ES2960034T3 - Inhibidores de la arginasa y métodos de uso de los mismos - Google Patents

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ES2960034T3 ES20709706T ES20709706T ES2960034T3 ES 2960034 T3 ES2960034 T3 ES 2960034T3 ES 20709706 T ES20709706 T ES 20709706T ES 20709706 T ES20709706 T ES 20709706T ES 2960034 T3 ES2960034 T3 ES 2960034T3
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Tyler Grebe
Sameer Kawatkar
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Abstract

Se describen compuestos de fórmula (Ib) o (Vc), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos de fórmula (Ib) o (Vc) y métodos para usar los mismos para tratar cáncer, enfermedades inflamatorias respiratorias e inhibir la arginasa. ; en la que R1 es -H o -C(O)CH(R1a)NHR1b; y R1a se selecciona entre -H, -alquilo (C1-C4) y CH2OR1c; R1b es -H; o alternativamente, R1a y R1b, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo heterocíclico de 5 miembros; y R1c es H o -CH3. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Inhibidores de la arginasa y métodos de uso de los mismos
Antecedentes de la invención
La arginasa es una metaloenzima de manganeso que cataliza la conversión de L-arginina en urea y L-ornitina. Existen dos isoformas: La arginasa 1 es una enzima citosólica que se encuentra predominantemente en los hepatocitos, donde desempeña una función crítica en la eliminación del amoníaco a través de la síntesis de urea, y arginasa 2, una enzima mitocondrial altamente expresada en el riñón implicada en la producción de ornitina, un precursor de poliaminas y prolinas importantes para la proliferación celular y la producción de colágeno, respectivamente.
Aunque la L-arginina no es un aminoácido esencial, ya que puede proporcionarse a través de la renovación de proteínas en adultos sanos, el aumento de la expresión y la secreción de arginasas resulta en niveles reducidos de L-arginina en diversas condiciones fisiológicas y patológicas(porejemplo,embarazo, enfermedades autoinmunes, cáncer). Las células inmunitarias, en particular, son sensibles a la reducción de los niveles de L-arginina. Las células T, cuando se enfrentan a un microambiente bajo de L-arginina, reducen su tasa de proliferación y disminuyen la expresión de la cadena CD3Z, IFNy y enzimas líticas, lo que resulta en una respuesta deficiente de las células T. Las células dendríticas responden a condiciones bajas de L-arginina al reducir su capacidad de presentar antígenos, y las células asesinas naturales reducen tanto la proliferación como la expresión de enzimas líticas.
Los tumores utilizan múltiples mecanismos inmunosupresores para evadir el sistema inmunitario. Uno de ellos es la reducción de la L-arginina a través de niveles elevados de arginasa circulante, el aumento de la expresión y secreción de arginasa por las células tumorales, y el reclutamiento de arginasa que expresa y secreta células supresoras derivadas de mieloides. Juntos, estos conducen a una reducción de la L-arginina en el microambiente tumoral y un fenotipo inmunosupresor. Se ha demostrado que la inhibición farmacológica de la actividad de la arginasa revierte la supresión inmunitaria inducida por la L-arginina baja en modelos animales. Como tal, existe la necesidad de inhibidores de la arginasa potentes y selectivos para revertir la supresión inmunitaria y reactivar la inmunidad anticancerígena en los pacientes, ya sea como agente único o en combinación con terapias que revierten mecanismos inmunosupresores adicionales.
WO2011/133653A1 y WO2018/119440A1 describen ciertos compuestos como inhibidores de la arginasa.
Sumario de la invención
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (Ib), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
en donde
R1 es -H o -C(O)CH(R1a)NHR1b; y
R1a se selecciona de -H, alquilo -(C1-C6) y CH2OR1c;
R1b es -H; o alternativamente, R1a y R1b, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo heterocíclico de 5 miembros; y
R1c es H o -CH3.
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (II), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
R2 es -H o -C(O)CH(R2a)NH2; y
R2a se selecciona de -H o -alquilo (C1-C6).
En una realización, se revela una sal farmacéutica aceptable del mismo:
R3 se selecciona de -H o -alquilo (C1-C4).
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (IVb), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
ela un compuesto de la fórmula (Vc), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
R1 es -H o -C(O)CH(R1a)NHR1b; y
R1a se selecciona de -H, alquilo -(C1-C4) y CH2OR1c;
R1b es -H; o alternativamente, R1a y R1b, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo heterocíclico de 5 miembros; y
R1c es H o -CH3.
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (VI), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
R2 es -H o -C(O)CH(R2a)NH2; y
R2a se selecciona de -H o -alquilo (C1-C6).
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (VII), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
R3 se selecciona de -H o -alquilo (C1-C4).
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (Vlllb), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
En algunas realizaciones, se revelan los compuestos de la Tabla 1, o una sal farmacéutica aceptable de los mismos. En algunas realizaciones, se revelan composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, o la Tabla 1, o una sal farmacéutica aceptable del mismo, y un portador farmacéutico aceptable.
En algunas realizaciones, se revelan compuestos de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, o la Tabla 1, o una sal farmacéutica aceptable del mismo, para tratar el cáncer.
En algunas realizaciones, se revelan composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, o una sal farmacéutica aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer.
En algunas realizaciones, se revelan compuestos de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, o la Tabla 1, o una sal farmacéutica aceptable de los mismos, para tratar una enfermedad inflamatoria respiratoria.
En algunas realizaciones, se revelan composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, o una sal farmacéutica aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria respiratoria.
En algunas realizaciones, la enfermedad inflamatoria respiratoria antes mencionada es la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) o asma.
Descripción detallada de la invención
Compuestos
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (Ib), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
en donde
R1 es -H o -C(O)CH(R1a)NHR1b; y
R1a se selecciona de -H, alquilo -(C1-C6) y CH2OR1c;
R1b es -H; o alternativamente, R1a y R1b, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo heterocíclico de 5 miembros; y
R1c es H o -CH3.
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (Ib). En otra realización, se revela una sal farmacéutica aceptable del compuesto de la fórmula (Ib).
En algunas realizaciones de la fórmula (Ib), R1 es -H.
En algunas realizaciones de la fórmula (Ib), R1 es -C(O)CH(R1a)NHR1b; R1a es -H; y R1b es -H.
En algunas realizaciones de la fórmula (I R1a es -alquilo (C1-C6); y R1b es -H. En algunas realizaciones de la fórmula (Ib), R1 es R1a es CH2OR1c; y R1b es -H. En algunas realizaciones de la fórmula (Ib), R1 es -C(O)CH(R1a)NHR1b; y R1a y R1b, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo heterocíclico de 5 miembros.
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (II), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
en donde
R2 es -H o -C(O)CH(R2a)NH2; y
R2a se selecciona de -H o -alquilo (C1-C6).
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (II). En otra realización, se revela una sal farmacéutica aceptable del compuesto de la fórmula (II).
En algunas realizaciones de la fórmula (II), R2 es -H.
En algunas realizaciones de la fórmula (II), R2 es -C(O)CH(R2a)NH2; y R2a es -H.
En algunas realizaciones de la fórmula (II), R2 es -C(O)CH(R2a)NH2; y R2a es -alquilo (C1-C6). En una realización, se revela una sal farmacéutica aceptable del mismo:
en donde R3 se selecciona de -H o -alquilo (C1-C4).
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (III). En otra realización, se revela una sal farmacéutica aceptable del compuesto de la fórmula (III).
En algunas realizaciones de la fórmula (III), R3 es -H.
En algunas realizaciones de la fórmula (III), R3 es -alquilo (C1-C4).
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (IVb), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (IVb). En otra realización, se revela una sal farmacéutica aceptable del compuesto de la fórmula (IVb).
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (Vc), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
R1 es -H o -C(O)CH(R1a)NHR1b; y
R1a se selecciona de -H, alquilo -(C1-C4) y CH2OR1c;
R1b es -H; o alternativamente, R1a y R1b, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo heterocíclico de 5 miembros; y
R1c es H o -CH3.
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (Vc). En otra realización, se revela una sal farmacéutica aceptable del compuesto de la fórmula (Vc).
En algunas realizaciones de la fórmula (Vc), R1 es -H.
En algunas realizaciones de la fórmula (Vc), R1 es -C(O)CH(R1a)NHR1b; R1a es -H; y R1b es - H.
En algunas realizaciones de la fórmula (Vc), R1 es -C(O)CH(R1a)NHR1b; R1a es -alquilo (C1-C6); y R1b es -H. En algunas realizaciones de la fórmula (Vc), R1 es -C(O)CH(R1a)NHR1b; R1a es CH2OR1c; y R1b es -H.
En algunas realizaciones de la fórmula (Vc), R1 es -C(O)CH(R1a)NHR1b; y R1a y R1b, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo heterocíclico de 5 miembros.
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (VI), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
R2 es -H o -C(O)CH(R2a)NH2; y
R2a se selecciona de -H o -alquilo (C1-C6).
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (VI). En otra realización, se revela una sal farmacéutica aceptable del compuesto de la fórmula (VI).
En algunas realizaciones de la fórmula (VI), R2 es -H.
En algunas realizaciones de la fórmula (VI), R2 es -C(O)CH(R2a)NH2; y R2a es -H.
En algunas realizaciones de la fórmula (VI), R2 es -C(O)CH(R2a)NH2; y R2a es -alquilo (C1-C6).
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (VII), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
R3 se selecciona de -H o -alquilo (C1-C4).
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (VII). En otra realización, se revela una sal farmacéutica aceptable del compuesto de la fórmula (VII).
En algunas realizaciones de la fórmula (III), R3 es -H.
En algunas realizaciones de la fórmula (III), R3 es -alquilo (C1-C4).
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (Vlllb), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
En una realización, se revela un compuesto de la fórmula (Vlllb). En otra realización, se revela una sal farmacéutica aceptable del compuesto de la fórmula (Vlllb).
En algunas realizaciones, los compuestos de la fórmula (Ib), (II), (III) y (IVb), incluidos los subgéneros y especies de los mismos, se convierten en los compuestos de la fórmula (Vc), (VI), (VII) y (Vlllb), incluidos cualquiera de los subgéneros y especies de los mismos a través de la ciclización intramolecular, y viceversa. Es decir, es un proceso de interconversión. Los compuestos de la fórmula (Ib), (II), (III) y (IVb) incluidos los subgéneros y especies de los mismos y los compuestos de la fórmula (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo los subgéneros y especies de los mismos se convierten cada uno en el otro parcialmente o completamente dependiendo de las condiciones, tales como temperatura, presión, humedad, pH y/o composición del medio (por ejemplo, disolventes), y etc. Se ilustra en el esquema a continuación:
en donde R1 es el mismo que se define en la fórmula (Ib) y (Vc) anterior.
En algunas realizaciones, se revelan compuestos de la Tabla 1, o una sal farmacéutica aceptable de los mismos:
Tabla 1
Las configuraciones estereoquímicas en las estructuras químicas en este documento se representan a través de notaciones de cuña (incluyendo cuña sólida y cuña rota/discontinua), líneas en negrita y líneas de puntos. Las notaciones de cuña se utilizan para indicar la estereoquímica absoluta. En particular, las notaciones de cuña se utilizan para indicar la posición de los enlaces químicos en relación con el plano de la superficie de dibujo en el que la cuña sólida indica que el enlace se está proyectando hacia el espectador; la cuña rota (discontinua) indica que el enlace se está alejando del espectador. Por ejemplo, las estructuras químicas de los ejemplos 1 a 9 y 12 tienen notaciones de cuña que indican la estereoquímica absoluta. Por otro lado, las líneas en negrita y punteadas se utilizan para indicar la estereoquímica relativa, como, por ejemplo, las líneas en negrita en un anillo indican los enlaces en el mismo lado, es decir, una relación syn, mientras que la línea punteada en el anillo indica el enlace en el lado opuesto de las líneas en negrita, es decir, una relación anti. Por ejemplo, las estructuras químicas de los ejemplos 10 y 11 tienen líneas en negrita y punteadas que indican la estereoquímica relativa de los dos enantiómeros.
El lenguaje “alquilo C1-C4” incluye las mitades de alquilo acíclico que tienen de 1 a 4 átomos de carbono, y “alquilo C1-C6” incluye las mitades de alquilo acíclico que tienen de 1 a 6 átomos de carbono. Los ejemplos de restos alquilo C1-C4 incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo y terc-butilo.
El lenguaje «sal farmacéutica aceptable» incluye las sales de adición ácida o de adición de base que conservan la eficacia biológica y las propiedades de los compuestos de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1 y, que por lo general no son biológicamente o de otra manera indeseables. En muchos casos, los compuestos de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1 son capaces de formar sales ácidas y/o base en virtud de la presencia de grupos básicos y/o carboxílicos o grupos similares a los mismos.
Las sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables se pueden formar con ácidos inorgánicos y ácidos orgánicos,por ejemplo,sales de acetato, aspartato, benzoato, besilato, bromuro/hidrobromuro, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, alcanforsulfonato, cloruro/clorhidrato, clorteofilonato, citrato, etanodisulfonato, fumarato, gluceptado, gluconato, glucuronato, hippurato, hidroyoduro/yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, laurilsulfato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metilsulfato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitrato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, palmoato, fosfato/hidrógeno fosfato, poligalacturonato, propionato, estearato, succinato, subsalicilato, sulfato/hidrogensulfato, tartrato, tosilato y trifluoroacetato. Los ácidos inorgánicos de los que se pueden derivar las sales incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares. Los ácidos orgánicos de los que se pueden derivar las sales incluyen, por ejemplo, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido maléico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido mandélico, ácido metanesulfónico, ácido etanesulfónico, ácido toluenesulfónico, ácido trifluoroacético, ácido sulfosalicílico y similares.
Las sales de adición de base farmacéuticamente aceptables se pueden formar con bases inorgánicas y orgánicas. Las bases inorgánicas de las que se pueden derivar sales incluyen, por ejemplo, el amoníaco y las sales de amonio y metales de las columnas I a XII de la tabla periódica. En ciertas realizaciones, las sales se derivan del sodio, potasio, amonio, calcio, magnesio, hierro, plata, zinc y cobre; las sales especialmente adecuadas incluyen las sales de amonio, potasio, sodio, calcio y magnesio. Las bases orgánicas de las que se pueden derivar las sales incluyen, por ejemplo, aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas incluyendo aminas sustituidas naturalmente presentes, aminas cíclicas, resinas básicas de intercambio iónico, y similares. Ciertas aminas orgánicas incluyen isopropilamina, benzatina, colinato, dietanolamina, dietilamina, lisina, meglumina, piperazina y trometamina.
Las sales farmacéuticas aceptables de los compuestos de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1 puede ser sintetizada a partir de una fracción básica o ácida, por métodos químicos convencionales. En general, estas sales pueden prepararse reaccionando las formas ácidas libres de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base adecuada (como Na+, Ca2+, Mg2+ o K+ hidróxido, carbonato, bicarbonato o similares), o reaccionando formas de base libre de estos compuestos con una cantidad estequiométrica del ácido apropiado. Tales reacciones se llevan a cabo típicamente en agua o en un disolvente orgánico, o en una mezcla de los dos. Generalmente, el uso de medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo es deseable, cuando sea posible. Se pueden encontrar listas de sales adecuadas adicionales,por ejemplo,en “Remington's Pharmaceutical Sciences”, 20a edición, Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); Berge et al., J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1-19 and in "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" por Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemania, 2002).
Cualquier fórmula dada en este documento también pretende representar formas no etiquetadas, así como formas etiquetadas isotópicamente para los compuestos de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (VI 11 b) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1. Los compuestos marcados isotópicamente tienen estructuras representadas por las fórmulas dadas en este documento, excepto que uno o más átomos son reemplazados por un átomo del mismo elemento pero con un número de masa diferente. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse a los compuestos de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1 y sus sales farmacéuticamente aceptables incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, azufre, flúor, cloro y yodo, como 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 35S, 36Cl y 125I. Los compuestos de fórmula etiquetados isotópicamente (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1 generalmente puede prepararse mediante técnicas convencionales conocidas por los expertos en la técnica o mediante procesos análogos a los descritos en los ejemplos adjuntos que utilizan reactivos etiquetados isotópicamente apropiados en lugar de los reactivos no etiquetados empleados anteriormente.
Los compuestos de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (VC), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1 puede tener diferentes formas isoméricas. El lenguaje “isómero óptico”, “estereoisómero”, “enantiómero” o “diastereoisómero” se refiere a cualquiera de las diversas configuraciones estereoisoméricas que pueden existir para un determinado compuesto de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1. Se entiende que un sustituto puede estar unido a un centro quiral de un átomo de carbono y, por lo tanto, los compuestos revelados incluyen enantiómeros, diastereómeros y racematos. El término “enantiómero” incluye pares de estereoisómeros que son imágenes de espejo no superponibles entre sí. Una mezcla 1:1 de un par de enantiómeros es una mezcla racémica. El término se utiliza para designar una mezcla racémica cuando sea apropiado. Los términos “diastereómeros” o “diastereoisómeros” incluyen estereoisómeros que tienen al menos dos átomos asimétricos, pero que no son imágenes de espejo de uno al otro. La estereoquímica absoluta se especifica de acuerdo con el sistema R-S de Cahn-Ingold-Prelog. Cuando un compuesto es un enantiómero puro, la estereoquímica en cada centro quiral puede especificarse medianteRo S. Los compuestos resueltos cuya configuración absoluta es desconocida pueden designarse (+) o (-) dependiendo de la dirección (dextro o levorotatorio) que giran luz polarizada plana en la longitud de onda de la línea D de sodio. Algunos de los compuestos de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1 contiene uno o más centros o ejes asimétricos y puede dar lugar así a enantiómeros, diastereómeros u otras formas estereoisoméricas que pueden definirse, en términos de estereoquímica absoluta, como (R)- o (S)-. La presente divulgación pretende incluir todos estos isómeros posibles, incluidas las mezclas racémicas, las formas ópticamente puras y las mezclas intermedias. Los isómeros ópticamente activos ( R )- y ( S )-se pueden preparar utilizando sintones quiral o reactivos quiral, o resolver utilizando técnicas convencionales conocidas en la técnica, como la HPLC quiral.
También se divulgan aquí los Intermedios 1-48 en los ejemplos, y las sales de los mismos.
Composiciones farmacéuticas
En algunas realizaciones, se revelan composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, o la Tabla 1, y un portador farmacéuticamente aceptable.
El lenguaje «portador farmaceuticamente aceptable» incluye compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que son, dentro del alcance del juicio médico sano, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de los seres humanos y animales sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica, u otro problema o complicación, según lo determinado por un experto en la técnica.
Las composiciones divulgadas pueden ser en una forma adecuada para uso oral (por ejemplo, como tabletas, pastillas, cápsulas duras o blandas, suspensiones acuosas o aceitosas, emulsiones, polvos o gránulos dispersables, jarabes o elixires), para uso tópico (por ejemplo, como cremas, ungüentos, geles o soluciones o suspensiones acuosas o aceitosas), para la administración por inhalación (por ejemplo, como un polvo finamente dividido o un aerosol líquido), para la administración por insuflación (por ejemplo, como un polvo finamente dividido) o para la administración parenteral (por ejemplo, como una solución acuosa o aceitosa estéril para intravenosa, subcutánea, dosis intramuscular o intramuscular o como supositorio para la dosificación rectal).
La cantidad de ingrediente activo que se combina con uno o más portadores farmacéuticos aceptables para producir una sola forma de dosificación variará necesariamente dependiendo del huésped tratado y la vía particular de administración. Para información adicional sobre las vías de administración y las pautas posológicas, se remite al lector al capítulo 25.3 del volumen 5 de Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Presidente del Consejo Editorial), Pregramon Press, 1990.
Utilidades terapéuticas
Los compuestos presentes son útiles como inhibidores de la arginasa en terapias.
En un aspecto, se revela un compuesto de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (VIIIb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, o la Tabla 1, o una sal farmacéutica aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer.
En un aspecto, se revela un compuesto de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, o la Tabla 1, o una sal farmacéutica aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria respiratoria.
En un aspecto, se revelan las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, o una sal farmacéutica aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer.
En un aspecto, se revelan las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, o una sal farmacéutica aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria respiratoria.
El término “cáncer” incluye, por ejemplo, carcinoma de células renales, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, cáncer de pulmón (por ejemplo, cáncer de pulmón de células pequeñas (SCLC), cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), mesotelioma), cáncer de páncreas, cáncer colorrectal, cáncer de mama, leucemia mieloide aguda (LMA), cáncer de próstata, cáncer gástrico, cáncer de vejiga, melanoma, cáncer renal y cáncer de ovario. En algunas realizaciones, el cáncer ha hecho metástasis. En algunas realizaciones, el cáncer se asocia con la modulación de la arginasa 1 y/o la arginasa 2.
En algunas realizaciones, el cáncer se asocia con un aumento de los niveles plasmáticos de arginasa 1. En algunas realizaciones, el cáncer se asocia con una disminución de los niveles plasmáticos de arginina. En algunas realizaciones, el cáncer se asocia tanto con un aumento de los niveles de arginasa 1 en plasma como con una disminución de los niveles de arginina en plasma. En algunas realizaciones, el cáncer asociado con el aumento de los niveles de arginasa 1 en plasma y/o la disminución de los niveles de arginina en plasma incluye el carcinoma de células renales, el carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, el cáncer de pulmón (por ejemplo, cáncer de pulmón de células pequeñas (SCLC), el cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), el mesotelioma), el cáncer de páncreas, cáncer colorrectal y cáncer de mama.
En algunas realizaciones, el cáncer secreta arginasa 2, por ejemplo, leucemia mieloide aguda y cáncer de próstata.
En algunas realizaciones, el cáncer se asocia con células inmunitarias infiltrantes de tumores positivos a la arginasa 1, por ejemplo, cáncer de pulmón (cáncer de pulmón de células pequeñas (SCLC), cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer gástrico, cáncer de vejiga, cáncer colorrectal, melanoma, carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer de páncreas y cáncer renal.
El término “una enfermedad inflamatoria respiratoria” se refiere a condiciones inflamatorias o trastornos que afectan los espacios aéreos, la vasculatura pulmonar, el intersticio pulmonar o una combinación de los mismos. Pueden aislarse al pulmón o involucrar múltiples órganos. En una realización, la enfermedad inflamatoria respiratoria es una enfermedad pulmonar inflamatoria. En otra realización, la enfermedad pulmonar inflamatoria no es infecciosa.
En algunas realizaciones, la enfermedad inflamatoria respiratoria es el asma, la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), la fibrosis pulmonar inducida químicamente, la fibrosis pulmonar idiopática, la fibrosis quística o una combinación de las mismas. En algunas realizaciones, la enfermedad inflamatoria respiratoria es la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) o asma.
En un aspecto, se revela un compuesto de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (VIIIb) incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, o una sal farmacéutica aceptable del mismo, para su uso en la inhibición de la arginasa.
En un aspecto, se revelan las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (vii), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, o una sal farmacéutica aceptable del mismo, para su uso en la inhibición de la arginasa.
El término arginasa incluye enzimas que contienen manganeso pertenecientes a la familia de la uerohidrolasa que catalizan el quinto y último paso del ciclo de la urea convirtiendo la L-arginina en L-ornitina y urea. El término “arginasa” incluye las dos isoenzimas de la enzima,por ejemplo,arginasa 1, que funciona en el ciclo de la urea, y se encuentra principalmente en el citoplasma del hígado, y arginasa 2 , que se encuentra en las mitocondrias de varios tejidos en el cuerpo y está implicado en la regulación de las concentraciones de arginina/ornitina en la célula. En algunas realizaciones, los compuestos de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1, o una sal farmacéutica aceptable de os mismos, son selectivos para la arginasa 1. En algunas realizaciones, los compuestos de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1, o una sal farmacéutica aceptable de los mismos, son selectivos para la arginasa 2. En algunas realizaciones, los compuestos de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1, o una sal farmacéutica aceptable de los mismos, están inhibiendo tanto la arginasa 1 como la arginasa 2.
El lenguaje “cantidad efectiva” incluye una cantidad de un compuesto de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, o Tabla 1 que provocará una respuesta biológica o médica en un sujeto, por ejemplo, la reducción o inhibición de la actividad enzimática o proteica relacionada con la arginasa o el cáncer, la mejora de los síntomas del cáncer o la ralentización o el retraso de la progresión del cáncer. En algunas realizaciones, el lenguaje “cantidad efectiva” incluye la cantidad de un compuesto de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie del mismo, o la Tabla 1, que cuando se administra a un sujeto, es eficaz para al menos parcialmente aliviar, inhibir y/o mejorar el cáncer o inhibir la arginasa, y/o reducir o inhibir el crecimiento de un tumor o la proliferación de células cancerosas en un sujeto.
El término “sujeto” incluye mamíferos de sangre caliente, por ejemplo, primates, perros, gatos, conejos, ratas y ratones. En algunas realizaciones, el sujeto es un primate, por ejemplo, un humano. En algunas realizaciones, el sujeto padece cáncer. En algunas realizaciones, el sujeto necesita tratamiento(por ejemplo,el sujeto se beneficiaría biológica o médicamente del tratamiento). En algunas realizaciones, el paciente padece cáncer. En algunas realizaciones, el sujeto ha aumentado los niveles plasmáticos de arginasa 1. En algunas realizaciones, el sujeto ha disminuido los niveles de arginina. En algunas realizaciones, el paciente tiene niveles elevados de arginasa 1 en plasma y niveles reducidos de arginina. En algunas realizaciones, el sujeto tiene un cáncer que segrega arginasa 2(por ejemplo,leucemia mieloide aguda o cáncer de próstata). En algunas realizaciones, el sujeto tiene células inmunitarias infiltrantes tumorales positivas de arginasa 1.
El lenguaje “inhibir”, “inhibición” o “inhibiendo” incluye una disminución en la actividad basal de una actividad o proceso biológico. En algunas realizaciones, los compuestos de la fórmula (Ib), (II), (III), (IVb), (Vc), (VI), (VII), y (Vlllb) incluyendo cualquier subgénero o especie de los mismos, y la Tabla 1 inhiben la arginasa.
El lenguaje “tratar”, “tratando” y “tratamiento” incluye la reducción o inhibición de la actividad enzimática o proteica relacionada con la arginasa o en un sujeto, la mejora de uno o más síntomas de un cáncer, o el retraso o retraso de la progresión del cáncer en un sujeto. El lenguaje “tratar”, “tratando” y “tratamiento” también incluye la reducción o inhibición del crecimiento de un tumor o la proliferación de células cancerosas en un sujeto.
Ejemplos
Los aspectos de la presente divulgación pueden definirse más detalladamente haciendo referencia a los siguientes ejemplos no limitantes, que describen en detalle la preparación de ciertos compuestos e intermedios de la presente divulgación y los métodos para utilizar compuestos de la presente divulgación. Resultará evidente para los expertos en la materia que pueden ponerse en práctica diversas modificaciones, tanto en los materiales y los métodos, sin desviarse del alcance de la presente divulgación.
A menos que se indique lo contrario:
i) todas las síntesis se realizaron a temperatura ambiente,es decir,en el intervalo de 17 a 25 °C y bajo una atmósfera de un gas inerte como el nitrógeno, a menos que se indique lo contrario;
ii) las evaporaciones se realizaron por evaporación rotatoria o utilizando equipos Genevac o el evaporador Biotage v10en vacíoy los procedimientos de trabajo se llevaron a cabo después de la eliminación de sólidos residuales por filtración;
(iii) las purificaciones de cromatografía flash se realizaron en un equipo automatizado de Teledyne ISCO CombiFlash® r F o Teledyne ISCO CombiFlash® Companion® utilizando columnas de sílice RediSep RF Gold ™ preempaquetadas (20-40 |jm, partículas esféricas), cartuchos GraceResolv ™ ( sílice Davisil ®) o cartuchos de silicona (40 - 63 jm).
(iv) la cromatografía preparativa se realizó en un instrumento HPLC de preparación de Gilson con recogida de UV;
como alternativa, la cromatografía preparativa se realizó en un instrumento HPLC-MS Waters AutoPurification con recogida activada por MS y UV;
(v) la cromatografía preparatoria quiral se realizó en un instrumento Gilson con recogida UV (inyector/colector de fracciones 233, bombas 333 y 334, detector UV 155) o en un instrumento Varian Prep Star (2 bombas SD1, detector UV 325, colector de fracciones 701) que funciona con inyección Gilson 305; como alternativa, la cromatografía preparatoria quiral se realizó en un instrumento Waters Prep 100 SFC-MS con recogida activada por MS y UV o en un instrumento Thar MultiGram III SFC con recogida UV.
(vi) los rendimientos, cuando estaban presentes, no eran necesariamente los máximos alcanzables;
vii) en general, las estructuras de los productos finales de la Fórmula I se confirmaron mediante espectroscopia de resonancia magnética nuclear (<r>M<n>); los valores de desplazamiento químico de la RMN se midieron en la escala delta [los espectros de resonancia magnética de protones se determinaron utilizando un instrumento Bruker Avance III 600 (600 MHz), Bruker Avance 400 (400 MHz), Bruker Avance 300 (300 MHz) o Bruker DRX 500 (500 MHz)]; las mediciones se tomaron a temperatura ambiente a menos que se especifique lo contrario; se han utilizado las siguientes abreviaturas: s, singlete; d, doblete; t, triplete; q, cuarteto; m, multiplete; dd, doblete de dobletes; ddd, doblete de doblete de doblete; dt, doblete de trillizos; bs, señal amplia.
(viii) en general, los productos finales de la Fórmula I también se caracterizaron por espectroscopia de masas tras cromatografía líquida (LCMS o UPLC); la UPLC se llevó a cabo utilizando un UPLC Waters equipado con un espectrómetro de masas Waters SQ (temperatura de la columna 40 °C, UV = 220-300 nm o 190-400 nm, Espectrometría de masas = ESI con conmutación positiva/negativa) a un caudal de 1 ml/min utilizando un sistema de disolvente del 97 % A 3 % B al 3 % A 97 % B durante 1,50 min (tiempo total de funcionamiento con equilibrio hasta las condiciones de arranque, etc., 1,70 min), donde A = 0,1 % de ácido fórmico o 0,05 % de ácido trifluoroacético en agua (para trabajos ácidos) o 0,1 % de hidróxido de amonio en agua (para trabajos básicos) y B = acetonitrilo. Para el análisis ácido la columna utilizada fue un Waters Acquity HSS T3 (1,8 jm , 2.1x 50 mm), para el análisis básico la columna utilizada fue un Waters Acquity BEH C18 (1,7 jm 2.1x50 mm). Alternativamente, la UPLC se llevó a cabo utilizando un UPLC Waters equipado con un espectrómetro de masas Waters SQ (temperatura de columna 30 °C, UV = nm, Espectrometría de masas = ESI con conmutación positiva/negativa) a una tasa de flujo de 210-400 ml/min utilizando un gradiente de disolvente de 2 a 98 % B durante 1,5 minutos (tiempo total de ejecución con equilibrio de vuelta a las condiciones de inicio 2 min), donde A = 0,1 % de ácido fórmico en agua y B = 0,1 % de ácido fórmico en acetonitrilo (para trabajo ácido) o A = 0,1 % de hidróxido de amonio en agua y B = acetonitrilo (para trabajo básico). Para el análisis ácido la columna utilizada fue una Acuquidad Waters HSS T3 (1,8 jm , 2.1x30 mm), para el análisis básico la columna utilizada fue un Acuquidad Waters BEH C18 (1,7 jm , 2.1x30 mm); LCMS se llevó a cabo utilizando un Waters Alliance HT (2795) equipado con un espectrómetro de masas Waters ZQ ESCi y un Phenomenex Gemini-NX C18 (5 jm , columna de 2.1 x 50 mm a una tasa de flujo de 1,1 ml/min del 95%A al 95%B durante 4 min con una retención de 0,5 min donde A = 0,1 % de ácido fórmico y B = 0,1 % de ácido fórmico en acetonitrilo (para trabajo ácido) o A = 0,1 % de hidróxido de amonio en agua y B = acetonitrilo (para trabajo básico). Además, el LCMS LCMS se llevó a cabo utilizando un UFLC Shimadzu equipado con un espectrómetro de masas Shimadzu LCMS-2020 y un Waters HSS C18 (1,8 |jm, 2,1 x 50 mm) o Shim-pack XR-ODS (2,2 |jm, 3,0 x 50 mm) o Phenomenex Gemini-NX. Columna C18 (3 |jm, 3,0 x 50 mm) a un caudal de 0,7 ml/min (para la columna Waters HSS C18), 1,0 ml/min (para la columna Shimpack XR-ODS) o 1,2 ml/min (para la columna Phenomenex Gemini -NX C18), 95 % A a 95 % B durante 2,2 min con una retención de 0,6 min, donde A = 0,1 % de ácido fórmico o 0,05 % de ácido trifluoroacético en agua (para trabajo ácido) o 0,1 % de hidróxido de amonio o carbonato de amonio 6,5 mM en agua (para trabajo básico) y B = acetonitrilo. El ion molecular reportado corresponde al [M+H]+ a menos que se especifique lo contrario; para moléculas con múltiples patrones isotópicos (Br, Cl, etc.) el valor reportado es el que se obtiene para la masa isótopo más baja a menos que se especifique lo contrario.
(ix) la purificación de intercambio iónico se realizó generalmente utilizando un cartucho SCX-2 (Biotage).
(x) la pureza intermedia se evaluó mediante cromatografía de capa fina, espectroscopia de masas, LCMS, UPLC/MS, HPLC (cromatografía líquida de alto rendimiento) y/o análisis de RMN;
xi) se han utilizado las siguientes abreviaturas:
EtOH:
etanol
EtOAc:
acetato de etilo
ADL:
diisopropilamida de litio
MeOH:
metanol
TFA:
ácido trifluoroacético
MeCN:
acetonitrilo
LCMS:
cromatografía liquida-espectrometría de masas
rt o RT:
temperatura ambiente
aq:
acuoso
THF:
tetrahidrofurano
KHMDS:
potasio bis(trimetilsililo)amida
DCM:
diclorometano
DMF:
dimetilformamida
HATU:
(hexafluorofosfato de 3-óxido de 1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinio)
BOC:
terc-butoxicarbonilo
DTNB:
ácido 5,5'-ditiobis(2-nitrobenzoico)
TNB:
ácido 2-nitro-5-tiobenzoico
HEPES:
(ácido 4-(2-hidroxietil)-1-piperazinaetanosulfónico)
Ejemplo 1: ácido (2R,4S)-4-amino-2-(4-boronobutil)piperidin-2-carboxílico
Producto intermedio 1: l-(terc-butil) (R)-4-oxopiperidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo
Se añadieron N,N'-diisopropilcarbodiimida (3,49 ml, 22,4 mmol) y DMAP (0,249 g, 2,04 mmol) a una solución agitada de ácido (R)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-oxopiperidina-2-carboxílico ( 4,955 g, 20,37 mmol) y alcohol bencílico (2,11 ml, 20,4 mmol) en d Cm (150 ml) a 0 °C. La reacción se agitó durante 17 h mientras se calentaba lentamente hasta temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue filtrada y el filtrado se concentró a la sequedad. El residuo resultante fue purificado por cromatografía de sílice flash (5 a 50 % EtOAc en hexanos) para proporcionar 2-bencilo 1 -(terc-butil) (R)-4-oxopiperidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (Intermedio 1, 6,50 g, rendimiento del 96 %) como aceite incoloro y como mezcla de rotadores.1H RMN (500MHz, CDCls) 5 1,40 (5H, s a), 1,49 (4H, s a), 2,43 - 2,65 (2H, m), 2,70 - 2,92 (2H, m), 3,53 - 3,74 (1H, m), 3,94 - 4,10 (1H, m), 4,89 (0,5H, s a), 5,10 - 5,23 (2,5H, m), 7,31 - 7,41 (5H, m);m/z:(ES+) [M+Na]+ = 356.
Producto intermedio 2: l-(terc-butil) (2R,4R)-4-hidroxipiperidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo
Se añadió en porciones borohidruro de sodio (0,738 g, 19,5 mmol) a una solución agitada de 1 -(terc-butil) (R)-4-oxopiperidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (Intermedio 1, 6,504 g, 19,51 mmol) en una mezcla de MeOH/THF (1:20, 105 ml) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 5 h y luego se inactivó cuidadosamente con HCl 1 M (acuoso) (15 ml -desprendimiento de gas) y se calentó a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con agua (25 ml) y EtOAc (50 ml). Se separaron las fases y se extrajo la fase acuosa con EtOAc (4 x 20 ml). Los compuestos orgánicos combinados se lavaron con NaCl acuoso saturado, se secaron más de MgSO4, se filtraron y se concentraron hasta la sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 5 al 45 % en hexanos) para proporcionar 1 -(terc-butil) (2R,4R)-4-hidroxipiperidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (Intermedio 2, 3,84 g, rendimiento del 59 %) como una goma incolora de una mezcla 5:1 de diastereómeros (el diastereómero principal es el compuesto del título) y como una mezcla de rotámeros.1H RMN (500MHz, CDCb) 5 1,38 (5H, s a), 1,40 - 1,44 (2H, m), 1,46 (5,4H, s a), 1,60 - 1,69 (1,4H, m), 1,70 - 1,79 (0,2H, m), 1,83 - 1,97 (1,2H, m), 2,48 (1H, a dd), 2,92 - 3,08 (1H, m), 3,28 - 3,46 (0,2H, m), 3,54 -3,70 (1H, m), 3,76 - 3,84 (0,1H, m), 3,87 - 3,96 (0,1H, m), 4,00 (0,5H, a d), 4,15 (0,5H, s), 4,65 - 4,74 (0,1H, m), 4,87 (0,6H, a d), 5,08 (0,5H, a d), 5,13 - 5,26 (2,4H, m), 7,31 - 7,40 (6H, m);m/z:(ES+) [M+Na]+ = 358.
Producto intermedio 3: l-(terc-butil) (2R,4R)-4-((metilsulfonil)oxi)piperidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo
Se añadió en porciones anhídrido metanosulfónico (3,59 g, 20,6 mmol) a una solución agitada de 1-(terc-butil)(2R,4R)-4-hidroxipiperidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (Intermedio 2, 3,84 g , 11,5 mmol; mezcla 5:1 de diastereómeros) y trietilamina (3,35 ml, 24,0 mmol) en DCM (50 ml) a 0 °C. Se dejó expirar el baño de enfriamiento y la reacción se calentó a temperatura ambiente. Después de 6 h, la reacción se diluyó con DCM (50 ml) y se lavó secuencialmente con HCl 1 M (acuoso) (50 ml) y NaCl acuoso saturado (50 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró hasta sequedad para proporcionar 1 -(terc-butil) (2R,4R)-4-((metilsulfonil)oxi)piperidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo bruto (Intermedio 3). , 4,73 g, rendimiento del 100 %) como una goma de color naranja pálido y una mezcla de diastereómeros. El material crudo se utilizó directamente sin purificación adicional.m/z:(ES+) [M+Na]+ = 436.
Producto intermedio 4: l-(terc-butil) (2R,4S)-4-azidopiperidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo
Se añadió azida sódica (3,72 g, 57,2 mmol) a una solución agitada de 1 -(terc-butil) (2R,4R)-4-((metilsulfonil)oxi)piperidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (Intermedio 3). , 4,73 g, 11,4 mmol; mezcla de diastereómeros) en DMF (50 ml) y la reacción se calentó a 60 °C durante 20 h. La mezcla se dejó enfriar hasta temperatura ambiente, se filtró y el filtrado se diluyó con agua (400 ml) y EtOAc (40 ml). Se separaron las fases y se extrajo la fase acuosa con EtOAc (4 x 40 ml). Los compuestos orgánicos combinados se lavaron con NaCl acuoso saturado (2 x 40 ml), se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron hasta la sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 5 al 30 % en hexanos) para proporcionar 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-azidopiperidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo diastereoméricamente puro (Intermedio 4). , 2,58 g, rendimiento 63 %) como una goma incolora y una mezcla de rotámerosJH RMN (500MHz, CDCb) 5 1,39 (4H, s a), 1,46 (5H, s a), 1,63 - 1,73 (1H, m), 1,74 - 1,87 (1H, m), 1,95 (1H, ddd), 2,50 - 2,61 (1H, m), 3,03 - 3,44 (1H, m), 3,73 - 3,89 (0,5H, m), 3,90 - 4,01 (1,5H, m), 4,58 - 4,74 (0,5H, m), 4,88 (0,5H, s a), 5,15 - 5,34 (2H, m), 7,30 - 7,43 (5H, m);m/z:(ES+) [M-Boc]+ = 261.
Intermedio 5: l-(terc-butil) (4S)-4-azido-2-(but-2-en-1-il)piperidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo
Se disolvieron 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-azidopiperidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (intermedio 4, 1,94 g, 5,38 mmol) y bromuro de crotilo (0,977 ml, 8,07 mmol) en THF ( 30 ml) y la solución se enfrió a -78°C. Se añadió gota a gota durante 10 min una solución de KHMDS (1 M en 2-metiltetrahidrofurano, 7,0 ml, 7,0 mmol). La mezcla de reacción se calentó lentamente hasta temperatura ambiente y se agitó durante un total de 18 h. La mezcla de reacción bruta se inactivó con NH4Cl acuoso saturado y después se diluyó con NaCl acuoso saturado y EtOAc (50 ml). Se separaron las fases y se extrajo la capa acuosa con EtOAc (3 x 30 ml). Los compuestos orgánicos combinados se lavaron con NaCl acuoso saturado, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron hasta la sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 2 al 30 % en hexanos) para proporcionar 2-bencil 1 -(terc-butil) (4S)-4-azido-2-(but-2-en-1-ilo). )piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 5, 2,106 g, rendimiento 94 %) como una mezcla diastereomérica sin/anti y como una mezcla de rotámeros y olefinas E/Z.1H RMN (500MHz, CD2Cb) 51,40 - 1,42 (4H, m), 1.43 (5H, s a), 1,49 - 1,58 (1H, m), 1,59 - 1,66 (0,6H, m), 1,67 - 1,74 (3,4H, m), 1,86 (0,5H, dd), 1,89 - 2,05 (2H, m), 2,07 - 2,19 (1H, m), 2,42 (0,5H, dd), 2,58 - 2,69 (1H, m), 2,71 - 2,83 (0,5H, m), 3,01 - 3,16 (0,5H, m), 3,21 (0,5H, a dd), 3,31 -3.44 (0,5H, m), 3,61 - 3,77 (1,5H, m), 3,97 - 4,07 (0,5H, m), 5,10 - 5,27 (2H, m), 5,36 - 5,45 (1H, m), 5,51 - 5,74 (2H, m), 7,32 - 7,47 (5H,m);m/z:(ES+) [M-Boc]+ = 315.
Intermedio 6: 2-bencilo 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil) piperidina-1,2-dicarboxilato
Se añadieron dicloruro de bis(1,5-ciclooctadieno)diiridio(I) (50 mg, 0,074 mmol) y bis(difenilfosfino)metano (57 mg, 0,15 mmol) a un matraz de fondo redondo secado en horno. El matraz fue sellado y purgado con N2. Los sólidos se disolvieron en DCM (9 ml) y se añadió lentamente a la solución 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (0,32 ml, 2,2 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. Se añadió 1 -(terc-butil) (4S)-4-azido-2-(but-2-en-1-il)piperidin-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (Intermedio 5, 616 mg, 1,49 mmol) a la reacción como una solución en DCM (3 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 66 h a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se inactivó cuidadosamente con MeOH (1 ml) y agua (5 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 15 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 5 al 15 % en hexanos) para proporcionar 2-bencil-1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-azido-2-(4-(4, 4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dicarboxilato (Intermedio 6, 261 mg, 32 % de rendimiento) como una goma transparente e incolora.1H r Mn (500MHz, CDCls) 50,79 (2H, t), 1,25 (12H, s), 1,29 - 1,35 (1H, m), 1,36 - 1,39 (1H, m), 1,41 (9H, s), 1,42 - 1,46 (2H, m), 1,57 - 1,68 (1H, m), 1,85 - 1,94 (3H, m), 1,95 - 2,01 (1H, m), 2,05 (1H, dd), 2,92 - 3,11 (1H, m), 3,49 - 3,72 (1H, m), 3,98 - 4,03 (1H, m), 5,09 (1H, d), 5,18 (1H, d), 7,29 - 7,42 (5H, m);m/z:(ES+) [M+Na]+ = 565.
Intermedio 7: Ácido (2R,4S)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico
Se añadió Pd/C (10 % en peso, 50 mg, 0,047 mmol) a una solución de 2-bencil 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-azido-2-(4-(4,4, 5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 6, 268 mg, 0,494 mmol) en EtOAc (3 ml). La suspensión se agitó en una atmósfera de hidrógeno (se evacuó el globo, se evacuó el matraz y se volvió a llenar con hidrógeno x3) a temperatura ambiente durante 17 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH (5 ml), se filtró a través de tierra de diatomeas y se concentró hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (MeOH del 5 al 45 % en DCM) para proporcionar ácido (2R,4S)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4-(4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidin-2-carboxílico (Intermedio 7, 156 mg, rendimiento 74 %) como una película seca blanca.1H RMN (500MHz, CDsCb) 50,71 (2H, t), 1,07 - 1,16 (1H, m), 1,19 (14H, s), 1,31 - 1,37 (2H, m), 1,40 (9H, s), 1,80 - 1,96 (1H, m), 2,02 (3H, a d), 2,33 (1H, s a), 3,00 (1H, s a), 3,53 (1H, s a), 3,92 (1H, s a), 8,60 (3H, s a);m/z:(ES+) [M+H]+ = 427Ejemplo 1: Ácido (2R,4S)-4-amino-2-(4-boronobutil)DÍDeridin-2-carboxílico
Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,53 ml, 6,9 mmol) a una solución agitada de ácido (2R,4S)-4-amino-1-(tercbutoxicarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametilo-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidin-2-carboxílico (Intermedio 7, 146 mg, 0,342 mmol) en DCM (2 ml) a temperatura ambiente. Después de 2 h, la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en HCl 1 M (acuoso) (3,0 ml, 3,0 mmol) y Et2O (3 ml). Se añadió ácido fenilborónico (125 mg, 1,03 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla se diluyó con Et2O (20 ml) y agua (5 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con ET2O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó mediante cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna usando amoniaco al 5 % en MeOH (20 ml) para proporcionar ácido (2R,4S)-4-amino-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico (62 mg, rendimiento del 74 %). ) como un sólido blanco.1H RMN (500MHz, D2O) 50,71 - 0,82 (2H, m), 1,10 - 1,30 (2H, m), 1,33 - 1,44 (2H, m), 1,45 - 1,55 (1H, m), 1,62 (1H, dd), 1,77 (1H, ddd), 1,84 - 1,93 (1H, m), 2,01 - 2,08 (1H, m), 2,18 (1H, ddd), 3,07 (1H, td), 3,22 (1H, dt), 3,28 - 3,39 (1H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 245.
Ejemplo 2: Ácido (2R,4S)-4-((S)-2-amino-3-metil)butanamida)-2-(4-bromobutil)piperidin-2-carboxílico
Intermedio 8: 2-bencilo 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil) piperidina-1,2-dicarboxilato
Se añadieron zinc (270 mg, 4,14 mmol) y AcOH (1,20 ml, 20,9 mmol) a una solución agitada de 2-bencil 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-azido-2-(4-( 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dicarboxilato (Intermedio 6, 748 mg, 1,38 mmol) en THF (10 ml). La mezcla rápidamente agitada se calentó a 30 °C durante 18 h. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con DCM (30 ml) y se filtró a través de tierra de diatomeas. La torta de filtración se lavó con DCM y el filtrado se concentró hasta sequedad. El residuo resultante se repartió entre EtOAc (40 ml) y NaHCO acuoso saturado. Las fases se separaron y las fases orgánicas se lavaron con NaHCO acuoso saturado y NaCl acuoso saturado. Las fases orgánicas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron hasta sequedad para proporcionar 2-bencil 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametilo). -1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dicarboxilato (Intermedio 8, 713 mg, rendimiento del 100 %) como una goma transparente e incolora. El material bruto se utilizó directamente sin purificación adicional.^ RMN (500MHz, CDCla) 50,79 (2H, t), 1,24 (12H, s), 1,32 - 1,38 (2H, m), 1,39 -1,47 (13H, m), 1,68 (2H, brt), 1,83 - 1,99 (4H, m), 2,93 (1H, td), 2,97 - 3,07 (1H, m), 3,96 - 4,10 (1H, m), 5,06 - 5,23 (2H, m), 7,30 - 7,41 (5H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 517.
Intermedio 9: 2-bencilo l-(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5) ,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil) piperidina-1,2-dicarboxilato
Se añadió lentamente N,N-diisopropiletilamina (0,12 ml, 0,63 mmol) a una solución agitada de COMU (270 mg, 0,63 mmol) y Boc-Val-OH (137 mg, 0,631 mmol) en DMF (2 ml) a temperatura ambiente. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 30 min y luego se enfrió a 0°C. Una solución de 2-bencil 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dicarboxilato (Intermedio 8 , 310 mg, 0,60 mmol) en DMF (2 ml) y se añadieron N,N-diisopropiletilamina (0,10 ml, 0,60 mmol) y la reacción se agitó durante 17 h mientras se agitaba lentamente calentando a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con agua (40 ml) y el precipitado resultante se recogió por filtración. El sólido se disolvió en EtOAc, se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 10 al 100 % en hexanos) para proporcionar 2-bencil 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 9, 184 mg, rendimiento 43%) como una película incolora y como una mezcla de rotámeros.1H RMN (500MHz, CDQ<b>) 50,73 - 0,80 (2H, m), 0,85 (3H, d), 0,89 (3H, d), 1,22 (12H, s a), 1,23 - 1,29 (2H, m), 1,37 - 1,45 (20H, m), 1,62 - 1,74 (1H, m), 1,86 - 1,99 (3H, m), 2,00 - 2,12 (3H, m), 2,97 (1H, t), 3,78 (1H, t), 3,94 - 4,06 (1H, m), 4,07 - 4,14 (1H, m), 5,00 (1H, s a), 5,05 - 5,24 (2H, m), 6,05 (1H, a d), 7,28 - 7,36 (5H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 716.
Intermedio 10: Ácido (2R-4S)-1-(tert-butoxicarbonil)-4-(S)-2-(terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-2,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico
Se añadió Pd/C (10 % en peso, 27 mg, 0,025 mmol) a una solución de 2-bencil 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((tercbutoxicarbonil))amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 9, 184 mg, 0,257 mmol) en EtOAc (2 ml). La suspensión se agitó bajo una atmósfera de hidrógeno (globo, matraz evacuado y relleno con hidrógeno x3) a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (20 ml) y MeOH (20 ml), se filtró a través de tierra diatomácea y se concentró en sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (20 a 100 % de EtOAc en hexanos seguido de 10 % de MeOH en<d>C<m>) para proporcionar ácido (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico (Intermedio 10, 116 mg, rendimiento del 72 %) como un sólido blanco y como una mezcla de rotámeros.1H RMN (500MHz, CDCb) 50,78 (3H, a d), 0,83 - 0,91 (2H, m), 0,94 (3H, a d), 1,20 - 1,25 (12H, m), 1,40 (9H, s a), 1,42 - 1,53 (11H, m), 1,51 - 1,66 (1H, m), 1,75 - 2,18 (4H, m), 2,19 - 2,34 (1H, m), 2,88 - 3,06 (1H, m), 3,85 - 4,06 (2H, m), 4,07 - 4,26 (1H, m), 5,14 (1H, s a), 5,93 (1H, s a), 6,73 (1H, s a), 7,30 - 7,48 (1H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 627.
Ejemplo 2: Ácido (2R,4S)-4-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)-2-(4-boronobutil)piperidin-2-carboxílico
Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,433 ml, 5,63 mmol) a una solución agitada de ácido (2R,4S)-1-(tercbutoxicarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidin-2-carboxílico (Intermedio 10, 176 mg, 0,281 mmol) en DCM (2 ml) a temperatura ambiente. Después de 3 h, la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en HCl 1 M (acuoso) (3,0 ml, 3,0 mmol) y Et2O (3 ml). Se añadió ácido fenilborónico (103 mg, 0,845 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla se diluyó con Et2O (20 ml) y agua (5 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con ET2O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó mediante cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna usando amoniaco al 5 % en MeOH (20 ml) para proporcionar ácido (2R,4S)-4-((S)-2-amino-3-metilbutanamido)-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico (Ejemplo 2,89 mg, rendimiento del 92%) como un sólido blanco.1H RMN (500MHz, D2O) 50,73 - 0,83 (2H, m), 0,88 - 0,96 (6H, m), 1,14 - 1,24 (1H, m), 1,25 - 1,35 (1H, m), 1,37 - 1,50 (2H, m), 1,64 - 1,76 (1H, m), 1,79 - 1,99 (4H, m), 2,01 - 2,09 (1H, m), 2,17 (1H, dd), 3,11 (1H, d), 3,16 - 3,24 (1H, m), 3,31 (1H, dt), 4,10 - 4,22 (1H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 344.
Ejemplo 3: Ácido (2R.4S)-4-(2-am¡noacetam¡do)-2-(4-boronobutil)p¡per¡d¡n-2-carboxíl¡co
Intermedio 11: 2-bencil l-(terc-butil) (2R,4S)-4-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1, 3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato
Se añadió lentamente N,N-diisopropiletilamina (0,12 ml, 0,63 mmol) a una solución agitada de COMU (270 mg, 0,63 mmol) y Boc-Gly-OH (110 mg, 0,63 mmol) en DMF (2 ml) a temperatura ambiente. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 30 min y luego se enfrió a 0°C. Una solución de 2-bencil 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1.3.2- dioxaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dicarboxilato (Intermedio 8, 310 mg, 0,60 mmol) enDm F(2 ml) y N,N-diisopropiletilamina (0,11 ml, 0,60 mmol) se añadieron y la reacción se agitó durante 17 h mientras se agitaba lentamente calentando a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con agua (60 ml) y el pH se ajustó a ~5 con ácido acético. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (4 x 15 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con NaCl acuoso saturado (2 x 10 ml), se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 10 al 100 % en hexanos) para proporcionar 2-bencil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dicarboxilato (Intermedio 11,204 mg, rendimiento del 51 %) como una película incolora y como una mezcla de rotámeros.1H RMN (500MHz, CDCls) 50,75 (2H, brt), 1,21 (14H, s), 1,24 (2H, brd), 1,38 (9H, s), 1,40 (10H, s), 1.71 (1H, dd), 1,81 - 1,91 (1H, m), 1,93 - 2,04 (3H, m), 2,86 - 3,04 (1H, m), 3,62 (2H, s a), 3,93 - 4,04 (1H, m), 4,06 - 4,15 (1H, m), 5,11 (2H, s), 5,14 (1H, s a), 6,27 (1H, s a), 7,28 - 7,40 (5H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 674.
Intermedio 12:Ácido (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)acetamido)-2-(4-(4, 4, 5,5-tetrametil-1.3.2- dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico
Se añadió Pd/C (10 % en peso, 32 mg, 0,030 mmol) a una solución de 2-bencil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-(2-((tercbutoxicarbonil)amino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dicarboxilato (Intermedio 11,204 mg, 0,303 mmol) en EtOAc (2 ml). La suspensión se agitó en una atmósfera de hidrógeno (se evacuó el globo, se evacuó el matraz y se volvió a llenar con hidrógeno x3) a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (20 ml) y MeOH (20 ml), se filtró a través de tierra de diatomeas y el filtrado se concentró hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 25 al 100 % en hexanos) para proporcionar ácido (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico (Intermedio 12, 117 mg, 66 % de rendimiento) como un color blanco sólido y como mezcla de rotámeros.1H RMN (500MHz, CDCb) 50,78 (2H, t), 1,17 - 1,29 (13H, m), 1,40 (10H, s a), 1,45 (9H, s), 1,48 - 1,57 (2H, m), 1,76 - 2,01 (3H, m), 2,04 - 2,13 (1H, m), 2,98 (1H, a t), 3,47 - 3,66 (1H, m), 3,75 (1H, s), 3,90 - 4,06 (2H, m), 4,13 - 4,25 (1H, m), 5,41 (1H, s a), 5,92 (1H, s a), 6,73 (1H, s a), 7,65 (1H, s a); m/z: (ES+) [M+H]+ = 584.
Ejemplo 3: Ácido (2R,4S)-4-(2-aminoacetamido)-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico
Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,31 ml, 4,0 mmol) a una solución agitada de ácido (2R,4S)-1-(tercbutoxicarbonil)-4-(2-((terc-butoxicarbonil)amino)acetamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidin-2-carboxílico (Intermedio 12, 117 mg, 0,201 mmol) en DCM (2 ml) a temperatura ambiente. Después de 3 h, la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en HCl 1 M (acuoso) (3,0 ml, 3,0 mmol) y Et2O (3 ml). Se añadió ácido fenilborónico (73 mg, 0,60 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla se diluyó con Et2O (20 ml) y agua (5 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con ET2O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó mediante cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna usando amoniaco al 5 % en MeOH (20 ml) para proporcionar ácido (2R,4S)-4-(2-aminoacetamido)-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico (Ejemplo 3,61 mg, rendimiento del 100 %) como un sólido blanco.1H RMN (500MHz, D2O) 50,72 - 0,84 (2H, m), 1,14 - 1,25 (1H, m), 1,26 - 1,34 (1H, m), 1,41 (2H, quin), 1.72 (1H, dtd), 1,79 - 1,94 (2H, m), 1,96 - 2,08 (2H, m), 2,10 (1H, dd), 3,14 - 3,25 (1H, m), 3,30 - 3,36 (1H, m), 3,37 (2H, s), 4,08 - 4,19 (1H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 302.
Ejemplo 4: Ácido (2R,4S)-4-[[(2S)-2-aminopropanoil]amino]-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico
Intermedio 13: 2-bencil 1-terc-butil(2R,4S)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)propanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidina-1,2-dicarboxilato
Se añadió lentamente N,N-diisopropiletilamina (0,17 ml, 1,0 mmol) a una solución agitada de 2-bencil 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4, 5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 8, 245 mg, 0,474 mmol), Boc-Ala-OH (108 mg, 0,571 mmol) y COMU (244 mg, 0,571 mmol) en DMF (1,5 ml) a 0 °C. La reacción se agitó durante 1,5 h mientras se calentaba lentamente a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con agua (20 ml) y EtOAc (20 ml) y se separaron las fases. La fase acuosa se extrajo con EtOAc (3 x 20 ml) y los extractos orgánicos combinados se lavaron con NaCl acuoso saturado, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 15 al 80 % en hexanos) para proporcionar 2-bencil 1 -terc-butil (2R,4S)-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)propanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 13, 191 mg, 59 % rendimiento) como una goma de color amarillo pálido y como una mezcla de rotámeros.1H RMN (500MHz, CDCh) 50,69 - 0,83 (2H, m), 1,22 (12H, d), 1,26 (5H, td), 1,38 (9H, s a), 1,40 (9H, a d), 1,42 - 1,49 (3H, m), 1,57 - 1,73 (1H, m), 1,83 - 1,98 (3H, m), 2,01 -2,05 (2H, m), 2,91 - 3,03 (1H, m), 4,02 (2H, s a), 4,96 (1H, s a), 5,05 - 5,22 (2H, m), 6,21 (1H, s a), 7,27 - 7,36 (5H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 688.
Intermedio 14: Ácido (2R,4S)-1-terc-butoxicarbonil-4[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)propanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidina-2-carboxílico
Se añadió Pd/C (10 % en peso, 15 mg, 0,014 mmol) a una solución de 2-bencil-1-terc-butil (2R,4S)-4-[[(2S)-2-(tercbutoxicarbonilamino)propanoilo. ]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidin-1,2-dicarboxilato (Intermedio 13, 190 mg, 0,28 mmol ) en EtOAc (2 ml). La suspensión se agitó en una atmósfera de hidrógeno (se evacuó el globo, se evacuó el matraz y se volvió a llenar con hidrógeno x3) a temperatura ambiente durante 17 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (15 ml) y MeOH (2 ml), se filtró a través de tierra de diatomeas y se concentró hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 20 al 100 % en hexanos) para proporcionar ácido (2R,4S)-1-terc-butoxicarbonil-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)propanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidina-2-carboxílico (Intermedio 14, 134 mg, rendimiento del 81 %) como una película seca y como una mezcla de rotámeros. 1H RMN (500MHz, CDCh) 50,78 (2H, a t), 1,20 - 1,25 (12H, m), 1,29 - 1,36 (5H, m), 1,41 (9H, s), 1,44 (11H, s), 1,48 - 1,62 (2H, m), 1,77 - 2,01 (3H, m), 2,09 (2H, s a), 2,97 (1H, s a), 3,92 - 4,05 (1H, m), 5,07 (1H, s a), 5,48 (1H, s a), 6,71 (1H, s a), 7,61 (1H, s a);m/z:(ES+) [M+H]+ = 598.
Ejemplo 4: Ácido (2R,4S)-4-[[(2S)-2-aminopropanoil]amino]-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico
Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,34 ml, 4,4 mmol) a una solución agitada de ácido (2R,4S)-1-tercbutoxicarbonil-4-[[(2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)propanoil]amino]-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidin-2-carboxílico (Intermedio 14, 130 mg, 0,22 mmol) en DCM (1 ml ) a temperatura ambiente. Después de 3 h la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en 1 M HCl (aq) (2,0 ml, 2,0 mmol) y ET2O (2 ml). Se añadió ácido fenilborónico (80 mg, 0,65 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla se diluyó con Et2O (20 ml) y agua (5 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con ET2O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó mediante cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna usando amoniaco al 5 % en MeOH (20 ml). El material obtenido se purificó adicionalmente mediante cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold® C18, 0 a 15 % de acetonitrilo en agua) para proporcionar ácido (2R,4S)-4-[[(2S)-2-aminopropanoil]amino]-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico (Ejemplo 4, 25 mg, rendimiento del 37%) como un sólido blanco.1Hr Mn (500m Hz ,D2O) 50,72 - 0,80 (2 H, m), 1,12 - 1,23 (1H, m), 1,24 - 1,26 (1H, m), 1,27 (3H, d), 1,40 (2H, quin), 1,66 - 1,76 (1H, m), 1,78 - 1,92 (2H, m), 1,93 -1,99 (1H, m), 2,00 - 2,06 (1H, m), 2,10 (1H, dd), 3,18 (1H, ddd), 3,27 - 3,36 (1H, m), 3,53 (1H, c), 4,10 (1H, tt);m/z:(ES+) [M+H]+ = 316.
Ejemplo 5: Ácido (2R,4S)-4-[[(2S)-2-aminobutanoil]amino]-2-(4-boromobutil)piperidina-2-carboxílico
Intermedio 15: 2-bencilo l-(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato
Se añadió lentamente N,N-diisopropiletilamina (0,165 ml, 0,94 mmol) a una solución agitada de 2-bencil-1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4, 5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dicarboxilato (Intermedio 8, 244 mg, 0,47 mmol), Boc-Abu-OH (96 mg, 0,47 mmol) y COMU (206 mg, 0,48 mmol) en DMF (3 ml) a 0 °C. La reacción se agitó durante 16 h mientras se calentaba lentamente hasta temperatura ambiente. La mezcla de reacción bruta se diluyó con agua (30 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 10 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron secuencialmente con NaHCO3 acuoso saturado (20 ml) y NaCl acuoso saturado (15 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 15 al 60 % en hexanos) para proporcionar 2-bencilo 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 15, 215 mg, 65% de rendimiento) como goma transparente y como mezcla de rotámeros.1H RMN (500MHz, CDCb) 50,71 - 0,79 (2H, m), 0,87 (3H, a t), 1,19 (4H, s a), 1,21 (9H, s), 1,36 (5H, s a), 1,38 (8H, s), 1,39 - 1,41 (8H, m), 1,48 - 1,58 (2H, m), 1,68 (1H, a dd), 1,72 - 1,81 (1H, m), 1,84 - 1,98 (3H, m), 1,99 - 2,02 (1H, m), 2,88 - 3,04 (1H, m), 3,89 (1H, a d), 3,95 - 4,07 (2H, m), 5,00 (1H, a d), 5,05 - 5,22 (2H, m), 6,20 (1H, s a), 7,27 - 7,36 (5H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 703.
Intermedio 16: Ácido (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico
Se añadió Pd/C (10 % en peso, 16 mg, 0,015 mmol) a una solución de 2-bencil 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 15, 215 mg, 0,31 mmol) en EtOAc (3 ml). La suspensión se agitó en una atmósfera de hidrógeno (se evacuó el globo, se evacuó el matraz y se volvió a llenar con hidrógeno x3) a temperatura ambiente durante 24 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (10 ml) y MeOH (1 ml), se filtró a través de tierra de diatomeas y se concentró hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 5 al 100 % en hexanos) para proporcionar ácido (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico (Intermedio 16, 147 mg, 78% de rendimiento) como una película seca y una mezcla de rotámeros.. 1H RMN (500MHz, CDCb) 50,75(2h ,s a), 0,89 (3H, s a), 1,20 (12H, s), 1,24 - 1,33 (2H, m), 1,37 (10H, s a), 1,40 (10H, s), 1,42 - 1,61 (4H, m), 1,85 (3H, s a), 1,98 (2H, s a), 2,01 - 2,06 (1H, m), 2,95 (1H, s a), 3,98 (2H, s a), 5,27 (0,5H, s a), 5,68 (0,5H, s a), 6,74 (0,5H, s a), 7,52 (0,5H, s a);m/z:(ES+) [M+H]+ = 612.
Ejemplo 5: Ácido (2R,4S)-4-[[(2S)-2-aminobutanoil]amino]-2-(4-boronobutil)piperidin-2-carboxílico
Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,37 ml, 4,8 mmol) a una solución agitada de ácido (2R,4S)-1-(tercbutoxicarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)butanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico (Intermedio 16, 147 mg, 0,24 mmol) en DCM ( 1 ml) a temperatura ambiente. Después de 2 h la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en 1 M HCl (aq) (2,0 ml, 2,0 mmol) y ET2O (2 ml). Se añadió ácido fenilborónico (88 mg, 0,72 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla se diluyó con Et2O (5 ml) y agua (2 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con ET2O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó mediante cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna usando amoniaco al 5 % en MeOH (20 ml). El material obtenido se purificó adicionalmente mediante cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold® C18, 0 a 15 % de acetonitrilo en agua) para proporcionar ácido (2R,4S)-4-[[(2S)-2-aminobutanoil]amino]-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico (Ejemplo 5, 37 mg, rendimiento del 47%) como un sólido blanco.1H RMN (500MHz, D2O) 50,76 (2H, a t), 0,87 (3H, t), 1,13 - 1,23 (1H, m), 1,24 - 1,34 (1H, m), 1,40 (2H, quin), 1,63 (2H, dq), 1,67 - 1,74 (1H, m), 1,78 - 1,85 (1H, m), 1,86 - 1,96 (2H, m), 1,99 - 2,07 (1H, m), 2,13 (1H, brdd), 3,10 - 3,24 (1H, m), 3,25 - 3,41 (2H, m), 4,07 - 4,21 (1H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 330.
Ejemplo 6: Ácido (2R,4S)-4-[[(2S)-2-amino-4-metil-pentanoil]amino]-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico
Intermedio 17: 2-bencilo l-(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5) ,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato
Se añadió N,N-diisopropiletilamina (0,17 ml, 0,94 mmol) a una solución agitada de 2-bencil 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4,5 ,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dicarboxilato (Intermedio 8, 244 mg, 0,47 mmol), Boc-Leu-OH (96 mg, 0,47 mmol) y COMU (206 mg, 0,48 mmol) en DMF (3 ml) a 0 °C. La reacción se agitó durante 16 h mientras se calentaba lentamente hasta temperatura ambiente. La mezcla de reacción bruta se diluyó con agua (30 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 10 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron secuencialmente con NaHCO3 acuoso saturado (20 ml) y NaCl acuoso saturado (15 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 15 al 60 % en hexanos) para proporcionar 2-bencilo 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 17, 224 mg, rendimiento 65%) como una espuma blanca y como una mezcla de rotámeros.1H RMN (500MHz, CDCb) 50,73 - 0,80 (2H, m), 0,89 (3H, d), 0,90 (3H, d), 1,22 (12H, s), 1,27 (1H, s a), 1,39 (9H, s), 1,40 (9H, s), 1,41 - 1,48 (4H, m), 1,55 - 1,64 (2H, m), 1,68 (1H, a dd), 1,85 -1,98 (3H, m), 2,01 (1H, a d), 2,02 - 2,05 (1H, m), 2,93 - 3,02 (1H, m), 3,94 - 4,08 (3H, m), 4,83 (1H, a d), 5,05 - 5,22 (2H, m), 6,20 (1H, s a), 7,28 - 7,31 (1H, m), 7,33 (4H, d);m/z:(ES+) [M+H]+ = 731.
Intermedio 18: Ácido (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico
Se añadió Pd/C (10 % en peso, 13 mg, 0,012 mmol) a una solución de 2-bencil 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato (intermedio 17, 174 mg, 0,24 mmol) en EtOAc (2,5 ml). La suspensión se agitó en una atmósfera de hidrógeno (se evacuó el globo, se evacuó el matraz y se volvió a llenar con hidrógeno x3) a temperatura ambiente durante 23 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (10 ml) y MeOH (1 ml), se filtró a través de tierra de diatomeas y se concentró hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 15 al 100 % en hexanos) para proporcionar ácido (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidin-2-carboxílico (Intermedio 18, 149 mg, 98% de rendimiento) como una película seca y una mezcla de rotámeros. 1H Rm N (500MHz, CDCb) 50,78 (2H, a t), 0,91 (6H, a d), 1,23 (11H, s), 1,27 - 1,36 (2H, m), 1,40 (10H, s), 1,43 (11H, s), 1,46 - 1,55 (2H, m), 1,60 - 1,73 (2H, m), 1,78 - 1,96 (3H, m), 1,97 - 2,02 (1H, m), 2,05 - 2,14 (1H, m), 2,82 - 3,08 (1H, m), 3,92 - 4,08 (2H, m), 5,00 (0,4H, s a), 5,49 (0,6H, a d), 6,76 (0,4H, a d), 7,60 (0,6H, s a);m/z:(ES+) [M+H]+ = 640.
Ejemplo 6: Ácido (2R, 4S)-4-[[(2S)-2-amino-4-metil-pentanoil]amino]-2-(4-boronobutil)piperidin-2-carboxílico
Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,36 ml, 4,7 mmol) a una solución agitada de ácido (2R,4S)-1-(tercbutoxicarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-4-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico (Intermedio 18, 149 mg, 0,23 mmol) en DCM (1 ml) a temperatura ambiente. Después de 2 h la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en 1 M HCl (aq) (2,0 ml, 2,0 mmol) y ET2O (2 ml). Se añadió ácido fenilborónico (85 mg, 0,70 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla se diluyó con Et2O (10 ml) y agua (2 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con ET2O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó mediante cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna usando amoniaco al 5 % en MeOH (20 ml) para proporcionar ácido (2R,4S)-4-[[(2S)-2-amino-4-metil-pentanoil]amino]-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico.
Ejemplo 6,81 mg, 97% rendimiento) como un sólido blanco. 1H RMN (500MHz, D2O) 50,74 - 0,82 (2H, m), 0,89 (3H, d), 0,91 (3H, d), 1,15 - 1,25 (1H, m), 1,24 - 1,34 (1H, m), 1,38 - 1,47 (3H, m), 1,47 - 1,54 (1H, m), 1,60 (1H, dt), 1,65 - 1,76 (1H, m), 1,79 - 1,98 (3H, m), 2,01 - 2,09 (1H, m), 2,14 (1H, dd), 3,15 - 3,23 (1H, m), 3,31 (1H, dt), 3,39 (1H, t), 4,10 - 4,17 (1H, m); m/z: (ES+) [M-H2O+H]+ = 340.
Ejemplo 7: Ácido (2R,4S)-4-[[(2S,3S)-2-amino-3-metil-pentanoil]amino]-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico
Intermedio 19: 2-bencilo l-(terc-butil) (2R,4S)-4-((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato
Se añadió lentamente N,N-diisopropiletilamina (0,24 ml, 1,4 mmol) a una solución agitada de 2-bencil 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4, 5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 8, 355 mg, 0,687 mmol), Boc-Ile-OH (159 mg, 0,687 mmol) y COMU (300 mg, 0,70 mmol) en DMF (4 ml) a 0 °C. La reacción se agitó durante 16 h mientras se calentaba lentamente hasta temperatura ambiente. La mezcla de reacción bruta se diluyó con agua (30 ml) y la mezcla se agitó durante 10 min. El precipitado resultante se recogió por filtración. El sólido fue disuelto en EtOAc (20 ml) y lavado con NaCl acuoso saturado (5 ml), secado sobre MgSO4, filtrado y concentrado a sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 5 al 60 % en hexanos) para proporcionar 2-bencil 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 19, 424 mg, rendimiento 85%) como una espuma blanca y como una mezcla de rotámeros.1H RMN (500MHz, CDCb) 50,73 - 0,80 (2H, m), 0,82 - 0,90 (6H, m), 0,97 - 1,11 (1H, m), 1,21 (12H, s), 1,26 - 1,31 (1H, m), 1,32 - 1,36 (1H, m), 1,38 (9H, s a), 1,39 (9H, s), 1,41 - 1,43 (2H, m), 1,67 (1H, a dd), 1,75 - 1,84 (2H, m), 1,86 - 1,98 (3H, m), 2,00 (1H, a d), 2,03 (1H, a d), 2,92 - 3,02 (1H, m), 3,81 (1H, t), 3,95 - 4,09 (2H, m), 4,98 (1H, s a), 5,04 - 5,21 (2H, m), 6,07 (1H, a d), 7,28 - 7,36 (5H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 730.
Intermedio 20: Ácido (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico
Se añadió Pd/C (10 % en peso, 22 mg, 0,021 mmol) a una solución de 2-bencil 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-((2S,3S)-2-((terc -butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 19, 302 mg, 0,41 mmol) en EtOAc (4 ml). La suspensión se agitó en una atmósfera de hidrógeno (se evacuó el globo, se evacuó el matraz y se volvió a llenar con hidrógeno x3) a temperatura ambiente durante 20 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (10 ml) y MeOH (1 ml), se filtró a través de tierra de diatomeas y se concentró hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (15 a 100 % de EtOAc en hexanos seguido de 0 a 50 % de MeOH en EtOAc) para proporcionar ácido (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico (Intermedio 20, 223 mg, 84 % de rendimiento) como una película seca y como una mezcla de rotámeros, y el subproducto del ácido borónico, ácido (2R,4S)-2-(4-boronobutil)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((2S,3S)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-metilpentanamido)piperidian-2-carboxílico (30 mg, 13 % de rendimiento) como un sólido blanco y como una mezcla o rotámeros.Intermedio 20: 1H RMN (500MHz, CDCl3) 50,72 - 0,81 (2H, m), 0,82 - 0,88 (3H, m), 0,89 - 0,94 (3H, m), 0,98 - 1,11 (1H, m), 1,21 - 1,24 (12H, m), 1,26 - 1,31 (1H, m), 1,32 - 1,38 (2H, m), 1,40 (10H, s a), 1,42 (10H, s a), 1,45 - 1,55 (1H, m), 1,53 - 1,64 (1H, m), 1,76 - 1,97 (4H, m), 1,98 - 2,08 (3H, m), 2,83 - 3,10 (1H, m), 3,90 -4,08 (2H, m), 5,15 (0,5H, a d), 5,81 (0,5H, s a), 6,74 (0,5H, s a), 7,48 (0,5H, s a);m/z:(ES+) [M+H]+ = 640. Subproducto del ácido borónico: 1H RMN (500MHz, CDCls) 50,76 - 0,86 (2H, m), 0,86 - 0,96 (6H, m), 1,03 - 1,13 (1H, m), 1,43 (9H, s a), 1,44 (12H, s), 1,53 - 1,68 (1H, m), 1,78 - 1,90 (2H, m), 1,90 - 1,99 (2H, m), 1,99 - 2,04 (1H, m), 2,07 - 2,21 (1H, m), 2,98 - 3,11 (1H, m), 3,43 - 3,61 (1H, m), 3,90 (1H, s a), 3,96 - 4,12 (2H, m), 5,19 (1H, s a), 5,53 - 5,76 (1H, m), 6,72 (1H, s a);m/z:(ES+) [M+H]+ = 558.
Ejemplo 7: Ácido (2R,4S)-4-[[(2S,3S)-2-amino-3-metil-pentanoilaminol-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico
Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,62 ml, 8,1 mmol) a una solución agitada de ácido (2R,4S)-1-(tercbutoxicarbonil)-4-((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico (Intermedio 20, 223 mg, 0,35 mmol) y el subproducto ácido borónico, ácido (2R,4S)-2-(4-boronobutil)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((2S,3S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilpentanamido)piperidina-2-carboxílico (30 mg, 0,05 mmol) en DCM (2 ml) a temperatura ambiente. Después de 2 h, la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en HCl 1 M (acuoso) (3,0 ml, 3,0 mmol) y Et2O (3 ml). Se añadió ácido fenilborónico (147 mg, 1,21 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla se diluyó con Et2O (5 ml) y agua (1 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con ET2O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó mediante cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna usando amoniaco al 5 % en MeOH (20 ml) para proporcionar ácido (2R,4S)-4-[[(2S,3S)-2-amino-3-metil-pentanoil]amino]-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico.
Example7,126 mg, rendimiento del 88%) como un sólido blanco. 1H RMN (500MHz, D2O) 50,78 (2H, td), 0,85 - 0,91 (6H, m), 1,11 - 1,25 (2H, m), 1,26 - 1,34 (1H, m), 1,37 - 1,49 (3H, m), 1,64 - 1,76 (2H, m), 1,80 - 1,91 (2H, m), 1,92 - 1,99 (1H, m), 2,01 - 2,09 (1H, m), 2,17 (1H, dd), 3,15 - 3,24 (2H, m), 3,31 (1H, dt), 4,10 - 4,21 (1H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 358.
Ejemplo 8: Ácido (2R,4S)-4-[[(2S)-2-amino-3,3-dimetil-butanoil]amino]-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico
Intermedio 21: 2-bencilo l-(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato
Se añadió lentamente N,N-diisopropiletilamina (0,24 ml, 1,4 mmol) a una solución agitada de 2-bencil 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4, 5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 8, 355 mg, 0,687 mmol), Boc-terc-Leu-OH (159 mg, 0,687 mmol) y COMU (300 mg, 0,70 mmol) en DMF (4 ml) a 0 °C. La reacción se agitó durante 16 h mientras se calentaba lentamente hasta temperatura ambiente. La mezcla de reacción bruta se diluyó con agua (30 ml) y la mezcla se agitó durante 10 min. El precipitado resultante se recogió por filtración. El sólido fue disuelto en EtOAc (20 ml) y lavado con NaCl acuoso saturado (5 ml), secado sobre MgSO4, filtrado y concentrado a sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 5 al 55 % en hexanos) para proporcionar 2-bencilo 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 21, 372 mg, rendimiento del 74%) como una espuma blanca.1H RMN (500MHz, CDCls) 50,73 - 0,81 (2H, m), 0,95 (9H, s), 1,24 (12H, s), 1,41 (10H, s), 1,42 - 1,46 (12H, m), 1,68 (1H, dd), 1,87 - 1,95 (1H, m), 1,96 - 2,01 (2H, m), 2,02 - 2,05 (2H, m), 2,92 - 3,04 (1H, m), 3,69 (1H, a d), 3,98 - 4,12 (2H, m), 5,05 - 5,25 (3H, m), 5,50 - 5,62 (1H, m), 7,30 - 7,39 (5H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 730.
Intermedio 22: Ácido (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico
Se añadió Pd/C (10 % en peso, 27 mg, 0,025 mmol) a una solución de 2-bencil 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-((S)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 21,372 mg, 0,511 mmol) en EtOAc (4 ml). La suspensión se agitó en una atmósfera de hidrógeno (se evacuó el globo, se evacuó el matraz y se volvió a llenar con hidrógeno x3) a temperatura ambiente durante 20 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (10 ml) y MeOH (1 ml), se filtró a través de tierra de diatomeas y se concentró hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (40 a 100 % de EtOAc en hexanos seguido de 0 a 40 % de MeOH en EtOAc) para proporcionar ácido (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)- 2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico (Intermedio 22, 265 mg, rendimiento del 81 %) como una película seca y una mezcla de rotámeros, y el subproducto ácido borónico, ácido (2R,4S)-2-(4-boronobutil)-1-(terc-butoxicarbonilo).-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanamido)piperidina-2-carboxílico (32 mg, 11 % de rendimiento) como una película seca transparente y como una mezcla de rotámeros. Intermedio 22: 1H RMN (500MHz, CDCls) 50,75 (2H, a t), 0,93 (9H, s), 1,20 (12H, s), 1,24 -1,33 (2H, m), 1,36 (9H, s), 1,38 (9H, s a), 1,40 (3H, s a), 1,51 - 1,64 (1H, m), 1,72 - 1,82 (1H, m), 1,83 - 1,98 (3H, m), 2,03 (1H, s a), 2,79 - 3,06 (1H, m), 3,76 (0,4H, a d), 3,85 - 4,07 (2,6H, m), 5,42 (0,6H, a d), 6,39 - 6,71 (1H, m), 6,74 - 6,99 (0,4H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 640. Subproducto de ácido borónico: 1H RMN (500MHz, CDCh) 50,77 - 0,86 (2H, m), 0,97 (9H, s), 1,42 (9H, s a), 1,43 (14H, s a), 1,52 - 1,67 (1H, m), 1,75 - 1,90 (2H, m), 1,91 - 2,04 (3H, m), 2,08 - 2,19 (1H, m), 2,97 - 3,14 (1H, m), 3,44 - 3,63 (1H, m), 3,87 (1H, a d), 3,97 - 4,11 (2H, m), 5,50 (1H, s a), 6,53 - 6,79 (1H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 558.
Ejemplo 8: Ácido (2R,4S)-4-[[(2S)-2-amino-3,3-dimetil-butanoil]amino]-2-(4-boronobutil)piperidin-2-carboxílico
Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,73 ml, 9,4 mmol) a una solución agitada de ácido (2R,4S)-1-(tercbutoxicarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidian-2-carboxílico (Intermedio 22, 265 mg, 0,414 mmol) y el subproducto ácido borónico, ácido (2R,4S)-2-(4-boronobutil)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((S)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3,3-dimetilbutanamido)piperidian-2-carboxílico (32 mg, 0,057 mmol) en DCM (2 ml) a temperatura ambiente. Después de 2 h, la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en HCl 1 M (acuoso) (3,0 ml, 3,0 mmol) y Et2O (3 ml). Se añadió ácido fenilborónico (172 mg, 1,41 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla se diluyó con Et2O (5 ml) y agua (1 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con ET2O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó mediante cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna usando amoniaco al 5 % en MeOH (20 ml) para proporcionar ácido (2R,4S)-4-[[(2S)-2-amino-3,3dimetil-butanoil]amino]-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico (Ejemplo 8, 158 mg, rendimiento del 94%) como un sólido blanco.1H RMN (500MHz, D2O) 50,74 - 0,81 (2H, m), 0,95 (9H, s), 1,15 - 1,25 (1H, m), 1,26 - 1,34 (1H, m), 1,38 -1,48 (2H, m), 1,65 - 1,75 (1H, m), 1,80 - 1,91 (2H, m), 1,96 (1H, ddd), 2,01 - 2,10 (1H, m), 2,19 (1H, dd), 3,05 (1H, s), 3,15 - 3,24 (1H, m), 3,30 (1H, dt), 4,10 - 4,23 (1H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 358.
Ejemplo 9: Ácido (2R,4S)-4-[[(2R)-2-amino-3-metil-butanoil]amino]-2-(4-boronobutil)piperidin-2-carboxílico
Intermedio 23: 2-bencilo l-(terc-butil) (2R,4S)-4-((R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5) ,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato
Se añadió lentamente N,N-diisopropiletilamina (0,063 ml, 0,36 mmol) a una solución agitada de HATU (61 mg, 0,16 mmol) y Boc-D-Val-OH (33 mg, 0,15 mmol) en DMF (1 ml) a 0 °C. La solución se agitó durante 10 minutos y luego se añadió una solución de 2-bencil-1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-amino-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3). Se añadió 1,2-dicarboxilato de ,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina (Intermedio 8, 75 mg, 0,15 mmol) en DMF (1 ml). La reacción se agitó durante 16 h mientras se calentaba lentamente a temperatura ambiente. La reacción cruda se diluyó con 0,1 M HCl (aq) (30 ml) y EtOAc. Se separaron las fases y se extrajo la fase acuosa con EtOAc (3 x 15 ml). Los compuestos orgánicos combinados se lavaron con NaCl acuoso saturado, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron hasta la sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 5 al 40 % en hexanos) para proporcionar 2-bencilo 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-((R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 23, 74 mg, rendimiento 71%) como una película incolora y como una mezcla de rotámeros.1H RMN (500MHz, CDCb) 50,75 (2H, t), 0,84 (3H, d), 0,89 (3H, d), 1,21 (12H, s), 1,30 - 1,35 (1H, m), 1,37 (9H, s), 1,39 (9H, s), 1,42 (4H, s a), 1,69 (1H, dd), 1,81 - 1,91 (1H, m), 1,92 - 2,01 (3H, m), 2,02 (2H, s), 2,94 - 3,02 (1H, m), 3,75 (1H, dd), 3,91 - 4,03 (1H, m), 5,03 - 5,19 (3H, m), 6,10 (1H, d), 7,28 - 7,39 (5H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 715.
Intermedio 24: Ácido (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico
Se añadió Pd/C (10 % en peso, 5 mg, 0,005 mmol) a una solución de 2-bencil 1 -(terc-butil) (2R,4S)-4-((R)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 23, 69 mg, 0,10 mmol) en EtOAc (1 ml). La suspensión se agitó en una atmósfera de hidrógeno (se evacuó el globo, se evacuó el matraz y se volvió a llenar con hidrógeno x3) a temperatura ambiente durante 19 h. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (10 ml) y MeOH (1 ml), se filtró a través de tierra de diatomeas y se concentró hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (de 40 a 100 % de EtOAc en hexanos y luego de 0 a 40 % de MeOH en EtOAc) para proporcionar (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((R)-2-((tercbutoxicarbonil)amino)-3-metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico ácido (Intermedio 24, 40 mg, 66% de rendimiento) como una película seca y como una mezcla de rotámeros.1H RMN (500MHz, CDCls) 50,77 (2H, t), 0,91 (6H, a d), 1,20 - 1,24 (13H, m), 1,29 (1H, a d), 1,33- 1,42 (11H, m), 1,43 (10H, s), 1,70 - 1,82 (1H, m), 1,83 - 1,90 (1H, m), 1,91 - 2,02 (4H, m), 3,00 (1H, t), 3,83 - 3,94 (1H, m), 3,96 - 4,07 (1H, m), 4,13 (1H, s a), 5,40 (1H, d), 6,03 - 6,33 (1H, m), 6,90 - 7,22 (1H, m); m/z: (ES+) [M+H]+ = 625.
Ejemplo9:Ácido (2R,4S)-4-[[(2R)-2-amino-3-metil-butanoil]amino]-2-(4-boronobutil)piperidin-2-carboxílico
Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,10 ml, 1,3 mmol) a una solución agitada de (2R,4S)-1-(terc-butoxicarbonil)-4-((R)-2-((terc-butoxicarbonil)amino)-3 -metilbutanamido)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico (Intermedio 24, 40 mg, 0,06 mmol) en DCM (1 ml) a temperatura ambiente. Después de 2 h, la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en HCl 1 M (acuoso) (1,0 ml, 1,0 mmol) y Et2O (1 ml). Se añadió ácido fenilborónico (24 mg, 0,20 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 20 h. La mezcla se diluyó con Et2O (5 ml) y agua (1 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con ET2O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó mediante cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna usando amoniaco al 5 % en MeOH (20 ml) para proporcionar ácido (2R,4S)-4-[[(2R)-2-amino-3-metil-butanoil]amino]-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico (Ejemplo 9, 20 mg, rendimiento del 91%) como un sólido blanco.1H RMN (500MHz, D2O) 50,73 - 0,83 (2H, m), 0,87 - 0,95 (6H, m), 1,14 - 1,23 (1H, m), 1,24 - 1,33 (1H, m), 1,41 (2H, quin), 1,65 - 1,77 (1H, m), 1,79 - 1,87 (1H, m), 1,88 - 1,98 (3H, m), 2,01 - 2,09 (1H, m), 2,15 (1H, dd), 3,14 (1H, d), 3,15 - 3,24 (1H, m), 3,31 (1H, dt), 4,11 - 4,20 (1H, m);m/z:(ES+) [M-H2O+H]+ = 326.
Ejemplo 10: Enantiómero 1 del ácido anti-4-amino-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico
Intermedio 25: 4-oxopiperidina-1,2-dicarboxilato de l-(terc-butilo) de 2-bencilo
Se añadieron N,N'-diisopropilcarbodiimida (3,48 ml, 22,3 mmol) y DMAP (0,248 g, 2,03 mmol) a una solución agitada de ácido 1-(terc-butoxicarbonil)-4-oxopiperidina-2-carboxílico (4,94 g, 20,3 mmol) y alcohol bencílico (2,21 ml, 21,4 mmol) en DCM (130 ml) a 0 °C. La reacción se agitó durante 17 h mientras se calentaba lentamente hasta temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue filtrada y el filtrado se concentró a la sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 5 al 50 % en hexanos) para proporcionar 4-oxopiperidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo 1 -(terc-butilo) (Intermedio 25, 6,68 g, rendimiento del 99 %). como aceite incoloro y como mezcla de rotámeros.1H RMN (500 MHz, CDCls) 51,40 (5H, s a), 1,45 - 1,58 (4H, m), 2,50 (2H, a d), 2,71 - 2,94 (2H, m), 3,51 - 3,75 (1H, m), 4,05 (1H, s a), 4,89 (0,5H, s a), 5,09 - 5,27 (2,5H, m), 7,30 - 7,42 (5H, m);m/z:(ES+) [M+Na]+ = 356.
Intermedio 26: l-(terc-butil) 4-hidroxipiperidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo
Se añadió en porciones borohidruro de sodio (0,749 g, 19,8 mmol) a una solución agitada de 4-oxopiperidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo 1 -(terc-butilo) (Intermedio 25, 6,60 g, 19,8 mmol) en un mezcla MeOH/THF (1:1, 100 ml) a 0 °C. La mezcla se agitó durante 3 h y luego se inactivó cuidadosamente con Hcl 1 M (acuoso) (20 ml - desprendimiento de gas) y se calentó a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con agua (120 ml) y EtOAc (40 ml). Se separaron las fases y se extrajo la fase acuosa con EtOAc (3 x 30 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con NaCl acuoso saturado, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron hasta sequedad para proporcionar 1-(terc-butil)4-hidroxipiperidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (Intermedio 26, 6,87 g, 103 %). como una goma de mascar transparente. El material bruto se sacó directamente sin purificación adicional.1H RMN (500 MHz, CDCh) 5 1,34 - 1,42 (5H, m), 1,47 (4H, s), 1,56 - 1,78 (3H, m), 1,84 - 1,97 (1H, m), 2,48 (1H, brdd), 2,88 - 3,10 (1H, m), 3,63 (1H, brdd), 4,00 (0,5H, a d), 4,71 (0,5H, s), 4,87 (0,5H, s a), 5,08 (0,5H, s a), 5,13 - 5,26 (2H, m), 7,32 - 7,39 (5H, m); m/z: (ES+) [M+Na]+ = 358.
Intermedio 27: 4-((metilsulfonil)oxi)piperidina-1,2-dicarboxilato de l-(terc-butilo) de 2-bencilo
Se añadió en porciones anhídrido metanosulfónico (6,26 g, 36,0 mmol) a una solución agitada de 4-hidroxipiperidina-1,2-dicarboxilato de 1 -(terc-butilo) de 2-bencilo (Intermedio 26, 6,71 g, 19,9 mmol) y trietilamina. (5,60 ml, 40,2 mmol) en DCM (100 ml) a 0 °C. Se dejó expirar el baño de enfriamiento y la reacción se calentó a temperatura ambiente. Después de 15 h, la reacción se diluyó con DCM (100 ml) y se lavó secuencialmente con HCl 1 M (acuoso) (50 ml), agua (50 ml), NaHCO acuosos saturados (50 ml) y NaCl acuoso saturado (50 ml). La capa orgánica se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró hasta sequedad para producir 4-((metilsulfonil)oxi)piperidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (Intermedio 27, 7,74 g, rendimiento 94%) como una goma de color naranja pálido y una mezcla de rotámeros e isómeros. El material bruto se sacó directamente sin purificación adicional.1H RMN (500 MHz, CDCb) 51,39 (4H, s a), 1,43 - 1,48 (5H, m), 1,57 (0,5H, s a), 1,66 - 1,78 (1H, m), 1,84 - 1,95 (1H, m), 1,97 - 2,07 (0,5H, m), 2,08 - 2,20 (1H, m), 2,68 - 2,87 (1H, m), 2,93 - 3,00 (3H, m), 3,98 - 4,07 (0,6H, m), 4,14 - 4,24 (0,4H, m), 4,52 - 4,72 (1H, m), 4,86 - 5,05 (1H, m), 5,08 - 5,22 (2H, m), 7,34 -7,41 (5H, m);m/z:(ES+) [M+Na]+ = 436.
Intermedio 28: 4-azidopiperidina-1,2-dicarboxilato de l-(terc-butilo) de 2-bencilo
Se añadió azida sódica (6,05 g, 93,1 mmol) a una solución agitada de 4-((metilsulfonil)oxi)piperidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (intermedio 27, 7,73 g, 18,6 mmol). ) en DMF (50 ml). La reacción se calentó a 60 °C y se agitó durante 21 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se filtró y el filtrado se diluyó con agua (500 ml) y EtOAc (50 ml). Se separaron las fases y se extrajo la fase acuosa con EtOAc (4 x 40 ml). Los compuestos orgánicos combinados se lavaron con NaCl acuoso saturado (2 x 40 ml), se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron hasta la sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 5 al 35 % en hexanos) para proporcionar 1-(terc-butil)4-azidopiperidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (intermedio 28, 5,26 g, rendimiento del 78 %) como una goma de color amarillo pálido y como una mezcla de rotámeros e isómeros.1H RMN (500 MHz, CDCb) 5 1,38 (4H, s a), 1,46 (5H, s a), 1,64 - 1,74 (1H, m), 1,74 - 1,86 (1H, m), 1,95 (1H, ddd), 2,43 - 2,59 (1H, m), 3,13 - 3,38 (1H, m), 3,83 (0,5H, a d), 3,90 - 4,09 (1,5H, m), 4,68 (0,5H, s a), 4,88 (0,5H, s a), 5,10 - 5,36 (2H, m), 7,30 - 7,43 (5H, m);m/z:(ES+) [M-Boc]+ = 261.
Intermedio 29: 4-azido-2-(but-2-enil)piperidina-1,2-dicarboxilato de l-(terc-butilo) de 2-bencilo
Se disolvieron 1 -(terc-butil) 4-azidopiperidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (intermedio 28, 5,26 g, 14,6 mmol) y bromuro de crotilo (2,65 ml, 21,9 mmol) en THF (100 ml) y la solución se enfrió a -78°C. Se añadió gota a gota una solución de KHMDS (1 M en 2-metiltetrahidrofurano, 22,0 ml, 22,0 mmol) durante 10 min. La mezcla de reacción se calentó lentamente hasta temperatura ambiente y se agitó durante un total de 5 h. La mezcla de reacción bruta se inactivó con NH4Cl acuoso saturado y después se diluyó con NaCl acuoso saturado y EtOAc (50 ml). Se separaron las fases y se extrajo la capa acuosa con EtOAc (3 x 40 ml). Los compuestos orgánicos combinados se lavaron con NaCl acuoso saturado, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron hasta la sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (EtOAc del 2 al 40 % en hexanos) para proporcionar 1 -(terc-butil)4-azido-2-(but-2-enil)pi peridina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (Intermedio 29, 5,13 g, rendimiento del 85 %) como un aceite amarillo pálido transparente y como una mezcla de diastereómeros, rotámeros y olefinas E/Z.1H RMN (500MHz, CD2O 2) 5 1,37 (4<h>, s a), 1,39 (5H, s), 1,40 - 1,43 (1H, m), 1,45 - 1,54 (1H, m), 1,54 - 1,62 (1H, m), 1,67 (3H, dd), 1,79 - 1,89 (1H, m), 1,91 - 2,01 (2H, m), 2,03 -2,08 (1H, m), 2,08 - 2,15 (1H, m), 2,38 (1H, dd), 2,50 - 2,66 (1H, m), 2,67 - 2,83 (1H, m), 2,94 - 3,11 (1H, m), 3,17 (1H, a dd), 3,32 (1H, ddd), 3,56 - 3,75 (2H, m), 3,99 (1H, dt), 5,05 - 5,25 (1H, m), 5,35 - 5,43 (1H, m), 5,49 - 5,64 (2H, m), 7,29 -7,39 (5H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 415.
Intermedio 30: anti-2-bencil l-(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidina-1, 2-dicarboxilato e
Intermedio 31: sin-2-bencil 1-(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidina-1, 2-dicarboxilato
Se añadieron dicloruro de bis(1,5-ciclooctadieno)diiridio(I) (415 mg, 0,618 mmol) y bis(difenilfosfino)metano (475 mg, 1,24 mmol) a un matraz de fondo redondo secado en horno. El matraz fue sellado y purgado con N2. Los sólidos se disolvieron en DCM (90 ml) y se añadió lentamente a la solución 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (2,70 ml, 18,6 mmol). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. Se añadió 1-(terc-butil)4-azido-2-(but-2-enil)piperidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (intermedio 29, 5,12 g, 12,4 mmol) como una solución en DCM (30 ml). ) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 46 h. La mezcla de reacción se enfrió a 0 °C y se inactivó cuidadosamente con MeOH (2 ml) y agua (50 ml). Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo con DCM (3 x 30 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (5 a 20 % de EtOAc en hexanos) para proporcionar anti-2-bencil 1 -(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 30, 2,01 g, rendimiento del 30 %) como primer diasterómero eluyente como una goma incolora y sin-2-bencilo 1 -(terc-butil)4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 31, 2,07 g, rendimiento del 31 %) como segundo diasterómero eluyente en forma de goma incolora.
Intermedio 30:1H RMN (500MHz, CDCb) 50,80 (2H, t), 1,25 (12H, s), 1,28 - 1,36 (2H, m), 1,38 (8H, s), 1,40 -1,44 (2H, m), 1,44 - 1,48 (1H, m), 1,49 - 1,54 (1H, m), 1,67 - 1,78 (1H, m), 1,87 - 2,03 (2H, m), 2,07 - 2,19 (1H, m), 2,50 (1H, td), 3,42 (1H, ddd), 3,46 - 3,58 (1H, m), 3,66 - 3,77 (1H, m), 5,09 - 5,21 (2H, m), 7,29 - 7,43 (5H, m);m/z:(ES+) [M+Na]+ = 565.
Intermedio 31:1H RMN (500MHz, CDCb) 50,79 (2H, a t), 1,25 (12H, s), 1,30 - 1,39 (2H, m), 1,39 - 1,44 (11H, m), 1,58 - 1,69 (1H, m), 1,86 - 1,94 (3H, m), 1,94 - 2,00 (1H, m), 2,01 - 2,09 (1H, m), 2,94 - 3,09 (1H, m), 3,52 -3,66 (1H, m), 4,05 (1H, a d), 5,03 - 5,25 (2H, m), 7,29 - 7,39 (5H, m);m/z:(ES+) [M+Na]+ = 565.
Intermedio 32:anti-2-bencil 1 -(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1, enantiómero 2-dicarboxilato 1 e
Intermedio 33:anti-2-bencil 1 -(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1, enantiómero 2-dicarboxilato 2
anti-2-bencil 1 -(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 30, 2 g, 3,69 mmol) se sometió a SFC quiral [columna (S,S)Whelk-O1,21,2 mm x 250 mm, 5 |jm, temperatura = 20 °C, fase móvil = 20 % de isopropanol :CO2, detección UV a 220 nm, carga = 25 mg/inj, conc = 100 mg/ml en MeCN, tasa de flujo = 70 ml/min, presión de salida = 100 bar] para producir el enantiómero 1 del anti-2-bencil 1-(terc-butil)4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 32, 980 mg, 49 % de rendimiento, 96 % ee) como primer enantiómero eluyente como goma incolora y enantiómero 2 de anti-2-bencil 1-(tercbutil) 4-azido-2-[4-(4,4 ,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]pi peridina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 33,957 mg, 48%de rendimiento, 98 % ee) como segundo enantiómero eluyente como goma incolora.
Intermedio 32: 1H RMN (500MHz, CDCb) 50,80 (2H, t), 1,25 (12H, s), 1,27 - 1,35 (2H, m), 1,38 (9H, s), 1,41 -1.47 (2H, m), 1,49 - 1,53 (1H, m), 1,68 - 1,78 (1H, m), 1,89 - 2,03 (2H, m), 2,08 - 2,18 (1H, m), 2,42 - 2,56 (1H, m), 3,42 (1H, ddd), 3,47 - 3,56 (1H, m), 3,68 - 3,77 (1H, m), 5,09 - 5,22 (2H, m), 7,31 - 7,42 (5H, m);m/z:(ES+) [M+Na]+ = 565.
Intermedio 33: 1H RMN (500MHz, CDCb) 50,80 (2H, t), 1,25 (12H, s), 1,27 - 1,35 (2H, m), 1,38 (9H, s), 1,41 -1.48 (2H, m), 1,49 - 1,52 (1H, m), 1,67 - 1,77 (1H, m), 1,88 - 1,96 (1H, m), 1,96 - 2,03 (1H, m), 2,09 - 2,18 (1H, m), 2,50 (1H, td), 3,42 (1H, ddd), 3,51 (1H, dq), 3,67 - 3,76 (1H, m), 5,10 - 5,22 (2H, m), 7,32 - 7,41 (5H, m);m/z:(ES+) [M+Na]+ = 565.
Intermedio 34: Enantiómero 1 del ácido anti-4-amino-1-terc-butoxicarbonil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidin-2-carboxílico
Se añadió Pd/C (10 % en peso, 50 mg, 0,047 mmol) a una solución de anti-2-bencil 1 -(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-enantiómero 1 de tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 32, 250 mg, 0,46 mmol) en EtOAc (3 ml). La suspensión se agitó en una atmósfera de hidrógeno (se evacuó el globo, se evacuó el matraz y se volvió a llenar con hidrógeno x3) a temperatura ambiente durante 20 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH (5 ml), se filtró a través de tierra de diatomeas y se concentró hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (MeOH del 5 al 55 % en DCM) para proporcionar enantiómero 1 de ácido anti-4-amino-1-terc-butoxicarbonil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidina-2-carboxílico (Intermedio 34, 159 mg, rendimiento del 82%) como un sólido blanco.1H RMN (500MHz, DMSO-d6) 50,64 (2H, td), 1,16 (12H, s), 1,18 -1,25 (2H, m), 1,25 - 1,30 (2H, m), 1,32 (9H, s), 1,34 - 1,46 (2H, m), 1,49 - 1,61 (1H, m), 1,84 - 1,99 (2H, m), 2,91 - 3,04 (1H, m), 3,27 (1H, s a), 3,37 - 3,49 (2H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 427.
Ejemplo 10: Enantiómero 1 del ácido anti-4-amino-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico
Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,58 ml, 7,5 mmol) a una solución agitada de enantiómero 1 de ácido anti-4-amino-1-terc-butoxicarbonil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidina-2-carboxílico (intermedio 34.159 mg, 0,37 mmol) en<d>C<m>(2 ml) a temperatura ambiente. Después de 2 h, la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en HCl 1 M (acuoso) (3,0 ml, 3,0 mmol) y Et2O (3 ml). Se añadió ácido fenilborónico (136 mg, 1,12 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla se diluyó con Et2O (20 ml) y agua (5 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con ET2O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó mediante cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna usando amoniaco al 5 % en MeOH (20 ml) para proporcionar el enantiómero 1 del ácido anti-4-amino-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico (Ejemplo 10, 84 mg, 92 % rendimiento) como un sólido blanco.1H RMN (500MHz, D2O) 5 0,75 (2H, t), 1,18 - 1,29 (2H, m), 1,30 - 1,42 (3H, m), 1,43 - 1,52 (1H, m), 1,55 - 1,65 (1H, m), 1,65 - 1,73 (1H, m), 1,96 - 2,03 (1H, m), 2,44 - 2,53 (1H, m), 2,95 (1H, td), 3,04 (1H, tt), 3,11 - 3,19 (1H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 245.
Ejemplo 11: Enantiómero 2 de ácido anti-4-amino-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico
Intermedio 35: Enantiómero 2 del ácido anti-4-amino-1-terc-butoxicarbonil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidina-2-carboxílico
Se añadió Pd/C (10 % en peso, 25 mg, 0,023 mmol) a una solución de enantiómero 2 de anti-2-bencil 1 -(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 33, 138 mg, 0,25 mmol) en una mezcla de EtOAc/isopropanol (2:1, 3 ml) . La suspensión se agitó en una atmósfera de hidrógeno (se evacuó el globo, se evacuó el matraz y se volvió a llenar con hidrógeno x3) a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH (5 ml), se filtró a través de tierra de diatomeas y se concentró hasta sequedad para proporcionar enantiómero 2 de ácido anti-4-amino-1-terc-butoxicarbonil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidin-2-carboxílico (Intermedio 35, 118 mg, rendimiento del 109 %) como un sólido blanco y como una mezcla de rotámeros. El material bruto se sacó directamente sin purificación adicional.1H RMN (500 MHz, CÜ2Cl2) 50,61 - 0,80 (2H, m), 0,93 - 1,15 (2H, m), 1,18 - 1,24 (12H, m), 1,24 - 1,38 (3H, m), 1,42 (9H, s a), 1,47 - 1,67 (2H, m), 1,70 - 1,91 (1H, m), 1,97 - 2,15 (1H, m), 2,16 - 2,34 (1H, m), 2,44 (1H, s a), 3,20 - 3,40 (1H, m), 3,55 (2H, s a), 8,35 (2H, s a);m/z:(ES+) [M+H]+ = 427.
Ejemplo 11: Enantiómero 2 de ácido anti-4-amino-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico
Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,43 ml, 5,5 mmol) a una solución agitada de enantiómero 2 de ácido anti-4-amino-1 -terc-butoxicarbonil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidina-2-carboxílico (Intermedio 35, 118 mg, 0,277 mmol) en DCM (2 ml) a temperatura ambiente. Después de 2 h la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en 1 M HCl (aq) (2,0 ml, 2,0 mmol) y ET2O (2 ml). Se añadió ácido fenilborónico (101 mg, 0,83 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla se diluyó con Et2O (20 ml) y agua (5 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con ET2O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó mediante cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna usando amoniaco al 5 % en MeOH (20 ml). El material obtenido se purificó adicionalmente mediante cromatografía de fase inversa (RediSep Rf Gold® C18, del 0 al 95 % de acetonitrilo en agua) para proporcionar el enantiómero 2 del ácido anti-4-amino-2-(4-boronobutil)piperidin-2-carboxílico (Ejemplo 11, 41 mg, rendimiento 61%) como un sólido blanco.1H RMN (500MHz, D2O) 50,70 (2H, t), 1,14 - 1,24 (2H, m), 1,24 - 1,37 (3H, m), 1,37 - 1,45 (1H, m), 1,51 - 1,59 (1H, m), 1,59 - 1,67 (1H, m), 1,91 - 1,98 (1H, m), 2,43 (1H, dt), 2,89 (1H, td), 2,98 (1H, tt), 3,07 - 3,13 (1H, m);m/z:(ES+) [M+H]+ = 245.
Ejemplo 12: Enantiómero 1 de ácido sin-4-amino-2-(4-boronobutil)piperidina-2-carboxílico
Intermedio36: 2-bencilo 1 -(terc-butil) (2S,4R)-4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil) piperidina-1,2-dicarboxilato (enantiómero 1) e
Intermedio 6: 2-bencilo l-(terc-butil) (2R,4S)-4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil) piperidina-1,2-dicarboxilato (enantiómero 2)
sin-2-bencil 1 -(terc-butil) 4-azido-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil]piperidina-1,2-dicarboxilato (intermedio 31, 2,0 g, 3,7 mmol) se sometió a SFC quiral [columna (S,S)Whelk-O1,4,6 mm x 100 mm, 5 |jm, temperatura
= 20 °C, fase móvil = 20 % de isopropanol. :CO2, detección UV a 220 nm, carga = 25 mg/inj, conc = 100 mg/ml en MeCN, tasa de flujo= 70 ml/min, presión de salida = 100 bar] para producir el enantiómero 1 de sin-2-bencilo 1 -(terc-butil) (2S,4R)-4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 36, 994 mg, 49%de rendimiento, 98 % ee) como primer enantiómero eluyente como una goma incolora y enantiómero 2 de sin-2-bencil 1-(terc-butil) (2R,4S)-4-azido-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-1,2-dicarboxilato (Intermedio 6,
1,04 g, rendimiento 51 % , 98 % ee) como segundo enantiómero eluyente en forma de goma incolora. La estereoquímica absoluta del enantiómero 2 se determinó mediante SFC en comparación con elIntermedio 6sintetizado previamente. La estereoquímica absoluta delIntermedio 36se asignó por analogía.
Intermedio 36:1H RMN (500MHz, CDCla) 50,79 (2H, a t), 1,25 (12H, s), 1,29 - 1,36 (1H, m), 1,38 (1H, a d), 1,41
(11H, s), 1,56 - 1,68 (1H, m), 1,85 - 1,94 (3H, m), 1,97 (1H, a d), 2,05 (1H, a dd), 2,94 - 3,07 (1H, m), 3,54 - 3,65
(1H, m), 4,03 (1H, t), 5,06 - 5,25 (2H, m), 7,30 - 7,39 (5H, m);m/z:(ES+) [M+Na]+ = 565.
Intermedio 6:1H RMN (500MHz, CDCla) 50,79 (2H, a t), 1,25 (12H, s), 1,30 - 1,36 (1H, m), 1,36 - 1,39 (1H, m), 1,41 (11H, s), 1,56 - 1,67 (1H, m), 1,85 - 1,94 (3H, m), 1,94 - 2,01 (1H, m), 2,05 (1H, a dd), 2,96 - 3,05 (1H, m),
3,54 - 3,64 (1H, m), 4,01 - 4,05 (1H, m), 5,06 - 5,23 (2H, m), 7,29 - 7,38 (5H, m);m/z:(ES+) [M+Na]+ = 565.
Intermedio 37: Ácido (2S, 4R)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico
Se añadió Pd/C (10 % en peso, 50 mg, 0,047 mmol) a una solución de sin-2-bencil 1 -(terc-butil) (2S,4R)-4-azido-2-(4-(4,
4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidin-1,2-dicarboxilato (Intermedio 36, 250 mg, 0,46 mmol) en EtOAc (3 ml). La suspensión se agitó en una atmósfera de hidrógeno (se evacuó el globo, se evacuó el matraz y se volvió a llenar con hidrógeno x3) a temperatura ambiente durante 17 h. La mezcla de reacción se diluyó con MeOH (5 ml), se filtró a través de tierra de diatomeas y se concentró hasta sequedad. El residuo resultante se purificó mediante cromatografía ultrarrápida en sílice (MeOH del 5 al 40 % en DCM) para proporcionar ácido (2S,4R)-4-amino-1-(terc-butoxicarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico (Intermedio 37, 149 mg, rendimiento del 76%) como un sólido blanco.1H RMN (500MHz, CD2Cb) 50,71 (2H, brt), 1,05 - 1,15 (1H, m), 1,19 (14H, s), 1,29 - 1,37 (2H, m), 1,40 (9H, s), 1,75 - 1,94 (1H, m), 1,95 - 2,20 (3H, m), 2,23 - 2,48 (1H, m), 3,02 (1H, s a), 3,54 (1H, s a), 3,92 (1H, s a), 8,64 (3H, s a);m/z:(ES+) [M+H]+ = 427.
Ejemplo12:Ácido (2S,4R)-4-amino-2-(4-boronobutil)piperidin-2-carboxílico
Se añadió gota a gota ácido trifluoroacético (0,43 ml, 5,5 mmol) a una solución agitada de ácido (2S,4R)-4-amino-1-(tercbutoxicarbonil)-2-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)piperidina-2-carboxílico (Intermedio 37, 146 mg, 0,342 mmol) en DCM (2 ml) a temperatura ambiente. Después de 2 h, la solución se concentró a presión reducida y el residuo resultante se disolvió en HCl 1 M (acuoso) (3,0 ml, 3,0 mmol) y Et2O (3 ml). Se añadió ácido fenilborónico (125 mg, 1,03 mmol) y la solución bifásica transparente se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla se diluyó con
Et2O (20 ml) y agua (5 ml) y las capas se separaron. La capa acuosa se lavó con ET2O. La capa acuosa se liofilizó y se purificó mediante cromatografía de intercambio iónico (columna PoraPak Rxn CX de 20 cc). El producto deseado se eluyó de la columna usando amoniaco al 5 % en MeOH (20 ml) para proporcionar ácido (2S,4R)-4-amino-2-(4-boronobutil)piperidin-2-carboxílico.
Ejemplo 12, 63 mg, rendimiento del 75%).1H RMN (500MHz, D2O) 50,70 - 0,82 (2H, m), 1,10 - 1,31 (2H, m), 1,35 - 1,44
(2H, m), 1,45 - 1,54 (1H, m), 1,62 (1H, dd), 1,76 (1H, ddd), 1,84 - 1,94 (1H, m), 2,00 - 2,08 (1H, m), 2,18 (1H, ddd), 3,07
(1H, td), 3,22 (1H, dt), 3,33 (1H, tt); m/z: (ES+) [M+H]+ = 245.
Ejemplo 13: Actividad biológica de los ejemplos 1 a 12
Los efectos inhibitorios de los Ejemplos 1 a 12 sobre la actividad de la arginasa humana 1 y la arginasa 2 se cuantificaron midiendo la formación del grupo tiol a partir de tioarginina utilizando arginasa recombinante 1 o arginasa 2 producida a partir de E.coli.El grupo tiol se detectó con el reactivo de Ellman, 5,5'-dithiobis(ácido 2-nitrobenzoico) (DTNB). DTNB reacciona con el tiol para dar el disulfuro mezclado y el ácido 2-nitro-5-tiobenzoico (TNB) que se cuantifica por la absorbancia del anión (TNB2') a 412 nm.
Los ensayos se realizaron en placas transparentes de 384 pocilios (Greiner cat no: 781101). Varias concentraciones de ejemplos 1 a 12 en 300 nlDMSO se dispensaron a las placas de ensayo utilizando un dispensador acústico Echo inmediatamente seguido de sellado de placas y centrifugación.
Se prepararon dos premezclas a partir de reactivos descongelados inmediatamente antes de añadirlos a las placas de ensayo. La premezcla uno comprendía arginasa 1 humana o arginasa 2 humana, a una concentración final de 5 nM y DTNB 0,5 mM en tampón de ensayo, HEPES 45 mM, pH 7,5, brij 35, 0,045 % (p/v) y MnCl2100 pM. La premezcla dos comprendía tioarginina 0,5 mM recién descongelada en solución amortiguadora de ensayo. Se dispensaron quince microlitros de la premezcla uno en placas de ensayo que contenían los Ejemplos 1 a 12, se centrifugaron y se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente antes de añadir quince microlitros de la premezcla dos.
Las placas de ensayo se centrifugaron antes de leer la absorbancia a 412 nm en un lector de placas multimodo Pherastar para recopilar datos en el punto temporal 0 (T0). Las placas se incubaron a temperatura ambiente durante 60 minutos antes de leerlas nuevamente para recopilar datos en el punto de tiempo 1 (T1). Los datos se obtienen restando la señal A412 medida en T0 (punto de tiempo 0) de la medida en T1 (punto de tiempo 1). Los datos se transformaron en % de efecto utilizando la ecuación:
Compound % effect = 100*[(X-min)/(max-min)],
donde X representa el valor normalizado para el compuesto basado en el control de inhibición Min (vehículo) y Max (compuesto de referencia).
La concentración de los ejemplos 1 a 12 que inhibieron la actividad en un 50 % (es decir, el IC50) se calculó trazando el % de efecto frente a la concentración del compuesto de prueba y ajustando los datos utilizando el algoritmo de ajuste inteligente de Genedata Screener. Los resultados de estos ensayos se encuentran en la Tabla 2:
Tabla 2
Ejemplo 14: Estudios de biodisponibilidad
Los Ejemplos 2, 3 y 4 son formas profarmacológicas del Ejemplo 1. El siguiente estudio farmacocinético se realizó para demostrar la biodisponibilidad del Ejemplo 1 del Ejemplo 2. El Ejemplo 2 se formuló en solución salina al 0,9 % p/v, pH 4 (ajustado con HCl 1 M) para dosificación IV. La formulación se dosificó a 2 mg/kg mediante catéter femoral a dos ratas macho cada una (170-250 g). Se tomaron muestras de sangre en serie con catéter de la vena yugular a las 0,033, 0,083, 0,167, 0,5, 1,2, 4, 8 y 24 horas después de la dosis. Para la dosificación PO, se formuló el Ejemplo 2 en agua desionizada a pH 4 (ajustada con HCl 1 M) y se dosificó a 5 mg/kg mediante sonda oral a dos ratas macho cada una (170-250 g). Se tomaron muestras de sangre en serie mediante un catéter de la vena yugular a las 0,25, 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4, 8 y 24 horas después de la dosis. Las muestras de plasma se generaron a partir de la sangre mediante centrifugación a baja velocidad. Se preparó un único conjunto de estándares de calibración que contenían el Ejemplo 1 y el Ejemplo 2 añadiendo plasma en blanco. Las muestras y los estándares se extrajeron por precipitación con dos volúmenes de acetonitrilo seguido de centrifugación. Los resultados obtenidos se utilizaron para determinar el Cl (ml/min/kg), Vdss (l/kg), Cmax (pm), AUC (pm h), tmax (h), y % F para el ejemplo 1 y el ejemplo 2. La biodisponibilidad absoluta se determinó comparando el AUC normalizado de la dosis PO del Ejemplo 1 cuando se dosificó como el Ejemplo 2, versus el AUC IV normalizado de la dosis del Ejemplo 1 cuando se dosificó como el Ejemplo 1. Cuando fue apropiado, se utilizaron dosis medidas y no nominales para calcular la biodisponibilidad. De manera análoga, el mismo procedimiento se repitió para los ejemplos 3 y 4. Los resultados se muestran en las Tablas 3 a 5. Estos resultados indican que la biodisponibilidad puede incrementarse mediante la incorporación de ciertas partes de aminoácidos como profármacos.
Tabla 3
Tabla 4
Tabla 5

Claims (14)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de la fórmula (Ib), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
  2. en donde R1 es -H o -C(O)CH(R1a)NHR1b; y R1a se selecciona de -H, - alquilo (C1-C6) y CH2OR1c; R1b es -H; o alternativamente, R1a y R1b, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo heterocíclico de 5 miembros; y R1c es H o -CH3. 2. Un compuesto de la fórmula (Ib), o una sal farmacéutica aceptable del mismo, como se reivindica en la reivindicación 1, que es un compuesto de fórmula (II), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
  3. en donde R2 es -H o-C(O)CH(R2A)NH2; y R2a se selecciona de -H o -alquilo (C1-C6). 3. Un compuesto de la fórmula (Ib), o una sal farmacéutica aceptable del mismo, como se reivindica en la reivindicación 1, que es un compuesto de fórmula (III), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
  4. en donde R3 se selecciona de -H o -alquilo (C1-C4). 4. Un compuesto de la fórmula (IB), o una sal farmacéutica aceptable del mismo, como se reivindica en la reivindicación 1, que es un compuesto de la fórmula (IVb), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
  5. 5. Un compuesto de la fórmula (Vc), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
    en donde R1 es -H o -C(O)CH(R1a)NHR1b; y R1a se selecciona de -H, - alquilo (C1-C4) y CH2OR1c; R1b es -H; o alternativamente, R1a y R1b, junto con el átomo al que están unidos, forman un anillo heterocíclico de 5 miembros; y R1c es H o -CH3; o un compuesto de la fórmula (VI), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
    en donde R2 es -H o -C(O)CH(R2a)NH2; y R2a se selecciona de -H o -alquilo (C1-C6).
  6. 6. Un compuesto de la fórmula (Vc), o una sal farmacéutica aceptable del mismo, como se reivindica en la reivindicación 5.
  7. 7. Un compuesto de la fórmula (VI), o una sal farmacéutica aceptable del mismo, como se reivindica en la reivindicación 5.
  8. 8. Un compuesto de la fórmula (Vc), o una sal farmacéutica aceptable del mismo, como se reivindica en la reivindicación 5, que es un compuesto de la fórmula (VII), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
    en donde R3 se selecciona de -H o -alquilo (C1-C4).
  9. 9. Un compuesto de la fórmula (VC), o una sal farmacéutica aceptable del mismo, como se reivindica en la reivindicación 5, que es un compuesto de la fórmula (VIIIb), o una sal farmacéutica aceptable del mismo:
  10. 10. Un compuesto de la fórmula (IB), o una sal farmacéutica aceptable del mismo, como se reivindica en la reivindicación 1, que se selecciona de
    o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
  11. 11. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.
  12. 12. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o una sal farmacéutica aceptable del mismo, para su uso como un medicamento.
  13. 13. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o una sal farmacéutica aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer.
  14. 14. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, o una sal farmacéutica aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de enfermedades inflamatorias respiratorias.
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