BR112014009415B1 - Composição farmacêutica, composto inbidor de arginase e seus usos - Google Patents

Composição farmacêutica, composto inbidor de arginase e seus usos Download PDF

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Abstract

inibidores de arginase e suas aplicações terapêuticas. os compostos da invenção são agentes terapêuticos de molécula pequena que são inibidores potentes da atividade de arginase i e ii. a invenção também fornece composições farmacêuticas dos compostos da invenção e métodos para uso dos compostos da invenção para o tratamento ou prevenção de uma doença ou uma condição associada a atividade de arginase.

Description

Este pedido reivindica prioridade para Pedido Provisório U.S. N°: 61/548.939 depositado em 19 de outubro de 2011, que é aqui incorporado em sua totalidade por referência como se fosse aqui totalmente apresentado. Fundamento da invenção
A presente invenção está relacionada de modo geral a inibidores de arginase e seu uso para o tratamento de estados patológicos. Duas isoformas de arginase foram identificadas até hoje. Arginase I (ARG I), que é expressa no citosol e arginase II (ARG II), que é expressa na mitocôndria. As enzimas arginase juntas com as enzimas óxido nítrico sintase (NOS) possuem um importante papel na regulação dos níveis de óxido nítrico em células e no desenvolvimento de estados de doença fisiopatológica.
As arginases estão envolvidas em vários estados patológicos. Esses incluem, sem limitação, disfunção erétil, hipertensão pulmonar, hipertensão, aterosclerose, doença renal, asma, disfunção de célula T, lesão de reperfusão por isquemia, doenças neurodegenerativas, cicatrização de ferimentos, e doenças fibróticas. Embora o mecanismo de ação de enzimas arginase nesses estados de doença ainda seja alvo de pesquisa constante, vários estudos indicam que as enzimas arginase são freqüentemente supra-reguladas durantes estados de doença.
Por exemplo, é postulado que a supra-regulação da atividade de arginase resulta em níveis reduzidos de arginina que por suas vez reduz o nível de óxido nítrico (NO) uma molécula de sinalização fisiologicamente importante que é necessária para divisão celular, vasodilatação arterial, regulação de fluxo sangüíneo e para o controle de transdução muscular e sinal neurológico.
Em adição a seu papel na regulação dos níves de óxido nítrico (NO), arginase também afeta a produção de poliaminas críticas como putrescina, espermidina e espermina. À medida que arginase cataboliza L-arginina ela produz ornitina. Ornitina é subseqüentemente convertida a putrescina, espermidina e espermina via ornitina descarboxilase, espermidina sintase e espermina sintase respectivamente. Portanto, as enzimas arginase controlam eventos de sinalização fisiológica por controle dos níveis intracelulares de transdutores de sinal de poliamina. VejaWang, J-Y; e Casero, Jr., R. A., Ed; Humana Press, Totowa, NJ, 2006. Ornitina também fornece uma via biossintética alternativa para prolina e assim sustenta a produção de colágeno (Smith, R. J.; Phang, J. M., “The importance of ornithine as a precursor for proline in mammalian cells”. J. Cell. Physiol. 1979, 98, 475-482. Albina, J. E.; Abate, J. A.; Mastrofrancesco, B. “Role of ornithine as a proline precursor in healing wounds”. J. Surg. Res. 1993,55, 97-102.)
Dado o papel de arginase em vários etados patológicos, a presente invenção fornece compostos que contêm boro como inibidores de atividade de arginase, bem como metodologias para uso dos compostos da invenção como terápicos. Sumário da invenção
A presente invenção fornece certos compostos que contêm boro que são inibidores de atividade de arginase. A invenção também fornece métodos para uso dos compostos da invenção em tratamento. Em uma modalidade, portanto, os compostos da invenção e suas formulações farmaceuticamente aceitáveis são fornecidos como agentes terapêuticos capazes de inibir a atividade de arginase. Compostos e formulações farmacêuticas de acordo com essa invenção são úteis para o tratamento de inúmeras doenças e condições, incluindo, sem limitação, hipertensão pulmonar, disfunção erétil (ED), hipertensão, aterosclerose, doença renal, asma, disfunção de célula T, lesão de reperfusão por isquemia, doenças neurodegenerativas, cicatrização de ferimentos, e doenças fibróticas.
Em uma modalidade, a invenção fornece i, composto que é selecionado da seguinte tabela:
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A invenção também engloba sais, estereoisômeros, tautômeros e pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis de tais compostos.
Em outra modalidade a invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende um composto que é selecionado da tabela acima ou sais, estereoisômeros, tautômeros ou um pró-fármaco farmaceuticamente aceitável do composto da invenção e um carreador farmaceuticamente aceitável.
Os compostos de acordo com a presente invenção e suas formulações farmacêuticas são úteis para o tratamento de inúmeros distúrbios, que incluem sem limitação, distúrbios cardiovasculares, distúrbios sexuais, distúrbios de cicatrização de ferimentos, distúrbios gastrointestinais, distúrbios autoimunes, distúrbios imunes, infecções, distúrbios pulmonares, distúrbios fibróticos e distúrbios hemolíticos.
Exemplos de distúrbios cardiovasculares são doenças e condições que são selecionadas do grupo que consiste em hipertensão arterial pulmonar (PAH), hipertensão arterial pulmonar em alta altitude, lesão de reperfusão por isquemia e aterosclerose.
Quando a doença ou condição é um distúrbio pulmonar, exemplos de doenças incluem fibrose pulmonar quimicamente induzida, fibrose pulmonar idiopática, fibrose cística, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), e asma.
Os compostos de acordo com a presente invenção são também úteis no tratamento de distúrbios autoimunes selecionados do grupo que consiste em encefalomielite, esclerose múltipla, síndrome anti-fosfolipídeo 1, anemia hemolítica autoimune, polirradiculoneuropatia desmielinizante inflamatória crônica, dermatite herpetiforme, dermatomiosite, miastenia grave, pênfigo, artrite reumatóide, síndrome de pessoa rígida, diabetes tipo 1, espondilite anquilosante, hemoglobinúria noturna paroxística (PNH), hemoglobinúria fria paroxística, anemia hemolítica idiopática severa, e síndrome de Goodpasture.
Outras doenças ou condições imunes que podem ser tratadas com o uso de um composto da invenção incluem, sem limitação, disfunção de célula T mediada por célula supressora mielóide-derivada (MDSC), vírus da imunodeficiência humana (HIV), encefalomielite autoimune, reação à transfusão com descombinação de ABO, doença de célula falciforme, talassemias, esferocitose hereditária, estomatocitose, anemias hemolíticas microangiopáticas, deficiência de piruvato quinase, anemia induzida por infecção, bypass cardiopulmonar e anemia induzida por válcula cardíaca mecânica, e anemia induzida quimicamente.
Exemplos de distúrbios gastrointestinais que podem ser tratados com o uso dos compostos da invenção incluem sem limitação, distúrbios de motilidade gastrointestinal, cânceres gástricos, doença intestinal inflamatória, doença de Crohn, colite ulcerativa, e úlceras gástricas.
Os compostos da invenção são também úteis para proteger órgãos de lesão por reperfusão de isquemia (IR) depois de transplante de órgão. Por exemplo, os compostos de acordo com a presente invenção podem ser usados para prevenir IR hepática, IR renal, e IR miocárdica.
Em uma modalidade, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um composto selecionado da tabela acima, e um carreador farmaceuticamente aceitável.
A invenção também fornece em uma modalidade um método para a inibição de arginase I, arginase II, ou uma combinação destas em uma célula que compreende o contato da célula com pelo menos um composto selecionado da tabela acima. De acordo com outra modalidade, a invenção fornece um método para tratamento ou prevenção de uma doença ou uma condição associada a expressão ou atividade de arginase I, arginase II, ou uma combinação destas em um indivíduo, que compreende a administração ao indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de pelo menos um composto selecionado da tabela acima.
Descrição detalhada
Os compostos como aqui descritos são inibidores de molécula pequena de atividade de arginase I ou atividade de arginase II. como estará aparente a partir da descrição abaixo, os compostos da invenção e suas composições farmacêuticas são úteis no tratamento ou prevenção de doenças ou condições que são associadas com a expressão ou atividade de arginase.
Definições
Os compostos da invenção pdoem existir em várias formas isoméricas, incluindo isômeros configuracionais, geométricos e conformacionais, que incluem, por exemplo, conformações cis- ou trans. Os compostos da presente invenção também podem existir em uma ou mais formas tautoméricas, que incluem tautômeros simples e misturas de tautômeros. O termo “isômero” é destinado a englobar todas as formas isoméricas de um composto dessa invenção, incluindo formas tautoméricas do composto.
Alguns compostos aqui descritos podem ter centros assimétricos e podem existir, portanto, em diferentes formas enantioméricas e diastereoméricas. Um composto da invenção pode estar na forma de um isômero ótico ou um diastereômero. Portanto, a invenção engloba compostos da invenção e seus usos como aqui descrito na forma de seus isômeros óticos, diaestereoisômeros e misturas desses, incluindo uma mistura racêmica. Os isômeros óticos dos compostos da invenção podem ser obtidos por técnicas conhecidas como síntese assimétrica, cromatografia quiral, tecnologia de leito móvel simulado ou via separação química de estereoisômeros através do emprego de agentes de resolução oticamente ativos.
A menos que indicado em contrário, “estereoisômero” significa um estereoisômero de um composto que é substancialmente livre de outros estereoisômeros daquele composto. Portanto, um composto estereomericamente puro que possui um centro quiral será substancialmente livre do enantiômero oposto do composto. Um compost estereomericamente puro que possui dois centros quirais será substancialmente livre de outros diastereômeros do composto. Um composto estereomericamente puro típico compreende mais que cerca de 80% por peso de um estereoisômero do composto e menos que cerca de 20% por peso dos outros estereoisômeros do composto, por exemplo, mais que cerca de 90% por peso de um estereoisômero do composto e menos que cerca de 10% por peso dos outros estereoisômeros do composto, ou mais que cerca de 95% por peso de um estereoisômero do composto e menos que cerca de 5% por peso dos outros estereoisômeros do composto, ou mais que cerca de 97% por peso de um estereoisômero do compost e menos que cerca de 3% por peso dos outros estereoisômeros do composto.
Se houver uma discrepância entre uma estrutura mostrada e nome dado àquela estrutura, então a estrutura mostrada controla. Adicionalmente, se a estereoquímica de uma estrutura ou uma porção de uma estrutura não é indicada, por exemplo, com linhas em negrito ou tracejadas, a estrutura ou porção da estrutura deve ser interpretada como englobando todos os estereoisômeros dela. Em alguns casos, no entanto, quando existe mais de um centro quiral, as estruturas e nomes podem ser representados como enantiômeros únicos para ajudar a descrever a estereoquímica relativa. Aqueles habilitados na técnica de síntese orgânica saberão se os compostos são preparados como enantiômeros únicos a partir dos métodos usados para prepara-los.
Um “sal farmaceuticamente aceitável” é um sal de base ou ácido orgânico ou inorgânico farmaceuticamente aceitável, de um composto da invenção. Sais farmaceuticamente aceitáveis representativos incluem, por exemplo, sais de metal alcalino, sais de metal alcalino terroso, sais de amônio, sais solúveis em água e insolúveis em água, como acetato, amsonato (4,4-diaminostilbene-2,2 - dissulfonato), benzenossulfonato, benzonato, bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, brometo, butirato, cálcio, cálcio edetato, cansilato, carbonato, cloreto, citrato, clavulariato, dicloridrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexafluorfosfato, hexilresorcinato, hidrabamina, hidrobrometo, cloridrato, hidroxinaftoato, iodeto, isotionato, lactato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilbrometo, metilnitrato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, sal de N- metilglucamina amônio, 3-hidroxi-2-naftoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato (1,1-metene-bis-2-hidroxi-3- naftoato, einbonato), pantotenato, fosfato/difosfato, picrato, poligalacturonato, propionato, p- toluenossulfonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, sulfato, sulfosalicilato, suramato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato, trietiodeto, e valerato. Um sal farmaceuticamente aceitável pode ter mais de um átomos carregado em sua estrutura. Nesse caso o sal farmaceuticamente aceitável pode ter múltiplos contra-íons. Portanto, um sal farmaceuticamente aceitável pode ter um ou mais átomos carregados e/ou um ou mais contra-íons.
Os termos “tratar”, “tratando” e “tratamento” se referem à melhoria ou erradicação de uma doença ou sintomas associados com uma doença. Em certas modalidades, tais termos se referem à minimização da disseminação ou agravamento da doença que resulta da administração de um ou mais agentes profiláticos ou terapêuticos a um paciente com tal doença.
Os termos “prevenir”, “prevenção” e “evitar” se referem à prevenção do surgimento, recorrência, ou disseminação da doença em um paciente que resulta da administração de um agente profilático ou terapêutico.
O termo “quantidade eficaz” se refere a uma quantidade de um composto da invenção, ou outro ingrediente ativo suficiente para fornecer um benefício terapêutico ou profilático no tratamento ou prevenção de uma doença ou para retardar ou minimizar os sintomas associados com uma doença. Além disso, uma quantidade terapeuticamente eficaz com relação a um composto da invenção significa que a quantidade de agente terapêutico isoladamente, ou em combinação com outras terapias, que fornece um benefício terapêutico no tratamento ou prevenção de uma doença. Usado em conexão com um composto da invenção, o termo pode englobar uma quantidade que melhora a terapia geral, reduz ou evita sintomas ou causas de doença, ou melhora a eficácia terapêutica ou sinergias com outro agente terapêutico.
Os termos “modular”, “modulação” e outros se referem à capacidade de um composto da invenção de aumentar ou diminuir a função, ou atividade, por exemplo, de Arginase I ou Arginase II. “Modulação”, em suas várias formas, deve englobar inibição, antagonismo, antagonismo parcial, ativação, agonismo e/ou agonismo parcial da atividade associada com arginase. Os inibidores de arginase são compostos que, por exemplo, se ligam, bloqueiam a estimulação parcialmente ou totalmente, diminuem, previnem, retardam a ativação, inativam, dessensibilizam, ou infra- regulam a transdução de sinal. A capacidade de um composto de modular a atividade de arginase pode ser demonstrada em um ensaio enzimático ou um ensaio à base de célula.
Um “paciente” inclui um animal, como um a humano, vaca, cavalo, carneiro, cordeiro, porco, galinha, peru, codorna, gato, cão, camundongo, rato, coelho ou porquinho da Índia. O animal pode ser um mamífero com um não primata e um primata (por exemplo, macaco e humano). Em uma modalidade, um paciente é um humano, como um bebê humano, criança, adolescente ou adulto.
O termo “pró-fármaco” se refere a um precursor de um fármaco que é um composto que após administração a um paciente, deve sofrer conversão química por processos metabólicos antes de se tornar um agente farmacológico ativo. Exemplos de pró-fármacos de compostos de acordo com a presente invenção são ésteres, pinenos, dioxaborolanos, e amidas.
Compostos da invenção
A presente invenção fornece terápicos de molécula pequena que são potentes inibidores das atividades de arginase I e II. Exemplos de compostos de acordo com a presente invenção são mostrados na Tabela 1 abaixo. Embora alguns compostos de exemplo sejam mostrados com estereoquímica, deve-se entender que a invenção inclui todos os possíveis estereoisômeros, como diastereômeros dos compostos. Tabela 1
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Composições farmacêuticas e dosagens
A presente invenção é direcionada em parte a formulações farmacêuticas dos compostos da invenção e ao uso das formulações da invenção para tratar condições de doença associadas com um desequilíbrio de atividade de arginase ou a função inadequada das enzimas arginase. Portanto, em uma modalidade a invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende um composto selecionado da Tabela 2 ou um sal, solvato, estereoisômero, tautômero ou pró-fármaco desses, e um carreador farmaceuticamente aceitável. Tabela 2
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Em um aspecto, a presente invenção fornece terapia combinada em que um paciente ou indivíduo em necessidade de terapia é administrado com uma formulação do composto da invenção em combinação com um ou mais compostos que possuem atividades biológicas similares ou diferentes.
De acordo com um aspecto da rotina de terapia combinada, uma dose terapeuticamente eficaz do composto da invenção pode ser administrada separadamente a um paciente ou indivíduo em necessidade dessa a partir de uma dose terapeuticamente eficaz do fármaco combinado. A pessoa habilitada na técnica reconhecerá que as duas doses podem ser administradas com intervalos de horas ou dias ou as duas doses podem ser administradas juntas.
Exemplos de condições de doença para as quais a terapia combinada de acordo com a presente invenção pode sere administrada incluem qualquer uma das condições mais especificamente descritas a seguir. Essas incluem, sem limitação, doença cardíaca, hipertensão, distúrbios sexuais, distúrbios gástricos, distúrbios autoimunes, infecções parasíticas, distúrbios pulmonares, distúrbios de relaxamento de músculo liso e distúrbios hemolíticos. Mais especificamente, uma formulação farmaceuticamente aceitável de um composto de acordo com a presente invenção pode ser administrada independentemente ou em combinação com um ou mais compostos para tratar as seguintes condições de doença: disfunção erétil, hipertensão pulmonar, hipertensão, asma, inflamação, lesão de reperfusão por isquemia, infarto do miocárdio, aterosclerose, resposta imune, psoríase e cicatrização de ferimentos.
Os compostos adequados que podem ser usados em combinação com um composto de acordo com a presente invenção incluem, sem limitação: Disfunção eréti: sildenafil, vardenafil, tadalafil e alprostadil.
Hipertensão pulmonar/Hipertensão: epoprostenol, iloprost, bosentan, amlodipina, diltiazem, nifedipina, ambrisentan e warfarina.
Asma: fluticasona, budesonida, mometasona, flunisolida, beclometasona, montelukast, zafirlukast, zileuton, salmeterol, formoterol, teofilina, albuterol, levalbuterol, pirbuterol, ipratropium, prednisona, metilprednisolona, omalizumab, corticosteróide e cromolin.
Aterosclerose: atorvastatina, lovastatina, simvastatina, pravastatina, fluvastatina, rosuvastatina, gemfibrozil, fenofibrato, ácido nicotínico, clopidogrel.
A invenção também fornece uma composição farmacêutica que compreende um ou mais compostos selecionados da Tabela 2 ou sais, estereoisômeros, tautômeros, ou pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis, em mistura com um carreador farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, a composição também contém, de acordo com práticas aceitas de composição farmacêutica, um ou mais agentes terapêuticos adicionais, excipientes farmaceuticamente aceitáveis, diluentes, adjuvantes, estabilizantes, emulsificantes, conservantes, colorantes, tampões, ou agentes flavorizantes.
Os compostos de acordo com a presente invenção podem ser formulados para administração oral, administração parenteral, inalação, para administração como um spray ou como um supositório adequado para uso retal. No contexto da presente invenção, o termo parenteral se refere a injeções subcutâneas, injeção intravenosa, injeção intramuscular, injeção intra-esternal ou técnicas de infusão.
Composições orais adequadas de acordo com a invenção incluem, sem limitação, comprimidos, pastilhas, losangos, suspensões aquosas ou oleosas, pós dispersíveis ou grânulos, emulsão, cápsulas duras ou macias, xaropes ou elixires.
São englobadas no escopo da invenção composições farmacêuticas adequadas para dosagens unitárias únicas que compreendem um composto da invenção, seus estereoisômeros, pró-fármacos, sais, solvatos, hidratos, ou tautômeros farmaceuticamente aceitáveis e um carreador farmaceuticamente aceitável.
As composições da invenção adequadas para uso oral podem ser preparadas de acordo com qualquer método conhecidos na técnica para a fabricação de composições farmacêuticas. Por exemplo, formulações líquidas dos compostos da invenção podem conter um ou mais agentes selecionados do grupo que consiste em agentes adoçantes, agentes flavorizantes, agentes colorantes e agentes conservantes para fornecer preparações farmaceuticamente palatáveis do inibidor de arginase.
Para composições em comprimido dos compostos da invenção, o ingrediente ativo em mistura com excipientes farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos é usado para a fabricação de comprimidos. Exemplos de tais excipientes incluem, sem limitação, diluentes inertes, como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegração, por exemplo, amido de milho, ou ácido algínico; agentes de ligação, por exemplo, amido, gelatina ou acácia, e agentes lubrificantes, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos podem ser não revestidos ou eles podem ser revestidos por técnicas conhecidas de revestimento para retardar a desintegração e absorção no trato gastrointestinal e assim fornecer uma ação terapêutica sustentada por um período de tempo desejado. Por exemplo, um material de retardo de tempo como gliceril monostearato ou gliceril distearato pode ser empregado.
As formulações para uso oral também podem ser apresentadas como cápsulas de gelatina dura em que o ingrediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caolin, ou como cápsulas de gelatina macia em que o ingrediente ativo é misturado com água ou um meio oleoso, por exemplo, óleo de amendoim, parafina líquida ou óleo de oliva.
Para suspensões aquosas o composto da invenção é misturado com excipientes adequados para a manutenção de uma suspensão estável. Exemplos de tais excipientes incluem, sem limitação, carboximetilcelulose sódica, metilcelulose, hidropropilmetilcelulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto e goma acácia.
As suspensões orais também podem conter agentes de dispersão ou umectantes, como fosfatida de ocorrência natural, por exemplo, lecitina, ou produtos da condensação de um óxido de alquileno com ácidos graxos, por exemplo, estearato de polioxietileno, ou produtos da condensação de óxido de etileno com álcoois alifáticos de cadeia longa, por exemplo, heptadecaetilenooxicetanol, ou produtos da condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos graxos e um hexitol como polioxietileno monooleato de sorbitol, ou produtos da condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexitol, por exemplo, polietileno sorbitano monooleato. As suspensões aquosas também podem conter um ou mais conservantes, por exemplo, etil ou n-propil p- hidroxibenzoato, um ou mais agentes colorantes, um ou mais agentes flavorizantes, e um ou mais agentes adoçantes, como sacarose ou sacarina.
Suspensões oleosas podem ser formuladas por suspensão dos ingredientes ativos em um óleo vegetal, por exemplo, óleo de arachis, óleo de oliva, óleo de gergelim ou óleo de coco, ou em um óleo mineral como parafina líquida. As suspensões oleosas podem conter um agente espessante, por exemplo, cerca de abelha, parafina dura ou cetil álcool.
Agentes adoçantes como aqueles apresentados acima, e agentes flavorizantes podem ser adicionados para fornecer preparações orais palatáveis. Essas composições podem ser conservadas pela adição de um antioxidante como ácido ascórbico.
Pós dispersíveis e grânulos adequados para a preparação de uma suspensão aquosa pela adição de água pode fornecer o ingrediente ativo em mistura com um agente de dispersão ou umectante, agente de suspensão e um ou mais conservantes. Agentes de dispersão ou umectantes adequados e agentes de suspensão são exemplificados por aqueles já mencionados acima. Excipientes adicionais, por exemplo, agentes adoçantes, flavorizantes e colorantes, também podem ser presentes.
Composições farmacêuticas da invenção também podem estar na forma de emulsões óleo-em-água. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, por exemplo, óleo de oliva ou óleo de arachis, ou um óleo mineral, por exemplo, parafina líquida ou misturas desses. Agentes emulsificantes adequados podem ser gomas de ocorrência natural, por exemplo, goma acácia ou goma tragacanto, fosfatidas de ocorrência natural, por exemplo, soja, lecitina, e ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexitol, por exemplo, monooleato de sorbitano e produtos da condensação dos referidos ésteres parciais com óxido de etileno, por exemplo, polioxietileno monooleato de sorbitano. As emulsões também podem conter agentes adoçantes e agentes flavorizantes.
Xaropes e elixires podem ser formulados com agentes adoçantes, por exemplo, glicerol, propileno glicol, sorbitol ou sacarose. Tais formulações também podem conter um demulcente, um conservante, e agentes flavorizantes e colorantes. As composições farmacêuticas podem estar na forma de um injetável estéril, uma suspensão aquosa ou uma suspensão oleaginosa. Essa suspensão pode ser formulada de acordo com a técnica conhecida com o uso daqueles agentes de dispersão ou umectantes adequados e agentes de suspensão que foram acima mencionados. A preparação injetável estéril também pode ser solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente não tóxico, parentalmente aceitável, por exemplo, como uma solução em 1,3-butanodiol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão água, solução de Ringer e solução isotônica de cloreto de sódio. Além disso, óleos estéreis fixados são convencionalmente empregados como um solvente ou meio de suspensão. Para este objetivo qualquer óleo fixado pode ser empregado incluindo, mono- ou diglicerídeos sintéticos. Em adição, ácidos graxos como ácido oléico têm uso na preparação de injetáveis.
Os compostos de acordo com a presente invenção também podem ser administrados na forma de supositórios para administração retal do fármaco. Essas composições podem ser preparadas por mistura do fármaco com um excipiente não irritante adequado que é sólido em temperaturas comuns mas líquido na temperatura retal e derreterá no reto para liberar o fármaco. Exemplos de tais materiais são manteiga de cacau e polietileno glicóis.
As composições para administrações parenterais são administradas em um meio estéril. Dependendo do veículo usado e da concentração do fármaco na formulação, a formulação parenteral pode ser uma suspensão ou uma solução que contém fármaco dissolvido. Adjuvantes como anestésicos locais, conservantes e agentes de tamponamento também podem ser adicionados a composições parenterais.
Síntese de compostos
Os compostos de acordo com a presente invenção podem ser sintetizados com o uso de várias metodologias sintéticas. A escoha de uma metodologia sintética adequada é guiada pelo composto da invenção desejado e pela natureza de grupos funcionais presentes nos produtos intermediários e finais. Portanto, protocolos de proteção/desproteção seletiva podem ser necessários durante a síntese dependendo dos grupos funcionais específicos desejados e grupos de proteção sendo usados. Uma descrição de tais grupos de proteção e de como introduzir e remover esses grupos é encontrada em: “Protective Groups in Organic Synthesis”,terceira edição, T. W. Green and P. G. M. Wuts, John Wiley and Sons, New York, 1999. Ilustrações das metodologias sintéticas gerais usadas para produzir os compostos da invenção são apresentadas abaixo.
De acordo com uma modalidade, certos compostos da invenção podem ser convenientemente preparados com o uso de um éster de glicina benzofenona imina como ilustrado no Esquema A abaixo. Nesse método, o aminoácido de partida imina A-1 pode ser adquirido ou preparado por reação de benzofenona imina com o éster de aminoácido desejado (O'Donnell, M. J., Aldrichimica Acta, 2001, 34, 3-15). A alquilação de A-1 no Esquema A com eletrófilo A-2 com o uso de condições típicas de alquilação como lítio bis(trimetilsilil)amida, LDA ou hidreto de sódio em um solvente aprótico polar como THF fornece o produto monoalquilado A-3. Condições de reação similares podem ser usadas para introduzir o segundo substituinte para fornecer intermediário A-4. Hidrólise subseqüente fornece o composto alvo A-5 (Esquema A).
Em alguns casos, pode ser preferível ou necessário produzir um ou ambos os substituintes de aminoácido em um processo de múltiplas etapas. Um exemplo disso é fornecido no Esquema A em que alil brometo é usado na segunda etapa de alquilação gerando o intermediário A-6 sob condições de alquilação descritas acima. Após a remoção da benzofenona e subseqüente proteção da amina, a olefina terminal é oxidada para gerar intermediário de aldeído A-8.
O grupo aldeído altamente versátil pode ser utilizado para preparar uma ampla variedade de compostos alvo. Um uso conveniente é nas reações de aminação redutora como mostrado no Esquema A. Aqui, tratamento com a amina desejada e um agente redutor como cianoborohidreto de sódio gera intermediário de amina A-9, que após hidrólise, fornece os compostos que correspondem estruturalmente ao composto A-10. Dependendo do grupo funcional específico desejado, certos grupos de proteção podem ser necessários.Esquema A
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Alternativamente, no caso em quie um eletrófilo de ácido boronico protegido não ser disponível ou ser incompatível com o protocolo sintético, os compostos de acordo com a presente invenção podem ser sintetizados por substituição do eletrófilo A-2 com uma olefina terminal seguido pela introdução de boro em uma etapa posterior após alquilação usado química de hidroboração.
Para síntese enantio-seletiva, várias abordagens sintéticas diferentes podem ser usadas. Portanto, em uma modalidade uma cetona oticamente pura é usada no lugar da benzofenona aquiral. Veja, por exemplo, Tabcheh, e cols. Tetrahedron 1991, 47, 4.611-4.618 e Belokon e cols. Angew Chem, Int Ed 2001, 40, 1.948-1.951.
Alternativamente, indução assimétrica pode ser atingida na segunda reação de alquilação pelo uso de um catalisador quiral. Veja, por exemplo, Ooi, e cols. Tet Lett. 2004, 45, 1.675-1.678; Ohshima e cols. J. Am. Chem. Soc. 2009, 125, 11.206-11.207; e , Belokon e cols.Tetrahedron 2001, 57, 2.491-2.498.
Ainda em outra modalidade, a enantio-seletividade pode ser introduzida pelo uso de uma oxazinona oticamente pura. Veja, Dastlik, K. A.; Sundermeier, U., Johns, D. M.; Chen, Y.; Williams, R. M. Synlett 2005, 4, 693-696. Essa abordagem é ilustrada no Esquema B. Esquema B
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Aqui, a oxazinona oticamente ativa B-4 é usada para alquilações seqüenciais diretas estereo-seletivas para formar intermediário B-7. Essas alquilações podem ser realizadas sob condições de reação que são específicas para o eletrófilo sendo usado (por exemplo, B-2, B-3 e B-6). Abordagens alternativas para a síntese de B-5 e B-7 incluem a reação de aldol que envolve a ligação de um aldeído com a oxazinona seguido por redução da ligação dupla resultante. Os compostos da invenção são obtidos por decomposição da oxazinona dissubstituída seguido por remoção dos grupos de proteção. Portanto, a clivagem do heterociclo da oxazinona via hidrogenação ou uso de uma redução de metal alcalino/amônia seguido por tratamento de intermediário B-8 com ácido aquoso fornece o aminoácido B-9 dissubstituído alvo.
Se um ácido butanoborônico é desejado como um dos substituintes no produto final, o eletrófilo B-2 ou B-3 pode ser usado como um agente de alquilação. B-2 pode ser facilmente preparados a partir de B-1 por tratamento com pinacol em THF. Se intermediário de iodo B-3 é desejado, ele pode ser preparado a partir do brometo correspondente via tratamento com iodeto de sódio em acetona.
Alternativamente, um ou ambos os substituintes podem ser modificados após a etapa de alquilação. Isso pdoe ser necessário quando a funcionalidade desejada no produto final não é compatível com as condições da reação de alquilação ou se o substituinte desejado não é convenientemente introduzidos como um eletrófilo devido a reatividade limitada. Um exemplo é ilustrado no Esquema C, em que alil iodeto é usado como um eficiente agente de alquilação então também modificado após clivagem do sistema de anel de oxazinona. Neste exemplo, o intermediário de alil C-1 é tratado com lítio em amônia para remover o anel de oxazinona. O ácido resultante pode ser protegido como éster C-3 e subseqüentemente tratado com ozônio e para gerar o aldeído correspondente.
O aldeído (C-4) é um grupo funcional versátil e pode ser usado em qualquer tipo de reações para confeccionar uma ampla variedade de diferentes análogos. Como um exemplo, ele pode ser usado em reações de aminação redutora para preparar os compostos com substituintes de amina R1 e R2 como no intermediário C-5. Os compostos alvo finais (C-6) podem ser obtidos depois de desproteção de porções éster, amino e ácido borônico.Esquema C
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Em outra modalidade, a síntese de alguns compostos emprega a reação de Ugi (Doemling, A., Chem. Rev. 2006, 106, 17-89), como ilustrado abaixo no Esquema D. Na reação de Ugi uma cetona ou aldeído (D-3) é tratado com um isocianato como terc-butil isocianato e uma fonte de amina como acetato de amônio para produzir diretamente o derivado de aminoácido com o ácido carboxílico e amina protegida como uma terc-butilamida e acetamida respectivamente. Nessa reação diferentes isocianatos e fontes de amina podem ser usados dependendo dos grupos de proteção de amina e ácido carboxílico desejados. Se produtos oticamente ativos são desejado, isocianatos quirais oticamente puros e/ou fontes de amina podem ser usados. As reações que usam esses reagentes podem ser enantio-seletivas, ou pelo menos fornecer misturas diastereoméricas de produtos que podem ser facilmente separados. Esquema D
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A síntese de intermediário chave D-3 pode ser completada com o uso de uma ampla variedade de métodos. Um método muito conveniente utiliza ácido carboxílico D-1. Nesse método o ácido carboxílico é ativado ted e ligado com metoximetilamina para formar amida de Weinreb D-2. Isso pode ser completado com o uso de uma ampla variedade de regentes de ligação como EDC, DCC ou PyBOP, ou diretamente a partir do cloreto ácido de D-1. A amida de Weinreb pode ser convertida à cetona desejada por reação dela com o reagente de Grignard adequado para gerar o intermediário D- 3.
Após a reação de Ugi estar completa, a olefina terminal pode ser tratada com uma fonte de borano como pinacolborano para introduzir a porção de ácido borônico. A desproteção final do intermediário D-5 gera o composto alvo D-6.
Aqueles que possuem hjabilidade na técnica reconhecerão que os materiais de partida e condições de reação podem variar, a seqüência das reações pode ser alterada e etapas adicionais empregadas para produzir os compostos englobados pela presente invenção, como demonstrado pelos exemplos a seguir. Em alguns casos, a proteção de certas funcionalidades reativas pode ser necessária para atingir algumas das transformações acima. Em geral, a necessidade por tais grupos de proteção bem como as condições necessárias para anexar e remover tais grupos serão aparentes para aqueles habilitados na técnica de síntese orgânica.
Os compostos ilustrados na Tabela 2 acima foram sintetizados com o uso de metodologias também descritas pelos exemplos a seguir, que não são interpretados como limitantes da invenção em escopo ou espirito aos procedimentos específicos e compostos descritos neles.
Exemplos de compostos Exemplo 1: Preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2-(1s,3R)-3-(3- fenilpropilamino)ciclobutil)hexanóico
O composto do título foi preparado com o uso do seguinte protocolo sintético de múltiplas etapas.
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Etapa 1: terc-butil 3-(metoxi(metil)carbamoil)ciclobutil carbamato ácido (1s,3s)-3-(terc-butoxicarbonilamino) ciclobutanocarboxílico (5,0 g, 23,2 mmol) foi dissolvido em diclorometano (77 ml), resfriado a 0°C, e tratado com N,O- dimetilhidroxilamina cloridrato (2,95 g, 30,2 mmol) e N- metilmorfolina (3,32 ml, 30,2 mmol). A mistura foi agitada por 15 minutos, então EDCI (5,79 g, 30,2 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada por 18 horas em temperatura ambiente. A reação foi resfriada a 0°C e extinta com 1 N HCl (10 ml), então diluída com acetato de etila, lavada sucessivamente com bicarbonato de sódio saturado aquoso, cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre MgSO4, e concentrada in vacuo. O resíduo foi cromatografado em sílica gel eluindo com 3-40% acetato de etila em heptano para gerar o produto desejado (4,34 g, 75%). Rf 0,43 (50% acetato de etila em heptano). 1H RMN (CDC13, 300 MHz) δ 4,80 (br s, 1 H), 4,22 - 4, 04 (m, 1 H), 3,66 (s, 3 H), 3,18 (s, 3 H), 3,17 - 3,06 (m, 1 H), 2,612,48 (m, 2 H), 2,16 - 2,03 (m, 2 H), 1,43 (s, 9 H). ESI MS encontrado para C12H22N2O4 m/z [259,0 (M+1)].
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Etapa 2. terc-butil 3-pent-4-enoilciclobutilcarbamato terc-Buti1 (1s,3s)-3-(metoxi(meti1)carbamoi1) cic1obuti1carbamato (4,34 g, 16,8 mmo1) foi disso1vido em THF (46 m1), resfriado a 0°C e tratado em gotas com brometo de 3- buteni1magnésio (8,4 m1, 0,5 M/THF, 42 mmo1). Depois de agitação por 2 h em temperatura ambiente, a reação foi novamente resfriada a 0°C, extinta com 1 N ácido cítrico (10 m1), di1uída com acetato de eti1a, 1avada com uma so1ução a 5% de bicarbonato de sódio, c1oreto de sódio saturado aquoso, seca sobre MgSO4, e concentrada in vacuo. O resíduo foi cromatografado em sí1ica ge1 e1uindo com 340% acetato de eti1a em heptano para gerar o produto desejado (3,60 g, 85%). Rf 0,69 (50% acetato de eti1a em heptano). 1H RMN (CDC13, 300 MHz) δ 5,85 - 5,70 (m, 1 H), 5,06 - 4,95 (m, 2 H), 4,74 - 4,66 (m, 1 H), 4,19 - 4,06 (m, 1 H), 2,97 - 2,85 (m, 1 H), 2,59 - 2,43 (m, 4 H), 2,35 - 2,25 (m, 2 H), 2,06 - 1,93 (m, 2 H), 1,43 (s, 9 H). ESI MS encontrado para C14H23NO3 m/z [254,1 (M+1)].
Figure img0026
Etapa 3: terc-butil (1R,3s)-3-((S)-2-acetamido-1-(terc- butilamino)-1-oxohex-5-en-2-il)ciclobutilcarbamato terc-Butil (1s,3s)-3-pent-4-enoilciclobutilcarbamato (2,0 g, 7,9 mmol) foi dissolvido em um volume mínimo de 2,2,2-trifluoretanol. Acetato de amônio (2,43 g, 31,6 mmol) e terc-butil isocianeto (1,78 ml, 15,8 mmol) foram adicionados e a reação foi agitada 4 dias em temperatura ambiente. A reação foi diluída com acetato de etila, lavada sucessivamente com água, cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre MgSO4, e concentrada in vacuo. O resíduo foi cromatografado em sílica gel eluindo com 12-100% acetato de etila em heptano para gerar o produto desejado (2,13 g, 68%) junto com uma pequena quantidade de material de partida que não reagiu. Rf 0,29 (50% acetato de etila em heptano). 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 5, 83 - 5, 68 (m, 1 H), 5,02 - 4,89 (m, 2 H), 4,82 - 4,73 (m, 1 H), 3,73 - 3,59 (m, 1 H), 2,77 - 2,51 (m, 2 H), 2,36 - 2,17 (m, 3 H), 2,10 (s, 3 H), 2,01 - 1,81 (m, 2 H), 1,44 (s, 9 H), 1,33 (s, 9 H). ESI MS encontrado para C21H37N3O4 m/z [396,0 (M+1)].
Figure img0027
Etapa 4: terc-butil (1R,3s)-3-((S)-2-acetamido-1-(terc- butilamino)-1-oxo-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan- 2-il)hexan-2-il)ciclobutilcarbamato terc-Butil (1S ,3s)-3-((R)-2-acetamido-1-(terc- butilamino)-1-oxohex-5-en-2-il)ciclobutilcarbamato (2,13 g, 5,4 mmol) foi dissolvido em diclorometano (30 ml) e tratado com [Ir(COD)Cl]2 (109 mg, 0,162 mmol) e dppe (126 mg, 0,324 mmol). A reação foi agitada 15 minutos, resfriada a 0°C e tratada com pinacolborano (1,17 ml, 8,08 mmol). Depois de agitação de um dia para o outro em temperatura ambiente reação foi diluída com acetato de etila, lavada com cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre MgSO4, e concentrada in vacuo. O resíduo foi cromatografado em sílica gel eluindo com 15-100% acetato de etila em heptano para gerar o produto desejado (2,32 g, 82%). Rf 0,22 (50% acetato de etila em heptano). 1H RMN (CDCI3, 300 MHz) δ 4,78 - 4,71 (m, 1 H), 3,74 - 3,58 (m, 1 H), 2,65 - 2,41 (m, 2 H), 2,36 - 2,13 (m, 3 H), 2,09 (s, 3 H), 1,54 - 1,03 (m, 38 H), 0,73 (t, J = 9,0 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C27H50BN3O6 m/z
Figure img0028
Etapa 5: (S)-2-acetamido-2-((1s,3R)-3-aminociclobutil)-N- terc-butil-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)hexanamida terc-Butil (1S,3s)-3-((R)-2-acetamido-1-(terc- butilamino)-1-oxo-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan- 2-il)hexan-2-il)ciclobutilcarbamato (1,16 g, 2,22 mmol) foi dissolvido em diclorometano (7,5 ml) e tratado com 4 N HCl/dioxano. Depois de agitação por 3 horas, a mistura da reação foi concentrada para gerar (S)-2-acetamido-2- ((1s,3R)-3-aminociclobutil)-N-terc-butil-6-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanamida como o sal de cloridrato (1,03 g) que foi usado sem purificação adicional. ESI MS encontrado para C22H42BN3O4 m/z [424,2 (M+1)].
Figure img0029
Etapa 6: (S)-2-acetamido-N-terc-butil-2-((ls,3R)-3-(3- fenilpropilamino)ciclobutil)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)hexanamida Cloridrato de (R)-2-Acetamido-2-((ls,3S)-3- aminociclobutil)-N-terc-butil-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)hexanamida (200 mg, 0,435 mmol) foi suspenso em 1,2-dicloroetano (2 ml) e tratado com 3- fenilpropanal (57 μl, 0,435 mmol). Trietilamina (121 μl, 0,87 mmol) e ácido acético (50 μl, 0,87 mmol) foram adicionados a a mistura foi agitada por 20 minutos, tratada com NaBH(OAc)3 (138 mg, 0,653 mmol) e agitada de um dia para o outro. A reação foi diluída com acetato de etila, lavada sucessivamente com bicarbonato de sódio saturado, cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre MgSO4, e concentrada in vacuo para gerar o produto bruto (189 mg) que foi usado sem purificação adicional. ESI MS encontrado para C31H52BN3O4 m/z [542,2 (M+1)].
Figure img0030
Etapa 7: ácido (S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-(3-fenilpropilamino)ciclobutil) hexanóico (R)-2-Acetamido-N-terc-butil-2-((1s,3S)-3-(3- fenilpropilamino)ciclobutil)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)hexanamida (189 mg) foi tratada com 6 N HCl (3 ml) e aquecida a 100°C de um dia para o outro. A reação foi resfriada até a temperatura ambiente, diluída com H2O, lavada 3 x diclorometano e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparatória (10-100% CH3CN/H2O) para gerar o produto desejado. 1H RMN (D2O, 400 MHz) δ 7,42 - 7,38 (m, 2 H), 7,33 - 7,29 (m, 3 H), 3,66 - 3,61 (m, 1 H), 2,95 (t, J = 8,0 Hz, 2 H), 2,73 (t, J = 7,6 Hz, 2 H), 2,57 - 2,31 (m, 4 H), 2,02 - 1,83 (m, 4 H), 1,69 - 1,60 (m, 1 H), 1,44 - 1,32 (m, 3 H), 1,23 - 1,19 (m, 1 H), 0,80 (t, J= 7,6 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C19H31BN2O4 m/z [363,1 (M+1)]. Exemplo 2: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-(3-(3-cloro-5-fluorfenil)propilamino)ciclobutil) hexanóico
Figure img0031
Ácido 2-Amino-6-borono-2-((ls,3s)-3-(3-(3-cloro-5-fluorfenil)propilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 3-(3-cloro-5-fluorfenil)propanal ter sido usado em vez de 3-fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D2O, 400 MHz) δ 7,16 - 7,10 (m, 2 H), 6,99 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 3,68 - 3,59 (m, 1 H), 2,94 (t, J= 8,0 Hz, 2 H), 2,71 (t, J= 7,6 Hz, 2 H), 2,57 - 2,32 (m, 4 H), 2,02 - 1,84 (m, 4 H), 1,69 - 1,61 (m, 1 H), 1,44 - 1,32 (m, 3 H), 1,23 - 1,19 (m, 1 H), 0,80 (t, J= 7,6 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C19H29BClFN2O4 m/z [415,1 (M+1)]. Exemplo 3: preparação deácido (S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-(3-(3,4-difluorfenil)propilamino) ciclobutil)hexanóico
Figure img0032
Ácido 2-Amino-6-borono-2-((1s,3s)-3-(3,4-difluorfenetilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 2-(3,4- difluorfenil)acetaldeído ter sido usado em vez de 3-fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D2O, 400 MHz) δ 7,30 - 7,20 (m, 2 H), 7,10 - 7,07 (m, 1 H), 3,70 - 3,65 (m, 1 H), 3,23 (t, J= 7,2 Hz, 2 H), 2,99 (t, J= 7,2 Hz, 2 H), 2,57 - 2,36 (m, 4 H), 1,98 - 1,84 (m, 2 H), 1,69 - 1,62 (m, 1 H), 1,45 - 1,32 (m, 3 H), 1,23 - 1,19 (m, 1 H), 0,80 (t, J= 8,0 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C18H27BF2N2O4 m/z [385,1 (M+1)]. Exemplo 4: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-(3-(2,4- diclorofenil)propilamino)ciclobutil)
Figure img0033
Ácido 2-Amino-6-borono-2-((1s,3s)-3-(2,4-diclorofenetilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 2-(2,4- diclorofenil)acetaldeído ter sido usado em vez de 3-fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D2O, 400 MHz) δ 7,57 - 7,32 (m, 3 H), 3,72 - 3,68 (m, 1 H), 3,22 (t, J= 7,6 Hz, 2 H), 3,12 (t, J= 7,4 Hz, 2 H), 2,56 - 2,37 (m, 4 H), 1,99 - 1,84 (m, 2 H), 1,68 - 1,62 (m, 1 H), 1,45 - 1,32 (m, 3 H), 1,23 - 1,19 (m, 1 H), 0,80 (t, J= 7,8 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C18H27BCl2N2O4 m/z [417,2 (M+)]. Exemplo 5: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-(2,3-dihidro-1H-inden-2-ilamino)ciclobutil) Hexanóico
Figure img0034
Ácido 2-Amino-6-borono-2-((1s,3s)-3-(2,3-dihidro-1H- inden-2-ilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 2-indanona ter sido usada em vez de 3-fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D2O, 400 MHz) δ 7,24 (br d, J= 16 Hz, 4 H), 4,71 (s, 4 H), 4,01 - 3,97 (m, 1 H), 3,74 - 3,71 (m, 1 H), 3,37 - 3,28 (m, 2 H), 3,02 - 2,97 (m, 2 H), 2,52 - 2,26 (m, 4 H), 1,94 - 1,91 (m, 1 H), 1,84 - 1,77 (m, 1 H), 1,61 - 1,53 (m, 1 H), 1,36 - 1,20 (m, 3 H), 1,19 - 1,08 (m, 1 H), 0,72 (t, J = 6,8 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C19H29BN2O4 m/z [361,3 (M+1)]. Exemplo 6: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-(4-terc-butilbenzilamino)ciclobutil)hexanóico
Figure img0035
Ácido 2-Amino-6-borono-241s,3s)-3-(4-terc-butilbenzilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 4-terc-butilbenzaldeído ter sido usado em vez de 3- fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D2O, 400 MHz) δ 7,59 (d, J= 7,6 Hz, 2 H), 7,42 (d, J= 7,2 Hz, 2 H), 4,14 (s, 2 H), 3,69 - 3,64 (m, 1 H), 2,59 - 2,37 (m, 4 H), 2,05 - 1,70 (m, 2 H), 1,65 (br t, J= 10.6 Hz, 1 H), 1,49 - 1,38 (m, 3 H), 1,33 (s, 9 H), 1,28 - 1,15 (m, 1 H), 0,79 (t, J= 7,4 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C21H35BN2O4 m/z [391,3 (M+1)]. Exemplo 7: preparação de ácido (S)-2-amino-2-41s,3R)-3- (bifenil-3-ilmetilamino)ciclobutil)-6-boronohexanóico
Figure img0036
Ácido (S)-2-Amino-2-((1s,3R)-3-(bifenil-3- ilmetilamino)ciclobutil)-6-boronohexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por bifenil-3-carbaldeído ter sido usado em vez de 3- fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (CD3OD) δ 7,84 (m, 1 H), 7,74 - 7,65 (m, 3 H), 7,58 - 7,33 (m, 5 H), 4,21 (s, 2 H), 3,84 - 3,69 (m, 1 H), 2,77 - 2,60 (m, 1 H), 2,60 - 2,21 (m, 4 H), 2,05- 1,90 (m, 1 H), 1,88 - 1,73 (m, 1 H), 1,53 - 1,10 (m, 4 H), 0,83 (t, J = 7,1 Hz, 2 H). MS encontrado para C23H31BN2O4 m/z [411(M + 1)]. Exemplo 8: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-((4'-(trifluormetil)bifenil-3-il)metilamino) ciclobutil)hexanóico
Figure img0037
Ácido (S)-2-Amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((4'- (trifluormetil)bifenil-3-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 4'-(trifluormetil)bifenil-3- carbaldeído ter sido usado em vez de 3-fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,85 (s, 4 H), 7,84 - 7,79 (m, 1 H), 7,77 (m, 1 H), 7,62 (t, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,52 (m, 1 H), 4,25 (s, 2 H), 3,80 - 3,68 (m, 1 H), 2,60 - 2,37 (m, 4 H), 2,08 - 1,94 (m, 1 H), 1,94 - 1,79 (m, 1 H), 1,70 - 1,58 (m, 1 H), 1,53 - 1,12 (m, 4 H), 0,78 (t, J = 7,6 Hz, 2 H). MS encontrado para C24H30BF3N2O4 m/z[479(M + 1)]. Exemplo 9: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-((4'-clorobifenil-3-il)metilamino) ciclobutil)hexanóico
Figure img0038
Acido (S)-2-Amino-6-borono-2-((1s,3R)-3((4'- clorobifenil-3-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 4'-clorobifenil-3-carbaldeído ter sido usado em vez de 3-fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,76 (dt, J = 8,0, 1,2 Hz, 1 H), 7,71 (t, J = 1.6 Hz, 1 H), 7,67 (dt, J = 8,4, 2,4 Hz, 2 H), 7,59 (t, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,54 (dt, J = 8,4, 2,4 Hz, 2 H), 7,47 (dm, J = 7,6 Hz, 1 H), 4,23 (s, 2 H), 3,77 - 3,67 (m, 1 H), 2,60 - 2,35 (m, 4 H), 2,09 - 1,94 (m, 1 H), 1,93 - 1,80 (m, 1 H), 1,69 - 1,58 (m, 1 H), 1,45 - 1,13 (m, 4 H), 0,78 (t, J = 7,8 Hz, 2 H). MS encontrado para C23H30BClN2O4 m/z[445(M + 1)]. Exemplo 10: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-((4-fluornaftalen-1-il)metilamino)ciclobutil) hexanóico
Figure img0039
Ácido (S)-2-Amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((4-fluornaftalen-1-il)metilamino) ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 4-flúor-1-naftaldeído ter sido usado em vez de 3-fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 8,26 (d, J = 7,6, 1 H), 8,09 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,82 - 7,51 (m, 2 H), 7,64 (dd, J = 8,0, 5,6 Hz, 2 H), 7,30 (dd, J = 10,4, 8,0 Hz, 1 H), 4,64 (s, 2 H), 3,83 - 3,74 (m, 1 H), 2,61 - 2,35 (m, 4 H), 2,07 - 1,94 (m, 1 H), 1,92 - 1,80 (m, 1 H), 1,68 - 1,57 (m, 1 H), 1,49 - 1,13 (m, 4 H), 0,78 (t, J = 8,0 Hz, 2 H). MS encontrado para C21H28BFN2O4 m/z [403(M + 1)]. Exemplo 11: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-((5-fluornaftalen-1-il)metilamino)ciclobutil) Hexanóico
Figure img0040
Ácido (S)-2-Amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((5- fluornaftalen-1-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 5-flúor-1-naftaldeído ter sido usado em vez de 3-fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 8,28 (d, J = 8,4, 1 H), 7,89 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,73 (dd, J = 7,2, 1,2 Hz, 1 H), 7,70 - 7,63 (m, 2 H), 7,37 (dd, J = 10,8, 7,2 Hz, 1 H), 4,68 (s, 2 H), 3,85 - 3,73 (m, 1 H), 2,63 - 2,36 (m, 4 H), 2,08 - 1,94 (m, 1 H), 1,92 - 1,80 (m, 1 H), 1,70 - 1,57 (m, 1 H), 1,50 - 1,11 (m, 4 H), 0,78 (t, J = 7,6 Hz, 2 H). MS encontrado para C21H28BFN2O4 m/z [403(M + 1)]. Exemplo 12: preparação de ácido (S)-2-amino-2-((1s,3R)-3- (antracen-9-ilmetilamino)ciclobutil)-6-boronohexanóico
Figure img0041
Ácido (S)-2-Amino-2-((1s,3R)-3-(antracen-9- ilmetilamino)ciclobutil)-6-boronohexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por antraceno-9-carbaldeído ter sido usado em vez de 3- fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 8,68 (m, 1 H), 8,23 (d, J = 8,8, 2 H), 8,16 (d, J= 8,8 Hz, 2 H), 7,74 (m, 2 H), 7,63 (m, 2 H), 5,13 (s, 2 H), 3,92 - 3,80 (m, 1 H), 2,62 - 2,25 (m, 4 H), 2,08 - 1,80 (m, 2 H), 1,70 - 1,53 (m, 1 H), 1,52 - 1,11 (m, 4 H), 0,78 (t, J= 8,0 Hz, 2 H). MS encontrado para C25H31BN2O4 m/z [435(M + 1)]. Exemplo 13: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-(2-morfolinobenzilamino)ciclobutil)hexanóico
Figure img0042
Ácido (S)-2-Amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-(2-morfolinobenzilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 2-morfolinobenzaldeído ter sido usado em vez de 3- fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,40 - 7,24 (m, 4 H), 4,47 (s, 2 H), 3,98 - 3,89 (m, 1 H), 3,77 - 3,67 (m, 1 H), 3,67 - 3,56 (m, 1 H), 3,42 - 3,25 (m, 4 H), 3,12 - 3,00 (m, 1 H), 2,64 - 2,34 (m, 4 H), 2,05 - 1,80 (m, 2 H), 1,74 - 1,50 (m, 2 H), 1,50 - 1,14 (m, 4 H), 0,80 (t, J= 8,0 Hz, 2 H). MS encontrado para C21H34BN3O5 m/z [420(M + 1)]. Exemplo 14: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1R,3R)-3-(((S)-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-3- il)metilamino)ciclobutil)hexanóico
Figure img0043
Ácido (S)-2-Amino-6-borono-2-((1R,3R)-3-(((S)-1,2,3,4- tetrahidroisoquinolin-3-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por (S)-terc-butil 3-formil-3,4- dihidroisoquinolina-2(1H)-carboxilato ter sido usado em vez de 3-fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,55 - 7,49 (m, 1 H), 7,41 (d, J= 8,0 Hz, 1 H), 7,28 (dt, J= 1.2, 8,4 Hz, 1 H), 4,26 (s, 2 H), 3,96 - 3,88 (m, 4 H), 3,75 - 3,65 (m, 1 H), 3,03 - 2,97 (m, 4 H), 2,57 - 2,38 (m, 4 H), 2,07 - 1,80 (m, 2 H), 1,75 - 1,56 (m, 1 H), 1,50 - 1,13 (m, 4 H), 0,79 (t, J = 8,0 Hz, 2 H). MS encontrado para C20H32BN3O4 m/z[390(M + 1)]. Exemplo 15: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-((2,3-dihidrobenzofuran-5-il)metilamino) ciclobutil)hexanóico
Figure img0044
Ácido (S)-2-Amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((2,3- dihidrobenzofuran-5-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 2,3-dihidrobenzofuran-5-carbaldeído ter sido usado em vez de 3- fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,33 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 7,21 (dd, J = 8,4, 1,8 Hz, 1 H), 6,87 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 4,63 (t, J = 8,8 Hz, 2 H), 4,08 (s, 2 H), 3,71 - 3,58 (m, 1 H), 3,25 (t, J = 8,8 Hz, 2 H), 2,60 - 2,34 (m, 4 H), 2,05 - 1,80 (m, 2 H), 1,71 - 1,55 (m, 1 H), 1,50 - 1,13 (m, 4 H), 0,79 (t, J = 8,0 Hz, 2 H). MS encontrado para C19H29BN2O5 m/z [377(M + 1)]. Exemplo 16: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-((3',4'-diclorobifenil-4-il)metilamino) ciclobutil)hexanóico
Figure img0045
Ácido (S)-2-Amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((3',4'- diclorobifenil-4-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 3',4'-diclorobifenil-3-carbaldeído ter sido usado em vez de 3- fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,75 (s, 1 H), 7,67 - 7,59 (m, 2 H), 7,57 - 7,42 (m, 4 H), 4,13 (s, 2 H), 3,63 (m, 1 H), 2,60 - 2,25 (m, 4 H), 2,01 - 1,75 (m, 2 H), 1,66 - 1,53 (m, 1 H), 1,40 - 1,04 (m, 4 H), 0,70 (t, J = 7,2 Hz, 2 H). MS encontrado para C23H29BCl2N2O4 m/z[502(M + Na)]. Exemplo 17: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-((4'-clorobifenil-4-il)metilamino) ciclobutil)hexanóico
Figure img0046
Ácido (S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((4'- clorobifenil-4-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 4'-clorobifenil-3-carbaldeído ter sido usado em vez de 3-fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,67 (d, J = 8,0, 2 H), 7,60 (d, J = 8,0 Hz, 2 H), 7,44 (m, 4 H), 4,13 (s, 2 H), 3,64 (m, 1 H), 2,58 - 2,26 (m, 4 H), 2,02 - 1,78 (m, 2 H), 1,67 - 1,55 (m, 1 H), 1,42 - 1,07 (m, 4 H), 0,71 (t, J = 7,2 Hz, 2 H). MS encontrado para C23H30BClN2O4 m/z [445(M + 1)]. Exemplo 18: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-((4'-(trifluormetil)bifenil-4-il)metilamino) ciclobutil)hexanóico
Figure img0047
Ácido (S)-2-Amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((4'-(trifluormetil)bifenil-4-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 4'-(trifluormetil)bifenil-3- carbaldeído ter sido usado em vez de 3-fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,84 - 7,71 (m, 6 H), 7,51 (d, J = 7,6 Hz, 2 H), 4,15 (s, 2 H), 3,65 (m, 1 H), 2,56 - 2,59 (m, 4 H), 2,02 - 1,73 (m, 2 H), 1,67 - 1,53 (m, 1 H), 1,44 - 1,08 (m, 4 H), 0,71 (t, J = 7,2 Hz, 2 H). MS encontrado para C24H30BF3N2O4 m/z[479(M + 1)]. Exemplo 19: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-((4’-fluorbifenil-4-il)metilamino) ciclobutil)hexanóico
Figure img0048
Ácido (S)-2-Amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((4’- fluorbifenil-4-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 4'-fluorbifenil-3-carbaldeído ter sido usado em vez de 3-fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,70 - 7,60 (m, 4 H), 7,46 (d, J = 7,6 Hz, 2 H), 7,18 (t, J = 8,8 Hz, 2 H), 7,44 (m, 4 H), 4,13 (s, 2 H), 3,64 (m, 1 H), 2,59 - 2,25 (m, 4 H), 2,00 - 1,76 (m, 2 H), 1,68 - 1,54 (m, 1 H), 1,42 - 1,05 (m, 4 H), 0,71 (t, J = 7,2 Hz, 2 H). MS encontrado para C23H30BFN2O4 m/z [429(M + 1)]. Exemplo 20: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-(4-hidroxibenzilamino)ciclobutil)hexanóico
Figure img0049
Ácido (S)-2-Amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-(4- hidroxibenzilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 4- (benziloxi)benzaldeído ter sido usado em vez de 3- fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,26 (d, J = 7,2, 2 H), 6,87 (d, J = 7,2 Hz, 2 H), 4,01 (s, 2 H), 3,59 (m, 1 H), 2,60 - 2,18 (m, 4 H), 1,96 - 1,78 (m, 2 H), 1,67 - 1,53 (m, 1 H), 1,40 - 1,04 (m, 4 H), 0,72 (m, 2 H). MS encontrado para C17H27BN2O5 m/z [351(M + 1)]. Exemplo 21: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-(4-(4-clorofenoxi)benzilamino) ciclobutil)hexanóico
Figure img0050
Ácido (S)-2-Amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-(4-(4- clorofenoxi)benzilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 4-(4-clorofenoxi)benzaldeído ter sido usado em vez de 3-fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,37 (m, 4 H), 7,09 - 6,97 (m, 4 H), 4,07 (s, 2 H), 3,64 (m, 1 H), 2,56 - 2,20 (m, 4 H), 2,00 - 1,70 (m, 2 H), 1, 66 - 1,52 (m, 1 H), 1,43 - 1,01 (m, 4 H), 0,72 (m, 2 H). MS encontrado para C23H30BClN205 m/z [461(M + 1)]. Exemplo 22: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-((4’-clorobifenil-2-il)metilamino) ciclobutil)hexanóico
Figure img0051
Ácido (S)-2-Amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((4’- clorobifenil-2-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 4'-clorobifenil-2-carbaldeído ter sido usado em vez de 3-fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,52 - 7,41 (m, 5 H), 7,39 - 7,28 (m, 3 H), 4,12 (s, 2 H), 3,38 - 3,27 (m, 1 H), 2,40 - 2,28 (m, 1 H), 2,16 - 1,91 (m, 3 H), 1,79 - 1,47 (m, 3 H), 1,40 - 1,01 (m, 4 H), 0,71 (t, J = 8,0 Hz, 2 H). MS encontrado para C23H30BClN2O4 m/z [445(M + 1)]. Exemplo 23: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-((6-fenilpiridin-3-il)metilamino) ciclobutil)hexanóico
Figure img0052
Ácido (S)-2-Amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((6- fenilpiridin-3-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 6-fenilnicotinaldeído ter sido usado em vez de 3-fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 8,82 (s, 1 H), 8,58 (m, 1 H), 8,29 (m, 1 H), 7,85 (d, J = 7,1 Hz, 2 H), 7,70 - 7,58 (m, 3 H), 4,38 (s, 2 H), 3,77 (m, 1 H), 2,62 - 2,38 (m, 4 H), 2,07 - 1,80 (m, 2 H), 1,68 - 1,56 (m, 1 H), 1,42 - 1,09 (m, 4 H), 0,72 (t, J = 7,6 Hz, 2 H). MS encontrado para C22H30BN3O4 m/z [412(M + 1)]. Exemplo 24: preparação de ácido (S)-2-((1s,3R)-34(9H- fluoren-2-il)metilamino)ciclobutil)-2-amino-6- boronohexanóico
Figure img0053
Ácido (S)-2-((1s,3R)-3-((9H-Fluoren-2- il)metilamino)ciclobutil)-2-amino-6-boronohexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 9H-fluorene-2-carbaldeído ter sido usado em vez de 3-fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,89 - 7,83 (m, 2 H), 7,62 - 7,56 (m, 2 H), 7,44 - 7,32 (m, 3 H), 4,14 (s, 2 H), 3,91 (s, 2 H), 3,63 (m, 1 H), 2,54 - 2,27 (m, 4 H), 2,00 - 1,77 (m, 2 H), 1,63 - 1,53 (m, 1 H), 1,40 - 1,04 (m, 4 H), 0,70 (t, J = 7,6 Hz, 2 H). MS encontrado para C24H31BN2O4 m/z [423(M + 1)]. Exemplo 25: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-((4’-(trifluormetil)bifenil-2-il)metilamino) ciclobutil)hexanóico
Figure img0054
Ácido (S)-2-Amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((4’- (trifluormetil)bifenil-2-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 4'-(trifluormetil)bifenil-2- carbaldeído ter sido usado em vez de 3-fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,82 (d, J = 8,1 Hz, 2 H), 7,56 - 7,45 (m, 5 H), 7,42 - 7,36 (m, 1 H), 4,12 (s, 2 H), 3,34 - 3,26 (m, 1 H), 2,45 - 2,24 (m, 1 H), 2,16 - 1,86 (m, 3 H), 1,75 - 1,61 (m, 2 H), 1,54 - 1,43 (m, 1 H), 1,39 - 1,01 (m, 4 H), 0,70 (t, J = 8,0 Hz, 2 H). MS encontrado para C24H30BF3N2O4 m/z[479(M + 1)].
Exemplo 26: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-(4- ciclohexilbenzilamino)ciclobutil)hexanóico
Figure img0055
Ácido (S)-2-Amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-(4- ciclohexilbenzilamino)ciclobutil) hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 4- ciclohexilbenzaldeído ter sido usado em vez de 3-fenilpropanal na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,31 (s, 4 H), 4,05 (s, 2 H), 3,58 (m, 1 H), 2,57 — 2.22 (m, 5 H), 1,96 - 1,50 (m, 8 H), 1,41 - 1,05 (m, 9 H), 0,71 (t, J = 7,8 Hz, 2 H). MS encontrado para C23H37BN2O4 m/z [417(M + 1)]. Exemplo 27: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3- (dibenzilamino)ciclobutil)hexanóico
Figure img0056
Etapa 1: Metil 3,3-dimetoxiciclobutanocarboxilato Com o uso do método descrito em J. Org. Chem. (2006) 61, 2.174-2.178, ácido 3-oxociclobutanocarboxílico (11,4 g, 100 mmol) foi dissolvido em MeOH (133 ml) e tratado com hidrato de ácido p-toluenossulfônico (0,38 g, 2,0 mmol). A mistura foi aquecida a 55°C por 3 dias, resfriada a room temperature e concentrada in vacuo a ~1/5 volume. A solução resultante foi diluída com H2O, extraída com diclorometano (3 x), lavada com cloreto de sódio saturado aquoso e concentrada in vacuo para gerar o produto bruto (15,2 g) que foi usado sem purificação adicional. Rf 0,41 (20% acetato de etila em heptano). 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) δ 1H- RMN: 2,50 - 2,30 (m, 4 H); 2,89 (quint, J = 8,6 Hz, 1 H), 3,14 (s, 3 H); 3,17 (s, 3 H); 3,69 (s, 3 H).
Figure img0057
Etapa 2: N,3,3-trimetoxi-N-metilciclobutanocarboxamida Metil 3,3-dimetoxiciclobutanocarboxilato (11,65 g, 66,9 mmol) foi dissolvido em THF (134 ml) e tratado com N,O-dimetilhidroxilamina cloridrato (10,12 g, 103,7 mmol). A mistura foi resfriada a 0°C e tratada com cloreto de isopropilmagnésio (2 M solução em THF, 100,3 ml, 200,7 mmol) e agitada por 2 h. A reação foi extinta com solução saturada de cloreto de amônio (75 ml), diluída com acetato de etila, lavada com água e cloreto de sódio saturado aquoso, e concentrada in vacuo. O resíduo foi cromatografado em sílica gel eluindo com 20-100% acetato de etila em heptano para gerar o produto desejado (9,16 g, 67%). Rf 0,06 (20% acetato de etila em heptano). 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) δ 3,61 (s, 3 H), 3,20 (s, 3 H), 3,19 (s, 3 H), 3,15 (s, 3 H), 2,39 (d, J = 9,0 Hz, 4 H). ESI MS encontrado para C9H17NO4m/z [204,1 (M+1)].
Figure img0058
Etapa 3: 1-(3,3-dimetoxiciclobutil)pent-4-en-1-ona N,3,3-trimetoxi-N-metilciclobutanocarboxamida (12,19 g, 60,0 mmol) foi dissolvida em THF (130 ml), resfriada a 0°C e tratada com brometo de 3-butenilmagnésio (168 ml, 0,5 M/THF, 84 mmol). Depois de agitação por 1,5 h em temperatura ambiente, a reação foi novamente resfriada a 0°C e extinta com 1 N ácido cítrico (30 ml), diluída com acetato de etila, lavada sucessivamente com água, cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre MgSO4, e concentrada in vacuo. O resíduo foi cromatografado em sílica gel eluindo com 5-40% acetato de etila em heptano para gerar o produto desejado 10,98 g (92%). Rf 0,77 (50% acetato de etila em heptano). 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) δ 5,87 - 5,72 (m, 1 H), 5,06 - 4,95 (m, 2 H), 3,17 (s, 3 H), 3,13 (s, 3 H), 3,06 - 2,88 (m, 1 H), 2,54 - 2,48 (m, 2 H), 2,38 - 2,28 (m, 6 H).
Figure img0059
Etapa 4: 2-acetamido-N-terc-butil-2-(3,3- dimetoxiciclobutil)hex-5-enamida 1-(3,3-dimetoxiciclobutil)pent-4-en-1-ona (3,0, 15,1) foi dissolvida em 2,2,2- trifluoretanol (7 ml). Acetato de amônio (4,66 g, 60,5 mmol) e terc-butil isocianeto (3,40 ml, 30,3 mmol) foram adicionados e a reação foi agitada por 3 dias em temperatura ambiente. A reação foi diluída com acetato de etila, lavada sucessivamente com água, cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre MgSO4, e concentrada in vacuo. O resíduo foi cromatografado em sílica gel eluindo com 20-100% acetato de etila em heptano para gerar o produto desejado (4,04 g, 79%). Rf 0.16 (50% acetato de etila em heptano). 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) δ 7,10 (br s, 1 H), 6,71 (br s, 1 H), 5,83 - 5,69 (m, 1 H), 5,03 - 4,91 (m, 2 H), 3,14 (s, 6 H), 2,91 - 2,72 (m, 2 H), 2,39 - 2,24 (m, 2 H), 2,13 - 1,79 (m, 7 H), 1,53 - 1,33 (m, 10 H). ESI MS encontrado para C18H32N2O4 m/z [363,0 (M+Na+)]
Figure img0060
Etapa 5: 2-acetamido-N-terc-butil-2-(3,3- dimetoxiciclobutil)-644,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)hexanamida 2-Acetamido-N-terc-butil-2-(3,3-dimetoxiciclo butil)hex-5-enamida (4,04 g, 11,87 mmol) foi dissolvida em diclorometano (119 ml) e tratada com [Ir(COD)Cl]2 (239 mg, 0,356 mmol) e dppe (276 mg, 0,712 mmol). A reação foi agitada por 15 minutos, então resfriada a 0°C e tratada com pinacolborano (2,41 ml, 16,61 mmol). A reação foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente, então diluída com acetato de etila, lavada com cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre MgSO4, e concentrada in vacuo. O resíduo foi cromatografado em sílica gel eluindo com 18100% acetato de etila em heptano para gerar o produto desejado (5,21 g, 94%). Rf 0,29 (75% acetato de etila em heptano). 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) δ 7,05 (br s, 1 H), 6,75 (br s, 1 H), 3,14 (s, 6 H), 2,81 - 2,64 (m, 2 H), 2,38 - 2,21 (m, 2 H), 2,12 - 1,91 (m, 6 H), 1,51 - 1,04 (m, 25 H), 0,74 (t, J = 8,0 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C24H45BN2O6 m/z [491,4 (M+Na+)].
Figure img0061
Etapa 6: 2-acetamido-N-terc-butil-2-(3-oxociclobutil)-6- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanamida 2-Acetamido-N-terc-butil-2-(3,3-dimetoxiciclobutil)-6- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanamida (5,21 g, 11,10 mmol) foi dissolvida em acetone (110 ml) e tratada com ácido p-toluenossulfônico (106 mg, 0,56 mmol). A reação foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente, então diluída com benzeno (500 ml) e heptano (250 ml), lavada sucessivamente com água e cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre MgSO4, e concentrada in vacuo. O resíduo foi cromatografado em sílica gel eluindo com 5075% acetato de etila em heptano para gerar o produto desejado (3,40 g, 73%). Rf 0,31 (75% acetato de etila em heptano). 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) δ 6,83 (br s, 1 H), 5,84 (br s, 1 H), 3,45 - 3,33 (m, 1 H), 3,09 - 2,82 (m, 6 H), 2,02 (s, 3 H), 1,54 - 1,05 (m, 25 H), 0,77 (t, J = 7,4 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C22H39BN2O5 m/z [423,1 (M+1)].
Figure img0062
Etapa 7: (S)-2-acetamido-N-terc-butil-2-((1s,3R)-3- (dibenzilamino)ciclobutil)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)hexanamida 2-Acetamido-N-terc-butil-2-(3-oxociclobutil)-6- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanamida (211 mg, 0,50 mmol) foi dissolvida em acetato de etila (1,4 ml) e tratada com dibenzilamina (96 μl, 0,50 mmol). Depois de agitação por 5 minutos, NaBH(OAc)3 (159 mg, 0,75 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada de um dia para o outro. A reação foi diluída com acetato de etila, lavada sucessivamente com solução saturada de bicarbonato de sódio, cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre MgSO4, e concentrada in vacuo. The reside foi cromatografado em sílica gel eluindo com 3-25% acetato de etila em heptano para gerar o produto bruto (209 mg) como uma mistura de isômeros cis- e trans- que foi realizada sem purificação adicional. Rf 0,45 (75% acetato de etila em heptano). ESI MS encontrado para C36H54BN3O4 m/z [604,5 (M+1)].
Figure img0063
Etapa 8. Ácido (S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3- (dibenzilamino)ciclobutil)hexanóico 2-acetamido-N-terc-butil-2-41s,3s)-3-(dibenzilamino) ciclobutil)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)hexanamida (209 mg, 0,347 mmol) foi tratada com 6 N HCl (3,6 ml) e aquecida a 100°C de um dia para o outro. A reação foi resfriada até a temperatura ambiente, diluída com H2O, lavada com diclorometano (3 x), e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por HPLC preparatória (10100% CH3CN/H2O) para gerar o produto desejado. 1H RMN (D2O, 300 MHz) δ 7,41 - 7,23 (m, 10 H), 4,15 (br s, 4 H), 3,73 - 3,62 (m, 1 H), 2,33 - 2,02 (m, 4 H), 1,94 - 1,78 (m, 1 H), 1,74 - 1,59 (m, 1 H), 1,51 - 1,36 (m, 1 H), 1,33 - 0.95 (m, 4 H), 0,65 (t, J = 7,2 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C24H33BN2O4 m/z [425,1 (M+1)]. Exemplo 28: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1r,3S)-3- (dibenzilamino)ciclobutil)hexanóico
Figure img0064
Ácido (S)-2-Amino-6-borono-2-((1r,3S)-3- (dibenzilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 27, exceto pelo trans-isômero ter sido usado da etapa 7. 1H RMN (D2O, 300 MHz) δ 7,41 - 7,25 (m, 10 H), 4,18 (br s, 4 H), 3,88 — 3,76 (m, 1 H), 2,66 - 2,54 (m, 1 H), 2,45 - 2,17 (m, 4 H), 1,86 - 1,67 (m, 1 H), 1,57 - 1,42 (m, 1 H), 1,37 - 1,01 (m, 4 H), 0,66 (t, J = 7,8 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C24H33BN2O4 m/z [425,1 (M+1)]. Exemplo 29: preparação de ácido 2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-(isoindolin-2-il)ciclobutil)hexanóico
Figure img0065
Ácido 2-Amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-(isoindolin-2- il)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 27 exceto pela isoindolina ter sido usada em vez de dibenzilamina na etapa 7. 1H RMN (D2O, 300 MHz) δ 7,37- 7,20 (m, 10 H), 4,58- 4,30 (m, 4 H), 3,86 - 3,76 (m, 1 H), 2,55 - 2,31 (m, 4 H), 2,06 - 1,57 (m, 3 H), 1,36 - 1,02 (m, 4 H), 0,66 (t, 2 H, J = 6,9 Hz). ESI MS encontrado para C18H27BN2O4 m/z [311,1 (M- 2H20)]. Exemplo 30: preparação de ácido 6-borono-2-(2-(isoindolin- 2-il)etil)-2-(metilamino)hexanóico
Figure img0066
Etapa 1: Etil 2-alil-2-(terc-butoxicarbonil(metil)amino)-6- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanoato
Etil 2-alil-2-(terc-butoxicarbonilamino)-6-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanoato (0,64 g, 1,50 mmol) foi dissolvido em THF (5 ml) e resfriado a 0°C. NaHMDS (1 M solução em THF, 2,5 ml, 2,5 mmol) foi adicionado em gotas e a reação foi agitada por 20 min. Metil iodeto (0,47 ml, 7,5 mmol) foi adicionado e a reação foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada de um dia para o outro. A reação foi extinta com solução de NH4Cl saturado (5 ml), diluída com acetato de etila, lavada sucessivamente com solução saturada de bicarbonato de sódio e cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre MgSO4, e concentrada in vacuo. O resíduo foi cromatografado em sílica gel eluindo com 2-25% acetato de etila em heptano para gerar o produto desejado (0,518 g, 79%). Rf 0,53 (30% acetato de etila em heptano). 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) δ 5,78 - 5,62 (m, 1 H), 5,15 - 5,03 (m, 2 H), 4,12 (q, J = 9,0 Hz, 2 H), 2,90 (s, 3 H), 2,89 - 2,81 (m, 1 H), 2,58 - 2,51 (m, 1 H), 1,94 - 1,83 (m, 1 H), 1,76 - 1,66 (m, 1 H), 1,54 - 1,08 (m, 29 H), 0,77 (t, J = 8,0 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C23H42B1N1O6 m/z [440,2 (M+1)].
Figure img0067
Etapa 2: Etil 2-(terc-butoxicarbonil(metil)amino)-2-(2- oxoetil)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)hexanoato
Etil 2-alil-2-(terc-butoxicarbonil(metil)amino)-6- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanoato (0,518 g, 1,18 mmol) foi dissolvido em diclorometano (60 ml) e resfriado a -78 °C. Ozônio foi borbulhado através da solução até uma cor azul persistir. A reação foi salpicada com nitrogen por 15 min, então tratada com Ph3P (0,928 g, 3,54 mmol), e agitada 2 horas em temperatura ambiente. A reação foi concentrada in vacuo e o resíduo foi cromatografado em sílica gel eluindo com 7-60% acetato de etila em heptano para gerar o produto desejado (0,375 g, 79%). Rf 0,31 (30% acetato de etila em heptano). 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) δ 9,42 (s, 1 H), 4,17 (q, J = 9,0 Hz, 2 H), 3,21 (br d, J = 15,0 Hz, 1 H), 2,92 (s, 3 H), 2,64 (br d, J = 15,0 Hz, 1 H), 1,87 - 1,79 (m, 2 H), 1,46 - 1,09 (m, 28 H), 0,77 (t, J = 8,0 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C22H40B1N1O7 m/z [442,2 (M+1)].
Figure img0068
Etapa 3: Etil 2-(terc-butoxicarbonil(metil)amino)-2-(2- (isoindolin-2-il)etil)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)hexanoato
Etil 2- (terc-butoxicarbonil(metil)amino)-2-(2- (isoindolin-2-il)etil)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)hexanoato foi preparado de acordo com o procedimento da etapa 6 no Exemplo 27 exceto por etil 2- (terc-butoxicarbonil(metil)amino)-2-(2-oxoetil)-6-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanoato ter sido usado em vez de 3-fenilpropanal e isoindolina ter sido usada em vez de (R)-2-acetamido-2-((1s,3S)-3- aminociclobutil)-N- terc-butil-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)hexanamida cloridrato. Rf 0,32 (10% MeOH em diclorometano). 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) δ 7,20 - 7,14 (m, 4 H), 4,13 (q, J = 8,0 Hz, 2 H), 3,96 (br s, 4 H), 3,00 - 2,88 (m, 4 H), 2,75 - 2,60 (m, 2 H), 2,41 - 2,31 (m, 1 H), 2,15 - 1,95 (m, 2 H), 1,87 - 1,74 (m, 2 H), 1,49 - 1,08 (m, 26 H), 0,79 (t, J = 8,5 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C30H49B1N2O6 m/z [545,6 (M+1)].
Figure img0069
Etapa 4: ácido 6-borono-2-(2-(isoindolin-2-il)etil)-2- (metilamino)hexanóico
Ácido 6-borono-2-(2-(isoindolin-2-il)etil)-2- (metilamino)hexanóico foi desprotegido em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 27, etapa 8. 1H RMN (D2O, 400 MHz) δ 7,41- 7,38 (m, 4 H), 4,57 (br s, 4 H), 3,47- 3,43 (m, 1 H), 3,33 - 3,28 (m, 1 H), 2,69 (s, 3 H), 2,33 - 2,24 (m, 2 H), 1,96 - 1,83 (m, 2 H), 1,50 - 1,42 (m, 2 H), 1,36 - 1,30 (m, 1 H), 1,25 - 1,19 (m, 1 H), 0,82 (t, J = 7,2 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C17H27BN2O4 m/z [335,2 (M+1)]. Exemplo 31 (1799): preparação de ácido 6-borono-2-(2-(5- cloro-3,4-dihidroisoquinolin-2(1H)-il)etil)-2- (metilamino)hexanóico
Figure img0070
Ácido 6-Borono-2-(2-(5-cloro-3,4-dihidroisoquinolin- 2(1H)-il)etil)-2-(metilamino)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 30, exceto por 5-cloro-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina ter sido usado como a amina na etapa 3. 1H RMN (D2O, 500 MHz) δ 7,38 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,24 (dd, Ji = J2 = 8,0 Hz, 1 H), 7,10 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 4,53- 4,48 (m, 1 H), 4,32- 4,26 (m, 1 H), 3,81- 3,75 (m, 1 H), 3,42- 3,35 (m, 1 H), 3.34 - 3,21 (m, 2 H), 3,20 - 3,12 (m, 1 H), 3,11 - 3,01 (m, 1 H), 2,57 (s, 3 H), 1,92 - 1,75 (m, 5 H), 1,75 - 1,65 (m, 1 H), 1,40 - 1,34 (m, 2 H), 1,31 - 1,18 (m, 1 H), 1,16 - 1,06 (m, 1 H), 0,70 (t, J = 7,5 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C19H30BClN2O4 m/z [361,4 (M -2 x 18 + 1)]. Análise elementar para C19H30BClN2O4 2HCl.2H2O. Calc: C 45,13, H 7,18, N 5,54. Encontrado C 45,18, H 6,95, N 5,62 Exemplo 32: preparação de ácido 6-borono-2-(2-(5-cloro-3,4- dihidroisoquinolin-2(1H)-il)etil)-2-(metilamino)hexanóico
Figure img0071
Ácido 6-Borono-2-(2-(5-cloro-3,4-dihidroisoquinolin- 2(1H)-il)etil)-2-(metilamino)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 30, exceto por 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina ter sido usada como a amina na etapa 3. 1H RMN (D2O, 500 MHz) δ 7,30 - 7,18 (m, 3 H), 7,12 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 4,57 - 4,48 (m, 1 H), 4,33 - 4,26 (m, 1 H), 3,80 - 3,70 (m, 1 H), 3,51 - 3,35 (m, 2 H), 3,31 - 3,22 (m, 1 H), 3,21 - 3,10 (m, 1 H), 3,10 - 3,02 (m, 1 H), 2,60 (s, 3 H), 2,41 - 2,26 (m, 2 H), 1,92 - 1,77 (m, 2 H), 1,40 - 1,32 (m, 2 H), 1,30 - 1,19 (m, 1 H), 1,19 - 1,07 (m, 1 H), 0,70 (t, J = 7,2 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C18H29BN2O4 m/z [313,5 (M -2x18 + 1)]. Exemplo 33: preparação de ácido 6-borono-2-(metilamino)-2- (2-(4-metilpiperidin-1-il)etil)hexanóico
Figure img0072
Ácido 6-Borono-2-(metilamino)-2-(2-(4-metilpiperidin- 1-il)etil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 30, exceto por 4- metilpiperidina ter sido usada como a amina na etapa 3. 1H RMN (D2O, 500 MHz) δ 3,51 - 3,41 (m, 2 H), 3,24 - 3,16 (m, 1 H), 3,06 - 2,97 (m, 1 H), 2,95 - 2,80 (m, 2 H), 2,50 (s, 3 H), 2,28 - 2,12 (m, 2 H), 1,88 - 1,70 (m, 4 H), 1,64 - 1,48 (m, 1 H), 1,36- 1,17 (m, 5 H), 1,17- 1,04 (m, 1H), 0,84 (d, J = 8,2 Hz, 3 H), 0,70 (t, J = 7,2 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C15H31BN2O4 m/z [297,5 (M -18 + 1)]. Análise elementar para C15H31BN2O4 2HCl.1/3H2O. Calc: C 45,83, H 8,63, N 7,13. Encontrado C 45,77, H 8,56, N 7,10 Exemplo 34: preparação de ácido 6-borono-2-(2-(4,4- dimetilpiperidin-1-il)etil)-2- (metilamino)hexanóico
Figure img0073
Ácido 6-Borono-2-(2-(4,4-dimetilpiperidin-1-il)etil)- 2-(metilamino)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 30, exceto por 4,4- dimetilpiperidina ter sido usada como a amina na etapa 3. 1H RMN (D2O, 500 MHz) δ 3,39 - 3,28 (m, 2 H), 3,28 - 3,20 (m, 1 H), 3,12 - 2,96 (m, 3 H), 2,56 (s, 3 H), 2,30 - 2,15 (m, 2 H), 1,89 - 1,72 (m, 2 H), 1,59 - 1,50 (m, 4 H), 1,39 - 1,30 (m, 2 H), 1,28 - 1,16 (m, 1 H), 1,15- 1,04 (m, 1H), 0,93 (s, 3 H), 0,88 (s, 3 H), 0,69 (t, J = 7,5 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C16H33BN2O4 m/z [311,5 (M -18 + 1)]. Exemplo 35: preparação de ácido 6-borono-2-(2-(3,4- diclorobenzilamino)etil)-2-(metilamino)hexanóico
Figure img0074
Ácido 6-Borono-2-(2-(3,4-diclorobenzilamino)etil)-2- (metilamino)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 30, exceto por (3,4- diclorofenil)metanamina ter sido usada como a amina na etapa 3. 1H RMN (D2O, 500 MHz) δ 7,56 (s, 1 H), 7,52 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 7,28 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 4,20 (dAB, J = 11,5 Hz, 1 H), 4,10 (dAB, J = 11,5 Hz, 1 H), 3,20 - 3,11 (m, 1 H), 3,08 - 2,98 (m, 1 H), 2,51 (s, 3 H), 2,19 - 2,05 (m, 2 H), 1,71 - 1,62 (m, 2 H), 1,32 - 1,24 (m, 2 H), 1,21 - 1,11 (m, 1 H), 1,11 - 0,99 (m, 1 H), 0,63 (t, J = 7,2 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C16H25BCl2N2O4 m/z [355,4/357.4 (M -2x18 + 1)]. Exemplo 36: preparação de ácido 6-borono-2-(metilamino)-2- (2-(4-fenilpiperidin-1-il)etil)hexanóico
Figure img0075
Ácido 6-Borono-2-(metilamino)-2-(2-(4-fenilpiperidin- 1-il)etil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 30, exceto por 4- fenilpiperidina ter sido usada como a amina na etapa 3. 1H RMN (D2O, 500 MHz) δ 7,30 - 7,24 (m, 2 H), 7,22 - 7,16 (m, 3 H), 3,62 - 3,51 (m, 2 H), 3,30 - 3,20 (m, 1 H), 3,12 - 2,96 (m, 3 H), 2,86 - 2,74 (m, 1H), 2,55 (s, 3 H), 2,31 - 2,12 (m, 2 H), 2,09 - 1,97 (m, 2 H), 1,88 - 1,72 (m, 4 H), 1,39 - 1,28 (m, 2 H), 1,28 - 1,14 - 1,03 (m, 1 H), 0,66 (t, J = 7,5 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C20H33BN2O4 m/z [341,5 (M -2x18 + 1)]. Análise elementar para C20H33BN2O4 2HCl.2H2O. Calc: C 49,50, H 8,10, N 5,77. Encontrado C 49,46, H 7,88, N 5,87 Exemplo 37: preparação de ácido 6-borono-2-(2-(4-(4-clorofenil)piperidin-1-il)etil)-2-(metilamino)hexanóico
Figure img0076
Ácido 6-Borono-2-(2-(4-(4-clorofenil)piperidin-1- il)etil)-2-(metilamino)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 30, exceto por 4-(4- clorofenil)piperidina ter sido usada como a amina na etapa 3. 1H RMN (D2O, 500 MHz) δ 7,21 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,12 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 3,58 - 3,47 (m, 2 H), 3,25 - 3,15 (m, 1 H), 3,08 - 2,92 (m, 3 H), 2,80 - 2,72 (m, 1 H), 2,51 (s, 3 H), 2,28 - 2,11 (m, 2 H), 2,02 - 1,90 (m, 2 H), 1,84 - 1,67 (m, 4 H), 1,31 - 1,22 (m, 2 H), 1,21 - 1,10 (m, 1 H), 1,10 - 0,98 (m, 1 H), 0,62 (t, J = 7,5 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C20H32BClN2O4 m/z [375,3/377,5 (M -2x18 + 1)]. Análise elementar para C20H32BClN2O4 2HCl.2H2O. Calc: C 46,22, H 7,37, N 5,39. Encontrado C 46,46, H 7,66, N 5,50. Exemplo 38: preparação de ácido 2-amino-6-borono-2-(3- (pirrolidin-1-il)propil)hexanóico
Figure img0077
Etapa 1: 4-cloro-N-metoxi-N-metilbutanamida
Sob argônio, uma solução de cloridrato de N,O- dimetilhidroxilamina (16,9 g, 0,173 mol) e trietilamina (53 ml, 0,381 mol) em diclorometano (240 ml) foi cuidadosamente tratada com 4-clorobutiril cloreto (20 g, 0,19 mol) por 40 minutos. Depois da adição estar completa, a mistura da reação foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente. O cloridrato de trietilamina sólido foi removido por filtração e a solução remascente foi lavada sucessivamente com 2 N HCl aquoso (x 2), 1M K2CO3 e cloreto de sódio saturado aquoso. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada para gerar 4-cloro-N-metoxi- N-metilbutanamida (21.8 g) de óleo amarelo bruto que foi usada na próxima etapa sem purificação adicional. ESI MS encontrado para C6H12ClNO2 m/z [166,0/168,0 (M+1)].
Figure img0078
Etapa 2: 1-clorooct-7-en-4-ona
Em um frasco seco em chama, sob uma atmosfera de argônio, magnésio (7,8 g, 0,33 mol) e um pequeno cristal de iodo em THF suficiente para cobrir o magnésio foi aquecido em um leve refluxo até a cor ter desaparecido. Aproximadamente 10% de uma solução de 4-bromo-1-buteno (32,5 ml, 0,321 mol) em THF (100 ml) foi adicionado de uma vez e refluxo foi continuado até surgir uma coloração marrom. O restante da solução foi adicionado em gotas com refluxo continuado. Depois de a adição estar completa, o aquecimento foi mantido por 10 minutos, em cujo ponto quase todo o Mg havia dissolvido. A solução de reagente de Grignard foi adicionada a uma segunda solução resfriada (banho de gelo) de 4-cloro-N-metoxi-N-metilbutanamida (21,3 g, 0,128 mol) em THF (200 ml). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 2 h, despejada em uma mistura de éter e cloreto de amônio aquoso saturado. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com éter. Os extratos combinados foram secos sobre Mg2SO4,
Figure img0079
Etapa 3: 2-acetamido-N-terc-butil-2-(3-cloropropil)hex-5-enamida
Uma solução de 1-clorooct-7-en-4-ona (1 g, 6,22 mmol), t-butil isonitrila (2,8 ml, 24,8 mmol) e acetato de amônio 2,8 g (37,3 mmol) em 2,2,2-trifluoretanol (3 ml), foi agitada em temperatura ambiente. Uma vez que a cetona de partida foi consumida a reação foi diluída com acetato de etila, extinta com 2M HCl e extraída com acetato de etila. O extrato orgânico foi lavado sucessivamente com 2M HCl e cloreto de sódio saturado aquoso, seco sobre MgSO4 e concentrado. Purificação por cromatografia em coluna (acetato de etila em hexano gerou 2-acetamido-N-terc-butil- 2-(3-cloropropil)hex-5-enamida como um óleo amarelo 1,7 g (94%). ESI MS encontrado para C15H27ClN2O2 m/z [303 (M+1), 325,3 (M+23)].
Figure img0080
Etapa 4: 2-acetamido-N-terc-butil-2-(3-cloropropil)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanamida
Sob argônio, uma solução resfriada (banho de gelo) de bis(1,5-diciclooctadiene)diirídio (I)dicloreto (100 mg, 3% mol), difenilfosfinoetano (118 mg, 6% mol) e 4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (2,8 ml, 19,8 mmol) em diclorometano seco (20 ml) foi tratado com uma segunda solução de olefina (1,5 g, 4.95 mmol) em diclorometano seco (20 ml). Depois de 4 h a reação foi lavada com água e cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre MgSO4, concentrated e purificada por cromatografia instantânea (20-30% acetato de etila em hexano para gerar 2-acetamido- N-terc-butil-2-(3-cloropropil)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)hexanamida como um óleo amarelo (1,6 g, 76%). ESI MS encontrado para C21H40BClN2O4 m/z [431,5 (M+1),453,5 (M+23)].
Figure img0081
Etapa 5: 2-acetamido-N-terc-butil-2-(3-(pirrolidin-1- il)propil)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)hexanamida
Uma solução de 2-acetamido-N-terc-butil-2-(3- cloropropil)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)hexanamida (0,39 g, 0,9 mmol) em acetonitrila foi tratada com NaI (10% mol) e pirolidina (0,75 ml, 9 mmol). A seca sobre MgSO4, e concentrada para gerar crude 2- acetamido-N-terc-butil-2-(3-(pirrolidin-1-il)propil)-6- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanamida (0,31g). esse material foi usado na próxima etapa sem purificação adicional. ESI MS encontrado para C25H48BN3O4 m/z [466,6 (M+1)].
Figure img0082
Etapa 6: ácido 2-amino-6-borono-2-(3-(pirrolidin-1- il)propil)hexanóico
Uma solução de 2-acetamido-N-terc-butil-2 -(3 -(pirro lidin-1-il)propil)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)hexanamida em 6 N HCl foi aquecida até refluxo de um dia para o outro. Depois de resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura foi concentrada até secar e purificada por HPLC preparatória (MeCN e água). 1H RMN (D2O ,500 MHz) δ 3,52 - 3,59 (m, 2 H), 3,15 - 3,08 (m, 2 H), 3,01 - 2,94 (m, 2 H), 2,09 - 2,00 (m, 2 H), 1,94 - 1,66 (m, 7 H), 1,63 - 1,53 (m, 1 H), 1,37 - 1,25 (m, 3 H), 1,21 - 1,08 (m, 1 H), 0,698 (t, J = 7,5 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C13H27BN2O4 m/z [251 (M+1-2xH2O)]. Exemplo 39: preparação de ácido 2-amino-6-borono-2-(3-(isoindolin-2-il)propil)hexanóico
Figure img0083
Ácido 2-Amino-6-borono-2-(3-(isoindolin-2-il)propil) hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 38 exceto por isoindolina ter sido usada como a amina na etapa 5. 1H RMN (D2O, 200 MHz) δ 7,37 (bs, 4 H), 4,91 - 4,80 (m, 2 H), 4,56 - 4,47 (m, 2 H), 3,51 - 3,38 (m, 2 H), 2,05 - 1,68 (m, 6 H), 1,48 - 1,05 (m, 4 H), 0,70 (t, J = 7,2 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C17H27BN2O4 m/z [299,4 (M -2 x 18 + 1)]. Exemplo 40: preparação de ácido 2-amino-6-borono-2-(3-(5- cloro-3,4-dihidroisoquinolin-2(1H)-il)propil)hexanóico
Figure img0084
Ácido 2-Amino-6-borono-2-(3-(5-cloro-3,4- dihidroisoquinolin-2(1H)-il)propil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 38 exceto por 5-cloro-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina ter sido usada como a amina na etapa 5. 1H RMN (D2O, 500 MHz) δ 7,35 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,20 (dd, J1 = J2 = 8,0 Hz, 1 H), 7,06 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 4,54 - 4,47 (m, 1 H), 4,31 - 4,25 (m, 1 H), 3,82 - 3,74 (m, 1 H), 3,41 - 3,32 (m, 1 H), 3,32 - 3,20 (m, 2 H), 3,18 - 2,99 (m, 2 H), 2,00 - 1,83 (m, 4 H), 1,83- 1,69 (m, 2 H), 0,70 (t,J = 7,2 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C18H28BClN2O4 m/z [347,4/349,4 (M -2x18 + 1)]. Exemplo 41: preparação de ácido 2-amino-6-borono-2-(3-(3,4-dihidroisoquinolin-2(1H)-il)propil)hexanóico
Figure img0085
Ácido 2-Amino-6-borono-2-(3-(3,4-dihidroisoquinolin- 2(1H)-il)propil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 38 exceto por 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina ter sido usada como a amina na etapa 5. 1H RMN (D2O, 500 MHz) δ 7,28 - 7,15 (m, 3 H), 7,10 (d, J = 8,5 Hz, 1 H), 4,52 - 4,45 (m, 1 H), 4,29 - 4,21 (m, 1 H), 3,75 - 3,67 (m, 1 H), 3,39 - 3,00 (m, 5 H), 2,00 - 1,68 (m, 6 H), 1,36 - 1,27 (m, 3 H), 1,20 - 1,10 (m, 1 H), 0,70 (t, J = 7,2 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C18H29BN2O4 m/z [313,4 (M -2x18 + 1)]. Exemplo 42: preparação de ácido 2-Amino-2-(1R,3S)-3-(bifen- 4-ilmetilamino)- ciclopentil)-6-borono hexanóico
Figure img0086
Etapa 1: ácido (1R,35)-3-(bifenil-4-ilmetilamino) ciclopentanocarboxílico
Bifenil carboxaldeído (2,82 g, 15,5 mmol) foi adicionado a uma solução agitada de ácido (1R,3S)-3- aminociclopentanocarboxílico (2,0g, 15,5 mmol) em metanol anidro (50 ml) e ácido acético (2 ml). Depois de agitação em temperatura ambiente por 1 hora, triacetoxiborohidreto de sódio (6,57 g, 31 mmol) foi adicionado em porções por 10 minutos e a reação foi agitada em temperatura ambiente por 4 horas, diluída com cloreto de sódio saturado aquoso, e extraída com acetato de etila (3 x 30 ml). A fase orgânica combinada foi lavada com cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada e concentrada in vacuo para gerar ácido (1R,35)-3-(bifen-4- ilmetil-amino)-ciclopentano carboxílico bruto, que foi usado na próxima etapa sem purificação adicional; m/z para C19H21NO2 esperado 295,2; encontrado 318,1 (M + Na)+, 296,3 (M + H)+.
Figure img0087
Etapa 2: ácido (1R,35)-3-((bifenil-4-ilmetil)(terc- butoxicarbonil)amino)ciclopentano carboxílico
A uma solução do ácido (1R,3S)-3-(bifen-4- ilmetilamino)-ciclopentano carboxílico bruto em acetato de etila (25 ml) e solução saturada aquosa de NaHCO3 (25 ml), foi adicionado anidrido de Boc (6,76 g, 31 mmol), e a mistura foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente. A mistura da reação foi então acidificada ao pH 3-4 com 2N ácido clorídrico e extraída com acetato de etila (3 x). A fase orgânica combinada foi lavada com cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada e concentrada in vacuo. Purificação por cromatografia instantânea em coluna (sílica gel, 10-60% acetato de etila em heptano) gerou ácido (1R,3S)-3-{(Bifen- 4-ilmetil)-(terc-butoxicarbonil)amino}-ciclo-pentano carboxílico como um sólido branco (1,96 g, 32%); 1H RMN (CDCl3, 400 MHz) δ 7,61 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,56 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,45 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,36 (m, 1 H), 7,28 (m, 2 H), 4,46 (m, 3 H), 2,80 (m, 1 H), 2,16 (m, 1 H), 1,84 - 2,06 (m, 4 H), 1,75 (m, 1 H), 1,44 (s, 9 H); m/z para C24H291NO4 esperado 395,2; encontrado 418,1 (M + Na)+, 396,1 (M + H)+.
Figure img0088
Etapa 3: terc-Butil-bifen-4-ilmetil-{(1S,3R)-3-(metoxi(metil)carbamoil)-ciclopentil}-carbamato
EDC (901 mg, 4,7 mmol) foi adicionado em porções a uma solução agitada de ácido (1R,3S)-3- {(bifen-4-ilmetil)- (terc-butoxicarbonil)amino}-ciclopentano carboxílico (930 mg, 2,35 mmol), DMAP (10 mg), e N,O-dimetilhidroxilamina cloridrato (459 mg, 4,7 mmol) em diclorometano (15 ml). Trietilamina (1,31 ml, 9,4 mmol) foi adicionada em gotas, e a mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A solução resultante foi despejada em água, e extraída com acetato de etila (3 x). A fase orgânica combinada foi lavada com cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada e concentrada in vacuo. Purificação por cromatografia instantânea em coluna (sílica gel, 10-60% acetato de etila em heptano) gerou terc-Butil-bifen-4-ilmetil-{(1S,3R)-3- (metoxi(metil)carbamoil)-ciclopentil}-carbamato (800 mg, 78%) como um óleo incolor; 1H RMN (CDCl3, 400 MHz) δ 7,61 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,54 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,45 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,35 (m, 1 H), 7,30 (m, 2 H), 4,72 (br, s, 1 H), 4,49 (m, 2 H), 3,68 (s, 3 H), 3,19 (s, 3 H), 3,10 - 3,20 (m, 1 H), 2,10 (m, 1 H), 1,64 - 2,01 (m, 5 H), 1,41 (s, 9 H).
Figure img0089
Etapa 4: terc-butil-bifen-4-ilmetil-{(1S,3R)-3-pent-4-enoilciclopentil}- carbamato
Sob uma atmosfera de nitrogênio, uma solução de terc- Butil-bifen-4-ilmetil-{(1S,3R)-3-(metoxi(metil)carbamoil)- ciclopentil}-carbamato (1,2 g, 2,74 mmol), em tetrahidrofurano (20 ml) foi resfriada a 0°C e tratada com brometo de 3-butenilmagnésio (0,5 M em THF, 13,7 ml, 6,85 mmol) em gotas. A solução foi agitada por 1 hora a 0°C então aquecida até a temperatura ambiente de um dia para o outro. A solução resultante foi despejada em água, acidificada ao pH 3-4 com 1 N ácido clorídrico, e extraída com acetato de etila (3 x). A fase orgânica combinada foi lavada com cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada e concentrada in vacuo. Purificação por cromatografia instantânea em coluna (sílica gel, 0-30% acetato de etila em heptano) gerou terc- Butil-bifen-4-ilmetil-{(1S,3R)-3-pent-4-enoilciclopentil}- carbamato como um óleo incolor (1,12 g, 94 %); 1H RMN (CDCl3, 400 MHz) δ 7,62 d, J = 7,5 Hz, (2 H), 7,56 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,46 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,36 (m, 1 H), 7,28 (m, 2 H), 5,80 (m, 1 H), 5,01 (m, 2 H), 4,48 m, (3 H), 2,92 (m, 1 H), 2,54 (m, 2 H), 2,37 (m, 2 H), 2,04 (m, 1 H), 1,74 - 1,94 (m, 4 H), 1,48 - 1,66 (m, 1 H), 1,43 (s, 9 H).
Figure img0090
Etapa 5: terc-butil-(1S,35)-3-{(2-acetamido-1-(terc-butilamino)-1-oxo-hex-5-en-2-il)ciclopentil-bifen-4- ilmetil}-carbamato e terc-butil-(1S,3R)-3-{(2-acetamido-1- (terc-butilamino)-1-oxo-hex-5-en-2-il)ciclopentil-bifen-4- ilmetil}-carbamato.
Uma solução de terc-Butil-bifen-4-ilmetil-{(1S,3R)-3- pent-4-enoilciclopentil}-carbamato (402 mg, 0,93 mmol) e acetato de amônio (716 mg, 9,3 mmol) em 2,2,2- trifluoretanol (1 ml) foi tratada com terc-butil isocianeto (387 mg, 0,53 ml, 4.65 mmol). Depois de agitação por em temperatura ambiente por 2 dias, a mistura da reação foi adicionada a um funil de separação, diluída com água (10 ml) e extraída com acetato de etila (2 x 20 ml). A camada orgânica foi lavada com cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada. Purificação por cromatografia instantânea em coluna (sílica gel, 10-60% acetato de etila em heptano) gerou terc-butil-(1S,35)-3- {(2-acetamido-1-(terc-butilamino)-1-oxo-hex-5-en-2- il)ciclopentil-bifen-4-ilmetil}-carbamato como uma espuma incolor (120 mg, 22 %); 1H RMN (CDCl3, 400 MHz) δ 7,61 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,56 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,46 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,37 (m, 1 H), 7,29 (m, 2 H), 7,00 (br s, NH, 1 H), 6,18 (br s, NH, 1 H), 5,80 (m, 1 H), 4,98 (m, 2 H), 4,50 (d, J = 16.5 Hz, 1 H), 4,31 (d, J = 16.5 Hz, 1 H), 4,14 (m, 1 H), 3,00 (m, 1 H), 2,58 (m, 1 H), 1,94 - 2,10 (m, 3 H), 2,03 (s, 3 H), 1,72 - 1,88 (m, 3 H), 1,43 (s, 9 H), 1,36 (s, 9 H), 1,21 - 1,56 (m, 3 H), e terc-butil- (1S,3R)-3-{(2-acetamido-1-(terc-butilamino)-1-oxo-hex-5-en- 2-il)ciclopentil-bifen-4-ilmetil}-carbamato como uma espuma incolor (360 mg, 67%); 1H RMN (CDCl3, 400 MHz) δ 7,60 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,56 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,46 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,36 (m, 1 H), 7,27 (m (2 Ar-H + NH), 3 H), 6,87 (d, J = 11,5 Hz, NH, 1 H), 5,79 (m, 1 H), 4,98 (m, 2 H), 4,45 (m, 2 H), 4,25 (m, 1 H), 3,04 (m, 1 H), 2,75 (m, 1 H), 2,02 (s, 3 H), 1,76 - 2,00 (m, 3 H), 1,52 - 1,72 (m, 3 H), 1,44 (s, 9 H), 1,35 (s, 9 H), 1,21 - 1,56 (m, 3 H).
Figure img0091
Etapa 6: terc-Butil-(1S,3R)-34[2-acetamido-1-(terc-butilamino)-1-oxo-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan- 2-il)-hexan-2-yUciclopentil-bifen-4-ilmetil}-carbamato.
Uma solução de terc-Butil-(1S,3R)-3- {(2-acetamido-1- (terc-butilamino)-1-oxo-hex-5- en-2-il)ciclopentil-bifen-4- ilmetil}-carbamato (360 mg, 0,63 mmol) em diclorometano (10 ml), foi tratada com dímero de cloro-1,5-ciclooctadieno irídio(I) (13 mg, 3 mol%) e 1,2-bis(difenilfosfino)etano (15 mg, 6 mol%). A solução foi agitada a 0°C por 30 minutos e então 4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolano (0,091 ml, 9,9 mmol) foi adicionado em gotas, e a reação foi então agitada por 1 hr a 0°C e então aquecida de um dia para o outro em temperatura ambiente. A reação foi despejada em água e extraída com acetato de etila (3 x). A fase orgânica combinada foi lavada com cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada e concentrada in vacuo. Purificação por cromatografia instantânea em coluna (sílica gel, 30 -70% acetato de etila em heptano) gerou terc-Butil-(1S,3R)-3-{[2-acetamido-1- (terc-butilamino)-1-oxo-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)-hexan-2-il]ciclopentil-bifen-4-ilmetil}- carbamato como um óleo incolor (319 mg, 72 %); 1H RMN (CDCl3, 400 MHz) δ 7,61 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,55 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,45 (t, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,36 (m, 1 H), 7,26 (m (2 Ar-H + NH), 3 H), 6,85 (d, J = 10,5 Hz, NH, 1 H), 4,46 (m, 2 H), 4,26 (m, 1 H), 2,62 - 2,95 (m, 2 H), 2,00 (s, 3 H), 1,76 - 2,00 (m, 3 H), 1,52 - 1,72 (m, 5 H), 1,43 (s, 9 H), 1,34 (s, 9 H), 1,24 (s, 12 H), 1,21 - 1,36 (m, 2 H), 1,05 (m, 1 H), 0,75 (t, J = 7,5 Hz, 2 H); m/z para C41H62BN3O6 esperado 703,5; encontrado 726,4 (M + Na)+, 704,5 (M + H)+, 648,4 (M + H-iBu)+, 604,1 (M+H-Boc) +.
Figure img0092
Etapa 7: ácido 2-Amino-2-(1R,35)-3-(bifen-4-ilmetilamino)- ciclopentil)-6-boronohexanóico terc-Butil-(1S,3R)-3-{[2-acetamido-1-(terc- butilamino)-1-oxo-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan- 2-il)-hexan-2-il]ciclopentil-bifen-4-ilmetil}-carbamato (310 mg) foi suspenso em 6N ácido clorídrico, e então aquecido, com agitação, a 170°C por 30 minutos em um reator de microondas Biotage. Depois de resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura da reação foi transferida para um funil de separação, diluída com água deionizada (15 ml) e lavada com diclorometano (2 x 15 ml). A camada aquosa foi concentrada para gerar um sólido quase branco que foi purificado por HPLC de fase reversa (10-100% acetonitrila em água). As frações que contêm o produto foram acidificadas com 6N HCl e então concentradas para gerar ácido 2- Amino-2-(1R,35)-3-(bifen-4-ilmetilamino)- ciclopentil)-6-boronohexanóico (78 mg) como seu sal de dicloridrato. 1H RMN (D2O, 400 MHz) δ 7,63 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,59 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,42 (m, 4 H), 7,34 (m, 1 H), 4,14 (m, 2 H), 3,57 (sept, J = 7,5 Hz, 1 H), 2,61 (m, 1 H), 2,00 - 2,41 (m, 3 H), 1,48 - 1,94 (m, 5 H), 1,30 (m, 3 H), 1,11 (m, 1 H), 0,66 (t, J = 7,5 Hz, 2 H); m/z para C24H33BN2O4 esperado 424,3; encontrado 425,2 (M + H)+, 407,2 (M+H-H2O)+, 389,3 (M+H-2H2O)+. Exemplo 43: preparação de ácido 2-Amino-2-(1S,3S)-3-(bifen- 4-ilmetilamino)-ciclopentil)-6-boronohexanóico
Figure img0093
Ácido 2-Amino-2-(1S,35)-3-(bifen-4-ilmetilamino)- iclopentil)-6-borono hexanóico foi preparado em um modo análogo a seu (1R,3S) diaestereoisômero, a partir de um produto menor, terc-Butil-(1S,3S)-3-{(2-acetamido-1-(terc- butilamino)-1-oxo-hex-5-en-2-il)ciclopentil-bifen-4- ilmetil}-carbamato (Exemplo 42), obtido a partir da reação de condensação de Ugi anterior. O produto foi purificado por HPLC de fase reversa (10-100% acetonitrila em água). As frações que contêm o produto foram acidificadas com 6N HCl e então concentradas, para gerar ácido 2-amino-2-(1S,35)-3- (bifen-4-ilmetilamino)-ciclopentil)-6-boronohexanóico (22 mg) como seu sal de dicloridrato. 1H RMN (D2O, 400 MHz) δ 7,67 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,63 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,45 (m, 4 H), 7,36 (m, 1 H), 4,19 (s, 2 H), 3,63 (m, 1 H), 2,42 (m, 1 H), 2,34 (m, 1 H), 2,12 (m, 1 H), 1,92 (m, 1 H), 1,76 (m, 4 H), 1,24 - 1,46 (m, 4 H), 1,13 (m, 1 H), 0,69 (t, J = 7,5 Hz, 2 H); m/z para C24H33BN2O4 esperado 424,3; encontrado 425,1 (M + H)+, 407,3 (M+H-H2O)+, 389,1 (M+H-2H2O)+. Exemplo 44: preparação de ácido 2-Amino-2-(1S,3R)-3-(bifen- 4-ilmetilamino)-ciclopentil)-6-boronohexanóico
Figure img0094
Ácido 2-Amino-2-(1S,3R)-3-(bifen-4-ilmetilamino)- ciclopentil)-6-boronohexanóico foi preparado de modo idêntico ao ácido 2-Amino-2-(1R,3S)-3-(bifen-4- ilmetilamino)-ciclopentil)-6-boronohexanóico com o uso do aminoácido ácido (1S,3R)-3-aminociclopentano carboxílico como o material de partida inicial para a seqüência sintética apontada no Exemplo 42. O composto do título foi isolado como seu sal de dicloridrato (72 mg); 1H RMN (D2O, 400 MHz) δ 7,66 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,62 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,45 (m, 4 H), 7,37 (m, 1 H), 4,19 (m, 2 H), 3,61 (m, 1 H), 2,61 (m, 1 H), 2,05- 2,46 (m, 3 H), 1,50- 1,96 (m, 5 H), 1,32 (m, 3 H), 1,14 (m, 1 H), 0,69 (t, J = 7,5 Hz, 2 H); m/z para C24H33BN2O4 esperado 424,3; encontrado 425,3 (M + H)+, 407,3 (M+H-H2O)+, 389,5 (M+H-2H2O)+. Exemplo 45: preparação de ácido 2-amino-6-borono-2-{(1R, 5S)-8-(4-clorobenzil)-8-aza-biciclo[3.2.1]-octan-3-il}- hexanóico
Figure img0095
Etapa 1: terc-butil 3-(metoxi(metil)carbamoil)-8-azabiciclo [3 .2. 1]-octano-8- carboxilato
EDC (2,99 g, 15,6 mmol) foi adicionado em porções a uma solução agitada de ácido (1R,5S)-8-(terc- butoxicarbonil)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-3-carboxílico, (2,0 g, 7,8 mmol), DMAP (10 mg), e N,O-dimetilhidroxilamina cloridrato (1,52 g, 15,6 mmol) em diclorometano (20 ml). Trietilamina (4,37 ml, 31,33 mmol) foi adicionada em gotas, e a mistura da reação foi agitada em temperatura ambiente de um dia para o outro. A solução resultante foi despejada em água, e extraída com acetato de etila (3 x). A fase orgânica combinada foi lavada com cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada e concentrada in vacuo para gerar terc-butil 3- (metoxi(metil)carbamoil)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8- carboxilato (1,7 g, 73%) como um óleo incolor, que foi usado sem purificação adicional; m/z para C15H26N2O4 esperado 298,2; encontrado 321,3 (M + Na)+, 299,3 (M + H)+.
Figure img0096
Etapa 2: terc-butil 3-pent-4-enoil-8-azabiciclo[3.2.1]- octano-8-carboxilato
Sob uma atmosfera de nitrogênio, uma solução de terc- butil 3-(metoxi(metil)carbamoil)-8-azabiciclo[3.2.1]octano- 8-carboxilato (1,7 g, 5,7 mmol), em tetrahidrofurano (25 ml) foi resfriada a 0°C e tratada com brometo de 3- butenilmagnésio (0,5 M em THF, 28,5 ml, 14,3 mmol) em gotas. A solução foi agitada por 1 hora a 0°C então aquecida até a temperatura ambiente de um dia para o outro. A solução resultante foi despejada em água, acidificada ao pH 3-4 com 1 N ácido clorídrico, e extraída com acetato de etila (3 x). A fase orgânica combinada foi lavada com cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada e concentrada in vacuo. Purificação por cromatografia instantânea em coluna (sílica gel, 0-25% acetato de etila em heptano) gerou ácido (1R,5S)-terc-Butil-3-pent-4-enoil-8-azabiciclo[3.2.1]- octano-8-carboxílico como um óleo incolor (1,45 g, 87 %); 1H RMN (CDCl3, 400 MHz) δ 5,81 (m, 1 H), 5,01 (m, 2 H), 4,29 (br s, 2 H), 2,83 (m, 1 H), 2,53 (t, J = 7,5 Hz, 1 H), 2,32 (q, J = 7 Hz, 2 H), 2,03 (m, 2 H), 1,83 (t, J = 12,5 Hz, 2 H), 1,60- 1,71 (m, 5 H) e 1.48 (s, 9 H); m/z para C17H27NO3 esperado 293,2; encontrado 316,3 (M + Na)+, 294,3 (M + H)+.
Figure img0097
Etapa 3: ácido (1R,5S)-terc-Butil-3-(2-acetamido)-1-(terc- butilamino)-1-oxo-hex-5-en-2-il)-8-azabiciclo[3.2.1]- octano-8-carboxílico
Uma solução de ácido (1R,55)-terc-butil-3-pent-4- enoil-8-azabiciclo[3.2.1]-octano-8-carboxílico (1,45 g, 4,95 mmol) e acetato de amônio (3,82 g, 49,5 mmol) em 2,2,2-trifluoretanol (4 ml) foi tratada com terc-butil isocianeto (2,06 g, 2,60 ml, 24,75 mmol). Depois de agitação em temperatura ambiente por 3 dias, a mistura da reação foi adicionada a um funil de separação, diluída com água (20 ml) e extraída com acetato de etila (2 x 20 ml). A camada orgânica foi lavada com cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada. Purificação por cromatografia instantânea em coluna (sílica gel, 10-60% acetato de etila em heptano) gerou ácido (1R,5S)-terc-Butil-3(2-acetamido)-1-(terc-butilamino)-1- oxo-hex-5-en-2-il)-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxílico como uma espuma incolor (1,91 g, 89 %).; 1H RMN (CDCl3, 400 MHz) δ 6,90 (s, NH, 1 H), 5,79 (m, 1 H), 5,59 (s, NH, 1 H), 4,98 (m, 2 H), 4,15 (m, 2 H), 2,93 (m, 2 H), 2,07 (m, 1 H), 2,00 (s, 3 H), 1,74 - 1,96 (m, 3 H), 1,50 - 1,72 (m, 6 H), 1,45 (s, 9 H), 1,38 (s, 9 H), 1,20 - 1,36 (m, 1 H).
Figure img0098
Etapa 4: ácido (1R,5S)-terc-Butil-342-acetamido)-1-(terc- butilamino)-1-oxo-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan- 2-il)-hexan-2-il}-8-azabiciclo[3.2.1]-octano-8-carboxílico
Uma solução de ácido (1R,55)-terc-Butil-3(2- acetamido)-1-(terc-butilamino)-1-oxo-hex-5-en-2-il)-8- azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxílico (1,91 g, 4,4 mmol) em diclorometano (30 ml), foi tratada com cloro-1,5- ciclooctadieno irídio (I) dímero (88 mg, 3 mol%) e 1,2- bis(difenilfosfino)etano (105 mg, 6 mol%). A solução foi agitada a 0°C por 30 minutos e então 4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2]dioxaborolano (0,96 ml, 6,6 mmol) foi adicionado em gotas, e a reação foi então agitada por 1 hr a 0°C e então aquecida de um dia para o outro em temperatura ambiente. A reação foi despejada em água e extraída com acetato de etila (3 x). A fase orgânica combinada foi lavada com cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada e concentrada in vacuo. Purificação por cromatografia instantânea em coluna (sílica gel, 30 - 70% acetato de etila em heptano) gerou ácido (1R,55)-terc-Butil-3-{2-acetamido)-1-(terc-butilamino)-1- oxo-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-hexan-2- il}-8-azabiciclo[3.2.1]-octano-8-carboxílico como um óleo incolor (1,9 g, 77 %); m/z para C30H54BN3O6 esperado 563,4; encontrado 586,2 (M + Na)+, 564,2 (M + H)+, 508,5 (M + H- iBu)+.
Figure img0099
Etapa 5: 2-acetamido-2-{(1R,5S)-8-azabiciclo [3.2.1]-octan- 3-il}-N-terc-butil-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)-hexanamida 4N de Cloreto de hidrogênio em dioxano (0,94 ml, 3,76 mmol) foram adicionados a uma solução agitada de ácido
(1R,5S)-terc-Butil-3-{2-acetamido)-1-(terc-butilamino)-1- oxo-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-hexan-2- il}-8-azabiciclo[3.2.1]octano-8-carboxílico (400 mg, 0,75 mmol) em dioxano (2 ml). A solução foi agitada por 2 hrs em temperatura ambiente e então concentrada in vacuo para gerar uma espuma incolor. A espuma foi dissolvido em uma mistura de acetato de etila (20 ml) e solução saturada de NaHCO3 (20 ml) e agitada por 5 minutos. As fses foram separadas; a fase aquosa foi também extraída com acetato de etila (3 x 10 ml). A fase orgânica combinada foi lavada com cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre sulfato de magnésio anidro, filtrada e concentrada in vacuo para gerar 2-acetamido-2-{(1R,5S)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il}-N- terc-butil-6-(4,4,5 ,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)- hexanamida que foi usada sem purificação adicional (340 mg, 97%).; 1H RMN (CDCl3, 400 MHz) δ 6,71 br s, NH, (1 H), 5,71 (s, NH, 1 H), 3,70 (m, 1 H), 3,58 (m, 1 H), 3,48 (br s, NH, 1 H), 2,74 (t, J = 7,5 Hz, 1 H), 2,45 (m, 1 H), 1,93 (s, 3 H), 1,48 - 1,76 (m, 5 H), 1,11 - 1,46 (m, 8 H), 1,30 (s, 9 H), 1,16 (s, 12 H), 0,67 (t, J = 7,5 Hz, 2 H); m/z para C25H46BN3O4 esperado 463,4; encontrado 464,4 (M + H)+.
Figure img0100
Etapa 6: 2-acetamido-N-terc-butil-2-{(1R,5S)-8-(4- clorobenzil)-8-azabiciclo[3.2.yoctan-3-il}-6-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-hexanamida
Uma solução de 2-acetamido-2-{(1R,5S)-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ilI-N-terc-butil-6-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-hexanamida (170 mg, 0,37 mmol) e 4-clorobenzaldeído (104 mg, 0,74 mmol) e ácido acético (44 mg, 41 μl, 0,74 mmol) em 1,2-dicloroetano (1 ml) foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos e então tratada com sódio triacetoxiborohidreto (196 mg, 0,93 mmol). Depois de 24 horas, a mistura da reação foi extinta com bicarbonato de sódio aquoso saturado (10 ml), diluída com cloreto de sódio saturado aquoso (20 ml) e extraída com diclorometano (3 x 20 ml). A fase orgânica combinada foi coletada, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada para gerar 2-acetamido-N-terc-butil-2-{(1R,5S)-8-(4- clorobenzil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il}6-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-hexanamida como um óleo amarelo pálido que foi usado imediatamente na próxima etapa; m/z para C32H51BClN3O4 esperado 587,4; encontrado 589,7 (M + H(37Cl))+, 588,0 (M + H(35Cl))+.
Figure img0101
Etapa 7: ácido 2-Amino-6-borono-2-{(1R,5S)-8-(4- clorobenzil)-8-aza-biciclo[3.2.1]- octan-3-il}-hexanóico
A solução de 2-acetamido-N-terc-butil-2-{(1R,55)-8-(4- clorobenzil)-8-aza-biciclo[3.2.1]octan-3-il}-6-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-hexanamida, obtida na etapa prévia, foi suspensa em 6N ácido clorídrico, e foi então aquecida, com agitação, a 170°C por 30 minutos em um reator de microondas Biotage. Depois de resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura da reação foi transferida para um funil de separação, diluída com água deionizada (15 ml) e lavada com diclorometano (2 x 15 ml). A camada aquosa foi concentrada para gerar um sólido quase branco que foi purificado por HPLC de fase reversa (10-100% acetonitrila em água). As frações que contêm o produto foram acidificadas com 6N HCl e então concentradas para gerar ácido 2-Amino-6-borono-2-{(1R,5S)-8-(4-clorobenzil)-8-aza- biciclo[3.2.1]-octan-3-il}-hexanóico (29 mg,) como seu sal de dicloridrato. 1H RMN (D2O, 400 MHz) δ 7,45 (d, J = 8 Hz, 2 H), 7,41 (d, J = 8 Hz, 2 H), 4,11 (s, 2 H), 3,98 (s, 2 H), 2,35 (m, 3 H), 1,90- 2,05 (m, 4 H), 1,62- 1,82 (m, 4 H), 1,33 (m, 3 H), 1,12 (m, 1 H) e 0.71 (t, J = 7 Hz, 2 H); mlz for C20H30BClN2O4 esperado 408,2; encontrado 409,2 (M + H)+, 391,3 (M+H-H2O)+, 373,3 (M+H-2 H2O)+. Exemplo 46: preparação de ácido 2-Amino-6-borono-2-{(1R, 5S)-8-(3,4-diclorobenzil)-8-aza-biciclo[3.2.1]-octan-3-il}- hexanóico
Figure img0102
Etapa 1: 2-acetamido-N-terc-butil-2-(8-(3,4-diclorobenzil)- 8-azabiciclo[3.2.yoctan-3-il)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)hexanamida
Uma solução de 2-acetamido-2-{(1R,5S)-8- azabiciclo[3.2.1]octan-3-ilI-N-terc-butil-6-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-hexanamida (170 mg, 0,37 mmol) e 3,4-diclorobenzaldeído (129 mg, 0,74 mmol) e ácido acético (44 mg, 41 μl, 0,74 mmol) em 1,2-dicloroetano (1 ml) foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos então tratada com sódio triaetoxiborohidreto (196 mg, 0,93 mmol). Depois de 24 horas, a mistura da reação foi extinta com bicarbonato de sódio aquoso saturado (10 ml), diluída com cloreto de sódio saturado aquoso (20 ml) e extraída com diclorometano (3 x 20 ml). A fase orgânica combinada foi coletada, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada para gerar 2-acetamido-N-terc-butil-2-{(1R,5S)-8-(3,4- diclorobenzil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il}-6-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-hexanamida como um óleo amarelo pálido que foi usado imediatamente na próxima etapa; m/z para C32H50BCl2N3O4 esperado 621,3; encontrado 644,5 (M + Na(35Cl))+, 622,1 (M + H(35Cl))+.
Figure img0103
Etapa 2: ácido 2-Amino-6-borono-2-{(1R, 55)-8-(3,4- diclorobenzil)-8-aza-biciclo[3.2.11- octan-3-il}-hexanóico
A solução de 2-acetamido-N-terc-butil-2-{(1R,5S)-8- (3,4-diclorobenzil)-8-aza-biciclo[3.2.1]octan-3-il}-6- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)-hexanamida, obtida na etapa prévia, foi suspensa em 6N ácido clorídrico, e foi então aquecida, com agitação, a 170°C por 30 minutos em um reator de microondas Biotage. Depois de resfriamento até a temperatura ambiente, a mistura da reação foi transferida para um funil de separação, diluída com água deionizada (15 ml) e lavada com diclorometano (2 x 15 ml). A camada aquosa foi concentrada para gerar um sólido quase branco que foi purificado por HPLC de fase reversa (10-100% acetonitrila em água). As frações que contêm o produto foram acidificadas com 6N HCl e então concentradas para gerar ácido 2-Amino-6-borono-2-{(1R, 5S)- 8-(3,4-diclorobenzil)-8-aza-biciclo[3.2.1]-octan-3-il}- hexanóico (28 mg,) como seu sal de dicloridrato. 1H RMN (D2O, 400 MHz) δ 7,62 (d, J = 2 Hz, 1 H), 7,57 (d, J = 8,5 Hz, 1 H ), 7,35 (dd, Ji = 8,5 Hz , J1= 2 Hz, 1 H), 4,11 (s, 2 H), 3,99 (br s, 2 H), 2,38 (m, 3 H), 1,88 - 2,05 (m, 4 H), 1,65- 1,85 (m, 4 H), 1,33 (m, 3 H), 1,14 (m, 1 H) e 0,71 (t, J = 7 Hz, 2 H); m/z para C20H29BCl2N2O4 esperado 442.2; encontrado 443,2 (M + H)+, 425,1 (M+H-H2O)+, 407,2 (M+H-2 H2O)+. Exemplo 47: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2-41s,3R)-3-(4-fenilciclohexilamino)ciclobutil)hexanóico
Figure img0104
(S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-(4-fenilciclohexilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 4-fenilciclohexanecarbaldeído ter sido usado como o aldeído na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,46 - 7,10 (m, 5 H), 3,74 (m, 1 H), 3,42 - 3,07 (m, 1 H), 2,76 - 2,26 (m, 5 H), 2,14 - 1,96 (m, 2 H), 1,96 - 1,60 (m, 8 H), 1,60 - 1,43 (m, 1 H), 1,43 - 1,24 (m, 3 H), 1,24 - 1,03 (m, 1 H), 0,72 (t, J = 8,0 Hz, 2 H). MS encontrado para C22H35BN2O4 m/z [403(M + 1)]. Exemplo 48: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2-41s,3R)-3-((2-fluorbifenil-3-il)metilamino)ciclobutil) hexanóico (racêmico)
Figure img0105
Ácido (S)-2-amino-6-borono-2-41s,3R)-3-((2-fluorbifenil-3-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 2-fluorbifenil-4-carbaldeído ter sido usado como o aldeído na etapa 6. 1H RMN (D2O) δ 7,63 - 7,34 (m, 6 H), 7,23 - 7,10 (m, 2 H), 4,11 (s, 2 H), 3,63 (m, 1 H), 2,62 - 2,23 (m, 4 H), 2,10 - 1,80 (m, 2 H), 1,74 - 1,60 (m, 1 H), 1,40 - 1,07 (m, 4 H), 0,71 (m, 2 H). MS encontrado para C23H30BFN2O4 m/z [429(M + 1)]. Exemplo 49: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2-41s,3R)-3-((4’-cloro-3-fluorbifenil-4-il)metilamino) ciclobutil)hexanóico
Figure img0106
Etapa 1: 4'-Cloro-2-flúor-bifenil-4-carbaldeído Ácido 2-flúor-4-formilfenil borônico (263 mg, 1,57 mmol) foi adicionado à mistura de 1-cloro-4-iodobenzeno (250 mg, 1,05 mmol), PdCl2(PPh3)2 (36 mg, 0,5 mmol), e dicarbonato de sódio (332 mg, 3,13 mmol) em uma solução de água (1 ml) e dioxano (2 ml). a mistura reagiu a 130°C por 22 min em um reator de microondas. Após resfriamento, água foi adicionada, e a mistura foi extraída com etilacetato. O solvente orgânico foi seco sobre Na2SO4, filtrado, e concentrado. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna em sílica gel, eluindo com acetato de etila em heptano para gerar o composto do título (220 mg, 0,94 mmol, 90%) como um sólido branco. 1H RMN (D2O) δ 10,02 (s, 1 H), 7,75 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,67 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 7,60 (t, J = 7,5 Hz, 1 H), 7,53 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 7,46 (d, J = 8,3 Hz, 2 H).
Figure img0107
Etapa 2: ácido (S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((4'- cloro-3-fluorbifenil-4-il)metilamino)ciclobu Ohexanóico
Ácido (S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((4'-cloro-3- fluorbifenil-4-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 4'-Cloro-2-flúor-bifenil-4- carbaldeído ter sido usado como o aldeído na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,50 - 7,29 (m, 7 H), 4,14 (s, 2 H), 3,64 (m, 1 H), 2,61 — 2,22 (m, 4 H), 1,98 (m, 1 H), 1,90 - 1,77 (m, 1 H), 1,64 (m, 1 H), 1,37 - 1,21 (m, 3 H), 1,18 - 1,04 (m, 1 H), 0,67 (t, J = 7,1 Hz, 2 H). MS encontrado para C23H29BClFN2O4 m/z[463(M + 1)]. Exemplo 50: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- 41s,3R)-3-((4’-cloro-2,3-difluorbifenil-4-il)metilamino) ciclobutil)hexanóico (racêmico)
Figure img0108
Ácido (S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((4'-cloro- 2,3-difluorbifenil-4-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico (racêmico) foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 4'-cloro-2,3- difluorbifenil-4-carbaldeído ter sido usado como o aldeído na etapa 6 e este foi preparado com o uso do método descrito no Exemplo 49, Etapa 1. 1H RMN (D20) δ 7,46 (dd, J = 20.0, 8,0 Hz, 4 H), 7,25 (m, 2 H), 4,22 (s, 2 H), 3,68 (m, 1 H), 2,64 - 2,26 (m, 4 H), 2,00 (q, J = 10,0 Hz, 1 H), 1,87 (m, 1 H), 1,66 (m, 1 H), 1,41 - 1,22 (m, 3 H), 1,20 - 1,06 (m, 1 H), 0,70 (t, J = 7,6 Hz, 2 H). MS encontrado para C23H28BClF2N2O4 m/z[481(M + 1)]. Exemplo 51: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- 41s,3R)-3-((4’-cloro-2-fluorbifenil-4-il)metilamino) ciclobutil)hexanóico
Figure img0109
Ácido (S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((4'-cloro-2- fluorbifenil-4-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico (racêmico) foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 4'-cloro-2- fluorbifenil-4-carbaldeído ter sido usado como o aldeído na etapa 6 e este foi preparado com o uso do método descrito no Exemplo 49, Etapa 1. 1H RMN (D20) δ 7,43 - 7,18 (m, 7 H), 4,10 (s, 2 H), 3,64 (m, 1 H), 2,62 - 2,28 (m, 4 H), 2,03 (q, J = 10,0 Hz, 1 H), 1,92 - 1,78 (m, 1 H), 1,67 (d, J = 12,0 Hz, 1 H), 1,41 - 1,24 (m, 3 H), 1,23 - 1,08 (m, 1 H), 0,72 (t, J = 8,0 Hz, 2 H). MS encontrado para C23H29BClFN2O4 m/z [463(M + 1)]. Exemplo 52: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-((2,2'-diflúor-5'-metilbifenil-4- il)metilamino)ciclobutil)hexanóico
Figure img0110
Ácido (S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((2,2'- diflúor-5'-metilbifenil-4-l)metilamino)ciclobutil)hexanóico (racêmico) foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 2,2'-diflúor-5'- metilbifenil-4-carbaldeído ter sido usado como o aldeído na etapa 6 e este foi preparado com o uso do método descrito no Exemplo 49, Etapa 1. 1H RMN (D20) δ 7,46 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,36 - 7,18 (m, 4 H), 7,12 (d, J = 9,3 Hz, 1 H), 4,19 (s, 2 H), 3,71 (m, 1 H), 2,70 - 2,35 (m, 4 H), 2,31 (s, 3 H), 2,05 (q, J = 10,0 Hz, 1 H), 1,93 (m, 1 H), 1,72 (m, 1 H), 1,47 - 1,29 (m, 3 H), 1,27 - 1,11 (m, 1 H), 0,76 (t, J = 7,1 Hz, 2 H). MS encontrado para C24H31BF2N2O4 m/z[461(M + 1)]. Exemplo 53: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((2,4'-difluorbifenil-4-il)metilamino) ciclobutil)hexanóico (racêmico)
Figure img0111
Ácido (S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((2,4'- difluorbifenil-4-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico (racêmico) foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 2,4'-difluorbifenil-4- carbaldeído ter sido usado como o aldeído na etapa 6 e este foi preparado com o uso do método descrito no Exemplo 49, Etapa 1. 1H RMN (D20) δ 7,52 - 7,36 (m, 3 H), 7,32 - 7,21 (m, 2 H), 7,12 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 4,13 (s, 2 H), 3,67 (qt, J = 8,0 Hz, 1 H), 2,67 - 2,29 (m, 4 H), 2,05 (q, J = 10,0 Hz, 1 H), 1,96 - 1,83 (m, 1 H), 1,71 (d, J = 12,0 Hz, 1 H), 1,44 - 1,26 (m, 3 H), 1,26 - 1,08 (m, 1 H), 0,73 (t, J = 8,0 Hz, 2 H). MS encontrado para C23H29BF2N2O4 m/z [447(M + 1)]. Exemplo 54: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-((2,2'-difluorbifenil-4-il)metilamino) ciclobutil)hexanóico (racêmico)
Figure img0112
Ácido (S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((2,2'- difluorbifenil-4-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico (racêmico) foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 2,2'-difluorbifenil-4- carbaldeído ter sido usado como o aldeído na etapa 6 e este foi preparado com o uso do método descrito no Exemplo 49, Etapa 1. 1H RMN (D20) δ 7,53 - 7,38 (m, 3 H), 7,36 - 7,19 (m, 4 H), 4,18 (s, 2 H), 3,70 (qt, J = 8,0 Hz, 1 H), 2,67 - 2,30 (m, 4 H), 2,06 (q, J = 10,0 Hz, 1 H), 1,99 - 1,86 (m, 1 H), 1,73 (t, J = 12,0 Hz, 1 H), 1,46 - 1,28 (m, 3 H), 1,27 - 1,12 (m, 1 H), 0,76 (t, J = 8,0 Hz, 2 H). MS encontrado para C23H29BF2N2O4 m/z [447(M + 1)]. Exemplo 55: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((2,2',4'-trifluorbifenil-4-il)metilamino) ciclobutil)hexanóico
Figure img0113
Ácido (S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((2,2',4'-trifluorbifenil-4-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico (racêmico) foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 2,2',4'- trifluorbifenil-4-carbaldeído ter sido usado como o aldeído na etapa 6 e este foi preparado com o uso do método descrito no Exemplo 49, Etapa 1. 1H RMN (D20) δ 7,49 - 7,23 (m, 4 H), 7,07 - 6,96 (m, 2 H), 4,18 (s, 2 H), 3,70 (qt, J = 8,0 Hz, 1 H), 2,70 - 2,30 (m, 4 H), 2,06 (q, J = 10,0 Hz, 1 H), 1,99 - 1,85 (m, 1 H), 1,73 (t, J = 12,0 Hz, 1 H), 1,45 - 1,28 (m, 3 H), 1,26 - 1,11 (m, 1 H), 0,75 (t, J = 8,0 Hz, 2 H). MS encontrado para C23H28BF3N2O4 m/z [465(M + 1)]. [Exemplo 56: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-(3-(4-(trifluormetil)fenil)propilamino) ciclobutil)hexanóico
Figure img0114
Ácido (S)-2-Amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-(3-(4- (trifluormetil)fenil)propilamino)ciclobutil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 3-(4-(trifluormetil)fenil)propanal ter sido usado como o aldeído na etapa 6. 1H RMN (D2O, 300 MHz) δ 7,58 (d, J =7 .7 Hz, 2 H), 7,34 (d, J = 7,9 Hz, 2 H), 3,59 - 3,51 (m, 1 H), 2,85 (t, J = 7,6 Hz, 2 H), 2,70 (t, J = 7,4 Hz, 2 H), 2,54 - 2,21 (m, 4 H), 1,98 - 1,82 (m, 4 H), 1,66 - 1,59 (m, 1 H), 1,36 - 1,25 (m, 3 H), 1,13 - 1,08 (m, 1 H), 0,70 (t, J = 7,0 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C20H30BF3N2O4 m/z [431,4 (M+1)]. Exemplo 57: preparação de ácido (S)-2-amino-2-41s,3R)-3-(4- benzilbenzilamino)ciclobutil)-6-boronohexanóico
Figure img0115
Ácido (S)-2-amino-2-41s,3R)-3-(4-benzilbenzilamino) ciclobutil)-6-boronohexanóico (racêmico) foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 4-benzilbenzaldeído ter sido usado como o aldeído na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,40 - 7,23 (m, 9 H), 4,11 (s, 2 H), 4,02 (s, 2 H), 3,66 (qt, J = 8,0 Hz, 1 H), 2,66 - 2,26 (m, 4 H), 2,06 - 1,85 (m, 2 H), 1,72 (t, J = 12,0 Hz, 1 H), 1,48 - 1,30 (m, 3 H), 1,27 - 1,13 (m, 1 H), 0,79 (t, J = 7,8 Hz, 2 H). MS encontrado para C24H33BN2O4 m/z [425(M + 1)]. Exemplo 58: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((4’-cloro-3,5-difluorbifenil-4-il)metilamino) ciclobutil)hexanóico
Figure img0116
Ácido (S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((4'-cloro-3,5-difluorbifenil-4-il)metilamino)ciclobutil)hexanóico (racêmico) foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 4'-cloro-3,5- difluorbifenil-4-carbaldeído ter sido usado como o aldeído na etapa 6 e este foi preparado com o uso do método descrito no Exemplo 49, Etapa 1. 1H RMN (D20) δ 7,59 (d, J = 7,7 Hz, 2 H), 7,48 (d, J = 7,7 Hz, 2 H), 7,36 (s, 1 H), 7,34 (s, 1 H), 4,30 (s, 2 H), 3,78 (qt, J = 8,0 Hz, 1 H), 2,73 - 2,34 (m, 4 H), 2,08 (q, J = 10,0 Hz, 1 H), 2,01 - 1,88 (m, 1 H), 1,81 - 1,68 (m, 1 H), 1,49 - 1,31 (m, 3 H), 1,29 - 1,14 (m, 1 H), 0,78 (t, J = 8,0 Hz, 2 H). MS encontrado para C23H28BClF2N2O4 m/z[481(M + 1)]. Exemplo 59: preparação de ácido 4-(4-(((1r,3S)-3-((S)-1- amino-5-borono-1-carboxipentil)ciclobutilamino)metil) piperidin-1-il)benzóico
Figure img0117
Ácido 4-(4-(((lR,3 s)-3 -((S)-1-amino-5 -borono-l-carboxipentil)ciclobutilamino)metil)piperidin-1-il)benzóico (racêmico) foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por ácido 4-(4- formylpiperidin-1-il)benzóico ter sido usado como o aldeído na etapa 6. 1H RMN (D2O) δ 8,21 (d, J = 8,0 Hz, 2 H), 7,74 (d, J = 8,0 Hz, 2 H), 3,89 - 3,80 (m, 2 H), 3,78 - 3,66 (m, 3 H), 3,04 (d, J = 6,4 Hz, 2 H), 2,72 - 2,36 (m, 4 H), 2,34 - 2,18 (m, 3 H), 2,15 - 2,04 (m, 1 H), 2,04 - 1,92 (m, 1 H), 1,91 - 1,71 (m, 3 H), 1,51 - 1,32 (m, 3 H), 1,29 - 1,16 (m, 1 H), 0,78 (t, J = 7,4 Hz, 2 H). MS encontrado para C23H36BN3O6 m/z[444(M -H2O + 1)]. Exemplo 60: preparação de ácido (S)-2-amino-6-borono-2- ((1s,3R)-3-((1-(4-(trifluormetil)fenil)piperidin-4- il)metilamino)ciclobutil)hexanóico
Figure img0118
Ácido (S)-2-amino-6-borono-2-((1s,3R)-3-((1-(4-(trifluormetil)fenil)piperidin-4-il)metilamino)ciclobutil) hexanóico (racêmico) foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, exceto por 1-(4- (trifluormetil)fenil)piperidina-4-carbaldeído ter sido usado como o aldeído na etapa 6. 1H RMN (D20) δ 7,94 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 7,80 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 3,86 - 3,77 (m, 2 H), 3,77 - 3,65 (m, 3 H), 3,06 (d, J = 6,4 Hz, 2 H), 2,71 - 2,34 (m, 4 H), 2,32 - 2,15 (m, 3 H), 2,13 - 2,02 (m, 1 H), 2,02 - 1,91 (m, 1 H), 1,90 - 1,68 (m, 3 H), 1,49 - 1,30 (m, 3 H), 1,28 - 1,13 (m, 1 H), 0,78 (t, J = 7,4 Hz, 2 H). MS encontrado paraC23H35BF3N3O4 m/z[485(M + 1)]. Exemplo 61: preparação de ácido 2-amino-2-(8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-6-boronohexanóico
Figure img0119
Ácido 2-Amino-2-(8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-6-boronohexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 45, exceto pela etapa 6 ter sido eliminada. 1H RMN (D2O, 400 MHz) δ 4,01 (s, 2H), 2,41 — 2,28 (m, 1H), 2,11 - 1,58 (m, 10H), 1,40 - 1,24 (m, 3H), 1,19 - 1,04 (m, 1H), 0,69 (t, J = 6,4, 2H). MS encontrado para C13H25BN2O4 m/z[285(M + 1)]. Exemplo 62: preparação de ácido 2-amino-2-(8-benzil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-6-boronohexanóico
Figure img0120
Ácido 2-Amino-2-(8-benzil-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3- il)-6-boronohexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 45, exceto por benzaldeído ter sido usado como o aldeído na etapa 6. 1H RMN (D2O, 400 MHz) δ 7,51 (s, 5H), 4,19 (s, 2H), 4,05 (s, 2H), 2,55 — 2.35 (m, 3H), 2,13- 1,65 (m, 8H), 1,49 - 1,30 (m, 3H), 1,28 - 1,10 (m, 1H), 0,77 (t, J = 6,9, 2H). MS encontrado para C20H31BN2O4 m/z[375(M + 1)]. Exemplo 63: preparação de ácido 2-amino-6-borono-2-(8-(3,4- difluorobenzil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)hexanóico
Figure img0121
Ácido 2-Amino-6-borono-2-(8-(3,4-difluorbenzil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il) hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 45, exceto por 3,4-difluorbenzaldeído ter sido usado como o aldeído na etapa 6. 1H RMN (D2O, 400 MHz) δ 7,50 - 7,24 (m, 5H), 4,16 (s, 2H), 4,04 (s, 2H), 2,55 - 2,31 (m, 3H), 2,12- 1,66 (m, 8H), 1,47 - 1,27 (m, 3H), 1,26 - 1,10 (m, 1H), 0,75 (t, J = 6,9, 2H). MS encontrado para C20H29BF2N2O4 m/z[411(M + 1)]. Exemplo 64: preparação de ácido 2-amino-6-borono-2-(8-(4- (trifluormetoxi)benzil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3- il)hexanóico
Figure img0122
Ácido 2-Amino-6-borono-2-(8-(4- (trifluormetoxi)benzil)-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3- il)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 45, exceto por 4- trifluormetoxibenzaldeído ter sido usado como o aldeído na etapa 6. 1H RMN (D2O, 400 MHz) δ 7,62 (d, J = 7,9, 2H), 7,44 (d, J = 7,9, 2H), 4,24 (s, 2H), 4,07 (s, 2H), 2,57 - 2,37 (m, 3H), 2,16 - 1,70 (m, 8H), 1,53 - 1,32 (m, 3H), 1,31 - 1,13 (m, 1H), 0,79 (t, J = 7,0, 2H). MS encontrado para C21H30BF3N2O5 m/z[459(M + 1)]. Exemplo 65: preparação de ácido (S)-2-amino-2-((1s,3R)-3- (2-(bifenil-4-il)etilamino)ciclobutil)-6-boronohexanóico
Figure img0123
Ácido (S)-2-Amino-2-((1s,3R)-3-(2-(bifenil-4- il)etilamino)ciclobutil)-6-boronohexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 27, exceto por ácido (S)-2-amino-6-borono-2-isopropilhexanóico ter sido usado como a amina na etapa 6. 1H RMN (D2O, 300 MHz) δ 7,70 - 7,61 (m, 5 H), 7,51 - 7,44 (m, 2 H), 7,41 - 7,34 (m, 2 H), 3,60 - 3,51 (m, 1 H), 3,50 - 3,17 (m, 2 H), 3,03 - 2,93 (m, 2 H), 2,52 - 2,25 (m, 4 H), 1,97 - 1,75 (m, 2 H), 1,64 - 1,53 (m, 1 H), 1,39 - 1,22 (m, 3 H), 1,16 - 1,07 (m, 1 H), 0,70 (t, J = 7,2 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C24H33BN2O4 m/z [425,1 (M+1)]. Exemplo 66: preparação de ácido (R)-2-amino-6-borono-2-(2- (2,3-dihidro-1H-inden-2-ilamino)etil)hexanóico
Figure img0124
Etapa 1: 2-(4-bromobutil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolano
Depois de leve aqueicmento até a fusão, ácido 4-bromo- 1-butilborônico catecol éster (112,2 g, 0,44 mol, 1,0 equiv), enquanto sob uma corrente de nitrogênio, foi adicionado a um frasco de fundo redondo de 500 ml com 3 gargalos, diluído com THF recém destilado (150 ml, 3,0 M) e tratado com pinacol (104,0 g, 0,88 mol, 2 equiv) em uma porção. Depois de agitação por 16 h sob uma atmosfera de nitrogênio a solução resultante foi concentrada. O produto bruto foi diluído com heptano (500 ml) e resfriado em uma banho de água gelada. Depois de 1 h, o catecol precipitado foi removido por filtração e a solução restante foi filtrada através de um plugue curto de sílica gel (500 g) umedecido com heptano. Depois de eluir com soluções de 5% acetato de etila em heptano (700 ml) e 10% acetato de etila em heptano (700 ml), o filtrado foi concentrado para gerar 2-(4-bromobutil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano como um óleo incolor (112,7 g, 97%). 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) δ 3.38 (t, J = 6,6 Hz, 2 H), 1,90 - 1,78 (m, 2 H), 1,58 - 1,44 (m, 2 H), 1,26 (s, 12 H), 0,78 (t, J = 7,5 Hz, 2 H) ; ESI-LCMS m/z calc. para C10H20BBrO2: esperado 262,1; encontrado 263,1 (M + H)+.
Figure img0125
Etapa 2: 2-(4-iodobutil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolano
Sob uma atmosfera de nitrogênio, uma solução de 2-(4- bromobutil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (46,2 g, 0,176 mol, 1,0 equiv) e iodeto de sódio (52,8 g, 0,35 mol, 2 equiv) em acetona (176 ml, 1,0 M) foi aquecida a 50°C por 4 h. Depois de resfriamento até a temperatura ambiente a solução foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi diluído com heptano (200 ml) e filtrado através de um plugue curto de sílica gel (300 g) umedecido com heptano. Depois de eluir com uma solução de 10% acetato de etila em heptano (500 ml) o filtrado foi concentrado para gerar 2-(4-iodobutil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolano como um óleo incolor (53,5 g, 98%). 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) δ 3,18 (t, J = 7,2 Hz, 2 H), 1,90 - 1,78 (m, 2 H), 1,58- 1,44 (m, 2 H), 1,24 (s, 12 H), 0,79 (t, J = 7,5 Hz, 2 H); ESI-LCMS m/z calc. para C10H20BIO2: esperado 310,1; encontrado 311,1 (M + H)+.
Figure img0126
Etapa 3: (3R, 5R, 65)-terc-butil 2-oxo-5,6-difenil-3-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil) morfolina-4-carboxilato
Uma solução de (2S,3R)-terc-butil 6-oxo-2,3- difenilmorfolina-4-carboxilato (4,69 g, 13.27 mmol) e 2-(4- iodobutil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (d 1,38, 5,96 ml, 8,23 g, 26,5 mmol, 2 equiv) em THF (66 ml, 0,2 M) e HMPA (6,6 ml) foi resfriado a -78°C e tratada com sódio bis(trimetilsilil)amida (14,6 ml, 1,0 M, 1,1 equiv) em gotas por 5 minutos e agitada por 1 h. depois de aquecimento até a temperatura ambiente e agitação por mais 2 h, a solução foi resfriada a 0°C e extinta com 0,5 N HC (2-3 equiv). A solução resultante foi diluída com heptano e lavada sucessivamente com água e NaCl aquoso saturado, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada. Purificação por MPLC (1-60% acetato de etila em heptano em 6 CV) gerou (3R,5R,6S)-terc-butil 2-oxo-5,6-difenil-3-(4-(4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil)morfolina-4- carboxilato como um sólido branco (6,66 g, 94%); ESI-LCMS m/z calc. para C31H42BNO2: esperado 535,3; encontrado 536,4 (M + H)+.
Figure img0127
Etapa 4: (3R,5R,65)-terc-butil 3-alil-2-oxo-5,6-difenil-3- (4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)morfolina-4-carboxilato
Uma solução de (3R,5R,6S)-terc-butil 2-oxo-5,6- difenil-3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)butil)morfolina-4-carboxilato (5,00 g, 9.34 mmol) e TMEDA (10 ml, 65 mmol, 7 equiv) em THF (51 ml, 0,2 M) foi resfriada a -78 °C e tratada com alil iodeto (17 ml, 187 mmol, 20 equiv) e potássio bis(trimetilsilil)amida (47 ml, 0,9 M em THF, 46,7 mmol, 5 equiv) em gotas e agitada por 30 minutos. Uma vez que a adição estiver completa, o banhod e resfriamento é removido e a mistura é agitada de um dia para o outro. Uma vez completa por TLC, a mistura da reação foi extinta com 0,5 N HCl (5-10 equiv), diluída com heptano e lavada sucessivamente com água e NaCl aquoso saturado, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada. Purificação por MPLC (1-60% acetato de etila em heptano em 6 CV) gerou (3R,5R,6S)-terc-butil 3-alil-2-oxo-5,6-difenil-3-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil) morfolina-4-carboxilato como um óleo incolor(5,2g, 96%). Rf 0,55 (30% acetato de etila em heptano); 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) δ 7,39 - 7,14 (m, 10 H), 7,10 (dd, Jr = 5.4 Hz, J2 = 1.8 Hz, 1 H), 6,08 (d, J = 5.4 Hz, 1 H), 5,95 - 5,80 (m, 1 H), 5,27- 5,17 (m, 2 H), 3,30 - 3,15 (m, 1 H), 2,89 - 2,76 (m, 1 H), 2,20 - 2,07 (m, 2 H), 1,54 (s, 9 H), 1,35 - 1,21 (m, 4 H), 1,78 (s, 12 H), 0,46 (t, J = 8,4 Hz, 2 H); ESI- LCMS m/z calc. para C34H46BNO6: esperado 575,3; encontrado 574,3 (M + H)+.
Figure img0128
Etapa 5: (R)-metil 2-alil-2-(terc-butoxicarbonilamino)-6- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanoato
Um RBF de três gargalos equipado com tubo de entrada de nitrogênio e condensador de gelo seco foi carregado com (3R,5R,6S)-terc-butil 3-alil-2-oxo-5,6-difenil-3-(4- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)butil) morfolina-4-carboxilato (4,60 g, 8,00 mmol) e THF (10 ml). Após resfriamento do condensador a -78 °C e do frasco a - 45°C (CO2 (s), CH3CN), amônia (80 ml) foi condensada no frasco. Uma vez completa, metal lítio (0,55 g, 80 mmol, pequenos pedaços) foi cuidadosamente adicionado por 10 minutos. Depois de agitação por mais 40 minutos, a mistura da reação foi cuidadosamente extinta com NH4Cl (s) até a solução se tornar transparente. O banho foi removido e a amônia foi evaporada de um dia para o outro. O resíduo resultante foi diluído com acetato de etila e lavado sucessivamente com 0,5 N HCl e NaCl aquoso saturado, seco sobre MgSO4, filtrado e concentrado. O produto bruto foi dissolvido em 50% metanol em tolueno (80 ml, 0,1 M) e tratado com TMSCHN2 (2,0 M em hexanos) até uma for amarelo pálido persistir. Com TLC indicando que a reação está completa, o excesso de TMSCHN2 foi extinto com ácido acético até a solução se tornar transparente. A solução foi concentrada, diluída com acetato de etila e lavada sucessivamente com NaHCO3 aquoso saturado e NaCl aquoso saturado, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada. Purificação por MPLC (1-60% acetato de etila em heptano em 6 CV) gerou (R)-metil 2-alil-2- (terc-butoxicarbonilamino)- 6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanoato como um óleo incolor(1,9 g, 58%). Rf 0,46 (30% acetato de etila em heptano); 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) δ 5,70 - 5,52 (m, 1 H), 5,49- 5,36 (m, 1 H), 5,05 (dd, J1 = 13,8 Hz, J2 = 1,2 Hz, 1 H), 3,73 (s, 3 H), 3,09 - 2,96 (m, 1 H), 2,50 (dd, J1 = 13,8 Hz, J2 = 7,8 Hz, 1 H), 2,29 - 2,10 (m, 1 H), 1,78- 1,65 (m, 1 H), 1,43 (s, 9 H), 1,42- 1,26 (m, 4 H), 1,23 (s, 12 H), 0,74 (t, J = 7,5 Hz, 2 H); ESI-LCMS m/z calc. para C21H38BNO6: esperado 411,3; encontrado 412,3 (M + H)+.
Figure img0129
Etapa 6: (R)-metil 2-(terc-butoxicarbonilamino)-2-(2- oxoetil)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)hexanoato
Uma solução de (R)-metil 2-alil-2-(terc- butoxicarbonilamino)-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)hexanoato (1,90 g, 4.62 mmol) em diclorometano (90 ml, 0,05 M) foi resfriada a -78°C e tratada com ozônio até surgir uma cor azul pálido. Depois de TLC indicar a ausência de material de partida, o tubo de entrada de ozônio foi recolocado com nitrogênio e o nitrogênio foi borbulhado através da solução por 20 minutos para remover qualquer excesso de ozônio. Trifenilfosfino (3,6 g, 13,8 mmol, 3 equiv) foi adicionado em uma porção, o banho de resfriamento foi removido e a mistura foi agitada por 4 h. A solução foi concentrada e purificada por MPLC (1-50% acetato de etila em heptano over 6 CV) gerou (R)- metil 2-(terc-butoxicarbonilamino)-2-(2-oxoetil)-6- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanoato como um óleo incolor (1,28 g, 67%). Rf 0,55 (30% acetato de etila em heptano); 1H RMN (CDCl3, 300 MHz) δ 9,66 (s, 1 H), 5,62 (br s, 1 H), 3,75 (s, 3 H), 3,60 (br d, J = 17,4 Hz, 1 H), 2,95 (d, J = 17,4 Hz, 1 H), 2,30 - 2,15 (m, 1 H), 1,70 - 1,54 (m, 1 H), 1,40 (s, 9 H), 1,39 - 1,24 (m, 4 H), 0,74 (t, J = 7,8 Hz, 2 H); ESI-LCMS m/z calc. para C20H36BNO7: esperado 413,3; encontrado 414,3 (M + H)+.
Figure img0130
Etapa 7: ácido (R)-2-amino-6-borono-2-(2-(2,3-dihidro-11-1- inden-2-ilamino)etil)hexanóico
As duas etapas finais na síntese de ácido (R)-2-amino- 6-borono-2-(2-(2,3-dihidro-1H-inden-2-ilamino)etil) hexanóico foram preparadas em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 1, etapas 6 e 7. 1H RMN (D20) δ 7,37 - 7,20 (m, 4 H), 4,20 - 4,08 (m, 2 H), 3,47 - 2,90 (m, 6 H), 2,41 - 2,09 (m, 2 H), 2,02 - 1,75 (m, 2 H), 1,50 - 1,13 (m, 4 H), 0,78 (m, 2 H). MS encontrado para C17H27BN2O4 m/z[317(M - H2O + 1)]. Exemplo 67: preparação de ácido (R)-2-amino-6-borono-2-(2- (etil(2-hidroxietil)amino)etil)hexanóico
Figure img0131
Ácido (R)-2-amino-6-borono-2-(2-(etil(2-hidroxietil) amino)etil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 66, exceto por 2- (etilamino)etanol ter sido usado como a amina na etapa 7. 1H RMN (D2O) δ 3,95 - 3,80 (m, 2 H), 3,65 - 3,15 (m, 6 H), 2,39 - 2,24 (m, 2 H), 2,01 - 1,78 (m, 2 H), 1,45 - 1,32 (m, 3 H), 1,32 - 1,15 (m, 4 H), 0,75 (m, 2 H). MS encontrado para C12H27BN2O4 m/z[273(M - H2O + 1)]. Exemplo 68: preparação de ácido (R)-2-amino-6-borono-2-(2- (dietilamino)etil)hexanóico
Figure img0132
Ácido (R)-2-amino-6-borono-2-(2-(dietilamino)etil) hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 66, exceto por dietilamina ter sido usada como a amina na etapa 7. 1FINMR (D2O) δ 3,42 - 3,29 (m, 1 H), 3,28 - 3,07 (m, 5 H), 2,36 - 2,21 (m, 2 H), 2,04 - 1,80 (m, 2 H), 1,45 - 1,30 (m, 3 H), 1,29 - 1,14 (m, 7 H), 0,74 (t, J = 6,0 Hz, 2 H). MS encontrado para C12H27BN2O4 m/z[257(M - H2O + 1)]. Exemplo 69: preparação de ácido (R)-2-amino-6-borono-2-(2- (metil(propil)amino)etil) hexanóico
Figure img0133
Ácido (R)-2-amino-6-borono-2-(2-(dietilamino) etil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 66, exceto por metilpropilamina ter sido usada como a amina na etapa 7. 1H RMN (D2O) δ 3,53 - 3,03 (m, 4 H), 2,87 (s, 3 H), 2,43 - 2,25 (m, 2 H), 2,06 - 1,82 (m, 2 H), 1,81 - 1,62 (m, 2 H), 1,48 - 1,33 (m, 3 H), 1,33 - 1,15 (m, 1 H), 0,95 (t, J = 7,0 Hz, 3 H), 0,79 (m, 2 H). MS encontrado para C12H27BN2O4 m/z[257(M - H2O + 1)]. Exemplo 70: preparação de ácido (R)-2-amino-6-borono-2-(2- (isopropilamino)etil)hexanóico
Figure img0134
Ácido (R)-2-amino-6-borono-2-(2-(isopropilamino) etil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 66, exceto por isopropilamina ter sido usada como a amina na etapa 7. 1H RMN (D2O) δ 3,54 - 3,37 (m, 2 H), 3,34 - 3,15 (m, 2 H), 3,15 - 3,00 (m, 2 H), 2,25 (m, 2 H), 2,04 - 1,81 (m, 2 H), 1,49 - 1,35 (m, 3 H), 1,35 - 1,20 (m, 7 H), 0,79 (m, 2 H). MS encontrado para C11H25BN2O4 m/z[243(M - H2O + 1)]. Exemplo 71: preparação de ácido (R)-2-amino-6-borono-2-(2- (isobutilamino)etil)hexanóico
Figure img0135
Ácido (R)-2-amino-6-borono-2-(2-(isobutilamino)etil) hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 66, exceto por isopropilamina ter sido usada como a amina na etapa 7. 1H RMN (D2O) δ 3,65 - 3,46 (m, 1 H), 3,35 - 2,99 (m, 2 H), 2,96 - 2,86 (m, 1 H), 2,51 - 2,02 (m, 2 H), 2,06 - 1,76 (m, 3 H), 1,50 - 1,16 (m, 4 H), 1,05 - 0.93 (m, 3 H), 0,92 - 0.69 (m, 5 H). MS encontrado para C12H27BN2O4 m/z[275(M + 1)]. Exemplo 72: preparação de ácido (R)-2-amino-6-borono-2-(2- (isoindolin-2-il)etil)hexanóico
Figure img0136
Ácido (R)-2-Amino-6-borono-2-(2-(isoindolin-2- il)etil)hexanóico foi preparado em uma maneira análoga àquela apresentada no Exemplo 66, exceptisoindolina ter sido usada como a amina na etapa 7. 1H RMN (D20) δ 7,34 (s, 4 H), 4,94 - 4,80 (m, 2 H), 4,55 - 4,42 (m, 2 H), 3,71 - 3,59 (m, 1 H), 3,54 - 3,38 (m, 1 H), 2,35 (t, J = 7,8 Hz, 2 H), 2,00 - 1,75 (m, 2 H), 1,42 - 1,08 (m, 4 H), 0,71 (m, 2 H). MS encontrado para C16H25BN2O4 m/z[321(M + 1)]. Exemplo 73: preparação de ácido 2-amino-2-(3-amino-3-(4- clorofenil)ciclobutil)-6-boronohexanóico hidroxiciclobutanocarboxílico
Figure img0137
Sob argônio, complexo de cloreto de isopropilmagnésio , cloreto de lítio (1,3 M solução em THF, 160 ml, 0,208 mol) foi adicionado em gotas por 15 minutos a uma solução de p-cloroiodobenzeno (54,3 g, 0,227 mol) em 100 ml de THF seco a -78°C. Depois de 1 h, ácido 3- oxociclobutanocarboxílico (7,42 g, 0,065 mol) em 40 ml de THF seco foi adicionado e a mistura da reação foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada de um dia para o outro. A reação foi extinta com 1 M HCl ao pH~3, e agitada por 2 horas. Dietil éter foi adicionado, a solução foi agitada vigorosamente e as fases separadas. O produto foi lixiviado de camada orgânica com 1 M NaOH, reacidificado ap pH~3 com 6 M HCl e extraído com éter dietílico (2x). as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4 filtradas e concentradas para gerar o produto bruto como um sólido quase branco. Recristalização de éter dietílico e n-heptano gerou composto como um sólido branco 4,03 g (27,3%). 1H RMN (DMSO-d6, 600MHz) δ 12,25 (bs, 1 H), 7,58 (d, J = 8,7 Hz, 2 H), 7,45 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 5,86 (bs, 1 H), 2,74 - 2,80 (m, 1 H), 2,62 - 2,65 (m, 2 H), 2,53 - 2,57 (m, 2 H). ESI MS encontrado para C11H11ClO3 m/z [225,1/227,1 (M-1)].
Figure img0138
Etapa 2: ácido 3-benzamido-3-(4-clorofenil) ciclobutanocarboxílico
Uma solução de ácido 3-(4-clorofenil)-3- hidroxiciclobutanocarboxílico (4 g, 0,0176 mol) e benzonitrila (8,66 ml, 0,0847mo1) em água (4,4 ml, 0,245 mol) foi tratada com bismuto triflato (2,32 g, 0,0035 mol) e aquecida a 100°C por 16 h. Após resfriamento a 0°C, a reação foi extinta com 1 M HCl ao pH~, diclorometano foi adicionado, a solução foi agitada vigorosamente e as fases foram separadas. O produto foi lixiviado de camada orgânica com 1 M NaOH. Essa solução aquosa foi acidificada ao pH~3 com 6 M HCl e extraída duas vezes com éter dietílico. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas para gerar um resíduos marrom claro. Esse produto bruto foi dissolvido em éter dietílico, e diluído com n-heptano para precipitar o produto. Ele foi filtrado, lavado com n-heptano e seco a 45°C para gerar o produto como um sólido cristalino branco (1,65 g, 29%). 1H RMN (DMSO-d6, 600 MHz) δ 12,25 (bs, 1 H), 9.16 (s, 1 H), 7,82 (d, J = 7,2 Hz, 2 H), 7,50 - 7,53 (m, 3 H), 7,43 - 7,45 (m, 2 H), 7,38 (d, J = 8,7 Hz, 2 H), 2,94 - 3,00 (m, 1 H), 2,72 - 2,78 (m, 4 H). ESI MS encontrado para C18H16ClNO3 m/z [352,3/354,3 (M+Na+), 330,4/332,4 (M+1), 328,2/330,2 (M-1)].
Figure img0139
Etapa 3: N-(1-(4-clorofenil)-3- (metoxi(metil)carbamoil)ciclobu Obenzamida
Uma solução de ácido 3-benzamido-3-(4- clorofenil)ciclobutanocarboxílico (1,16 g, 3,52 mmol), diisopropiletilamina (1,57 ml, 9.14 mmol) e N,O- dimetilhidroxilamina cloridrato (0,446 g, 4,572 mmol) em diclorometano (45 ml) foi tratada com HATU (1,61 g, 4,22 mmol). Depois de agitação de um dia para o outro, a solução foi diluída com diclorometano (50 ml), lavada sucessivamente com 1 M HCl (3x), 5% aqueous NaHCO3 e cloreto de sódio saturado aquoso. A fase orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada para gerar uma goma incolor. Cristalização de éter dietílico gerou o composto como um sólido cristalino branco (1,13 g 86%). 1H RMN (CDCl3, 600 MHz) δ 7,79 (d, J = 7,5 Hz, 2 H), 7,49 - 7,52 (m, 3 H), 7,42 - 7,45 (m, 2 H), 7,35 (d, J = 8,5 Hz, 2 H), 7,08 (bs, 1 H), 3,68 (s, 3 H), 3,43 - 3,47 (m, 1 H), 3,22 (s, 3 H), 2,98 - 3,01 (m, 2 H), 2,87 - 2,91 (m, 2 H). ESI MS encontrado para C20H21ClN2O3 m/z [395.4/397,3 (M + NO, 373,3/375,3 (M+1), 371,3/373,3 (M-1)].
Figure img0140
Etapa 4: N-(1-(4-clorofenil)-3-pent-4- enoilciclobutil)benzamida
Pós de magnésio (1,05 g, 42,0 mmol) foi colocado em um frasco de fundo Redondo com um pequeno pedaço de iodo. THF seco foi adicionado para cobrir o magnésio e a solução foi aquecida em um leve refluxo por 30 minutos. Com refluxo, uma segunda solução de 4-bromo-1-buteno (4,72 ml, 42,0 mmol) em THF seco (5 ml) foi adicionada. Depois de 12 minutos, a mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e adicionada a uma solução de N-(1-(4-clorofenil)-3- (metoxi(metil)carbamoil)ciclobutil)benzamida (1,12 g, 3,0 mmol) em THF seco (30 ml). Depois de 2 h, a reação foi extinta com NH4Cl aquoso saturado. 1M HCl foi adicionado ao pH~3 e a solução foi extraída com éter dietílico (x2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas sucessivamente com 1M HCl, água e cloreto de sódio saturado aquoso, secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas para gerar o produto bruto que foi usado para a próxima etapa sem purificação adicional. 1H RMN (CDCl3, 600MHz) δ 7,76 (d, J = 7,2 Hz, 2 H), 7,47 - 7,50 (m, 1 H), 7,46 (d, J = 8,7Hz, 2 H), 7,40 - 7,43 (m, 2 H), 7,33 (d, J = 8,7 Hz, 2 H), 6,77 (s, 1 H), 5,72 - 5,80 (m, 1 H), 4,92 - 5,01 (m, 2 H), 3,16 - 3,22 (m, 1 H), 2,90 - 2,94 (m, 2 H), 2,82 - 2,86 (m, 2 H), 2,54 (t, J = 7,3 Hz, 2 H), 2,30 -2 .35 (m, 2 H). ESI MS encontrado para C22H22ClNO2 m/z [368,4/370,4 (M+1)].
Figure img0141
Etapa 5: N-(3-(2-acetamido-1-(terc-butilamino)-1-oxohex-5- en-2-il)-1-(4- clorofenil)ciclobu Obenzamida
Uma supensão de N-(1-(4-clorofenil)-3-pent-4- enoilciclobutil)benzamida (1,21 g, 3,0 mmol), acetato de amônio (2,08 g, 27,0 mmol) em 2,2,2-trifluoretanol (12 ml) foi tratada com terc-butilisocianato (2 ml, 18,0 mmol). Depois de agitação por três dias em temperatura ambiente, a reação foi extinta com 1M HCl (5 ml) e diluída com acetato de etila (15 ml). Depois de agitação vigorosa por 1 h, as fases foram separadas e a camada orgânica foi lavada sucessivamente com 1 M HCl, água e cloreto de sódio saturado aquoso. A solução foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada para gerar o produto bruto como uma mistura de diastereômeros (1,77 g). It foi usda na próxima etapa sem purificação adicional. ESI MS encontrado para C29H36ClN3O3 m/z [510,7/512,7 (M + 1), 508,7/509,9 (M - 1)].
Figure img0142
Etapa 6: N-(3-(2-acetamido-1-(terc-butilamino)-1-oxo-6- (4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexan-2-il)-1- (4-clorofenil)ciclobutil)benzamida
Sob argônio, uma solução de bis(1,5- diciclooctadieno)diiridium(I)dicloreto (58 mg, 0,086 mmol) e difenilfosfinoetano (68 mg, 0,172 mmol) em diclorometano (10 ml) foi resfriada a 0°C, e carregada com 4,4,5,5- tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (1,66 ml, 11,44 mmol). Depois de agitação por 15 minutos, uma solução de N-(3-(2- acetamido-1-(terc-butilamino)-1-oxohex-5-en-2-il)-1-(4- clorofenil)ciclobutil)benzamida (1,46 g, - 2,8 mmol) em diclorometano (35 ml) foi adicionada em uma porção e a solução resultante foi lentamente aquecida até a temperatura ambiente. Depois de agitação por 16 h diclorometano (40 ml) foi adicionado e a camada orgânica foi lavada com água e cloreto de sódio saturado aquoso. A solução resultante foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada para gerar o produto bruto como uma mistura de diastereômeros. Purificação por cromatografia instantânea em coluna (20-80% acetato de etila em heptano) gerou dois produtos. O isômero mais lipofílico foi isolado e usado na próxima etapa (590 mg, 0,924 mmol). 1H RMN (CDCl3, 600MHz) δ 8,65 (s, 1 H), 7,97 (s, 1 H), 7,67 (d, J=7.2 Hz, 2 H), 7,49 - 7,53 (m, 3 H), 7,40 - 7,43 (m, 4 H), 6,17 (s, 1 H), 3,37 - 3,42 (m, 1 H), 3,30 - 3,34 (m, 1 H), 2,72 - 2,80 (m, 2 H), 2,39 - 2,51 (m, 2 H), 2,31 (s, 3 ), 1,66 - 1,72 (m, 2 H), 1,30 (s, 9 H), 1,19 (s, 12 H), 1,10 - 1,17 (m, 2 H), 0, 83 - 8,89 (m, 1 H), 0,72 (t, J = 7,8 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C35H49BClN3O5 m/z [638,7/640,8 (M+1), 636,7/638,9 (M-1)]
Figure img0143
Etapa 7: 2-amino-2-(3-amino-3-(4-clorofenil)ciclobutil)-6-boronohexanóico
Uma solução de N-(3-(2-acetamido-1-(terc-butilamino)- 1-oxo-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexan- 2-il)-1-(4-clorofenil)ciclobutil) benzamida 555 mg (0,870 mmol) em 6M HCl foi aquecida a um leve refluxo. Depois de agitação por 16 h, a solução amarelo pálido foi resfriada até a temperatura ambiente e purificada por HPLC preparatória seguido por tratamento com 6 M HCl e concentração gerou o composto individual como um sólido branco. (38 mg, tendimento 10%). 1H RMN (D2O, 600 MHz) δ 7,31 - 7,40 (m, 2 H), 7,20 - 7,29 (m, 2 H), 1,62 - 3,08 (m, 7 H), 1,24 - 1,35 (m, 3 H), 1,06 - 1,21 (m, 1 H), 0,63 - 0.69 (m, 1 H). ESI MS encontrado para C16H24BClN2O4 m/z [338,4/340,4 (M+1-NH3), 320,4/322,4 (M+1-NH3-H2O), 336,3/338,3 (M-1-NH3), 318,3/320,3 (M-1-NH3-H2O)]. Exemplo 74: preparação de ácido 2-amino-2-(3-amino-3-(4- clorobenzil)ciclobutil)-6-boronohexanóico
Figure img0144
Etapa 1: ácido 3-(4-clorobenzil)-3- hidroxiciclobutanocarboxílico
Em um frasco seco, sob argônio, magnésio (1,7g, 70,11 mmol), um cristal de I2 e Et2O suficiente para cobrir o magnésio foi aquecido até refluxo até a cor roxa se dissipar (cerca de 10 minutos). Aproximadamente 10% de uma solução de 4-clorobenzil cloreto (11,3 g, 70,11 mmol) em Et2O (20 ml) foi adicionada de uma vez e o refluxo foi continuado até a solução se tornar marrom. Com manutenção de um leve refluxo, o restante da solução de 4-clorobenzil cloreto foi lentamente adicionada. Depois de a adição estar completa, o aquecimento foi continuado por 0,5 h. A solução foi resfriado até a temperatura ambiente e adicionada a uma solução de ácido 3-oxociclobutanocarboxílico (2 g, 17,53 mmol) em THF (30 ml) pré-resfriado a 0°C. Uma vez que adição está completa, a solução resultante foi aquecida até a temperatura ambiente com agitação continuada por 16 horas. A mistura da reação foi então despejada em uma solução de éter e 1 M HCl. As camadas foram separadas e a fase aquosa foi extraída com éter (3x). Os extratos combinados foram concentrados, dissolvidos em 1 M NaOH e lavados com éter. A fase aquosa foi re-acidificada com 2 M HCl e extraída com Et2O, seca sobre MgSO4 e concentrada para gerar o composto como um sólido branco (2,5g, 59%) de sólido branco. 1H RMN (CDCl3, 500 MHz) δ 7,44 (d, J = 8,24 Hz, 2 H), 7,35 (d, J = 8,24 Hz, 2 H), 3,02 (s, 2 H), 2,90 - 2,84 (m, 1 H), 2,66 - 2,62 (m, 2 H), 2,47 - 2,42 (m, 2 H). ESI MS encontrado para C12H13ClO3 m/z [239,1 (M-1)].
Figure img0145
Etapa 2: ácido 3-(4-clorobenzil)-3- formamidociclobutanocarboxílico
Uma solução de ácido 3-(4-clorobenzil)-3- hidroxiciclobutanocarboxílico (1 g, 4,17 mmol) em TFA (17,5 ml) foi carregada com KCN (813 mg, 12,5 mmol), resfriada a 0°C e tratada com H2SO4 (3,5 ml) em gotas. O banho de resfriamento foi removido e a agitação foi continuada por 1,5 h. Uma vez que a reação estiver completa, a mistura foi re-resfriada a 0°C diluída com água, e extraída com éter dietílico . A camada orgânica foi lavada sucessivamente com 1M NaOH e cloreto de sódio saturado aquoso. A solução foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada. Purificação por cromatografia instantânea em coluna (gradiente 1-20% metanol em diclorometano) gerou o composto individual (500 mg, 45% de rendimento). 1H RMN (DMSO-d6, 600 MHz) δ 12,15 (bs, 1 H), 8,38 (s, 1 H), 7,88 (d, J = 1,13 Hz, 1 H), 7,36 - 7,32 (m, 4 H), 2,94 - 2,89 (m, 1 H), 2,57 - 2,53 (m, 1 H), 2,36 - 2,32 (m, 1 H), 2,26 - 2,22 (m, 1 H), 2,03 - 1,96 (m, 1 H), 1,95 - 1,88 (m, 2 H). ESI MS encontrado para C13H14ClNO3 m/z [266,1 (M-1)].
Figure img0146
Etapa 3: 3-(4-clorobenzil)-3-formamido-N-metoxi-N- metilciclobutanocarboxamida
Uma solução de ácido 3-(4-clorobenzil)-3- formamidociclobutanocarboxílico (1,3 g, 4,87 mmol), DIPEA (2,17 ml, 12,6 mmol), O,N-dimetilhidroxilamina cloridrato (617 mg, 6,33 mmol) em diclorometano (20 ml) foi tratada com HATU (2,2 g, 5,84 mmol) e agitada em temperatura ambiente por 16 horas. A solução foi diluída com diclorometano (20 ml), lavada sucessivamente com 1 M HCl (2x), 5% NaHCO3 aquoso e cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (gradiente 0,51,0% metanol em diclorometano) para gerar o composto individual (0,5 g, 33.3%). ESI MS encontrado para C15H19ClN2O3 m/z [211,4 (M + 1), 233,4 (M + Na+)].
Figure img0147
Etapa 4: N-(1-(4-clorobenzil)-3-pent-4- enoilciclobutil)formamida
Pó de magnésio (0,548 g, 22,6 mmol) foi colocado em um frasco de fundo Redondo com um pequeno pedaço de iodo. THF seco foi adicionado para cobrir o magnésio e a solução foi aquecida em um leve refluxo até a dor ter se dissipado (aproximadamente 30 minutos). Com refluxo, uma segunda solução de 4-bromo-1-buteno (2,3 ml, 22,6 mmol) em THF seco (5 ml) foi adicionada. Depois de 12 minutos, a mistura foi resfriada até a temperatura ambiente e adicionada a uma solução de 3-(4- clorobenzil)-3-formamido-N-metoxi-N- metilciclobutanocarboxamida (0,5 g, 1,61 mmol) em THF seco (30 ml). Depois de 2 h, a reação foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada de um dia para o outro. A reação foi extinta com NH4Cl aquoso saturado e extraída com éter dietílico (x2). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas sucessivamente com 1M HCl, água e cloreto de sódio saturado aquoso, secas sobre MgSO4, filtradas e concentradas para gerar o produto bruto (0,48 g) que foi usado para a próxima etapa sem purificação adicional. ESI MS encontrado para C17H20ClNO2 m/z [306,3 (M+1), 328,3 (M+Na+), 304,5 (M-1)].
Figure img0148
Etapa 5: 2-acetamido-N-terc-butil-2-(3-(4-clorobenzil)-3- formamidociclobu Ohex-5-enamida
Uma solução de N-(1-(4-clorobenzil)-3-pent-4- enoilciclobutil)formamida (0,5 g, 1,64 mmol) e acetato de amônio (1,14 g, 9.84 mmol) em 2,2,2-trifluoretanol (4 ml). foi tratada com terc-butil isocianeto (1,1 ml, 9.84 mmol) e agitada em temperatura ambiente por 3 dias. Uma vez completa, a solução foi diluída com acetato de etila (15 ml) e extinta com 2M HCl (10 ml). Depois de agitação vigorosa por 1h, as fases foram separadas e a camada orgânica foi lavada com água e cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada. Purificação por cromatografia em coluna (gradiente 25 -75% acetato de etila em heptano) gerou o composto individual como um óleo incolor (330, mg, 45% de rendimento). ESI MS encontrado para C24H34ClN3O3 m/z [448,6 (M + 1),470,6 (M +
Figure img0149
Etapa 6: 2-acetamido-N-terc-butil-2-(3-(4- clorobenzil)-3-formamidociclobutil)-6- (4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanamida
Sob argônio, bis(1,5-diciclooctadieno) diirídio (I)dicloreto (15 mg, 0,022 mmol) e difenilfosfinoetano (18 mg, 0,044 mmol) em diclorometano (3 ml) foi resfriado a 0°C e tratado com 4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (0,430 ml, 2,95 mmol). Depois de 30 min, uma solução de 2- acetamido-N-terc-butil-2-(3-(4-clorobenzil)-3- formamidociclobutil)hex-5-enamida (330 mg, 0,738 mmol) em diclorometano (10 ml) foi adicionada e o banho de resfriamento foi removido. Depois de 16 h, a solução foi diluída com diclorometano (20 ml) e lavada com água e cloreto de sódio saturado aquoso. A camada orgânica foi seca sobre MgSO4, filtrada e concentrada para gerar o produto bruto (420 mg, 99%), que foi usado na próxima etapa C30H47BClN3O5 m/z [576,8 (M+1), 574,7 (M-1)].
Figure img0150
Etapa 7: ácido 2-amino-2-(3-amino-3-(4-clorobenzil) ciclobutil)-6-boronohexanóico
Uma solução de 2-acetamido-N-terc-butil-2-(3-(4- clorobenzil)-3- formamidociclobutil)-6-(4,4,5,5-tetrametil- 1,3,2-dioxaborolan-2-il)hexanamida (140 mg) em 6M HCl foi aquecida em um leve refluxo por 16 h. Depois de resfriamento até a temperatura ambiente, a solução foi lavada com éter e concentrada até secar. O resíduo resultante foi dissolvido em água e ajustado ao pH~1,3 com 1M NaOH e lavado com éter. A camada aquosa foi ajustada ao pH~3 com 6 M HCl e concentrada até secar. Metanol foi adicionado, e o sólido branco resultante (NaCl) foi filtrado. O filtrado foi concentrado e purificado em HPLC preparatória para gerar o composto individual como um sólido branco (10 mg, 9.3%) . 1H RMN (D2O, 600 MHz) δ 7,47 - 7,34 (m, 4 H), 2,66 - 2,34 (m, 2 H), 2,25 - 2,16 (m, 1 H), 2,05 - 1,82 (m, 3 H), 1,80 - 1,61 (m, 1 H), 1,40 - 1,20 (m, 3 H), 1,17 - 1,04 (m, 1 H), 0,8 - 0.63 (m, 2 H). ESI MS encontrado para C17H26BClN2O4 m/z [369,4 (M + 1), 391,5 (M + Na+), 367,5 (M - 1)]. Exemplo 75: preparação de ácido (S)-2-((1s,3R)-3- aminociclobutil)-6-borono-2- (metilamino)hexanóico
Figure img0151
Etapa 1: terc-butil (1s,3s)-34(Z)-1-(metilimino)pent-4- enil)ciclobutilcarbamato
Terc-butil (1s,3s)-3-pent-4-enoilciclobutilcarbamato (199 mg, 0,79 mmol) foi dissolvido em 2 M de uma solução de MeNH2 em THF (2 ml, 5,0 mmol) e tratado com peneiras moleculares de 3 angstrom (1,5 g). A mistura ficou em repouso de um dia para o outro em temperatura ambiente, então decantada das peneiras e concentradas in vacuo para gerar o produto desejado que foi usado sem purificação adicional. 1H RMN (CDCl3, 400 MHz) δ 5,87 - 5,76 (m, 1 H), 5,10 - 4,96 (m, 2 H), 4,77 - 4,64 (m, 1 H), 4,15 - 4,02 (m, 1 H), 3,20 (s, 3 H), 2,80 - 2,65 (m, 1 H), 2,62 - 2,44 (m, 2 H), 2,41 - 2,13 (m, 4 H), 2,00 - 1,89 (m, 2 H), 1,45 (s, 9 H).
Figure img0152
Etapa 2: terc-butil (1R,3s)-3-((S)-1-(terc-butilamino)-2- (N-metilbutiramido)-1- oxohex-5-en-2-il)ciclobutilcarbamato
Uma solução de crude terc-butil (1s,3s)-3-(1- (metilimino)pent-4-enil)ciclobutilcarbamato e ácido butírico (0,182 ml, 1,98 mmol) em 2,2,2-trifluoretanol (1 ml) foi tratada com terc-butil isocianeto (0,270 ml, 2,37 mmol) e agitada 3 dias em temperatura ambiente. A reação foi diluída com acetato de etila, lavada com água, cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre MgSO4, e concentrada. O resíduo foi cromatografado em sílica gel eluindo com 35% acetato de etila em heptano para gerar o produto desejado (83 mg, 24% para duas etapas). 1H RMN (CDCl3, 400 MHz) δ 5,87 - 5,71 (m, 1 H), 5,32 (br s, 1 H), 5,09 - 4,93 (m, 2 H), 4,60 (br s, 1 H), 3,92 (br s, 1 H), 3,00 (s, 3 H), 2,59 - 2,28 (m, 6 H), 2,11 - 1,80 (m, 6 H), 1,75 - 1,50 (m, 4 H), 1,45 (s, 9 H), 1,37 (s, 9 H). ESI MS encontrado para C24H43N3O4 M/Z [438,3 (M+1)].
Figure img0153
Etapa 3: terc-butil (1R,3s)-3-0)-1-(terc-butilamino)-2-(N- metilbutiramido)-1-oxo-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)hexan-2-il)ciclobutilcarbamato
Uma solução de terc-butil (1R,3s)-3-((S)-1-(terc- butilamino)-2-(N-metilbutiramido)-1-oxohex-5-en-2-il) ciclobutilcarbamato (83 mg, 0,19 mmol) e dppe (7,8 mg, 0,020 mmol) em diclorometano (2 ml) e tratada com [Ir(COD)Cl]2 (6,4 mg, 0,010 mmol) . Depois de agitação por 15 minutos, a solução foi resfriada a 0°C e carregada com pinacolborano (0,041 ml, 0,29 mmol). A reação foi agitada de um dia para o outro em temperatura ambiente, então diluída com acetato de etila, lavada com cloreto de sódio saturado aquoso, seca sobre MgSO4 e concentrada. O resíduo foi cromatografado em sílica gel eluindo com 10-80% acetato de etila em heptano para gerar o produto desejado (90 mg, 84%). 1H RMN (CDCl3, 400 MHz) δ 4,63 (br s, 1 H), 3,90 (br s, 1 H), 2,98 (s, 3 H), 2,59 - 2,49 (m, 1 H), 2,44 - 2,25 (m, 6 H), 2,09 - 1,61 (m, 12 H), 1,45 (s, 9 H), 1,37 (s, 9 H), 1,26 (s, 12 H), 0,79 (t, J = 7,3 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C30H56BN3O6 m/z [566,6 (M+1)].
Figure img0154
Etapa 4: ácido (S)-2-((1s,3R)-3-aminociclobutil)-6-borono- 2-(metilamino)hexanóico terc-Butil (1R,3s)-3-((S)-1-(terc-butilamino)-2-(N- metilbutiramido)-1-oxo-6-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)hexan-2-il)ciclobutilcarbamato (90 mg, 0,16 mmol) foi tratado com 6 N HCl (3,6 ml) e aquecido a 170°C por 25 minutos em um reator de microondas. A reação foi resfriada até a temperatura ambiente, diluída com H2O, lavada com dichlormetano (3x), e concentrada. O resíduo foi purificado por HPLC preparatória (10-100% CH3CN/H2O) para gerar o produto desejado. 1H RMN (D2O, 400 MHz) δ 3,73 - 3,63 (m, 1 H), 2,59 (s, 3 H), 2,53 - 2,36 (m, 3 H), 2,05 - 1,64 (m, 4 H), 1,47 - 1,21 (m, 3 H), 1,20 - 1,08 (m, 1 H), 0,78 (t, J = 7,3 Hz, 2 H). ESI MS encontrado para C11H23BN2O4 m/z [259,4 (M+1)].
Métodos e usos
Os compostos da invenção são úteis para a inibição da expressão ou atividade de arginase I, arginase II ou uma combinação dessas enzimas. As enzimas da família arginase possuem um importante papel na regulação dos níveis fisiológicos da L-arginina, um precursor da molécula de sinalização óxido nítrico (óxido nítrico (NO)), bem como na regulação de níveis de L-ornitina, um precursor de certas poliaminas que são importantes transdutores de sinal fisiológico.
Mais especificamente, a invenção fornece métodos e usos para a inibição de arginase I, arginase II, ou uma combinação destas em uma célula, que compreende o contato da célula com pelo menos um composto de acordo com a presente invenção, ou uma composição deste como aqui descrito. Em algumas modalidades, a invenção fornece um método para o tratamento ou prevenção de uma doença ou condição associada com expressão ou atividade de arginase I, arginase II, ou uma combinação destas em um indivíduo.
Por exemplo, a doença ou condição é selecionada do grupo que consiste em distúrbios cardiovasculares, distúrbios gastrointestinais, distúrbios sexuais, distúrbios pulmonares, distúrbios imunes, infecção, distúrbios autoimunes, distúrbios pulmonares, e distúrbios hemolíticos.
De acordo com uma modalidade, os compostos da invenção são terápicos candidatos úteis para o tratamento de distúrbios cardiovasculares, como doenças ou condições selecionadas do grupo que consiste em hipertensão, incluindo hipertensão sistêmica, hipertensão arterial pulmonar (PAH), hipertensão arterial pulmonar em alta altitude, lesão por reperfusão de isquemia (IR), infarto do miocárdio, aterosclerose.
Exemplos de distúrbios sexuais que podem ser tratados com o uso dos compostos da invenção são doenças ou condições selecionadas do grupo que consiste em Doença de Peyronie e disfunção erétil (ED).
Em uma modalidade um inibidor de arginase de acordo com a presente invenção é adequado para o tratamento de um distúrbio pulmonar selecionado do grupo que consiste em fibrose pulmonar quimicamente induzida, fibrose pulmonar idiopática, fibrose cística, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD e asma.
Os compostos de acordo com a presente invenção são também úteis no tratamento de distúrbios gastrointestinais, como doenças ou condições selecionadas do grupo que consiste em distúrbios de motilidade gastrointestinal, cânceres gástricos, doença intestinal inflamatória, doença de Crohn, colite ulcerativa, e úlceras gástricas.
O transporte de órgãos, como fígado, rim e coração aumenta o risco de lesão por reperfusão de isquemia (IR). Os compostos da invenção são úteis na proteção de órgãos transportados de IR durante transporte.
De acordo com uma modalidade da presente invenção, os compostos da invenção são úteis para o tratamento de distúrbios autoimunes. Exemplos de doenças ou condições incluem, sem limitação, encefalomielite, esclerose múltipla, síndrome anti-fosfolipídeo 1, anemia hemolítica autoimune, polirradiculoneuropatia desmielinizante inflamatória crônica, dermatite herpetiforme, dermatomiosite, miastenia grave, pênfigo, artrite reumatóide, síndrome de pessoa rígida, diabetes tipo 1, espondilite anquilosante, hemoglobinúria noturna paroxística (PNH), hemoglobinúria fria paroxística, anemia hemolítica idiopática severa, e síndrome de Goodpasture.
Os inibidores da arginase de acordo com a presente invenção são também úteis para o tratamento de distúrbios imunes, como uma doença ou condição selecionada do grupo que consiste em disfunção de célula T mediada por célula supressora mielóide-derivada (MDSC), vírus da imunodeficiência humana (HIV), encefalomielite autoimune, e reação à transfusão com descombinação de ABO.
Em uma modalidade, os compostos da invenção são úteis como terápicos candidatos para o tratamento de um indivíduo que sofre de distúrbios hemolíticos. Exemplos de doenças ou condições incluem, sem limitação, doença de célula falciforme, talassemias, esferocitose hereditária, estomatocitose, anemias hemolíticas microangiopáticas, deficiência de piruvato quinase, anemia induzida por infecção, bypass cardiopulmonar e anemia induzida por válcula cardíaca mecânica, e anemia induzida quimicamente.
Outros exemplos de condições de doença para as quais os compostos aqui descritos são terápicos candidatos são inflamação, psoríase, leishmaniose, doenças neurodegenerativas, cicatrização de ferimentos, vírus da hepatite B (HBV), infecções por H. pylori, doenças fibróticas, artrite, candidíase, doença periodontal, quelóides, doença adenotonsilar, doença do sono africana, e doença de Chagas.
Vantajosamente, os compostos de acordo com a presente invenção são especialmente úteis no tratamento de doenças ou condições selecionadas do grupo que consiste em hipertensão arterial pulmonar (PAH), disfunção erétil (ED), hipertensão, infarto do miocárdio, aterosclerose, doença renal, asma, inflamação, psoríase, resposta imune, disfunção de célula T, como disfunção de célula T mediada por célula supressora mielóide-derivada (MDSC), leishmaniose, lesão de reperfusão por isquemia, doença falciforme, doenças neurodegenerativas, cicatrização de ferimentos, vírus da imunodeficiência humana (HIV), vírus da hepatite B (HBV), infecções por H. pylori, e doenças fibróticas como fibrose cística. Em adição, os compostos aqui descritos são úteis na proteção de órgãos, como durante transporte de órgãos.
Em algumas modalidades, o indivíduo que recebe tratamento é um mamífero. Por exemplo, o métodos e usos aqui descritos são adequados para uso médico em humanos. Alternativamente, os métodos e usos são também adequados em um contexto veterinário, e que o indivíduo inclui, sem limitação, um cão, gato, cavalo, vaca, carneiro, cordeiro e réptil.
Descrições mais específicas de doenças e condições são dadas a seguir.
Disfunção erétil
A observação de que há diferenças na atividade de arginase no pênis de camundongos jovens versus camundongos idosos levou à conclusão de que a arginase pode ter um papel na disfunção erétil (ED). Nesse contexto, Champion e cols., (Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292:340 -351, (2006) e Biochem. and Biophys. Research Communications, 283:923-27, (2001)), observaram um aumento de níveis de expressão de mRNA e proteína arginase em camundongos idosos junto com uma redução na atividade de NOS constitutivamente ativo.
Óxido nítrico está envolvido em neurotransmissão não adrenérgica, não colinérgica que leva ao relaxamento de músculo liso no corpo cavernoso permitindo a eração do pênis (New England Journal of Medicine, 326, (1992)), Portanto, a disfunção erétil pode ser freqüentemente tratada por elevação dos níveis de óxido nítrico (NO) no tecido peniano. Tal elevação dos níveis de óxido nítrico nítrico (NO) teciduais pode ser realizada por inibição da atividade de arginase no tecido peniano de indivíduos idosos. Determinado diferentemente, tem sido postulado que a arginase esgota o pool de L-arginina livre disponível para NOS em células que resulta em menores níveis de óxido nítrico (NO) e disfunção erétil. Veja, Christianson e cols., (Acc. Chem. Res., 38:191-201, (2005)), e (Nature Structural Biol., 6(11):1.043-1.047, (1999)). Os inibidores de arginase, portanto, podem ter um papel no tratamento de disfunção erétil.
Hipertensão pulmonar
Foi proposto que alterações no metabolismo de arginina estão envolvidas na patogênese de hipertensão pulmonar (Xu e cols., FASEB J., 18:1746-48, 2004). A proposição é baseada em parte no achado de que a expressão de arginase II e atividade de arginase são significativamente elevadas nas células endoteliais da artéria pulmonar derivadas de explantes de pulmão de pacientes com hipertensão pulmonar classe I.
Adicionalmente, a hipertensão pulmonar secundária surge como uma das principais causas de mortalidade e morbidade em pacientes que sofrem de anemias hemolíticas, como talassemia e doença falciforme. A causa subjacente para hipertensão pulmonar secundária é a biodisponibilidade prejudicada de óxido nítrico devido à liberação de arginase após hemólise que diminui o conjunto de arginina livre que é necessário para a síntese de óxido nítrico (NO). Portanto, a inibição da atividade de arginase pode fornecer um potencial terapêutico para o tratamento de hipertensão pulmonar.
Hipertensão
Xu, W. e cols., FASEB 2004, 14, 1.746-8 propuseram um papel fundamental de arginase II na regulação da pressão arterial. Nesse contexto, altos níveis de arginase vascular são correlacionados à redução concomitante de óxido nítrico (NO) vascular em animais hipertensos. Por exemplo, a supra- regulação da atividade de arginase precede uma elevação na pressão arterial em ratos que eram geneticamente predispostos à hipertensão (ou seja, ratos espontaneamente hipertensos), mas a administração do agente anti- hipertensivo hidralazina diminuiu a pressão arterial com uma diminuição nos níveis de expressão de arginase vascular, com isso indicando uma forte correlação entre a atividade de arginase e pressão arterial (Berthelot e cols. Life Sciences, 80:1.128-34, (2008). A administração similar do inibidor de arginase conhecido N'-hidroxi-nor-L-arginina (nor-NOHA) diminuiu a pressão arterial e melhorou a resposta vascular de vasos resistentes ao fluxo sanguíneo e pressão em animais espontaneamente hipertensos, com isso enfatizando os inibidores de arginase como terápicos candidatos para o tratamento de hipertensão (Demougeot e cols., (J. Hypertension, 26:1110-18, (2008).
A arginase também tem um papel na hipertensão cutânea reflexa por diminuição dos níveis celulares de óxido nítrico (NO). Óxido nítrico causa vasodilatação e os níveis de óxido nítrico (NO) são normalmente elevados ou diminuídos para manter a pressão arterial em níveis fisiologicamente aceitáveis. Kenny e cols., (J. of Physiology 581 (2007) 863-872), supuseram que a vasodilatação reflexa em indivíduos hipertensos pode atenuar a inibição de arginase, assim envolvendo um papel para inibidores de arginase para o tratamento de hipertensão.
Asma
A atividade de arginase é também associada com hiper- responsividade das vias aéreas em asma. Por exemplo, a arginase I é supra-regulada em asmáticos humanos e em camundongos que sofre de asma aguda e crônica, enquanto que os níveis de isoformas de arginase II e NOS permanecem inalterados (Scott e cols., Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 296:911-920 (2009)). Além disso, metacolina induziu a responsividade das vias aéreas centrais no modelo crônico de murídeo atenuado após a administração do inibidor de arginase S-(2-boronoetil)-L-cisteína. A similaridade entre os perfis de expressão de ARG I em humanos e em camundongos que têm asma crônica indica que os compostos capazes de inibir a atividade de arginase são terápicos candidatos para o tratamento de asma.
Outras linhas de evidência revelam correlações adicionais entre atividade aumentada de arginase em tecido pulmonar asmático e progressão da doença, como uma suprarregulação para genes relacionados ao metabolismo de aminoácidos catiônicos, incluindo arginase I e II em camundongos que possuem asma (Rothenberg e cols., (J. Clin. Invest., 111:1863-74 (2003), e Meurs e cols., (Expert Opin. Investig Drugs, 14(10:1.221-1.231, (2005)).
Além disso, os níveis de todos os aminoácidos são menores no plasma de asmáticos, mas os níveis de arginina são significantemente menores no plasma comparados àqueles de um indivíduo normal (Morris e cols., (Am. J. Respir. Crit Care Med., 170:148 -154, (2004)). Portanto, a atividade de arginase é significativamente aumentada no plasma de um asmático, em que os níveis elevados de atividade de arginase podem contribuir para a menor biodisponibilidade de arginina plasmática que cria uma deficiência de óxido nítrico (NO), que é responsável pela promoção de vias aéreas hiper-reativas em asmáticos.
Inflamação
A atividade de arginase também é associada com inflamação autoimune (Chen e cols., Immunology, 110:141 -148, (2003)). Os autores identificaram supra-pregulação nos níveis de expressão do gene ARG I em células espinhais de murídeo de animas que sofrem de encefalomielite autoimune experimental (EAE). A administração do inibidor de arginase amino-6-boronohexanóico (ABH), no entanto, resultou nos animais desenvolvendo uma forma muito mais leve de EAE que em animais de controle. Esses resultados envolvem os inibidores de arginase em um papel terapêutico para o tratamento de encefalomielite autoimune.
Além disso, Horowitz e cols., (American J. Physiol Gastrointestinal Liver Physiol., 292:G1323-36, (2007)), sugerem um papel para as enzimas arginase na fisiopatologia vascular. Por exemplo, esses autores indicam uma perda de produção de óxido nítrico (NO) e vasos sanguíneos intestinais cronicamente inflamados em pacientes que sofrem de doença do cólon irritável (IBD), doença de Crohn e colite ulcerativa. A perda na produção de óxido nítrico (NO) está correlacionada com uma supra-regulação de expressão de arginase e atividade que reduziu os níveis de arginina evitando que a óxido nítrico sintase (NOS) sintetize óxido nítrico (NO). Os inibidores de atividade de arginase, portanto, podem ser terápicos candidatos para o tratamento de fisiopatologia vascular.
Reperfusão de isquemia
É também sugerido que a inibição de arginase possui um papel cardioprotetor durante reperfusão de isquemia. Mais especificamente, a inibição de arginase protege contra infarto do miocárdio por um mecanismo que pode ser dependente da atividade de NOS e a conseqüente biodisponibilidade de óxido nítrico (NO) (Pernow e cols., (Cardiovascular Research, 85:147-154 (2010)).
Infarto do miocárdio e arterosclerose
O polimorfismo de arginase I está associado ao infarto do miocárdio, juntamente com um risco aumentado para o desenvolvimento da espessura da média íntima da artéria carótida, o que é considerado como sendo um indicador confiável de aterosclerose, bem como de outras doenças arteriais coronarianas (Brousseau e cols., J. Med Genetics, 44: 526-531, (2007)). A atividade aumentada de arginase eleva os níveis de ornitina, que está bioquimicamente envolvida na promoção da formação dos componentes da matriz e celulares da placa aterosclerótica. Id. Dessa forma, os inibidores de arginase podem servir como substâncias terapêuticas candidatas para o tratamento de arteriosclerose. Berkowitz e cols. (Circulation Res. 102, (2008), páginas 923-932) sugeriram um papel para ARGII na formação de placa e arteriosclerose. A oxidação de LDLP que acompanha a formação da placa aumenta a atividade de arginase e reduz os níveis de óxido nítrico (NO) em células endoteliais. Em particular, os níveis de ARG II estão elevados em camundongos ateroscleróticos, o que indica um papel para os inibidores de arginase como substâncias terapêuticas candidatas para o tratamento de arteriosclerose.
Adicionalmente, estudos por Ming e cols. (Current Hypertension Reports., 54:54-59, (2006)), indicam que uma supra-regulação de arginase, e não uma disfunção do óxido nítrico (NO) endotelial, tem um papel importante em distúrbios cardiovasculares, incluindo arteriosclerose. O fato de a arginase estar envolvida em doenças cardiovasculares é ainda apoiado pela observação de que a atividade de ARGI e ARGII está supra-regulada em miócitos cardíacos que, por sua vez, afetam negativamente a atividade de NOS e a contratilidade miocárdica (veja, Margulies e cols., Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol., 290: 1.756-62, (2006)).
Resposta imune
A via de arginina/óxido nítrico (NO) também pode participar da resposta imune, por exemplo, após transplantes de órgãos. Por exemplo, foi proposto que a reperfusão de um enxerto de transplante de fígado ortotópico causaria um aumento significante nos níveis de ornitina em conseqüência da supra-regulação da atividade de arginase no enxerto (Tsikas e cols., Nitric oxide, 20: 6167, (2009)). Os níveis elevados de enzimas hidrolíticas e proteolíticas no enxerto podem resultar em um resultado final menos favorável para o órgão enxertado. Dessa forma, a inibição das enzimas arginases pode apresentar uma avenida terapêutica alternativa para a melhora do resultado final de um transplante.
Psoríase
Foi sugerido que a arginase participa na patogênese da psoríase. Por exemplo, ARG I está altamente expressa na psoríase hiperproliferativa e, na verdade, é responsável pela infra-regulação do óxido nítrico (NO), um inibidor da proliferação celular, por competição pelo substrato comum L-arginina, como postulado por D. Bruch-Gerharz e cols., American Journal of Pathology 162(1) (2003) 203-211. Um trabalho mais recente por Abeyakirthi e cols. (British J. Dermatology, (2010)), e Berkowitz e cols., (WO/2007/005620) apóiam os achados de níveis baixos de óxido nítrico (NO) em queratinócitos psoriáticos. Abeyakirthi e cols. verificaram que os queratinócitos psoriáticos estavam poucos diferenciados e hiperproliferativos. Foi sugerido que a baixa diferenciação resulte de níveis baixos de óxido nítrico (NO), não por causa da pouca expressão de NOS, mas sim pela superexpressão de arginase que compete com NOS pelo substrato L-arginina. Dessa forma, a inibição de arginase pode fornecer alívio terapêutico da psoríase.
Cicatrização de feridas
Sob condições fisiológicas normais, o óxido nítrico (NO) tem um papel importante na promoção da cicatrização de feridas. Por exemplo, Hulst e cols. (Nitric Oxide, 21: 175-183, (2009)) estudaram o papel da ARG I e ARG II na cicatrização de feridas. Imediatamente após a lesão, é desejável elevar os níveis teciduais de óxido nítrico (NO) de modo a promover a angiogênese e a proliferação celular que são importantes para a cicatrização. Inibidores da arginase podem, portanto, encontrar utilidade como substâncias terapêuticas para o tratamento de feridas, pois esses compostos elevariam os níveis teciduais de óxido nítrico (NO). Suporte adicional para o uso de inibidores de arginase como substâncias terapêuticas candidatas para o tratamento de feridas foi fornecido por South e cols. (Experimental Dermatology, 29: 664-668 (2004)), que constataram um aumento de 5 vezes na arginase I em feridas crônicas como, por exemplo, erosões e bolhas cutâneas.
Fibrose cística
A fibrose cística (CF) é um distúrbio multissitêmico causado por mutações do gene regulador da condutância transmembrana da fibrose cística (CFTR). Os sintomas comuns da CF são infecção pulmonar persistente, dificuldade para respirar, insuficiência pancreática e níveis elevados de cloreto no suor. A CF pode ser fatal se não tratada, com doenças pulmonares resultantes da formação de muco e depuração mucociliar diminuída, sendo a causa principal de morbidade e mortalidade.
Foi constatado que pacientes com fibrose cística (CF) possuem atividade aumentada de arginase no plasma e no escarro, com uma diminuição associada nos níveis de L- arginina plasmática (H. Grasemann e cols., Am. J. Respir. Crit. Care Med. 172(12) (2005) 1.523-1.528). A atividade aumentada de arginase, no entanto, resulta em níveis fisiológicos menores de óxido nítrico (NO) que podem causar obstrução das vias aéreas e diminuição da função pulmonar em pacientes que sofrem de fibrose cística (CF).
A deficiência da estimulação induzida por campo elétrico do relaxamento de músculo liso nas vias aéreas de um modelo em camundongo de CF e a administração de L- arginina e NO reverteram esse efeito, como proposto por M. Mhanna e cols. (Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 24(5) (200)1 621-626). Graesmann e cols. verificaram que existe uma correlação positiva entre função pulmonar e concentrações exaladas de NO e do metabólito de NO no escarro de pacientes com CF (Grasemann, H.; Michler, E.; Wallot, M.; Ratjen, F., Pediatr. Pulmonol. 1997, 24, 173-7).
Considerados em conjunto, esses resultados indicam que a atividade aumentada de arginase na CF contribui para a deficiência de NO e obstrução pulmonar na CF por limitação da disponibilidade de L-arginina para o NOS. Dessa forma, os inibidores da atividade de arginase são substâncias terapêuticas candidatas para o tratamento de fibrose cística (CF).
Proteção de órgãos
Outra avenida terapêutica para compostos de acordo com a presente invenção é a proteção de órgãos durante transporte do doador até um local onde serão transplantados em um receptor. A lesão por reperfusão isquêmica (IR) em conseqüência da exposição dos órgãos de transplante a um período de isquemia quente (tempo desde a retirada do doador até ser enxaguado com meios de conservação) e à isquemia fria (conservação hipotérmica) é freqüentemente observada em pacientes que são submetidos à cirurgia de transplante. A lesão por reperfusão isquêmica (IR) e a disfunção primária do enxerto e/ou rejeição aguda ou crônica que a acompanham resultam da alteração na atividade celular da via da L-Arginina/NO.
Foi proposto que arginase 1 e arginase 2 são liberadas por células endoteliais e células renais apoptóticas dentro das primeiras 24 horas após a remoção do órgão do corpo. Para se contrapor à arginase liberada, a L-Arginina é adicionada aos meios de conservação. Resultados com transplantes renais caninos indicam que a adição de L- arginina reduzia a incidência e severidade da isquemia, resultando em um pós-transplante com níveis menores de MDA em 1 hora, e BUN e níveis séricos de creatinina reduzidos durante as primeiras 72 horas. Veja Erkasap, S.; Ates, E., Nephrol. Dial. Transplant. 2000, 15, 1.224-7.
Resultados similares foram observados para enxertos pulmonares caninos ao longo de um período de 24 horas quando os pulmões eram conservados na solução da Universidade de Wisconsin suplementada com L-Arginina. Yen e cols. observaram que a adição de L-arginina ao meio de conservação aumentava a proteção endotelial pulmonar e reduzia a incidência de isquemia, quando comparada com um controle que é conservado em meio que não contém L-arginina (Chu, Y.; Wu, Y.C.; Chou, Y.C.; Chueh, H.Y, Liu H.P., Chu J.J., Lin P.J., J. Heart Lung Transplant. 2004, 23, 592-8).
Koch e cols. afirmaram que a contratilidade miocárdica e o relaxamento no músculo cardíaco de ratos após transplante aumentavam quando os corações eram conservados na solução HTK com L-Arginina e N-alfa-acetil-histidina (Koch A., Radovits T., Loganathan S., Sack F.U., Karck M., Szabo G.B., Transplant Proc. 2009, 41, 2.592-4).
A adição de um inibidor de arginase, portanto, pode ser uma abordagem terapêutica candidata para prevenção e/ou redução da incidência e risco de lesão por reperfusão isquêmica por um aumento sinérgico do efeito protetor do órgão dos meios de conservação. Considerando o número baixo de órgãos disponíveis que são adequados para transplante, a perda e lesão de órgãos em conseqüência do surgimento de isquemia, inibidores de arginase de acordo com a presente invenção podem ser úteis como substâncias terapêuticas para a preservação de órgãos, aumento da disponibilidade de órgãos por redução da quantidade de lesão por reperfusão isquêmica durante transporte de órgãos.
Leishmaniose
A leishmaniose é causada por um protozoário e se manifesta como leishmaniose cutânea (ou seja, infecção cutânea que causa nódulos hipopigmentados) e leishmaniose visceral (mais grave, afetando órgãos internos). É proposto que a arginase participe da progressão da doença, na medida em que o parasita depende da arginase para a síntese de poliaminas celulares que são essenciais para a patogênese. A inibição da arginase, portanto, poderia reduzir a carga parasítica celular e promover níveis aumentados de óxido nítrico (NO), aumentando a depuração parasitária. Veja Liew F.Y. e cols. Eur. J. Immunol. 21 (1991) 2.489, Iniesta V. e cols. Parasite Immunol. 24 (2002) 113-118 e Kane M.M. e cols. J. Immunol. 166 (2001) 1.141-1.147. Os compostos de acordo com a presente invenção, portanto, podem ser usados como substâncias terapêuticas para o tratamento de leishmaniose.
Células supressoras de derivação mielóide (MDSC)
MDSCs são moduladores imunes potentes que limitam as respostas imunes por diversas vias, por exemplo, depleção de L-arginina por meio da liberação de arginase 1 no microambiente (Rodriguez 2009 Cancer Res.), supressão restrita de MHC (Nagaraj S., Gupta K., Pisarev V., Kinarsky L., Sherman S., Kang L., Herber D.L., Schneck J., Gabrilovich D.I., Nat Med. 2007, 13, 828-35), indução de células T reguladoras (Serafini P., Mgebroff S., Noonan K., Borrello I., Cancer Res. 2008,68, 5.439-49) e produção de IL-10 (Rodrigues J.C., Gonzalez G.C., Zhang L., Ibrahim G., Kelly J.J., Gustafson M.P., Lin Y., Dietz A.B., Forsyth P.A., Yong V.W., Parney I.F., Neuro. Oncol. 2010, 12, 35165) (Sinha P., Clements V.K., Bunt S.K., Albelda S.M., Ostrand-Rosenberg S., J. Immunol. 2007, 179, 977-83), por exemplo.
Postula-se que o desenvolvimento tumoral seja acompanhado por um aumento no número de MDSCs, tanto perifericamente quanto infiltradas dentro de tumores. Veja Almand B., Clark J.I., Nikitina E., van Beynen J., English N.R., Knight S.C., Carbone D.P., Gabrilovich D.I., J. Immunol. 2001, 166, 678-89 e Gabrilovich D., Nat. Rev. Immunol. 2004, 4, 941-52. O tratamento de camundongos com tumores com quimioterápicos estabelecidos como, por exemplo, gemcitabina e 5-fluoruracil, elimina a imunossupressão de MDSC e resulta em retardo do crescimento tumoral. Veja Le H.K., Graham L., Cha E., Morales J.K., Manjili M.H., Bear H.D., Int Immunopharmacol. 2009, 9, 9009 e Vincent J., Mignot G., Chalmin F., Ladoire S., Bruchard M., Chevriaux A., Martin F., Apetoh L., Rae C., Ghiringhelli F., Cancer Res. 2010, 70, 3.052-61, respectivamente. Além disso, a inibição de arginase I aumentou a imunidade antitumoral por redução da função da MDSC. Dessa forma, os inibidores de arginase, por exemplo, compostos de acordo com a presente invenção, reduzem ou retardam o crescimento tumoral e podem ser usados em combinação com agentes anticâncer estabelecidos no tratamento de câncer.
Helicobacter pylori (H. pylori)
Helicobacter pylori (H. pylori) é uma bactéria Gram- negativa que coloniza a mucosa gástrica humana. A colonização bacteriana pode levar à gastrite aguda ou crônica e está altamente associada à doença péptica ulcerosa e ao câncer do estômago. A observação de que a adição de L-arginina à cocultura de H. pylori e macrófagos aumentava a morte mediada por óxido nítrico (NO) do H. pylori (Chaturvedi R., Asim M., Lewis N.D., Algood H.M., Cover T.L., Kim P.Y., Wilson K.T., Infect Immun. 2007, 75,4.305-15) apóia a hipótese de que a arginase bacteriana compete com a arginase de macrófagos pela arginina livre que é necessária à síntese de óxido nítrico (NO). Veja Gobert A.P., McGee D.J., Akhtar M., Mendz G.L., Newton J.C., Cheng Y., Mobley H.L., Wilson K.T., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001, 98, 13.844-9. A L-arginina é necessária para ativação de célula T e para a depuração rápida de bactérias de células infectadas. Por depleção dos pools de L-arginina livre in vivo, H. pylori reduz a expressão de CD3-zeta induzida por arginina em células T e evita a ativação e proliferação de células T. Veja Zabaleta J., McGee D.J., Zea A.H., Hernandez C.P., Rodriguez P.C., Sierra R.A., Correa P., Ochoa A.C., J. Immunol. 2004, 173, 586-93.
A inibição de arginase bacteriana usando o inibidor conhecido NOHA, no entanto, reestabeleceu a expressão de CD3 em células T (Zabaleta J 2004) e aumentou a produção de NO por macrófagos promovendo, dessa forma, a depuração mediada por macrófagos de bactérias de células infectadas. Veja Chaturvedi R., Asim M., Lewis N.D., Algood H.M., Cover T.L., Kim P.Y., Wilson K.T., Infect Immun. 2007, 75, 4.30515.
Além disso, Lewis e cols. sugeriram um papel para arginase II na infecção por H. pylori. Por exemplo, esses autores indicam que macrófagos primários argII-/- incubados com extratos de H. pylori mostraram produção aumentada de NO e, de forma correspondente, uma morte mediada por NO aumentada (aproximadamente 15%) de células bacterianas (Lewis N.D., Asim M., Barry D.P., Singh K., de Sablet T., Boucher J.L., Gobert A.P., Chaturvedi R., Wilson K.T., J. Immunol. 2010, 184, 2.572-82). Os inibidores da atividade de arginase, portanto, podem ser substâncias terapêuticas candidatas para o tratamento de fisiopatologia vascular. Os inibidores da atividade de arginase, portanto, podem ser substâncias terapêuticas candidatas para o tratamento de infecções por H. pylori e para o tratamento de úlceras gástricas, úlceras pépticas e câncer.
Doença falciforme (SCD)
A doença falciforme (SCD), ou anemia falciforme, ou drepanocitose, é um distúrbio sangüíneo genético, caracterizado por eritrócitos que assumem um formato anormal, rígido, falciforme. O formato falciforme diminui a flexibilidade das células e aumenta o risco de complicações. Um aumento na concentração de espécies reativas ao oxigênio (ROS) em circulação causa aderência de células sangüíneas e consumo de NO que resulta em uma deficiência na vasodilatação ou incapacidade de vasodilatação dos vasos sangüíneos. A incapacidade de vasodilatação, juntamente com a aderência aumentada de células sangüíneas na SCD, resulta em crise oclusiva de vasos e dor.
Níveis baixos de L-arginina plasmática são normalmente detectados em pacientes com SCD (Morris C.R., Kato G.J., Poljakovic M., Wang X., Blackwelder W.C., Sachdev V., Hazen S.L., Vichinsky E.P., Morris S.M. Jr, Gladwin M.T., JAMA. 2005, 294, 81-90). De acordo com esses autores, a lise de eritrócitos (RBCs) em pacientes que sofrem de SCD causa a liberação de arginase e uma redução subseqüente dos níveis fisiológicos de L-Arginina. Essa seqüência de eventos biológicos reduz as concentrações fisiológicas de óxido nítrico (NO), uma molécula de sinalização que participa da vasodilatação. Outros eventos biológicos também limitam a biodisponibilidade de NO. Esses incluem, por exemplo, o desacoplamento de óxido nítrico sintase (NOS) e a subseqüente diminuição dos níveis fisiológicos de NO, além da reação de espécies reativas ao oxigênio de superóxido (O-2) com NO para seqüestrar o último como ONOO-.
Com base nessas observações, os inibidores de arginase, especialmente inibidores da arginase I, estão sendo propostos pelos presentes inventores como substâncias terapêuticas candidatas para pacientes com doença falciforme. Como estabelecido acima, SCD causa o desacoplamento de eNOS em função de níveis fisiológicos baixos de L-arginina. A inibição da arginase presente na circulação sangüínea, no entanto, pode solucionar esse problema por aumento dos níveis fisiológicos de L-arginina, o substrato da óxido nítrico sintase endotelial (eNOS). Essa seqüência de eventos, notadamente, é proposta pelos presentes inventores como responsável por aumento da função endotelial e alívio da vasoconstrição associada à SCD.
Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV)
HIV é causada por vírus que infecta as células T helper CD4+ e causa linfopenia severa que predispõe os indivíduos infectados a infecção oportunista. Embora a terapia anti-retroviral (ART) seja extensivamente usada para combater a infecção por HIV, o uso amplamente disseminado de fármacos anti-retrovirais tem resultado na geração de cepas resistentes de HIV.
Existe uma correlação entre a atividade de arginase em pacientes que sofrem de HIV e a severidade da doença por HIV. Ou seja, a atividade aumentada de arginase tem sido correlacionada a títulos virais aumentados em pacientes com HIV. Esses pacientes também mostram níveis séricos diminuídos de arginina bem como níveis diminuídos de células CD4+/CD8+.
Juntas, essas observações sugerem um papel para inibidores de arginase, como os compostos de acordo com as Fórmulas I ou II como terápicos candidatos no tratamento de infecção por HIV.
Vírus da Hepatite B crônica (HBV)
A infecção de hepatite B crônica é uma doença viral que é transmitida por contado com fluidos corporais infectados. As infecções crônicas por HBV são caracterizadas por inflamação do fígado e icterícia e se deixada não tratada pode causar cirrose do fígado que pode progredir para formar carcinomas hepatocelulares. Os fármacos antivirais atualmente usados, no entanto, possuem pouca eficácia contra as infecções crônicas por HBV. Soro e homogenados hepáticos de pacientes com infecções crônicas por HBV mostram níveis reduzidos de arginina e atividade aumentada de arginase. Para pacientes infectados além disso, a atividade aumentada de arginase está correlacionada a uma resposta prejudicada de linfócito T citotóxico (CTL) com produção reduzida de IL-2 e expressão de CD3z.
O retorno da arginina sérica aos níveis fisiologicamente aceitáveis, no entanto, reconstituiu a expressão de CD3z e IL-2, implicando em um papel para inibidores de arginase como potenciais terápicos no tratamento de infecções crônicas por HBV.
Vias de administração e regimes de dosagem
A despeito de ampla evidência que associa inibição de com terapias de várias doenças e condições, apenas um número limitado de compostos são conhecidos que são capazes de inibir a atividade de arginase. A presente invenção, portanto, fornece compostos e suas composições farmacêuticas que são úteis no tratamento de um indivíduo que sofre de tal doença ou condição, como apresentado de modo geral acima.
O composto da invenção pode ser formulado como descrito acima e é adequado para administração em uma quantidade terapeuticamente eficaz ao indivíduo em qualquer número de formas. A quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da invenção pode depender das quantidades e tipos de excipientes usados, da quantidades e tipos específicos de ingredientes ativos em uma forma de dosagem, e da via pela qual o composto deve ser administrado aos pacientes. No entanto, as formas de dosagem típicas da invenção compreendem um composto, ou um sal, solvato, hidrato, isômero, ou pró-fármaco farmaceuticamente aceitável deste.
Os níveis de dosagem típicos para um composto da invenção geralmente variam de cerca de 0,001 a cerca de 100 mg por kg do peso corporal do paciente por dia que pode ser administrado em doses únicas ou múltiplas. Um exemplo de dosagem é cerca de 0,01 a cerca de 25 mg/kg por dia ou cerca de 0,05 a cerca de 10 mg/kg por dia. Em outras modalidades, o nível de dosagem é de cerca de 0,01 a cerca de 25 mg/kg por dia, cerca de 0,05 a cerca de 10 mg/kg por dia, ou cerca de 0,1 a cerca de 5 mg/kg por dia.
Uma dose varia tipicamente de cerca de 0.1 mg a cerca de 2000 mg por dia, dada como uma dose única uma vez ao dia ou, alternativamente, como doses divididas pelo dia, opcionalmente dadas com alimento. Em uma modalidade, a dose diária é administrada duas vezes ao dia em doses igualmente divididas. Uma faixa de dose diária pdoe ser de cerca de 5 mg a cerca de 500 mg por dia, como, por exemplo, entre cerca de 10 mg e cerca de 300 mg por dia. No controle do paciente, a terapia pode ser iniciada em uma dose menor, talvez de cerca de 1 mg a cerca de 25 mg, e aumentada se necessário, até de cerca de 200 mg a cerca de 2.000 mg por dia como uma dose única ou doses divididas, dependendo da resposta global do paciente.
Dependendo da doença a ser tratada e da condição do indivíduo, uma composição farmaceuticamente aceitável dos compostos da invenção pode ser administrada por via oral, parenteral (por exemplo, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, ICV, injeção intracisternal ou infusão, injeção subcutânea ou implante), por inalação, via nasal, vaginal, retal, sublingual, ou tópica (por exemplo, transdérmica, local). Os compostos podem ser formulados, isoladamente ou juntos, em formulações de dosagem unitária adequadas contendo carreadores farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos convencionais, adjuvantes e veículos, como acima descrito, que são adequados para cada via de administração. A invenção também contempla a administração do compostos da invenção em uma formulação de depósito, em que o ingrediente ativo é liberado por um período de tempo definido.
Inibição de arginase
Os compostos da invenção inibem a arginase I (ARG I) e arginase II (ARG II) humanas como evidenciado por um ensaio ex vivo apresentado por um protocolo publicado (Baggio e cols. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1999, 290, 1.409-1.416). O ensaio estabeleceu a concentração de inibidor que é necessária para reduzir a atividade de arginase em 50% (IC50).
Protocol de ensaio
A inibição de arginase I (ARG I) e arginase II (ARG II) pelos compostos da invenção é seguida espectrofotometricamente a 530 nm. O composto a ser testado é dissolvido em DMSO em uma concentração inicial 50 vezes maior que sua concentração final no cadinho. 10 μl da solução de estoque são diluídos em 90 μl do tampão de ensaio que compreende 0,1 M de tampão de fosfato de sódio contendo 130 mM NaCl, pH 7,4, ao qual é adicionada ovalbumina (OVA) em uma concentração de 1 mg/ml. Soluções de arginase I e II são preparadas em 100 mM de tampão de fosfato de sódio, pH 7,4 contendo 1 mg/ml de OVA para gerar uma solução de estoque de arginase em uma concentração final de 100 ng/ml.
A cada poço de uma placa de microtítulo de 96 poços são adicionados 40 μl de enzima, 10 μl de um composto da invenção e 10 μl de substrato de enzima (L-arginina + sulfato de manganês). Para poços que são usados como controles positivos, apenas a enzima e seu substrato são adicionados, enquanto poços usados como controles negativos contêm apenas sulfato de manganês.
Depois de incubação da placa de microtítulo a 37°C por 60 minutos, 150 μl de um reagente de uréia obtido por combinação de proporções iguais (1:1) de reagentes A e B são adicionados a cada poço da placa de microtítulo para interromper a reação. O reagente de uréia é feito logo antes do uso por combinação do Reagente A (10 mM o- ftaldialdeído, e 0,4% de polioxietileno (23) lauril éter (w/v) em 1,8 M ácido sulfúrico) com Reagente B (1,3 mM primaquina difosfato, 0,4% polioxietileno (23) lauril éter (w/v), 130 mM ácido bórico em 3,6 M de ácido sulfúrico).
Depois de extinção da mistura da reação, a placa de microtítulo é colocada em repouso por mais 10 minutos em temperatura ambiente para permitir o desenvolvimento de cor. A inibição de arginase é computada por medição da densidade ótica (OD) da mistura da reação a 530 nm e normalização do valor da OD à inibição percentual observada no controle. A OD normalizada é então usada para gerar uma curva dose-resposta por colocação em gráfico os calores de OD normalizada contra log [concentração] e uso de análise de regressão para computar os valores de IC50.
A Tabela 3 abaixo mostra a potência dos compostos da invenção em uma escala de 1 a 5, ou seja, os compostos mais potentes são designados como 1 e os compostos menos potentes são designados como 5. Portanto, um valor de potência de 1 se refere aos compostos da invenção com valores de IC50 na faixa de 0,1 nM a 25 nM; um valor de potência de 2 se refere aos compostos da invenção com valores de IC50 na faixa de 26 nM a 100 nM; compostos tendo , um valor de potência de 3 exibem valores de IC50 na faixa de 101 nM a 500 nM; compostos da invenção com valores de IC50 na faixa de 501 nM a 1.500 nM recebem um valor de potência de 4, e compostos com valores de IC50 acima de 1.501 nM recebem um valor de potência de 5.
A Tabela 3 também fornece valores de IC50 com base em célula CHOK para inibidores de arginase ilustrativos. Os valores de IC50 foram determinados por medição da produção de uréia em células CHOK estavelmente transfectadas com Arginase-1 humana, e células estavelmente transfectadas com Arginase-1 foram plaqueadas em uma placa de 96 poços. As células foram plaqueadas com o uso de 200 μl de meio de crescimento completo e incubadas de um dia para o outro a 37°C.
Meio de cada um dos poços contendo células foi primeiramente removido e meio de crescimento suplementado com arginina em uma concentração de 5 mM foi adicionado a cada poço. Os compostos de teste foram dissolvidos em tampão PBS na concentração desejada e adicionados aos poços adequados. A placa foi então incubada a 37°C por 24 horas. Depois de 24 horas as placas foram rotacionadas a 3.000 RPM por 5 minutos e 50 μl do meio foram transferidos para uma nova placa.
Uma solução aquosa de o-ftaldeído, Brij, ácido sulfúrico, primaquina difosfato e ácido bórico foi adicionada a cada poço e a placa foi incubada por 10-15 minutos. A concentração de uréia em cada poço foi determinada por medição da densidade ótica a 520-530 nanômetros com o uso de uma curva padrão. Os valores de IC50 foram calculados por medição da produção de uréia em várias concentrações dos inibidores de arginase da invenção após subtração do valor relacionado à concentração de uréia em poços de controle.Tabela 3
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aOrdem de potência (maior — menor): 1 = 0,1 nM ^ 25 nM; 2 = 26 nM ^ 100 nM; 3 = 101 nM ^ 500 nM; 4 = 501 nM ^ 1.500 nM; e 5 = 1.501 nM ^ maior; aOrdem de potência (maior — menor): célula CHOK: - 1= 1 μM ^ 25 μM; 2 = 26 μM ^ 100 μM; e “nd” = não determinado os exemplos anteriores são destinados a ilustrar certas modalidades da invenção, que são definidas na totalidade abaixo pelas reivindicações. Além disso, todas as publicações aqui citadas são incorporadas por referência como se totalmente aqui apresentadas.

Claims (16)

1.Composto caracterizado por ser selecionado Dentre
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ou um sal ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável destes.
2. Composição farmacêutica caracterizada por compreender: (i) pelo menos um composto, como definido na reivindicação 1; ou um sal ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável destes; e (ii) um veículo farmaceuticamente aceitável.
3. Uso do composto, como definido na reivindicação 1, ou um sal ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável destes caracterizado pelo fato de ser na preparação de uma composição para o tratamento ou prevenção de uma doença ou condição selecionada de distúrbios cardiovasculares, distúrbios sexuais, distúrbios de cicatrização de ferimentos, distúrbios gastrointestinais, distúrbios autoimunes, distúrbios imunes, infecções, distúrbios pulmonares, distúrbios hemolíticos, inflamação de doença renal, psoríase, leishmaniose, doenças neurodegenerativas, cicatrização de ferimentos, vírus da imunodeficiência humana (HIV), vírus da hepatite B (HBV), Infecções por H. pylori, distúrbios fibróticos, artrite, candidíase, doença periodontal, quelóides, doença adenotonsilar, doença do sono africana, doença de Chagas e câncer gástrico, em que a referida composição atua na inibição de arginase I, arginase II, ou uma combinação destas em uma célula.
4. Uso do composto, como definido na reivindicação 1, ou um sal ou estereoisômero farmaceuticamente aceitável destes caracterizado pelo fato de ser na preparação de uma composição para o tratamento ou prevenção de uma doença ou condição associada com expressão ou atividade de arginase I, arginase II, ou uma combinação destas em um indivíduo, em que a doença ou condição é selecionada a partir de distúrbios cardiovasculares, distúrbios sexuais, distúrbios de cicatrização de ferimentos, distúrbios gastrointestinais, distúrbios autoimunes, distúrbios imunes, infecções, distúrbios pulmonares, distúrbios hemolíticos, doença renal inflamatória, psoríase, leishmaniose, doenças neurodegenerativas, cicatrização de ferimentos, vírus da imunodeficiência humana (HIV), vírus da hepatite B (HBV), Infecções por H. pylori, distúrbios fibróticos, artrite, candidíase, doença periodontal, quelóides, doença adenotonsilar, doença do sono africana, doença de Chagas e câncer gástrico.
5. Uso, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é selecionada a partir de distúrbios cardiovasculares, distúrbios sexuais, distúrbios de cicatrização de ferimentos, distúrbios gastrointestinais, distúrbios autoimunes, distúrbios imunes, infecções, distúrbios pulmonares e distúrbios hemolíticos.
6. Uso, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é distúrbio cardiovascular selecionado a partir de hipertensão sistêmica, hipertensão arterial pulmonar (PAH), hipertensão arterial pulmonar em alta altitude, lesão de isquemia-reperfusão (IR), infarto do miocárdio e aterosclerose.
7. Uso, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é um distúrbio pulmonar selecionado a partir de fibrose pulmonar quimicamente induzida, fibrose pulmonar idiopática, fibrose cística, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), e asma.
8. Uso, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é um distúrbio autoimune selecionado a partir de encefalomielite, esclerose múltipla, síndrome anti- fosfolipídeo 1, anemia hemolítica autoimune, polirradiculoneuropatia desmielinizante inflamatória crônica, dermatite herpetiforme, dermatomiosite, miastenia grave, pênfigo, artrite reumatóide, síndrome de pessoa rígida, diabetes tipo 1, espondilite anquilosante, hemoglobinúria noturna paroxística (PNH), hemoglobinúria fria paroxística, anemia hemolítica autoimune idiopática severa, e síndrome de Goodpasture.
9. Uso, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é um distúrbio imune selecionado a partir de disfunção de célula T mediada por célula supressora mielóide-derivada (MDSC), vírus da imunodeficiência humana (HIV), encefalomielite autoimune, e reação à transfusão com descombinação de ABO.
10. Uso, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é um distúrbio hemolítico selecionado a partir de doença de célula falciforme, talassemias, esferocitose hereditária, estomatocitose, anemias hemolíticas microangiopáticas, deficiência de piruvato quinase, anemia induzida por infecção, anemia durante bypass cardiopulmonar e anemia induzida por válvula cardíaca mecânica, e anemia induzida quimicamente.
11. Uso, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é um distúrbio gastrointestinal selecionado a partir de distúrbios de motilidade gastrointestinal, cânceres gástricos, doença intestinal inflamatória, doença de Crohn, colite ulcerativa, e úlceras gástricas.
12. Uso, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é um distúrbio sexual selecionado a partir de Doença de Peyronie e disfunção erétil.
13. Uso, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é lesão de isquemia-reperfusão (IR) selecionada a partir de IR hepática, IR renal, e IR miocárdica.
14. Uso, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é selecionada a partir de doença renal inflamatória, psoríase, leishmaniose, doenças neurodegenerativas, cicatrização de ferimentos, vírus da imunodeficiência humana (HIV), vírus da hepatite B (HBV), infecções por H. pylori, distúrbios fibróticos, artrite, candidíase, doença periodontal, quelóides, doença adenotonsilar, doença do sono Africana e doença de Chagas.
15. Uso, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é um distúrbio de cicatrização de ferimentos selecionado a partir de cicatrização de ferimentos infectados e não infectados.
16. Uso, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a doença ou condição é câncer gástrico.
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