnostic pour la détection et/ou la quantification d'une pluralité d'analytes présents dans un échantillon
MX2020003793A MX2020003793A (es) 2017-10-04 2018-10-04 Medios de diagnostico para detectar y/o cuantificar una pluralidad de analitos presentes en una muestra.
EP18782435.4A EP3692367A1 (fr) 2017-10-04 2018-10-04 Moyen de diagnostic pour la détection et/ou la quantification d'une pluralité d'analytes présents dans un échantillon
CA3078150A CA3078150A1 (fr) 2017-10-04 2018-10-04 Moyen de diagnostic pour la detection et/ou la quantification d'une pluralite d'analytes presents dans un echantillon
CN201880064404.3A CN111512157A (zh) 2017-10-04 2018-10-04 用于检测和/或定量样品中存在的多种分析物的诊断装置
JP2020519697A JP7361026B2 (ja) 2017-10-04 2018-10-04 サンプルに存在する複数の検体を検出及び／又は定量化するための診断手段
RU2020112945A RU2799444C2 (ru) 2017-10-04 2018-10-04 Средство диагностики для обнаружения и/или количественного определения аналитов, присутствующих в пробе
US18/461,044 US20240077422A1 (en) 2017-10-04 2023-09-05 Diagnostic means for the detection and/or quantification of a plurality of analytes present in a sample

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
BE2017/5709A BE1025616B1 (fr) 2017-10-04 2017-10-04 Moyen de diagnostic pour la détection et/ou la quantification d’une pluralité d’analytes présents dans un échantillon

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BE1025616A1 BE1025616A1 (fr) 2019-04-30
BE1025616B1 true BE1025616B1 (fr) 2019-05-08

Family

ID=60117411

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BE2017/5709A BE1025616B1 (fr) 2017-10-04 2017-10-04 Moyen de diagnostic pour la détection et/ou la quantification d’une pluralité d’analytes présents dans un échantillon

Country Status (1)

Country Link
BE (1) BE1025616B1 (fr)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140024016A1 (en) * 2012-07-18 2014-01-23 Symbolics, Llc Lateral flow assays using two dimensional features

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140024016A1 (en) * 2012-07-18 2014-01-23 Symbolics, Llc Lateral flow assays using two dimensional features

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KNECHT B G ET AL: "AUTOMATED MICROARRAY SYSTEM FOR THE SIMULTANEOUS DETECTION OF ANTIBIOTICS IN MILK", ANALYTICAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, US, vol. 76, no. 3, 1 February 2004 (2004-02-01), pages 646 - 654, XP001047318, ISSN: 0003-2700, DOI: 10.1021/AC035028I *
NADEZHDA A. TARANOVA ET AL: "Integration of lateral flow and microarray technologies for multiplex immunoassay: application to the determination of drugs of abuse", MIKROCHIMICA ACTA, vol. 180, no. 11-12, 13 July 2013 (2013-07-13), pages 1165 - 1172, XP055152769, ISSN: 0026-3672, DOI: 10.1007/s00604-013-1043-2 *
THOMAS P. O'CONNOR: "SNAP Assay Technology", TOPICS IN COMPANION ANIMAL MEDICINE, vol. 30, no. 4, 1 December 2015 (2015-12-01), AMSTERDAM, NL, pages 132 - 138, XP055473890, ISSN: 1938-9736, DOI: 10.1053/j.tcam.2015.12.002 *

Also Published As

Publication number Publication date
BE1025616A1 (fr) 2019-04-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2019068806A1 (fr) Moyen de diagnostic pour la détection et/ou la quantification d&#39;une pluralité d&#39;analytes présents dans un échantillon
Di Nardo et al. Ten years of lateral flow immunoassay technique applications: Trends, challenges and future perspectives
US11422030B2 (en) Spectral imaging system for remote and noninvasive detection of target substances using spectral filter arrays and image capture arrays
Taitt et al. Detection of Salmonella enterica serovar typhimurium by using a rapid, array-based immunosensor
EP1869475B1 (fr) Procede in-vitro pour la detection et l&#39;identification simultanees d&#39;antibiotiques de classes differentes et trousse de diagnostic correspondante
Gwaltney-Brant Veterinary forensic toxicology
US20100285490A1 (en) Detection apparatus
CN105899936A (zh) 包括光学部的微成像器分析系统及其使用方法
CN107121396A (zh) 用于检测分析物的方法
Taitt et al. Array biosensor for toxin detection: continued advances
CN101657723A (zh) 通过增加报道抗体层积改进抗体谱灵敏度
JP2005505746A (ja) レアイベント検出システム
Deveney et al. A parasite survey of farmed Southern bluefin tuna, Thunnus maccoyii (Castelnau)
JP2002506522A (ja) 流体サンプル中のミクロ粒子を検出するための方法及び装置
KR20190127816A (ko) 디지털 분자 분석
Kwon et al. Applications of smartphone cameras in agriculture, environment, and food: A review
EP3218715B1 (fr) Système pour l&#39;évaluation d&#39;au moins un analyte susceptible d&#39;être contenu dans un échantillon liquide déposé sur un dispositif immunochromatographique
IL174032A (en) Method and device for the detection of very small quantities of particles
CN111183359A (zh) 横流免疫测定装置及其使用方法
JP2021501322A5 (fr)
FR3038620A1 (fr) Procede de detection d&#39;une presence ou d&#39;une absence d&#39;au moins une premiere zone d&#39;inhibition
BE1025616B1 (fr) Moyen de diagnostic pour la détection et/ou la quantification d’une pluralité d’analytes présents dans un échantillon
CN107923913A (zh) 评估血细胞的细胞表面受体的方法
US20230003728A1 (en) Velvet disease detection device, system and method
US20210341476A1 (en) Velvet disease test and method

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Effective date: 20190508